CN113354642B - 一种石杉碱乙晶体及其制备和应用 - Google Patents

一种石杉碱乙晶体及其制备和应用 Download PDF

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Abstract

本发明提供了一种石杉碱乙晶体及其制备和应用，具体地，本发明提供了一种石杉碱乙晶体的A晶型，其特征在于，所述的A晶型的X‑射线衍射图具有如下的2θ角特征吸收峰：9.56±0.2，13.90±0.2，14.88±0.2，16.00±0.2，25.39±0.2，28.78±0.2。

Description

一种石杉碱乙晶体及其制备和应用
技术领域
本发明属于医药技术领域，具体涉及一种石杉碱乙晶型，以及晶型的制备。
背景技术
阿尔茨海默病，又称早老性痴呆症，是一种以进行性记忆和认知功能缺损为主要临床特征、多病因参与的神经退行性疾病。发病率随着年龄增长而增加。患者的大脑皮层退化导致丧失正常的活动功能，包括记忆力和判断力衰退、缺乏推理能力及行为迟钝等。一旦丧失独立生活能力，将为家庭带来沉重的精神负担和经济负担。
蛇足石杉（Huperziaserrata（Thunb.）Trev.，又名千层塔、蛇足草）是一种作为药用植物，石杉碱乙（Huperzine B）是蛇足石杉中提取的一种生物碱，是具有低毒、高效、可逆和高选择性等优点的胆碱酯酶抑制剂。胆碱酯酶抑制剂是目前少有的被FDA批准用于老年痴呆症治疗的有效药物。目前市场上没有石杉碱乙单独组分的药用制剂上市。
石杉碱乙的结构式如下：
石杉碱乙的化学名为：(4aR,5R,10bR)-1,2,3,4,4a,4,6,10b-八氢-12-甲基-5,10b-propeno-1,7-二氮杂菲-8(7H)-酮。
相对于石杉碱甲，石杉碱乙有一定的减毒增效作用。此外，石杉碱乙具有抑制胆碱酯酶活性和提高学习、记忆效率的功能，其作用强度不及石杉碱甲，但作用维持时间比石杉碱甲为长，不良反应比石杉碱甲更少，另外具有一定的神经保护作用，与石杉碱甲合用时，能减少石杉碱甲的服用量及服用次数，降低不良反应。因此，石杉碱乙具有值得开发的药用价值，有望成为临床应用药物，然而，本领域尚缺乏适合成药的石杉碱乙晶型。
发明内容
本发明的发明人经过大量研究，发现了石杉碱乙晶型物A，具有理化性质优异，稳定性好等优点，可以满足药用制剂对石杉碱乙的晶型要求，适宜于工业化生产。
本发明的第一目的是填补现有技术的空白，提供一种石杉碱乙的晶型物A。
本发明的另一个目的是提供所述石杉碱乙晶型物A的制备方法。
本发明的第一方面，提供了一种石杉碱乙晶体的A晶型，所述的A晶型的X-射线衍射图具有如下的2θ角特征吸收峰：9.56±0.2，13.90±0.2，14.88±0.2，16.00±0.2，25.39±0.2，28.78±0.2。
在另一优选例中，所述的晶型的X-射线衍射图还具有选自下组的一个或多个2θ角特征吸收峰：12.08±0.2，13.26±0.2，14.12±0.2，15.18±0.2，16.86±0.2，18.45±0.2，19.12±0.2，19.84±0.2，22.41±0.2，22.97±0.2，23.42±0.2，24.79±0.2，25.81±0.2，26.01±0.2，26.34±0.2，27.65±0.2，28.04±0.2，28.44±0.2，29.86±0.2，30.51±0.2，31.22±0.2，33.22±0.2，34.94±0.2，37.09±0.2，38.64±0.2。
