CN113226470A - 利福霉素类似物及其抗体-药物缀合物 - Google Patents

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Abstract

本公开内容涉及利福霉素类似物化合物、其中间体和前体，以及能够抑制细菌生长(例如金黄色葡萄球菌生长)并治疗细菌感染(例如金黄色葡萄球菌感染)的药物组合物。本公开内容还涉及利福霉素类似物化合物与抗体的抗体‑药物缀合物以及该抗体‑药物缀合物用于抑制细菌生长和治疗细菌感染的方法，所述抗体为例如针对感染性疾病相关的靶标诸如膜糖蛋白受体(MSR1)、壁磷壁酸(WTA)或蛋白A特异性的抗体。

Description

利福霉素类似物及其抗体-药物缀合物
相关申请的交叉引用
本申请要求于2018年12月21日提交的美国临时申请序列第62/783,506号和于2019年5月8日提交的美国临时申请序列第62/844,860号的优先权，这两个申请的内容通过引用以其整体并入本文。
公开内容的领域
本公开内容涉及能够抑制细菌生长并治疗细菌感染的利福霉素类似物化合物和药物组合物，以及利福霉素类似物化合物和抗体(例如对感染性疾病相关的靶标特异性的抗体)的抗体-药物缀合物，及其使用方法。
序列表
本申请包含序列表，所述序列表已经以ASCII格式电子地提交并且在此通过引用以其整体并入本文。于2019年12月19日创建的所述ASCII副本被命名为250298_000145_SL.txt并且大小为409,310字节。
本公开内容的背景
金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,S.aureus)是一种革兰氏阳性的圆形细菌，是厚壁菌门(Firmicutes)的成员，并且也是身体的微生物区系的常见成员，经常在上呼吸道中和皮肤上发现。金黄色葡萄球菌通常是过氧化氢酶和硝酸盐还原阳性的，并且是一种不需要氧气就能生长的兼性厌氧菌。虽然金黄色葡萄球菌通常作为人类微生物区系的共生体，但它也可能成为机会性病原体，是皮肤感染包括脓肿、呼吸道感染诸如鼻窦炎、以及食物中毒的常见原因。致病菌株通常通过产生毒力因子诸如有效的蛋白质毒素以及表达与抗体结合并使抗体失去活性的细胞表面蛋白来促进感染。
据估计，20％至30％的人类群体是金黄色葡萄球菌的长期携带者，金黄色葡萄球菌可以作为鼻孔中的正常皮肤菌群的一部分被发现，并且作为女性下生殖道的正常习居菌被发现。金黄色葡萄球菌可以引起一系列疾病，范围从轻微的皮肤感染，诸如丘疹、脓疱病、疖子、蜂窝组织炎、毛囊炎、痈、烫伤样皮肤综合征和脓肿，到危及生命的疾病，诸如肺炎、脑膜炎、骨髓炎、心内膜炎、中毒性休克综合征、菌血症和败血症。金黄色葡萄球菌仍然是医院获得性感染的五个最常见原因之一，并且通常是手术后伤口感染的原因。每年，美国医院中约有500,000名患者罹患葡萄球菌感染，主要由金黄色葡萄球菌引起。在美国，每年多达50,000例死亡与金黄色葡萄球菌感染有关。Schlecht LM等人,2015,Microbiology,161,1,168-181。尽管进行了大量的研究和开发，目前还没有针对金黄色葡萄球菌的疫苗被批准。
最初，用于金黄色葡萄球菌感染的治疗选择是青霉素。当青霉素于1943年首次引入时，金黄色葡萄球菌的抗生素耐受性并不常见。到1950年，40％的医院金黄色葡萄球菌分离株是青霉素耐受性的；到1960年，这已经上升到80％。Chambers HF,2001,EmergingInfectious Diseases,7,2,178-82。如今，金黄色葡萄球菌已变得对许多常用抗生素耐受。
金黄色葡萄球菌的抗生素耐受性菌株，诸如耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的出现是临床医学中的世界性问题。MRSA菌株最常被发现与机构诸如医院相关，但在社区获得性感染中变得越来越流行。MRSA是许多非常令人恐惧的已变得对大多数β-内酰胺类抗生素耐受的金黄色葡萄球菌菌株中的一种。在医院和社区环境两者中，MRSA感染通常用非β-内酰胺类抗生素治疗，诸如用克林霉素(一种林肯胺)和复方新诺明(也称为甲氧苄啶/磺胺甲噁唑)治疗。对这些抗生素的耐受性也引起了新的广谱抗革兰氏阳性抗生素的使用，诸如利奈唑胺的使用，因为它可用作口服药物。用于因MRSA引起的严重侵袭性感染的一线治疗目前是糖肽抗生素(万古霉素和替考拉宁)。这些抗生素存在许多问题，诸如需要静脉内施用(没有口服制剂可获得)、毒性以及需要通过血液测试定期监控药物水平。此外，糖肽抗生素不能很好地渗透到受感染的组织中(这是脑和脑膜的感染以及心内膜炎的一个特别关注的问题)。因此，对于一般的金黄色葡萄球菌的新型抗生素治疗，并且特别是在解决细胞内金黄色葡萄球菌感染方面，存在强烈的未满足的需求。
利福霉素是安莎霉素抗生素家族的一个子类别，是一组由细菌Amycolatopsisrifamycinica天然地合成或人工合成的抗生素。利福霉素对分枝杆菌特别有效，并且因此用于治疗结核病、麻风和鸟分枝杆菌复合群(MAC)感染。利福霉素的组包括“典型”利福霉素药物以及利福霉素类似物利福平(rifampicin或rifampin)、利福布汀、利福喷丁、利福拉齐(rifalazil)和利福昔明(rifaximin)。利福霉素SV以商品名Aemcolo销售，经FDA批准用于治疗某些情况下的旅行者腹泻。
利福霉素类抗生素抑制细菌RNA聚合酶(RNAP)，并对金黄色葡萄球菌具有有效的活性。然而，使用这类抗生素的单一疗法可能导致在治疗期间选择出耐受群体。因此，利福霉素抗生素可以与一线抗生素联合使用以改善预后，通常用于涉及假肢或外来装置的感染。
巨噬细胞清道夫受体1(MSR1)是一种单次通过的三聚II型跨膜糖蛋白模式识别受体，介导一系列带负电荷/聚阴离子配体的摄取，包括修饰的低密度脂蛋白(LDL)(Krieger,M.1994.Annu.Rev.Biochem.63:601-637；Platt,N.和S.Gordon.2001.J Clin Invest.108(5):649-654)和牛血清白蛋白的晚期糖化终产物(advanced glycation end products ofbovine serum albumin,AGE-BSA)的摄取(
Figure BDA0003124860200000031
等人1997.Biochem J.322(Pt 2):567-573)。MSR1受体与许多巨噬细胞相关的生理过程和病理过程(包括动脉粥样硬化、阿尔茨海默病和宿主防御)有关。
MSR1表达最初被认为是巨噬细胞特异性的。然而，最近已经证明它存在于不同类别的树突细胞上(Herber等人2010.Nat.Med.16(8):880-886)。此外，MSR1看起来在内皮细胞和平滑肌细胞中表达。在从反面高尔基体循环回细胞表面之前，它通过细胞表面的有被小窝进行内化并在酸性pH释放其配体(Doi等人1994.Journal of Biological Chemistry；Mori,T.1994.Lab Invest)。它促进单核细胞来源的巨噬细胞转化为泡沫细胞，这是动脉粥样硬化进展的关键一步。
金黄色葡萄球菌是一种兼性细胞内细菌，可以从巨噬细胞和其他细胞类型的吞噬中存活下来(Horn等人2018.Int.J.Med.Microbiol.308(6):607-624；Jubrail等人2016.Cell Microbiol.18(1):80-96；Mitchell等人2016.Microbiol.Spectr.4(3))。活体成像证明，巨噬细胞可以用作其中金黄色葡萄球菌进行复制的储库，并且然后在感染期间对其他器官进行播种(Surewaard等人2016.J.Exp.Med.213(7):1141-51)。大多数抗生素不能很好地渗透细胞(包括巨噬细胞)，表明细胞内金黄色葡萄球菌储库可以从使用标准护理抗生素的治疗逃逸(Lehar等人2015.Nature.527(7578):323-8)。然而，万古霉素脂质体制剂比标准护理万古霉素更有效地增加了抗生素对巨噬细胞的渗透，并降低了金黄色葡萄球菌的器官负荷(Surewaard等人2016.J.Exp.Med.213(7):1141-51)。总之，这些数据表明，将抗生素递送到巨噬细胞可能是消除细胞内金黄色葡萄球菌储库的有效方法。
磷壁酸是在大多数革兰氏阳性细菌(包括金黄色葡萄球菌)细胞壁内的许多聚糖结合蛋白上发现的富含磷酸盐的分子。磷壁酸以及许多其他糖蛋白在细菌周围形成多个肽聚糖鞘的一个厚层，不仅使细胞膜稳定，还为其他分子提供许多附接位点。壁磷壁酸(“WTA”)是磷壁酸的一种类型，共价地附接至肽聚糖并且延伸通过细胞壁并达到细胞壁外。在聚糖结合蛋白中，WTA可以占总细胞壁质量的多达60％。因此，它代表了革兰氏阳性细菌(包括金黄色葡萄球菌)的高度表达的细胞表面抗原。
金黄色葡萄球菌还表达许多表面决定簇抗原，包括金黄色葡萄球菌蛋白A(SpA)和多糖聚-N-乙酰葡糖胺(PNAG)，铁调节表面决定簇蛋白IsdA、IsdB、IsdC、IsdE和IsdH，聚集因子蛋白(clumping factor proteins)ClfA和ClfB，荚膜多糖类型(CP)5和CP8，丝氨酸-天冬氨酸重复蛋白SdrC、SdrD和SdrE，纤连蛋白结合蛋白A和B(FnBpA、FnBpB)，Cna(胶原结合蛋白)和SasG(金黄色葡萄球菌表面蛋白G)。这些表面抗原在宿主组织的定殖、宿主免疫反应的逃逸和细菌适合度中起作用。
因此，包含利福霉素类似物的ADC的开发将允许将利福霉素类似物靶特异性递送到巨噬细胞内，或将利福霉素类似物束缚在细菌表面上。此外，这样的ADC可以提供改善的针对例如耐受性细菌靶标的活性、改善的生物利用度和改善的治疗窗。因此，持续需要使用利福霉素类似物的抗体-药物缀合物来有效治疗抗生素耐受性细菌。
因此，对于开发利福霉素的有效类似物以对抗抗生素耐受性细菌(包括抗生素耐受性金黄色葡萄球菌菌株)的日益增长的问题，存在强烈的未满足的需求。MSR1抗体可以提供用于特异性靶向治疗分子(诸如利福霉素类似物)的手段，以使全身性施用这样的化合物所引起的不期望的副作用最小化并帮助这些化合物内化到巨噬细胞中。可选地，与靶向细胞表面抗原(例如，WTA、蛋白A)的抗体缀合可以改善利福霉素类似物的治疗效果。
前述讨论仅仅是为了提供对本领域面临的问题的性质的更好理解而呈现的，并且不应以任何方式理解为对现有技术的承认，也不应将本文对任何参考文献的引用理解为承认这样的参考文献构成本申请的“现有技术”。
本公开内容的概述
如本文所讨论的，强烈需要开发用于通常是细菌感染并且特别是金黄色葡萄球菌感染的有效治疗。本公开内容通过提供新的利福霉素类似物化合物、其中间体和前体、抗体-药物缀合物、药物组合物以及基于这类化合物和药物组合物的治疗方法来解决这些和其他需求。
下面描述各种非限制性的方面和实施方案。
在一方面中，本公开内容提供具有式(A)的结构的利福霉素类似物化合物、其中间体或前体：
Figure BDA0003124860200000061
或其药学上可接受的盐，其中：
X选自-O-和-NR*-；
Za和Zb独立地选自氢、-Cl、-Br、-OR1和-RN；条件是Za或Zb中的至少一个不是氢；其中：
R1选自氢、RN、脂肪族C1-C20烃、芳香族C1-C20烃、杂芳香族C1-C20烃、环状脂肪族C1-C20烃、杂环C1-C20烃及其组合，它们中的每一个还包含0-8个选自卤素、O、N和S的杂原子，并且其中R1任选地被以下中的一种或更多种取代：-F、-Cl、-Br、-I、-OH、-OR*、-NO、-NO2、-NO3、-O-NO、-N3、-NH2、-NHR*、-N(R*)2、-N(R*)3 +、-N(R*)-OH、-O-N(R*)2、-N(R*)-O-R*、-CN、-NC、-(C＝O)-R*、-CHO、-CO2H、-CO2R*、-(C＝O)-S-R*、-O-(C＝O)-H、-O-(C＝O)-R*、-S-(C＝O)-R*、-(C＝O)-NH2、-(C＝O)-N(R*)2、-(C＝O)-NHNH2、-O-(C＝O)-NHNH2、-(C＝S)-NH2、-(C＝S)-N(R*)2、-N(R*)-CHO、-N(R*)-(C＝O)-R*、-SCN、-NCS、-NSO、-SSR*、-SO2R*、-SO2-N(R*)2、-S(＝O)-OR*、-S(＝O)-R*、-Si(R*)3、-CF3、-O-CF3及其组合，条件是R1不是正丁基基团，并且当X是-O-且Ra是氢时，R1不是氢；
RN选自：
Figure BDA0003124860200000071
Figure BDA0003124860200000072
其中符号
Figure BDA0003124860200000073
表示附接点；并且R’、R”和R”’选自氢、C1-C6脂肪族烃和选自以下的保护基团：芴基甲氧羰基(FMOC)和叔丁氧羰基(Boc)，或者其中R’和R”一起形成脂肪族单环的、脂肪族双环的或脂肪族多环的结构；
R2、R3和R4独立地选自氢、脂肪族C1-C20烃和-(C＝O)-R*，它们中的每一个还包含0-8个选自卤素、O、N和S的杂原子；
Ra选自氢、-F、-Cl、-Br、-I、-OH、-OR*、-NH2、-NHR*、-N(R*)2、-N(R*)3 +、-(C＝O)-R*、-CHO、-CO2H、-CO2R*、-SR*、-SO2R*和脂肪族C1-C20烃，它还包含0-8个选自卤素、O、N和S的杂原子，并且其中Ra任选地被以下中的一种或更多种取代：-F、-Cl、-Br、-I、-OH、-OR*；
Rb选自氢、-F、-Cl、-Br、-I、-OH、-OR*、-(C＝O)-R*、-CHO、-CO2H、-CO2R*和脂肪族C1-C20烃，它还包含0-3个选自卤素、O和S的杂原子，并且其中Rb任选地被以下中的一种或更多种取代：-F、-Cl、-Br、-I、-OH、-OR*，并且
R*在每次出现时独立地选自氢、脂肪族C1-C20烃、芳香族C1-C20烃、杂芳香族C1-C20烃、环状脂肪族C1-C20烃、杂环C1-C20烃及其组合，它还包含0-8个选自卤素、O、N和S及其组合的杂原子。
在一方面中，本公开内容提供具有式(I)的结构的利福霉素类似物化合物：
Figure BDA0003124860200000081
或其药学上可接受的盐，其中：
X选自-O-和-NR*-；
R1选自RN、氢、脂肪族C1-C20烃、芳香族C1-C20烃、杂芳香族C1-C20烃、环状脂肪族C1-C20烃、杂环C1-C20烃及其组合，它们中的每一个还包含0-8个选自卤素、O、N和S的杂原子，并且其中R1任选地被以下中的一种或更多种取代：-F、-Cl、-Br、-I、-OH、-OR*、-NO、-NO2、-NO3、-O-NO、-N3、-NH2、-NHR*、-N(R*)2、-N(R*)3 +、-N(R*)-OH、-O-N(R*)2、-N(R*)-O-R*、-CN、-NC、-(C＝O)-R*、-CHO、-CO2H、-CO2R*、-(C＝O)-S-R*、-O-(C＝O)-H、-O-(C＝O)-R*、-S-(C＝O)-R*、-(C＝O)-NH2、-(C＝O)-N(R*)2、-(C＝O)-NHNH2、-O-(C＝O)-NHNH2、-(C＝S)-NH2、-(C＝S)-N(R*)2、-N(R*)-CHO、-N(R*)-(C＝O)-R*、-SCN、-NCS、-NSO、-SSR*、-SO2R*、-SO2-N(R*)2、-S(＝O)-OR*、-S(＝O)-R*、-Si(R*)3、-CF3、-O-CF3及其组合，条件是R1不是正丁基基团，并且当X是-O-且Ra是氢时，R1不是氢；
RN选自：
Figure BDA0003124860200000091
Figure BDA0003124860200000092
其中符号
Figure BDA0003124860200000093
表示附接点；并且R’、R”和R”’选自氢、C1-C6脂肪族烃和选自以下的保护基团：FMOC和Boc，或者其中R’和R”一起形成脂肪族单环的、脂肪族双环的或脂肪族多环的结构；
R2、R3和R4独立地选自氢、脂肪族C1-C20烃或-(C＝O)-R*，它们中的每一个还包含0-8个选自卤素、O、N和S的杂原子；
Ra选自氢、-F、-Cl、-Br、-I、-OH、-OR*、-NH2、-NHR*、-N(R*)2、-N(R*)3 +、-(C＝O)-R*、-CHO、-CO2H、-CO2R*、-SR*、-SO2R*和脂肪族C1-C20烃，它还包含0-8个选自卤素、O、N和S的杂原子，并且其中Ra任选地被以下中的一种或更多种取代：-F、-Cl、-Br、-I、-OH、-OR*；
Rb选自氢、-F、-Cl、-Br、-I、-OH、-OR*、-(C＝O)-R*、-CHO、-CO2H、-CO2R*和脂肪族C1-C20烃，它还包含0-3个选自卤素、O和S的杂原子，并且其中Rb任选地被以下中的一种或更多种取代：-F、-Cl、-Br、-I、-OH、-OR*；并且R*在每次出现时独立地选自氢、脂肪族C1-C20烃、芳香族C1-C20烃、杂芳香族C1-C20烃、环状脂肪族C1-C20烃、杂环C1-C20烃及其组合，它还包含0-8个选自卤素、O、N和S及其组合的杂原子。
在一方面中，本公开内容提供具有式(I’)的结构的利福霉素类似物化合物：
Figure BDA0003124860200000101
或其药学上可接受的盐，其中：
X选自-O-和-NR*-；
R1选自RN、氢、脂肪族C1-C20烃、芳香族C1-C20烃、杂芳香族C1-C20烃、环状脂肪族C1-C20烃、杂环C1-C20烃及其组合，它们中的每一个还包含0-8个选自卤素、O、N和S的杂原子，并且其中R1任选地被以下中的一种或更多种取代：-F、-Cl、-Br、-I、-OH、-OR*、-NO、-NO2、-NO3、-O-NO、-N3、-NH2、-NHR*、-N(R*)2、-N(R*)3 +、-N(R*)-OH、-O-N(R*)2、-N(R*)-O-R*、-CN、-NC、-(C＝O)-R*、-CHO、-CO2H、-CO2R*、-(C＝O)-S-R*、-O-(C＝O)-H、-O-(C＝O)-R*、-S-(C＝O)-R*、-(C＝O)-NH2、-(C＝O)-N(R*)2、-(C＝O)-NHNH2、-O-(C＝O)-NHNH2、-(C＝S)-NH2、-(C＝S)-N(R*)2、-N(R*)-CHO、-N(R*)-(C＝O)-R*、-SCN、-NCS、-NSO、-SSR*、-SO2R*、-SO2-N(R*)2、-S(＝O)-OR*、-S(＝O)-R*、-Si(R*)3、-CF3、-O-CF3及其组合，条件是R1不是正丁基基团，并且当X是-O-且Ra是氢时，R1不是氢；
RN选自：
Figure BDA0003124860200000111
Figure BDA0003124860200000112
其中符号
Figure BDA0003124860200000113
表示附接点；并且R’、R”和R”’选自氢、C1-C6脂肪族烃和选自以下的保护基团：FMOC和Boc，或者其中R’和R”一起形成脂肪族单环的、脂肪族双环的或脂肪族多环的结构；
R2、R3和R4独立地选自氢、脂肪族C1-C20烃或-(C＝O)-R*，它们中的每一个还包含0-8个选自卤素、O、N和S的杂原子；
Ra选自氢、-F、-Cl、-Br、-I、-OH、-OR*、-NH2、-NHR*、-N(R*)2、-N(R*)3 +、-(C＝O)-R*、-CHO、-CO2H、-CO2R*、-SR*、-SO2R*和脂肪族C1-C20烃，它还包含0-8个选自卤素、O、N和S的杂原子，并且其中Ra任选地被以下中的一种或更多种取代：-F、-Cl、-Br、-I、-OH、-OR*；
Rb选自氢、-F、-Cl、-Br、-I、-OH、-OR*、-(C＝O)-R*、-CHO、-CO2H、-CO2R*和脂肪族C1-C20烃，它还包含0-3个选自卤素、O和S的杂原子，并且其中Rb任选地被以下中的一种或更多种取代：-F、-Cl、-Br、-I、-OH、-OR*，并且R*在每次出现时独立地选自氢、脂肪族C1-C20烃、芳香族C1-C20烃、杂芳香族C1-C20烃、环状脂肪族C1-C20烃、杂环C1-C20烃及其组合，它还包含0-8个选自卤素、O、N和S及其组合的杂原子。
在式(A)、式(I)或式(I’)的化合物的实施方案中，X是-O-；R1是脂肪族C1-C3烃；R2是甲基基团；R3是Ac(-(C＝O)-CH3)；R4是氢；并且Ra是氢。
在式(A)、式(I)或式(I’)的化合物的实施方案中，X是-O-；R1是苄基基团；R2是甲基基团；R3是Ac(-(C＝O)-CH3)；R4是氢；Ra是氢并且Rb是氢。
在式(A)、式(I)或式(I’)的化合物的实施方案中，X是-O-；R1是包含1-8个选自O和N的杂原子的脂肪族C1-C8烃；R2是甲基基团；R3是Ac(-(C＝O)-CH3)；R4是氢；Ra是氢并且Rb是氢。
在式(A)、式(I)或式(I’)的化合物的实施方案中，X是-O-；R1是被-NH2、-NHR*、-N(R*)2中的一种或更多种取代的脂肪族C1-C8烃，R*是氢或脂肪族C1-C3烃；R2是甲基基团；R3是Ac(-(C＝O)-CH3)；R4是氢；Ra是氢并且Rb是氢。
在式(A)、式(I)或式(I’)的化合物的实施方案中，X是-NCH3-；R1是-OH；R2是甲基基团；R3是Ac(-(C＝O)-CH3)；R4是氢；Ra是氢并且Rb是氢。
在一种实施方案中，本公开内容的利福霉素类似物化合物具有式(II)的结构：
Figure BDA0003124860200000121
或其药学上可接受的盐，其中：
X选自-O-和-NR*-；
Ra选自氢、-Cl和-OR*；
R1选自RN、氢、脂肪族C1-C20烃、芳香族C1-C20烃、杂芳香族C1-C20烃、环状脂肪族C1-C20烃、杂环C1-C20烃及其组合，它们中的每一个还包含0-8个选自卤素、O、N和S的杂原子，并且其中R1任选地被以下中的一种或更多种取代：-F、-Cl、-Br、-I、-OH、-OR*、-NO、-NO2、-NO3、-O-NO、-N3、-NH2、-NHR*、-N(R*)2、-N(R*)3 +、-N(R*)-OH、-O-N(R*)2、-N(R*)-O-R*、-CN、-NC、-(C＝O)-R*、-CHO、-CO2H、-CO2R*、-(C＝O)-S-R*、-O-(C＝O)-H、-O-(C＝O)-R*、-S-(C＝O)-R*、-(C＝O)-NH2、-(C＝O)-N(R*)2、-(C＝O)-NHNH2、-O-(C＝O)-NHNH2、-(C＝S)-NH2、-(C＝S)-N(R*)2、-N(R*)-CHO、-N(R*)-(C＝O)-R*、-SCN、-NCS、-NSO、-SSR*、-SO2R*、-SO2-N(R*)2、-S(＝O)-OR*、-S(＝O)-R*、-Si(R*)3、-CF3、-O-CF3及其组合，条件是R1不是正丁基基团；
RN选自：
Figure BDA0003124860200000131
Figure BDA0003124860200000132
其中符号
Figure BDA0003124860200000133
表示附接点；并且R’、R”和R”’选自氢、C1-C6脂肪族烃和选自以下的保护基团：FMOC和Boc，或者其中R’和R”一起形成脂肪族单环的、脂肪族双环的或脂肪族多环的结构；并且
R*在每次出现时独立地选自氢、脂肪族C1-C20烃、芳香族C1-C20烃、杂芳香族C1-C20烃、环状脂肪族C1-C20烃、杂环C1-C20烃及其组合，它还包含0-8个选自卤素、O、N和S及其组合的杂原子。
在一种实施方案中，本公开内容的利福霉素类似物化合物具有式(II’)的结构：
Figure BDA0003124860200000141
或其药学上可接受的盐，其中：
X选自-O-和-NR*-；
Ra选自氢和-OR*；
R1选自RN、氢、脂肪族C1-C20烃、芳香族C1-C20烃、杂芳香族C1-C20烃、环状脂肪族C1-C20烃、杂环C1-C20烃及其组合，它们中的每一个还包含0-8个选自卤素、O、N和S的杂原子，并且其中R1任选地被以下中的一种或更多种取代：-F、-Cl、-Br、-I、-OH、-OR*、-NO、-NO2、-NO3、-O-NO、-N3、-NH2、-NHR*、-N(R*)2、-N(R*)3 +、-N(R*)-OH、-O-N(R*)2、-N(R*)-O-R*、-CN、-NC、-(C＝O)-R*、-CHO、-CO2H、-CO2R*、-(C＝O)-S-R*、-O-(C＝O)-H、-O-(C＝O)-R*、-S-(C＝O)-R*、-(C＝O)-NH2、-(C＝O)-N(R*)2、-(C＝O)-NHNH2、-O-(C＝O)-NHNH2、-(C＝S)-NH2、-(C＝S)-N(R*)2、-N(R*)-CHO、-N(R*)-(C＝O)-R*、-SCN、-NCS、-NSO、-SSR*、-SO2R*、-SO2-N(R*)2、-S(＝O)-OR*、-S(＝O)-R*、-Si(R*)3、-CF3、-O-CF3及其组合，条件是R1不是正丁基基团；
RN选自：
Figure BDA0003124860200000151
Figure BDA0003124860200000152
其中符号
Figure BDA0003124860200000154
表示附接点；并且R’、R”和R”’选自氢、C1-C6脂肪族烃和选自以下的保护基团：FMOC和Boc，或者其中R’和R”一起形成脂肪族单环的、脂肪族双环的或脂肪族多环的结构；并且
R*在每次出现时独立地选自氢、脂肪族C1-C20烃、芳香族C1-C20烃、杂芳香族C1-C20烃、环状脂肪族C1-C20烃、杂环C1-C20烃及其组合，它还包含0-8个选自卤素、O、N和S及其组合的杂原子。
在一种实施方案中，本公开内容的利福霉素类似物化合物具有式(III)的结构：
Figure BDA0003124860200000153
或其药学上可接受的盐，其中：
Ra选自氢和-OR*；
R5选自RN、脂肪族C1-C20烃、芳香族C1-C20烃、杂芳香族C1-C20烃、环状脂肪族C1-C20烃、杂环C1-C20烃及其组合，它们中的每一个还包含0-8个选自卤素、O、N和S的杂原子，并且其中R5任选地被以下中的一种或更多种取代：-F、-Cl、-Br、-I、-OH、-OR*、-NH2、-NHR*、-N(R*)2、-N(R*)3 +、-N(R*)-(C＝O)-R*、-(C＝O)-R*、-CHO、-CO2H、-CO2R*及其组合，条件是R5不是正丁基基团；
R*在每次出现时独立地选自氢、脂肪族C1-C20烃、芳香族C1-C20烃、杂芳香族C1-C20烃、环状脂肪族C1-C20烃、杂环C1-C20烃及其组合，它还包含0-8个选自卤素、O、N和S及其组合的杂原子；并且
RN选自：
Figure BDA0003124860200000161
Figure BDA0003124860200000162
其中符号
Figure BDA0003124860200000163
表示附接点；并且R’、R”和R”’选自氢、C1-C6脂肪族烃和选自以下的保护基团：FMOC和Boc，或者其中R’和R”一起形成脂肪族单环的、脂肪族双环的或脂肪族多环的结构。
在一种实施方案中，本公开内容的利福霉素类似物化合物具有式(III’)的结构：
Figure BDA0003124860200000171
或其药学上可接受的盐，其中：
Ra选自氢和-OR*；
R5选自RN、脂肪族C1-C20烃、芳香族C1-C20烃、杂芳香族C1-C20烃、环状脂肪族C1-C20烃、杂环C1-C20烃及其组合，它们中的每一个还包含0-8个选自卤素、O、N和S的杂原子，并且其中R5任选地被以下中的一种或更多种取代：-F、-Cl、-Br、-I、-OH、-OR*、-NH2、-NHR*、-N(R*)2、-N(R*)3 +、-N(R*)-(C＝O)-R*、-(C＝O)-R*、-CHO、-CO2H、-CO2R*及其组合，条件是R5不是正丁基基团；
R*在每次出现时独立地选自氢、脂肪族C1-C20烃、芳香族C1-C20烃、杂芳香族C1-C20烃、环状脂肪族C1-C20烃、杂环C1-C20烃及其组合，它还包含0-8个选自卤素、O、N和S及其组合的杂原子；并且
RN选自：
Figure BDA0003124860200000181
Figure BDA0003124860200000182
其中符号
Figure BDA0003124860200000184
表示附接点；并且R’、R”和R”’选自氢、C1-C6脂肪族烃和选自以下的保护基团：FMOC和Boc，或者其中R’和R”一起形成脂肪族单环的、脂肪族双环的或脂肪族多环的结构。
在一种实施方案中，本公开内容的利福霉素类似物化合物具有式(IV)的结构：
Figure BDA0003124860200000183
或其药学上可接受的盐，其中：
Ra选自氢和-OR*；
R5选自RN、氢、脂肪族C1-C20烃、芳香族C1-C20烃、杂芳香族C1-C20烃、环状脂肪族C1-C20烃、杂环C1-C20烃及其组合，它们中的每一个还包含0-8个选自卤素、O、N和S的杂原子，并且其中R5任选地被以下中的一种或更多种取代：-F、-Cl、-Br、-I、-OH、-OR*、-NH2、-NHR*、-N(R*)2、-N(R*)3 +、-N(R*)-(C＝O)-R*、-(C＝O)-R*、-CHO、-CO2H、-CO2R*及其组合；
RN选自：
Figure BDA0003124860200000191
Figure BDA0003124860200000192
其中符号
Figure BDA0003124860200000193
表示附接点；并且R’、R”和R”’选自氢、C1-C6脂肪族烃和选自以下的保护基团：FMOC和Boc，或者其中R’和R”一起形成脂肪族单环的、脂肪族双环的或脂肪族多环的结构；并且
R*在每次出现时独立地选自氢、脂肪族C1-C20烃、芳香族C1-C20烃、杂芳香族C1-C20烃、环状脂肪族C1-C20烃、杂环C1-C20烃及其组合，它还包含0-8个选自卤素、O、N和S及其组合的杂原子。
在一种实施方案中，本公开内容的利福霉素类似物化合物具有式(IV’)的结构：
Figure BDA0003124860200000201
或其药学上可接受的盐，其中：
Ra选自氢和-OR*；
R5选自RN、氢、脂肪族C1-C20烃、芳香族C1-C20烃、杂芳香族C1-C20烃、环状脂肪族C1-C20烃、杂环C1-C20烃及其组合，它们中的每一个还包含0-8个选自卤素、O、N和S的杂原子，并且其中R5任选地被以下中的一种或更多种取代：-F、-Cl、-Br、-I、-OH、-OR*、-NH2、-NHR*、-N(R*)2、-N(R*)3 +、-N(R*)-(C＝O)-R*、-(C＝O)-R*、-CHO、-CO2H、-CO2R*及其组合；
RN选自：
Figure BDA0003124860200000202
Figure BDA0003124860200000211
Figure BDA0003124860200000212
其中符号
Figure BDA0003124860200000214
表示附接点；并且R’、R”和R”’选自氢、C1-C6脂肪族烃和选自以下的保护基团：FMOC和Boc，或者其中R’和R”一起形成脂肪族单环的、脂肪族双环的或脂肪族多环的结构；并且
R*在每次出现时独立地选自氢、脂肪族C1-C20烃、芳香族C1-C20烃、杂芳香族C1-C20烃、环状脂肪族C1-C20烃、杂环C1-C20烃及其组合，它还包含0-8个选自卤素、O、N和S及其组合的杂原子。
在一种实施方案中，本公开内容的利福霉素类似物化合物具有式(V)的结构：
Figure BDA0003124860200000213
或其药学上可接受的盐，其中：
X选自-O-和-NR*-；
Ra选自氢和-OR*；
R6选自RN、脂肪族C1-C20烃、芳香族C1-C20烃、杂芳香族C1-C20烃、环状脂肪族C1-C20烃、杂环C1-C20烃及其组合，它们中的每一个还包含0-8个选自卤素、O、N和S的杂原子，并且其中R6任选地被以下中的一种或更多种取代：-OH、-OR*、-NH2、-NHR*、-N(R*)2、-N(R*)3 +、-N(R*)-(C＝O)-R*、-(C＝O)-R*、-CHO、-CO2H、-CO2R*及其组合，条件是R6不是正丁基基团；
RN选自：
Figure BDA0003124860200000221
Figure BDA0003124860200000222
其中符号
Figure BDA0003124860200000223
表示附接点；并且R’、R”和R”’选自氢、C1-C6脂肪族烃和选自以下的保护基团：FMOC和Boc，或者其中R’和R”一起形成脂肪族单环的、脂肪族双环的或脂肪族多环的结构；并且
R*在每次出现时独立地选自氢、脂肪族C1-C20烃、芳香族C1-C20烃、杂芳香族C1-C20烃、环状脂肪族C1-C20烃、杂环C1-C20烃及其组合，它还包含0-8个选自卤素、O、N和S及其组合的杂原子。
在一种实施方案中，本公开内容的利福霉素类似物化合物具有式(V’)的结构：
Figure BDA0003124860200000231
或其药学上可接受的盐，其中：
X选自-O-和-NR*-；
Ra选自氢和-OR*；
R6选自RN、脂肪族C1-C20烃、芳香族C1-C20烃、杂芳香族C1-C20烃、环状脂肪族C1-C20烃、杂环C1-C20烃，它们中的每一个还包含0-8个选自卤素、O、N和S的杂原子，并且其中R6任选地被以下中的一种或更多种取代：-OH、-OR*、-NH2、-NHR*、-N(R*)2、-N(R*)3 +、-N(R*)-(C＝O)-R*、-(C＝O)-R*、-CHO、-CO2H、-CO2R*及其组合，条件是R6不是正丁基基团；
RN选自：
Figure BDA0003124860200000232
Figure BDA0003124860200000241
其中符号
Figure BDA0003124860200000243
表示附接点；并且R’、R”和R”’选自氢、C1-C6脂肪族烃和选自以下的保护基团：FMOC和Boc，或者其中R’和R”一起形成脂肪族单环的、脂肪族双环的或脂肪族多环的结构；并且
R*在每次出现时独立地选自氢、脂肪族C1-C20烃、芳香族C1-C20烃、杂芳香族C1-C20烃、环状脂肪族C1-C20烃、杂环C1-C20烃及其组合，它还包含0-8个选自卤素、O、N和S及其组合的杂原子。
在另一方面中，本公开内容提供具有式(B)的结构的利福霉素类似物化合物、其中间体或前体：
Figure BDA0003124860200000242
或其药学上可接受的盐，其中：
X选自-O-和-NR*-；
R1选自氢、RN、脂肪族C1-C20烃、芳香族C1-C20烃、杂芳香族C1-C20烃、环状脂肪族C1-C20烃、杂环C1-C20烃及其组合，它们中的每一个还包含0-8个选自卤素、O、N和S的杂原子，并且其中R1任选地被以下中的一种或更多种取代：-F、-Cl、-Br、-I、-OH、-OR*、-NO、-NO2、-NO3、-O-NO、-N3、-NH2、-NHR*、-N(R*)2、-N(R*)3 +、-N(R*)-OH、-O-N(R*)2、-N(R*)-O-R*、-CN、-NC、-(C＝O)-R*、-CHO、-CO2H、-CO2R*、-(C＝O)-S-R*、-O-(C＝O)-H、-O-(C＝O)-R*、-S-(C＝O)-R*、-(C＝O)-NH2、-(C＝O)-N(R*)2、-(C＝O)-NHNH2、-O-(C＝O)-NHNH2、-(C＝S)-NH2、-(C＝S)-N(R*)2、-N(R*)-CHO、-N(R*)-(C＝O)-R*、-SCN、-NCS、-NSO、-SSR*、-SO2R*、-SO2-N(R*)2、-S(＝O)-OR*、-S(＝O)-R*、-Si(R*)3、-CF3、-O-CF3及其组合，条件是R1不是正丁基基团，并且当X是-O-且Ra是氢时，R1不是氢；
RN选自：
Figure BDA0003124860200000251
Figure BDA0003124860200000252
其中符号
Figure BDA0003124860200000253
表示附接点；并且R’、R”和R”’选自氢、C1-C6脂肪族烃和选自以下的保护基团：芴基甲氧羰基(FMOC)和叔丁氧羰基(Boc)，或者其中R’和R”一起形成脂肪族单环的、脂肪族双环的或脂肪族多环的结构；
R2、R3和R4独立地选自氢、脂肪族C1-C20烃和-(C＝O)-R*，它们中的每一个还包含0-8个选自卤素、O、N和S的杂原子；
Ra选自氢、-F、-Cl、-Br、-I、-OH、-OR*、-NH2、-NHR*、-N(R*)2、-N(R*)3 +、-(C＝O)-R*、-CHO、-CO2H、-CO2R*、-SR*、-SO2R*和脂肪族C1-C20烃，它还包含0-8个选自卤素、O、N和S的杂原子，并且其中Ra任选地被以下中的一种或更多种取代：-F、-Cl、-Br、-I、-OH、-OR*；
Rb选自氢、-F、-Cl、-Br、-I、-OH、-OR*、-(C＝O)-R*、-CHO、-CO2H、-CO2R*和脂肪族C1-C20烃，它还包含0-3个选自卤素、O和S的杂原子，并且其中Rb任选地被以下中的一种或更多种取代：-F、-Cl、-Br、-I、-OH、-OR*，并且
R*在每次出现时独立地选自氢、脂肪族C1-C20烃、芳香族C1-C20烃、杂芳香族C1-C20烃、环状脂肪族C1-C20烃、杂环C1-C20烃及其组合，它还包含0-8个选自卤素、O、N和S及其组合的杂原子。
在另一方面中，本公开内容提供具有式(B-1)的结构的利福霉素类似物化合物：
Figure BDA0003124860200000261
或其药学上可接受的盐，其中：
X选自-O-和-NR*-；
R1选自RN、氢、脂肪族C1-C20烃、芳香族C1-C20烃、杂芳香族C1-C20烃、环状脂肪族C1-C20烃、杂环C1-C20烃及其组合，它们中的每一个还包含0-8个选自卤素、O、N和S的杂原子，并且其中R1任选地被以下中的一种或更多种取代：-F、-Cl、-Br、-I、-OH、-OR*、-NO、-NO2、-NO3、-O-NO、-N3、-NH2、-NHR*、-N(R*)2、-N(R*)3 +、-N(R*)-OH、-O-N(R*)2、-N(R*)-O-R*、-CN、-NC、-(C＝O)-R*、-CHO、-CO2H、-CO2R*、-(C＝O)-S-R*、-O-(C＝O)-H、-O-(C＝O)-R*、-S-(C＝O)-R*、-(C＝O)-NH2、-(C＝O)-N(R*)2、-(C＝O)-NHNH2、-O-(C＝O)-NHNH2、-(C＝S)-NH2、-(C＝S)-N(R*)2、-N(R*)-CHO、-N(R*)-(C＝O)-R*、-SCN、-NCS、-NSO、-SSR*、-SO2R*、-SO2-N(R*)2、-S(＝O)-OR*、-S(＝O)-R*、-Si(R*)3、-CF3、-O-CF3及其组合，条件是R1不是正丁基基团；
RN选自：
Figure BDA0003124860200000271
Figure BDA0003124860200000272
其中符号
Figure BDA0003124860200000273
表示附接点；并且R’、R”和R”’选自氢、C1-C6脂肪族烃和选自以下的保护基团：FMOC和Boc，或者其中R’和R”一起形成脂肪族单环的、脂肪族双环的或脂肪族多环的结构；并且
R*在每次出现时独立地选自氢、脂肪族C1-C20烃、芳香族C1-C20烃、杂芳香族C1-C20烃、环状脂肪族C1-C20烃、杂环C1-C20烃及其组合，它还包含0-8个选自卤素、O、N和S及其组合的杂原子。
在另一方面中，本公开内容提供具有式(B-2)的结构的利福霉素类似物化合物：
Figure BDA0003124860200000281
或其药学上可接受的盐，其中：
RN选自：
Figure BDA0003124860200000282
Figure BDA0003124860200000283
其中符号
Figure BDA0003124860200000284
表示附接点；并且R’、R”和R”’选自氢、C1-C6脂肪族烃和选自以下的保护基团：FMOC和Boc，或者其中R’和R”一起形成脂肪族单环的、脂肪族双环的或脂肪族多环的结构。
在另一方面中，本公开内容提供具有式(B-2)的结构的利福霉素类似物化合物：
Figure BDA0003124860200000291
或其药学上可接受的盐，其中：
RN是
Figure BDA0003124860200000292
其中符号
Figure BDA0003124860200000294
表示附接点；并且R’和R”选自氢和C1-C6脂肪族烃。
在一种实施方案中，利福霉素类似物化合物具有根据以下式的结构：
Figure BDA0003124860200000293
或其药学上可接受的盐。
在任一前述式的实施方案中提供了一种化合物，其中R1选自RN、氢、脂肪族C1-C20烃、芳香族C1-C20烃、杂芳香族C1-C20烃、环状脂肪族C1-C20烃、杂环C1-C20烃及其组合，它们中的每一个还包含0-3个选自O和N的杂原子，并且其中R1任选地被以下中的一种或更多种取代：-F、-Cl、-Br、-I、-OH、C1-3烷氧基(C1-3 alkoxide)、-NH2、-NHR*、-N(R*)2、-N(R*)3 +、-N(R*)-OH、-O-N(R*)2、-N(R*)-O-R*、-N(R*)-(C＝O)-R*、-(C＝O)-R*、-CHO、-CO2H、-CO2R*、-O-(C＝O)-H、-O-(C＝O)-R*、-(C＝O)-NH2、-(C＝O)-N(R*)2、-Si(R*)3、-CF3、-O-CF3及其组合，条件是R1不是正丁基基团，并且当X是-O-时，R1不是氢。
在任一前述式的实施方案中提供了一种化合物，其中R1是脂肪族C1-C20烃和芳香族C1-C20烃的组合。
在任一前述式的实施方案中提供了一种化合物，其中R1是脂肪族C1-C20烃和杂芳香族C1-C20烃的组合。
在任一前述式的实施方案中提供了一种化合物，其中R1选自：
Figure BDA0003124860200000301
在任一前述式的实施方案中提供了一种化合物，其中R1是被-NH2、-NHR*、-N(R*)2或-N(R*)-(C＝O)-R*中的一种或更多种取代的脂肪族C1-C20烃。
在任一前述式的实施方案中提供了一种化合物，其中R1是被-NH-(C＝O)-CH3或-N(CH3)-(C＝O)-CH3取代的脂肪族C1-C20烃。
在任一前述式的实施方案中提供了一种化合物，其中Ra是氢。
在任一前述式的实施方案中提供了一种化合物，其中Ra是-OH。
在任一前述式的实施方案中提供了一种化合物，其中Ra是-Cl。
在任一前述式的实施方案中提供了一种化合物，其中Ra是-OR*，并且R*选自脂肪族C1-C20烃、芳香族C1-C20烃及其组合。
在任一前述式的实施方案中提供了一种化合物，其中RN选自：
Figure BDA0003124860200000302
Figure BDA0003124860200000311
Figure BDA0003124860200000312
其中符号
Figure BDA0003124860200000316
表示附接点；并且R’、R”和R”’选自氢、C1-C6脂肪族烃和选自以下的保护基团：FMOC和Boc，或者其中R’和R”一起形成脂肪族单环的、脂肪族双环的或脂肪族多环的结构。
在任一前述式的实施方案中提供了一种化合物，其中RN选自：
Figure BDA0003124860200000313
Figure BDA0003124860200000314
其中R’是氢、脂肪族烃或保护基团，并且其中符号
Figure BDA0003124860200000315
表示附接点。
在任一前述式的化合物的实施方案中提供了一种化合物，其中R*在每次出现时独立地选自氢、脂肪族C1-C6烃、芳香族C4-C6烃及其组合，它任选地包含1-3个选自O、N及其组合的杂原子。
在一种实施方案中，本公开内容的利福霉素类似物化合物具有选自由以下组成的组的结构：
Figure BDA0003124860200000321
Figure BDA0003124860200000331
Figure BDA0003124860200000341
Figure BDA0003124860200000351
或其药学上可接受的盐。
在一种实施方案中，本公开内容的利福霉素类似物化合物具有选自由以下组成的组的结构：
Figure BDA0003124860200000352
或其药学上可接受的盐。
在一方面中，本公开内容提供了一种制造具有式(V)的结构的利福霉素类似物化合物的方法：
Figure BDA0003124860200000361
其中：X选自-O-和-NR*-；
R6选自RN、氢、脂肪族C1-C20烃、芳香族C1-C20烃、杂芳香族C1-C20烃、环状脂肪族C1-C20烃、杂环C1-C20烃及其组合，
RN选自：
Figure BDA0003124860200000362
Figure BDA0003124860200000363
其中符号
Figure BDA0003124860200000364
表示附接点；并且R’、R”和R”’选自氢、C1-C6脂肪族烃和选自以下的保护基团：FMOC和Boc，或者其中R’和R”一起形成脂肪族单环的、脂肪族双环的或脂肪族多环的结构；并且
R*在每次出现时独立地选自氢、脂肪族C1-C20烃、芳香族C1-C20烃、杂芳香族C1-C20烃、环状脂肪族C1-C20烃、杂环C1-C20烃及其组合，它还包含0-8个选自卤素、O、N和S及其组合的杂原子，
所述方法包括以下步骤：
(a)使具有以下结构的利福霉素S：
Figure BDA0003124860200000371
与具有式(VI)的结构的化合物：
Figure BDA0003124860200000372
接触，
其中X’选自-OH和-NHR*；以及
(b)将步骤(a)的产物用氧化剂进行处理。
在一方面中，本公开内容提供了一种制造具有式(V’)的结构的利福霉素类似物化合物的方法：
Figure BDA0003124860200000373
其中：X选自-O-和-NR*-；
R6选自RN、氢、脂肪族C1-C20烃、芳香族C1-C20烃、杂芳香族C1-C20烃、环状脂肪族C1-C20烃、杂环C1-C20烃及其组合，
RN选自：
Figure BDA0003124860200000381
Figure BDA0003124860200000382
其中符号
Figure BDA0003124860200000383
表示附接点；并且R’、R”和R”’选自氢、C1-C6脂肪族烃和选自以下的保护基团：FMOC和Boc，或者其中R’和R”一起形成脂肪族单环的、脂肪族双环的或脂肪族多环的结构；并且
R*在每次出现时独立地选自氢、脂肪族C1-C20烃、芳香族C1-C20烃、杂芳香族C1-C20烃、环状脂肪族C1-C20烃、杂环C1-C20烃及其组合，它还包含0-8个选自卤素、O、N和S及其组合的杂原子，
所述方法包括以下步骤：
(a)使具有以下结构的利福霉素S：
Figure BDA0003124860200000384
与具有式(VI’)的结构的化合物：
Figure BDA0003124860200000391
接触，
其中X’选自-OH和-NHR*；以及
(b)将步骤(a)的产物用氧化剂进行处理。
在一方面中，本公开内容提供了一种制造具有以下结构的化合物的方法：
Figure BDA0003124860200000392
所述方法包括以下步骤：
(a)使利福霉素S与具有式(VII)的结构的化合物：
Figure BDA0003124860200000393
接触，
其中PG是保护基团；
(b)将步骤(a)的产物用氧化剂进行处理；以及
(c)去除保护基团PG。
在一种实施方案中，式(VII)的化合物通过从式(VIII)的化合物中去除保护基团PG’来制备，
Figure BDA0003124860200000401
其中，保护基团PG和PG’彼此可以是相同的或不同的。
在一种实施方案中，式(VIII)的化合物通过使式(IX)的化合物：
Figure BDA0003124860200000402
与式(X)的化合物：
Figure BDA0003124860200000403
接触来制备，其中，保护基团PG和PG’彼此可以是相同的或不同的。
在一方面中，本公开内容提供了一种制造具有式(XI)的结构的化合物的方法：
Figure BDA0003124860200000404
其中：R6选自RN、脂肪族C1-C20烃、芳香族C1-C20烃、杂芳香族C1-C20烃、环状脂肪族C1-C20烃、杂环C1-C20烃及其组合，它还包含0-8个选自卤素、O、N和S及其组合的杂原子，并且其中R6任选地被以下中的一种或更多种取代：-F、-Cl、-Br、-I、-OH、-OR*、-NO、-NO2、-NO3、-O-NO、-N3、-NH2、-NHR*、-N(R*)2、-N(R*)3 +、-N(R*)-OH、-O-N(R*)2、-N(R*)-O-R*、-CN、-NC、-(C＝O)-R*、-CHO、-CO2H、-CO2R*、-(C＝O)-S-R*、-O-(C＝O)-H、-O-(C＝O)-R*、-S-(C＝O)-R*、-(C＝O)-NH2、-(C＝O)-N(R*)2、-(C＝O)-NHNH2、-O-(C＝O)-NHNH2、-(C＝S)-NH2、-(C＝S)-N(R*)2、-N(R*)-CHO、-N(R*)-(C＝O)-R*、-SCN、-NCS、-NSO、-SSR*、-SO2R*、-SO2-N(R*)2、-S(＝O)-OR*、-S(＝O)-R*、-Si(R*)3、-CF3、-O-CF3及其组合；
RN选自：
Figure BDA0003124860200000411
Figure BDA0003124860200000412
其中符号
Figure BDA0003124860200000413
表示附接点；并且R’、R”和R”’选自氢、C1-C6脂肪族烃和选自以下的保护基团：FMOC和Boc，或者其中R’和R”一起形成脂肪族单环的、脂肪族双环的或脂肪族多环的结构；并且
R*在每次出现时独立地选自氢、脂肪族C1-C20烃、芳香族C1-C20烃、杂芳香族C1-C20烃、环状脂肪族C1-C20烃、杂环C1-C20烃及其组合，它还包含0-8个选自卤素、O、N和S及其组合的杂原子，
所述方法包括使具有式(XII)的结构的化合物：
Figure BDA0003124860200000421
与具有结构R6-OH的醇接触。
在一方面中，本公开内容提供了一种制造具有式(XIII)的结构的化合物的方法：
Figure BDA0003124860200000422
其中：A选自键(A不存在)或脂肪族C1-C20烃；
Rcy是C3-C14环脂肪族烃，它还包含0-8个选自卤素、O、N和S及其组合的杂原子，并且其中Rcy任选地被以下中的一种或更多种取代：-F、-Cl、-Br、-I、-OH、-OR*、-NO、-NO2、-NO3、-O-NO、-N3、-NH2、-NHR*、-N(R*)2、-N(R*)3 +、-N(R*)-OH、-O-N(R*)2、-N(R*)-O-R*、-CN、-NC、-(C＝O)-R*、-CHO、-CO2H、-CO2R*、-(C＝O)-S-R*、-O-(C＝O)-H、-O-(C＝O)-R*、-S-(C＝O)-R*、-(C＝O)-NH2、-(C＝O)-N(R*)2、-(C＝O)-NHNH2、-O-(C＝O)-NHNH2、-(C＝S)-NH2、-(C＝S)-N(R*)2、-N(R*)-CHO、-N(R*)-(C＝O)-R*、-SCN、-NCS、-NSO、-SSR*、-SO2R*、-SO2-N(R*)2、-S(＝O)-OR*、-S(＝O)-R*、-Si(R*)3、-CF3、-O-CF3及其组合；并且
R*在每次出现时独立地选自氢、脂肪族C1-C20烃、芳香族C1-C20烃、杂芳香族C1-C20烃、环状脂肪族C1-C20烃、杂环C1-C20烃及其组合，它还包含0-8个选自卤素、O、N和S及其组合的杂原子，
所述方法包括使具有式(XII)的结构的化合物：
Figure BDA0003124860200000431
与具有结构Rcy-A-OH的醇接触。
在一方面中，本公开内容提供了一种制造具有式(XIII’)的结构的化合物的方法：
Figure BDA0003124860200000432
其中：A选自键(A不存在)或脂肪族C1-C20烃；
Rcy是C3-C14环脂肪族烃，它还包含0-8个选自卤素、O、N和S及其组合的杂原子，并且其中Rcy任选地被以下中的一种或更多种取代：-F、-Cl、-Br、-I、-OH、-OR*、-NO、-NO2、-NO3、-O-NO、-N3、-NH2、-NHR*、-N(R*)2、-N(R*)3 +、-N(R*)-OH、-O-N(R*)2、-N(R*)-O-R*、-CN、-NC、-(C＝O)-R*、-CHO、-CO2H、-CO2R*、-(C＝O)-S-R*、-O-(C＝O)-H、-O-(C＝O)-R*、-S-(C＝O)-R*、-(C＝O)-NH2、-(C＝O)-N(R*)2、-(C＝O)-NHNH2、-O-(C＝O)-NHNH2、-(C＝S)-NH2、-(C＝S)-N(R*)2、-N(R*)-CHO、-N(R*)-(C＝O)-R*、-SCN、-NCS、-NSO、-SSR*、-SO2R*、-SO2-N(R*)2、-S(＝O)-OR*、-S(＝O)-R*、-Si(R*)3、-CF3、-O-CF3及其组合；并且
R*在每次出现时独立地选自氢、脂肪族C1-C20烃、芳香族C1-C20烃、杂芳香族C1-C20烃、环状脂肪族C1-C20烃、杂环C1-C20烃及其组合，它还包含0-8个选自卤素、O、N和S及其组合的杂原子，
所述方法包括使具有式(XII)的结构的化合物：
Figure BDA0003124860200000441
与具有结构Rcy-A-OH的醇接触。
在一方面中，本公开内容提供了一种制造具有式(XIV)的结构的化合物的方法：
Figure BDA0003124860200000442
其中：Y在每次出现时选自-O-和-NR’R”-；n在每次出现时独立地是从1-6的整数；并且R’、R”和R”’各自独立地选自氢、脂肪族C1-C20烃；所述方法包括使具有式(XII)的结构的化合物：
Figure BDA0003124860200000451
与具有结构R″R′N-Y-(CH2)n-Y-(CH2)n-OH的醇接触。
在一方面中，本公开内容提供了一种制造具有式(XIV’)的结构的化合物的方法：
Figure BDA0003124860200000452
其中：Y在每次出现时选自-O-和-NR’R”-；n在每次出现时独立地是从1至6的整数；并且R’、R”和R”’各自独立地选自氢和脂肪族C1-C20烃；所述方法包括使具有式(XII’)的结构的化合物：
Figure BDA0003124860200000453
与具有结构R″R′N-Y-(CH2)n-Y-(CH2)n-OH的醇接触。
在一种实施方案中，式(XII)的化合物通过使利福霉素S与2-氨基-5-溴苯酚接触，并且用氧化剂处理产物来制备。
在一种实施方案中，式(XII’)的化合物通过使利福霉素S与2-氨基-4-溴苯酚接触，并且用氧化剂处理产物来制备。
在一方面中，本公开内容提供了一种药物组合物，所述药物组合物包含如上文描述的任一种或更多种化合物或其药学上可接受的盐，以及药学上可接受的载体。
在另一方面中，本公开内容提供了一种药物剂型，所述药物剂型包含如上文描述的任一种或更多种化合物或其药学上可接受的盐，或者如上文描述的药物组合物。
在另一方面中，本公开内容提供了一种防止或抑制细菌的生长的方法，所述方法包括施用有效量的利福霉素类似物化合物，其具有根据如本文提供的式(A)、式(B)、式(I)、式(I’)、式(II)、式(II’)、式(III)、式(III’)、式(IV)、式(IV’)、式(V)、式(V’)中的任一种的结构。
在一种实施方案中，细菌是革兰氏阳性细菌。
在一种实施方案中，细菌是耐青霉素细菌。
在一种实施方案中，细菌是金黄色葡萄球菌。
在一种实施方案中，细菌是耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)。
在一种实施方案中，细菌是耐万古霉素金黄色葡萄球菌(VRSA)。
在一种实施方案中，细菌是甲氧西林易感性金黄色葡萄球菌(MSSA)。
在又一方面中，本公开内容提供了治疗需要相应治疗的受试者的细菌感染的方法，所述方法包括向受试者施用有效量的利福霉素类似物化合物，其具有根据如本文提供的式(A)、式(B)、式(I)、式(I’)、式(II)、式(II’)、式(III)、式(III’)、式(IV)、式(IV’)、式(V)、式(V’)中的任一种的结构。
在一种实施方案中，细菌感染是革兰氏阳性细菌感染。
在一种实施方案中，细菌感染是耐青霉素细菌感染。
在一种实施方案中，细菌感染是金黄色葡萄球菌感染。
在一种实施方案中，细菌感染是耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)感染。
在一种实施方案中，细菌感染是耐万古霉素金黄色葡萄球菌(VRSA)感染。
在一种实施方案中，其中细菌感染是甲氧西林易感性金黄色葡萄球菌(MSSA)感染。
在一种实施方案中，细菌感染是细胞内细菌感染。
在一种实施方案中，受试者是人类。
在一种实施方案中，方法还包括施用第二治疗剂。
在一种实施方案中，第二治疗剂是第二抗生素。
在一种实施方案中，第二抗生素针对金黄色葡萄球菌是有效的。
在一种实施方案中，第二抗生素选自氨基糖苷、β-内酰胺、大环内酯、环肽、四环素、氟喹啉、氟喹诺酮和噁唑烷酮。
在一种实施方案中，第二抗生素选自克林霉素(clindamycin)、新生霉素(novobiocin)、瑞他莫林(retapamulin)、达托霉素、西他沙星、替考拉宁、三氯生、萘啶酮(napthyridone)、雷德唑胺(radezolid)、多柔比星、氨苄西林、万古霉素、亚胺培南(imipenem)、多利培南(doripenem)、吉西他滨、达巴万星和阿奇霉素。
在一种实施方案中，化合物被口服地、局部地、鼻内地、静脉内地、肌内地或皮下地施用至受试者。
在另一方面中，本文提供了一种抗体-药物缀合物，所述抗体-药物缀合物包含抗体或抗体的抗原结合片段，并且还包含利福霉素类似物。在本发明的抗体-药物缀合物的一些实施方案中，抗体或抗体的抗原结合片段结合至感染性疾病相关的靶标。可用于本公开内容的感染性疾病相关的靶标包括但不限于巨噬细胞清道夫受体1(MSR1)，壁磷壁酸(WTA)，金黄色葡萄球菌抗原诸如蛋白A、IsdA、IsdB、IsdC、IsdE、IsdH、ClfA、ClfB、CP5、CP8、SdrC、SdrD、SdrE、FnBpA、FnBpB、Can、多糖聚-N-乙酰葡糖胺(PNAG)和SasG。
在一些实施方案中，抗体或抗体的抗原结合片段结合至MSR1。在一些实施方案中，抗体或抗体的抗原结合片段结合至WTA。在一些实施方案中，抗体或抗体的抗原结合片段结合至蛋白A。
在另一方面中，本文提供了抗体-药物缀合物，其包含抗体或抗体的抗原结合片段并且还包含利福霉素类似物，抗体或抗体的抗原结合片段结合被称为MSR1的膜糖蛋白受体。抗体尤其可用于靶向表达MSR1的细胞，诸如巨噬细胞。
在另一方面中，本文提供了抗体-药物缀合物，其包含抗体或抗体的抗原结合片段并且还包含利福霉素类似物，抗体或抗体的抗原结合片段结合壁磷壁酸(WTA)。
在另一方面中，本文提供了抗体-药物缀合物，其包含抗体或抗体的抗原结合片段并且还包含利福霉素类似物，抗体或抗体的抗原结合片段结合蛋白A。
在另一方面中，本文提供了一种药物组合物，其包含抗体-药物缀合物和药学上可接受的载体，所述抗体-药物缀合物包含重组人抗体或其片段，还包含利福霉素类似物。在一些实施方案中，重组人抗体或其片段特异性地结合感染性疾病相关的靶标。在一些实施方案中，重组人抗体或其片段特异性地结合MSR1、WTA或蛋白A。在相关方面中，实施方案涉及一种组合物，该组合物是抗体-药物缀合物和第二治疗剂的组合，抗体-药物缀合物包含本文所描述的抗体并且还包含利福霉素类似物。在一种实施方案中，第二治疗剂是有利地与包含本文描述的抗体的抗体-药物缀合物组合的任何剂。在一种实施方案中，第二治疗剂是抗体-药物缀合物，其包含本文描述的缀合至第二药物或第二治疗剂的抗体。本文别处公开了涉及抗体的示例性组合疗法、联合制剂(co-formulation)和ADC。
本文还提供了包含利福霉素类似物的反应性连接基-有效载荷(linker-payload)，例如，可用于制备包含抗体的抗体-药物缀合物的、如本文所提供的具有根据式(A)、式(B)、式(I)、式(I’)、式(II)、式(II’)、式(III)、式(III’)、式(IV)、式(IV’)、式(V)、式(V’)、式(B-1)、式(B-2)的任何实施方案的结构的化合物。本文还提供了可用于制备包含利福霉素类似物的抗体-药物缀合物的修饰的抗体(modified antibody)和修饰的抗原结合片段。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段特异性地结合感染性疾病相关的靶标。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段特异性地结合MSR1、WTA或蛋白A。
本文还提供了防止或抑制细菌的生长的方法，所述方法包括施用有效量的抗体-药物缀合物(ADC)，抗体-药物缀合物(ADC)包含抗体或其抗原结合片段和利福霉素类似物。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段特异性地结合感染性疾病相关的靶标。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段特异性地结合MSR1、WTA或蛋白A。
本文还提供了治疗方法，治疗方法包括向有相应需要的受试者施用有效量的ADC，所述ADC包含抗体或其抗原结合片段和利福霉素类似物。治疗方法包括向受试者施用治疗有效量的包含ADC的药物组合物，所述ADC包含抗体或其抗原结合片段和利福霉素类似物。所治疗的紊乱是通过靶向感染性疾病相关的靶标和/或通过施用抗生素剂而康复(improve)、改善(ameliorate)、抑制或预防的任何疾病或状况。在一些实施方案中，疾病或状况是增殖性疾病、代谢性疾病、炎症、神经退行性疾病或与糖皮质激素受体信号传导相关的疾病、紊乱或状况。在一些这样的实施方案中，与施用未缀合的利福霉素类似物相关的副作用被减少。本文提供了本文所描述的抗体、其抗原结合部分或者包含抗体或其抗原结合片段的ADC用于治疗本文描述的任何疾病、紊乱或状况的用途。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段特异性地结合感染性疾病相关的靶标。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段特异性地结合MSR1、WTA或蛋白A。
本文还提供了用于治疗、减轻(attenuate)或改善与葡萄球菌感染例如金黄色葡萄球菌感染相关的疾病或紊乱或状况和/或用于改善与这样的疾病、紊乱或状况相关的至少一种症状的治疗方法，所述治疗方法包括向有相应需要的受试者施用利福霉素类似物或者包含抗体或其抗原结合片段和利福霉素类似物的ADC。这样的疾病、紊乱或状况可以是蜂窝组织炎、菌血症、皮肤坏死(dermonecrosis)、眼睑感染(eyelid infection)、眼部感染(eye infection)、新生儿结膜炎、骨髓炎、脓疱病、疖子、烫伤样皮肤综合征、食物中毒、肺炎、外科手术感染、尿道感染(urinary tract infection)、烧伤感染、脑膜炎、心内膜炎、败血症、中毒性休克综合征或脓毒性关节炎(septic arthritis)。在一些实施方案中，受试者具有假肢关节(prosthetic joint)，并且本文公开的利福霉素类似物或包含抗体或其抗原结合片段和利福霉素类似物的ADC用于治疗和/或预防假肢关节周围的组织的金黄色葡萄球菌感染。在一些实施方案中，受试者具有导管，并且本文公开的利福霉素类似物或包含抗体或其抗原结合片段和利福霉素类似物的ADC用于治疗和/或预防导管的和/或导管周围的组织的金黄色葡萄球菌感染。在一些实施方案中，受试者植入了异物，并且本文公开的利福霉素类似物或包含抗体或其抗原结合片段和利福霉素类似物的ADC用于治疗和/或预防异物的和/或异物周围的组织的金黄色葡萄球菌感染。在一些实施方案中，受试者患有乳腺炎，并且本文公开的抗体可用于治疗乳腺炎。治疗方法包括向有相应需要的受试者施用治疗有效量的药物组合物，所述药物组合物包含利福霉素类似物或者包含抗体或其抗原结合片段和利福霉素类似物的ADC。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段特异性地结合感染性疾病相关的靶标。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段特异性地结合MSR1、WTA或蛋白A。
在另一方面中，本公开内容提供了抗体-药物缀合物，其包含抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段经由连接基或通过连接基-间隔基缀合至本公开内容的任一实施方案的利福霉素类似物化合物。
在各种实施方案中，抗体或其抗原结合片段结合巨噬细胞清道夫受体1(MSR1)。在各种实施方案中，抗体或其抗原结合片段结合壁磷壁酸(WTA)。在各种实施方案中，抗体或其抗原结合片段结合金黄色葡萄球菌蛋白A。
在一种实施方案中，抗体或其抗原结合片段可以包含：(a)重链可变区(HCVR)的互补决定区(CDR)，其包括如表9中列出的氨基酸序列；以及(b)轻链可变区(LCVR)的CDR，其包括如表9中列出的氨基酸序列。
在一种实施方案中，抗MSR1抗体或其抗原结合片段可以包含：
(i)HCDR 1结构域，其包括选自由SEQ ID NO：4、36、52、92和284组成的组的氨基酸序列；
(ii)HCDR 2结构域，其包括选自由SEQ ID NO：6、38、54、94和286组成的组的氨基酸序列；
(iii)HCDR 3结构域，其包括选自由SEQ ID NO：8、40、56、96和288组成的组的氨基酸序列；
(iv)LCDR1结构域，其包括选自由SEQ ID NO：12、44、60、100和292组成的组的氨基酸序列；
(v)LCDR 2结构域，其包括选自由SEQ ID NO：14、46、62、102和294组成的组的氨基酸序列；以及
(vi)LCDR3结构域，其包括选自由SEQ ID NO：16、48、64、104和296组成的组的氨基酸序列。
在一种实施方案中，抗WTA抗体或其抗原结合片段可以包含：(a)重链可变区(HCVR)的互补决定区(CDR)，其包括如表2A中列出的氨基酸序列；以及(b)轻链可变区(LCVR)的CDR，其包括如表2A中列出的氨基酸序列。
在一种实施方案中，抗WTA抗体或其抗原结合片段可以包含：
(i)HCDR 1结构域，其包括选自由SEQ ID NO：470、476、482和488组成的组的氨基酸序列；
(ii)HCDR 2结构域，其包括选自由SEQ ID NO：471、477、483和489组成的组的氨基酸序列；
(iii)HCDR 3结构域，其包括选自由SEQ ID NO：472、478、484和490组成的组的氨基酸序列；
(iv)LCDR1结构域，其包括选自由SEQ ID NO：467、473、479和485组成的组的氨基酸序列；
(v)LCDR 2结构域，其包括选自由SEQ ID NO：468、474、480和486组成的组的氨基酸序列；以及
(vi)LCDR3结构域，其包括选自由SEQ ID NO：469、475、481和487组成的组的氨基酸序列。
在一种实施方案中，抗WTA抗体或其抗原结合片段可以包含：(a)重链可变区(HCVR)的互补决定区(CDR)，其包括如表2B中列出的氨基酸序列；以及(b)轻链可变区(LCVR)的CDR，其包括如表2B中列出的氨基酸序列。
在一种实施方案中，抗WTA抗体或其抗原结合片段可以包含：
(i)HCDR 1结构域，其包括选自由SEQ ID NO：502、508、514、520、526、532、538、544、550、556、562、568和574组成的组的氨基酸序列；
(ii)HCDR 2结构域，其包括选自由SEQ ID NO：503、509、515、521、527、533、539、545、551、557、563、569和575组成的组的氨基酸序列；
(iii)HCDR 3结构域，其包括选自由SEQ ID NO：504、510、516、522、528、534、540、546、552、558、564、570、576和584组成的组的氨基酸序列；
(iv)LCDR1结构域，其包括选自由SEQ ID NO：499、505、511、517、523、529、535、541、547、553、559、565和571组成的组的氨基酸序列；
(v)LCDR 2结构域，其包括选自由SEQ ID NO：500、506、512、518、524、530、536、542、548、554、560、566和572组成的组的氨基酸序列；以及
(vi)LCDR3结构域，其包括选自由SEQ ID NO：501、507、513、519、525、531、537、543、549、555、561、567和573组成的组的氨基酸序列。
在一些实施方案中，抗WTA抗体或其抗原结合片段包含轻链中的V205C突变(EU编号)。
在一种实施方案中，抗蛋白A抗体或其抗原结合片段可以包含：(a)重链可变区(HCVR)的互补决定区(CDR)，其包括如表3A中列出的氨基酸序列；以及(b)轻链可变区(LCVR)的CDR，其包括如表3A中列出的氨基酸序列。
在一种实施方案中，抗蛋白A抗体或其抗原结合片段可以包含：
(i)HCDR 1结构域，其包括选自由SEQ ID NO：632、652和672组成的组的氨基酸序列；
(ii)HCDR 2结构域，其包括选自由SEQ ID NO：634、654和674组成的组的氨基酸序列；
(iii)HCDR 3结构域，其包括选自由SEQ ID NO：636、656和676组成的组的氨基酸序列；
(iv)LCDR1结构域，其包括选自由SEQ ID NO：640、660和680组成的组的氨基酸序列；
(v)LCDR 2结构域，其包括选自由SEQ ID NO：642和662组成的组的氨基酸序列；以及
(vi)LCDR3结构域，其包括选自由SEQ ID NO：644、664和683组成的组的氨基酸序列。
在一些实施方案中，抗蛋白A抗体或其抗原结合片段包含重链Fc中的H435R突变和Y436F突变(EU编号)。
在各种实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含轻链中的C103S突变。
在各种实施方案中，抗体或其抗原结合片段在轻链的103位缀合至本公开内容的化合物。
在一种实施方案中，连接基或连接基-间隔基选自：
Figure BDA0003124860200000531
Figure BDA0003124860200000541
在另一方面中，本公开内容提供了一种抗体-药物缀合物，其具有根据式(XVIII)的结构：
Figure BDA0003124860200000542
其中：
BA是抗体或其抗原结合片段；
RG是选自马来酰亚胺、N-羟基琥珀酰亚胺或琥珀酰亚胺的反应性基团；
SP不存在或是间隔基残基，所述间隔基残基选自由以下组成的组：C1-6烷基、-NH-、-C(O)-、-CH2-CH2-C(O)-NH-、-(CH)u-C(O)-NH-、(-CH2-CH2-O)e、-NH-CH2-CH2-(-O-CH2-CH2)e-C(O)-、-C(O)-(CH2)u-C(O)-、-C(O)-NH-(CH2)v-、-(CH)u-C(O)-NH-(CH2-CH2-O)e-(CH)u-C(O)-NH-、-(CH)2-C(O)-NH-(CH2-CH2-O)8-(CH)2-C(O)-NH-及其组合，其中在每次出现时独立地，下标e是从0至20的整数，下标u是从1至8的整数，并且下标v是从1至8的整数；
AA是选自以下的连接基：缬氨酸-瓜氨酸、瓜氨酸-缬氨酸、缬氨酸-丙氨酸、丙氨酸-缬氨酸、缬氨酸-甘氨酸或甘氨酸-缬氨酸；
B不存在或是
Figure BDA0003124860200000551
其中
Figure BDA0003124860200000552
指示B通过其被键合至所述式中相邻基团的原子；
n是从1至30的整数；并且
PA是根据本公开内容的任一实施方案的利福霉素类似物。
在一种实施方案中，
Figure BDA0003124860200000553
是
Figure BDA0003124860200000554
在一种实施方案中，
Figure BDA0003124860200000555
是
Figure BDA0003124860200000556
在一种实施方案中，
Figure BDA0003124860200000557
是
Figure BDA0003124860200000561
其中，
Figure BDA0003124860200000562
是至抗体或其抗原结合片段的键。在一方面中，本公开内容提供了一种抗体-药物缀合物，其具有根据式(XIX)的结构：
Figure BDA0003124860200000563
其中：
BA是抗体或其抗原结合片段；
RG选自马来酰亚胺、N-羟基琥珀酰亚胺或琥珀酰亚胺；
SP1和SP2独立地不存在或是间隔基，所述间隔基选自由以下组成的组：C1-6烷基、-NH-、-C(O)-、
Figure BDA0003124860200000564
-(CH)u-C(O)-NH-、(-CH2-CH2-O)e、-NH-CH2-CH2-(-O-CH2-CH2)e-C(O)-、-C(O)-(CH2)u-C(O)-、-C(O)-NH-(CH2)v-及其组合，其中下标e是从0至4的整数，下标u是从1至8的整数，并且下标v是从1至8的整数；
AA是选自以下的连接基：缬氨酸-瓜氨酸、瓜氨酸-缬氨酸、缬氨酸-丙氨酸、丙氨酸-缬氨酸、缬氨酸-甘氨酸或甘氨酸-缬氨酸；
PEG是包含在1个和30个之间的聚乙二醇残基的聚乙二醇链；
B不存在或是
Figure BDA0003124860200000565
其中
Figure BDA0003124860200000566
指示B通过其被键合至所述式中相邻基团的原子；
n是从1至30的整数；
m是从0至20的整数；
并且PA是根据本公开内容的任一实施方案的利福霉素类似物。
在一种实施方案中，
Figure BDA0003124860200000571
是
Figure BDA0003124860200000572
在一方面中，本公开内容提供了一种抗体-药物缀合物，所述抗体-药物缀合物包含抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段经由连接基或通过连接基-间隔基缀合至利福霉素类似物有效载荷，所述利福霉素类似物有效载荷具有式(XX)的结构：
Figure BDA0003124860200000573
其中：
X选自-O-、-S-和-NR*-；
Za选自-OR1和-RN；
R1选自键、脂肪族C1-C20烃、芳香族C1-C20烃、杂芳香族C1-C20烃、环状脂肪族C1-C20烃、杂环C1-C20烃及其组合，它们中的每一个还包含0-8个选自卤素、O、N和S的杂原子，并且其中R1任选地被以下中的一种或更多种取代：-F、-Cl、-Br、-I、-OH、-OR*、-NO、-NO2、-NO3、-O-NO、-N3、-NH2、-NHR*、-N(R*)2、-N(R*)3 +、-N(R*)-OH、-O-N(R*)2、-N(R*)-O-R*、-CN、-NC、-(C＝O)-R*、-CHO、-CO2H、-CO2R*、-(C＝O)-S-R*、-O-(C＝O)-H、-O-(C＝O)-R*、-S-(C＝O)-R*、-(C＝O)-NH2、-(C＝O)-N(R*)2、-(C＝O)-NHNH2、-O-(C＝O)-NHNH2、-(C＝S)-NH2、-(C＝S)-N(R*)2、-N(R*)-CHO、-N(R*)-(C＝O)-R*、-SCN、-NCS、-NSO、-SSR*、-SO2R*、-SO2-N(R*)2、-S(＝O)-OR*、-S(＝O)-R*、-Si(R*)3、-CF3、-O-CF3及其组合；
RN选自：
Figure BDA0003124860200000581
Figure BDA0003124860200000582
其中符号
Figure BDA0003124860200000583
表示附接点；并且R’、R”和R”’选自氢、C1-C6脂肪族烃和选自以下的保护基团：FMOC和Boc，或者其中R’和R”一起形成脂肪族单环的、脂肪族双环的或脂肪族多环的结构；
R2、R3和R4独立地选自氢，直链的、支链的或环状的脂肪族C1-C20烃，或者-(C＝O)-R*，它们中的每一个还包含0-8个选自卤素、O、N和S的杂原子；
Ra在每次出现时独立地选自氢、-F、-Cl、-Br、-I、-OH、-OR*、-NH2、-NHR*、-N(R*)2、-N(R*)3 +、-(C＝O)-R*、-CHO、-CO2H、-CO2R*、-SR*、-SO2R*和脂肪族C1-C20烃，它还包含0-8个选自卤素、O、N和S的杂原子，并且其中Ra任选地被以下中的一种或更多种取代：-F、-Cl、-Br、-I、-OH、-OR*；
R*在每次出现时独立地选自氢、脂肪族C1-C20烃、芳香族C1-C20烃、杂芳香族C1-C20烃、环状脂肪族C1-C20烃、杂环C1-C20烃及其组合，它还包含0-8个选自卤素、O、N和S及其组合的杂原子；并且
其中基团Za被键合至连接基。
应当理解的是，基团R1是键(即，R1不存在)；或者是二价基团，即R1能够键合至利福霉素类似物的-O-以及键合至连接基。
在一种实施方案中，-OR1是-O-(即，R1不存在)、
Figure BDA0003124860200000591
Figure BDA0003124860200000592
在一种实施方案中，X是-O-，并且-OR1包括叔胺。在一些这样的实施方案中，-OR1是
Figure BDA0003124860200000593
在一些实施方案中，包含连接基-利福霉素类似物有效载荷的抗体-药物缀合物包括具有一个或更多个抗衡离子的铵盐。任何药学上可接受的抗衡离子可以是合适的。例如，在本公开内容的实施方案中，合适的抗衡离子可以是选自以下的阴离子：F-、Cl-、Br-、I-、OH-、-BF4、CF3SO3 -、硫酸氢根、硫酸根、磷酸二氢根、磷酸氢根或磷酸根、NO3 -、PF6 -、NO2 -、羧酸根、CeFfSO3 -(其中e＝2-10并且f＝2e+1)、乙酸根、天冬氨酸根、苯磺酸根(benzenesulfonate)、苯甲酸根、苯磺酸根(besylate)、碳酸氢根、酒石酸氢根、樟脑磺酸根(camsylate)、碳酸根、柠檬酸根、癸酸根、乙二胺四乙酸根、乙磺酸根(esylate)、富马酸根、葡庚糖酸根、葡萄糖酸根、谷氨酸根、羟乙酸根、glycollyalarsanilate、己酸根、海巴明(hydrabamine)、羟基萘酸根、羟乙基磺酸根、乳酸根、乳糖醛酸根(lactobionate)、苹果酸根、马来酸根、扁桃酸根、甲磺酸根、甲基溴化物、甲基硝酸根(methylnitrate)、粘酸根(mucate)、萘磺酸根(napsylate)、辛酸根、油酸根、双羟萘酸根(pamoate)、泛酸根(pantothenate)、聚半乳糖醛酸根(polygalacturonate)、丙酸根、水杨酸根、硬脂酸根、碱式乙酸根(subacetate)、琥珀酸根、酒石酸根、茶氯酸根(teoclate)、甲苯磺酸根或三乙基碘(triethyliodide)。
在一些实施方案中，Ra不存在。在一些实施方案中，Ra是-OH并且在一次出现时是存在的。
在一方面中，本公开内容提供了抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段经由连接基或通过连接基-间隔基缀合至利福霉素类似物，所述利福霉素类似物具有式(XXI)的结构：
Figure BDA0003124860200000601
其中：
X选自-O-、-S-和-NR*-；
R5选自键；脂肪族C1-C20烃，它还包含0-8个选自卤素、O、N和S的杂原子；
Figure BDA0003124860200000602
其中Y是C或N；
R2、R3和R4独立地选自氢，直链的、支链的或环状的脂肪族C1-C20烃，或者-(C＝O)-R*，它们中的每一个还包含0-8个选自卤素、O、N和S的杂原子；并且
R5c是键或脂肪族C1-C8烃；
其中基团R5被键合至连接基。
应当理解的是，基团R5是键(即，R5不存在)；或者是二价基团，即R5能够键合至利福霉素的-O-以及键合至连接基。
在一种实施方案中，-OR5是-O-(即，R5不存在)、
Figure BDA0003124860200000611
Figure BDA0003124860200000612
在一种实施方案中，X是O，并且-OR5包括叔胺。在一些这样的实施方案中，-OR5是
Figure BDA0003124860200000613
在任何上文的一种实施方案中，R2是甲基、乙基、丙基或异丙基；R3是CH3-(C＝O)-(乙酰基)基团、CH3CH2-(C＝O)-、CH3CH2CH2-(C＝O)-或(CH3)2CH-(C＝O)-；并且R4是氢。
在任何上文的一种实施方案中，R2是甲基，R3是乙酰基，并且R4是氢。
在任何上文的一种实施方案中，化合物选自由以下组成的组：
Figure BDA0003124860200000614
Figure BDA0003124860200000621
Figure BDA0003124860200000631
Figure BDA0003124860200000641
Figure BDA0003124860200000651
Figure BDA0003124860200000661
其中
Figure BDA0003124860200000662
是至连接基的键。
在一方面中，本公开内容提供了抗体-药物缀合物，所述抗体-药物缀合物具有式(XXII)的结构：
Figure BDA0003124860200000663
其中：
BA是抗体或其抗原结合片段；
L是连接基；
SP是选自以下的间隔基：
Figure BDA0003124860200000664
Figure BDA0003124860200000665
Figure BDA0003124860200000671
其中符号
Figure BDA0003124860200000672
表示附接点；并且R’、R”和R”’选自氢、C1-C6脂肪族烃和选自以下的保护基团：芴基甲氧羰基(FMOC)和叔丁氧羰基(Boc)，或者其中R’和R”一起形成脂肪族单环的、脂肪族双环的或脂肪族多环的结构；
Y是C或N；
R’和R”在每次出现时独立地选自氢和C1-6烷基；并且
X选自-O-、-S-和-NR*-。
在一种实施方案中，抗体是抗MSR1抗体或其抗原结合片段，包含：(a)重链可变区(HCVR)的互补决定区(CDR)，其包括如表9中列出的氨基酸序列；以及(b)轻链可变区(LCVR)的CDR，其包括如表9中列出的氨基酸序列。
在一种实施方案中，抗MSR1抗体或其抗原结合片段包含：
(i)HCDR 1结构域，其包括选自由SEQ ID NO：4、36、52、92和284组成的组的氨基酸序列；
(ii)HCDR 2结构域，其包括选自由SEQ ID NO：6、38、54、94和286组成的组的氨基酸序列；
(iii)HCDR 3结构域，其包括选自由SEQ ID NO：8、40、56、96和288组成的组的氨基酸序列；
(iv)LCDR1结构域，其包括选自由SEQ ID NO：12、44、60、100和292组成的组的氨基酸序列；
(v)LCDR 2结构域，其包括选自由SEQ ID NO：14、46、62、102和294组成的组的氨基酸序列；以及
(vi)LCDR3结构域，其包括选自由SEQ ID NO：16、48、64、104和296组成的组的氨基酸序列。
在一种实施方案中，抗MSR1抗体或其抗原结合片段包含：
(i)HCDR 1结构域，其包括SEQ ID NO：52的氨基酸序列；
(ii)HCDR 2结构域，其包括SEQ ID NO：54的氨基酸序列；
(iii)HCDR 3结构域，其包括SEQ ID NO：56的氨基酸序列；
(iv)LCDR1结构域，其包括SEQ ID NO：60的氨基酸序列；
(v)LCDR 2结构域，其包括SEQ ID NO：62的氨基酸序列；和
(vi)LCDR3结构域，其包括SEQ ID NO：64的氨基酸序列。
在一种实施方案中，抗MSR1抗体或其抗原结合片段包含N297Q突变。
在一种实施方案中，抗WTA抗体或其抗原结合片段可以包含：(a)重链可变区(HCVR)的互补决定区(CDR)，其包括如表2A中列出的氨基酸序列；以及(b)轻链可变区(LCVR)的CDR，其包括如表2A中列出的氨基酸序列。
在一种实施方案中，抗WTA抗体或其抗原结合片段可以包含：
(i)HCDR 1结构域，其包括选自由SEQ ID NO：470、476、482和488组成的组的氨基酸序列；
(ii)HCDR 2结构域，其包括选自由SEQ ID NO：471、477、483和489组成的组的氨基酸序列；
(iii)HCDR 3结构域，其包括选自由SEQ ID NO：472、478、484和490组成的组的氨基酸序列；
(iv)LCDR1结构域，其包括选自由SEQ ID NO：467、473、479和485组成的组的氨基酸序列；
(v)LCDR 2结构域，其包括选自由SEQ ID NO：468、474、480和486组成的组的氨基酸序列；以及
(vi)LCDR3结构域，其包括选自由SEQ ID NO：469、475、481和487组成的组的氨基酸序列。
在一种实施方案中，抗WTA抗体或其抗原结合片段可以包含：(a)重链可变区(HCVR)的互补决定区(CDR)，其包括如表2B中列出的氨基酸序列；以及(b)轻链可变区(LCVR)的CDR，其包括如表2B中列出的氨基酸序列。
在一种实施方案中，抗WTA抗体或其抗原结合片段可以包含：
(i)HCDR 1结构域，其包括选自由SEQ ID NO：502、508、514、520、526、532、538、544、550、556、562、568和574组成的组的氨基酸序列；
(ii)HCDR 2结构域，其包括选自由SEQ ID NO：503、509、515、521、527、533、539、545、551、557、563、569和575组成的组的氨基酸序列；
(iii)HCDR 3结构域，其包括选自由SEQ ID NO：504、510、516、522、528、534、540、546、552、558、564、570、576和584组成的组的氨基酸序列；
(iv)LCDR1结构域，其包括选自由SEQ ID NO：499、505、511、517、523、529、535、541、547、553、559、565和571组成的组的氨基酸序列；
(v)LCDR 2结构域，其包括选自由SEQ ID NO：500、506、512、518、524、530、536、542、548、554、560、566和572组成的组的氨基酸序列；以及
(vi)LCDR3结构域，其包括选自由SEQ ID NO：501、507、513、519、525、531、537、543、549、555、561、567和573组成的组的氨基酸序列。
在一些实施方案中，抗WTA抗体或其抗原结合片段包含轻链中的V205C突变(EU编号)。
在一种实施方案中，抗WTA抗体或其抗原结合片段来源于美国专利申请公布20140356375(其通过引用以其整体并入本文)中描述的抗体4497。在一种实施方案中，抗WTA抗体来源于抗体4497并且还包含轻链中的V205C突变。
在一种实施方案中，抗WTA抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID No：568-569-570-565-566-567的HCDR 1-HCDR 2-HCDR 3-LCDR 1-LCDR2-LCDR 3。
在一些实施方案中，抗WTA抗体或其抗原结合片段包含在重链可变区(HCVR)氨基酸序列SEQ ID NO：586内的三个重链互补决定区(HCDR1、HCDR2和HCDR3)；以及在轻链可变区(LCVR)氨基酸序列SEQ ID NO：585内的三个轻链互补决定区(LCDR1、LCDR2和LCDR3)。
在一些实施方案中，抗WTA抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：586的HCVR氨基酸序列和SEQ ID NO：585的LCVR氨基酸序列。
在一些实施方案中，抗WTA抗体包含SEQ ID NO：602的重链氨基酸序列和SEQ IDNO：587或SEQ ID NO：589的轻链氨基酸序列。在一些实施方案中，抗WTA抗体或其抗原结合片段包含轻链中的V205C突变。
在一种实施方案中，抗蛋白A抗体或其抗原结合片段可以包含：(a)重链可变区(HCVR)的互补决定区(CDR)，其包括如表3A中列出的氨基酸序列；以及(b)轻链可变区(LCVR)的CDR，其包括如表3A中列出的氨基酸序列。
在一种实施方案中，抗蛋白A抗体或其抗原结合片段可以包含：
(i)HCDR 1结构域，其包括选自由SEQ ID NO：632、652和672组成的组的氨基酸序列；
(ii)HCDR 2结构域，其包括选自由SEQ ID NO：634、654和674组成的组的氨基酸序列；
(iii)HCDR 3结构域，其包括选自由SEQ ID NO：636、656和676组成的组的氨基酸序列；
(iv)LCDR1结构域，其包括选自由SEQ ID NO：640、660和680组成的组的氨基酸序列；
(v)LCDR 2结构域，其包括选自由SEQ ID NO：642和662组成的组的氨基酸序列；以及
(vi)LCDR3结构域，其包括选自由SEQ ID NO：644、664和683组成的组的氨基酸序列。
在一些实施方案中，抗蛋白A抗体或其抗原结合片段包含重链Fc中的H435R突变和Y436F突变(EU编号)。
在一种实施方案中，抗蛋白A抗体或其抗原结合片段包含在重链可变区(HCVR)氨基酸序列SEQ ID NO：630内的三个重链互补决定区(HCDR1、HCDR2和HCDR3)；以及在轻链可变区(LCVR)氨基酸序列SEQ ID NO：638内的三个轻链互补决定区(LCDR1、LCDR2和LCDR3)。在一种实施方案中，抗蛋白A抗体或其抗原结合片段包含一组六个CDR(HCDR1-HCDR2-HCDR3-LCDR1-LCDR2-LCDR3)，其包括SEQ ID NO：632-634-636-640-642-644。
在一种实施方案中，抗蛋白A抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：630的HCVR氨基酸序列和SEQ ID NO：638的LCVR氨基酸序列。
在一种实施方案中，抗蛋白A抗体包括SEQ ID NO：666的重链氨基酸序列和SEQ IDNO：668的轻链氨基酸序列。在一种实施方案中，抗蛋白A抗体还包含重链Fc中的H435R突变和Y436F突变(EU编号)。在一种实施方案中，抗蛋白A抗体或其抗原结合片段在轻链位置103被缀合至本公开内容的化合物。
在各种实施方案中，抗体或其抗原结合片段包括轻链中的C103S突变。
在各种实施方案中，抗体或其抗原结合片段在轻链的103位缀合至本公开内容的化合物。
在一种实施方案中，L是具有以下式的连接基：
Figure BDA0003124860200000711
其中：
RG选自马来酰亚胺、N-羟基琥珀酰亚胺或琥珀酰亚胺；
SP1和SP2独立地不存在或是间隔基，所述间隔基选自由以下组成的组：
Figure BDA0003124860200000712
C1-6烷基、-NH-、-C(O)-、-CH2-CH2-C(O)-NH-、-(CH)u-C(O)-NH-、(-CH2-CH2-O)e、-NH-CH2-CH2-(-O-CH2-CH2)e-C(O)-、-C(O)-(CH2)u-C(O)-、-C(O)-NH-(CH2)v-及其组合，其中下标e是从0至4的整数，下标u是从1至8的整数，并且下标v是从1至8的整数；
AA2-4是包含从2个至4个氨基酸的肽单元；并且
PEG是包含在1个和30个之间的聚乙二醇残基的聚乙二醇链。
在一种实施方案中，AA2-4是选自以下的二肽：缬氨酸-瓜氨酸、瓜氨酸-缬氨酸、缬氨酸-丙氨酸、丙氨酸-缬氨酸、缬氨酸-甘氨酸、甘氨酸-缬氨酸、或丙氨酸-甘氨酸、丙氨酸-丙氨酸。
在一种实施方案中，AA2-4是缬氨酸-瓜氨酸。
在一种实施方案中，SP是
Figure BDA0003124860200000721
并且R’和R”各自是C1-6烷基。
在一种实施方案中，SP是
Figure BDA0003124860200000722
并且R’和R”各自是甲基。
在一种实施方案中，SP1和SP2各自是
Figure BDA0003124860200000723
在一种实施方案中，PEG包含8个聚乙二醇单元。
在一种实施方案中，BA是抗体或其抗原结合片段；
L是具有以下式的连接基：
Figure BDA0003124860200000724
其中：
RG选自马来酰亚胺或琥珀酰亚胺；
SP1和SP2各自是
Figure BDA0003124860200000725
AA2-4是缬氨酸-瓜氨酸；
PEG是包含8个聚乙二醇残基的聚乙二醇链；
SP是
Figure BDA0003124860200000726
并且R’和R”各自是甲基；并且
X是-O-。
在一种实施方案中，抗体-药物缀合物具有以下结构：
Figure BDA0003124860200000731
其中BA是抗体或其抗原结合片段。
在另一方面中，本公开内容提供了分离的抗体或其抗原结合片段，其中抗体或其抗原结合片段直接地或者通过连接基或连接基-间隔基缀合至有效载荷，所述有效载荷具有选自由以下组成的组的结构：
Figure BDA0003124860200000732
Figure BDA0003124860200000741
Figure BDA0003124860200000751
Figure BDA0003124860200000761
Figure BDA0003124860200000771
在一种实施方案中，有效载荷具有选自以下的结构：
Figure BDA0003124860200000781
在一种实施方案中，有效载荷通过连接基缀合，连接基具有以下结构：
Figure BDA0003124860200000782
其中：
RG选自马来酰亚胺或琥珀酰亚胺；
SP1和SP2独立地不存在或是间隔基，所述间隔基选自由以下组成的组：
Figure BDA0003124860200000783
C1-6烷基、-NH-、-C(O)-、-CH2-CH2-C(O)-NH-、-(CH)u-C(O)-NH-、(-CH2-CH2-O)e、-NH-CH2-CH2-(-O-CH2-CH2)e-C(O)-、-C(O)-(CH2)u-C(O)-、-C(O)-NH-(CH2)v-及其组合，其中下标e是从0至4的整数，下标u是从1至8的整数，并且下标v是从1至8的整数；
AA2-4是包含从2个至4个氨基酸的肽单元；并且
PEG是包含在1个和30个之间的聚乙二醇残基的聚乙二醇链。
在一种实施方案中，AA2-4是选自以下的二肽：缬氨酸-瓜氨酸、瓜氨酸-缬氨酸、缬氨酸-丙氨酸、丙氨酸-缬氨酸、缬氨酸-甘氨酸或甘氨酸-缬氨酸。
在一种实施方案中，AA2-4是缬氨酸-瓜氨酸。
在一种实施方案中，SP是
Figure BDA0003124860200000791
并且R’和R”各自是C1-6烷基。
在一种实施方案中，SP是
Figure BDA0003124860200000792
并且R’和R”各自是甲基。
在一种实施方案中，SP1和SP2各自是
Figure BDA0003124860200000793
在一种实施方案中，PEG包含8个聚乙二醇单元。
在一种实施方案中，有效载荷通过连接基缀合，连接基具有以下结构：
Figure BDA0003124860200000794
在一种实施方案中，有效载荷通过连接基缀合，连接基-有效载荷具有以下结构：
Figure BDA0003124860200000795
其中
Figure BDA0003124860200000796
是至抗体或其抗原结合片段的键。
在一种实施方案中，有效载荷通过连接基缀合，连接基-有效载荷具有以下结构：
Figure BDA0003124860200000801
其中
Figure BDA0003124860200000802
是至抗体或其抗原结合片段的键。
在一种实施方案中，结合巨噬细胞清道夫受体1(MSR1)的抗体或其抗原结合片段包含：(a)重链可变区(HCVR)的互补决定区(CDR)，其包括如表9中列出的氨基酸序列；以及(b)轻链可变区(LCVR)的CDR，其包括如表9中列出的氨基酸序列。
在一种实施方案中，抗MSR1抗体或其抗原结合片段包含：
(i)HCDR 1结构域，其包括选自由SEQ ID NO：4、36、52、92和284组成的组的氨基酸序列；
(ii)HCDR 2结构域，其包括选自由SEQ ID NO：6、38、54、94和286组成的组的氨基酸序列；
(iii)HCDR 3结构域，其包括选自由SEQ ID NO：8、40、56、96和288组成的组的氨基酸序列；
(iv)LCDR1结构域，其包括选自由SEQ ID NO：12、44、60、100和292组成的组的氨基酸序列；
(v)LCDR 2结构域，其包括选自由SEQ ID NO：14、46、62、102和294组成的组的氨基酸序列；以及
(vi)LCDR3结构域，其包括选自由SEQ ID NO：16、48、64、104和296组成的组的氨基酸序列。
在一种实施方案中，抗MSR1抗体或其抗原结合片段包含：
(i)HCDR 1结构域，其包括SEQ ID NO：52的氨基酸序列；
(ii)HCDR 2结构域，其包括SEQ ID NO：54的氨基酸序列；
(iii)HCDR 3结构域，其包括SEQ ID NO：56的氨基酸序列；
(iv)LCDR1结构域，其包括SEQ ID NO：60的氨基酸序列；
(v)LCDR 2结构域，其包括SEQ ID NO：62的氨基酸序列；和
(vi)LCDR3结构域，其包括SEQ ID NO：64的氨基酸序列。
在一种实施方案中，抗MSR1抗体或其抗原结合片段包含N297Q突变。
在一种实施方案中，抗WTA抗体或其抗原结合片段可以包含：(a)重链可变区(HCVR)的互补决定区(CDR)，其包括如表2A中列出的氨基酸序列；以及(b)轻链可变区(LCVR)的CDR，其包括如表2A中列出的氨基酸序列。
