CN113308466A - 一种针对表位点为tygpvfmsl的tcr所设计的引物及其应用 - Google Patents

一种针对表位点为tygpvfmsl的tcr所设计的引物及其应用 Download PDF

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CN113308466A CN202110681804.2A CN202110681804A CN113308466A CN 113308466 A CN113308466 A CN 113308466A CN 202110681804 A CN202110681804 A CN 202110681804A CN 113308466 A CN113308466 A CN 113308466A
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张立峰
杨宏波
孟锦
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Guangdong Tiankeya Biomedical Technology Co ltd
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Guangdong Tiankeya Biomedical Technology Co ltd
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    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
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Abstract

本发明涉及质粒克隆技术领域。本发明提供了一种针对表位点为TYGPVFMSL的TCR所设计的引物及其应用，所述引物对包括L24‑3位点的引物对、L24‑5位点的引物对和L24‑13位点的引物对中的一种、两种或三种。本发明的引物对针对分型为HLA A24、表位点为TYGPVFMSL的患者体内EBV病毒抗原肽段的TCR所设计，能够实现特定质粒的克隆。

Description

一种针对表位点为TYGPVFMSL的TCR所设计的引物及其应用
技术领域
本发明涉及质粒克隆技术领域，尤其涉及一种针对表位点为TYGPVFMSL的TCR所设计的引物及其应用。
背景技术
载体是一种运载体(vehicle)，通过其可将多核苷酸序列(例如，外源基因)引入至宿主细胞中，以便转化宿主并促进引入的序列的表达(例如转录和翻译)。载体包括质粒、噬菌体、病毒等。载体的最普遍的类型是质粒，其是指闭合的环状双链DNA环，其中可连接含有目标基因的另外的DNA段。载体的另一种类型为病毒载体，其中将待运输的核酸构建体连接至病毒基因组中。病毒载体可在它们被引入的宿主细胞中自主复制、或可将它们自身整合至宿主细胞的基因组中，从而与宿主基因组一起复制。此外，某些载体可指导与其可操作连接的基因的表达。
要将某一目标基因片段克隆进质粒载体，必须有与目标基因片段序列相匹配的引物。我公司克隆到了3条针对免疫分型为HLA A24的病人体内的EBV病毒蛋白的TYGPVFMSL表位点的TCR，并对这3条TCR的基因序列申请了专利保护。但是，现有技术中尚没有将此3条TCR的基因序列克隆进质粒载体的引物。
发明内容
本发明的目的在于提供一种引物对，用于质粒克隆。
为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案。
本发明提供了一种引物对所述引物对包括L24-3位点的引物对、L24-5位点的引物对和L24-13位点的引物对中的一种、两种或三种。
作为优选，所述引物对针对分型为HLA A24、表位点为TYGPVFMSL的患者体内EBV病毒抗原肽段的TCR所设计。
作为优选，所述L24-3位点的引物对的序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示。
作为优选，所述L24-5位点的引物对的序列如SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示。
作为优选，所述L24-13位点的引物对的序列如SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6所示。
本发明还提供了所述的引物对在质粒克隆中的应用。
本发明提供了一种针对表位点为TYGPVFMSL的TCR所设计的引物及其应用，所述引物对包括L24-3位点的引物对、L24-5位点的引物对和L24-13位点的引物对中的一种、两种或三种。本发明的引物对针对分型为HLA A24、表位点为TYGPVFMSL的患者体内EBV病毒抗原肽段的TCR所设计，能够实现特定质粒的克隆。
附图说明
图1为TCRPCR扩增后胶回收电泳结果；
图2为骨架载体质粒图谱；
图3为TCR与载体重组质粒酶切电泳结果；
图4为TCR与载体重组质粒测序峰图；
图5为TCR转染Jurkat细胞，流式检测转染效率；
图6为TCR转染Jurkat细胞后，功能验证流式检测CD69。
具体实施方式
本发明提供了一种引物对，所述引物对包括L24-3位点的引物对、L24-5位点的引物对和L24-13位点的引物对中的一种、两种或三种。
在本发明中，所述引物对针对分型为HLA A24、表位点为TYGPVFMSL的患者体内EBV病毒抗原肽段的TCR所设计。
