CN110698533B

CN110698533B - 一种熊果酸吲哚醌基类衍生物及其制备方法和应用

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Publication number: CN110698533B
Application number: CN201911068398.1A
Authority: CN
Inventors: 谷文; 王文燕; 李阿良; 王石发; 刘青松; 孙月
Original assignee: Nanjing Forestry University
Current assignee: Nanjing Forestry University
Priority date: 2019-11-04
Filing date: 2019-11-04
Publication date: 2021-10-12
Anticipated expiration: 2039-11-04
Also published as: CN110698533A

Abstract

本发明公开了一种熊果酸吲哚醌基类衍生物及其制备方法和应用，属于有机合成和药物化学技术领域。该熊果酸吲哚醌基类衍生物的结构通式如式(I)所示：

Description

一种熊果酸吲哚醌基类衍生物及其制备方法和应用

技术领域

本发明属于有机合成和药物化学技术领域，具体涉及一种熊果酸吲哚醌基类衍生物及其制备方法和应用。

背景技术

恶性肿瘤是严重威胁人类健康和社会发展的疾病。据世界卫生组织的最新统计数据，全球每年有880万人死于癌症，占全球每年死亡总人数的约1/6，而中国恶性肿瘤的发病人数约占全球的21.8％。肿瘤治疗的主要手段包括手术治疗、放射治疗(简称放疗)、化学药物治疗(简称化疗)以及细胞免疫治疗等。其中化疗作为一种常规治疗方法即使用DNA合成抑制剂或细胞分裂抑制剂之类的细胞毒药物来抑制肿瘤细胞，但同时，这些制剂也会杀伤正常的增殖较快的细胞，引起骨髓抑制、感染、出血等症状。因此，开发出选择性好、安全性好、疗效高的肿瘤抑制药物是现代肿瘤疾病研究的重要方向。

熊果酸(ursolic acid，UA)又名乌苏酸、乌索酸，是乌苏烷型五环三萜类化合物。熊果酸在植物中分布广泛，分布于白花蛇舌草、女贞子、乌梅、夏枯草等多种植物中，据统计，在自然界已有34科108种植物中分离得到熊果酸，因而是一种资源丰富，具有开发潜力的植物活性成分。熊果酸具有抗病毒、抗细菌、抗真菌、保肝、抗炎以及抗肿瘤等多种生物活性。其中，它的抗肿瘤作用得到了越来越多的关注。熊果酸的抗癌作用机制包括多个方面，如细胞毒作用，诱导细胞坏死和凋亡，表皮生长因子受体激酶抑制作用，DNA聚合酶和拓扑异构酶抑制作用及抗肿瘤血管生成作用等。但由于熊果酸的生物利用度较低，一定程度上限制了其在临床上的应用。因此需要通过化学结构修饰的方法来提高熊果酸的抗癌活性和生物利用度。熊果酸的结构修饰的研究主要集中于对A环、C环和C28位羧基的改造。目前国内外关于熊果酸杂环衍生物的报道仍非常少。

吲哚醌属于吲哚类生物碱，是一类存在于动物、植物及海洋生物的内源性天然活性化合物，也是中药青黛中的主要活性成分，具有抗菌、抗动脉粥样硬化、降低胆固醇、抑制血管内皮细胞生长因子、抗癌、预警帕金森病及调节脑内乙酰胆碱和多巴胺的平衡等药理活性。它同时也是重要的医药中间体，可以用来合成具有抗癌作用的靛玉红，具有抗菌、抗炎、抗癌等活性的天然产物色胺酮及其衍生物。此外，数个具有吲哚醌结构的天然产物或合成化合物也表现出显著的抗肿瘤作用。例如丝裂霉素C是从头状链霉菌培养液中分离提取的一种光谱抗肿瘤抗生素，对多种癌症具有治疗作用，临床适用于消化道癌，如胃癌、肠癌、肝癌及胰腺癌等，对肺癌、乳腺癌、宫颈癌及绒毛膜上皮癌等也有效。所以吲哚醌是抗肿瘤药物研发中一个非常有潜力的药效团。如果在熊果酸分子A环上引入吲哚醌基团，再对其羧基进行进一步衍生化，引入不同醇，酰胺，酰肼基团；对合成的系列衍生物进行抗肿瘤活性测试，如获得抗肿瘤活性较好的新型熊果酸吲哚醌类衍生物，对于研发新型抗肿瘤药物将具有重要的化学和生物学的意义。

目前，缺乏一种抗肿瘤活性较高的一类熊果酸吲哚醌基类衍生物及其制备方法和应用。

发明内容

本发明要解决的一个技术问题是提供一种熊果酸吲哚醌基类衍生物，具有较高的抗肿瘤生物活性。本发明要解决的另一个技术问题是提供一种熊果酸吲哚醌基类衍生物的制备方法，利用熊果酸制备抗癌症药物熊果酸吲哚醌基类衍生物，弥补现有技术的空白。本发明要解决的技术问题还有一个是提供一种熊果酸吲哚醌基类衍生物在制备抗癌症药物中应用，该衍生物在抗宫颈癌、乳腺癌或肝癌中均具有非常好的活性。

为了实现上述技术目的，本发明采用的技术方案的如下：

一种熊果酸吲哚醌基类衍生物，其结构通式如式(I)所述：

式中，R基团为：

上述熊果酸吲哚醌基类衍生物的制备方法，通过熊果酸A环上的C-3位羟基氧化为羰基后与3,5-二甲氧基苯肼反应得到3,5-二甲氧基吲哚衍生物，再通过Vilsmeier-Haack甲酰化反应生成3,5-二甲氧基-2-醛基吲哚衍生物，然后进行氧化反应得到熊果酸吲哚醌衍生物，熊果酸吲哚醌衍生物的C-28位羧基再分别进行酯化反应、酰胺化反应、酰肼化反应得到相应的熊果酸吲哚醌基类衍生物。具体包括以下步骤：

(1)熊果酸经过琼斯试剂氧化反应得到3-氧化熊果酸，具有通式(II)所示结构：

(2)3-氧化熊果酸与3,5-二甲氧基苯肼通过Fishier吲哚合成反应得到3,5-二甲氧基吲哚衍生物，具有通式(III)所示结构：

(3)吲哚衍生物与三氯氧磷和N,N-二甲基甲酰胺发生Vilsmeier-Haack甲酰化反应，得到3,5-二甲氧基-2-醛基吲哚衍生物，具有通式(IV)所示结构：

(4)化合物IV通过与过氧化氢进行氧化反应，得到熊果酸吲哚醌衍生物，具有通式V所示结构：

(5)化合物V通过分别与不同的醇、胺、酰肼分别进行酯化反应、酰胺化反应、酰肼化反应，得到熊果酸吲哚醌基类衍生物，具有通式(I)所示结构：

所述熊果酸吲哚醌基类衍生物的制备方法，3,5-二甲氧基吲哚衍生物的制备过程为：向3,5-二甲氧基苯胺的盐酸溶液中加入亚硝酸钠水溶液，冰浴条件下反应0.5～1.5h；反应结束后加入氯化亚锡的浓盐酸溶液，室温反应1.5～2.5h，得到固体3,5-二甲氧基苯肼；将其加入到3-氧化熊果酸的无水乙醇溶液中，并加入浓盐酸，80～90℃下回流2.5～3.5h，反应结束后得到3，5-二甲氧基吲哚衍生物；所述的3,5-二甲氧基苯胺、亚硝酸钠与氯化亚锡的摩尔比为2～3∶3～4∶5～6，所述3,5-二甲氧基苯胺与3-氧化熊果酸的摩尔比为2～3∶1。

