CN113227377B - 与黄热病病毒ediii特异性结合的dna适体及其用途 - Google Patents
与黄热病病毒ediii特异性结合的dna适体及其用途 Download PDFInfo
- Publication number
- CN113227377B CN113227377B CN201980083915.4A CN201980083915A CN113227377B CN 113227377 B CN113227377 B CN 113227377B CN 201980083915 A CN201980083915 A CN 201980083915A CN 113227377 B CN113227377 B CN 113227377B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- yellow fever
- ediii
- yfv
- dna aptamer
- diagnosing
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 241000710772 Yellow fever virus Species 0.000 title claims abstract description 113
- 108091008102 DNA aptamers Proteins 0.000 title claims abstract description 58
- 229940051021 yellow-fever virus Drugs 0.000 title claims abstract description 26
- 208000003152 Yellow Fever Diseases 0.000 claims abstract description 42
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 20
- 239000000758 substrate Substances 0.000 claims description 18
- 239000010931 gold Substances 0.000 claims description 13
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 claims description 10
- 108010003533 Viral Envelope Proteins Proteins 0.000 claims description 9
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims description 9
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims description 9
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 claims description 6
- 239000002184 metal Substances 0.000 claims description 6
- 239000002082 metal nanoparticle Substances 0.000 claims description 3
- 230000027455 binding Effects 0.000 abstract description 27
- 238000000034 method Methods 0.000 abstract description 27
- 101710091045 Envelope protein Proteins 0.000 abstract description 7
- 101710188315 Protein X Proteins 0.000 abstract description 7
- 102100021696 Syncytin-1 Human genes 0.000 abstract description 7
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 abstract description 5
- 239000000101 novel biomarker Substances 0.000 abstract description 4
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 abstract description 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 42
- 108091023037 Aptamer Proteins 0.000 description 38
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 37
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 29
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 27
- 108020004682 Single-Stranded DNA Proteins 0.000 description 26
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 25
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 21
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 16
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 14
- 239000002096 quantum dot Substances 0.000 description 13
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical group N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 12
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 12
- RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N imidazole Natural products C1=CNC=N1 RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 9
- 239000000463 material Substances 0.000 description 9
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 9
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 8
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 8
- WUPHOULIZUERAE-UHFFFAOYSA-N 3-(oxolan-2-yl)propanoic acid Chemical compound OC(=O)CCC1CCCO1 WUPHOULIZUERAE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 7
- 229910052980 cadmium sulfide Inorganic materials 0.000 description 7
- -1 external use Substances 0.000 description 7
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 7
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 6
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 6
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 6
- 239000012148 binding buffer Substances 0.000 description 6
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 6
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 6
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 6
- 241000710831 Flavivirus Species 0.000 description 5
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 5
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 5
- 238000011160 research Methods 0.000 description 5
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 5
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- GRYLNZFGIOXLOG-UHFFFAOYSA-N Nitric acid Chemical compound O[N+]([O-])=O GRYLNZFGIOXLOG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 4
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 4
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 4
- 229910017604 nitric acid Inorganic materials 0.000 description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- BZTDTCNHAFUJOG-UHFFFAOYSA-N 6-carboxyfluorescein Chemical compound C12=CC=C(O)C=C2OC2=CC(O)=CC=C2C11OC(=O)C2=CC=C(C(=O)O)C=C21 BZTDTCNHAFUJOG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 3
- 102000018697 Membrane Proteins Human genes 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 3
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 3
