CN113293108A - 一种用于兰花盆土清洁的微生物菌剂的制备方法及得到的生物菌剂和应用 - Google Patents

一种用于兰花盆土清洁的微生物菌剂的制备方法及得到的生物菌剂和应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种用于兰花盆土清洁的微生物菌剂的制备方法及得到的生物菌剂和应用，涉及微生物培养及运用领域，通过提取分离、多次筛选、分离、扩繁实验，直至处理的植料无任何异味，筛选出此菌，即为兰花盆土清洁专用菌。发明制备的菌剂能帮助兰花清洁盆土，解决植料在分解过程中带来的弊端，有利于兰花根部呼吸和生长；通过比对实验，发现使用该菌剂的兰花新根萌发数量多，同时利用芽的分化和生长。

Description

一种用于兰花盆土清洁的微生物菌剂的制备方法及得到的生 物菌剂和应用
技术领域
本发明涉及微生物培养及运用领域，具体的涉及一种用于兰花盆土清洁的微生物菌剂的制备方法及得到的生物菌剂和应用。
背景技术
兰花隶属于兰科，是多年生草本单子叶植物，是附生或地生常绿草本。兰花的根系属肉质根，根系粗壮发达，同时根系呼吸需要大量氧气，又需要一定湿度，因此，有“养兰先养根”的谚语，故兰花栽培有别于其他植物的栽培方式，其盆土需要一个疏松、湿润、透气、干净的环境。同时需要有机质作为无机营养来源，因此兰花栽培通常采用树皮加植金石按一定比例混合作为栽培植料，通过微生物对树皮的分解为兰花提供无机营养。
但在微生物分解树皮的过程中会产生一些对兰花生长不利的气体及代谢废物，影响兰花盆土的干净的环境，阻碍兰花根系对氧气的吸收，导致兰花空根烂根现象的发生。
发明内容
本发明的目的在于：针对上述存在的问题，本发明提供一种用于兰花盆土清洁的微生物菌剂的制备方法及得到的生物菌剂和应用。
本发明采用的技术方案如下：
一种用于兰花盆土清洁的微生物菌剂的制备方法，包括以下步骤：
步骤1：提取分离：将长势良好的兰花的栽培植料每50g倒入灭过菌的容器，往其中加入0.5-1.5L无菌水，进行浸提1-3h，浸提完成后，取浸提液10-20ml，进行离心提取分离，取上清液5-15mL为提取分离的菌液，后置于3-5℃下保存；
步骤2：利用稀释涂布平板法培养菌液里细菌的单个菌落，至少涂布10个平板，至于25-30℃黑暗的条件下培养；
步骤3：在培养的平板上筛选出至少10种单个菌落数较多的细菌种类，将筛选出的种菌进行扩繁，配制5-15L扩繁培养基，将扩繁培养基平均分成5-15份，每份0.5-1.5L，将筛选出的每个种菌分别加入一个扩繁培养基中培养，摇匀，密封，置于25-30℃的黑暗环境下，培养15-30d后得到纯化的菌液；
步骤4：将得到的筛选出的种菌的纯化的菌液进行兰花盆土清洁实验，分别将每种菌的纯化的菌液稀释150-250倍，选择植料有腐败气味的兰花，将液稀的纯化的菌液对兰花盆土进行灌盆，每种液稀的纯化的菌液处理3-8盆，8-12d一次，25-35d后脱盆观察；
步骤5：通过提取分离、多次筛选、分离、扩繁实验，直至处理的植料无任何异味，筛选出此菌，即为兰花盆土清洁专用菌。经过菌种的鉴定所述兰花盆土清洁专用菌为红螺菌。
本发明的兰花盆土清洁专用菌可利用其中的微生物吸收分解盆土内产生的有害气体及其他微生物的有害代谢产物，同时有利于有机物的分解，解决兰花盆土因特殊植料分解带来的弊端，为兰花生长提供优良的盆土环境，促进兰花生长发育。
优选地，步骤1中的离心提取分离具体为在离心机2500-3500r/min条件下离心5-15min，进行提取分离。
优选地，所述稀释涂布平板法采用的培养基配方为每NH4Cl 0.5-1.5g/L，添加NaHCO3 0.5-1.5g/L，K2HP4 0.1-0.3g/L，NaCl 1-3g/L，酵母膏0.05-0.2g/L，琼脂15-25g/L，后调节PH为6.5-7.5。
优选地，步骤3中扩繁培养基配方为每NH4Cl 0.5-1.5g/L，添加K2HPO4 0.1-0.3g/L，CH3COONa 2-3g/L，MgSO4·7H2O 0.1-0.3g/L，NaCl1-3 g/L，FeCl3·6H2O 3-7mg/L，CuSO4·5H2O 0.03-0.07mg/L，MnCl2·4H2O 0.03-0.07mg/L，ZnSO4·7H2O 0.5-1.5mg/L，Co(NO3)2·6H2O 0.03-0.07mg/L，维生素B1 0.001mg/L，调节PH为6.5-7.5。
优选地，步骤1中栽培植料为树皮和植金石，树皮和植金石的重量比为(2-6):1。
本申请要求保护通过本申请的制备方法制备的微生物菌剂。及微生物菌剂在兰花盆土清洁中的应用。
与现有的技术相比本发明的有益效果是：