在一种实施方案中，抗WTA抗体或其抗原结合片段可以包含：
(i)HCDR 1结构域，其包括选自由SEQ ID NO：470、476、482和488组成的组的氨基酸序列；
(ii)HCDR 2结构域，其包括选自由SEQ ID NO：471、477、483和489组成的组的氨基酸序列；
(iii)HCDR 3结构域，其包括选自由SEQ ID NO：472、478、484和490组成的组的氨基酸序列；
(iv)LCDR1结构域，其包括选自由SEQ ID NO：467、473、479和485组成的组的氨基酸序列；
(v)LCDR 2结构域，其包括选自由SEQ ID NO：468、474、480和486组成的组的氨基酸序列；以及
(vi)LCDR3结构域，其包括选自由SEQ ID NO：469、475、481和487组成的组的氨基酸序列。
在一种实施方案中，抗WTA抗体或其抗原结合片段可以包含：(a)重链可变区(HCVR)的互补决定区(CDR)，其包括如表2B中列出的氨基酸序列；以及(b)轻链可变区(LCVR)的CDR，其包括如表2B中列出的氨基酸序列。
在一种实施方案中，抗WTA抗体或其抗原结合片段可以包含：
(i)HCDR 1结构域，其包括选自由SEQ ID NO：502、508、514、520、526、532、538、544、550、556、562、568和574组成的组的氨基酸序列；
(ii)HCDR 2结构域，其包括选自由SEQ ID NO：503、509、515、521、527、533、539、545、551、557、563、569和575组成的组的氨基酸序列；
(iii)HCDR 3结构域，其包括选自由SEQ ID NO：504、510、516、522、528、534、540、546、552、558、564、570、576和584组成的组的氨基酸序列；
(iv)LCDR1结构域，其包括选自由SEQ ID NO：499、505、511、517、523、529、535、541、547、553、559、565和571组成的组的氨基酸序列；
(v)LCDR 2结构域，其包括选自由SEQ ID NO：500、506、512、518、524、530、536、542、548、554、560、566和572组成的组的氨基酸序列；以及
(vi)LCDR3结构域，其包括选自由SEQ ID NO：501、507、513、519、525、531、537、543、549、555、561、567和573组成的组的氨基酸序列。
在一些实施方案中，抗WTA抗体或其抗原结合片段包含轻链中的V205C突变(EU编号)。
在一种实施方案中，抗WTA抗体或其抗原结合片段来源于美国专利申请公布20140356375(其通过引用以其整体并入本文)中描述的抗体4497。在一种实施方案中，抗WTA抗体来源于抗体4497并且还包含轻链中的V205C突变。
在一种实施方案中，抗WTA抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID No：568-569-570-565-566-567的HCDR 1-HCDR 2-HCDR 3-LCDR 1-LCDR2-LCDR 3。
在一些实施方案中，抗WTA抗体或其抗原结合片段包含在重链可变区(HCVR)氨基酸序列SEQ ID NO：586内的三个重链互补决定区(HCDR1、HCDR2和HCDR3)；以及在轻链可变区(LCVR)氨基酸序列SEQ ID NO：585内的三个轻链互补决定区(LCDR1、LCDR2和LCDR3)。
在一些实施方案中，抗WTA抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：586的HCVR氨基酸序列和SEQ ID NO：585的LCVR氨基酸序列。
在一些实施方案中，抗WTA抗体包含SEQ ID NO：602的重链氨基酸序列和SEQ IDNO：587或SEQ ID NO：589的轻链氨基酸序列。在一些实施方案中，抗WTA抗体或其抗原结合片段包含轻链中的V205C突变。
在一种实施方案中，抗蛋白A抗体或其抗原结合片段可以包含：(a)重链可变区(HCVR)的互补决定区(CDR)，其包括如表3A中列出的氨基酸序列；以及(b)轻链可变区(LCVR)的CDR，其包括如表3A中列出的氨基酸序列。
在一种实施方案中，抗蛋白A抗体或其抗原结合片段可以包含：
(i)HCDR 1结构域，其包括选自由SEQ ID NO：632、652和672组成的组的氨基酸序列；
(ii)HCDR 2结构域，其包括选自由SEQ ID NO：634、654和674组成的组的氨基酸序列；
(iii)HCDR 3结构域，其包括选自由SEQ ID NO：636、656和676组成的组的氨基酸序列；
(iv)LCDR1结构域，其包括选自由SEQ ID NO：640、660和680组成的组的氨基酸序列；
(v)LCDR 2结构域，其包括选自由SEQ ID NO：642和662组成的组的氨基酸序列；以及
(vi)LCDR3结构域，其包括选自由SEQ ID NO：644、664和683组成的组的氨基酸序列。
在一些实施方案中，抗蛋白A抗体或其抗原结合片段包含重链Fc中的H435R突变和Y436F突变(EU编号)。
在一些实施方案中，抗蛋白A抗体或其抗原结合片段包含重链Fc中的H435R突变和Y436F突变(EU编号)。
在一种实施方案中，抗蛋白A抗体或其抗原结合片段包含在重链可变区(HCVR)氨基酸序列SEQ ID NO：630内的三个重链互补决定区(HCDR1、HCDR2和HCDR3)；以及在轻链可变区(LCVR)氨基酸序列SEQ ID NO：638内的三个轻链互补决定区(LCDR1、LCDR2和LCDR3)。在一种实施方案中，抗蛋白A抗体或其抗原结合片段包含一组六个CDR(HCDR1-HCDR2-HCDR3-LCDR1-LCDR2-LCDR3)，其包括SEQ ID NO：632-634-636-640-642-644。
在一种实施方案中，抗蛋白A抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：630的HCVR氨基酸序列和SEQ ID NO：638的LCVR氨基酸序列。
在一种实施方案中，抗蛋白A抗体包括SEQ ID NO：666的重链氨基酸序列和SEQ IDNO：668的轻链氨基酸序列。在一种实施方案中，抗蛋白A抗体还包含重链Fc中的H435R突变和Y436F突变(EU编号)。在一种实施方案中，抗蛋白A抗体或其抗原结合片段在轻链位置103被缀合至本公开内容的化合物。
在各种实施方案中，抗体或其抗原结合片段包括轻链中的C103S突变。
在各种实施方案中，抗体或其抗原结合片段在轻链的103位缀合至本公开内容的化合物。
在一方面中，本公开内容提供了防止或抑制细菌的生长的方法，所述方法包括施用有效量的如本文描述的抗体-药物缀合物。
在一种实施方案中，细菌是革兰氏阳性细菌。
在一种实施方案中，细菌是耐青霉素细菌。
在一种实施方案中，细菌是金黄色葡萄球菌。
在一种实施方案中，细菌选自耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)、耐万古霉素金黄色葡萄球菌(VRSA)和甲氧西林易感性金黄色葡萄球菌(MSSA)。
在一方面中，本公开内容提供了治疗需要相应治疗的受试者的细菌感染的方法，所述方法包括向受试者施用有效量的如本文描述的抗体-药物缀合物。
在一种实施方案中，细菌感染是革兰氏阳性细菌感染。
在一种实施方案中，细菌感染是耐青霉素细菌感染。
在一种实施方案中，细菌感染是金黄色葡萄球菌感染。
在一种实施方案中，细菌感染选自耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)感染、耐万古霉素金黄色葡萄球菌(VRSA)感染和甲氧西林易感性金黄色葡萄球菌(MSSA)感染。
在一种实施方案中，细菌感染是细胞内细菌感染。
在一种实施方案中，受试者是人类。
在一种实施方案中，方法还包括施用第二治疗剂。
在一种实施方案中，第二治疗剂是第二抗生素。
在一种实施方案中，第二抗生素针对金黄色葡萄球菌是有效的。
在一种实施方案中，第二抗生素选自氨基糖苷、β-内酰胺、大环内酯、环肽、四环素、氟喹啉、氟喹诺酮和噁唑烷酮。
在一种实施方案中，第二抗生素选自克林霉素、新生霉素、瑞他莫林、达托霉素、西他沙星、替考拉宁、三氯生、萘啶酮、雷德唑胺、多柔比星、氨苄西林、万古霉素、亚胺培南、多利培南、吉西他滨、达巴万星和阿奇霉素。
在一种实施方案中，抗体-药物缀合物被口服地、局部地、鼻内地、静脉内地、肌内地或皮下地施用至受试者。
在又一方面中，本公开内容提供了一种在受试者中预防或治疗蜂窝组织炎、菌血症、皮肤坏死、眼睑感染、眼部感染、新生儿结膜炎、骨髓炎、脓疱病、疖子、烫伤样皮肤综合征、食物中毒、肺炎、外科手术感染、尿道感染、烧伤感染、脑膜炎、心内膜炎、败血症、中毒性休克综合征、脓毒性关节炎、乳腺炎、与假肢关节相关的感染、与导管相关的感染或与植入物相关的感染的方法，所述方法包括向受试者施用有效治疗量的如本文描述的化合物、抗体-药物缀合物或药物组合物。
在阅读本公开内容的以下详细描述(包括所附权利要求)之后，本公开内容的这些和其他方面对于本领域技术人员来说将变得明显。
附图简述
图1是用根据本公开内容的利福霉素类似物进行的金黄色葡萄球菌生长抑制测定的结果的图。
图2是用根据本公开内容的利福霉素类似物进行的金黄色葡萄球菌细胞内灭杀测定的结果的条形图。
图3是用根据本公开内容的利福霉素类似物进行的金黄色葡萄球菌细胞内灭杀测定的结果的图。
图4是四天金黄色葡萄球菌感染模型的示意图。
图5是使用THP细胞的、根据本公开内容的抗金黄色葡萄球菌ADC在细胞内灭杀测定中的菌落形成单位的图。
图6描绘用以下治疗的小鼠的平均金黄色葡萄球菌肾负荷(burden)：与万古霉素组合的以2mg/kg的同种型对照和根据本公开内容的抗WTA Ab-抗生素ncADC(抗体-药物缀合物)。
图7描绘用以下治疗的小鼠的平均金黄色葡萄球菌肾负荷：与万古霉素组合的以2mg/kg的同种型对照和根据本公开内容的抗蛋白A Ab-抗生素ncADC。
图8描绘用以下治疗的小鼠的平均金黄色葡萄球菌肾负荷：与万古霉素组合的以5mg/kg的同种型对照和根据本公开内容的抗WTA Ab-抗生素ncADC。
发明详述
本公开内容的详细实施方案在本文中公开；然而，应当理解公开的实施方案仅仅说明可以以多种形式体现的本公开内容。此外，结合本公开内容的多种实施方案给出的每个实例意图是说明性的，而不是限制性的。因此，本文公开的特定结构和功能细节不应被解释为限制性的，而仅仅作为用于教导本领域技术人员不同地利用本公开内容的代表性的基础。
定义
除非另外定义，否则本文使用的所有技术术语和科学术语具有与由本公开内容所属的领域的普通技术人员通常理解的相同的含义。
如本说明书和所附权利要求书中使用的，除非上下文另外清楚指示，否则单数形式“a(一)”、“an(一)”和“该(the)”包括复数指示物。因此，例如，提及“一种(a)方法”包括一种或更多种方法、和/或本文描述的类型的步骤，和/或其对本领域技术人员而言在阅读本公开内容后将变得明显。
术语“治疗(treat)”或“治疗(treatment)”状态、紊乱或状况包括：(1)预防、延迟或减少在可能罹患或易患该状态、紊乱或状况但尚未经历或表现出该状态、紊乱或状况的临床或亚临床症状的受试者中发展的该状态、紊乱或状况的至少一种临床或亚临床症状的出现和/或发生的可能性；或(2)抑制该状态、紊乱或状况，即，阻止、减少或延迟疾病或其复发症或其至少一种临床或亚临床症状的发展；或(3)缓解疾病，即引起该状态、紊乱或状况或其临床或亚临床症状中的至少一种的消退。对待治疗的受试者的益处为在统计学上显著的或至少对患者或对医师为可感知的。
如本文使用的“受试者”或“患者”或“个体”或“动物”是指人类、兽用动物(例如，猫、狗、牛、马、羊、猪等)和疾病的实验动物模型(例如小鼠、大鼠)。在一种实施方案中，受试者是人类。
如本文使用的，适用于剂量或量的术语“有效”是指在施用至有相应需要的受试者后足以产生期望活性的化合物或药物组合物的量。注意，当施用活性成分的组合时，组合的有效量可以包括或可以不包括如果单独施用时将有效的每一种成分的量。所需的确切量将取决于物种、受试者的年龄和一般状况、被治疗状况的严重程度、所使用的一种或更多种特定药物、施用的模式等等，从受试者到受试者变化。
如与本公开内容的组合物结合使用的短语“药学上可接受的”是指在生理上可耐受的并且当被施用至哺乳动物(例如，人类)时通常不产生不良反应的此类组合物的分子实体和其他成分。优选地，如本文使用的，术语“药学上可接受的”意指联邦或州政府的管理机构所批准的或在美国药典或其他一般公认的药典中列出的用于哺乳动物并且更特别地用于人类。
如本文使用的短语“治疗有效量”是指施用时产生期望效果的量。确切量将取决于治疗的目的，并且将由本领域技术人员使用已知技术来确定(参见，例如Lloyd(1999)TheArt,Science and Technology of Pharmaceutical Compounding)。
范围可以在本文中表示为从“约(about)”或“大约(approximately)”一个特定值和/或到“约(about)”或“大约(approximately)”另一个特定值。当这样的范围被表示时，另一种实施方案包括从一个特定值和/或到另一个特定值。
“包含(comprising)”或“含有(containing)”或“包含(including)”意指至少所命名的化合物、元素、颗粒或方法步骤存在于组合物或制品或方法中，但不排除其他化合物、材料、颗粒或方法步骤的存在，即使其他此类化合物、材料、颗粒或方法步骤具有与所命名的化合物、材料、颗粒或方法步骤相同的功能。
本公开内容的化合物包括在本文中一般描述的化合物，并且通过本文公开的类别、亚类和种类进一步说明。如本文使用的，除非另外指示，否则应适用以下定义。为了本公开内容的目的，化学元素根据元素周期表，CAS版本，Handbook of Chemistry andPhysics,第75版来确定。此外，有机化学的一般原理在“Organic Chemistry”，ThomasSorrell,University Science Books,Sausalito:1999,和“March’s Advanced OrganicChemistry”,第5版,编辑:Smith,M.B.和March,J.,John Wiley&Sons,New York:2001中描述，这些文献的全部内容在此通过引用并入。保护基团的化学可以例如在Wuts和Greene,Greene’s Protective Groups in Organic Synthesis,第4版,John Wiley&Sons:NewYork,2006中找到。
术语“烃”在本文中用于包括含有碳和氢的烃基团(也被称为“基团”)，并且还包括其衍生物，在衍生物中一个或更多个碳被任何杂原子诸如氧、氮、硫和磷取代。本公开内容的烃任选地被含氧基团、含氮基团、含硫基团和含磷基团或卤素取代，没有限制。术语烃包括直链的、支链的、环状的或多环的脂肪族基团以及芳香族基团和杂芳香族基团，如下文更详细讨论的。
术语“任选地被取代”具有与其中被取代的元素“还包含0-n个”任选的元素相同的含义，其中n是整数，通常从0-20、或从0-10、或从1-3。例如，当脂肪族烃任选地包含一个或更多个杂原子时，其将具有与其中脂肪族烃还包含0个-20个杂原子相同的含义。
如本文使用的术语“脂肪族”或“脂肪族基团”意指完全饱和的或含有一个或更多个不饱和单元的直链(即非支链)的、支链的、被取代的或未被取代的烃链，或者完全饱和的或含有一个或更多个不饱和单元但不是芳香族的、与分子的其余部分具有单个附接点的单环烃、双环烃或三环烃(在本文中也被称为“碳环”、“脂环族”或“环烷基”)，以及它们的组合。在一些实施方案中，脂肪族基团包括直链脂肪族烃和环状脂肪族烃的组合(混杂物)。在一些实施方案中，脂肪族基团包括直链脂肪族烃和环状脂肪族烃的组合。除非另外说明，脂肪族基团包含1个-30个脂肪族碳原子。在一些实施方案中，脂肪族基团包含1个-20个脂肪族碳原子。在其他实施方案中，脂肪族基团包含1个-10个脂肪族碳原子。在仍其他实施方案中，脂肪族基团包含1个-6个脂肪族碳原子，并且在又其他实施方案中，脂肪族基团包含1个、2个、3个或4个脂肪族碳原子。合适的脂肪族基团包括但不限于直链的或支链的、被取代的或未被取代的烷基基团、烯基基团、炔基基团及它们的组合/混杂物，诸如(环烷基)烷基、(环烯基)烷基或(环烷基)烯基。简单的脂肪族烃包括甲基、乙基、丙基、丁基、叔丁基、正丁基、戊基等等。
如本文使用的术语“脂肪族环”、“环状脂肪族”、“碳环”、“脂环族(alicyclic)”或“脂环族(cycloaliphatic)”是指如本文描述的具有从3个至14个成员的饱和的或部分不饱和的环状脂肪族单环、双环或多环环结构，其中脂肪族环体系任选地被取代，如上文定义和本文描述的。脂环族基团包括但不限于环丙基、环丁基、环戊基、环戊烯基、环己基、环己烯基、环庚基、环庚烯基、环辛基、环辛烯基、降冰片烷基、金刚烷基和环辛二烯基。在一些实施方案中，环烷基具有3个-6个碳。脂肪族环结构还包括与一个或更多个芳香族环或非芳香族环(诸如十氢萘基或四氢萘基)稠合的脂肪族环，其中基团或附接点在脂肪族环上。在一些实施方案中，脂肪族环状基团是双环的。在一些实施方案中，碳环基团是三环的。在一些实施方案中，脂肪族环状基团是多环的。在一些实施方案中，脂肪族多环基团是螺环结构，其呈现出两个或更多个环的扭曲结构(环体系)，其中2个或3个环通过一个共同的原子连接在一起。在另一种实施方案中，脂肪族多环基团是稠合的双环结构，其中两个环共享两个相邻的原子，即环共享一个共价键，即所谓的桥头原子直接连接(例如α-侧柏烯(α-thujene)和萘烷)。在一些实施方案中，脂肪族多环结构是桥接的双环结构，其中例如两个环共享三个或更多个原子，通过包含至少一个原子的桥将两个桥头原子分开。例如，降冰片烷，也被称为双环[2.2.1]庚烷，可以被认为是一对环戊烷环，每个环共享五个碳原子中的三个。在一些实施方案中，“脂肪族环”(或“碳环”或“环烷基”)是指完全饱和的或含有一个或更多个不饱和单元但不是芳香族的、与分子的其余部分具有单个附接点的单环C3–C8烃、或C6-C12双环烃；或完全饱和的或含有一个或更多个不饱和单元但不是芳香族的、与分子的其余部分具有单个附接点的C9–C16三环烃。
如本文使用的，术语“烷基”在本领域中具有普通含义，并且可以包括饱和的脂肪族基团，包括直链烷基基团、支链烷基基团、环烷基基团、烷基取代的环烷基基团和环烷基取代的烷基基团。在某些实施方案中，直链烷基或支链烷基在其主链中具有约1个-20个碳原子(例如，直链为C1–C20，支链为C2–C20)，并且可选择地，约1个-10个碳原子或约1个至6个碳原子。在一些实施方案中，环烷基环在其环结构中具有从约3个-10个碳原子，其中这样的环是单环或双环的，或可选择地在环结构中具有约5个、6个或7个碳。在一些实施方案中，烷基基团可以是低级烷基基团，其中低级烷基基团包含1个-4个碳原子(例如，直链低级烷基为C1–C4)。
如本文使用的，术语“烯基”是指如本文定义的具有一个或更多个双键的烃基基团(alkyl group)。
如本文使用的，术语“炔基”是指如本文定义的具有一个或更多个三键的烃基基团。
术语“杂烷基”在本领域中具有普通含义，并且是指如本文描述的其中一个或更多个碳原子被杂原子(例如卤素、氧、氮、硫等)取代的烷基基团。杂烷基基团的实例包括但不限于烷氧基、聚(乙二醇)，烷基取代的氨基、四氢呋喃基、哌啶基、吗啉基等。
如本文使用的，“芳香族”是指单环的或多环的芳香族环或杂芳香族环，其可以具有从5个至20个环原子并且任选地可以具有从1个至20个杂原子取代基。在一些实施方案中，芳香族基团可以任选地具有从1个至10个杂原子取代基。在一些实施方案中，芳香族基团可以任选地具有从1个至5个杂原子取代基。在一些实施方案中，芳香族基团是单环的或多环的芳香族环，诸如环戊二烯基、苯基、萘基或蒽基。在一些实施方案中，芳香族基团是具有从5个至10个环原子的单环的或多环的芳香族环。在一些实施方案中，芳香族基团是含有从5个至6个碳原子的单环芳香族环，诸如苯基和环戊二烯基。在一种特定实施方案中，芳香族基团是苯基基团。
单独使用或作为更大部分如“芳烷基”、“芳烷氧基”或“芳氧基烷基”中的一部分使用的术语“芳基”是指具有总共5个至14个环成员的单环或双环的环体系，其中该体系中至少一个环是芳香族的，并且其中该体系中的每个环包含3个至7个环成员。术语“芳基”可以与术语“芳基环”可互换地使用。在本公开内容的某些实施方案中，“芳基”是指芳香族环体系，其包括但不限于苯基、联苯基、萘基、联萘基、蒽基等，它们可以带有一个或更多个取代基。如本文使用的术语“芳基”的范围还包括其中芳香族环与一个或更多个非芳香族环稠合的基团，诸如茚满基、邻苯二甲酰亚胺基、萘酰亚胺基(naphthimidyl)、菲啶基或四氢萘基等。
单独使用或作为更大部分例如“杂芳烷基”或“杂芳烷氧基”的一部分的术语“杂芳香族烃”、“杂芳基(heteroaryl)”和“杂芳(heteroar-)”是指具有5个至10个环原子，在一些实施方案中，5个、6个、9个或10个环原子的基团(即单环或双环)。在一些实施方案中，这样的环具有在环状阵列中共享的6个、10个或14个π电子；并且除了碳原子之外，还具有从1个至5个杂原子。术语“杂原子”是指氮、氧或硫，并且包括氮或硫的任何氧化形式，以及碱性氮的任何季铵化形式。杂芳香族烃或杂芳基基团包括但不限于噻吩基、呋喃基、吡咯基、咪唑基、吡唑基、三唑基、四唑基、噁唑基、异噁唑基、噁二唑基、噻唑基、异噻唑基、噻二唑基、吡啶基、哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基、吲嗪基、嘌呤基、萘啶基和蝶啶基。在一些实施方案中，杂芳基是杂联芳基基团，诸如联吡啶基等。如本文使用的术语“杂芳基”和“杂芳”，还包括其中杂芳香族环与一个或更多个芳基、脂环族或杂环基环稠合的基团，其中基团或附接点在杂芳香族环上。非限制性实例包括吲哚基、异吲哚基、苯并噻吩基、苯并呋喃基、二苯并呋喃基、吲唑基、苯并咪唑基、苯并噻唑基、喹啉基、异喹啉基、噌啉基、酞嗪基、喹唑啉基、喹喔啉基、4H-喹嗪基(4H-quinolizinyl)、咔唑基、吖啶基、吩嗪基、吩噻嗪基、吩噁嗪基、四氢喹啉基、四氢异喹啉基和吡啶并[2,3-b]-l,4-噁嗪-3(4H)-酮。杂芳基基团可以是单环、双环、三环、四环和/或另外多环的。术语“杂芳基”可以与术语“杂芳基环”、“杂芳基基团”或“杂芳香族”可互换地使用，这些术语中的任一种包括任选地被取代的环。术语“杂芳烷基”是指被杂芳基取代的烷基基团，其中烷基和杂芳基部分独立地任选地被取代。
如本文使用的，术语“杂环”、“杂环基”、“杂环基团”和“杂环”可互换地使用，并且是指稳定的5至7元单环杂环部分或7-10元双环杂环部分，它们是饱和的或部分不饱和的，并且除了碳原子之外，还具有一个或更多个，优选地1个至4个杂原子，如上文定义的。当提及杂环的环原子使用时，术语“氮”包括被取代的氮。
杂环可以在任何杂原子或碳原子上附接至其侧基，产生稳定的结构，并且任何环原子可以任选地被取代。这样的饱和或部分不饱和的杂环基团的实例包括但不限于四氢呋喃基、四氢噻吩基、吡咯烷基、哌啶基、吡咯啉基、四氢喹啉基、四氢异喹啉基、十氢喹啉基、噁唑烷基、哌嗪基、二氧六环基、二氧戊环基、二氮杂
Figure BDA0003124860200000921
基、氧杂氮杂
Figure BDA0003124860200000922
基(oxazepinyl)、硫氮杂
Figure BDA0003124860200000923
基(thiazepinyl)、吗啉基和奎宁环基。术语“杂环”、“杂环基”、“杂环基环”、“杂环基团”、“杂环部分”和“杂环基团”在本文中可互换地使用，并且还包括其中杂环基环与一个或更多个芳基、杂芳基或脂环族环稠合的基团，诸如二氢吲哚基、3H-吲哚基、色满基、菲啶基或四氢喹啉基。杂环基基团可以是单环、双环、三环、四环和/或另外多环的。术语“杂环基烷基”是指被杂环基取代的烷基基团，其中烷基和杂环基部分独立地任选地被取代。
如本文使用的，术语“部分不饱和的”是指包含至少一个双键或三键的环部分。术语“部分不饱和的”意图包括具有多个不饱和位点的环，但不意图包括如本文定义的芳基或杂芳基部分。
术语“杂原子”意指氧、硫、氮、磷或硅中的一种或更多种(包括氮、硫、磷或硅的任何氧化形式；任何碱性氮的季铵化形式；或杂环中可取代的氮)。
如本文使用的术语“不饱和的”意指部分具有一个或更多个不饱和单元。术语“卤素”意指F、Cl、Br或I；术语“卤化物”是指卤素基团或取代基，即-F、-Cl、-Br或-I。如本文使用的，“卤代烷基”是指如上文定义的其中烷基包括至少一个选自卤素(例如氟(F)、氯(Cl)、溴(Br)或碘(I))的取代基的烷基。卤代烷基的实例包括但不限于-CF3、-CH2CF3、–CCl2F和–CCl3。
如本文中使用的术语“保护基团”是指通过官能团诸如氨基或醇的化学修饰引入分子中的基团，以便在后续化学反应中获得化学选择性。在一种非限制性实施方案中，保护基团可以包括1-氯乙基羰基(ACE)、乙酰基、苄基(Bn)、苄氧羰基(CBz)、甲酰基、甲基羰基、三氟乙酰基、叔丁氧羰基(Boc)和芴基甲氧羰基(Fmoc)。在另一种非限制性实施方案中，保护基团包括苄氧羰基(Cbz)、对甲氧基苄基羰基(Moz或MeOZ)、叔丁氧羰基(BOC)、9-芴基甲氧羰基(Fmoc)、乙酰基(Ac)、苯甲酰基(bz)、苄基(Bn)、对甲氧基苄基(PMB)、3,4-二甲氧基苄基(DMPM)、对甲氧基苯基(PMP)基团、甲苯磺酰基(Ts)、Troc(氯甲酸三氯乙酯)、磺酰胺类诸如Nosyl和Nps。在另外的非限制性实施方案中，保护基团包括β-甲氧基乙氧基甲基醚(MEM)、二甲氧基三苯甲基、[双-(4-甲氧基苯基)苯基甲基](DMT)、甲氧基甲基醚(MOM)、甲氧基三苯甲基[(4-甲氧基苯基)二苯基甲基](MMT)、甲硫基甲基醚、新戊酰基(Piv)、四氢吡喃基(THP)、四氢呋喃(THF)、三苯甲基(三苯基甲基，Tr)、甲硅烷基醚(TMS)、叔丁基二甲基甲硅烷基(TBDMS)、三异丙基甲硅烷氧基甲基(TOM)和三异丙基甲硅烷基(TIPS)醚、TBDMS和TOM；甲基醚和乙氧基乙基醚(EE)。
如本文使用的，术语“O-氨基酸”或“HO-氨基酸”表示其中在氨基酸或氨基酸序列的N末端的天然氨基基团分别被氧基团或羟基基团取代的氨基酸。例如，“O-XXXX”或“HO-XXXX”意图表示其中在N末端的天然氨基基团分别被氧基团或羟基基团取代的氨基酸序列(XXXX)(例如，
Figure BDA0003124860200000941
其中每个R是氨基酸侧链)。类似地，术语“O-氨基酸残基”或“HO-氨基酸残基”是指化学反应后保留在化合物中的化学部分。例如，“O-氨基酸残基”或“HO-氨基酸残基”是指O-氨基酸或HO-氨基酸与合适的偶联配偶体的酰胺偶联或肽偶联的产物；其中，例如，在O-氨基酸或HO-氨基酸的酰胺偶联或肽偶联后，水分子被排出，导致产物具有掺入其中的O-氨基酸残基或HO-氨基酸残基。
氨基酸或氨基酸残基的命名在不指定其立体化学的情况下，意图包括氨基酸的L形式、氨基酸的D形式或其外消旋混合物。
如本文描述的，本公开内容的化合物可以包含“任选地被取代的”部分。通常，术语“被取代的”，无论前面是否有术语“任选地”，都意指指定部分的一个或更多个氢被合适的取代基取代。除非另外指示，否则“任选地被取代的”基团可以在该基团的每一个可取代的位置处具有合适的取代基，并且当任何给定结构中的多于一个位置可以被多于一个选自指定基团的取代基取代时，该取代基可以在每一位置处是相同的或不同的。由本公开内容预期的取代基的组合优选地是导致形成稳定的化合物或化学上可行的化合物的那些。如本文使用的术语“稳定”是指当经受允许其生产、检测、以及在某些实施方案中，其回收、纯化和用于本文公开的一个或更多个目的的用途的条件时基本上不改变的化合物。
除非另外说明，否则本文描绘的结构还意图包括该结构的所有异构体(例如，对映异构体、非对映异构体和几何(或构象))形式；例如，每个不对称中心的R和S构型、(Z)和(E)双键异构体以及(Z)和(E)构象异构体。因此，本文的化合物的单个立体化学异构体以及对映异构体、非对映异构体和几何(或构象)混合物在本公开内容的范围内。
除非另外说明，否则本公开内容的化合物的所有互变异构体形式都在本公开内容的范围内。
另外，除非另外说明，否则本文描绘的结构还意图包括仅在一个或更多个同位素富集的原子的存在方面不同的化合物。例如，除了用氘或氚取代氢原子、或用11C-或13C-或14C-富集的碳取代碳、或用17O-或18O-富集的氧取代氧、或用15N-富集的氮取代氮，具有本文的结构的化合物在本公开内容的范围内。
还应当理解，提及一个或更多个方法步骤并不排除存在另外的方法步骤或在明确标识的那些步骤之间的中间方法步骤。类似地，还应当理解，提及装置或系统中的一个或更多个部件并不排除存在另外的部件或在明确标识的那些部件之间的中间部件。
除非另外说明，否则本公开内容的化合物及其盐的所有结晶形式也在本公开内容的范围内。本公开内容的化合物可以以各种无定形和结晶多晶型形式分离，包括但不限于为无水、水合、非溶剂化或溶剂化的无定形和结晶多晶型形式。水合物的实例包括半水合物、一水合物、二水合物等。在一些实施方案中，本公开内容的化合物是无水的和非溶剂化的。“无水”意指化合物的结晶形式在晶格结构中基本上不包含结合水，即该化合物不形成结晶水合物。
如本文使用的，“结晶形式”意图指结晶物质的某种晶格构型。相同物质的不同结晶形式(多晶型形式)通常具有不同的晶格(例如，晶胞)，这归因于每种结晶形式所特有的不同物理性质。在一些情况下，不同的晶格构型具有不同的水或溶剂含量。不同的晶格可以通过固态表征方法诸如通过X射线粉末衍射(PXRD)来鉴定。其他表征方法，诸如差示扫描量热法(DSC)、热重分析(TGA)、动态蒸汽吸附(DVS)、固态NMR等，还有助于鉴定结晶形式以及有助于确定稳定性和溶剂/水含量。
物质的结晶形式包括溶剂化(例如水合)和非溶剂化(例如无水)形式两者。水合形式是晶格中包含水的结晶形式。水合形式可以是化学计量水合物，其中水以一定的水/分子比率存在于晶格中，诸如半水合物、一水合物、二水合物等。水合形式也可以是非化学计量的，其中水含量是可变的并且取决于外部条件，诸如湿度。
在一些实施方案中，本公开内容的化合物被基本上分离。“基本上分离”意指特定化合物至少部分地与杂质分离。例如，在一些实施方案中，本公开内容的化合物包含小于约50％、小于约40％、小于约30％、小于约20％、小于约15％、小于约10％、小于约5％、小于约2.5％、小于约1％或小于约0.5％的杂质。杂质通常包括不是基本上分离的化合物的任何东西，包括例如其他结晶形式和其他物质。
如本文使用的，术语“抗生素”(abx或Abx)包括特异性抑制微生物(诸如细菌)的生长或灭杀微生物的任何分子，但在施用的浓度和给药间隔对宿主是非致死的。在具体方面中，抗生素在施用浓度和给药间隔对宿主是无毒的。对细菌有效的抗生素可以大致分为杀菌的(即直接灭杀)或抑菌的(即阻止分裂)。抗杀菌抗生素可以被进一步细分为窄谱或广谱。与对较小范围或特定细菌家族有效的窄谱抗生素相比，广谱抗生素是对包括革兰氏阳性细菌和革兰氏阴性细菌两者在内的宽范围的细菌有效的抗生素。抗生素的实例包括：氨基糖苷，例如阿米卡星、庆大霉素、卡那霉素、新霉素、奈替米星、链霉素、妥布霉素、巴龙霉素，安沙霉素，例如格尔德霉素、除莠霉素，碳头孢烯类(carbacephem)，例如氯碳头孢(loracarbef)，碳青霉烯(carbapenem)，例如厄他培南(ertapenum)、多利培南、亚胺培南/西司他丁、美罗培南，头孢菌素类(第一代)，例如头孢羟氨苄、头孢唑啉、头孢噻吩、头孢氨苄，头孢菌素类(第二代)，例如头孢克洛、头孢羟唑、头孢西丁、头孢丙烯、头孢呋辛，头孢菌素类(第三代)，例如头孢克肟、头孢地尼、头孢托仑、头孢哌酮、头孢噻肟、头孢泊肟、头孢他啶、头孢布烯、头孢唑肟、头孢曲松，头孢菌素类(第四代)，例如头孢吡肟，头孢菌素类(第五代)，例如头孢托罗，糖肽类，例如替考拉宁、万古霉素，大环内酯，例如阿奇霉素、克拉霉素、地红霉素、红霉素、螺红霉素、醋竹桃霉素、泰利霉素、壮观霉素，单环内酰胺，例如axtreonam，青霉素类，例如阿莫西林、氨苄西林、阿洛西林(axlocilin)、羧苄青霉素、氯唑西林、双氯西林、氟氯西林、美洛西林、甲氧西林、萘夫西林、苯唑西林、盘尼西林、哌拉西林、替卡西林，抗生素多肽，例如杆菌肽、粘菌素、多粘菌素B，喹诺酮类，例如环丙沙星、依诺沙星、加替沙星、左氧氟沙星、洛美沙星(lemefloxacin)、莫西沙星、诺氟沙星、氧氟沙星、曲氟沙星，磺胺类，例如磺胺米隆、偶氮磺胺、磺乙酰胺、磺胺甲二唑、磺胺、柳氮磺吡啶、磺胺异噁唑、甲氧苄啶、甲氧苄啶-磺胺甲噁唑(trimethoprim-sulfamethoxazole)(TMP-SMX)，四环素类，例如地美环素、多西环素、米诺环素、土霉素、四环素和其他药物，诸如arspenamine、氯霉素、克林霉素、林可霉素、乙胺丁醇、磷霉素、夫西地酸、呋喃唑酮、异烟肼、利奈唑胺、甲硝唑、莫匹罗星、呋喃妥因、平板霉素、吡嗪酰胺、喹奴普丁/达福普丁、利福平/利福平(rifampin/rifampicin)或替硝唑(timidazole)。
术语“耐甲氧西林金黄色葡萄球菌”(MRSA)，可选择地被称为耐多药金黄色葡萄球菌或耐苯唑西林金黄色葡萄球菌(ORSA)，是指耐β-内酰胺抗生素(其包括青霉素类(例如甲氧西林、双氯西林、萘夫西林、苯唑西林等)和头孢菌素类)的任何金黄色葡萄球菌菌株。“甲氧西林易感性金黄色葡萄球菌”(MSSA)是指对β-内酰胺抗生素敏感的任何金黄色葡萄球菌菌株。
术语“最低抑制浓度”(“MIC”)是指在过夜孵育之后将抑制微生物的可见生长的抗微生物剂的最低浓度。用于确定MIC的测定是已知的。一种方法如在下文的实施例中描述的。
药物-抗体比率(DAR)是缀合至抗体或抗原结合片段的药物的平均数目，其对ADC的功效、效力和药代动力学具有重要作用。在多种实施方案中，DAR是每种抗体1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个或8个药物分子。在一些实施方案中，DAR是从1至8。在一些实施方案中，DAR是从1至6。在某些实施方案中，DAR是从2至4。在一些情况下，DAR是从2至3。在某些情况下，DAR是从0.5至3.5。在一些实施方案中，DAR是约1、或约1.5、或约2、或约2.5、或约3、或约3.5。
如本文使用的表述“MSR1”、“hMSR1”等是指人类单程三聚体II型跨膜糖蛋白模式识别受体(human single-pass,trimeric type II transmembrane glycoproteinpattern recognition receptor)，其包括(i)如NCBI登录号NP_002436.1中列出的氨基酸序列，(ii)如NCBI登录号NP_619729.1中列出的氨基酸序列，和/或(iii)如NCBI登录号NP_619730.1中列出的氨基酸序列，其代表各种类型和同种型的A类巨噬细胞清道夫受体。表述“MSR1”包括单体MSR1分子和多聚体MSR1分子两者。如本文使用的，表述“单体人MSR1”意指MSR1蛋白或其部分，它不包含或具有任何多聚化结构域，并且在正常条件下作为单个MSR1分子存在，与另一个MSR1分子没有直接的物理连接。示例性的单体MSR1分子是在本文中被称为“His-hMSR1”的分子，其包括SEQ ID NO:393的氨基酸序列(参见，例如本文的实施例25)。
本文中所有提及的蛋白质、多肽和蛋白质片段意图指各自蛋白质、多肽或蛋白质片段的人类版本，除非明确指定为来自非人类物种。因此，表述“MSR1”意指人MSR1，除非指定为来自非人类物种，例如，“小鼠MSR1”、“猴MSR1”等。
如本文使用的，表述“细胞表面表达的MSR1”意指一种或更多种MSR1蛋白或其细胞外结构域，它在处于体外或体内的细胞的表面上表达，使得MSR1蛋白的至少一部分暴露于细胞膜的细胞外侧并且可被抗体的抗原结合部分接近。“细胞表面表达的MSR1”可以包括在正常表达MSR1蛋白的细胞的表面上表达的MSR1蛋白或由所述MSR1蛋白组成。可选择地，“细胞表面表达的MSR1”可以包括在通常不在细胞表面上表达人MSR1，但已被人工工程化以在其表面上表达MSR1的细胞的表面上表达的MSR1蛋白或由所述MSR1蛋白组成。
如本文使用的，表述“抗MSR1抗体”包括具有单一特异性的单价抗体，以及包含结合MSR1的第一臂和结合第二(靶)抗原的第二臂的双特异性抗体，其中抗MSR1臂包括如在本文的表9中列出的任何HCVR/LCVR或CDR序列。表述“抗MSR1抗体”还包括包含缀合至药物或治疗剂的抗MSR1抗体或其抗原结合部分的抗体-药物缀合物(ADC)。表述“抗MSR1抗体”还包括包含缀合至放射性核素的抗MSR1抗体或其抗原结合部分的抗体-放射性核素缀合物(ARC)。
术语“壁磷壁酸”(WTA)是指经由磷酸二酯键共价附接至肽聚糖的N-乙酰基胞壁酸糖的C6羟基的阴离子含糖聚合物。虽然精确的化学结构在生物体之间可以变化，但是在一些实施方案中，WTA是在2位具有D-核糖醇和D-丙氨酰酯的1,5-磷酸二酯键的重复单元并且在4位具有糖基取代基的核糖醇磷壁酸。糖基基团可以是如存在于金黄色葡萄球菌中的N-乙酰葡糖胺基α(alpha)或β(beta)。糖醇(alditol)/糖醇(sugar alcohol)磷酸重复单元上的羟基可以被阳离子型D-丙氨酸酯和单糖诸如N-乙酰葡糖胺取代。羟基取代基可以包括D-丙氨酰基和α(alpha)或β(beta)GlcNHAc。在一种具体实施方案中，WTA包括下式的化合物：
Figure BDA0003124860200000991
其中波浪线指示重复连接单元或聚糖醇-P或肽聚糖的附接位点，其中X是D-丙氨酰基或-H；并且Y是α(alpha)-GlcNHAc或β(beta)-GlcNHAc。
Figure BDA0003124860200000992
如本文使用的，术语“抗WTA抗体”是指结合壁磷壁酸(WTA)(无论是WTAα还是WTAβ)的任何抗体。术语“抗壁磷壁酸α抗体”或“抗WTAα抗体”或“抗αWTA”或“抗αGlcNac WTA抗体”可互换地使用，以指特异性地结合WTAα的抗体。类似地，术语“抗壁磷壁酸β抗体”或“抗WTAβ抗体”或“抗βWTA”或“抗βGlcNac WTA抗体”可互换地使用，以指特异性地结合WTAβ的抗体。表述“抗WTA抗体”包括具有单一特异性的单价抗体，以及包含结合WTA(无论是WTAα还是WTAβ)的第一臂和结合第二(靶)抗原的第二臂的双特异性抗体，其中抗WTA臂包括如本文的表2A和表2B中列出的任何HCVR/LCVR或CDR序列。表述“抗WTA抗体”还包括包含缀合至药物或治疗剂的抗WTA抗体或其抗原结合部分的抗体-药物缀合物(ADC)。
如本文使用的术语“抗体”意指任何抗原结合分子或分子复合物，其包含至少一个特异性地结合特定抗原(例如，MSR1、WTA或蛋白A)或与特定抗原相互作用的互补决定区(CDR)。术语“抗体”包括免疫球蛋白分子，其包含通过二硫键相互连接的四条多肽链，两条重(H)链和两条轻(L)链，以及它们的多聚体(例如，IgM)。每条重链包括重链可变区(在本文中被缩写为HCVR或VH)和重链恒定区。重链恒定区包括三个结构域，CH1、CH2和CH3。每条轻链包括轻链可变区(在本文中被缩写为LCVR或VL)和轻链恒定区。轻链恒定区包括一个结构域(CL1)。VH和VL区可以被进一步细分为被称为互补决定区(CDR)的高变区，其散布着被称为框架区(FR)的更保守的区域。每个VH和VL包含按以下顺序从氨基末端至羧基末端排列的3个CDR和4个FR：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。在不同实施方案中，抗体(或其抗原结合部分)的FR可以与人类种系序列相同，或者可以是天然或人工修饰的。氨基酸共有序列可以基于两个或更多个CDR的并列分析来定义。
如本文使用的术语“抗体”还包括完整抗体分子的抗原结合片段。如本文使用的术语抗体的“抗原结合部分”、抗体的“抗原结合片段”等包括任何天然存在的、可酶促获得的、合成的或基因工程化的多肽或糖蛋白，它们特异性地结合抗原以形成复合物。抗体的抗原结合片段可以使用任何合适的标准技术，诸如蛋白水解消化或重组基因工程技术，包括操纵和表达编码抗体可变结构域和任选的恒定结构域的DNA，例如从完整抗体分子中衍生出。这样的DNA是已知的和/或容易从例如商业来源，DNA文库(包括，例如噬菌体抗体文库)获得，或者可以合成。化学地或通过使用分子生物学技术可以对DNA进行测序和操纵，例如，以将一个或更多个可变结构域和/或恒定结构域排列成合适的构型，或引入密码子，产生半胱氨酸残基，修饰、添加或缺失氨基酸等。
抗原结合片段的非限制性实例包括：(i)Fab片段；(ii)F(ab’)2片段；(iii)Fd片段；(iv)Fv片段；(v)单链Fv(scFv)分子；(vi)dAb片段；和(vii)由模拟抗体(例如，分离的互补决定区(CDR)诸如CDR3肽)或受约束的FR3-CDR3-FR4肽的高变区的氨基酸残基组成的最小识别单元。其他工程化分子，诸如结构域特异性抗体、单结构域抗体、结构域缺失抗体、嵌合抗体、CDR接枝抗体、双抗体、三抗体、四抗体、微型抗体、纳米抗体(例如，单价纳米抗体、二价纳米抗体等)、小模块免疫药物(SMIP)和鲨鱼可变IgNAR结构域，也被包含在如本文使用的表述“抗原结合片段”中。
抗体的抗原结合片段通常将包括至少一个可变结构域。可变结构域可以是任何大小或氨基酸组成，并且通常将包括与具有一个或更多个框架序列的框架相邻或在框架内的至少一个CDR。在具有与VL结构域缔合的VH结构域的抗原结合片段中，VH和VL结构域可以以任何合适的排列相对于彼此定位。例如，可变区可以是二聚体，并且包含VH-VH、VH-VL或VL-VL二聚体。可选择地，抗体的抗原结合片段可以包含单体VH或VL结构域。
在某些实施方案中，抗体的抗原结合片段可以包含共价连接至至少一个恒定结构域的至少一个可变结构域。可以在本公开内容的抗体的抗原结合片段中发现的可变结构域和恒定结构域的非限制性示例性配置包括：(i)VH-CH1；(ii)VH-CH2；(iii)VH-CH3；(iv)VH-CH1-CH2；(v)VH-CH1-CH2-CH3；(vi)VH-CH2-CH3；(vii)VH-CL；(viii)VL-CH1；(ix)VL-CH2；(x)VL-CH3；(xi)VL-CH1-CH2；(xii)VL-CH1-CH2-CH3；(xiii)VL-CH2-CH3；和(xiv)VL-CL。在可变结构域和恒定结构域的任何配置中，包括上文列出的任何示例性配置，可变结构域和恒定结构域可以直接彼此连接，或者可以通过完全或部分铰链区或接头区连接。铰链区可以由至少2个(例如，5个、10个、15个、20个、40个、60个或更多个)氨基酸组成，这导致单个多肽分子中相邻可变结构域和/或恒定结构域之间的柔性或半柔性连接。此外，本公开内容的抗体的抗原结合片段可以包含上文列出的彼此非共价缔合的和/或(例如，通过二硫键)与一个或更多个单体VH或VL结构域非共价缔合的任何可变结构域和恒定结构域配置的同二聚体或异二聚体(或其他多聚体)。
与完整抗体分子一样，抗原结合片段可以是单特异性的或多特异性的(例如，双特异性的)。抗体的多特异性抗原结合片段通常将包含至少两个不同的可变结构域，其中每个可变结构域能够特异性地结合单独抗原或同一抗原上的不同表位。任何多特异性抗体形式，包括本文公开的示例性的双特异性抗体形式，可以使用本领域可获得的常规技术适于在本公开内容的抗体的抗原结合片段的情况中使用。
本公开内容的抗体可以通过补体依赖性细胞毒性(CDC)或抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)起作用。“补体依赖性细胞毒性”(CDC)是指在存在补体的情况下，本公开内容的抗体对表达抗原的细胞的裂解。“抗体依赖性细胞介导的细胞毒性”(ADCC)是指一种细胞介导的反应，其中表达Fc受体(FcR)的非特异性细胞毒性细胞(例如，自然杀伤(NK)细胞、中性粒细胞和巨噬细胞)识别靶细胞上结合的抗体，并且从而导致靶细胞的裂解。CDC和ADCC可以使用本领域熟知且可获得的测定来测量。(参见，例如美国专利第5,500,362号和第5,821,337号，以及Clynes等人.(1998)Proc.Natl.Acad.Sci.(USA)95:652-656)。抗体的恒定区在抗体固定补体和介导细胞依赖性细胞毒性的能力方面是重要的。因此，可以基于抗体是否需要介导细胞毒性来选择抗体的同种型。
在某些实施方案中，本文公开的抗体是人抗体。如本文使用的术语“人抗体”意图包括具有来源于人类种系免疫球蛋白序列的可变区和恒定区的抗体。本公开内容的人抗体可以包括不被人类种系免疫球蛋白序列编码的、例如在CDR中并且特别是在CDR3中的氨基酸残基(例如，通过随机或位点特异性诱变在体外或通过体细胞突变在体内引入的突变)。然而，如本文使用的术语“人抗体”不意图包括这样的抗体，其中来源于另一种哺乳动物物种(诸如小鼠)的种系的CDR序列已经被接枝到人框架序列上。
在一些实施方案中，本文公开的抗体可以是重组人抗体。如本文使用的术语“重组人抗体”意图包括通过重组手段制备、表达、产生或分离的所有人抗体，诸如使用转染到宿主细胞中的重组表达载体表达的抗体(下文进一步描述)、从重组组合人抗体文库中分离的抗体(下文进一步描述)、从对于人免疫球蛋白基因转基因的动物(例如小鼠)中分离的抗体(参见，例如Taylor等人.(1992)Nucl.Acids Res.20:6287-6295)或通过涉及人免疫球蛋白基因序列与其他DNA序列剪接的任何其他手段制备、表达、产生或分离的抗体。这样的重组人抗体具有来源于人类种系免疫球蛋白序列的可变区和恒定区。然而，在某些实施方案中，这样的重组人抗体经受体外诱变(或者，当使用对于人Ig序列转基因的动物时，体内体细胞诱变)，并且因此重组抗体的VH区和VL区的氨基酸序列是这样的序列，即，虽然来源于并与人类种系VH和VL序列相关，但可以不天然存在于体内人抗体种系库中。
人抗体可以以两种形式存在，这两种形式与铰链异质性相关。在一种形式中，免疫球蛋白分子包含约150kDa-160kDa的稳定的四链构建体，其中二聚体通过链间重链二硫键保持在一起。在第二种形式中，二聚体不经由链间二硫键连接，并且形成包含共价偶联的轻链和重链的约75kDa-80kDa的分子(半抗体)。即使在亲和纯化后，这些形式也极难分离。
第二种形式在各种完整的IgG同种型中出现的频率是由于，但不限于，与抗体的铰链区同种型相关的结构差异。人IgG4铰链的铰链区中的单个氨基酸取代可以显著减少第二种形式的出现(Angal等人.(1993)Molecular Immunology 30:105)到通常使用人IgG1铰链观察到的水平。本文公开的实施方案包括在铰链区、CH2或CH3区中具有一个或更多个突变的抗体，这在例如生产中可以是合意的，以提高期望抗体形式的产率。
本文公开的抗体可以是分离的抗体。如本文使用的“分离的抗体”意指已经从其自然环境的至少一种组分中鉴定和分离和/或回收的抗体。例如，从生物体的至少一种组分中，或从抗体天然存在或天然产生的组织或细胞中分离或去除的抗体，是为了本公开内容的目的的“分离的抗体”。分离的抗体还包括重组细胞中的原位抗体。分离的抗体是经受至少一个纯化或分离步骤的抗体。根据某些实施方案，分离的抗体可以基本上不含其他细胞物质和/或化学物质。
与衍生抗体的相应种系序列相比，本文公开的抗体可以在重链和轻链可变结构域的框架区和/或CDR区中包含一个或更多个氨基酸取代、插入和/或缺失。通过将本文公开的氨基酸序列与可从例如公共抗体序列数据库获得的种系序列进行比较，可以容易地确定这样的突变。实施方案包括衍生自本文公开的任何氨基酸序列的抗体及其抗原结合片段，其中一个或更多个框架区和/或CDR区内的一个或更多个氨基酸突变为衍生抗体的种系序列的相应残基，或突变为另一个人种系序列的相应残基，或突变为相应种系残基的保守氨基酸取代(这样的序列变化在本文中被统称为“种系突变”)。本领域普通技术人员，从本文公开的重链和轻链可变区序列开始，可以容易地生产包含一个或更多个单独种系突变或其组合的许多抗体和抗原结合片段。在某些实施方案中，在VH和/或VL结构域内的所有框架和/或CDR残基突变回到在衍生抗体的原始种系序列中发现的残基。在其他实施方案中，只有某些残基突变回到原始种系序列，例如，只有在FR1的前8个氨基酸或在FR4的后8个氨基酸中发现的突变的残基，或只有在CDR1、CDR2或CDR3中发现的突变的残基。在其他实施方案中，框架和/或CDR残基中的一个或更多个突变为不同种系序列(即，与最初衍生抗体的种系序列不同的种系序列)的相应残基。此外，本公开内容的抗体可以包含在框架区和/或CDR区内的两个或更多个种系突变的任何组合，例如，其中某些单独残基突变为特定种系序列的相应残基，而不同于原始种系序列的某些其他残基被保留或突变为不同种系序列的相应残基。一旦获得，可以容易地测试含有一个或更多个种系突变的抗体和抗原结合片段的一种或更多种期望的性质，例如，改善的结合特异性、增加的结合亲和力、改善或增强的拮抗或激动生物性质(视情况而定)、降低的免疫原性等。以这种一般方式获得的抗体和抗原结合片段包括在本文公开的实施方案中。
实施方案还包括包含本文公开的具有一个或更多个保守取代的任何HCVR、LCVR和/或CDR氨基酸序列的变体的抗体。例如，实施方案包括抗MSR1抗体，其包含相对于本文的表9中列出的任何HCVR、LCVR和/或CDR氨基酸序列，具有例如10个或更少、8个或更少、6个或更少、4个或更少等的保守氨基酸取代的HCVR、LCVR和/或CDR氨基酸序列。作为另一个实例，实施方案包括抗WTA抗体，其包含相对于本文的表2A或表2B中列出的任何HCVR、LCVR和/或CDR氨基酸序列，具有例如10个或更少、8个或更少、6个或更少、4个或更少等的保守氨基酸取代的HCVR、LCVR和/或CDR氨基酸序列。作为又一个实例，实施方案包括抗蛋白A抗体，其包含相对于本文的表3A中列出的任何HCVR、LCVR和/或CDR氨基酸序列，具有例如10个或更少、8个或更少、6个或更少、4个或更少等的保守氨基酸取代的HCVR、LCVR和/或CDR氨基酸序列。
术语“表位”是指抗原决定簇，它与抗体分子的可变区中的特定抗原结合位点相互作用，被称为互补位(paratope)。单个抗原可以具有多于一个表位。因此，不同抗体可以结合至抗原上的不同区域，并且可以具有不同的生物学效应。表位可以是构象的或线性的。构象表位由来自线性多肽链的不同区段的空间并列的氨基酸产生。线性表位是由多肽链中相邻的氨基酸残基产生的表位。在某些情况下，表位可以包括抗原上的糖、磷酰基基团或磺酰基基团的部分。
术语“基本上同一性”或“基本上同一的”，当提及核酸或其片段时，指示当与另一核酸(或其互补链)的适当核苷酸插入或缺失最佳比对时，存在至少约95％，以及更优选地至少约96％、97％、98％或99％的核苷酸碱基的核苷酸序列同一性，如通过任何熟知的序列同一性算法，诸如FASTA、BLAST或GAP测量的，如下文讨论的。与参考核酸分子具有基本上同一性的核酸分子可以在某些情况下，编码包含与由参考核酸分子编码的多肽相同或基本上相似的氨基酸序列的多肽。
当应用于多肽时，术语“基本上相似性”或“基本上相似的”意指当诸如通过程序GAP或BESTFIT使用默认缺口权重进行最佳比对时，两个肽序列共享至少95％的序列同一性，甚至更优选地至少98％或99％的序列同一性。优选地，不相同的残基位置通过保守氨基酸取代而不同。“保守氨基酸取代”是其中一个氨基酸残基被另一个具有拥有相似化学性质(例如电荷或疏水性)的侧链(R基团)的氨基酸残基取代。通常，保守氨基酸取代将不会显著改变蛋白质的功能性质。在两个或更多个氨基酸序列因保守取代而彼此不同的情况下，序列同一性百分比或相似度可以被向上调整，以校正取代的保守性质。进行这种调整的手段是本领域技术人员熟知的。参见，例如Pearson(1994)Methods Mol.Biol.24:307-331。具有拥有相似化学性质的侧链的氨基酸组的实例包括(1)脂肪族侧链：甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸；(2)脂肪族-羟基侧链：丝氨酸和苏氨酸；(3)含酰胺的侧链：天冬酰胺和谷氨酰胺；(4)芳香族侧链：苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸；(5)碱性侧链：赖氨酸、精氨酸和组氨酸；(6)酸性侧链：天冬氨酸和谷氨酸，以及(7)含硫侧链为半胱氨酸和甲硫氨酸。优选的保守氨基酸取代基团是：缬氨酸-亮氨酸-异亮氨酸、苯丙氨酸-酪氨酸、赖氨酸-精氨酸、丙氨酸-缬氨酸、谷氨酸-天冬氨酸和天冬酰胺-谷氨酰胺。可选择地，保守取代是在Gonnet等人.(1992)Science 256:1443-1445中公开的PAM250对数似然矩阵中具有正值的任何改变。“适度保守”取代是在PAM250对数似然矩阵中具有非负值的任何改变。
多肽的序列相似性，也被称为序列同一性，通常使用序列分析软件来测量。蛋白质分析软件使用分配给各种取代、缺失和其他修饰(包括保守氨基酸取代)的相似性的度量来匹配相似序列。例如，GCG软件包含诸如GAP和BESTFIT的程序，这些程序可以与缺省参数一起使用，以确定密切相关的多肽(诸如来自不同物种的生物体的同源多肽)之间或野生型蛋白质及其突变体之间的序列同源性或序列同一性。参见，例如GCG版本6.1。多肽序列也可以利用FASTA(GCG版本6.1中的程序)使用缺省参数或推荐参数进行比较。FASTA(例如FASTA2和FASTA3)提供了查询序列和搜索序列之间的最佳重叠区域的比对和序列同一性百分比(Pearson(2000)同上)。当将本公开内容的序列与包含来自不同生物体的大量序列的数据库进行比较时，另一种优选的算法是计算机程序BLAST，特别是BLASTP或TBLASTN，使用缺省参数。参见，例如Altschul等人.(1990)J.Mol.Biol.215:403-410和Altschul等人.(1997)Nucleic Acids Res.25:3389-402。
如本文使用的，“O-PEGn”是指经由末端氧原子附接的单价部分，其中n是从1至100。例如，当n是1时，那么O-PEGn是–O–CH2CH2OH；当n是2时，那么O-PEGn是–O–CH2CH2O–CH2CH2OH；并且当n是3时，那么O-PEGn是–O–CH2CH2O–CH2CH2O–CH2CH2OH。
如本文使用的，“结合剂”是指能够特异性结合给定结合配偶体(例如抗原)的任何分子，例如蛋白质或抗体。
如本文使用的，“连接基”是指将结合剂共价连接至本文描述的一种或更多种化合物(例如如本文描述的有效载荷化合物和亲水基团)的二价、三价或多价部分。
如本文使用的，“反应性基团”或RG是指这样的部分，在其结构中包含能够与另一个化学部分反应并形成共价键的部分，例如与抗体在其半胱氨酸或赖氨酸残基上反应的部分。用于本公开内容的说明性反应性基团包括但不限于那些包括马来酰亚胺、琥珀酰亚胺、N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)、末端伯胺、卤代乙酰基基团、异硫氰酸酯、硫醇、醇、酮、醛、酸、酯、肼和苯胺的基团。RG还包括具有以下结构的部分：
Figure BDA0003124860200001071
其中X是-O-或-NH-并且LG是离去基团，例如Br。
如本文使用的，“酰胺合成条件”是指适合于例如通过羧酸、活化的羧酸或酰卤与胺的反应来实现酰胺形成的反应条件。在一些实例中，酰胺合成条件是指适合于在羧酸和胺之间实现酰胺键的形成的反应条件。在这些实例中的一些实例中，在活化的羧酸与胺反应形成酰胺之前，羧酸首先被转化成活化的羧酸。实现酰胺的形成的合适条件包括但不限于那些利用试剂实现羧酸和胺之间的反应的条件，所述试剂包括但不限于二环己基碳二亚胺(DCC)、二异丙基碳二亚胺(DIC)、(苯并三唑-1-基氧基)三(二甲氨基)鏻六氟磷酸盐(BOP)、(苯并三唑-1-基氧基)三吡咯烷鏻六氟磷酸盐(PyBOP)、(7-氮杂苯并三唑-1-基氧基)三吡咯烷鏻六氟磷酸盐(PyAOP)、溴代三吡咯烷鏻六氟磷酸盐(PyBrOP)、O-(苯并三唑-1-基)-N,N,N′,N′-四甲基脲六氟磷酸盐(HBTU)、O-(苯并三唑-1-基)-N,N,N′,N′-四甲基脲四氟硼酸盐(TBTU)、1-[双(二甲氨基)亚甲基]-1H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶鎓3-氧化物六氟磷酸盐(HATU)、N-乙氧基羰基-2-乙氧基-1,2-二氢喹啉(EEDQ)，N-乙基-N′-(3-二甲氨基丙基)碳二亚胺(EDC)、2-氯-1,3-二甲基咪唑烷鎓六氟磷酸盐(2-chloro-1,3-dimethylimidazolidinium hexafluorophosphate，CIP)、2-氯-4,6-二甲氧基-1,3,5-三嗪(CDMT)、(1-氰基-2-乙氧基-2-氧代亚乙基氨基氧基)二甲氨基-吗啉代-碳正离子-六氟磷酸盐((1-Cyano-2-ethoxy-2-oxoethylidenaminooxy)dimethylamino-morpholino-carbeniumhexafluorophosphate，COMU)和羰基二咪唑(CDI)。
在一些实例中，在用胺处理活化的羧酸酯以形成酰胺键之前，羧酸首先被转化成活化的羧酸酯。在某些实施方案中，用试剂处理羧酸。该试剂通过使羧酸去质子化来活化羧酸，并且然后由于去质子化的羧酸对质子化的试剂的亲核攻击而与去质子化的羧酸形成产物复合物。与活化之前的羧酸相比，某些羧酸的活化的羧酸酯随后更易于被胺亲核攻击。这导致酰胺键形成。因此，羧酸被描述为活化的。示例性试剂包括DCC和DIC。
如本文使用的，“牛磺酸”是指试剂
Figure BDA0003124860200001081
或基团
Figure BDA0003124860200001082
其中
Figure BDA0003124860200001083
指示牛磺酸通过其被键合至所述式中相邻基团的原子。
本公开内容的化合物
根据前述目的和其他目的，本公开内容提供了利福霉素类似物化合物、其前体和中间体、药物组合物以及用于抑制细菌生长和/或治疗需要相应治疗的受试者的细菌感染的方法。
在一方面中，本公开内容提供具有式(A)的结构的利福霉素类似物化合物或其前体：
Figure BDA0003124860200001084
或其药学上可接受的盐，其中：
X选自-O-和-NR*-；
Za和Zb独立地选自氢、-Cl、-Br、-OR1和-RN；条件是Za或Zb中的至少一个不是氢；其中：
R1选自氢、RN、脂肪族C1-C20烃、芳香族C1-C20烃、杂芳香族C1-C20烃、环状脂肪族C1-C20烃、杂环C1-C20烃及其组合，它们中的每一个还包含0-8个选自卤素、O、N和S的杂原子，并且其中R1任选地被以下中的一种或更多种取代：-F、-Cl、-Br、-I、-OH、-OR*、-NO、-NO2、-NO3、-O-NO、-N3、-NH2、-NHR*、-N(R*)2、-N(R*)3 +、-N(R*)-OH、-O-N(R*)2、-N(R*)-O-R*、-CN、-NC、-(C＝O)-R*、-CHO、-CO2H、-CO2R*、-(C＝O)-S-R*、-O-(C＝O)-H、-O-(C＝O)-R*、-S-(C＝O)-R*、-(C＝O)-NH2、-(C＝O)-N(R*)2、-(C＝O)-NHNH2、-O-(C＝O)-NHNH2、-(C＝S)-NH2、-(C＝S)-N(R*)2、-N(R*)-CHO、-N(R*)-(C＝O)-R*、-SCN、-NCS、-NSO、-SSR*、-SO2R*、-SO2-N(R*)2、-S(＝O)-OR*、-S(＝O)-R*、-Si(R*)3、-CF3、-O-CF3及其组合，条件是R1不是正丁基基团，并且当X是-O-且Ra是氢时，R1不是氢；
RN选自：
Figure BDA0003124860200001091
Figure BDA0003124860200001092
其中符号
Figure BDA0003124860200001093
表示附接点；并且R’、R”和R”’选自氢、C1-C6脂肪族烃和例如FMOC和Boc的保护基团，或者其中R’和R”一起形成脂肪族环状结构，诸如脂肪族单环的、脂肪族双环的或脂肪族多环的结构；
R2、R3和R4独立地选自氢、脂肪族C1-C20烃和-(C＝O)-R*，它们中的每一个还包含0-8个选自卤素、O、N和S的杂原子；
Ra选自氢、-F、-Cl、-Br、-I、-OH、-OR*、-NH2、-NHR*、-N(R*)2、-N(R*)3 +、-(C＝O)-R*、-CHO、-CO2H、-CO2R*、-SR*、-SO2R*和脂肪族C1-C20烃，它还包含0-8个选自卤素、O、N和S的杂原子，并且其中Ra任选地被以下中的一种或更多种取代：-F、-Cl、-Br、-I、-OH、-OR*；
Rb选自氢、-F、-Cl、-Br、-I、-OH、-OR*、-(C＝O)-R*、-CHO、-CO2H、-CO2R*和脂肪族C1-C20烃，它还包含0-3个选自卤素、O和S的杂原子，并且其中Rb任选地被以下中的一种或更多种取代：-F、-Cl、-Br、-I、-OH、-OR*，并且
R*在每次出现时独立地选自氢、脂肪族C1-C20烃、芳香族C1-C20烃、杂芳香族C1-C20烃、环状脂肪族C1-C20烃、杂环C1-C20烃及其组合，它还包含0-8个选自卤素、O、N和S及其组合的杂原子。
在一方面中，本公开内容提供具有式(I)的结构的利福霉素类似物化合物：
Figure BDA0003124860200001101
或其药学上可接受的盐，其中：
X选自-O-和-NR*-；
R1选自RN、氢、脂肪族C1-C20烃、芳香族C1-C20烃、杂芳香族C1-C20烃、环状脂肪族C1-C20烃、杂环C1-C20烃及其组合，它们中的每一个还包含0-8个选自卤素、O、N和S的杂原子，并且其中R1任选地被以下中的一种或更多种取代：-F、-Cl、-Br、-I、-OH、-OR*、-NO、-NO2、-NO3、-O-NO、-N3、-NH2、-NHR*、-N(R*)2、-N(R*)3 +、-N(R*)-OH、-O-N(R*)2、-N(R*)-O-R*、-CN、-NC、-(C＝O)-R*、-CHO、-CO2H、-CO2R*、-(C＝O)-S-R*、-O-(C＝O)-H、-O-(C＝O)-R*、-S-(C＝O)-R*、-(C＝O)-NH2、-(C＝O)-N(R*)2、-(C＝O)-NHNH2、-O-(C＝O)-NHNH2、-(C＝S)-NH2、-(C＝S)-N(R*)2、-N(R*)-CHO、-N(R*)-(C＝O)-R*、-SCN、-NCS、-NSO、-SSR*、-SO2R*、-SO2-N(R*)2、-S(＝O)-OR*、-S(＝O)-R*、-Si(R*)3、-CF3、-O-CF3及其组合，条件是R1不是正丁基基团，并且当X是-O-且Ra是氢时，R1不是氢；
RN选自：
Figure BDA0003124860200001111
Figure BDA0003124860200001112
其中符号
Figure BDA0003124860200001113
表示附接点；并且R’、R”和R”’选自氢、C1-C6脂肪族烃和包括以下的保护基团：FMOC和Boc，或者其中R’和R”一起形成脂肪族单环的、脂肪族双环的或脂肪族多环的结构；
R2、R3和R4独立地选自氢、脂肪族C1-C20烃或-(C＝O)-R*，它们中的每一个还包含0-8个选自卤素、O、N和S的杂原子；
Ra选自氢、-F、-Cl、-Br、-I、-OH、-OR*、-NH2、-NHR*、-N(R*)2、-N(R*)3 +、-(C＝O)-R*、-CHO、-CO2H、-CO2R*、-SR*、-SO2R*和脂肪族C1-C20烃，它还包含0-8个选自卤素、O、N和S的杂原子，并且其中Ra任选地被以下中的一种或更多种取代：-F、-Cl、-Br、-I、-OH、-OR*；
Rb选自氢、-F、-Cl、-Br、-I、-OH、-OR*、-(C＝O)-R*、-CHO、-CO2H、-CO2R*和脂肪族C1-C20烃，它还包含0-3个选自卤素、O和S的杂原子，并且其中Rb任选地被以下中的一种或更多种取代：-F、-Cl、-Br、-I、-OH、-OR*，并且
R*在每次出现时独立地选自氢、脂肪族C1-C20烃、芳香族C1-C20烃、杂芳香族C1-C20烃、环状脂肪族C1-C20烃、杂环C1-C20烃及其组合，它还包含0-8个选自卤素、O、N和S及其组合的杂原子。
在一方面中，本公开内容提供具有式(I’)的结构的利福霉素类似物化合物：
Figure BDA0003124860200001121
或其药学上可接受的盐，其中：
X选自-O-和-NR*-；
R1选自RN、氢、脂肪族C1-C20烃、芳香族C1-C20烃、杂芳香族C1-C20烃、环状脂肪族C1-C20烃、杂环C1-C20烃及其组合，它们中的每一个还包含0-8个选自卤素、O、N和S的杂原子，并且其中R1任选地被以下中的一种或更多种取代：-F、-Cl、-Br、-I、-OH、-OR*、-NO、-NO2、-NO3、-O-NO、-N3、-NH2、-NHR*、-N(R*)2、-N(R*)3 +、-N(R*)-OH、-O-N(R*)2、-N(R*)-O-R*、-CN、-NC、-(C＝O)-R*、-CHO、-CO2H、-CO2R*、-(C＝O)-S-R*、-O-(C＝O)-H、-O-(C＝O)-R*、-S-(C＝O)-R*、-(C＝O)-NH2、-(C＝O)-N(R*)2、-(C＝O)-NHNH2、-O-(C＝O)-NHNH2、-(C＝S)-NH2、-(C＝S)-N(R*)2、-N(R*)-CHO、-N(R*)-(C＝O)-R*、-SCN、-NCS、-NSO、-SSR*、-SO2R*、-SO2-N(R*)2、-S(＝O)-OR*、-S(＝O)-R*、-Si(R*)3、-CF3、-O-CF3及其组合，条件是R1不是正丁基基团，并且当X是-O-且Ra是氢时，R1不是氢；
RN选自：
Figure BDA0003124860200001131
Figure BDA0003124860200001132
其中符号
Figure BDA0003124860200001133
表示附接点；并且R’、R”和R”’选自氢、C1-C6脂肪族烃和包括以下的保护基团：FMOC和Boc，或者其中R’和R”一起形成脂肪族单环的、脂肪族双环的或脂肪族多环的结构；
R2、R3和R4独立地选自氢、脂肪族C1-C20烃或-(C＝O)-R*，它们中的每一个还包含0-8个选自卤素、O、N和S的杂原子；
Ra选自氢、-F、-Cl、-Br、-I、-OH、-OR*、-NH2、-NHR*、-N(R*)2、-N(R*)3 +、-(C＝O)-R*、-CHO、-CO2H、-CO2R*、-SR*、-SO2R*和脂肪族C1-C20烃，它还包含0-8个选自卤素、O、N和S的杂原子，并且其中Ra任选地被以下中的一种或更多种取代：-F、-Cl、-Br、-I、-OH、-OR*；
Rb选自氢、-F、-Cl、-Br、-I、-OH、-OR*、-(C＝O)-R*、-CHO、-CO2H、-CO2R*和脂肪族C1-C20烃，它还包含0-3个选自卤素、O和S的杂原子，并且其中Rb任选地被以下中的一种或更多种取代：-F、-Cl、-Br、-I、-OH、-OR*，并且
R*在每次出现时独立地选自氢、脂肪族C1-C20烃、芳香族C1-C20烃、杂芳香族C1-C20烃、环状脂肪族C1-C20烃、杂环C1-C20烃及其组合，它还包含0-8个选自卤素、O、N和S及其组合的杂原子。
在式(A)、式(I)或式(I’)的化合物的实施方案中，X是-O-；R1是脂肪族C1-C3烃；R2是甲基基团；R3是Ac(-(C＝O)-CH3)；R4是氢；并且Ra是氢。
在式(A)、式(I)或式(I’)的化合物的实施方案中，X是-O-；R1是苄基基团；R2是甲基基团；R3是Ac(-(C＝O)-CH3)；R4是氢；Ra是氢并且Rb是氢。
在式(A)、式(I)或式(I’)的化合物的实施方案中，X是-O-；R1是包含1-8个选自O和N的杂原子的脂肪族C1-C8烃；R2是甲基基团；R3是Ac(-(C＝O)-CH3)；R4是氢；Ra是氢并且Rb是氢。
在式(A)、式(I)或式(I’)的化合物的实施方案中，X是-O-；R1是被-NH2、-NHR*、-N(R*)2中的一种或更多种取代的脂肪族C1-C8烃，R*是H或脂肪族C1-C3烃；R2是甲基基团；R3是Ac(-(C＝O)-CH3)；R4是氢；Ra是氢并且Rb是氢。
在式(A)、式(I)或式(I’)的化合物的实施方案中，X是-NCH3-；R1是-OH；R2是甲基基团；R3是Ac(-(C＝O)-CH3)；R4是氢；Ra是氢并且Rb是氢。
在一种实施方案中，本公开内容的利福霉素类似物化合物具有式(II)的结构：
Figure BDA0003124860200001141
或其药学上可接受的盐，其中：
X选自-O-和-NR*-；
Ra选自氢、-Cl和-OR*；
R1选自RN、氢、脂肪族C1-C20烃、芳香族C1-C20烃、杂芳香族C1-C20烃、环状脂肪族C1-C20烃、杂环C1-C20烃及其组合，它们中的每一个还包含0-8个选自卤素、O、N和S的杂原子，并且其中R1任选地被以下中的一种或更多种取代：-F、-Cl、-Br、-I、-OH、-OR*、-NO、-NO2、-NO3、-O-NO、-N3、-NH2、-NHR*、-N(R*)2、-N(R*)3 +、-N(R*)-OH、-O-N(R*)2、-N(R*)-O-R*、-CN、-NC、-(C＝O)-R*、-CHO、-CO2H、-CO2R*、-(C＝O)-S-R*、-O-(C＝O)-H、-O-(C＝O)-R*、-S-(C＝O)-R*、-(C＝O)-NH2、-(C＝O)-N(R*)2、-(C＝O)-NHNH2、-O-(C＝O)-NHNH2、-(C＝S)-NH2、-(C＝S)-N(R*)2、-N(R*)-CHO、-N(R*)-(C＝O)-R*、-SCN、-NCS、-NSO、-SSR*、-SO2R*、-SO2-N(R*)2、-S(＝O)-OR*、-S(＝O)-R*、-Si(R*)3、-CF3、-O-CF3及其组合，条件是R1不是正丁基基团；
RN选自：
Figure BDA0003124860200001151
Figure BDA0003124860200001152
其中符号
Figure BDA0003124860200001153
表示附接点；并且R’、R”和R”’选自氢、C1-C6脂肪族烃和包括以下的保护基团：FMOC和Boc，或者其中R’和R”一起形成脂肪族单环的、脂肪族双环的或脂肪族多环的结构；并且
R*在每次出现时独立地选自氢、脂肪族C1-C20烃、芳香族C1-C20烃、杂芳香族C1-C20烃、环状脂肪族C1-C20烃、杂环C1-C20烃及其组合，它还包含0-8个选自卤素、O、N和S及其组合的杂原子。
在一种实施方案中，本公开内容的利福霉素类似物化合物具有式(II’)的结构：
Figure BDA0003124860200001161
或其药学上可接受的盐，其中：
X选自-O-和-NR*-；
Ra选自氢和-OR*；
R1选自RN、氢、脂肪族C1-C20烃、芳香族C1-C20烃、杂芳香族C1-C20烃、环状脂肪族C1-C20烃、杂环C1-C20烃及其组合，它们中的每一个还包含0-8个选自卤素、O、N和S的杂原子，并且其中R1任选地被以下中的一种或更多种取代：-F、-Cl、-Br、-I、-OH、-OR*、-NO、-NO2、-NO3、-O-NO、-N3、-NH2、-NHR*、-N(R*)2、-N(R*)3 +、-N(R*)-OH、-O-N(R*)2、-N(R*)-O-R*、-CN、-NC、-(C＝O)-R*、-CHO、-CO2H、-CO2R*、-(C＝O)-S-R*、-O-(C＝O)-H、-O-(C＝O)-R*、-S-(C＝O)-R*、-(C＝O)-NH2、-(C＝O)-N(R*)2、-(C＝O)-NHNH2、-O-(C＝O)-NHNH2、-(C＝S)-NH2、-(C＝S)-N(R*)2、-N(R*)-CHO、-N(R*)-(C＝O)-R*、-SCN、-NCS、-NSO、-SSR*、-SO2R*、-SO2-N(R*)2、-S(＝O)-OR*、-S(＝O)-R*、-Si(R*)3、-CF3、-O-CF3及其组合，条件是R1不是正丁基基团；
RN选自：
Figure BDA0003124860200001171
Figure BDA0003124860200001172
其中符号
Figure BDA0003124860200001173
表示附接点；并且R’、R”和R”’选自氢、C1-C6脂肪族烃和包括以下的保护基团：FMOC和Boc，或者其中R’和R”一起形成脂肪族单环的、脂肪族双环的或脂肪族多环的结构；并且
R*在每次出现时独立地选自氢、脂肪族C1-C20烃、芳香族C1-C20烃、杂芳香族C1-C20烃、环状脂肪族C1-C20烃、杂环C1-C20烃及其组合，它还包含0-8个选自卤素、O、N和S及其组合的杂原子。
在一种实施方案中，本公开内容的利福霉素类似物化合物具有式(III)的结构：
Figure BDA0003124860200001181
或其药学上可接受的盐，其中：
Ra选自氢和-OR*；
R5选自RN、脂肪族C1-C20烃、芳香族C1-C20烃、杂芳香族C1-C20烃、环状脂肪族C1-C20烃、杂环C1-C20烃及其组合，它们中的每一个还包含0-8个选自卤素、O、N和S的杂原子，并且其中R5任选地被以下中的一种或更多种取代：-F、-Cl、-Br、-I、-OH、-OR*、-NH2、-NHR*、-N(R*)2、-N(R*)3 +、-N(R*)-(C＝O)-R*、-(C＝O)-R*、-CHO、-CO2H、-CO2R*及其组合，条件是R5不是正丁基基团；
R*在每次出现时独立地选自氢、脂肪族C1-C20烃、芳香族C1-C20烃、杂芳香族C1-C20烃、环状脂肪族C1-C20烃、杂环C1-C20烃及其组合，它还包含0-8个选自卤素、O、N和S及其组合的杂原子；并且
RN选自：
Figure BDA0003124860200001182
Figure BDA0003124860200001191
Figure BDA0003124860200001192
其中符号
Figure BDA0003124860200001193
表示附接点；并且R’、R”和R”’选自氢、C1-C6脂肪族烃和包括以下的保护基团：FMOC和Boc，或者其中R’和R”一起形成脂肪族单环的、脂肪族双环的或脂肪族多环的结构。
在一种实施方案中，本公开内容的利福霉素类似物化合物具有式(III’)的结构：
Figure BDA0003124860200001194
或其药学上可接受的盐，其中：
Ra选自氢和-OR*；
R5选自RN、脂肪族C1-C20烃、芳香族C1-C20烃、杂芳香族C1-C20烃、环状脂肪族C1-C20烃、杂环C1-C20烃及其组合，它们中的每一个还包含0-8个选自卤素、O、N和S的杂原子，并且其中R5任选地被以下中的一种或更多种取代：-F、-Cl、-Br、-I、-OH、-OR*、-NH2、-NHR*、-N(R*)2、-N(R*)3 +、-N(R*)-(C＝O)-R*、-(C＝O)-R*、-CHO、-CO2H、-CO2R*及其组合，条件是R5不是正丁基基团；
R*在每次出现时独立地选自氢、脂肪族C1-C20烃、芳香族C1-C20烃、杂芳香族C1-C20烃、环状脂肪族C1-C20烃、杂环C1-C20烃及其组合，它还包含0-8个选自卤素、O、N和S及其组合的杂原子；并且
RN选自：
Figure BDA0003124860200001201
Figure BDA0003124860200001202
其中符号
Figure BDA0003124860200001203
表示附接点；并且R’、R”和R”’选自氢、C1-C6脂肪族烃和包括以下的保护基团：FMOC和Boc，或者其中R’和R”一起形成脂肪族单环的、脂肪族双环的或脂肪族多环的结构。
在一种实施方案中，本公开内容的利福霉素类似物化合物具有式(IV)的结构：
Figure BDA0003124860200001204
或其药学上可接受的盐，其中：
Ra选自氢和-OR*；
R5选自RN、氢、脂肪族C1-C20烃、芳香族C1-C20烃、杂芳香族C1-C20烃、环状脂肪族C1-C20烃、杂环C1-C20烃及其组合，它们中的每一个还包含0-8个选自卤素、O、N和S的杂原子，并且其中R5任选地被以下中的一种或更多种取代：-F、-Cl、-Br、-I、-OH、-OR*、-NH2、-NHR*、-N(R*)2、-N(R*)3 +、-N(R*)-(C＝O)-R*、-(C＝O)-R*、-CHO、-CO2H、-CO2R*及其组合；
RN选自：
Figure BDA0003124860200001211
Figure BDA0003124860200001212
其中符号
Figure BDA0003124860200001213
表示附接点；并且R’、R”和R”’选自氢、C1-C6脂肪族烃和包括以下的保护基团：FMOC和Boc，或者其中R’和R”一起形成脂肪族单环的、脂肪族双环的或脂肪族多环的结构；并且
R*在每次出现时独立地选自氢、脂肪族C1-C20烃、芳香族C1-C20烃、杂芳香族C1-C20烃、环状脂肪族C1-C20烃、杂环C1-C20烃及其组合，它还包含0-8个选自卤素、O、N和S及其组合的杂原子。
在一种实施方案中，本公开内容的利福霉素类似物化合物具有式(IV’)的结构：
Figure BDA0003124860200001221
或其药学上可接受的盐，其中：
Ra选自氢和-OR*；
R5选自RN、氢、脂肪族C1-C20烃、芳香族C1-C20烃、杂芳香族C1-C20烃、环状脂肪族C1-C20烃、杂环C1-C20烃及其组合，它们中的每一个还包含0-8个选自卤素、O、N和S的杂原子，并且其中R5任选地被以下中的一种或更多种取代：-F、-Cl、-Br、-I、-OH、-OR*、-NH2、-NHR*、-N(R*)2、-N(R*)3 +、-N(R*)-(C＝O)-R*、-(C＝O)-R*、-CHO、-CO2H、-CO2R*及其组合；
RN选自：
Figure BDA0003124860200001222
Figure BDA0003124860200001231
Figure BDA0003124860200001232
其中符号
Figure BDA0003124860200001233
表示附接点；并且R’、R”和R”’选自氢、C1-C6脂肪族烃和包括以下的保护基团：FMOC和Boc，或者其中R’和R”一起形成脂肪族单环的、脂肪族双环的或脂肪族多环的结构；并且
R*在每次出现时独立地选自氢、脂肪族C1-C20烃、芳香族C1-C20烃、杂芳香族C1-C20烃、环状脂肪族C1-C20烃、杂环C1-C20烃及其组合，它还包含0-8个选自卤素、O、N和S及其组合的杂原子。
在一种实施方案中，本公开内容的利福霉素类似物化合物具有式(V)的结构：
Figure BDA0003124860200001234
或其药学上可接受的盐，其中：
X选自-O-和-NR*-；
Ra选自氢和-OR*；
R6选自RN、脂肪族C1-C20烃、芳香族C1-C20烃、杂芳香族C1-C20烃、环状脂肪族C1-C20烃、杂环C1-C20烃及其组合，它们中的每一个还包含0-8个选自卤素、O、N和S的杂原子，并且其中R6任选地被以下中的一种或更多种取代：-OH、-OR*、-NH2、-NHR*、-N(R*)2、-N(R*)3 +、-(C＝O)-R*、-CHO、-CO2H、-CO2R*及其组合，条件是R6不是正丁基基团；
RN选自：
Figure BDA0003124860200001241
Figure BDA0003124860200001242
其中符号
Figure BDA0003124860200001243
表示附接点；并且R’、R”和R”’选自氢、C1-C6脂肪族烃和包括以下的保护基团：FMOC和Boc，或者其中R’和R”一起形成脂肪族单环的、脂肪族双环的或脂肪族多环的结构；并且
R*在每次出现时独立地选自氢、脂肪族C1-C20烃、芳香族C1-C20烃、杂芳香族C1-C20烃、环状脂肪族C1-C20烃、杂环C1-C20烃及其组合，它还包含0-8个选自卤素、O、N和S及其组合的杂原子。
在一种实施方案中，本公开内容的利福霉素类似物化合物具有式(V’)的结构：
Figure BDA0003124860200001251
或其药学上可接受的盐，其中：
X选自-O-和-NR*-；
Ra选自氢和-OR*；
R6选自RN、脂肪族C1-C20烃、芳香族C1-C20烃、杂芳香族C1-C20烃、环状脂肪族C1-C20烃、杂环C1-C20烃，它们中的每一个还包含0-8个选自卤素、O、N和S的杂原子，并且其中R6任选地被以下中的一种或更多种取代：-OH、-OR*、-NH2、-NHR*、-N(R*)2、-N(R*)3 +、-N(R*)-(C＝O)-R*、-(C＝O)-R*、-CHO、-CO2H、-CO2R*及其组合，条件是R6不是正丁基基团；
RN选自：
Figure BDA0003124860200001252
Figure BDA0003124860200001261
其中符号
Figure BDA0003124860200001262
表示附接点；并且R’、R”和R”’选自氢、C1-C6脂肪族烃和包括以下的保护基团：FMOC和Boc，或者其中R’和R”一起形成脂肪族单环的、脂肪族双环的或脂肪族多环的结构；并且
R*在每次出现时独立地选自氢、脂肪族C1-C20烃、芳香族C1-C20烃、杂芳香族C1-C20烃、环状脂肪族C1-C20烃、杂环C1-C20烃及其组合，它还包含0-8个选自卤素、O、N和S及其组合的杂原子。
在另一方面中，本公开内容提供具有式(B)的结构的利福霉素类似物化合物、其中间体或前体：
Figure BDA0003124860200001263
或其药学上可接受的盐，其中：
X选自-O-和-NR*-；
R1选自氢、RN、脂肪族C1-C20烃、芳香族C1-C20烃、杂芳香族C1-C20烃、环状脂肪族C1-C20烃、杂环C1-C20烃及其组合，它们中的每一个还包含0-8个选自卤素、O、N和S的杂原子，并且其中R1任选地被以下中的一种或更多种取代：-F、-Cl、-Br、-I、-OH、-OR*、-NO、-NO2、-NO3、-O-NO、-N3、-NH2、-NHR*、-N(R*)2、-N(R*)3 +、-N(R*)-OH、-O-N(R*)2、-N(R*)-O-R*、-CN、-NC、-(C＝O)-R*、-CHO、-CO2H、-CO2R*、-(C＝O)-S-R*、-O-(C＝O)-H、-O-(C＝O)-R*、-S-(C＝O)-R*、-(C＝O)-NH2、-(C＝O)-N(R*)2、-(C＝O)-NHNH2、-O-(C＝O)-NHNH2、-(C＝S)-NH2、-(C＝S)-N(R*)2、-N(R*)-CHO、-N(R*)-(C＝O)-R*、-SCN、-NCS、-NSO、-SSR*、-SO2R*、-SO2-N(R*)2、-S(＝O)-OR*、-S(＝O)-R*、-Si(R*)3、-CF3、-O-CF3及其组合，条件是R1不是正丁基基团，并且当X是-O-且Ra是氢时，R1不是氢；
RN选自：
Figure BDA0003124860200001271
Figure BDA0003124860200001272
其中符号
Figure BDA0003124860200001273
表示附接点；并且R’、R”和R”’选自氢、C1-C6脂肪族烃和选自以下的保护基团：芴基甲氧羰基(FMOC)和叔丁氧羰基(Boc)，或者其中R’和R”一起形成脂肪族单环的、脂肪族双环的或脂肪族多环的结构；
R2、R3和R4独立地选自氢、脂肪族C1-C20烃和-(C＝O)-R*，它们中的每一个还包含0-8个选自卤素、O、N和S的杂原子；
Ra选自氢、-F、-Cl、-Br、-I、-OH、-OR*、-NH2、-NHR*、-N(R*)2、-N(R*)3 +、-(C＝O)-R*、-CHO、-CO2H、-CO2R*、-SR*、-SO2R*和脂肪族C1-C20烃，它还包含0-8个选自卤素、O、N和S的杂原子，并且其中Ra任选地被以下中的一种或更多种取代：-F、-Cl、-Br、-I、-OH、-OR*；
Rb选自氢、-F、-Cl、-Br、-I、-OH、-OR*、-(C＝O)-R*、-CHO、-CO2H、-CO2R*和脂肪族C1-C20烃，它还包含0-3个选自卤素、O和S的杂原子，并且其中Rb任选地被以下中的一种或更多种取代：-F、-Cl、-Br、-I、-OH、-OR*，并且
R*在每次出现时独立地选自氢、脂肪族C1-C20烃、芳香族C1-C20烃、杂芳香族C1-C20烃、环状脂肪族C1-C20烃、杂环C1-C20烃及其组合，它还包含0-8个选自卤素、O、N和S及其组合的杂原子。
在另一方面中，本公开内容提供具有式(B-1)的结构的利福霉素类似物化合物：
Figure BDA0003124860200001281
或其药学上可接受的盐，其中：
X选自-O-和-NR*-；
R1选自RN、氢、脂肪族C1-C20烃、芳香族C1-C20烃、杂芳香族C1-C20烃、环状脂肪族C1-C20烃、杂环C1-C20烃及其组合，它们中的每一个还包含0-8个选自卤素、O、N和S的杂原子，并且其中R1任选地被以下中的一种或更多种取代：-F、-Cl、-Br、-I、-OH、-OR*、-NO、-NO2、-NO3、-O-NO、-N3、-NH2、-NHR*、-N(R*)2、-N(R*)3 +、-N(R*)-OH、-O-N(R*)2、-N(R*)-O-R*、-CN、-NC、-(C＝O)-R*、-CHO、-CO2H、-CO2R*、-(C＝O)-S-R*、-O-(C＝O)-H、-O-(C＝O)-R*、-S-(C＝O)-R*、-(C＝O)-NH2、-(C＝O)-N(R*)2、-(C＝O)-NHNH2、-O-(C＝O)-NHNH2、-(C＝S)-NH2、-(C＝S)-N(R*)2、-N(R*)-CHO、-N(R*)-(C＝O)-R*、-SCN、-NCS、-NSO、-SSR*、-SO2R*、-SO2-N(R*)2、-S(＝O)-OR*、-S(＝O)-R*、-Si(R*)3、-CF3、-O-CF3及其组合，条件是R1不是正丁基基团；
RN选自：
Figure BDA0003124860200001291
Figure BDA0003124860200001292
其中符号
Figure BDA0003124860200001293
表示附接点；并且R’、R”和R”’选自氢、C1-C6脂肪族烃和选自以下的保护基团：FMOC和Boc，或者其中R’和R”一起形成脂肪族单环的、脂肪族双环的或脂肪族多环的结构；并且
R*在每次出现时独立地选自氢、脂肪族C1-C20烃、芳香族C1-C20烃、杂芳香族C1-C20烃、环状脂肪族C1-C20烃、杂环C1-C20烃及其组合，它还包含0-8个选自卤素、O、N和S及其组合的杂原子。
在另一方面中，本公开内容提供具有式(B-2)的结构的利福霉素类似物化合物：
Figure BDA0003124860200001301
或其药学上可接受的盐，其中：
RN选自：
Figure BDA0003124860200001302
Figure BDA0003124860200001303
其中符号
Figure BDA0003124860200001304
表示附接点；并且R’、R”和R”’选自氢、C1-C6脂肪族烃和选自以下的保护基团：FMOC和Boc，或者其中R’和R”一起形成脂肪族单环的、脂肪族双环的或脂肪族多环的结构。
在另一方面中，本公开内容提供具有式(B-2)的结构的利福霉素类似物化合物：
Figure BDA0003124860200001311
或其药学上可接受的盐，其中：
RN是
Figure BDA0003124860200001312
其中符号
Figure BDA0003124860200001313
表示附接点；并且R’和R”选自氢和C1-C6脂肪族烃。
在一种实施方案中，利福霉素类似物化合物具有根据以下式的结构：
Figure BDA0003124860200001314
或其药学上可接受的盐。
在任一前述式的实施方案中提供了一种化合物，其中R1选自RN、氢、脂肪族C1-C20烃、芳香族C1-C20烃、杂芳香族C1-C20烃、环状脂肪族C1-C20烃、杂环C1-C20烃及其组合，它们中的每一个还包含0-3个选自O和N的杂原子，并且其中R1任选地被以下中的一种或更多种取代：-F、-Cl、-Br、-I、-OH、C1-3烷氧基、-NH2、-NHR*、-N(R*)2、-N(R*)3 +、-N(R*)-OH、-O-N(R*)2、-N(R*)-O-R*、-N(R*)-(C＝O)-R*、-(C＝O)-R*、-CHO、-CO2H、-CO2R*、-O-(C＝O)-H、-O-(C＝O)-R*、-(C＝O)-NH2、-(C＝O)-N(R*)2、-Si(R*)3、-CF3、-O-CF3及其组合，条件是R1不是正丁基基团，并且当X是-O-且Ra是氢时，R1不是氢。
在任一前述式的实施方案中提供了一种化合物，其中R1是脂肪族C1-C20烃和芳香族C1-C20烃的组合。
在任一前述式的实施方案中提供了一种化合物，其中R1是脂肪族C1-C20烃和杂芳香族C1-C20烃的组合。
在任一前述式的实施方案中提供了一种化合物，其中R1选自：
Figure BDA0003124860200001321
在任一前述式的实施方案中提供了一种化合物，其中R1是被-NH2、-NHR*、-N(R*)2或-N(R*)-(C＝O)-R*中的一种或更多种取代的脂肪族C1-C20烃。
在任一前述式的实施方案中提供了一种化合物，其中R1是被-NH-(C＝O)-CH3或-N(CH3)-(C＝O)-CH3取代的脂肪族C1-C20烃。
在任一前述式的实施方案中提供了一种化合物，其中Ra是氢。
在任一前述式的实施方案中提供了一种化合物，其中Ra是-OH。
在任一前述式的实施方案中提供了一种化合物，其中Ra是-Cl。
在任一前述式的实施方案中提供了一种化合物，其中Ra是-OR*，并且R*选自脂肪族C1-C20烃、芳香族C1-C20烃及其组合。
在任一前述式的实施方案中提供了一种化合物，其中RN选自：
Figure BDA0003124860200001322
Figure BDA0003124860200001331
Figure BDA0003124860200001332
其中符号
Figure BDA0003124860200001333
表示附接点；并且R’、R”和R”’选自氢、C1-C6脂肪族烃和包括以下的保护基团：FMOC和Boc，或者其中R’和R”一起形成脂肪族单环的、脂肪族双环的或脂肪族多环的结构。
在任一前述式的实施方案中提供了一种化合物，其中RN选自：
Figure BDA0003124860200001334
Figure BDA0003124860200001335
其中R’是氢、脂肪族烃或保护基团，并且其中符号
Figure BDA0003124860200001336
表示附接点。
在任一前述式的实施方案中提供了一种化合物，其中R*在每次出现时独立地选自氢；脂肪族C1-C6烃；芳香族C6-C7烃及其组合，它还包含0-3个选自O和N及其组合的杂原子；脂肪族C1-C20烃、芳香族C1-C20烃、杂芳香族C1-C20烃、环状脂肪族C1-C20烃、杂环C1-C20烃及其组合，它还包含0-8个选自卤素、O和N及其组合的杂原子。
根据本公开内容的利福霉素类似物化合物的一些示例性非限制性实施方案在下表1中示出：
表1:选择根据本公开内容的利福霉素类似物
Figure BDA0003124860200001341
Figure BDA0003124860200001351
Figure BDA0003124860200001361
Figure BDA0003124860200001371
Figure BDA0003124860200001381
Figure BDA0003124860200001391
Figure BDA0003124860200001401
Figure BDA0003124860200001411
Figure BDA0003124860200001421
Figure BDA0003124860200001431
Figure BDA0003124860200001441
在一种实施方案中，本公开内容的利福霉素类似物化合物具有选自由以下组成的组的结构：
Figure BDA0003124860200001442
Figure BDA0003124860200001451
或其药学上可接受的盐。
在一方面中，本公开内容的化合物具有式(IA)的结构：
Figure BDA0003124860200001452
其中：
X选自-O-、-S-和-NR*-；
R1选自氢、脂肪族C1-C20烃、芳香族C5-C20烃、杂芳香族C1-C20烃、芳基C6-C20烃、杂芳基C1-C20烃及其组合，它们中的每一个还包含0-8个选自卤素、O、N和S的杂原子，并且其中R1任选地被以下中的一种或更多种取代：-F、-Cl、-Br、-I、-OH、-OR*、-NO、-NO2、-NO3、-O-NO、-N3、-NH2、-NHR*、-N(R*)2、-N(R*)3 +、-N(R*)-OH、-O-N(R*)2、-N(R*)-O-R*、-CN、-NC、-(C＝O)-R*、-CHO、-CO2H、-CO2R*、-(C＝O)-S-R*、-O-(C＝O)-H、-O-(C＝O)-R*、-S-(C＝O)-R*、-(C＝O)-NH2、-(C＝O)-N(R*)2、-(C＝O)-NHNH2、-O-(C＝O)-NHNH2、-(C＝S)-NH2、-(C＝S)-N(R*)2、-N(R*)-CHO、-N(R*)-(C＝O)-R*、-SCN、-NCS、-NSO、-SSR*、-SO2R*、-SO2-N(R*)2、-S(＝O)-OR*、-S(＝O)-R*、-Si(R*)3、-CF3、-O-CF3及其组合，
R2、R3和R4独立地选自氢，直链的、支链的或环状的脂肪族C1-C20烃，或者-(C＝O)-R*，它们中的每一个还包含0-8个选自卤素、O、N和S的杂原子；
Ra在每次出现时独立地选自氢、-F、-Cl、-Br、-I、-OH、-OR*、-NH2、-NHR*、-N(R*)2、-N(R*)3 +、-(C＝O)-R*、-CHO、-CO2H、-CO2R*、-SR*、-SO2R*和脂肪族C1-C20烃，它还包含0-8个选自卤素、O、N和S的杂原子，并且其中Ra和Rb任选地被以下中的一种或更多种取代：-F、-Cl、-Br、-I、-OH、-OR*；
R*在每次出现时独立地选自氢、脂肪族C1-C20烃、芳香族C5-C20烃、杂芳香族C1-C20烃、芳基C6-C20烃、杂芳基C1-C20烃及其组合，它还包含0-8个选自卤素、O、N和S及其组合的杂原子。
在一种实施方案中，X是-O-；R1是脂肪族C1-C3烃；R2是甲基基团；R3是Ac(-(C＝O)-CH3)；R4是氢；并且Ra是氢。
在一种实施方案中，X是-O-；R1是苄基基团；R2是甲基基团；R3是Ac(-(C＝O)-CH3)；R4是氢；并且Ra是氢。
在一种实施方案中，X是-O-；R1是包含1-8个选自卤素、O、N和S的杂原子的脂肪族C1-C8烃；R2是甲基基团；R3是Ac(-(C＝O)-CH3)；R4是氢；并且Ra是氢。
在一种实施方案中，X是-O-；R1是被-NH2、-NHR*、-N(R*)2中的一种或更多种取代的脂肪族C1-C8烃；R2是甲基基团；R3是Ac(-(C＝O)-CH3)；R4是氢；并且Ra是氢。
在一种实施方案中，X是-NCH3-；R1是-OH；R2是甲基基团；R3是Ac(-(C＝O)-CH3)；R4是氢；并且Ra是氢。
本公开内容还包括本文所描述的化合物的盐。如本文使用的，“盐”是指所公开的化合物的衍生物，其中母体化合物通过将现有的酸部分或碱部分转化成其盐形式而被修饰。盐的实例包括但不限于：碱性残基例如胺的无机酸(例如HCl、HBr、H2SO4)盐或有机酸(例如乙酸、苯甲酸、三氟乙酸)盐；酸性残基例如羧酸的碱金属(例如Li、Na、K、Mg、Ca)盐或有机(例如三烷基铵)盐；等等。本申请的盐可以通过常规化学方法由包含碱性部分或酸性部分的母体化合物合成。通常，这样的盐可以通过使这些化合物的游离酸形式或游离碱形式与化学计量量的合适的碱或酸在水中或在有机溶剂中或在二者的混合物中反应来制备。在一些实施方案中，可以使用非水性介质如醚、乙酸乙酯、乙醇、异丙醇或乙腈(ACN)。
本申请还包括本文所描述的化合物的药学上可接受的盐。“药学上可接受的盐”包括上述“盐”的子集，它们是例如由无毒的无机酸或有机酸形成的、母体化合物的常规的无毒盐。合适的盐的清单在Remington's Pharmaceutical Sciences，第17版，MackPublishing Company,Easton,Pa.，1985，第1418页和Berge,SM等人，Journal ofPharmaceutical Science,1977,66,1,1-19中找到。本文采用措辞“药学上可接受的”来指代在合理医学判断的范围内适合用于与人类和动物的组织接触而无过度毒性、刺激、过敏反应或其他的问题或并发症，与合理的益处/风险比率相称的那些化合物、材料、组合物和/或剂型。
化合物的制备可以包括各种化学基团的保护和脱保护。保护和脱保护的需求以及合适的保护基团的选择可以由本领域技术人员容易地确定。保护基团的化学(chemistry)可以例如在Wuts和Greene，Greene Protective Groups in Organic Synthesis，第4版，John Wiley&Sons:New York,2006中找到。在一种非限制性实施方案中，保护基团可以包括1-氯乙基羰基(ACE)、乙酰基、苄基(Bn)、苄氧羰基(CBz)、甲酰基、甲基羰基、三氟乙酰基、叔丁氧羰基(Boc)和芴基甲氧羰基(Fmoc)。
本文描绘的利福霉素类似物化合物包括化合物的所有异构(例如，对映异构体、非对映异构体和几何(或构象))形式；例如，每个不对称中心的R构型和S构型，(Z)双键异构体和(E)双键异构体，以及(Z)构象异构体和(E)构象异构体。因此，本发明化合物的单一立体化学异构体以及对映异构体、非对映异构体和几何(或构象)混合物在本公开内容的范围内。本文呈现的化合物的所有互变异构形式也在本公开内容的范围内。
本文描述的利福霉素类似物化合物还包括仅在一个或更多个同位素富集的原子的存在方面不同的所有化合物。例如，除了用氘或氚代替氢、或者用11C-或13C-或14C-富集的碳代替碳、或者用17O-或18O-富集的氧代替氧、或者用15N-富集的氮代替氮之外，具有本发明结构的化合物都在本公开内容的范围内。