- 230000009260 cross reactivity Effects 0.000 description 3
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 3
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 3
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 3
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 3
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 3
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 3
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 3
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 3
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108090000565 Capsid Proteins Proteins 0.000 description 2
- 102100023321 Ceruloplasmin Human genes 0.000 description 2
- 208000001490 Dengue Diseases 0.000 description 2
- 206010012310 Dengue fever Diseases 0.000 description 2
- 241000710781 Flaviviridae Species 0.000 description 2
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000031705 Neglected disease Diseases 0.000 description 2
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 2
- 238000012408 PCR amplification Methods 0.000 description 2
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 2
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 2
- 206010037660 Pyrexia Diseases 0.000 description 2
- 108010090804 Streptavidin Proteins 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108070000030 Viral receptors Proteins 0.000 description 2
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 2
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 2
- 229910052797 bismuth Inorganic materials 0.000 description 2
- JCXGWMGPZLAOME-UHFFFAOYSA-N bismuth atom Chemical compound [Bi] JCXGWMGPZLAOME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 2
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 2
- 235000010980 cellulose Nutrition 0.000 description 2
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 2
- 230000037029 cross reaction Effects 0.000 description 2
- 208000025729 dengue disease Diseases 0.000 description 2
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 2
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 230000005684 electric field Effects 0.000 description 2
- 239000012149 elution buffer Substances 0.000 description 2
- 238000005558 fluorometry Methods 0.000 description 2
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 2
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 2
- HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L magnesium stearate Chemical compound [Mg+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 239000002105 nanoparticle Substances 0.000 description 2
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 2
- 239000000123 paper Substances 0.000 description 2
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 2
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 2
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 238000003950 stripping voltammetry Methods 0.000 description 2
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 2
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 2
- 208000037972 tropical disease Diseases 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- NWUYHJFMYQTDRP-UHFFFAOYSA-N 1,2-bis(ethenyl)benzene;1-ethenyl-2-ethylbenzene;styrene Chemical compound C=CC1=CC=CC=C1.CCC1=CC=CC=C1C=C.C=CC1=CC=CC=C1C=C NWUYHJFMYQTDRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FMYBFLOWKQRBST-UHFFFAOYSA-N 2-[bis(carboxymethyl)amino]acetic acid;nickel Chemical compound [Ni].OC(=O)CN(CC(O)=O)CC(O)=O FMYBFLOWKQRBST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 1
- FHVDTGUDJYJELY-UHFFFAOYSA-N 6-{[2-carboxy-4,5-dihydroxy-6-(phosphanyloxy)oxan-3-yl]oxy}-4,5-dihydroxy-3-phosphanyloxane-2-carboxylic acid Chemical compound O1C(C(O)=O)C(P)C(O)C(O)C1OC1C(C(O)=O)OC(OP)C(O)C1O FHVDTGUDJYJELY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000220479 Acacia Species 0.000 description 1
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- 108090001008 Avidin Proteins 0.000 description 1
- 102000004506 Blood Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010017384 Blood Proteins Proteins 0.000 description 1
- 229920002134 Carboxymethyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 1
- 235000005956 Cosmos caudatus Nutrition 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- 102000012410 DNA Ligases Human genes 0.000 description 1
- 108010061982 DNA Ligases Proteins 0.000 description 1
- 230000004544 DNA amplification Effects 0.000 description 1
- 208000005156 Dehydration Diseases 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- 238000009007 Diagnostic Kit Methods 0.000 description 1
- 241000255925 Diptera Species 0.000 description 1
- 208000000059 Dyspnea Diseases 0.000 description 1
- 206010013975 Dyspnoeas Diseases 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 239000004386 Erythritol Substances 0.000 description 1
- UNXHWFMMPAWVPI-UHFFFAOYSA-N Erythritol Natural products OCC(O)C(O)CO UNXHWFMMPAWVPI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004606 Fillers/Extenders Substances 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 206010061192 Haemorrhagic fever Diseases 0.000 description 1