所述熊果酸吲哚醌基类衍生物的制备方法，3,5-二甲氧基-2-醛基吲哚衍生物的合成过程为：将POCl₃加到冰水冷却后的DMF中反应0.5h，形成配位络合物，再加入3,5-二甲氧基吲哚衍生物，25～35℃搅拌反应2.5～3.5h生成中间体后，在冰水中水解1.5～2.5h，得到3，5-二甲氧基-2-醛基吲哚衍生物；所述的POCl₃、DMF、3,5-二甲氧基吲哚衍生物的摩尔比为7～8∶9～10∶4～5。

所述熊果酸吲哚醌基类衍生物的制备方法，所述酯化反应过程为：向3,5-二甲氧基-2-醛基吲哚衍生物的甲醇溶液中加入30％H₂O₂和浓盐酸，冰水浴条件下反应2.5～3.5h，反应结束后得到熊果酸吲哚醌衍生物；所述的30％H₂O₂、浓盐酸的体积比为3～4∶50～55；将熊果酸吲哚醌衍生物溶解于苯中，然后加入SOCl₂后升温至75～85℃，回流反应4h，反应结束得到熊果酸吲哚醌酰氯；将熊果酸吲哚醌酰氯溶解于乙醚中，冰水浴条件下加入不同的醇和三乙胺的二氯甲烷溶液；室温下反应6h，反应结束后得到熊果酸吲哚醌基酯衍生物；所述熊果酸吲哚醌衍生物：SOCl₂、不同的醇与三乙胺的摩尔比为2～3∶20～30∶3～5∶4～6；所述不同的醇为甲醇、乙醇、异丙醇或正丁醇中的任一种。

所述熊果酸吲哚醌基类衍生物的制备方法，所述酰胺化反应过程为；将3，5-二甲氧基-2-醛基吲哚衍生物的甲醇溶液中加入浓盐酸和30％H₂O₂，冰水浴条件下反应2.5～3.5h，反应结束后得到熊果酸吲哚醌衍生物；所述的30％H₂O₂：浓盐酸的体积比为3～4∶50～55；将熊果酸吲哚醌衍生物溶于二氯甲烷，然后加入HOBt和DCC，室温下反应30～40min；然后加入不同的胺，室温反应过夜，反应结束后得到熊果酸吲哚醌基酰胺衍生物；所述熊果酸吲哚醌衍生物、HOBt、DCC与不同的胺的摩尔比为4～5∶6～7∶6～7∶7～8；所述不同的胺为胺、甲胺、乙胺、丙胺、二甲胺、二乙胺或二丙胺中的任一种。

所述熊果酸吲哚醌基类衍生物的制备方法，所述酰肼化反应过程为：将3,5-二甲氧基-2-醛基吲哚衍生物的甲醇溶液中加入浓盐酸和30％H₂O₂，冰水浴条件下反应2.5～3.5h，反应结束后得到熊果酸吲哚醌衍生物；所述30％H₂O₂、浓盐酸的体积比为3～4∶50～55；将熊果酸吲哚醌衍生物溶解于苯，然后加入SOCl₂后升温至80～90℃，回流反应4～4.5h，反应结束得到熊果酸吲哚醌酰氯；将熊果酸吲哚醌酰氯溶解于乙醚中，冰水浴条件下加入不同的酰肼和三乙胺的二氯甲烷溶液，室温下反应5.5～6.5h；反应结束后得到熊果酸吲哚醌基酰肼衍生物；所述熊果酸吲哚醌衍生物、SOCl₂、不同的醇与三乙胺的摩尔比为2～3∶20～25∶3～5∶4～5；所述不同的酰肼为乙酰肼、丁酸肼、戊酸肼、苯甲酰基、对甲苯甲酰肼或3-吡啶甲酰肼中的任一种。

上述熊果酸吲哚醌基类衍生物在制备抗癌症药物中的应用。

所述熊果酸吲哚醌基类衍生物在制备抗癌症药物中的应用，所述癌症为宫颈癌、乳腺癌或肝癌。

有益效果：与现有的技术相比，本发明的优点包括：

本发明具有抗肿瘤活性，药理学实验表明，本发明的熊果酸吲哚醌基类衍生物对宫颈癌细胞株HeLa、乳腺癌细胞株MCF-7和肝癌细胞株Hep G2有显著的抑制作用，其中化合物I-d的体外抗肿瘤活性最好。该类衍生物的结构较为新颖，国内外未见报道。具有开发抗肿瘤药物的潜在价值。

具体实施方式

为使本发明的上述目的、特征和优点能够更加明显易懂，下面结合具体实施例对本发明的具体实施方式做详细的说明。

实施例1(1)合成3-氧化熊果酸(II)：

在500mL的圆底烧瓶中加入4.6mmol的熊果酸和250mL的丙酮，搅拌溶解后在冰水中搅拌反应15min，缓慢滴加1.87mL的琼斯试剂并升至室温搅拌反应5h后加入90mL异丙醇搅拌反应30min，反应结束后滤去沉淀收集滤液，滤液减压浓缩得到的浅黄绿色粘稠状固体用甲醇重结晶得到的白色针状晶体即为3-氧化熊果酸(II)(1.2g，65.6％)。

(2)合成熊果酸3，5-二甲氧吲哚衍生物(III)：

称取3,5-二甲氧基苯胺3mmol溶于3mL 20％盐酸在单口圆底烧瓶内。再称取亚硝酸钠4mmol溶于0.7mL水中，将之缓慢滴入在冰浴条件下的反应烧瓶内，在冰浴条件下搅拌反应1h。称取氯化亚锡6mmol溶解于1.8mL浓盐酸，缓慢滴入在冰浴条件下的上步反应完成的烧瓶内，室温下搅拌2h，反应完成后进行抽滤，固体为3，5-二甲氧基苯肼。

称取3-氧化熊果酸1mmol溶于10mL无水乙醇中，将上步反应的3，5-二甲氧基苯肼3mmol加入体系中，再加入0.5mL浓盐酸，在85℃下回流3h。反应完成后，将反应物倒入装有20mL冰水的烧杯里，等冰融化，用二氯甲烷萃取3次，每次20mL；合并有机相用水洗涤3次，每次20mL，再用20mL碳酸氢钠饱和溶液洗涤1次，最后用20mL饱和氯化钠溶液洗涤一次。用无水硫酸钠干燥，蒸馏去除溶剂。硅胶柱层析分离纯化，用石油醚/丙酮梯度洗脱(20∶1～5∶1)，合并产物组分，减压浓缩，去除溶剂，制得纯化合物III0.39g，得率为66.3％，

(3)合成熊果酸3,5-二甲氧基-2-醛基吲哚衍生物(IV)：

将1.6mmol POCl₃滴加到搅拌并冰水冷却的2mmol N,N-二甲基甲酰胺(DMF)中反应0.5h后形成配位络合物，再将1mmol化合物III缓慢加到此络合反应液中，30℃搅拌反应3h生成中间体后，再将此中间体反应液加入搅拌的冰水中水解2h，等冰融化，用二氯甲烷萃取3次，每次20mL；合并有机相用水洗涤3次，每次20mL，再用20mL碳酸氢钠饱和溶液洗涤1次，最后用20mL饱和氯化钠溶液洗涤一次。用无水硫酸钠干燥，蒸馏去除溶剂。硅胶柱层析分离纯化，用石油醚/丙酮梯度洗脱(20∶1～10∶1)，合并产物组分，减压浓缩，去除溶剂，制得纯化合物IV0.46g，得率为74.7％，

(4)合成熊果酸吲哚醌衍生物(V)：

将0.31mmol的化合物IV用50mL的甲醇溶解，加入3mL30％H₂O₂和3滴浓盐酸，混合液在冰浴下搅拌反应3h后倒入50mL冰水中，等冰融化，用二氯甲烷萃取3次，每次30mL。合并有机相用水洗涤3次，每次30mL，再用30mL碳酸氢钠饱和溶液洗涤1次，最后用30mL饱和氯化钠溶液洗涤一次。用无水硫酸钠干燥，蒸馏去除溶剂。硅胶柱层析分离纯化，用石油醚/丙酮梯度洗脱(15∶1-8∶1)，合并产物组分，减压浓缩，去除溶剂，制得纯化合物V，0.11g，得率为60.3％，

