CN113337537B - OsCDKB1;1蛋白及其编码基因在水稻耐盐中的功能与应用 - Google Patents

OsCDKB1;1蛋白及其编码基因在水稻耐盐中的功能与应用 Download PDF

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    • C12N15/8218Antisense, co-suppression, viral induced gene silencing [VIGS], post-transcriptional induced gene silencing [PTGS]

Abstract

本发明公开了一种提高植物耐盐性的方法,包括如下步骤:抑制受体植物中OsCDKB1;1基因的表达,得到耐盐性强于所述受体植物的目的植物。本发明还公开了一种培育盐敏感植物的方法,包括将OsCDKB1;1基因在目的植物中过表达,对盐的敏感性高于所述目的植物的盐敏感植物。实验证明,过表达OsCDKB1;1基因的转基因水稻与受体水稻相比,对盐的敏感性显著增加,而OsCDKB1;1基因沉默的转基因水稻与受体水稻相比,耐盐性显著增强,说明调控OsCDKB1;1基因可调控耐盐性是与耐盐相关的基因,且抑制OsCDKB1;1基因的表达可提高植物的耐盐性,提高植物的抗逆能力。

Description

OsCDKB1;1蛋白及其编码基因在水稻耐盐中的功能与应用
技术领域
本发明涉及生物技术领域中一种OsCDKB1;1蛋白及其编码基因在水稻耐盐中的功能与应用。
背景技术
植物的生长过程会受到多种非生物胁迫的干扰,主要是指在特定环境下,任何非生物因素对植物所造成的不利影响,包括干旱、低温、盐碱等因素。其中盐是制约植物生长的一个很主要的胁迫因素。非生物胁迫严重制约植物尤其是作物的生长发育,使得人类在农业生产上面临许多难题。尤其是在全球土地盐渍化程度加深,可使用耕地面积越来越少的今天,对植物抗盐的研究需求越来越紧迫,研究植物响应非生物胁迫的应答响应基因及其作用机制研究已成为当今热点的研究话题,筛选与培育与植物耐盐性相关的基因品种也是分子育种的核心需求。
作为世界上最重要的粮食作物之一,水稻养活了世界上超过一半的人口。水稻比其他作物如玉米、小麦等的基因组小,基因组长度大约为420Mb,成为继拟南芥(Arabidopsis thaliana)之后的另外一类重要的模式植物。近些年来水稻已被广泛应用于植物遗传学、发育生物学和分子生物学的研究。面对农作物生产中日益严重的土壤盐渍化问题,克隆水稻耐盐基因并对其功能进行研究,对尽快培育作物耐盐品种有重要的实践意义。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是如何提高植物的耐盐性。
为了解决以上技术问题,本发明的第一个目的是提供了一种提高植物耐盐性的方法,包括如下步骤:抑制受体植物中OsCDKB1;1基因的表达,得到耐盐性强于所述受体植物的目的植物;所述OsCDKB1;1基因编码OsCDKB1;1蛋白;所述OsCDKB1;1 蛋白是如下A1)、A2)或A3)的蛋白质:
A1)氨基酸序列是序列表中序列1的蛋白质;
A2)将A1)的蛋白质经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加得到的与A1)所示的蛋白质具有90%以上的同一性且对高盐具有敏感性的蛋白质;
A3)在A1)或A2)的N末端或/和C末端连接蛋白质标签得到的融合蛋白质。
其中,序列表中的序列1由303个氨基酸残基组成。
上述方法中,所述蛋白质可人工合成,也可先合成其编码基因,再进行生物表达得到。
上述方法中,所述蛋白质标签(protein-tag)是指利用DNA体外重组技术,与目的蛋白质一起融合表达的一种多肽或者蛋白质,以便于目的蛋白质的表达、检测、示踪和/或纯化。所述蛋白质标签可为Flag标签、His标签、MBP标签、HA标签、myc 标签、GST标签和/或SUMO标签等。
上述方法中,所述同一性是指氨基酸序列的同一性。可使用国际互联网上的同源性检索站点测定氨基酸序列的同一性,如NCBI主页网站的BLAST网页。例如,可在高级BLAST2.1中,通过使用blastp作为程序,将Expect值设置为10,将所有Filter 设置为OFF,使用BLOSUM62作为Matrix,将Gap existence cost,Perresidue gap cost 和Lambdaratio分别设置为11,1和0.85(缺省值)并进行检索一对氨基酸序列的同一性进行计算,然后即可获得同一性的值(%)。
上述方法中,所述90%以上的同一性可为至少91%、92%、95%、96%、98%、 99%或100%的同一性。