- 206010019233 Headaches Diseases 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- 235000010643 Leucaena leucocephala Nutrition 0.000 description 1
- 241000408529 Libra Species 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- 229920000168 Microcrystalline cellulose Polymers 0.000 description 1
- 208000000112 Myalgia Diseases 0.000 description 1
- 206010028813 Nausea Diseases 0.000 description 1
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 description 1
- 239000004677 Nylon Substances 0.000 description 1
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 1
- 239000004698 Polyethylene Substances 0.000 description 1
- 239000004743 Polypropylene Substances 0.000 description 1
- 206010036790 Productive cough Diseases 0.000 description 1
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 1
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 1
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 1
- 238000012300 Sequence Analysis Methods 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- 206010047700 Vomiting Diseases 0.000 description 1
- TVXBFESIOXBWNM-UHFFFAOYSA-N Xylitol Natural products OCCC(O)C(O)C(O)CCO TVXBFESIOXBWNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 1
- 229940072056 alginate Drugs 0.000 description 1
- 235000010443 alginic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229920000615 alginic acid Polymers 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 238000000137 annealing Methods 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 1
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- FRLJSGOEGLARCA-UHFFFAOYSA-N cadmium sulfide Chemical class [S-2].[Cd+2] FRLJSGOEGLARCA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 239000000378 calcium silicate Substances 0.000 description 1
- 229910052918 calcium silicate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000012241 calcium silicate Nutrition 0.000 description 1
- OYACROKNLOSFPA-UHFFFAOYSA-N calcium;dioxido(oxo)silane Chemical compound [Ca+2].[O-][Si]([O-])=O OYACROKNLOSFPA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 239000001768 carboxy methyl cellulose Substances 0.000 description 1
- 235000010948 carboxy methyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 239000008112 carboxymethyl-cellulose Substances 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 210000001175 cerebrospinal fluid Anatomy 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 229910017052 cobalt Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010941 cobalt Substances 0.000 description 1
- GUTLYIVDDKVIGB-UHFFFAOYSA-N cobalt atom Chemical compound [Co] GUTLYIVDDKVIGB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 1
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 1
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 1
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 1
- 230000002498 deadly effect Effects 0.000 description 1
- 230000018044 dehydration Effects 0.000 description 1
- 238000006297 dehydration reaction Methods 0.000 description 1
- 238000011033 desalting Methods 0.000 description 1
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 description 1
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 1
- 239000012502 diagnostic product Substances 0.000 description 1
- 239000007884 disintegrant Substances 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 238000012377 drug delivery Methods 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 230000005518 electrochemistry Effects 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- UNXHWFMMPAWVPI-ZXZARUISSA-N erythritol Chemical compound OC[C@H](O)[C@H](O)CO UNXHWFMMPAWVPI-ZXZARUISSA-N 0.000 description 1
- 235000019414 erythritol Nutrition 0.000 description 1
- 229940009714 erythritol Drugs 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000000945 filler Substances 0.000 description 1
- 238000012921 fluorescence analysis Methods 0.000 description 1
- 238000000799 fluorescence microscopy Methods 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 238000012215 gene cloning Methods 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- 231100000869 headache Toxicity 0.000 description 1
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 239000012678 infectious agent Substances 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 239000003456 ion exchange resin Substances 0.000 description 1
- 229920003303 ion-exchange polymer Polymers 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- XCAUINMIESBTBL-UHFFFAOYSA-N lead(ii) sulfide Chemical compound [Pb]=S XCAUINMIESBTBL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000007169 ligase reaction Methods 0.000 description 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 1
- 238000004811 liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000012139 lysis buffer Substances 0.000 description 1
