CN113264972A - 一种制备奥贝胆酸的方法 - Google Patents

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CN113264972A CN202010092708.XA CN202010092708A CN113264972A CN 113264972 A CN113264972 A CN 113264972A CN 202010092708 A CN202010092708 A CN 202010092708A CN 113264972 A CN113264972 A CN 113264972A
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Abstract

本申请公开了一种制备奥贝胆酸或其药学上可接受的盐的方法，包括以下步骤：(c)使化合物5发生水解反应脱除羧基保护基团Q，以生成化合物6；(d)使化合物6发生氢化反应，以生成化合物7；(e)使化合物7一步法进行羰基还原反应和脱除羟基保护基团P的水解反应，以生成奥贝胆酸；其中P为羟基保护基团，Q为羧基保护基团。本申请通过合成路线的设计以获得常温为固体形式的关键中间产物，有利于所述中间产物的分离纯化以及后续的合成操作，且提高了各步骤的收率及中间产物和最终产物的纯度。

Description

一种制备奥贝胆酸的方法
技术领域
本发明属于药物合成领域，具体涉及一种制备奥贝胆酸的方法。
背景技术
奥贝胆酸，化学名为3α,7α-二羟基-6α-乙基-5β-胆烷-24-酸(结构式如下所示)，是一种半合成鹅去氧胆酸的类似物，也是法尼醇X核内受体激动剂(FXR)。
Figure BDA0002384244830000011
奥贝胆酸，由美国Intercept和日本住友共同研发，于2008年在美国获得孤儿药资格。2015年获得美国食品药品管理局(FDA)授予突破性疗法认定。2016年6月在美国上市，上市适应症为原发性胆汁性肝硬化(PBC)，是二十年来首个研发用于治疗胆汁淤积性肝病的药物。同时，2019年09月27日向FDA提交非酒精性脂肪肝炎(NASH)适应症的上市申请，市场潜力巨大。
临床前和临床研究显示，奥贝胆酸具有较好的抗胆汁淤积、抗炎症和抗纤维化的作用，临床上对于原发性胆汁性肝硬化(PBC)的疗效超出预期。单药治疗多种肝病，副作用低，长期治疗耐受性好。
目前国内外文献中关于合成奥贝胆酸的路线主要有以下几种：
原研公司化合物专利WO 02072598首次报道了奥贝胆酸的合成路线(合成路线一)。该路线首先以化合物I-1(3α-羟基-7-酮-5β-胆烷-24-酸，CDCA的7位-氧化物)为起始物料，3α-羟基经缩醛保护得到中间体I-2。然后，在强碱二异丙基氨基锂(LDA)作用下，7-酮羰基空间位阻小的α位与溴乙烷发生亲核取代的烷基化反应，选择性地在6位引入乙基，同时将24-羧酸反应生成乙酯，得中间体I-3。接着，在盐酸存在的条件下将缩醛保护基脱除得到中间体I-4。随后，中间体I-4利用硼氢化钠(NaBH4)将7-酮基选择性还原成α羟基。最后，在碱性条件下将24-乙酯水解得到目标化合物奥贝胆酸。
合成路线一：
Figure BDA0002384244830000021
上述合成路线存在较多缺点，首先，所有的工艺步骤中，反应中间体及产物均需要在色谱柱上分离纯化，不利于工业化规模的实现。其次，制备I-3的反应步骤的产率很低(12％)，总收率仅为3.1％，副产物较多。最后，在该工艺路线中使用六亚甲基膦酰胺(HMPA)作为反应物，HMPA是一种已知的致癌物，不利于路线的工业化生产及使用。
文献(J.Med.Chem.2012,55,84–93)报道了以鹅去氧胆酸(CDCA)为起始物料制备奥贝胆酸的合成路线(合成路线二)。首先，将7-羟基氧化成酮、24-羧基与溴苄反应成苄酯得到中间体II-1。随后，中间体II-1在LDA强碱条件下，3-羟基被TMS保护，同时，7-羰基烯醇化后被TMS所捕获，形成烯醇硅醚II-2，在BF3 ·Et2O氟离子的作用下脱去TMS保护基，烯醇负离子与乙醛发生反应，即可在6位引入亚乙基，得到中间体II-3。最后，中间体II-3依次经NaBH4还原7-酮羰基、催化氢化还原6-亚乙基的烯烃并将24-苄基脱除，即可得到奥贝胆酸。
