CN111088239B

CN111088239B - 玉米高温响应蛋白激酶ZmCDPK7、其编码基因及应用

Info

Publication number: CN111088239B
Application number: CN201911420028.XA
Authority: CN
Inventors: 胡秀丽; 赵玉龙; 杜晗蔚; 陈宁
Original assignee: Henan Agricultural University
Current assignee: Henan Agricultural University
Priority date: 2019-12-31
Filing date: 2019-12-31
Publication date: 2020-10-13
Anticipated expiration: 2039-12-31
Also published as: CN111088239A

Abstract

本发明公开了一种玉米高温响应蛋白激酶ZmCDPK7、其编码基因及应用，旨在筛选鉴定出能够响应高温的CDPK并明确其功能的技术问题。本发明筛选出了一种玉米蛋白激酶ZmCDPK7和编码ZmCDPK7基因，并设计了其基因扩增引物，及表达载体。该ZmCDPK7或其编码基因能够应用于玉米高温抵制调控中，还可应用于耐高温玉米品种的选育。本发明首次筛选并确证了玉米高温响应蛋白激酶ZmCDPK7基因能够增强玉米耐高温胁迫的生物学功能，为玉米抗高温育种提供了新的技术途径。

Description

玉米高温响应蛋白激酶ZmCDPK7、其编码基因及应用

技术领域

本发明涉及分子生物学技术领域，具体涉及一种玉米高温响应蛋白激酶ZmCDPK7、其编码基因及应用。

背景技术

玉米是我国第一大粮食作物，产量与种植面积均居粮食作物之首，在国家粮食安全中发挥着重要作用。但近几年高温热害频发对全国玉米生产带来严重损失。玉米生殖生长的最适温度为25～28℃，较高温度可加快其生长和发育，缩短其生育期，但极端高温可阻碍其生长和发育，如32℃以上的高温不利于其干物质积累，而连续超过5天35℃以上的高温会严重影响玉米开花、授粉与灌浆，出现秃尖、满天星、空杆等畸形穗现象。

研究预测全球平均气温每升高1℃，玉米产量将会降低7.4%。面对高温对玉米生产带来的严峻考验，解决这一问题最基本、最有效的手段是选育和推广耐高温玉米新品种，而当前玉米育种工作的成效主要取决于玉米耐高温新种质的鉴定与优异基因资源的挖掘与利用。

截至目前，国内外农作物育种所取得的突破性成绩无不与重要基因的发现与利用密切相关。玉米耐热性是复杂的数量性状，筛选优异耐高温自交系、了解其遗传规律并鉴定功能基因是耐高温育种的关键环节。

因此，在全基因组水平上开展耐高温性状重要基因的挖掘，对关键调控基因进行功能解析并加以利用，不仅可促进现代生物技术与常规育种的有机结合，推进玉米育种从“经验育种”向“精准育种”转变，而且可为培育耐高温玉米品种提供重要的基因资源与技术支撑，从而为分子育种以及基因组选择育种奠定坚实的基础。

发明内容

本发明要解决的技术问题是如何筛选鉴定出能够响应高温的ZmCDPK，并明确其功能，为培育出一批综合抗性突出、适应性广的优良玉米新品种提供候选基因资源，以促进我国玉米生产的发展。

为解决上述技术问题，本发明采用如下技术方案：

经过长期大量的试验研究，发明人筛选出了一个在高温胁迫条件下显著表达的蛋白激酶ZmCDPK7，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示；编码ZmCDPK7基因的DNA序列如SEQ IDNO.2所示。并通过分析研究发现在其启动子区域中包含有响应ABA和高温胁迫的顺式作用元件。