- 235000019359 magnesium stearate Nutrition 0.000 description 1
- 239000000696 magnetic material Substances 0.000 description 1
- 239000006247 magnetic powder Substances 0.000 description 1
- 230000005389 magnetism Effects 0.000 description 1
- 239000000845 maltitol Substances 0.000 description 1
- 235000010449 maltitol Nutrition 0.000 description 1
- VQHSOMBJVWLPSR-WUJBLJFYSA-N maltitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]([C@H](O)CO)O[C@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O VQHSOMBJVWLPSR-WUJBLJFYSA-N 0.000 description 1
- 229940035436 maltitol Drugs 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- HEBKCHPVOIAQTA-UHFFFAOYSA-N meso ribitol Natural products OCC(O)C(O)C(O)CO HEBKCHPVOIAQTA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910021645 metal ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 229920000609 methyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 239000001923 methylcellulose Substances 0.000 description 1
- 235000010981 methylcellulose Nutrition 0.000 description 1
- LXCFILQKKLGQFO-UHFFFAOYSA-N methylparaben Chemical compound COC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 LXCFILQKKLGQFO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000019813 microcrystalline cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 239000008108 microcrystalline cellulose Substances 0.000 description 1
- 229940016286 microcrystalline cellulose Drugs 0.000 description 1
- 238000004853 microextraction Methods 0.000 description 1
- 239000002480 mineral oil Substances 0.000 description 1
- 235000010446 mineral oil Nutrition 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 230000008693 nausea Effects 0.000 description 1
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 description 1
- 229920001778 nylon Polymers 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 1
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 description 1
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 1
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 1
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 1
- 239000002985 plastic film Substances 0.000 description 1
- 229920006255 plastic film Polymers 0.000 description 1
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 1
- 238000002264 polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 229920002239 polyacrylonitrile Polymers 0.000 description 1
- 229920000728 polyester Polymers 0.000 description 1
- 229920000573 polyethylene Polymers 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 229920006254 polymer film Polymers 0.000 description 1
- 229920001155 polypropylene Polymers 0.000 description 1
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 description 1
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 1
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- QELSKZZBTMNZEB-UHFFFAOYSA-N propylparaben Chemical compound CCCOC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 QELSKZZBTMNZEB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960003415 propylparaben Drugs 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 238000004445 quantitative analysis Methods 0.000 description 1
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 1
- PYWVYCXTNDRMGF-UHFFFAOYSA-N rhodamine B Chemical compound [Cl-].C=12C=CC(=[N+](CC)CC)C=C2OC2=CC(N(CC)CC)=CC=C2C=1C1=CC=CC=C1C(O)=O PYWVYCXTNDRMGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000003296 saliva Anatomy 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 230000000405 serological effect Effects 0.000 description 1
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 238000000527 sonication Methods 0.000 description 1
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 1
- 235000010356 sorbitol Nutrition 0.000 description 1
- 238000011895 specific detection Methods 0.000 description 1
- 210000003802 sputum Anatomy 0.000 description 1
- 208000024794 sputum Diseases 0.000 description 1
- 238000004365 square wave voltammetry Methods 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 239000012536 storage buffer Substances 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 239000000829 suppository Substances 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 238000002636 symptomatic treatment Methods 0.000 description 1
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 1
- 239000006188 syrup Substances 0.000 description 1
- 235000020357 syrup Nutrition 0.000 description 1
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 1
- 239000000454 talc Substances 0.000 description 1
- 229910052623 talc Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000012222 talc Nutrition 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K trisodium phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 1
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 1
- 230000008673 vomiting Effects 0.000 description 1
- 239000000080 wetting agent Substances 0.000 description 1
- 239000000811 xylitol Substances 0.000 description 1
