CN113274384A - 驴食草酚在制备防治溃疡性结肠炎的药物中的应用及其药物 - Google Patents

Abstract

本发明属于生物医药技术领域，公开了一种驴食草酚在制备防治溃疡性结肠炎的药物中的应用及其药物。通过采用国际通用的溃疡性结肠炎造模方法，上述方案表明了该成分可以有效改善溃疡性结肠炎小鼠的体重减轻、腹泻、便血状态，抑制结肠长度缩短，减轻结肠组织病理损伤以及减低血清IL‑17A的分泌，对溃疡性结肠炎具有显著的防治作用，有望成为研发治疗溃疡性结肠炎药物的关键成分。该防治溃疡性结肠炎的药物，药用疗效确切，副作用低，具有广泛的医疗应用前景。

Description

驴食草酚在制备防治溃疡性结肠炎的药物中的应用及其药物

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，具体涉及一种驴食草酚在制备防治溃疡性结肠炎的药物中的应用及其药物。

背景技术

溃疡性结肠炎(ulcerative colitis，UC)是一种病因尚不清楚的结肠和直肠慢性非特异性炎症性疾病，其持续的浅表黏膜炎症在不同程度上从直肠延伸至近端结肠，易复发、且癌变风险大。UC的临床症状除了腹痛、腹泻以及里急后重以外，便血是其最典型的临床表现。该病的临床发病率高，流行病学调查显示全球每年平均每10万人中，有7.6～245例UC患者，其中发病的有1.2～20.3 例。在中国，香港地区的UC患病率在十年间增加了3倍，内地患病率也在持续增长。该病不仅给患者带来极大痛苦，而且给社会造成了很大程度的经济损失。在美国，与UC相关的年度费用损失高达81～149亿美元左右，而在欧洲则高达125～291亿欧元左右。UC严峻的增长形势以及其造成的社会影响，已然成为一个重要的公共卫生问题，因此迫切需要研发治疗该病的药物。

作为治疗轻度至中度UC的一线药物，以5-氨基水杨酸(5-ASA)为代表的氨基水杨酸类制剂在临床应用广泛。5-ASA可以按照栓剂、灌肠剂或口服制剂方式给药，不同制剂之间在功效和安全性上几乎没有差异，但是在治疗部位方面存在明显的区别。例如，报道显示，5-ASA栓剂可以直接靶向作用于部位，在治疗结肠炎方面似乎比口服更有效。由于灌肠剂能够到达更深的病变部位，所以其治疗降结肠炎效果比其他剂型显著。对于广泛性UC患者来说，口服制剂优势更明显。尽管5-ASA是治疗轻中度UC的首选药物，但其临床治疗有效率和复发率仍未令人满意。一项Meta分析结果显示，在服药4-8周的疗程中， 5-ASA的代表药美沙拉嗪的临床平均有效率为66.58％。而另一项系统评价提示，有41％的UC患者在服用5-ASA维持缓解过程中出现了复发。这些研究表明，5-ASA仍不能满足临床治疗UC的需求。

糖皮质激素是治疗UC的二线药物，通常用于对氨基水杨酸类药物无效，或者中度至重度UC的治疗。目前治疗UC的糖皮质激素主要有：泼尼松 (prednisone)、布地奈德(budesonide)、倍氯米松(beclomethasone)等。与5- ASA一样，不同剂型对UC诱导的缓解不同。对于活动期远端的UC患者，采用泡沫剂给药通常比灌肠剂的耐受性更好。布地奈德和倍氯米松二丙酸酯口服副作用较小，且可有效诱导UC缓解。然而，长期应用糖皮质激素则会产生满月脸、痤疮、失眠、机体抗感染能力降低等不良反应，且不能防止复发；研究显示30％～60％的IBD患者在减药过程中出现症状反复。目前糖皮质激素的耐药性以及患者产生的药物依赖性仍是未解决的难题，因此糖皮质激素在临床治疗 UC的应用过程受到严格的限制。

对于糖皮质激素治疗依赖或无效、或重度UC患者，通常采用免疫抑制剂、生物制剂药物治疗。免疫抑制剂主要以巯基嘌呤类药物为代表药，包括硫唑嘌呤、6-巯基嘌呤。巯基嘌呤类药物通常在治疗后三个月才产生临床效果，因此往往与糖皮质激素类药物联合治疗UC。但是研究发现，免疫抑制剂具有细胞毒性作用，长期使用可使其肝、肾毒性、白细胞下降等严重后果。低蛋白血症、腹腔脓肿等并发症限制了免疫制剂在UC临床治疗中的应用。