并且提供了一种能有效扩增编码ZmCDPK7的基因的引物，其碱基序列为：

ATGGGCAACTGCTGCGTAAC或CTACTGCGTACTCTCCATCT。

设计了一种装载有所述DNA序列的表达载体。

通过瞬时过表达和RNAi技术证明了ZmCDPK7在玉米抵制高温胁迫伤害中的作用，所述ZmCDPK7或其编基因能够应用于玉米高温抵制调控中。

编码ZmCDPK7的基因应用在耐高温玉米品种的选育中。即：构建超表达ZmCDPK7的表达载体，利用农杆菌介导的玉米成熟胚原位转化法将该表达载体转化玉米，经筛选后获得T₀代阳性植株，再自交至T₂代并得到了转基因植株的果穗。

与现有技术相比，本发明的主要有益技术效果在于：

1.本发明首次筛选并确证了ZmCDPK7基因能够增强玉米耐高温胁迫的生物学功能，为玉米抗高温胁迫育种提供了新的技术途径。

2.本发明解析了ZmCDPK7基因在玉米耐高温胁迫伤害作用机制，为玉米生产中解决高温胁迫伤害、选育耐高温新品种提供了新的优异候选基因。

3.本发明从分子生物学层面探明了玉米高温胁迫的作用机制，为从基因调控、分子育种等方面探求解决玉米受高温胁迫伤害奠定了坚实的技术基础。

附图说明

图1为ZmCDPK家族的进化树分析图。

图2为筛选出ZmCDPK7启动子区域的顺式作用元件的预测图。

图3为瞬时过表达、沉默ZmCDPK7在高温胁迫下对玉米中sHSP17.4、sHSP70、APX和CAT基因的表达量，MDA和H₂O₂的含量及CAT和APX的活性对比图；

图中，CK为对照；H为原生质体高温胁迫处理；OE-ZmCDPK7+H为原生质体经转化过表达载体OE-ZmCDPK7之后高温胁迫处理；RNAi-ZmCDPK7+H为原生质体经转化ds-ZmCDPK7之后高温胁迫处理；平均值为±SE（n=6），同一字母表示的均值在P<0.05时无显着性差异。

图4为qPCR检测转基因株系ZmCDPK7的表达量对比图。

图5为玉米ZmCDPK7的过表达转基因材料的获得、表型鉴定对比照片。

图6为玉米CRISPR-Cas9的沉默转基因材料的获得、表型鉴定对比照片。

图7为检测ZmCDPK7的过表达和CRISPR-Cas9沉默转基因植株在高温胁迫下对玉米中的MDA、H₂O₂含量的影响、对抗氧化防护酶APX和CAT的影响和光合速率影响对比图。

图8为ZmCDPK7的过表达和CRISPR-Cas9沉默转基因植株在高温胁迫下对玉米中的sHSP17.4、HSP70、APX、CAT、RBOHA、RBOHB、RBOHC和RBOHD基因的表达量对比图；

图中，WT-H为经高温胁迫处理的野生型；OE1-H、OE2-H、OE3-H为经高温胁迫处理的3种过表达株系的；C1-H、C2-H、C3-H为经高温胁迫处理的3种敲除株系；平均值为±SE（n=6），同一字母表示的均值在P<0.05时无显着性差异。

具体实施方式

下面结合附图和实施例来说明本发明的具体实施方式，但以下实施例只是用来详细说明本发明，并不以任何方式限制本发明的范围。

在以下实施例中所涉及的仪器设备如无特别说明，均为常规仪器设备；所涉及的试剂如无特别说明，均为市售常规试剂；所涉及的试验方法，如无特别说明，均为常规方法。

实施例1：玉米中高温响应白激酶CDPK7的鉴定

（1）玉米CDPK家族的进化树分析

研究发现，钙依赖蛋白激酶(CDPKs) 是一个具有丰富功能的大家族，其在调控植物的生长、发育、应激反应中起着重要的作用，是参与调控不同细胞生物学过程的多功能激酶。当前，CDPK家族功能多样化，命名没有固定标准，不同物种的不同成员功能和机制也不尽相同。在香蕉中，CDPKs参与抗寒功能；在水稻中，CDPKs参与干旱、盐渍等胁迫相应。