在另一优选例中，所述的晶型用KBr压片测得的红外光谱具有选自下组的一个或多个特征吸收峰：3323.36 cm-1，3219.52 cm-1，3088.83 cm-1，2994.76 cm-1，2958.33 cm-1，2938.33 cm-1，2913.38 cm-1，2861.67 cm-1，2817.87 cm-1，1666.30 cm-1，1605.50 cm-1，1555.70 cm-1，1453.09 cm-1，1429.96 cm-1，1369.99 cm-1，1346.50 cm-1，1323.03 cm-1，1309.51 cm-1，1283.99 cm-1，1260.62 cm-1，1200.47 cm-1，1180.20 cm-1，1155.23 cm-1，1127.13 cm-1，1099.03 cm-1，1071.87 cm-1，1055.99 cm-1，1046.15 cm-1，993.81 cm-1，973.82 cm-1，958.22 cm-1，915.72 cm-1，867.03 cm-1，855.87 cm-1，839.87 cm-1，815.10cm-1，783.02 cm-1，755.87 cm-1，731.69 cm-1，686.04 cm-1，651.90 cm-1，629.38 cm-1，568.32 cm-1，521.58 cm-1，499.42 cm-1，487.62 cm-1，467.39 cm-1，442.58 cm-1，417.99cm-1。
在另一优选例中，所述的晶型的拉曼光谱具有选自下组的一个或多个特征吸收峰：2939.42cm-1，2909.62cm-1，2879.72 cm-1，2864.57cm-1，2820.5 cm-1，1674.43 cm-1，1602.88 cm-1，1553.75 cm-1，1450.8 cm-1，1288.9 cm-1，1262.33 cm-1，1246.66 cm-1，719.965 cm-1，683.93 cm-1处有吸收峰。
本发明的第二方面，提供了一种如本发明第一方面所述的晶型的制备方法，所述的方法包括如下步骤：
1）在加热条件下，将石杉碱乙溶于第一溶剂中，得到石杉碱乙第一溶液；
2）进行如下步骤2a）或2b）：
2a)对所述的石杉碱乙第一溶液进行降温并缓慢挥发溶剂直至干燥；
2b）降温至室温析晶，并在0℃左右保温；
3）对步骤2）得到的产物进行真空干燥，收集所得固体，得到所述的晶型。
在另一优选例中，当采用所述步骤2a)时，所述的步骤1）中，所述的第一溶剂选自下组：甲醇、乙醇、正丁醇、1，4-二氧六环、1，2-二氯乙烷、二氯甲烷、丙酮、水，或其组合。
在另一优选例中，当采用所述步骤2a)时，所述的步骤1）中，溶剂：石杉碱乙的比例为1：15-75（ml：mg）；和/或
所述的步骤1）中，加热温度为50℃-90℃。
在另一优选例中，所述的第一溶剂为第三溶剂和第四溶剂的混合溶剂，且所述的步骤1）包括：在第三溶剂中加热并完全溶解，然后加入第四溶剂，并在加热条件下完全溶解。
在另一优选例中，当采用所述步骤2b)时，所述的第一溶剂选自下组：乙醇、正丁醇、1，4-二氧六环、1，2-二氯乙烷、N,N-二甲基甲酰胺、丙酮、水、甲叔醚，或其组合。
在另一优选例中，当采用所述步骤2b)时，所述步骤1）中，溶剂：石杉碱乙的比例为1：15-90（ml：mg）；和/或
所述的步骤1）中，加热温度为70℃-90℃。
本发明的第三方面，提供了一种如本发明第一方面所述的晶型的制备方法，所述的方法包括如下步骤：
i）将石杉碱乙加入到第二溶剂中，加热搅拌并保持48-96小时，得到反应混合物；
ii）将所述的反应混合物置于敞口容器中，在室温下使溶剂挥发干；
iii）真空干燥，并收集所得固体；得到所述的晶型。
在另一优选例中，所述的第二溶剂选自下组：甲苯、乙酸乙酯、甲叔醚，或其组合。
在另一优选例中，所述的步骤i）中，溶剂：石杉碱乙的比例为1:2-10（ml：mg）；和/或
所述的步骤ii）中，加热温度为40℃-60℃。