(5)合成熊果酸吲哚醌基酯(I-a)：

将0.054g的化合物V用苯溶解，缓慢滴加50μL SOCl₂后逐渐升温至80℃，回流反应4h。当把润湿的pH试纸放到排气口处试纸不变红表示反应结束，减压浓缩，将反应液中的苯和SOCl₂蒸出，得到黄色油状的熊果酸吲哚醌酰氯。将熊果酸吲哚醌酰氯用6mL的乙醚溶解并在冰浴条件下缓慢滴加0.225mmol甲醇和30μL三乙胺的二氯甲烷溶液，缓慢升至室温并搅拌反应6h。反应结束后将反应液倒入冰水混合物中，待冰融化后用二氯甲烷萃取3次；合并有机相用水洗涤3次，再用碳酸氢钠饱和溶液洗涤1次，最后用饱和氯化钠溶液洗涤一次；用无水硫酸钠干燥，蒸馏去除溶剂；硅胶柱层析分离纯化，用二氯甲烷/甲醇梯度洗脱(30∶1-10∶1)，合并产物组分，减压浓缩，去除溶剂，制得纯化合物I-a，得率77％。

Red Powder Solid；M.p.307～309℃；Yield：71.9％；¹H NMR(600MHz，CDCl₃)：δ0.82(s，3H)，0.88(s，3H)，0.89(s，3H)，0.91(s，3H)，0.95(d，J＝6.42Hz，3H)，1.10(s，3H)，1.20(s，3H)，1.26(s，3H)，1.48～1.82(m，16H)，2.0～2.24(m，6H)，2.28(d，J＝11.22Hz，1H)，3.07(d，J＝16.44Hz，1H)，3.62(s，3H)，3.72(q，J＝7.02Hz，1H)，3.81(s，3H)，5.34(s，2H)，5.65(s，1H)，9.23(s，1H)；¹³C NMR(150MHz，CDCl₃)δ184.75，178.04，170.56，159.99，145.62，137.89，128.58，125.75，124.22，118.89，107.28，56.51，53.39，52.58，51.45，48.25，46.02，42.23，39.55，39.19，38.89，37.85，36.63，34.02，32.38，31.57，30.21，29.69，28.06，26.92，24.30，23.49，22.64，21.15，19.11，16.81，15.77，14.09；ESI-MS：calcd.for C₃₈H₅₀NO₅600.3689[M-H]^-，found 600.3692.

实施例2

合成熊果酸吲哚醌基酯(I-b)：

将0.054g的实施例1中的化合物V用苯溶解，缓慢滴加50μL SOCl₂后逐渐升温至80℃，回流反应4h。当把润湿的pH试纸放到排气口处试纸不变红表示反应结束，减压浓缩，将反应液中的苯和SOCl₂蒸出，得到黄色油状的熊果酸吲哚醌酰氯。将熊果酸吲哚醌酰氯用6mL的乙醚溶解并在冰浴条件下缓慢滴加0.225mmol乙醇和30μL三乙胺的二氯甲烷溶液，缓慢升至室温并搅拌反应6h。反应结束后将反应液倒入冰水混合物中，待冰融化后用二氯甲烷萃取3次；合并有机相用水洗涤3次，再用碳酸氢钠饱和溶液洗涤1次，最后用饱和氯化钠溶液洗涤一次；用无水硫酸钠干燥，蒸馏去除溶剂；硅胶柱层析分离纯化，用二氯甲烷/甲醇梯度洗脱(30∶1～10∶1)，合并产物组分，减压浓缩，去除溶剂，制得纯化合物I-b，得率77％。

Red Powder Solid；M.p.289～294℃；Yield：70.2％；1H NMR(600MHz，CDCl3)：δ0.80(s，3H)，0.85(s，3H)，0.87(d，J＝6.18Hz，3H)，0.94(d，J＝6.06Hz，3H)，1.09(s，3H)，1.19(s，3H)，1.23～1.28(m，3H)，1.30(s，3H)，1.40(d，J＝10.98Hz，2H)，1.47～1.77(m，9H)，1.85～2.15(m，6H)，2.24(d，J＝10.98Hz，1H)，3.05(d，J＝16.56Hz，1H)，3.79(s，3H，OCH3)，5.29(s，2H)，5.66(s，1H)，11.08(s，1H)；13C NMR(150MHz，CDCl3)δ185.13，183.08，170.46，160.37，147.68，137.70，128.43，125.88，124.65，119.65，107.08，56.62，53.48，52.76，52.60，50.61，48.02，46.86，45.93，42.19，39.50，39.12，38.84，37.79，36.73，34.28，32.33，30.71，30.50，29.72，28.05，24.19，23.42，23.13，21.19，19.07，16.98，16.84，15.85，14.17；ESI-MS：calcd.for C₃₉H₅₂NO₅614.3845[M-H]^-，found 614.3842.

实施例3

合成熊果酸吲哚醌基酯(I-c)：

将0.054g的实施例1中的化合物V用苯溶解，缓慢滴加50μL SOCl₂后逐渐升温至80℃，回流反应4h。当把润湿的pH试纸放到排气口处试纸不变红表示反应结束，减压浓缩，将反应液中的苯和SOCl₂蒸出，得到黄色油状的熊果酸吲哚醌酰氯。将熊果酸吲哚醌酰氯用6mL的乙醚溶解并在冰浴条件下缓慢滴加0.225mmol异丙醇和30μL三乙胺的二氯甲烷溶液，缓慢升至室温并搅拌反应6h。反应结束后将反应液倒入冰水混合物中，待冰融化后用二氯甲烷萃取3次；合并有机相用水洗涤3次，再用碳酸氢钠饱和溶液洗涤1次，最后用饱和氯化钠溶液洗涤一次；用无水硫酸钠干燥，蒸馏去除溶剂；硅胶柱层析分离纯化，用二氯甲烷/甲醇梯度洗脱(30∶1-10∶1)，合并产物组分，减压浓缩，去除溶剂，制得纯化合物I-c，得率77％。

Red Powder Solid；M.p.292～297℃；Yield：69.8％；1H NMR(600MHz，CDC13)：δ0.80(s，3H)，0.85(s，3H)，0.87(d，J＝6.18Hz，3H)，0.954(d，J＝6.06Hz，3H)，1.09(s，3H)，1.19(s，3H)，1.23～1.28(m，3H)，1.30(s，3H)，1.40(d，J＝10.98Hz，2H)，1.47～1.77(m，9H)，1.85～2.15(m，6H)，2.24(d，J＝10.98Hz，1H)，3.05(d，J＝16.56Hz，1H)，3.79(s，3H)，5.29(s，2H)，5.66(s，1H)，11.08(s，1H)；13C NMR(150MHz，CDCl3)δ185.09，182.92，170.47，160.32，147.40，137.70，128.47，125.88，124.57，119.51，107.09，56.61，53.47，52.76，52.59，48.02，45.94，42.19，39.51，39.13，38.84，37.79，36.73，36.63，34.25，32.33，31.54，30.71，30.54，28.04，24.19，23.42，23.35，23.16，21.19，19.06，16.97，16.87，15.84；ESI-MS：calcd.for C₄₀H₅₄NO₅628.4002[M-H]^-，found628.4011.