上述方法中,所述OsCDKB1;1基因为如下B1)或B2)所示的基因:
B1)编码链的编码序列(CDS)是序列表中序列2的cDNA分子或DNA分子;
B2)编码链的核苷酸是序列表中序列2的cDNA分子或DNA分子。
其中,序列表中的序列2由912个核苷酸组成,编码序列表中的序列1所示的蛋白质。
上述方法中,所述抑制受体植物中OsCDKB1;1基因的表达是通过对受体植物中OsCDKB1;1基因进行基因沉默实现的。
上述方法中,所述基因沉默通过RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术实现。
上述方法中,所述RNA干扰技术,在本发明的一个实施例中利用pBJW13载体和pCAMBIA1301载体构建基因沉默载体。
上述方法中,所述RNA干扰技术,在本发明的一个实施例中以F和R作为引物构建基因沉默载体:
F:5’-GCGTCGACCCCGGGGCTCCTGAAGTTTTGCTTGG-3’(序列表的序列 3,其中下划线指示的为引入的酶切位点);
R:5’-GGGGTACCTCTAGAGGAGTTCCCAACAACCTGAA-3’(序列表的序列4,其中下划线指示的为引入的酶切位点)。
本发明还提供一种培育盐敏感植物的方法,包括将OsCDKB1;1基因在目的植物中过表达,得到盐敏感植物;所述盐敏感植物对盐的敏感性高于所述目的植物的对盐的敏感性。
其中,所述将OsCDKB1;1基因在目的植物中过表达为将编码OsCDKB1;1蛋白的核酸分子导入目的植物中。所述核酸分子可以是DNA,如cDNA、基因组DNA或重组DNA;所述核酸分子也可以是RNA,如mRNA或hnRNA等。
本发明所述目的植物可为单子叶植物或双子叶植物。所述单子叶植物可为谷子、水稻。
本发明还提供OsCDKB1;1蛋白,所述OsCDKB1;1蛋白是如下A1)、A2)或A3) 的蛋白质:
A1)氨基酸序列是序列表中序列1的蛋白质;
A2)将A1)的蛋白质经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加得到的与A1)所示的蛋白质具有90%以上的同一性且具有降低耐盐性活性的蛋白质;
A3)在A1)或A2)的N末端或/和C末端连接蛋白质标签得到的融合蛋白质。
本发明还提供OsCDKB1;1基因,所述基因为如下B1)或B2)所示的基因:
B1)编码链的编码序列(CDS)是序列表中序列2的cDNA分子或DNA分子;
B2)编码链的核苷酸是序列表中序列2的cDNA分子或DNA分子。
上述提高植物耐盐性的方法、和/或上述培育盐敏感植物的方法、和/或上述的蛋白质、和/或上述基因在调控植物耐盐性中的应用也属于本发明的保护范围。
所述调控可为提高植物的耐盐性,也可为提高植物的盐敏感性。
为了解决上述技术问题,本发明还提供了植物试剂,其作用为提高植物耐盐性。
本发明所提供的植物试剂含有抑制植物中OsCDKB1;1基因表达的物质。
上述植物试剂的活性成分可为抑制植物中OsCDKB1;1基因表达的物质,上述植物试剂的活性成分还可含有其他生物成分或/和非生物成分,上述植物试剂的其他活性成分本领域技术人员可根据植物的耐盐效果确定。
将OsCDKB1;1基因在水稻过表达和沉默的转基因实验证明,过表达OsCDKB1;1 基因的转基因水稻与受体水稻相比,对盐的敏感性显著增加,而OsCDKB1;1基因沉默的转基因水稻与受体水稻相比,耐盐性显著增强,说明OsCDKB1;1基因是与耐盐相关的基因,且抑制OsCDKB1;1基因的表达可提高植物的耐盐性,提高植物的抗逆能力。
附图说明
图1为实施例1中水稻OsCDKB1;1蛋白与已知拟南芥CDKB1;1和CDKB1;2的蛋白的序列比较图。
图2为实施例1中pH7WG2D.1的质粒图谱。
图3为实施例1中pBJW13载体的构建方法。
图4为实施例1中不同NaCl处理下野生型ZH11、OsCDKB1;1-RNAi株系和 OsCDKB1;1基因过表达株系的性状照片及存活率统计与叶绿素含量统计的柱状图,数据表示为平均值±标准差,重复数为3,采用Student’s t test进行显著性分析,**表示显著性分析结果为P<0.01。
具体实施方式
下面结合具体实施方式对本发明进行进一步的详细描述,给出的实施例仅为了阐明本发明,而不是为了限制本发明的范围。以下提供的实施例可作为本技术领域普通技术人员进行进一步改进的指南,并不以任何方式构成对本发明的限制。
下述实施例中的实验方法,如无特殊说明,均为常规方法。下述实施例中所用的材料、试剂等,如无特殊说明,均为常规生化试剂,可从商业途径得到。
1载体
下述实施例中载体TOPOvector(货号:CV0402)为北京艾德科技有限公司产品。