应理解，在本发明范围内中，本发明的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在此不再一一累述。
附图说明
图1为实施例1石杉碱乙晶型物A的典型的X-射线粉末衍射图；
图2为实施例2石杉碱乙晶型物A的X-射线粉末衍射图；
图3为实施例3石杉碱乙晶型物A的X-射线粉末衍射图；
图4为实施例4石杉碱乙晶型物A的X-射线粉末衍射图；
图5为实施例5石杉碱乙晶型物A的X-射线粉末衍射图；
图6为实施例6石杉碱乙晶型物A的X-射线粉末衍射图；
图7为石杉碱乙晶型物A的典型的红外光谱图；
图8为石杉碱乙晶型物A的典型的拉曼光谱图；
图9为对比例1的石杉碱乙晶型物B的XRPD图谱；
图10为实施例1的石杉碱乙晶型物A与对比例1的石杉碱乙晶型物B的XRPD对比图谱。
具体实施方式
本发明人经过长期而深入的研究，制备得到了一种石杉碱乙的晶型物。所述的晶型物具有极低的引湿性和良好的稳定性，因此适宜长期保存。基于上述发现，发明人完成了本发明。
石杉碱乙A晶型
本发明公开了一种石杉碱乙的晶型物A，其使用Cu-Ka辐射得到的X-射线衍射图，以度表示的2θ角在9.56，12.08，13.26，13.90，14.12，14.88，15.18，16.00，16.86，18.45，19.12，19.84，22.41，22.97，23.42，24.79，25.39，25.81，26.01，26.34，27.65，28.04，28.44，28.78，29.86，30.51，31.22，33.22，34.94，37.09，38.64 处有吸收峰。所述吸收峰位置根据不同仪器会有5%左右的改变，但峰的排列和形状不变。
所述石杉碱乙晶型物A，用KBr压片测得的红外光谱在3323.36 cm-1，3219.52 cm-1，3088.83 cm-1，2994.76 cm-1，2958.33 cm-1，2938.33 cm-1，2913.38 cm-1，2861.67 cm-1，2817.87 cm-1，1666.30 cm-1，1605.50 cm-1，1555.70 cm-1，1453.09 cm-1，1429.96 cm-1，1369.99 cm-1，1346.50 cm-1，1323.03 cm-1，1309.51 cm-1，1283.99 cm-1，1260.62 cm-1，1200.47 cm-1，1180.20 cm-1，1155.23 cm-1，1127.13 cm-1，1099.03 cm-1，1071.87 cm-1，1055.99 cm-1，1046.15 cm-1，993.81 cm-1，973.82 cm-1，958.22 cm-1，915.72 cm-1，867.03cm-1，855.87 cm-1，839.87 cm-1，815.10 cm-1，783.02 cm-1，755.87 cm-1，731.69 cm-1，686.04 cm-1，651.90 cm-1，629.38 cm-1，568.32 cm-1，521.58 cm-1，499.42 cm-1，487.62cm-1，467.39 cm-1，442.58 cm-1，417.99 cm-1处有吸收峰。所述吸收峰位置根据不同仪器会有2%左右的改变，但峰的排列和形状不变。
所述石杉碱乙晶型物A，测得的拉曼光谱在2939.42cm-1，2909.62cm-1，2879.72 cm-1，2864.57cm-1，2820.5 cm-1，1674.43 cm-1，1602.88 cm-1，1553.75 cm-1，1450.8 cm-1，1288.9 cm-1，1262.33 cm-1，1246.66 cm-1，719.965 cm-1，683.93 cm-1处有吸收峰。
石杉碱乙A晶型
本发明还提供了一种石杉碱乙A晶型的制备方法，所述的晶型可以通过选自下组的方法一、二或三制备：
方法一：