发明内容

为了解决现有技术存在的上述问题，本发明目的在于提供一种驴食草酚在制备防治溃疡性结肠炎的药物中的应用及其药物。

本发明所采用的技术方案为：一种驴食草酚在制备防治溃疡性结肠炎的药物中的应用。

作为优选地，所述驴食草酚通过以下方式制备得到：将驴食草酚溶解于溶剂中，完成制备。

作为优选地，所述溶剂为去离子水。

作为优选地，所述药物在增加溃疡性结肠炎小鼠的体重、降低疾病活动指数(DAI)、恢复结肠长度、降低组织病理结构损伤和降低血清炎性细胞因子IL- 17A的分泌中的应用。

上述关于恢复结肠长度这一指标，是由于患有溃疡性结肠炎的小鼠有结肠长度缩短的现象出现，当使用药物后小鼠结肠长度逐渐趋向于正常长度状态，存在结肠长度恢复的过程。

作为优选地，所述疾病活动指数包括溃疡性结肠炎小鼠的体重下降率、腹泻情况和便血情况。

一种防治溃疡性结肠炎的药物，所述药物是以驴食草酚为活性成分。

针对上述药物的给药方式，包括但不限于经胃肠消化道给药方式、经静脉注射给药方式和经腔道给药方式。经胃肠消化道给药方式为最佳。

作为优选地，所述药物还含有药学上可以接受的辅料，制备得到药学上对应的剂型。

作为优选地，所述驴食草酚的HPLC纯度不低于98％。

作为优选地，所述辅料为液体、固体或半固体辅料。

作为优选地，所述剂型包括但不限于液体剂型、固体剂型和半固体剂型中的任意一种；

所述液体剂型包括溶液剂和/或注射剂；所述固体剂型包括散剂和/或片剂；所述半固体剂型包括栓剂和/或糊剂。

本发明的有益效果为：

本发明提供了一种驴食草酚在制备防治溃疡性结肠炎的药物中的应用，通过采用国际通用的溃疡性结肠炎造模方法，上述方案表明了该成分可以有效改善溃疡性结肠炎小鼠的体重减轻、腹泻、便血状态，抑制结肠长度缩短，减轻结肠组织病理损伤以及减低血清IL-17A的分泌，对溃疡性结肠炎具有显著的防治作用，有望成为研发治疗溃疡性结肠炎药物的关键成分。

该防治溃疡性结肠炎的药物，药用疗效确切，副作用低，具有广泛的医疗应用前景。

附图说明

图1为该实施例驴食草酚对溃疡性结肠炎小鼠体重的影响中，各组小鼠的体重比较示意图；

图2为该实施例驴食草酚对溃疡性结肠炎小鼠疾病活动指数的影响中，各组小鼠结肠长度比较示意图；

图3为该实施例驴食草酚对结肠炎小鼠结肠组织病理损伤的影响中，各组小鼠组织病理10×10倍镜下显微示意图；

图4为该实施例驴食草酚对溃疡性结肠炎小鼠血清IL-17A分泌水平的影响中，为各组小鼠血清IL-17A水平比较示意图。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明做进一步阐释。本领域技术人员将会理解，下列所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例，仅用于说明本发明，而不应视为限制本发明的范围。所用试剂均为可以通过市售购买获得的常规产品。

实施例：

使用成分：驴食草酚，分子式C₁₆H₁₆O₄，分子量：272.3，结构式如下

上述该驴食草酚来源于：成都乐美天公司，驴食草酚的纯度＞98％，其纯度符合用药标准。

实验：驴食草酚对溃疡性结肠炎小鼠疗效的影响。

1、实验材料

1.1药材

驴食草酚(驴食草酚，CAS:35878-41-2，HPLC≥98％。品牌：成都乐美天)、葡聚糖硫酸钠(DSS，CAS号：9011-18-1.MW：36-50kDa)、柳氮磺胺吡啶肠溶片(CAS:599-79-1，分子量：398.39，HPLC纯度＞98％)。