下述实施例中载体pH7WG2D.1为中国质粒载体菌株细胞株基因保藏中心(BioVector)产品,货号:BioVector921816,图谱见图2。
下述实施例中载体pBJW13载体为pBluescrip SK载体和pJAWOH13-RNAI载体改造而来,pBluescrip SK载体为中国质粒载体菌株细胞株基因保藏中心(BioVector)产品,货号:BioVector931522。pJAWOH13-RNAI载体为中国质粒载体菌株细胞株基因保藏中心(BioVector)产品,货号:BioVector928511。载体改造方法为:用HindⅢ和NotⅠ酶切去pBluescrip SK载体HindⅢ酶切位点和NotⅠ酶切位点之间的片段;同时用 HindⅢ和NotⅠ酶切下pJAWOH13-RNAI的目的片段(Intron-pA35S),将目的片段连到已经切好的pBluescripSK载体上,形成新的含有多个常用酶切位点的新载体 pBJW13,具体见图3。
下述实施例中载体pCAMBIA1301载体为北京华博德亿生物技术有限公司产品,货号:VT3013。
2植物品系
下述实施例中的水稻品种日本晴记载于非专利文献“Clock component OsPRR73positively regulates rice salttolerance by modulating OsHKT2;1-mediatedsodium homeostasis”。公众可从中国科学院植物研究所获得,以重复本申请实验,不可作为其它用途使用。
下述实施例中的水稻品种ZH11记载于非专利文献“OsPGIP1-MediatedResistance to Bacterial LeafStreak in Rice is BeyondResponsive to thePolygalacturonase of Xanthomonas oryzae pv.oryzicola”。公众可从中国科学院植物研究所获得,以重复本申请实验,不可作为其它用途使用。
3试剂
Gateway LR ClonaseⅡenzyme mix(货号:11791100)为赛默飞世尔科有限公司产品。
PVUⅠ限制性内切酶(货号:TYB-PVU-101WX5)为Cosmo Bio公司产品。
下述实施例中,如无特殊说明,序列表中各核苷酸序列的第1位均为相应DNA 的5′末端核苷酸,末位均为相应DNA的3′末端核苷酸。
实施例1、植物耐盐相关基因OsCDKB1;1的获得
1、水稻OsCDKB1;1的获得
利用拟南芥CDKB1;1和CDKB1;2的蛋白序列在NCBI数据库中 (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/)进行比对。获得了一个303个氨基酸残基的预测蛋白(Os01g67160),来源于水稻日本晴生态型。通过DNAMAN多重序列比对发现,该蛋白与拟南芥CDKB1的两个序列相似性为88.5%,具体比对结果见图1。与拟南芥 CDKB1相同,该预测蛋白包含了B1-型CDK与周期蛋白结合的特有基序PPTALRE。将该预测蛋白命名为OsCDKB1;1,其氨基酸序列如序列表中序列1所示,编码该蛋白的基因命名为OsCDKB1;1,其CDS序列的核苷酸序列如序列表的序列2(912个核苷酸)所示。
2、OsCDKB1;1沉默载体及过表达载体构建
(1)OsCDKB1;1基因过表达载体的构建
OsCDKB1;1基因过表达载体是利用pH7WG2D.1质粒采取gateway方法完成,具体实施如下:
取水稻ZH11幼苗,用RNA提取试剂盒提取总RNA,硝化后根据提取RNA的浓度反转录合成一定量的单链cDNA。以Primer 1和Primer 2为引物扩增:
Primer 1:5’-ATGGAGAAGTACGAGAAGCTG-3’;
Primer 2:5’-CTAGAACTGGGACTTGTCGAG-3’。
扩增得到OsCDKB1;1的cDNA(核苷酸序列如序列表的序列2所示)凝胶回收后连接到载体TOPO vector,得到构建好的OsCDKB1;1-TOPO质粒,用PVUⅠ限制性内切酶在37℃条件下酶切3小时,把酶解产物进行琼脂糖凝胶电泳分离,切胶回收。取 1.5μL回收产物、0.5μL载体pH7WG2D.1及0.5μL的Gateway LR ClonaseⅡenzyme mix混合,于25℃反应4小时。终止反应后,将混合物转化大肠杆菌感受态细胞DH5 α,得到单菌落克隆。对单菌落进行扩大培养并提取质粒,对质粒进行PCR鉴定后得到正确的Super-pH7WG2D.1-OsCDKB1;1质粒。将Super-pH7WG2D.1-OsCDKB1;1质粒转化根癌农杆菌EH105的感受态细胞,利用菌落PCR和酶切的方法鉴定得到阳性克隆。将成功转化农杆菌的菌株转化水稻,所用水稻品种为ZH11,得到OsCDKB1;1 基因过表达植株。