本发明制备的菌剂能帮助兰花清洁盆土，解决植料在分解过程中带来的弊端，有利于兰花根部呼吸和生长；通过比对实验，发现使用该菌剂的兰花新根萌发数量多，同时利用芽的分化和生长。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅用以解释本发明，并不用于限定本发明，即所描述的实施例仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。
实施例1
一种用于兰花盆土清洁的微生物菌剂的制备方法，该微生物菌剂，是通过从生长状况良好的兰花植料中提取分离、筛分、纯化及扩繁所得，其具体操作方法是：
(1)提取分离，将长势良好兰花的栽培植料倒入灭过菌的容器，往其中加入1L无菌水，进行浸提2h；浸提完成后，取浸提液15ml在离心机3000r/min条件下离心10min提取分离，取上清液10mL为提取分离的菌液，置于4℃下保存；
(2)利用稀释涂布平板法培养菌液里细菌的单个菌落，每取上清液10mL提取分离的菌液，采用的培养基配方为:NH4Cl 1g/L+NaHCO3 1g/L+K2HP4 0.2g/L+NaCl 2g/L+酵母膏0.1g/L+琼脂20g/L，调节PH为7.0，涂布10个平板，至于25-30℃黑暗的条件下培养；
(3)在培养的10个平板上筛选出10种单个菌落数较多的细菌种类，将此10种菌进行扩繁，扩繁培养基配方:NH4Cl 1g/L+K2HPO4 0.2g/L+CH3COONa 2.5g/L+MgSO4·7H2O0.2g/L+NaCl 2g/L+FeCl3·6H2O 5mg/L+CuSO4·5H2O 0.05mg/L+MnCl2·4H2O 0.05mg/L+ZnSO4·7H2O 1mg/L+Co(NO3)2·6H2O 0.5mg/L+维生素B1 0.001mg/L，调节PH为7.0，称取配制10L用量制作培养基的试剂，配制10L扩繁培养基，将培养基平均分成10份，每份1L，将10种菌分别加入培养基中培养，摇匀，密封，置于25-30℃的黑暗环境下，培养15-30d后得到纯化的菌液；
(4)将得到的10种细菌纯化的菌液进行兰花盆土清洁实验，分别将10种菌液稀释200倍，选择50盆植料有腐败气味的兰花，将10种菌液对兰花盆土进行灌盆，每种菌液处理5盆，10d一次，30d后脱盆观察；
(5)通过多次筛选、分离、扩繁实验后找出处理的栽培植料无任何异味菌，即为兰花盆土清洁专用菌。
试验例
选择一批苗数相同(3苗)、长势相当、无烂根、健康的兰花，统计每盆兰花根数。采用树皮:植金石＝4:1的比例混合作为兰花栽培基质。
从市场购买了4种土壤微生物菌剂分别为：1.名称：激抗菌-968有效菌种：细黄链霉菌，有效活菌数≥2.0亿/g；2.名称：微生物菌剂，有效菌种：枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、侧孢短芽孢杆菌，有效活菌数≥2.0亿/g；3.名称：微生物菌剂，有效菌种：解淀粉芽孢杆菌，有效活菌数≥2.0亿/g；4.名称：复合微生物菌剂；有效菌种：地衣芽孢杆菌、胶冻样类芽孢杆菌；有效活菌数≥2.0亿/g。分别编号为:菌1、菌2、菌3、菌4，本菌编号为:菌5，设置一个空白对照:CK。
为将实验菌作为盆土优势菌，观察实验菌对兰花生长的影响，因此将上述五种菌稀释200倍灌盆，每组处理10盆，然后将兰花置于25℃、光照强度5000Lux、光照时间12h/d、空气湿度90％的环境下培养，培养30d。30d后脱盆观察兰花盆土有无异味，统计兰花烂根数和新根数。实验情况见下表一至三。
表一、不同菌剂处理下兰花烂根情况
Figure BDA0003055999090000051
表二、不同菌剂处理下兰花新根生长情况
Figure BDA0003055999090000052
表三、不同菌剂处理下兰花植料有无腐败味道情况
菌剂类型 菌1 菌2 菌3 菌4 菌5 CK
味道情况 有 有 有 有 无 有
通过对上表实验数据表一至表三分析得知，对照组CK中的盆土有异味，并且烂根数多，新根数少，说明此植料(树皮:植金石＝4:1的比例混合作为兰花栽培基质)确实会造成兰花烂根，影响兰花新根生长。而菌5盆土无异味，其他商品菌盆土均有异味，说明此菌清除盆土有害气体效果明显。同时发现菌5处理组新根数较多，平均新根率50.0％，显著高于其他组新根率，烂根数较少，平均烂根率3.0％，显著低于其他组烂根率。其它商品菌新根数较少，平均新根率较低，烂根数较多，平均烂根率较高。说明菌5对兰花根系生长有很大帮助。
综合可以看出，此微生物菌剂用于兰花栽培对清除盆土有害气体效果明显，同时此菌利于兰花根系生长效果明显。
以上所述实施例仅表达了本申请的具体实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本申请保护范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本申请技术方案构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本申请的保护范围。