玉米CDPK家族成员的鉴定，在一些文献中已经有过报道，例如，CDPK10和CDPK30在玉米原生质体中被鉴定为ABA诱导型HVA1启动子的正向调节因子的CDPK。在水稻中过表达OsCDPK21，可以提高植株对盐胁迫的耐受能力以及对ABA的敏感性。玉米中虽然已发现了几十种CDPKs，但目前对于玉米中响应高温胁迫的CDPK及其功能解析并无报道。

因此，本发明人基于长期以来在玉米抗性基因研究方面的经验，也对CDPKs家族与玉米高温抗性的关系进行了持续的跟踪研究。

比如，基于NCBI基因数据库，对玉米中的CDPK家族成员进行了筛选鉴定。其中，参照拟南芥和水稻的CDPK蛋白质序列在NCBI上（https://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi）对玉米的基因数据库进行BLAST检索，通过反复的序列比对，从玉米基因库中初步筛选鉴定了40个ZmCDPKs（ZmCDPK1-ZmCDPK40）。

进一步分析得到了每个ZmCDPK的基因组序列、cDNA序列以及启动子序列。借助DNAMAN软件对40个ZmCDPKs的氨基酸序列进行比对，并运用MEGA5中的邻接法（NJ）构建了系统发育树（见图1）。综合分析研究了系统发育树和氨基酸序列比对的结果，设计了用于q-PCR的基因特异性引物（见表1），通过实时定量PCR，研究分析它们在高温胁迫下的表达情况。

表1 引物序列

。

qPCR分析研究结果显示，在40个ZmCDPKs中，包括ZmCDPK7等在内的7个ZmCDPKs的表达受高温胁迫诱导，其中ZmCDPK7最为显著。

（2） ZmCDPK7的启动子分析

ZmCDPK7的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，DNA序列如SEQ ID NO.2所示。

在NCBI 确定ZmCDPK7的基因组序列及其转录起始位点，截取转录起始位点上游的2 kb序列，即为ZmCDPK7的启动子序列，如SEQ ID NO.3所示。

将启动子序列放入PlantCARE（http://bioinformatics.psb.ugent.be/ webtools/plantcare/htmL）数据库中，结果如图2所示，ZmCDPK7显示与非生物胁迫相关的高温响应元件（CCAAT-box）和ABA响应元件（ABRE）。

以上分析研究结果表明，ZmCDPK7具有响应高温，并且与植物的非生物胁迫特别是高温胁迫有关。

实施例2： ZmCDPK7的耐高温功能验证

热休克蛋白（HSPs）是重要的分子伴侣，在胁迫条件下维持蛋白质的可溶状态，使解折叠的蛋白质重新折叠成有活性的构象，在提高植物对干旱、高温等胁迫的应激能力上起着关键的作用。丙二醛（MDA）含量是植物细胞膜质过氧化程度的体现，丙二醛含量高，说明植物细胞膜质过氧化程度高，细胞膜受到的伤害严重。而H₂O₂含量的积累，可以直接或者间接地氧化细胞内核酸、蛋白质等生物大分子，并使细胞膜遭受损害，从而加速细胞的衰老和解体。过氧化氢酶（CAT）和抗坏血酸酶（APX）可以清除H₂O₂，是植物体内重要的酶促防御体系之一。

为确定ZmCDPK7是否参与玉米对高温的抵制，利用原生质体RNAi干扰技术，将过表达载体OE-ZmCDPK7和ZmCDPK7的双链RNA和蒸馏水分别转化入玉米叶片原生质体中，室温孵育12h，然后在高温胁迫（38℃）下孵育30 min。

利用qRT-PCR（引物序列见表1）检测在高温胁迫下原生质体中sHSP17.4、sHSP70、APX和CAT基因的表达，并测定MDA和H₂O₂的含量及CAT和APX的活性。