本公开内容的化合物及其盐的结晶形式也在本公开内容的范围内。本公开内容的化合物可以以各种无定形形式和结晶多晶型形式分离，包括但不限于无水的、水合的、非溶剂化的或溶剂化的无定形形式和结晶多晶型形式。示例性水合物包括半水合物、一水合物、二水合物等。在一些实施方案中，本公开内容的化合物是无水的和非溶剂化的。“无水”意指该化合物的结晶形式在晶格结构中基本上不含结合水(bound water)，即该化合物不形成结晶水合物。
制造方法
在一方面中，本公开内容提供了一种制造具有式(V)的结构的利福霉素类似物化合物的方法：
Figure BDA0003124860200001481
其中：X选自-O-和-NR*-；
R6选自RN、氢、脂肪族C1-C20烃、芳香族C1-C20烃、杂芳香族C1-C20烃、环状脂肪族C1-C20烃、杂环C1-C20烃及其组合，
RN选自：
Figure BDA0003124860200001491
Figure BDA0003124860200001492
其中符号
Figure BDA0003124860200001493
表示附接点；并且R’、R”和R”’选自氢、C1-C6脂肪族烃和包括以下的保护基团：FMOC和Boc，或者其中R’和R”一起形成脂肪族单环的、脂肪族双环的或脂肪族多环的结构；并且
R*在每次出现时独立地选自氢、脂肪族C1-C20烃、芳香族C1-C20烃、杂芳香族C1-C20烃、环状脂肪族C1-C20烃、杂环C1-C20烃及其组合，它还包含0-8个选自卤素、O、N和S及其组合的杂原子，
所述方法包括以下步骤：
(a)使具有以下结构的利福霉素S：
Figure BDA0003124860200001494
与具有式(VI)的结构的化合物：
Figure BDA0003124860200001501
接触，
其中X’选自-OH和-NHR*；以及
(b)将步骤(a)的产物用氧化剂进行处理。
在一方面中，本公开内容提供了一种制造具有式(V’)的结构的利福霉素类似物化合物的方法：
Figure BDA0003124860200001502
其中：X选自-O-和-NR*-；
R6选自RN、氢、脂肪族C1-C20烃、芳香族C1-C20烃、杂芳香族C1-C20烃、环状脂肪族C1-C20烃、杂环C1-C20烃及其组合，
RN选自：
Figure BDA0003124860200001503
Figure BDA0003124860200001511
Figure BDA0003124860200001512
其中符号
Figure BDA0003124860200001513
表示附接点；并且R’、R”和R”’选自氢、C1-C6脂肪族烃和包括以下的保护基团：FMOC和Boc，或者其中R’和R”一起形成脂肪族单环的、脂肪族双环的或脂肪族多环的结构；并且
R*在每次出现时独立地选自氢、脂肪族C1-C20烃、芳香族C1-C20烃、杂芳香族C1-C20烃、环状脂肪族C1-C20烃、杂环C1-C20烃及其组合，它还包含0-8个选自卤素、O、N和S及其组合的杂原子，
所述方法包括以下步骤：
(a)使具有以下结构的利福霉素S：
Figure BDA0003124860200001514
与具有式(VI’)的结构的化合物：
Figure BDA0003124860200001515
接触，
其中X’选自-OH和-NHR*；以及
(b)将步骤(a)的产物用氧化剂进行处理。
在一方面中，本公开内容提供了一种制造具有以下结构的化合物的方法：
Figure BDA0003124860200001521
所述方法包括以下步骤：
(a)使利福霉素S与具有式(VII)的结构的化合物：
Figure BDA0003124860200001522
接触，
其中PG是保护基团；
(b)将步骤(a)的产物用氧化剂进行处理；以及
(c)去除保护基团PG。
在一种实施方案中，式(VII)的化合物通过从式(VIII)的化合物中去除保护基团PG’来制备，
Figure BDA0003124860200001523
其中，保护基团PG和PG’彼此可以是相同的或不同的。
在一种实施方案中，式(VIII)的化合物通过使式(IX)的化合物：
Figure BDA0003124860200001531
与式(X)的化合物：
Figure BDA0003124860200001532
接触来制备，其中，保护基团PG和PG’彼此可以是相同的或不同的。
在一方面中，本公开内容提供了一种制造具有式(XI)的结构的化合物的方法：
Figure BDA0003124860200001533
其中：R6选自RN、脂肪族C1-C20烃、芳香族C1-C20烃、杂芳香族C1-C20烃、环状脂肪族C1-C20烃、杂环C1-C20烃及其组合，它还包含0-8个选自卤素、O、N和S及其组合的杂原子，并且其中R6任选地被以下中的一种或更多种取代：-F、-Cl、-Br、-I、-OH、-OR*、-NO、-NO2、-NO3、-O-NO、-N3、-NH2、-NHR*、-N(R*)2、-N(R*)3 +、-N(R*)-OH、-O-N(R*)2、-N(R*)-O-R*、-CN、-NC、-(C＝O)-R*、-CHO、-CO2H、-CO2R*、-(C＝O)-S-R*、-O-(C＝O)-H、-O-(C＝O)-R*、-S-(C＝O)-R*、-(C＝O)-NH2、-(C＝O)-N(R*)2、-(C＝O)-NHNH2、-O-(C＝O)-NHNH2、-(C＝S)-NH2、-(C＝S)-N(R*)2、-N(R*)-CHO、-N(R*)-(C＝O)-R*、-SCN、-NCS、-NSO、-SSR*、-SO2R*、-SO2-N(R*)2、-S(＝O)-OR*、-S(＝O)-R*、-Si(R*)3、-CF3、-O-CF3及其组合；
RN选自：
Figure BDA0003124860200001541
Figure BDA0003124860200001542
其中符号
Figure BDA0003124860200001543
表示附接点；并且R’、R”和R”’选自氢、C1-C6脂肪族烃和包括以下的保护基团：FMOC和Boc，或者其中R’和R”一起形成脂肪族单环的、脂肪族双环的或脂肪族多环的结构；并且
R*在每次出现时独立地选自氢、脂肪族C1-C20烃、芳香族C1-C20烃、杂芳香族C1-C20烃、环状脂肪族C1-C20烃、杂环C1-C20烃及其组合，它还包含0-8个选自卤素、O、N和S及其组合的杂原子，
所述方法包括使具有式(XII)的结构的化合物：
Figure BDA0003124860200001544
与具有结构R6-OH的醇接触。
在一方面中，本公开内容提供了一种制造具有式(XI’)的结构的化合物的方法：
Figure BDA0003124860200001551
其中：R6选自RN、脂肪族C1-C20烃、芳香族C1-C20烃、杂芳香族C1-C20烃、环状脂肪族C1-C20烃、杂环C1-C20烃及其组合，它还包含0-8个选自卤素、O、N和S及其组合的杂原子，并且其中R6任选地被以下中的一种或更多种取代：-F、-Cl、-Br、-I、-OH、-OR*、-NO、-NO2、-NO3、-O-NO、-N3、-NH2、-NHR*、-N(R*)2、-N(R*)3 +、-N(R*)-OH、-O-N(R*)2、-N(R*)-O-R*、-CN、-NC、-(C＝O)-R*、-CHO、-CO2H、-CO2R*、-(C＝O)-S-R*、-O-(C＝O)-H、-O-(C＝O)-R*、-S-(C＝O)-R*、-(C＝O)-NH2、-(C＝O)-N(R*)2、-(C＝O)-NHNH2、-O-(C＝O)-NHNH2、-(C＝S)-NH2、-(C＝S)-N(R*)2、-N(R*)-CHO、-N(R*)-(C＝O)-R*、-SCN、-NCS、-NSO、-SSR*、-SO2R*、-SO2-N(R*)2、-S(＝O)-OR*、-S(＝O)-R*、-Si(R*)3、-CF3、-O-CF3及其组合；
RN选自：
Figure BDA0003124860200001552
Figure BDA0003124860200001561
Figure BDA0003124860200001562
其中符号
Figure BDA0003124860200001563
表示附接点；并且R’、R”和R”’选自氢、C1-C6脂肪族烃和包括以下的保护基团：FMOC和Boc，或者其中R’和R”一起形成脂肪族单环的、脂肪族双环的或脂肪族多环的结构；并且
R*在每次出现时独立地选自氢、脂肪族C1-C20烃、芳香族C1-C20烃、杂芳香族C1-C20烃、环状脂肪族C1-C20烃、杂环C1-C20烃及其组合，它还包含0-8个选自卤素、O、N和S及其组合的杂原子，
所述方法包括使具有式(XII’)的结构的化合物：
Figure BDA0003124860200001564
与具有结构R6-OH的醇接触。
在一方面中，本公开内容提供了一种制造具有式(XIII)的结构的化合物的方法：
Figure BDA0003124860200001565
其中：A选自键(A不存在)或脂肪族C1-C20烃；
Rcy是C3-C14环脂肪族烃，它还包含0-8个选自卤素、O、N和S及其组合的杂原子，并且其中Rcy任选地被以下中的一种或更多种取代：-F、-Cl、-Br、-I、-OH、-OR*、-NO、-NO2、-NO3、-O-NO、-N3、-NH2、-NHR*、-N(R*)2、-N(R*)3 +、-N(R*)-OH、-O-N(R*)2、-N(R*)-O-R*、-CN、-NC、-(C＝O)-R*、-CHO、-CO2H、-CO2R*、-(C＝O)-S-R*、-O-(C＝O)-H、-O-(C＝O)-R*、-S-(C＝O)-R*、-(C＝O)-NH2、-(C＝O)-N(R*)2、-(C＝O)-NHNH2、-O-(C＝O)-NHNH2、-(C＝S)-NH2、-(C＝S)-N(R*)2、-N(R*)-CHO、-N(R*)-(C＝O)-R*、-SCN、-NCS、-NSO、-SSR*、-SO2R*、-SO2-N(R*)2、-S(＝O)-OR*、-S(＝O)-R*、-Si(R*)3、-CF3、-O-CF3及其组合；并且
R*在每次出现时独立地选自氢、脂肪族C1-C20烃、芳香族C1-C20烃、杂芳香族C1-C20烃、环状脂肪族C1-C20烃、杂环C1-C20烃及其组合，它还包含0-8个选自卤素、O、N和S及其组合的杂原子，
所述方法包括使具有式(XII)的结构的化合物：
Figure BDA0003124860200001571
与具有结构Rcy-A-OH的醇接触。
在一方面中，本公开内容提供了一种制造具有式(XIII’)的结构的化合物的方法：
Figure BDA0003124860200001581
其中：A选自键(A不存在)或脂肪族C1-C20烃；
Rcy是C3-C14环脂肪族烃，它还包含0-8个选自卤素、O、N和S及其组合的杂原子，并且其中Rcy任选地被以下中的一种或更多种取代：-F、-Cl、-Br、-I、-OH、-OR*、-NO、-NO2、-NO3、-O-NO、-N3、-NH2、-NHR*、-N(R*)2、-N(R*)3 +、-N(R*)-OH、-O-N(R*)2、-N(R*)-O-R*、-CN、-NC、-(C＝O)-R*、-CHO、-CO2H、-CO2R*、-(C＝O)-S-R*、-O-(C＝O)-H、-O-(C＝O)-R*、-S-(C＝O)-R*、-(C＝O)-NH2、-(C＝O)-N(R*)2、-(C＝O)-NHNH2、-O-(C＝O)-NHNH2、-(C＝S)-NH2、-(C＝S)-N(R*)2、-N(R*)-CHO、-N(R*)-(C＝O)-R*、-SCN、-NCS、-NSO、-SSR*、-SO2R*、-SO2-N(R*)2、-S(＝O)-OR*、-S(＝O)-R*、-Si(R*)3、-CF3、-O-CF3及其组合；并且
R*在每次出现时独立地选自氢、脂肪族C1-C20烃、芳香族C1-C20烃、杂芳香族C1-C20烃、环状脂肪族C1-C20烃、杂环C1-C20烃及其组合，它还包含0-8个选自卤素、O、N和S及其组合的杂原子，
所述方法包括使具有式(XII’)的结构的化合物：
Figure BDA0003124860200001582
与具有结构Rcy-A-OH的醇接触。
在一方面中，本公开内容提供了一种制造具有式(XIV)的结构的化合物的方法：
Figure BDA0003124860200001591
其中：Y在每次出现时选自-O-和-NR’R”-；n在每次出现时独立地是从1-6的整数；并且R’、R”和R”’各自独立地选自氢、脂肪族C1-C20烃；所述方法包括使具有式(XII)的结构的化合物：
Figure BDA0003124860200001592
与具有结构R″R′N-Y-(CH2)n-Y-(CH2)n-OH的醇接触。
在一方面中，本公开内容提供了一种制造具有式(XIV’)的结构的化合物的方法：
Figure BDA0003124860200001593
其中：Y在每次出现时选自-O-和-NR’R”-；n在每次出现时独立地是从1至6的整数；并且R’、R”和R”’各自独立地选自氢和脂肪族C1-C20烃；所述方法包括使具有式(XII’)的结构的化合物：
Figure BDA0003124860200001601
与具有结构R″R′N-Y-(CH2)n-Y-(CH2)n-OH的醇接触。
在一种实施方案中，式(XII)的化合物通过使利福霉素S与2-氨基-5-溴苯酚接触，并且用氧化剂处理产物来制备。
在一种实施方案中，式(XII’)的化合物通过使利福霉素S与2-氨基-4-溴苯酚接触，并且用氧化剂处理产物来制备。
药物组合物和剂型
本公开内容还提供了包含本文描述的化合物的药物组合物。当用作药物时，本公开内容的化合物可以以药物组合物的形式施用，该药物组合物是本公开内容的化合物和药学上可接受的载体的组合。这些组合物可以以制药领域公知的方式制备，并且可以通过多种途径施用。这样的药物组合物可以被全身性地施用。如本文使用的术语“全身性”包括肠胃外、局部、透皮、口服、通过吸入/肺部、直肠、鼻、含服和舌下施用。如本文使用的术语“肠胃外”包括皮下、皮内、静脉内、肌内、颅内和腹膜内施用。在一些实施方案中，化合物以治疗有效量被口服地、局部地、鼻内地、静脉内地、肌内地或皮下地施用，以治疗细菌感染(例如，金黄色葡萄球菌感染)。
包含本公开内容的化合物的药物组合物可以与一种或更多种药学上可接受的载体组合制备。在制备本公开内容的组合物时，活性成分通常与赋形剂混合，被赋形剂稀释或以例如胶囊、小囊(sachet)、纸或其它容器的形式封装在这样的载体中。当赋形剂用作稀释剂时，它可以是充当活性成分的媒介物、载体或介质的固体材料、半固体材料或液体材料。因此，组合物可以呈片剂、丸剂、粉剂、锭剂、小囊、扁囊剂(cachet)、酏剂、悬浮液、乳液、溶液、糖浆剂、气溶胶(作为固体或在液体介质中)、含有例如多达按重量计10％的活性化合物的软膏、软的和硬的明胶胶囊、栓剂、无菌注射溶液和无菌包装粉剂的形式。
在一些实施方案中，本公开内容的药物组合物呈液体形式。通过非限制性实例的方式，液体形式包括乳液、溶液、悬浮液、糖浆剂、浆液、分散体、胶体等。在一些实施方案中，本文描述的药物组合物呈液体形式、半固体形式或固体(例如粉末)形式。在特定的实施方案中，本文描述的药物组合物呈半固体形式，例如凝胶、凝胶基质、乳膏、糊剂或类似形式。在一些实施方案中，半固体形式包括液体媒介物。在一些实施方案中，本公开内容的药物组合物是固体剂型，例如片剂、颗粒剂、小囊或粉剂。还提供了药物组合物，所述药物组合物包括呈溶解片剂、溶解糯米纸囊剂(dissolving wafer)、胶囊或凝胶胶囊形式的本公开内容的化合物或其药学上可接受的盐。在某些实施方案中，本文描述的固体剂型包括固体媒介物(例如，如片剂中所使用的)和/或气体媒介物(例如，如DPI中所使用的)。
在一些实施方案中，组合物呈用于向患者进行口服施用、鼻内施用、静脉内施用或其他施用的单位剂量制剂。术语“单位剂型”是指适于作为用于人类受试者和其他哺乳动物的单一剂量的物理上离散的单元，每个单元包含与合适的药物赋形剂结合的、计算以产生期望的治疗效果的预先确定量的活性物质。
活性化合物可以在宽剂量范围内是有效的，并且通常以药物有效量被施用。然而，应当理解，实际施用的化合物的量将通常由医生根据相关情况来确定，包括待治疗的状况、所选择的施用途径、施用的实际化合物、个体患者的年龄、体重和反应、患者症状的严重程度等。
在一些实施方案中，本文描述的组合物或单位剂型作为乳液、溶液、悬浮液、糖浆剂、浆液、分散体、胶体、溶解片剂、溶解糯米纸囊剂、胶囊、凝胶胶囊、半固体形式的凝胶、固体形式的凝胶、凝胶基质、乳膏、糊剂、片剂、颗粒剂、小囊、粉剂或类似形式被施用。在某些方面中，每天或每剂约0.000001mg至约2000mg、约0.00001mg至约1000mg、或约0.0001mg至约750mg、约0.001mg至约500mg、约0.01mg至约250mg、约0.1mg至约100mg、约0.5mg至约75mg、约1mg至约50mg、约2mg至约40mg、约5mg至约20mg或约7.5mg至约15mg的式(I)的化合物或者具有根据如本文提供的式(A)、式(B)、式(I)、式(I’)、式(II)、式(II’)、式(III)、式(III’)、式(IV)、式(IV’)、式(V)、式(V’)的任何实施方案的结构的化合物被施用至个体。
在一些实施方案中，本公开内容的化合物以从约0.01mg至约10mg(例如，约0.1mg-10mg、约0.25mg-5mg、约0.25mg-2.5mg、约1mg-2mg或约2mg-3mg、约0.5mg至约2mg、约1mg至约2mg、约1mg或约2mg)的量存在于本文描述的组合物或单位剂量的组合物中。在一些实施方案中，每日或以单位剂量施用的化合物的量在约0.5mg和约3mg之间、在约0.5mg和约4mg之间、或在约0.35mg和约4mg之间。在其他实施方案中，存在于单位剂量中的或每日施用的化合物的量在约1mg和约3mg之间、或在约1mg和约2mg之间或在约2mg和约3mg之间。
在某些方面中，每天或每剂约0.05mg至约50mg、约0.25mg至约20mg、约0.25mg至约15mg、约0.25mg至约10mg或约0.25mg至约5mg(例如，约0.1mg至约5mg、约0.25mg至约2.5mg、约0.3mg至约2mg、约0.5mg至约1mg、约0.7mg至约1.5mg、约0.375mg、约0.75mg、约1mg、约1.25mg、约1.5mg或约2mg)的化合物被施用至患者。
在一些实施方案中，化合物以约5mg和约500mg之间的量存在于单位剂量中。在一些实施方案中，每日或以单位剂量施用的化合物的量在约5mg和约300mg之间。在其他实施方案中，存在于单位剂量中的或每日施用的化合物的量在约5mg和约250mg之间、或在约5mg和约200mg之间、或在约5mg和约150mg之间、在约5mg和约100mg之间或在约5mg和约50mg之间。
在制备制剂时，活性化合物可以在与其它成分组合之前被研磨以提供合适的粒度。如果活性化合物是大体上不溶的，则其可以被研磨成小于200目的粒度。如果活性化合物是大体上水溶性的，则可以通过研磨调整粒度以提供在制剂中大体上均匀的分布，诸如约40目。合适的赋形剂的一些实例包括乳糖、右旋糖、蔗糖、山梨醇、甘露醇、淀粉、阿拉伯胶、磷酸钙、海藻酸盐、黄芪胶、明胶、硅酸钙、微晶纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、纤维素、水、糖浆和甲基纤维素。制剂另外可以包括：润滑剂诸如滑石粉、硬脂酸镁和矿物油；润湿剂；乳化剂和悬浮剂；防腐剂诸如苯甲酸甲酯和苯甲酸丙酯(propylhydroxy-benzoate)；甜味剂和调味剂。本公开内容的组合物可以通过采用本领域已知的程序来配制，以便在向患者施用之后提供活性成分的快速、持续或延迟的释放。
为了制备固体组合物例如片剂，将主要活性成分与药物赋形剂混合以形成含有式I的化合物的均质混合物的固体预制剂组合物。当将这些预制剂组合物称为均质时，活性成分通常被均匀地分散在整个组合物中，使得组合物可以容易地细分为同等有效的单位剂型诸如片剂、丸剂和胶囊。然后将该固体预制剂细分为上述类型的单位剂型，包含例如从0.000001mg至约2000mg的本申请的活性成分。
含有式I的化合物的片剂或丸剂可以被包衣或以其他方式复合，以提供具有延长作用优势的剂型。例如，片剂或丸剂可以包含内部剂量组分和外部剂量组分，后者是呈包封在前者上的形式。两种组分可以通过肠溶层被分开，肠溶层用以抵抗胃中的分解并且允许内部组分完整通过进入十二指肠或延迟释放。多种材料可以被用于这样的肠溶层或包衣，这样的材料包括大量聚合的酸以及聚合的酸与例如虫胶、鲸蜡醇和乙酸纤维素的这样材料的混合物。
本申请的化合物和组合物可被掺入其中以用于口服施用或通过注射施用的液体形式包括水溶液、合适调味的糖浆剂、水性或油性的悬浮液、和具有食用油例如棉花籽油、芝麻油、椰子油或花生油的调味的乳液以及酏剂和类似的药物媒介物。
用于吸入或吹入的组合物包括在药学上可接受的水性溶剂或有机溶剂或其混合物中的溶液和悬浮液以及粉剂。液体组合物或固体组合物可以含有如以上描述的合适的药学上可接受的赋形剂。在一些实施方案中，组合物通过用于局部作用或全身作用的口服途径或鼻腔呼吸途径被施用。组合物可以通过使用惰性气体进行雾化。雾化的溶液可以直接从雾化装置被吸入，或雾化装置可以被附接至面罩蓬(face masks tent)或间歇性正压呼吸机。溶液、悬浮液或粉剂组合物可以从以合适的方式递送制剂的装置被口服地或经鼻地施用。
施用至患者的组合物可以呈上述药物组合物的形式。这些组合物可以通过常规的灭菌技术来灭菌，或可以无菌过滤。水溶液可以经过包装就此使用，或者进行冻干，在施用之前将冻干的制品与无菌水性载体组合。复合制品的pH通常将在3和11之间，更优选地从5至9。应当理解，某些前述赋形剂、载体或稳定剂的使用将导致药物盐的形成。
本公开内容的化合物的治疗剂量可以根据例如进行治疗的特定用途、化合物的施用方式、患者的健康和状况以及处方医生的判断而变化。药物组合物中本公开内容的化合物的比例或浓度可以根据许多因素而变化，包括剂量、化学特性(例如，疏水性)和施用途径。剂量可能取决于诸如以下的变量：疾病或紊乱的类型和进展程度、特定患者的总体健康状态、所选化合物的相对生物学效力、赋形剂的配方及其施用途径。有效剂量可以从源自体外模型测试系统或动物模型测试系统的剂量-响应曲线进行推断。
本申请还包括可用于例如治疗细菌感染(例如，金黄色葡萄球菌感染)的药物试剂盒，该药物试剂盒包括一个或更多个含有药物组合物的容器，所述药物组合物包含治疗有效量的本公开内容的化合物。如果需要，这样的试剂盒还可以包含各种常规药物试剂盒组分中的一种或更多种，诸如例如，具有一种或更多种药学上可接受的载体的容器、附加容器等，这对本领域技术人员将是容易明显的。试剂盒中还可以包括说明书(作为插页或作为标签)，指示待施用的组分的量、施用指南和/或用于混合组分的指南。
递送装置不仅对于递送本公开内容的化合物是重要的，而且对于提供合适的储存环境也是重要的。这将包括保护免于微生物污染和化学降解。装置和制剂应当是相容的，以便避免潜在的浸出或吸附。递送装置(或其包装)可以任选地被提供有标签和/或使用说明，指示组合物应当被鼻内地使用。
使用方法
在另一方面中，本公开内容提供了一种防止或抑制细菌的生长的方法，所述方法包括施用有效量的具有式(A)的结构的化合物：
Figure BDA0003124860200001651
或其药学上可接受的盐，其中：
X选自-O-、-S-和-NR*-；
Za和Zb独立地选自氢、-Cl、-Br、-OR1和-RN；条件是Za或Zb中的至少一个不是氢；其中：
R1选自氢、RN、脂肪族C1-C20烃、芳香族C1-C20烃、杂芳香族C1-C20烃、环状脂肪族C1-C20烃、杂环C1-C20烃及其组合，它们中的每一个还包含0-8个选自卤素、O、N和S的杂原子，并且其中R1任选地被以下中的一种或更多种取代：-F、-Cl、-Br、-I、-OH、-OR*、-NO、-NO2、-NO3、-O-NO、-N3、-NH2、-NHR*、-N(R*)2、-N(R*)3 +、-N(R*)-OH、-O-N(R*)2、-N(R*)-O-R*、-CN、-NC、-(C＝O)-R*、-CHO、-CO2H、-CO2R*、-(C＝O)-S-R*、-O-(C＝O)-H、-O-(C＝O)-R*、-S-(C＝O)-R*、-(C＝O)-NH2、-(C＝O)-N(R*)2、-(C＝O)-NHNH2、-O-(C＝O)-NHNH2、-(C＝S)-NH2、-(C＝S)-N(R*)2、-N(R*)-CHO、-N(R*)-(C＝O)-R*、-SCN、-NCS、-NSO、-SSR*、-SO2R*、-SO2-N(R*)2、-S(＝O)-OR*、-S(＝O)-R*、-Si(R*)3、-CF3、-O-CF3及其组合，条件是R1不是正丁基基团，并且当X是-O-且Ra是氢时，R1不是氢；
RN选自：
Figure BDA0003124860200001661
Figure BDA0003124860200001662
其中符号
Figure BDA0003124860200001663
表示附接点；并且R’、R”和R”’选自氢、C1-C6脂肪族烃和例如FMOC和Boc的保护基团，或者其中R’和R”一起形成脂肪族环状结构，诸如脂肪族单环的、脂肪族双环的或脂肪族多环的结构；
R2、R3和R4独立地选自氢、脂肪族C1-C20烃和-(C＝O)-R*，它们中的每一个还包含0-8个选自卤素、O、N和S的杂原子；
Ra选自氢、-F、-Cl、-Br、-I、-OH、-OR*、-NH2、-NHR*、-N(R*)2、-N(R*)3 +、-(C＝O)-R*、-CHO、-CO2H、-CO2R*、-SR*、-SO2R*和脂肪族C1-C20烃，它还包含0-8个选自卤素、O、N和S的杂原子，并且其中Ra任选地被以下中的一种或更多种取代：-F、-Cl、-Br、-I、-OH、-OR*；
Rb选自氢、-F、-Cl、-Br、-I、-OH、-OR*、-(C＝O)-R*、-CHO、-CO2H、-CO2R*和脂肪族C1-C20烃，它还包含0-3个选自卤素、O和S的杂原子，并且其中Rb任选地被以下中的一种或更多种取代：-F、-Cl、-Br、-I、-OH、-OR*，并且
R*在每次出现时独立地选自氢、脂肪族C1-C20烃、芳香族C1-C20烃、杂芳香族C1-C20烃、环状脂肪族C1-C20烃、杂环C1-C20烃及其组合，它还包含0-8个选自卤素、O、N和S及其组合的杂原子。
在另一方面中，本公开内容提供了一种防止或抑制细菌的生长的方法，所述方法包括施用有效量的具有式(I)的结构的化合物：
Figure BDA0003124860200001671
或其药学上可接受的盐，其中：
X选自-O-和-NR*-；
R1选自RN、氢、脂肪族C1-C20烃、芳香族C1-C20烃、杂芳香族C1-C20烃、环状脂肪族C1-C20烃、杂环C1-C20烃及其组合，它们中的每一个还包含0-8个选自卤素、O、N和S的杂原子，并且其中R1任选地被以下中的一种或更多种取代：-F、-Cl、-Br、-I、-OH、-OR*、-NO、-NO2、-NO3、-O-NO、-N3、-NH2、-NHR*、-N(R*)2、-N(R*)3 +、-N(R*)-OH、-O-N(R*)2、-N(R*)-O-R*、-CN、-NC、-(C＝O)-R*、-CHO、-CO2H、-CO2R*、-(C＝O)-S-R*、-O-(C＝O)-H、-O-(C＝O)-R*、-S-(C＝O)-R*、-(C＝O)-NH2、-(C＝O)-N(R*)2、-(C＝O)-NHNH2、-O-(C＝O)-NHNH2、-(C＝S)-NH2、-(C＝S)-N(R*)2、-N(R*)-CHO、-N(R*)-(C＝O)-R*、-SCN、-NCS、-NSO、-SSR*、-SO2R*、-SO2-N(R*)2、-S(＝O)-OR*、-S(＝O)-R*、-Si(R*)3、-CF3、-O-CF3及其组合，条件是R1不是正丁基基团，并且当X是-O-且Ra是氢时，R1不是氢；
RN选自：
Figure BDA0003124860200001681
Figure BDA0003124860200001682
其中符号
Figure BDA0003124860200001683
表示附接点；并且R’、R”和R”’选自氢、C1-C6脂肪族烃和包括以下的保护基团：FMOC和Boc，或者其中R’和R”一起形成脂肪族单环的、脂肪族双环的或脂肪族多环的结构；
R2、R3和R4独立地选自氢、脂肪族C1-C20烃或-(C＝O)-R*，它们中的每一个还包含0-8个选自卤素、O、N和S的杂原子；
Ra选自氢、-F、-Cl、-Br、-I、-OH、-OR*、-NH2、-NHR*、-N(R*)2、-N(R*)3 +、-(C＝O)-R*、-CHO、-CO2H、-CO2R*、-SR*、-SO2R*和脂肪族C1-C20烃，它还包含0-8个选自卤素、O、N和S的杂原子，并且其中Ra任选地被以下中的一种或更多种取代：-F、-Cl、-Br、-I、-OH、-OR*；
Rb选自氢、-F、-Cl、-Br、-I、-OH、-OR*、-(C＝O)-R*、-CHO、-CO2H、-CO2R*和脂肪族C1-C20烃，它还包含0-3个选自卤素、O和S的杂原子，并且其中Rb任选地被以下中的一种或更多种取代：-F、-Cl、-Br、-I、-OH、-OR*；并且
R*在每次出现时独立地选自氢、脂肪族C1-C20烃、芳香族C1-C20烃、杂芳香族C1-C20烃、环状脂肪族C1-C20烃、杂环C1-C20烃及其组合，它还包含0-8个选自卤素、O、N和S及其组合的杂原子。
在另一方面中，本公开内容提供了一种防止或抑制细菌的生长的方法，所述方法包括施用有效量的具有式(I’)的结构的化合物：
Figure BDA0003124860200001691
或其药学上可接受的盐，其中：
X选自-O-和-NR*-；
R1选自RN、氢、脂肪族C1-C20烃、芳香族C1-C20烃、杂芳香族C1-C20烃、环状脂肪族C1-C20烃、杂环C1-C20烃及其组合，它们中的每一个还包含0-8个选自卤素、O、N和S的杂原子，并且其中R1任选地被以下中的一种或更多种取代：-F、-Cl、-Br、-I、-OH、-OR*、-NO、-NO2、-NO3、-O-NO、-N3、-NH2、-NHR*、-N(R*)2、-N(R*)3 +、-N(R*)-OH、-O-N(R*)2、-N(R*)-O-R*、-CN、-NC、-(C＝O)-R*、-CHO、-CO2H、-CO2R*、-(C＝O)-S-R*、-O-(C＝O)-H、-O-(C＝O)-R*、-S-(C＝O)-R*、-(C＝O)-NH2、-(C＝O)-N(R*)2、-(C＝O)-NHNH2、-O-(C＝O)-NHNH2、-(C＝S)-NH2、-(C＝S)-N(R*)2、-N(R*)-CHO、-N(R*)-(C＝O)-R*、-SCN、-NCS、-NSO、-SSR*、-SO2R*、-SO2-N(R*)2、-S(＝O)-OR*、-S(＝O)-R*、-Si(R*)3、-CF3、-O-CF3及其组合，条件是R1不是正丁基基团，并且当X是-O-且Ra是氢时，R1不是氢；
RN选自：
Figure BDA0003124860200001701
Figure BDA0003124860200001702
其中符号
Figure BDA0003124860200001703
表示附接点；并且R’、R”和R”’选自氢、C1-C6脂肪族烃和包括以下的保护基团：FMOC和Boc，或者其中R’和R”一起形成脂肪族单环的、脂肪族双环的或脂肪族多环的结构；
R2、R3和R4独立地选自氢、脂肪族C1-C20烃或-(C＝O)-R*，它们中的每一个还包含0-8个选自卤素、O、N和S的杂原子；
Ra选自氢、-F、-Cl、-Br、-I、-OH、-OR*、-NH2、-NHR*、-N(R*)2、-N(R*)3 +、-(C＝O)-R*、-CHO、-CO2H、-CO2R*、-SR*、-SO2R*和脂肪族C1-C20烃，它还包含0-8个选自卤素、O、N和S的杂原子，并且其中Ra任选地被以下中的一种或更多种取代：-F、-Cl、-Br、-I、-OH、-OR*；
Rb选自氢、-F、-Cl、-Br、-I、-OH、-OR*、-(C＝O)-R*、-CHO、-CO2H、-CO2R*和脂肪族C1-C20烃，它还包含0-3个选自卤素、O和S的杂原子，并且其中Rb任选地被以下中的一种或更多种取代：-F、-Cl、-Br、-I、-OH、-OR*，并且
R*在每次出现时独立地选自氢、脂肪族C1-C20烃、芳香族C1-C20烃、杂芳香族C1-C20烃、环状脂肪族C1-C20烃、杂环C1-C20烃及其组合，它还包含0-8个选自卤素、O、N和S及其组合的杂原子。
在另一方面中，本公开内容提供了一种防止或抑制细菌的生长的方法，所述方法包括施用有效量的具有式(B)的结构的化合物：
Figure BDA0003124860200001711
或其药学上可接受的盐，其中：
X选自-O-和-NR*-；
R1选自氢、RN、脂肪族C1-C20烃、芳香族C1-C20烃、杂芳香族C1-C20烃、环状脂肪族C1-C20烃、杂环C1-C20烃及其组合，它们中的每一个还包含0-8个选自卤素、O、N和S的杂原子，并且其中R1任选地被以下中的一种或更多种取代：-F、-Cl、-Br、-I、-OH、-OR*、-NO、-NO2、-NO3、-O-NO、-N3、-NH2、-NHR*、-N(R*)2、-N(R*)3 +、-N(R*)-OH、-O-N(R*)2、-N(R*)-O-R*、-CN、-NC、-(C＝O)-R*、-CHO、-CO2H、-CO2R*、-(C＝O)-S-R*、-O-(C＝O)-H、-O-(C＝O)-R*、-S-(C＝O)-R*、-(C＝O)-NH2、-(C＝O)-N(R*)2、-(C＝O)-NHNH2、-O-(C＝O)-NHNH2、-(C＝S)-NH2、-(C＝S)-N(R*)2、-N(R*)-CHO、-N(R*)-(C＝O)-R*、-SCN、-NCS、-NSO、-SSR*、-SO2R*、-SO2-N(R*)2、-S(＝O)-OR*、-S(＝O)-R*、-Si(R*)3、-CF3、-O-CF3及其组合，条件是R1不是正丁基基团，并且当X是-O-且Ra是氢时，R1不是氢；
RN选自：
Figure BDA0003124860200001721
Figure BDA0003124860200001722
其中符号
Figure BDA0003124860200001723
表示附接点；并且R’、R”和R”’选自氢、C1-C6脂肪族烃和选自以下的保护基团：芴基甲氧羰基(FMOC)和叔丁氧羰基(Boc)，或者其中R’和R”一起形成脂肪族单环的、脂肪族双环的或脂肪族多环的结构；
R2、R3和R4独立地选自氢、脂肪族C1-C20烃和-(C＝O)-R*，它们中的每一个还包含0-8个选自卤素、O、N和S的杂原子；
Ra选自氢、-F、-Cl、-Br、-I、-OH、-OR*、-NH2、-NHR*、-N(R*)2、-N(R*)3 +、-(C＝O)-R*、-CHO、-CO2H、-CO2R*、-SR*、-SO2R*和脂肪族C1-C20烃，它还包含0-8个选自卤素、O、N和S的杂原子，并且其中Ra任选地被以下中的一种或更多种取代：-F、-Cl、-Br、-I、-OH、-OR*；
Rb选自氢、-F、-Cl、-Br、-I、-OH、-OR*、-(C＝O)-R*、-CHO、-CO2H、-CO2R*和脂肪族C1-C20烃，它还包含0-3个选自卤素、O和S的杂原子，并且其中Rb任选地被以下中的一种或更多种取代：-F、-Cl、-Br、-I、-OH、-OR*，并且
R*在每次出现时独立地选自氢、脂肪族C1-C20烃、芳香族C1-C20烃、杂芳香族C1-C20烃、环状脂肪族C1-C20烃、杂环C1-C20烃及其组合，它还包含0-8个选自卤素、O、N和S及其组合的杂原子。
在另一方面中，本公开内容提供了一种防止或抑制细菌的生长的方法，所述方法包括施用有效量的利福霉素类似物化合物，其具有根据如本文提供的式(IA)、式(II)、式(II’)、式(III)、式(III’)、式(IV)、式(IV’)、式(V)、式(V’)、式(B-1)和式(B-2)中的任一种的结构。在一种实施方案中，细菌是革兰氏阳性细菌。
在一种实施方案中，细菌是耐青霉素细菌。
在一种实施方案中，细菌是金黄色葡萄球菌。
在一种实施方案中，细菌是选自MRSA和VRSA的耐金黄色葡萄球菌菌株。
在一种实施方案中，细菌是耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)。
在一种实施方案中，细菌是耐万古霉素金黄色葡萄球菌(VRSA)。
在一种实施方案中，细菌是甲氧西林易感性金黄色葡萄球菌(MSSA)。
在又一方面中，本公开内容提供了治疗需要相应治疗的受试者的细菌感染的方法，所述方法包括向受试者施用有效量的具有式(A)的结构的化合物：
Figure BDA0003124860200001731
或其药学上可接受的盐，其中：
X选自-O-、-S-和-NR*-；
Za和Zb独立地选自氢、-Cl、-Br、-OR1和-RN；条件是Za或Zb中的至少一个不是氢；其中：
R1选自氢、RN、脂肪族C1-C20烃、芳香族C1-C20烃、杂芳香族C1-C20烃、环状脂肪族C1-C20烃、杂环C1-C20烃及其组合，它们中的每一个还包含0-8个选自卤素、O、N和S的杂原子，并且其中R1任选地被以下中的一种或更多种取代：-F、-Cl、-Br、-I、-OH、-OR*、-NO、-NO2、-NO3、-O-NO、-N3、-NH2、-NHR*、-N(R*)2、-N(R*)3 +、-N(R*)-OH、-O-N(R*)2、-N(R*)-O-R*、-CN、-NC、-(C＝O)-R*、-CHO、-CO2H、-CO2R*、-(C＝O)-S-R*、-O-(C＝O)-H、-O-(C＝O)-R*、-S-(C＝O)-R*、-(C＝O)-NH2、-(C＝O)-N(R*)2、-(C＝O)-NHNH2、-O-(C＝O)-NHNH2、-(C＝S)-NH2、-(C＝S)-N(R*)2、-N(R*)-CHO、-N(R*)-(C＝O)-R*、-SCN、-NCS、-NSO、-SSR*、-SO2R*、-SO2-N(R*)2、-S(＝O)-OR*、-S(＝O)-R*、-Si(R*)3、-CF3、-O-CF3及其组合，条件是R1不是正丁基基团，并且当X是-O-且Ra是氢时，R1不是氢；
RN选自：
Figure BDA0003124860200001741
Figure BDA0003124860200001742
其中
Figure BDA0003124860200001743
表示附接点；并且R’、R”和R”’选自氢、C1-C6脂肪族烃和包括以下的保护基团：FMOC和Boc，或者其中R’和R”一起形成脂肪族单环的、脂肪族双环的或脂肪族多环的结构；
R2、R3和R4独立地选自氢、脂肪族C1-C20烃和-(C＝O)-R*，它们中的每一个还包含0-8个选自卤素、O、N和S的杂原子；
Ra选自氢、-F、-Cl、-Br、-I、-OH、-OR*、-NH2、-NHR*、-N(R*)2、-N(R*)3 +、-(C＝O)-R*、-CHO、-CO2H、-CO2R*、-SR*、-SO2R*和脂肪族C1-C20烃，它还包含0-8个选自卤素、O、N和S的杂原子，并且其中Ra任选地被以下中的一种或更多种取代：-F、-Cl、-Br、-I、-OH、-OR*；
Rb选自氢、-F、-Cl、-Br、-I、-OH、-OR*、-(C＝O)-R*、-CHO、-CO2H、-CO2R*和脂肪族C1-C20烃，它还包含0-3个选自卤素、O和S的杂原子，并且其中Rb任选地被以下中的一种或更多种取代：-F、-Cl、-Br、-I、-OH、-OR*，并且
R*在每次出现时独立地选自氢、脂肪族C1-C20烃、芳香族C1-C20烃、杂芳香族C1-C20烃、环状脂肪族C1-C20烃、杂环C1-C20烃及其组合，它还包含0-8个选自卤素、O、N和S及其组合的杂原子。
在另一方面中，本公开内容提供了治疗需要相应治疗的受试者的细菌感染的方法，所述方法包括施用有效量的具有式(I)的结构的化合物：
Figure BDA0003124860200001751
或其药学上可接受的盐，其中：
X选自-O-和-NR*-；
R1选自RN、氢、脂肪族C1-C20烃、芳香族C1-C20烃、杂芳香族C1-C20烃、环状脂肪族C1-C20烃、杂环C1-C20烃及其组合，它们中的每一个还包含0-8个选自卤素、O、N和S的杂原子，并且其中R1任选地被以下中的一种或更多种取代：-F、-Cl、-Br、-I、-OH、-OR*、-NO、-NO2、-NO3、-O-NO、-N3、-NH2、-NHR*、-N(R*)2、-N(R*)3 +、-N(R*)-OH、-O-N(R*)2、-N(R*)-O-R*、-CN、-NC、-(C＝O)-R*、-CHO、-CO2H、-CO2R*、-(C＝O)-S-R*、-O-(C＝O)-H、-O-(C＝O)-R*、-S-(C＝O)-R*、-(C＝O)-NH2、-(C＝O)-N(R*)2、-(C＝O)-NHNH2、-O-(C＝O)-NHNH2、-(C＝S)-NH2、-(C＝S)-N(R*)2、-N(R*)-CHO、-N(R*)-(C＝O)-R*、-SCN、-NCS、-NSO、-SSR*、-SO2R*、-SO2-N(R*)2、-S(＝O)-OR*、-S(＝O)-R*、-Si(R*)3、-CF3、-O-CF3及其组合，条件是R1不是正丁基基团，并且当X是-O-且Ra是氢时，R1不是氢；
RN选自：
Figure BDA0003124860200001761
Figure BDA0003124860200001762
其中符号
Figure BDA0003124860200001763
表示附接点；并且R’、R”和R”’选自氢、C1-C6脂肪族烃和包括以下的保护基团：FMOC和Boc，或者其中R’和R”一起形成脂肪族单环的、脂肪族双环的或脂肪族多环的结构；
R2、R3和R4独立地选自氢、脂肪族C1-C20烃或-(C＝O)-R*，它们中的每一个还包含0-8个选自卤素、O、N和S的杂原子；
Ra选自氢、-F、-Cl、-Br、-I、-OH、-OR*、-NH2、-NHR*、-N(R*)2、-N(R*)3 +、-(C＝O)-R*、-CHO、-CO2H、-CO2R*、-SR*、-SO2R*和脂肪族C1-C20烃，它还包含0-8个选自卤素、O、N和S的杂原子，并且其中Ra任选地被以下中的一种或更多种取代：-F、-Cl、-Br、-I、-OH、-OR*；
Rb选自氢、-F、-Cl、-Br、-I、-OH、-OR*、-(C＝O)-R*、-CHO、-CO2H、-CO2R*和脂肪族C1-C20烃，它还包含0-3个选自卤素、O和S的杂原子，并且其中Rb任选地被以下中的一种或更多种取代：-F、-Cl、-Br、-I、-OH、-OR*；并且
R*在每次出现时独立地选自氢、脂肪族C1-C20烃、芳香族C1-C20烃、杂芳香族C1-C20烃、环状脂肪族C1-C20烃、杂环C1-C20烃及其组合，它还包含0-8个选自卤素、O、N和S及其组合的杂原子。
在另一方面中，本公开内容提供了治疗需要相应治疗的受试者的细菌感染的方法，所述方法包括施用有效量的具有式(I’)的结构的化合物：
Figure BDA0003124860200001771
或其药学上可接受的盐，其中：
X选自-O-和-NR*-；
R1选自RN、氢、脂肪族C1-C20烃、芳香族C1-C20烃、杂芳香族C1-C20烃、环状脂肪族C1-C20烃、杂环C1-C20烃及其组合，它们中的每一个还包含0-8个选自卤素、O、N和S的杂原子，并且其中R1任选地被以下中的一种或更多种取代：-F、-Cl、-Br、-I、-OH、-OR*、-NO、-NO2、-NO3、-O-NO、-N3、-NH2、-NHR*、-N(R*)2、-N(R*)3 +、-N(R*)-OH、-O-N(R*)2、-N(R*)-O-R*、-CN、-NC、-(C＝O)-R*、-CHO、-CO2H、-CO2R*、-(C＝O)-S-R*、-O-(C＝O)-H、-O-(C＝O)-R*、-S-(C＝O)-R*、-(C＝O)-NH2、-(C＝O)-N(R*)2、-(C＝O)-NHNH2、-O-(C＝O)-NHNH2、-(C＝S)-NH2、-(C＝S)-N(R*)2、-N(R*)-CHO、-N(R*)-(C＝O)-R*、-SCN、-NCS、-NSO、-SSR*、-SO2R*、-SO2-N(R*)2、-S(＝O)-OR*、-S(＝O)-R*、-Si(R*)3、-CF3、-O-CF3及其组合，条件是R1不是正丁基基团，并且当X是-O-且Ra是氢时，R1不是氢；
RN选自：
Figure BDA0003124860200001781
Figure BDA0003124860200001782
其中符号
Figure BDA0003124860200001783
表示附接点；并且R’、R”和R”’选自氢、C1-C6脂肪族烃和包括以下的保护基团：FMOC和Boc，或者其中R’和R”一起形成脂肪族单环的、脂肪族双环的或脂肪族多环的结构；
R2、R3和R4独立地选自氢、脂肪族C1-C20烃或-(C＝O)-R*，它们中的每一个还包含0-8个选自卤素、O、N和S的杂原子；
Ra选自氢、-F、-Cl、-Br、-I、-OH、-OR*、-NH2、-NHR*、-N(R*)2、-N(R*)3 +、-(C＝O)-R*、-CHO、-CO2H、-CO2R*、-SR*、-SO2R*和脂肪族C1-C20烃，它还包含0-8个选自卤素、O、N和S的杂原子，并且其中Ra任选地被以下中的一种或更多种取代：-F、-Cl、-Br、-I、-OH、-OR*；
Rb选自氢、-F、-Cl、-Br、-I、-OH、-OR*、-(C＝O)-R*、-CHO、-CO2H、-CO2R*和脂肪族C1-C20烃，它还包含0-3个选自卤素、O和S的杂原子，并且其中Rb任选地被以下中的一种或更多种取代：-F、-Cl、-Br、-I、-OH、-OR*，并且
R*在每次出现时独立地选自氢、脂肪族C1-C20烃、芳香族C1-C20烃、杂芳香族C1-C20烃、环状脂肪族C1-C20烃、杂环C1-C20烃及其组合，它还包含0-8个选自卤素、O、N和S及其组合的杂原子。
在又一方面中，本公开内容提供了治疗需要相应治疗的受试者的细菌感染的方法，所述方法包括向受试者施用有效量的具有式(B)的结构的化合物：
Figure BDA0003124860200001791
或其药学上可接受的盐，其中：
X选自-O-和-NR*-；
R1选自氢、RN、脂肪族C1-C20烃、芳香族C1-C20烃、杂芳香族C1-C20烃、环状脂肪族C1-C20烃、杂环C1-C20烃及其组合，它们中的每一个还包含0-8个选自卤素、O、N和S的杂原子，并且其中R1任选地被以下中的一种或更多种取代：-F、-Cl、-Br、-I、-OH、-OR*、-NO、-NO2、-NO3、-O-NO、-N3、-NH2、-NHR*、-N(R*)2、-N(R*)3 +、-N(R*)-OH、-O-N(R*)2、-N(R*)-O-R*、-CN、-NC、-(C＝O)-R*、-CHO、-CO2H、-CO2R*、-(C＝O)-S-R*、-O-(C＝O)-H、-O-(C＝O)-R*、-S-(C＝O)-R*、-(C＝O)-NH2、-(C＝O)-N(R*)2、-(C＝O)-NHNH2、-O-(C＝O)-NHNH2、-(C＝S)-NH2、-(C＝S)-N(R*)2、-N(R*)-CHO、-N(R*)-(C＝O)-R*、-SCN、-NCS、-NSO、-SSR*、-SO2R*、-SO2-N(R*)2、-S(＝O)-OR*、-S(＝O)-R*、-Si(R*)3、-CF3、-O-CF3及其组合，条件是R1不是正丁基基团，并且当X是-O-且Ra是氢时，R1不是氢；
RN选自：
Figure BDA0003124860200001801
Figure BDA0003124860200001802
其中符号
Figure BDA0003124860200001803
表示附接点；并且R’、R”和R”’选自氢、C1-C6脂肪族烃和选自以下的保护基团：芴基甲氧羰基(FMOC)和叔丁氧羰基(Boc)，或者其中R’和R”一起形成脂肪族单环的、脂肪族双环的或脂肪族多环的结构；
R2、R3和R4独立地选自氢、脂肪族C1-C20烃和-(C＝O)-R*，它们中的每一个还包含0-8个选自卤素、O、N和S的杂原子；
Ra选自氢、-F、-Cl、-Br、-I、-OH、-OR*、-NH2、-NHR*、-N(R*)2、-N(R*)3 +、-(C＝O)-R*、-CHO、-CO2H、-CO2R*、-SR*、-SO2R*和脂肪族C1-C20烃，它还包含0-8个选自卤素、O、N和S的杂原子，并且其中Ra任选地被以下中的一种或更多种取代：-F、-Cl、-Br、-I、-OH、-OR*；
Rb选自氢、-F、-Cl、-Br、-I、-OH、-OR*、-(C＝O)-R*、-CHO、-CO2H、-CO2R*和脂肪族C1-C20烃，它还包含0-3个选自卤素、O和S的杂原子，并且其中Rb任选地被以下中的一种或更多种取代：-F、-Cl、-Br、-I、-OH、-OR*，并且
R*在每次出现时独立地选自氢、脂肪族C1-C20烃、芳香族C1-C20烃、杂芳香族C1-C20烃、环状脂肪族C1-C20烃、杂环C1-C20烃及其组合，它还包含0-8个选自卤素、O、N和S及其组合的杂原子。
在另一方面中，本公开内容提供了一种治疗需要相应治疗的受试者的细菌感染的方法，所述方法包括施用有效量的利福霉素类似物化合物，其具有根据如本文提供的式(IA)、式(II)、式(II’)、式(III)、式(III’)、式(IV)、式(IV’)、式(V)、式(V’)、式(B-1)和式(B-2)中的任一种的结构。在一种实施方案中，细菌感染是革兰氏阳性细菌感染。
在一种实施方案中，细菌感染是耐青霉素细菌感染。
在一种实施方案中，细菌感染是金黄色葡萄球菌感染。
在一种实施方案中，细菌感染是细胞内细菌感染。
在一种实施方案中，受试者是人类。
在一种实施方案中，方法还包括施用第二治疗剂。
在一种实施方案中，第二治疗剂是第二抗生素。
在一种实施方案中，第二抗生素针对金黄色葡萄球菌是有效的。
在一种实施方案中，第二抗生素选自氨基糖苷、β-内酰胺、大环内酯、环肽、四环素、氟喹啉、氟喹诺酮和噁唑烷酮。
在一种实施方案中，第二抗生素选自克林霉素、新生霉素、瑞他莫林、达托霉素、西他沙星、替考拉宁、三氯生、萘啶酮、雷德唑胺、多柔比星、氨苄西林、万古霉素、亚胺培南、多利培南、吉西他滨、达巴万星和阿奇霉素。
在一种实施方案中，化合物被口服地、局部地、鼻内地、静脉内地、肌内地或皮下地施用至受试者。
在另一方面中，本公开内容提供了一种防止或抑制细菌的生长的方法，所述方法包括施用有效量的具有式(I)的结构的化合物：
Figure BDA0003124860200001821
其中：
X选自-O-、-S-和-NR*-；
R1选自氢、脂肪族C1-C20烃、芳香族C5-C20烃、杂芳香族C1-C20烃、环状脂肪族C1-C20烃、杂环C1-C20烃及其组合，它们中的每一个还包含0-8个选自卤素、O、N和S的杂原子，并且其中R1任选地被以下中的一种或更多种取代：-F、-Cl、-Br、-I、-OH、-OR*、-NO、-NO2、-NO3、-O-NO、-N3、-NH2、-NHR*、-N(R*)2、-N(R*)3 +、-N(R*)-OH、-O-N(R*)2、-N(R*)-O-R*、-CN、-NC、-(C＝O)-R*、-CHO、-CO2H、-CO2R*、-(C＝O)-S-R*、-O-(C＝O)-H、-O-(C＝O)-R*、-S-(C＝O)-R*、-(C＝O)-NH2、-(C＝O)-N(R*)2、-(C＝O)-NHNH2、-O-(C＝O)-NHNH2、-(C＝S)-NH2、-(C＝S)-N(R*)2、-N(R*)-CHO、-N(R*)-(C＝O)-R*、-SCN、-NCS、-NSO、-SSR*、-SO2R*、-SO2-N(R*)2、-S(＝O)-OR*、-S(＝O)-R*、-Si(R*)3、-CF3、-O-CF3及其组合，条件是R1不是正丁基基团，其中当X是-O-且Ra是氢时，R1不是氢；
R2、R3和R4独立地选自氢，直链的、支链的或环状的脂肪族C1-C20烃，或者-(C＝O)-R*，它们中的每一个还包含0-8个选自卤素、O、N和S的杂原子；
Ra选自氢、-F、-Cl、-Br、-I、-OH、-OR*、-NH2、-NHR*、-N(R*)2、-N(R*)3 +、-(C＝O)-R*、-CHO、-CO2H、-CO2R*、-SR*、-SO2R*和脂肪族C1-C20烃，它还包含0-8个选自卤素、O、N和S的杂原子，并且其中Ra任选地被以下中的一种或更多种取代：-F、-Cl、-Br、-I、-OH、-OR*；
Rb在每次出现时是氢原子；并且
R*在每次出现时独立地选自氢、脂肪族C1-C20烃、芳香族C1-C20烃、杂芳香族C1-C20烃、环状脂肪族C1-C20烃、杂环C1-C20烃及其组合，它还包含0-8个选自卤素、O、N和S及其组合的杂原子；
或其药学上可接受的盐。
在又一方面中，本公开内容提供了治疗需要相应治疗的受试者的细菌感染的方法，所述方法包括向受试者施用有效量的具有式(I’)的结构的化合物：
Figure BDA0003124860200001831
其中：
X选自-O-、-S-和-NR*-；
R1选自氢、脂肪族C1-C20烃、芳香族C1-C20烃、杂芳香族C1-C20烃、环状脂肪族C1-C20烃、杂环C1-C20烃及其组合，它们中的每一个还包含0-8个选自卤素、O、N和S的杂原子，并且其中R1任选地被以下中的一种或更多种取代：-F、-Cl、-Br、-I、-OH、-OR*、-NO、-NO2、-NO3、-O-NO、-N3、-NH2、-NHR*、-N(R*)2、-N(R*)3 +、-N(R*)-OH、-O-N(R*)2、-N(R*)-O-R*、-CN、-NC、-(C＝O)-R*、-CHO、-CO2H、-CO2R*、-(C＝O)-S-R*、-O-(C＝O)-H、-O-(C＝O)-R*、-S-(C＝O)-R*、-(C＝O)-NH2、-(C＝O)-N(R*)2、-(C＝O)-NHNH2、-O-(C＝O)-NHNH2、-(C＝S)-NH2、-(C＝S)-N(R*)2、-N(R*)-CHO、-N(R*)-(C＝O)-R*、-SCN、-NCS、-NSO、-SSR*、-SO2R*、-SO2-N(R*)2、-S(＝O)-OR*、-S(＝O)-R*、-Si(R*)3、-CF3、-O-CF3及其组合，条件是R1不是正丁基基团；
其中当X是-O-且Ra是氢时，R1不是氢；
R2、R3和R4独立地选自氢，直链的、支链的或环状的脂肪族C1-C20烃，或者-(C＝O)-R*，它们中的每一个还包含0-8个选自卤素、O、N和S的杂原子；
Ra选自氢、-F、-Cl、-Br、-I、-OH、-OR*、-NH2、-NHR*、-N(R*)2、-N(R*)3 +、-(C＝O)-R*、-CHO、-CO2H、-CO2R*、-SR*、-SO2R*和脂肪族C1-C20烃，它还包含0-8个选自卤素、O、N和S的杂原子，并且其中Ra任选地被以下中的一种或更多种取代：-F、-Cl、-Br、-I、-OH、-OR*；
Rb在每次出现时是氢原子；并且
R*在每次出现时独立地选自氢、脂肪族C1-C20烃、芳香族C1-C20烃、杂芳香族C1-C20烃、环状脂肪族C1-C20烃、杂环C1-C20烃及其组合，它还包含0-8个选自卤素、O、N和S及其组合的杂原子；
或其药学上可接受的盐。
在一方面中，本公开内容提供了防止或抑制细菌的生长的方法，所述方法包括施用有效量的本公开内容的利福霉素类似物化合物、或包含本公开内容的利福霉素类似物化合物的药物组合物、或包含本公开内容的利福霉素类似物化合物的药物剂型。
在另一方面中，本公开内容提供了治疗需要相应治疗的受试者的细菌感染的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的本公开内容的利福霉素类似物化合物、或包含本公开内容的利福霉素类似物化合物的药物组合物、或包含本公开内容的利福霉素类似物化合物的药物剂型。
在一种实施方案中，化合物、组合物或剂型被口服地、局部地、鼻内地、静脉内地、肌内地或皮下地施用至受试者。
适合于ADC的抗MSR1抗体
本文描述的抗体-药物缀合物可以包含全长的抗MSR1抗体(例如，IgG1或IgG4抗体)，或者可以仅包含抗原结合部分(例如，Fab、F(ab’)2或scFv片段)，并且可以被修饰以影响功能，例如，消除残余效应物功能(Reddy等人,2000,J.Immunol.164:1925-1933)。
本文描述的抗体-药物缀合物的实施方案可以包括表9和表10中列出的抗MSR1抗体。表9列出了示例性抗MSR1抗体的重链可变区(HCVR)、轻链可变区(LCVR)、重链互补决定区(HCDR1、HCDR2和HCDR3)和轻链互补决定区(LCDR1、LCDR2和LCDR3)的氨基酸序列标识符。表10列出了示例性抗MSR1抗体的HCVR、LCVR、HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3的核酸序列标识符。
用于本文描述的抗体-药物缀合物的合适抗体或其抗原结合片段包括特异性地结合MSR1并包含HCVR的抗体或其抗原结合片段，该HCVR包含选自表9中列出的任何HCVR氨基酸序列，或与其具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％序列同一性的其基本上相似的序列的氨基酸序列。
特异性地结合MSR1的另外合适的抗体或其抗原结合片段包含LCVR，该LCVR包含选自表9中列出的任何LCVR氨基酸序列，或与其具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％序列同一性的其基本上相似的序列的氨基酸序列。
特异性地结合MSR1的另外合适的抗体或其抗原结合片段包含HCVR和LCVR氨基酸序列对(HCVR/LCVR)，该氨基酸序列对包含与表9中列出的任何LCVR氨基酸序列配对的表9中列出的任何HCVR氨基酸序列。某些实施方案涉及包含抗体或其抗原结合片段的抗体-药物缀合物，所述抗体或其抗原结合片段包含表9中列出的任何示例性抗MSR1抗体中包含的HCVR/LCVR氨基酸序列对。在一些实施方案中，HCVR/LCVR氨基酸序列对选自由以下组成的组：2/10、23/42、50/58、90/98和282/290。
用于本文描述的抗体-药物缀合物的合适抗体或其抗原结合片段包括特异性地结合MSR1并包含重链CDR1(HCDR1)的抗体或其抗原结合片段，该重链CDR1包含选自表9中列出的任何HCDR1氨基酸序列，或具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％序列同一性的其基本上相似的序列的氨基酸序列。
特异性地结合MSR1的另外合适的抗体或其抗原结合片段包含重链CDR2(HCDR2)，该重链CDR2包含选自表9中列出的任何HCDR2氨基酸序列，或具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％序列同一性的其基本上相似的序列的氨基酸序列。
特异性地结合MSR1的另外合适的抗体或其抗原结合片段包含重链CDR3(HCDR3)，该重链CDR3包含选自表9中列出的任何HCDR3氨基酸序列，或具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％序列同一性的其基本上相似的序列的氨基酸序列。
用于本文描述的抗体-药物缀合物的合适抗体或其抗原结合片段包括特异性地结合MSR1并包含轻链CDR1(LCDR1)的抗体或其抗原结合片段，该轻链CDR1包含选自表9中列出的任何LCDR1氨基酸序列，或具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％序列同一性的其基本上相似的序列的氨基酸序列。
特异性地结合MSR1的另外合适的抗体或其抗原结合片段包含轻链CDR2(LCDR2)，该轻链CDR2包含选自表9中列出的任何LCDR2氨基酸序列，或具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％序列同一性的其基本上相似的序列的氨基酸序列。
特异性地结合MSR1的另外合适的抗体或其抗原结合片段包含轻链CDR3(LCDR3)，该轻链CDR3包含选自表9中列出的任何LCDR3氨基酸序列，或具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％序列同一性的其基本上相似的序列的氨基酸序列。
特异性地结合MSR1的另外合适的抗体或其抗原结合片段包含HCDR3和LCDR3氨基酸序列对(HCDR3/LCDR3)，该氨基酸序列对包含与表9中列出的任何LCDR3氨基酸序列配对的表9中列出的任何HCDR3氨基酸序列。某些实施方案涉及抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包含表9中列出的任何示例性抗MSR1抗体中包含的HCDR3/LCDR3氨基酸序列对。在一些实施方案中，HCDR3/LCDR3氨基酸序列对选自由以下组成的组：8/16、40/48、56/64、96/104和288/296。
用于本文描述的抗体-药物缀合物的合适抗体或其抗原结合片段包括特异性地结合MSR1并包含在表9中列出的任何示例性抗MSR1抗体中包含的一组六个CDR(即，HCDR1-HCDR2-HCDR3-LCDR1-LCDR2-LCDR3)的抗体或其抗原结合片段。在某些实施方案中，HCDR1-HCDR2-HCDR3-LCDR1-LCDR2-LCDR3氨基酸序列组选自由以下组成的组：4-6-8-12-14-16；36-38-40-44-46-48；52-54-56-60-62-64；92-94-96-100-102-104和284-286-288-292-294-296。
在相关实施方案中，特异性地结合MSR1的合适抗体或其抗原结合片段包含在如由表9中列出的任何示例性抗MSR1抗体定义的HCVR/LCVR氨基酸序列对中包含的一组六个CDR(即，HCDR1-HCDR2-HCDR3-LCDR1-LCDR2-LCDR3)。例如，本公开内容包括合适抗体或其抗原结合片段，其特异性地结合MSR1并包含在选自由2/10、23/42、50/58、90/98和282/290组成的组中的HCVR/LCVR氨基酸序列对中包含的HCDR1-HCDR2-HCDR3-LCDR1-LCDR2-LCDR3氨基酸序列组。用于鉴定HCVR和LCVR氨基酸序列中的CDR的方法和技术是本领域熟知的，并且可以用于鉴定本文公开的特定HCVR和/或LCVR氨基酸序列中的CDR。可以用于鉴定CDR的边界的示例性惯例包括例如Kabat定义、Chothia定义和AbM定义。一般来说，Kabat定义是基于序列可变性，Chothia定义是基于结构环区域的位置，并且AbM定义是Kabat和Chothia方法之间的折衷。参见，例如Kabat,"Sequences of Proteins of Immunological Interest,"National Institutes of Health,Bethesda,Md.(1991)；Al-Lazikani等人,J.Mol.Biol.273:927-948(1997)；和Martin等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 86:9268-9272(1989)。公共数据库也可用于鉴定抗体中的CDR序列。
本文还提供了编码抗MSR1抗体或其部分的核酸分子，该抗MSR1抗体或其部分用于制备本文描述的抗体-药物缀合物。例如，本文提供了编码表9中列出的任何HCVR氨基酸序列的核酸分子；在某些实施方案中，核酸分子可以包含选自表10中列出的任何HCVR核酸序列，或与其具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％序列同一性的其基本上相似的序列的多核苷酸序列。
本文还提供了编码表9中列出的任何LCVR氨基酸序列的核酸分子；在某些实施方案中，核酸分子可以包含选自表10中列出的任何LCVR核酸序列，或与其具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％序列同一性的其基本上相似的序列的多核苷酸序列。
本文还提供了编码表9中列出的任何HCDR1氨基酸序列的核酸分子；在某些实施方案中，核酸分子可以包含选自表10中列出的任何HCDR1核酸序列，或与其具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％序列同一性的其基本上相似的序列的多核苷酸序列。
本文还提供了编码表9中列出的任何HCDR2氨基酸序列的核酸分子；在某些实施方案中，核酸分子可以包含选自表10中列出的任何HCDR2核酸序列，或与其具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％序列同一性的其基本上相似的序列的多核苷酸序列。
本文还提供了编码表9中列出的任何HCDR3氨基酸序列的核酸分子；在某些实施方案中，核酸分子可以包含选自表10中列出的任何HCDR3核酸序列，或与其具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％序列同一性的其基本上相似的序列的多核苷酸序列。
本文还提供了编码表9中列出的任何LCDR1氨基酸序列的核酸分子；在某些实施方案中，核酸分子可以包含选自表10中列出的任何LCDR1核酸序列，或与其具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％序列同一性的其基本上相似的序列的多核苷酸序列。
本文还提供了编码表9中列出的任何LCDR2氨基酸序列的核酸分子；在某些实施方案中，核酸分子可以包含选自表10中列出的任何LCDR2核酸序列，或与其具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％序列同一性的其基本上相似的序列的多核苷酸序列。
本文还提供了编码表9中列出的任何LCDR3氨基酸序列的核酸分子；在某些实施方案中，核酸分子可以包含选自表10中列出的任何LCDR3核酸序列，或与其具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％序列同一性的其基本上相似的序列的多核苷酸序列。
本文还提供了编码HCVR的核酸分子，其中HCVR可以包含一组三个CDR(即，HCDR1-HCDR2-HCDR3)，其中HCDR1-HCDR2-HCDR3氨基酸序列组如由表9中列出的任何示例性抗MSR1抗体定义的。
本文还提供了编码LCVR的核酸分子，其中LCVR可以包含一组三个CDR(即，LCDR1-LCDR2-LCDR3)，其中LCDR1-LCDR2-LCDR3氨基酸序列组如由表9中列出的任何示例性抗MSR1抗体定义的。
本文还提供了编码HCVR和LCVR两者的核酸分子，其中HCVR可以包含表9中列出的任何HCVR氨基酸序列的氨基酸序列，并且其中LCVR可以包含表9中列出的任何LCVR氨基酸序列的氨基酸序列。在某些实施方案中，核酸分子可以包含选自表10中列出的任何HCVR核酸序列，或与其具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％序列同一性的其基本上相似的序列的多核苷酸序列；以及选自表10中列出的任何LCVR核酸序列，或与其具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％序列同一性的其基本上相似的序列的多核苷酸序列。在根据本公开内容的该方面的某些实施方案中，核酸分子编码HCVR和LCVR，其中HCVR和LCVR均来源于表9中列出的相同的抗MSR1抗体。
本文还提供了能够表达包含抗MSR1抗体的重链或轻链可变区的多肽的重组表达载体，抗MSR1抗体用于制备本文描述的抗体-药物缀合物。例如，实施方案包括重组表达载体，其包含上文提及的任何核酸分子，即，编码如表9中列出的任何HCVR、LCVR和/或CDR序列的核酸分子。本公开内容的范围内还包括已经引入此类载体的宿主细胞，以及通过在允许产生抗体或抗体片段的条件下培养宿主细胞并回收如此产生的抗体和抗体片段来产生用于制备本文描述的抗体-药物缀合物的抗体或其部分的方法。
用于本文描述的抗体-药物缀合物的合适的抗MSR1抗体包括那些具有修饰的糖基化模式的抗体。在一些实施方案中，修饰以去除不期望的糖基化位点可以是有用的，或者去除缺乏存在于寡糖链上的岩藻糖部分的抗体，例如，以增加抗体依赖性细胞毒性(ADCC)功能(参见Shield等人.(2002)JBC 277:26733)。在其他应用中，可以进行半乳糖基化的修饰，以修饰补体依赖性细胞毒性(CDC)。
根据某些实施方案，根据本公开内容的抗体-药物缀合物包含抗MSR1抗体，该抗MSR1抗体包含含有一个或更多个突变的Fc结构域，所述突变例如在酸性pH比在中性pH增强或减少抗体与FcRn受体的结合。例如，本文提供了包含抗MSR1抗体的抗体-药物缀合物，该抗MSR1抗体包含在Fc结构域的CH2或CH3区中的突变，其中突变增加在酸性环境中(例如，在pH范围为约5.5至约6.0的内体中)Fc结构域与FcRn的亲和力。当施用至动物时，这样的突变可以导致抗体的血清半衰期增加。这样的Fc修饰的非限制性实例包括，例如，在250位(例如，E或Q)；250位和428位(例如，L或F)；252位(例如，L/Y/F/W或T)、254位(例如，S或T)和256位(例如，S/R/Q/E/D或T)的修饰；或在428位和/或433位(例如，H/L/R/S/P/Q或K)和/或434位(例如，H/F或Y)的修饰；或在250位和/或428位的修饰；或在307位或308位(例如，308F、V308F)和434位的修饰。在一种实施方案中，修饰可以包括428L(例如，M428L)和434S(例如，N434S)修饰；428L、259I(例如，V259I)和308F(例如，V308F)修饰；433K(例如，H433K)和434(例如，434Y)修饰；252、254和256(例如，252Y、254T和256E)修饰；250Q和428L修饰(例如，T250Q和M428L)；以及307和/或308修饰(例如，308F或308P)。
例如，实施方案包括包含抗MSR1抗体的抗体-药物缀合物，该抗MSR1抗体包含含有一对或更多对突变或突变组的Fc结构域，所述突变选自由以下组成的组：250Q和248L(例如，T250Q和M248L)；252Y、254T和256E(例如，M252Y、S254T和T256E)；428L和434S(例如，M428L和N434S)；以及433K和434F(例如，H433K和N434F)。前述Fc结构域突变和在本文公开的抗体可变结构域内的其他突变的所有可能组合预期都在本公开内容的范围内。
抗MSR1抗体的生物学特性
实施方案包括抗体-药物缀合物，该抗体-药物缀合物包含利福霉素类似物和以高亲和力结合人MSR1的抗体及其抗原结合片段。例如，本公开内容包括包含抗MSR1抗体的抗体-药物缀合物，该抗MSR1抗体在25℃或37℃以如通过表面等离子体共振(例如，使用如本文的实施例25中定义的测定形式，或基本上类似的测定)测量的小于约10nM的KD结合用N-末端九组氨酸(nonahistidine)标签表达的人MSR1细胞外结构域(SEQ ID NO:688)(例如，His9-hMSR1)。根据某些实施方案，提供了包含抗MSR1抗体的抗体-药物缀合物，该抗MSR1抗体在37℃以如通过表面等离子体共振(例如，使用如本文的实施例25中定义的测定形式，或基本上类似的测定)测量的小于约10nM、小于约9nM、小于约8nM、小于约7nM、小于约6nM、小于约5nM、小于约4nM、小于约3nM、小于约2nM、小于约1nM、小于约900pM、小于约800pM、小于约700pM、小于约600pM、小于约500pM、小于约400pM、小于约300pM、小于约200pM、小于约100pM、小于约90pM、小于约80pM、小于约70pM、小于约60pM、小于约50pM、小于约40pM、小于约30pM、小于约20pM、或小于约10pM的KD结合人MSR1。在一些实施方案中，抗体-药物缀合物包含本文公开的抗MSR1抗体，该抗MSR1抗体在25℃以如通过表面等离子体共振(例如，使用如本文的实施例25中定义的测定形式，或基本上类似的测定)测量的小于约6nM、小于约5nM、小于约4nM、小于约3nM、小于约2nM、小于约1nM、小于约900pM、小于约800pM、小于约700pM、小于约600pM、小于约500pM、小于约400pM、小于约300pM、小于约200pM、小于约100pM、小于约90pM、小于约80pM、小于约70pM、小于约60pM、小于约50pM、小于约40pM、小于约30pM、或小于约20pM的KD结合人MSR1。
实施方案还包括抗体-药物缀合物，该抗体-药物缀合物包含以高亲和力结合猴MSR1的抗体及其抗原结合片段。例如，本文公开了包含抗MSR1抗体的抗体-药物缀合物，该抗MSR1抗体在25℃或37℃以如通过表面等离子体共振(例如，使用如本文的实施例25中定义的测定形式，或基本上类似的测定)测量的小于约20nM的KD结合用N-末端myc-myc-六组氨酸标签表达的猴MSR1细胞外结构域(“六组氨酸”公开为SEQ ID NO:689)(例如，HMM-mfMSR1)。根据某些实施方案，提供了包含抗MSR1抗体的抗体-药物缀合物，该抗MSR1抗体在37℃以如通过表面等离子体共振(例如，使用如本文的实施例25中定义的测定形式，或基本上类似的测定)测量的小于约20nM、小于约18nM、小于约15nM、小于约12nM、小于约10nM、小于约9nM、小于约8nM、小于约7nM、小于约6nM、小于约5nM、小于约4nM、小于约3nM、小于约2nM、小于约1nM、小于约900pM、小于约800pM、小于约700pM、小于约600pM、小于约500pM、小于约400pM、小于约300pM、小于约200pM、小于约100pM、小于约90pM、小于约80pM、小于约70pM、小于约60pM、小于约50pM、小于约40pM、小于约30pM、小于约20pM、或小于约10pM的KD结合猴MSR1。在一些实施方案中，包含本文公开的抗MSR1抗体的抗体-药物缀合物在25℃以如通过表面等离子体共振(例如，使用如本文的实施例25中定义的测定形式，或基本上类似的测定)测量的小于约12nM、小于约10nM、小于约9nM、小于约8nM、小于约7nM、小于约6nM、小于约5nM、小于约4nM、小于约3nM、小于约2nM、小于约1nM、小于约900pM、小于约800pM、小于约700pM、小于约600pM、小于约500pM、小于约400pM、小于约300pM、小于约200pM、小于约100pM、小于约90pM、小于约80pM、小于约70pM、小于约60pM、小于约50pM、小于约40pM、小于约30pM、或小于约20pM的KD结合猴MSR1。
本公开内容还包括包含抗体及其抗原结合片段的抗体-药物缀合物，该抗体及其抗原结合片段在25℃或37℃以如通过表面等离子体共振(例如，使用如本文的实施例25中定义的测定形式，或基本上类似的测定)测量的大于约5分钟的解离半衰期(t1/2)结合用N-末端九组氨酸标签表达的人MSR1细胞外结构域(SEQ ID NO:688)(例如，His9-hMSR1)。根据某些实施方案，提供了包含抗MSR1抗体的抗体-药物缀合物，该抗MSR1抗体在37℃以如通过表面等离子体共振(例如，使用如本文的实施例25中定义的测定形式，或基本上类似的测定)测量的大于约4分钟、大于约5分钟、大于约6分钟、大于约8分钟、大于约10分钟、大于约12分钟、大于约14分钟、大于约16分钟、大于约18分钟、大于约20分钟、大于约30分钟、大于约40分钟、大于约50分钟、大于约60分钟、大于约70分钟、大于约80分钟、大于约90分钟、大于约120分钟、大于约150分钟、大于约180分钟、大于约210分钟、大于约240分钟或更长时间的t1/2结合人MSR1。
实施方案还包括包含抗体及其抗原结合片段的抗体-药物缀合物，该抗体及其抗原结合片段可以以高亲和力结合用N-末端myc-myc-六组氨酸标签表达的猴MSR1细胞外结构域(“六组氨酸”公开为SEQ ID NO:689)(例如，HMM-mfMSR1)。例如，本公开内容包括包含抗MSR1抗体的抗体-药物缀合物，该抗MSR1抗体在25℃或37℃以如通过表面等离子体共振(例如，使用如本文的实施例25中定义的测定形式，或基本上类似的测定)测量的小于约20nM的KD结合HMM-mfMSR1。根据某些实施方案，提供了包含抗MSR1抗体的抗体-药物缀合物，该抗MSR1抗体在37℃以如通过表面等离子体共振(例如，使用如本文的实施例25中定义的测定形式，或基本上类似的测定)测量的小于约20nM、小于约15nM、小于约10nM、小于约9nM、小于约8nM、小于约7nM、小于约6nM、小于约5nM、小于约4nM、小于约3nM、小于约2nM、小于约1nM、小于约900pM、小于约800pM、小于约700pM、小于约600pM、小于约500pM、小于约400pM、小于约300pM、小于约200pM、小于约150pM、小于约100pM、小于约90pM、小于约80pM、小于约70pM、小于约60pM、或小于约50pM的KD结合HMM-mfMSR1。在一些实施方案中，本文公开的抗MSR1抗体在25℃以如通过表面等离子体共振(例如，使用如本文的实施例25中定义的测定形式，或基本上类似的测定)测量的小于约12nM、小于约10nM、小于约9nM、小于约8nM、小于约7nM、小于约6nM、小于约5nM、小于约4nM、小于约3nM、小于约2nM、小于约1nM、小于约900pM、小于约800pM、小于约700pM、小于约600pM、小于约500pM、小于约400pM、小于约300pM、小于约200pM、小于约150pM、小于约100pM、小于约90pM、小于约80pM、小于约70pM、小于约60pM、或小于约50pM的KD结合HMM-mfMSR1。
实施方案还包括包含抗体及其抗原结合片段的抗体-药物缀合物，该抗体及其抗原结合片段在25℃或37℃以如通过表面等离子体共振(例如，使用如本文的实施例25中定义的测定形式，或基本上类似的测定)测量的大于约55分钟的解离半衰期(t1/2)结合用N-末端myc-myc-六组氨酸标签表达的猴MSR1细胞外结构域(“六组氨酸”公开为SEQ ID NO:689)(例如，HMM-mfMSR1)。根据某些实施方案，提供了包含抗MSR1抗体的抗体-药物缀合物，该抗MSR1抗体在37℃以如通过表面等离子体共振(例如，使用如本文的实施例25中定义的测定形式，或基本上类似的测定)测量的大于约1分钟、大于约2分钟、大于约3分钟、大于约4分钟、大于约5分钟、大于约6分钟、大于约8分钟、大于约10分钟、大于约12分钟、大于约14分钟、大于约16分钟、大于约18分钟、大于约20分钟、大于约30分钟、大于约40分钟、大于约50分钟、大于约60分钟、大于约70分钟、大于约80分钟、大于约90分钟、大于约120分钟、大于约150分钟、大于约180分钟、大于约210分钟或更长时间的t1/2结合二聚体人MSR1。
实施方案还包括包含抗体及其抗原结合片段的抗体-药物缀合物，该抗体及其抗原结合片段以如通过抗体结合测定(例如，使用如本文的实施例27中定义的测定形式，或基本上类似的测定)测量的至少约2倍、至少约3倍、至少约4倍、至少约5倍、至少约6倍、至少约7倍、至少约8倍、至少约9倍、至少约10倍、至少约12倍、至少约15倍、至少约20倍、至少约25倍、至少约30倍、至少约35倍、至少约40倍、至少约45倍、至少约50倍或更大的工程化表达hMSR1的细胞与非表达细胞的结合比率结合工程化细胞表面表达的hMSR1。在一些实施方案中，本文提供了抗体-药物缀合物，其包含以如通过抗体结合测定(例如，使用如本文的实施例27中定义的测定形式，或基本上类似的测定)测量的至少约2倍、至少约3倍、至少约4倍、至少约5倍、至少约6倍、至少约7倍、至少约8倍、至少约9倍、至少约10倍、至少约12倍、至少约15倍、至少约20倍、至少约25倍、至少约30倍、至少约35倍、至少约40倍、至少约45倍、至少约50倍或更大的内源表达hMSR1的细胞与非表达细胞的结合比率结合具有内源表达的hMSR1的细胞的抗体。在一些实施方案中，抗体-药物缀合物包含本文公开的MSR1抗体或抗原结合片段，该MSR1抗体或抗原结合片段以如通过抗体结合测定(例如，使用如本文的实施例27中定义的测定形式，或基本上类似的测定)测量的至少约2倍、至少约3倍、至少约4倍、至少约5倍、至少约6倍、至少约7倍、至少约8倍、至少约9倍、至少约10倍、至少约12倍、至少约15倍、至少约20倍、至少约25倍、至少约30倍、至少约35倍、至少约40倍、至少约45倍、至少约50倍或更大的工程化表达小鼠hMSR1的细胞与非表达细胞的结合比率结合工程化细胞表面表达的小鼠hMSR1。
抗体-药物缀合物包含本文公开的抗体，该抗体可以具有上述生物学特性或其任何组合中的一种或更多种。本文公开的抗体的生物学特性的前述列表不意图是穷尽的。通过包括本文的工作实施例的本公开内容的综述，本文公开的抗体的其他生物学特性对于本领域普通技术人员来说将是明显的。
适合于ADC的抗WTA抗体
根据某些实施方案，本公开内容的抗体-药物缀合物可以包含抗WTA抗体或其抗原结合片段。这样的抗WTA抗体或其抗原结合片段结合在包括金黄色葡萄球菌在内的许多革兰氏阳性细菌上表达的壁磷壁酸(WTA)。抗WTA抗体可以通过在例如美国专利第8,283,294号；Meijer PJ等人(2006)J Mol Biol.358(3):764-72；Lantto J,等人(2011)J Virol.85(4):1820-33；和WO2016090038中教导的方法来选择和生产，每篇文献为了所有目的通过引用以其整体并入本文。
WTA的化学结构在生物体中变化。在金黄色葡萄球菌中，WTA经由包含N-乙酰葡糖胺(GlcNAc)-1-P和N-乙酰甘露糖胺(ManNAc)的二糖共价连接至N-乙酰基胞壁酸(MurNAc)的6-OH，随后连接至约两个或三个甘油-磷酸酯单元。然后，实际的WTA聚合物包含约11个-40个核糖醇-磷酸(Rbo-P)重复单元。WTA的逐步合成首先由被称为TagO的酶启动，而缺乏TagO基因(通过缺失该基因)的金黄色葡萄球菌菌株不产生任何WTA。重复单元可以经由α-(alpha)或β-(beta)糖苷键进一步用D-丙氨酸(D-Ala)在C2-OH位处和/或用N-乙酰葡糖胺(GlcNAc)在C4-OH位处定制。取决于金黄色葡萄球菌菌株或细菌的生长期，糖苷键可以是α-糖苷键、β-糖苷键或两种异头物的混合物。这些GlcNAc糖修饰由两种特定的来源于金黄色葡萄球菌的糖基转移酶(Gtf)定制：TarM Gtf介导α-糖苷键，而TarS Gtf介导β-(beta)糖苷键。
适合于本公开内容的ADC的抗WTA抗体可以是抗WTAα抗体或抗WTAβ抗体。抗WTA抗体可以从金黄色葡萄球菌感染的患者的B细胞中克隆。在一种实施方案中，抗WTA抗体是人单克隆抗体。本公开内容的ADC包括嵌合抗体和人源化抗体，其包含本文描述的抗WTA抗体的CDR。
本公开内容的抗体-药物缀合物可以包含本文描述的任一种抗WTA抗体或其抗原结合片段。在一些实施方案中，抗WTA抗体或其抗原结合片段与金黄色葡萄球菌结合。
在一些实施方案中，本公开内容的抗体-药物缀合物包含抗WTAα单克隆抗体或其抗原结合片段。作为非限制性实例，抗WTAα抗体或其抗原结合片段包含：(a)重链可变区(HCVR)的互补决定区(CDR)，其包括如表2A中列出的氨基酸序列；以及(b)轻链可变区(LCVR)的CDR，其包括如表2A中列出的氨基酸序列。
表2A：示例性抗WTAα抗体的CDR序列
Figure BDA0003124860200001961
在一种实施方案中，抗WTAα抗体或其抗原结合片段包含：
(i)HCDR1结构域，其包括选自由SEQ ID NO:470、476、482和488组成的组的氨基酸序列；
(ii)HCDR2结构域，其包括选自由SEQ ID NO:471、477、483和489组成的组的氨基酸序列；
(iii)HCDR3结构域，其包括选自由SEQ ID NO:472、478、484和490组成的组的氨基酸序列；
(iv)LCDR1结构域，其包括选自由SEQ ID NO:467、473、479和485组成的组的氨基酸序列；
(v)LCDR2结构域，其包括选自由SEQ ID NO:468、474、480和486组成的组的氨基酸序列；以及
(vi)LCDR3结构域，其包括选自由SEQ ID NO:469、475、481和487组成的组的氨基酸序列。
在一些实施方案中，抗WTAα抗体或其抗原结合片段包含重链可变区(HCVR)，该重链可变区(HCVR)包括选自SEQ ID NO:492、SEQ ID NO:494、SEQ ID NO:496和SEQ ID NO:498的氨基酸序列，或与其具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％序列同一性的其基本上相似的序列。抗体还可以包含轻链可变区(LCVR)，该轻链可变区(LCVR)包括选自SEQID NO:491、SEQ ID NO:493、SEQ ID NO:495和SEQ ID NO:497的氨基酸序列，或与其具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％序列同一性的其基本上相似的序列。
在一种实施方案中，抗WTAα抗体或其抗原结合片段包含具有SEQ ID NO:491的氨基酸序列或与其具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％序列同一性的其基本上相似的序列的LCVR；以及具有SEQ ID NO:492的氨基酸序列或与其具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％序列同一性的其基本上相似的序列的HCVR。
在另一种实施方案中，抗WTAα抗体或其抗原结合片段包含具有SEQ ID NO:493的氨基酸序列或与其具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％序列同一性的其基本上相似的序列的LCVR；以及具有SEQ ID NO:494的氨基酸序列或与其具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％序列同一性的其基本上相似的序列的HCVR。
在另一种实施方案中，抗WTAα抗体或其抗原结合片段包含具有SEQ ID NO:495的氨基酸序列或与其具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％序列同一性的其基本上相似的序列的LCVR；以及具有SEQ ID NO:496的氨基酸序列或与其具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％序列同一性的其基本上相似的序列的HCVR。
在另一种实施方案中，抗WTAα抗体或其抗原结合片段包含具有SEQ ID NO:497的氨基酸序列或与其具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％序列同一性的其基本上相似的序列的LCVR；以及具有SEQ ID NO:498的氨基酸序列或与其具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％序列同一性的其基本上相似的序列的HCVR。
在一些实施方案中，本公开内容的抗体-药物缀合物包含抗WTAβ单克隆抗体或其抗原结合片段。本发明的示例性抗WTAβ抗体在本文的表2B中列出。表2B列出了示例性抗WTAβ抗体的重链互补决定区(HCDR1、HCDR2和HCDR3)和轻链互补决定区(LCDR1、LCDR2和LCDR3)的氨基酸序列标识符。
表2B：示例性抗WTAβ抗体的CDR序列
Figure BDA0003124860200001981
在一种实施方案中，抗WTAβ抗体或其抗原结合片段包含：
(i)HCDR1结构域，其包括选自由SEQ ID NO:502、508、514、520、526、532、538、544、550、556、562、568和574组成的组的氨基酸序列；
(ii)HCDR2结构域，其包括选自由SEQ ID NO:503、509、515、521、527、533、539、545、551、557、563、569和575组成的组的氨基酸序列；
(iii)HCDR3结构域，其包括选自由SEQ ID NO:504、510、516、522、528、534、540、546、552、558、564、570、576和584组成的组的氨基酸序列；
(iv)LCDR1结构域，其包括选自由SEQ ID NO:499、505、511、517、523、529、535、541、547、553、559、565和571组成的组的氨基酸序列；
(v)LCDR2结构域，其包括选自由SEQ ID NO:500、506、512、518、524、530、536、542、548、554、560、566和572组成的组的氨基酸序列；以及
(vi)LCDR3结构域，其包括选自由SEQ ID NO:501、507、513、519、525、531、537、543、549、555、561、567和573组成的组的氨基酸序列。
本发明还提供了抗WTAβ抗体或其抗原结合片段，其包含重链CDR1(HCDR1)，该重链CDR1包含选自表2B中列出的任何HCDR1氨基酸序列或具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％序列同一性的其基本上相似的序列的氨基酸序列。
本发明还提供了抗WTAβ抗体或其抗原结合片段，其包含重链CDR2(HCDR2)，该重链CDR2包含选自表2B中列出的任何HCDR2氨基酸序列或具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％序列同一性的其基本上相似的序列的氨基酸序列。
本发明还提供了抗WTAβ抗体或其抗原结合片段，其包含重链CDR3(HCDR3)，该重链CDR3包含选自表2B中列出的任何HCDR3氨基酸序列或具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％序列同一性的其基本上相似的序列的氨基酸序列。
本发明还提供了抗WTAβ抗体或其抗原结合片段，其包含轻链CDR1(LCDR1)，该轻链CDR1包含选自表2B中列出的任何LCDR1氨基酸序列或具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％序列同一性的其基本上相似的序列的氨基酸序列。
本发明还提供了抗WTAβ抗体或其抗原结合片段，其包含轻链CDR2(LCDR2)，该轻链CDR2包含选自表2B中列出的任何LCDR2氨基酸序列或具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％序列同一性的其基本上相似的序列的氨基酸序列。
本发明还提供了抗WTAβ抗体或其抗原结合片段，其包含轻链CDR3(LCDR3)，该轻链CDR3包含选自表2B中列出的任何LCDR3氨基酸序列或具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％序列同一性的其基本上相似的序列的氨基酸序列。
本发明还提供了抗WTAβ抗体或其抗原结合片段，该抗WTAβ抗体或其抗原结合片段包含在表2B中列出的任何示例性抗WTAβ抗体中包含的一组六个CDR(即，HCDR1-HCDR2-HCDR3-LCDR1-LCDR2-LCDR3)。在某些实施方案中，HCDR1-HCDR2-HCDR3-LCDR1-LCDR2-LCDR3氨基酸序列组选自由SEQ ID NO:502-503-504-499-500-501、508-509-510-505-506-507、514-515-516-511-512-513、520-521-522-517-518-519、526-527-528-523-524-525、532-533-534-529-530-531、538-539-540-535-536-537、544-545-546-541-542-543、550-551-552-547-548-549、556-557-558-553-554-555、562-563-564-559-560-561、568-569-570-565-566-567、574-575-576-571-572-573和568-569-584-565-566-567组成的组。
在一种实施方案中，抗WTAβ抗体或其抗原结合片段来源于在美国专利申请公布20140356375(其通过引用以其整体并入本文)中描述的抗体4497。在一些实施方案中，来源于抗体4497的抗WTAβ抗体或其抗原结合片段还包含轻链中的V205C突变。
在一种实施方案中，抗WTAβ抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO:568-569-570-565-566-567的HCDR1-HCDR2-HCDR3-LCDR1-LCDR2-LCDR3。
在一些实施方案中，抗WTAβ抗体或其抗原结合片段包含在重链可变区(HCVR)氨基酸序列SEQ ID NO:586中的三个重链互补决定区(HCDR1、HCDR2和HCDR3)；以及在轻链可变区(LCVR)氨基酸序列SEQ ID NO:585中的三个轻链互补决定区(LCDR1、LCDR2和LCDR3)。
在一些实施方案中，抗WTAβ抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO:586的HCVR氨基酸序列和SEQ ID NO:585的LCVR氨基酸序列。
在一些实施方案中，抗WTAβ抗体包含SEQ ID NO:602的重链氨基酸序列和SEQ IDNO:587或SEQ ID NO:589的轻链氨基酸序列。在一些实施方案中，抗WTAβ抗体或其抗原结合片段包含轻链中的V205C突变。
在一些实施方案中，抗WTAβ抗体或其抗原结合片段包含重链可变区(HCVR)，该重链可变区(HCVR)包含对应于选自SEQ ID NO:580、621-628和591-594的全长重链序列的Kabat 1-113位的氨基酸序列，或与其具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％序列同一性的其基本上相似的序列。抗体还可以包含轻链可变区(LCVR)，该轻链可变区(LCVR)包含对应于选自SEQ ID NO:579、610-620和587的全长轻链序列的Kabat 1-107位的氨基酸序列，或与其具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％序列同一性的其基本上相似的序列。全长重链和全长轻链的Kabat位置的参考可以例如在美国专利申请公布第20180021450号的图15A-1、图15A-2和图15A-3以及图15B-1、图15-B 2、图15-B 3、图15-B4、图15-B 5和图15-B 6中找到，该美国专利申请公布为了所有目的通过引用以其整体并入本文。
在一种实施方案中，抗WTAβ抗体或其抗原结合片段包含含有SEQ ID NO:577的氨基酸序列或与其具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％序列同一性的其基本上相似的序列的LCVR；以及含有SEQ ID NO:578的氨基酸序列(其中X是Q或E，并且X1是M、I或V)或与其具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％序列同一性的其基本上相似的序列的HCVR。
在一种实施方案中，抗WTAβ抗体或其抗原结合片段包含含有SEQ ID NO:579的氨基酸序列或与其具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％序列同一性的其基本上相似的序列的轻链；以及含有SEQ ID NO:580的氨基酸序列或与其具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％序列同一性的其基本上相似的序列的重链。
在具体实施方案中，抗WTAβ抗体或其抗原结合片段包含含有SEQ ID NO:577的氨基酸序列的LCVR和含有SEQ ID NO:578的氨基酸序列的HCVR。在又更具体实施方案中，抗WTAβ抗体或其抗原结合片段包含含有SEQ ID NO:579的氨基酸序列的轻链和含有SEQ IDNO:580的氨基酸序列的重链。
在一些实施方案中，适合于本公开内容的ADC的抗WTAβ抗体或其抗原结合片段可以在抗体轻链和/或重链中包含一个或更多个工程化半胱氨酸。
在一些实施方案中，抗WTAβ抗体或其抗原结合片段的轻链包含工程化半胱氨酸。在一种实施方案中，抗WTAβ抗体或其抗原结合片段包含含有SEQ ID NO:581的氨基酸序列的轻链；和含有SEQ ID NO:582的氨基酸序列的重链，其中X是M、I或V。在一种实施方案中，抗WTAβ抗体或其抗原结合片段包含含有SEQ ID NO:581的氨基酸序列的轻链；和含有SEQID NO:580的氨基酸序列的重链。
在一些实施方案中，抗WTAβ抗体或其抗原结合片段的重链包含工程化半胱氨酸。在一种实施方案中，抗WTAβ抗体或其抗原结合片段包含含有SEQ ID NO:579的氨基酸序列的轻链；和含有SEQ ID NO:583的氨基酸序列的重链，其中X是M、I或V。
在一些实施方案中，抗WTAβ抗体或其抗原结合片段的轻链和重链两者均包含工程化半胱氨酸。在一种实施方案中，抗WTAβ抗体或其抗原结合片段包含含有工程化半胱氨酸且含有SEQ ID NO:581的序列的轻链；含有工程化半胱氨酸且含有SEQ ID NO:583的氨基酸序列的重链，其中X是M、I或V。
在一些实施方案中，抗WTAβ抗体或其抗原结合片段包含具有SEQ ID NO:585的氨基酸序列或与其具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％序列同一性的其基本上相似的序列的LCVR；以及具有SEQ ID NO:608的氨基酸序列或与其具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％序列同一性的其基本上相似的序列的HCVR。在一种实施方案中，抗WTAβ抗体或其抗原结合片段包含具有SEQ ID NO:585的氨基酸序列的LCVR和具有SEQ ID NO:608的氨基酸序列的HCVR。