合成路线二：
Figure BDA0002384244830000031
合成路线二中仍然使用LDA作为强碱以制备得到甲硅烷基醚衍生物，而LDA对空气及氧气敏感，在工业生产中存在很大的安全隐患，对操作工人和反应设备均由较高的要求，且LDA价格昂贵，生产成本较高。同时，该合成路线副反应多，给活性药物成分(API)的纯化带来极大挑战，需要采用柱层析进行分离纯化；且仅适用于很小批量的API合成研究(例如：1g级别的API制备)，不利于工艺路线的进一步放大。
专利CN101203526A和CN104781272A报道了相似的合成路线(合成路线三)。该条工艺路线存在的显著缺点如下：(1)中间体III-2与III-3为油状物，不利于物料的分离纯化及放大生产；(2)6-乙基的手性未翻转杂质较多，在工艺过程中较难除去；(3)中间体III-2的3-羟基采用三甲基氯硅烷(TMSCl)进行保护，该保护基不够稳定，容易被水解，进一步地，该3-羟基可能与24-羧基反应生成奥贝胆酸的二聚体杂质(如下所示)，产生的工艺杂质不易被控制；(4)中间体III-3需要通过柱层析进行分离纯化，不利于工业化规模的实现。
Figure BDA0002384244830000032
合成路线三：
Figure BDA0002384244830000041
专利CN107383139A报道了制备奥贝胆酸的方法(合成路线四)，中间体IV-4与IV-5均为油状物，成固性较差，不利于中间体的进一步纯化。其中多个工艺步骤中需要用到无水硫酸钠干燥除水，在工业化放大生产中，会产生大量的固体废弃物，对环境及固废的处理带来极大的不便。
合成路线四：
Figure BDA0002384244830000042
发明内容
有鉴于此，本发明的主要目的在于提供一种易于工业化的制备奥贝胆酸的方法，通过合成路线的设计以获得常温为固体的关键中间产物，有利于所述中间产物的分离纯化以及后续的合成操作，且提高了各步骤的收率及中间产物和最终产物的纯度。
本发明第一方面，提供一种制备奥贝胆酸或其药学上可接受的盐的方法，包括以下步骤：
Figure BDA0002384244830000051
(c)使化合物5发生水解反应脱除羧基保护基团Q，以生成化合物6；
(d)使化合物6发生氢化反应，以生成化合物7；
(e)使化合物7一步法进行羰基还原反应和脱除羟基保护基团P的水解反应，以生成奥贝胆酸；
其中P为羟基保护基团，Q为羧基保护基团。
在部分实施方案中，所述化合物5由以下步骤制备得到：
Figure BDA0002384244830000052
(a)使化合物3与三氟甲磺酸烷基硅酯类保护试剂在缚酸剂的作用下进行反应，以生成化合物4；
(b)在路易斯酸存在下，使化合物4与乙醛或三聚乙醛反应，以生成化合物5。
在部分实施方案中，所述制备方法还包括制备得到所述化合物3的步骤：对化合物2进行羧基保护反应，以生成化合物2；以及对化合物2进行羟基保护反应，以生成化合物3，
Figure BDA0002384244830000053
其中，P和Q如上文所定义。
本发明的制备方法中以化合物5为起始物，或者也可以以3为起始物。其中P为羟基保护基团。在部分实施方案中，所述P为苯甲酰基或苯环被取代的苯甲酰基，所述取代基选自C1～5烷基，-NR2，-NHR，-NH2，-OH，-OR，-NHCOR，-OCOR，-NO2，-CX3，-CN，-SO3H，-CHO，-COR和-COOH，其中各R独立为C1～5的烷基，X为F或Cl；优选地，P为苯甲酰基；
Q为羧基保护基团。在部分实施方案中，所述Q为C1～10的烷基、苄基或苯环被取代的苄基，所述取代基选自C1～5烷基，-NR2，-NHR，-NH2，-OH，-OR，-NHCOR，-OCOR，-NO2，-CX3，-CN，-SO3H，-CHO，-COR和-COOH，其中各R独立为C1～5的烷基，X为F或Cl；优选地，Q为C1～6的烷基；更优选地，Q为C1～3的烷基；根据本发明的部分实例，Q为甲基。