- 235000010447 xylitol Nutrition 0.000 description 1
- HEBKCHPVOIAQTA-SCDXWVJYSA-N xylitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO HEBKCHPVOIAQTA-SCDXWVJYSA-N 0.000 description 1
- 229960002675 xylitol Drugs 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
- C12N15/115—Aptamers, i.e. nucleic acids binding a target molecule specifically and with high affinity without hybridising therewith ; Nucleic acids binding to non-nucleic acids, e.g. aptamers
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N27/00—Investigating or analysing materials by the use of electric, electrochemical, or magnetic means
- G01N27/02—Investigating or analysing materials by the use of electric, electrochemical, or magnetic means by investigating impedance
- G01N27/021—Investigating or analysing materials by the use of electric, electrochemical, or magnetic means by investigating impedance before and after chemical transformation of the material
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N27/00—Investigating or analysing materials by the use of electric, electrochemical, or magnetic means
- G01N27/26—Investigating or analysing materials by the use of electric, electrochemical, or magnetic means by investigating electrochemical variables; by using electrolysis or electrophoresis
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
- G01N33/54366—Apparatus specially adapted for solid-phase testing
- G01N33/54386—Analytical elements
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
- G01N33/56983—Viruses
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/58—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances
- G01N33/588—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances with semiconductor nanocrystal label, e.g. quantum dots
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/10—Type of nucleic acid
- C12N2310/16—Aptamers
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/005—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from viruses
- G01N2333/08—RNA viruses
- G01N2333/18—Togaviridae; Flaviviridae
- G01N2333/183—Flaviviridae, e.g. pestivirus, mucosal disease virus, bovine viral diarrhoea virus, classical swine fever virus (hog cholera virus) or border disease virus
- G01N2333/185—Flaviviruses or Group B arboviruses, e.g. yellow fever virus, japanese encephalitis, tick-borne encephalitis, dengue
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Abstract
本发明涉及一种特异性结合黄热病病毒包膜蛋白结构域III(YFV EDIII)的DNA适体、包含所述DNA适体的用于诊断黄热病的组合物、诊断黄热病的试剂盒、诊断黄热病的生物传感器及提供用于诊断黄热病的信息的方法。作为本发明人为开发用于诊断黄热病的新型生物标志物而进行的正式研究的结果，已证实对YFV EDIII具有特异性结合能力的DNA适体具有与YFV EDIII的强结合力和优异的特异性。因此，预期与使用现有抗体的ELISA法相比，本发明具有更高的稳定性，因此预期可有效地用于开发诊断黄热病的组合物、诊断黄热病的生物传感器和提供用于诊断黄热病的信息的方法等。
Description
技术领域
本发明涉及一种特异性结合黄热病病毒包膜蛋白结构域III(YFV EDIII)的DNA适体，包含所述DNA适体的用于诊断黄热病的组合物、试剂盒和生物传感器，以及提供用于诊断黄热病的信息的方法。
背景技术
黄热病是一种由黄病毒属类型的黄热病病毒引起的急性传染性出血热，并且是一种由埃及森林蚊子传播的致命传染病。黄热病在感染后3至6天的潜伏期后出现，并出现诸如发烧、肌痛、头痛、呕吐和恶心之类症状。虽然很多患者会康复，但众所周知，约有15％的患者进入危重期，约50％的危重患者会在10至14天内死亡。已经开发出了疫苗，但是对于黄热病发病后的患者还没有专门的治疗方法。患者治疗在注重对症治疗的同时进行，并且以预防脱水和呼吸困难、发热以及并发症为目的来进行。每年报告200,000例黄热病病例，其中30,000例死亡(韩国专利10-0883703)。
同时，黄热病病毒包膜蛋白结构域III(YFV EDIII)是位于黄热病病毒的表面蛋白中的结构域III部分，并且诸如黄热病病毒之类的黄病毒属具有基因组RNA位于衣壳蛋白内部，并且包膜(E)蛋白和膜(M)蛋白的二聚体围绕其外侧的结构。位于黄病毒抗原最外侧的包膜蛋白由结构域I、II和III组成，其中结构域III是病毒受体结合的位置，并且作为使用血清的诊断和免疫学研究的主要靶点而备受关注。结构域III具有很强的抗原特性，并具有被单个病毒中和抗体识别的线性表位。由于病毒之间强抗原交叉反应，因此同一黄病毒属的疾病难以通过血清方式诊断。例如，还报道了大多数感染由于登革热、黄热病和圣路易斯脑炎三种类型之间的交叉反应而误诊。为了解决此类问题，关注结构域III的序列，所述结构域III的序列即使在相同属的病毒之间也具有明显不同的特征。
目前，诸如黄热病之类的地方性热带病通过基于症状的诊断、使用聚合酶链反应(PCR)的传染原检测和使用抗原-抗体反应的免疫诊断来诊断。然而，现有的方法由于成本问题不能在医疗设施较差的发展中国家广泛使用，或者在诸如灵敏度和选择性之类的方面没有达到合适的水平。因此，需要克服现有诊断方法的局限性，并开发可在发展中国家实际应用的检测被忽视疾病的平台。
同时，适体是对特定物质具有高度特异性和亲和力的单链DNA(ssDNA)或RNA。适体对特定物质具有非常高的亲和力并且是稳定的，因此近年来得到了广泛的开发，并且正在积极地将它们应用于治疗剂和使用它们的诊断传感器。因为适体可通过相对简单的方法合成，并且细胞、蛋白质、甚至小的有机物质都可以为靶向物质，因此有可能开发出使用所述适体的新的检测方法，并且其特异性和稳定性远高于已经开发出来的抗体的特异性和稳定性，从而适体可应用于治疗剂开发、药物输送系统和诊断生物传感器。
因此，为了开发检测被忽视疾病的平台，利用新型生物标志物诊断黄热病一直是研究的主题，并且就这一点而言已经进行了研究，但研究仍然不充分。
发明内容
[技术问题]
因为本发明是为解决上述问题而作出的，证实了本发明制备的DNA适体与黄热病病毒包膜蛋白结构域III(YFV EDIII)的特异性结合能力，并且基于此完成本发明。
因此，本发明的一个目的是提供一种特异性结合黄热病病毒包膜蛋白结构域III(YFV EDIII)的DNA适体，其中该DNA适体包括SEQ ID NO:6的核苷酸序列。
此外，本发明的另一个目的是提供一种用于诊断黄热病的组合物或用于诊断黄热病的试剂盒，其包含所述DNA适配体。
此外，本发明的另一个目的是提供一种用于诊断黄热病的生物传感器，该生物传感器包括：黄热病病毒包膜蛋白结构域III(YFV EDIII)特异性DNA适体；以及其上固定所述DNA适体的基底，其中所述DNA适体包含SEQ ID NO:6的核苷酸序列。
此外，本发明的另一目的是提供一种提供用于诊断黄热病的信息的方法，该方法包括：(a)将受试者样品注入生物传感器中；(b)向在步骤(a)中注入受试者样品的生物传感器中注入包含量子点的检测探针；(c)向在步骤(b)中注入包括量子点的检测探针的生物传感器中注入酸；(d)获得溶液，其中步骤(c)中的量子点与酸彼此反应；以及(e)测量步骤(d)中溶液的电流(安培(A))。
然而，本发明旨在解决的技术问题不限于上文已提及的技术问题，并且本发明所属领域的普通技术人员将由以下描述清楚地理解其他未提及的技术问题。
[技术方案]
为实现上述本发明的目的，本发明提供了一种特异性结合黄热病病毒包膜蛋白结构域III(YFV EDIII)的DNA适体，其中该DNA适体包括SEQ ID NO:6的核苷酸序列。
作为本发明的示例性实施方案，YFV EDIII可以为包括黄热病病毒抗原表面上的结构域蛋白的蛋白质。
此外，本发明提供了一种用于诊断黄热病的组合物，该组合物包含DNA适体。
此外，本发明提供了一种用于诊断黄热病的试剂盒，该试剂盒包含DNA适体。
此外，本发明提供了一种用于诊断黄热病的生物传感器，该生物传感器包括：黄热病病毒包膜蛋白结构域III(YFV EDIII)特异性DNA适体；以及其上固定所述DNA适体的基底，其中所述DNA适体包含SEQ ID NO:6的核苷酸序列。
作为本发明的一个示例性实施方案，基底可包括金属电极层和金属纳米颗粒层，并且所述金属可以为金(Au)。
作为本发明的另一示例性实施方案，DNA适体可与待以双链方式固定在基底上的固定序列杂交。