在一种实施方案中，抗WTAβ抗体或其抗原结合片段包含具有SEQ ID NO:587的氨基酸序列的轻链；和具有SEQ ID NO:590的氨基酸序列的重链。在一种实施方案中，抗WTAβ抗体或其抗原结合片段包含具有SEQ ID NO:589的氨基酸序列的轻链；和具有SEQ ID NO:609的氨基酸序列的重链。在一种实施方案中，抗WTAβ抗体或其抗原结合片段包含具有SEQID NO:589的氨基酸序列的轻链；和具有SEQ ID NO:590的氨基酸序列的重链。
在一些实施方案中，抗WTAβ抗体包含具有SEQ ID NO:585的氨基酸序列的LCVR以及具有SEQ ID NO:586或SEQ ID NO:608的氨基酸序列的HCVR。
在一些实施方案中，抗WTAβ抗体包含具有SEQ ID NO:577的氨基酸序列的LCVR和具有SEQ ID NO:578的氨基酸序列的HCVR。
在本公开内容的ADC的一些实施方案中，抗WTA抗体与本文公开的任一种抗WTA抗体结合相同的表位。
适合于本发明的ADC的抗WTA抗体或其抗原结合片段可以在一个或更多个残基处被改变，例如以改善pK、稳定性、表达、可制造性，同时与野生型、未修饰的抗体相比，保持与抗原基本上大约相同或改善的结合亲和力。本发明包括本文的抗WTA抗体的具有保守氨基酸取代的变体。
在一些实施方案中，本公开内容的ADC可以包含缺乏Fc区的抗WTA抗原结合片段。在一些实施方案中，抗原结合片段是F(ab)或F(ab′)2。在一些实施方案中，抗原结合片段还包含重链恒定区和/或轻链恒定区，其中重链恒定区和/或轻链恒定区包含一个或更多个被半胱氨酸残基取代的氨基酸。在一些实施方案中，抗原结合片段包含含有氨基酸取代A118C和/或S400C的重链恒定区，和/或含有氨基酸取代V205C的轻链恒定区，其中编号系统根据EU编号。
在某些实施方案中，可能合意的是产生半胱氨酸工程化的抗WTA抗体，例如，“thioMAb”，其中抗体的一个或更多个残基被半胱氨酸残基取代。任何形式的抗体可以被如此工程化，即突变。例如，亲本Fab抗体片段可以被工程化以形成半胱氨酸工程化的Fab，在本文中被称为“ThioFab”。类似地，亲本单克隆抗体可以被工程化以形成“ThioMab”。应该注意，单位点突变在ThioFab中产生单个工程化的半胱氨酸残基，而由于IgG抗体的二聚体性质，单位点突变在ThioMab中产生两个工程化的半胱氨酸残基。在特定实施方案中，被取代的残基出现在抗体的可及位点。通过用半胱氨酸取代那些残基，反应性硫醇基团因此位于抗体的可及位点，并且可以用于将抗体缀合至其他部分，诸如抗生素部分(例如，利福霉素类似物)或连接基-抗生素部分(例如，连接基-利福霉素类似物有效载荷)，以产生抗体-药物缀合物，如本文进一步描述的。在某些实施方案中，以下残基中的任一个或更多个可以被半胱氨酸取代，包括轻链的V205(Kabat编号)；重链的A118(EU编号)；和重链Fc区的5400(EU编号)。示出了抗WTA抗体的非限制性的示例性半胱氨酸工程化的重链A118C(SEQ ID NO:605)和轻链V205C(SEQ ID NO:607)突变体。半胱氨酸工程化的抗WTA抗体可以如例如在Junutula,等人,2008b Nature Biotech.,26(8):925-932；美国专利第7,521,541号；US-2011/0301334；Lehar等人,Nature 2015 527,323–328中描述的产生，这些文献中的每一篇均通过引用以其整体并入本文。
工程化的半胱氨酸硫醇可以与本发明的连接基试剂或连接基-药物中间体反应，所述连接基试剂或连接基-药物中间体具有硫醇反应性的亲电基团，诸如马来酰亚胺或α-卤代酰胺，以与半胱氨酸工程化的抗体(THIOMABTM或thioMabs)和抗生素部分(例如，利福霉素类似物)形成ADC。抗生素部分的位置因此可以被设计、控制和知晓。抗生素负载量可以被控制，因为工程化的半胱氨酸硫醇基团通常以高产率与硫醇反应性连接基试剂或连接基抗生素中间体反应。通过在重链或轻链上的单个位点处取代将抗WTA抗体工程化以引入半胱氨酸氨基酸给出了在对称的四聚体抗体上的两个新的半胱氨酸。接近2的抗生素负载量可以被实现并且接近ADC的同质性。
适合于ADC的抗蛋白A抗体
根据某些实施方案，本公开内容的抗体-药物缀合物可以包含抗蛋白A抗体或其抗原结合片段。
蛋白A是一种42-kDa蛋白，其以分泌形式和膜缔合形式存在，具有两种不同的Ig结合活性：每个结构域可以结合Fcγ(参与效应物功能的IgG的恒定区)和Fab(负责抗原识别的Ig片段)。蛋白A通过其羧基末端共价锚定在葡萄球菌细胞壁中。该蛋白包含通过Xr区连接到细胞表面的五个重复结构域(E、D、A、B、C)，并且每个结构域可以以高亲和力结合免疫球蛋白G的Fc区和VH3亚类的免疫球蛋白的Fab区。与IgG Fc的相互作用阻碍效应物功能。此外，通过Fc区与蛋白A结合的抗体不能通过经典途径刺激补体固定。
适合于本公开内容的ADC的抗蛋白A抗体的非限制性实例在本文的表3A和表3B中列出。表3A列出了示例性抗蛋白A抗体的重链可变区(HCVR)、轻链可变区(LCVR)、重链互补决定区(HCDR1、HCDR2和HCDR3)和轻链互补决定区(LCDR1、LCDR2和LCDR3)的氨基酸序列标识符，本公开内容的抗体可以来源于抗蛋白A抗体。表3B列出了示例性抗蛋白A抗体的HCVR、LCVR、HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3的核酸序列标识符。
在一些实施方案中，适合于本公开内容的ADC的抗蛋白A抗体具有减弱的Fc结合。此类抗体具有如表3A所示的HCVR氨基酸序列和LCVR氨基酸序列，并且还可以包含SEQ IDNO:648的IgG1重链氨基酸序列。该IgG1序列包含hIgG1 Fc中的H435R和Y436F突变(EU指数编号；相当于SEQ ID NO:648的H318R和Y319F)，其在本文中以“*/*”或“**”指明。
表3A：示例性抗蛋白A抗体的氨基酸序列标识符
Figure BDA0003124860200002051
表3B：示例性抗蛋白A抗体的核酸序列标识符
Figure BDA0003124860200002052
在一种实施方案中，抗蛋白A抗体或其抗原结合片段包含：
(i)HCDR1结构域，其包括选自由SEQ ID NO:632、652和672组成的组的氨基酸序列；
(ii)HCDR2结构域，其包括选自由SEQ ID NO:634、654和674组成的组的氨基酸序列；
(iii)HCDR3结构域，其包括选自由SEQ ID NO:636、656和676组成的组的氨基酸序列；
(iv)LCDR1结构域，其包括选自由SEQ ID NO:640、660和680组成的组的氨基酸序列；
(v)LCDR2结构域，其包括选自由SEQ ID NO:642和662组成的组的氨基酸序列；以及
(vi)LCDR3结构域，其包括选自由SEQ ID NO:644、664和683组成的组的氨基酸序列。
在一些实施方案中，本公开内容的抗体-药物缀合物包含特异性地结合蛋白A的抗体或其抗原结合片段，该抗体或其抗原结合片段包含含有选自由SEQ ID NO:630、650和670组成的组的氨基酸序列或与其具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％序列同一性的其基本上相似的序列的HCVR。
在一些实施方案中，本公开内容的抗体-药物缀合物包含特异性地结合蛋白A的抗体或其抗原结合片段，该抗体或其抗原结合片段包含含有选自由SEQ ID NO:638、658和678组成的组的氨基酸序列或与其具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％序列同一性的其基本上相似的序列的LCVR。
在一些实施方案中，本公开内容的抗体-药物缀合物包含特异性地结合蛋白A的抗体或其抗原结合片段，该抗体或其抗原结合片段包含含有表3A中列出的抗蛋白A HCVR氨基酸序列和表3A中列出的抗蛋白A LCVR氨基酸序列的HCVR和LCVR氨基酸序列对(HCVR/LCVR)。根据某些实施方案，本公开内容的抗体-药物缀合物包含特异性地结合蛋白A的抗体或其抗原结合片段，该抗体或其抗原结合片段包含在表3A中列出的示例性抗蛋白A抗体中包含的HCVR/LCVR氨基酸序列对。在某些实施方案中，HCVR/LCVR氨基酸序列对选自由SEQID NO:630/638、650/658和670/678组成的组。
在一些实施方案中，本公开内容的抗体-药物缀合物包含特异性地结合蛋白A的抗体或其抗原结合片段，该抗体或其抗原结合片段包含在表3A中列出的任何示例性抗蛋白A抗体中包含的一组六个CDR(即，HCDR1-HCDR2-HCDR3-LCDR1-LCDR2-LCDR3)。在某些实施方案中，HCDR1-HCDR2-HCDR3-LCDR1-LCDR2-LCDR3氨基酸序列组包括SEQ ID NO:632-634-636-640-642-644、652-654-656-660-662-664或672-674-676-680-662-683。
在相关实施方案中，本公开内容的抗体-药物缀合物包含特异性地结合蛋白A的抗体或其抗原结合片段，该抗体或其抗原结合片段包含在如由表3A中列出的示例性抗蛋白A抗体定义的HCVR/LCVR氨基酸序列对中包含的一组六个CDR(即，HCDR1-HCDR2-HCDR3-LCDR1-LCDR2-LCDR3)。例如，本发明包括特异性地结合蛋白A的抗体或其抗原结合片段，该抗体或其抗原结合片段包含在选自由SEQ ID NO:630/638、650/658和670/678组成的组的HCVR/LCVR氨基酸序列对中包含的HCDR1-HCDR2-HCDR3-LCDR1-LCDR2-LCDR3氨基酸序列组。
在一些实施方案中，抗蛋白A抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO:666的重链氨基酸序列，或与其具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％序列同一性的其基本上相似的序列。在一些方面中，抗蛋白A抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO:668的轻链氨基酸序列，或与其具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％序列同一性的其基本上相似的序列。
在一些实施方案中，抗蛋白A抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO:685的重链氨基酸序列，或与其具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％序列同一性的其基本上相似的序列。在一些实施方案中，抗蛋白A抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO:687的轻链氨基酸序列，或与其具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％序列同一性的其基本上相似的序列。
在一种实施方案中，抗蛋白A抗体或其抗原结合片段包含在重链可变区(HCVR)氨基酸序列SEQ ID NO:630中的三个重链互补决定区(HCDR1、HCDR2和HCDR3)；以及在轻链可变区(LCVR)氨基酸序列SEQ ID NO:638中的三个轻链互补决定区(LCDR1、LCDR2和LCDR3)。在一种实施方案中，抗蛋白A抗体或其抗原结合片段包含含有SEQ ID NO:632-634-636-640-642-644的一组六个CDR(HCDR1-HCDR2-HCDR3-LCDR1-LCDR2-LCDR3)。
在一种实施方案中，抗蛋白A抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO:630的HCVR氨基酸序列；和SEQ ID NO:638的LCVR氨基酸序列。
在一种实施方案中，抗蛋白A抗体包含SEQ ID NO:666的重链氨基酸序列和SEQ IDNO:668的轻链氨基酸序列。在一种实施方案中，抗蛋白A抗体包含在103位的轻链突变(C103S)。在一种实施方案中，抗蛋白A抗体或其抗原结合片段在轻链的103位缀合至本公开内容的化合物。
用于鉴定HCVR和LCVR氨基酸序列中的CDR的方法和技术是本领域熟知的，并且可以用于鉴定本文公开的特定HCVR和/或LCVR氨基酸序列中的CDR。可以用于鉴定CDR的边界的示例性惯例包括例如Kabat定义、Chothia定义和AbM定义。一般来说，Kabat定义是基于序列可变性，Chothia定义是基于结构环区域的位置，并且AbM定义是Kabat和Chothia方法之间的折衷。参见，例如Kabat,"Sequences of Proteins of Immunological Interest,"National Institutes of Health,Bethesda,Md.(1991)；Al-Lazikani等人,J.Mol.Biol.273:927-948(1997)；和Martin等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 86:9268-9272(1989)。公共数据库也可用于鉴定抗体中的CDR序列。
还提供了编码适合于本公开内容的ADC的抗蛋白A抗体或其部分的核酸分子。例如，表3A中列出的抗蛋白A HCVR氨基酸序列和抗蛋白ALCVR氨基酸序列可以由表3B中列出的核酸分子编码。在某些实施方案中，核酸分子包含选自表3B中列出的抗蛋白A HCVR核酸序列和抗蛋白A LCVR核酸序列，或与其具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％序列同一性的其基本上相似的序列的多核苷酸序列。
例如，表3A中列出的抗蛋白A CDR氨基酸序列可以由表3B中列出的核酸分子编码。在某些实施方案中，核酸分子包含选自表3B中列出的任何抗蛋白A CDR核酸序列，或与其具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％序列同一性的其基本上相似的序列的多核苷酸序列。
在一些实施方案中，编码抗蛋白A抗体或其抗原结合片段的核酸分子可以包括编码HCVR的核酸分子，其中HCVR包含一组三个CDR(即，HCDR1-HCDR2-HCDR3)，其中HCDR1-HCDR2-HCDR3氨基酸序列组如由表3A中列出的示例性抗蛋白A抗体定义的。
编码抗蛋白A抗体或其抗原结合片段的核酸分子可以包括编码LCVR的核酸分子，其中LCVR包含一组三个CDR(即，LCDR1-LCDR2-LCDR3)，其中LCDR1-LCDR2-LCDR3氨基酸序列组如由表3A中列出的示例性抗蛋白A抗体定义的。
还提供了能够表达包含抗蛋白A抗体的重链可变区或轻链可变区的多肽的重组表达载体。例如，本公开内容包括重组表达载体，其包含上文提及的任何核酸分子，即，编码如表3A中列出的任何HCVR、LCVR和/或CDR序列的核酸分子。本公开内容的范围内还包括已经引入此类载体的宿主细胞，以及通过在允许产生抗体或抗体片段的条件下培养宿主细胞并回收如此产生的抗体和抗体片段来产生抗体或其部分的方法。
适合于本公开内容的ADC的抗蛋白A抗体可以具有修饰的糖基化模式。在一些实施方案中，修饰以去除不期望的糖基化位点可以是有用的，或者去除缺乏存在于寡糖链上的岩藻糖部分的抗体，例如，以增加抗体依赖性细胞毒性(ADCC)功能(参见Shield等人.(2002)JBC 277:26733)。在其他应用中，可以进行半乳糖基化的修饰，以修饰补体依赖性细胞毒性(CDC)。
如本文提供的特异性地结合蛋白A的单克隆抗体及其抗原结合片段可以具有与蛋白A(和/或SpsQ或其他同源蛋白)的减弱的Fc结合。在本公开内容中，其以“*/*”或“**”指明，并且是指包含hIgG1 Fc中根据EU指数编号的H435R和Y436F突变的抗体或其抗原结合片段。H435R和Y436F突变相当于SEQ ID NO:648(一个hIgG1重链)的H318R和Y319F。虽然*/*突变位置是指根据EU编号的H435R和Y436F，但是*/*突变可以在给定抗体(或其抗原结合片段)的实际重链中的不同位置发现，这取决于可变结构域序列长度。
除了上文描述的*/*变体之外，本文还预期某些另外的Fc变体。根据某些实施方案，针对蛋白A的指定抗体将在抗体的Fc区被修饰，以减弱蛋白A或适于相应动物物种的同源蛋白的结合。
根据某些实施方案，适合于本公开内容的ADC的针对蛋白A的抗体包含含有一个或更多个突变的Fc结构域，所述突变例如在酸性pH比在中性pH增强或减少抗体与FcRn受体的结合。例如，本发明包括针对蛋白A的抗体，所述抗体包含在Fc结构域的CH2或CH3区中的突变，其中突变增加在酸性环境中(例如，在pH范围为约5.5至约6.0的内体中)Fc结构域与FcRn的亲和力。当施用至动物时，这样的突变可以导致抗体的血清半衰期增加。这样的Fc修饰的非限制性实例包括，例如，在250位(例如，E或Q)；250位和428位(例如，L或F)；252位(例如，L/Y/F/W或T)、254位(例如，S或T)和256位(例如，S/R/Q/E/D或T)的修饰；或在428位和/或433位(例如，H/L/R/S/P/Q或K)和/或434位(例如，H/F或Y)的修饰；或在250位和/或428位的修饰；或在307位或308位(例如，308F、V308F)和434位的修饰。在一种实施方案中，修饰包括428L(例如，M428L)和434S(例如，N434S)修饰；428L、259I(例如，V259I)和308F(例如，V308F)修饰；433K(例如，H433K)和434(例如，434Y)修饰；252、254和256(例如，252Y、254T和256E)修饰；250Q和428L修饰(例如，T250Q和M428L)；以及307和/或308修饰(例如，308F或308P)。
例如，针对蛋白A的抗体包含含有一对或更多对突变或突变组的Fc结构域，所述突变选自由以下组成的组：250Q和248L(例如，T250Q和M248L)；252Y、254T和256E(例如，M252Y、S254T和T256E)；428L和434S(例如，M428L和N434S)；以及433K和434F(例如，H433K和N434F)。前述Fc结构域突变和在本文公开的抗体可变结构域内的其他突变的所有可能组合预期都在本公开内容的范围内。
适合于本公开内容的ADC的针对蛋白A的抗体可以包含具有改变的效应物功能(例如，增加或减少的效应物功能)的修饰的Fc结构域。如本文使用的，“具有改变的效应物功能的修饰的Fc结构域”意指相对于野生型、天然存在的Fc结构域，免疫球蛋白的已被修饰、突变、截短等的任何Fc部分，使得包含修饰的Fc的分子相对于包含野生型、天然存在的Fc部分的版本的比较物分子，呈现出选自由细胞杀伤(例如，ADCC和/或CDC)、补体活化、吞噬作用和调理作用组成的组的至少一种效应的严重性或程度的增加或减少。在某些实施方案中，“具有改变的效应物功能的修饰的Fc结构域”是与Fc受体(例如，FcγR)具有减少或减弱的结合的Fc结构域。示例性修饰的Fc结构域在US 2006/0024298中被描述，该专利通过引用以其整体并入本文。在一些实施方案中，修饰是G236A。
在某些实施方案中，修饰的Fc结构域是在铰链区中包含取代的变体IgG1 Fc或变体IgG4 Fc。例如，用于本发明的上下文中的修饰的Fc可以包括变体IgG1 Fc，其中IgG1 Fc铰链区的至少一个氨基酸被来自IgG2 Fc铰链区的相应氨基酸取代。可选择地，用于本发明的上下文中的修饰的Fc可以包括变体IgG4 Fc，其中IgG4 Fc铰链区的至少一个氨基酸被来自IgG2Fc铰链区的相应氨基酸取代。可以用于本发明的上下文中的非限制性的示例性修饰的Fc区在美国专利申请公布第2014/0243504号中列出，该美国专利申请公布的公开内容在此通过引用以其整体并入，以及其中列出的修饰的Fc区的任何功能等效变体。
可以用于本发明的上下文中的其他修饰的Fc结构域和Fc修饰包括如在US 2014/0171623；US 8,697,396；US 2014/0134162；WO 2014/043361中列出的任何修饰，这些文献的公开内容在此通过引用以其整体并入本文。构建包含如本文描述的修饰的Fc结构域的抗体或其他抗原结合融合蛋白的方法是本领域已知的。
抗体-药物缀合物(ADC)
本文提供了抗体-药物缀合物(ADC)，其包含缀合至药物或治疗剂的抗体或其抗原结合片段。在一些实施方案中，治疗剂可以是利福霉素类似物。本文还提供了反应性连接基-有效载荷，例如，可用于制备ADC的、如本文提供的具有根据式(A)、式(B)、式(I)、式(I’)、式(II)、式(II’)、式(III)、式(III’)、式(IV)、式(IV’)、式(V)、式(V’)的任何实施方案的结构的化合物。本文还提供了可用于制备ADC的修饰的抗体和修饰的抗原结合片段。
在一些实施方案中，适合于制备本公开内容的ADC的抗体或抗体的抗原结合片段结合感染性疾病相关靶。在一些实施方案中，抗体或抗体的抗原结合片段结合MSR1。在一些实施方案中，抗体或抗体的抗原结合片段结合WTA。在一些实施方案中，抗体或抗体的抗原结合片段结合蛋白A。
ADC通常具有式(XV)：BA–[L–PA]n。在该式中，BA是结合剂，例如抗体或其抗原结合片段。L是连接基，在下文详细描述。PA是有效载荷，例如利福霉素类似物，如本文详细描述的。在该式中，n是从1至30，例如从1至4，例如2或4的整数。每个L–PA共价结合至PA的官能团。在特定实施方案中，每个L–PA共价结合至赖氨酸侧链、半胱氨酸侧链、谷氨酰胺侧链或BA的氨基末端。
在一些实施方案中，L–PA经由反应性基团或RG共价结合至例如抗体或其抗原结合片段的结合剂BA的侧链。在缀合至结合剂后，反应性基团成为具有式(XV)：BA–[L–PA]n的ADC的连接基L的一部分。可用于本公开内容的说明性反应性基团RG包括但不限于包括马来酰亚胺、琥珀酰亚胺、N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)、末端伯胺、卤代乙酰基基团、异硫氰酸酯、硫醇、醇、酮、醛、酸、酯、肼和苯胺的那些基团。RG还包括具有以下结构的部分：
Figure BDA0003124860200002121
其中X是-O-或-NH-并且LG是离去基团，例如Br。
在一些实施方案中，反应性连接基是
Figure BDA0003124860200002131
其中b是从2至8的整数。
在一些实施方案中，反应性连接基是
Figure BDA0003124860200002132
其中b是从2至8的整数。
在一些实施方案中，反应性连接基是
Figure BDA0003124860200002133
其中b是从2至8的整数，RN是氢原子或烷基基团，并且RM是烷基基团。
在一些实施方案中，反应性连接基是
Figure BDA0003124860200002134
其中b是从2至8的整数。
在一些实施方案中，反应性连接基是
Figure BDA0003124860200002141
其中b是从2至8的整数。
在一些实施方案中，反应性连接基是
Figure BDA0003124860200002142
其中b是从2至8的整数，RN是氢原子或烷基基团，并且RM是烷基基团。
用于与抗体或抗原结合片段的残基缀合的技术和连接基是本领域已知的。可以用于本方面的上下文中的示例性氨基酸附件，例如赖氨酸(参见，例如US 5,208,020；US2010/0129314；Hollander等人,Bioconjugate Chem.,2008,19:358-361；WO 2005/089808；US 5,714,586；US 2013/0101546；和US 2012/0585592)、半胱氨酸(参见，例如US 2007/0258987；WO2013/055993；WO 2013/055990；WO 2013/053873；WO 2013/053872；WO2011/130598；US 2013/0101546和US 7,750,116)、硒代半胱氨酸(参见，例如WO 2008/122039；和Hofer等人,Proc.Natl.Acad.Sci.,USA,2008,105:12451-12456)、甲酰甘氨酸(参见，例如Carrico等人,Nat.Chem.Biol.,2007,3:321-322；Agarwal等人,Proc.Natl.Acad.Sci.,USA,2013,110:46-51,和Rabuka等人,Nat.Protocols,2012,10:1052-1067)、非天然氨基酸(参见，例如WO 2013/068874和WO 2012/166559)以及酸性氨基酸(参见，例如WO 2012/05982)。赖氨酸缀合也可以通过NHS(N-羟基琥珀酰亚胺)进行。连接基也可以通过在硫醇之间形成碳桥来缀合至半胱氨酸残基，包括断裂的链间二硫键的半胱氨酸残基(参见，例如US9,951,141和US 9,950,076)。连接基也可以经由附接至碳水化合物(参见，例如US 2008/0305497、WO2014/065661和Ryan等人,Food&Agriculture Immunol.,2001,13:127-130)和二硫化物连接基(参见，例如WO 2013/085925、WO 2010/010324、WO2011/018611和Shaunak等人,Nat.Chem.Biol.,2006,2:312-313)来缀合至抗原结合蛋白。位点特异性缀合技术也可以用于直接缀合至抗体或抗原结合蛋白的特定残基(参见，例如Schumacher等人.J ClinImmunol(2016)36(Suppl 1):100)。位点特异性缀合技术包括但不限于经由转谷氨酰胺酶的谷氨酰胺缀合(参见，例如Schibli,Angew Chemie Inter Ed.2010,49,9995)。
连接基可以经由基于转谷氨酰胺酶的化学-酶缀合来缀合至一个或更多个谷氨酰胺残基(参见，例如Dennler等人,Bioconjugate Chem.2014,25,569-578和WO 2017/147542)。例如，在存在转谷氨酰胺酶的情况下，抗体的一个或更多个谷氨酰胺残基可以偶联至伯胺化合物。简言之，在一些实施方案中，在存在转谷氨酰胺酶的情况下，将具有谷氨酰胺残基(例如，Gln295残基)的抗体用伯胺化合物处理，在下文更详细地描述。伯胺化合物包括有效载荷或连接基-有效载荷，它们经由转谷氨酰胺酶介导的偶联直接提供抗体药物缀合物。伯胺化合物还包括用反应性基团官能化的连接基和间隔基，这些反应性基团随后可以与另外的化合物反应，从而合成抗体药物缀合物。包含谷氨酰胺残基的抗体可以从天然来源中分离，或者被工程化成包含一个或更多个谷氨酰胺残基。用于将谷氨酰胺残基工程化到抗体多肽链(谷氨酰胺基修饰的抗体或抗原结合分子)的技术在本领域技术人员的技能范围内。在某些实施方案中，抗体是糖基化的。
在某些实施方案中，抗体或谷氨酰胺基修饰的抗体或抗原结合分子可以在至少一个多肽链序列中包含至少一个谷氨酰胺残基。在某些实施方案中，抗体或谷氨酰胺基修饰的抗体或抗原结合分子可以包含两种重链多肽，每种重链多肽具有一个Gln295残基。在另外的实施方案中，抗体或谷氨酰胺基修饰的抗体或抗原结合分子可以在除重链295以外的位点包含一个或更多个谷氨酰胺残基。在一些实施方案中，抗体可以通过定点诱变制备，以在位点插入谷氨酰胺残基，而不会导致抗体功能或结合失效。例如，本文包括如本文描述的带有Asn297Gln(N297Q)突变的抗体。在一些实施方案中，具有Gln295残基和/或N297Q突变的抗体在其可变区中包含一个或更多个另外的天然存在的谷氨酰胺残基，谷氨酰胺残基可以被转谷氨酰胺酶接近，并且因此能够与连接基或连接基-有效载荷缀合。可以例如在轻链的Q55处发现示例性的天然存在的谷氨酰胺残基。在这样的情况下，经由转谷氨酰胺酶缀合的抗体可以具有高于预期的DAR值(例如，DAR高于4)。任何这样的抗体可以从天然或人工来源中分离。
在多种实施方案中，适合于本公开内容的ADC的抗体或其抗原结合片段可以包含一个或更多个用于缀合的位点特异性半胱氨酸突变。在一种实施方案中，抗体或其抗原结合片段在103位包含轻链突变(Cys103Ser或C103S)。在一种实施方案中，抗体或其抗原结合片段在轻链的103位缀合至本公开内容的化合物。
作为非限制性实例，抗蛋白A抗体或其抗原结合片段可以包含一个或更多个用于缀合的位点特异性半胱氨酸突变。在一种实施方案中，抗蛋白A抗体或其抗原结合片段包含在103位的轻链突变(C103S)。在一种实施方案中，抗蛋白A抗体或其抗原结合片段在轻链的103位缀合至本公开内容的化合物。
可用于转谷氨酰胺酶介导的包含谷氨酰胺的抗体(或抗原结合化合物)的偶联的伯胺化合物可以是普通技术人员认为有用的任何伯胺化合物。通常，伯胺化合物具有式H2N-R，其中R可以是与抗体和反应条件相容的任何基团。在某些实施方案中，R是烷基、被取代的烷基、杂烷基或被取代的杂烷基。
在一些实施方案中，伯胺化合物可以包含反应性基团或受保护的反应性基团。有用的反应性基团包括叠氮化物、炔烃、环炔烃、硫醇、醇、酮、醛、酸、酯、肼、苯胺和胺。在某些实施方案中，反应性基团选自由叠氮化物、炔烃、巯基、环炔烃、醛和羧基组成的组。
在某些实施方案中，伯胺化合物是根据式H2N-LL-X，其中LL是二价间隔基，并且X是反应性基团或受保护的反应性基团。在特定实施方案中，LL是二价聚乙二醇(PEG)基团。在某些实施方案中，X选自由–SH、–N3、炔烃、醛和四唑组成的组。在特定实施方案中，X是–N3。
在某些实施方案中，伯胺化合物是根据以下式中的一种：
H2N-(CH2)n-X；
H2N-(CH2CH2O)n-(CH2)p-X；
H2N-(CH2)n-N(H)C(O)-(CH2)m-X；
H2N-(CH2CH2O)n-N(H)C(O)-(CH2CH2O)m-(CH2)p-X；
H2N-(CH2)n-C(O)N(H)-(CH2)m-X；
H2N-(CH2CH2O)n-C(O)N(H)-(CH2CH2O)m-(CH2)p-X；
H2N-(CH2)n-N(H)C(O)-(CH2CH2O)m-(CH2)p-X；
H2N-(CH2CH2O)n-N(H)C(O)-(CH2)m-X；
H2N-(CH2)n-C(O)N(H)-(CH2CH2O)m-(CH2)p-X；和
H2N-(CH2CH2O)n-C(O)N(H)-(CH2)m-X；
其中n是选自1至12的整数；
m是选自0至12的整数；
p是选自0至2的整数；
并且X选自由–SH、–N3、–C≡CH、–C(O)H、四唑和以下的任一种组成的组：
Figure BDA0003124860200002171
在上文，任何烷基基团或亚烷基基团(即，-CH2-)可以任选地被取代，例如被C1-8烷基、甲基甲酰基或–SO3H取代。在某些实施方案中，烷基基团是未被取代的。
在某些实施方案中，伯胺化合物选自由以下组成的组：
Figure BDA0003124860200002181
在特定实施方案中，伯胺化合物是
Figure BDA0003124860200002182
因此，本文提供了与一种或更多种伯胺化合物连接的修饰的抗体及其抗原结合片段。在特定实施方案中，本文提供了根据下式的修饰的抗体及其抗原结合片段：
Figure BDA0003124860200002183
在式中，BA是抗体或其抗原结合片段。变量n是从1至30的整数。在某些实施方案中，n是从1至BA中谷氨酰胺残基的数目。在某些实施方案中，n是从1至4。在某些实施方案中，n是1、2、3或4。在某些实施方案中，n是2。在某些实施方案中，n是4。修饰的抗体及其抗原结合片段可用于例如连接至一个或更多个L–PA分子以形成ADC。
在某些实施方案中，BA可以包含两个或四个谷氨酰胺残基。在某些实施方案中，BA可以包含Q295残基。在某些实施方案中，BA可以包含N297Q突变。在某些实施方案中，BA可以包含Q295和N297Q。在这样的实施方案中，因为BA可以是二聚体，所以BA具有四个用于缀合至L–PA部分的谷氨酰胺残基。
在式(XV)BA–[L–PA]n中，PA可以是被认为有用的任何有效载荷。在某些实施方案中，PA是根据本公开内容的利福霉素类似物。
在式(XV)的一些实施方案中，L是-L1-L2-(L3)0-1-，并且L2可以包括
Figure BDA0003124860200002191
Figure BDA0003124860200002192
-C(O)CH2CH2C(O)NH-、
Figure BDA0003124860200002193
Figure BDA0003124860200002194
Figure BDA0003124860200002195
-OCH2C(O)-或环糊精残基(CD)；或它们的组合。在一些实施方案中，L是-L1-L2-(L3)0-1-，并且L2可以包括
Figure BDA0003124860200002196
Figure BDA0003124860200002201
Figure BDA0003124860200002202
或CD，或它们的任何组合。在一些实施方案中，L是-L1-L2-(L3)0-1-，并且L2可以包括CD，其中CD选自由以下组成的组：
Figure BDA0003124860200002203
Figure BDA0003124860200002211
在式(XV)的一些实施方案中，L是-L1-L2-(L3)0-1-，并且L2可以包括
Figure BDA0003124860200002212
在一些实施方案中，L是-L1-L2-(L3)0-1-，并且–L1可以包括选自以下的L1：
Figure BDA0003124860200002221
或其位置异构体或异构体的混合物；
Figure BDA0003124860200002222
Figure BDA0003124860200002223
或其立体异构体或立体异构体的混合物，其中S是指半胱氨酸残基上的S原子，反应性基团残基通过S附接至BA；和
Figure BDA0003124860200002224
其中N是指赖氨酸残基上的N原子，反应性基团残基通过N附接至BA。
在一些实施方案中，L是-L1-L2-(L3)0-1-，并且-L2-(L3)0-1-可以包括
Figure BDA0003124860200002225
Figure BDA0003124860200002231
Figure BDA0003124860200002241
Figure BDA0003124860200002251
Figure BDA0003124860200002261
在式(XV)BA–[L–PA]n中，PA可以用认为合适的任何连接基L连接至BA。连接基是将本文描述的抗体或抗原结合蛋白与治疗部分例如利福霉素类似物连接(link)、连接(connect)或结合的任何基团或部分。合适的连接基可以例如在Antibody-DrugConjugates and Immunotoxins；Phillips,G.L.,编著；Springer Verlag:New York,2013；Antibody-Drug Conjugates；Ducry,L.,编著；Humana Press,2013；Antibody-DrugConjugates；Wang,J.,Shen,W.-C.,和Zaro,J.L.,编著；Springer InternationalPublishing,2015中找到，每篇文献的内容通过引用以其整体并入本文。通常，用于本文描述的抗体缀合物的合适的结合剂连接基是那些足够稳定以利用抗体的循环半衰期，并且同时能够在抗原介导的缀合物的内化后释放其有效载荷的连接基。连接基可以是可裂解的或不可裂解的。可裂解的连接基包括在内化后被细胞内代谢裂解(例如经由水解、还原或酶促反应的裂解)的连接基。不可裂解的连接基包括在内化后经由抗体的溶酶体降解释放附接的有效载荷的连接基。合适的连接基包括但不限于酸不稳定的连接基、水解不稳定的连接基、酶促可裂解的连接基、还原不稳定的连接基、自我破坏的连接基和不可裂解的连接基。合适的连接基还包括但不限于以下或包括以下的那些：肽、葡糖苷酸、琥珀酰亚胺-硫醚、聚乙二醇(PEG)单元、腙、马来酰亚胺基-己酰基单元(mal-caproyl unit)、二肽单元、缬氨酸-瓜氨酸单元和对氨基苄基(PAB)单元。
本领域已知的任何连接基分子或连接基技术都可以用于创建或构建本公开内容的ADC。在某些实施方案中，连接基是可裂解的连接基。根据其他实施方案，连接基是不可裂解的连接基。可以用于本公开内容的上下文中的示例性连接基包括包含以下或由以下组成的连接基：例如，MC(6-马来酰亚胺基己酰基)、MP(马来酰亚胺基丙酰基)、val-cit(缬氨酸-瓜氨酸)、val-ala(缬氨酸-丙氨酸)、蛋白酶可裂解连接基中的二肽位点、ala-phe(丙氨酸-苯丙氨酸)、蛋白酶可裂解连接基中的二肽位点、PAB(对氨基苄氧基羰基)、SPP(N-琥珀酰亚胺基4-(2-吡啶硫基)戊酸酯)、SMCC(N-琥珀酰亚胺基4-(N-马来酰亚胺基甲基)环己烷-1羧酸酯)、SIAB(N-琥珀酰亚胺基(4-碘乙酰基)氨基苯甲酸酯)以及它们的变体和组合。可以用于本公开内容的上下文中的连接基的另外的实例例如在US 7,754,681和Ducry,Bioconjugate Chem.,2010,21:5-13以及其中引用的参考文献中提供，这些文献的内容通过引用以其整体并入本文。
在某些实施方案中，连接基在生理条件下是稳定的。在某些实施方案中，连接基是可裂解的，例如，能够在存在酶的情况下或在特定的pH范围或值释放至少有效载荷部分。在一些实施方案中，连接基可以包括酶可裂解部分。说明性的酶可裂解部分包括但不限于肽键、酯键、腙键和二硫键。在一些实施方案中，连接基可以包括组织蛋白酶可裂解的连接基。
在一些实施方案中，连接基可以包括不可裂解部分。
合适的连接基还包括但不限于那些被化学结合至单个结合剂(例如抗体)的两个半胱氨酸残基的连接基。这样的连接基可以用于模拟抗体的二硫键，二硫键由于缀合过程被破坏。
在一些实施方案中，连接基可以包括一个或更多个氨基酸。合适的氨基酸包括天然的、非天然的、标准的、非标准的、蛋白原的、非蛋白原的和L-或D-α氨基酸。在一些实施方案中，连接基可以包括丙氨酸、缬氨酸、甘氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、甲硫氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸、半胱氨酸、酪氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、天冬氨酸、谷氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸或瓜氨酸、其衍生物或其组合。在某些实施方案中，氨基酸的一个或更多个侧链连接至侧链基团，在下文描述。在一些实施方案中，连接基可以包括缬氨酸和瓜氨酸。在一些实施方案中，连接基可以包括赖氨酸、缬氨酸和瓜氨酸。在一些实施方案中，连接基可以包括赖氨酸、缬氨酸和丙氨酸。在一些实施方案中，连接基可以包括缬氨酸和丙氨酸。
在一些实施方案中，连接基可以包括自我破坏基团。自我破坏基团可以是本领域技术人员已知的任何这样的基团。在特定实施方案中，自我破坏基团可以是对氨基苄基(PAB)或其衍生物。有用的衍生物包括对氨基苄氧基羰基(PABC)。技术人员将认识到，自我破坏基团能够进行化学反应，从而从有效载荷中释放连接基的剩余原子。
在一些实施方案中，连接基可以是：
Figure BDA0003124860200002291
其中
Figure BDA0003124860200002292
是至抗体或抗原结合蛋白的键(例如，经由赖氨酸残基)，并且
Figure BDA0003124860200002293
是至有效载荷的键。在一些实施方案中，连接基可以是：
Figure BDA0003124860200002294
其中
Figure BDA0003124860200002295
是至抗体或抗原结合蛋白的键(例如，经由赖氨酸残基)，并且
Figure BDA0003124860200002296
是至有效载荷的键。在某些实施方案中，连接基可以是：
Figure BDA0003124860200002297
在某些实施方案中，连接基可以是：
Figure BDA0003124860200002298
在一些实施方案中，连接基可以来源于马来酰亚胺基甲基-4-反式-环己烷羧基琥珀酸酯：
Figure BDA0003124860200002301
在一些实施方案中，连接基可以是：
Figure BDA0003124860200002302
Figure BDA0003124860200002311
其中
Figure BDA0003124860200002312
是至抗体或抗原结合蛋白的键(例如，经由赖氨酸或丝氨酸残基)，并且
Figure BDA0003124860200002313
是至有效载荷的键。
在一些实施方案中，L可以是可裂解的连接基。在一些实施方案中，L可以是不可裂解的连接基。在一些实施方案中，L可以包括二肽。在一些实施方案中，L可以包括
Figure BDA0003124860200002314
部分。
在一些实施方案中，L可以包括具有以下结构的部分：
Figure BDA0003124860200002315
在一些实施方案中，L可以包括具有以下结构的部分：
Figure BDA0003124860200002316
在一些实施方案中，L可以包括具有以下结构的部分：
Figure BDA0003124860200002317
在一些实施方案中，L可以包括具有选自以下的结构的部分：
Figure BDA0003124860200002321
在某些实施方案中，连接基可以包括环糊精基团。在某些实施方案中，连接基提供根据式(XVa)的ADC：
Figure BDA0003124860200002322
在式(XVa)中，BA是抗体或其抗原结合片段，LL是三价连接基，RG是反应性连接基残基，SP在每种情况下独立地不存在或是间隔基，下标n是从1至30的整数；并且PA是有效载荷。在某些实施方案中，n是从1至4。在某些实施方案中，n是4。在某些实施方案中，n是2。在某些实施方案中，n是1。在某些实施方案中，n是3。
在某些实施方案中，连接基可以包括环糊精基团。在某些实施方案中，连接基提供根据式(XVb)的ADC：
Figure BDA0003124860200002331
在式(XVb)中，BA是抗体或其抗原结合片段；RG是反应性基团残基；SP1和SP2在每种情况下各自独立地不存在或是间隔基残基，并且其中SP1可以包括三价连接基；AA1是包括氨基酸残基的三价连接基；AA2是二肽残基；PEG可以包含在1个和30个之间的聚乙二醇残基；B不存在、是
Figure BDA0003124860200002332
其中
Figure BDA0003124860200002333
指示B通过其被键合至所述式中相邻基团的原子；CD在每种情况下独立地不存在或是环糊精残基，其中至少一个CD存在，下标n是从1至30的整数；下标m是从0至5的整数；并且PA是有效载荷部分。在这些实例中，下标m是0、1、2、3、4或5。在一些实例中，下标m是0。在一些实例中，下标m是1。在一些实例中，下标m是2。在一些实例中，下标m是3。在一些实例中，下标m是4。在一些实例中，下标m是5。在一些实例中，B不存在。在一些实例中，B是
Figure BDA0003124860200002334
在一些实例中，B是
Figure BDA0003124860200002335
在一些实例中，AA1或AA2中的任一个可以在每种情况下独立地包括选自以下的氨基酸：丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、甲硫氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸、半胱氨酸、酪氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、天冬氨酸、谷氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸或瓜氨酸、其衍生物及其组合。在某些实施方案中，AA1是选自以下的氨基酸：丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、甲硫氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、甘氨酸、丝氨酸、苏氨酸、半胱氨酸、酪氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、天冬氨酸、谷氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸或瓜氨酸、其衍生物及其组合。在某些实施方案中，AA1是赖氨酸。在某些实施方案中，AA1是赖氨酸或赖氨酸的衍生物。在某些实施方案中，AA2是缬氨酸-瓜氨酸。在一些实施方案中，AA2是瓜氨酸-缬氨酸。在一些实施方案中，AA2是缬氨酸-丙氨酸。在一些实施方案中，AA2是丙氨酸-缬氨酸。在一些实施方案中，AA2是缬氨酸-甘氨酸。在一些实施方案中，AA2是甘氨酸-缬氨酸。在一些实施方案中，AA1-AA2是谷氨酰胺-缬氨酸-瓜氨酸。在一些实施方案中，AA1-AA2是谷氨酰胺-缬氨酸-瓜氨酸。在一些实施方案中，AA1-AA2是赖氨酸-缬氨酸-丙氨酸。在一些实施方案中，AA1-AA2是赖氨酸-缬氨酸-瓜氨酸。在一些实施方案中，AA1-AA2是谷氨酰胺-缬氨酸-瓜氨酸。在某些实施方案中，赖氨酸是L-赖氨酸。在某些实施方案中，赖氨酸是D-赖氨酸。在一些实例中，SP1在每种情况下独立地选自由以下组成的组：C1-6亚烷基、-NH-、-C(O)-、(-CH2-CH2-O)e、-NH-CH2-CH2-(-O-CH2-CH2)e-C(O)-、-C(O)-(CH2)u-C(O)-、-C(O)-NH-(CH2)v-及其组合，其中下标e是从0至4的整数，下标u是从1至8的整数，并且下标v是从1至8的整数。在一些实例中，SP2在每种情况下独立地选自由以下组成的组：C1-6亚烷基、-NH-、-C(O)-、(-CH2-CH2-O)e、-NH-CH2-CH2-(-O-CH2-CH2)e-C(O)-、-C(O)-(CH2)u-C(O)-、-C(O)-NH-(CH2)v-及其组合，其中下标e是从0至4的整数，下标u是从1至8的整数，并且下标v是从1至8的整数。
在某些实施方案中，连接基可以包括末端亲水基团(HG)。在某些实施方案中，连接基可以包括牛磺酸基团。在某些实施方案中，连接基可以包括末端磺酸基团。在某些实施方案中，连接基提供根据式(XVI)的ADC：
Figure BDA0003124860200002341
其中，在式(XVI)中，BA是结合剂；LL是三价连接基；RG1和RG2是反应性基团残基；SP1和SP2在每种情况下独立地不存在或是间隔基残基；HG是亲水残基；PA是有效载荷残基；下标n是从1至30的整数；并且下标q是0或1。在一些情况下，可能存在多于一个三价连接基LL。在一些情况下，n是从1至4的整数。在一些情况下，n是1。在一些情况下，n是2。在一些情况下，n是3。在一些情况下，n是4。在一些情况下，HG是末端亲水基团。在一些情况下，HG可以包括一个末端磺酸基团或其盐。在其他情况下，HG可以包括多于一个末端磺酸基团或其盐。在一些情况下，HG可以包括一个末端膦酸基团或其盐。在其他情况下，HG可以包括多于一个末端膦酸基团或其盐。在一些情况下，HG可以包括一个末端叔胺基团或其盐。在其他情况下，HG可以包括多于一个末端叔胺基团或其盐。在一些情况下，HG可以包括一个末端多元醇(例如，葡萄糖、麦芽糖)或其衍生物。在其他情况下，HG可以包括多于一个末端多元醇(例如，葡萄糖、麦芽糖)或其衍生物。
在另一个实例中，式(XVI)的化合物是根据式(XVII)：
Figure BDA0003124860200002351
在式(XVII)中，BA、RG1、SP1、RG2、SP2和HG如上文定义的，AA1是包括氨基酸残基的三价连接基；AA2是二肽残基；并且B是
Figure BDA0003124860200002352
其中
Figure BDA0003124860200002353
指示B通过其被键合至所述式中相邻基团的原子；下标p是0或1；并且下标q是0或1。在一些情况下，下标p是0，并且下标q是0。在一些情况下，下标p是1，并且下标q是0。在一些情况下，下标p是0，并且下标q是1。在一些情况下，下标p是1，并且下标q是1。在一些情况下，SP1可以包括0个-5个聚乙二醇(PEG)残基。在一些情况下，SP2可以包括0个-5个PEG残基。在一些实例中，SP1在每种情况下独立地选自由以下组成的组：C1-6亚烷基、-NH-、-C(O)-、(-CH2-CH2-O)e、-NH-CH2-CH2-(-O-CH2-CH2)e-C(O)-、-C(O)-(CH2)u-C(O)-、-C(O)-NH-(CH2)v-及其组合，其中下标e是从0至4的整数，下标u是从1至8的整数，并且下标v是从1至8的整数。在一些实例中，SP2在每种情况下独立地选自由以下组成的组：C1-6亚烷基、-NH-、-C(O)-、(-CH2-CH2-O)e、-NH-CH2-CH2-(-O-CH2-CH2)e-C(O)-、-C(O)-(CH2)u-C(O)-、-C(O)-NH-(CH2)v-及其组合，其中下标e是从0至4的整数，下标u是从1至8的整数，并且下标v是从1至8的整数。在一些实例中，AA1或AA2中的任一个可以在每种情况下独立地包括选自以下的氨基酸：丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、甲硫氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸、半胱氨酸、酪氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、天冬氨酸、谷氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸或瓜氨酸、其衍生物及其组合。在某些实施方案中，AA1是选自以下的氨基酸：丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、甲硫氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、甘氨酸、丝氨酸、苏氨酸、半胱氨酸、酪氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、天冬氨酸、谷氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸或瓜氨酸、其衍生物及其组合。在某些实施方案中，AA1是赖氨酸。在某些实施方案中，AA1是赖氨酸或赖氨酸的衍生物。在某些实施方案中，AA1是谷氨酸。在某些实施方案中，AA2是缬氨酸-瓜氨酸。在一些实施方案中，AA2是瓜氨酸-缬氨酸。在一些实施方案中，AA2是缬氨酸-丙氨酸。在一些实施方案中，AA2是丙氨酸-缬氨酸。在一些实施方案中，AA2是缬氨酸-甘氨酸。在一些实施方案中，AA2是甘氨酸-缬氨酸。在一些实施方案中，AA1-AA2是谷氨酰胺-缬氨酸-瓜氨酸。在一些实施方案中，AA1-AA2是赖氨酸-缬氨酸-瓜氨酸。在一些实施方案中，AA1-AA2是赖氨酸-缬氨酸-丙氨酸。在一些实施方案中，AA1-AA2是谷氨酰胺-缬氨酸-丙氨酸。在某些实施方案中，赖氨酸是L-赖氨酸。在某些实施方案中，赖氨酸是D-赖氨酸。
在某些实施方案中，连接基提供根据式(XVIII)的ADC：
Figure BDA0003124860200002361
在式(XVIII)中，BA是抗体或其抗原结合片段；RG是反应性基团残基，例如马来酰亚胺或琥珀酰亚胺残基；SP不存在或是间隔基残基；AA是二肽残基，例如缬氨酸-瓜氨酸连接基；B不存在或是
Figure BDA0003124860200002362
其中
Figure BDA0003124860200002363
指示B通过其被键合至所述式中相邻基团的原子，下标n是从1至30的整数；并且PA是有效载荷部分，例如利福霉素类似物。在一些实例中，B不存在。在一些实例中，B是
Figure BDA0003124860200002371
在一些实例中，AA可以在每种情况下独立地包括选自以下的氨基酸：丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、甲硫氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸、半胱氨酸、酪氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、天冬氨酸、谷氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸或瓜氨酸、其衍生物及其组合。在某些实施方案中，AA是缬氨酸-瓜氨酸。在一些实施方案中，AA是瓜氨酸-缬氨酸。在一些实施方案中，AA是缬氨酸-丙氨酸。在一些实施方案中，AA是丙氨酸-缬氨酸。在一些实施方案中，AA是缬氨酸-甘氨酸。在一些实施方案中，AA是甘氨酸-缬氨酸。在一些实例中，SP选自由以下组成的组：C1-6烷基、-NH-、-C(O)-、-CH2-CH2-C(O)-NH-、-(CH)u-C(O)-NH-、(-CH2-CH2-O)e、-NH-CH2-CH2-(-O-CH2-CH2)e-C(O)-、-C(O)-(CH2)u-C(O)-、-C(O)-NH-(CH2)v-、-(CH)u-C(O)-NH-(CH2-CH2-O)e-(CH)u-C(O)-NH-、-(CH)2-C(O)-NH-(CH2-CH2-O)8-(CH)2-C(O)-NH-及其组合，其中在每次出现时独立地，下标e是从0至20的整数，下标u是从1至8的整数，并且下标v是从1至8的整数。
在某些实施方案中，连接基可以包括环糊精基团。在某些实施方案中，连接基提供根据式(XIX)的ADC：
Figure BDA0003124860200002372
(XIX)。
在式(XIX)中，BA是抗体或其抗原结合片段；RG是反应性基团残基，例如马来酰亚胺或琥珀酰亚胺残基；SP1和SP2在每种情况下各自独立地不存在或是间隔基残基，例如，
Figure BDA0003124860200002373
AA是二肽残基，例如缬氨酸-瓜氨酸连接基；PEG是包含在1个和30个之间的聚乙二醇残基的聚乙二醇链；B不存在或是
Figure BDA0003124860200002374
其中
Figure BDA0003124860200002375
指示B通过其被键合至所述式中相邻基团的原子，下标n是从1至30的整数；下标m是从0至20的整数；下标p是0或1；并且PA是有效载荷部分，例如利福霉素类似物。在这些实例中，下标m是0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20。在一些实例中，下标m是0。在一些实例中，下标m是1。在一些实例中，下标m是2。在一些实例中，下标m是5。在一些实例中，下标m是8。在一些实例中，下标m是10。在一些实例中，B不存在。在一些实例中，B是
Figure BDA0003124860200002381
在一些实例中，AA可以在每种情况下独立地包括选自以下的氨基酸：丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、甲硫氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸、半胱氨酸、酪氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、天冬氨酸、谷氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸或瓜氨酸、其衍生物及其组合。在某些实施方案中，AA是缬氨酸-瓜氨酸。在一些实施方案中，AA是瓜氨酸-缬氨酸。在一些实施方案中，AA是缬氨酸-丙氨酸。在一些实施方案中，AA是丙氨酸-缬氨酸。在一些实施方案中，AA是缬氨酸-甘氨酸。在一些实施方案中，AA是甘氨酸-缬氨酸。在一些实例中，SP1在每种情况下独立地选自由以下组成的组：C1-6亚烷基、-NH-、-C(O)-、-CH2-CH2-C(O)-NH-、-(CH)u-C(O)-NH-、(-CH2-CH2-O)e、-NH-CH2-CH2-(-O-CH2-CH2)e-C(O)-、-C(O)-(CH2)u-C(O)-、-C(O)-NH-(CH2)v-及其组合，其中下标e是从0至4的整数，下标u是从1至8的整数，并且下标v是从1至8的整数。在一些实例中，SP2在每种情况下独立地选自由以下组成的组：C1-6亚烷基、-NH-、-C(O)-、-CH2-CH2-C(O)-NH-、-(CH)u-C(O)-NH-、(-CH2-CH2-O)e、-NH-CH2-CH2-(-O-CH2-CH2)e-C(O)-、-C(O)-(CH2)u-C(O)-、-C(O)-NH-(CH2)v-及其组合，其中下标e是从0至4的整数，下标u是从1至8的整数，并且下标v是从1至8的整数。
在这些实例中还包括其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体形式、其位置异构体或其位置异构体的混合物，其中每个
Figure BDA0003124860200002382
是至结合剂的键；并且每个
Figure BDA0003124860200002383
是至有效载荷的键。
在一些实施方案中，包含连接基-利福霉素类似物有效载荷的抗体-药物缀合物包括具有一个或更多个抗衡离子的盐，例如铵盐。任何药学上可接受的抗衡离子可以是合适的。例如，在本公开内容的实施方案中，合适的抗衡离子可以是选自以下的阴离子：F-、Cl-、Br-、I-、OH-、-BF4、CF3SO3 -、硫酸氢根、硫酸根、磷酸二氢根、磷酸氢根或磷酸根、NO3 -、PF6 -、NO2 -、羧酸根、CeFfSO3 -(其中e＝2-10并且f＝2e+1)、乙酸根、天冬氨酸根、苯磺酸根、苯甲酸根、苯磺酸根、碳酸氢根、酒石酸氢根、樟脑磺酸根、碳酸根、柠檬酸根、癸酸根、乙二胺四乙酸根、乙磺酸根、富马酸根、葡庚糖酸根、葡萄糖酸根、谷氨酸根、羟乙酸根、glycollyalarsanilate、己酸根、海巴明、羟基萘酸根、羟乙基磺酸根、乳酸根、乳糖醛酸根、苹果酸根、马来酸根、扁桃酸根、甲磺酸根、甲基溴化物、甲基硝酸根、粘酸根、萘磺酸根、辛酸根、油酸根、双羟萘酸根、泛酸根、聚半乳糖醛酸根、丙酸根、水杨酸根、硬脂酸根、碱式乙酸根、琥珀酸根、酒石酸根、茶氯酸根、甲苯磺酸根或三乙基碘。
本文描述的抗体药物缀合物可以使用本领域普通技术人员已知的缀合条件来制备(参见，例如Doronina等人.Nature Biotechnology 2003,21,7,778，该文献通过引用以其整体并入本文)。在一些实施方案中，ADC通过使抗体或其抗原结合片段与包含所需连接基和有效载荷的化合物接触来制备，其中所述连接基具有例如在抗体或抗原结合蛋白的所需残基处与抗体或抗原结合蛋白反应的部分。示例性条件在下文的实施例中描述。
在一些方面中，有效载荷PA是利福霉素类似物，如在具有根据如本文提供的式(A)、式(B)、式(I)、式(I’)、式(II)、式(II’)、式(III)、式(III’)、式(IV)、式(IV’)、式(V)、式(V’)的结构的化合物的任何以上实施方案中描述的。
在一方面中，有效载荷PA是具有式(XX)的结构的利福霉素类似物：
Figure BDA0003124860200002401
其中：
X选自-O-、-S-和-NR*-；
R1选自键、脂肪族C1-C20烃、芳香族C5-C20烃、杂芳香族C1-C20烃、芳基C6-C20烃、杂芳基C1-C20烃及其组合，它们中的每一个还包含0-8个选自卤素、O、N和S的杂原子，并且其中R1任选地被以下中的一种或更多种取代：-F、-Cl、-Br、-I、-OH、-OR*、-NO、-NO2、-NO3、-O-NO、-N3、-NH2、-NHR*、-N(R*)2、-N(R*)3 +、-N(R*)-OH、-O-N(R*)2、-N(R*)-O-R*、-CN、-NC、-(C＝O)-R*、-CHO、-CO2H、-CO2R*、-(C＝O)-S-R*、-O-(C＝O)-H、-O-(C＝O)-R*、-S-(C＝O)-R*、-(C＝O)-NH2、-(C＝O)-N(R*)2、-(C＝O)-NHNH2、-O-(C＝O)-NHNH2、-(C＝S)-NH2、-(C＝S)-N(R*)2、-N(R*)-CHO、-N(R*)-(C＝O)-R*、-SCN、-NCS、-NSO、-SSR*、-SO2R*、-SO2-N(R*)2、-S(＝O)-OR*、-S(＝O)-R*、-Si(R*)3、-CF3、-O-CF3及其组合；
R2、R3和R4独立地选自氢，直链的、支链的或环状的脂肪族C1-C20烃，或者-(C＝O)-R*，它们中的每一个还包含0-8个选自卤素、O、N和S的杂原子；
Ra在每次出现时独立地选自氢、-F、-Cl、-Br、-I、-OH、OR*、-NH2、-NHR*、-N(R*)2、-N(R*)3 +、-(C＝O)-R*、-CHO、-CO2H、-CO2R*和脂肪族C1-C20烃，它还包含0-8个选自卤素、O、N和S的杂原子，并且其中Ra和Rb任选地被以下中的一种或更多种取代：-F、-Cl、-Br、-I、-OH、-OR*；
R*在每次出现时独立地选自氢、脂肪族C1-C20烃、芳香族C5-C20烃、杂芳香族C1-C20烃、芳基C6-C20烃、杂芳基C1-C20烃及其组合，它还包含0-8个选自卤素、O、N和S及其组合的杂原子；
其中基团R1被键合至连接基。
应当理解的是，基团R1是键(即，R1不存在)；或者是二价基团，即
在另一方面中，有效载荷PA是具有式(XXI)的结构的利福霉素类似物：
Figure BDA0003124860200002411
其中：
X选自-O-、-S-和-NR*-；
R5选自键；脂肪族C1-C20烃，它还包含0-8个选自卤素、O、N和S的杂原子；
Figure BDA0003124860200002412
其中Y是C或N；
R2、R3和R4独立地选自氢，直链的、支链的或环状的脂肪族C1-C20烃，或者-(C＝O)-R*，它们中的每一个还包含0-8个选自卤素、O、N和S的杂原子；并且
R5c是键或脂肪族C1-C8烃；
其中基团R5被键合至连接基。
在另一方面中，有效载荷PA是具有式(XXI’)的结构的利福霉素类似物：
Figure BDA0003124860200002421
其中：
X选自-O-、-S-和-NR*-；
R5选自键；脂肪族C1-C20烃，它还包含0-8个选自卤素、O、N和S的杂原子；
Figure BDA0003124860200002422
Figure BDA0003124860200002423
Figure BDA0003124860200002424
其中Y是C或N。
R2、R3和R4独立地选自氢，直链的、支链的或环状的脂肪族C1-C20烃，或者-(C＝O)-R*，它们中的每一个还包含0-8个选自卤素、O、N和S的杂原子；
其中基团R5被键合至连接基。
应当理解的是，基团R5是键(即，R5不存在)；或者是二价基团，即R5能够键合至利福霉素的-O-以及键合至连接基。
在式(A)、式(B)、式(I)至式(XVI)和式(I’)至式(XVI’)的一些或任何实施方案中，Ra是氢和/或Rb是氢。在式(A)、式(I)至式(XVI)和式(I’)至式(XVI’)的一些或任何实施方案中，Ra是-OH。在式(A)、式(I)至式(XVI)和式(I’)至式(XVI’)的一些或任何实施方案中，R2是甲基、乙基、丙基或异丙基。在一种实施方案中，R2是甲基。在式(A)、式(I)至式(XVI)和式(I’)至式(XVI’)的一些或任何实施方案中，R3是CH3-(C＝O)-(乙酰基基团)、CH3CH2-(C＝O)-CH3CH2CH2-(C＝O)-或(CH3)2CH-(C＝O)-。在一种实施方案中，R3是乙酰基。在式(A)、式(I)至式(XVI)和式(I’)至式(XVI’)的一些或任何实施方案中，R4是氢。
在式(XX)或式(XX’)的一些实施方案中，-OR1是-O-(即，R1不存在)、
Figure BDA0003124860200002431
在式(XXI)或式(XXI’)的一些实施方案中，-OR5是-O-(即，R5不存在)、
Figure BDA0003124860200002432
Figure BDA0003124860200002441
在式(XX)的一些或任何实施方案中，X是-O-，并且-OR1包括叔胺。在一些这样的实施方案中，-OR1是
Figure BDA0003124860200002442
在式(XXI)或式(XXI’)的一些或任何实施方案中，X是-O-，并且-OR5包括叔胺。在一些这样的实施方案中，-OR5是
Figure BDA0003124860200002443
Figure BDA0003124860200002444
在一些实施方案中，式(XX)、式(XXI)、式(XX’)或式(XXI’)的化合物选自由以下组成的组：
Figure BDA0003124860200002451
Figure BDA0003124860200002461
Figure BDA0003124860200002471
Figure BDA0003124860200002481
其中
Figure BDA0003124860200002482
是至连接基的键。
在一方面中，本公开内容提供了具有式(XXII)的结构的抗体-药物缀合物：
Figure BDA0003124860200002483
其中：
BA是抗体或其抗原结合片段；
L是连接基；
SP是选自以下的间隔基
Figure BDA0003124860200002491
Figure BDA0003124860200002492
Figure BDA0003124860200002493
其中Y是C或N；其中符号
Figure BDA0003124860200002494
表示附接点；并且R’、R”和R”’选自氢、C1-C6脂肪族烃和选自以下的保护基团：芴基甲氧羰基(FMOC)和叔丁氧羰基(Boc)，或者其中R’和R”一起形成脂肪族单环的、脂肪族双环的或脂肪族多环的结构；
R’和R”在每次出现时独立地选自氢和C1-6烷基；并且
X选自-O-、-S-和-NR*。
在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段结合MSR1。在一种实施方案中，抗MSR1抗体或其抗原结合片段包含：(a)重链可变区(HCVR)的互补决定区(CDR)，其包括如表9中列出的氨基酸序列；以及(b)轻链可变区(LCVR)的CDR，其包括如表9中列出的氨基酸序列。
在一种实施方案中，抗MSR1抗体或其抗原结合片段包含：
(i)HCDR1结构域，其包括选自由SEQ ID NO:4、36、52、92和284组成的组的氨基酸序列；
(ii)HCDR2结构域，其包括选自由SEQ ID NO:6、38、54、94和286组成的组的氨基酸序列；
(iii)HCDR3结构域，其包括选自由SEQ ID NO:8、40、56、96和288组成的组的氨基酸序列；
(iv)LCDR1结构域，其包括选自由SEQ ID NO:12、44、60、100和292组成的组的氨基酸序列；
(v)LCDR2结构域，其包括选自由SEQ ID NO:14、46、62、102和294组成的组的氨基酸序列；以及
(vi)LCDR3结构域，其包括选自由SEQ ID NO:16、48、64、104和296组成的组的氨基酸序列。
在一种实施方案中，抗MSR1抗体或其抗原结合片段包含：
(i)HCDR1结构域，其包括SEQ ID NO:52的氨基酸序列；
(ii)HCDR2结构域，其包括SEQ ID NO:54的氨基酸序列；
(iii)HCDR3结构域，其包括SEQ ID NO:56的氨基酸序列；
(iv)LCDR1结构域，其包括SEQ ID NO:60的氨基酸序列；
(v)LCDR2结构域，其包括SEQ ID NO:62的氨基酸序列；以及
(vi)LCDR3结构域，其包括SEQ ID NO:64的氨基酸序列。
在一种实施方案中，抗MSR1抗体或其抗原结合片段包含N297Q突变。
在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段结合WTAα。在一种实施方案中，抗WTAα抗体或其抗原结合片段包含：(a)重链可变区(HCVR)的互补决定区(CDR)，其包括如表2A中列出的氨基酸序列；以及(b)轻链可变区(LCVR)的CDR，其包括如表2A中列出的氨基酸序列。
在一种实施方案中，抗WTAα抗体或其抗原结合片段包含：
(i)HCDR1结构域，其包括选自由SEQ ID NO:470、476、482和488组成的组的氨基酸序列；
(ii)HCDR2结构域，其包括选自由SEQ ID NO:471、477、483和489组成的组的氨基酸序列；
(iii)HCDR3结构域，其包括选自由SEQ ID NO:472、478、484和490组成的组的氨基酸序列；
(iv)LCDR1结构域，其包括选自由SEQ ID NO:467、473、479和485组成的组的氨基酸序列；
(v)LCDR2结构域，其包括选自由SEQ ID NO:468、474、480和486组成的组的氨基酸序列；以及
(vi)LCDR3结构域，其包括选自由SEQ ID NO:469、475、481和487组成的组的氨基酸序列。
在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段结合WTAβ。在一种实施方案中，抗WTAβ抗体或其抗原结合片段包含：(a)重链可变区(HCVR)的互补决定区(CDR)，其包括如表2B中列出的氨基酸序列；以及(b)轻链可变区(LCVR)的CDR，其包括如表2B中列出的氨基酸序列。
在一种实施方案中，抗WTAβ抗体或其抗原结合片段包含：
(i)HCDR1结构域，其包括选自由SEQ ID NO:502、508、514、520、526、532、538、544、550、556、562、568和574组成的组的氨基酸序列；
(ii)HCDR2结构域，其包括选自由SEQ ID NO:503、509、515、521、527、533、539、545、551、557、563、569和575组成的组的氨基酸序列；
(iii)HCDR3结构域，其包括选自由SEQ ID NO:504、510、516、522、528、534、540、546、552、558、564、570、576和584组成的组的氨基酸序列；
(iv)LCDR1结构域，其包括选自由SEQ ID NO:499、505、511、517、523、529、535、541、547、553、559、565和571组成的组的氨基酸序列；
(v)LCDR2结构域，其包括选自由SEQ ID NO:500、506、512、518、524、530、536、542、548、554、560、566和572组成的组的氨基酸序列；以及
(vi)LCDR3结构域，其包括选自由SEQ ID NO:501、507、513、519、525、531、537、543、549、555、561、567和573组成的组的氨基酸序列。
在一些实施方案中，抗WTA抗体或其抗原结合片段包含V205C突变。
在一种实施方案中，抗WTA抗体或其抗原结合片段来源于在美国专利申请公布20140356375(其通过引用以其整体并入本文)中描述的抗体4497。在一种实施方案中，抗WTA抗体来源于抗体4497，并且还包含轻链中的V205C突变。
在一种实施方案中，抗WTA抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO:568-569-570-565-566-567的HCDR1-HCDR2-HCDR3-LCDR1-LCDR2-LCDR3。
在一些实施方案中，抗WTA抗体或其抗原结合片段包含在重链可变区(HCVR)氨基酸序列SEQ ID NO:586中的三个重链互补决定区(HCDR1、HCDR2和HCDR3)；以及在轻链可变区(LCVR)氨基酸序列SEQ ID NO:585中的三个轻链互补决定区(LCDR1、LCDR2和LCDR3)。
在一些实施方案中，抗WTA抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO:586的HCVR氨基酸序列和SEQ ID NO:585的LCVR氨基酸序列。
在一些实施方案中，抗WTA抗体包含SEQ ID NO:602的重链氨基酸序列和SEQ IDNO:587或SEQ ID NO:589的轻链氨基酸序列。在一些实施方案中，抗WTA抗体或其抗原结合片段包含轻链中的V205C突变。
在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段结合蛋白A。在一种实施方案中，抗蛋白A抗体或其抗原结合片段可以包含：(a)重链可变区(HCVR)的互补决定区(CDR)，其包括如表3A中列出的氨基酸序列；以及(b)轻链可变区(LCVR)的CDR，其包括如表3A中列出的氨基酸序列。
在一种实施方案中，抗蛋白A抗体或其抗原结合片段可以包含：
(i)HCDR1结构域，其包括选自由SEQ ID NO:632、652和672组成的组的氨基酸序列；
(ii)HCDR2结构域，其包括选自由SEQ ID NO:634、654和674组成的组的氨基酸序列；
(iii)HCDR3结构域，其包括选自由SEQ ID NO:636、656和676组成的组的氨基酸序列；
(iv)LCDR1结构域，其包括选自由SEQ ID NO:640、660和680组成的组的氨基酸序列；
(v)LCDR2结构域，其包括选自由SEQ ID NO:642和662组成的组的氨基酸序列；以及
(vi)LCDR3结构域，其包括选自由SEQ ID NO:644、664和683组成的组的氨基酸序列。
在一些实施方案中，抗蛋白A抗体或其抗原结合片段包含在重链Fc中的H435R突变和Y436F突变(EU编号)。
在一种实施方案中，抗蛋白A抗体或其抗原结合片段包含在重链可变区(HCVR)氨基酸序列SEQ ID NO:630中的三个重链互补决定区(HCDR1、HCDR2和HCDR3)；以及在轻链可变区(LCVR)氨基酸序列SEQ ID NO:638中的三个轻链互补决定区(LCDR1、LCDR2和LCDR3)。在一种实施方案中，抗蛋白A抗体或其抗原结合片段包含一组六个CDR(HCDR1-HCDR2-HCDR3-LCDR1-LCDR2-LCDR3)，其包括SEQ ID NO:632-634-636-640-642-644。
在一种实施方案中，抗蛋白A抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO:630的HCVR氨基酸序列；和SEQ ID NO:638的LCVR氨基酸序列。
在一种实施方案中，抗蛋白A抗体包含SEQ ID NO:666的重链氨基酸序列和SEQ IDNO:668的轻链氨基酸序列。在一种实施方案中，抗蛋白A抗体还包含在重链Fc中的H435R突变和Y436F突变(EU编号)。在一种实施方案中，抗蛋白A抗体还包含轻链中的C103S突变。在一种实施方案中，抗蛋白A抗体或其抗原结合片段在轻链的103位缀合至本公开内容的化合物。
在多种实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含轻链中的C103S突变。
在多种实施方案中，抗体或其抗原结合片段在轻链的103位缀合至本公开内容的化合物。
在一种实施方案中，L是具有式
Figure BDA0003124860200002531
的连接基，其中
RG选自马来酰亚胺、N-羟基琥珀酰亚胺或琥珀酰亚胺；
SP1和SP2独立地不存在或是间隔基，所述间隔基选自由以下组成的组
Figure BDA0003124860200002541
C1-6烷基、-NH-、-C(O)-、-CH2-CH2-C(O)-NH-、-(CH)u-C(O)-NH-、(-CH2-CH2-O)e、-NH-CH2-CH2-(-O-CH2-CH2)e-C(O)-、-C(O)-(CH2)u-C(O)-、-C(O)-NH-(CH2)v-及其组合，其中下标e是从0至4的整数，下标u是从1至8的整数，并且下标v是从1至8的整数；
AA2-4是包含从2个至4个氨基酸的肽单元；并且
PEG是包含在1个和30个之间的聚乙二醇残基的聚乙二醇链。
在一种实施方案中，AA2-4是选自以下的二肽：缬氨酸-瓜氨酸、瓜氨酸-缬氨酸、缬氨酸-丙氨酸、丙氨酸-缬氨酸、缬氨酸-甘氨酸或甘氨酸-缬氨酸。
在一种实施方案中，AA2-4是缬氨酸-瓜氨酸。
在一种实施方案中，SP是
Figure BDA0003124860200002542
并且R’和R”各自是C1-6烷基。
在一种实施方案中，SP是
Figure BDA0003124860200002543
并且R’和R”各自是甲基。
在一种实施方案中，SP1和SP2各自是
Figure BDA0003124860200002544
在一种实施方案中，PEG包含8个聚乙二醇单元。
在一种实施方案中，抗体-药物缀合物具有以下结构：
Figure BDA0003124860200002551
其中BA是抗体或其抗原结合片段。
在另一方面中，本公开内容提供了分离的抗体或其抗原结合片段，其中抗体或其抗原结合片段直接地或者通过连接基或连接基-间隔基缀合至有效载荷，所述有效载荷具有选自由以下组成的组的结构：
Figure BDA0003124860200002552
Figure BDA0003124860200002561
Figure BDA0003124860200002571
Figure BDA0003124860200002581
Figure BDA0003124860200002591
在一种实施方案中，有效载荷具有选自以下的结构：
Figure BDA0003124860200002592
Figure BDA0003124860200002601
在一种实施方案中，有效载荷通过连接基缀合，连接基具有以下结构：
Figure BDA0003124860200002602
其中
RG选自马来酰亚胺、N-羟基琥珀酰亚胺或琥珀酰亚胺；
SP1和SP2独立地不存在或是间隔基，所述间隔基选自由以下组成的组
Figure BDA0003124860200002603
C1-6烷基、-NH-、-C(O)-、-CH2-CH2-C(O)-NH-、-(CH)u-C(O)-NH-、(-CH2-CH2-O)e、-NH-CH2-CH2-(-O-CH2-CH2)e-C(O)-、-C(O)-(CH2)u-C(O)-、-C(O)-NH-(CH2)v-及其组合，其中下标e是从0至4的整数，下标u是从1至8的整数，并且下标v是从1至8的整数；
AA2-4是包含从2个至4个氨基酸的肽单元；并且
PEG是包含在1个和30个之间的聚乙二醇残基的聚乙二醇链。
在一种实施方案中，AA2-4是选自以下的二肽：缬氨酸-瓜氨酸、瓜氨酸-缬氨酸、缬氨酸-丙氨酸、丙氨酸-缬氨酸、缬氨酸-甘氨酸或甘氨酸-缬氨酸。
在一种实施方案中，AA2-4是缬氨酸-瓜氨酸。
在一种实施方案中，SP是
Figure BDA0003124860200002604
并且R’和R”各自是C1-6烷基。
在一种实施方案中，SP是
Figure BDA0003124860200002605
并且R’和R”各自是甲基。
在一种实施方案中，SP1和SP2各自是
Figure BDA0003124860200002611
在一种实施方案中，PEG包含8个聚乙二醇单元。
在一种实施方案中，有效载荷通过连接基缀合，连接基具有以下结构：
Figure BDA0003124860200002612
在一种实施方案中，有效载荷通过连接基缀合，连接基-有效载荷具有以下结构：
Figure BDA0003124860200002613
其中
Figure BDA0003124860200002614
是至抗体或其抗原结合片段的键。
在一种实施方案中，有效载荷通过连接基缀合，连接基-有效载荷具有以下结构：
Figure BDA0003124860200002615
其中
Figure BDA0003124860200002616
是至抗体或其抗原结合片段的键。
在一种实施方案中，有效载荷通过连接基缀合，连接基-有效载荷具有以下结构：
Figure BDA0003124860200002621
其中
Figure BDA0003124860200002622
是至抗体或其抗原结合片段的键。
在一种实施方案中，有效载荷通过连接基缀合，连接基-有效载荷具有以下结构：
Figure BDA0003124860200002623
其中
Figure BDA0003124860200002624
是至抗体或其抗原结合片段的键。
在一种实施方案中，结合巨噬细胞清道夫受体1(MSR1)的抗体或其抗原结合片段包含：(a)重链可变区(HCVR)的互补决定区(CDR)，其包括如表9中列出的氨基酸序列；以及(b)轻链可变区(LCVR)的CDR，其包括如表9中列出的氨基酸序列。
在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段结合MSR1。在一种实施方案中，抗MSR1抗体或其抗原结合片段包含：(a)重链可变区(HCVR)的互补决定区(CDR)，其包括如表9中列出的氨基酸序列；以及(b)轻链可变区(LCVR)的CDR，其包括如表9中列出的氨基酸序列。
在一种实施方案中，抗MSR1抗体或其抗原结合片段包含：
(i)HCDR1结构域，其包括选自由SEQ ID NO:4、36、52、92和284组成的组的氨基酸序列；
(ii)HCDR2结构域，其包括选自由SEQ ID NO:6、38、54、94和286组成的组的氨基酸序列；
(iii)HCDR3结构域，其包括选自由SEQ ID NO:8、40、56、96和288组成的组的氨基酸序列；
(iv)LCDR1结构域，其包括选自由SEQ ID NO:12、44、60、100和292组成的组的氨基酸序列；
(v)LCDR2结构域，其包括选自由SEQ ID NO:14、46、62、102和294组成的组的氨基酸序列；以及
(vi)LCDR3结构域，其包括选自由SEQ ID NO:16、48、64、104和296组成的组的氨基酸序列。
在一种实施方案中，抗MSR1抗体或其抗原结合片段包含：
(i)HCDR1结构域，其包括SEQ ID NO:52的氨基酸序列；
(ii)HCDR2结构域，其包括SEQ ID NO:54的氨基酸序列；
(iii)HCDR3结构域，其包括SEQ ID NO:56的氨基酸序列；
(iv)LCDR1结构域，其包括SEQ ID NO:60的氨基酸序列；
(v)LCDR2结构域，其包括SEQ ID NO:62的氨基酸序列；以及
(vi)LCDR3结构域，其包括SEQ ID NO:64的氨基酸序列。
在一种实施方案中，抗MSR1抗体或其抗原结合片段包含N297Q突变。
在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段结合WTAα。在一种实施方案中，抗WTAα抗体或其抗原结合片段包含：(a)重链可变区(HCVR)的互补决定区(CDR)，其包括如表2A中列出的氨基酸序列；以及(b)轻链可变区(LCVR)的CDR，其包括如表2A中列出的氨基酸序列。
在一种实施方案中，抗WTAα抗体或其抗原结合片段包含：
(i)HCDR1结构域，其包括选自由SEQ ID NO:470、476、482和488组成的组的氨基酸序列；
(ii)HCDR2结构域，其包括选自由SEQ ID NO:471、477、483和489组成的组的氨基酸序列；
(iii)HCDR3结构域，其包括选自由SEQ ID NO:472、478、484和490组成的组的氨基酸序列；
(iv)LCDR1结构域，其包括选自由SEQ ID NO:467、473、479和485组成的组的氨基酸序列；
(v)LCDR2结构域，其包括选自由SEQ ID NO:468、474、480和486组成的组的氨基酸序列；以及
(vi)LCDR3结构域，其包括选自由SEQ ID NO:469、475、481和487组成的组的氨基酸序列。
在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段结合WTAβ。在一种实施方案中，抗WTAβ抗体或其抗原结合片段包含：(a)重链可变区(HCVR)的互补决定区(CDR)，其包括如表2B中列出的氨基酸序列；以及(b)轻链可变区(LCVR)的CDR，其包括如表2B中列出的氨基酸序列。
在一种实施方案中，抗WTAβ抗体或其抗原结合片段包含：
(i)HCDR1结构域，其包括选自由SEQ ID NO:502、508、514、520、526、532、538、544、550、556、562、568和574组成的组的氨基酸序列；
(ii)HCDR2结构域，其包括选自由SEQ ID NO:503、509、515、521、527、533、539、545、551、557、563、569和575组成的组的氨基酸序列；
(iii)HCDR3结构域，其包括选自由SEQ ID NO:504、510、516、522、528、534、540、546、552、558、564、570、576和584组成的组的氨基酸序列；
(iv)LCDR1结构域，其包括选自由SEQ ID NO:499、505、511、517、523、529、535、541、547、553、559、565和571组成的组的氨基酸序列；
(v)LCDR2结构域，其包括选自由SEQ ID NO:500、506、512、518、524、530、536、542、548、554、560、566和572组成的组的氨基酸序列；以及
(vi)LCDR3结构域，其包括选自由SEQ ID NO:501、507、513、519、525、531、537、543、549、555、561、567和573组成的组的氨基酸序列。
在一些实施方案中，抗WTA抗体或其抗原结合片段包含V205C突变。
在一种实施方案中，抗WTA抗体或其抗原结合片段来源于在美国专利申请公布20140356375(其通过引用以其整体并入本文)中描述的抗体4497。在一种实施方案中，抗WTA抗体来源于抗体4497，并且还包含轻链中的V205C突变。
在一种实施方案中，抗WTA抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO:568-569-570-565-566-567的HCDR1-HCDR2-HCDR3-LCDR1-LCDR2-LCDR3。
在一些实施方案中，抗WTA抗体或其抗原结合片段包含在重链可变区(HCVR)氨基酸序列SEQ ID NO:586中的三个重链互补决定区(HCDR1、HCDR2和HCDR3)；以及在轻链可变区(LCVR)氨基酸序列SEQ ID NO:585中的三个轻链互补决定区(LCDR1、LCDR2和LCDR3)。
在一些实施方案中，抗WTA抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO:586的HCVR氨基酸序列和和SEQ ID NO:585的LCVR氨基酸序列。
在一些实施方案中，抗WTA抗体包含SEQ ID NO:602的重链氨基酸序列和SEQ IDNO:587或SEQ ID NO:589的轻链氨基酸序列。在一些实施方案中，抗WTA抗体或其抗原结合片段包含轻链中的V205C突变。
在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段结合蛋白A。在一种实施方案中，抗蛋白A抗体或其抗原结合片段可以包含：(a)重链可变区(HCVR)的互补决定区(CDR)，其包括如表3A中列出的氨基酸序列；以及(b)轻链可变区(LCVR)的CDR，其包括如表3A中列出的氨基酸序列。
在一种实施方案中，抗蛋白A抗体或其抗原结合片段可以包含：
(i)HCDR1结构域，其包括选自由SEQ ID NO:632、652和672组成的组的氨基酸序列；
(ii)HCDR2结构域，其包括选自由SEQ ID NO:634、654和674组成的组的氨基酸序列；
(iii)HCDR3结构域，其包括选自由SEQ ID NO:636、656和676组成的组的氨基酸序列；
(iv)LCDR1结构域，其包括选自由SEQ ID NO:640、660和680组成的组的氨基酸序列；
(v)LCDR2结构域，其包括选自由SEQ ID NO:642和662组成的组的氨基酸序列；以及
(vi)LCDR3结构域，其包括选自由SEQ ID NO:644、664和683组成的组的氨基酸序列。
在一些实施方案中，抗蛋白A抗体或其抗原结合片段包含在重链Fc中的H435R突变和Y436F突变(EU编号)。
在一种实施方案中，抗蛋白A抗体或其抗原结合片段包含在重链可变区(HCVR)氨基酸序列SEQ ID NO:630中的三个重链互补决定区(HCDR1、HCDR2和HCDR3)；以及在轻链可变区(LCVR)氨基酸序列SEQ ID NO:638中的三个轻链互补决定区(LCDR1、LCDR2和LCDR3)。在一种实施方案中，抗蛋白A抗体或其抗原结合片段包含一组六个CDR(HCDR1-HCDR2-HCDR3-LCDR1-LCDR2-LCDR3)，其包括SEQ ID NO:632-634-636-640-642-644。
在一种实施方案中，抗蛋白A抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO:630的HCVR氨基酸序列；和SEQ ID NO:638的LCVR氨基酸序列。
在一种实施方案中，抗蛋白A抗体包含SEQ ID NO:666的重链氨基酸序列和SEQ IDNO:668的轻链氨基酸序列。在一种实施方案中，抗蛋白A抗体还包含在重链Fc中的H435R突变和Y436F突变(EU编号)。在一种实施方案中，抗蛋白A抗体还包含轻链中的C103S突变。在一种实施方案中，抗蛋白A抗体或其抗原结合片段在轻链的103位缀合至本公开内容的化合物。
在多种实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含轻链中的C103S突变。
在多种实施方案中，抗体或其抗原结合片段在轻链的103位缀合至本公开内容的化合物。
本公开内容的示例性抗体-药物缀合物
在一种实施方案中，本公开内容的抗体-药物缀合物包含抗MSR1抗体或其抗原结合片段，该抗MSR1抗体或其抗原结合片段包含含有SEQ ID NO:52-54-56-60-62-64的一组六个CDR(HCDR1-HCDR2-HCDR3-LCDR1-LCDR2-LCDR3)和N297Q突变，所述抗MSR1抗体或其抗原结合片段缀合至具有以下结构的化合物：
Figure BDA0003124860200002671
在一种实施方案中，本公开内容的抗体-药物缀合物包含抗MSR1抗体或其抗原结合片段，该抗MSR1抗体或其抗原结合片段包含含有SEQ ID NO:52-54-56-60-62-64的一组六个CDR(HCDR1-HCDR2-HCDR3-LCDR1-LCDR2-LCDR3)和N297Q突变，所述抗MSR1抗体或其抗原结合片段缀合至具有以下结构的化合物:
Figure BDA0003124860200002672
在一种实施方案中，本公开内容的抗体-药物缀合物包含抗MSR1抗体或其抗原结合片段，该抗MSR1抗体或其抗原结合片段包含含有SEQ ID NO:52-54-56-60-62-64的一组六个CDR(HCDR1-HCDR2-HCDR3-LCDR1-LCDR2-LCDR3)和N297Q突变，所述抗MSR1抗体或其抗原结合片段缀合至具有以下结构的化合物：
Figure BDA0003124860200002681
在一种实施方案中，本公开内容的抗体-药物缀合物包含抗MSR1抗体或其抗原结合片段，该抗MSR1抗体或其抗原结合片段包含含有SEQ ID NO:52-54-56-60-62-64的一组六个CDR(HCDR1-HCDR2-HCDR3-LCDR1-LCDR2-LCDR3)和N297Q突变，所述抗MSR1抗体或其抗原结合片段缀合至具有以下结构的化合物：
Figure BDA0003124860200002682
在一种实施方案中，本公开内容的抗体-药物缀合物包含抗MSR1抗体或其抗原结合片段，该抗MSR1抗体或其抗原结合片段包含含有SEQ ID NO:52-54-56-60-62-64的一组六个CDR(HCDR1-HCDR2-HCDR3-LCDR1-LCDR2-LCDR3)和N297Q突变，所述抗MSR1抗体或其抗原结合片段缀合至具有以下结构的化合物：
Figure BDA0003124860200002683
在一种实施方案中，本公开内容的抗体-药物缀合物包含抗MSR1抗体或其抗原结合片段，该抗MSR1抗体或其抗原结合片段包含含有SEQ ID NO:52-54-56-60-62-64的一组六个CDR(HCDR1-HCDR2-HCDR3-LCDR1-LCDR2-LCDR3)和N297Q突变，所述抗MSR1抗体或其抗原结合片段缀合至具有以下结构的化合物:
Figure BDA0003124860200002691
在一些实施方案中，抗MSR1抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO:50的HCVR氨基酸序列和和SEQ ID NO:58的LCVR氨基酸序列。
在一种实施方案中，本公开内容的抗体-药物缀合物包含抗WTA抗体或其抗原结合片段，该抗WTA抗体或其抗原结合片段包含含有SEQ ID NO:568-569-570-565-566-567的一组六个CDR(HCDR1-HCDR2-HCDR3-LCDR1-LCDR2-LCDR3)和轻链中的V205C突变，所述抗WTA抗体或其抗原结合片段缀合至具有以下结构的化合物：
Figure BDA0003124860200002692
在一种实施方案中，本公开内容的抗体-药物缀合物包含抗WTA抗体或其抗原结合片段，该抗WTA抗体或其抗原结合片段包含含有SEQ ID NO:568-569-570-565-566-567的一组六个CDR(HCDR1-HCDR2-HCDR3-LCDR1-LCDR2-LCDR3)和轻链中的V205C突变，所述抗WTA抗体或其抗原结合片段缀合至具有以下结构的化合物：
Figure BDA0003124860200002701
在一种实施方案中，本公开内容的抗体-药物缀合物包含抗WTA抗体或其抗原结合片段，该抗WTA抗体或其抗原结合片段包含含有SEQ ID NO:568-569-570-565-566-567的一组六个CDR(HCDR1-HCDR2-HCDR3-LCDR1-LCDR2-LCDR3)和轻链中的V205C突变，所述抗WTA抗体或其抗原结合片段缀合至具有以下结构的化合物：
Figure BDA0003124860200002702
在一种实施方案中，本公开内容的抗体-药物缀合物包含抗WTA抗体或其抗原结合片段，该抗WTA抗体或其抗原结合片段包含含有SEQ ID NO:568-569-570-565-566-567的一组六个CDR(HCDR1-HCDR2-HCDR3-LCDR1-LCDR2-LCDR3)和轻链中的V205C突变，所述抗WTA抗体或其抗原结合片段缀合至具有以下结构的化合物：
Figure BDA0003124860200002703
在一种实施方案中，本公开内容的抗体-药物缀合物包含抗WTA抗体或其抗原结合片段，该抗WTA抗体或其抗原结合片段包含含有SEQ ID NO:568-569-570-565-566-567的一组六个CDR(HCDR1-HCDR2-HCDR3-LCDR1-LCDR2-LCDR3)和轻链中的V205C突变，所述抗WTA抗体或其抗原结合片段缀合至具有以下结构的化合物：
Figure BDA0003124860200002711
在一些实施方案中，抗WTA抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO:586的HCVR氨基酸序列和SEQ ID NO:585的LCVR氨基酸序列。
在一些实施方案中，抗WTA抗体包含SEQ ID NO:602的重链氨基酸序列和SEQ IDNO:587或SEQ ID NO:589的轻链氨基酸序列。
在一种实施方案中，本公开内容的抗体-药物缀合物包含抗蛋白A抗体或其抗原结合片段，该抗蛋白A抗体或其抗原结合片段包含含有SEQ ID NO:632-634-636-640-642-644的一组六个CDR(HCDR1-HCDR2-HCDR3-LCDR1-LCDR2-LCDR3)以及重链Fc中的H435R突变和Y436F突变和轻链中的C103S突变，所述抗蛋白A抗体或其抗原结合片段缀合至具有以下结构的化合物：
Figure BDA0003124860200002712
在一种实施方案中，本公开内容的抗体-药物缀合物包含抗蛋白A抗体或其抗原结合片段，该抗蛋白A抗体或其抗原结合片段包含含有SEQ ID NO:632-634-636-640-642-644的一组六个CDR(HCDR1-HCDR2-HCDR3-LCDR1-LCDR2-LCDR3)以及重链Fc中的H435R突变和Y436F突变和轻链中的C103S突变，所述抗蛋白A抗体或其抗原结合片段缀合至具有以下结构的化合物：
Figure BDA0003124860200002721
在一种实施方案中，本公开内容的抗体-药物缀合物包含抗蛋白A抗体或其抗原结合片段，该抗蛋白A抗体或其抗原结合片段包含含有SEQ ID NO:632-634-636-640-642-644的一组六个CDR(HCDR1-HCDR2-HCDR3-LCDR1-LCDR2-LCDR3)以及重链Fc中的H435R突变和Y436F突变和轻链中的C103S突变，所述抗蛋白A抗体或其抗原结合片段缀合至具有以下结构的化合物：
Figure BDA0003124860200002722
在一种实施方案中，本公开内容的抗体-药物缀合物包含抗蛋白A抗体或其抗原结合片段，该抗蛋白A抗体或其抗原结合片段包含含有SEQ ID NO:632-634-636-640-642-644的一组六个CDR(HCDR1-HCDR2-HCDR3-LCDR1-LCDR2-LCDR3)以及重链Fc中的H435R突变和Y436F突变和轻链中的C103S突变，所述抗蛋白A抗体或其抗原结合片段缀合至具有以下结构的化合物：