在本发明中，所述L24-3位点的引物对的序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示。
在本发明中，所述L24-5位点的引物对的序列如SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示。
在本发明中，所述L24-13位点的引物对的序列如SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6所示。
本发明还提供了所述的引物对在质粒克隆中的应用。
在本发明中，所述质粒优选为MP71；
在本发明中，所述质粒骨架为public available information。
在本发明中，所述MP71的序列如SEQ ID NO.7所示。
下面结合实施例对本发明提供的技术方案进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。
实施例1引物设计
引物对设计实例：以SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2为例。
Forwardprimer(SEQ ID NO.1):GCCGCGCCACCATGGCCACA；
Reverse primer(SEQ ID NO.2):GTAGGTCCTCCACCACTGTCAGTCTG；
注：SEQ ID NO.1序列中：“GCCGCGCCACC”位于质粒载体中，“ATGGCCACA”位于TCR基因片段；SEQ ID NO.2序列中：“GTAGGTCCTC”位于质粒载体中，“CACCACTGTCAGTCTG”位于TCR基因片段。
实施例2载体构建
载体构建其方法包括如下步骤：
1、TCR基因合成后进行PCR扩增以合成的TCR基因为模板，运用SEQ ID NO.1和SEQID NO.2进行PCR扩增；PCR反应体系如下：PCR预混液25μl，正向引物5μl，引物浓度：10μm/μl，反向引物5μl，引物浓度：10μm/μl，合成的TCR基因序列1μl，浓度：10ng/μl，Nuclease-Free Water 14μl，总反应体系共50μl；PCR反应程序：98℃，2min；(98℃，15s；64℃，15s；72℃，20s)30循环；72℃，2min。
2、PCR产物胶回收
对步骤1中的PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳，然后胶回收，具体步骤参照试剂盒TaKaRa MiniBEST Agarose Gel DNA Extraction Kit Ver.4.0说明书，制备琼脂糖凝胶，对回收产物片段运行电泳，其结果如图1示。
3、线性化载体与胶回收片段进行同源重组
步骤2中的胶回收PCR产物片段与线性化的载体重组摩尔比为1:1，然后加入10μl的2X Seamless Cloning Mix，并用水补至20μl，50℃反应30min，载体骨架核酸序列如SEQID NO.7所示，重组质粒图谱信息如图2所示。
4、重组质粒载体转化DH5α感受态细菌
取5μl步骤4的反应样品加入到50μl DH5α等感受态细胞中，轻轻混匀，将该混合物置于冰上30min；42℃水浴中90秒进行热激，然后迅速放回冰浴中，静置3～5min；加入300μl不含抗生素的LB培养液，轻轻混匀，37℃震荡培养1h；然后全部均匀涂布到含适当抗生素的LB平板上，37℃培养箱中培养过夜。
5、质粒提取
挑取步骤4中的单克隆菌落，摇菌过夜；取5ml过夜培养的菌液，加入离心管中，12,000rpm离心1min，吸除上清；向留有菌体沉淀的离心管中加入250μl溶液P1，吹散沉淀；向离心管中加入250μl溶液P2，温和地上下翻转6-8次使菌体充分裂解；向离心管中加入350μl溶液P3，立即温和地上下翻转6-8次，充分混匀，此时将出现白色絮状沉淀，12,000rpm离心10min；将上一步收集的上清液用移液器转移到吸附柱中，12,000rpm离心30-60s，倒掉收集管中的废液，将吸附柱放入收集管中；向吸附柱中加入600μl漂洗液PW，12,000rpm离心30-60s，倒掉收集管中的废液，将吸附柱入收集管中；重复上一步骤；将吸附柱C放入收集管中,12,000rpm离心2min；将吸附柱置于一个干净的离心管中，向吸附膜的中间部位滴加50μl洗脱缓冲液，室温放置2min，12,000rpm离心2min将质粒溶液收集到离心管中。
6、重组质粒的鉴定
对步骤5中提取的质粒进行双酶切、测序鉴定，酶切电泳结果及测序峰图见图3、图4。
实施例3载体的使用
本过程包括病毒液的制备及细胞的转染，详细过程如下所述：
1、制备病毒液
Lipo3000转染293FT细胞，转染前一天，以合适的细胞密度接种到6孔板培养板中，Lipo3000试剂转染操作流程详细步骤参见试剂InvitrogenTM LipofectamineTM 3000Transfection Reagent；37℃、5％CO2培养培养48小时，吸出培养基上清用于转染；
2、病毒转染Jurkat细胞
293T细胞转染后第二天，用Retronectin包被24孔培养板，4℃过夜备用；将病毒液加入Retronectin包被过的24孔培养板中，32℃，2000g，离心2h，弃去上清液；取适量转染的Jurkat细胞加入24孔培养板中，30℃，600g，离心30min，使细胞贴于底壁；离心完毕后，将培养板置于37℃，5％CO2培养箱中培养。48h后，取适量细胞，500g离心5min，去培养基上清；PBS重悬，hCD3(PE)/mTCRbeta(PB)流式染料各1ul，室温避光染色15min，加入1ml PBS，500g离心5min，去上清；适量PBS或FASC Buffer重悬后做流式细胞检测，其结果流式图如图5所示。