1.2实验动物

SPF级雄性C57BL/6小鼠，体重20-22g，由斯贝福(北京)生物技术有限公司提供，置于屏障环境饲养，自由饮食饮水。

动物许可证号：SCXK(京)2019-0010。

2、实验方法

2.1溃疡性结肠炎模型的建立

选择体重为20-22g的C57BL/6雄性小鼠，采用国际通用的溃疡性结肠炎造模方法，小鼠适应性饲养一周后，采用3％DSS溶液自由饮用7天，诱导溃疡性结肠炎模型。

2.2分组及给药方式

对照组(Control group)：8只，给予自由饮水饮食，同时用生理盐水灌胃。

模型组(DSS group)：8只，给予3％DSS溶液自由饮用饮食，同时用生理盐水灌胃。

驴食草酚组(Vestitol treatment group)：8只，给予3％DSS溶液自由饮用，同时用驴食草酚灌胃(10mg/kg)，连续7天。

柳氮磺胺吡啶组(SASP treatment group)：8只，给予3％DSS溶液自由饮用，同时用柳氮磺胺吡啶灌胃(根据临床用量换算成500mg/kg)，连续7天。

实验期间，制剂新鲜制备，将驴食草酚溶于去离子水中，放置超声水浴锅中晃动以加速溶解；利用去离子水配置3％DSS溶液；柳氮磺吡啶肠溶片用研钵碾碎后充分溶于去离子水中。所有制剂在制备1小时内使用。

2.3肠炎的评估

实验期间每天记录血便、腹泻和体重的情况，实验结束后，眼球取血制备血清，ELISA检测IL-17A的分泌水平。小鼠处死后取出结肠，测量盲肠至直肠的长度，并取末端结肠进行HE染色，制作结肠病理切片并进行组织病理评分。

2.4统计分析

结果以平均值±标准差表示，采用SPSS统计软件对实验数据进行ANOVE 方差分析，P＜0.05为统计学差异有显著性。

实验结果数据：

3.1驴食草酚对溃疡性结肠炎小鼠体重的影响

如图1所示，为各组小鼠的体重比较示意图。其中与对照组相比，^###P＜ 0.001；与模型组相比，^*P＜0.05，^***P＜0.001。

图1显示，造模第9天对照组小鼠体重23.60±0.93g，模型组小鼠体重 17.70±1.85g，SASP组小鼠体重19.73±1.56g，驴食草酚组小鼠体重20.10±1.73g。结果表明驴食草酚能显著抑制DSS引起的溃疡性结肠炎小鼠体重下降(P＜ 0.05)，且随着时间延长效果，比阳性药SASP更为明显。

3.2驴食草酚对溃疡性结肠炎小鼠疾病活动评分的影响

表1各组小鼠DAI指数比较

组别	第3天	第5天	第7天	第9天
					对照组	0.000±0.000	0.000±0.000	0.000±0.000	0.000±0.000
模型组	0.670±0.302<sup>###</sup>	1.665±0.306<sup>###</sup>	2.708±0.590<sup>###</sup>	3.500±0.309<sup>###</sup>
					驴食草酚组	0.084±0.103<sup>***</sup>	1.203.±0.210<sup>*</sup>	1.001±0.470<sup>***</sup>	0.958±0.776<sup>***</sup>
阳性药组	0.065±0.203<sup>***</sup>	1.247±0.233<sup>*</sup>	1.417±0.436<sup>***</sup>	1.333±0.744<sup>***</sup>

注：与对照组相比，^###P＜0.001；与模型组相比，^*P＜0.05，^***P＜0.001

由上述表1可见：造模后第三天，模型组小鼠出现腹泻、半稀便甚至便血，疾病活动指数评分逐渐升高(P＜0.001)。而给予驴食草酚或SASP治疗，疾病活动指数评分明显降低(P＜0.001)，且驴食草酚组的效果要好于柳氮磺胺吡啶组。

3.3驴食草酚对溃疡性结肠炎小鼠结肠长度的影响

如图2所示，为各组小鼠结肠长度比较示意图。其中与对照组相比，^##P＜0.01；与模型组相比，^*P＜0.05。

由图2可见，对照组小鼠的结肠长度为7.35±0.08cm，模型组小鼠结肠长度为5.19±0.26cm，驴食草酚组小鼠结肠长度为6.03±0.24cm，柳氮磺胺吡啶组小鼠结肠长度6.43±0.11cm。结肠长度为结肠炎症的一个大体指标，结果显示驴食草酚能够起到抑制结肠炎小鼠结肠缩短的作用(P＜0.05)