Claims (7)

1.一种用于兰花盆土清洁的微生物菌剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤1：提取分离：将长势良好的兰花的栽培植料每50g倒入灭过菌的容器，往其中加入0.5-1.5L无菌水，进行浸提1-3h，浸提完成后，取浸提液10-20ml，进行离心提取分离，取上清液5-15mL为提取分离的菌液，后置于3-5℃下保存；
步骤2：利用稀释涂布平板法培养菌液里细菌的单个菌落，至少涂布10个平板，至于25-30℃黑暗的条件下培养；
步骤3：在培养的平板上筛选出至少10种单个菌落数较多的细菌种类，将筛选出的种菌进行扩繁，配制5-15L扩繁培养基，将扩繁培养基平均分成5-15份，每份0.5-1.5L，将筛选出的每个种菌分别加入一个扩繁培养基中培养，摇匀，密封，置于25-30℃的黑暗环境下，培养15-30d后得到纯化的菌液；
步骤4：将得到的筛选出的种菌的纯化的菌液进行兰花盆土清洁实验，分别将每种菌的纯化的菌液稀释150-250倍，选择植料有腐败气味的兰花，将液稀的纯化的菌液对兰花盆土进行灌盆，每种液稀的纯化的菌液处理3-8盆，8-12d一次，25-35d后脱盆观察；
步骤5：通过提取分离、筛选、分离、扩繁实验，直至处理的植料无任何异味，筛选出此菌，即为兰花盆土清洁专用菌。
2.根据权利要求1所述的一种用于兰花盆土清洁的微生物菌剂的制备方法，其特征在于，步骤1中的离心提取分离具体为在离心机2500-3500r/min条件下离心5-15min，进行提取分离。
3.根据权利要求1所述的一种用于兰花盆土清洁的微生物菌剂的制备方法，其特征在于，所述稀释涂布平板法采用的培养基配方为每NH4Cl 0.5-1.5g/L，添加NaHCO3 0.5-1.5g/L，K2HP4 0.1-0.3g/L，NaCl 1-3g/L，酵母膏0.05-0.2g/L，琼脂15-25g/L，后调节PH为6.5-7.5。
4.根据权利要求1所述的一种用于兰花盆土清洁的微生物菌剂的制备方法，其特征在于，步骤3中扩繁培养基配方为每NH4Cl 0.5-1.5g/L，添加K2HPO40.1-0.3g/L，CH3COONa 2-3g/L，MgSO4·7H2O 0.1-0.3g/L，NaCl1-3 g/L，FeCl3·6H2O 3-7mg/L，CuSO4·5H2O 0.03-0.07mg/L，MnCl2·4H2O 0.03-0.07mg/L，ZnSO4·7H2O 0.5-1.5mg/L，Co(NO3)2·6H2O 0.03-0.07mg/L，维生素B1 0.001mg/L，调节PH为6.5-7.5。
5.根据权利要求1所述的一种用于兰花盆土清洁的微生物菌剂的制备方法，其特征在于，步骤1中栽培植料为树皮和植金石，树皮和植金石的重量比为(2-6):1。
6.一种权利要求1-5任一项所述的制备方法制备的微生物菌剂。
7.一种权利要求6所述的微生物菌剂在兰花盆土清洁中的应用。
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