CN113248543A - 组蛋白去甲基化酶lsd1的酶活检测体系、检测方法及应用 - Google Patents

组蛋白去甲基化酶lsd1的酶活检测体系、检测方法及应用 Download PDF

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Abstract

本发明提供了组蛋白去甲基化酶LSD1的酶活检测体系、检测方法及应用，包括过氧化氢荧光探针、LSD1的作用底物、黄素腺嘌呤二核苷酸或黄素腺嘌呤二核苷酸二钠盐，检测体系中过氧化氢荧光探针的浓度为3‑7μM，黄素腺嘌呤二核苷酸的浓度为3‑7μM，LSD1的作用底物的浓度为20‑30μM，荧光探针可以选择性地与组蛋白去甲基化酶作用后产生的副产物作用，生成一种具有荧光的物质，本发明解决了LSD1的酶活检测和抑制剂筛选过程中成本高和可重复性差，通量低，难以进行高通量药物筛选等诸多问题。

Description

组蛋白去甲基化酶LSD1的酶活检测体系、检测方法及应用
技术领域
本发明属于生物技术检测领域，尤其是涉及组蛋白去甲基化酶LSD1的酶活检测体系、检测方法及应用。
背景技术
表观遗传学是20世纪九十年代以来迅速兴起的科学。表观遗传是细胞在不改变DNA碱基序列的前提下改变了基因表达水平。真核细胞染色体由组蛋白与缠绕其上的DNA组成。组蛋白是真核细胞中富含精氨酸、赖氨酸等碱性氨基酸残基的一种碱性蛋白质，它可与DNA分子之间紧密结合，对维持遗传物质的稳定存在发挥了至关重要的作用。同时，细胞对组蛋白上残基所进行的特定修饰作用也对基因的表达水平起到调控作用。
组蛋白上残基的修饰方式包括甲基化、乙酰化、泛素化以及SUMO化等。细胞通过对组蛋白进行这一系列的修饰，改变了基因的表达水平。它实现了细胞生命活动中的动态调节，在细胞生长周期、DNA损伤修复以及代谢水平调节等诸多过程中发挥了非常重要的调节作用。
组蛋白甲基化修饰是一种常见且重要的表观遗传学现象，它在细胞分裂分化、细胞衰老、DNA损伤修复、癌细胞产生发展等生理过程中发挥重要的作用。组蛋白甲基化修饰主要发生在组蛋白赖氨酸和精氨酸残基上，最新也发现可发生在组氨酸和谷氨酰胺残基上。其中对赖氨酸和精氨酸甲基化修饰的产物较为稳定，因而成为生物体内最常见的甲基化修饰位点并承担重要的作用。如H3K4、H3K36和H3K79位点上的三甲基化修饰可作为促进基因表达的生物信号，同时与之形成对比的是H3K9me3、H3K27me3、H4K20me2等位点的甲基化修饰可抑制基因的表达。同样，即使组蛋白上甲基化修饰的位点相同，在甲基化修饰程度不同的情况下所带来的表观遗传效应也存在差异，这就使得生命体细胞可以对繁杂的代谢活动进行有序调节，使得其调控基因表达的方式上更具多样性。
组蛋白甲基化修饰受组蛋白甲基化酶和去甲基化酶协同调控。LSD1是最早发现的组蛋白去甲基化酶，具有与多胺氧化酶具有相似结构。LSD1在细胞分化，细胞增殖、转移扩散等多种生命过程中发挥重要的功能。已知乳腺癌、肝癌、肺癌、膀胱癌和前列腺癌等多种癌细胞中检测到LSD1的过量表达或激活的现象，因此LSD1酶活检测及抑制剂研究具有非常广阔的应用前景。
目前LSD1活性检测方法大致分为两种，一种是利用抗原抗体作用，直接检测一定时间内生成物的含量来测定酶活力；另一种则是通过测定一定时间内去甲基作用过程中产生副产物的量来间接反映酶活力的强弱。