此外，本发明提供了一种提供用于诊断黄热病的信息的方法，该方法包括：(a)将受试者样品注入生物传感器中；(b)向在步骤(a)中注入受试者样品的生物传感器中注入包含量子点的检测探针；(c)向在步骤(b)中注入包含量子点的检测探针的生物传感器中注入酸；(d)获得溶液，其中步骤(c)中的量子点与酸彼此反应；以及(e)测量步骤(d)中溶液的电流(安培(A))。
作为本发明的一个示例性实施方案，量子点可以为硫化镉(CdS)。
此外，本发明提供了一种黄热病的诊断方法，该方法包括向个体施用特异性结合YFV EDIII的DNA适体。
此外，本发明提供了一种特异性结合YFV EDIII的DNA适体用于诊断黄热病的用途。
[有益效果]
作为本发明人为了开发用于诊断黄热病的新型生物标志物而进行深入和充分研究的结果，已证实对YFV EDIII具有特异性结合能力的DNA适体具有与YFV EDIII的强结合力和优异的特异性。因此，预期与使用现有抗体的ELISA法相比，本发明具有更高的稳定性，因此预期可有效地用于开发诊断黄热病的组合物、诊断黄热病的生物传感器和提供用于诊断黄热病的信息的方法等。
附图说明
图1A示出了扩增和确认YFV EDIII基因的结果。
图1B示出了在过表达重组YFV EDIII蛋白后通过FPLC获得的高纯度重组YFVEDIII蛋白的观察结果。
图2是示出确认单链DNA(ssDNA)与YFV EDIII之间的结合度(％)并进行选择处理的结果的图。
图3是示出通过荧光测量确认YF1适体序列的Kd值的结果的图。
图4是使用DNA适体检测YFV EDIII的生物传感器的示意图。
图5A是确认当YFV EDIII的浓度变化时使用YF1适体的YFV EDIII检测结果的图。
图5B是确认当将转化为Log的YFV EDIII浓度值作为x轴时定量获得的使用YF1适体的YFV EDIII检测结果的图。
图6是示出在YFV EDIII蛋白的结合特异性实验中由于与每种蛋白的反应引起的电流值的相对变化的图。
具体实施方式
作为本发明人为开发用于诊断黄热病的新型生物标志物而进行的深入且充分研究的结果，已证实对YFV EDIII具有特异性结合能力的DNA适体具有与YFV EDIII的强结合力和优异特异性，从而完成本发明。
下文中，将详细描述本发明。
本发明提供特异性结合YFV EDIII的DNA适体。
如本文所用，术语“黄热病病毒包膜蛋白结构域III(YFV EDIII)”是指位于黄热病病毒表面蛋白中的结构域III部分，并且诸如黄热病病毒之类的黄病毒属具有基因组RNA位于衣壳蛋白内部，包膜(E)蛋白和膜(M)蛋白的二聚体围绕其外侧的结构。位于黄病毒抗原最外侧的包膜蛋白由结构域I、II和III组成，其中结构域III是病毒受体结合的位置，并且作为使用血清进行诊断和免疫研究的主要靶点而备受关注。结构域III具有很强的抗原特性，并具有被单个病毒中和抗体识别的线性表位。由于病毒之间强抗原交叉反应，同一黄病毒属的疾病难以通过血清方式诊断。例如，还报道了大多数感染由于登革热、黄热病和圣路易斯脑炎三种类型之间的交叉反应而误诊。为了解决此类问题，根据对即使在相同属的病毒之间也具有明显不同特征的结构域III序列的关注，可通过检测YFV EDIII来有效诊断黄热病病毒，并且黄热病病毒EDIII可以是在黄热病病毒抗原表面上包括的结构域蛋白，但不限于此。
如本文所用的，术语“适体”是指对特定材料具有高特异性和亲和力的单链DNA(ssDNA)或RNA。因为使用先前开发的抗体的方法是通过使用生物体的免疫系统来制备抗体的，因此存在的问题在于该方法需要相对大量的时间和金钱，并且稳定性由于抗体是蛋白质而成为一个问题，然而因为适体可通过相对简单的方法合成。此外，适体可靶向细胞、蛋白质、甚至是小的有机物质。基于能够开发使用所述适体的新的检测方法，并且与已经开发的抗体相比，其特异性和稳定性非常高的事实，因此将DNA适体用于YFV EDIII的特异性检测。任何能够特异性检测YFV EDIII的DNA(ssDNA)或RNA都可属于本发明的适体，并且可优选地包括SEQ ID NO:6的核苷酸序列，但不限于此。
此外，本发明提供一种用于诊断黄热病的组合物，该组合物包含DNA适体。
除了DNA适体之外，本发明的组合物还可包括药理学和生理学上可接受的载体、赋形剂和稀释剂。此外，药物组合物可通过根据典型的方法被配制成气雾剂、外用剂、栓剂、无菌注射液和口服制剂诸如粉剂、颗粒剂、片剂、胶囊剂、混悬剂、乳液、糖浆的形式来使用。
可包含在组合物中的载体、赋形剂和稀释剂的示例包括乳糖、葡萄糖、蔗糖、山梨糖醇、甘露糖醇、木糖醇、赤藓糖醇、麦芽糖醇、淀粉、阿拉伯胶、藻酸盐、明胶、磷酸钙、硅酸钙、纤维素、甲基纤维素、微晶纤维素、聚乙烯基吡咯烷酮、水、羟基苯甲酸甲酯、羟基苯甲酸丙酯、滑石、硬脂酸镁、矿物油等。当配制组合物时，使用常用的稀释剂或赋形剂例如填充剂、增量剂、粘合剂、润湿剂、崩解剂和表面活性剂来制备组合物。
此外，本发明提供了一种用于诊断黄热病的试剂盒，该试剂盒包含DNA适配体。
该试剂盒包含特异性结合YFV EDIII的本发明的适体，以及本领域中广泛使用的检测标记，例如生物素残基，可附接至适体。将标记材料引入生物素所附接的适体之后，其分析可用于YFV EDIII的检测、定量和诊断。各种已知的分析标记材料可用作用于生物素的标记材料，并且可以使用例如链霉亲和素、亲和素、Cy3、Cy5、Alexa、BODIPY、罗丹明、Q-dot等进行荧光分析。此外，除了生物素残基之外，用于检测YFV EDIII的适体还可通过诸如其他荧光材料、磁性体、染色材料、酶、放射性同位素等典型的标记材料进行标记，并且可以通过例如荧光显微镜、放射免疫检测(RAID)等的典型检测方式进行检测。
此外，该试剂盒包括多种工具或试剂，其可用于定性或定量地测量是否存在适体与样品中YFV EDIII的结合，并且还可包括载体(基底)、缓冲溶液、反应终止剂、增溶剂、去污剂、稳定剂等。
作为在本发明中固定适体的基底，例如，可使用选自聚合物、玻璃、金、纸和生物膜的基底作为固体基底。更具体地讲，可使用聚苯乙烯、聚乙烯、聚丙烯、聚酯、聚丙烯腈、氟树脂、琼脂糖、纤维素、硝化纤维素、葡聚糖、Sephadex、Sepharose、脂质体、羧甲基纤维素、聚丙烯酰胺、聚苯乙烯、辉长岩、滤纸、离子交换树脂、塑料膜、塑料管、聚胺-甲基乙烯基-醚-马来酸共聚物、氨基酸共聚物、乙烯-马来酸共聚物、尼龙、金属、玻璃、玻璃珠、磁粉等。作为其他固体基底，可使用细胞培养板、ELISA板、管、聚合物膜等。基底可以具有任何可能的形式，例如球形(珠)、圆柱形(试管或内孔表面)和平面形(片材、测试条)，更优选地，可使用多孔板(例如、24孔、96孔、192孔、384孔、576孔等)。
此外，本发明提供了一种用于诊断黄热病的生物传感器，该生物传感器包括：黄热病病毒包膜蛋白结构域III(YFV EDIII)特异性DNA适体；以及其上固定DNA适体的基底。
其上固定DNA适体的基底包括表面印刷电极芯片(丝网印刷金电极)的金属电极层和金属纳米粒子层，并且作为电极和纳米粒子的材料，可使用可以被电场或磁场吸引并且可改变电场的特性的任何材料，并且可优选地包括金(Au)，但不限于此。
固定在基底上的DNA适体可与待以双链方式固定在基底上的固定序列杂交，并且特异性结合YFV EDIII的任何DNA适体不限于任一种，并且优选地，DNA适体可以为YF1适体，但不限于此。
此外，固定序列可以通过硫醇-金反应与待固定在基底上的YF1适体杂交，并且优选可以为5'-AAG CAG TCC AAC TCG AAC ACA CTG-(CH2)6-SH-3'序列，但不限于此。
在本发明的示例性实施方案中，特异性结合序列通过表达和纯化YFV EDIII来确认(参见实施例1至3)，并且作为使用SELEX搜索YFV EDIII的适体的结果，对YF1适体的序列和结构进行了分析和确认(参见实施例4)，利用荧光测量法测定了YFV EDIII与适体之间的结合力(参见实施例5)，并且基于实验结果，进一步制备了具有优异稳定性和结合能力的DNA适体和生物传感器(参见实施例6)，并确认了该生物传感器对YFV EDIII具有优异的特异性，从而确认了该生物传感器可用作提供诊断黄热病的方法的信息(参见实施例7)。
因此，本发明提供了一种提供用于诊断黄热病的信息的方法，该方法包括：(a)将受试者样品注入生物传感器中；(b)向在步骤(a)中注入受试者样品的生物传感器中注入包含量子点的检测探针；(c)向在步骤(b)中注入包括量子点的检测探针的生物传感器中注入酸；(d)获得溶液，其中步骤(c)中的量子点与酸彼此反应；以及(e)测量步骤(d)中溶液的电流(安培(A))
用于诊断黄热病的受试者样品可以为组织、细胞、全血、血液、唾液、痰、脑脊液、尿液等，但不限于此。
此外，随着YFV EDIII结合到生物传感器适体以脱离生物传感器，检测探针用更多检测探针填充位置，优选地，检测探针序列为5'-GTT CGA GTT GGA CTG CTT CTA GGA TTGCTG GCT CGA AC-(CH2)6-NH2-3'，但不限于此。
此外，量子点还可包含在检测探针中，并且不限于任一种，只要量子点能够与酸反应即可，并且可以为例如硫化镉(CdS)、硫化铅(PbS))等，优选硫化镉，但不限于此。
此外，酸不限于任一种，只要酸能够与量子点反应即可，并且可以为例如硝酸、硫酸、盐酸等，可以优选为硝酸，但不限于此。
下文中，将提出有助于理解本发明的优选实施例。然而，提供以下实施例是为了更容易理解本发明，并且本发明的内容不受以下实施例的限制。
实施例1.YFV
EDIII基因克隆
为了扩增黄热病病毒包膜蛋白结构域III(YFV EDIII)的基因，使用包括BamH1限制性内切酶识别序列的正向引物(5'-CCC GGA TCC TCT GCT CTG ACC CTG AAA GG-3'；SEQID NO:1)，和包括HindIII限制性内切酶识别序列的反向引物(5'-CCC AAG CTT TTT ACCGAT AGA AGA ACC TTC TTT GTG CC-3'；SEQ ID NO:2)。
将针对大肠杆菌K-12优化的YFV EDIII基因序列(菌株Ghana/Asibi/1927，573Ser-683Lys)用作基因扩增的模板，并使用i-pfu聚合酶通过聚合酶链反应(PCR)过程进行扩增。聚合酶链反应的每个步骤如下。1)在98℃下温育20秒作为模板的双链DNA变性的步骤，2)在55℃下温育20秒作为将模板和引物退火的步骤，3)在72℃下温育30秒作为合成新链的步骤，并且将此类步骤重复20次。
将经扩增的YFV EDIII基因通过限制性内切酶和DNA连接酶反应克隆到含有(His)6-标记的PET32a载体中，并使用该载体转化到BL21(DE3)大肠杆菌细胞中。
实施例2.YFV
EDIII蛋白的表达
将用YFV EDIII基因转化的BL21(DE3)细胞在Luria Bertani(LB)培养基中培养，并在37℃下培养，直至在UV 600nm下的光密度(OD)达到0.6。然后，添加异丙基-硫代-b-D-吡喃半乳糖苷(IPTG)，以便诱导蛋白质的表达，使得终浓度为1mM，并将细胞在18℃下培养20小时。通过SDS PAGE确认蛋白质的表达，并使用离心机将细胞与培养基分离，然后用PBS缓冲液(10mM磷酸钠、150mM NaCl和pH 8.0)洗涤一次。
实施例3.YFV
EDIII蛋白的纯化
为了以高纯度纯化在细菌细胞BL21(DE3)中表达的YFV EDIII蛋白，使细胞在裂解缓冲液(20mM Tris、500mM NaCl、0.5mMβ-巯基乙醇、5％甘油和pH 8.0)中裂解，然后通过使用超声波仪超声处理20分钟进行破裂。为了分离水溶液中的蛋白质和细胞，使用离心机在18,000rpm下分离细胞并持续40分钟。