根据本发明的部分实施方式，步骤(a)中所述三氟甲磺酸烷基硅酯类保护试剂选自三氟甲磺酸三甲基硅酯、三氟甲磺酸三乙基硅酯、三氟甲磺酸叔丁基二甲基硅酯和三氟甲磺酸叔丁基二苯基硅酯。
优选地，所述三氟甲磺酸烷基硅酯类保护试剂为三氟甲磺酸三甲基硅酯。
根据本发明的部分实施方式，步骤(a)中所述缚酸剂可为三乙胺或N,N-二异丙基乙基胺；优选地，所述缚酸剂为三乙胺。
步骤(a)中的反应溶剂并无特别限制，只要不妨碍反应及后续步骤即可。可列举的为二氯甲烷，但不限于此。
根据本发明的部分实施方式，步骤(a)中反应温度为-10℃～30℃；优选地，反应温度为20～30℃。
在本发明方法的步骤(a)中，采用三氟甲磺酸烷基硅酯类保护试剂，三乙胺作为缚酸剂，反应条件温和，产率高。
在部分实施方案中，步骤(a)还任选地包含后处理步骤，所述后处理步骤为加入甲苯并蒸馏除水。该后处理步骤有效地控制反应体系中水分的含量，避开了无水硫酸钠等固体干燥剂的使用，同时减少三废对环境的污染。
传统的奥贝胆酸合成路线中，一般采用三甲基氯硅烷(TMSCl)对羟基和羰基进行保护反应，而TMSCl遇水会生成氯化氢，即盐酸，因此，在反应中要保持反应体系无水干燥。此外，当采用TMSCl时会使用强碱，即二异丙基氨基锂(LDA)，以形成碳负离子的碱，但LDA对空气及氧气敏感。因此，使用LDA进行反应时不但要保证无水还要保证无氧的环境，需在低温条件下进行以保证反应的安全性。采用TMSCl及高危试剂LDA，使反应存在很大的安全隐患，对操作人员和反应设备均有较高的要求，不利于工业化规模生产。并且LDA的价格昂贵，生产成本高。本发明中避免使用高危试剂LDA，在温和的反应条件下进行羰基的保护反应，通过合理的条件控制，以获得较高产率的化合物4。
根据本发明的部分实施方式，步骤(b)中所述路易斯酸为三氟化硼乙腈溶液或三氟化硼乙醚溶液；优选地，所述路易斯酸为三氟化硼乙腈溶液。
步骤(b)中的反应溶剂并无特别限制，只要不妨碍反应及后续步骤即可。可列举的为二氯甲烷，但不限于此。
根据本发明的部分实施方式，步骤(b)中根据以下的操作条件进行：将反应混合物冷却至-70℃～-60℃进行反应并维持0.5～1.5h，然后使所述反应混合物升温至室温继续反应。
根据本发明的部分实施方式，步骤(c)中所述水解反应在酸性条件下进行。可用的水解试剂可为稀盐酸。
根据本发明的部分实施方式，步骤(c)中所述水解反应的温度为50～65℃。
上述步骤(c)中水解反应的反应溶剂可为四氢呋喃，但不限于此。
具体地，所述方法中使化合物5水解仅脱除羧基保护基团Q，以生成化合物6，其中，所得化合物6为固体。上述水解反应中通过控制反应条件为酸性，以确保仅水解羧基保护基团Q，而不水解羟基保护基团P，从而获得固体化合物6。固体中间产物的获得有利于后续反应中各中间产物以及终产物奥贝胆酸的分离纯化，尤其是可避免产生奥贝胆酸二聚体杂质。
根据本发明的部分实施方式，步骤(d)的氢化反应可使用常规的加氢催化剂在氢气存在下进行。例如可使用Pd/C催化剂。上述步骤(d)的反应溶剂可为甲醇，但不限于此。
根据本发明的部分实施方式，所述方法中步骤(d)中采用甲醇作为溶剂，溶解步骤(c)中得到的化合物6，加入到高压反应釜中，用甲醇将Pd/C加入反应釜中，氮气置换三次后，氢气置换一次，并加压，升温搅拌反应，直至HPLC监测反应到达终点。将反应液降温至室温，过滤除去Pd/C，滤液转移入反应釜中，减压脱除溶剂，并用乙酸异丙酯进行溶剂置换，停止脱除溶剂，乙酸异丙酯补加至化合物6的4倍体积，升温至80℃，向反应釜中加入正庚烷溶剂，并梯度降温，离心得到固体化合物7。
根据本发明的部分实施方式，步骤(e)中在碱性条件下使化合物7一步法进行羰基还原反应和脱除羟基保护基团P的水解反应，以生成奥贝胆酸。
步骤(e)中，羰基还原反应使用的还原剂可为硼氢化钠和硼氢化锂，但不限于此。优选地，还原剂可为硼氢化钠。
步骤(e)中，水解反应的水解试剂可为碱性溶液，具体可为氢氧化钠水溶液，但不限于此。