Figure BDA0003124860200002731
在一种实施方案中，本公开内容的抗体-药物缀合物包含抗蛋白A抗体或其抗原结合片段，该抗蛋白A抗体或其抗原结合片段包含含有SEQ ID NO:632-634-636-640-642-644的一组六个CDR(HCDR1-HCDR2-HCDR3-LCDR1-LCDR2-LCDR3)以及重链Fc中的H435R突变和Y436F突变和轻链中的C103S突变，所述抗蛋白A抗体或其抗原结合片段缀合至具有以下结构的化合物：
Figure BDA0003124860200002732
在一种实施方案中，抗蛋白A抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO:630的HCVR氨基酸序列；和SEQ ID NO:638的LCVR氨基酸序列。
在一种实施方案中，抗蛋白A抗体包含SEQ ID NO:666的重链氨基酸序列和SEQ IDNO:668轻链氨基酸序列。
表位作图及相关技术
包含本公开内容的抗体的抗体-药物缀合物结合的表位可以由位于抗原(例如，MSR1蛋白或蛋白A)(例如结构域中的线性表位)内的单个连续的3个或更多个(例如，3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个、11个、12个、13个、14个、15个、16个、17个、18个、19个、20个或更多个)氨基酸的序列组成。可选择地，表位可以由MSR1的多于一个非连续氨基酸(或氨基酸序列)组成。在一些实施方案中，表位位于MSR1的修饰的LDL结合结构域上或附近。在其他实施方案中，表位位于MSR1的修饰的LDL结合结构域的外部，例如，在MSR1的表面上的一个位置，在该位置，当抗体结合至这样的表位时，抗体不干扰修饰的LDL结合至抗原(例如，构象表位)。
本领域普通技术人员已知的多种技术可以用于确定抗体是否“与多肽或蛋白质中的一个或更多个氨基酸相互作用”。示例性的技术包括，例如，常规的交叉阻断测定，诸如在Antibodies,Harlow and Lane(Cold Spring Harbor Press,Cold Spring Harb.,NY)中描述的，丙氨酸扫描突变分析、肽印迹分析(Reineke,2004,Methods Mol Biol 248:443-463)和肽裂解分析。此外，可以使用诸如抗原的表位切除、表位提取和化学修饰的方法(Tomer,2000,Protein Science 9:487-496)。另一种可以用于鉴定多肽中与抗体相互作用的氨基酸的方法是通过质谱法检测的氢/氘交换。一般来说，氢/氘交换方法包括氘标记感兴趣的蛋白质，然后将抗体结合至氘标记的蛋白质。接下来，将蛋白质/抗体复合物转移到水中，允许氢-氘交换发生在除了被抗体保护的残基(其保持氘标记)之外的所有残基处。在抗体解离之后，对靶蛋白进行蛋白酶裂解和质谱法分析，从而揭示对应于与抗体相互作用的特定氨基酸的氘标记的残基。参见，例如Ehring(1999)Analytical Biochemistry267(2):252-259；Engen和Smith(2001)Anal.Chem.73:256A-265A。
实施方案包括包含抗MSR1抗体的抗体-药物缀合物，所述抗MSR1抗体与本文描述的任何特定示例性抗体(例如，包含如本文的表9中列出的任何氨基酸序列的抗MSR1抗体；包含如本文的表2A和表2B中列出的任何氨基酸序列的抗WTA抗体；或包含如本文的表3A中列出的任何氨基酸序列的抗蛋白A抗体)结合相同的表位。同样地，实施方案还包括包含抗MSR1抗体的抗体-药物缀合物，所述抗MSR1抗体与本文描述的任何特定示例性抗体(例如，包含如本文的表9中列出的任何氨基酸序列的抗MSR1抗体；包含如本文的表2A和表2B中列出的任何氨基酸序列的抗WTA抗体；或包含如本文的表3A中列出的任何氨基酸序列的抗蛋白A抗体)竞争结合相同的表位。
通过使用本领域已知的且例如在实施例29中例示的常规方法，人们可以容易地确定抗体是否与参考抗体结合相同的表位，或者与参考抗体竞争结合相同的表位。例如，为了确定测试抗体是否与本文公开的参考抗MSR1抗体结合相同的表位，允许参考抗体结合MSR1蛋白。接下来，评估测试抗体结合MSR1分子的能力。如果在参考抗MSR1抗体饱和结合后测试抗体能够结合MSR1，则可以得出结论，即测试抗体与参考抗MSR1抗体结合不同的表位。在另一方面，如果在参考抗MSR1抗体饱和结合后测试抗体不能结合MSR1分子，则测试抗体可以结合与本公开内容的参考抗MSR1抗体结合的表位相同的表位。然后可以进行另外的常规实验(例如，肽突变和结合分析)，以确认观察到的测试抗体结合的缺乏是否实际上是由于与参考抗体结合相同的表位，或者空间阻断(或另一种现象)是否是观察到的结合缺乏的原因。该类型的实验可以使用ELISA、RIA、Biacore、流式细胞术或本领域可得的任何其他定量或定性抗体结合测定来进行。根据本公开内容的某些实施方案，如果如在竞争结合测定(参见，例如Junghans等人,Cancer Res.1990:50:1495-1502)中测量的，1、5、10、20或100倍过量的一种抗体将另一种抗体的结合抑制至少50％，但优选地75％、90％或甚至99％，则两种抗体结合相同(或重叠)的表位。可选择地，如果抗原中减少或消除一种抗体的结合的基本上所有的氨基酸突变减少或消除另一种抗体的结合，则两种抗体被认为结合相同的表位。如果减少或消除一种抗体的结合的仅氨基酸突变的子集减少或消除另一种抗体的结合，则两种抗体被认为具有“重叠表位”。
例如，为了确定抗体是否与参考抗MSR1抗体竞争结合(或交叉竞争结合)，上文描述的结合方法在两个方向上进行。在第一个方向上，允许参考抗体在饱和条件下结合MSR1蛋白，然后评估测试抗体与MSR1分子的结合。在第二个方向上，允许测试抗体在饱和条件下结合MSR1分子，然后评估参考抗体与MSR1分子的结合。如果在两个方向上，只有第一个(饱和)抗体能够结合MSR1分子，那么可以得出结论，即测试抗体和参考抗体竞争结合MSR1。如本领域普通技术人员将理解的，与参考抗体竞争结合的抗体可能不一定与参考抗体结合相同的表位，而是可以通过结合重叠或相邻的表位在空间上阻断参考抗体的结合。
适合于ADC的人抗体的制备
用于本文公开的抗体-药物缀合物的合适抗体可以是完全人抗体。用于产生包括完全人单克隆抗体在内的单克隆抗体的方法是本领域已知的。在本公开内容的上下文中，可以使用任何这样的已知方法来制备特异性地结合靶抗原的人抗体，所述靶抗原诸如感染性疾病相关靶(例如，MSR1、WTA或蛋白A)。
例如，使用VELOCIMMUNETM技术或用于产生完全人单克隆抗体的任何其他类似的已知方法，针对MSR1的高亲和力嵌合抗体最初被分离，具有人可变区和小鼠恒定区。如下文的实验部分中，对抗体进行表征并选择所需的特性，包括亲和力、配体阻断活性、选择性、表位等。如果需要，将小鼠恒定区替换为所需的人恒定区，例如野生型或修饰的IgG1或IgG4，以产生完全人抗体。虽然选择的恒定区可以根据具体用途而变化，但高亲和力抗原结合和靶特异性特征存在于可变区。在某些情况下，完全人抗体直接从抗原阳性B细胞中分离。
生物等效性
包含本文公开的抗体和抗体片段的抗体-药物缀合物包括具有不同于所描述的抗体的氨基酸序列，但保留了结合靶抗原诸如感染性疾病相关靶(例如，MSR1、WTA或蛋白质A)的能力的蛋白质。当与亲本序列相比时，这样的变体抗体和抗体片段包含一个或更多个氨基酸的添加、缺失或取代，但呈现出与所描述的抗体基本上等效的生物活性。同样地，本文公开的编码抗体的DNA序列包括与所公开的序列相比包含一个或更多个核苷酸的添加、缺失或取代的序列，但是所述DNA序列编码与本文公开的抗体或抗体片段基本上生物等效的抗体或抗体片段。在上文讨论了这样的变体氨基酸和DNA序列的实例。
例如如果两种抗原结合蛋白或抗体是药物等效物或药物替代物，则它们被认为是生物等效的，当在相似的实验条件下以相同的摩尔剂量施用时，无论是单剂量还是多剂量，它们的吸收速率和吸收程度都没有显示出显著差异。如果一些抗体在吸收程度上是等效的但在吸收速率上不是等效的，则它们将被认为是等效物或药物替代物，但是还可以被认为是生物等效的，因为吸收速率的这样的差异是有意的并在标签上反映，对于例如长期使用时达到有效的体内药物浓度不是必需的，并且对于所研究的特定药物产品，被认为是医学上不显著的。
在一种实施方案中，如果两种抗原结合蛋白的安全性、纯度和效力没有临床上有意义上的差异，则它们是生物等效的。
在一种实施方案中，如果患者可以在参考产品和生物产品之间切换一次或更多次，而与在没有这样的切换的情况下的持续治疗相比，副作用的风险没有预期的增加，包括免疫原性的临床上显著的变化或降低的有效性，则两种抗原结合蛋白是生物等效的。
在一种实施方案中，如果两种抗原结合蛋白均通过一种或更多种共同的作用机制对一种或更多种使用条件起作用，则两种抗原结合蛋白是生物等效的，在某种程度上这样的机制是已知的。
生物等效性可以通过体内和体外方法来证明。生物等效性测量包括，例如，(a)在人类或其他哺乳动物中的体内测试，其中抗体或其代谢物的浓度在血液、血浆、血清或其他生物流体中作为时间的函数被测量；(b)与人类体内生物利用度数据相关并可合理预测人类体内生物利用度数据的体外测试；(c)在人类或其他哺乳动物中的体内测试，其中抗体(或其靶)的适当急性药理作用作为时间的函数被测量；和(d)在建立抗体的安全性、功效或生物利用度或生物等效性的良好控制的临床试验中。
适合于本文公开的抗体-药物缀合物的抗体的生物等效变体可以通过例如进行残基或序列的各种取代或使对生物活性不必需的末端或内部的残基或序列缺失来构建。例如，对生物活性不必需的半胱氨酸残基可以被缺失或被其他氨基酸取代，以防止复性时形成不必要或不正确的分子内二硫桥。在其他情况下，生物等效抗体可以包括包含氨基酸变化(例如消除或去除糖基化的突变)的抗体变体，所述氨基酸变化改变抗体的糖基化特性。
物种选择性和物种交叉反应性
根据某些实施方案，本文提供了抗体-药物缀合物，其包含与人MSR1结合但不与来自其他物种的MSR1结合的抗MSR1抗体。实施方案还包括抗体-药物缀合物，其包含与人MSR1和来自一种或更多种非人类物种的MSR1结合的抗MSR1抗体。例如，包含本文公开的抗MSR1抗体的抗体-药物缀合物可以结合人MSR1，并且可以结合或可以不结合(视情况而定)小鼠、大鼠、豚鼠、仓鼠、沙鼠、猪、猫、狗、兔、山羊、绵羊、牛、马、骆驼、食蟹猴、狨猴、恒河猴或黑猩猩中的一种或更多种的MSR1。根据某些示例性实施方案，提供了包含抗MSR1抗体的抗体-药物缀合物，其特异性地结合人MSR1和食蟹猴(cynomolgus monkey)(例如，食蟹猴(Macacafascicularis))MSR1。包含本文公开的抗MSR1抗体的其他抗体-药物缀合物结合人MSR1，但不结合或仅弱结合食蟹猴MSR1。
多特异性抗体
适合于本文公开的抗体-药物缀合物的抗体可以是单特异性的或多特异性的(例如，双特异性的)。多特异性抗体对一种靶多肽的不同表位可以是特异性的，或者可以包含对多于一种靶多肽特异的抗原结合结构域。参见，例如Tutt等人,1991,J.Immunol.147:60-69；Kufer等人,2004,Trends Biotechnol.22:238-244。本文公开的抗体可以连接至另一种功能性分子例如另一种肽或蛋白质或者与另一种功能性分子例如另一种肽或蛋白质共表达。例如，抗体或其片段可以(例如，通过化学偶联、基因融合、非共价缔合或以其他方式)功能连接至一个或更多个其他分子实体，诸如另一种抗体或抗体片段，以产生具有第二结合特异性的双特异性抗体或多特异性抗体。
实施方案包括包含双特异性抗体的抗体-药物缀合物，其中免疫球蛋白的一个臂结合第一抗原，并且免疫球蛋白的另一个臂对第二抗原特异。抗原可以是感染性疾病相关靶。作为非限制性实例，抗体-药物缀合物可以包含双特异性抗体，其中免疫球蛋白的一个臂结合人MSR1，并且免疫球蛋白的另一个臂对WTA或蛋白A特异。作为另一个非限制性实例，抗体-药物缀合物可以包含双特异性抗体，其中免疫球蛋白的一个臂结合WTA，并且免疫球蛋白的另一个臂对蛋白A特异。
例如，结合MSR1的臂可以包括如本文的表9中列出的任何HCVR/LCVR或CDR氨基酸序列。在某些实施方案中，结合MSR1的臂结合人MSR1并阻断修饰的LDL与MSR1的结合。在其他实施方案中，结合MSR1的臂结合人MSR1，但不阻断修饰的LDL与MSR1的结合。在一些实施方案中，结合MSR1的臂结合人MSR1并活化MSR1信号传导。在其他实施方案中，结合MSR1的臂阻断MSR1介导的受体刺激。实施方案还包括双特异性抗体，其中抗体的一个臂结合人MSR1的第一表位，并且所述抗体的另一个臂结合人MSR1的不同的第二表位。
可以在根据本公开内容的抗体-药物缀合物的上下文中使用的示例性双特异性抗体形式包括使用第一免疫球蛋白(Ig)CH3结构域和第二Ig CH3结构域，其中第一Ig CH3结构域和第二Ig CH3结构域彼此相差至少一个氨基酸，并且其中与缺乏所述氨基酸差异的双特异性抗体相比，至少一个氨基酸差异降低了双特异性抗体与蛋白质A的结合。在一种实施方案中，第一Ig CH3结构域结合蛋白A，并且第二Ig CH3结构域包含减少或消除蛋白A结合的突变，诸如H95R修饰(通过IMGT外显子编号；通过EU编号为H435R)。第二CH3还可以包括Y96F修饰(通过IMGT；通过EU为Y436F)。可以在第二CH3中发现的另外的修饰包括：在IgG1抗体的情况下，D16E、L18M、N44S、K52N、V57M和V82I(通过IMGT；通过EU为D356E、L358M、N384S、K392N、V397M和V422I)；在IgG2抗体的情况下，N44S、K52N和V82I(IMGT；通过EU为N384S、K392N和V422I)；以及在IgG4抗体的情况下，Q15R、N44S、K52N、V57M、R69K、E79Q和V82I(通过IMGT；通过EU为Q355R、N384S、K392N、V397M、R409K、E419Q和V422I)。上文描述的双特异性抗体形式的变化预期在本公开内容的范围内。
可以在本公开内容的上下文中使用的其他示例性双特异性形式包括但不限于例如，基于scFv的双特异性形式或双抗体双特异性形式、IgG-scFv融合物、双重可变结构域(DVD)-Ig、Quadroma、柞适配臼(knobs-into-holes)、普通轻链(例如，带有柞适配臼的普通轻链等)、CrossMab、CrossFab、(SEED)体、亮氨酸拉链、Duobody、IgG1/IgG2、双重作用Fab(DAF)-IgG，和Mab2双特异性形式(参见，例如Klein等人.2012,mAbs 4:6,1-11，以及其中引用的参考文献，前述形式的综述)。双特异性抗体还可以使用例如肽/核酸缀合来构建，其中具有正交化学反应性的非天然氨基酸用于产生位点特异性抗体-寡核苷酸缀合物，然后该缀合物自组装成具有确定组成、化合价和几何形状的多聚体复合物。(参见，例如Kazane等人,J.Am.Chem.Soc.[Epub:Dec.4,2012])。
组合治疗
在任何以上方法的一种实施方案中，方法还包括施用第二治疗剂。
在一种实施方案中，第二治疗剂是第二抗生素。
在一种实施方案中，第二治疗剂是抗生素，包括通常针对金黄色葡萄球菌和/或特别地MRSA的抗生素。
在一种实施方案中，第二治疗剂是选自氨基糖苷、β-内酰胺、大环内酯、环肽、四环素、氟喹啉、氟喹诺酮和噁唑烷酮的第二抗生素。
在一种实施方案中，第二治疗剂是选自克林霉素、新生霉素、瑞他莫林、达托霉素、西他沙星、替考拉宁、三氯生、萘啶酮、雷德唑胺、多柔比星、氨苄西林、万古霉素、亚胺培南、多利培南、吉西他滨、达巴万星和阿奇霉素的第二抗生素。
实施方案包括包含与一种或更多种另外的治疗活性组分组合的本文描述的任何抗体或ADC的组合物和治疗制剂，以及治疗方法，该方法包括向有相应需要的受试者施用此类组合。
本文公开的抗体或ADC可以与一种或更多种另外的治疗活性组分共同配制和/或与一种或更多种另外的治疗活性组分组合施用，所述治疗活性组分选自由以下组成的组：细胞因子抑制剂，包括小分子细胞因子抑制剂以及结合细胞因子诸如IL-1、IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6,IL-8、IL-9、IL-11、IL-12、IL-13、IL-17、IL-18或它们各自的受体的抗体。
本文公开的抗体或ADC也可以与抗炎剂、免疫调节剂、镇痛药、皮质类固醇、类固醇、抗氧化剂、COX抑制剂、心脏保护剂、金属螯合剂、IFN-γ和/或NSAID组合施用和/或共同配制。在一些实施方案中，抗体或ADC可以与抗PCSK9抗体、抗ANGPTL3抗体、他汀类、依泽替米贝和其他降脂治疗剂组合施用和/或共同配制。
另外的治疗活性组分，例如上文列出的任何剂或其衍生物，可以在施用本文公开的抗体或ADC之前、同时或之后不久施用；(为了本公开内容的目的，这样的施用方案被认为是与另外的治疗活性组分组合的抗体或ADC的施用)。实施方案包括药物组合物，其中本文公开的抗体或ADC与如本文别处描述的一种或更多种另外的治疗活性组分共同配制。
实施例
以下实施例说明了本说明书的具体方面。实施例不应被解释为限制性的，因为实施例仅仅提供了对实施方案及其各个方面的具体理解和实践。
如本文使用的，除非另外相反指定，否则本文的工艺和实施例中使用的符号和惯例与当代科学文献中使用的那些一致，当代科学文献例如美国化学学会杂志(Journal ofthe American Chemical Society)或生物化学杂志(Journal of BiologicalChemistry)。具体地，但非限制性地，在实施例和整个说明书中可以使用以下缩写：
Figure BDA0003124860200002811
Figure BDA0003124860200002821
Figure BDA0003124860200002831
如本文使用的，这些工艺、方案和实例中使用的符号和惯例，无论是否具体定义了特定的缩写，都与当代科学文献中使用的那些一致，当代科学文献例如美国化学学会杂志或生物化学杂志。
一般方法
所有使用的溶剂都是从Sigma Aldrich或Fisher Scientific购买的，并且在不进一步纯化的情况下使用。利福霉素S购自Bosche Scientific。在Varian Inova 300MHz和500MHz NMR仪器上记录1H-NMR光谱。化学位移(δ)以相对于用于分析的NMR溶剂的ppm报告，并且被报告为s-单峰、d-双重峰、t-三重峰、q-四重峰、dd-双重峰的双重峰、dt-三重峰的双重峰、dq-四重峰的双重峰和m-多重峰。耦合常数(J)以赫兹(Hz)报告。色谱纯度在Agilent1100、1260Infinity或1200系列LC/MS系统上确定，使用
Figure BDA0003124860200002832
FastGradient RP-18e分析柱(50×2mm，Merck KGaA，P/N1.52007.0001)和以下分析HPLC方法：注射体积5μL或10μL；流量1mL/min；含5％-95％乙腈的水，经4min；在λ＝254nm的Agilent二极管阵列检测器；室温。使用电喷雾电离源在Agilent系统上进行低分辨率质谱法，并且使用单四极杆或离子阱质量检测器进行分析。
实施例1：根据本公开内容的类似物1a-1d的合成
下文的方案1描绘了根据本公开内容的示例性化合物1a-1d从商业上可得的起始材料的合成。
Figure BDA0003124860200002841
实施例1A：利福霉素4-MeO-苯酚类似物(1a)：
实施例1的一般偶联程序被用于制备标题化合物：在室温，向利福霉素S(200mg，0.287mmol)在15mL的甲苯中的在氩气下的搅拌溶液中添加2-氨基-5-甲氧基苯酚(44mg，0.316mmol)。将混合物溶液在室温搅拌持续3天。通过LC/MS监测反应进程，然后将混合物蒸发至干燥。将深色残余物溶解在10mL的乙醇中，并且将100mg(1.14mmol)的氧化锰(MnO2)一次性添加至乙醇溶液。将滞流混合物在室温搅拌持续15h。在使用硅藻土垫过滤不溶性材料之后，将滤液在减压下蒸发。深色残余物经由ISCO(梯度洗脱：5％→95％EA于己烷中)在40gHP硅胶Gold RediSep柱上纯化，并且将纯级分蒸发并在真空中干燥，给出作为暗红色固体的标题化合物1a(85mg，37％)。MS(ESI,+)：C44H50N2O13的计算值814.33；实测值815.3(M+H)，837.3(M+Na)。1H NMR(500MHz；CDCl3)δ7.96(d,J＝9.0Hz,1H),7.47(s,1H),7.05-7.01(m,2H),6.86(s,1H),5.99(s,2H),4.97(dd,J＝12.4,7.4Hz,2H),3.93(s,3H),3.08(s,3H),3.00-2.99(m,1H),2.30(s,3H),2.13(s,3H),2.03(d,J＝18.1Hz,3H),1.81(s,3H),1.70-1.67(m,1H),1.59-1.54(m,16H),1.53(s,3H),0.96-0.95(m,3H)。
实施例1B：利福霉素4-BnO-苯酚类似物(1b)：
类似物1b使用中间体2来制备，中间体2的合成在下文方案2中描绘。
Figure BDA0003124860200002842
化合物2的合成。用1.2g的NaOH在6mL的水中的溶液处理6-(苄氧基)苯并[d]噁唑-2(3H)-酮(500mg，2.07mmol)和甲醇(6mL)的混合物。将悬浮液在90℃加热过夜。在室温冷却之后，将混合物用6N HCl(5mL)处理，然后过滤。用饱和NaHCO3水溶液调节滤液以提供pH＝8-9，并且将沉淀物过滤，用水洗涤以给出深色固体，该深色固体通过40g HP硅胶GoldRediSep柱(0％→90％EA于己烷中)纯化，以提供220mg(49％)的化合物2。MS(ESI,+)：C13H13NO2的计算值，215.09；实测值216.1(M+H)。1H NMR(500MHz；DMSO-d6)δ7.39-7.37(m,5H),7.31(d,J＝7.0Hz,1H),6.49(d,J＝8.4Hz,1H),6.37(d,J＝2.7Hz,1H),6.25(dd,J＝8.4,2.7Hz,1H),4.91(s,2H)。
类似物1b的合成。在室温，用2-氨基-5-(苄氧基)苯酚2(6.8mg，0.0316mmol)处理利福霉素S(20mg，0.0287mmol)在1mL的甲苯中的在氩气下的搅拌溶液。将溶液在室温搅拌持续3天，并且添加另外的2-氨基-5-(苄氧基)苯酚(6.8mg)。通过LC/MS监测反应进程。在5天之后，将混合物蒸发至干燥。将深色残余物溶解在3.5mL的乙醇中，并且将10mg(0.11mmol)的氧化锰(MnO2)一次性添加至乙醇溶液。将滞流混合物在室温搅拌持续3h。在使用硅藻土垫过滤不溶性材料之后，将滤液在减压下蒸发。深色残余物经由ISCO(梯度洗脱：5％→98％EA于己烷中)在24g HP硅胶Gold RediSep柱上纯化，并且将纯级分蒸发并在真空中干燥，给出作为暗红色固体的标题化合物1b(8.5mg，33％)。MS(ESI,+)：C50H54N2O13的计算值890.36；实测值891.3(M+H)。1H NMR(500MHz；CDCl3)δ7.97(s,1H),7.49(s,1H),7.44-7.41(m,5H),7.14-7.11(m,2H),7.07(s,1H),6.94(s,1H),5.32(s,1H),5.23(s,1H),5.18(d,J＝11.9Hz,2H),4.99(s,2H),3.11(s,3H),3.04(dd,J＝2.0,0.6Hz,1H),2.32(s,3H),2.07(s,6H),1.83(s,3H),1.71-1.69(m,1H),1.61(d,J＝0.4Hz,9H),1.58—1.52(m,6H),1.28(s,1H),0.97(td,J＝1.9,1.2Hz,3H),0.79(t,J＝0.8Hz,1H)。
实施例1C：利福霉素4-OH-苯酚类似物(1c)：
类似物1c使用中间体4来制备，中间体4的合成在下文方案3中描绘。
Figure BDA0003124860200002861
2-氨基-5-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)苯酚(4)：
化合物3的合成。化合物8由实施例1B中的产物来制备。向3-苄氧基-4-硝基苯酚8(400mg，1.63mmol)在DMF(2mL)中的在氩气下的溶液中添加TBSCl(0.247mL，2.44mmol)、咪唑(222mg，3.26mmol)和DMAP(0.5mg)。将混合物在室温搅拌过夜，然后用乙酸乙酯(25mL)稀释，用水(2×10mL)、盐水溶液(10mL)洗涤，并且经硫酸钠干燥。粗制产物经由ISCO(梯度洗脱：0％→20％EA于己烷中)通过40g HP硅胶Gold RediSep柱纯化，并且蒸发纯级分，以提供期望的化合物3(540mg，92％)。MS(ESI,+)：C19H25N2O4Si的计算值359.16；实测值382.1(M+Na)。
化合物4的合成。向化合物3(120mg，0.33mmol)在3mL的甲醇(用氩气脱气三次)中的在氩气下的溶液中添加10％Pd/C(10mg)。将混合物再次脱气，并且用来自气球的氢气鼓泡。将氢气球插入隔片，并且将混合物老化过夜。将混合物通过硅藻土过滤并且浓缩以给出深绿色固体(71mg，90％)。MS(ESI,+)：C12H21NO2Si的计算值239.13；实测值240.2(M+H)。
类似物1c的合成。在室温，向利福霉素S(120mg,0.172mmol)在10mL的甲苯中的在氩气下的搅拌溶液中添加化合物4(46mg，0.192mmol)。将混合物溶液在室温搅拌持续3天。通过LC/MS监测反应进程，然后将混合物蒸发至干燥。将深色残余物溶解在10mL的乙醇中，并且将50mg(0.6mmol)的氧化锰(MnO2)一次性添加至乙醇溶液。将滞流混合物在室温搅拌持续12h。在使用硅藻土垫过滤不溶性材料之后，将滤液在减压下蒸发。深色残余物经由ISCO(梯度洗脱：5％→95％EA于己烷中)在24g HP硅胶Gold RediSep柱上纯化。将纯级分蒸发并且在真空中干燥，给出作为暗红色固体的标题化合物1c(48mg，35％)。MS：C43H48N2O13的计算值800.32；实测值801.3(M+H)，799.2(M-H)。1H NMR(500MHz；DMSO-d6)δ11.43(d,J＝1.7Hz,1H),9.33-9.32(m,1H),7.82(dt,J＝2.0,1.0Hz,1H),7.02-7.01(m,1H),6.89(t,J＝1.3Hz,1H),6.04(dd,J＝2.5,0.9Hz,1H),5.83(dt,J＝1.9,1.0Hz,1H),5.25-5.24(m,1H),4.78-4.77(m,1H),4.14-4.14(m,1H),3.52(d,J＝0.8Hz,1H),3.07(d,J＝0.7Hz,1H),3.03(t,J＝0.6Hz,3H),2.89(s,1H),2.78(t,J＝2.7Hz,1H),2.19(d,J＝16.7Hz,3H),1.99(d,J＝12.2Hz,4H),1.95(t,J＝0.5Hz,4H),1.67(d,J＝1.9Hz,3H),1.24(s,2H),0.89(dd,J＝2.5,1.1Hz,2H),0.85(d,J＝6.5Hz,6H),0.69(d,J＝1.5Hz,3H)。
Figure BDA0003124860200002871
实施例1D：利福霉素4-OH-苯酚N-甲基类似物(1d)：
类似物1d使用中间体7来制备，中间体7的合成在下文方案4中描绘。
Figure BDA0003124860200002872
5-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-N1-甲基苯-1,2-二胺(7)：
化合物5的合成。标题化合物使用在PTC国际申请2008051805中公开的方法来制备。将3-氟-4-硝基苯酚(1g，6.36mmol)和2mL的40％甲胺水溶液的混合物置于密封管中。将烧瓶经由隔膜密封，用氩气吹扫，并且在油浴中在80℃加热持续18h。反应基于LCMS分析完成，并且冷却至室温。通过添加水(15mL-20mL)溶解溶液，并且使用乙酸乙酯(3×30mL)萃取。然后将合并的有机层用水、盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，并且然后浓缩以给出粗制产物，即5的棕白色固体(900mg，84％)，其在不进一步纯化的情况下用于下一步。MS(ESI,+)：C7H8N2O3的计算值168.05；实测值169.1(M+H)。
化合物6的合成。在氩气下，在催化DMAP(0.7mg)存在的情况下，将3-(甲基氨基)-4-硝基苯酚5(200mg，1.19mmol)和咪唑(162mg，2.38mmol)溶解在无水DMF中。将搅拌的黄色溶液在冰浴中冷却，并且向黄色溶液中一次性添加TBSCl(269mg，1.79mmol)。在5min之后，移除水浴，并且允许溶液升温至室温过夜。将混合物通过饱和NaHCO3溶液猝灭，并且用乙酸乙酯(2×25mL)萃取。将合并的有机物通过添加Na2SO4干燥，并且然后浓缩以给出粗制产物。残余物经由ISCO(梯度洗脱：0％→90％EA于己烷中)在24g HP硅胶Gold RediSep柱上纯化，并且将纯级分蒸发然后在真空中干燥，给出作为黄色固体的标题化合物6(220mg，66％)。MS：C13H22N2O3Si的计算值282.14；实测值283.1(M+H)。
化合物7的合成。在氩气下，将5-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-N1-甲基苯-1,2-二胺6(50mg，0.177mmol)溶解在2mL的甲醇中。将溶液用氩气脱气三次，随后添加Pd/C(5mg)。将混合物用氩气进一步脱气，并且经由隔膜与氢气球连接。在2.5h之后，通过LC/MS对过程中等分试样的分析指示反应完成。将混合物通过硅藻土过滤并且浓缩，以定量提供46mg的化合物7，其在不进一步纯化的情况下立即用于下一步。MS：C13H24N2OSi的计算值252.17；实测值253.2(M+H)。
类似物1d的合成。在室温，向利福霉素S(58mg,0.083mmol)在3mL的甲苯中的在氩气下的搅拌溶液中添加化合物7(21mg，0.083mmol)。将溶液在室温搅拌持续2天。通过LC/MS监测反应进程，然后将溶液蒸发至干燥。将深色残余物溶解在5mL的乙醇中，并且将10mg的氧化锰(MnO2)一次性添加至乙醇溶液。将滞流混合物在室温搅拌持续12h。在使用硅藻土垫过滤不溶性材料之后，将滤液在减压下蒸发。深色残余物经由ISCO(梯度洗脱：5％→95％EA于己烷中)在12g HP硅胶Gold RediSep柱上纯化，并且将纯级分蒸发然后在真空中干燥，给出作为暗红色固体的标题化合物1d(22.3mg，33％)。通过LC/MS发现其不纯，因此将其溶解在MeCN/水中，并且在15.5g C18 Aq Gold柱上重新纯化(梯度洗脱：10％-95％MeCN于水中，两者中含0.05％乙酸，经20min)。将产物级分合并，在干冰上冷冻，并且冻干，给出作为白色固体的标题化合物1d(13.5mg，20％)。MS：C44H51N3O12的计算值813.35；实测值814.3(M+H)，812.3(M-H)。1H NMR(500MHz；DMSO-d6)δ11.31(b,J＝0.8Hz,2H),9.41(s,1H),9.22(s,1H),8.86(s,1H),8.01-7.95(m,2H),7.19-7.13(m,2H),7.04(s,2H),6.79-6.74(m,1H),6.39-6.37(m,1H),6.19(t,J＝11.4Hz,2H),6.08(d,J＝12.4Hz,1H),6.02-5.92(m,1H),5.73(d,J＝26.4Hz,1H),5.49(d,J＝11.2Hz,1H),5.28(d,J＝0.6Hz,1H),5.09-5.02(m,2H),4.82(dd,J＝11.5,10.2Hz,1H),4.54(d,J＝6.6Hz,1H),4.36(d,J＝2.6Hz,1H),3.96(d,J＝4.4Hz,1H),3.88(s,1H),3.83(s,1H),3.79(s,1H),3.70(s,1H),3.09(s,1H),2.91(s,3H),2.21(s,3H),2.15(d,J＝5.9Hz,1H),1.97(s,2H),1.72(s,2H),1.64(s,2H),1.59(s,2H),0.90(d,J＝7.0Hz,1H),0.70(d,J＝6.6Hz,1H),0.62(d,J＝6.8Hz,1H),0.20-0.18(m,1H),0.07(d,J＝0.7Hz,1H)。
Figure BDA0003124860200002891
实施例2：根据本公开内容的类似物14的合成
利福霉素类似物14如下文方案5所示并且如下文描述由利福霉素S合成。
Figure BDA0003124860200002892
实施例2A：化合物(10和13)的制备：
中间体10和13根据下文示出的方案6来制备。
Figure BDA0003124860200002901
化合物8的合成。使用Otten等人报告的略微改变的方法制备标题化合物(Bioconjugate Chem.2001,12,76-83)。向3-氟-4-硝基苯酚(2.09g，8.45mmol)在DMSO(10mL)中的溶液中添加1M NaOH(10mL)，并且在加热块上加热至80℃持续18h。反应基于LCMS完成，并且冷却至室温。用1M HCl(15mL-20mL)酸化反应，直至pH＝3-4，并且将得到的溶液使用乙酸乙酯(3×30mL)萃取。合并的有机层用水、盐水洗涤，干燥(Na2SO4)并且在真空中浓缩。粗制油然后经由ISCO(梯度洗脱：0％→100％乙酸乙酯于己烷中)在80g HP硅胶Gold RediSep柱上纯化，并且将纯级分蒸发然后在真空中干燥，给出作为黄白色固体的标题化合物8(1.51g，73％)。MS(ESI,+)：C13H11NO4的计算值245.1；实测值268.1(M+Na)，244.1(M-H)。
化合物9的合成。在室温，向化合物8(1.51g，6.157mmol)在THF(16mL)中的在氩气下的搅拌溶液中添加BOC-哌啶-4-醇(1.61g，8.005mmol)和PPh3(2.91g，11.083mmol)。将DBAD(2.55g，11.083mmol)在THF(9mL)中的溶液逐滴添加至反应混合物。在搅拌持续16h之后，将混合物蒸发至干燥，并且将残余物经由ISCO(梯度洗脱：0％→100％乙酸乙酯于己烷中)在40g HP硅胶Gold RediSep柱上纯化，并且将纯级分蒸发然后在真空中干燥，给出作为黄白色固体的标题化合物9(2.41g，91％)。MS：C23H28N2O6的计算值428.2；实测值451.1(M+Na)。
化合物10的合成。向化合物9(100mg，0.233mmol)在3mL的甲醇中的在氩气下的脱气溶液中添加5mg的10％Pd/C。将混合物进一步脱气并且连接至氢气球。在2.5h之后，通过LC/MS对过程中等分试样的分析指示反应完成。将混合物通过硅藻土过滤并且浓缩，以定量提供75mg的化合物10，其在不进一步纯化的情况下立即用于下一步。MS：C16H24N2O4的计算值308.17；实测值331.2(M+Na)，307.1(M-H)。
化合物11的合成。向化合物9(1100mg，2.561mmol)在1,4-二氧六环(15mL)中的溶液中添加在1,4-二氧六环(5mL)中的4M HCl。在搅拌持续15h之后，过程中等分试样指示反应完成。向溶液中添加乙醚(50mL)，然后将混合物剧烈搅拌持续1h，直到形成白色沉淀。将固体过滤并且用乙醚洗涤，以提供11的HCl盐。向白色固体中添加EtOAc(10mL)和饱和NaHCO3(15mL)，直到pH＝8-9，并且搅拌持续15min。将两层分离，并且水层用EtOAc(3×30mL)萃取。将合并的有机层干燥(Na2SO4)并且在真空中浓缩以给出化合物11(372mg，44％)，其在不进一步纯化的情况下立即用于下一步。MS：C18H21N2O4的计算值328.1；实测值329.1(M+H)。
化合物12的合成。向化合物11(372mg，1.128mmol)在1,4-二氧六环/水(v/v，10:1，11mL)中的在氩气下的溶液中添加Fmoc-OSu(399mg，1.184mmol)。在搅拌持续15h之后，过程中LC/MS分析指示反应完成。将反应混合物在真空中浓缩，以给出化合物12，其在不进一步纯化的情况下立即用于下一步。MS：C33H30N2O6的计算值550.2；实测值551.2(M+H)。
化合物13的合成。向化合物12(72mg，0.131mmol)在2mL的甲醇中的在氩气下且用氩气脱气的溶液中添加9mg的10％Pd/C。将混合物用氩气进一步脱气，并且与氢气球连接。在45min之后，通过LC/MS对过程中等分试样的分析指示反应完成。将混合物通过硅藻土过滤并且在真空中浓缩，以定量提供55mg的化合物13，其在不进一步纯化的情况下立即用于下一步。MS：C26H26N2O4的计算值430.1；实测值431.2(M+H)。
实施例2B：从中间体10制备类似物14
化合物14-Boc的合成：在室温，向利福霉素S(100mg，0.143mmol)在5mL的甲苯中的搅拌溶液中添加化合物10(44mg，0.143mmol)。将混合物溶液在室温搅拌持续4天。通过LC/MS监测反应进程直到完成，然后将混合物蒸发至干燥。将深色残余物溶解在10mL的乙醇中，并且将62mg(0.715mmol)的氧化锰(MnO2)一次性添加至乙醇溶液。将滞流混合物在室温搅拌持续15h。在使用硅藻土垫过滤不溶性材料之后，将滤液在减压下蒸发。深色残余物经由ISCO(梯度洗脱：5％→95％乙酸乙酯于己烷中)在12g HP硅胶Gold RediSep柱上纯化。在减压下浓缩之后，粗制产物(约85％纯)在50g C18 Aq Gold柱上重新纯化(梯度洗脱：10％-95％MeCN于水中，两者中含0.05％乙酸)。将纯级分合并，在干冰上冷冻，并且冻干，以提供作为暗红色固体的14-Boc(36mg，26％)。MS：C53H65N3O15的计算值983.44；实测值984.4(M+H)。
Figure BDA0003124860200002921
化合物14的合成：将14-Boc(30mg，0.03mmol)在室温用TFA/乙腈/水(0.25mL/5mL/5mL)的混合物处理持续20h，以提供化合物14。反应混合物经由ISCO系统(梯度洗脱：10％-100％MeCN于水中，两者中含0.05％乙酸，经30min)在15.5g C18 Aq.Gold柱上纯化。将含产物的级分合并，在干冰上冷冻，并且冻干过夜，给出作为暗红色固体的标题化合物14(10mg，37％)。MS：C48H57N3O13的计算值883.4；实测值884.3(M+H)。
实施例2C：从中间体13制备类似物14
化合物14的合成：向含有羟基苯胺13(55mg，0.1278mmol)的圆底烧瓶中添加甲苯(1.5mL)和利福霉素S(67mg，0.0956mmol)。将反应混合物超声持续1min以溶解反应混合物，经由橡胶隔膜密封，用氩气吹扫，并且将反应在环境温度搅拌。在2天之后，添加另一份羟基苯胺(45mg，0.1045mmol)，并且搅拌持续1d。将反应在真空中浓缩以去除甲苯，溶解在EtOH(6mL)中，并且添加MnO2(20mg)。在搅拌持续3d之后，将反应在真空中浓缩，并且经由ISCO(梯度洗脱：0％→100％乙酸乙酯于己烷中)在40g HP硅胶Gold RediSep柱上通过色谱法纯化。将纯级分蒸发并且在真空中干燥，给出作为暗红色固体的标题化合物14-Fmoc(35mg，33％)。MS(ESI,+)：C63H67N3O15的计算值1105.4；实测值1106.5(M+H)，1128.5(M+Na)。
Figure BDA0003124860200002931
用2％哌啶(3.5mg，0.2mL，0.0411mmol)在DMF中的溶液处理前一步的Fmoc-利福霉素-哌啶-O-苯酚14-Fmoc(35mg，0.0361mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(DMF，1mL)中的在氩气下的搅拌溶液，并且将反应在环境温度搅拌。在2h之后，反应经由ISCO系统(梯度洗脱：0％-100％MeCN于水中，两者中含0.05％乙酸，经30min)在50g C18 RediSep Gold柱上直接纯化。将含产物的级分合并，在干冰上冷冻，并且冻干过夜，给出作为暗红色固体的标题化合物14(12mg，43％)。MS：C48H57N3O13的计算值883.4；实测值884.3(M+H)。1H NMR(500MHz；DMSO-d6)δ9.40(s,1H),7.87(d,J＝8.9Hz,1H),7.16–7.23(m,4H),5.99–6.05(m,2H),5.76–5.85(m,2H),5.18–5.23(m,2H),4.83–4.95(m,2H),4.80(br.s,2H),4.12(br.S.,1H),2.91–3.18(m,13H),2.88(s,1H),2.78(t,J＝0.9Hz,2H),2.67(s,2H),2.22(d,J＝3.7Hz,4H),2.15(s,2H),2.02(s,2H),1.96(d,J＝1.2Hz,2H),1.90(s,1H),1.68(s,2H),0.85–0.92(m,12H),0.69(br.s,9H)。
实施例3：根据本公开内容的类似物16a-16z-1的合成
利福霉素类似物16a-16z-1如下文方案7和方案7a所示并且如下文描述由利福霉素S合成。
方案7
Figure BDA0003124860200002932
Pd-催化的O-烷基化(16a-16z-1)：
化合物15的合成。在室温，向利福霉素S(2.0g，2.87mmol)在80mL的甲苯中的在氩气下的搅拌溶液中添加2-氨基-5-溴苯酚(0.54g，2.87mmol)。将溶液在室温搅拌持续2天。然后将反应混合物蒸发至干燥，并且将深色残余物溶解在20mL的乙醇中，并且将300mg的氧化锰(MnO2)一次性添加至乙醇溶液。将滞流混合物在室温在氩气下搅拌持续15h。在使用硅藻土垫过滤不溶性材料之后，将滤液在减压下蒸发。深色残余物经由ISCO(梯度洗脱：5％→95％EA于己烷中)在120g HP硅胶Gold RediSep柱上纯化。将纯级分蒸发并且在真空中干燥，给出作为暗红色固体的标题化合物15(1.6g，65％)。MS(ESI,+)：C43H47BrN2O13的计算值862.23；实测值863.1和865.1(M+H)，885.1和888.0(M+Na)。1H NMR(500MHz；DMSO-d6):δ9.49(d,J＝6.0Hz,1H),7.92(ddd,J＝3.6,2.9,1.8Hz,1H),7.86-7.85(m,1H),7.75-7.74(m,1H),6.06-6.05(m,1H),5.84(dt,J＝2.6,1.4Hz,2H),5.25-5.23(m,2H),4.80(dt,J＝2.5,1.0Hz,1H),4.23(td,J＝2.4,1.0Hz,1H),3.49(d,J＝1.1Hz,1H),3.10-3.09(m,2H),3.03(s,3H),2.79(s,1H),2.19(s,3H),2.01(s,4H),1.96(s,4H),1.81(d,J＝2.2Hz,1H),1.68(s,3H),1.60(dq,J＝2.8,0.9Hz,1H),1.48(t,J＝1.4Hz,1H),0.90(dt,J＝2.1,1.1Hz,2H),0.84(d,J＝7.1Hz,4H),0.69(dd,J＝2.2,1.2Hz,5H)。
化合物16a的合成。使用Buchwald S.L.等人报告的类似方法(Org.Lett.2018,20,1580)，对于标题化合物16a-16c，采用了伯醇与化合物15的钯催化的C-O偶联。向配备有搅拌子并且用螺帽密封的2dram螺旋顶部烘箱干燥试管中加入化合物15(40mg，0.0463mmol，1.00当量)，2-(二甲基氨基)乙-1-醇(42mg，0.462mmol，10当量)，tBuBrettPhos Pd G3-环钯配合物(11.8mg，30mol％)和NaOt-Bu(5mg，0.051mmol，1.1当量)。反应管用隔膜重新加帽，并且用附接的针刺穿以排空，并且用氩气回填(该过程重复两次)，随后经由注射器添加1,4-二氧六环(2.0mL)。反应在氩气压力下在油浴中在55℃±5℃加热持续15h，允许反应冷却至室温，然后通过
Figure BDA0003124860200002941
的垫过滤，并且用EtOAc冲洗。将粗制材料在真空中浓缩，并且在15.5g C18 Aq Gold柱上纯化(梯度洗脱：10％-95％MeCN于水中，两者中含0.05％乙酸)。将产物级分合并，在干冰上冷冻，并且冻干，给出作为暗红色固体的标题化合物16a(12.5mg，32％)。MS：C47H57N3O13的计算值871.39；实测值872.3(M+H)，870.2(M-H)。1H NMR(300MHz；DMSO-d6)δ9.40(s,1H),7.87(d,J＝8.9Hz,1H),7.23—7.16(m,2H),6.83(dt,J＝2.3,1.1Hz,1H),6.23(d,J＝4.6Hz,1H),6.06(dd,J＝5.9,1.1Hz,1H),5.82(dd,J＝2.3,1.5Hz,2H),5.24(dt,J＝1.4,0.7Hz,1H),4.83—4.75(m,1H),4.24(d,J＝29.9Hz,3H),3.80(d,J＝1.3Hz,1H),3.03(t,J＝0.5Hz,3H),2.88(s,1H),2.78(t,J＝0.9Hz,2H),2.67(s,2H),2.22(d,J＝3.7Hz,4H),2.15(s,2H),2.02(s,2H),1.96(d,J＝1.2Hz,2H),1.90(s,1H),1.68(s,2H),0.85(d,J＝6.7Hz,3H),0.69(t,J＝1.2Hz,3H)。
化合物16b的合成。向配备有搅拌子并且用螺帽密封的8mL螺旋顶部烘箱干燥小瓶中加入化合物15(40mg，0.0463mmol，1.00当量)，Fmoc-甘氨酸醇(131mg，0.463mmol，10当量)，t-BuBrettPhos-Pd-G3-环钯配合物(16mg，0.4当量)和K3PO4(20mg，0.0942mmol，2.0当量)。反应小瓶用橡胶隔膜加帽，用附接的针刺穿以排空，并且用氩气回填(该过程重复两次)，随后添加1,4-二氧六环(2.0mL)。反应在氩气压力下在加热块中在60℃加热持续15h，允许反应冷却至室温，然后通过
Figure BDA0003124860200002951
的垫过滤，并且用MeOH冲洗。将粗制材料在真空中浓缩，并且在50g C18 Aq Gold柱上纯化(梯度洗脱：5％-100％MeCN于水中，两者中含0.05％乙酸)。将产物级分合并，在干冰上冷冻，并且冻干，给出作为暗红色固体的标题化合物16b(19mg，38％)。MS(ESI,+)：C60H63N3O15的计算值1065.4；实测值1066.4(M+H)。
化合物16d的合成。将前一步的化合物16b(26mg，0.0244mmol)溶解在DMF(1mL)中，用2％哌啶(3.1mg，0.2mL，0.0366mmol)在DMF中的溶液处理，并且将反应在环境温度在氩气下搅拌。在2h之后，反应经由ISCO系统(梯度洗脱：0％-100％MeCN于水中，两者中含0.05％乙酸，经30min)在50g C18 Aq Gold柱上直接纯化。将含产物的级分合并，在干冰上冷冻，并且冻干过夜，给出作为深蓝色固体的标题化合物16d(9mg，44％)。MS：C45H53N3O13的计算值843.4；实测值844.4(M+H)，842.3(M-H)。1H NMR(500MHz；CD3OD)：δ7.83(d,J＝8.8Hz,1H),6.91-7.03(m,2H),6.55(s,1H),6.43(d,J＝11.2Hz,1H),6.21-6.30(m,2H),4.98-5.08(m,2H),3.76(br.s,3H),3.43-3.47(m,1H),3.41(d,J＝5.37Hz,2H),3.12(br.s,1H),2.97-3.04(m,4H),2.39(br.s,1H),2.19-2.32(m,4H),2.09-2.14(m,4H),1.95-2.07(m,4H),1.78(s,4H),1.67(d,J＝6.84Hz,1H),1.31(br.s.,2H),0.97(br.s,8H),0.66-0.85(m,4H),0.08(d,J＝5.5Hz,3H),-0.26(d,J＝6.5Hz,3H)。
化合物16c的合成。向配备有搅拌子并且用螺帽密封的8mL螺旋顶部烘箱干燥小瓶中加入化合物15(80mg，0.0926mmol，1.00当量)，Fmoc-肌氨酸醇(275mg，0.9262mmol，10当量)，t-BuBrettPhos-Pd-G3-环钯配合物(40mg，0.5当量)和K3PO4(39mg，0.1852mmol，2当量)。反应小瓶用橡胶隔膜加帽，用附接的针刺穿以排空，并且用氩气回填(该过程重复两次)，随后经由注射器添加1,4-二氧六环(3.0mL)。反应在氩气压力下在加热块中在60℃加热持续15h，允许反应冷却至室温，然后通过
Figure BDA0003124860200002961
的垫过滤，并且用MeOH冲洗。将粗制材料在真空中浓缩，并且在50g C18 Aq Gold柱上纯化(梯度洗脱：5％-100％MeCN于水中，两者中含0.05％乙酸)。将产物级分合并，在干冰上冷冻，并且冻干，以给出作为暗红色固体的标题化合物16c(49mg，49％)。MS：C61H65N3O15的计算值1079.4；实测值1080.5(M+H)。
化合物16e的合成。将前一步的化合物16c(49mg，0.045mmol)溶解在DMF(1mL)中，用2％哌啶(7.7mg，0.45mL，0.091mmol)在DMF中的溶液处理，并且将反应在环境温度在氩气下搅拌。在2h之后，反应经由ISCO系统(梯度洗脱：0％-100％MeCN于水中，两者中含0.05％乙酸，经30min)在50g C18 Aq Gold柱上直接纯化。将含产物的级分合并，在干冰上冷冻，并且冻干过夜，给出作为深蓝色固体的标题化合物16e(18mg，46％)。MS：C46H55N3O13的计算值857.3；实测值858.3(M+H)。1H NMR(500MHz；CD3OD)：δ7.84(d,J＝8.79Hz,1H),7.11-7.20(m,1H),6.88-6.96(m,1H),6.64(s,1H),6.42(d,J＝10.26Hz,1H),6.17-6.28(m,2H),4.93-5.06(m,2H),3.86(br.s,1H),3.66-3.84(m,8H),3.18-3.31(m,7H),3.10(br.s,2H),2.94-3.05(m,6H),2.37(br.s,1H),2.25(d,J＝4.88Hz,4H),2.05-2.22(m,7H),1.85-2.05(m,7H),1.78(s,6H),1.65(br.s,1H),1.30(br.s.,2H),0.95(br.s,8H),0.82-0.92(m,4H),0.78(br.s.,1H),0.70(br.s,1H),0.03(d,J＝5.86Hz,3H),-0.28(d,J＝5.86Hz,3H)。
方案7a
Figure BDA0003124860200002971
化合物16f：向配备有搅拌子并且用螺帽密封的8mL螺旋顶部烘箱干燥小瓶中加入化合物15(40mg，0.0463mmol，1.00当量)，(1-甲基哌啶-3-基)甲醇(60mg，0.463mmol，10当量)，t-BuBrettPhos-Pd-G3-环钯配合物(19mg，0.0222mmol，0.5当量)和K3PO4(20mg，0.0942mmol，2.0当量)。将反应小瓶用橡胶隔膜加帽。隔膜用附接的针刺穿以排空，并且用氩气回填(该过程重复两次)，随后添加1,4-二氧六环(2.0mL)。反应在氩气压力下在加热块中在60℃加热持续15h，允许反应冷却至室温，然后通过
Figure BDA0003124860200002972
的垫过滤，并且用MeOH冲洗。将粗制材料在真空中浓缩，并且在50g C18Aq Gold柱上纯化(梯度洗脱：5％-100％MeCN于水中，两者中含0.05％乙酸)。将纯级分合并，在干冰上冷冻，并且冻干，给出作为暗红色固体的标题化合物16f(16.2mg，39％)。MS：C50H61N3O13的计算值911.4；实测值912.4(M+H)。1H-NMR(500MHz；DMSO-d6)：δ9.38(s,1H),7.86-7.84(m,1H),7.19-7.18(m,2H),6.06(td,J＝2.9,1.9Hz,1H),5.86-5.80(m,1H),5.24-5.21(m,1H),4.80-4.76(m,1H),4.08-4.07(m,2H),3.51(ddq,J＝5.7,2.9,1.0Hz,1H),3.09(t,J＝0.6Hz,2H),3.02-3.01(m,3H),2.77(d,J＝0.7Hz,3H),2.61-2.59(m,1H),2.14(s,6H),2.00(s,3H),1.95-1.94(m,3H),1.83-1.76(m,2H),1.66(s,9H),1.50-1.47(m,3H),1.37(d,J＝15.9Hz,3H),1.27-1.20(m,2H),1.07(d,J＝6.5Hz,2H),0.85(d,J＝6.5Hz,6H),0.70-0.67(m,3H)。
化合物16g：16g使用针对16b描述的一般程序来制备：化合物15(40mg，0.0463mmol，1.00当量)，(1-甲基哌啶-4-基)-甲醇(90mg，0.719mmol，15当量)，t-BuBrettPhos-Pd-G3-环钯配合物(21mg，0.0245mmol，0.5当量)和K3PO4(23mg，0.108mmol，2.3当量)以提供标题化合物16g(5.6mg，13％)。MS：C50H61N3O13的计算值911.4；实测值912.4(M+H)。1H NMR(500MHz,CD3OD)：δ8.01(br.s.,1H),7.18(br.s.,1H),6.94(br.s.,2H),6.43(br.s.，1H),6.23(br.s.,2H),5.06(br.s.,1H),5.01(br.s.,1H),4.01-4.19(m,1H),3.93(br.s.,1H),3.75(br.s.,1H),3.07(br.s.,1H),2.86-3.05(m,7H),2.33-2.45(m,4H),2.30(br.s.,4H),2.11-2.20(m,5H),1.98(br.s.,4H),1.83-1.93(m,4H),1.78(br.s.,4H),1.48(d,J＝11.72Hz,2H),1.32(d,J＝18.07Hz,1H),0.95(br.s.,8H),0.80(br.s.,2H),0.03(br.s.,2H),-0.23(br.s.,2H)。
化合物16h：16h使用针对16b描述的一般程序来制备：化合物15(40mg，0.0463mmol，1.00当量)，2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙-1-醇(80mg，0.554mmol，12当量)，t-BuBrettPhos-Pd-G3-环钯配合物(20mg，0.0234mmol，0.5当量)和K3PO4(23mg，0.108mmol，2.3当量)以提供标题化合物16h(9.6mg，22％)。MS：C50H62N4O13的计算值926.4；实测值927.4(M+H)，925.3(M-H)。1H NMR(500MHz；DMSO-d6):δ9.36-9.41(m,1H),7.87(br.s.,1H),7.19(br.s.,2H),5.81(br.s.,1H),5.25(br.s.,1H),4.78(br.s.,1H),4.31(br.s.,1H),4.23(br.s.,1H),4.16(br.s.,1H),3.51(br.s.,1H),3.03(br.s.,2H),2.86(d,J＝10.75Hz,1H),2.78(br.s.,1H),2.72(br.s.,3H),2.31(br.s.,5H),2.14(br.s.,7H),2.10(br.s.,1H),2.01(br.s.,5H),1.95(br.s.,3H),1.90(br.s.,2H),1.67(br.s.,3H),1.59(br.s.,1H),1.51(br.s.,1H),1.26-1.46(m,1H),1.23(br.s.,1H),0.85(br.s.,8H),0.79(br.s.,2H),0.69-0.67(m,5H)。
化合物16i：16i使用针对16b描述的一般程序来制备：化合物15(30mg，0.0347mmol，1.00当量)，2-吗啉代乙-1-醇(46mg，0.347mmol，10当量)，t-BuBrettPhos-Pd-G3-环钯配合物(15mg，0.0173mmol，0.5当量)和K3PO4(15mg，0.0704mmol，2.0当量)以提供69％(22mg)。MS：C49H59N3O14的计算值913.40；实测值914.3(M+H)。1H NMR(500MHz；DMSO-d6):δ9.41-9.40(m,1H),7.86(dd,J＝5.2,2.0Hz,1H),7.23-7.18(m,2H),6.06-6.03(m,1H),5.83-5.81(m,1H),5.25-5.24(m,1H),4.79-4.78(m,1H),4.33-4.31(m,1H),4.33-4.16(m,3H),3.58(s,5H),3.09-3.03(m,4H),2.73(s,2H),2.16(s,4H),1.99(d,J＝29.4Hz,8H),1.67(s,3H),1.52(d,J＝4.2Hz,2H),1.13(d,J＝13.8Hz,1H),0.85(d,J＝6.5Hz,10H),0.69-0.67(m,8H)。
化合物16j：16j使用针对16b描述的一般程序来制备：化合物15(30mg，0.0347mmol，1.00当量)，(1-甲基吡咯烷-3-基)甲醇(40mg，0.347mmol，10当量)，t-BuBrettPhos-Pd-G3-环钯配合物(15mg，0.0173mmol，0.5当量)和K3PO4(15mg，0.0704mmol，2.0当量)以提供23％(7.0mg)。MS：C49H59N3O13的计算值897.40；实测值898.4(M+H)。1H NMR(500MHz；DMSO-d6):δ9.39-9.38(m,1H),7.89-7.86(m,1H),7.19(t,J＝7.0Hz,2H),6.05-6.03(m,1H),5.86-5.80(m,1H),5.25-5.23(m,1H),4.80-4.78(m,1H),4.17-4.15(m,1H),4.14-4.09(m,1H),3.99(s,1H),3.52-3.49(m,1H),3.09-3.03(m,3H),2.78-2.77(m,1H),2.37(dt,J＝5.5,2.7Hz,2H),2.21(d,J＝35.5Hz,6H),1.98(d,J＝31.1Hz,7H),1.67-1.59(m,3H),1.60-1.58(m,1H),1.53-1.47(m,2H),1.39-1.34(m,2H),0.84(d,J＝6.8Hz,11H),0.67(t,J＝2.9Hz,7H)。
化合物16k：16k使用针对16b描述的一般程序来制备：化合物15(50mg，0.0579mmol，1.00当量)，2-(吡咯烷-1-基)乙-1-醇(67mg，0.579mmol，10当量)，t-BuBrettPhos-Pd-G3-环钯配合物(25mg，0.0289mmol，0.5当量)和K3PO4(25mg，0.1158mmol，2.0当量)以提供46％(23.6mg)。MS：C49H59N3O13的计算值897.40；实测值898.4(M+H)，896.3(M-H)。1H NMR(500MHz；DMSO-d6):δ9.38(d，J＝1.2Hz,1H),7.88-7.87(m,1H),7.21(s,1H),6.05-6.03(m,1H),5.82(dd,J＝1.3,0.7Hz,1H),5.25-5.20(m,1H),4.81-4.79(m,1H),4.33-4.30(m,1H),4.24-4.15(m,1H),3.54-3.50(m,2H),3.09-3.03(m,6H),2.85-2.78(m,6H),2.18(s,4H),1.99(d,J＝31.9Hz,5H),1.70(s,6H),1.15-1.05(m,1H),0.85(d,J＝6.7Hz,11H),0.68(dt,J＝3.6,0.9Hz,9H)。
化合物16l：16l使用针对16b描述的一般程序来制备：化合物15(50mg，0.0579mmol，1.00当量)，(1-甲基吡咯烷-2-基)甲醇(67mg，0.579mmol，10当量)，t-BuBrettPhos-Pd-G3-环钯配合物(25mg，0.0289mmol，0.5当量)和K3PO4(25mg，0.1158mmol，2.0当量)以提供35％(17.7mg)。MS：C49H59N3O13的计算值897.40；实测值898.4(M+H)，896.3(M-H)。1H NMR(500MHz；DMSO-d6):δ9.38-9.37(m,1H),7.88-7.87(m,1H),7.20-7.18(m,1H),6.06-6.04(m,1H),5.84-5.82(m,1H),5.25-5.24(m,1H),4.81-4.79(m,1H),4.19-4.11(m,2H),3.54-3.50(m,1H),3.10-3.07(m,1H),3.03(s,2H),2.97-2.96(m,1H),2.79-2.78(m,3H),2.64-2.61(m,6H),2.37(s,3H),2.18(s,3H),1.99(d,J＝32.7Hz,6H),1.68(s,3H),1.68-1.57(m,3H),1.55-1.45(m,1H),0.85(d,J＝6.7Hz,11H),0.69-0.67(m,7H)。
化合物16m：16m使用针对16b描述的一般程序来制备：化合物15(50mg，0.0579mmol，1.00当量)，2-(哌啶-1-基)乙-1-醇(75mg，0.579mmol，10当量)，t-BuBrettPhos-Pd-G3-环钯配合物(25mg，0.0289mmol，0.5当量)和K3PO4(25mg，0.1158mmol，2.0当量)以提供54％(28.3mg)。MS：C50H61N3O13的计算值911.42；实测值912.4(M+H)，910.3(M-H)。1H NMR(500MHz；DMSO-d6):δ9.38-9.36(m,1H),7.88-7.86(m,1H),7.22(dt,J＝1.7,0.8Hz,1H),6.07-6.05(m,1H),5.83-5.82(m,1H),5.26-5.22(m,1H),4.81-4.78(m,1H),4.31(dd,J＝2.5,1.0Hz,1H),4.23-4.15(m,1H),3.54-3.50(m,1H),3.10-3.01(m,3H),2.79-2.77(m,1H),2.69(s,2H),2.44(d,J＝0.7Hz,6H),2.17(s,6H),1.99(d,J＝32.3Hz,5H),1.68(s,6H),1.50(s,3H),1.38-1.37(m,2H),0.85(d,J＝6.7Hz,9H),0.69-0.67(m,7H)。
化合物16n：16n使用针对16b描述的一般程序来制备：化合物15(50mg，0.0579mmol，1.00当量)，2-(氮杂环庚-1-基)乙-1-醇(83mg，0.579mmol，10当量)，t-BuBrettPhos-Pd-G3-环钯配合物(25mg，0.0289mmol，0.5当量)和K3PO4(25mg，0.1158mmol，2.0当量)以提供53％(28.4mg)。MS：C51H63N3O13的计算值925.44；实测值926.5(M+H)，924.3(M-H)。1H NMR(500MHz；DMSO-d6):δ9.42-9.34(m,1H),7.85-7.84(m,1H),7.16(td,J＝1.8,0.5Hz,2H),6.07-6.04(m,1H),5.84-5.82(m,1H),5.24(s,1H),4.81-4.77(m,1H),4.26-4.25(m,1H),4.19-4.13(m,2H),3.57-3.48(m,1H),3.12-3.10(m,2H),3.02-2.99(m,4H),2.89(s,6H),2.89-2.76(m,3H),2.69(s,3H),2.15-2.14(m,3H),2.01(s,3H),1.95(s,3H),1.90(s,3H),1.67(s,3H),1.58-1.54(m,6H),0.86(d,J＝6.5Hz,8H),0.71-0.67(m,6H)。
化合物16o：16o使用针对16b描述的一般程序来制备：化合物15(30mg，0.0347mmol，1.0当量)，N,N-二甲基氨基丙-1-醇(35mg，0.339mmol，10当量)，t-BuBrettPhos-Pd-G3-环钯配合物(15mg，0.0176mmol，0.5当量)和K3PO4(15mg，0.0707mmol，2.0当量)以提供55％(17mg)。MS：C48H59N3O13的计算值885.4；实测值886.4(M+H)。1H NMR(500MHz,CD3OD)δ7.86-8.10(m,1H),7.16(s,1H),6.93(br.s.,1H),6.43(br.s.,1H),6.22(br.s.,2H),5.06(br.s.,1H),4.98(br.s.,1H),4.24(br.s.,1H),4.15(br.s.,1H),3.75(br.s.,1H),2.90-3.13(m,5H),2.58(br.s.,2H),2.34(br.s.,7H),2.26(br.s.,3H),2.09-2.17(m,4H),2.05(br.s.,3H),1.98(br.s.,3H),1.82-1.95(m,3H),1.79(s,3H),1.73(s,1H),0.77-1.00(m,8H),0.03(s,2H),-0.25(s,2H)。
化合物16p：16p使用针对16b描述的一般程序来制备：化合物15(30mg，0.0347mmol，1.0当量)，N,N-二甲基氨基丁-1-醇(40mg，0.341mmol，10当量)，t-BuBrettPhos-Pd-G3-环钯配合物(15mg，0.0176mmol，0.5当量)和K3PO4(15mg，0.0707mmol，2.0当量)以提供35％(11mg)。MS：C49H61N3O13的计算值899.42；实测值900.4(M+H)。1H NMR(500MHz,CD3OD)δ7.98(br.s.,1H)，7.18(br.s.，1H),6.93(br.s.，1H),6.22(br.s.,2H),5.06(br.s.,1H),4.99(br.s.,1H),4.93(br.s.,1H),4.22(br.s.,2H),4.12(br.s.,1H),3.83-3.96(m,1H),3.63-3.83(m,2H),3.08(br.s.,2H),3.01(d,J＝8.79Hz,5H),2.51(br.s.,3H),2.35(br.s.,6H),2.28(br.s.,3H),2.09-2.17(m,3H),2.07(br.s.,1H),1.98(br.s.,3H),1.81-1.92(m,3H),1.68-1.81(m,2H),1.52-1.65(m,2H),1.36-1.52(m,3H),1.32(d,J＝18.56Hz,2H),0.95(br.s.,3H),0.88(d,J＝6.84Hz,4H)0.04(s,2H),-0.24(s,2H)。
化合物16q：16q使用针对16b描述的一般程序来制备：化合物15(50mg，0.0579mmol，1.00当量)，2-(2-氮杂双环[2.2.1]庚-2-基)乙-1-醇(82mg，0.579mmol，10当量)，t-BuBrettPhos-Pd-G3-环钯配合物(25mg，0.0289mmol，0.5当量)和K3PO4(25mg，0.1158mmol，2.0当量)以提供55％(29mg)。MS：C51H61N3O13的计算值923.42；实测值924.4(M+H)，922.3(M-H)。1HNMR(500MHz；DMSO-d6):δ9.34-9.32(m,1H),7.88-7.86(m,1H),7.18-7.17(m,2H),6.06-6.03(m,1H),5.84-5.81(m,1H),5.25-5.22(m,1H),4.82-4.78(m,1H),4.21-4.13(m,3H),3.46-3.39(m,1H),3.13(t,J＝2.6Hz,3H),3.02-3.01(m,3H),2.81-2.79(m,3H),2.29(d,J＝0.8Hz,3H),2.18(s,3H),2.02(s,3H),1.95(s,3H),1.68(s,5H),1.55-1.50(m,3H),1.40(s,3H),1.22(d,J＝9.2Hz,6H),0.86(d,J＝6.8Hz,8H),0.69-0.68(m,5H)。
化合物16r：16r使用针对16b描述的一般程序来制备：化合物15(50mg，0.0579mmol，1.00当量)，2-(氮杂环丙-1-基)乙-1-醇(50.4mg，0.579mmol，10当量)，t-BuBrettPhos-Pd-G3-环钯配合物(25mg，0.0289mmol，0.5当量)和K3PO4(25mg，0.1158mmol，2.0当量)以提供11％(5.6mg)。MS：C51H64N4O14的计算值956.44；实测值957.4(M+H)，955.3(M-H)。1HNMR(500MHz；DMSO-d6):δ9.37-9.35(m,1H),7.87-7.84(m,1H),7.20-7.18(m,1H),6.07-6.03(m,1H),5.83-5.81(m,1H),5.25-5.21(m,1H),4.78(dq,J＝2.8,0.9Hz,1H),4.34-4.31(m,2H),4.23-4.15(m,1H),3.47(d,J＝5.8Hz,5H),3.09-3.08(m,2H),3.02(dddd,J＝3.6,2.6,2.4,1.3Hz,3H),2.78-2.77(m,1H),2.71-2.70(m,2H),2.63(d,J＝1.2Hz,2H),2.41-2.34(m,8H),2.17-2.15(m,3H),2.01(t,J＝0.4Hz,3H),1.94(t,J＝0.9Hz,3H),1.89(s,2H),1.66(d,J＝0.4Hz,3H),1.61-1.53(m,1H),1.38(d,J＝15.9Hz,2H),0.86-0.84(m,9H),0.69-0.67(m,6H)。
化合物16s：16s使用针对16b描述的一般程序来制备：化合物15(30mg，0.0347mmol，1.0当量)，2-(2-(二甲基氨基)乙氧基)乙-1-醇(50mg，0.375mmol，10当量)，t-BuBrettPhos-Pd-G3-环钯配合物(15mg，0.0176mmol，0.5当量)和K3PO4(15mg，0.0707mmol，2.0当量)以提供35％(11mg)。MS：C49H61N3O14的计算值915.4；实测值916.4(M+H)。1H NMR(500MHz,CD3OD)δ8.01(d,J＝15.1Hz,1H),7.20(br.s.,1H),6.96(br.s.,1H),6.44(br.s.,1H),6.15-6.32(m,2H),5.07(d,J＝16.2Hz,1H),4.34(br.s.,2H),4.24(br.s.,1H),3.86(br.s.,3H),3.78(d,J＝11.7Hz,1H),3.69(br.s.,3H),3.18(br.s.,1H),3.06-3.15(m,2H),3.02(d,J＝9.77Hz,5H),2.51-2.70(m,2H),2.32(d,J＝11.7Hz,6H),2.11(s.,3H),1.94-2.07(m,6H),1.90(br.s.,1H),1.75-1.86(m,5H),1.73(br.s.,1H),1.67(br.s.,2H),1.24-1.45(m,3H),0.89-0.96(m,8H),0.06(s,2H),-0.20(s,2H)。
化合物16t：16t使用针对16b描述的一般程序来制备：化合物15(30mg，0.0347mmol，1.0当量)，2-二乙基氨基乙-1-醇(45mg，0.383mmol，11当量)，t-BuBrettPhos-Pd-G3-环钯配合物(15mg，0.0176mmol，0.5当量)和K3PO4(15mg，0.0707mmol，2.0当量)以提供14％(4.5mg)。MS：C49H61N3O13的计算值899.4；实测值900.4(M+H)，898.3(M-H)。1H NMR(500MHz,CD3OD)δ8.06(br.s.,1H),7.26(br.s.,1H),7.02(br.s.,1H),6.44(br.s.,1H),6.23(br.s.,2H),5.10(br.s.,1H),5.00(br.s.,2H),4.48(br.s.,1H),4.38(br.s.,1H),3.77(br.s.,1H),3.46(br.s.,2H),3.15(s,4H),3.18(s,3H),3.03(d,J＝9.28Hz,6H),2.32(br.s.,4H),2.09-2.16(m,4H),1.99(br.s.,4H),1.78(br.s.,4H),1.38(br.s.,1H),1.30(br.s.,10H),0.96(br.s.,8H),0.11(s,2H),-0.20(s,2H)。
化合物16u：16u使用针对16b描述的一般程序来制备：化合物15(30mg，0.0347mmol，1.0当量)，2-二异丙基氨基乙-1-醇(45mg，0.383mmol，11当量)，t-BuBrettPhos-Pd-G3-环钯配合物(15mg，0.0176mmol，0.5当量)和K3PO4(15mg，0.0707mmol，2.0当量)以提供31％(10mg)。MS：C51H65N3O13的计算值927.45；实测值928.4(M+H)，926.3(M-H)。1H NMR(500MHz,CD3OD)δ8.03(br.s.,1H),7.10-7.29(m,1H),6.94(br.s.,1H),6.23(br.s.,1H),5.01–5.06(m,2H),4.23(br.s.,1H),3.18(br.s.,1H),3.12(br.s.,2H),2.91-3.06(m,4H),2.31(br.s.,4H),2.11(s,4H),1.98(br.s.,4H),1.78(br.s.,4H),1.64(br.s.,1H),1.28-1.41(m,2H),1.18(br.s.,14H),1.06(d,J＝6.84Hz,1H),0.95(s,9H),0.81(s,2H),0.07-0.13(m,1H),0.04(s,2H),-0.23(s,2H)。
化合物16v：16v使用针对16b描述的一般程序来制备：化合物15(40mg，0.0463mmol，1.0当量)，2-(甲基(吡啶-2-基)氨基)乙-1-醇(75mg，0.463mmol，10当量)，t-BuBrettPhos-Pd-G3-环钯配合物(20mg，0.0213mmol，0.5当量)和K3PO4(20mg，0.094mmol，2.0当量)以提供标题化合物16v(15.6mg，36％)。MS：C51H58N4O13的计算值934.40；实测值935.3(M+H)，933.3(M-H)。1H NMR(500MHz,CD3OD):δ8.09(t，J＝1.4Hz,1H),8.02-8.00(m,1H),7.56-7.53(m,1H),7.19-7.17(m,1H),7.07(s,1H),6.86-6.84(m,1H),6.70-6.68(m,2H),6.61(td,J＝1.8,0.7Hz,2H),6.42-6.41(m,1H),6.22-6.20(m,2H),5.04-5.02(m,1H),4.59(s,2H),4.39-4.36(m,1H),4.32-4.29(m,1H),4.01(s,2H),3.72-3.68(m,1H),3.15(s,7H),3.00-2.99(m,4H),2.31(s,4H),2.11(s,4H),1.95(d,J＝22.7Hz,3H),1.77(s,3H),1.63-1.60(m,1H),1.30(s,2H),0.94(d,J＝6.6Hz,4H),0.80-0.79(m,4H),-0.03(dd,J＝2.4,0.5Hz,2H),-0.24(dd,J＝2.3,1.1Hz,2H)。
化合物16w：16w使用针对16b描述的一般程序来制备：化合物15(40mg，0.0463mmol，1.0当量)，(2-((二甲基氨基)甲基)苯基)甲醇(76mg，0.463mmol，10当量)，t-BuBrettPhos-Pd-G3-环钯配合物(20mg，0.0213mmol，0.5当量)和K3PO4(20mg，0.094mmol，2.0当量)以提供标题化合物16w(5.6mg，18％)。MS：C53H61N3O13的计算值947.42；实测值948.4(M+H)，946.3(M-H)。1H NMR(500MHz,CD3OD)：δ8.05-8.04(m,1H),7.46-7.44(m,1H),7.34-7.33(m,1H),7.07-7.05(m,1H),6.80(d,J＝4.2Hz,1H),6.53-6.48(m,1H),6.24-6.22(m,1H),5.51(d,J＝12.1Hz,1H),5.44-5.42(m,1H),5.07-5.00(m,1H),4.59(s,1H),3.82-3.69(m,2H),3.55(d,J＝8.6Hz,1H),3.31-3.11(m,12H),3.03-3.01(m,4H),2.33(s,3H),2.24(s,5H),2.09(dd,J＝1.9,1.0Hz,3H),1.99(s,3H),1.92(s,1H),1.77(d,J＝0.5Hz,4H),1.67-1.61(m,1H),1.30(d,J＝0.3Hz,1H),0.96-0.87(m,5H),0.11(d,J＝2.8Hz,1H),0.06-0.04(m,3H),-0.20-0.22(m,2H)。
化合物16x：16x使用针对16b描述的一般程序来制备：化合物15(40mg，0.0463mmol，1.0当量)，N-(2-羟乙基)乙酰胺(48mg，0.463mmol，10当量)，t-BuBrettPhos-Pd-G3-环钯配合物(20mg，0.0213mmol，0.5当量)和K3PO4(20mg，0.094mmol，2.0当量)以提供标题化合物16x(20mg，41％)。MS：C47H55N3O14的计算值885.37；实测值886.3(M+H)。1H NMR(500MHz,CD3OD)δ7.98(br.s.,1H),7.18(s,2H),6.94(br.s.,1H),6.23(br.s.,1H),5.01–5.06(m,2H),4.14(br.s.,1H),3.62(br.s.,4H),2.94-3.18(m,5H),2.31(br.s.,5H),2.11(s,5H),1.98(br.s.,10H),1.78(br.s.,5H),1.64(br.s.,1H),1.28-1.41(m,2H),1.06(d,J＝6.84Hz,1H),0.95(s,8H),0.07-0.13(m,1H),0.04(s,2H),-0.23(s,2H)。
化合物16y：16y使用针对16b描述的一般程序来制备：化合物15(40mg，0.0463mmol，1.0当量)，2-(1H-咪唑-1-基)乙-1-醇(52mg，0.463mmol，10当量)，t-BuBrettPhos-Pd-G3-环钯配合物(20mg，0.0213mmol，0.5当量)和K3PO4(20mg，0.094mmol，2.0当量)以提供标题化合物16y(8mg，8％)。MS：C48H54N4O13的计算值894.37；实测值895.3(M+H)。1H NMR(500MHz,CD3OD)δ7.75(br.s.,1H),7.16-7.26(m,2H),6.98(s,1H),6.94(s,1H),4.58(br.s.,5H),4.44-4.54(m,3H),4.31-4.35(m,1H),3.83-3.90(m,2H),3.72(br.s.,1H),3.66(s,1H),3.55(s,1H),3.33-3.36(m,1H),3.00(d,J＝8.30Hz,3H),2.30(br.s.,3H),2.00-2.11(m,4H),1.92-2.00(m,3H),1.90(s,2H),1.76(br.s.,3H),1.70(d,J＝6.84Hz,1H),1.52-1.65(m,2H),1.49(d,J＝15.14Hz,2H),1.32-1.41(m,2H),1.11-1.32(m,3H),0.83-1.00(m,6H),0.09-0.10(m,1H),0.00(br.s.,2H),-0.23(br.s.,1H)。
化合物16z：16z使用针对16b描述的一般程序来制备：化合物15(40mg，0.0463mmol，1.0当量)，N-(2-羟乙基)-N-甲基乙酰胺(54mg，0.463mmol，10当量)，t-BuBrettPhos-Pd-G3-环钯配合物(20mg，0.0213mmol，0.5当量)和K3PO4(20mg，0.094mmol，2.0当量)以提供标题化合物16z(6.5mg，16％)。MS：C48H57N3O14的计算值899.38；实测值900.4(M+H)。1H NMR(500MHz,CD3OD)δ8.03(br.s.,1H),7.20(br.s.,2H),6.42(br.s.,1H),6.22(br.s.,1H),5.06(br.s.,1H),4.99(br.s.,2H),4.58(s,3H),4.38(d,J＝3.91Hz,1H),4.31(br.s.,2H),4.23(br.s.,2H),3.86(br.s.,2H),3.80(br.s.,2H),3.74(br.s.,1H),3.19(s,3H),2.96-3.06(m,5H),2.31(br.s.,2H),2.20(s,2H),2.11(d,J＝6.84Hz,3H),2.04(s,1H),1.97(br.s.,6H),1.93(s,2H),1.76(br.s.,3H),1.65(br.s.,2H),1.29(s,1H),0.94(br.s.,3H),0.10(d,J＝2.93Hz,1H),0.03(br.s.,2H),-0.23(br.s.,2H)。
化合物16z-1：16z-1使用针对16b描述的一般程序来制备：化合物15(40mg，0.0463mmol，1.0当量)，2-(氮杂环丁-1-基)乙-1-醇(47mg，0.463mmol，10当量)，t-BuBrettPhos-Pd-G3-环钯配合物(20mg，0.0213mmol，0.5当量)和K3PO4(20mg，0.094mmol，2.0当量)以提供标题化合物16z-1(8.7mg，21％)。MS：C48H57N3O13的计算值883.39；实测值884.4(M+H)。1H NMR(500MHz,CD3OD)δ7.19(br.s.，1H)，4.58(br.s.，2H)，4.19(br.s.,1H),3.83-3.89(m,1H),3.73-3.82(m,1H),3.52(s,1H),3.46(br.s.,6H),3.00(br.s.,1H),2.30(br.s.,4H),2.13-2.22(m,3H),2.10(br.s.,3H),1.97(br.s.,3H),1.92(s,8H),1.76(br.s.,4H),1.56-1.69(m,2H),1.43(s,2H),1.46(s,2H),1.31-1.39(m,2H),1.29(br.s.,1H),1.24(d,J＝14.17Hz,1H),1.15(d,J＝5.86Hz,1H),0.95(br.s.,3H),0.10(d,J＝2.44Hz,2H),0.03(br.s.,2H),-0.23(br.s.,1H)。
实施例4：还原胺化
利福霉素类似物(17)如下文方案8所示通过使用还原胺化从化合物14合成。
Figure BDA0003124860200003061
在室温，向化合物14(9mg，0.0102mmol)和多聚甲醛(1.52mg，0.051mmol)在1.0mL的无水DCM中的溶液中添加NaBH(OAc)3(4.3mmol，0.0204mmol)。将混合物搅拌持续1h。通过LC/MS监测反应进程，以提供期望的产物。通过添加2-3滴水来猝灭粗制反应混合物。在减压下去除所有挥发物，然后用DMSO(0.5mL)稀释。粗制混合物通过制备型HPLC(Gemini，5μm，150mm×30mm，洗脱液：10％-95％MeCN于水中，0.05％AcOH)纯化，将纯级分合并并且冻干，以给出6mg(66％)的作为红色固体的17。MS(ESI,+)：C49H59N3O13的计算值897.40；实测值898.4(M+H)。1H NMR(500MHz；DMSO-d6):δ9.38(br.s.,1H),7.86(br.s.,1H),7.17-7.25(m,4H),6.04(d,J＝6.35Hz,1H),5.81(br.s.,2H),4.79(br.s.,2H),4.70(br.s.,2H),4.15(br.s.,1H),3.53(br.s.,1H),3.30(br.s.,5H),3.09(br.s.,3H),3.03(br.s.,4H),2.87(s,1H),2.78(br.s.,2H),2.58-2.66(m,6H),2.54(br.s.,8H),2.37(d,J＝1.47Hz,2H),2.15-2.27(m,20H),2.12(br.s.,1H),2.03-2.09(m,3H),2.00(s,9H),1.95(br.s.,10H),1.91(s,3H),1.72(br.s.,3H),1.67(br.s.,8H),1.58(s,1H),1.50(br.s.,1H),1.24(br.s.,2H),0.81-0.94(m,15H),0.78(d,J＝6.84Hz,3H),0.69(br.s.,9H)。
实施例5：化合物29的制备
利福霉素类似物29如下文方案9所示并且如下文描述来制备。
Figure BDA0003124860200003071
化合物26的合成在4℃，向2,6-二甲氧基苯胺(9.0g，58.7mmol，1.0当量)在350mL的无水DCM中的搅拌溶液中经30min逐滴添加在50mL的无水DCM中的Br2溶液。将另外的200mL添加至浆料以得到半均匀溶液。将反应混合物在室温搅拌过夜。将深棕色混合物冷却至4℃，并且通过添加1.0M NaOH溶液(约100mL)碱化至pH＝10-11。将混合物用200mL的DCM稀释，并且将层分离。将水层用DCM(总计200mL)萃取。将合并的DCM层用水、盐水洗涤，并且经Na2SO4干燥。在真空中浓缩之后，获得作为略微红色的固体的粗制产物。将残余物溶解在DCM(8mL)中，并且装载到220g HP硅胶Gold RediSep柱上，并且经由ISCO(梯度洗脱：5％-95％EA于己烷中)纯化，将纯级分合并，并且在真空中蒸发溶剂。将固体用DCM和己烷研磨并且过滤。将灰白色固体在真空中干燥，给出作为灰白色固体的标题化合物26(9.4g，70％)。MS(ESI,+)：C8H10BrNO2的计算值230.99；实测值231.9和234.0(M+H)。1H NMR(500MHz；CDCl3)δ6.66(s,2H),3.84(s,6H)。
化合物27的合成将化合物26(2.2g，9.47mmol，1.0当量)溶解在10mL的无水DCM中，并且在4℃经10min逐滴添加BBr3溶液(10mL，1.0MDCM溶液)。该反应是放热的并且产生沉淀。添加额外量的BBr3(9mL，94.7mmol，10当量)，并且将反应混合物在室温搅拌过夜。通过LC/MS检查红色悬浮液，以确认期望产物。将反应混合物转移至250mL烧瓶，并且冷却至4℃。将混合物用水小心地猝灭，随后用饱和NaHCO3水溶液处理，以给出pH＝7-8。将混合物用DCM萃取，并且将水层冷却至4℃，以提供深棕色沉淀。过滤混合物，并且将棕色固体溶解在10mL的甲醇中，并且经Na2SO4干燥，以提供期望的产物27(1.9g，100％)。MS(ESI,+)：C6H6BrNO2的计算值202.96；实测值204.0和206.1(M+H)。1H NMR(500MHz；CD3OD)δ6.45(s,2H),4.87(s,2H)。
化合物28的合成在室温，向化合物27(0.146g，0.72mmol)在甲苯(20mL)和THF(20mL)的混合物中的搅拌溶液中添加利福霉素S(0.5g，0.72mmol)。将溶液在室温搅拌持续3天，以提供期望的产物。在真空中去除溶剂，将深色残余物溶解在10mL的乙醇中，随后添加100mg的二氧化锰(MnO2)。将滞流混合物在室温搅拌持续5h。在使用硅藻土垫过滤不溶性材料之后，将滤液在真空中蒸发。深色残余物经由ISCO(梯度洗脱：5％-95％EA于己烷中)在120g HP硅胶Gold RediSep柱上纯化。将纯级分合并并且在真空中蒸发，给出作为暗红色固体的标题化合物28(270mg，43％)。MS(ESI,+)：C43H47BrN2O13的计算值878.23；实测值879.2和880.2(M+H)，878.1和879.1(M-1)。1H NMR(500MHz；DMSO-d6)δ10.22(br.s.,1H),9.52(br.s.,1H),7.43(br.s.,1H),7.35(br.s.,1H),6.04(br.s.,1H),5.83(br.s.,2H),5.21(d,J＝6.35Hz,2H),4.89(t,J＝10.50Hz,1H),4.16(br.s.,1H),3.51(br.s.,1H),3.15(br.s.,2H),3.02(br.s.,4H),2.80(t,J＝8.55Hz,1H),2.21(br.s.,3H),2.08(br.s.,1H),1.96(s,4H),1.99(s,4H),1.78(br.s.,1H),1.71(br.s.,3H),1.60(br.s.,1H),1.47(br.s.,1H),0.84(d,J＝6.84Hz,6H),0.69(br.s.,6H)。
化合物29的合成向配备有搅拌子的8mL螺旋顶部烘箱干燥小瓶中加入化合物15(60mg，0.069mmol，1.00当量)，2-(二甲基氨基)乙-1-醇(61mg，0.69mmol，10当量)，t-BuBrettPhos-Pd-G3-环钯配合物(31mg，0.0345mmol，0.5当量)和K3PO4(30mg，0.141mmol，2.0当量)。将反应小瓶用橡胶隔膜加帽。隔膜用附接的针刺穿以排空，并且用氩气回填(该过程重复两次)，随后添加1,4-二氧六环(1.5mL)。反应在氩气压力下在60℃加热持续15h，允许反应冷却至室温，通过
Figure BDA0003124860200003091
的垫过滤，并且用MeOH冲洗。将粗制材料在真空中浓缩，并且在50g C18 Aq柱上纯化(梯度洗脱：10％-95％MeCN于水中，两者中含0.05％乙酸)。将产物级分合并并且冻干，给出作为暗红色固体的标题化合物29(21mg，35％)。MS(ESI,+)：C47H57N3O14的计算值887.38；实测值888.3(M+H)。1H NMR(500MHz；DMSO-d6)δ10.12(br.s.,1H),9.39(br.s.,1H),6.75(br.s.,1H),6.70(br.s.,1H),6.03(br.s.,1H),5.77(d,J＝15.14Hz,1H),5.21(br.s.,1H),4.83-4.90(m,1H),4.15-4.30(m,2H),4.08(br.s.,1H),3.53(br.s.,1H),3.29(s,1H),3.16(br.s.,1H),3.03(br.s.,3H),2.87(br.s.,1H),2.79(br.s.,1H),2.62-2.71(m,2H),2.36(s,1H),2.23(s,6H),2.19(br.s.,3H),1.93-2.11(m,7H),1.91(s,1H),1.76(br.s.,1H),1.69(br.s.,3H),1.53-1.65(m,1H),1.50(br.s.,1H),1.32-1.45(m,1H),0.76-0.94(m,6H),0.68(br.s.,5H)。
Figure BDA0003124860200003101
化合物29a：29a使用针对29描述的一般程序来制备：化合物28(50mg，0.0568mmol，1.00当量)，(1-甲基吡咯烷-3-基)甲醇(65mg，0.568mmol，10当量)，t-BuBrettPhos-Pd-G3-环钯配合物(24mg，0.0284mmol，0.5当量)和K3PO4(24mg，0.115mmol，2.0当量)以提供19％(9.8mg)。MS：C49H59N3O14的计算值913.40；实测值914.4(M+H)，912.3(M-H)。1H NMR(500MHz；DMSO-d6):δ9.38-9.34(m,1H),6.74-6.64(m,1H),6.26(s,1H),6.02-6.00(m,1H),5.80-5.78(m,1H),5.23-5.19(m,1H),4.87-4.82(m,1H),4.06-4.03(m,2H),3.55-3.51(m,1H),3.17-3.15(m,1H),3.03(dd,J＝3.2,1.1Hz,2H),2.87(s,3H),2.78(tdd,J＝2.8,1.5,0.6Hz,3H),2.64-2.58(m,1H),2.37(s,1H),2.30(s,6H),2.18(s,6H),1.97(d,J＝16.7Hz,5H),1.69(t,J＝0.4Hz,3H),1.53-1.51(m,2H),0.85(dt,J＝2.6,1.3Hz,11H),0.69-0.67(m,4H)。
Figure BDA0003124860200003102
化合物29b：29b使用针对29描述的一般程序来制备：化合物28(60mg，0.068mmol，1.00当量)，(1-甲基哌啶-4-基)甲醇(88mg，0.683mmol，10当量)，t-BuBrettPhos-Pd-G3-环钯配合物(29mg，0.034mmol，0.5当量)和K3PO4(29mg，0.136mmol，2.0当量)以提供9.5％(6.0mg)。MS：C50H61N3O14的计算值927.42；实测值928.4(M+H)，926.3(M-H)。1H NMR(500MHz；DMSO-d6):δ8.84(dd,J＝1.5,0.9Hz,1H),7.13(dd,J＝1.7,0.9Hz,1H),6.92-6.88(m,1H),6.29-6.26(m,1H),6.21-6.18(m,1H),5.67(t,J＝0.6Hz,1H),5.00-4.99(m,1H),4.75-4.73(m,1H),3.92-3.90(m,1H),3.81-3.79(m,4H),2.85(d,J＝2.5Hz,2H),2.75-2.72(m,1H),2.63(s,2H),2.36(s,3H),2.12(t,J＝5.7Hz,6H),1.93(d,J＝9.7Hz,4H),1.81(ddd,J＝3.6,3.0,1.4Hz,2H),1.72(s,6H),1.66(s,6H),1.37-1.34(m,5H),0.88-0.85(m,7H),0.69-0.64(m,4H)。
Figure BDA0003124860200003111
化合物29c：29c使用针对29描述的一般程序来制备：化合物28(60mg，0.068mmol，1.00当量)，2-(吡咯烷-1-基)乙-1-醇(88mg，0.682mmol，10当量)，t-BuBrettPhos-Pd-G3-环钯配合物(29mg，0.034mmol，0.5当量)和K3PO4(29mg，0.136mmol，2.0当量)以提供26％(16.2mg)。MS：C49H59N3O14的计算值913.40；实测值914.4(M+H)，912.3(M-H)。1H NMR(500MHz；DMSO-d6):δ9.40-9.39(m,1H),6.77-6.76(m,1H),6.67-6.65(m,1H),6.02-6.00(m,1H),5.78-5.76(m,1H),5.21-5.19(m,1H),4.86(t,J＝10.6Hz,1H),4.27-4.20(m,2H),4.08-4.06(m,1H),3.54-3.50(m,1H),3.17-3.14(m,1H),3.03(d,J＝0.8Hz,3H),2.86(d,J＝0.4Hz,3H),2.79-2.77(m,1H),2.64-2.57(m,4H),2.18(s,8H),1.97(d,J＝18.7Hz,7H),1.70(s,7H),1.60-1.56(m,1H),1.51-1.46(m,1H),0.84(d,J＝5.8Hz,7H),0.67(dt,J＝1.5,0.7Hz,5H)。
Figure BDA0003124860200003121
化合物29d：29d使用针对29描述的一般程序来制备：化合物28(60mg，0.068mmol，1.00当量)，2-(2-氮杂双环[2.2.1]庚-2-基)乙-1-醇(96mg，0.682mmol，10当量)，t-BuBrettPhos-Pd-G3-环钯配合物(29mg，0.034mmol，0.5当量)和K3PO4(29mg，0.136mmol，2.0当量)以提供37％(23.7mg)。MS：C51H61N3O14的计算值939.42；实测值940.5(M+H)，938.3(M-H)。1HNMR(500MHz；DMSO-d6):δ9.37-9.35(m,1H),6.72-6.65(m,1H),6.04-6.00(m,1H),5.79(tdd,J＝3.6,1.8,1.1Hz,1H),5.22-5.19(m,1H),4.86-4.82(m,1H),4.19-4.16(m,2H),4.07-4.05(m,2H),3.54-3.52(m,1H),3.17-3.14(m,1H),3.07-3.02(m,2H),2.86-2.80(m,3H),2.80-2.77(m,1H),2.32(d,J＝1.2Hz,3H),2.18(s,7H),1.98-1.91(m,8H),1.69(d,J＝0.5Hz,3H),1.58(ddd,J＝5.0,2.0,0.9Hz,1H),1.52-1.43(m,2H),1.42-1.40(m,2H),1.27-1.24(m,2H),0.85(dt,J＝2.2,1.1Hz,9H),0.68-0.67(m,5H)。