此外，使用镍-次氮基三乙酸(Ni-NTA)与(His)6-标记氨基酸之间的结合特性获得高纯度蛋白质。具体地讲，将Ni-NTA柱连接到快速蛋白质液相色谱(FPLC)系统，并且通过使YFV EDIII的水溶液流入柱中来结合YFV EDIII。因为与Ni-NTA柱结合的蛋白质的(His)6-标记与咪唑化合物竞争性结合，因此通过使一定浓度的洗脱缓冲液(20mM Tris、500mMNaCl、0.5mMβ-巯基乙醇、300mM咪唑和pH 8.0)依次流过以从柱中分离目标蛋白质来以高纯度分离YFV EDIII。
此外，通过脱盐柱更换缓冲液以从分离的蛋白质中去除咪唑，并将纯化的蛋白质储存在储存缓冲液(50mm Tris-HCl(pH 8.0)、100mM NaCl和5mMβ-巯基乙醇)中。
实施例4.使用SELEX搜索YFV
EDIII的适体
4-1.单链DNA(ssDNA)文库的制备
设计了一个合成文库(5'-CACCTAATACGACTCACTATAGCGGATCCGA-N40-CTGGCTCGAACAAGCTTGC-3'；SEQ ID NO:3)，其具有90个核苷酸序列，包括两端处用于PCR扩增和克隆的引物结合序列，以及中心的40个随机DNA核苷酸序列。此外，对于PCR扩增和ssDNA制备，使用正向引物(5'-CACCTAATACGACTCACTATAGCGGA-3'；SEQ ID NO:4)、反向引物(5'-GCAAGCTTGTTCGAGCCAG-3'；SEQ ID NO:5)和生物素结合的反向引物(5'-生物素-GCAAGCTTGTTCGAGCCAG-3')。此处使用的所有寡核苷酸均由BIONICS Co.,Ltd.(韩国)合成和PAGE纯化。
4.2 YFV EDIII在Ni-NTA磁珠上的固定
使用Dynabeads(Invitrogen，Norway)将纯化的YFV EDIII固定到珠上，所述Dynabeads是磁珠，其表面涂覆有钴以结合蛋白质的His标记。
具体地讲，将溶于100uL蛋白质结合缓冲液(20mM Tris、50mM NaCl、5mM KCl、5mMMgCl2，pH 8.0)中的1000pmol蛋白质和15ul珠使用外部磁体用结合缓冲液洗涤，然后在室温下反应1小时以固定到珠上。
4-3.对YFV EDIII具有特异性的适体选择
为了选择对YFV EDIII具有特异性的适体，进行了使用磁性的特定分离方法。具体地讲，首先，为了形成最稳定的ssDNA结构，将溶于100uL结合缓冲液中的ssDNA文库(500pmol)在90℃培养3分钟，然后在4℃培养30分钟。此后，使文库与固定在磁珠上的YFVEDIII反应1小时，同时轻轻摇动。然后，将珠用结合缓冲液洗涤两次以去除未与结合到YFVEDIII的珠结合的ssDNA。此后，使用洗脱缓冲液(20mM Tris、50mM NaCl、5mM KCl、5mMMgCl2、0.01％Tween 20、300mM咪唑和pH 8.0)洗脱与蛋白质结合的ssDNA，以分离磁珠中与蛋白质结合的ssDNA。使用乙醇沉淀洗脱的ssDNA，然后将其溶于60uL蒸馏水中，然后使用i-pfu聚合酶(iNtRON Biotechnology,Inc.,Korea)，利用正向引物和生物素结合的反向引物通过PCR扩增。为了制备用于下一个选择过程的ssDNA，在偶联缓冲液(5mM Tris-HCl、0.5mMEDTA、1M NaCl、0.005％Tween 20和pH 7.5)条件下，将生物素结合的PCR产物连同涂覆有结合到生物素的链霉亲和素的磁珠一起培养1小时。培养后，将PCR产物与100ul的100mM NaOH一起培养10分钟以便仅分离ssDNA，并且只有选定的ssDNA可使用外部磁体获得。此外，使用第一次选择的ssDNA重复选择以供下一次选择。在这种情况下，在进一步减少ssDNA的量和YFV EDIII的浓度同时进行选择以获得严格的选择，并且在利用UV分光光度计(BiochromLibra S22光谱仪)测量重复选择中经洗脱的ssDNA的浓度以确认剩余ssDNA与YFV EDIII的结合度的同时进行选择过程。结合度(％)如图2所示。
4-4.适体序列分析和结构分析
使用未修饰的正向引物和反向引物通过PCR过程扩增第11次重复选择的ssDNA，将其克隆到pENTR/TOPO载体(TOPO TA克隆试剂盒，Invitrogen，USA)，然后转化到大肠杆菌TOP10细胞(Invitrogen，USA)中。使用微量提取试剂盒(GeneAll，Korea)纯化其中插入了ssDNA的克隆体，然后分析核苷酸序列(COSMO Genetech，Korea)。结果，可分析下表1中所示的序列。
[表1]
实施例5.使用荧光测量法测量蛋白质和适体之间的结合亲和力
将400pmol YFV EDIII与10uL磁珠混合后，将所得混合物在100uL结合缓冲液(20mM Tris、50mM NaCl、5mM KCl、5mM MgCl2和pH 8.0)中培养1小时。将混合物用结合缓冲液洗涤两次以分离未结合的YFV EDIII。此后，将混合物与不同浓度的用6-FAM标记的适体一起培养1小时，并通过洗涤去除未结合的适体。通过使用磁体仅分离与YFV EDIII结合的6-FAM标记的ssDNA，通过荧光测量法(1420Victor multilabel counter，PerkinElmer，USA)，来测量结合到YFV EDIII固定于其上的磁珠上的6-FAM标记的ssDNA适体的量。结果，如图3和下表2所示，可以测量YF1核苷酸序列所具有的DNA适体的kd值。
[表2]
| 适体 | Kd(nM) |
| YF1 | 12.2nM |
实施例6.检测条件的优化和生物传感器的制造
为了通过实施例4中发现的DNA适体检测YFV EDIII，使用溶出伏安法技术设计了具有优异检测灵敏度的生物传感器。图4是使用本发明的DNA适体检测YFV EDIII的生物传感器的示意图。
首先将金纳米粒子吸附到丝网印刷金电极(SPGE)芯片的金电极上，然后将其中与氨基结合的固定序列(5'-AAG CAG TCC AAC TCG AAC ACA CTG-(CH2)6-SH-3')与YF1适体(5'-GTT CGA GTT GGA CTG CTT CTA GGA TTG CTG GCT CGA AC-3')杂交的双链固定到金表面。此后，当向其中添加待检测的YFV EDIII时，使所得混合物反应40分钟，然后用蒸馏水洗涤，与YFV EDIII特异性反应的YF1适体与蛋白结合并脱离，并且相应的固定序列保持为单链。最后，通过以下步骤来进行溶出方波伏安法分析：使连接到硫化镉量子点(CdS)的检测探针序列(5'-GTT CGA GTT GGA CTG CTT CTA GGA TTG CTG GCT CGA AC-(CH2)6-NH2-3')反应40分钟，用蒸馏水洗涤所得产物，然后将另外与70μL 1M硝酸反应1小时的溶液转移到1mL醋酸/铋缓冲液(0.1M醋酸缓冲液、400ug/L铋和pH 4.5)中。
YFV EDIII与生物传感器表面探针结合并脱离的越多，检测探针序列占据的位置就越多，并且与硝酸反应的硫化镉在溶液中释放。这可在溶出伏安法技术图上作为峰值被观察到，该图以极高的特异性和灵敏度检测金属离子，从而实现信号开启型定量分析。
基于电化学，使用选定的YF1适体检测重组YFV EDIII。结果，如图5A和图5B所示，可确认随着YFV EDIII的浓度增加(1pM至100μM)，电流值增加(参见图5A)。得到y轴为电流值、x轴为换算成Log的YFV EDIII浓度值的图，因此确认上述制造的生物传感器对YFVEDIII进行了定量检测，检测极限为0.10pM(参见图5B)。
实施例7.确认YFV
EDIII检测适体的结合特异性
由于不与血液中除靶YFV EDIII以外的各种蛋白质反应的结合特异性对于为了将DNA适体用作生物传感器而言是重要的，因此确认了各种蛋白质样品的结合特异性，以便确认DNA适体是否选择性结合。在这种情况下，用PBS进行混合，使得待检测的每种蛋白质的浓度为10nM。
结果，如图6所示，证实对YFV EDIII的特异性是优异的。特别是在对照蛋白中，CHIKV是类似于YFV的传染性热带病毒的表面蛋白，虽然众所周知YFV在传染性热带病之间具有高交叉反应性，但证实了CHIKV不与本发明开发的DNA适体结合。这意指本发明的DNA适体以高结合特异性与YFV EDIII反应。此外，即使与作为血清蛋白质的HAS相比，本发明的DNA适体也具有高特异性。
综上所述，意味着本发明开发的DNA适体YF1不仅对YFV EDIII具有极高的结合特异性，而且即使在复杂的生物样品中也可用作生物传感器。
作为参考，本发明的序列表如下表3所示。
[表3]
提供本发明的上述描述是出于说明的目的，本发明所属领域的技术人员应理解，在不改变本发明的技术精神或基本特征的情况下，本发明可容易地修改为其他特定形式。因此，应当理解，上述实施方案在所有方面仅是示例性的而不是限制性的。
工业实用性
因为本发明的特异性结合黄热病病毒包膜蛋白结构域III(YFV EDIII)的DNA适体对YFV EDIII具有强结合力和优异的特异性，因此与使用现有抗体的诊断相比，可显著提高诊断黄热病病毒的准确度，因此，预期DNA适体可有效用于各种诊断产品，诸如诊断试剂盒和诊断组合物。
Claims (6)
1.一种特异性结合黄热病病毒包膜蛋白结构域III(YFV EDIII)的DNA适体，其中所述DNA适体由SEQ ID NO:6的核苷酸序列组成。
2.一种用于诊断黄热病的组合物，所述组合物包含根据权利要求1所述的DNA适体。
3.一种用于诊断黄热病的试剂盒，所述试剂盒包含根据权利要求1所述的DNA适体。
4.一种用于诊断黄热病的生物传感器，所述生物传感器包括：黄热病病毒包膜蛋白结构域III(YFV EDIII)特异性DNA适体；以及其上固定所述DNA适体的基底，其中所述DNA适体由SEQ ID NO:6的核苷酸序列组成。
5.根据权利要求4所述的生物传感器，其中所述基底包括金属电极层和金属纳米颗粒层，所述金属为金(Au)。
6.根据权利要求4所述的生物传感器，其中所述DNA适体与固定序列杂交成双链并且所述双链固定在基底上。
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR10-2018-0165205 | 2018-12-19 | ||
| KR1020180165205A KR101970963B1 (ko) | 2018-12-19 | 2018-12-19 | 황열 바이러스 ediii에 특이적으로 결합하는 dna 압타머 및 이의 용도 |
| PCT/KR2019/018001 WO2020130627A1 (ko) | 2018-12-19 | 2019-12-18 | 황열 바이러스 ediii에 특이적으로 결합하는 dna 압타머 및 이의 용도 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN113227377A CN113227377A (zh) | 2021-08-06 |
| CN113227377B true CN113227377B (zh) | 2023-11-28 |
Family
ID=66285261
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201980083915.4A Active CN113227377B (zh) | 2018-12-19 | 2019-12-18 | 与黄热病病毒ediii特异性结合的dna适体及其用途 |
Country Status (3)
| Country | Link |
|---|---|
| KR (1) | KR101970963B1 (zh) |