步骤(e)中所述羰基还原反应和水解反应的温度可为85～95℃，优选地，反应温度可为90℃。
常规的奥贝胆酸制备路线中采用两步法进行反应，首先，采用碱性溶液进行水解反应，脱除羟基保护基团；然后，采用还原剂进行羰基还原反应以生成奥贝胆酸。本发明中使化合物7一步法进行羰基还原反应和脱除羟基保护基团P的水解反应，以生成奥贝胆酸。该反应中，尤其在采用苯甲酰基保护基时，可在还原剂硼氢化钠还原酮羰基的碱性条件下同时脱除羟基保护基团。
本发明提供的制备方法中，采用苯甲酸类化合物对化合物1的C-3位置的羟基进行保护反应，可稳定地保护羟基，可有效地避免中间体自身或中间体之间发生副反应生成二聚体酯化杂质(如下所示)，从而能够同时提高终产物奥贝胆酸的收率与纯度。
Figure BDA0002384244830000091
本发明提供的制备方法中，采用带有紫外吸收的苯甲酸类化合物对奥贝胆酸C-3位置的羟基进行保护，同时苯甲酰基仅在最后一步制得奥贝胆酸的反应中脱除，从而各步骤的中间产物均显示特定的紫外吸收，有利于反应过程中的质量控制及反应终点的判断，进而达到保证奥贝胆酸质量的目的。同时，由于反应过程中各中间产物的紫外吸收特性，使用普通的紫外检测仪器即可满足检测要求，代替了原有的昂贵的电喷雾检测器仪器的使用，节约生产及检测成本，且避免了示差检测器及蒸发光检测仪器的使用。
根据本发明的部分实施方案，在制备化合物3的步骤中，将化合物2溶于二氯甲烷后加入反应釜中，先后加入4-二氨基吡啶(DMAP)、三乙胺(TEA)及1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺(EDCI)，氮气保护下加入苯甲酸，升温至回流反应至HPLC监测反应完全。降温后先后用水，盐酸和饱和碳酸氢钠洗涤二氯甲烷有机相，有机相转入新的反应釜中，加入甲醇并降温至0℃析晶，离心干燥得到化合物3。
优选地，本发明采用如下式所示化合物3-1，作为本发明的奥贝胆酸的制备方法中的起始化合物。其中，P为苯甲酰基，Q为甲基，可稳定地保护羟基，避免中间体自身或中间体之间发生副反应生成二聚体酯化杂质，从而能够同时提高终产物奥贝胆酸的收率与纯度，
Figure BDA0002384244830000092
因此，本发明的第二方面，提供上述化合物3-1。
本发明提供的奥贝胆酸的制备方法，通过合成路线的设计以获得固体形式的中间体，有利于各中间体及终产物奥贝胆酸的分离纯化，可同时提高奥贝胆酸的收率与纯度。
具体实施方式
下面将结合本发明实施方式，对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施方式仅仅是本发明的一部分实施方式，而不是全部的实施方式。基于本发明中的实施方式，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施方式，都属于本发明保护的范围。
仪器
化合物的结构是通过核磁共振(1H、13C NMR)或质谱(MS)来确定的。
1H、13C NMR波谱法采用Bruker超导核磁共振波谱仪(仪器型号：BRUKERAVANCE 300型核磁共振仪)；溶剂DMSO-d6或CDCl3，温度20℃；
HRMS检测采用Waters Autospec Premier 776磁质谱仪，电离方式：EI+；扫描范围：390～460Da；电子电量：70eV；
LC-MS检测采用：Waters Autospec Premier 776磁质谱仪，电离方式：EI+；扫描范围：50～1000Da；电子电量：70eV；
采用高效液相色谱仪(HPLC-UV)测定各步骤中间体化合物纯度，检测器为：紫外(UV)检测器，色谱柱：资生堂MGII C18(4.6*250mm,5μm)；
采用高效液相色谱仪(HPLC-CAD)测定奥贝胆酸化合物纯度，检测器为：电喷雾(CAD)检测器，参数设置：滤光片5，温度35℃，气体压力50～60psi。
实施例中所涉及试剂缩写具有以下中文含义：
缩写 中文名称 缩写 中文名称
DMAP 4-二甲氨基吡啶 DCM 二氯甲烷
TEA 三乙胺 NaBH<sub>4</sub> 硼氢化钠