3.4驴食草酚对结肠炎小鼠结肠组织病理损伤的影响

如图3所示，为各组小鼠组织病理显微镜(10×10)下显微示意图。

由图3可见，通过苏木精-伊红(H&E)染色法进行处理。

图3 Control为对照组，对照组小鼠的结肠粘膜、粘膜下层、肌层无炎性细胞浸润，组织结构清晰，无出血，无水肿，无毛细血管扩张。

图3 DSS为模型组，模型组小鼠的结肠组织为典型炎症粘膜表现，可见粘膜、粘膜下层、肌层大量炎性细胞浸润，组织结构紊乱，断裂，粘膜下层出血水肿，毛细血管扩张。

图3 Vestitiol为驴食草酚组、SASP为柳氮磺胺吡啶组，这两组小鼠的结肠组织可见病变减轻，溃疡愈合，粘膜下层炎细胞浸润明显减少。

3.5驴食草酚对溃疡性结肠炎小鼠血清IL-17A分泌水平的影响

如图4所示，为各组结肠炎小鼠血清IL-17A水平比较示意图。其中与对照组相比，^###P＜0.001；与模型组相比，^***P＜0.001。

图4可见，与对照组相比，模型组小鼠IL-17A水平明显升高(P＜0.001)。与模型组相比，驴食草酚或SASP治疗组小鼠IL-17A水平明显下降(P＜0.001)，且驴食草酚组下降更为明显。

这说明驴食草酚可抑制IL-17A的产生，从而抑制了中性粒细胞的募集，进一步抑制中性粒细胞介导的炎症。

综上结果表明，驴食草酚可以明显改善溃疡性结肠炎小鼠的体重减轻；降低疾病活动指数(DAI)；恢复结肠长度；降低组织病理结构损伤和降低血清炎性细胞因子IL-17A的分泌，从而对溃疡性结肠炎发挥治疗作用。

本发明提供了一种驴食草酚在制备防治溃疡性结肠炎的药物中的应用，通过采用国际通用的溃疡性结肠炎造模方法，上述方案表明了该成分可以有效改善溃疡性结肠炎小鼠的体重减轻、腹泻、便血状态，抑制结肠长度缩短，减轻结肠组织病理损伤以及减低血清IL-17A的分泌，对溃疡性结肠炎具有显著的防治作用，有望成为研发治疗溃疡性结肠炎药物的关键成分。

该防治溃疡性结肠炎的药物，药用疗效确切，副作用低，具有广泛的医疗应用前景。

本发明不局限于上述可选的实施方式，任何人在本发明的启示下都可得出其他各种形式的产品，均属于本发明的保护范围。上述具体实施方式不应理解成对本发明的保护范围的限制，本领域的普通技术人员应当理解，在不背离本发明的范围下，可对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或对其中部分或者全部技术特征进行等同替换，与此同时这些修改或者替换，并不会使相应的技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的范围。同时由上述所引伸出的显而易见的变化或是变动仍处于本发明创造的保护范围之中。

Claims (10)

1.一种驴食草酚在制备防治溃疡性结肠炎的药物中的应用。

2.根据权利要求1所述的一种驴食草酚在制备防治溃疡性结肠炎的药物中的应用，其特征在于，所述驴食草酚通过以下方式制备得到：将驴食草酚溶解于溶剂中，完成制备。

3.根据权利要求2所述的一种驴食草酚在制备防治溃疡性结肠炎的药物中的应用，其特征在于，所述溶剂为去离子水。

4.根据权利要求3所述的一种驴食草酚在制备防治溃疡性结肠炎的药物中的应用，其特征在于，所述药物在增加溃疡性结肠炎小鼠的体重、降低疾病活动指数、恢复结肠长度、降低组织病理结构损伤和降低血清炎性细胞因子IL-17A的分泌中的应用。

5.根据权利要求4所述的一种驴食草酚在制备防治溃疡性结肠炎的药物中的应用，其特征在于，所述疾病活动指数包括溃疡性结肠炎小鼠的体重下降率、腹泻情况和便血情况。

6.一种防治溃疡性结肠炎的药物，其特征在于，所述药物是以驴食草酚为活性成分。

7.根据权利要求6所述的一种防治溃疡性结肠炎的药物，其特征在于，所述药物还含有药学上可以接受的辅料，制备得到药学上对应的剂型。

8.根据权利要求6所述的一种防治溃疡性结肠炎的药物，其特征在于，所述驴食草酚的HPLC纯度不低于98％。

9.根据权利要求7所述的一种防治溃疡性结肠炎的药物，其特征在于，所述辅料为液体、固体或半固体辅料。

10.根据权利要求7所述的一种防治溃疡性结肠炎的药物，其特征在于，所述剂型包括液体剂型、固体剂型和半固体剂型中的任意一种；

所述液体剂型包括溶液剂和/或注射剂；所述固体剂型包括散剂和/或片剂；所述半固体剂型包括栓剂和/或糊剂。

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