Figure BDA0003124860200003122
化合物29e：29e使用针对29描述的一般程序来制备：化合物28(60mg，0.068mmol，1.00当量)，2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙-1-醇(100mg，0.693mmol，10当量)，t-BuBrettPhos-Pd-G3-环钯配合物(30mg，0.0351mmol，0.5当量)和K3PO4(30mg，0.141mmol，2.0当量)以提供15％(9.8mg)。MS：C50H62N4O14的计算值942.43；实测值943.4(M+H)。1H NMR(500MHz,CD3OD)δ6.53-6.63(m,2H),6.24(br.s.,1H),4.99-5.11(m,2H),4.27-4.40(m,2H),3.67(s,1H),3.01(d,J＝8.30Hz,4H),2.89(br.s.,2H),2.56-2.68(m,6H),2.46(br.s.,1H),2.32(s,8H),2.12(br.s.,3H),2.06(s,1H),1.92-2.04(m,3H),1.83(s,3H),1.65(d,J＝8.79Hz,2H),1.56(s,1H),1.31(br.s.,3H),1.03(br.s.,1H),0.95(s,8H),0.81(s,4H),0.01(s,2H),-0.28(s,2H)。
Figure BDA0003124860200003131
化合物29f：29f使用针对29描述的一般程序来制备：：化合物28(60mg，0.068mmol，1.00当量)，2-(2-(二甲基氨基)乙氧基)乙-1-醇(100mg，0.693mmol，10当量)，t-BuBrettPhos-Pd-G3-环钯配合物(30mg，0.0351mmol，0.5当量)和K3PO4(30mg，0.141mmol，2.0当量)以提供11％(7.1mg)。MS：C49H61N3O15的计算值931.41；实测值932.3(M+H)。1H NMR(500MHz,CD3OD)δ6.49-6.59(m,2H),6.21(br.s.,1H),4.95-5.07(m,2H),4.24-4.40(m,2H),3.87(br.s.,3H),3.72(br.s.,3H),3.00(d,J＝8.79Hz,5H),2.67(d,J＝4.88Hz,3H),2.36(s,10H),2.30(s,5H),2.11(s,5H),1.99(s,5H),1.82(s,4H),1.30(s,2H),0.93(s,6H),0.00(s,2H),-0.30(s,2H)。
Figure BDA0003124860200003141
化合物29g：29g使用针对29描述的一般程序来制备：化合物28(50mg，0.0568mmol，1.00当量)，2-吗啉代乙-1-醇(75mg，0.568mmol，10当量)，t-BuBrettPhos-Pd-G3-环钯配合物(24mg，0.028mmol，0.5当量)和K3PO4(24mg，0.115mmol，2.0当量)以提供12％(5.8mg)。MS：C49H59N3O15的计算值929.39；实测值930.4(M+H)。1H NMR(500MHz；DMSO-d6):δ10.14-10.11(m,1H),9.38-9.31(m,1H),6.76-6.59(m,1H),6.34-6.20(m,1H),6.04-6.01(m,1H),5.79-5.76(m,2H),5.21(td,J＝2.0,1.1Hz,1H),4.83(t,J＝0.8Hz,1H),4.27-4.22(m,1H),4.06-4.05(m,1H),3.57(s,6H),3.15(d,J＝0.7Hz,3H),3.03(d,J＝1.5Hz,4H),2.86(s,1H),2.71(dt,J＝2.0,1.5Hz,4H),2.17(s,3H),1.97(d,J＝15.3Hz,6H),1.69(s,3H),1.60-1.59(m,3H),1.50-1.44(m,3H),1.37(s,1H),1.24(d,J＝1.0Hz,2H),1.15-1.14(m,1H),0.85(td,J＝1.9,0.8Hz,6H),0.67(dtd,J＝4.1,2.1,0.9Hz,4H)。
Figure BDA0003124860200003142
化合物29h：29h使用针对29描述的一般程序来制备：化合物28(40mg，0.0454mmol，1.0当量)，2-(甲基(吡啶-2-基)氨基)乙-1-醇(69mg，0.454mmol，10当量)，t-BuBrettPhos-Pd-G3-环钯配合物(20mg，0.0223mmol，0.5当量)和K3PO4(20mg，0.0921mmol，2.0当量)以提供29h(5.6mg，13％)。MS：C51H58N4O14的计算值950.39；实测值951.3(M+H)。1H NMR(500MHz；,CD3OD):δ8.07(d,J＝3.91Hz,1H),7.53(t,J＝7.08Hz,1H),6.69(d,J＝8.79Hz,1H),6.59-6.66(m,2H),6.44(d,J＝1.95Hz,1H),6.22(d,J＝10.26Hz,1H),5.95(d,J＝1.95Hz,1H),5.74(d,J＝11.72Hz,1H),5.13-5.18(m,2H),4.58(s,5H),4.30(d,J＝6.35Hz,2H),4.22(dd,J＝2.93,5.86Hz,1H),4.00(t,J＝5.62Hz,2H),3.86(d,J＝10.26Hz,1H),3.35(br.s.,2H),3.13(s,2H),2.95-3.03(m,3H),2.11-2.17(m,2H),2.03-2.11(m,4H),1.92-2.00(m,8H),1.71(br.s.,1H),1.42(d,J＝2.93Hz,1H),1.35(d,J＝6.35Hz,2H),1.22-1.32(m,5H),0.85-1.00(m,3H),0.33(d,J＝6.84Hz,2H),0.09-0.10(m,1H),-0.33(d,J＝7.33Hz,2H)。
Figure BDA0003124860200003151
化合物29i：29i使用针对29描述的一般程序来制备：化合物28(40mg，0.0454mmol，1.0当量)，N-(2-羟乙基)乙酰胺(47mg，0.454mmol，10当量)，t-BuBrettPhos-Pd-G3-环钯配合物(20mg，0.0227mmol，0.5当量)和K3PO4(20mg，0.0939mmol，2.0当量)以提供29i(12.2mg，31％)。MS：C47H55N3O15的计算值901.36；实测值902.3(M+H)，900.3(M-H)。1H NMR(500MHz；CD3OD):6.65-6.84(m,1H),6.43-6.64(m,3H),6.31-6.43(m,1H),6.07-6.28(m,2H),4.92-5.10(m,2H),4.08-4.24(m,4H),3.62(br.s.,5H),2.91-3.09(m,4H),2.29(s,5H),2.11(br.s.,5H),2.04(s,2H),1.90-2.02(m,7H),1.82(s,5H),0.91(br.s.,5H),0.10(s,3H),-0.34(s,2H)。
Figure BDA0003124860200003161
化合物29j：29j使用针对29描述的一般程序来制备：化合物28(40mg，0.0454mmol，1.0当量)，N-(2-羟乙基)-N-甲基乙酰胺(53mg，0.454mmol，10当量)，t-BuBrettPhos-Pd-G3-环钯配合物(20mg，0.0227mmol，0.5当量)和K3PO4(20mg，0.0939mmol，2.0当量)以提供29j(7mg，17％)。MS：C48H57N3O15的计算值915.38；实测值916.3(M+H)。1H NMR(500MHz；CD3OD):δ6.45-6.68(m,2H),6.30-6.45(m,1H),6.11-6.30(m,1H),5.09-5.34(m,1H),4.95-5.09(m,5H),4.58(s,3H),4.18-4.40(m,2H),3.73-3.90(m,2H),3.14-3.23(m,2H),2.99(d,J＝9.28Hz,6H),2.31(br.s.,5H),2.10(s,5H),2.13(s,2H),2.04(s,1H),1.98(br.s.,3H),1.93(s,1H),1.81(s,6H),0.79-1.02(m,6H),-0.10-0.04(m,2H),-0.21–0.41(m,2H)。
Figure BDA0003124860200003162
化合物29k：29k是从化合物28开始的所有C-O交叉偶联反应的副产物。MS：C43H48N2O14的计算值816.3；实测值817.3(M+H)，839.3(M+Na)。1H NMR(500MHz；DMSO-d6):δ10.09(s,1H),9.31(s,1H),6.44(s,2H),6.00(s,1H),5.77(br.s.,2H),5.20(br.s.,1H),4.81-4.88(m,2H),4.05(br.s.,1H),3.48-3.54(m,1H),3.16(br.s.,1H),3.02(br.s.,3H),2.97(br.s.,1H),2.77(br.s.,1H),2.51-2.54(m,1H),2.12-2.21(m,4H),2.00(br.s.,1H),1.92-1.98(m,5H),1.90(s,1H),1.74(s,3H),1.61-1.71(m,6H),1.43-1.61(m,3H),1.22-1.24(m,1H),0.83(d,J＝6.35Hz,2H),0.66(br.s.,3H),0.06(d,J＝0.98Hz,1H)。
实施例6：化合物35的制备
利福霉素类似物35如下文方案10所示并且如下文描述由利福霉素S合成。
Figure BDA0003124860200003171
化合物31的合成。向化合物30(200mg，1.920mmol)在1,4-二氧六环/水(v/v，10:1，11mL)中的在氩气下的溶液中添加Fmoc-OSu(1360mg，4.032mmol)。在搅拌持续5h之后，LC/MS分析指示反应完成。将反应混合物用饱和NaHCO3(5mL)处理并且用EtOAc(3×15mL)萃取。然后将合并的有机层用盐水(10mL)处理，干燥(Na2SO4)并且在真空中浓缩以给出作为白色泡沫的粗制化合物31(800mg，76％)，其在不进一步纯化的情况下立即用于下一步。MS：C34H32N2O5的计算值548.2；实测值549.2(M+H)。
化合物32的合成。在室温，向化合物8(160mg，0.652mmol)在THF(2mL)中的在氩气下的搅拌溶液中添加醇31(432mg，0.788mmol)和PPh3(308mg，1.174mmol)。然后将DBAD(270mg，1.174mmol)在THF(1mL)中的溶液逐滴添加至反应混合物。在搅拌持续15h之后，将混合物蒸发至干燥，并且将残余物经由ISCO(梯度洗脱：0％-100％乙酸乙酯于己烷中)在40g HP硅胶Gold RediSep柱上纯化，并且将纯级分蒸发并且在真空中干燥，给出作为黄白色固体的标题化合物32(286mg，56％)。MS：C47H41N3O8的计算值775.3；实测值776.3(M+H)，798.2(M+Na)。
化合物33的合成。向化合物32(220mg，0.284mmol)在5mL的甲醇/EtOAc(2:3)中的在氩气下且用氩气脱气的溶液中添加31mg的10％Pd/C。将混合物用氩气进一步脱气，并且与氢气球连接。在2h之后，通过LC/MS对过程中等分试样的分析指示反应完成。将混合物通过硅藻土过滤并且浓缩，以提供150mg的作为黄色油的化合物33(根据LC/MS 85％纯)，其在不进一步纯化的情况下立即用于下一步。MS：C40H37N3O6的计算值655.3；实测值656.3(M+H)。
化合物34的合成。向含有羟基苯胺33(150mg，0.194mmol，85％纯)的圆底烧瓶中添加甲苯(2mL)和利福霉素S(129mg，0.185mmol)。将反应混合物超声持续1min以溶解反应混合物，经由橡胶隔膜密封，用氩气吹扫，并且将反应在环境温度搅拌。在1天之后，添加在甲苯(2mL)中的另一份羟基苯胺(45mg，0.059mmol，86％纯，使用先前描述的相同程序合成)，并且搅拌持续5d。将反应在真空中浓缩以去除甲苯，溶解在EtOH(4mL)中，并且添加MnO2(20mg)。在搅拌持续4d之后，将反应在真空中浓缩，并且经由ISCO(梯度洗脱：0％-100％乙酸乙酯于己烷中)在40g HP硅胶Gold RediSep柱上通过色谱法纯化。将纯级分蒸发并且在真空中干燥，给出作为暗红色固体的标题化合物34(65mg，26％)。MS(ESI,+)：C77H78N4O17的计算值1330.5；实测值1353.5(M+Na)。
化合物35的合成。用TBAF的溶液(13mg，0.05mL，0.050mmol，1M于THF中)处理化合物34(28mg，0.021mmol)在THF(1mL)中的在氩气下的搅拌溶液，并且将反应在环境温度搅拌。在2h之后，反应经由ISCO系统(梯度洗脱：0％-100％MeCN于水中，两者中含0.05％乙酸，经30min)在50g C18 RediSep Gold柱上直接纯化。将含产物的级分合并，在干冰上冷冻，并且冻干过夜，给出作为暗红色固体的标题化合物35(9mg，48％)。MS：C47H58N4O13的计算值886.4；实测值887.3(M+H)。1H-NMR(500MHz；CD3OD):δ7.86-7.74(m,1H),7.18-7.08(m,1H),6.98-6.84(m,1H),6.78-6.68(m,1H),6.53-6.40(m,1H),6.23-6.15(m,1H),6.23-6.15(m,1H),6.00-5.79(m,1H),6.00-5.79(m,1H),5.30-4.95(m,2H),3.81-3.65(m,6H),3.35(s,3H),3.09-2.93(m,7H),2.25-2.20(m,2H),2.17-2.03(m,4H),2.00-1.87(m,5H),1.76-1.68(m,4H),1.03-0.85(m,7H),0.78-0.65(m,2H),0.14-0.03(m,4H),0.13-0.00(m,3H),-0.30(m,2H)。
实施例7：根据本公开内容的类似物38的合成
利福霉素类似物38如下文方案11所示并且如下文描述由利福霉素S合成。
方案11
Figure BDA0003124860200003191
实施例6A：Pd催化的O-烷基化(37)：
化合物37：如实施例3中描述的，在室温用2-氨基-4-溴苯酚(0.54g，2.87mmol)处理在80mL的甲苯中的利福霉素S(2.0g，2.87mmol)。将混合物溶液在室温搅拌持续2天。然后将混合物蒸发至干燥，并且将残余物溶解在20mL的乙醇中，并且将300mg的氧化锰(MnO2)一次性添加至乙醇溶液。将混合物在室温在氩气下搅拌持续15h。在使用硅藻土垫过滤不溶性材料之后，将滤液在减压下蒸发。深色残余物经由ISCO(梯度洗脱：5％-95％EA于己烷中)在120g HP硅胶Gold RediSep柱上纯化。将纯级分蒸发并且在真空中干燥，给出作为暗红色固体的标题化合物37(1.5g，60％)。MS(ESI,+)：C43H47BrN2O12的计算值862.23；实测值863.1和865.1(M+H)，885.1和888.0(M+Na)。1H NMR 1H-NMR(500MHz；CDCl3):δ8.19-8.19(m,1H),7.66-7.64(m,1H),7.48(s,2H),7.06(s,1H),6.23-6.18(m,1H),6.01(d,J＝12.3Hz,2H),5.06-5.05(m,1H),4.98(dd,J＝12.2,7.1Hz,2H),3.11(s,3H),3.03-3.00(m,2H),2.33(s,6H),2.13(s,3H),2.07(s,6H),1.83(s,6H),1.70(s,2H),1.54(s,1H),0.97(d,J＝6.6Hz,3H),0.80(d,J＝5.2Hz,6H),0.58-0.57(m,4H)。
化合物38：采用了类似于标题化合物15和29的伯醇的钯催化的C-O偶联。向化合物37(60mg，0.069mmol，1.00当量)中添加2-(二甲基氨基)乙-1-醇(62mg，0.69mmol，10当量)，t-BuBrettPhos-Pd-G3-环钯配合物(30mg，0.0345mmol，0.5当量)和K3PO4(30mg，0.141mmol，2.0当量)。隔膜用针刺穿以排空，并且用氩气回填(该过程重复两次)，随后添加1,4-二氧六环(1.5mL)。将反应在氩气压力下在油浴中在60℃加热持续15h。将粗制材料在真空中浓缩，并且在50g C18 Aq柱上纯化(梯度洗脱：10％-95％MeCN于水中，两者中含0.05％乙酸)。将产物级分合并，在干冰上冷冻，并且冻干，给出作为暗红色固体的标题化合物38(6.8mg，12％)。另一个纯化通过制备型HPLC(Gemini，5μm，150mm×30mm，洗脱液：10％-95％MeCN于水中，0.05％AcOH)进行，并且冻干以提供纯产物(4.5mg)。MS(ESI,+)：C47H57N3O13的计算值871.39；实测值872.4(M+H)。1H NMR(500MHz；DMSO-d6)δ9.48-9.32(m,2H),7.68-7.49(m,2H),7.44-7.27(m,1H),6.11-5.95(m,1H),5.88-5.76(m,2H),5.28-5.16(m,2H),4.84-4.71(m,1H),4.21-4.18(m,1H),3.57-3.43(m,2H),3.09-3.01(m,1H),2.82-2.75(m,1H),2.67(dd,J＝15.5,10.1Hz,3H),2.29-2.23(m,13H),2.19(d,J＝0.6Hz,9H),1.99-1.91(m,1H),1.69(s,1H),1.64-1.56(m,1H),1.55-1.43(m,1H),1.24(s,1H),0.85-0.84(m,7H),0.69-0.68(m,4H)。
实施例8：化合物43的制备
利福霉素类似物43如下文方案12所示并且如下文描述由利福霉素S合成。
方案12
Figure BDA0003124860200003211
化合物39：在室温，向5-溴-1,3-二氟-2-硝基苯(2.0g，8.40mmol，1.0当量)在15mL的甲醇中的搅拌溶液中添加KOH(504mg，8.98mmol，1.07当量)。将得到的混合物在90℃回流持续1h。在反应完成之后，将混合物在室温冷却并且在减压下浓缩。将残余物用乙酸乙酯(20mL)稀释，并且用水、盐水洗涤，并且经Na2SO4干燥。在真空中浓缩之后，获得作为深色固体的粗制产物。将残余物溶解在DCM(5mL)中，并且装载在经由ISCO(梯度洗脱：己烷-90％EA于己烷中)的80g HP硅胶Gold RediSep柱上，并且将纯级分蒸发以提供39的淡黄色固体(1.48g，70％)。MS(ESI,+)：C7H5BrFNO3的计算值250.02；实测值273.2(M+Na)。1H-NMR(500MHz；CDCl3):δ7.06(dd，J＝8.6,1.5Hz,1H),7.02(s,1H),3.95(s,3H)。
化合物40：向5-溴-1-氟-3-甲氧基-2-硝基苯39(400mg，1.56mmol)在DMSO(3mL)中的搅拌溶液中添加1M NaOH(2mL，2mmol)，并且在油浴中加热至85℃持续15h。反应基于LCMS完成，并且冷却至室温，然后用1M HCl酸化直到pH＝2-3。得到的溶液使用乙酸乙酯(2×10mL)萃取。合并的有机层用水、盐水洗涤，干燥(Na2SO4)并且然后浓缩。粗制油然后经由ISCO(梯度洗脱：0％-100％乙酸乙酯于己烷中)在24g HP硅胶Gold RediSep柱上纯化，并且将纯级分蒸发并且在真空中干燥，给出作为黄白色固体的40(0.35g，89％)。MS(ESI,+)：C7H6BrNO4的计算值248.03；实测值247.9和248.9同位素(M+H)。1H-NMR(500MHz；CDCl3):δ10.50(t,J＝0.4Hz,1H),6.94(s,1H),6.71(s,1H),3.97(s,3H)。
化合物41：在室温，向5-溴-3-甲氧基-2-硝基苯酚40(150mg，0.605mmol，1.0当量)和乙酸铵(114mg，1.814mmol，3.0当量)在无水THF(3mL)中的搅拌溶液中添加Zn粉(593mg，9.07mmol，15当量)并且用氮气脱气。将混合物在油浴中加热至50℃过夜。反应基于LCMS完成。将反应冷却至室温，并且将粗制产物通过硅藻土垫过滤并且浓缩。粗制油然后经由ISCO(梯度洗脱：0％-20％DCM于甲醇中)在24g HP硅胶Gold RediSep柱上纯化，并且将纯级分蒸发并且在真空中干燥，给出作为棕色固体的41(40mg，31％)。MS(ESI,+)：C7H8BrNO2的计算值218.05；实测值219.9和220.9同位素(M+H)。1H-NMR(500MHz；CDCl3):δ6.65(s,1H),6.62(s,1H),3.85(s,3H),1.45(s,2H)。
化合物42：按照实施例3中的一般程序，在室温，向利福霉素S(118mg，0.169mmol)在4mL的甲苯中的在氩气下的搅拌溶液中添加2-氨基-5-溴-3-甲氧基苯酚41(37mg，0.169mmol)。将混合物溶液在室温搅拌持续2天。然后将混合物蒸发至干燥，并且将深色残余物溶解在5mL的乙醇中，并且将30mg的氧化锰(MnO2)一次性添加至乙醇溶液。将滞流混合物在室温在氩气下搅拌持续15h。在使用硅藻土垫过滤不溶性材料之后，将滤液在减压下蒸发。深色残余物经由ISCO(梯度洗脱：5％-95％EA于己烷中)在24g HP硅胶Gold RediSep柱上纯化。将纯级分蒸发并且在真空中干燥，给出作为暗红色固体的标题化合物42(70mg，47％)。MS(ESI,+)：C44H49BrN2O13的计算值893.78；实测值893.7和895.7(M+H)，891.3和893.1(M-H)。1H-NMR(500MHz；CDCl3):δ7.06(d,J＝9.8Hz,1H),6.00-5.98(m,1H),5.32(s,1H),5.10-5.05(m,1H),5.00-4.96(m,1H),4.13(s,4H),3.11(s,3H),3.03-3.01(m,1H),2.32(s,3H),2.13(s,3H),2.07(d,J＝4.3Hz,4H),1.85(s,3H),1.74(dtd,J＝6.2,1.7,1.2Hz,1H),1.67-1.65(m,1H),1.54(s,2H),1.29-1.26(m,1H),0.99-0.97(m,3H),0.85-0.80(m,3H),0.63-0.59(m,3H)。
化合物43：43使用针对16b描述的一般程序来制备：化合物42(37mg，0.0447mmol，1.0当量)，2-(二甲基氨基)乙-1-醇(40mg，0.447mmol，10当量)，t-BuBrettPhos-Pd-G3-环钯配合物(20mg，0.0223mmol，0.5当量)和K3PO4(20mg，0.091mmol，2.0当量)以提供标题化合物43(15.0mg，40％)。MS：C48H59N3O14的计算值901.40；实测值902.3(M+H)，900.3(M-H)。1H-NMR(500MHz；DMSO-d6):δ9.31-9.30(m,1H),6.79-6.76(m,1H),6.70(d,J＝6.2Hz,2H),6.05-6.03(m,1H),5.81-5.80(m,2H),5.25-5.22(m,2H),4.77-4.77(m,2H),4.29(dt,J＝1.9,1.0Hz,2H),4.21-4.13(m,3H),4.00(s,3H),3.57-3.54(m,1H),3.04(t,J＝0.9Hz,4H),2.96-2.87(m,1H),2.80-2.76(m,2H),2.66(s,6H),2.22(s,2H),2.15(s,3H),2.00(s,3H),1.95(s,3H),1.80-1.78(m,1H),1.66-1.59(m,3H),0.85-0.84(m,6H),0.69-0.66(m,6H)。
实施例9：化合物45的制备
利福霉素类似物45如下文方案13所示并且如下文描述由利福霉素S合成。
方案13
Figure BDA0003124860200003231
化合物44：按照实施例3中的一般程序，在室温，向利福霉素S(250mg，0.359mmol)在5mL的甲苯中的在氩气下的搅拌溶液中添加商业可得的2-氨基-5-溴-3-氯苯酚(80mg，0.359mmol)。将混合物溶液在室温搅拌过夜。然后将混合物蒸发至干燥，并且将暗红色残余物溶解在15mL的乙醇中，并且将300mg的氧化锰(MnO2)一次性添加至乙醇溶液。将滞流混合物在室温在氩气下搅拌持续15h。在使用硅藻土垫过滤不溶性材料之后，将滤液在减压下蒸发。深色残余物经由ISCO(梯度洗脱：己烷-95％EA于己烷中)在40g HP硅胶Gold RediSep柱上纯化。将纯级分蒸发并且在真空中干燥，给出作为暗红色固体的标题化合物44(161mg，50％)。MS(ESI,+)：C43H46BrClN2O12的计算值898.19；实测值899.1(M+H)。1H-NMR(500MHz；CDCl3):δ13.81(s，1H),7.65(d,J＝1.7Hz,1H),7.44(s,1H),6.24-6.22(m,1H),6.01(d,J＝12.2Hz,1H),5.07-5.05(m,1H),4.99(dd,J＝12.3,6.8Hz,1H),3.11(s,3H),3.04-3.02(m,1H),2.32(s,3H),2.13(s,3H),2.08(s,4H),1.84(s,3H),1.74-1.71(m,1H),1.71-1.66(m,1H),1.60(s,9H),0.98(d,J＝6.5Hz,4H),0.82-0.81(m,4H),0.63(d,J＝0.5Hz,4H)。
化合物45：45使用针对16b描述的一般程序来制备：化合物44(20mg，0.0222mmol，1.0当量)，2-(二甲基氨基)乙-1-醇(20mg，0.222mmol，10当量)，t-BuBrettPhos-Pd-G3-环钯配合物(9.5mg，0.0111mmol，0.5当量)和K3PO4(9.6mg，0.045mmol，2.0当量)以提供标题化合物45(6.8mg，34％)。MS：C47H56ClN3O13的计算值905.35；实测值906.3(M+H)。1H-NMR(500MHz；CD3OD)：δ7.30(d,J＝0.4Hz,1H),6.93-6.92(m,1H),6.78-6.76(m,1H),6.39-6.37(m,1H),6.20(dd,J＝12.5,0.4Hz,2H),5.09-5.07(m,1H),4.58(dq,J＝2.2,0.6Hz,1H),4.30(dd,J＝9.1,4.5Hz,1H),4.21(dtd,J＝2.8,1.4,0.7Hz,1H),3.04(d,J＝9.5Hz,6H),2.83(s,3H),2.36(s,6H),2.31(s,3H),2.11(s,1H),2.00(s,2H),1.91(s,4H),1.76(s,3H),1.73-1.62(m,2H),1.30(s,1H),0.96(d,J＝5.4Hz,6H),0.88(d,J＝6.4Hz,4H),0.25(d,J＝6.6Hz,1H),0.11(s,2H),-0.16--0.19(m,2H)。
实施例10：化合物48的制备
利福霉素类似物48如下文方案14所示并且如下文描述由利福霉素S合成。
方案14
Figure BDA0003124860200003251
化合物46：在室温，向商业可得的5-溴-4-氯-2-硝基苯酚(100mg，0.396mmol，1.0当量)和乙酸铵(75mg，1.188mmol，3.0当量)在无水THF(5mL)中的搅拌溶液中添加Zn粉(388mg，5.94mmol，15当量)并且用氮气脱气。将混合物在油浴中加热至50℃持续2h。反应基于LCMS完成，并且冷却至室温。将粗制产物通过硅藻土垫过滤并且浓缩。粗制油然后经由ISCO(梯度洗脱：0％-20％DCM于甲醇中)在24g HP硅胶Gold RediSep柱上纯化，并且将纯级分蒸发并且在真空中干燥，给出作为棕色固体的46(37mg，42％)。MS(ESI,+)：C6H5BrClNO的计算值222.47；实测值222.9和223.9同位素(M+H)。1H-NMR(500MHz；CD3OD):δ6.89(s,1H)，6.81(s,1H)NH2和OH未见到。
化合物47：按照实施例3中的一般程序，在室温，向利福霉素S(62mg，0.0899mmol)在1.5mL的甲苯和0.25mL的THF中的在氩气下的搅拌溶液中添加2-氨基-5-溴-4-氯苯酚46(20mg，0.0899mmol)。将混合物溶液在室温搅拌持续7天。然后将混合物蒸发至干燥，并且将暗红色残余物溶解在10mL的乙醇中，并且将100mg的氧化锰(MnO2)一次性添加至乙醇溶液。将滞流混合物在室温在氩气下搅拌持续15h。在使用硅藻土垫过滤不溶性材料之后，将滤液在减压下蒸发。深色残余物经由ISCO(梯度洗脱：己烷-95％EA于己烷中)在40g HP硅胶GoldRediSep柱上纯化。将纯级分蒸发并且在真空中干燥，给出作为暗红色固体的标题化合物47(40mg，51％)。MS(ESI,+)：C43H46BrClN2O12的计算值898.19；实测值899.1(M+H)。1H-NMR(500MHz；CDCl3):δ13.87(s,1H),8.11(s,1H),7.67(s,1H),6.32(s,1H),6.01(d,J＝12.4Hz,2H),5.04-5.04(m,1H),4.98(dd,J＝12.2,6.5Hz,2H),3.11(s,6H),3.03-3.01(m,2H),2.34(s,6H),2.14(s,7H),2.07(s,6H),1.83(s,6H),1.73(dt,J＝6.4,0.6Hz,3H),1.65-1.56(m,17H),0.99(d,J＝6.2Hz,6H),0.83-0.82(m,6H),0.60(t,J＝0.7Hz,5H)。
化合物48：48使用针对16b描述的一般程序来制备：化合物47(20mg，0.0222mmol，1.0当量)，2-(二甲基氨基)乙-1-醇(20mg，0.222mmol，10当量)，t-BuBrettPhos-Pd-G3-环钯配合物(9.5mg，0.0111mmol，0.5当量)和K3PO4(9.6mg，0.045mmol，2.0当量)以提供标题化合物48(2.8mg，12％)。MS：C47H56ClN3O13的计算值905.35；实测值906.3(M+H)。1H-NMR(500MHz；CD3OD)：δ8.04(t,J＝0.6Hz,1H),7.15-7.14(m,1H),6.90-6.89(m,2H),6.42-6.41(m,2H),6.22-6.20(m,1H),5.02-4.99(m,1H),4.59(s,1H),4.42-4.41(m,1H),4.24-4.21(m,1H),3.77-3.74(m,1H),3.04-3.02(m,1H),2.94(d,J＝0.4Hz,1H),2.43(s,6H),2.31(s,5H),2.12(s,6H),1.99(s,5H),1.92(s,4H),1.79(s,1H),1.69(t,J＝1.4Hz,1H),1.31(s,1H),0.96(t,J＝0.5Hz,6H),0.85-0.70(m,4H),0.11(s,1H),-0.22(td,J＝2.3,1.2Hz,1H)。
实施例11：化合物50的制备
利福霉素类似物50如下文方案15所示并且如下文描述由化合物28合成。
方案15
Figure BDA0003124860200003271
化合物49：在室温，向化合物28(50mg，0.0568mmol，1.0当量)在1.5mL的无水DMF中的搅拌溶液中添加K2CO3(12mg，0.0852mmol，1.5当量)，随后添加n-BuBr(15.5mg，0.1136mmol，2.0当量)。将得到的混合物在50℃回流过夜。将粗制产物用乙腈/水稀释，并且通过EZ制备型柱在ISCO系统上纯化(洗脱液：10％-95％MeCN于水中，0.05％AcOH)。将纯级分通过LC/MS收集，在干冰/丙酮浴中冷冻，并且冻干持续30h以提供34mg(65％)的49。MS(ESI,+)：C47H55BrN2O13的计算值935.85；实测值935.2和937.2(M+H)。1H-NMR(500MHz；CDCl3):δ7.48(s,2H),7.13(s,1H),7.07(s,2H),7.02(s,1H),5.92-6.07(m,1H),4.98(dd,J＝6.84,12.21Hz,1H),4.18-4.25(m,2H),3.11(s,3H),3.02(br.s.,1H),2.31(s,3H),2.13(s,3H),2.07(s,4H),1.95-2.03(m,2H),1.80(s,4H),1.74(br.s.,2H),1.60-1.71(m,2H),1.50-1.59(m,12H),1.05(t,J＝7.33Hz,4H),0.98(br.s.,3H),0.81(br.s.,2H),0.62(br.s.,2H)。
化合物50：50使用针对16b描述的一般程序来制备：化合物49(20mg，0.0213mmol，1.0当量)，2-(二甲基氨基)乙-1-醇(19mg，0.213mmol，10当量)，t-BuBrettPhos-Pd-G3-环钯配合物(9.1mg，0.01065mmol，0.5当量)和K3PO4(9.2mg，0.043mmol，2.0当量)以提供标题化合物50(6.1mg，30％)。使用ISCO EZ制备型柱(Gemini)来纯化期望的产物(洗脱液：10％-95％MeCN于水中，0.05％AcOH)。MS：C51H65N3O14的计算值943.45；实测值944.4(M+H)，942.3(M-H)。1H-NMR(500MHz；CD3OD):δ6.82-6.81(m,2H),6.70(s,1H),6.58-6.55(m,1H),6.38-6.37(m,2H),6.23(ddd,J＝3.0,1.6,0.8Hz,2H),5.07(bs,2H),4.59(s,6H),4.29(t,J＝5.3Hz,4H),4.20-4.14(m,2H),3.74-3.71(m,2H),3.03(s,6H),2.83(d,J＝0.3Hz,2H),2.36(s,6H),2.31(s,1H),2.11(s,3H),1.98(s,2H),1.76(s,3H),1.69-1.60(m,1H),1.30(s,2H),1.08(s,6H),0.97-0.91(m,4H),0.11(s,3H),-0.21(dd,J＝2.2,0.9Hz,2H)。
实施例12：化合物52的制备
利福霉素类似物52如下文方案16所示并且如下文描述由化合物28合成。
方案16
Figure BDA0003124860200003281
化合物51：在室温，向化合物28(50mg，0.0568mmol，1.0当量)在1.5mL的无水DMF中的搅拌溶液中添加K2CO3(12mg，0.0852mmol，1.5当量)，随后添加苄基溴(19.4mg，0.1136mmol，2.0当量)。将得到的混合物在室温搅拌过夜。使用ISCO系统EZ制备型柱来纯化期望的产物(洗脱液：10％-95％MeCN于水中，0.05％AcOH)。将纯级分通过LC/MS收集，在干冰/丙酮浴中冷冻，并且冻干持续30h以提供25mg(45％)的51。MS(ESI,+)：C50H53BrN2O13的计算值969.88；实测值969.2和971.2(M+H)。1H-NMR(500MHz；CDCl3):δ7.68-7.66(m,1H),7.45-7.42(m,2H),7.39-7.37(m,2H),7.19(dt,J＝1.0,0.5Hz,2H),7.14(t,J＝0.4Hz,2H),5.99(dd,J＝12.2,0.4Hz,1H),5.44-5.38(m,1H),5.29-5.22(m,2H),5.00-4.96(m,2H),3.10(s,3H),3.03-3.01(m,1H),2.31(s,6H),2.14(s,3H),2.07(s,3H),1.78(d,J＝0.4Hz,3H),1.66-1.64(m,3H),1.54(s,3H),1.27(s,3H),1.00-0.98(m,3H),0.90(dd,J＝8.5,4.8Hz,3H),0.83(dddd,J＝2.9,2.1,1.5,0.7Hz,2H),0.63-0.61(m,1H),0.14(s,1H)。
化合物52：52使用针对16b描述的一般程序来制备：化合物51(26mg，0.0268mmol，1.0当量)，2-(二甲基氨基)乙-1-醇(24mg，0.268mmol，10当量)，t-BuBrettPhos-Pd-G3-环钯配合物(11.4mg，0.0134mmol，0.5当量)和K3PO4(11.5mg，0.054mmol，2.0当量)以提供标题化合物52(7.0mg，27％)。使用ISCO EZ制备型柱(Gemini)来纯化期望的产物(洗脱液：10％-95％MeCN于水中，0.05％AcOH)。MS：C54H63N3O14的计算值977.43；实测值978.4(M+H)，976.3(M-H)。1H-NMR(500MHz；CD3OD):δ7.73(d,J＝7.0Hz,2H),7.43(d,J＝4.3Hz,2H),7.38-7.37(m,1H),6.81(s,2H),6.58(d,J＝0.9Hz,1H),6.42-6.40(m,1H),6.21-6.18(m,1H),6.03(d,J＝12.6Hz,1H),5.41-5.36(m,2H),5.05-5.01(m,1H),4.59(s,1H),4.29(d,J＝5.1Hz,1H),4.18(dt,J＝2.6,1.3Hz,1H),3.72-3.70(m,1H),3.00(d,J＝9.9Hz,4H),2.83(s,2H),2.37(s,7H),2.29(s,3H),2.11(s,3H),2.03(d,J＝18.5Hz,6H),1.74(s,4H),1.64-1.63(m,1H),1.30(s,1H),0.96-0.90(m,10H),0.11-0.09(m,2H),-0.25(t,J＝0.6Hz,2H)。
实施例13：化合物55的制备
利福霉素类似物55如下文方案17所示并且如下文描述由利福霉素S合成。
方案17
Figure BDA0003124860200003301
化合物53：在室温，向商业可得的5-溴-3-氟-2-硝基苯酚(150mg，0.635mmol，1.0当量)和乙酸铵(120mg，1.906mmol，3.0当量)在无水THF(5mL)中的用氮气脱气的溶液中添加Zn粉(622mg，9.52mmol，15当量)。将混合物在油浴中加热至50℃持续2h。反应基于LCMS完成，并且冷却至室温。将粗制产物通过硅藻土垫过滤并且浓缩。粗制油然后经由ISCO系统(梯度洗脱：0％-20％DCM于甲醇中)在24g HP硅胶Gold RediSep柱上纯化，并且将纯级分蒸发并且在真空中干燥，给出作为棕色固体的53(67mg，52％)。MS(ESI,+)：C6H5BrFNO的计算值206.01；实测值205.9和207.9同位素(M+H)。1H-NMR(500MHz；CD3OD):δ6.71-6.67(m,2H)。NH2和OH未见到。
化合物54：按照实施例9中的一般程序，在室温，向利福霉素S(120mg，0.172mmol)在1.5mL的甲苯中的在氩气下的搅拌溶液中添加化合物53(36mg，0.172mmol)，以提供作为暗红色固体的标题化合物54(92mg，61％)。MS(ESI,+)：C43H46BrFN2O12的计算值881.75；实测值882.1和883.2(M+H)，880.1和881.1(M-H)。1H-NMR(500MHz；DMSO-d6):δ9.54(s,1H),7.80-7.79(m,2H),6.04-6.01(m,1H),5.74(s,1H),5.22(s,2H),4.80-4.76(m,1H),4.23(dt,J＝1.4,0.6Hz,1H),3.09-3.02(m,5H),2.78(td,J＝10.0,1.8Hz,1H),2.16(s,3H),1.99(s,4H),1.95(s,4H),1.65(s,3H),1.60-1.59(m,2H),1.46(dt,J＝1.9,0.9Hz,1H),0.88-0.85(m,2H),0.83(t,J＝7.8Hz,4H),0.67(s,5H)。
化合物55：55使用针对16b描述的一般程序来制备：化合物54(40mg，0.0453mmol，1.0当量)，2-(二甲基氨基)乙-1-醇(40mg，0.453mmol，10当量)，t-BuBrettPhos-Pd-G3-环钯配合物(19.3mg，0.0226mmol，0.5当量)和K3PO4(19.6mg，0.0919mmol，2.0当量)以提供标题化合物55(16.8mg，42％)。MS：C47H56FN3O13的计算值889.38；实测值890.4(M+H)，888.3(M-H)。1H-NMR(500MHz；DMSO-d6):δ9.43-9.42(m,1H),7.15-7.12(m,1H),7.05-7.03(m,1H),6.04(dtd,J＝4.5,2.2,1.1Hz,1H),5.85-5.80(m,1H),5.23(dtd,J＝3.5,1.8,1.0Hz,1H),4.79-4.75(m,1H),4.27(s,1H),4.19-4.18(m,2H),3.52-3.51(m,1H),3.09-2.99(m,4H),2.80-2.75(m,1H),2.64-2.63(m,2H),2.15(s,9H),1.99(s,3H),1.94(s,2H),1.64(s,2H),1.48-1.44(m,1H),1.36-1.33(m,1H),1.23-1.22(m,1H),1.14-1.13(m,1H),1.05(d,J＝12.0Hz,1H),0.83(d,J＝6.8Hz,6H),0.68-0.66(m,5H)。
Figure BDA0003124860200003311
化合物55a：55a是从化合物54开始的C-O交叉偶联反应的副产物。MS：C43H47N2O13的计算值818.3；实测值819.3(M+H)，817.2(M-H)。1HNMR(500MHz；DMSO-d6):δ9.31(s，1H)，5.82(s，2H)，4.76(s,2H),4.13(br.s.,1H),3.52(d,J＝5.86Hz,1H),3.08(br.s.,2H),3.02(br.s.,3H),2.97(s,1H),2.88(s,1H),2.77(br.s.,2H),2.72(s,1H),2.52(d,J＝8.79Hz,1H),2.19(br.s.,1H),2.14(br.s.,3H),1.92-2.01(m,7H),1.90(s,1H),1.64(br.s.,3H),1.58(br.s.,2H),1.22(s,1H),0.72-0.95(m,6H),0.67(br.s.,3H),0.06(s,2H)。
实施例14：化合物60和61的制备
利福霉素类似物60和61如下文方案18所示并且如下文描述由利福霉素S合成。
方案18
Figure BDA0003124860200003321
化合物56：在冰浴中，向5-溴-1,3-二氟-2-硝基苯(1.0g，4.2mmol，1.0当量)在7.5mL的DMF中的搅拌溶液中添加在2.5mL的水中的CH3SNa(320mg，4.6mmol，1.1当量)。将得到的混合物在室温搅拌持续1h。将黄色悬浮液用水(5mL)稀释并且过滤，以获得含有二硫化物副产物杂质的黄色固体(0.91g)。MS(ESI,+)：C7H5BrFNO2S的计算值266.08；实测值299.1(M+Na)。
化合物57：用1M NaOH(6mL，6mmol)处理在DMSO(10mL)中的粗制56(900mg)，并且在油浴中加热至85℃持续1.5h。反应基于LCMS完成，并且冷却至室温。用1M HCl酸化反应，直至pH＝2-3，并且将得到的溶液使用乙酸乙酯(2×10mL)萃取。合并的有机层用水、盐水洗涤，干燥(Na2SO4)并且然后浓缩。粗制产物然后经由ISCO系统(梯度洗脱：0％-100％乙酸乙酯于己烷中)在24g HP硅胶Gold RediSep柱上纯化，并且将纯级分蒸发并且在真空中干燥，给出作为黄白色固体的57(0.51g，46％)。MS(ESI,+)：C7H6BrNO3S的计算值264.09；实测值263.9和262.9同位素(M-H)。1H-NMR(500MHz；CDCl3):δ11.40(s,1H),7.10(dd,J＝2.0,1.1Hz,1H),6.91(d,J＝1.1Hz,1H),6.91(d,J＝1.1Hz,1H),2.48(s,3H)。
化合物58：在室温，向化合物57(200mg，0.757mmol，1.0当量)和乙酸铵(143mg，2.271mmol，3.0当量)在无水THF(7mL)中的溶液中添加Zn粉(495mg，7.57mmol，10当量)并且用氮气脱气。将混合物在油浴中加热至50℃持续2h。反应基于LCMS完成，并且冷却至室温。将粗制产物通过硅藻土垫过滤并且浓缩。粗制产物然后经由ISCO系统(梯度洗脱：0％-20％DCM于甲醇中)在24g HP硅胶Gold RediSep柱上纯化，并且将纯级分蒸发并且在真空中干燥，给出作为淡棕色固体的58(120mg，68％)。MS(ESI,+)：C7H8BrNOS的计算值234.11；实测值235.9和236.9同位素(M+H)，232.9和231.9同位素(M-H)。1H-NMR(300MHz；CDCl3):δ7.09(d，J＝2.0Hz,1H),6.84(d,J＝2.1Hz,1H),5.07-5.06(m,1H),4.15-4.09(m,2H),2.42(s,3H)。
化合物59：按照实施例9中的一般程序，在室温，向利福霉素S(267mg，0.384mmol)在5mL的甲苯中的在氩气下的搅拌溶液中添加化合物58(90mg，0.384mmol)。在2天之后，将反应在真空中浓缩以去除甲苯，溶解在EtOH(10mL)中，并且添加MnO2(30mg)。在搅拌持续1天之后，将反应在真空中浓缩。粗制产物经由ISCO系统(梯度洗脱：0％-100％乙酸乙酯于己烷中)在40g HP硅胶Gold RediSep柱上纯化，以提供作为暗红色固体的标题化合物59(181mg，52％)。MS(ESI,+)：C44H49BrN2O12S的计算值909.84；实测值910.2和911.2(M+H)，908.1和907.1(M-H)。1H-NMR(500MHz；CD3OD)：δ7.35(s,1H),7.25-7.23(m,1H),6.74(dt,J＝1.7,0.9Hz,1H),6.37-6.35(m,1H),6.26-6.22(m,2H),5.20(ddt,J＝7.1,2.9,1.1Hz,1H),5.09-5.08(m,1H),3.70-3.68(m,),3.05-3.03(m,4H),2.57(s,3H),2.30(s,3H),2.09(s,3H),1.99(s,3H),1.75(s,3H),1.67-1.64(m,1H),0.94(d,J＝6.9Hz,3H),0.87-0.86(m,3H),0.07-0.06(m,2H),-0.17--0.18(m,1H)。
化合物60：60使用针对16b描述的一般程序来制备：化合物59(40mg，0.044mmol，1.0当量)，2-(二甲基氨基)乙-1-醇(40mg，0.439mmol，10当量)，t-BuBrettPhos-Pd-G3-环钯配合物(19mg，0.022mmol，0.5当量)和K3PO4(19mg，0.089mmol，2.0当量)以提供标题化合物60(22mg，55％)。MS：C48H59N3O13S的计算值917.38；实测值918.4(M+H)，916.3(M-H)。1H-NMR(500MHz；CD3OD)：δ6.85-6.81(m,2H),6.68-6.67(m,1H),6.41-6.39(m,1H),6.27(dt,J＝1.5,0.7Hz,1H),6.19-6.16(m,1H),5.25-5.22(m,1H),5.03-5.02(m,1H),4.30(t,J＝5.1Hz,1H),4.19-4.17(m,1H),3.68(ddd,J＝5.5,2.2,1.0Hz,1H),3.48-3.44(m,1H),3.02(d,J＝8.9Hz,6H),2.81(d,J＝4.9Hz,3H),2.56(s,3H),2.43-2.37(m,6H),2.29(s,4H),2.14-2.04(m,3H),1.98(s,3H),1.79-1.71(m,3H),1.63-1.59(m,2H),1.25-1.22(m,2H),1.08-1.05(m,2H),0.94(d,J＝7.0Hz,6H),0.89-0.87(m,3H),0.05-0.03(m,2H),-0.24(ddt,J＝2.8,2.2,1.4Hz,2H)。
化合物61：在冰浴中，向化合物60(12mg，0.013mmol)在3mL的无水DCM中的搅拌溶液中添加m-CPBA(6.8mg，0.039mmol)。得到的溶液被允许升温至室温持续3h，以提供标题化合物61。将粗制产物浓缩并且通过ISCO系统EZ制备型HPLC柱纯化(Gemini，5μm，150mm×30mm，洗脱液：10％-95％MeCN于水中，0.05％AcOH)。将纯级分收集，在干冰/丙酮浴中冷冻，并且通过冻干机干燥持续30h，以提供6.5mg(52％)的作为红紫色固体的61。MS(ESI,+)：C48H59N3O15S的计算值949.37；实测值950.37(M+H)，948.2(M-H)。1H-NMR(500MHz；CD3OD):δ7.94-7.85(m,1H),7.59(d,J＝0.7Hz,1H),7.42(d,J＝7.9Hz,1H),7.37(dd,J＝7.2,0.6Hz,1H),7.18-7.15(m,1H),6.85-6.81(m,1H),6.41-6.36(m,1H),6.23-6.21(m,1H),5.11-5.08(m,1H),4.74-4.72(m,2H),3.83-3.81(m,4H),3.14-3.06(m,2H),3.03(dd,J＝10.2,2.1Hz,6H),2.33(s,6H),2.11(d,J＝5.2Hz,4H),2.04(s,3H),1.98(s,3H),1.77(d,J＝10.6Hz,2H),1.70-1.65(m,1H),1.29(s,1H),0.94(d,J＝6.9Hz,6H),0.87-0.86(m,3H),0.10(d,J＝2.8Hz,3H),0.05-0.02(m,2H),-0.17--0.19(m,2H)。
实施例15：化合物68的制备
利福霉素类似物68如下文方案19所示并且如下文描述由利福霉素S合成。
方案19
Figure BDA0003124860200003351
化合物62：在冰浴中，向1,3,5-三氟-2-硝基苯(1.0g，5.65mmol，1.0当量)在5mL的无水THF中的搅拌溶液中逐滴添加苄醇(1.34g，12.42mmol，2.2当量)在7mL的THF中的溶液，然后在氩气下用KOtBu(12mL，11.86mmol，2.1当量)在THF中的溶液处理。将得到的混合物在室温搅拌持续4h。得到的溶液使用乙酸乙酯(2×40mL)萃取。合并的有机层用水、盐水洗涤，干燥(Na2SO4)并且然后浓缩。将粗制产物用THF/乙醇重结晶，以提供化合物62(1.63g，82％)的灰白色固体。MS(ESI,+)：C20H16FNO4的计算值353.35；实测值376.1(M+Na)。1H-NMR(500MHz；CDCl3):δ7.40-7.35(m,10H),6.40(d,J＝10.1Hz,2H),5.16(s,4H)。
化合物63：用2M NaOH(5mL，10mmol)处理在DMSO(7mL)中的化合物62(1.4g，3.96mmol)，并且在油浴中加热至85℃过夜。反应基于LCMS完成，并且冷却至室温。用1M HCl酸化反应，直至pH＝2-3，并且将得到的溶液使用乙酸乙酯(2×30mL)萃取。合并的有机层用水、盐水洗涤，干燥(Na2SO4)并且然后浓缩。粗制产物然后经由ISCO系统(梯度洗脱：0％-100％乙酸乙酯于己烷中)在80g HP硅胶Gold RediSep柱上纯化，并且将纯级分蒸发并且在真空中干燥，给出作为黄色固体的63(1.29g，82％)。MS(ESI,+)：C20H17NO5的计算值351.11；实测值374.1(M+H)和350.1(M-H)。1H-NMR(300MHz；CDCl3):δ7.40-7.35(m,10H),6.20(d,J＝10.1Hz,2H),5.15(s,4H)。
化合物64：使用实施例2中报告的相同方法制备标题化合物。在室温，向化合物63(200mg，0.569mmol)在THF(5mL)中的在氩气下的搅拌溶液中添加BOC-哌啶-4-醇(115mg，0.569mmol)和PPh3(224mg，0.853mmol)，随后逐滴添加在THF(2mL)中的DBAD(157mg，0.682mmol)。在搅拌过夜之后，将混合物蒸发至干燥，并且将残余物经由ISCO系统(梯度洗脱：0％-100％乙酸乙酯于己烷中)在40g HP硅胶Gold RediSep柱上纯化，并且将纯级分蒸发并且在真空中干燥，给出作为灰白色固体的标题化合物64(285mg，93％)。MS：C30H34N2O7的计算值534.24；实测值557.2(M+Na)。1H-NMR(500MHz；CDCl3):δ7.39(d,J＝4.3Hz,6H),7.34(d,J＝4.7Hz,4H),6.14(s,2H),5.15(s,4H),4.29(dd,J＝3.6,3.0Hz,1H),3.67-3.63(m,2H),3.28-3.26(m,2H),1.79-1.76(m,2H),1.63-1.56(m,2H),1.49(d,J＝2.0Hz,9H。
化合物65：向化合物64(285mg，0.54mmol)在1,4-二氧六环(2.0mL)中的溶液中添加在1,4-二氧六环(1.4mL)中的4M HCl。在搅拌持续15h之后，过程中等分试样指示反应完成。向溶液中添加乙醚(50mL)，然后将混合物剧烈搅拌持续1h，直到形成白色沉淀。将固体过滤，并且用乙醚洗涤，以提供对应的胺的HCl盐，其在不进一步纯化的情况下立即用于下一步。MS：C25H26N2O5的计算值434.18；实测值435.2(M+H)。
向HCl盐在1,4-二氧六环/水(v/v，1:1，6mL)中的溶液中添加NaHCO3(182mg，2.17mmol，4.0当量)，随后添加Fmoc-OSu(219mg，0.65mmol，1.2当量)。在搅拌持续5h之后，过程中LC/MS分析指示反应完成。将反应混合物用水(5mL)处理并且用EtOAc(3×15mL)萃取。然后合并的有机层用盐水(10mL)处理，干燥(Na2SO4)并且在真空中浓缩。粗制化合物经由ISCO系统(梯度洗脱：0％-100％乙酸乙酯于己烷中)在24g HP硅胶Gold RediSep柱上纯化，并且将纯级分蒸发以提供灰白色泡沫(250mg，70％)。MS：C40H36N2O7的计算值656.25；实测值657.2(M+H)，689.3(M+Na)。1H-NMR(500MHz；CDCl3):δ7.79(d,J＝7.5Hz,2H),7.59(d,J＝7.4Hz,2H),7.40(五重峰,J＝5.6Hz,10H),7.34(t,J＝6.9Hz,4H),6.13(s,2H),5.15(s,4H),4.48-4.47(m,2H),4.31-4.30(m,1H),4.26(t,J＝6.5Hz,1H),3.63(dddt,J＝5.1,2.7,1.7,0.9Hz,2H),3.35-3.32(m,2H),1.74-1.72(m,2H),1.62-1.58(m,2H)。
化合物66：向化合物65(220mg，0.304mmol)在5mL的甲醇/EtOAc(2:3)中的用氩气脱气的溶液中添加28mg的10％Pd/C。将混合物用氩气进一步脱气，并且与氢气球连接。在2h之后，通过LC/MS对过程中等分试样的分析指示反应完成。将混合物通过硅藻土过滤，用MeOH(2×10mL)和EtOAc(10mL)洗涤并且浓缩，以提供130mg的作为黄色油的化合物66(根据LC/MS 70％纯)，其在不进一步纯化的情况下立即用于下一步。MS：C26H26N2O5的计算值446.1；实测值447.1(M+H)。
化合物67：向含有羟基苯胺66(130mg，0.204mmol，70％醇)的圆底烧瓶中添加THF(1mL)并且超声处理持续1min。然后添加利福霉素S(135mg，0.194mmol)和甲苯(5mL)，并且将反应混合物超声处理持续2min以溶解暗黄色固体，经由橡胶隔膜密封，用氩气吹扫，并且将反应在环境温度剧烈搅拌。在10天之后，将反应在真空中浓缩以去除甲苯/THF，溶解在EtOH(10mL)中，并且添加MnO2(70mg，0.805mmol)。在搅拌持续4天之后，将反应在真空中浓缩，并且经由ISCO系统(梯度洗脱：0％-50％MeOH/DCM)在24g HP硅胶Gold RediSep柱上通过色谱法纯化。将相对纯的级分蒸发并且在真空中干燥，给出作为暗红色固体的标题化合物67(120mg，38％)。化合物67在LCMS中不电离。
化合物68：用哌啶的溶液(0.5mL，2％于DMF中)处理粗制化合物67(120mg，0.041mmol，38％纯)在DMF(2mL)中的在氩气下的搅拌溶液，并且将反应在环境温度搅拌。在1h之后，反应经由ISCO系统(梯度洗脱：0％-100％MeCN于水中，两者中含0.05％乙酸，经30min)在50g C18RediSep Gold柱上直接纯化。将含产物的级分合并，在干冰上冷冻，并且冻干过夜，给出作为暗红色固体的Fmoc脱保护产物(9mg，25％)。MS：C48H57N3O14的计算值899.4；实测值900.4(M+H)。
在环境温度，向产物(7mg，0.0078mmol)在DCM(2mL)中的在氩气下的搅拌溶液中添加多聚甲醛(3.5mg，0.1167mmol)和Na(OAc)3BH(6.6mg，0.0312mmol)。在4h之后，向反应混合物中添加另一份多聚甲醛(3.5mg，0.1167mmol)和Na(OAc)3BH(6.0mg，0.0283mmol)。在1h之后，将反应通过硅藻土过滤，用MeOH(2×10mL)洗涤，浓缩并且经由ISCO系统(梯度洗脱：0％-100％MeCN于水中，两者中含0.05％乙酸，经30min)在15.5g C18 RediSep Gold柱上直接纯化。将含产物的级分合并，在干冰上冷冻，并且冻干过夜，给出标题化合物68。将化合物通过EZ制备型HPLC柱重新纯化(Gemini，5μm，150mm×30mm，洗脱液：10％-95％MeCN于水中，0.05％AcOH)。将纯级分合并，在干冰/丙酮上冷冻，并且冻干过夜，给出作为暗红色固体的标题化合物68(2mg，28％)。MS：C49H59N3O14的计算值913.4；实测值914.4(M+H)。1H-NMR(500MHz；CD3OD):δ6.68(br.s.,1H),6.47-6.58(m,1H),6.32-6.46(m,1H),6.13-6.32(m,1H),4.64-4.75(m,1H),4.59(br.s.,1H),3.46(s,1H),3.18(br.s.,1H),2.91-3.12(m,4H),2.76(br.s.,2H),2.51(br.s.,2H),2.35-2.42(m,3H),2.31(br.s.,2H),2.22(br.s.,2H),2.04-2.17(m,3H),1.97-2.04(m,3H),1.94(s,6H),1.90(br.s.,2H),1.72-1.83(m,6H),1.55-1.71(m,3H),1.39-1.52(m,3H),1.25-1.37(m,3H),0.76-1.06(m,4H),0.02(br.s.,2H),-0.25(br.s.,3H)。
实施例16：化合物71的制备
利福霉素类似物71如下文方案20所示并且如下文描述由利福霉素S合成。
方案20
Figure BDA0003124860200003381
化合物69：向3-(苄氧基)-2-硝基苯酚(500mg，2.03mmol，1.0当量)、2-氯-N,N-二甲基乙-1-胺HCl盐(380mg，2.65mmol，1.3当量)和Cs2CO3(1.65g，5.07mmol，2.5当量)的搅拌混合物中添加无水丙酮(7mL)并且在50℃加热过夜。反应基于LC/MS完成，并且冷却至室温。将粗制产物通过硅藻土垫过滤并且浓缩。粗制产物然后经由ISCO(梯度洗脱：0％-20％DCM于甲醇中)在40g HP硅胶Gold RediSep柱上纯化，并且将纯级分蒸发并且在真空中干燥，给出作为深色油的69(428mg，67％)。MS(ESI,+)：C17H20N2O4的计算值316.36；实测值317.2(M+H)。1H-NMR(500MHz；CDCl3)：δ7.39-7.29(m,6H),6.65(t,J＝8.5Hz,2H),5.18(s,2H),4.17(t,J＝5.9Hz,2H),2.75(t,J＝5.9Hz,2H),2.33(s,6H)。
化合物70：向化合物69(185mg，0.585mmol)在甲醇(3mL)中的在氩气下的搅拌溶液中添加37mg的20％Pd(OH)2/C(含有～50％水)。将混合物用氩气进一步脱气，并且与氢气球连接。在2h之后，通过LC/MS对过程中等分试样的分析指示反应完成。将混合物通过硅藻土过滤并且浓缩，以提供110mg的作为暗黄色油的标题化合物70(根据LC/MS 85％纯)，其在不进一步纯化的情况下立即用于下一步。MS：C10H16N2O2的计算值196.1；实测值197.1(M+H)。
化合物71：向含有羟基苯胺70(110mg，0.476mmol，85％纯)的圆底烧瓶中添加1,4-二氧六环(6.8mL)和利福霉素S(663mg，0.953mmol)。将反应混合物经由橡胶隔膜密封，用氩气吹扫，并且将反应在环境温度剧烈搅拌。在7天之后，将反应在真空中浓缩，溶解在MeOH(10mL)中，并且添加MnO2(104mg，1.191mmol)。在搅拌持续4周之后，将反应通过硅藻土过滤，用MeOH(2×20mL)洗涤，在真空中浓缩，并且经由ISCO系统(梯度洗脱：0％-10％然后10％-50％MeOH/DCM)在40g HP硅胶Gold RediSep柱上通过色谱法纯化。将纯级分蒸发并且在真空中干燥。将浓缩的级分溶解在MeCN/H2O(1:1)中，在干冰/丙酮上冷冻，并且冻干过夜，以给出作为暗红色固体的标题化合物71(48mg，12％)。MS(ESI,+)：C47H57N3O13的计算值871.4；实测值872.4(M+H)。1H-NMR(500MHz；DMSO-d6):δ9.37(s,1H),7.65(t,J＝8.55Hz,1H),7.15(d,J＝8.30Hz,1H),5.23(br.s.,1H),4.33(br.s.,2H),4.28(br.s.,1H),3.13(br.s.,1H),3.01(br.s.,4H),2.95(br.s.,1H),2.91(br.s.,3H),2.78(t,J＝9.28Hz,1H),2.31(br.s.,9H),2.17(br.s.,4H),1.98(s,5H),1.94(br.s.,4H),1.67(br.s.,3H),1.59(br.s.,1H),0.80-0.93(m,8H),0.78(br.s.,1H),0.67(br.s.,6H)。
实施例17：化合物72的制备
利福霉素类似物72如下文方案21所示并且如下文描述由化合物15合成。
方案21
Figure BDA0003124860200003401
化合物72：使用Sonogashira偶联反应制备标题化合物。在室温，将化合物15(100mg，0.115mmol，1.0当量)、N,N-二甲基丙-2-炔-1-胺(19μL，0.173mmol，1.5当量)、CuI(1.1mg，0.00575mmol，0.05当量)、Pd(PPh3)4(3.3mg，0.00287mmol，0.025当量)和三乙胺(64μL，0.46mmol，4.0当量)在无水THF(3mL)中的脱气的混合物搅拌过夜。通过LC/MS监测反应进程，并且添加另外的催化剂(10mg)。将混合物在油浴中加热至40℃过夜。反应基于LC/MS完成。将粗制产物通过硅藻土垫过滤并且浓缩。粗制产物然后通过C18 50g柱纯化，随后通过ISCO EZ制备型HPLC柱(Gemini，5μm，150mm×30mm，洗脱液：10％-95％MeCN于水中，0.05％AcOH)进行另一个纯化。将纯级分收集，在干冰/丙酮浴中冷冻，并且通过冻干机干燥持续20h，以提供12mg(9％)的作为红色固体的72。MS(ESI,+)：C48H55N3O12的计算值865.38；实测值866.4(M+H)，864.4(M-H)。1H-NMR(500MHz；CD3OD):δ7.97-7.94(m,1H),7.54(t,J＝1.7Hz,1H),7.39-7.35(m,1H),6.89-6.86(m,1H),6.38-6.35(m,1H),6.17-6.15(m,2H),5.12-5.09(m,1H),4.95-4.93(m,2H),3.82-3.79(m,1H),3.58(s,2H),3.02(s,6H),2.40(s,3H),2.27-2.27(m,4H),2.12-2.01(m,3H),1.97(d,J＝10.6Hz,8H),1.74(s,4H),1.72-1.68(m,2H),1.54-1.49(m,1H),1.29(d,J＝2.3Hz,1H),0.95(s,3H),0.89(dd,J＝5.2,1.5Hz,3H),0.21-0.17(m,2H),-0.08--0.12(m,2H)。
实施例18：化合物75的制备
利福霉素类似物75如下文方案22所示并且如下文描述由利福霉素S合成。
方案22
Figure BDA0003124860200003411
化合物73：在室温，将2-(苄氧基)-4-溴-1-硝基苯(500mg，1.622mmol，1.0当量)、N,N-二甲基丙-2-炔-1-胺(262μL，2.433mmol，1.5当量)、CuI(15.4mg，0.0811mmol，0.05当量)、Pd(PPh3)4(47mg，0.0405mmol，0.025当量)和三乙胺(904μL，6.488mmol，4.0当量)在无水THF(15mL)中的混合物脱气并且搅拌持续5h。通过LC/MS监测反应进程。将粗制产物通过硅藻土垫过滤并且浓缩。粗制产物然后经由ISCO系统(梯度洗脱：0％-20％DCM于甲醇中)在40g HP硅胶Gold RediSep柱上纯化，并且将纯级分蒸发并且在真空中干燥，给出73(492mg，98％)。MS(ESI,+)：C18H18N2O3的计算值310.13；实测值311.2(M+H)。1H-NMR(500MHz；CD3OD):δ7.81(d,J＝8.3Hz,1H),7.47(d,J＝7.6Hz,2H),7.38(dd,J＝8.4,1.4Hz,4H),7.14(dd,J＝8.3,1.5Hz,1H),5.28(s,2H),3.52(s,2H),2.36(dd,J＝1.3,0.6Hz,6H)。
化合物74：向化合物73(100mg，0.322mmol)在甲醇(4mL)中的在氩气下的溶液中添加20mg的20％Pd(OH)2/C。将混合物用氩气进一步脱气，并且与氢气球连接。在16h之后，通过LC/MS对过程中等分试样的分析指示反应完成。将混合物通过硅藻土过滤，用MeOH(2×10mL)洗涤并且浓缩，以提供72mg的作为红黄色油的标题化合物74，其在不进一步纯化的情况下立即用于下一步。MS：C11H18N2O的计算值194.1；实测值195.2(M+H)。
化合物75：向含有羟基苯胺74(72mg，0.304mmol，82％纯)的圆底烧瓶中添加1,4-二氧六环(3mL)和利福霉素S(423mg，0.608mmol)。将反应混合物经由橡胶隔膜密封，用氩气吹扫，并且将反应在环境温度剧烈搅拌。在12天之后，将反应在真空中浓缩以去除二氧六环，溶解在MeOH(6mL)中，并且添加MnO2(106mg，1.216mmol)。在搅拌持续20h之后，将反应通过硅藻土过滤，用MeOH(2×10mL)洗涤，在真空中浓缩并且经由ISCO系统(梯度洗脱：0％-100％MeCN于水中，两者中含0.05％乙酸)在50g C18 RediSep Gold柱上直接纯化。将含产物的级分合并，在干冰/丙酮上冷冻，并且冻干过夜，给出标题化合物75。将化合物通过EZ制备型HPLC柱重新纯化(Gemini，5μm，150mm×30mm，洗脱液：10％-95％MeCN于水中，两者中含10mM NH4OAc)。将纯级分合并，在干冰/丙酮上冷冻，并且冻干过夜，给出作为红棕色固体的标题化合物75(6mg，2.2％)。MS：C48H59N3O12的计算值869.4；实测值870.4(M+H)。1H-NMR(500MHz；CD3OD):δ8.46(s,1H),7.67(s,1H),7.00(s,1H),6.28(d,J＝8.79Hz,1H),6.20(s,1H),5.98-6.11(m,2H),5.21(dd,J＝6.11,12.46Hz,1H),5.11(d,J＝10.26Hz,1H),3.85-3.99(m,2H),3.76(s,3H),3.65-3.70(m,3H),3.58(s,3H),3.45(br.s.,3H),3.04-3.15(m,3H),2.35(br.s.,3H),2.03(s,3H),1.99(s,3H),1.77(s,3H),1.61-1.69(m,3H),1.29(s,3H),1.00(d,J＝6.84Hz,3H),0.92(d,J＝7.33Hz,3H),0.75-0.89(m,3H),0.63(d,J＝6.84Hz,3H),0.10(s,3H),0.00(d,J＝6.84Hz,2H)。
实施例19：连接基-有效载荷化合物的制备
连接基-有效载荷化学被用于制备化合物20，如下文方案23所示，并且如下文描述。
方案23
Figure BDA0003124860200003431
化合物18的合成。标题化合物使用PCT国际申请2014145090中的程序来制备。将((S)-1-(((S)-1-((4-(羟甲基)苯基)氨基)-1-氧代-5-脲基戊-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)氨基甲酸酯叔丁酯18a(500mg，1.04mmol)溶解在CH3CN/H2O/TFA(3:1:1＝v/v/v，12mL/4mL/4mL)的混合物中。将反应混合物在室温搅拌持续48h。基于LCMS确定反应进程完成。在真空中浓缩之后，粗制产物18b(0.9g湿)在不进一步纯化的情况下直接用于下一步。MS(ESI,+)：C18H29N5O4的计算值379.22；实测值380.2(M+H)。
将18b(700mg，1.47mmol，1.0当量)在水(8mL)中的溶液在4℃用2mL的NaHCO3水溶液稀释，并且将混合物(pH＝8.0)用在10mL的乙腈中的商业可得的2,5-二氧代吡咯烷-1-基6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酸酯(408mg，0.9当量)处理。将悬浮液在室温搅拌持续16h，直到反应完成。将粗制产物在减压下浓缩并且用DMSO(5mL)稀释。粗制产物通过ISCO 150g C18柱纯化(洗脱液：10％-95％MeCN于水中，0.05％AcOH)。将纯级分合并并且冻干，以提供368mg(44％)的作为白色固体的化合物18。MS(ESI,+)：C28H40N6O7的计算值572.30；实测值573.6(M+H)，(2M+H)，1145.9。1H NMR(500MHz；DMSO-d6):δ9.89(s,1H),8.05(d,J＝7.33Hz,1H),7.81(d,J＝8.79Hz,1H),7.52-7.57(m,J＝8.79Hz,2H),7.21-7.26(m,J＝8.79Hz,2H),6.99-7.02(m,2H),5.98(br.s.,1H),5.40(s,2H),5.10(t,J＝5.62Hz,1H),4.35-4.45(m,3H),4.18(dd,J＝6.84,8.30Hz,1H),3.26-3.33(m,2H),2.91-3.06(m,2H),2.08-2.22(m,2H),1.93-2.01(m,1H),1.66-1.74(m,1H),1.59(dd,J＝4.40,9.28Hz,1H),1.43-1.55(m,5H),1.32-1.43(m,1H),1.19(五重峰,J＝7.57Hz,2H),0.84(d,J＝8.30Hz,3H),0.80-0.89(m,3H)。
化合物19的合成。使用微型注射器在室温向18(100mg，0.174mmol，1.0当量)的搅拌悬浮液中缓慢添加SOCl2(14μL，0.192mmol，1.1当量)。将浆料反应混合物搅拌持续1.5h，并且通过LC/MS分析的等分试样指示形成了期望的产物。在减压下浓缩粗制混合物以去除所有挥发物。将混合物用2mL的DMSO稀释，并且装载到ISCO C18 Aq 50g柱上进行纯化(10％-95％MeCN于水中，0.05％AcOH)。将纯级分合并并且冻干，以给出72mg(71％)的作为灰白色固体的19。MS(ESI,+)：C28H39ClN6O6的计算值590.26；实测值591.3(M+H)，1181.5(2M+H)。1H NMR(500MHz；DMSO-d6)δ10.03(s,1H),8.03-8.11(m,1H),7.79(d,J＝8.30Hz,1H),7.57-7.63(m,J＝8.79Hz,2H),7.34-7.38(m,J＝8.79Hz,2H),6.99-7.02(m,2H),5.97(br.s.,1H),5.40(br.s.,2H),4.71(s,2H),4.34-4.43(m,2H),4.16-4.21(m,1H),3.36-3.42(m,3H),2.90-3.06(m,3H),2.07-2.22(m,3H),1.91-2.00(m,1H),1.66-1.73(m,1H),1.31-1.41(m,1H),1.18(五重峰,J＝7.69Hz,3H),0.79-0.89(m,7H)。
化合物20的合成。将在2dram小瓶中的19(13.5mg，0.0228mmol，1.2当量)、16a(16.6mg，0.0190mmol，1.0当量)和NaI(14.2mg，0.095mmol)的混合物溶解在1mL的无水DMF中。通过注射器添加催化量(10μL)的0.5M DIPEA的DMF溶液。将混合物在油浴中在55℃加热过夜。反应基于LC/MS完成，以提供期望的产物。将混合物冷却至4℃，并且用1mL的水稀释。在过滤之后，将深色粗制混合物通过EZ制备型HPLC柱纯化(Gemini，5μm，150mm×30mm，洗脱液：10％-95％MeCN于水中，0.05％AcOH)。将纯级分合并并且冻干，以提供14.6mg(55％)的作为暗红色固体的20。MS(ESI,+)：C75H96N9O19 +的计算值1426.68；实测值1427.3(M+1)和1425.5(M-1)。1H NMR(500MHz；DMSO-d6)δ10.25(s,1H),8.19(d,J＝6.84Hz,1H),7.82(d,J＝8.30Hz,2H),7.76(d,J＝8.79Hz,3H),7.50(d,J＝8.30Hz,3H),7.00(s,2H),6.12(d,J＝12.70Hz,1H),6.03(br.s.,1H),5.43(s,2H),4.70-4.80(m,2H),4.58(br.s.,3H),4.36-4.41(m,1H),4.18(t,J＝7.82Hz,1H),3.77(br.s.,2H),3.36-3.45(m,8H),3.13(d,J＝8.30Hz,1H),2.89-3.06(m,12H),2.78(t,J＝9.04Hz,1H),2.06-2.22(m,3H),2.03(br.s.,1H),1.91-2.00(m,10H),1.85(s,3H),1.66-1.74(m,1H),1.56-1.64(m,6H),1.42-1.56(m,8H),1.38(d,J＝6.84Hz,2H),1.15-1.25(m,3H),0.75-0.88(m,14H),0.07(s,1H)。
连接基-有效载荷化合物25如下文方案24所示并且如下文描述来制备。
方案24
Figure BDA0003124860200003451
化合物23的合成。然后经由微型注射器用DIEA(50μL，0.288mmol)处理22(100mg，0.144mmol)和18b(82mg，0.217mmol)在无水DMF(1.5mL)中的混合物。将反应混合物在室温搅拌持续2h，并且基于LC/MS确定提供23。将粗制混合物通过ISCO C18 100g Aq柱纯化(洗脱液：10％-95％MeCN于水中，0.05％AcOH)，将纯级分合并并且冻干，以产生84.4mg(62％)的23。MS(ESI,+)：C44H71N7O16的计算值953.50；实测值954.4(M+H)，976.4(M+Na)，952.4(M-H)。1H NMR(500MHz；DMSO-d6)δ9.88(s,1H),8.08(d,J＝7.2Hz,1H),8.00(s,1H),7.86(d,J＝8.5Hz,1H),7.55(d,J＝8.4Hz,2H),7.23(d,J＝8.3Hz,2H),7.00(s,2H),5.98(s,1H),5.40(s,1H),4.43(s,2H),4.39(d,J＝5.4Hz,1H),4.23(dd,J＝8.3,6.8Hz,2H),3.60(d,J＝6.9Hz,6H),3.44-3.54(m,30H),3.37(t,J＝5.8Hz,3H),3.15(d,J＝5.7Hz,2H),2.99(d,J＝29.6Hz,2H),2.33(t,J＝7.3Hz,3H),1.98(d,J＝6.7Hz,1H),1.71-1.70(m,1H),1.61-1.58(m,1H),1.44-1.36(m,2H),0.85(dd,J＝15.5,6.7Hz,7H)。
化合物24的合成。经由微型注射器在室温向在小瓶中的23(15mg，0.0157mmol，1.0当量)的搅拌悬浮液中缓慢添加SOCl2(1.3μL，0.0173mmol，1.1当量)。在1h之后，通过LC/MS分析的等分试样指示期望产物的形成。在减压下浓缩粗制混合物以去除所有挥发物。将粗制混合物用0.8mL的MeCN稀释，并且装载到EZ制备型HPLC柱上并洗脱(Gemini，5μm，150mm×30mm，洗脱液：10％-95％MeCN于水中，0.05％AcOH)。将纯级分合并并且冻干，以提供9.5mg(63％)的作为灰白色固体的24。MS(ESI,+)：C44H70ClN7O15的计算值971.46；实测值972.4(M+H)，994.4(M+Na)，970.3(M-1)。
连接基-有效载荷化合物25的合成。将在1dram小瓶中的24(9.5mg，0.00976mmol，1.0当量)、16a(8.51mg，0.00976mmol，1.0当量)和NaI(7.3mg，0.0488mmol)的混合物溶解在1mL的无水DMF中。通过注射器添加催化量(20μL)的0.5M DIEA的DMF溶液。将混合物在油浴中在55℃加热过夜。反应基于LC/MS完成，以提供期望的产物。将混合物在冰浴中冷却，并且用1mL的水稀释。在过滤之后，将深色粗制混合物通过EZ制备型HPLC柱纯化(Gemini，5μm，150mm×30mm，洗脱液：10％-95％MeCN于水中，0.05％AcOH)。将纯级分合并并且冻干，以提供7.4mg(42％)的作为暗红色固体的25。MS(ESI,+)：C91H127N10O28 +的计算值1807.88；实测值1808.8(M+H)和1806.5(M-1)。1H NMR(500MHz；DMSO-d6)δ10.23(s,1H),8.22—8.17(m,1H),8.03—7.98(m,1H),7.86(d,J＝8.3Hz,1H),7.75(d,J＝8.2Hz,4H),7.50(d,J＝8.3Hz,3H),7.00(s,2H),6.01(s,1H),5.76(s,1H),5.43(s,1H),4.80—4.80(m,1H),4.58(s,1H),4.43—4.41(m,1H),4.27—4.23(m,1H),3.76(t,J＝0.6Hz,2H),3.59(t,J＝7.3Hz,5H),3.49(d,J＝2.9Hz,54H),3.14(d,J＝5.8Hz,4H),3.03(s,8H),2.90(t,J＝0.7Hz,3H),2.77(d,J＝0.7Hz,1H),2.33(t,J＝7.3Hz,4H),2.08(d,J＝6.1Hz,4H),1.94(d,J＝18.9Hz,10H),1.83(s,5H),1.59(s,8H),0.85(dd,J＝16.1,6.7Hz,8H)。
连接基-有效载荷化合物36如下文方案25所示并且如下文描述来制备。
方案25
Figure BDA0003124860200003471
化合物36：将在1dram小瓶中的24(14.4mg，0.00149mmol，1.2当量)、16a(11.0mg，0.00123mmol，1.0当量)和NaI(9.1mg，0.0615mmol)的混合物溶解在1mL的无水DMF中。经由注射器添加催化量的0.5MDIEA的DMF溶液(10μL)。将混合物在油浴中在55℃加热过夜。当通过LC/MS测定时，反应完成，以提供期望的产物。将混合物在冰浴中冷却，并且用0.5mL的水稀释。在过滤之后，将深色粗制混合物通过EZ制备型HPLC柱纯化(Gemini，5μm，150mm×30mm，洗脱液：10％-95％MeCN于水中，0.05％AcOH)。将纯级分收集，冷冻，并且冻干，以提供11.7mg(53％)的作为暗红色固体的36。MS(ESI,+)：C91H127N10O29 +的计算值1823.88；实测值1824.8(M+H)和1821.7(M-1)。1H NMR(500MHz；DMSO-d6):δ10.22(s,1H),8.85(d,J＝0.8Hz,1H),8.18-8.17(m,1H),8.01(s,1H),7.86(d,J＝8.1Hz,1H),7.75-7.73(m,2H),7.49-7.47(m,2H),7.00(s,2H),6.28(dd,J＝9.9,0.9Hz,1H),6.21(dd,J＝12.4,0.6Hz,1H),6.00-5.98(m,1H),5.86(s,1H),5.48(s,1H),5.42(d,J＝8.4Hz,2H),5.04-4.99(m,1H),4.72-4.69(m,1H),4.58-4.50(m,3H),4.40-4.38(m,1H),4.25-4.22(m,1H),3.89-3.87(m,1H),3.73-3.70(m,4H),3.62-3.58(m,7H),3.54-3.47(m,29H),3.36(t,J＝5.8Hz,7H),3.15(d,J＝5.7Hz,4H),3.03-2.98(m,4H),2.85(s,3H),2.66(d,J＝23.9Hz,3H),2.34(dd,J＝16.4,9.2Hz,4H),2.12-2.05(m,3H),1.92(d,J＝18.7Hz,13H),1.67(s,3H),1.61(t,J＝0.6Hz,3H),1.47-1.37(m,3H),1.24(d,J＝0.6Hz,1H),0.88-0.78(m,8H),0.78-0.65(m,4H),0.17-0.16(m,1H),0.07(s,1H),-0.41(td,J＝2.5,0.9Hz,1H)。
连接基-有效载荷化合物25a如下文方案26所示并且如下文描述来制备。
方案26
Figure BDA0003124860200003481
化合物23a的合成。然后经由微型注射器用DIEA(50μL，0.288mmol)处理22a(100mg，0.144mmol)和18b(82mg，0.217mmol)在无水DMF(1.5mL)中的混合物。将反应混合物在室温搅拌持续2h，并且基于LC/MS确定提供23a。将粗制混合物通过ISCO C18 100g Aq柱纯化(洗脱液：10％-95％MeCN于水中，0.05％AcOH)，将纯级分合并并且冻干，以产生84.4mg(62％)的23。MS(ESI,+)：C44H71N7O16的计算值953.50；实测值954.4(M+H)，976.4(M+Na)，952.4(M-H)。1H NMR(500MHz；DMSO-d6)δ9.88(s,1H),8.08(d,J＝7.2Hz,1H),8.00(s,1H),7.86(d,J＝8.5Hz,1H),7.55(d,J＝8.4Hz,2H),7.23(d,J＝8.3Hz,2H),7.00(s,2H),5.98(s,1H),5.40(s,1H),4.43(s,2H),4.39(d,J＝5.4Hz,1H),4.23(dd,J＝8.3,6.8Hz,2H),3.60(d,J＝6.9Hz,6H),3.44-3.54(m,30H),3.37(t,J＝5.8Hz,3H),3.15(d,J＝5.7Hz,2H),2.99(d,J＝29.6Hz,2H),2.33(t,J＝7.3Hz,3H),1.98(d,J＝6.7Hz,1H),1.71-1.70(m,1H),1.61-1.58(m,1H),1.44-1.36(m,2H),0.85(dd,J＝15.5,6.7Hz,7H)。
化合物24a的合成。经由微型注射器在室温向在小瓶中的23a(15mg，0.0157mmol，1.0当量)的搅拌悬浮液中缓慢添加SOCl2(1.3μL，0.0173mmol，1.1当量)。在1h之后，通过LC/MS分析的等分试样指示期望产物的形成。在减压下浓缩粗制混合物以去除所有挥发物。将粗制混合物用0.8mL的MeCN稀释，并且装载到EZ制备型HPLC柱上并洗脱(Gemini，5μm，150mm×30mm，洗脱液：10％-95％MeCN于水中，0.05％AcOH)。将纯级分合并并且冻干，以提供9.5mg(63％)的作为灰白色固体的24。MS(ESI,+)：C44H70ClN7O15的计算值971.46；实测值972.4(M+H)，994.4(M+Na)，970.3(M-1)。
连接基-有效载荷化合物25a的合成。将在1dram小瓶中的24a(9.5mg，0.00976mmol，1.0当量)、16a(8.51mg，0.00976mmol，1.0当量)和NaI(7.3mg，0.0488mmol)的混合物溶解在1mL的无水DMF中。通过注射器添加催化量(20μL)的0.5M DIEA的DMF溶液。将混合物在油浴中在55℃加热过夜。反应基于LC/MS完成，以提供期望的产物。将混合物在冰浴中冷却，并且用1mL的水稀释。在过滤之后，将深色粗制混合物通过EZ制备型HPLC柱纯化(Gemini，5μm，150mm×30mm，洗脱液：10％-95％MeCN于水中，0.05％AcOH)。将纯级分合并并且冻干，以提供7.4mg(42％)的作为暗红色固体的25。MS(ESI,+)：C91H127N10O28 +的计算值1807.88；实测值1808.8(M+H)和1806.5(M-1)。1H NMR(500MHz；DMSO-d6)δ10.23(s,1H),8.22—8.17(m,1H),8.03—7.98(m,1H),7.86(d,J＝8.3Hz,1H),7.75(d,J＝8.2Hz,4H),7.50(d,J＝8.3Hz,3H),7.00(s,2H),6.01(s,1H),5.76(s,1H),5.43(s,1H),4.80—4.80(m,1H),4.58(s,1H),4.43—4.41(m,1H),4.27—4.23(m,1H),3.76(t,J＝0.6Hz,2H),3.59(t,J＝7.3Hz,5H),3.49(d,J＝2.9Hz,54H),3.14(d,J＝5.8Hz,4H),3.03(s,8H),2.90(t,J＝0.7Hz,3H),2.77(d,J＝0.7Hz,1H),2.33(t,J＝7.3Hz,4H),2.08(d,J＝6.1Hz,4H),1.94(d,J＝18.9Hz,10H),1.83(s,5H),1.59(s,8H),0.85(dd,J＝16.1,6.7Hz,8H)。
连接基-有效载荷化合物36a如下文方案27所示并且如下文描述来制备。
方案27
Figure BDA0003124860200003501
化合物36a：将在1dram小瓶中的24a(14.4mg，0.00149mmol，1.2当量)、16a(11.0mg，0.00123mmol，1.0当量)和NaI(9.1mg，0.0615mmol)的混合物溶解在1mL的无水DMF中。经由注射器添加催化量的0.5MDIEA的DMF溶液(10μL)。将混合物在油浴中在55℃加热过夜。当通过LC/MS测定时，反应完成，以提供期望的产物。将混合物在冰浴中冷却，并且用0.5mL的水稀释。在过滤之后，将深色粗制混合物通过EZ制备型HPLC柱纯化(Gemini，5μm，150mm×30mm，洗脱液：10％-95％MeCN于水中，0.05％AcOH)。将纯级分收集，冷冻，并且冻干，以提供11.7mg(53％)的作为暗红色固体的36。MS(ESI,+)：C91H127N10O29 +的计算值1823.88；实测值1824.8(M+H)和1821.7(M-1)。1H NMR(500MHz；DMSO-d6)：δ10.22(s,1H),8.85(d,J＝0.8Hz,1H),8.18-8.17(m,1H),8.01(s,1H),7.86(d,J＝8.1Hz,1H),7.75-7.73(m,2H),7.49-7.47(m,2H),7.00(s,2H),6.28(dd,J＝9.9,0.9Hz,1H),6.21(dd,J＝12.4,0.6Hz,1H),6.00-5.98(m,1H),5.86(s,1H),5.48(s,1H),5.42(d,J＝8.4Hz,2H),5.04-4.99(m,1H),4.72-4.69(m,1H),4.58-4.50(m,3H),4.40-4.38(m,1H),4.25-4.22(m,1H),3.89-3.87(m,1H),3.73-3.70(m,4H),3.62-3.58(m,7H),3.54-3.47(m,29H),3.36(t,J＝5.8Hz,7H),3.15(d,J＝5.7Hz,4H),3.03-2.98(m,4H),2.85(s,3H),2.66(d,J＝23.9Hz,3H),2.34(dd,J＝16.4,9.2Hz,4H),2.12-2.05(m,3H),1.92(d,J＝18.7Hz,13H),1.67(s,3H),1.61(t,J＝0.6Hz,3H),1.47-1.37(m,3H),1.24(d,J＝0.6Hz,1H),0.88-0.78(m,8H),0.78-0.65(m,4H),0.17-0.16(m,1H),0.07(s,1H),-0.41(td,J＝2.5,0.9Hz,1H)。
连接基-有效载荷化合物80如下文方案28所示并且如下文描述来制备。
方案28
Figure BDA0003124860200003521
化合物77：经由微型注射器向商业可得的化合物76(100mg，0.131mmol)和18b(71mg，0.144mmol)在无水DMF(1.5mL)中的溶液中添加DIEA(34μL，0.197mmol)。将反应混合物在室温搅拌持续1h。反应基于LC/MS完成，并且在真空中浓缩。粗制产物使用C18 100g Aq柱通过ISCO系统纯化(洗脱液：10％-95％MeCN于水中，0.05％AcOH)。将纯级分通过LC/MS收集，在干冰/丙酮浴中冷冻，并且冻干持续24h以提供114mg(85％)的77。MS(ESI,+)：C52H76N6O15的计算值1024.54；实测值1025.5(M+H)，1047.4(M+Na)。
化合物78：使用微型注射器在室温向77(46mg，0.0448mmol，1.0当量)在1.5mL的无水DCM中的搅拌悬浮液中缓慢添加SOCl2(3.6μL，0.0493mmol，1.1当量)。在30min之后，通过LC/MS分析过程中等分试样，以指示期望产物的形成。将粗制混合物在真空中浓缩并且用1mL的MeCN稀释。将溶液装载到ISCO系统C18 50g Ag柱上(洗脱液：10％-95％MeCN于水中，0.05％AcOH)。将纯级分收集，在干冰/丙酮浴中冷冻，并且冻干，以提供40mg(85％)的作为灰白色固体的77。MS(ESI,+)：C52H75ClN6O14的计算值1042.50；实测值1043.4(M+H)，1065.4(M+Na)。
化合物79：向在2dram小瓶中的78(35mg，0.0337mmol，1.2当量)、29(25mg，0.0281mmol，1.0当量)和NaI(21mg，0.145mmol，5.0当量)的混合物中添加1.5mL的无水DMF。经由隔膜通过注射器添加催化量的0.5M DIEA的DMF溶液(20μL)。将混合物在油浴中在55℃加热过夜。反应基于LC/MS完成，以提供期望的产物。将混合物用冰浴冷却，并且用1mL的水稀释。在过滤之后，将深色粗制混合物通过EZ制备型HPLC柱纯化(Gemini，5μm，150mm×30mm，洗脱液：10％-95％MeCN于水中，0.05％AcOH)。将纯级分收集，在干冰/丙酮浴中冷冻，并且冻干，以提供42mg(79％)的作为暗红色固体的79。MS(ESI,+)：C99H132N9O28 +的计算值1894.92；实测值1895.9(M+H)。1H-NMR(500MHz；DMSO-d6):δ10.22(s，1H),8.85(s,1H),8.19-8.17(m,1H),7.89-7.84(m,2H),7.74-7.73(m,2H),7.70-7.68(m,2H),7.48-7.46(m,2H),7.41(t,J＝7.5Hz,2H),7.32(t,J＝7.4Hz,2H),6.91-6.87(m,1H),6.28-6.26(m,1H),6.20(dd,J＝12.8,0.7Hz,1H),6.09-6.07(m,1H),6.06-5.97(m,2H),5.85(t,J＝0.7Hz,1H),5.72-5.65(m,1H),5.48(d,J＝0.7Hz,1H),5.42(s,3H),5.23-5.22(m,1H),5.04-4.98(m,2H),4.71-4.69(m,1H),4.51(t,J＝0.8Hz,6H),4.39-4.38(m,12H),4.29(d,J＝6.9Hz,3H),4.23-4.20(m,2H),3.87(dd,J＝8.2,1.1Hz,1H),3.70(dd,J＝1.7,0.9Hz,4H),3.59(d,J＝5.7Hz,4H),3.46(s,12H),3.40(d,J＝5.8Hz,3H),3.13-3.11(m,2H),3.03-2.97(m,6H),2.85(s,3H),2.68(dd,J＝1.3,0.8Hz,2H),2.63(d,J＝1.7Hz,5H),2.36(dd,J＝3.5,1.7Hz,4H),2.22-2.18(m,1H),2.12(s,3H),2.05(dd,J＝1.4,0.7Hz,1H),1.98-1.93(m,3H),1.86(s,1H),1.67(s,1H),1.60(t,J＝0.8Hz,3H),1.45-1.44(m,2H),1.38-1.37(m,1H),1.24-1.20(m,1H),0.85(dd,J＝16.5,6.6Hz,2H),0.78-0.76(m,3H),0.70-0.60(m,2H),0.17-0.16(m,2H),-0.42(dd,J＝5.2,0.8Hz,2H)。
化合物80：向化合物79(25mg，0.0131mmol)在2mL的DMF中的搅拌溶液中添加5％哌啶的DMF溶液(400μL)，并且将反应在环境温度搅拌。在1h之后，反应基于LC/MS完成。然后将粗制产物通过EZ制备型HPLC柱纯化(Gemini，5μm，150mm×30mm，洗脱液：10％-95％MeCN于水中，0.05％AcOH)。将纯级分收集，在干冰/丙酮浴中冷冻，并且冻干，以提供18.6mg(82％)的作为红色固体的80。MS(ESI,+)：C84H122N9O26 +的计算值1672.85(游离碱)；实测值1673.8(M+H)。1H-NMR(500MHz；DMSO-d6):δ10.26(s,1H),8.85(d,J＝0.9Hz,1H),8.23(dd,J＝6.3,0.4Hz,1H),7.89-7.87(m,1H),7.75-7.74(m,2H),7.48-7.47(m,2H),6.90-6.87(m,1H),6.28-6.26(m,1H),6.21-6.19(m,1H),6.04(t,J＝10.3Hz,2H),5.88-5.85(m,1H),5.74-5.72(m,1H),5.50(ddt,J＝3.3,1.0,0.8Hz,1H),5.43(s,2H),5.03-4.98(m,1H),4.71-4.69(m,1H),4.52(s,4H),4.38(d,J＝5.4Hz,1H),4.23(t,J＝7.6Hz,1H),3.89-3.87(m,1H),3.70(d,J＝0.7Hz,3H),3.60(d,J＝5.2Hz,4H),3.48(s,24H),3.00-2.97(m,12H),2.85(s,2H),2.64(s,2H),2.39-2.36(m,1H),2.23-2.20(m,1H),2.11(d,J＝0.4Hz,3H),1.93(s,9H),1.83(s,3H),1.67-1.60(m,6H),1.46-1.38(m,3H),1.24(s,1H),0.85(dd,J＝16.2,6.6Hz,12H),0.76(d,J＝8.3Hz,5H),0.15-0.15(m,2H),0.07(s,1H),-0.40(d,J＝1.9Hz,1H)。
连接基-有效载荷化合物82如下文方案29所示并且如下文描述来制备。
方案29
Figure BDA0003124860200003551