结果如图3所示，过表达ZmCDPK7后，显著诱导了高温诱导的HSP基因表达的增加，但显著抑制了高温诱导的H₂O₂和MDA含量的增加，调高了CAT和APX酶的活性；RNAi干扰ZmCDPK7表达后，显著抑制了高温诱导的HSP基因表达的增加，但显著促进了高温诱导的H₂O₂和MDA含量的增加，降低了CAT和APX酶的活性。

可知，ZmCDPK7参与了玉米对高温的抵制，在玉米中过表达ZmCDPK7，可以促进高温诱导的HSP基因表达、抑制高温诱导的H₂O₂和MDA含量，提高抗氧化防护酶CAT和APX的活性，进而能有效抵制高温胁迫产生的伤害。

实施例3：耐高温玉米的转化及培育

为了进一步探究ZmCDPK7的功能，将其在玉米中过表达和敲除。

构建pFGC5941-ZmCDPK7和CRISPR-Cas9-ZmCDPK7载体，利用农杆菌介导的玉米成熟胚原位转化法将pFGC5941-ZmCDPK7和CRISPR-Cas9-ZmCDPK7载体分别转化玉米，经除草剂筛选后获得T₀代阳性植株，再自交至T₂代并得到了转基因植株的果穗。

对T₂代转基因株系，利用Basta草铵膦基因为标记进行转基因株系的筛选，并使用qPCR（引物序列见表1）和测序对ZmCDPK7的基因进行检测（见图4），筛选出三个表达量较高的株系（OE-1、OE-2和OE-3）和三个表达量明显下调的株系（C-1、C-2和C-3）。

高温处理6个株系，孵化箱内高温处理为44℃/14h、35℃/10h，连续处理5天，直到有明显的表型差异；大田高温处理为在所种植的小区搭建密封的塑料大棚，连续处理5天。

检测上述6个株系在高温处理下的表型，结果如图5和图6所示。

结果如图5所示，高温胁迫下过表达ZmCDPK7的3个转基因植株的表型明显强于其野生型，在高温胁迫下显现出了更强的耐性；而图6的结果也显示，在高温胁迫下敲除ZmCDPK7的3个转基因植株的表型性明显弱于其野生型。利用qRT-PCR（引物序列见表1）在高温胁迫下原生质体中sHSP17.4、sHSP 70、APX和CAT基因的表达，并测定MDA和H₂O₂的含量及CAT和APX的活性。

结果如图7和图8所示，高温胁迫下过表达ZmCDPK7的转基因植株的耐高温性明显强于其野生型；敲除ZmCDPK7的转基因植株的耐高温性明显弱于其野生型。并且，在过表达ZmCDPK7株系中，显著诱导了高温诱导的HSP基因和RBOH基因表达的增加，但显著抑制了高温诱导的H₂O₂和MDA含量的增加，调高了CAT和APX酶的活性；但却在敲除ZmCDPK7的转基因植株正好与之相反。

上面结合附图和实施例对本发明作了详细的说明，但是，所属技术领域的技术人员能够理解，在不脱离本发明宗旨的前提下，还可以对上述实施例中的各个具体参数进行变更，形成多个具体的实施例，均为本发明的常见变化范围，在此不再一一详述。