1）将自制的石杉碱乙原料加入到溶剂中；
2）在搅拌下加热使之溶解；
3）降温并将溶液置于广口的玻璃容器使溶剂挥发干；
4）真空干燥，并收集所得固体；
其中，所述溶剂选自甲醇、乙醇、正丁醇、1，4-二氧六环、1，2-二氯乙烷、二氯甲烷、丙酮、水，或其组合。
其中，步骤1）溶剂和石杉碱乙的体积和质量比为1:15至1:75（ml：mg）；其中步骤2）中加热温度为50℃至90℃。
方法二：
1）将自制的石杉碱乙原料加入到溶剂中；
2）在搅拌下加热使之溶解；
3）降温至室温析晶，并在0℃左右保温；
4）过滤，真空干燥，收集所得固体；
其中，所述溶剂选自乙醇、正丁醇、1，4-二氧六环、1，2-二氯乙烷、N,N-二甲基甲酰胺、丙酮、水、甲叔醚或其组合。
其中，步骤1）溶剂和石杉碱乙的体积和质量比为1:15至1:90（ml：mg）；其中步骤2）中加热温度为70℃至90℃。
方法三：
1）将自制的石杉碱乙原料加入到溶剂中；
2）加热搅拌并保持72小时；
3）将反应混合物置于广口的玻璃容器并使溶剂挥发干；
4）真空干燥，并收集所得固体；
其中，所述溶剂选自甲苯、乙酸乙酯、甲叔醚，或其组合。
其中，步骤1）溶剂和石杉碱乙的体积和质量比为1:2至1:10（ml：mg）；其中步骤2）中加热温度为40℃至60℃。
所述的石杉碱乙晶型物A作为丁酰胆碱酯酶对于大鼠大脑皮层AchE和血清BuchE活性均有一定的抑制作用，制备治疗神经退行性疾病的药物中的用途。
所述神经退行性疾病包括阿尔茨海默症、血管性痴呆、智力低下、精神分裂症和记忆障碍。
与现有技术相比，本发明的主要优点在于：药物晶型研究及该晶型的稳定对开发药物起到至关重要的作用，本发明人通过研究，提供了一种石杉碱乙的晶型物A及其制法，该石杉碱乙晶型物A的理化性质友好、稳定性好，适宜工业化规模制备；该晶型物A的制备方法操作简便、重现性好、纯度高，晶型物A在制备成的制剂中表现稳定、产品质量可控性好，为临床开发新药提供了有效的晶型数据支持。本发明的石杉碱乙的晶型研究，成功填补了现有医药领域中此项技术的空白。
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则百分比和份数按重量计算。
通过以下实施例进一步说明本发明，但本发明的范围并不受限于此。
实验条件：
XRPD（X射线粉末衍射）：本发明中XRPD谱图由Bruker Advance X射线衍射仪检测，2θ角扫描从5度到45度，Cu-Ka辐射。
IR（红外光谱）：本发明中红外谱图由Bruker Tenso2 27红外吸收光谱仪检测，检测范围为4000-350波数。
Raman（拉曼光谱）：本发明中拉曼谱图由DXR显微拉曼光谱仪检测，检测范围为3500-50cm-1拉曼位移。
本发明所涉及的有关物质检测条件及方法为：高效液相色谱法测定。
色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相（Waters Symmetry C18柱，250×4.6mm,5μm），以0.02mol/L 的磷酸盐缓冲溶液，磷酸调节pH2.5为流动相A，乙腈为流动相B，A:B=90:10,等度洗脱；流速1ml/min ；柱温25℃ ；PAD 检测器；检测波长310nm。
通用方法石杉碱乙原料药的制备
本研究所用的石杉碱乙原料，是由蛇足石杉提取、精制而获得，详细工艺如下：
提取：将蛇足石杉100Kg粉碎后在提取罐中，用20倍量含1.5%酒石酸水溶液，45℃条件下，动态搅拌提取36小时；
浓缩：将渗滤液浓缩至100L；
萃取：将浓缩液用稀碱氨水调节pH值至9，用氯仿反复萃取4次，合并氯仿萃取液，浓缩回收氯仿，浓缩至100L；
酸反萃取：用2%的柠檬酸水溶液反复萃取上述溶液3次；
活性炭脱色：取酸水萃取液，用水稀释10倍，活性炭用量为稀释后体积的1%，搅拌30分钟，过滤得到透明液体；