实施例4

合成熊果酸吲哚醌基酯(I-d)：

将0.054g的实施例1中的化合物V用苯溶解，缓慢滴加50μL SOCl₂后逐渐升温至80℃，回流反应4h。当把润湿的pH试纸放到排气口处试纸不变红表示反应结束，减压浓缩，将反应液中的苯和SOCl₂蒸出，得到黄色油状的熊果酸吲哚醌酰氯。将熊果酸吲哚醌酰氯用6mL的乙醚溶解并在冰浴条件下缓慢滴加0.225mmol正丁醇和30μL三乙胺的二氯甲烷溶液，缓慢升至室温并搅拌反应6h。反应结束后将反应液倒入冰水混合物中，待冰融化后用二氯甲烷萃取3次；合并有机相用水洗涤3次，再用碳酸氢钠饱和溶液洗涤1次，最后用饱和氯化钠溶液洗涤一次；用无水硫酸钠干燥，蒸馏去除溶剂；硅胶柱层析分离纯化，用二氯甲烷/甲醇梯度洗脱(30∶1-10∶1)，合并产物组分，减压浓缩，去除溶剂，制得纯化合物I-d，得率77％。

Red Powder Solid；M.p.287～293℃；Yield：70.3％；1H NMR(600MHz，CDCl3)：δ0.81(s，3H)，0.86(s，3H)，0.87(d，J＝6.48Hz，3H)，0.94(d，J＝6.3Hz，3H)，1.09(s，3H)，1.19(s，3H)，1.22～1.28(m，3H)，1.29(s，3H)，1.41(d，J＝11.4Hz，3H)，1.50～2.17(m，14H)，2.24(d，J＝11.28Hz，1H)，2.96(s，2H)，3.05(d，J＝16.6Hz，1H)，3.80(s，3H)，5.29～5.32(m，2H)，5.65(s，1H)，10.92(s，1H)；13C NMR(150MHz，CDCl3)δ184.81，177.65，170.56，160.01，145.76，137.92，128.59，127.98，125.71，118.96，107.25，64.00，56.54，53.05，52.56，48.19，46.00，42.29，39.59，39.22，38.90，37.84，36.73，34.04，32.48，31.62，31.44，30.70，29.70，28.00，24.27，23.49，23.39，22.70，21.18，19.28，19.12，17.04，15.80，14.13，13.75；ESI-MS：calcd.for C₄₁H₅₆NO₅642.4158[M-H]^-，found 642.4151.

实施例5

熊果酸吲哚醌基酰胺衍生物(I-e)的合成

将0.05mmol的实施例1中制备得到的化合物V溶于2mL二氯甲烷，HOBt 0.07mmol和DCC 0.07mmol加入反应体系中室温搅拌反应30min后将胺0.08mmol添加进去。室温搅拌过夜。反应结束后过滤掉沉淀，滤液减压浓缩后用乙腈溶解4℃放置过夜，进一步过滤掉沉淀，减压浓缩除去溶剂，用二氯甲烷/甲醇梯度洗脱(30∶1～10∶1)，合并产物组分，减压浓缩，去除溶剂，制得纯化合物I-e 23.9mg，得率为76％。

Red Powder Solid；M.p.278～284℃；Yield：72.3％；1H NMR(600MHz，CDCl3)：δ0.91(s，3H)，0.94(d，J＝6.36Hz，3H)，0.96(s，3H)，1.01(d，J＝6.24Hz，3H)，1.19(s，3H)，1.25(s，3H)，1.32(s，3H)，1.36～1.74(m，14H)，1.76(q，J＝5.7Hz，1H)，1.90～2.34(m，12H)，2.42(d，J＝11.16Hz，1H)，3.08(d，J＝15.84Hz，1H)，3.80(s，3H)，5.29(s，1H)，5.45(brs，1H)，5.65(s，1H)，10.14(s，1H)；13C NMR(151 MHz，CDCl₃)δ185.01，173.35，170.55，160.14，143.60，136.70，131.45，128.70，124.22，120.61，118.79，107.14，76.83，56.51，53.16，52.72，49.22，47.35，45.95，44.25，42.46，39.74，39.16，38.73，37.85，36.70，34.18，30.77，25.61，24.96，24.40，23.27，19.11，17.48，16.87，15.90；ESI-MS：calcd.forC₃₇H₄₉N₂O₄585.3692[M-H]^-，found 585.3687.

实施例6

熊果酸吲哚醌酰胺衍生物(I-f)的合成

将0.05mmol的实施例1中制备得到的化合物V溶于2mL二氯甲烷，HOBt 0.07mmol和DCC 0.07mmol加入反应体系中室温搅拌反应30min后将甲胺0.08mmol添加进去。室温搅拌过夜。反应结束后过滤掉沉淀，滤液减压浓缩后用乙腈溶解4℃放置过夜，进一步过滤掉沉淀，减压浓缩除去溶剂，用二氯甲烷/甲醇梯度洗脱(30∶1～10∶1)，合并产物组分，减压浓缩，去除溶剂，制得纯化合物I-f，27.0mg，得率为82％。

Red Powder Solid；M.p.287～294℃；Yield：73.9％；¹H NMR(600MHz，CDCl₃)：δ0.82(d，J＝4.5Hz，3H)，0.88(d，J＝4.5Hz，3H)，0.94(s，3H)，1.11(s，3H)，1.23(s，3H)，1.30(s，3H)，1.40～1.80(m，12H)，1.88～2.26(m，8H)，2.73(d，J＝4.56Hz，2H)，3.06(d，J＝16.38Hz，1H)，3.79(s，3H，OCH₃)，5.39(s，1H)，5.65(s，1H)，IR(KBr，cm-1)：3401，2973，1927，1865，1639，1587，1483，1443，1378，1236，1099，1020，800，732；¹³C NMR(151 MHz，CDCl₃)δ185.12，178.83，160.18，146.05，139.95，128.71，125.71，124.16，118.63，107.12，56.50，53.44，52.57，47.83，45.98，42.66，39.90，39.48，39.13，37.78，36.90，34.16，32.00，30.92，30.66，27.85，26.28，25.62，25.00，23.50，23.23，23.18，21.23，19.07，17.25，16.38，15.81；ESI-MS：calcd.for C₃₈H₅₁N₂O₄599.3849[M-H]^-，found 599.3852.

实施例7

熊果酸吲哚醌酰胺衍生物(I-g)的合成

将0.05mmol的实施例1中制备得到的化合物V溶于2mL二氯甲烷，HOBt 0.07mmol和DCC 0.07mmol加入反应体系中室温搅拌反应30min后将乙胺0.08mmol添加进去。室温搅拌过夜。反应结束后过滤掉沉淀，滤液减压浓缩后用乙腈溶解4℃放置过夜，进一步过滤掉沉淀，减压浓缩除去溶剂，用二氯甲烷/甲醇梯度洗脱(30∶1～10∶1)，合并产物组分，减压浓缩，去除溶剂，制得纯化合物I-g，25.0mg，得率为73％。

Red Powder Solid；M.p.279～284℃；Yield：71.0％；¹H NMR(600MHz，CDCl₃)：δ0.87(s，3H)，0.89(d，J＝6.42Hz，3H)，0.91(s，3H)，0.94(s，3H)，1.09(t，J＝7.32，3H)，1.11(s，3H)，1.22(s，3H)，1.30(s，3H)，1.40～1.78(m，12H)，1.86～2.08(m，6H)，2.15(d，J＝14.4Hz，1H)，2.19～2.24(m，1H)，3.06(d，J＝4.44Hz，1H)，3.10～3.17(m，1H)，3.25～3.33(m，1H)，3.79(s，3H，OCH₃)，5.39(td，J＝2.94，3.66Hz，1H)，5.65(s，1H)，10.21(s，1H)；¹³CNMR(150MHz，CDCl₃)δ185.08，177.98，170.44，160.17，146.12，139.79，128.70，125.70，124.17，118.74，107.12，56.51，52.61，47.68，45.98，42.77，39.92，39.57，39.12，37.10，34.18，32.21，30.97，30.66，27.89，25.62，24.98，24.91，23.09，21.22，19.07，17.23，16.73，15.86，14.53；ESI-MS：calcd.for C₃₉H₅₃N₂O₄613.4005[M-H]^-，found613.4002.