| CN (1) | CN113227377B (zh) |
| WO (1) | WO2020130627A1 (zh) |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR102048812B1 (ko) * | 2018-12-19 | 2019-11-26 | 주식회사 엠디헬스케어 | 뎅기 바이러스 ediii에 특이적으로 결합하는 dna 압타머 및 이의 용도 |
| KR101970963B1 (ko) * | 2018-12-19 | 2019-04-23 | 주식회사 엠디헬스케어 | 황열 바이러스 ediii에 특이적으로 결합하는 dna 압타머 및 이의 용도 |
| KR102196156B1 (ko) * | 2019-09-25 | 2020-12-29 | 충북대학교 산학협력단 | 황열 바이러스 비구조단백질 1에 대한 단일클론항체, 이를 생산하는 하이브리도마 세포주 및 이의 용도 |
Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102816764A (zh) * | 2011-06-07 | 2012-12-12 | 浦项工科大学校产学协力团 | 特异性结合于人心肌肌钙蛋白ⅰ的dna适体 |
| CN105301085A (zh) * | 2015-11-09 | 2016-02-03 | 江南大学 | 一种基于核酸适配体和量子点同时检测链霉素氯霉素四环素三种抗生素残留的方法 |
| CN106029888A (zh) * | 2013-11-13 | 2016-10-12 | 新加坡国立大学 | 用于结合黄病毒蛋白的适体 |
| CN106687590A (zh) * | 2014-09-11 | 2017-05-17 | Vlp 治疗有限责任公司 | 黄热病毒病毒样颗粒 |
| CN113195722A (zh) * | 2018-12-19 | 2021-07-30 | Md保健株式会社 | 与基孔肯雅热病毒e2特异性结合的dna适体及其用途 |
Family Cites Families (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20060121489A1 (en) * | 2003-05-23 | 2006-06-08 | Board Of Regents, The University Of Texas System | High throughput screening of aptamer libraries for specific binding to proteins on viruses and other pathogens |
| ES2726998T3 (es) | 2003-05-30 | 2019-10-11 | Gilead Pharmasset Llc | Análogos de nucleósidos fluorados modificados |
| WO2015042454A1 (en) * | 2013-09-20 | 2015-03-26 | Integrated Diagnostics, Inc. | Compositions, methods and kits for diagnosis of lung cancer |
| KR101588332B1 (ko) * | 2013-12-09 | 2016-01-26 | 대한민국 | 초파리 발현 시스템에서 황열바이러스 유사 입자 생산 방법 |
| WO2018208741A1 (en) * | 2017-05-08 | 2018-11-15 | University Of Pittsburgh-Of The Commonwealth System Of Higher Education | Methods and compositions for the detection of flavivirus infections |
| KR101970963B1 (ko) * | 2018-12-19 | 2019-04-23 | 주식회사 엠디헬스케어 | 황열 바이러스 ediii에 특이적으로 결합하는 dna 압타머 및 이의 용도 |
-
2018
- 2018-12-19 KR KR1020180165205A patent/KR101970963B1/ko active IP Right Grant
-
2019
- 2019-12-18 CN CN201980083915.4A patent/CN113227377B/zh active Active
- 2019-12-18 WO PCT/KR2019/018001 patent/WO2020130627A1/ko active Application Filing
Patent Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102816764A (zh) * | 2011-06-07 | 2012-12-12 | 浦项工科大学校产学协力团 | 特异性结合于人心肌肌钙蛋白ⅰ的dna适体 |
| CN106029888A (zh) * | 2013-11-13 | 2016-10-12 | 新加坡国立大学 | 用于结合黄病毒蛋白的适体 |
| CN106687590A (zh) * | 2014-09-11 | 2017-05-17 | Vlp 治疗有限责任公司 | 黄热病毒病毒样颗粒 |
| CN105301085A (zh) * | 2015-11-09 | 2016-02-03 | 江南大学 | 一种基于核酸适配体和量子点同时检测链霉素氯霉素四环素三种抗生素残留的方法 |
| CN113195722A (zh) * | 2018-12-19 | 2021-07-30 | Md保健株式会社 | 与基孔肯雅热病毒e2特异性结合的dna适体及其用途 |
Non-Patent Citations (4)
| Title |
|---|
| Aptamer Displacement Screen for Flaviviral RNA Methyltransferase Inhibitors;Shaun P.Falk等;《SLAS Discovery》;第19卷(第8期);第1147-1153页 * |
| Development, screening, and analysis of DNA aptamer libraries potentially useful for diagnosis and passive immunity of arboviruses;Bruno J 等;《BMC Research Notes》;第5卷(第1期);633 * |
| 核酸适体的筛选制备及分析应用;刘腾飞等;《生物技术通报》(第4期);第39-48页 * |
| 黄热病病毒的实时荧光RT-PCR检测方法研究;师永霞等;《中国卫生检验杂志》;第19卷(第5期);第1003-1006页 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| KR101970963B1 (ko) | 2019-04-23 |
| WO2020130627A1 (ko) | 2020-06-25 |
| CN113227377A (zh) | 2021-08-06 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN113195722B (zh) | 与基孔肯雅热病毒e2特异性结合的dna适体及其用途 | |
| CN113227377B (zh) | 与黄热病病毒ediii特异性结合的dna适体及其用途 | |
| CN111693712B (zh) | 一种采用核酸适配体检测新冠病毒SARS-CoV-2 N蛋白的方法 | |
| EP2290100A2 (en) | Kits for displacement Sandwich Immuno-PCR | |
| KR0171617B1 (ko) | 단백질-핵산 프로브 및 그를 사용하는 면역분석법 | |
| KR101841046B1 (ko) | 환원 그래핀 산화물을 이용한 카나마이신 검출용 앱타 센서 및 이의 응용 | |
| JP2008518605A (ja) | 同種の分析物検出 | |
| WO2006049289A1 (ja) | 標的物質の検出方法 | |
| TW201002825A (en) | Novel method and kit for diagnosis of mycobacterium tuberculosis and nontuberculous mycobacterium | |
| CN110241119B (zh) | 心肌肌钙蛋白i特异性核酸适配体及其筛选方法和应用 | |
| CN116438307A (zh) | 针对SARS-CoV-2的适体 | |
| US10751359B2 (en) | Nucleic acid aptamer specifically binding to avian influenza virus subtype H5 and method of detecting avian ifluenza virus subtype H5 using the same | |
| CN113227378B (zh) | 与登革病毒ediii特异性结合的dna适配体及其用途 | |
| CN111212911B (zh) | 与tb7.7特异性结合的dna适体及其用途 | |
| JPH05149949A (ja) | 新規な微量物質測定法 | |
| CN111212912A (zh) | 与esat6特异性结合的dna适体及其用途 | |
| WO2019035763A1 (en) | APTAMERS FOR DETECTION OF ZIKA FLAVIVIRAL PROTEIN | |
| Li et al. | Discovery and translation of functional nucleic acids for clinically diagnosing infectious diseases: Opportunities and challenges | |
| WO2023173711A1 (zh) | 特异性识别可溶性st2蛋白的核酸适配体及其应用 | |
| JP5083892B2 (ja) | ペルオキシレドキシン６（Ｐｒｘ６）に対するアプタマー | |
| US20220090174A1 (en) | Detection method for a target nucleic acid and kit | |
| CN111662909B (zh) | 心肌肌钙蛋白i特异性核酸适配体及其应用 | |
| CA2353920A1 (en) | Test system for detecting different markers, and production and use thereof | |
| US11028396B2 (en) | DNA aptamer specifically binding to CFP10, and use thereof | |
| JPH11511027A (ja) | Ｇｂ型肝炎ウィルス遺伝子型の検出 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |