CN113321729A - 一组il-12单克隆抗体及其医药用途 - Google Patents

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Abstract

本发明属于免疫治疗和分子免疫学领域；具体涉及一组抗IL‑12的单克隆抗体及其医药用途。本发明通过杂交瘤技术获得了阻断IL‑12功能的单克隆抗体，并成功地对其进行了人源化改造。所述抗体在制备应用于调节IL‑12的作用、水平以及机体免疫力的相关药物，尤其是治疗自身免疫疾病相关药物方面具有广阔的应用前景。

Description

一组IL-12单克隆抗体及其医药用途
技术领域
本发明属于免疫治疗和分子免疫学领域，涉及IL-12抗体及其用途。具体地，本发明涉及到多种IL-12的单克隆抗体。
技术背景
白介素-12(interleukin-12,IL-12)是由IL-12A(p35)和IL-12B(p40)两个亚基通过二硫键形成的异源二聚体(Curfs JH,et al,(1997),Clinical Microbiology Reviews,10:742-780)。IL- 12由抗原提呈细胞，包括单核细胞、巨噬细胞、B细胞、NK细胞、Langerhans细胞和角蛋白形成细胞等合成和分泌(Gubler U,et al,(1991)Proc.Natl.Acad.Sci.USA,88:4143- 4147)。IL-12通过与IL-12受体(IL-12R)结合形成复合物而介导靶细胞的信号转导，该受体复合体是由IL-12Rβ1和IL-12Rβ2组成的异源二聚体。多种分子参与调控IL-12信号通路，包括Jak2、Tyk2、STAT1、STAT4和STAT5，其中STAT4起关键作用。IL-12作为多效促炎细胞因子，在Th1细胞分化和Th1型细胞因子介导的肿瘤免疫和炎症免疫中起重要作用。IL-12能够激活NK细胞和T细胞(如CD8+T细胞)等效应细胞，诱导产生IFN-γ，抑制肿瘤生长(Brunda,et al.,(1993),J.Exp.Med.,178:1223-30)。IL-12也可以通过旁分泌上调MHCI和MHCII、ICAM-1等黏附分子以及T-bet等转录调节因子的表达(Wallach,et al.,(1982),Nature,299:833-69)，从而促进抗原的提呈，继而会引起IL-12的产生(Hamza T, et al.,(2010),Int.J.Mol.Sci.,11:789-806)。内源性IL-12对抵抗病原体的入侵以及抑制肿瘤的生长、转移发挥了重要作用(Gateley,et al.,(1998),Annu.Rev.Immunol.,16:495-521)。
IL-12是参与机体免疫调控的重要细胞因子。机体IL-12水平的失调会造成免疫功能紊乱，从而导致自身免疫性疾病，如银屑病(Yawalkar,et al.,(1998),J.Invest.Dermatol., 111:1053-7)，类风湿性关节炎(Kim,et al,.(2000),Clin.Exp.Immunol.,119:175-81；Yago T, et al.,(2017)J Clin Med.,6:81)，克罗恩病(Simpson,et al,.(1998),J.Exp.Med.,187:1225- 34)，多发性硬化(Laman,et al.,(1998),J.Neuroimmunol,86:30-45),炎症性肠道疾病 (Aden K,et al.,(2016),CellRep.,16:2208–18)。大量临床试验数据表明，针对IL-12的抗体可有效改善银屑病的临床症状，显著提高患者的生活质量(Paul C,et al.,(2014),Br J Dermatol.,170:425-34；Machado A,et al.,(2018)BioDrugs.,32:119–28)。因此，研发高效的 IL-12中和抗体具有重要的社会价值和广阔的市场前景。
针对IL-12过量产生而引起的自身免疫疾病，特异性结合IL-12并阻断其与IL-12R结合的单克隆抗体可作为治疗自身免疫疾病的一种有效药物。目前仅有美国强生公司开发的IL- 12抗体获得美国FDA的批准，用于临床治疗银屑病等自身免疫相关疾病，但其价格昂贵。由于自身免疫性疾病涉及的人群广泛，所以研发更高效的IL-12单克隆抗体将具有巨大的社会效益和广阔的市场前景。
发明内容
本发明采用杂交瘤技术获得了一组IL-12单克隆抗体，并成功对其进行了人源化改造。这些抗体在制备应用于阻断或调节IL-12水平、以及治疗自身免疫疾病的相关药物方面有巨大的应用前景。