实施例4：结果验证
结果验证详细过程如下所述：
收集K562细胞，重悬并计数，在24孔板中进行刺激共培养，每孔4e5个K562细胞，加相应的抗原肽至终浓度10ug/ml；培养箱中孵育1.5h，将24孔板离心去培养基上清；补新鲜培养基及每孔2e5个转染的Jurkat细胞，孵育过夜；hCD3(PE)，mTCRbeta(PB)，hCD69(APC)，室温避光染色15min；加PBS清洗后做流式细胞检测，其结果流式图如图6所示。
由以上实施例可知，本发明提供了一种针对表位点为TYGPVFMSL的TCR所设计的引物及其应用，所述引物对包括L24-3位点的引物对、L24-5位点的引物对和L24-13位点的引物对中的一种、两种或三种。本发明的引物对针对分型为HLA A24、表位点为TYGPVFMSL的患者体内EBV病毒抗原肽段的TCR所设计，能够实现特定质粒的克隆。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
序列表
<110> 广东天科雅生物医药科技有限公司
<120> 一种针对表位点为TYGPVFMSL的TCR所设计的引物及其应用
<160> 7
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
gccgcgccac catggccaca 20
<210> 2
<211> 26
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 2
gtaggtcctc caccactgtc agtctg 26
<210> 3
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 3
ggccgcgcca ccatggccac a 21
<210> 4
<211> 28
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 4
cgtaggtcct caagaaccag cagtctgg 28
<210> 5
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 5
ggccgcgcca ccatggccac a 21
<210> 6
<211> 26
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 6
gtaggtcctc cagaactgtc agtctg 26
<210> 7
<211> 5979
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 7
gaggacctac gtaacgtgac ccctcccaag gtgtccctgt tcgagcctag caaggccgag 60
atcgccaaca agcagaaggc cacactcgtc tgcctggcta gaggcttctt cccagaccac 120
gtggagctgt cttggtgggt gaacggcaag gaggtgcact caggagtgtc taccgaccct 180
caggcctaca aggagagcaa ctacagctac tgcctgtcct ccagactcag ggtctgcgcc 240
accttttggc acaaccctcg gaaccacttc cgctgtcagg tccagttcca cggcctgtcc 300
gaggaagaca agtggccaga gggctctcct aagccagtga cacagaacat cagcgccgag 360
gcttggggaa gagccgattg cggaatcacc agcgcctctt accagcaggg agtgctgtca 420
gctaccatcc tgtacgagat cctgctgggc aaggccacac tgtacgcagt gctggtgtcc 480
actctggtcg tgatggctat ggtgaagcgg aagaacagct aggaattcga gcatcttacc 540
gccatttatt cccatatttg ttctgttttt cttgatttgg gtatacattt aaatgttaat 600
aaaacaaaat ggtggggcaa tcatttacat tttatgggat atgtaattac tagttcaggt 660
gtattgccac aagacaaaca tgttaagaaa ctttcccgtt atttacgctc tgttcctgtt 720
aatcaacctc tggattacaa aatttgtgaa agattgactg atattcttaa ctatgttgct 780
ccttttacgc tgtgtggata tgctgcttta atgcctctgt atcatgctat tgcttcccgt 840
acggctttcg ttttctcctc cttgtataaa tcctggttgc tgtctcttta tgaggagttg 900
tggcccgttg tccgtcaacg tggcgtggtg tgctctgtgt ttgctgacgc aacccccact 960
ggctggggca ttgccaccac ctgtcaactc ctttctggga ctttcgcttt ccccctcccg 1020
atcgccacgg cagaactcat cgccgcctgc cttgcccgct gctggacagg ggctaggttg 1080