实施例8

熊果酸吲哚醌酰胺衍生物(I-h)的合成

将0.05mmol的实施例1中制备得到的化合物V溶于2mL二氯甲烷，HOBt 0.07mmol和DCC 0.07mmol加入反应体系中室温搅拌反应30min后将丙胺0.08mmol添加进去。室温搅拌过夜。反应结束后过滤掉沉淀，滤液减压浓缩后用乙腈溶解4℃放置过夜，进一步过滤掉沉淀，减压浓缩除去溶剂，用二氯甲烷/甲醇梯度洗脱(30∶1～10∶1)，合并产物组分，减压浓缩，去除溶剂，制得纯化合物I-h，24.5mg，得率为76％。

Red Powder Solid；M.p.285～293℃；Yield：70.7％；¹H NMR(600MHz，CDCl₃)：60.92(s，6H)，0.94(d，J＝6.48Hz，3H)，0.96(s，3H)，1.02(d，J＝6.42Hz，3H)，1.19(s，3H)，1.26(s，3H)，1.32(s，3H)，1.40～1.80(m，13H)，1.90～2.33(m，11H)，2.43(d，J＝11.16Hz，1H)，3.09(d，J＝16.5Hz，1H)，3.44～3.51(m，1H)，3.79(s，3H)，5.29(s，1H)，5.46(brs，1H)，5.65(s，1H)，10.06(s，1H)；¹³C NMR(150MHz，CDCl₃)δ184.96，173.33，170.48，160.13，143.58，136.60，128.79，128.40，120.62，118.75，108.13，107.16，56.48，53.17，52.76，49.23，45.97，42.47，39.77，39.17，38.74，37.85，36.71，34.18，33.89，32.58，30.77，30.57，28.44，25.61，24.95，24.42，23.54，23.32，23.27，21.02，19.11，17.48，16.86，15.88；ESI-MS：calcd.for C₄₀H₅₅N₂O₄627.4162[M-H]^-，found 627.4152.

实施例9

熊果酸吲哚醌酰胺衍生物(I-i)的合成

将0.05mmol的实施例1中制备得到的化合物V溶于2mL二氯甲烷，HOBt 0.07mmol和DCC 0.07mmol加入反应体系中室温搅拌反应30min后将二甲胺0.08mmol添加进去。室温搅拌过夜。反应结束后过滤掉沉淀，滤液减压浓缩后用乙腈溶解4℃放置过夜，进一步过滤掉沉淀，减压浓缩除去溶剂，用二氯甲烷/甲醇梯度洗脱(30∶1～10∶1)，合并产物组分，减压浓缩，去除溶剂，制得纯化合物I-i，29.0mg，得率为86％。

Red Powder Solid；M.p.275～282℃；Yield：68.4％；¹H NMR(600MHz，CDCl₃)：δ0.80(s，3H)，0.81(s，3H)，0.87(d，J＝6.3Hz，3H)，0.95(d，J＝6.24Hz，3H)，1.04(s，3H)，1.13(s，3H)，1.23(s，3H)，1.30～1.72(m，13H)，1.87～2.32(m，9H)，2.50(s，6H)，2.90(t，J＝16.32Hz，1H)，3.16(s，3H)，4.29(s，2H)，4.55(s，2H)，5.36(s，1H)；¹³C NMR(151 MHz，DMSO)δ185.11，173.79，170.08，166.00，160.49，143.20，137.19，128.57，123.43，120.37，117.66，106.86，56.83，53.18，52.66，49.06，42.49，39.91，39.21，38.73，38.54，37.63，34.34，33.70，32.47，30.32，28.28，25.70，24.85，23.28，22.89，21.17，18.80，17.41，17.11，15.97；ESI-MS：calcd.for C₃₉H₅₃N₂O₄613.4005[M-H]^-，found 613.4008.

实施例10

熊果酸吲哚醌酰胺衍生物(I-j)的合成

将0.05mmol的实施例1中制备得到的化合物V溶于2mL二氯甲烷，HOBt 0.07mmol和DCC 0.07mmol加入反应体系中室温搅拌反应30min后将二乙胺0.08mmol添加进去。室温搅拌过夜。反应结束后过滤掉沉淀，滤液减压浓缩后用乙腈溶解4℃放置过夜，进一步过滤掉沉淀，减压浓缩除去溶剂，用二氯甲烷/甲醇梯度洗脱(30∶1～10∶1)，合并产物组分，减压浓缩，去除溶剂，制得纯化合物I-j，28.4mg，得率为81％。

Red Powder Solid；M.p.269～276℃；Yield：76.4％；¹H NMR(600MHz，CDCl₃)：δ0.92(s，3H)，0.95(d，J＝6.42Hz，3H)，0.97(s，3H)，1.02(d，J＝6.42Hz，3H)，1.19(s，3H)，1.23(s，3H)，1.25(t，J＝7.26Hz，6H)，1.31(s，3H)，1.38～1.80(m，14H)，1.91～2.33(m，10H)，2.43(d，J＝11.16Hz，1H)，3.09(d，J＝16.44Hz，1H)，3.30～3.52(m，2H)，3.81(s，3H，OCH₃)，5.47(td，J＝3.18，3.9Hz，1H)，5.64(s，1H)，9.63(s，1H)；¹³C NMR(151MHz，CDCl₃)δ184.84，173.34，170.53，160.06，145.77，136.61，128.38，118.74，107.22，56.49，49.24，45.98，42.49，39.77，39.18，38.74，36.70，34.11，32.58，30.86，30.57，29.68，28.43，25.62，24.94，24.43，23.41，23.25，21.01，19.09，17.46，16.85，15.87，14.08；ESI-MS：calcd.for C₄₁H₅₇N₂O₄641.4318[M-H]^-，found 641.4312.

实施例11

熊果酸吲哚醌酰胺衍生物(I-k)的合成

将0.05mmol的实施例1中制备得到的化合物V溶于2mL二氯甲烷，HOBt 0.07mmol和DCC 0.07mmol加入反应体系中室温搅拌反应30min后将二丙胺0.08mmol添加进去。室温搅拌过夜。反应结束后过滤掉沉淀，滤液减压浓缩后用乙腈溶解4℃放置过夜，进一步过滤掉沉淀，减压浓缩除去溶剂，用二氯甲烷/甲醇梯度洗脱(30∶1～10∶1)，合并产物组分，减压浓缩，去除溶剂，制得纯化合物I-k，23.7mg，得率为72％。

Red Powder Solid；M.p.278～286℃；Yield：72.0％；¹H NMR(600MHz，CDCl₃)：δ0.85(s，3H)，0.88(d，J＝3.12Hz，3H)，0.89(d，J＝3.36Hz，3H)，0.91(t，J＝3.42Hz，6H)，0.94(s，3H)，1.11(s，3H)，1.23(s，3H)，1.30(s，3H)，1.38～1.60(m，10H)，1.65～1.80(m，4H)，1.85～2.08(m，5H)，2.15(d，J＝16.5Hz，1H)，2.21(dt，J＝4.92，4.86Hz，1H)，2.98～3.02(m，1H)，3.07(d，J＝16.44Hz，1H)，3.26～3.34(m，1H)，3.79(s，3H，OCH₃)，5.38(brs，1H)，5.85(s，1H)，5.93(t，J＝5.22Hz，1H)，10.19(s，1H)；¹³C NMR(151 MHz，CDCl₃)δ185.05，177.98，170.43，166.14，160.18，146.10，139.82，128.72，125.66，124.18，118.72，107.13，56.47，54.23，52.65，49.22，47.86，46.00，42.77，41.24，39.58，39.12，37.79，37.22，34.19，33.90，30.98，30.65，27.90，25.63，24.97，23.53，22.52，21.19，19.08，17.21，16.76，15.84，11.56；ESI-MS：calcd.for C₄₃H₆₁N₂O₄669.4631[M-H]^-，found669.4632.