浓缩：将上述溶液浓缩至200L；
柱层析：将上述浸膏上硅胶柱，采用甲醇-氯仿洗脱液进行梯度洗脱，搜集甲醇-氯仿（25:75）洗脱液流份；
将上述流份合并浓缩至500ml送至真空冷冻机中冷冻干燥，得石杉碱乙提取物50g。
柱层析：将石杉碱乙提取物投入反应器中，以2倍量体积的氯仿/乙醇混合溶剂（体积比为98:2）溶解，硅胶柱层析，用氯仿/乙醇混合溶剂（体积比97:3）进行解析，至TLC检查解析液呈阴性，停止解析，解析液减压浓缩至干，加10倍体积氯仿溶解，并以稀氨水处理氯仿相，干燥、浓缩氯仿相得粗品；
结晶：取粗品加入5倍量丙酮，水浴加热回流1小时，趁热过滤，滤液放置析晶，抽干，真空烘箱内80℃干燥2小时，获得石杉碱乙1.7g,纯度>96%。
实施例1石杉碱乙晶型物A的制备（方法1a）
称取120mg上述石杉碱乙粉末加入至3ml乙醇中，加热至70℃，完全溶解，降温并将溶液置于广口的玻璃容器使溶剂挥发干，真空干燥，收集得到结晶性粉末108mg，收率：90%，经X射线粉末衍射测定，得到的结晶性粉末为晶型物A，图谱见附图1，具体峰位如下表1所示：
实施例2石杉碱乙晶型物A的制备（方法1a）
称取60mg的上述石杉碱乙加入15ml二氯甲烷中，升温到45℃完全溶解，降温并将溶液置于广口的玻璃容器中使溶剂挥发干，真空干燥，收集得到的结晶性粉末28mg，收率：46.6%，经X射线粉末衍射测定，得到的结晶性粉末为晶型物A，图谱见附图2。
实施例3石杉碱乙晶型物A的制备（方法1b）
称取120mg上述石杉碱乙加入3.5ml乙醇中，加热到70℃，完全溶解，缓缓降至室温析晶，晶体析出后，进一步降至0℃保温1小时，过滤该反应液，固体真空干燥得到结晶性粉末36mg，收率：30%，经X射线粉末衍射测定，得到的结晶性粉末为晶型物A，图谱见附图3。
实施例4石杉碱乙晶型物A的制备
称取60mg上述石杉碱乙加入2ml正丁醇中，加热至80℃，完全溶解，降至50℃加入甲叔醚20ml，降温析晶，晶体析出后，进一步降至0℃保温1小时，过滤该反应液，固体真空干燥得到结晶性粉末47mg，收率：78.3%，经X射线粉末衍射测定，得到的结晶性粉末为晶型物A，图谱见附图4。
实施例5石杉碱乙晶型物A的制备（方法1b）
称取62mg上述石杉碱乙加入5ml1，4-二氧六环中，加热至90℃，完全溶解，降温析晶，晶体析出后，进一步降至0℃保温1小时，过滤该反应液，固体真空干燥得到结晶性粉末39mg，收率62.9%，经X射线粉末衍射测定，得到的结晶性粉末为晶型物A，图谱见附图5。
实施例6石杉碱乙晶型物A的制备
称取60mg上述石杉碱乙加入10ml甲苯中，加热至50℃，保温搅拌72小时，降温并将溶液置于广口的玻璃容器使溶剂挥发干，真空干燥，收集得到结晶性粉末 36mg，收率：60%，经X射线粉末衍射测定，得到的结晶性粉末为晶型物A，图谱见附图6。
对比例1石杉碱乙晶型物B的制备
称取60mg上述石杉碱乙加入5ml乙醇中，加热至70-75℃，完全溶解，向溶液中滴加纯化水3ml，有大量固体析出，过滤该反应液，固体真空干燥，收集得到结晶性粉末 32mg，收率：53.3%，经X射线粉末衍射测定，得到的结晶性粉末为晶型物B，图谱见附图10。具体峰位如下表2所示：
测试实施例1石杉碱乙晶型物A的引湿性试验
参考中国药典2020版四部通用技术要求中引湿性试验的要求进行试验。
方法：取干燥的具塞玻璃称量瓶（外径50mm，高为15mm），于试验前置于适宜的25℃±1℃恒温干燥器（下部放置氯化铵或硫酸铵饱和溶液）或人工气候箱（设定温度25℃±1℃，相对湿度为80%±2%）内，精密称定重量（m1）。
分别取供试品（实施例1制备得到的石杉碱乙晶型物A和实施例7制备得到的石杉碱乙晶型物B)适量，平铺于上述称量瓶中，供试品厚度一般为1mm，精密称定重量（m2）。