EDCI 1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺 Pd/C 钯碳
实施例1：由化合物3-1(3α-苯甲酰氧基-7-酮-5β-胆烷酸-24-甲酯)制备奥贝胆酸
Figure BDA0002384244830000111
步骤一：向反应釜中加入25.80kg二氯甲烷，先后加入4.30kg的化合物3-1及1.81kg三乙胺，搅拌溶清，氮气置换后，加入3.10kg三氟甲磺酸三甲基硅酯，采用HPLC监测反应到达终点。
将氢氧化钠水溶液加入到反应釜中淬灭反应，并静置分液，有机相中加入22.50kg甲苯后溶剂置换脱除溶剂，随后升高温度，将有机溶剂脱除溶剂至无液体流出，所得物料化合物4-1(3α-苯甲酰氧基-6-烯-7-(三甲基硅基)氧基-5β-胆烷酸-24-甲酯)为白色固体，并按100％的收率进行下一步反应。
步骤二：将上一步所得白色固体化合物4-1用35.80kg二氯甲烷溶解加入到低温反应釜，氮气置换。氮气保护将反应釜内温度降至＜-60℃，加入1.68kg三聚乙醛，控制内温不高于-60℃加入6.03kg三氟化硼乙腈溶液。随后维持低温-65±5℃搅拌反应1h，再升至室温搅拌至HPLC监测反应到达终点。
向反应釜内加入14.73kg纯化水淬灭反应，静置分液，有机相加入碳酸氢钠水溶液洗涤，静置分液。将分层所得有机相转移至浓缩釜中减压浓缩至无液体流出，所得物料化合物5-1((E)-3α-苯甲酰氧基-6-亚乙基-7-酮-5β-胆烷酸-24-甲酯)为油状物，并按100％的收率进行下一反应。
步骤三：将上一步所得物料化合物5-1用16.09kg四氢呋喃溶解，搅拌澄清后加入稀盐酸水溶液(2.94kg浓盐酸溶解于2.94kg纯化水中)。升温至65℃，搅拌反应至HPLC监测反应到达终点，向反应液中加入氢氧化钠水溶液调节pH值至6～7，反应液减压脱除溶剂后加入15.73kg乙酸异丙酯萃取产物，静置分液，有机相转入干燥洁净的反应釜中，升温至60℃时，向反应釜中加入12.30kg正庚烷溶剂，并梯度降温，离心得到3.74kg固体化合物6-1(3α-苯甲酰氧基-6-亚乙基-7-酮-5β-胆烷-24-酸)。前三步骤总收率为85％，纯度97.8％。
步骤四：将3.74kg固体化合物6-1溶于14.77kg甲醇，加入到高压反应釜中，用甲醇将0.74kg的Pd/C加入反应釜中，氮气置换三次后，氢气置换一次，并加压，升温至65℃，搅拌反应至HPLC监测反应到达终点，将反应液降温至室温，过滤除去Pd/C，滤液转移入反应釜中，减压脱除溶剂，并用13.01kg乙酸异丙酯进行溶剂置换，停止脱除溶剂，乙酸异丙酯补加至化合物6的4倍体积，升温至80℃，向反应釜中加入15.25kg正庚烷溶剂，并梯度降温，离心得到固体物料3.27kg化合物7-1(3α-苯甲酰氧基-6α-乙基-7α-酮-5β-胆烷-24-酸)，该步骤收率为87％，纯度98.3％。
步骤五：将3.27kg的中间体化合物7-1溶解于氢氧化钠水溶液中，加入到反应釜中，氮气保护下将反应液升温至90℃，滴加配置好的硼氢化钠碱水溶液，维持该温度下搅拌反应。
采用HPLC监测反应完毕，降至室温，加入8.62kg乙酸丁酯，氮气保护下缓慢滴加2N盐酸调节pH至1～3，静置分液。有机相转入反应釜中，升温至60℃，加入13.32kg正庚烷，并梯度降温，离心干燥得奥贝胆酸2.50kg，本步收率95％，纯度98.7％，由化合物3-1制备奥贝胆酸的总收率为70％，经HPLC检测，未检出二聚体杂质。
奥贝胆酸的结构表征结果如下：
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ4.03(brs,1H),3.49(m,1H),3.16-3.11(m,1H),0.89(d,3H),0.84(t,3H),0.82(s,3H),0.60(s,3H)；