化合物81：将在2dram小瓶中的78(43mg，0.0414mmol，1.0当量)、16a(36mg，0.0412mmol，1.0当量)和NaI(30mg，0.206mmol，5.0当量)的混合物溶解在2mL的无水DMF中。经由注射器添加催化量(20μL)的0.5M DIEA的DMF溶液。将混合物在油浴中在55℃加热过夜。反应基于LC/MS完成。将混合物在冰浴中冷却，并且用1mL的水稀释。在过滤之后，将深色粗制混合物通过EZ制备型HPLC柱纯化(Gemini，5μm，150mm×30mm，洗脱液：10％-95％MeCN于水中，0.05％AcOH)。将纯级分收集，在干冰/丙酮浴中冷冻，并且冻干，以提供48mg(62％)的作为暗红色固体的81。MS(ESI,+)：C99H132N9O27 +的计算值1878.92；实测值1879.9(M+H)。1H-NMR(500MHz；DMSO-d6):δ10.35(s,1H),8.86-8.81(m,1H),8.34-8.33(m,1H),7.93(d,J＝8.7Hz,1H),7.89(t,J＝12.9Hz,3H),7.75(d,J＝8.7Hz,3H),7.68(d,J＝7.5Hz,2H),7.48(d,J＝8.6Hz,2H),7.40(t,J＝7.4Hz,2H),7.31(td,J＝7.4,0.8Hz,3H),7.05-7.03(m,1H),6.81-6.74(m,1H),6.70-6.67(m,1H),6.22-6.19(m,1H),6.13-6.08(m,2H),5.44(s,2H),5.12-5.09(m,1H),4.75(dd,J＝12.8,8.4Hz,1H),4.71-4.68(m,1H),4.56(s,3H),4.37-4.35(m,1H),4.28(d,J＝6.9Hz,2H),4.20(dd,J＝9.5,2.8Hz,2H),3.75(s,3H),3.58(d,J＝5.5Hz,4H),3.49-3.46(m,32H),3.12(d,J＝6.0Hz,4H),3.02(s,8H),2.88(d,J＝0.4Hz,3H),2.78-2.74(m,1H),2.62(五重峰,J＝1.8Hz,1H),2.37-2.34(m,1H),1.95-1.91(m,10H),1.74(s,5H),1.58(s,5H),1.45-1.43(m,2H),1.37-1.34(m,1H),0.83(dd,J＝16.3,6.8Hz,13H),0.29(s,1H),0.21-0.16(m,2H),0.03-0.02(m,1H)。
化合物82：向先前步骤的化合物81(26mg，0.0138mmol)在1.5mL的DMF中的搅拌溶液中添加5％哌啶的DMF溶液(500μL)，并且将反应在环境温度搅拌。在50min之后，反应基于LC/MS完成。然后将粗制产物通过EZ制备型HPLC柱纯化(Gemini，5μm，150mm×30mm，洗脱液：10％-95％MeCN于水中，0.05％AcOH)。将纯级分收集，在干冰/丙酮浴中冷冻，并且冻干，以提供17.6mg(77％)的作为红色固体的82。MS(ESI,+)：C84H122N9O25 +的计算值1656.85(游离碱)；实测值1658.7(M+H)，1655.7(M-H)。1H-NMR(500MHz；DMSO-d6):δ10.25(d,J＝1.1Hz,1H),8.26-8.17(m,1H),7.89-7.87(m,1H),7.75(d,J＝8.4Hz,3H),7.49(d,J＝8.4Hz,2H),7.08-7.05(m,1H),6.12-6.09(m,1H),6.04-6.01(m,1H),5.42(s,2H),5.13-5.09(m,1H),4.76(dd,J＝12.6,8.7Hz,1H),4.70(dq,J＝3.2,1.0Hz,1H),4.57(s,3H),4.37-4.36(m,1H),4.23-4.20(m,1H),3.75(s,2H),3.58(t,J＝5.5Hz,3H),3.48(t,J＝1.9Hz,32H),3.14-3.07(m,3H),3.02(d,J＝9.5Hz,10H),2.96-2.93(m,4H),2.91-2.87(m,4H),2.78-2.76(m,1H),2.63-2.62(m,3H),2.38-2.35(m,1H),1.95(dd,J＝3.4,0.7Hz,8H),1.92(s,3H),1.83(s,3H),1.68(dd,J＝2.2,1.6Hz,1H),1.59(s,5H),1.45-1.43(m,2H),1.38-1.35(m,1H),1.22(s,1H),0.84(dt,J＝12.6,5.0Hz,10H),0.79-0.77(m,2H),0.06-0.01(m,1H)。
连接基-有效载荷化合物84如下文方案30所示并且如下文描述来制备。
方案30
Figure BDA0003124860200003571
化合物84：向商业可得的化合物83(14mg，0.0186mmol，1.5当量)和化合物14(11mg，0.0124mmol，1.0当量)在2.5mL无水DMF中的搅拌溶液中添加DIEA(4.3μL，0.0248mmol，2.0当量)并且将反应在环境温度搅拌。在15min之后，反应基于LC/MS完成。然后将粗制产物通过EZ制备型HPLC柱纯化(Gemini，5μm，150mm×30mm，洗脱液：10％-95％MeCN于水中，0.05％AcOH)。将纯级分收集，在干冰/丙酮浴中冷冻，并且冻干，以提供11.4mg(64％)的作为红色固体的84。MS(ESI,+)：C77H95N9O21的计算值1481.66；实测值1482.6(M+H)，1480.6(M-H)。1H-NMR(500MHz；DMSO-d6)：δ9.99(s，1H)，8.08(d,J＝7.33Hz,1H),7.87(br.s.,1H),7.80(d,J＝8.30Hz,1H),7.60(d,J＝8.30Hz,2H),7.24-7.34(m,3H),7.21(d,J＝8.79Hz,1H),7.00(s,2H),5.95-6.00(m,1H),5.81(br.s.,1H),5.40(s,2H),5.02(s,2H),4.91(br.s.,1H),4.79(br.s.,1H),4.35-4.41(m,1H),4.19(t,J＝7.57Hz,2H),3.73(br.s.,2H),3.38(br.s.,2H),3.08(s,3H),3.10(s,3H),2.82-3.05(m,6H),2.78(br.s.,1H),2.64(br.s.,1H),2.54(br.s.,1H),2.37(d,J＝4.40Hz,6H),2.25(br.s.,1H),2.02-2.23(m,6H),1.93-2.02(m,9H),1.90(s,2H),1.67(br.s.,5H),1.60(br.s.,4H),1.43-1.55(m,6H),1.28-1.43(m,2H),1.14-1.28(m,3H),0.72-0.95(m,6H),0.67(br.s.,2H),0.07(s,1H)。
连接基-有效载荷化合物86如下文方案31所示并且如下文描述来制备。
方案31
Figure BDA0003124860200003581
化合物85：向化合物23(85mg，0.0894mmol，1.0当量)和双(4-硝基苯基)碳酸酯(82mg，0.2682mmol，3.0当量)在无水DMF(2.5mL)中的在氩气下的搅拌溶液中添加DIEA(31μL，0.1788mmol，2.0当量)，并且将反应在环境温度搅拌过夜。反应基于LC/MS分析完成。得到的混合物经由ISCO系统(梯度洗脱：10％-100％MeCN于水中，两者中含0.05％乙酸，经30min)在100g C18 Aq.柱上直接纯化。将含产物的级分合并，在干冰上冷冻，并且冻干过夜，给出作为暗红色固体的标题化合物85。(68mg，69％)。MS：C51H74N8O20的计算值1118.50；实测值1120.0(M+H)。
化合物86：使用化合物84中描述的连接基-有效载荷化学制备标题化合物。向化合物85(12mg，0.01085mmol，1.2当量)和化合物14(8mg，0.00905mmol，1.0当量)在无水DMF(1.5mL)中的搅拌溶液中添加DIEA(3.2μL，0.0180mmol，2.0当量)，并且将反应在环境温度搅拌。在30min之后，基于LC/MS，反应完成以提供期望的产物。然后将粗制产物通过EZ制备型HPLC柱纯化(Gemini，5μm，150mm×30mm，洗脱液：10％-95％MeCN于水中，0.05％AcOH)。将纯级分收集，在干冰/丙酮浴中冷冻，并且冻干，以提供12.5mg(74％)的作为红色固体的86。MS(ESI,+)：C93H126N10O30的计算值1862.86；实测值1863.8(M+H)，1886.8(M+Na)。1H-NMR(500MHz；DMSO-d6):δ9.99(s,1H),9.38(s,1H),8.11(d,J＝7.33Hz,1H),8.00(t,J＝5.37Hz,1H),7.86(d,J＝8.79Hz,2H),7.60(d,J＝8.30Hz,2H),7.25-7.34(m,3H),7.21(d,J＝8.79Hz,1H),7.00(s,2H),5.97(t,J＝5.62Hz,1H),5.81(br.s.,1H),5.40(s,2H),5.24(br.s.,1H),5.02(s,2H),4.91(br.s.,1H),4.78(br.s.,1H),4.35-4.41(m,1H),4.21-4.25(m,1H),3.74(br.s.,2H),3.53-3.69(m,5H),3.43-3.53(m,38H),3.34-3.39(m,3H),3.29(br.s.,1H),3.06-3.18(m,4H),2.84-3.06(m,5H),2.78(br.s.,1H),2.45-2.49(m,1H),2.30-2.40(m,3H),2.17(br.s.,2H),1.93-2.05(m,9H),1.90(s,1H),1.72(br.s.,1H),1.53-1.69(m,7H),1.42-1.53(m,1H),1.33-1.42(m,1H),0.86(d,J＝6.84Hz,6H),0.82(d,J＝6.84Hz,6H),0.67(br.s.,4H)。
连接基-有效载荷化合物89如下文方案32所示并且如下文描述来制备。
方案32
Figure BDA0003124860200003591
化合物87：使用与针对化合物85描述的相同的程序制备标题化合物。向化合物77(56mg，0.0546mmol，1.0当量)和双(4-硝基苯基)碳酸酯(50mg，0.1638mmol，3.0当量)在无水DMF(1.5mL)中的在氩气下的搅拌溶液中添加DIEA(19μL，0.1092mmol，2.0当量)以提供暗红色固体。(43mg，67％)。MS：C59H79N7O19的计算值1189.54；实测值1190.5(M+H)，1212.5(M+Na)。
化合物88：使用针对化合物86描述的连接基-有效载荷化学制备标题化合物。将化合物87(40.3mg，0.0339mmol，1.0当量)和化合物14(30mg，0.0339mmol，1.0当量)在无水DMF(3mL)中的溶液在室温搅拌，以提供50.7mg(77％)的作为红色固体的88。MS：C101H131N9O29的计算值1933.91；实测值1935.7(M+H)，1957.8(M+Na)。
化合物89：向化合物88(34mg，0.0175mmol，1.0当量)在无水THF(2.5mL)中的搅拌溶液中添加TBAF(1.0M THF溶液，35μL，35μL，2.0当量)并且将反应在环境温度搅拌。在30min之后，反应基于LC/MS完成。将粗制产物通过EZ制备型HPLC柱纯化(Gemini，5μm，150mm×30mm，洗脱液：10％-95％MeCN于水中，0.05％AcOH)。将纯级分收集，在干冰/丙酮浴中冷冻，并且冻干持续30h，以提供23.5mg(79％)的作为红色固体的89。MS(ESI,+)：C86H121N9O27的计算值1711.84；实测值1713.7(M+H)，1711.6(M-H)。1H-NMR(500MHz；DMSO-d6):9.99(s,1H),8.11(d,J＝7.33Hz,1H),7.83-7.89(m,2H),7.58-7.62(m,J＝8.79Hz,2H),7.29-7.33(m,J＝8.30Hz,2H),7.18(br.s.,1H),5.97(t,J＝5.37Hz,1H),5.40(s,2H),5.02(s,2H),4.89(br.s.,1H),4.76-4.83(m,1H),4.35-4.41(m,1H),4.21-4.25(m,1H),3.73(br.s.,2H),3.44-3.68(m,39H),3.38(t,J＝5.62Hz,3H),3.29(br.s.,2H),2.90-3.14(m,7H),2.75-2.81(m,1H),2.68(t,J＝5.62Hz,2H),2.64(d,J＝1.95Hz,1H),2.45-2.48(m,1H),2.35-2.41(m,2H),2.15(br.s.,3H),1.92-2.02(m,10H),1.90(s,1H),1.63-1.72(m,5H),1.59(d,J＝9.28Hz,3H),1.45(d,J＝6.84Hz,1H),1.37(dd,J＝6.35,16.12Hz,1H),0.73-0.93(m,13H),0.68(br.s.,3H)。
实施例20：肉汤最小抑制浓度(MIC)测定1
为了在体外测试本公开内容的利福霉素类似物的效力，开发了肉汤生长抑制测定。为了进行测定，使金黄色葡萄球菌NRS384在胰蛋白酶大豆肉汤(TSB)中生长过夜，然后在新鲜TSB中以1:50传代培养，并且生长持续另外的2小时。然后将培养物经由离心沉淀，并且在PBS中洗涤两次。然后将培养物在TSB中稀释至1×104cfu/mL，并且向96孔微量滴定皿每孔添加50μL的悬浮液，一式两份。针对以1:3的稀释度的1×10-5M的最终起始浓度，以1:1添加指定抗生素的稀释系列(根据本公开内容的类似物或先前已知的类似物利福平)。将板在37℃在振摇下孵育持续24h，并且然后在Spectramax i3 Minimax 300上读取OD600nm。
使用的试剂和批号在下文表4中示出。
表4：MIC测定的试剂和批号
Figure BDA0003124860200003611
抑制金黄色葡萄球菌生长的最低浓度(最小抑制浓度，MIC)在表5中列出。用根据本公开内容的利福霉素类似物进行的金黄色葡萄球菌抑制测定的图显示为图1。
表5：肉汤生长抑制测定中抗生素的最小抑制浓度(MIC)。
Figure BDA0003124860200003612
如表5所示，所有根据本公开内容的利福霉素类似物在亚微摩尔至纳摩尔浓度下有效地抑制金黄色葡萄球菌的生长。类似物16a比利福平更强地抑制金黄色葡萄球菌的生长，具有1.5×10-9M的MIC。
实施例21：细胞内灭杀测定1
利福霉素类似物化合物对金黄色葡萄球菌的活性在细胞内“灭杀”测定中进行测试。
使用的试剂和批号在下文表6中示出。
表6：细胞内测定的试剂和批号
Figure BDA0003124860200003621
使THP-1单核细胞系在培养基(RMPI+10％FBS+1％青霉素/链霉素)中生长，然后在96孔板中以1e5个细胞/孔的密度接种，并且在使用200nM PMA感染前分化为巨噬细胞持续3天。使金黄色葡萄球菌NRS384的过夜培养物在RPMI中生长，用PBS洗涤两次，并且以1e7cfu/mL重新悬浮在PBS中。THP-1用温的培养基(RMPI，不含FBS)洗涤以去除青霉素/链霉素，并且然后以10:1(金黄色葡萄球菌:巨噬细胞)的感染复数用金黄色葡萄球菌悬浮液感染。将板以300xg旋转持续5分钟，以同步细菌的粘附，然后在37℃孵育持续2小时。通过用温的培养基洗涤2×来去除自由漂浮的细菌，并且通过添加含有庆大霉素(50μg/mL)的培养基来灭杀剩余的细胞外金黄色葡萄球菌。在1h之后，吸出培养基并且将指示的化合物添加至含有50μg/mL庆大霉素的培养基中的感染的巨噬细胞中，以防止金黄色葡萄球菌的细胞外生长。在2h之后，用不含FBS的温的RPMI洗涤板2×，并且向每个孔中添加100μl的THP-1裂解缓冲液(0.1％Triton于PBS中)。金黄色葡萄球菌存活通过连续稀释并在TSA上铺板的菌落形成单位计算。
细胞内灭杀测定的结果在表7和图2和图3中示出。最小抑制浓度(MIC)对应于导致细胞内金黄色葡萄球菌根除的每种化合物的最低浓度。
表7：细胞内灭杀测定的结果
Figure BDA0003124860200003631
如上表以及图2和图3展示的，与利福平相比，化合物1a、14、16a、16d和16e具有增加的细胞内金黄色葡萄球菌灭杀能力，其中化合物16a具有最高活性。
实施例22：MSR1抗体-药物缀合
MSR1抗体(1mg/ml-10mg/ml)在50mM HEPES，150mM NaCl，pH 7.5中，用1mM二硫苏糖醇在37℃处理持续30min。在凝胶过滤(G-25，pH 4.5乙酸钠)之后，将在DMSO中的马来酰亚氨基连接基有效载荷衍生化合物25(1.2当量/SH基团)(10mg/ml)添加至还原的抗体中，并且用1M HEPES(pH 7.4)将混合物调节至pH 7.0。在1h之后，用过量的N-乙基马来酰亚胺猝灭反应。通过尺寸排阻色谱法，使用含5％甘油的PBS纯化缀合物，并且无菌过滤。通过UV光谱分析确定蛋白质浓度和有效载荷与抗体的比率。尺寸排阻HPLC确定所有使用的缀合物都是＞90％的单体，并且RP-HPLC确定有＜1％的未缀合的连接基有效载荷。通过HIC分析所有缀合的抗体的连接基有效载荷负荷值。有效载荷与抗体的比率在表8中报告。
表8：每种抗体药物缀合物的百分比收率和有效载荷与抗体的比率
Figure BDA0003124860200003641
通过疏水相互作用色谱(HIC)对缀合物的表征
为了确定抗体上的连接基-有效载荷的装载量(loading)，缀合物在Agilent 1260上使用TSK-NPR丁基HIC柱、使用1M磷酸钾pH 8.5与水的线性梯度运行超过60min。有效载荷的装载量通过对应于缀合抗体和未缀合抗体的种类的峰面积的积分来确定。
实施例23：抗MSR1抗体的产生
抗MSR1抗体通过用免疫原免疫接种包含编码人类免疫球蛋白重链和κ轻链可变区的DNA的基因工程化小鼠获得，所述免疫原包含与N-末端九组氨酸标签(SEQ ID NO:688)融合的重组人类MSR1细胞外结构域(R&DSystems,目录号2708-MS-050,Minneapolis,MN)。用于免疫接种的小鼠是Velocimmune小鼠或表达“通用轻链”的小鼠(“ULC”小鼠)。由ULC小鼠产生的抗体具有不同的重链可变区，但具有基本上相同的轻链可变结构域。
抗体免疫反应通过MSR1特异性免疫测定进行监测。当获得期望的免疫反应时，收获脾细胞并与小鼠骨髓瘤细胞融合以保持其生存力并形成杂交瘤细胞系。筛选和选择杂交瘤细胞系以鉴定产生MSR1特异性抗体的细胞系。使用该技术，获得了若干抗MSR1嵌合抗体(即，具有人类可变结构域和小鼠恒定结构域的抗体)。此外，在不与骨髓瘤细胞融合的情况下从抗原阳性B细胞中直接分离出若干完全人类抗MSR1抗体，如US2007/0280945A1中描述的。
根据本实施例的方法产生的示例性抗MSR1抗体的某些生物学性质在下文列出的实施例中详细描述。
实施例24：重链可变区和轻链可变区氨基酸和核酸序列
表9列出了本文描述的所选抗MSR1抗体的重链可变区和轻链可变区以及CDR的氨基酸序列标识符。相应的核酸序列标识符列于表10。
表9：氨基酸序列标识符
Figure BDA0003124860200003651
Figure BDA0003124860200003661
表10：核酸序列标识符
Figure BDA0003124860200003662
Figure BDA0003124860200003671
抗体在本文中通常根据以下命名法来指代：Fc前缀(例如，“H1H”，“H2aM”，等)，后跟数字标识符(例如，“21227”，“21228”，“21231”，等)，后跟“P”，“N”或“P2”后缀，如表9和表10中示出的。因此，根据该命名法，抗体在本文中可称为，例如，“H1H21227N”，“H2aM21228N”，“H1H27729P”，“H1H27760P2”等。本文使用的抗体名称的前缀表示抗体的特定Fc区同种型。特别地，“H1H”抗体具有人类IgG1 Fc(所有可变区都是完全人类的，如由抗体名称中的第一个“H”所示的)，而“H2aM”抗体具有小鼠IgG2a Fc。如本领域普通技术人员所理解的，具有特定Fc同种型的抗体可以转化为具有不同Fc同种型的抗体(例如，具有小鼠G4 Fc的抗体可以转化为具有人类IG1的抗体，等等)，但在任何情况下，由表9和表10中示出的数字标识符表示的可变结构域(包括CDR)将保持相同，并且无论Fc结构域的性质如何，结合性质被预期是相同或基本上相似的。
抗体修饰。实施例23中描述的三种抗MSR1抗体(21227N、21231N、21234N)被产生为具有原始的人类Fcγ部分，以及所有三种抗MSR1抗体的具有N297Q单点突变的形式。本文描述的所有其他抗体都制备为具有人类Fcγ部分中的N297Q单点突变。第三种形式N297D突变仅针对21227N抗体产生。
实施例25：人类抗MSR1单克隆抗体的表面等离子共振衍生结合亲和力和动力学常数
人类抗MSR1抗体对不同MSR1试剂的结合亲和力和动力学常数通过实时表面等离子共振(Biacore 4000)确定。所有结合研究均在10mM HEPES、150mM NaCl、3mM EDTA和0.05％v/v表面活性剂吐温-20,pH7.4(HBS-ET)运行缓冲液中于25℃和37℃进行。BiacoreCM4传感器芯片表面首先通过与山羊抗人类Fcγ特异性多克隆抗体(JacksonImmunoResearch Laboratories,目录号BR-1008-39)的胺偶联进行衍生化，以捕获抗MSR1单克隆抗体。对与N-末端九组氨酸标签(SEQ ID NO:688)一起表达的人类MSR1细胞外结构域(His9-hMSR1；R&D Systems,目录号2708-MS)和与N-末端六组氨酸-myc-myc标签(“六组氨酸”公开为SEQ ID NO:689)一起表达的猴MSR1细胞外结构域(HMM-mfMSR1；SEQ ID NO:418)进行结合研究。不同浓度的His9-hMSR1和HMM-mfMSR1(100nM-3.7nM；3倍系列稀释)首先在HBS-ET运行缓冲液中制备，并以30μL/分钟的流量在经抗人类Fcγ捕获的抗MSR1单克隆抗体表面上注射3分钟，同时在HBS-ET运行缓冲液中监测单克隆抗体结合的MSR1试剂的解离10分钟。
缔和速率(ka)和解离速率(kd)通过使用Scrubber 2.0c曲线拟合软件将实时结合传感器图(sensorgrams)拟合至具有质量传输限制(mass transport limitation)的1:1结合模型来确定。结合解离平衡常数(KD)和解离半衰期(t1/2)根据动力学速率计算为：
Figure BDA0003124860200003681
和
Figure BDA0003124860200003682
His9-hMSR1或HMM-mfMSR1在25℃和37℃与不同抗MSR1单克隆抗体结合的结合动力学参数分别在表11和表12中示出。
表11：在25℃时抗MSR1 mAb的Biacore结合亲和力
Figure BDA0003124860200003691
Figure BDA0003124860200003701
*表示在当前实验条件下没有观察到His9-hMSR1或HMM-mfMSR1的解离，并且在拟合数据时将kd值手动固定在1.00E-05
$表示在当前实验条件下没有观察到结合。
表12：在37℃时抗MSR1 mAb的Biacore结合亲和力
Figure BDA0003124860200003702
Figure BDA0003124860200003711
Figure BDA0003124860200003721
*表示在当前实验条件下没有观察到His9-hMSR1或HMM-mfMSR1的解离，并且在拟合数据时将kd值手动固定在1.00E-05
$表示在当前实验条件下没有观察到结合。
在25℃时，根据本公开内容的所有抗MSR1单克隆抗体都以范围为12pM至5.45nM的KD值与His9-hMSR1结合，如表11中示出的。在37℃时，本公开内容的所有抗MSR1单克隆抗体都以范围为3.66pM至8.53nM的KD值与His9-hMSR1结合，如表12中示出的。
在25℃时，根据本公开内容的所有抗MSR1单克隆抗体都以范围为29.9pM至10.1nM的KD值与HMM-mfMSR1结合，如表11中示出的。在37℃时，本公开内容的所有抗MSR1单克隆抗体都以范围为3.62pM至18.4nM的KD值与HMM-mfMSR1结合，如表12中示出的。
实施例26：人类抗MSR1单克隆抗体的Octet衍生结合亲和力和动力学常数
人类抗MSR1抗体对不同MSR1试剂的结合亲和力和动力学常数通过在
Figure BDA0003124860200003722
HTX生物传感器平台(Pall FortéBio Corp.,Menlo Park,CA)上的实时无标记生物层干涉测量术测定来确定。实验在25℃在10mM HEPES、150mM NaCl、3mM EDTA、0.05％v/v表面活性剂吐温-20和1mg/mL BSA,pH7.4(HBS-EBT)缓冲液中伴随着1000rpm速度的板摇动进行。对与N-末端九组氨酸标签(SEQ ID NO:688)一起表达的人类MSR1细胞外结构域(His9-hMSR1；R&D Systems,目录号2708-MS)、与N-末端myc-myc-六组氨酸标签(“六组氨酸”公开为SEQID NO:689)一起表达的猴MSR1细胞外结构域(HMM-mfMSR1；SEQ ID NO:418)以及与N-末端九组氨酸标签(SEQ ID NO:688)一起表达的小鼠MSR1细胞外结构域(His9-mMSR1；R&DSystems,目录号1797-MS)进行结合研究。抗MSR1单克隆抗体通过将抗人类Fc(AHC)或抗小鼠Fc(AMC)Octet生物传感器浸入含有5μg/mL或10μg/mL抗MSR1单克隆抗体的孔中45-90秒来捕获。然后经AHC捕获的抗MSR1单克隆抗体浸入含有50nM的His9-mMSR1的孔中，同时经AMC捕获的抗MSR1单克隆抗体浸入含有不同浓度的His9-hMSR1或HMM-mfMSR1(100nM、25nM)或100nM His9-mMSR1的孔中。不同的MSR1试剂与经捕获的抗MSR1单克隆抗体的结合在HBS-EBT缓冲液中测量4分钟，并且单克隆抗体结合的MSR1试剂的解离在HBS-EBT缓冲液中被监测8-10分钟。
缔和速率(ka)和解离速率(kd)通过使用Scrubber 2.0c曲线拟合软件将实时结合传感器图拟合至具有质量传输限制的1:1结合模型来确定。结合解离平衡常数(KD)和解离半衰期(t1/2)根据动力学速率计算为：
Figure BDA0003124860200003731
和
Figure BDA0003124860200003732
His9-hMSR1或HMM-mfMSR1在25℃与不同的本公开内容的抗MSR1单克隆抗体结合的结合动力学参数分别在表13和表14中示出。
表13：在25℃时抗MSR1 mAb的
Figure BDA0003124860200003733
结合亲和力
Figure BDA0003124860200003734
Figure BDA0003124860200003741
$表示在当前实验条件下没有观察到结合。
表14：在25℃时抗MSR1 mAb的
Figure BDA0003124860200003742
结合亲和力
Figure BDA0003124860200003743
Figure BDA0003124860200003751
*表示在当前实验条件下没有观察到His9-mMSR1的解离，并且在拟合数据时将kd值手动固定在5.00E-05
$表示在当前实验条件下没有观察到结合。
#表示结合数据是不确定的(IC)
抗MSR1单克隆抗体以范围为205pM至2.2nM的KD值与His9-hMSR1结合，如表13中示出的。抗MSR1单克隆抗体以范围为208pM至19.7nM的KD值与HMM-mfMSR1结合，如表13中示出的。
如表14中示出的，35种抗MSR1单克隆抗体中有23种不与His9-mMSR1结合，而6种抗MSR1单克隆抗体的结合数据是不确定的。35种抗MSR1单克隆抗体中有六(6)种以范围为1.09pM至5.2nM的KD值与His9-mMSR1结合，如表14中示出的。
实施例27：抗MSR1抗体显示出与细胞表面表达的人类MSR1和猴MSR1的特异性结合
抗MSR1单克隆抗体与表达人类MSR1或猴MSR1的细胞结合的能力使用基于电化学发光(ECL)的检测来确定。
表达MSR1的细胞系的产生。产生了两种过表达人类MSR1或猴MSR1的细胞系。为了产生人类MSR1过表达细胞系，人类胚胎肾(HEK)293细胞通过用潮霉素抗性慢病毒载体转导来工程化，所述慢病毒载体编码具有C-末端Myc标签的全长人类MSR1(hMSR1，登录号NP_619729.1的氨基酸M1-L451)。所得细胞系被称为HEK293.Myc.hMSR1。类似地，为了产生猴MSR1过表达细胞系，HEK293细胞通过用遗传霉素抗性表达质粒转染来工程化，所述质粒编码全长猴MSR1(食蟹猴(Macaca fascicularis)mfMSR1，登录号XP_005562705.1的氨基酸M1-L451)。所得细胞系被称为HEK293.mfMSR1细胞。为了测量抗体与内源表达的人类MSR1结合的能力，THP-1人类单核细胞用200nM的佛波醇12-肉豆蔻酸酯13-乙酸酯(PMA；Sigma,目录号P8139)处理72小时以诱导高MSR1表达，然后进行抗体结合。未转染的HEK293细胞被纳入作为非特异性结合对照，因为它们在基因表达的下一代测序中没有可检测到的MSR1表达(数据未示出)。
抗体结合测定。为了进行抗体结合测定，来自上文描述的每种细胞系的细胞在不具有Ca2+/Mg2+的PBS缓冲液中漂洗一次，并用无酶细胞解离溶液(Millipore,Cat.#S-004-C,Burlington,Ma)在37℃孵育5分钟以使细胞从烧瓶脱离。所有细胞用具有Ca2+/Mg2+的1xPBS洗涤一次，并且用CellometerTM自动T4细胞计数器(Nexcelom Bioscience)进行计数。大约1.0x104个细胞单独地接种到96孔碳电极板[MULTI-ARRAY高结合板,Meso ScaleDiagnostics]上并在37℃孵育1小时。然后非特异性结合位点在室温通过具有Ca2+/Mg2+的PBS中的2％BSA(w/v)封闭1小时。THP-1细胞在室温在具有以下1)或2)的样品稀释缓冲液中预孵育0.5小时：1)用于封闭THP-1细胞表面上的Fcγ受体的1mg/mL Fc受体封闭试剂[完整分子人类IgG(Jackson Immunoresearch,目录号009-000-003)，用于使用抗MSR1-mFc抗体进行测试的孔，或2)完整分子mIgG(Jackson Immunoresearch,目录号015-000-003)，用于使用抗MSR1-hFc抗体进行测试的孔。HEK293.Myc.hMSR1、HEK293.mfMSR1和HEK293细胞上的抗体结合在没有Fc受体封闭试剂的情况下进行测试。抗MSR1抗体或对照抗体的溶液以范围为1.7pM至100nM的系列稀释，以及不存在抗体的情况下的溶液以一式两份添加到板结合的HEK293.Myc.hMSR1、HEK293.mfMSR1和HEK293细胞或者THP-1+Fc阻断中，并且板在室温孵育1小时。然后板用具有细胞洗涤头的AquaMax2000洗板机(MDS Analytical Technologies)洗涤以去除未结合的抗体。板结合的抗体用对Fcγ片段有特异性的SULFO-TAGTM缀合的山羊多克隆抗人类IgG抗体(Jackson Immunoresearch,目录号109-005-098)或对Fcγ片段有特异性的SULFO-TAGTM缀合的山羊多克隆抗小鼠IgG抗体(Jackson Immunoresearch,目录号115-005-164)在室温检测1小时。将板洗涤并用Read缓冲液(Meso Scale Diagnostics,目录号R92TD-2)根据制造商推荐的程序进行显影，并且用SECTOR成像仪600(Meso ScaleDiagnostics)记录发光信号。记录了以相对光单位(RLU)度量的发光强度，以指示在一定浓度范围的每种抗体的结合强度。每种抗MSR抗体的所检测到的细胞表面结合信号与同种型对照抗体相比(两者均为11nM)的比率被报告为MSR1结合特异性的指示。与亲本HEK293细胞上的比率相比，具有大于或等于2倍的表达MSR-1的细胞上的结合比率的抗体被分类为特异性结合物。与亲本HEK293细胞上的比率相比，具有小于2倍的结合比率的抗体被分类为非结合物，如所示的。(参见表15)。
表15：抗MSR1抗体与表达MSR1的细胞的结合
Figure BDA0003124860200003771
Figure BDA0003124860200003781
Figure BDA0003124860200003791
如表15中说明的，39种经测试的抗MSR1抗体中有38种与HEK293.Myc.hMSR1细胞特异性结合，其中在11nM抗MSR1抗体浓度时结合比率的范围为大于同种型对照5倍至166倍。在PMA细胞分化后，这些抗MSR1抗体中有33种与内源表达人类MSR1的THP-1细胞特异性结合，其中在11nM时细胞结合比率的范围为大于同种型对照3倍至66倍。与工程化hMSR1细胞结合的35种抗MSR1抗体也与mfMSR1工程化细胞特异性结合，其中在11nM时细胞结合比率的范围为大于同种型对照6倍至77倍。12种抗MSR1抗体(H1H21234N-N297Q、H1H27731P-N297Q、H1H27732P-N297Q、H1H27734P-N297Q、H1H27736P-N297Q、H1H27751P-N297Q、H1H27754P-N297Q、H1H27756P-N297Q、H2aM25695N、H2aM21235N、H2aM21229N、H1H27766P2-N297Q)与亲本HEK293细胞以大于同种型对照5倍或更大的比率结合。用含有N297Q或N297D单点突变的人类IgG1产生的抗MSR1抗体与细胞的结合是与其相应的未修饰亲本抗体可比较的。
一种抗MSR1抗体H1xH29273P2被表征为非特异性结合物，因为与HEK293细胞相比，它在11nM抗体浓度时与MSR1细胞结合的比率小于2。如预期的，hIgG1和mIgG1同种型对照不是特异性的。
实施例28：抗MSR1抗体与细胞表面表达的小鼠MSR1的相对结合
抗MSR1抗体与表达小鼠MSR1的细胞的相对细胞表面结合通过使用MSR1阳性RAW264.7细胞(ATCC,目录号TIB-71)和MSR1阴性B16F10.9细胞(Lin等人1998.PNAS 95:8829-8834)的流式细胞术进行确定。对于该测定，将细胞铺板在96孔V-底板(AxygenScientific,目录号P-96-450-V-C-S)中的不具有钙和镁的PBS(VWR目录号45000-446)和2％FBS(Saradigm目录号1500-500)(染色缓冲液)中。为了封闭与Fc受体的结合，RAW264.7细胞在4℃与稀释在染色缓冲液中的500μg/mL小鼠IgG(Jackson ImmunoResearch,目录号015-000-003)孵育30分钟，而B16F10.9细胞保持在染色缓冲液中。在Fc受体封闭后，将10μg/mL的抗MSR1抗体或同种型对照抗体添加至细胞，并且随后在冰上孵育30分钟。对于阳性对照，使用商业抗小鼠MSR1抗体(Sino Biological,目录号50129-R004)，而兔IgG抗体(Thermo Scientific,目录号26102)用作阴性对照。细胞然后用染色缓冲液洗涤一次，并与10μg/mL的APC缀合的抗人类Fc二级抗体(Jackson ImmunoResearch,目录号109-136-170)或Alexa-Flour 647缀合的抗兔Fc二级抗体[Jackson ImmunoResearch目录号111-606-046]在4℃孵育30分钟。细胞随后使用稀释在PBC中的Cytofix(BD Biosciences,目录号554655)的50％溶液洗涤并固定。样品在Beckman Coulter Cytoflex上运行，并且结果在Flowjo 10.2软件(BD)中进行分析以计算平均荧光强度(MFI；表16)。信噪比(S/N)通过计算抗MSR1抗体或对照抗体MFI与未染色样品MFI的比率来确定(表16)。
表16：抗MSR1抗体与RAW264.7细胞的结合(流式细胞术)
Figure BDA0003124860200003801
Figure BDA0003124860200003811
如表16中说明的，两种抗MSR1抗体(H1H21227N-N297Q和H1H21234N-N297Q)分别以5和3的S/N值与RAW264.7细胞弱结合。非结合对照抗体不与RAW264.7细胞结合。22种抗MSR1抗体中没有一种与B16F10.9细胞结合。参考阳性对照(小鼠MSR1/CD204抗体，SinoBiological,Cat.#50129-R004)以97的S/N与Raw 264.7细胞结合。
实施例29：抗MSR1抗体与MSR1受体上的不同表位结合/抗MSR1抗体之间的交叉竞争
不同抗MSR1抗体之间的结合竞争通过在
Figure BDA0003124860200003812
HTX生物传感器平台(PallFortéBio Corp.,Menlo Park,CA)上的实时无标记生物层干涉测量术测定进行评估。实验在25℃在10mM HEPES、150mM NaCl、3mM EDTA、0.05％v/v表面活性剂吐温-20和1mg/mLBSA,pH 7.4(HBS-EBT)缓冲液中伴随着1000rpm速度的板摇动进行。
为了评估不同的抗体是否能够彼此竞争结合到与N-末端九组氨酸标签(SEQ IDNO:688)一起表达的重组人类MSR1细胞外结构域(His9-hMSR1；R&D Systems,目录号2708-MS)上各自的表位，大约0.59-0.79nM的His9-hMSR1首先通过使生物传感器尖端浸入含有20μg/mL的His9-hMSR1溶液的孔中45秒而被捕获到抗五His抗体包被的
Figure BDA0003124860200003821
生物传感器尖端(“五His”公开为SEQ ID NO:690)(Pall FortéBio Corp.,#18-5122)。然后，用第一种抗MSR1单克隆抗体(随后称为“mAb-1”)，通过浸入含有50μg/mL的mAb-1溶液的孔中4分钟使抗原捕获的生物传感器尖端饱和。然后将生物传感器尖端浸入含有50μg/mL的第二种抗MSR1单克隆抗体(随后称为“mAb-2”)溶液的孔中4分钟。在实验的每个步骤之间，所有的生物传感器尖端都在HBS-EBT缓冲液中洗涤。在实验过程期间监测实时结合反应，并记录每个步骤结束时的结合反应。比较了mAb-2与预先与mAb-1复合的His9-hMSR1结合的反应，并使用50％抑制阈值确定了不同抗MSR1单克隆抗体的竞争/非竞争表现。表17明确定义了不依赖于结合顺序而在两个方向竞争的抗体的关系。
表17：抗MSR1抗体对于与His9-hMSR1结合的交叉竞争
Figure BDA0003124860200003822
Figure BDA0003124860200003831
Figure BDA0003124860200003841
*当捕获为“mAb-1”时，不与任何其他mAb交叉竞争与MSR1的结合
**mAb未能使MSR1表面饱和或不与MSR1表面结合
实施例30：抗MSR1抗体的配体摄取
MSR1可以结合和内化经化学修饰或改变的聚阴离子分子，包括修饰的低密度脂蛋白(LDL)(Platt,N.和S.Gordon.2001.J Clin Invest.108(5):649-654)。生成生物测定以评估示例性抗MSR1抗体调节某些MSR1配体的摄取的能力。
用于测定的表达MSR1的细胞系的产生。人类胚胎肾细胞(HEK293)被转导以稳定表达具有C末端Myc标签的人类MSR1(UniProtKB登录号NP_619729.1的氨基酸1-451)。所得细胞系在此处被称为“HEK293.Myc.hMSR1”，被选择并维持在含有10％FBS、NEAA、青霉素/链霉素、L-谷氨酰胺和100μg/mL潮霉素的DMEM。
配体摄取测定。对于生物测定，HEK293.Myc.hMSR1细胞以20,000个细胞/孔接种到96孔聚-D-赖氨酸包被的测定板上(Greiner Bio One,目录号655946)在含有0.1％FBS、青霉素/链霉素和L-谷氨酰胺的Opti-MEM中(测定培养基)，并在37℃在5％CO2中孵育过夜。第二天，抗体从300nM系列稀释至5.08pM(1:3系列稀释)，并与细胞、与仅由测定培养基组成的阴性对照一起在37℃在5％CO2中预孵育30分钟。在30分钟后，以10μg/mL的恒定浓度向细胞中添加用1,1’-双十八烷基-3,3,3’,3’-四甲基吲哚菁高氯酸盐标记的氧化低密度脂蛋白(LDL)或乙酰化低密度脂蛋白(LDL)(分别称为“DiI-OxLDL”或“DiI-AcLDL”)。为了确定配体摄取的剂量反应，DiI-OxLDL或DiI-AcLDL从25μg/mL系列稀释至24.4pg/mL(加上单独的不具有LDL的测定培养基)，并添加到不被抗体孵育的细胞。在37℃于5％CO2中过夜孵育后，细胞用BD CytoFixTM(BD Biosciences,目录号554655)在4℃固定2小时，并且配体摄取使用Flexstation3板读取仪(MolecularDevices)评估，其中在514nm激发并且在565nm发射。结果使用非线性回归(4参数逻辑)与Prism 7程序进行分析以获得EC50和IC50值。抑制百分比通过使用以下等式用相对荧光单位(RFU)值进行计算：
Figure BDA0003124860200003851
在等式中，“RFU基线”是在不具有抗体的情况下用10μg/mL配体处理的细胞的荧光值，“RFU抑制”是特定抗体与10μg/mL配体的最小荧光值，并且“RFU背景”是在不具有任何配体或抗体的情况下来自细胞的荧光值。配体摄取测定的结果和计算值提供于表18中。
表18：HEK293.Myc.hMSR1细胞中Dil-OxLDL和Dil-AcLDL摄取的抗体抑制
Figure BDA0003124860200003852
Figure BDA0003124860200003861
合适的抗体候选物显示出相对有效的抑制(例如，小于约10nM的IC50值)。在一些实施方案中，合适的抗体候选物也显示出小于约65％的最大配体摄取抑制。
如表18(第1-10行)中示出的，八种抗体显示出对HEK293.Myc.hMSR1上的DiI-OxLDL摄取的抑制，其中最大抑制的范围为26％至90％并且IC50值的范围为2.3nM至＞100nM。8种抗体中有7种显示出对DiI-AcLDL摄取的抑制，其中最大抑制的范围为10％至62％并且IC50值的范围为1.8nM至＞100nM。抗体H2aM21229N显示出对DiI-AcLDL摄取无抑制。
如表18(第11-15行)中示出的，四种抗体显示出对MSR1介导的DiI-OxLDL摄取的抑制，其中最大抑制的范围为43％至91％并且IC50值的范围为1.7nM至＞100nM。本公开内容的四种抗体显示出对MSR1介导的DiI-AcLDL摄取的抑制，其中最大抑制的范围为22％至79％并且IC50值的范围为2.1nM至＞100nM。
如表18(第16-42行)中示出的，25种抗体中有24种显示出对MSR1介导的DiI-OxLDL摄取的抑制，其中最大抑制的范围为22％至94％并且IC50值的范围为1.7nM至＞100nM。25种抗体中有23种显示出对DiI-AcLDL摄取的抑制，其中最大抑制的范围为26％至65％并且IC50值的范围为0.42nM至＞100nM。抗体H1H27729P-N297Q显示出对DiI-OxLDL摄取没有抑制，同时抗体H1H27739P-N297Q和H1H27734P-N297Q显示出对HEK293.Myc.hMSR1上的DiI-AcLDL摄取没有抑制。
人类和小鼠同种型对照抗体在任何测定中未显示出对由HEK293.Myc.hMSR1细胞进行的DiI-OxLDL和DiI-AcLDL摄取的抑制。实施例31：抗MSR1抗体结合和内化细胞表面表达的MSR1
评估了示例性抗MSR1抗体结合和内化在表达MSR1的细胞上的MSR1的能力。
对于该测定，将THP-1细胞[ATCC,目录号TIB-202]接种到96孔PDL包被的板(Perkin Elmer,目录号6055500)中在含有10％FBS(ATCC,目录号30-2020)、青霉素/链霉素/L-谷氨酰胺(Gibco,目录号10378-016)、50μMβ-巯基乙醇(Sigma,目录号M7522)(生长培养基)加上200nM佛波醇肉豆蔻酸酯乙酸酯(PMA；Sigma,目录号P1585)的RPMI(IrvineScientific,目录号9160)中。允许THP-1细胞在37℃于5％CO2中分化4天。为了染色，将细胞的一式四份板(quadruplicate plate)与稀释在不具有钙和镁的PBS中的2％FBS(Irving,目录号9240)(染色缓冲液)中的10μg/mL抗MSR1抗体在4℃孵育30分钟。细胞用染色缓冲液洗涤两次，与10μg/mL的Alexa-Flour 488缀合的二级Ab(Jackson Immunoresearch,目录号115-547-003或Jackson Immunoresearch,目录号109-547-003)在4℃孵育30分钟，并且随后用染色缓冲液再洗涤两次。立即将两块板固定并用PBS中的4％多聚甲醛(PFA；ThermoFisher,目录号28908)+5μM DRAQ5(ThermoFisher,目录号62251)染色20分钟(非内化板)。剩余的两块板在37℃孵育1小时，随后用稀释在PBS中的4％PFA+5μM DRAQ5溶液固定和染色20分钟(内化板)。在固定后，所有板用PBS洗涤一次。一块非内化板和一块内化板与PBS中的50μg/mL的抗Alexa Fluor 488抗体(Regeneron)在4℃孵育过夜，以使表面AlexaFluor 488荧光猝灭。剩余的平板仅用PBS孵育。共焦图像在40X放大的Opera Phenix(Perkin Elmer)上获得。Harmony分析软件(Perkin Elmer)用于鉴定经DRAQ5标记的细胞，并且确定了总Alexa-Fluor 488相对荧光单位(RFU)/细胞。确定了每种抗体在4℃的总结合(4℃未猝灭孔的RFU值)、在37℃的总结合(37℃非猝灭孔的RFU值)、总内化RFU和％内化，如表19中示出的。
对于所有计算，从每个孔中减去来自未染色孔的背景荧光。总内化RFU计算如下：37℃未猝灭样品的总RFU-在37℃的表面RFU。表面RFU定义为在37℃的未猝灭RFU-在37℃的猝灭RFU)/QE。QE(猝灭效率)定义为：1-(4℃猝灭样品的总RFU/4℃未猝灭样品的总RFU)。％内化根据下式确定：(在37℃的总内化RFU/在37℃的总RFU)*100。
表19：分化的THP-1细胞中抗MSR1抗体的内化和表面结合
Figure BDA0003124860200003881
Figure BDA0003124860200003891
ND*：％内化由于弱结合和/或不能确定淬灭效率而不能被确定
**：％内化值＞100％是由于总内化值略高于在37℃的总值。100％的内化通过在37℃时所有Alex488荧光均表现为囊状结构来目视地确定。
如表19中示出的，21种经测定的抗MSR1抗体中有19种展示出以范围为13.3％至117.9％的内化而被内化到经分化的THP-1细胞中。对于21种抗MSR1抗体中的两种，内化由于弱结合和/或不能确定淬灭效率而不能被确定。作为对照，同种型对照没有展示出任何可测量的内化。
实施例32：评估抗MSR1抗体对人类MSR1的阻断能力
本文公开的抗MSR1抗体阻断各种配体与人类MSR1结合的能力使用三种竞争夹心ELISA测定来测量。测定中使用的配体为：(1)乙酰化LDL(Ac-LDL)，(2)氧化LDL(Ox-LDL)，和(3)牛血清白蛋白的晚期糖化终产物(AGE-BSA)。
对于该测定，包括人类MSR1细胞外结构域的一部分的与N-末端9组氨酸标签(SEQID NO:688)一起表达的重组单体人类MSR1蛋白(His9-hMSR1；R&D Systems,目录号2708-MS)以PBS中的2μg/mL的浓度在4℃过夜包被在96孔微量滴定板上，用于使用Ac-LDL、Ox-LDL或生物素化的AGE-BSA(“biot-AGE-BSA”)的竞争ELISA测定中。非特异性结合位点随后使用磷酸盐缓冲盐水(PBS)中的0.5％(w/v)的牛血清白蛋白(BSA)溶液封闭。抗MSR1抗体或同种型对照抗体根据每个测试配体的需要进行系列稀释，并且对于每个系列稀释组，以一式两份添加至用His9-hMSR1包被的微量滴定板。单独的缓冲液也添加至在每一个包被(coat)上的孔。在室温孵育1小时后，不经洗涤，将50pM Ac-LDL(Life Technologies/ThermoFisherScientific,目录号L-35354)、5nM或10nM Ox-LDL(Alfa Aesar,目录号J65591)或者400pMbiot-AGE-BSA(R&DSystems,目录号BT4127)的最终恒定浓度添加到具有His9-hMSR1的板中，并将板在室温孵育另外1小时。(用于抗体抑制测定的Ac-LDL、Ox-LDL和biot-AGE-BSA的浓度从Ac-LDL、Ox-LDL或biot-AGE-BSA与包被板的His9-hMSR1的单独结合曲线的线性部分内的近似中点选择。)将孔洗涤，并且板结合的Ac-LDL或Ox-LDL用抗LDL兔抗体(AlfaAesar,目录号J64398)与经辣根过氧化物酶(HRP)缀合的抗兔IgG(H+L)特异性驴多克隆抗体(JacksonImmunoResearch,目录号711-035-152)组合来检测，并且biot-AGE-BSA用链霉亲和素-HRP(ThermoFisher Scientific,目录号N200)进行检测。板使用TMB底物溶液(BDBiosciences,目录号51-2606KC&目录号51-2607KC)根据制造商的建议进行显影，并且450nm处的吸光度在VictorTM多标签板读取仪(PerkinElmerTM)上测量。该测定以四个不同的测定运行进行。
数据分析使用PrismTM软件(GraphPad)中的S型剂量-反应模型(sigmoidal dose-response model)进行。在每个测定中测试的抗体在最大浓度时的阻断百分比被计算为相对于测试的基线，抗体阻断Ac-LDL、Ox-LDL或biot-AGE-BSA与板上的His9-hMSR1结合的能力的指示物。在计算中，在不存在抗体的情况下，用于测定的相同浓度的Ac-LDL、Ox-LDL或biot-AGE-BSA的结合信号被称为100％结合或0％阻断，而测定的基线(定义为不具有MSR1配体或抗体的缓冲液样品的结合信号)被称为0％结合或100％阻断。报告了所有抗体在每个测定中测试的在最高抗体浓度的最大阻断百分比。负阻断百分比数值反映了在存在抗体的情况下更高的MSR1配体结合到包被板的His9-hMSR1。阻断结果总结在表20中。
表20：竞争ELISA测定中抗MSR1抗体的阻断能力
Figure BDA0003124860200003911
Figure BDA0003124860200003921
35种经测定的抗MSR1抗体中有4种被鉴定为阻断了＞50％的Ac-LDL、Ox-LDL和biot-AGE-BSA与hMSR1的结合。这四种抗MSR1抗体阻断了大于95％的50pM Ac-LDL、10nMOx-LDL和400pM biot-AGE-BSA与His9-hMSR1的结合。
在所测试的最大抗体浓度，35种抗MSR1抗体中有4种阻断了＞50％的Ac-LDL和/或Ox-LDL与hMSR1的结合，但未阻断biot-AGE-BSA与hMSR1的结合。这些抗体中有三种阻断了50pM Ac-LDL和10nM Ox-LDL两者与hMSR1的结合，具有52％至98％的阻断。一种抗体(H1H21234N-N297Q)仅阻断50pM Ac-LDL与hMSR1的结合，具有75％的阻断。
35种抗MSR1抗体中的二十七(27)种以及不相关的同种型对照抗体阻断了＜50％的Ac-LDL、Ox-LDL和biot-AGE-BSA与hMSR1的结合。
三种抗MSR1抗体(21227N、21231N、21234N)被产生为具有原始的人类Fcγ部分，以及具有N297Q单点突变的形式两者。21227N抗体也产生为具有N297D突变的第三种形式。21227N抗MSR1抗体的修饰形式(H1H21227N-N297Q和H1H21227N-N297D)和21231N抗MSR1抗体的修饰形式(H1H21231N-N297Q)保留了亲本特征。抗体H1H21227N-N297Q和H1H21227N-N297D阻断了＞50％的Ac-LDL、Ox-LDL和biot-AGE-BSA与hMSR1的结合，而抗体H1H21231N-N297Q阻断了＜50％的Ac-LDL、Ox-LDL和biot-AGE-BSA与hMSR1的结合。与未修饰的H1H21234N抗体相比，修饰的抗MSR1抗体H1H21234N-N297Q仅阻断了50pM Ac-LDL与hMSR1的结合，而未修饰的抗体H1H21234N阻断了＞50％的Ac-LDL和Ox-LDL两者与hMSR1的结合。
实施例33：细胞内金黄色葡萄球菌抗体-药物缀合物灭杀测定1(MSR1)使用的试剂在下文表21中示出。
表21：用于细胞内测定的试剂
试剂 供应商 目录号
RPMI Gibco 11835-030
PBS Gibco 20012-043
Triton X-100 Sigma TX1568-1
RPMI Gibco 11875-093
FBS Gibco 10082-147
PMA Sigma P8139
Costa 48孔板 Coming 3548
TSA板 Teknova T0144
青霉素/链霉素 Gibco 15140-122
稀释板 Greiner Bio one 780271-FD
庆大霉素 BioWhittaker 17-519Z
为了在体外测试根据本公开内容的抗MSR1 Ab-抗生素ncADC的效力，使用了细胞内金黄色葡萄球菌灭杀测定。对于该测定，THP-1单核细胞系在包括含有10％FBS和1％青霉素/链霉素的RPMI的培养基中生长，然后以1x105个细胞/孔的密度接种在96孔板中，并在感染前使用200nM的佛波醇肉豆蔻酸酯乙酸酯(PMA)分化为巨噬细胞三天。金黄色葡萄球菌MRSA菌株NRS384的过夜培养物在RPMI中生长，用PBS洗涤两次，并且随后以1x107cfu/mL重悬浮于PBS中。THP-1细胞用温的培养基(不具有FBS的RPMI)洗涤以去除青霉素/链霉素，并且然后用金黄色葡萄球菌悬浮液以10:1(金黄色葡萄球菌：巨噬细胞)的感染复数进行感染。板以300xg旋转5分钟，以使细菌的粘附同步进行，然后在37℃孵育2小时。自由漂浮的细菌通过用温的培养基洗涤两次来去除，并且剩余的细胞外金黄色葡萄球菌通过添加含有100μg/mL庆大霉素的培养基来灭杀。在1小时后，将培养基抽吸，并且将不同剂量(10μg/mL、3.3μg/mL、1.1μg/mL、0.4μg/mL、0.1μg/mL和0.04μg/mL)的抗MSR1 Ab-抗生素ncADC(H1H21234N-N297Q-25和H1H21234N-N297Q-80)(其为经由链间半胱氨酸与根据本公开内容的马来酰亚胺连接基有效载荷衍生化合物25和80缀合的根据本公开内容的抗MSR1抗体)和10μg/mL的同种型对照-抗生素ncADC(同种型对照-N297Q-25和同种型对照-N297Q-80)添加到培养基中的经感染的巨噬细胞，所述培养基含有50μg/mL庆大霉素以防止金黄色葡萄球菌的细胞外生长。还包括了不具有任何ncADC的样品用作参考。在24小时后，板用不具有FBS的温的RPMI洗涤两次，并且然后添加100μL的在PBS中的0.1％Triton X-100，并孵育10分钟以裂解THP-1。金黄色葡萄球菌生存通过在PBS中系列稀释并铺板到胰胨大豆琼脂(trypticase soy agar)板上的菌落形成单位来计数。
DAR总结在下文表22中。
表22：使用的抗体-药物缀合物的药物-抗体比率
Figure BDA0003124860200003941
结果总结在下文表23中。
表23：抗MSR1 Ab-抗生素的平均菌落形成单位
Figure BDA0003124860200003942
Figure BDA0003124860200003951
如表23中示出的，抗MSR1 Ab-抗生素ncADC(H1H21234N-N297Q-25和H1H21234N-N297Q-80)展示出与未处理的对照相比在体外以剂量依赖方式使来自感染的巨噬细胞的细胞内金黄色葡萄球菌减少的能力。用10μg/mL的同种型对照-抗生素ncADC(同种型对照-N297Q-25和同种型对照-N297Q-80)处理的巨噬细胞含有细胞内金黄色葡萄球菌，其水平与未处理的对照相似。这些数据证明，根据本公开内容的抗MSR1 Ab-抗生素ncADC可以用于有效灭杀驻留在巨噬细胞储库内的病原体。
实施例34：金黄色葡萄球菌IV播散性感染小鼠模型
为了在体内测试根据本公开内容的抗MSR1 Ab-抗生素ncADC的效力，使用了静脉内播散性感染模型。金黄色葡萄球菌MRSA菌株NRS384在胰胨大豆肉汤(TSB)中生长过夜，并传代培养至对数中期。细菌然后用PBS洗涤两次，并以1.2x10^8cfu/mL的浓度重悬浮于PBS中。然后用100μL细菌悬浮液通过尾静脉对纯合地表达人类MSR1细胞外结构域和跨膜结构域来代替小鼠MSR1细胞外结构域和跨膜结构域(人源化MSR，MAID7343-MSR1 HumIndelHyg)的小鼠进行静脉内感染，最终感染剂量为1.2x10^7cfu/小鼠。从感染后一天到三天，小鼠每天两次在所指示处用110mg/kg万古霉素皮下治疗。在感染后一天，如表24中描述的，抗MSR1单克隆抗体(H1H21234N-N297Q)、抗MSR1 Ab-抗生素ncADC(H1H21234N-N297Q-25)(其为经由链间半胱氨酸与根据本公开内容的马来酰亚胺连接基有效载荷衍生化合物25缀合的根据本公开内容的抗MSR1抗体)、同种型对照抗体或与马来酰亚胺连接基有效载荷衍生化合物25缀合的ncADC同种型对照以指示的剂量皮下施用。在整个感染过程中，监测小鼠的体重减轻和身体状况评分。在感染后4天，使小鼠安乐死，并且金黄色葡萄球菌肾负荷通过组织匀浆、随后通过在PBS中系列稀释并铺板到胰胨大豆琼脂板上对菌落形成单位计数来进行定量。
表24：用抗MSR1 Ab-抗生素ncADC与万古霉素联合治疗的小鼠中的平均金黄色葡萄球菌肾负荷
Figure BDA0003124860200003961
检测限＝250个菌落形成单位(cfu)
如上文表24中示出的，用金黄色葡萄球菌MRSA菌株NRS384静脉内感染导致肾中的高细菌负荷，并且用标准护理抗生素万古霉素治疗小鼠使金黄色葡萄球菌肾负荷降低了约2个对数，但没有一只小鼠具有的金黄色葡萄球菌水平降低至低于检测限(LOD)。1mg/kg和0.1mg/kg剂量的抗MSR1 Ab-抗生素ncADC(H1H21234N-N297Q-25)与万古霉素联合导致77％和75％的小鼠的金黄色葡萄球菌水平低于LOD，展示出用Ab-抗生素ncADC联合疗法治疗的小鼠中金黄色葡萄球菌清除的明显改善。在用同种型对照ncADC缀合物(同种型对照-N297Q-25)加万古霉素治疗的小鼠中，金黄色葡萄球菌清除不太明显，这展示出有效载荷靶向巨噬细胞的益处。
实施例35：无糖基化抗体与氨基-连接基-有效载荷缀合的方法
化合物80和82的细菌转谷氨酰胺酶缀合
使用了含有N297Q突变的抗MSR1抗体H1H21234N，该突变消除了该位点处Fc的N-连接糖基化。突变允许抗体被缀合，达到在重链的295Q和297Q处的最大装载量为4。含有相同N297Q突变的非靶向抗体对照用作非结合同种型对照。
去糖基化对照和MSR1抗体以1mg/mL在PBS pH 7.4中缀合。化合物80或82以超过抗体的10-40倍摩尔过量添加，并且酶促反应通过添加12个单位的细菌转谷氨酰胺酶(Zedira,T1001)/mg抗体来起始并在37℃孵育4-16小时。样品通过SEC纯化到PBS中。缀合物通过ESI-MS进行分析以确定药物-抗体比率(DAR)，并通过疏水相互作用色谱(HIC)进行分析。结果在表25中列出。
表25：每种抗体药物缀合物的收率百分比以及有效载荷与抗体的比率
Figure BDA0003124860200003971
通过疏水相互作用色谱(HIC)对缀合物的表征
为了确定抗体上的连接基-有效载荷的装载量，缀合物在Agilent 1260上使用TSK-NPR丁基HIC柱、使用水中的1M磷酸钾pH 8.5的线性梯度运行超过60min。有效载荷的装载量通过对应于缀合抗体和未缀合抗体的种类的峰面积的积分来确定。
通过ESI-MS对缀合物的表征
色谱分离是在C4柱(0.3X 50mm ACQUITY UPLC BEH蛋白C4,1.7um,300A)上以10min的梯度(分钟：流动相B的百分比；0:5％,2:50％,2.1:26％,6.5:40％,6.6:90％,8.5:90％,8.6:5％,10:5％,10.5:90％,12.5:90％,12.9:5％,15:5％)实现的。流动相A为水中的0.1％甲酸并且流动相B为乙腈中的0.1％甲酸。流量设置为8μL/min。检测器TOF扫描设置为m/z500-4500，其中主要参数如所列出的(毛细管电压3.03.0kV；采样锥80V；在100V的源偏移；源温度150℃；去溶剂化温度400℃；锥气体0L/hr；去溶剂化气体600L/hr)。光谱用MassLynx软件中的MaxEnt函数进行去卷积。
平均药物-抗体比率(DAR)基于去卷积质谱峰强度使用以下等式计算，其中PI＝峰强度，并且D＝单个DAR。
Figure BDA0003124860200003981
实施例36：抗体工程化半胱氨酸去阻断(deblocking)
抗蛋白A(H1xH15140P*/*)和非靶向抗体对照工程化抗体通过使链间二硫键形成重链C103S发生突变而产生。抗体在CHO细胞中表达，并且需要在室温通过添加30倍摩尔过量的还原剂TCEP在PBS中温和还原、随后进行缓冲液交换而在天然轻链半胱氨酸上去阻断。为了改善两条重链间二硫键，抗体在室温与CuSO4或与dhAA以2倍至20倍摩尔过量孵育3小时。还原和氧化的抗体经缓冲液交换到PBS中以去除氧化剂。这个过程产生两个游离的硫醇，它们位于轻链上并且可用于马来酰亚胺缀合。
抗WTA工程化抗体取自文献(Lehar等人,Nature 2015 527,323-328；抗体4497描述于US20140356375和WO2016090038，其内容通过引用以其整体并入本文)，并且具有轻链突变V205C以提供用于马来酰亚胺缀合的2个位点。上文的相同程序用于使工程化半胱氨酸去阻断。
抗体工程化去阻断半胱氨酸与连接基有效载荷的缀合
将DMSO(10mg/ml)中的马来酰亚胺连接基有效载荷(2当量/SH基团，Lehar等人,Nature 527,323-328)或本文件中的连接基有效载荷添加至PBS pH7.5中的还原和氧化抗体(1-10mg/ml)中。反应进行了2小时。缀合物通过尺寸排阻色谱法纯化到PBS中并无菌过滤。蛋白浓度以及有效载荷与抗体的比率通过UV光谱分析确定。尺寸排阻HPLC确定使用的所有缀合物为＞95％单体，并且RP-HPLC确定了存在＜1％的未缀合的连接基有效载荷。所有缀合的抗体的连接基有效载荷值通过HIC进行分析。有效载荷与抗体的比率报告于表26中。
无糖基化抗体(H1H21234N和非靶向抗体对照)的缀合方法
50mM HEPES、150mM NaCl,pH 7.5中的抗体(1-10mg/ml)用1mM二硫苏糖醇在37℃处理30min。在凝胶过滤(G-25，pH 4.5乙酸钠)后，将DMSO(10mg/ml)中的马来酰亚胺连接基有效载荷衍生化合物25(1.2当量/SH基团)添加至还原的抗体，并且用1M HEPES(pH 7.4)将混合物调节至pH 7.0。缀合物使用具有5％甘油的PBS通过尺寸排阻色谱法纯化并无菌过滤。蛋白浓度以及有效载荷与抗体的比率通过UV光谱分析确定。尺寸排阻HPLC确定使用的所有缀合物为＞95％单体。所有缀合的抗体的连接基有效载荷值通过HIC进行分析。有效载荷与抗体的比率报告于表26中。
表26.缀合物的纯度和药物-抗体比率(DAR)。
Figure BDA0003124860200003991
Rifalog(Lehar等人,Nature 2015 527,323-328；WO2016090038)：
Figure BDA0003124860200004001
通过疏水相互作用色谱(HIC)对缀合物的表征
为了确定抗体上的连接基-有效载荷的装载，缀合物在Agilent 1260上使用TSK-NPR丁基HIC柱、使用1M磷酸钾pH 8.5与水的线性梯度运行超过60min。有效载荷的装载量通过对应于缀合抗体和未缀合抗体的种类的峰面积的积分来确定。
通过ESI-MS对缀合物的表征
为了确定抗体(半胱氨酸缀合物)上连接基有效载荷的装载量，使缀合物去糖基化、还原，并通过LC-MS进行分析。
对于该测定，50μg的缀合物用mili-Q水稀释至1mg/mL的最终浓度。10μL的PNG酶F溶液[PNG酶F溶液通过添加150μL的PNG酶F储液(New England Biolabs,目录号P0704L)和850μL的mili-Q水并充分混合来制备]添加到稀释的缀合物溶液中，并且然后在37℃孵育过夜。2.4μL的0.5M TCEP添加到样品中，使得所得物质具有20mM的最终TCEP浓度，并且这然后在50℃孵育30分钟。每种样品的10μL注射到LC-MS(Waters Synat G2-Si)上并且用0.1mL/分钟的具有20％-40％的流动相B的梯度流动相洗脱达25分钟(流动相A：H2O中的0.1％v/vFA；流动相B：乙腈中的0.1％v/v FA)。LC分离在Waters Acquity BEH C18柱(1.0X 50mM,1.7μM)上实现。
使质谱光谱去卷积，并且经鉴定的轻链峰和重链峰代表具有连接基-有效载荷值＝0和1的轻链(L)、具有连接基-有效载荷值＝0、1、2和3的重链(H)。使用下文的等式根据每个种类的强度值来计算同二聚体抗体缀合物的药物-抗体比率(DAR)。
Figure BDA0003124860200004011
实施例37：肉汤最低抑制浓度(MIC)测定2
为了在体外测试本公开内容的利福霉素类似物的效力，开发了肉汤生长抑制测定。对于该测定，金黄色葡萄球菌NRS384在胰胨大豆肉汤(TSB)中生长过夜，然后在新鲜TSB中以1∶50传代培养，并且生长另外2小时。培养物然后经由离心进行沉淀，并在PBS中洗涤两次。培养物然后在TSB中稀释至1x106cfu/mL，并且将100μL的悬浮液/孔以一式三份添加到2mL稀释板中。指示的抗生素(根据本公开内容的类似物或者先前已知的类似物利福平)的稀释系列以1∶1添加，达到1x10-5M的最终起始浓度，然后1∶10稀释达到1x10-6M，随后1∶4稀释以包括2.5x10-7M、6.25x10-8M、1.56x10-8M、3.91x10-9M、9.77x10-10M、2.44x10-10M、6.1x10-11M、1.53x10-11M和3.81x10-12M，达到总计11个点。将板密封并在37℃伴随摇动地孵育24小时，然后将150μL的每种样品添加到96孔微量滴定板中，并且OD600nm在Spectramax i3Minimax 300上读取。
使用的试剂在下文表27中示出。
表27：用于MIC测定的试剂
试剂 供应商 目录号
PBS Gibco 20012-043
金黄色葡萄球菌NRS384 BEI resources NR-46070
胰胨大豆肉汤(TSB) Teknova T1525
稀释板 Greiner Bio one 780261
250mL烧瓶 Thermo Scientific 4116-0250
50mL生物反应器管 TPP 87050
胰胨大豆琼脂(TSA) Teknova T0144
DMSO VWR WN182
试剂储库 VWR 89094-658
Costa 96孔板 Corning 3904
抑制金黄色葡萄球菌生长的最低浓度(最低抑制浓度，MIC)列于表28中。如表28中示出的，根据本公开内容的所有利福霉素类似物在亚微摩尔至纳摩尔浓度有效抑制金黄色葡萄球菌的生长。肉汤MIC实验至少在两个独立实验中进行评估并且中值采集如下，除非另外指示。
表28：肉汤生长抑制测定中抗生素的最低抑制浓度(MIC)。
Figure BDA0003124860200004021
Figure BDA0003124860200004031
实施例38：细胞内灭杀测定2
利福霉素类似物化合物对金黄色葡萄球菌的活性在细胞内“灭杀”测定中进行测试。
使用的试剂在下文表29中示出。
表29：用于细胞内测定的试剂
Figure BDA0003124860200004032
Figure BDA0003124860200004041
THP-1单核细胞系在培养基(RMPI+10％FBS+1％青霉素/链霉素)中生长，然后以1e5个细胞/孔的密度接种在96孔板中，并在感染前使用200nMPMA分化为巨噬细胞三天。金黄色葡萄球菌NRS384的过夜培养物在RPMI中生长，用PBS洗涤两次，并且随后以1e7cfu/mL重悬浮于PBS中。THP-1用温的培养基(不具有FBS的RMPI)洗涤以去除青霉素/链霉素，并且然后用金黄色葡萄球菌悬浮液以10∶1(金黄色葡萄球菌：巨噬细胞)的感染复数进行感染。板以300xg旋转5分钟，以使细菌的粘附同步进行，然后在37℃孵育2小时。自由漂浮的细菌通过用温的培养基洗涤2x来去除，并且剩余的细胞外金黄色葡萄球菌通过添加含有庆大霉素(50ug/mL)的培养基来灭杀。在1小时后，将培养基抽吸并将指示的化合物以从1e-6M开始的稀释系列以1∶5稀释达到6个点(1.0x10-6M、2.0x10-7M、4.0x10-8M、8.0x10-9M、1.6x10-9M和3.2x10-10M)添加到感染的巨噬细胞中。化合物添加到含有50μg/mL庆大霉素的培养基中以防止金黄色葡萄球菌的细胞外生长。在2小时后，板用不具有FBS的温的RPMI洗涤2x，并且100μl的THP-1裂解缓冲液(PBS中的0.1％Triton)添加到每个孔中。金黄色葡萄球菌生存通过系列稀释和铺板到TSA上的菌落形成单位进行计数。
细胞内灭杀测定的结果示于表30中。最低抑制浓度(MIC)对应于导致细胞内金黄色葡萄球菌低于检测限(50cfu/mL)的每种化合物的最低浓度。指示的细胞内MIC值代表至少两个独立实验的中值，除非另有指示。
表30：使用THP细胞的细胞内灭杀测定中的本发明的抗生素的最低抑制浓度(MIC)
Figure BDA0003124860200004042
Figure BDA0003124860200004051
Figure BDA0003124860200004061
如表30展示的，根据本公开内容的利福霉素类似物(和利福平)的细胞内灭杀MIC的范围为＞1e-6M至4e-8M，其中8种新型利福霉素类似物显示出有效的细胞内灭杀活性。
实施例39：细胞内金黄色葡萄球菌抗体-药物缀合物灭杀测定2(抗WTA和抗蛋白A)
使用的试剂在下文表31中示出。
表31：用于细胞内测定的试剂
试剂 供应商 目录号
RPMI Gibco 11835-030
PBS Gibco 20012-043
Triton X-100 Sigma TX1568-1
RPMI Gibco 11875-093
FBS Gibco 10082-147
PMA Sigma P8139
Costa 48孔板 Coming 3548
TSA板 Teknova T0144
青霉素/链霉素 Gibco 15140-122
稀释板 Greiner Bio one 780271-FD
庆大霉素 BioWhittaker 17-519Z
本公开内容的利福霉素类似物化合物与抗WTA抗体(抗WTA mAb，hIgG1)、抗蛋白A抗体(抗蛋白A mAb，hIgG1**C103S)或对照抗体(非靶向同种型对照，hIgG1**)缀合。
为了在体外测试本公开内容的抗金黄色葡萄球菌抗体-药物缀合物(ADC)的效力，开发了金黄色葡萄球菌细胞内灭杀测定。对于该测定，THP-1单核细胞系在培养基(RMPI+10％FBS+1％青霉素/链霉素)中生长，然后以1e5个细胞/孔的密度接种在48孔板中，并在感染前使用200nM PMA分化为巨噬细胞三天。金黄色葡萄球菌NRS384的过夜培养物在RPMI中生长，用PBS洗涤两次，并且随后以1e7 cfu/mL重悬浮于PBS中。金黄色葡萄球菌悬浮液与指示的抗金黄色葡萄球菌ADC以从10ug/mL开始的稀释系列以1:3稀释达到6个点(10μg/mL、3.3μg/mL、1.1μg/mL、0.37μg/mL、0.12μg/mL和0.041μg/mL最终浓度)预孵育，并且同种型ADC仅在最高浓度进行测试。THP-1用温的培养基(不具有FBS的RMPI)洗涤以去除青霉素/链霉素，并且然后用预孵育的金黄色葡萄球菌悬浮液和ADC、裸抗体或无mAb以10∶1(金黄色葡萄球菌：巨噬细胞)的感染复数进行感染。板以300xg旋转5分钟，以使细菌的粘附同步进行，然后在37℃孵育2小时。自由漂浮的细菌通过用温的培养基洗涤2x来去除，并且剩余的细胞外金黄色葡萄球菌通过添加含有庆大霉素(50μg/mL)的培养基来灭杀。在24小时后，将培养基抽吸，并且孔用不具有FBS的温的RPMI洗涤2x，并且将100μl的THP-1裂解缓冲液(PBS中的0.1％Triton)和150μl的PBS添加到每个孔中。金黄色葡萄球菌生存通过系列稀释和铺板到TSA上的菌落形成单位进行计数。
细胞内灭杀测定的结果在图5和表32中示出，其中检测限为50cfu/mL。
表32:使用THP细胞的细胞内灭杀测定中的本公开内容的抗金黄色葡萄球菌ADC的菌落形成单位
Figure BDA0003124860200004071
Figure BDA0003124860200004081
对照ADC(非靶向同种型对照缀合物)是人类IgG1同种型并因此能够与金黄色葡萄球菌上的蛋白A结合，与未治疗的对照相比，对照ADC(非靶向同种型对照缀合物)使细胞内金黄色葡萄球菌生存力降低了～1个对数或更少。释放利福平有效载荷的抗WTA mAb-21降低了细菌负荷，这与对照ADC相似。递送具有有效细胞内灭杀活性的有效载荷的抗金黄色葡萄球菌ADC(抗WTA mAb-25、抗蛋白A mAb-36、抗WTA mAb-Rifalog和抗WTA mAb-36)在降低细胞内金黄色葡萄球菌方面比利福平缀合物(抗WTA mAb-21)更有效。在多个实验中，抗WTAmAb-36比抗WTA mAb-Rifalog更能持续降低金黄色葡萄球菌生存力。
实施例40：细胞内金黄色葡萄球菌抗体-药物缀合物灭杀测定3(MSR1)使用的试剂在下文表33中示出。
表33：用于细胞内测定的试剂
试剂 供应商 目录号
RPMI Gibco 11835-030
PBS Gibco 20012-043
Triton X-100 Sigma TX1568-1
RPMI Gibco 11875-093
FBS Gibco 10082-147
PMA Sigma P8139
Costa 48孔板 Coming 3548
TSA板 Teknova T0144
青霉素/链霉素 Gibco 15140-122
稀释板 Greiner Bio one 780271-FD
庆大霉素 BioWhittaker 17-519Z
为了在体外测试本公开内容的抗MSR1 Ab-抗生素ncADC的效力，使用了细胞内金黄色葡萄球菌灭杀测定。对于该测定，THP-1单核细胞系在包括含有10％FBS和1％青霉素/链霉素的RPMI的培养基中生长，然后以1x105个细胞/孔的密度接种在48孔板中，并在感染前使用200nM的佛波醇肉豆蔻酸酯乙酸酯(PMA)分化为巨噬细胞三天。金黄色葡萄球菌MRSA菌株NRS384的过夜培养物在RPMI中生长，用PBS洗涤两次，并且随后以1x107cfu/mL重悬浮于PBS中。THP-1细胞用温的培养基(不具有FBS的RPMI)洗涤以去除青霉素/链霉素，并且然后用金黄色葡萄球菌悬浮液以10∶1(金黄色葡萄球菌：巨噬细胞)的感染复数进行感染。板以300xg旋转5分钟，以使细菌的粘附同步进行，然后在37℃孵育2小时。自由漂浮的细菌通过用温的培养基洗涤两次来去除，并且剩余的细胞外金黄色葡萄球菌通过添加含有50μg/mL庆大霉素的培养基来灭杀。在1小时后，将培养基抽吸，并且不同剂量(10μg/mL、3.3μg/mL、1.1μg/mL、0.4μg/mL、0.1μg/mL和0.04μg/mL)的抗MSR1 Ab-抗生素ncADC(H1H21234N-N297Q-25和H1H21234N-N297Q-80)和10μg/mL的同种型对照-抗生素ncADC(同种型对照-N297Q-25和同种型对照-N297Q-80)添加到培养基中的感染的巨噬细胞，所述培养基含有50μg/mL庆大霉素以防止金黄色葡萄球菌的细胞外生长。还包括了不具有任何ncADC的样品用作参考。在24小时后，板用不具有FBS的温的RPMI洗涤两次，并且然后添加100μL的在PBS中的0.1％Triton X-100，并孵育10分钟以裂解THP-1。金黄色葡萄球菌生存通过在PBS中系列稀释并铺板在胰胨大豆琼脂板上的菌落形成单位来计数。
结果总结在下文表34中。
表34:抗MSR1Ab-抗生素的平均菌落形成单位
Figure BDA0003124860200004101
Figure BDA0003124860200004111
如表34中示出的，抗MSR1 Ab-抗生素ncADC(H1H21234N-N297Q-25和H1H21234N-N297Q-80)展示出与未处理的对照相比在体外以剂量依赖方式降低巨噬细胞中的细胞内金黄色葡萄球菌的能力。用10μg/mL的同种型对照-抗生素ncADC(同种型对照-N297Q-25和同种型对照-N297Q-80处理的巨噬细胞含有细胞内金黄色葡萄球菌，其水平与未处理的对照相似。这些数据证明，根据本公开内容的抗MSR1 Ab-抗生素ncADC可以用于有效灭杀驻留在巨噬细胞储库内的病原体。
实施例41：金黄色葡萄球菌IV播散性感染小鼠模型(4天模型)
为了在体内测试本公开内容的抗金黄色葡萄球菌Ab-抗生素ncADC单独和与标准护理MRSA抗生素万古霉素联合的效力，使用了四天静脉内播散性感染模型。金黄色葡萄球菌MSRA菌株NRS384在胰胨大豆肉汤(TSB)中生长过夜，并传代培养至对数中期。细菌然后用PBS洗涤两次，并以1.5x10^8cfu/mL的浓度重悬浮于PBS中。然后用100μL的细菌悬浮液通过尾静脉对Balb/c小鼠进行静脉内感染，最终感染剂量为1.5x10^7cfu/小鼠。在研究中，小鼠用以下治疗：单独的万古霉素、同种型对照Ab-抗生素ncADC(同种型对照Ab-抗生素ncADC-Rifalog)(为与Rifalog缀合的抗WTA抗体)、抗WTA抗体、抗WTA Ab-抗生素ncADC(抗WTA Ab-抗生素ncADC-36)(为与根据本公开内容的化合物36缀合的抗WTA抗体)、第二种抗WTA Ab-抗生素ncADC(抗WTA Ab-抗生素ncADC-25)(为与根据本公开内容的化合物25缀合的抗WTA抗体)或第三种抗WTA Ab-抗生素ncADC(抗WTA Ab-抗生素ncADC-Rifalog)、同种型对照Ab-抗生素ncADC(同种型对照Ab-抗生素ncADC-Rifalog)加万古霉素、抗WTA抗体加万古霉素、抗WTA Ab-抗生素ncADC(抗WTA Ab-抗生素ncADC-36)、第二种抗WTA Ab-抗生素ncADC(抗WTA Ab-抗生素ncADC-25)加万古霉素或第三种抗WTA Ab-抗生素ncADC(抗WTA Ab-抗生素ncADC-Rifalog)加万古霉素。对于包括万古霉素的治疗组，从感染后1天至3天，每天两次以110mg/kg皮下给药。对于包括抗体和ncADC的治疗组，它们在感染后2天以1mg/kg皮下施用。未治疗的感染对照以及未感染的对照被包括在研究中。在整个感染过程中，监测小鼠的体重减轻和身体状况评分。在感染后4天，使小鼠安乐死，并且对金黄色葡萄球菌肾负荷进行定量。对于定量，将肾匀浆，随后通过在PBS中系列稀释并铺板到胰胨大豆琼脂板上进行菌落形成单位的计数。感染方案呈现在图4中。数据在表35中呈现为小鼠中的中值金黄色葡萄球菌肾负荷。
表35：1mg/kg抗金黄色葡萄球菌Ab-抗生素ncADC单独和与万古霉素联合治疗的小鼠中的中值金黄色葡萄球菌肾负荷(4天感染模型)。
Figure BDA0003124860200004121
检测限＝250个菌落形成单位(cfu)
如表35中示出的，用金黄色葡萄球菌MRSA菌株NRS384静脉内感染在肾中导致3.63E+07cfu/一对肾的高的中值细菌负荷。作为单一疗法，抗WTA Ab抗生素ncADC-25和抗WTA Ab抗生素ncADC-36使肾细菌负荷降低～2个对数。当所测试的抗WTA Ab抗生素ncADC与万古霉素联合施用时，与万古霉素治疗的对照相比，所有治疗组的肾细菌负荷进一步降低～3个对数。
实施例42：金黄色葡萄球菌IV晚期播散性感染小鼠模型(8天模型)
为了在体内测试本公开内容的抗金黄色葡萄球菌Ab-抗生素ncADC在与标准护理万古霉素的联合疗法中的效力，进行了两种不同的8天静脉内播散性感染模型。在该模型中，治疗开始于已经形成脓肿的晚期感染阶段。金黄色葡萄球菌MSRA菌株NRS384在胰胨大豆肉汤(TSB)中生长过夜，并传代培养至对数中期。细菌然后用PBS洗涤两次，并以1.5x10^8cfu/mL的浓度重悬浮于PBS中。然后用100μL的细菌悬浮液通过尾静脉对Balb/c小鼠进行静脉内感染，最终感染剂量为1.5x10^7cfu/小鼠。在第一项研究中，小鼠用以下治疗：单独的万古霉素、同种型对照抗体加万古霉素、同种型对照Ab-ncADC(同种型对照-36)加万古霉素、抗WTA抗体加万古霉素、抗WTA Ab-抗生素ncADC(抗WTA Ab-抗生素ncADC-36)或不同的抗WTA Ab-抗生素ncADC(抗WTA Ab-抗生素ncADC-25)加万古霉素。小鼠还用以下治疗：单独的万古霉素、同种型对照抗体加万古霉素、同种型对照Ab-抗生素ncADC(同种型对照Ab-抗生素ncADC-36)加万古霉素、抗蛋白A抗体加万古霉素，或者抗蛋白A Ab-抗生素ncADC(抗蛋白A Ab-抗生素ncADC-36)。
在第二项研究中，小鼠用以下治疗：单独的万古霉素、同种型对照抗体加万古霉素、同种型对照Ab-抗生素ncADC(同种型对照Ab-抗生素ncADC-36)加万古霉素、第二种同种型对照Ab-抗生素ncADC(同种型对照Ab-抗生素ncADC-25)加万古霉素、第三种同种型对照Ab-抗生素ncADC(同种型对照Ab-抗生素ncADC-21)加万古霉素、抗WTA抗体加万古霉素、抗WTA Ab-抗生素ncADC(抗WTA Ab-抗生素ncADC-36)、第二种抗WTA Ab-抗生素ncADC(抗WTAAb-抗生素ncADC-25)加万古霉素，或者第三种抗WTA Ab-抗生素ncADC(抗WTA Ab-抗生素ncADC-21)加万古霉素。在所有研究中，对于包括万古霉素的治疗组，从感染后3天至7天，每天两次以110mg/kg皮下给药。对于包括抗体和ncADC的治疗组，在感染后4天，第一项研究以2mg/kg皮下施用，或者第二项研究以5mg/kg皮下施用。未治疗的感染对照以及未感染的对照被包括在每项研究中。在整个感染过程中，监测小鼠的体重减轻和身体状况评分。在感染后8天，使小鼠安乐死，并且对金黄色葡萄球菌肾负荷进行定量。对于定量，将肾匀浆，随后通过在PBS中系列稀释并铺板到胰胨大豆琼脂板上进行菌落形成单位的计数。数据点代表来自经测试的个体小鼠的肾负荷。
表36：用2mg/kg的同种型对照和抗WTAAb-抗生素ncADC与万古霉素联合治疗的小鼠中的平均金黄色葡萄球菌肾负荷
Figure BDA0003124860200004141
对于第一项研究，如图6和表36中示出的，用金黄色葡萄球菌MRSA菌株NRS384静脉内感染在肾中导致4.63E+08cfu/一对肾的高的中值细菌负荷。单独的万古霉素治疗使金黄色葡萄球菌肾负荷降低1-2个对数。与万古霉素治疗的小鼠相比，万古霉素与同种型对照mAb、抗WTA单克隆mAb和同种型对照Ab-抗生素ncADC-36的联合治疗未导致肾细菌负荷的进一步降低。当抗WTA Ab-抗生素ncADC-36和抗WTA Ab-抗生素ncADC-25与万古霉素联合施用时，中值肾细菌负荷分别进一步降低约～100倍和～10,000倍。
表37：用2mg/kg的同种型对照和抗蛋白AAb-抗生素ncADC与万古霉素联合治疗的小鼠中的平均金黄色葡萄球菌肾负荷
Figure BDA0003124860200004151
同样在第一项研究中，如图7和表37中示出的，用金黄色葡萄球菌MRSA菌株NRS384静脉内感染在肾中导致4.63E+08cfu/一对肾的高的中值细菌负荷。单独的万古霉素治疗使金黄色葡萄球菌肾细菌负荷降低1-2个对数。与万古霉素治疗的小鼠相比，万古霉素与同种型对照mAb和同种型对照Ab-抗生素ncADC-36的联合治疗未导致肾细菌负荷的进一步降低。当抗蛋白A mAb和抗蛋白A Ab-抗生素ncADC-36与万古霉素联合施用时，中值肾细菌负荷分别进一步降低约～100倍和～1,000倍。
表38：用5mg/kg同种型对照和抗WTA Ab-抗生素ncADC与万古霉素联合治疗的小鼠中的平均金黄色葡萄球菌肾负荷
Figure BDA0003124860200004152
Figure BDA0003124860200004161
对于第二项研究，如图8和表38中示出的，用金黄色葡萄球菌MRSA菌株NRS384静脉内感染在肾中导致2.50E+07cfu/一对肾的高的中值细菌负荷。单独的万古霉素治疗使金黄色葡萄球菌肾细菌负荷降低1-2个对数。与万古霉素治疗的小鼠相比，用万古霉素和同种型对照mAb、抗WTA mAb、同种型对照Ab-抗生素ncADC、抗WTA Ab-抗生素ncADC-36或抗WTA-Ab-抗生素ncADC-21(利福平ADC)的联合治疗没有导致肾细菌负荷的进一步降低。然而，当所测试的抗WTA Ab-抗生素ncADC-25与万古霉素联合施用时，中值肾细菌负荷进一步降低～100倍。
实施例43：抗体工程化半胱氨酸去阻断
抗蛋白A(H1xH15140P*/*)和非靶向抗体对照工程化抗体通过使链间二硫键形成重链C103S发生突变而产生。抗体在CHO细胞中表达，并且需要在室温通过添加30倍摩尔过量的还原剂TCEP在PBS中温和还原、随后进行缓冲液交换而在天然轻链半胱氨酸上去阻断。为了改善两条重链间二硫键，抗体在室温与CuSO4或与dhAA以2倍至20倍摩尔过量孵育3小时。还原和氧化的抗体经缓冲液交换到PBS中以去除氧化剂。这个过程产生两个游离的硫醇，它们位于轻链上并且可用于马来酰亚胺缀合。
抗WTA工程化抗体取自文献(Lehar等人,Nature 2015 527,323-328；抗体4497描述于US20140356375和WO2016090038，其内容通过引用以其整体并入本文)，并且具有轻链突变V205C以提供用于马来酰亚胺缀合的2个位点。上文的相同程序用于使工程化半胱氨酸去阻断。
抗体工程化去阻断半胱氨酸与连接基有效载荷的缀合
将DMSO(10mg/ml)中的马来酰亚胺连接基有效载荷(2当量/SH基团，Lehar等人,Nature 527,323-328)或本文件中的连接基有效载荷添加至PBS pH7.5中的还原和氧化抗体(1-10mg/ml)中。反应进行了2小时。缀合物通过尺寸排阻色谱法纯化到PBS中并无菌过滤。蛋白浓度以及有效载荷与抗体的比率通过UV光谱分析确定。尺寸排阻HPLC确定使用的所有缀合物为＞95％单体，并且RP-HPLC确定了存在＜1％的未缀合的连接基有效载荷。所有缀合的抗体的连接基有效载荷值通过HIC进行分析。有效载荷与抗体的比率报告于表39中。
无糖基化抗体(H1H21234N和非靶向抗体对照2)的缀合方法
50mM HEPES、150mM NaCl、pH 7.5中的抗体(1-10mg/ml)用1mM二硫苏糖醇在37℃处理30min。在凝胶过滤(G-25，pH 4.5乙酸钠)后，将DMSO(10mg/ml)中的马来酰亚胺连接基有效载荷衍生化合物25(Rifanalog M2767)(1.2当量/SH基团)添加至还原的抗体，并且用1MHEPES(pH 7.4)将混合物调节至pH 7.0。缀合物使用具有5％甘油的PBS通过尺寸排阻色谱法纯化并无菌过滤。蛋白浓度以及有效载荷与抗体的比率通过UV光谱分析确定。尺寸排阻HPLC确定使用的所有缀合物为＞95％单体。所有缀合的抗体的连接基有效载荷值通过HIC进行分析。有效载荷与抗体的比率报告于表39中。
表39.缀合物的纯度和药物-抗体比率(DAR)。
Figure BDA0003124860200004171
通过疏水相互作用色谱(HIC)对缀合物的表征
为了确定抗体上的连接基-有效载荷的装载，缀合物在Agilent 1260上使用TSK-NPR丁基HIC柱、使用1M磷酸钾pH 8.5与水的线性梯度运行达60min。有效载荷的装载通过对应于缀合抗体和未缀合抗体的种类的峰面积的积分来确定。
通过ESI-MS对缀合物的表征
为了确定抗体(半胱氨酸缀合物)上连接基有效载荷的装载量，使缀合物去糖基化、还原，并通过LC-MS进行分析。
对于该测定，50μg的缀合物用mili-Q水稀释至1mg/mL的最终浓度。10μL的PNG酶F溶液[PNG酶F溶液通过添加150μL的PNG酶F储液(New England Biolabs,目录号P0704L)和850μL的mili-Q水并充分混合来制备]添加到稀释的缀合物溶液中，并且然后在37℃孵育过夜。2.4μL的0.5M TCEP添加到样品中，使得所得物质具有20mM的最终TCEP浓度，并且这然后在50℃孵育30分钟。10μL的每种样品注射到LC-MS(Waters Synat G2-Si)上并且用0.1mL/分钟的具有20％-40％的流动相B的梯度流动相洗脱经过25分钟(流动相A：H2O中的0.1％v/v FA；流动相B：乙腈中的0.1％v/v FA)。LC分离在Waters Acquity BEH C18柱(1.0X 50mM,1.7μM)上实现。
使质谱光谱去卷积，并且经鉴定的轻链峰和重链峰代表具有连接基-有效载荷值＝0和1的轻链(L)、具有连接基-有效载荷值＝0、1、2和3的重链(H)。使用下文的等式根据每个种类的强度值来计算同二聚体抗体缀合物的药物-抗体比率(DAR)。
Figure BDA0003124860200004181
由于在不脱离本公开内容的范围和精神的情况下可以在上文描述的主题中进行各种改变，因此包含在上文的描述中的或在所附权利要求书中定义的所有主题旨在被解释为对本公开内容的描述和说明。根据上文的教导，本公开内容的许多修改和变化是可能的。因此，本文的描述旨在涵盖落入所附权利要求书的范围内的所有这样的可选方案、修改和变化。
本文引用的所有专利、申请、出版物、测试方法、文献和其他材料在此通过引用以其整体并入，如同在本说明书中实际存在一样。
序列表
<110> 瑞泽恩制药公司
<120> 利福霉素类似物及其抗体-药物缀合物
<130> 250298.000145
<140>
<141>
<150> 62/844,860
<151> 2019-05-08
<150> 62/783,506
<151> 2018-12-21
<160> 690
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 363
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 1
caggtccaat tggtacagtc tggggctgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtg 60
tcctgcaagg tttccggata caccctcact gaattatcca tacactgggt gcgccaggtt 120
cctggaaaag gacttgagtg gatgggaggt tttgatcctg aagagggtga aacaatcttc 180
gcacaggagt tccgggacag agtcaccttg accgaggaca catctccaga cacagcctac 240
atggagttga gcagcctgaa atctgaggac gcggccgtat attactgtac aaccccccga 300
tattgtaata atggtatatg ttatgactac tggggccagg gaaccctggt caccgtctct 360
tca 363
<210> 2
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 2
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Val Ser Gly Tyr Thr Leu Thr Glu Leu
20 25 30
Ser Ile His Trp Val Arg Gln Val Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Gly Phe Asp Pro Glu Glu Gly Glu Thr Ile Phe Ala Gln Glu Phe
50 55 60
Arg Asp Arg Val Thr Leu Thr Glu Asp Thr Ser Pro Asp Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Lys Ser Glu Asp Ala Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Thr Pro Arg Tyr Cys Asn Asn Gly Ile Cys Tyr Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 3
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 3
ggatacaccc tcactgaatt atcc 24
<210> 4
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 4
Gly Tyr Thr Leu Thr Glu Leu Ser
1 5
<210> 5
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 5
tttgatcctg aagagggtga aaca 24
<210> 6
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 6
Phe Asp Pro Glu Glu Gly Glu Thr
1 5
<210> 7
<211> 42
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 7
acaacccccc gatattgtaa taatggtata tgttatgact ac 42
<210> 8
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 8
Thr Thr Pro Arg Tyr Cys Asn Asn Gly Ile Cys Tyr Asp Tyr
1 5 10
<210> 9
<211> 327
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 9
gacatccaga tgacccagtc gccttcctcc ctgtctgcat ctgtgggaga cagagtcacc 60
atcacttgcc gggcaagtca gagcattagc aactatttaa attggtatca gcagaaacca 120
gggaaagccc ctaagctcct gatctatact gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180
aggttcagtg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag tcttcaaact 240
gaagattttg caacttacta ttgtcaacag agttacagta attttccgat caccttcggc 300
caagggacac gactggagat taaacga 327
<210> 10
<211> 109
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 10
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asn Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Thr Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Thr
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Asn Phe Pro
85 90 95
Ile Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys Arg
100 105
<210> 11
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 11
cagagcatta gcaactat 18
<210> 12
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 12
Gln Ser Ile Ser Asn Tyr
1 5
<210> 13
<211> 9