本发明提供的鼠源或人源化IL-12抗体或功能性片段，包括了重链序列和轻链序列。抗人IL-12鼠源抗体的重链可变区、轻链可变区的氨基酸序列信息如下：1B6重链可变区、轻链可变区的氨基酸序列分别为SEQ ID NO：1、2；2A3重链可变区、轻链可变区的氨基酸序列分别为SEQ ID NO：3、4；2E9重链可变区、轻链可变区的氨基酸序列分别为SEQ ID NO：5、6；11B4重链可变区、轻链可变区的氨基酸序列分别为SEQ ID NO：7、8；9E2重链可变区、轻链可变区的氨基酸序列分别为SEQ ID NO：9、10；19A4重链可变区、轻链可变区的氨基酸序列分别为SEQ ID NO：11、12。抗人IL-12鼠源抗体重链及轻链的CDR1、CDR2、 CDR3氨基酸序列信息如下：1B6重链CDR1、CDR2、CDR3氨基酸序列分别为SEQ ID NO： 13、14、15，其轻链CDR1、CDR2、CDR3氨基酸序列分别为SEQ ID NO：16、17、18； 2A3重链CDR1、CDR2、CDR3氨基酸序列分别为SEQ ID NO：19、20、21，其轻链CDR1、 CDR2、CDR3氨基酸序列分别为SEQ ID NO：22、23、24；2E9重链CDR1、CDR2、CDR3 氨基酸序列分别为SEQ ID NO：25、26、27，其轻链CDR1、CDR2、CDR3氨基酸序列分别为SEQ ID NO：28、29、30；11B4重链CDR1、CDR2、CDR3氨基酸序列分别为SEQ ID NO：31、32、33，其轻链CDR1、CDR2、CDR3氨基酸序列分别为SEQ ID NO：34、35、36；9E2重链CDR1、CDR2、CDR3氨基酸序列分别为SEQ ID NO：37、38、39，其轻链 CDR1、CDR2、CDR3氨基酸序列分别为SEQ ID NO：40、41、42；19A4重链CDR1、 CDR2、CDR3氨基酸序列分别为SEQ ID NO：43、44、45，其轻链CDR1、CDR2、CDR3 氨基酸序列分别为SEQ ID NO：46、47、48。
进一步，抗人IL-12抗体或片段经过改造后，成为人源化抗体。
分离的核酸分子：编码上述的抗体或功能性片段。
抗人IL-12人源化抗体11B4重链和轻链可变区氨基酸序列为SEQ ID NO：49、50；人源化抗体2A3重链和轻链可变区氨基酸序列为SEQ ID NO：51、52
表达载体，包含表达上述抗体的核酸分子。
药物组合物，其包含上述的抗体或其功能片段，以及药用载体
上述的抗体或其功能性片段，核酸分子、表达载体、宿主细胞、药物组合物在制备影响IL-12免疫功能药物中的用途。
本发明获得了如下有益效果：本发明采用哺乳动物细胞表达系统制备重组IL-12作为抗原免疫小鼠，将小鼠脾脏细胞与骨髓瘤细胞融合后获得杂交瘤细胞。通过对大量杂交瘤细胞的多次克隆及筛选后，得到一些单克隆杂交瘤细胞株。这些杂交瘤细胞株能够产生和IL- 12特异性结合的单克隆抗体(图1)，有效阻断IL-12与IL-12受体的结合(图2)，抑制人外周血淋巴细胞(PBMC)分泌INF-γ(图3)。通过RT-PCR(Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction，反转录-聚合酶链式扩增)克隆编码抗体轻链和重链可变区的基因，采用互补决定簇嫁接(complementarity-determining regions graft，CDR-graft)方法构建人源化抗体。体外功能实验表明，这些人源化IL-12抗体能特异性结合IL-12蛋白(图4)，可以有效阻断IL-12与IL-12受体的结合(图5),抑制人外周血淋巴细胞(PBMC)的INF- γ产生(图6)，并且该活性高于阳性对照抗体。本专利中阳性对照抗体的序列来自专利 US20180079809(Ustekinumab)。以上实验结果表明，本发明所述的单克隆抗体或其抗原结合片段，或者包含本发明所述单克隆抗体或其偶联物，在制备应用于阻断IL-12功能的药物、以及在预防和治疗或者辅助治疗自身免疫性疾病的药物方面具有良好的应用前景。
附图说明
图1：用ELISA测定IL-12杂交瘤抗体与IL-12蛋白结合的EC50；
图2：用FACS测定IL-12杂交瘤抗体阻断IL-12与CHO-IL-12R细胞结合的IC50；
图3：IL-12杂交瘤抗体对人外周血淋巴细胞(PBMC)分泌INF-γ的抑制作用；
图4：用ELISA测定IL-12人源化抗体与IL-12蛋白结合的EC50；
图5：用FACS测定IL-12人源化抗体阻断IL-12与CHO-IL-12R细胞结合的IC50；
图6：IL-12人源化抗体对人外周血淋巴细胞(PBMC)分泌INF-γ的抑制作用。
具体实施方式
实施例1
IL-12杂交瘤抗体的制备
用携带组氨酸标签的人IL-12(IL-12-His)作为抗原，与等体积完全弗氏佐剂(Sigma,Cat. No.:F5581)充分乳化后，皮下免疫6-8周龄Balb/c小鼠(购自北京维通利华实验动物技术有限公司)，抗原免疫量为50μg/只。随后每隔2周，用相同剂量的抗原与不完全弗氏佐剂 (Sigma,Cat.No.:F5506)充分乳化后，皮下免疫小鼠三次。三次免疫后测定小鼠血清效价，细胞融合前3天经腹腔注射进行加强免疫。以PEG Hybri-Max(Sigma,Cat.No.:7181)作为融合剂，将小鼠脾脏细胞与SP2/0细胞按照4:1的比例混合。将融合后的细胞(1×105细胞/ 孔)加入到含有0.1mL 1×HAT培养基(Invitrogen,Cat.No.:21060-017)的96孔板中进行培养。培养至第3天加入0.1mL HT(Invitrogen,Cat.No.:11067-030)培养基，在第7天吸掉96孔板中的培养基，补加0.2mL新鲜的HT培养基。在第9天，收取上清液进行ELISA和FACS检测。