13C-NMR(100MHz,DMSO-d6):δ174.82，70.58，68.40，55.53，50.05，45.30，41.99，41.27，39.92，39.34，35.51，35.16，34.89，33.52，32.61，30.80，30.72，30.41，27.77，23.05，22.13，20.38，18.14，11.66，11.64；
HRMS(m/z):[M]+计算值(或理论值)C26H44O4,420.3240，测量值,420.3267。
实施例2：由化合物3-1制备奥贝胆酸
Figure BDA0002384244830000131
步骤一：向反应釜中加入25.80kg二氯甲烷，先后加入4.30kg的化合物3-1及1.81kg三乙胺，搅拌溶清，氮气置换后，加入3.69kg三氟甲磺酸三乙基硅酯，搅拌反应至HPLC监测反应到达终点。
将氢氧化钠水溶液加入到反应釜中淬灭反应，并静置分液，向有机相中加入22.50kg甲苯后溶剂置换脱除溶剂，随后升高温度，将有机溶剂脱除溶剂至无液体流出，所得物料化合物4-2(3α-苯甲酰氧基-6-烯-7-(三乙基硅基)氧基-5β-胆烷酸-24-甲酯)为白色固体，并按100％的收率进行下一步反应。
步骤二：将上一步所得白色固体化合物4-2用35.80kg二氯甲烷溶解加入到低温反应釜，氮气置换。氮气保护将反应釜内温度降至＜-60℃，加入1.68kg三聚乙醛，控制内温不高于-60℃加入6.03kg三氟化硼乙腈溶液。随后维持低温-65±5℃搅拌反应1h，再升至室温搅拌至HPLC监测反应到达终点。
向反应釜内加入14.73kg纯化水淬灭反应，静置分液，有机相加入碳酸氢钠水溶液洗涤，静置分液。将分层所得有机相转移至浓缩釜中减压浓缩至无液体流出，所得物料化合物5-1为油状物。
步骤三：将上一步所得物料化合物5-1用16.09kg四氢呋喃溶解，搅拌澄清后加入稀盐酸水溶液(2.94kg浓盐酸溶解于2.94kg纯化水中)。升温至50℃，搅拌反应至HPLC监测反应到达终点，向反应液中加入氢氧化钠水溶液调节pH值至6～7，反应液减压脱除溶剂后加入15.73kg乙酸异丙酯萃取产物，静置分液，有机相转入干燥洁净的反应釜中，升温至60℃时，向反应釜中加入12.30kg正庚烷溶剂，并梯度降温，离心得到3.65kg固体化合物6-1。前三步骤总收率为83％，纯度98.6％。
步骤四：将3.65kg固体化合物6-1溶于14.48kg甲醇，加入到高压反应釜中，用甲醇将0.73kg的Pd/C加入反应釜中，氮气置换三次后，氢气置换一次，并加压，升温至65℃，搅拌反应至HPLC监测反应到达终点，将反应液降温至室温，过滤除去Pd/C，滤液转移入反应釜中，减压脱除溶剂，并用12.75kg乙酸异丙酯进行溶剂置换，停止脱除溶剂，乙酸异丙酯补加至化合物6的4倍体积，升温至80℃，向反应釜中加入14.95kg正庚烷溶剂，并梯度降温，离心得到固体物料3.15kg化合物7-1。该步骤收率为86％，纯度97.9％。
步骤五：将3.15kg的中间体化合物7-1溶解于氢氧化钠水溶液中，加入到反应釜中，氮气保护下将反应液升温至90℃，滴加配置好的硼氢化钠碱水溶液，维持该温度下搅拌反应。
采用HPLC监测反应完毕，降至室温，加入8.29kg乙酸丁酯，氮气保护下缓慢滴加2N盐酸调节pH至1～3，静置分液。有机相转入反应釜中，升温至60℃，加入12.81kg正庚烷，并梯度降温，离心干燥得奥贝胆酸2.33kg，本步收率92％，纯度98.9％，由化合物3-1制备奥贝胆酸的总收率为66％，经HPLC检测，未检出二聚体杂质。
实施例3：由化合物3-1制备奥贝胆酸
Figure BDA0002384244830000151
步骤一：向干燥洁净的反应釜中加入25.80kg二氯甲烷，先后加入4.30kg的化合物3-1及1.81kg三乙胺，搅拌溶清，氮气置换后，加入3.69kg三氟甲磺酸叔丁基二甲基硅酯，HPLC中控，至反应到达终点。
将氢氧化钠水溶液加入到反应釜中淬灭反应，并静置分液，向有机相中加入22.50kg甲苯后溶剂置换脱除溶剂，随后升高温度，将有机溶剂脱除溶剂至无液体流出，所得物料化合物4-3(3α-苯甲酰氧基-6-烯-7-(叔丁基二甲基硅基)氧基-5β-胆烷酸-24-甲酯)为白色固体，并按100％的收率进行下一步反应。
步骤二：将上一步所得白色固体化合物4-3用35.80kg二氯甲烷溶解加入到低温反应釜，氮气置换。氮气保护将反应釜内温度降至＜-60℃，加入1.68kg三聚乙醛，控制内温不高于-60℃加入6.03kg三氟化硼乙腈溶液。随后维持低温-65±5℃搅拌反应1h，再升至室温搅拌，HPLC中控至反应终点。
向反应釜内加入14.73kg纯化水淬灭反应，静置分液，有机相加入碳酸氢钠水溶液洗涤，静置分液。将分层所得有机相转移至浓缩釜中减压浓缩至无液体流出，所得物料化合物5-1为油状物，并按100％的收率进行下一反应。
步骤三：将上一步所得物料化合物5-1用16.09kg四氢呋喃溶解，搅拌澄清后加入稀盐酸水溶液(2.94kg浓盐酸溶解于2.94kg纯化水中)。升温至60℃，搅拌反应至HPLC监测反应到达终点，向反应液中加入氢氧化钠水溶液调节pH值至6～7，反应液减压脱除溶剂后加入15.73kg乙酸异丙酯萃取产物，静置分液，有机相转入干燥洁净的反应釜中，升温至60℃时，向反应釜中加入12.30kg正庚烷溶剂，并梯度降温，离心得到3.70kg固体化合物6-1。前三步骤总收率为84％，纯度98.3％。
步骤四：将3.70kg固体化合物6-1溶于14.62kg甲醇，加入到高压反应釜中，用甲醇将0.73kg的Pd/C加入反应釜中，氮气置换三次后，氢气置换一次，并加压，升温至65℃，搅拌反应至HPLC监测反应到达终点，将反应液降温至室温，过滤除去Pd/C，滤液转移入反应釜中，减压脱除溶剂，并用12.88kg乙酸异丙酯进行溶剂置换，停止脱除溶剂，乙酸异丙酯补加至化合物6的4倍体积，升温至80℃，向反应釜中加入15.10kg正庚烷溶剂，并梯度降温，离心得到固体物料3.12kg化合物7-1。该步骤收率为84％，纯度98.7％。
步骤五：将3.12kg的中间体化合物7-1溶解于氢氧化钠水溶液中，加入到反应釜中，氮气保护下将反应液升温至90℃，滴加配置好的硼氢化钠碱水溶液，维持该温度下搅拌反应。
采用HPLC监测反应完毕，降至室温，加入8.21kg乙酸丁酯，氮气保护下缓慢滴加2N盐酸调节pH至1～3，静置分液。有机相转入反应釜中，升温至60℃，加入12.69kg正庚烷，并梯度降温，离心干燥得奥贝胆酸2.26kg，本步收率90％，纯度98.5％，由化合物3-1制备奥贝胆酸的总收率为64％，经HPLC检测，未检出二聚体杂质。
实施例4：由化合物1(3α-羟基-7-酮-5β-胆烷-24-酸)制备化合物3-1
Figure BDA0002384244830000161
向反应釜中加入无水甲醇及7.50kg化合物1搅拌溶清，将浓硫酸用甲醇稀释成30％硫酸后加入到反应体系中，升温至60℃，HPLC中控至原料反应完全。使用饱和碳酸氢钠水溶液调节体系pH至中性，降温至10℃，加水后析出大量固体，离心干燥得化合物1的甲酯化产物化7.17kg合物2-1(3α-羟基-7-酮-5β-胆烷酸-24-甲酯)，收率92.3％，纯度96.8％。
将化合物2-1溶于二氯甲烷后加入反应釜中，先后加入DMAP、三乙胺及EDCI，氮气保护下加入苯甲酸，升温至回流反应至HPLC监测反应完全。降温后先后用水，2N盐酸和饱和碳酸氢钠洗涤二氯甲烷有机相，有机相转入新的反应釜中，加入甲醇并降温至0℃析晶，离心干燥得到类白色固体7.86kg化合物3-1，收率87.2％，纯度98.6％。
化合物3-1的结构表征结果如下：
1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ7.97(d,J＝7.7Hz,2H),7.50(t,J＝7.4Hz,1H),7.38(t,J＝7.4Hz,2H),4.91(dt,J＝11.2,6.4Hz,1H),3.62(s,3H),2.86(dd,J＝12.5,5.9Hz,1H),2.40–2.14(m,4H),1.99–1.78(m,9H),1.99–1.78(m,9H),1.49–1.39(m,6H),1.29–1.25(m,3H),1.20(S，3H),1.16–1.08(m,2H),0.96–0.88(m,4H),0.63(s,3H).