第一种检测方法是利用抗原抗体检测方法。利用抗体与去除甲基后的多肽结合，最终通过测定吸光度或者荧光的方法确定产生结合作用的抗体总量，进而确定出一定时间内LSD1的作用效果。这种检测方法灵敏性高，可实现精确度较高的定量检测。然而实验者需要使用两种特异性抗体才能实施整个实验过程，实验成本较高。同时，在整个实验过程中还需经过多步清洗过程，步骤繁琐，耗时较长。不利于LSD1抑制剂药物的高通量筛选过程。
第二种检测方法是通过检测去甲基化作用过程中的副产物来间接反映酶活力的强弱。LSD1在去甲基化作用过程中会产生两种副产物：甲醛和过氧化氢。因此，这两种产物的产生速率也反映了酶活力的强弱。通过检测甲醛以计算LSD1酶活力的检测方法是最早应用于LSD1酶活检测过程中，LSD1的组蛋白去甲基化酶的发现者施扬教授就是通过这一检测方法确定了LSD1的去甲基化作用。随后多篇文献报道中，研究者均通过这一方法，通过这种检测试剂盒来测试LSD1酶活力及LSD1抑制剂的抑制作用，具有较为广泛的应用。然而甲醛具有较强的还原性，易被外界氧化剂如氧气等氧化从而影响检测结果。同理，该检测方式也会在具有氧化性的抑制剂的检测过程中出现偏差，会对药物的高通量筛选过程产生影响。
另外一种副产物检测方法是通过检测过氧化氢的生成以计算出LSD1蛋白去甲基化酶的活力。采用这一方法检测LSD1去甲基化酶活性的试剂盒较多，如鲁米诺、安替比林、荧光红等。这些检测方法有较为明显的缺点，不利于应用于抑制剂药物的高通量筛选过程中，如鲁米诺检测方法灵敏度高，能产生肉眼可见的荧光，但是荧光持续时间很短，不利于后续的检测；安替比林检测方法灵敏度较低；荧光红检测方法则存在荧光染料不稳定，容易被氧化的问题，容易对检测结果造成较大干扰，产生假阳性结果。而且当产生的过氧化氢过量时，荧光红染料会被继续氧化为一种无荧光的物质，最终导致体系荧光数值降低，检测系统可靠性下降。
发明内容
有鉴于此，本发明旨在提出组蛋白去甲基化酶LSD1的酶活检测体系、检测方法及应用，其具有稳定性好、灵敏度高、操作简便、检测成本低等特性，适用于药物高通量筛选的需要，以克服现有技术的缺陷。
为达到上述目的，本发明的技术方案是这样实现的：
过氧化氢荧光探针，过氧化氢荧光探针的结构式为：
Figure BDA0002997230800000031
优选的，过氧化氢荧光探针在组蛋白去甲基化酶LSD1酶活检测体系、去甲基化酶抑制剂筛选和高通量药物筛选中的应用。
在去甲基化酶LSD1抑制剂筛选方向的应用，该检测体系为LSD1抑制剂筛选过程提供了一种行之有效的检测方法。在将抑制剂与LSD1相互结合后，通过该检测体系的检测即可得到该抑制剂化合物对LSD1的抑制作用。
本发明除了在抑制剂筛选中具有广泛的应用价值外，在高通量药物筛选方面仍具有较好的应用价值。本发明所述过氧化氢荧光探针与过氧化氢的反应产物具有较好的稳定性，因此可以提供较长的检测分析时间。同时借助微孔板即可实现多种抑制剂化合物的同时检测筛选过程，实现了组蛋白去甲基化酶LSD1抑制剂的高通量筛选。
本发明的另一目的在于提供组蛋白去甲基化酶LSD1的酶活检测体系，检测体系包括过氧化氢荧光探针、黄素腺嘌呤二核苷酸或者黄素腺嘌呤二核苷酸二钠盐和LSD1的作用底物，检测体系中过氧化氢荧光探针的浓度为3-7μM，黄素腺嘌呤二核苷酸的浓度为3-7μM，LSD1的作用底物的浓度为20-30μM，检测体系的pH值为6.5-8.5，酶活检测体系用于浓度为5-50μM的二甲基修饰的小肽H3K4me2的测试；
优选地，过氧化氢荧光探针的浓度为5μM，黄素腺嘌呤二核苷酸的浓度为5μM，LSD1的作用底物的浓度为25μM。