SEQUENCE LISTING

<110> 河南农业大学

<120> 玉米高温响应蛋白激酶ZmCDPK7、其编码基因及应用

<130> 2019

<160> 5

<170> PatentIn version 3.2

<210> 1

<211> 539

<212> PRT

<213> Zea mays

<400> 1

Met Gly Asn Cys Cys Val Thr Pro Asn Gly Ala Ala Asp Ala Gly Gly

1 5 10 15

Gly Lys Lys Pro Lys Glu Pro Lys Gln Lys Lys Gly Lys Lys Pro Asn

20 25 30

Pro Phe Ser Ile Glu Tyr Asn Arg Ser Thr Pro Ala Ser Ala Pro Arg

35 40 45

Leu Val Val Leu Arg Glu Pro Thr Gly Arg Asp Ile Ala Glu Arg Tyr

50 55 60

Glu Leu Gly Ala Glu Leu Gly Arg Gly Glu Phe Gly Val Thr Tyr Leu

65 70 75 80

Cys Thr Asp Arg Ala Ser Gly Glu Ala Leu Ala Cys Lys Ser Ile Ser

85 90 95

Lys Lys Lys Leu Arg Thr Pro Val Asp Val Glu Asp Val Arg Arg Glu

100 105 110

Val Glu Ile Met Arg His Leu Pro Lys His Pro Asn Ile Val Thr Leu

115 120 125

Arg Asp Thr Tyr Glu Asp Asp Asn Ala Val His Leu Val Met Glu Leu

130 135 140

Cys Glu Gly Gly Glu Leu Phe Asp Arg Ile Val Ala Arg Gly His Tyr

145 150 155 160

Thr Glu Arg Ala Ala Ala Leu Val Thr Arg Thr Ile Val Glu Val Val

165 170 175

Gln Met Cys His Lys His Gly Val Met His Arg Asp Leu Lys Pro Glu

180 185 190

Asn Phe Leu Phe Ala Asn Lys Lys Glu Ser Ala Ala Leu Lys Ala Ile

195 200 205

Asp Phe Gly Leu Ser Val Phe Phe Thr Pro Gly Glu Arg Phe Thr Glu

210 215 220

Ile Val Gly Ser Pro Tyr Tyr Met Ala Pro Glu Val Leu Lys Arg Asn

225 230 235 240

Tyr Gly Pro Glu Val Asp Val Trp Ser Ala Gly Val Ile Leu Tyr Ile

245 250 255

Leu Leu Cys Gly Val Pro Pro Phe Trp Ala Glu Ser Glu Gln Gly Val

260 265 270

Ala Gln Ala Ile Ile Arg Ser Val Ile Asp Phe Lys Arg Asp Pro Trp

275 280 285

Pro Arg Val Ser Asp Asn Ala Lys Asp Leu Val Arg Gly Met Leu Asn

290 295 300

Pro Asp Pro Lys Arg Arg Leu Thr Ala Gln Gln Val Leu Asp His Pro

305 310 315 320

Trp Leu Gln Asn Ile Lys Lys Ala Pro Asn Val Asn Leu Gly Glu Thr

325 330 335

Val Lys Ala Arg Leu Gln Gln Phe Ser Val Met Asn Lys Phe Lys Lys

340 345 350

His Ala Leu Arg Val Ile Ala Glu His Leu Ser Val Glu Glu Ala Ala

355 360 365

Asp Ile Lys Asp Met Phe Glu Lys Met Asp Leu Asn Lys Asp Gln Met

370 375 380

Leu Asn Phe Asp Glu Leu Lys Leu Gly Leu His Lys Phe Gly His Gln

385 390 395 400

Ile Pro Asp Ala Asp Val Gln Ile Leu Met Glu Ala Ala Asp Ala Asp

405 410 415

Gly Asn Gly Ser Leu Asp Tyr Gly Glu Phe Val Thr Leu Ser Val His

420 425 430

Leu Arg Lys Ile Gly Asn Asp Glu His Leu His Lys Ala Phe Ala Tyr

435 440 445

Phe Asp Arg Asn Gln Ser Gly Tyr Ile Glu Ile Asp Glu Leu Arg Glu

450 455 460

Ser Leu Ala Asp Asp Leu Gly Gln Asn His Glu Glu Val Ile Asn Ala

465 470 475 480

Ile Ile Arg Asp Val Asp Thr Asp Lys Asp Gly Lys Ile Ser Tyr Asp

485 490 495