(2)OsCDKB1;1沉默载体RNAi的构建
RNAi构建选用载体改造后的pBJW13载体(构建图谱见附图3)和pCAMBIA1301载体构建,图谱见附图3,构建所用引物为F和R:
F:5’-GCGTCGACCCCGGGGCTCCTGAAGTTTTGCTTGG-3’(序列表的序列 3,下划线指示的序列为酶切位点,其中GTCGAC为SalⅠ酶识别位点,CCCGGG 为SmaⅠ酶识别位点);
Figure RE-GDA0003193927640000061
(序列表的序列4,双下划线指示的序列为GGTACC为KpnⅠ酶识别位点;TCTAGA为XbaⅠ酶识别位点)。
具体的过程如下:
首先进行OsCDKB1;1的扩增,将上述测序正确的OsCDKB1;1-TOPO质粒稀释20 倍作为PCR反应的模板:用NEB公司的高保真DNA聚合酶KOD,对OsCDKB1;1片段进行扩增,扩增体系为50μL,具体为10×KOD buffer 5μL,2mM dNTP mix 5μL, 10μM Primer1和Primer2各1.5μL,KOD DNA聚合酶1μL,模板1-5μL,用灭过菌的超纯水补充体系至50μL,反应体系在冰上配制。在PCR仪上预变性5min,94℃变性 30s,56℃30s,68℃1min,循环数35个,68℃延伸10min。将扩增片段用2%的琼脂糖凝胶进行电泳,然后回收,连接到pEASY-Blunt载体,进行测序鉴定,获得正确的OsCDKB1;1片段序列。利用XbaⅠ和SmaⅠ双酶切下OsCDKB1;1片段,正向连入 pBJW13中间载体。通过酶切验证正确插入后,利用KpnⅠ和SalⅠ双酶切下 OsCDKB1;1片段,反向连入已连接有OsCDKB1;1正向片段的pBJW13中间载体。最后利用KpnⅠ和SacⅠ切下(OsCDKB1;1正向-内含子-OsCDKB1;1正向)片段,连接经过Ubi-1启动子改造的终载体pCAMBIA1301,形成OsCDKB1;1-pUV1301-RNAi载体。质粒提供到未名凯拓公司进行水稻转化。
(3)OsCDKB1;1-RNAi株系及OsCDKB1;1基因过表达株系耐盐性分析
水稻材料:
OsCDKB1;1基因过表达株系为步骤(1)得到的OsCDKB1;1基因过表达植株的 T5代株系。
OsCDKB1;1-RNAi株系为步骤(2)得到的OsCDKB1;1-RNAi植株的T5代株系。
对照为野生型ZH11。
试验方法:
以野生型ZH11、OsCDKB1;1-RNAi株系和OsCDKB1;1基因过表达株系为材料,用水稻水培的方法,对正常水培生长两周的水稻幼苗进行盐处理。
正常营养液配方:由A液、B液、铁盐和微量元素四种母液组成。A液:硫酸铵 48.2g,磷酸二氢钾24.8g,硝酸钾18.5g,硫酸钾15.9g,七水合硫酸镁149.8g,溶于1L ddH2O中。B液:86.175g四水硝酸钙溶于1L ddH2O中。铁盐(100×):5.77 g七水硫酸亚铁溶于200mLddH2O中,然后称取7.45g乙二胺四乙酸二钠于200mL ddH2O中加热至溶解,将七水硫酸亚铁溶液加入其中,不断搅拌,冷却后定容至1L。微量元素母液:2.86g硼酸,0.08g硫酸铜,0.22g七水硫酸锌,1.81g四水氯化镁, 0.09g钼酸溶于1L ddH2O中。
正常营养液水培两周后,换成在正常营养液基础上额外添加NaCl的营养液,使得营养液中NaCl的浓度为200mM,同时以正常营养液培养的水稻幼苗作为对照。盐处理后观察表型并在处理14天后恢复正常水培,统计存活率,并以进行差异显著性分析。
结果见图4,盐处理14天后,对照组幼苗生长状态没有差异,总体长势较好,生长高度平均,生长状态无差异;而盐处理组幼苗总体表现出叶片发黄干枯,卷缩下垂,生长停滞等胁迫状态。相同盐浓度处理下,不同幼苗对胁迫的反应不同,OsCDKB1;1 基因过表达株系的叶片发黄干枯现象更明显,受到盐胁迫的伤害表现更明显;而 OsCDKB1;1-RNAi株系无论是生长高度还是整个植株的生长状态都更比前二者更好。盐处理14天后,对照组仍然都表现出正常生长的状态,相互间没有差异;而实验组中 OsCDKB1;1基因过表达株系几乎全部死亡,没有新生叶片,表现出对盐处理的高敏感性;OsCDKB1;1-RNAi株系叶片整体发黄,死亡植株数目小于野生型和OsCDKB1;1 基因过表达株系,表现出对盐环境更强的耐受性,植株高度更高,叶片相对更伸展,新生叶片数目也多。盐处理后恢复水培,对植株的存活率进行统计,结果显示,与野生型相比,OsCDKB1;1-RNAi株系盐处理后的存活率更高,具体存活率为:在相同盐浓度处理后,水稻植株的存活率降低;其中野生型存活率为41.6%,OsCDKB1;1-RNAi 的植株存活为79.2%;OsCDKB1;1过表达的植株存活率为12.5%,;OsCDKB1;1基因过表达株系的存活率则显著低于野生型。
以上对本发明进行了详述。对于本领域技术人员来说,在不脱离本发明的宗旨和范围,以及无需进行不必要的实验情况下,可在等同参数、浓度和条件下,在较宽范围内实施本发明。虽然本发明给出了特殊的实施例,应该理解为,可以对本发明作进一步的改进。总之,按本发明的原理,本申请欲包括任何变更、用途或对本发明的改进,包括脱离了本申请中已公开范围,而用本领域已知的常规技术进行的改变。按以下附带的权利要求的范围,可以进行一些基本特征的应用。
序列表
<110> 中国科学院植物研究所
<120> OsCDKB1;1蛋白及其编码基因在水稻耐盐中的功能与应用
<130> GNCSY210906
<160> 4
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 303
<212> PRT
<213> 水稻(Oryza sativa)
<400> 1
Met Glu Lys Tyr Glu Lys Leu Glu Lys Val Gly Glu Gly Thr Tyr Gly
1 5 10 15
Lys Val Tyr Lys Ala Gln Asp Arg Ala Thr Gly Gln Leu Val Ala Leu
20 25 30
Lys Lys Thr Arg Leu Glu Met Asp Glu Glu Gly Ile Pro Pro Thr Ala
35 40 45
Leu Arg Glu Ile Ser Ile Leu Arg Leu Leu Ser Gln Ser Leu Tyr Val
50 55 60
Val Arg Leu Leu Ser Val Glu Gln Ala Thr Lys Asn Gly Lys Pro Val
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Val Phe Glu Phe Leu Asp Thr Asp Leu Lys Lys Phe Val
85 90 95
Asp Ala Tyr Arg Lys Gly Pro Asn Pro Arg Pro Leu Pro Thr Asn Val
100 105 110
Ile Lys Ser Phe Leu Tyr Gln Leu Cys Lys Gly Val Ala His Cys His
115 120 125
Gly His Gly Val Leu His Arg Asp Leu Lys Pro Gln Asn Leu Leu Val
130 135 140
Asp Lys Glu Lys Gly Ile Leu Lys Ile Ala Asp Leu Gly Leu Gly Arg
145 150 155 160
Ala Phe Thr Val Pro Met Lys Ser Tyr Thr His Glu Ile Val Thr Leu
165 170 175
Trp Tyr Arg Ala Pro Glu Val Leu Leu Gly Ser Thr His Tyr Ser Thr
180 185 190
Gly Val Asp Ile Trp Ser Val Gly Cys Ile Phe Ala Glu Met Val Arg
195 200 205
Arg Gln Ala Leu Phe Pro Gly Asp Ser Glu Leu Gln Gln Leu Leu His
210 215 220
Ile Phe Arg Leu Leu Gly Thr Pro Thr Glu Glu Gln Trp Pro Gly Val
225 230 235 240
Thr Asp Leu Arg Asp Trp His Glu Phe Pro Gln Trp Lys Pro Gln Ile
245 250 255
Leu Glu Arg Gln Val Pro Ser Leu Glu Pro Glu Gly Val Asp Leu Leu
260 265 270
Ser Lys Met Leu Gln Tyr Asn Pro Ala Asn Arg Ile Ser Ala Lys Ala
275 280 285
Ala Met Glu His Pro Tyr Phe Asp Ser Leu Asp Lys Ser Gln Phe
290 295 300
<210> 2
<211> 912
<212> DNA
<213> 水稻(Oryza sativa)
<400> 2