作为优选地，所述LSD1的作用底物为二甲基修饰的小肽H3K4me2。
作为优选地，所述二甲基修饰的小肽H3K4me2组蛋白H3上的氨基酸序列为ARTK(Me2)QTARKSTGGKAPRKQLA。
作为优选地，所述LSD1的酶活检测体系还包括缓冲溶液和组蛋白去甲基化酶LSD1。
作为优选地，所述缓冲溶液为NaH2PO4，NaH2PO4的浓度为40-60mM，去甲基化酶LSD1的浓度为1-3μM；
优选地，NaH2PO4的浓度为50mM，去甲基化酶LSD1的浓度为2μM。
本发明的第三目的在于提供组蛋白去甲基化酶LSD1的酶活检测方法，包括如下步骤：
a)取用PBS缓冲溶液加入到96孔黑孔板中，加入LSD1蛋白溶液和抑制剂溶液，将黑孔板于37℃下避光孵育1-1.5h；
b)步骤a)中的反应终止之后，随后加入过氧化氢荧光探针溶液和二甲基修饰的小肽H3K4me2溶液，将黑孔板于37℃下避光孵育1-1.5h；
c)在激发光420-480nm，发射光520-580nm处检测荧光强度；
步骤a)中的反应和步骤b)中的反应可同时进行。
作为优选地，组蛋白去甲基化酶LSD1的酶活检测方法还包括预先做出标准曲线的步骤。
进一步的，所述抑制剂为反苯环丙胺、白藜芦醇中的一种，抑制剂的浓度为40-60μM；
优选地，抑制剂的浓度为50μM。
相对于现有技术，本发明的有益效果为：
1、本发明所述的组蛋白去甲基化酶LSD1的酶活检测方法及应用，采用的过氧化氢探针稳定性高，不易被氧化；
2、本发明所述的组蛋白去甲基化酶LSD1的酶活检测方法及应用，荧光探针可以选择性地与组蛋白去甲基化酶作用后产生的副产物作用，生成一种具有荧光的物质。过氧化氢检测探针在被过氧化氢氧化后，其氧化产物不会继续发生反应，荧光强度与过氧化氢浓度之间线性相关性始终保持不变；
3、本发明所述的组蛋白去甲基化酶LSD1的酶活检测方法及应用，该检测体系中没有酶成分，避免了酶在储存过程中活性变化引起的重复性差及检测不准确的问题；
4、本发明所述的组蛋白去甲基化酶LSD1的酶活检测方法及应用，探针与过氧化氢的反应产物温度稳定性和光稳定性较好，可保证足够的时间用于持续检测分析。
附图说明
构成本发明的一部分的附图用来提供对本发明的进一步理解，本发明的示意性实施例及其说明用于解释本发明，并不构成对本发明的不当限定。在附图中：
图1为本发明所述LSD1酶活检测体系的原理示例图；
图2为本发明所述的过氧化氢探针加入过氧化氢前后荧光强度对比图；
图3为本发明所述的过氧化氢探针探针与过氧化氢反应产物的温度稳定性实验结果图；
图4为本发明所述的过氧化氢探针探针与过氧化氢反应产物的光稳定性实验结果图；
图5为本发明所述过氧化氢探针荧光强度与过氧化氢浓度线性关系图；
图6为荧光红染料检测法荧光强度与过氧化氢加入比例关系图；
图7为本发明所述荧光探针的荧光强度与过氧化氢加入比例关系图；
图8为荧光红染料检测法荧光强度与过氧化物酶冻融次数关系图；
图9为本发明所述的过氧化氢探针荧光强度与浓度关系图；
图10为本发明所述的过氧化氢探针荧光强度与时间关系图；
图11为本发明所述的酶活检测体系加入小肽前后的检测效果对比图；
图12为本发明所述的过氧化氢探针荧光强度与小肽浓度关系图；
图13为本发明所述的酶活检测体系加入抑制剂前后的检测效果对比图；
图14为本发明所述的去甲基化酶LSD1去甲基化过程的原理图；
图15为本发明所述的荧光红染料与过氧化氢发生氧化的原理图；
图16为本发明所述的过氧化氢荧光探针与过氧化氢发生氧化的原理图。
具体实施方式
除有定义外，以下实施例中所用的技术术语具有与本发明所属领域技术人员普遍理解的相同含义。以下实施例中所用的实验试剂，如无特殊说明，均为常规生化试剂；所述实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。
下面将参考附图并结合实施例来详细说明本发明，但不限定本发明。
本发明实施例中使用的试剂说明如下：
在本文中所使用的“FAD”，是黄素腺嘌呤二核苷酸(Flavin AdenineDinucleotide)的缩写。它在LSD1发挥去甲基化作用过程中起到了非常重要的辅助作用。
在本文中所使用的“HEPES”，是4-羟乙基哌嗪乙磺酸(2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid)的缩写。它是一种pH缓冲剂，它的存在能够使反应体系在较长时间保持酸碱度的相对恒定。
在本文中所使用的“HEPES”，是4-羟乙基哌嗪乙磺酸(2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid)的缩写。它是一种pH缓冲剂，它的存在能够使反应体系在较长时间保持酸碱度的相对恒定。
在本文中所使用的“HRP”，是辣根过氧化物酶(Horseradish Peroxidase)的缩写。它在荧光红染料检测法中起到催化作用，可在过氧化氢的共同参与下将荧光红染料催化氧化为一种荧光物质。
在本文中所使用的“AR”，是荧光红染料(Amplex Red)的缩写。它在荧光红染料检测法中起到荧光底物作用，其本身不产生荧光，但可在过氧化氢和过氧化物酶的共同参与下被催化氧化为一种荧光物质。
在本文中所使用的“TCP”，反苯环丙胺(Tranylcypromine)的缩写，它是一种常见的LSD1抑制剂。
在本文中所使用的“酶活”，定义为单位时间内(lmin)单位浓度的酶(μM)转化生成产物的量。就本次的酶活检测体系而言，指单位时间内(l min)单位浓度的LSD1组蛋白去甲基化酶(μM)在单位时间内转化生成过氧化氢的量。
缓冲溶液的配制：
PBS缓冲液配制方法：称量7.8g NaH2PO4·2H2O固体加水溶解，随后使用饱和NaOH溶液调节pH至6.0-9.0，定容至1000mL，4℃保存；
HEPES缓冲液配制方法：取HEPES先加水溶解，再加入氢氧化钠溶液调节至6.0-9.0，定容至1000mL，4℃保存；
过氧化氢荧光探针储液配制：取1mg过氧化氢荧光探针化合物，加入DMSO溶解。调节DMSO的加入量使得过氧化氢荧光探针储液的浓度达到10mM，分装至多个PCR管中避光-30℃保存；
LSD1抑制剂TCP储液配制：取少量过氧化氢荧光探针化合物，加入DMSO溶解。调节DMSO的加入量使得LSD1抑制剂中过氧化氢荧光探针浓度达到10mM，分装至多个PCR管中避光-30℃保存；
FAD储液配制：取1mg FAD，加入超纯水进行溶解，调节超纯水的加入量使得FAD储液的浓度达到10mM，分装至多个PCR管中避光-30℃保存；
二甲基修饰的小肽储液配制：取少量H3K4me2小肽(H3K4me2小肽购买自生工生物工程(上海)股份有限公司)，加入超纯水进行溶解，调节超纯水加入量使得二甲基修饰的小肽储液的浓度达到10mM，分装至多个PCR管中避光-30℃保存。
实施例1