ctgggcactg ataattccgt ggtgttgtcg gggaagctga cgtcctttcc atggctgctc 1140
gcctgtgttg ccaactggat cctgcgcggg acgtccttct gctacgtccc ttcggctctc 1200
aatccagcgg acctcccttc ccgaggcctt ctgccggttc tgcggcctct cccgcgtctt 1260
cgctttcggc ctccgacgag tcggatctcc ctttgggccg cctccccgcc tgtttcgcct 1320
cggcgtccgg tccgtgttgc ttggtcgtca cctgtgcaga attgcgaacc atggattcca 1380
ccgtgaactt tgtctcctgg catgcaaatc gtcaacttgg catgccaaga ataattcgga 1440
tccaagctta ggcctgctcg ctttcttgct gtcccatttc tattaaaggt tcctttgttc 1500
cctaagtcca actactaaac tgggggatat tatgaagggc cttgagcatc tggattctgc 1560
ctagcgctaa gcttaacacg agccatagat agaataaaag attttattta gtctccagaa 1620
aaagggggga atgaaagacc ccacctgtag gtttggcaag ctagcttaag taacgccatt 1680
ttgcaaggca tggaaaatac ataactgaga atagagaagt tcagatcaag gttaggaaca 1740
gagagacagc agaatatggg ccaaacagga tatctgtggt aagcagttcc tgccccggct 1800
cagggccaag aacagttgga acagcagaat atgggccaaa caggatatct gtggtaagca 1860
gttcctgccc cggctcaggg ccaagaacag atggtcccca gatgcggtcc cgccctcagc 1920
agtttctaga gaaccatcag atgtttccag ggtgccccaa ggacctgaaa tgaccctgtg 1980
ccttatttga actaaccaat cagttcgctt ctcgcttctg ttcgcgcgct tctgctcccc 2040
gagctcaata aaagagccca caacccctca ctcggcgcgc cagtcctccg atagactgcg 2100
tcgcccgggt acccgtgttc tcaataaacc ctcttgcagt tgcatccgac tcgtggtctc 2160
gctgttcctt gggagggtct cctctgagtg attgactgcc cacctcgggg gtctttcatt 2220
ctcgagcagc ttggcgtaat catggtcata gctgtttcct gtgtgaaatt gttatccgct 2280
cacaattcca cacaacatac gagccggaag cataaagtgt aaagcctggg gtgcctaatg 2340
agtgagctaa ctcacattaa ttgcgttgcg ctcactgccc gctttccagt cgggaaacct 2400
gtcgtgccag ctgcattaat gaatcggcca acgcgcgggg agaggcggtt tgcgtattgg 2460
gcgctcttcc gcttcctcgc tcactgactc gctgcgctcg gtcgttcggc tgcggcgagc 2520
ggtatcagct cactcaaagg cggtaatacg gttatccaca gaatcagggg ataacgcagg 2580
aaagaacatg tgagcaaaag gccagcaaaa ggccaggaac cgtaaaaagg ccgcgttgct 2640
ggcgtttttc cataggctcc gcccccctga cgagcatcac aaaaatcgac gctcaagtca 2700
gaggtggcga aacccgacag gactataaag ataccaggcg tttccccctg gaagctccct 2760
cgtgcgctct cctgttccga ccctgccgct taccggatac ctgtccgcct ttctcccttc 2820
gggaagcgtg gcgctttctc atagctcacg ctgtaggtat ctcagttcgg tgtaggtcgt 2880
tcgctccaag ctgggctgtg tgcacgaacc ccccgttcag cccgaccgct gcgccttatc 2940
cggtaactat cgtcttgagt ccaacccggt aagacacgac ttatcgccac tggcagcagc 3000
cactggtaac aggattagca gagcgaggta tgtaggcggt gctacagagt tcttgaagtg 3060
gtggcctaac tacggctaca ctagaagaac agtatttggt atctgcgctc tgctgaagcc 3120