ELISA筛选与IL-12蛋白结合的抗体。用IL-12-His蛋白包被96孔ELISA板(Corning, Cat.No.:9018)，置室温过夜，用洗涤缓冲液(PBS+0.05％Tween20)洗涤3次后，加入封闭缓冲液(PBS+2％BSA(Sigma,Cat.No.:V90093))孵育1小时；用洗涤缓冲液洗涤3次；加入杂交瘤上清液孵育1小时，洗涤3次；每孔加入100μL经10000倍稀释的羊抗鼠IgG 二抗(Thermo,Cat.No.:31432)，室温孵育1小时，洗涤3次；每孔加入100μL的TMB(北京百奥赛博，Cat.No.:ES-002)显色1分钟，再加入100μL/孔的终止液(2N H2SO4)终止反应，用TecanSpark酶标仪测定各孔OD450信号。
FACS筛选阻断IL-12与IL-12R结合的抗体。取50μL杂交瘤上清与biotin标记的IL-12-His预孵育1小时，再加入CHO-IL-12R细胞(1×105细胞/孔)进行混合，并转至96孔 U型底中孵育1小时，用FACS缓冲液(PBS+3％FBS)离心洗涤3次后加入经400倍稀释的PE anti-Biotin(Biolegend,Cat.No.:409004)二抗，孵育30分钟，经FACS缓冲液洗涤后，用BDAccruiC6流式细胞仪检测CHO-IL-12R细胞的PE信号。
用有限稀释法对IL-12杂交瘤细胞进行亚克隆，随后采用ELISA和FACS方法进行检测筛选，获得阳性杂交瘤单克隆。将阳性单克隆杂交瘤置50mL无血清培养基中(Invitrogen, Cat.No.:12045-076)培养8-9天后，离心收取上清液。用Protein A亲和层析纯化单克隆抗体，纯化后的抗体样品经超滤离心管(Millipore,Cat.No.:ACS500024)换液浓缩后，用 BCA方法测定蛋白浓度，用鳌试剂(厦门鲎试剂生物科技股份有限公司)检测抗体样品的内毒素含量。用ELISA和FACS方法检测纯化的抗体样品与IL-12的结合及其阻断IL-12与 IL-12R结合的活性，具体结果见表1-2和图1-2，候选的IL-12杂交瘤抗体能够与IL-12蛋白结合，并可以阻断IL-12与IL-12R的结合。
表1.用ELSIA方法检测IL-12杂交瘤抗体与IL-12结合的EC50。
Figure BDA0003143024170000041
表2.用FACS方法检测IL-12杂交瘤抗体阻断IL-12结合CHO-IL-12R细胞的IC50
Figure BDA0003143024170000042
实施例2
IL-12杂交瘤抗体对人外周血淋巴细胞(PBMC)分泌细胞因子的影响
复苏冻存的PBMC(购自妙顺上海生物科技有限公司)，加至预热的RPMI1640完全培养基中，颠倒混匀后置于离心机中1500rpm离心5分钟，用完全培养基重悬细胞并计数。在96孔板中，每孔加入100μL含人重组IL-1β(终浓度：50ng/mL)的PBMC细胞 (1×105/孔)。稀释配制不同浓度的IL-12抗体(终浓度为20μg/mL，10倍梯度稀释)，分别与IL-12(终浓度：10ng/mL)混匀后室温孵育1小时，转移100μL抗体/抗原混合液至对应细胞孔中，将96孔细胞培养板置于37℃,5％CO2培养箱中孵育24小时，收集上清液。用IFN-γELISA试剂盒(R&DSystems,Cat.No.:DY285)检测上清中的细胞因子浓度。如图3所示，本发明中列举的IL-12抗体均具有抑制PBMC细胞分泌IFN-γ的作用。
实施例3
IL-12抗体可变区基因的克隆
用TRIzon(Cwbiotech,Cat.No.:CW0580)裂解IL-12单克隆杂交瘤细胞株，提取杂交瘤细胞的总RNA。用HiFi Script cDNA合成试剂盒(Cwbiotech,Cat.No.:CW2569)将杂交瘤细胞的RNA反转录为cDNA。以cDNA为模板，用简并引物通过PCR方法(Kettleborough, etal.,(1993)Eur.J.Immunology 23:206-211；Strebe,et al.,(2010)AntibodyEngineering 1:3- 14)扩增抗体的重链和轻链的可变区基因。将PCR扩增产物连接到T/A载体后，转化 DH5a感受态细胞，涂板并置37℃过夜培养。从培养板上挑取单克隆，扩大培养后抽提质粒，测定抗体的基因序列。根据抗体的基因序列，分析其互补决定簇(CDR)和骨架区。抗体重链和轻链的可变区氨基酸序列编号和CDR氨基酸序列编号见表3。
表3.IL-12杂交瘤抗体及CDR区的序列编号
Figure BDA0003143024170000051
Figure BDA0003143024170000061
Figure BDA0003143024170000071
实施例4
鼠源IL-12抗体的人源化
采用互补决定簇嫁接法进行IL-12抗体的人源化改造。首先，在IMGT数据库中分别搜寻与鼠源11B4和2A3抗体的轻、重链可变区序列同源性最高的人胚系抗体(germlineantibody)序列。11B4抗体轻链可变区人源化选取的胚系为IGKV3-15*01，重链可变区人源化选取IGHV1-3*01。2A3抗体轻链可变区人源化选取的胚系为IGKV4-1*01，重链可变区人源化选取IGHV1-3*01。保留鼠源抗体的CDR区，将鼠源抗体的框架区(ramework) 序列用人胚系抗体的框架区序列置换。建立鼠源抗体的结构模型，逐个对比人源抗体与相应鼠源抗体框架区中每个位点的氨基酸，如果框架区的某个位点采用人的氨基酸序列没有导致CDR区域空间结构的破坏或改变，则该位点使用人的氨基酸序列，否则在该位点使用对应的鼠源序列(即回复突变为鼠源序列)。