S1、取过氧化氢荧光探针储液于96孔黑孔板中，再加入缓冲溶液PBS和过氧化氢溶液，过氧化氢荧光探针浓度为10μM，体系内过氧化氢荧光探针终浓度分别为0μM、5μM和50μM，使用TECAN SPARK多功能微孔检测仪在激发光420-480nm，发射光520-580nm处检测荧光强度，结果见图2，说明加入较多过氧化氢，荧光强度更高。
S2、向PBS缓冲溶液中加入一定量的荧光探针溶液和过氧化氢溶液，使探针和过氧化氢终浓度均为10μM。随后将反应体系置于37℃条件下避光保存，间隔一定时间取样，将所取样品在激发光420-480nm，发射光520-580nm处检测荧光强度，检测结果见图3，从图3可以看出荧光探针与过氧化氢反应产物在37℃条件下荧光强度变化较小。这表明其反应产物在37℃条件具有较好的稳定性，有利于后续的检测分析过程。
实施例2
实施例2与实施例1的实施方式基本相同，不同之处在于：向PBS缓冲溶液中加入一定量的过氧化氢荧光探针溶液和过氧化氢溶液，使过氧化氢荧光探针和过氧化氢终浓度均为10μM。随后将反应体系置于室温下日光灯照射，间隔一定时间取样。将所取样品在激发光420-480nm，发射光520-580nm处检测荧光强度，结果见图4，从图4可以看出过氧化氢荧光探针与过氧化氢反应产物在室温光照条件下荧光强度变化较小。这表明其反应产物在室温下具有较好的光稳定性，可有利于对所需样品进行持续荧光检测。
实施例3
用PBS缓冲溶液配置一系列过氧化氢溶液于96孔黑孔板中，分别加PBS缓冲溶液，过氧化氢荧光探针溶液及过氧化氢溶液，使过氧化氢荧光探针终浓度分别为0.125、0.625、3.125、6.25、12.5和25.0μM。在激发光420-480nm，发射光520-580nm处检测荧光强度，并以过氧化氢浓度为横坐标，荧光强度为纵坐标做图，结果见图5，表明在过氧化氢荧光探针检测体系中，体系整体的荧光强度与过氧化氢浓度呈现较好的线性相关性。
实施例4
用HEPES缓冲溶液配置一系列过氧化氢溶液于96孔黑孔板中，分别加HEPES缓冲溶液，荧光红染料溶液、过氧化物酶溶液及过氧化氢溶液，使过氧化氢与荧光探针终浓度比例分别为0、0.2、0.4、0.6、0.8、1、1.2、1.4、1.6、1.8、2。在激发光530nm，发射光590nm处检测荧光强度，并以过氧化氢浓度为横坐标，荧光强度为纵坐标做图，从图6可以看出，随着过氧化氢与荧光红染料比例数值的不断增加，当该数值大于1(即过氧化氢浓度高于荧光红染料)时检测体系的荧光强度与该比例之间的线性相关关系发生明显改变，这表现出荧光红染料检测范围较窄，在高浓度底物存在下可靠性明显降低。
实施例6
用PBS缓冲溶液配置一系列过氧化氢溶液于96孔黑孔板中，分别加PBS缓冲溶液，过氧化氢荧光探针溶液及过氧化氢溶液，使过氧化氢与过氧化氢荧光探针终浓度比例分别为0、0.2、0.4、0.6、0.8、1、1.2、1.4、1.6、1.8、2。在激发光420-480nm，发射光520-580nm处检测荧光强度，并以过氧化氢浓度为横坐标，荧光强度为纵坐标做图，结果见图7，从图7可以看出，随着过氧化氢与荧光探针比例数值的不断增加，检测体系的荧光强度与该比例之间的线性相关关系始终不变，这表现出该荧光探针具有更加宽的检测范围，可在高浓度底物存在下仍能保持较高的可靠性。
实施例7