atggagaagt acgagaagct ggagaaggtg ggggaaggga cgtacgggaa ggtgtacaag 60
gcgcaggaca gggcgacggg gcagctggtg gcgctgaaga agacgaggct ggagatggac 120
gaggagggga tcccgcccac cgcgctgcgc gagatctcca tcctcaggct gctctcccag 180
tcgctctacg tcgtccgcct cctctccgtc gagcaggcca ccaagaacgg caagcccgtc 240
ctctacctcg tcttcgagtt cctcgacacc gacctcaaga agttcgtcga cgcctaccgc 300
aagggcccca accctcgccc cctccccacc aacgtcatca agagcttctt gtatcagtta 360
tgcaaaggag tcgcacattg ccatggccat ggtgtccttc accgtgattt aaagccacaa 420
aacctgttgg tcgacaagga aaaggggata ttgaaaattg ctgatcttgg gctaggtagg 480
gcgttcactg ttcctatgaa aagctacaca catgagattg tgactctttg gtacagagct 540
cctgaagttt tgcttggatc aacacattac tcaaccggtg ttgacatttg gtccgttggt 600
tgcatcttcg ctgaaatggt cagaagacaa gctctttttc caggtgactc tgagttgcaa 660
cagttgcttc acattttcag gttgttggga actcctactg aggagcagtg gcctggagta 720
actgatttga gggactggca tgagtttcca cagtggaagc cacagatttt agaacgtcaa 780
gtcccatcat tggagcctga aggagttgac cttttatcga aaatgctcca gtataaccca 840
gcaaatcgga tctcagcaaa ggctgctatg gaacacccct acttcgacag cctcgacaag 900
tcccagttct ag 912
<210> 3
<211> 34
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 3
gcgtcgaccc cggggctcct gaagttttgc ttgg 34
<210> 4
<211> 34
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 4
ggggtacctc tagaggagtt cccaacaacc tgaa 34

Claims (6)

1.一种提高水稻耐盐性的方法,其特征在于,包括如下步骤:抑制受体水稻中OsCDKB1; 1基因的表达,得到耐盐性强于所述受体水稻的目的植物;所述OsCDKB1;1基因编码OsCDKB1;1蛋白;所述OsCDKB1;1蛋白是氨基酸序列是序列表中序列1的蛋白质;
所述OsCDKB1;1基因为如下B1)或B2)所示的基因:
B1)编码链的编码序列(CDS)是序列表中序列2的cDNA分子或DNA分子;
B2)编码链的核苷酸是序列表中序列2的cDNA分子或DNA分子。
2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述抑制受体水稻中OsCDKB1;1基因的表达是通过对受体水稻中OsCDKB1;1基因进行基因沉默实现的。
3.根据权利要求2所述的方法,其特征在于,所述基因沉默通过RNA干扰技术实现。
4.根据权利要求3所述的方法,其特征在于,所述RNA干扰技术,以F和R作为引物构建基因沉默载体:
F:5’-GCGTCGACCCCGGGGCTCCTGAAGTTTTGCTTGG-3’(序列表的序列3);
R:5’-GGGGTACCTCTAGAGGAGTTCCCAACAACCTGAA-3’(序列表的序列4)。
5.一种培育盐敏感水稻的方法,其特征在于,包括将权利要求1中所述的OsCDKB1;1基因在目的水稻中过表达,得到盐敏感水稻;所述盐敏感水稻对盐的敏感性高于所述目的水稻的对盐的敏感性。
6.权利要求1-4任一项所述提高水稻耐盐性的方法、和/或权利要求5所述培育盐敏感水稻的方法在调控水稻耐盐性中的应用。
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