13C NMR(100MHz,CDCl3)δ211.85,174.61,165.94,132.85,130.53,129.54,128.29,77.48,77.16,76.84,73.49,54.80,51.50,49.51,48.91,45.95,45.30,42.88,42.64,38.92,35.23,33.85,33.23,31.03,31.00,28.30,26.20,24.77,23.07,21.78,18.40,12.08.
MS(m/z):[M+NH4]+526。
以上所述仅为本发明的优选实施方式，并非因此限制本发明的专利范围，凡是在本发明的发明构思下，利用本发明说明书所作的等效结构变换，或直接/间接运用在其他相关的技术领域均包括在本发明的专利保护范围内。

Claims (10)

1.一种制备奥贝胆酸或其药学上可接受的盐的方法，包括以下步骤：
Figure FDA0002384244820000011
(c)使化合物5发生水解反应脱除羧基保护基团Q，以生成化合物6；
(d)使化合物6发生氢化反应，以生成化合物7；
(e)使化合物7一步法进行羰基还原反应和脱除羟基保护基团P的水解反应，以生成奥贝胆酸；
其中P为羟基保护基团，Q为羧基保护基团。
2.如权利要求1所述的制备方法，还包括制备得到所述化合物5的步骤：
Figure FDA0002384244820000012
(a)使化合物3与三氟甲磺酸烷基硅酯类保护试剂在缚酸剂的作用下进行反应，以生成化合物4；
(b)在路易斯酸存在下，使化合物4与乙醛或三聚乙醛反应，以生成化合物5。
3.如权利要求2所述的制备方法，还包括制备得到所述化合物3的步骤：对化合物1进行羧基保护反应，以生成化合物2；以及对化合物2进行羟基保护反应，以生成化合物3，
Figure FDA0002384244820000021
其中，P和Q如权利要求1所定义。
4.如权利要求1～3中任一项所述的制备方法，所述P为苯甲酰基或苯环被取代的苯甲酰基，所述取代基选自C1～5烷基，-NR2，-NHR，-NH2，-OH，-OR，-NHCOR，-OCOR，-NO2，-CX3，-CN，-SO3H，-CHO，-COR和-COOH，其中各R独立为C1～5的烷基，X为F或Cl；优选地，P为苯甲酰基；
Q为C1～10的烷基、苄基或苯环被取代的苄基，所述取代基选自C1～5烷基，-NR2，-NHR，-NH2，-OH，-OR，-NHCOR，-OCOR，-NO2，-CX3，-CN，-SO3H，-CHO，-COR和-COOH，其中各R独立为C1～5的烷基，X为F或Cl；优选地，Q为甲基。
5.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(c)中所述水解反应在酸性条件下进行，所述水解反应温度为50～65℃。
6.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤(a)中所述三氟甲磺酸烷基硅酯类保护试剂选自三氟甲磺酸三甲基硅酯、三氟甲磺酸三乙基硅酯、三氟甲磺酸叔丁基二甲基硅酯和三氟甲磺酸叔丁基二苯基硅酯。
7.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤(a)中所述缚酸剂为三乙胺或N,N-二异丙基乙基胺。
8.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤(b)中所述路易斯酸为三氟化硼乙腈溶液或三氟化硼乙醚溶液；优选地，所述路易斯酸为三氟化硼乙腈溶液。
9.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤(b)根据以下的操作条件进行：将反应混合物冷却至-70℃～-60℃进行反应并维持0.5～1.5h，然后使所述反应混合物升温至室温继续反应。
10.如下式所示化合物3-1，
Figure FDA0002384244820000031
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