使用HEPES缓冲溶液配制1U/mL的HRP溶液，将该溶液在-30度和常温环境下反复冻融。取用HEPES缓冲溶液于96孔黑孔板中，分别加入所取样品HRP溶液、荧光红染料溶液、过氧化氢溶液，使HRP、荧光红染料、过氧化氢的浓度分别是0.05U/mL、10μM、10μM。随后将黑孔板在激发光530nm，发射光590nm处检测荧光强度，结果见图8，从图8可以看出，反应体系的荧光强度随HRP冻融次数的增加而出现明显降低。这表明过氧化物酶(HRP)在多次冻融后，催化效率出现明显降低，这使得酶活检测体系的重复性受到较大影响。因此，物理化学性质稳定、重复性高的检测体系在酶活检测中具有非常重要的作用。
实施例8
取用PBS缓冲溶液于96孔黑孔板中，加入过氧化氢荧光探针溶液、LSD1蛋白溶液和二甲基修饰的小肽溶液，使过氧化氢荧光探针终浓度在0-8μM之间设置多个浓度。将黑孔板于37℃下避光放置1-1.5h后在激发光420-480nm，发射光520-580nm处检测荧光强度，结果见图9，从图9可以看出，,在荧光探针检测体系中，体系中荧光强度与过氧化氢荧光探针浓度呈现出较强的相关关系。
实施例9
取用PBS缓冲溶液于96孔黑孔板中，加入过氧化氢荧光探针溶液、LSD1蛋白溶液和二甲基修饰的小肽溶液。将黑孔板于37℃下避光放置1-1.5h后持续在激发光420-480nm，发射光520-580nm处检测荧光强度，研究荧光强度与时间的关系，结果见图10，从图10可以看出，在荧光探针检测体系中，延长孵育时间后体系的荧光强度增强。因此在抑制剂筛选检测过程中需控制孵育时间。
实施例10
取用PBS缓冲溶液于96孔黑孔板中，加入过氧化氢荧光探针溶液、LSD1蛋白溶液和二甲基修饰的小肽溶液，使小肽终浓度分别为0μM和10μM。将黑孔板于37℃下避光放置1-1.5h后在激发光420-480nm，发射光520-580nm处检测荧光强度，结果见图11，从图11可以看出，体系内荧光强度与底物浓度相关，底物终浓度越高，体系内荧光强度越高。
实施例11
取用PBS缓冲溶液于96孔黑孔板中，加入LSD1蛋白溶液。随后加入过氧化氢荧光探针溶液和二甲基修饰的小肽溶液，使二甲基修饰的小肽终浓度在0-50μM之间设置多个浓度梯度。将黑孔板于37℃下避光放置1-1.5h后在激发光420-480nm，发射光520-580nm处检测荧光强度，结果见图12，从图12可以看出体系内荧光强度与底物浓度具有非常好的线性相关关系，底物终浓度越高，体系内荧光强度越高。本荧光检测体系可以适用于LSD1的酶活检测实验中。
实施例12
取用PBS缓冲溶液于96孔黑孔板中，加入LSD1蛋白溶液和LSD1抑制剂TCP溶液，将黑孔板于37℃下避光放置1-1.5h。随后加入过氧化氢荧光探针溶液和二甲基修饰的小肽溶液。将黑孔板于37℃下避光放置1-1.5h后在激发光420-480nm，发射光520-580nm处检测荧光强度，结果见图13，从图13可以看出该检测体系具有较好的检测作用，能将检测出抑制剂对LSD1蛋白去甲基化过程的抑制作用。
对比例
采用荧光红染料检测法进行检测，按照表1将所需试剂加入到黑色96孔板中，最后加入荧光染料Amplex Red使用移液器反复吹吸混合。最后在室温下避光孵育15min，将黑色96孔板迅速放在TECAN SPARK微孔检测器中设置好检测波长及时间参数进行连续检测。当在微孔检测仪检测器上看到荧光强度曲线平稳后即可停止检测，将检测数据导出作图。最后将黑色96孔板从检测仪上取出用超纯水冲洗多次晾干备用。
表1荧光红染料检测法的检测体系
试剂名称 终浓度
AmplexRed 100μM
HRP 2×10<sup>-3</sup>U/mL
LSD1(mM) 5μM
FAD(mM) 50μM
H3K4me2(nM) 25μM
TCP 50μM
本发明的原理：去甲基化酶LSD1在去甲基化修饰过程中会释放出过氧化氢作为副产物，没有荧光性质的荧光探针可以特异性地被过氧化氢氧化为一种具有荧光性质的化合物，反应原理见图14。
荧光红染料遇到过量过氧化氢时会发生过度氧化，其过氧化的产物不具有荧光。因此会使体系内荧光强度降低，因此荧光强度与底物加入量相关性降低，反应原理见图15。
过氧化氢荧光探针遇到过量过氧化氢时不会发生过度氧化，因此会使体系内荧光强度不会出现降低，仍能保持较好的相关性，反应原理见图16。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.过氧化氢荧光探针，其特征在于：过氧化氢荧光探针的结构式为：
Figure FDA0002997230790000011
2.根据权利要求1所述的过氧化氢荧光探针，其特征在于：所述过氧化氢荧光探针在组蛋白去甲基化酶LSD1酶活检测体系、去甲基化酶抑制剂筛选和高通量药物筛选中的应用。
3.组蛋白去甲基化酶LSD1的酶活检测体系，其特征在于：包括过氧化氢荧光探针、LSD1的作用底物、黄素腺嘌呤二核苷酸或黄素腺嘌呤二核苷酸二钠盐，检测体系中过氧化氢荧光探针的浓度为3-7μM，黄素腺嘌呤二核苷酸的浓度为3-7μM，LSD1的作用底物的浓度为5-50μM，检测体系的pH值为6.5-8.5；
优选地，过氧化氢荧光探针的浓度为5μM，黄素腺嘌呤二核苷酸或黄素腺嘌呤二核苷酸二钠盐的浓度为5μM，LSD1的作用底物的浓度为25μM。
4.根据权利要求3所述的组蛋白去甲基化酶LSD1的酶活检测体系，其特征在于：所述LSD1的作用底物为二甲基修饰的小肽H3K4me2。
5.根据权利要求4所述的组蛋白去甲基化酶LSD1的酶活检测体系，其特征在于：所述二甲基修饰的小肽H3K4me2组蛋白H3上的氨基酸序列为ARTK(Me2)QTARKSTGGKAPRKQLA。
6.根据权利要求3所述的组蛋白去甲基化酶LSD1的酶活检测体系，其特征在于：所述LSD1的酶活检测体系还包括缓冲溶液和组蛋白去甲基化酶LSD1。
7.根据权利要求6所述的组蛋白去甲基化酶LSD1的酶活检测体系，其特征在于：所述缓冲溶液为NaH2PO4，NaH2PO4的浓度为40-60mM，去甲基化酶LSD1的浓度为1-3μM；
优选地，NaH2PO4的浓度为50mM，去甲基化酶LSD1的浓度为2μM。
8.组蛋白去甲基化酶LSD1的酶活检测方法，其特征在于：包括如下步骤：
a)取用PBS缓冲溶液加入到96孔黑孔板中，加入LSD1蛋白溶液和抑制剂溶液，将黑孔板于37℃下避光孵育1-1.5h；
b)步骤a)中的反应终止之后，随后加入过氧化氢荧光探针溶液和二甲基修饰的小肽H3K4me2溶液，将黑孔板于37℃下避光孵育1-1.5h；
c)在激发光420-480nm，发射光520-580nm处检测荧光强度；
步骤a)中的反应和步骤b)中的反应可同时进行。
9.根据权利要求8所述的组蛋白去甲基化酶LSD1的酶活检测方法，其特征在于：组蛋白去甲基化酶LSD1的酶活检测方法还包括预先做出标准曲线的步骤。
10.根据权利要求8所述的组蛋白去甲基化酶LSD1的酶活检测方法，其特征在于：所述抑制剂为反苯环丙胺、白藜芦醇中的一种，抑制剂的浓度为40-60μM，优选地，抑制剂的浓度为50μM。
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