根据结构模拟，将11B4抗体人源化重链的第28位Thr回复突变为Ala，第48位Met回复突变为Ile，第67位Val回复突变为Ala，第69位Ile回复突变为Leu，第71位Arg回复突变为Val，第73位Thr回复突变为Ile，第94位Arg回复突变为Thr。将11B4抗体人源化轻链的第46位Leu回复突变为Ala。将2A3抗体人源化重链的第27位Tyr回复突变为 Phe，第28位Thr回复突变为Asn，第29位Phe回复突变为Ile，第30位Thr回复突变为 Lys，第48位Met回复突变为Ile，第67位Val回复突变为Ala，第71位Arg回复突变为 Ala，第93位Ala回复突变为Ser。将2A3抗体人源化轻链的第49位Tyr回复突变为Ser。
11B4人源化抗体重链和轻链可变区的氨基酸序列号分别为SEQ ID NO：49和SEQID NO：50。2A3人源化抗体重链和轻链可变区的氨基酸序列号分别为SEQ ID NO：51和SEQID NO：52。将11B4和2A3人源化抗体构建为IgG1亚型。人源化抗体的重链和轻链的可变区氨基酸序列见表4。
表4.IL-12人源化抗体的序列表
Figure BDA0003143024170000081
合成编码11B4和2A3人源化抗体轻链和重链，并插入到表达载体pcDNA3.1。用抗体轻链和重链表达质粒各0.1mg共转染200mL的293细胞(细胞密度为1×106/mL)，在 37oC振摇培养6天，离心收集上清液，用Protein A纯化人源化抗体，纯化后的人源化抗体用于活性检测。
实施例5
人源化IL-12抗体的活性检测
采用ELISA和FACS检测纯化的人源化抗体样品与IL-12的结合，及其阻断IL-12与IL-12R结合的活性，具体方法参考实施例1。人源化抗体的活性测定结果见表5-6和图4- 5。结果表明，IL-12人源化抗体能够与IL-12蛋白结合，并可以阻断IL-12与IL-12R的结合。
表5.用ELSIA方法检测IL-12人源化抗体与IL-12结合的EC50
抗体 hu11B4 hu2A3 Ustekinumab
EC50(ng/mL) 51.70 57.15 71.77
表6.用FACS方法检测IL-12人源化抗体阻断IL-12结合CHO-IL-12R细胞的IC50
抗体 hu11B4 hu2A3 Ustekinumab
IC50(ng/mL) 322.6 398.0 223.8
实施例6
IL-12人源化抗体对人外周血淋巴细胞(PBMC)分泌细胞因子的影响
测定了人源化IL-12抗体对人外周血淋巴细胞(PBMC)分泌细胞因子IFN-γ的作用，具体实验方法参考实施例2，测定结果见图6。实验数据显示，人源化IL-12抗体具有显著抑制PBMC细胞分泌IFN-γ的作用，且优于阳性对照抗体Ustekinumab。
以上实施例的结果表明，本发明所述的单克隆抗体或者抗原结合片段，以及包含本发明所述单克隆抗体或其抗原结合片段的偶联物在制备阻断IL-12与IL-12R结合的药物、调节IL-12活性或IL-12表达水平的药物、调节机体免疫的药物、抑制PBMC细胞表达INF-γ的药物、以及在预防和治疗或者辅助治疗自身免疫疾病的药物方面具有良好的应用前景。
以上仅为本发明的较佳实施例而已，不能以此限定本发明的保护范围，即大凡依本发明权利要求书及发明内容所做的简单的等效变化与修改，皆仍属于本发明专利申请的保护范围。
SEQUENCE LISTING
<110> 东大生物技术（苏州）有限公司
<120> 一组IL-12单克隆抗体及其医药用途
<130> 2021
<160> 52
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 119
<212> PRT
<213> artificial
<400> 1
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Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Phe Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Ser
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<212> PRT
<213> artificial
<400> 2
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Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Ser Asn Asp
20 25 30
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<213> artificial
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Ser Val Lys Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr
20 25 30