agttaccttc ggaaaaagag ttggtagctc ttgatccggc aaacaaacca ccgctggtag 3180
cggtggtttt tttgtttgca agcagcagat tacgcgcaga aaaaaaggat ctcaagaaga 3240
tcctttgatc ttttctacgg ggtctgacgc tcagtggaac gaaaactcac gttaagggat 3300
tttggtcatg agattatcaa aaaggatctt cacctagatc cttttaaatt aaaaatgaag 3360
ttttaaatca atctaaagta tatatgagta aacttggtct gacagttacc aatgcttaat 3420
cagtgaggca cctatctcag cgatctgtct atttcgttca tccatagttg cctgactccc 3480
cgtcgtgtag ataactacga tacgggaggg cttaccatct ggccccagtg ctgcaatgat 3540
accgcgagac ccacgctcac cggctccaga tttatcagca ataaaccagc cagccggaag 3600
ggccgagcgc agaagtggtc ctgcaacttt atccgcctcc atccagtcta ttaattgttg 3660
ccgggaagct agagtaagta gttcgccagt taatagtttg cgcaacgttg ttgccattgc 3720
tacaggcatc gtggtgtcac gctcgtcgtt tggtatggct tcattcagct ccggttccca 3780
acgatcaagg cgagttacat gatcccccat gttgtgcaaa aaagcggtta gctccttcgg 3840
tcctccgatc gttgtcagaa gtaagttggc cgcagtgtta tcactcatgg ttatggcagc 3900
actgcataat tctcttactg tcatgccatc cgtaagatgc ttttctgtga ctggtgagta 3960
ctcaaccaag tcattctgag aatagtgtat gcggcgaccg agttgctctt gcccggcgtc 4020
aatacgggat aataccgcgc cacatagcag aactttaaaa gtgctcatca ttggaaaacg 4080
ttcttcgggg cgaaaactct caaggatctt accgctgttg agatccagtt cgatgtaacc 4140
cactcgtgca cccaactgat cttcagcatc ttttactttc accagcgttt ctgggtgagc 4200
aaaaacagga aggcaaaatg ccgcaaaaaa gggaataagg gcgacacgga aatgttgaat 4260
actcatactc ttcctttttc aatattattg aagcatttat cagggttatt gtctcatgag 4320
cggatacata tttgaatgta tttagaaaaa taaacaaata ggggttccgc gcacatttcc 4380
ccgaaaagtg ccacctgacg tctaagaaac cattattatc atgacattaa cctataaaaa 4440
taggcgtatc acgaggccct ttcgtctcgc gcgtttcggt gatgacggtg aaaacctctg 4500
acacatgcag ctcccggaga cggtcacagc ttgtctgtaa gcggatgccg ggagcagaca 4560
agcccgtcag ggcgcgtcag cgggtgttgg cgggtgtcgg ggctggctta actatgcggc 4620
atcagagcag attgtactga gagtgcacca tatgcggtgt gaaataccgc acagatgcgt 4680
aaggagaaaa taccgcatca ggcgccattc gccattcagg ctgcgcaact gttgggaagg 4740
gcgatcggtg cgggcctctt cgctattacg ccagctggcg aaagggggat gtgctgcaag 4800
gcgattaagt tgggtaacgc cagggttttc ccagtcacga cgttgtaaaa cgacggccag 4860
tgaattagta ctctagctta agtaacgcca ttttgcaagg catggaaaat acataactga 4920
gaatagagaa gttcagatca aggttaggaa cagagagaca gcagaatatg ggccaaacag 4980
gatatctgtg gtaagcagtt cctgccccgg ctcagggcca agaacagttg gaacagcaga 5040
atatgggcca aacaggatat ctgtggtaag cagttcctgc cccggctcag ggccaagaac 5100
agatggtccc cagatgcggt cccgccctca gcagtttcta gagaaccatc agatgtttcc 5160