实施例12

熊果酸吲哚醌酰肼衍生物(I-l)的合成

将0.054g的实施例1中制备得到的化合物V用苯溶解，缓慢滴加50μL SOCl₂后逐渐升温至80℃，回流反应4h。当把润湿的pH试纸放到排气口处试纸不变红表示反应结束，减压浓缩，将反应液中的苯和SOCl₂蒸出，得到黄色油状的熊果酸吲哚醌酰氯。将熊果酸吲哚醌酰氯用6mL的乙醚溶解并在冰浴条件下缓慢滴加0.225mmol乙酰肼和30μL三乙胺的二氯甲烷溶液，缓慢升至室温并搅拌反应6h。反应结束后将反应液倒入冰水混合物中，待冰融化后用二氯甲烷萃取3次；合并有机相用水洗涤3次，再用碳酸氢钠饱和溶液洗涤1次，最后用饱和氯化钠溶液洗涤一次；用无水硫酸钠干燥，蒸馏去除溶剂；硅胶柱层析分离纯化，用二氯甲烷/甲醇梯度洗脱(30∶1-10∶1)，合并产物组分，减压浓缩，去除溶剂，制得纯化合物I-l，得率77％。

Red Powder Solid；M.p.278～286℃；Yield：72.0％；¹H NMR(600MHz，CDCl₃)：δ0.79(s，3H)，0.88(d，J＝6.66Hz，6H)，0.94(s，3H)，1.11(s，3H)，1.24(s，3H)，1.30(s，3H)，1.34～1.59(m，8H)，1.67～1.77(m，4H)，1.85(d，J＝12.72Hz，1H)，2.02(s，3H)，2.05～2.22(m，5H)，3.06(d，J＝16.5Hz，1H)，3.78(s，3H，OCH₃)，5.28(s，3H)，5.52(brs，1H)，5.65(s，1H)，9.00(s，1H)，9.88(s，1H)，10.92(s，1H)；¹³C NMR(150MHz，CDCl₃)δ185.04，173.72，170.57，166.29，160.25，146.85，138.35，130.90，127.21，124.39，119.08，107.12，56.53，53.45，52.65，47.58，45.98，42.49，39.58，38.85，38.17，37.72，37.11，34.30，32.15，30.59，29.68，27.77，23.24，23.04，21.15，20.62，19.04，17.06，16.43，15.91，14.19；ESI-MS：calcd.for C₃₉H₅₂N₃O₅642.3907[M-H]^-，found 642.3912.

实施例13

熊果酸吲哚醌酰肼衍生物(I-m)的合成

将0.054g的实施例1中制备得到的化合物V用苯溶解，缓慢滴加50μL SOCl₂后逐渐升温至80℃，回流反应4h。当把润湿的pH试纸放到排气口处试纸不变红表示反应结束，减压浓缩，将反应液中的苯和SOCl₂蒸出，得到黄色油状的熊果酸吲哚醌酰氯。将熊果酸吲哚醌酰氯用6mL的乙醚溶解并在冰浴条件下缓慢滴加0.225mmol丁酸肼和30μL三乙胺的二氯甲烷溶液，缓慢升至室温并搅拌反应6h。反应结束后将反应液倒入冰水混合物中，待冰融化后用二氯甲烷萃取3次；合并有机相用水洗涤3次，再用碳酸氢钠饱和溶液洗涤1次，最后用饱和氯化钠溶液洗涤一次；用无水硫酸钠干燥，蒸馏去除溶剂；硅胶柱层析分离纯化，用二氯甲烷/甲醇梯度洗脱(30∶1～10∶1)，合并产物组分，减压浓缩，去除溶剂，制得纯化合物I-m，得率77％。Red Powder Solid；M.p.263～272℃；Yield：71.9％；¹H NMR(600MHz，CDCl₃)：δ0.79(s，3H)，0.87(d，J＝6.66Hz，3H)，0.89(s，3H)，0.91(d，J＝7.02Hz，6H)，0.95(s，3H)，1.23(s，3H)，1.25(s，3H)，1.30(s，3H)，1.34～1.60(m，13H)，1.61～1.78(m，8H)，1.88(d，J＝13.14Hz，1H)，2.02～2.17(m，5H)，2.23(t，J＝7.26Hz，3H)，3.80(s，3H，OCH₃)，5.57(brs，1H)，5.66(s，1H)，9.06(s，1H)，10.42(s，1H)；¹³C NMR(151 MHz，CDCl₃)δ184.90，173.41，170.59，168.72，160.19，146.45，138.42，128.65，127.35，124.36，118.98，107.18，56.48，53.39，52.90，52.64，47.55，46.02，39.66，39.62，38.89，37.75，35.85，34.24，32.14，31.91，30.66，29.68，29.34，27.79，24.87，23.54，22.67，21.12，18.97，17.06，16.32，15.83，14.09，13.55；ESI-MS：calcd.for C₄₁H₅₆N₃O₅670.4220[M-H]^-，found 669.4217.

实施例14

熊果酸吲哚醌酰肼衍生物(I-n)的合成

将0.054g的实施例1中制备得到的化合物V用苯溶解，缓慢滴加50μL SOCl₂后逐渐升温至80℃，回流反应4h。当把润湿的pH试纸放到排气口处试纸不变红表示反应结束，减压浓缩，将反应液中的苯和SOCl₂蒸出，得到黄色油状的熊果酸吲哚醌酰氯。将熊果酸吲哚醌酰氯用6mL的乙醚溶解并在冰浴条件下缓慢滴加0.225mmol戊酸肼和30μL三乙胺的二氯甲烷溶液，缓慢升至室温并搅拌反应6h。反应结束后将反应液倒入冰水混合物中，待冰融化后用二氯甲烷萃取3次；合并有机相用水洗涤3次，再用碳酸氢钠饱和溶液洗涤1次，最后用饱和氯化钠溶液洗涤一次；用无水硫酸钠干燥，蒸馏去除溶剂；硅胶柱层析分离纯化，用二氯甲烷/甲醇梯度洗脱(30∶1～10∶1)，合并产物组分，减压浓缩，去除溶剂，制得纯化合物I-n，得率77％。Red Powder Solid；M.p.276～282℃；Yield：75.7％；¹H NMR(600MHz，CDCl₃)：δ0.78(s，3H)，0.87(d，J＝7.26Hz，3H)，0.91(d，J＝8.22Hz，6H)，0.96(s，3H)，1.13(s，3H)，1.22(s，3H)，1.25(s，3H)，1.28～1.50(m，19H)，1.51～1.17(m，8H)，2.24(t，J＝7.38Hz，3H)，3.08(d，J＝16.44Hz，1H)，3.80(s，3H)，5.58(brs，1H)，5.65(s，1H)，9.03(t，J＝6.84Hz，1H)，9.18(d，J＝6.72Hz，1H)，10.19(s，1H)；¹³C NMR(151 MHz，CDCl₃)δ184.82，173.28，170.60，168.50，160.13，146.31，138.54，128.62，127.37，124.35，118.94，107.20，56.49，52.93，52.60，47.72，47.53，46.02，42.53，39.68，38.91，38.09，37.76，36.96，34.18，33.91，33.80，32.12，30.72，29.68，29.30，27.80，27.50，25.61，24.87，23.54，23.23，22.21，21.12，19.03，17.06，16.27，15.82，13.68；ESI-MS：calcd.forC₄₂H₅₈N₃O₅684.4376[M-H]^-，found 684.4380.