Glu Phe Ala Ala Met Met Lys Ala Gly Thr Asp Trp Arg Lys Ala Ser

500 505 510

Arg Gln Tyr Ser Arg Glu Arg Phe Thr Ser Leu Ser Leu Lys Leu Gln

515 520 525

Lys Asp Gly Ser Leu Gln Met Glu Ser Thr Gln

530 535

<210> 2

<211> 1620

<212> DNA

<213> Zea mays

<400> 2

atgggcaact gctgcgtaac accgaacgga gccgccgacg ccggcggcgg caagaagccc 60

aaggagccga agcagaagaa gggcaagaag ccgaacccct tctcgatcga gtacaaccgc 120

tcgacgccgg cgagcgcgcc gaggctggtg gtgctgcggg agcccacggg gcgggacatc 180

gcggagcggt acgagcttgg agcggagctc gggcgcggcg agttcggggt cacctatctc 240

tgcacggacc gcgcctcagg ggaggcgcta gcctgcaagt ccatctccaa gaagaagctc 300

cgcacccccg tcgacgtcga ggacgtgcgc cgggaggtgg agatcatgcg ccacctcccc 360

aagcacccca acatcgtcac gctcagggat acctacgagg acgacaatgc cgtgcacctc 420

gtcatggagc tctgtgaggg tggggagctc ttcgaccgca tcgtggcgcg ggggcactac 480

acggaacgcg ctgccgcctt ggtcacacgc actatcgtcg aggtcgtgca gatgtgccat 540

aagcatggag tgatgcacag ggatctcaaa ccagaaaatt tcttgtttgc gaacaaaaaa 600

gaatcagcag cccttaaggc cattgatttt ggcctgtctg tatttttcac tccaggcgaa 660

cggtttacag agattgttgg gagtccttat tacatggccc cagaggtact aaagagaaat 720

tatggcccag aggttgatgt ttggagtgca ggggtgattc tgtacattct tctctgtggt 780

gtccctccat tctgggcaga atcggagcaa ggtgttgctc aggcaattat ccgatctgtc 840

attgatttca aaagagatcc atggccaagg gtctctgata atgccaaaga ccttgtaaga 900

ggaatgctca acccagatcc aaagcgacga ttgacagctc agcaagtgct tgatcaccca 960

tggttacaga acattaagaa ggctccaaat gtcaatttgg gcgaaactgt taaggccaga 1020

cttcaacaat tctctgtgat gaacaagttc aagaagcatg cacttagggt catagctgag 1080

catctttcag tagaagaggc tgctgacata aaggatatgt ttgagaagat ggatcttaac 1140

aaggatcaaa tgcttaattt cgatgagctg aagcttggtc tgcataaatt tggtcaccaa 1200

atccctgatg cagatgttca aatactaatg gaagctgcgg atgctgatgg aaacgggtcc 1260

ttggattatg gagaatttgt tacactatct gttcatctaa gaaagattgg aaatgatgag 1320

catcttcata aggcatttgc atactttgac cggaaccaga gtggttatat tgaaatcgat 1380

gaactccgtg agtcattagc tgatgacctt ggacagaatc atgaagaggt tatcaatgcc 1440

attatccgtg acgtagacac cgataaggat ggcaagataa gctacgatga gtttgcagcg 1500

atgatgaagg ccggaacaga ctggaggaaa gcgtcgagac agtattcgag agagcggttc 1560

accagcctga gccttaagct gcaaaaggat ggatcgttgc agatggagag tacgcagtag 1620

<210> 3

<211> 2000

<212> DNA

<213> Zea mays

<400> 3

agaaatataa taatatgtat gatacataat aaacattatt aaactaatta taaaacatca 60

cttttctact ttttataaaa cggttccact atcgtgttgg tcgtgaaatg acgtgggttt 120

ttacctcata tatgagccgt gagaaaacat ccaagtccaa cacgagacaa agttgtatat 180

agcgcaacac tcccggatag tactacctcg ctaactgaaa gaggacgagc gaccaagcaa 240

gctataaaaa gatacatgtc ttcatttcaa ctcatacttt ctcggacttt tggttaagat 300