Tyr Met His Trp Leu Lys Gln Arg Pro Glu Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Lys Ile Asp Pro Ala Asn Gly Asn Thr Lys Tyr Asp Pro Lys Phe
50 55 60
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65 70 75 80
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85 90 95
Ser Arg Arg Phe Tyr Asp Ser Gly Phe Tyr Tyr Tyr Phe Tyr Ile Trp
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<213> artificial
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20 25 30
Ser Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
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<213> artificial
<400> 5
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20 25 30
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Asp Arg Val Ser Val Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asn Val Gly Thr Asn
20 25 30
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<213> artificial
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20 25 30
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Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
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Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Asp Lys Arg Leu Glu Trp Val
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Glu Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Ile Asn Arg Asn
20 25 30
Leu Asn Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Asn Ser Pro Lys Thr Leu Ile
35 40 45
Ile Arg Thr Asn Arg Leu Val Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Gln Val Tyr Ser Leu Thr Val Ser Ser Leu Glu Phe
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Gly
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Gly
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<213> artificial
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Asn
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Lys Ala Ser Gln Asn Val Gly Thr Asn Val Ala
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<213> artificial
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Ser Ala Ser Lys Arg Phe Ser
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Ala
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<213> artificial
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Thr Ile Gly Ser Gly Gly Leu Tyr Thr Tyr Ser Pro Asp Thr Val Lys