将称量瓶敞口，并于瓶盖同置于上述恒温恒湿条件24小时。
盖好称量瓶盖子，精密称定重量（m3）。
增重百分率= QUOTE />×100%
试验结果见表3。
实验结果表明，本发明得到的石杉碱乙晶型A的引湿性低，因此比石杉碱乙晶型B更适宜于长期保存。
测试实施例2晶体的稳定性考察
1、高温试验
方法：分别将供试品（实施例1制备得到的石杉碱乙晶型物A和实施例7制备得到的石杉碱乙晶型物B），放置于开口的洁净的玻璃器皿中，置于60℃恒温干燥箱中，分别于5,10天取样检测，并与0天的结果进行对照，结果见表4。
高湿试验
方法：分别将供试品（实施例1制备得到的石杉碱乙晶型物A和实施例7制备得到的石杉碱乙晶型物B），均匀分摊至敞口培养皿中，厚度≤5mm，置于室温（25℃左右），相对湿度为75±5%的恒温恒湿培养箱中，分别于5,10天取样检测，并与0天的结果进行对照，结果见表5。
强光照射试验
方法：分别将供试品（实施例1制备得到的石杉碱乙晶型物A和实施例7制备得到的石杉碱乙晶型物B），均匀分摊至敞口培养皿中，厚度≤5mm，调节距离，使光照强度为4500±500Lx，分别于5,10天取样检测，并与0天的结果进行对照，结果见表6：
结果显示，本发明的化合物具有更好的稳定性，在高温、高湿和强光照射实验中，稳定性均优于石杉碱乙的另一晶型B。
测试实施例3 石杉碱乙晶型物A体内胆碱酯酶抑制活性的研究
石杉碱乙（Huperzine B）是从中草药蛇足石杉中提取纯化的对脑内乙酰胆碱酯酶（AChE）具有高度选择性的乙酰胆碱酯酶抑制剂（AChEI）。乙酰胆碱酯酶抑制剂是目前少有的被FDA批准用于老年痴呆症治疗的有效药物。
实验动物：SD大鼠，清洁级，雄性，体质量180-200g，由上海斯莱克实验动物责任有限公司提供，实验期间自由饮水、摄食，室内温度22～24℃，湿度45～70%。
受试物：石杉碱乙（hupB）。
主要试剂：碘代硫代丁酰胆碱，碘化硫代乙酰胆碱，考马斯亮蓝，氢氧化钠，氨基甲酸乙酯（乌来糖），磷酸，氯化钠，碳酸氢钠，磷酸二氢钾，乙醇，十二烷基硫酸钠，5,5'-Dithiobis-(2-nitrobenzoic acid）（DTNB），盐酸；以上化学试剂均购自国药集团化学试剂有限公司。生理盐水，上海邦景实业有限公司产品；牛血清白蛋白，购自美仑生物。
实验分组与剂量设置：将SD大鼠随机分组，即空白对照组NS、受试物hupB（0.48mg/kg、0.24 mg/kg和0.12 mg/kg）、每组动物11只；灌胃给药容量均为20mL/kg。
乙酰胆碱酯酶活性计算公式：
〔∆A412/13600×(0.1/1000)×(4/0.1)×(1/8)×109〕/〔10×蛋白含量×（1/1000）〕(nmol/min/mg蛋白)
乙酰胆碱酯酶活性率计算公式：
“丁酰胆碱酯酶”活性及活性率计算公式：与“乙酰胆碱酯酶”公式相同。
统计分析：应用SPSS 18 统计软件和EXCEL，计量资料采用“均数±标准差（x±s）”表示，两组间比较采用t检验，组间两两比较方差齐性时用LSD方法分析，方差不齐时用Dunnett's方法分析。P＜0.05 表示差异有显著性意义。
实验结果
（一）石杉碱乙对大鼠海马AchE活性量效关系的影响（x±s）
注：与NS 组比：*P<0.05
（二）石杉碱乙对大鼠皮层AchE活性量效关系的影响（x±s）
注：与NS 组比：*P<0.05
（三）石杉碱乙对大鼠纹状体AchE活性量效关系的影响（x±s）
注：与NS 组比：*P<0.05
（四）石杉碱乙对大鼠血清AchE活性量效关系的影响（x±s）
注：与NS 组比：*P<0.05
（五）石杉碱乙对大鼠血清BuchE活性的影响（x±s）
注：与NS 组比：*P<0.05