实施例15

熊果酸吲哚醌酰肼衍生物(I-o)的合成

将0.054g的实施例1中制备得到的化合物V用苯溶解，缓慢滴加50μL SOCl₂后逐渐升温至80℃，回流反应4h。当把润湿的pH试纸放到排气口处试纸不变红表示反应结束，减压浓缩，将反应液中的苯和SOCl₂蒸出，得到黄色油状的熊果酸吲哚醌酰氯。将熊果酸吲哚醌酰氯用6mL的乙醚溶解并在冰浴条件下缓慢滴加0.225mmol苯甲酰肼和30μL三乙胺的二氯甲烷溶液，缓慢升至室温并搅拌反应6h。反应结束后将反应液倒入冰水混合物中，待冰融化后用二氯甲烷萃取3次；合并有机相用水洗涤3次，再用碳酸氢钠饱和溶液洗涤1次，最后用饱和氯化钠溶液洗涤一次；用无水硫酸钠干燥，蒸馏去除溶剂；硅胶柱层析分离纯化，用二氯甲烷/甲醇梯度洗脱(30∶1～10∶1)，合并产物组分，减压浓缩，去除溶剂，制得纯化合物I-o，得率77％。

Red Powder Solid；M.p.287～293℃；Yield：74.8％；¹H NMR(600MHz，CDCl₃)：δ0.80(s，3H)，0.89(s，3H)，0.94(d，J＝5.94Hz，3H)，0.98(d，J＝5.22Hz，3H)，1.15(s，3H)，1.17(s，3H)，1.26(s，3H)，1.47～1.66(m，17H)，1.68～1.83(m，5H)，1.96(d，J＝13.68Hz，1H)，1.97～2.30(m，10H)，3.08(d，J＝16.5Hz，1H)，3.81(s，3H)，7.45(t，J＝7.68Hz，2H)，7.53(t，J＝7.44Hz，1H)，7.79(t，J＝7.98Hz，2H)，9.24(s，1H)，9.29(brs，1H)；¹³C NMR(151MHz，CDCl₃)δ184.84，177.90，174.89，165.65，162.60，145.24，138.95，137.30，132.34，131.19，129.49，127.00，124.97，124.64，113.15，106.56，77.22，77.01，76.80，56.54，53.96，49.73，47.92，46.11，42.45，39.95，39.41，38.94，36.57，35.69，33.36，32.55，31.19，30.00，28.97，28.24，27.97，25.18，23.89，22.05，21.14，19.81，18.56，17.89，16.26；ESI-MS：calcd.for C₄₄H₅₄N₃O₅704.4063[M-H]^-，found 704.4067.

实施例16

熊果酸吲哚醌酰肼衍生物(I-p)的合成

将0.054g的实施例1中制备得到的化合物V用苯溶解，缓慢滴加50μL SOCl₂后逐渐升温至80℃，回流反应4h。当把润湿的pH试纸放到排气口处试纸不变红表示反应结束，减压浓缩，将反应液中的苯和SOCl₂蒸出，得到黄色油状的熊果酸吲哚醌酰氯。将熊果酸吲哚醌酰氯用6mL的乙醚溶解并在冰浴条件下缓慢滴加0.225mmol对甲苯甲酰肼和30μL三乙胺的二氯甲烷溶液，缓慢升至室温并搅拌反应6h。反应结束后将反应液倒入冰水混合物中，待冰融化后用二氯甲烷萃取3次；合并有机相用水洗涤3次，再用碳酸氢钠饱和溶液洗涤1次，最后用饱和氯化钠溶液洗涤一次；用无水硫酸钠干燥，蒸馏去除溶剂；硅胶柱层析分离纯化，用二氯甲烷/甲醇梯度洗脱(30∶1～10∶1)，合并产物组分，减压浓缩，去除溶剂，制得纯化合物I-p，得率77％。

Red Powder Solid；M.p.293～299℃；Yield：72.4％；¹H NMR(600MHz，CDCl₃)：δ0.92(s，3H)，0.95(d，J＝6.48Hz，3H)，0.97(s，3H)，1.02(d，J＝6.42Hz，3H)，1.19(s，3H)，1.23(s，3H)，1.24(s，3H)，1.25(s，3H)，1.29～1.55(m，16H)，1.59～1.72(m，5H)，1.76(q，J＝5.7Hz，1H)，2.43(d，J＝11.28Hz，1H)，3.09(d，J＝16.44Hz，1H)，3.49(s，2H)，3.73(dd，J＝7.02，6.96Hz，2H)，3.80(s，3H)，5.29(s，2H)，5.47(t，J＝3.6Hz，1H)，5.64(s，1H)，5.47(t，J＝3.6Hz，1H)，7.35(d，J＝8.34Hz，1H)，7.39(t，J＝7.62Hz，1H)，7.50(t，J＝7.62Hz，1H)，8.07(d，J＝8.4Hz，1H)，9.80(s，1H)；¹³C NMR(151 MHz，CDCl₃)δ184.87，173.34，170.56，160.09，145.95，143.57，136.60，128.80，128.63，128.38，127.20，124.60，124.26，120.56，118.82，107.20，56.50，53.19，52.69，50.82，49.24，45.99，42.50，39.77，39.18，38.74，37.86，36.70，34.12，32.59，31.92，30.86，29.68，29.34，28.43，24.43，23.41，23.26，21.01，19.09，18.42，17.46，16.86，15.88；ESI-MS：calcd.for C₄₅H₅₆N₃O₅718.4220[M-H]^-，found 718.4223.

实施例17

熊果酸吲哚醌酰肼衍生物(I-q)的合成

将0.054g的实施例1中制备得到的化合物V用苯溶解，缓慢滴加50μL SOCl₂后逐渐升温至80℃，回流反应4h。当把润湿的pH试纸放到排气口处试纸不变红表示反应结束，减压浓缩，将反应液中的苯和SOCl₂蒸出，得到黄色油状的熊果酸吲哚醌酰氯。将熊果酸吲哚醌酰氯用6mL的乙醚溶解并在冰浴条件下缓慢滴加0.225mmol 3-吡啶甲酰肼和30μL三乙胺的二氯甲烷溶液，缓慢升至室温并搅拌反应6h。反应结束后将反应液倒入冰水混合物中，待冰融化后用二氯甲烷萃取3次；合并有机相用水洗涤3次，再用碳酸氢钠饱和溶液洗涤1次，最后用饱和氯化钠溶液洗涤一次；用无水硫酸钠干燥，蒸馏去除溶剂；硅胶柱层析分离纯化，用二氯甲烷/甲醇梯度洗脱(30∶1-10∶1)，合并产物组分，减压浓缩，去除溶剂，制得纯化合物I-q，得率77％。

Red Powder Solid；M.p.285～289℃；Yield；73.6％；¹H NMR(600MHz，CDCl₃)：δ0.81(s，3H)，0.90(s，3H)，0.94(d，J＝6.42Hz，3H)，0.99(d，J＝6Hz，3H)，1.15(s，3H)，1.19(s，3H)，1.28(s，3H)，1.36～1.65(m，12H)，1.66～1.80(m，6H)，1.94(d，J＝13.44Hz，1H)，2.07～2.30(m，7H)，3.08(d，J＝16.44Hz，1H)，3.80(s，3H)，7.41(s，1H)，8.14(t，J＝7.74Hz，1H)，8.76(s，1H)，9.04(s，1H)，9.21(s，1H)，9.53(s，1H)；¹³C NMR(151 MHz，CDCl₃)δ184.74，179.24，171.87，165.43，162.49，152.09，147.93，140.71，138.09，135.49，134.25，132.37，127.48，123.77，121.01，117.67，107.26，56.52，52.52，51.89，50.00，45.95，42.62，40.65，39.63，38.93，37.78，36.95，34.07，32.11，30.88，30.75，29.80，29.59，27.84，23.60，23.40，21.76，21.11，19.98，17.08，16.33，15.89；ESI-MS：calcd.forC₄₃H₅₃N₄O₅705.4016[M-H]^-，found 705.4021.