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Gly
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Ser Gly Pro Phe Ala Tyr
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<213> artificial
<400> 47
Arg Thr Asn Arg Leu Val Asp
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<213> artificial
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Leu Gln Phe Asp Glu Phe Pro Trp Thr
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Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
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Val Ser Ser
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Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly
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Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gln Asn Val Gly Thr Asn
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<400> 52
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
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100 105 110

Claims (8)

1.一组IL-12单克隆抗体或其抗原结合片段，包括重链和轻链，其特征在于，所述重链的CDR1的氨基酸序列选自SEQ ID NO：13、19、25、31、37、43中的一种；所述重链的CDR2的氨基酸序列选自SEQ ID NO：14、20、26、32、38、44中的一种；所述重链的CDR3的氨基酸序列选自SEQ ID NO：15、21、27、33、39、45中的一种；所述轻链的CDR1的氨基酸序列选自SEQ IDNO：16、22、28、34、40、46中的一种；所述轻链的CDR2的氨基酸序列选自SEQ ID NO：17、23、29、35、41、47中的一种；所述轻链的CDR3的氨基酸序列选自SEQ ID NO：18、24、30、36、42、48中的一种；其中所述抗原结合片段的重链和轻链包含分别跨越所述抗体的重链和轻链的CDR1到CDR3的氨基酸序列。
2.根据权利要求1所述的一组IL-12单克隆抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述重链可变区的氨基酸序列选自SEQ ID NO：1、3、5、7、9、11中的一种；所述轻链可变区的氨基酸序列选自SEQ ID NO： 2、4、6、8、10、12中的一种。
3.根据权利要求2所述的一组IL-12单克隆抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述重链和轻链经过人源化；所述人源化后的重链可变区的氨基酸序列选自SEQ ID NO：49、51中的一种；所述人源化后的轻链可变区的氨基酸序列选自SEQ ID NO：50、52中的一种。
4.权利要求1-3任一项所述的一组IL-12单克隆抗体或其抗原结合片段在制备如下药物中的用途：阻断IL-12与IL-12受体结合的药物、调节IL-12活性或IL-12水平的药物、调节IL-12对机体免疫激活的药物、调节T淋巴细胞的药物或者调节T淋巴细胞中INF-γ表达的药物。
5.一组核酸分子，其特征在于，所述核酸分子编码如权利要求1-3任一项所述的IL-12单克隆抗体或其抗原结合片段。
6.一组表达载体，其特征在于，所述载体包含如权利要求5所述的核酸分子的序列以及与该序列相关的表达调控序列。
7.一种单克隆抗体偶联物，包括单克隆抗体和偶联部分，其中，所述单克隆抗体为权利要求1-6任一项所述的一组IL-12单克隆抗体或其抗原结合片段，所述偶联部分为选自放射性核素、药物、毒素、细胞因子、细胞因子受体片段、酶、荧光素、和生物素中的一种或多种。
8.表达权利要求1-7任一项所述的一组IL-12单克隆抗体或其抗原结合片段的核酸分子、表达载体、宿主细胞在制备如下药物中的用途：阻断IL-12与IL-12受体结合的药物、调节IL-12活性或IL-12水平的药物、调节IL-12对机体免疫激活的药物、调节T淋巴细胞的药物或者调节T淋巴细胞中INF-γ表达的药物。
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