实验结论：石杉碱乙晶型物A可显著降低大鼠大脑皮层AchE活性，对大鼠大脑血清AchE活性有一定的抑制作用，对大鼠血清BuchE活性有一定的抑制作用；因此，石杉碱乙晶型物A作为胆碱酯酶抑制剂，对乙酰胆碱酯酶和丁酰胆碱酯酶均具有一定的抑制作用，且对丁酰胆碱酯酶的抑制作用更强一些，上述实验数据具有统计学意义。
在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解，在阅读了本发明的上述讲授内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。

Claims (9)

1.一种石杉碱乙晶体的A晶型，其特征在于，所述的A晶型的X-射线衍射图具有如下的2θ角特征吸收峰：9.56±0.2，13.90±0.2，14.88±0.2，16.00±0.2，19.12±0.2，23.42±0.2，25.39±0.2，28.78±0.2；
且所述的晶型的X-射线衍射图还具有选自下组的一个或多个2θ角特征吸收峰：12.08±0.2，13.26±0.2，14.12±0.2，15.18±0.2，16.86±0.2，18.45±0.2，19.84±0.2，22.41±0.2，22.97±0.2， 24.79±0.2，25.81±0.2，26.01±0.2，26.34±0.2，27.65±0.2，28.04±0.2，28.44±0.2，29.86±0.2，30.51±0.2，31.22±0.2，33.22±0.2，34.94±0.2，37.09±0.2，38.64±0.2。
2.如权利要求1所述的晶型，其特征在于，所述的晶型的X-射线衍射图还具有以下2θ角特征吸收峰：12.08±0.2，13.26±0.2，14.12±0.2，15.18±0.2，16.86±0.2，18.45±0.2，19.84±0.2，22.41±0.2，22.97±0.2， 24.79±0.2，25.81±0.2，26.01±0.2，26.34±0.2，27.65±0.2，28.04±0.2，28.44±0.2，29.86±0.2，30.51±0.2，31.22±0.2，33.22±0.2，34.94±0.2，37.09±0.2，38.64±0.2。
3.如权利要求1所述的晶型，其特征在于，所述的晶型用KBr压片测得的红外光谱具有选自下组的一个或多个特征吸收峰：3323.36 cm-1，3219.52 cm-1，3088.83 cm-1，2994.76cm-1，2958.33 cm-1，2938.33 cm-1，2913.38 cm-1，2861.67 cm-1，2817.87 cm-1，1666.30 cm-1，1605.50 cm-1，1555.70 cm-1，1453.09 cm-1，1429.96 cm-1，1369.99 cm-1，1346.50 cm-1，1323.03 cm-1，1309.51 cm-1，1283.99 cm-1，1260.62 cm-1，1200.47 cm-1，1180.20 cm-1，1155.23 cm-1，1127.13 cm-1，1099.03 cm-1，1071.87 cm-1，1055.99 cm-1，1046.15 cm-1，993.81 cm-1，973.82 cm-1，958.22 cm-1，915.72 cm-1，867.03 cm-1，855.87 cm-1，839.87cm-1，815.10 cm-1，783.02 cm-1，755.87 cm-1，731.69 cm-1，686.04 cm-1，651.90 cm-1，629.38 cm-1，568.32 cm-1，521.58 cm-1，499.42 cm-1，487.62 cm-1，467.39 cm-1，442.58cm-1，417.99 cm-1。