agggtgcccc aaggacctga aatgaccctg tgccttattt gaactaacca atcagttcgc 5220
ttctcgcttc tgttcgcgcg cttctgctcc ccgagctcaa taaaagagcc cacaacccct 5280
cactcggcgc gccagtcctc cgatagactg cgtcgcccgg gtacccgtat tcccaataaa 5340
gcctcttgct gtttgcatcc gaatcgtgga ctcgctgatc cttgggaggg tctcctcaga 5400
ttgattgact gcccacctcg ggggtctttc atttggaggt tccaccgaga tttggagacc 5460
cctgcccagg gaccaccgac ccccccgccg ggaggtaagc tggccagcgg tcgtttcgtg 5520
tctgtctctg tctttgtgcg tgtttgtgcc ggcatctaat gtttgcgcct gcgtctgtac 5580
tagttggcta actagatctg tatctggcgg tcccgcggaa gaactgacga gttcgtattc 5640
ccggccgcag cccctgggag acgtcccagc ggcctcgggg gcccgttttg tggcccattc 5700
tgtatcagtt aacctacccg agtcggactt tttggagctc cgccactgtc cgaggggtac 5760
gtggctttgt tgggggacga gagacagaga cacttcccgc ccccgtctga atttttgctt 5820
tcggttttac gccgaaaccg cgccgcgcgt cttgtctgct gcagcatcgt tctgtgttgt 5880
ctctgtctga ctgtgtttct gtatttgtct gaaaattagc tcgacaaagt taagtaatag 5940
tccctctctc caagctcact tacaggcggc cgcgccacc 5979

Claims (6)

1.一种引物对，其特征在于，所述引物对包括L24-3位点的引物对、L24-5位点的引物对和L24-13位点的引物对中的一种、两种或三种。
2.根据权利要求1所述的一种引物对，其特征在于，所述引物对针对分型为HLA A24、表位点为TYGPVFMSL的患者体内EBV病毒抗原肽段的TCR所设计。
3.根据权利要求2所述的一种引物对，其特征在于，所述L24-3位点的引物对的序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示。
4.根据权利要求3所述的一种引物对，其特征在于，所述L24-5位点的引物对的序列如SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示。
5.根据权利要求1～4任意一项所述的一种引物对，其特征在于，所述L24-13位点的引物对的序列如SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6所示。
6.权利要求1～5任意一项所述的引物对在质粒克隆中的应用。
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US11773152B2 (en) * 2017-10-10 2023-10-03 Hiroshima University Technique for creating antigen-specific regulatory T cells (Treg) in which effector T cell (Teff) antigen receptors are used
CN109306005B (zh) * 2018-09-30 2019-11-15 清华大学 一种eb病毒特异性t细胞抗原受体及其应用
US20210380657A1 (en) * 2018-10-25 2021-12-09 The Council Of The Queensland Institute Of Medical Research T-Cell Receptors and Uses Thereof
WO2021243695A1 (en) * 2020-06-05 2021-12-09 Guangdong Tcrcure Biopharma Technology Co., Ltd. Tcr-t cell therapy targeting epstein-barr virus
CN113388612A (zh) * 2021-06-18 2021-09-14 重庆天科雅生物科技有限公司 一种针对表位点为iyvlvmlvl的tcr所设计的引物及其应用
CN113308521A (zh) * 2021-06-21 2021-08-27 重庆天科雅生物科技有限公司 一种特异性识别tygpvfmsl肽段的荧光pcr引物组及其应用

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113943783A (zh) * 2021-06-21 2022-01-18 重庆天科雅生物科技有限公司 一种特异性识别tygpvfmsl肽段的荧光pcr引物组及其应用

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