aaagaacatt atctgcagtt taatataaaa aatatgggct atatattcac tataatttaa 360

ttttttagtg gggagggttc actccaatta tatttttttt gtggggagta ttcatcacat 420

tggtttatca ttggaccatc gcgagtcgta taacggttgc actatatcgt caaatacgat 480

tggtgtatcc gttgtattat acggtcaaat acgattggtg tgatgtcaca tgcactattg 540

gtgtgatgtc acaatgcacg atcatatcac agtgcacaat cgtgtgtcat tttaactctc 600

atcaccaaac ctgtttatcc gtttagtcct cttcaacctt tgggcatgca caaaccacgt 660

aaataactca tatcttaaag gaaattaaag aggcaaatgc aaaaaaaaga tatatactgt 720

tgaaagaatg tctctaatat ggttctttag tttagataca tttgtaacca taatacacac 780

ataaataaac cgtatcttaa gaggttctag tgaataatat ataaggccta tatacgttgt 840

gttgtataaa atagtttatt agatgtaact agtgcgtgga gaaccggacc atattatcta 900

ggttgtacat gccttaacaa caaattctcc ttttcctttg aggccattaa agggttgttt 960

gttttcatct caatacatat ggattggagg agatgtgata ggtttaaatc tttagcgcaa 1020

gtcaaagtac ttcataattt tttcaatctt atctgatcta gggctaaaac aagctgaacc 1080

gagccgagga ggctcgactc gactcggctc ggtggtgtgg atcgttgtct cacctagttc 1140

atcttggctc ggctcaaagc tggctcacga gttacacctt aatagataat attgtattat 1200

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ataagtaata taaattataa attgccgtat atatcatcag aggataaaaa caagtcgcat 1320

atctataaaa ttaaccaata tcaattatta ttctataggt tgattaaatt ggtacaactc 1380

gcgagtcaga acggctctgc ttgttggacc aatgagctcg aaaatcaaac tcgtctcggc 1440

tcgctcgagg ttcgcgaacc gctataaact cgagccagct cgtgagcctc aataactcta 1500

atcccatcta tgctatggga ataaccggac aaaatcctaa taagataaca attcatagga 1560

aaagtaaata ggaaaaataa acctgaattt aaaaagaatg agaaaaaatt aaattaaaat 1620

gaaaacgaga ggagaaaaga aagacgatag gggaagaggg atggcgtgag ccaggcggga 1680

gcgaggtcgt gtttgaccac ctccccctcc gcgtccccgt cgctgctggg cttggcttta 1740

ccactggggc gggttcccac accggggcca gacgccgcca ccgctgtccc cgtctacacc 1800

gagttccccc cgcgcgattt aacccctcgc ctcgctcgct gcctccggtt ccctacaacg 1860

cgcacaccaa acgcgcacgc ggcgttcgtt cctcggccgc tctccctacc cacgtccttc 1920

tccccccaca gatctccgcg ggccgtgagg ttccttgatt cgccttctcc ggggctgccg 1980

gatctccgcggcggctgggg 2000

<210> 4

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工合成

<400> 4

atgggcaact gctgcgtaac 20

<210> 5

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工合成

<400> 5

ctactgcgta ctctccatct 20

Claims

1.玉米高温响应蛋白激酶ZmCDPK7或编码玉米高温响应蛋白激酶ZmCDPK7的基因在玉米高温抵制调控中的应用，其特征在于：

所述玉米高温响应蛋白激酶ZmCDPK7的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示；

所述编码玉米高温响应蛋白激酶ZmCDPK7的基因DNA序列如SEQ ID NO.2所示。

2.编码玉米高温响应蛋白激酶ZmCDPK7的基因在耐高温玉米育种中的应用，其特征在于：

3.依据权利要求2所述的应用，其特征在于，包括以下步骤：

构建超表达玉米高温响应蛋白激酶ZmCDPK7的表达载体，利用农杆菌介导的玉米成熟胚原位转化法将所述表达载体转化玉米，经筛选后获得T₀代阳性植株，再自交至T₂代并得到了转基因植株的果穗。