4.如权利要求1所述的晶型，其特征在于，所述的晶型的拉曼光谱具有选自下组的一个或多个特征吸收峰：2939.42cm-1，2909.62cm-1，2879.72 cm-1 ，2864.57cm-1，2820.5 cm-1，1674.43 cm-1，1602.88 cm-1，1553.75 cm-1，1450.8 cm-1，1288.9 cm-1，1262.33 cm-1，1246.66 cm-1，719.965 cm-1，683.93 cm-1处有吸收峰。
5.如权利要求1所述的晶型的制备方法，其特征在于，所述的方法包括如下步骤：
1）在加热条件下，将石杉碱乙溶于第一溶剂中，得到石杉碱乙第一溶液；
2）进行如下步骤2a）或2b）：
2a)对所述的石杉碱乙第一溶液进行降温并缓慢挥发溶剂直至干燥；
2b）降温至室温析晶，并在0℃左右保温；
3）对步骤2）得到的产物进行真空干燥，收集所得固体，得到所述的晶型；
且当采用所述步骤2a)时，所述的步骤1）中，所述的第一溶剂选自下组：甲醇、乙醇、1，4-二氧六环、二氯甲烷、丙酮、水，或其组合；且所述溶剂：石杉碱乙的比例为1：15-75，ml：mg；所述的步骤1）中，加热温度为50℃-90℃；
且当采用所述步骤2b)时，所述的第一溶剂选自下组：乙醇、1，4-二氧六环、N,N-二甲基甲酰胺、丙酮、水、甲叔醚，或其组合；且所述溶剂：石杉碱乙的比例为1：15-90，ml：mg；所述的步骤1）中，加热温度为70℃-90℃。
6.如权利要求5所述的制备方法，其特征在于，当采用所述步骤2a)时，所述的步骤1）中，所述的第一溶剂选自下组：乙醇、1，4-二氧六环、二氯甲烷，或其组合。
7.如权利要求5所述的制备方法，其特征在于，当采用所述步骤2b)时，所述的第一溶剂选自下组：乙醇、1，4-二氧六环，或其组合。
8.如权利要求1所述的晶型的制备方法，其特征在于，所述的方法包括如下步骤：
i）将石杉碱乙加入到第二溶剂中，加热搅拌并保持48-96小时，得到反应混合物；步骤i）中，溶剂：石杉碱乙的比例为1:2-10，ml：mg，加热温度为40℃-60℃；
ii）将所述的反应混合物置于敞口容器中，在室温下使溶剂挥发干；
iii）真空干燥，并收集所得固体；得到所述的晶型；且所述的第二溶剂选自下组：甲苯、乙酸乙酯、甲叔醚，或其组合。
9.如权利要求8所述的制备方法，其特征在于，所述的第二溶剂为甲苯。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1704405A (zh) * 2004-05-26 2005-12-07 中国科学院过程工程研究所 一种分析与分离制备石杉碱甲和石杉碱乙的方法
CN101020660A (zh) * 2006-12-01 2007-08-22 河南太龙药业股份有限公司豫中制药厂 从植物药材千层塔中提取石杉碱乙的工艺
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Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1704405A (zh) * 2004-05-26 2005-12-07 中国科学院过程工程研究所 一种分析与分离制备石杉碱甲和石杉碱乙的方法
CN101020660A (zh) * 2006-12-01 2007-08-22 河南太龙药业股份有限公司豫中制药厂 从植物药材千层塔中提取石杉碱乙的工艺
CN102070527A (zh) * 2011-01-25 2011-05-25 赵勇彪 一种从植物药材柳杉叶马尾杉中提取高纯度石杉碱甲和石杉碱乙的方法
CN102432535A (zh) * 2011-12-29 2012-05-02 重庆市秀山红星中药材开发有限公司 从千层塔中提取分离石杉碱甲和石杉碱乙的方法

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