实施例18

体外抗肿瘤活性筛选

筛选细胞株为：

人宫颈癌细胞HeLa、乳腺癌细胞MCF-7和肝癌细胞Hep G2。

实验方法：

取对数生长期状态良好的细胞，胰蛋白酶消化，制成5×10⁴细胞/mL的悬液。将细胞悬液移入96孔培养板，每孔100μL，置37℃、5％CO₂条件下培养24h。

将受试衍生物用DMSO配制成一定浓度的母液，再用DMEM培养基或1640培养基将衍生物母液稀释成不同作用浓度的稀释液。移去旧培养基，加入不同浓度的含药无血清DMEM培养基或1640培养基，每孔100μL。另设空白对照组和阳性对照依托泊苷(VP-16)对照组。药物作用72h后，于每孔再加入MTT溶液(5mg/mL)10μL，继续温育4h。

吸去各孔内上清液，每孔加入DMSO 100μL，振荡5min，使结晶物充分溶解，酶标仪测定540nm处各孔的光吸收值(OD值)，计算细胞的增殖抑制率：抑制率(％)＝(1-用药组平均OD值/空白对照组平均OD值)×100％。应用SPSS16.0软件进行数据处理并计算癌细胞增殖的半数抑制浓度(IC₅₀)，结果见表1。表1为熊果酸吲哚醌酯、酰胺、酰肼衍生物对人宫颈癌细胞HeLa、乳腺癌细胞MCF-7和肝癌细胞Hep G2的体外增殖抑制作用结果。化合物I-a～I-q的抗肿瘤活性结果如表1所示：

表1.化合物I-a～I-q抗肿瘤活性结果

如表1所示，所合成的熊果酸吲哚醌酰胺衍生物对三种肿瘤细胞(HeLa、MCF-7和Hep G2)均表现出了不同程度的抑制作用，化合物I-b、I-c对三种肝癌细胞具有较强的细胞毒活性，化合物I-f、I-g、I-i、I-n也表现出了中等的抑制活性，而化合物I-h和I-j的抗肿瘤活性则相对较弱。其中，化合物I-b、I-c对HeLa和MCF-7细胞的IC₅₀值分别为4.25±0.34、2.62±0.07和2.84±0.27、1.09±0.26μM，比阳性对照依托泊苷的活性强。初步的构效关系分析表明，该系列化合物的醌基酯侧链结构对于抗肿瘤活性具有一定的影响。熊果酸吲哚醌基酯侧链结构(I-b、I-c)活性要优于酰胺、酰肼侧链的衍生物；而对于酰胺来说，含甲胺基、乙胺基和丙胺基的衍生物活性较好，而含有氨基、二甲胺基、二乙胺基、二丙胺基的衍生物活性则比较弱，如化合物I-f、I-g和I-h的活性要显著强于化合物I-e、I-i、I-j和I-k。对于酰肼来说，含乙酰肼、戊酸肼的衍生物活性较好，而含有丁酸肼、苯甲酰基、对甲苯甲酰基、3-吡啶甲酰肼基的衍生物活性则比较弱，如化合物I-l、I-n的活性要显著强于化合物I-m、I-o、I-p和I-q。对于测试的三种肿瘤细胞株，此类化合物对于人宫颈癌细胞HeLa、乳腺癌细胞MCF-7具有显著的抑制作用，而对肝癌细胞Hep G2抑制作用较差。以上结果表明此类化合物具有开发抗癌药物的潜力。

以上显示和描述了本发明的基本原理、主要特征和本发明的优点。本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下，本发明还会有各种变化和改进，本发明要求保护范围由所附的权利要求书、说明书及其等效物界定。

Claims

1.一种熊果酸吲哚醌基类衍生物，其特征在于，其结构通式如式(Ⅰ)所述：

式中，R基团为：

2.权利要求1所述的熊果酸吲哚醌基类衍生物的制备方法，其特征在于，通过熊果酸经过琼斯试剂氧化反应得到3-氧化熊果酸，然后与3,5-二甲氧基苯肼反应得到3,5-二甲氧基吲哚衍生物，再通过Vilsmeier-Haack甲酰化反应生成3,5-二甲氧基-2-醛基吲哚衍生物，然后进行氧化反应得到熊果酸吲哚醌衍生物，熊果酸吲哚醌衍生物的C-28位羧基再分别进行酯化反应、酰胺化反应得到相应的熊果酸吲哚醌基类衍生物。

3.根据权利要求2所述的熊果酸吲哚醌基类衍生物的制备方法，其特征在于，具体包括以下步骤：

(5)化合物V通过分别与不同的乙醇、异丙醇或甲胺分别进行酯化反应、酰胺化反应，得到熊果酸吲哚醌基类衍生物，具有通式(I)所示结构：

4.根据权利要求2或3所述的熊果酸吲哚醌基类衍生物的制备方法，其特征在于，3,5-二甲氧基吲哚衍生物的制备过程为：向3,5-二甲氧基苯胺的盐酸溶液中加入亚硝酸钠水溶液，冰浴条件下反应0.5～1.5h；反应结束后加入氯化亚锡的浓盐酸溶液，室温反应1.5～2.5h，得到固体3,5-二甲氧基苯肼；将3,5-二甲氧基苯肼加入到3-氧化熊果酸的无水乙醇溶液中，并加入浓盐酸，80～90℃下回流2.5～3.5h，反应结束后得到3,5-二甲氧基吲哚衍生物；所述的3,5-二甲氧基苯胺、亚硝酸钠、氯化亚锡的摩尔比为2～3:3～4:5～6，所述3,5-二甲氧基苯胺与3-氧化熊果酸的摩尔比为2～3:1。

5.根据权利要求2或3所述的熊果酸吲哚醌基类衍生物的制备方法，其特征在于，3,5-二甲氧基-2-醛基吲哚衍生物的合成过程为：将POCl₃加到冰水冷却后的DMF中反应0.5～1h，形成配位络合物，再加入3,5-二甲氧基吲哚衍生物，25～35℃搅拌反应2.5～3.5h生成中间体后，在冰水中水解1.5～2.5h，得到3,5-二甲氧基-2-醛基吲哚衍生物；所述的POCl₃、DMF、3,5-二甲氧基吲哚衍生物的摩尔比为7～8:9～10:4～5。

6.根据权利要求2或3所述的熊果酸吲哚醌基类衍生物的制备方法，其特征在于，所述酯化反应过程为：向3,5-二甲氧基-2-醛基吲哚衍生物的甲醇溶液中加入浓盐酸和30％H₂O₂，冰水浴条件下反应2.5～3.5h，反应结束后得到熊果酸吲哚醌衍生物；所述的30％H₂O₂、浓盐酸的体积比为3～4:50～55；将熊果酸吲哚醌衍生物溶解于苯中，然后加入SOCl₂后升温至75～85℃，回流反应4h，反应结束得到熊果酸吲哚醌酰氯；将熊果酸吲哚醌酰氯溶解于乙醚中，冰水浴条件下加入乙醇或异丙醇和三乙胺的二氯甲烷溶液；室温下反应6h，反应结束后得到熊果酸吲哚醌基酯衍生物；所述熊果酸吲哚醌衍生物、SOCl₂、乙醇或异丙醇和三乙胺的摩尔比为2～3:20～30:3～5:4～6。

7.根据权利要求2或3所述的熊果酸吲哚醌基类衍生物的制备方法，其特征在于，所述酰胺化反应过程为；将3,5-二甲氧基-2-醛基吲哚衍生物的甲醇溶液中加入浓盐酸和30％H₂O₂，冰水浴条件下反应2.5～3.5h，反应结束后得到熊果酸吲哚醌衍生物；所述的30％H₂O₂：浓盐酸的体积比为3～4:50～55；将熊果酸吲哚醌衍生物溶于二氯甲烷，然后加入HOBt和DCC，室温下反应30～40min；然后加入甲胺，室温反应过夜，反应结束后得到熊果酸吲哚醌基酰胺衍生物；所述熊果酸吲哚醌衍生物、HOBt、DCC与不同的胺的摩尔比为4～5:6～7:6～7:7～8。

8.权利要求1所述的熊果酸吲哚醌基类衍生物在制备抗癌症药物中的应用，其特征在于，所述癌症为宫颈癌或乳腺癌。