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 13
actgcatcc 9
<210> 14
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 14
Thr Ala Ser
1
<210> 15
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 15
caacagagtt acagtaattt tccgatcacc 30
<210> 16
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 16
Gln Gln Ser Tyr Ser Asn Phe Pro Ile Thr
1 5 10
<210> 17
<211> 360
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 17
gtgcagctgg tggagtctgg gggaggcttg gtccagcctg gagggtccct gagactctcc 60
tgtgcagcct ctggattcac cttcagtgac cactacatgg actgggtccg tcaggctcct 120
gggaaggggc tggagtgggt tggccgaacc agaaacaaag ctaatagtca caccacagaa 180
tacgccgcgt ctgtgagtgg cagattcacc atctcaagag atgattcaaa gaactcattg 240
tatctgcaaa tgaacagcct gaaaaccgag gacacggccg tgtattattg cactagagcc 300
ggtataattg gaaccctctt tgactactgg ggccagggaa ccctggtcac cgtctcctca 360
<210> 18
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 18
Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser
1 5 10 15
Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp His Tyr
20 25 30
Met Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Gly
35 40 45
Arg Thr Arg Asn Lys Ala Asn Ser His Thr Thr Glu Tyr Ala Ala Ser
50 55 60
Val Ser Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser Leu
65 70 75 80
Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr
85 90 95
Cys Thr Arg Ala Gly Ile Ile Gly Thr Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 19
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 19
ggattcacct tcagtgacca ctac 24
<210> 20
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 20
Gly Phe Thr Phe Ser Asp His Tyr
1 5
<210> 21
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 21
accagaaaca aagctaatag tcacaccaca 30
<210> 22
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 22
Thr Arg Asn Lys Ala Asn Ser His Thr Thr
1 5 10
<210> 23
<211> 36
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 23
actagagccg gtataattgg aaccctcttt gactac 36
<210> 24
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 24
Thr Arg Ala Gly Ile Ile Gly Thr Leu Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 25
<211> 327
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 25
gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgcc gggcaagtca gagcattagc agctatttaa attggtatca gcagaaacca 120
gggaaagccc ctaagctcct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccgtca 180
aggttcagtg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag tctgcaacct 240
gaagattttg caacttacta ctgtcaacag agttacagta cccctccgat caccttcggc 300
caagggacac gactggagat taaacga 327
<210> 26
<211> 109
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 26
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Pro
85 90 95
Ile Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys Arg
100 105
<210> 27
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 27
cagagcatta gcagctat 18
<210> 28
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 28
Gln Ser Ile Ser Ser Tyr
1 5
<210> 29
<211> 9
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 29
gctgcatcc 9
<210> 30
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 30
Ala Ala Ser
1
<210> 31
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 31
caacagagtt acagtacccc tccgatcacc 30
<210> 32
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 32
Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Pro Ile Thr
1 5 10
<210> 33
<211> 363
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 33
gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtccagc ctggagggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt gaccactata tggactgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggaatg ggttggccgt actcgaaaca aagctaatag tcacaccaca 180
gaatacaccg cgtctgtgac aggcagattc accatctcaa gagatgattc aagaaactca 240
ctatatctgc aaatgaacag cctgaaaacc gaggacacgg ccgtatatta ctgtgttaga 300
gccggtataa ttggaaccct ctttgactat tggggccagg gaaccctggt caccgtctcc 360
tca 363
<210> 34
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 34
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp His
20 25 30
Tyr Met Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Gly Arg Thr Arg Asn Lys Ala Asn Ser His Thr Thr Glu Tyr Thr Ala
50 55 60
Ser Val Thr Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Arg Asn Ser
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Val Arg Ala Gly Ile Ile Gly Thr Leu Phe Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 35
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 35
ggattcacct tcagtgacca ctat 24
<210> 36
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 36
Gly Phe Thr Phe Ser Asp His Tyr
1 5
<210> 37
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 37
actcgaaaca aagctaatag tcacaccaca 30
<210> 38
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 38
Thr Arg Asn Lys Ala Asn Ser His Thr Thr
1 5 10
<210> 39
<211> 36
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 39
gttagagccg gtataattgg aaccctcttt gactat 36
<210> 40
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 40
Val Arg Ala Gly Ile Ile Gly Thr Leu Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 41
<211> 327
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 41
gacatccaga tgacccagtt tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgcc gggcaagtca gagcattagc agctttttaa attggtttca gcagaaacca 120
gggaaagccc ctaagttcct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180
aggttcagtg gcagtgggtc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag tctacaacct 240
gaagattttg caacttacta ctgtcaacag agttacagtt cccctccgat caccttcggc 300
caagggacac gactggagat taaacga 327
<210> 42
<211> 109
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 42
Asp Ile Gln Met Thr Gln Phe Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Phe
20 25 30
Leu Asn Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Phe Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Ser Pro Pro
85 90 95
Ile Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys Arg
100 105
<210> 43
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 43
cagagcatta gcagcttt 18
<210> 44
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 44
Gln Ser Ile Ser Ser Phe
1 5
<210> 45
<211> 9
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 45
gctgcatcc 9
<210> 46
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 46
Ala Ala Ser
1
<210> 47
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 47
caacagagtt acagttcccc tccgatcacc 30
<210> 48
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 48
Gln Gln Ser Tyr Ser Ser Pro Pro Ile Thr
1 5 10
<210> 49
<211> 357
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 49
caggtgcagc tgcaggagtc gggcccagga ctggtgaagc cttcggagac cctgtccctc 60
acctgcactg tcactggtgg ctccatcagt aggaactact ggagttggat ccggcagccc 120
ccagggaagg gactggaatg gattggatat atctattaca gtgggagtat cgactacaat 180
ccctccctca agagtcgagt caccatatca gtagacacgt ccaagaacca gttctccctg 240
aagctgagtt ctatgaccgc tgcggacacg gccgtatact actgtgcgag agatcggtgg 300
aactggaaat acggtatgga cgtctggggc caagggacca cggtcatcgt ctcgtca 357
<210> 50
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 50
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Thr Gly Gly Ser Ile Ser Arg Asn
20 25 30
Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Ile Asp Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu
65 70 75 80
Lys Leu Ser Ser Met Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Asp Arg Trp Asn Trp Lys Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Thr Val Ile Val Ser Ser
115
<210> 51
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 51
ggtggctcca tcagtaggaa ctac 24
<210> 52
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 52
Gly Gly Ser Ile Ser Arg Asn Tyr
1 5
<210> 53
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 53
atctattaca gtgggagtat c 21
<210> 54
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 54
Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Ile
1 5
<210> 55
<211> 39
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 55
gcgagagatc ggtggaactg gaaatacggt atggacgtc 39
<210> 56
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 56
Ala Arg Asp Arg Trp Asn Trp Lys Tyr Gly Met Asp Val
1 5 10
<210> 57
<211> 327
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 57
gaaattgtgt tgacgcagtc tccaggcacc ctgtctttgt ctccagggga aagagccacc 60
ctctcctgca gggccagtca gactgttaga aacaactact tagcctggta ccaccagaaa 120
cctggccagg ctcccaggct cctcatctat ggtgcatcca gcagggccac tggcatccca 180
gacaggttca gtggcagtgg gtctgggaca gacttcactc tcaccatcag cagactggag 240
cctgaagatt ttacagtgta ttactgtcac cagtatggta actcaccttg gacgttcggc 300
caagggacca aaatggaaat caaacga 327
<210> 58
<211> 109
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 58
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Thr Val Arg Asn Asn
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr His Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu
65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Thr Val Tyr Tyr Cys His Gln Tyr Gly Asn Ser Pro
85 90 95
Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Met Glu Ile Lys Arg
100 105
<210> 59
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 59
cagactgtta gaaacaacta c 21
<210> 60
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 60
Gln Thr Val Arg Asn Asn Tyr
1 5
<210> 61
<211> 9
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 61
ggtgcatcc 9
<210> 62
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 62
Gly Ala Ser
1
<210> 63
<211> 27
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 63
caccagtatg gtaactcacc ttggacg 27
<210> 64
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 64
His Gln Tyr Gly Asn Ser Pro Trp Thr
1 5
<210> 65
<211> 363
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 65
gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtccagc ctggagggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt gaccactaca tggactgggt ccgccaggct 120
cctgggaagg ggctggagtg ggttggccga actagaaaca aagctaatag ttacaccaca 180
gaatacgccg cgtctgtgag tggcagattc accatctcaa gagatgattc aaagaactca 240
ttatatctgc aaatgaacag cctgaaaacc gaggacacgg ccgtgtatta ttgcactaga 300
gccggtataa ttggaaccct ctttgactac tggggccagg gaaccctggt caccgtctcc 360
tca 363
<210> 66
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 66
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp His
20 25 30
Tyr Met Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Gly Arg Thr Arg Asn Lys Ala Asn Ser Tyr Thr Thr Glu Tyr Ala Ala
50 55 60
Ser Val Ser Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Thr Arg Ala Gly Ile Ile Gly Thr Leu Phe Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 67
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 67
ggattcacct tcagtgacca ctac 24
<210> 68
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 68
Gly Phe Thr Phe Ser Asp His Tyr
1 5
<210> 69
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 69
actagaaaca aagctaatag ttacaccaca 30
<210> 70
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 70
Thr Arg Asn Lys Ala Asn Ser Tyr Thr Thr
1 5 10
<210> 71
<211> 36
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 71
actagagccg gtataattgg aaccctcttt gactac 36
<210> 72
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 72
Thr Arg Ala Gly Ile Ile Gly Thr Leu Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 73
<211> 327
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 73
gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgcc gggcaagtca gatcattggt agatatttaa attggtttca gcagaaacca 120
gggaaagtcc ctaagctcct gatctatgct gcatccagtt tgcaacgtgg ggtcccatca 180
aggttcagtg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag tctgcaacct 240
gaagattttg caacttacta ctgtcaacag agttacaata cccctccgat caccttcggc 300
caagggacac gactggagat taaacga 327
<210> 74
<211> 109
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 74
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ile Ile Gly Arg Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Val Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Arg Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Asn Thr Pro Pro
85 90 95
Ile Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys Arg
100 105
<210> 75
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 75
cagatcattg gtagatat 18
<210> 76
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 76
Gln Ile Ile Gly Arg Tyr
1 5
<210> 77
<211> 9
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 77
gctgcatcc 9
<210> 78
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 78
Ala Ala Ser
1
<210> 79
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 79
caacagagtt acaatacccc tccgatcacc 30
<210> 80
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 80
Gln Gln Ser Tyr Asn Thr Pro Pro Ile Thr
1 5 10
<210> 81
<211> 363
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 81
caggtccagc tggtgcagtc tggggctgag gtgagggagc ctggggcctc agtgaagctc 60
tcctgcaagg tttccggata caccctcact gaattatcca tccactgggt gcgacaggct 120
cctggaaaag gacttgagtg gatgggaggt tttgatcctg aagagggtga aacagtctac 180
gcacagaagt tccggggcag agtcaccctg accgaggaca taagtccaga cacggcctac 240
atggagctga gcagcctgac ctctgaggac acggccgtat attattgtgc aaccccccgc 300
tattgtaata atggtatatg ttatgactac tggggccagg gaaccctaat caccgtctcc 360
tca 363
<210> 82
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 82
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Arg Glu Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Val Ser Gly Tyr Thr Leu Thr Glu Leu
20 25 30
Ser Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Gly Phe Asp Pro Glu Glu Gly Glu Thr Val Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Arg Gly Arg Val Thr Leu Thr Glu Asp Ile Ser Pro Asp Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Thr Pro Arg Tyr Cys Asn Asn Gly Ile Cys Tyr Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Ile Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 83
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 83
ggatacaccc tcactgaatt atcc 24
<210> 84
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 84
Gly Tyr Thr Leu Thr Glu Leu Ser
1 5
<210> 85
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 85
tttgatcctg aagagggtga aaca 24
<210> 86
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 86
Phe Asp Pro Glu Glu Gly Glu Thr
1 5
<210> 87
<211> 42
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 87
gcaacccccc gctattgtaa taatggtata tgttatgact ac 42
<210> 88
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 88
Ala Thr Pro Arg Tyr Cys Asn Asn Gly Ile Cys Tyr Asp Tyr
1 5 10
<210> 89
<211> 324
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 89
gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgcc gggcaagtca gagcattagc agctatttaa attggtatca gcagaaacca 120
gggaaagccc ctaagctcct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccgtca 180
aggttcagtg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag tctgcaacct 240
gaagattttg caacttacta ctgtcaacag agttacagta cccctccgat caccttcggc 300
caagggacac gactggagat taaa 324
<210> 90
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 90
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Pro
85 90 95
Ile Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 91
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 91
cagagcatta gcagctat 18
<210> 92
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 92
Gln Ser Ile Ser Ser Tyr
1 5
<210> 93
<211> 9
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 93
gctgcatcc 9
<210> 94
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 94
Ala Ala Ser
1
<210> 95
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 95
caacagagtt acagtacccc tccgatcacc 30
<210> 96
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 96
Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Pro Ile Thr
1 5 10
<210> 97
<211> 363
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 97
gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt cacctttagt aattatgcca tgacctgggt ccgccaggct 120
ccagggacgg ggctggagtg ggtctcagct attagtggtc gtggtagtaa cacatactac 180
acagactccg tgaagggccg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa catgctgtat 240
ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggcctcat attactgtgc gaaagatcgt 300
tttactacag tggggaactg gttcgacccc tggggccagg gaaccctggt caccgtctcc 360
tca 363
<210> 98
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 98
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Ala Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Thr Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Ser Gly Arg Gly Ser Asn Thr Tyr Tyr Thr Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Met Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Ser Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Asp Arg Phe Thr Thr Val Gly Asn Trp Phe Asp Pro Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 99
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 99
ggattcacct ttagtaatta tgcc 24
<210> 100
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 100
Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr Ala
1 5
<210> 101
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 101
attagtggtc gtggtagtaa caca 24
<210> 102
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 102
Ile Ser Gly Arg Gly Ser Asn Thr
1 5
<210> 103
<211> 42
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 103
gcgaaagatc gttttactac agtggggaac tggttcgacc cc 42
<210> 104
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 104
Ala Lys Asp Arg Phe Thr Thr Val Gly Asn Trp Phe Asp Pro
1 5 10
<210> 105
<211> 327
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 105
gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgcc gggcaagtca gagtattagc agctatttaa attggtatca gcagaaacca 120
gggaaagccc ctaagctcct gatctatgct gcgtccagtt tgcaaaatgg ggtcccatca 180
aggttcagtg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag tctgcagcct 240
gaagattttg caacttacta ctgtcaacag agttacagta gtcttccgat caccttcggc 300
caagggacac gactggatat taaacga 327
<210> 106
<211> 109
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 106
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Asn Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Ser Leu Pro
85 90 95
Ile Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Asp Ile Lys Arg
100 105
<210> 107
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 107
cagagtatta gcagctat 18
<210> 108
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 108
Gln Ser Ile Ser Ser Tyr
1 5
<210> 109
<211> 9
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 109
gctgcgtcc 9
<210> 110
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 110
Ala Ala Ser
1
<210> 111
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 111
caacagagtt acagtagtct tccgatcacc 30
<210> 112
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 112
Gln Gln Ser Tyr Ser Ser Leu Pro Ile Thr
1 5 10
<210> 113
<211> 357
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 113
caggtgcagc tgcaggagtc gggcccagga ctggtgaagc cttcggagac cctgtccctc 60
acctgcactg tcactggtgg ctccatcagt aggaactact ggagttggat ccggcagccc 120
ccagggaagg gactggaatg gattggatat atctattaca gtgggagtat caactacaat 180
ccctccctca agagtcgagt caccatatca gtggacatgt ctaagaacca gttctcccta 240
aagctgaatt ctgtgaccgc tgcggacacg gccgtgtact actgtgcgag agatcgatgg 300
aactggaaat acggtatgga cgtctggggc caagggacca cggtcatcgt ctcgtca 357
<210> 114
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 114
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Thr Gly Gly Ser Ile Ser Arg Asn
20 25 30
Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Ile Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Met Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu
65 70 75 80
Lys Leu Asn Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Asp Arg Trp Asn Trp Lys Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Thr Val Ile Val Ser Ser
115
<210> 115
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 115
ggtggctcca tcagtaggaa ctac 24
<210> 116
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 116
Gly Gly Ser Ile Ser Arg Asn Tyr
1 5
<210> 117
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 117
atctattaca gtgggagtat c 21
<210> 118
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 118
Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Ile
1 5
<210> 119
<211> 39
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 119
gcgagagatc gatggaactg gaaatacggt atggacgtc 39
<210> 120
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 120
Ala Arg Asp Arg Trp Asn Trp Lys Tyr Gly Met Asp Val
1 5 10
<210> 121
<211> 327
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 121
gaaattgtgt tgacgcagtc tccaggcacc ctgtctttgt ctccagggga aagagccacc 60
ctctcctgca gggccagtca gactgttaga aacagctact tagcctggta ccaccagaaa 120
cctggccagg ctcccaggct cctcatctat ggtgcatcca gcagggccac tggcatccca 180
gacaggttca gtggcagtgg gtctgggaca gacttcactc tcaccatcag cagactggag 240
cctgaagatt ttgcagtgta ttactgtcag cagtatggta gttcatattg gacgttcggc 300
caagggacca aaatggaaat caaacga 327
<210> 122
<211> 109
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 122
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Thr Val Arg Asn Ser
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr His Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu
65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Tyr
85 90 95
Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Met Glu Ile Lys Arg
100 105
<210> 123
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 123
cagactgtta gaaacagcta c 21
<210> 124
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 124
Gln Thr Val Arg Asn Ser Tyr
1 5
<210> 125
<211> 9
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 125
ggtgcatcc 9
<210> 126
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 126
Gly Ala Ser
1
<210> 127
<211> 27
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 127
cagcagtatg gtagttcata ttggacg 27
<210> 128
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 128
Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Tyr Trp Thr
1 5
<210> 129
<211> 363
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 129
caggtccagc tggtgcagtc tgggtctgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtc 60
tcctgcaagg tttccggata caccctcact gaattatcca tacactgggt gcgacaggct 120
cctggaaaag gacttgagtg gatgggaggt tttgatcctg aagatggtga aacaatctac 180
gcacagaagt tccggggcag agtcaccatg accgaggaca tatctccaga cacagcctac 240
atggagctga gcagcctgag atctgaagac acggccgtat attactgtgc aaccccccgc 300
tattgtaata atggtatatg ttatgactat tggggccagg gaaccctggt caccgtctcc 360
tca 363
<210> 130
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 130
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ser Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Val Ser Gly Tyr Thr Leu Thr Glu Leu
20 25 30
Ser Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Gly Phe Asp Pro Glu Asp Gly Glu Thr Ile Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Arg Gly Arg Val Thr Met Thr Glu Asp Ile Ser Pro Asp Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Thr Pro Arg Tyr Cys Asn Asn Gly Ile Cys Tyr Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 131
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 131
ggatacaccc tcactgaatt atcc 24
<210> 132
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 132
Gly Tyr Thr Leu Thr Glu Leu Ser
1 5
<210> 133
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 133
tttgatcctg aagatggtga aaca 24
<210> 134
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 134
Phe Asp Pro Glu Asp Gly Glu Thr
1 5
<210> 135
<211> 42
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 135
gcaacccccc gctattgtaa taatggtata tgttatgact at 42
<210> 136
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 136
Ala Thr Pro Arg Tyr Cys Asn Asn Gly Ile Cys Tyr Asp Tyr
1 5 10
<210> 137
<211> 327
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 137
gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctataggaga cagagtcacc 60
atcacttgcc gggcaagtca gagcattagc agctatttaa attggtatca gcagaaacca 120
gggaaagccc ctatgctcct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180
aggttcagtg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag tctgcaaact 240
gaagattttg caacttacta ctgtcaacag agttacagta cccctccgat caccttcggc 300
caagggacac gactggagat taaacga 327
<210> 138
<211> 109
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 138
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Ile Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Met Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Thr
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Pro
85 90 95
Ile Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys Arg
100 105
<210> 139
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 139
cagagcatta gcagctat 18
<210> 140
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 140
Gln Ser Ile Ser Ser Tyr
1 5
<210> 141
<211> 9
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 141
gctgcatcc 9
<210> 142
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 142
Ala Ala Ser
1
<210> 143
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 143
caacagagtt acagtacccc tccgatcacc 30
<210> 144
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 144
Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Pro Ile Thr
1 5 10
<210> 145
<211> 345
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 145
caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtcaagc ctggagggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt catttttagt gactactaca tgagctggat ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtttcatac attagtagta gtggtactac catatatgga 180
gactctgtga agggccgatt caccatgtcc agggacaacg ccaagaactc actgtatctg 240
caaatgaaca gcctgagagc cgaggacacg gccgtgtatt actgtgcgag gaactacgct 300
ctctttgact actggggcca gggaaccctg gtcaccgtct cctca 345
<210> 146
<211> 115
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 146
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ile Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met Ser Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Tyr Ile Ser Ser Ser Gly Thr Thr Ile Tyr Gly Asp Ser Val Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Met Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Asn Tyr Ala Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr
100 105 110
Val Ser Ser
115
<210> 147
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 147
ggattcattt ttagtgacta ctac 24
<210> 148
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 148
Gly Phe Ile Phe Ser Asp Tyr Tyr
1 5
<210> 149
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 149
attagtagta gtggtactac cata 24
<210> 150
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 150
Ile Ser Ser Ser Gly Thr Thr Ile
1 5
<210> 151
<211> 27
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 151
gcgaggaact acgctctctt tgactac 27
<210> 152
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 152
Ala Arg Asn Tyr Ala Leu Phe Asp Tyr
1 5
<210> 153
<211> 324
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 153
gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgcc aggcgagtca ggacattagc aaatatttaa attggtatca gcagaaacca 120
gggaaagccc ctaagctcct gatctactat acatccaatt tggaaacagg ggtcccatca 180
aggttcagtg gaagtggatc tgggacagat tttactttca ccatcagcag cctgcagcct 240
gaagatattg caacatatta ctgtcaccag tctgattatc tcccattcac tttcggccct 300
gggaccaaag tggatatcaa acga 324
<210> 154
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 154
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Gln Asp Ile Ser Lys Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Tyr Thr Ser Asn Leu Glu Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys His Gln Ser Asp Tyr Leu Pro Phe
85 90 95
Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys Arg
100 105
<210> 155
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 155
caggacatta gcaaatat 18
<210> 156
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 156
Gln Asp Ile Ser Lys Tyr
1 5
<210> 157
<211> 9
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 157
tatacatcc 9
<210> 158
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 158
Tyr Thr Ser
1
<210> 159
<211> 27
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 159
caccagtctg attatctccc attcact 27
<210> 160
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 160
His Gln Ser Asp Tyr Leu Pro Phe Thr
1 5
<210> 161
<211> 363
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 161
cagctgcagc tgcaggagtc gggcccagga ctggtgaagc cttcggagac cctgtccctc 60
acctgcactg tctctggtgg ctccatcagc cgtattagtt actactgggg ctggatccgc 120
cagcccccag ggaaggggct ggagtggatt gggagtatct atgatagtgg gagtacctac 180
tacaacccgt ccctcaagag tcgagtcacc atatccatag acacgtccaa gaaccagttc 240
tccctgaagc tgagctctgt gaccgccgca gacacggctg tgtattactg tgtgagatat 300
agcagttcgt ccgccttcgc ttttgactac tggggccagg gaaccctggt caccgtctcc 360
tca 363
<210> 162
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 162
Gln Leu Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Arg Ile
20 25 30
Ser Tyr Tyr Trp Gly Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu
35 40 45
Trp Ile Gly Ser Ile Tyr Asp Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser
50 55 60
Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Ile Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe
65 70 75 80
Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr
85 90 95
Cys Val Arg Tyr Ser Ser Ser Ser Ala Phe Ala Phe Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 163
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 163
ggtggctcca tcagccgtat tagttactac 30
<210> 164
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 164
Gly Gly Ser Ile Ser Arg Ile Ser Tyr Tyr
1 5 10
<210> 165
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 165
atctatgata gtgggagtac c 21
<210> 166
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 166
Ile Tyr Asp Ser Gly Ser Thr
1 5
<210> 167
<211> 39
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 167
gtgagatata gcagttcgtc cgccttcgct tttgactac 39
<210> 168
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 168
Val Arg Tyr Ser Ser Ser Ser Ala Phe Ala Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 169
<211> 324
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 169
gacatccaga tgacccagtc tccatcttcc gtgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgtc gggcgagtca gggtattagc agttggttag cctggtatca gcagaaacca 120
gggaaagccc ctaagctcct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180
aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240
gaagattttg caacttacta ttgtcaacag gctaacagtt tcccattcac tttcggccct 300
gggaccaaag tggatatcaa acga 324
<210> 170
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 170
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Asn Ser Phe Pro Phe
85 90 95
Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys Arg
100 105
<210> 171
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 171
cagggtatta gcagttgg 18
<210> 172
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 172
Gln Gly Ile Ser Ser Trp
1 5
<210> 173
<211> 9
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 173
gctgcatcc 9
<210> 174
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 174
Ala Ala Ser
1
<210> 175
<211> 27
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 175
caacaggcta acagtttccc attcact 27
<210> 176
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 176
Gln Gln Ala Asn Ser Phe Pro Phe Thr
1 5
<210> 177
<211> 360
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 177
cagctgcagc tgcaggagtc gggcccagga ctggtgaagc cttcggagac cctgtccctc 60
acctgcactg tctctggtgg ctccatcagc agtagtactt actactgggg ctggatccgc 120
cagcccccag ggaaggggct ggagtggatt gggagtttct attatagtgg gagcacctac 180
tacaacccgt ccctcaagag tcgagtcacc atatccgtag gcacgtccaa gaaccagttc 240
tccctgaagc tgagctctgt gaccgccgca gacacggctg tttatttctg tgcgagaggg 300
gggctcctgg ggagaccttt tgttatctgg ggccaaggga caatggtcac cgtctcttca 360
<210> 178
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 178
Gln Leu Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Ser
20 25 30
Thr Tyr Tyr Trp Gly Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu
35 40 45
Trp Ile Gly Ser Phe Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser
50 55 60
Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Gly Thr Ser Lys Asn Gln Phe
65 70 75 80
Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Phe
85 90 95
Cys Ala Arg Gly Gly Leu Leu Gly Arg Pro Phe Val Ile Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 179
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 179
ggtggctcca tcagcagtag tacttactac 30
<210> 180
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 180
Gly Gly Ser Ile Ser Ser Ser Thr Tyr Tyr
1 5 10
<210> 181
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 181
ttctattata gtgggagcac c 21
<210> 182
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 182
Phe Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr
1 5
<210> 183
<211> 36
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 183
gcgagagggg ggctcctggg gagacctttt gttatc 36
<210> 184
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 184
Ala Arg Gly Gly Leu Leu Gly Arg Pro Phe Val Ile
1 5 10
<210> 185
<211> 324
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 185
gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgcc gggcaagtca gggcattaga aatgatttag gctggtatca gcagaaacca 120
gggaaagccc ctaagcgcct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180
aggttcagcg gcagtggatc tgggacagaa ttcactctca caatcagcag cctgcagcct 240
gaagattttg caacttatta ctgtctacag cataatagtt acccgctcac tttcggcgga 300
gggaccaagg tggagatcaa acga 324
<210> 186
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 186
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Arg Asn Asp
20 25 30
Leu Gly Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln His Asn Ser Tyr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
100 105
<210> 187
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 187
cagggcatta gaaatgat 18
<210> 188
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 188
Gln Gly Ile Arg Asn Asp
1 5
<210> 189
<211> 9
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 189
gctgcatcc 9
<210> 190
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 190
Ala Ala Ser
1
<210> 191
<211> 27
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 191
ctacagcata atagttaccc gctcact 27
<210> 192
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 192
Leu Gln His Asn Ser Tyr Pro Leu Thr
1 5
<210> 193
<211> 366
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 193
gaggtgcagc tggtggagtc taggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt cacttttagc agctatgcca tgagctgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagct attagtggta gtggtggtag cacattctac 180
gcagactccg tgaagggccg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacggtatat 240
ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtat attactgtgc gaaagccctc 300
gtattgcgat ttttggagtg gttaggggac tactggggcc agggaaccct ggtcaccgtc 360
tcctca 366
<210> 194
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 194
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Arg Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Phe Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Ala Leu Val Leu Arg Phe Leu Glu Trp Leu Gly Asp Tyr Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 195
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 195
ggattcactt ttagcagcta tgcc 24
<210> 196
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 196
Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala
1 5
<210> 197
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 197
attagtggta gtggtggtag caca 24
<210> 198
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 198
Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr
1 5
<210> 199
<211> 45
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 199
gcgaaagccc tcgtattgcg atttttggag tggttagggg actac 45
<210> 200
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 200
Ala Lys Ala Leu Val Leu Arg Phe Leu Glu Trp Leu Gly Asp Tyr
1 5 10 15
<210> 201
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 201
gacatccaga tgacccagtc tccttccacc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgtc gggccagtca gagtattagt agctggttgg cctggtttca gcagaaacca 120
gggaaagccc ctaagctcct gatctataag gcgtctagtt tagaaagtgg ggtcccatca 180
aggttcagcg gcagtggatc tgggacagaa ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240
gatgattttg caacttatta ctgtcaacag tataaaagtt attggacgtt cggccaaggg 300
accaaggtgg aaatcaaacg a 321
<210> 202
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 202
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Lys Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Lys Ser Tyr Trp Thr
85 90 95
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
100 105
<210> 203
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 203
cagagtatta gtagctgg 18
<210> 204
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 204
Gln Ser Ile Ser Ser Trp
1 5
<210> 205
<211> 9
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 205
aaggcgtct 9
<210> 206
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 206
Lys Ala Ser
1
<210> 207
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 207
caacagtata aaagttattg gacg 24
<210> 208
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 208
Gln Gln Tyr Lys Ser Tyr Trp Thr
1 5
<210> 209
<211> 372
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 209
gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ctggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt cacctttagc agctatgcca tgagctgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtctcaagt attagtggta gtggtgatag cacattctac 180
acagactccg tgaagggccg gttcaccatc tccagagaca tttccaagaa cacgctgtat 240
ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtat attactgtgc gaaagatcgt 300
cttctatggt tcggggactt aatatccccc tttcactact ggggccaggg aaccctggtc 360
accgtctcct ca 372
<210> 210
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 210
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ser Ile Ser Gly Ser Gly Asp Ser Thr Phe Tyr Thr Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Ile Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Asp Arg Leu Leu Trp Phe Gly Asp Leu Ile Ser Pro Phe His
100 105 110
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 211
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 211
ggattcacct ttagcagcta tgcc 24
<210> 212
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 212
Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala
1 5
<210> 213
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 213
attagtggta gtggtgatag caca 24
<210> 214
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 214
Ile Ser Gly Ser Gly Asp Ser Thr
1 5
<210> 215
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 215
gcgaaagatc gtcttctatg gttcggggac ttaatatccc cctttcacta c 51
<210> 216
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 216
Ala Lys Asp Arg Leu Leu Trp Phe Gly Asp Leu Ile Ser Pro Phe His
1 5 10 15
Tyr
<210> 217
<211> 327
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 217
gaaattgtgt tgacgcagtc tccaggcacc ctgtctttgt ctccagggga aagagccacc 60
ctctcctgca gggccagtca gagtgttagc aacatctact tagcctggta ccagcagaaa 120
cctgcccagg ctcccaggct cctcatctat ggtgcatcca gcagggccac tggcatccca 180
gacaggttta gtgtcagtgg gtctgggaca gacttcactc tcaccatcag cagactggag 240
cctgaagatt ttgcagtgta ttactgtcag cagtatggta gctcacctcg gacgttcggc 300
caagggacca aggtggaaat caaacga 327
<210> 218
<211> 109
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 218
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Asn Ile
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Ala Gln Ala Pro Arg Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Val Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu
65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Pro
85 90 95
Arg Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
100 105
<210> 219
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 219
cagagtgtta gcaacatcta c 21
<210> 220
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 220
Gln Ser Val Ser Asn Ile Tyr
1 5
<210> 221
<211> 9
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 221
ggtgcatcc 9
<210> 222
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 222
Gly Ala Ser
1
<210> 223
<211> 27
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 223
cagcagtatg gtagctcacc tcggacg 27
<210> 224
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 224
Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Pro Arg Thr
1 5
<210> 225
<211> 366
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 225
gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtacag cctctggatt cacctttagc agctatgcca tgagttgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggaatg ggtctcagct attagtggga ctggtagtag tacatacttc 180
acagactccg tgaagggccg gttcgccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240
ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtat attactgtgc gaaagatgga 300
gagtggctct ctacggtgac cctttttgac tactggggcc agggaaccct ggtcaccgtc 360
tcctca 366
<210> 226
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 226
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Ser Gly Thr Gly Ser Ser Thr Tyr Phe Thr Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Ala Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Asp Gly Glu Trp Leu Ser Thr Val Thr Leu Phe Asp Tyr Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 227
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 227
ggattcacct ttagcagcta tgcc 24
<210> 228
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 228
Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala
1 5
<210> 229
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 229
attagtggga ctggtagtag taca 24
<210> 230
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 230
Ile Ser Gly Thr Gly Ser Ser Thr
1 5
<210> 231
<211> 45
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 231
gcgaaagatg gagagtggct ctctacggtg accctttttg actac 45
<210> 232
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 232
Ala Lys Asp Gly Glu Trp Leu Ser Thr Val Thr Leu Phe Asp Tyr
1 5 10 15
<210> 233
<211> 330
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 233
gaaattgtga tgacgcagtc tccagccacc ctgtctgtgt ctccagggga aagagccacc 60
ctctcctgca gggccagtca gagtgttagc agcaacttag cctggtacca gcagaaacct 120
ggccaggctc ccaggctcct catctatggt gcatccacca gggccactgg tatcccagcc 180
aggttcagtg gcagtgggtc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagtct 240
gaagattttg cactttatta ctgtcagcag tattttatct ggcctccgca tcccactttc 300
ggccctggga ccaaagtgga tatcaaacga 330
<210> 234
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 234
Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Asn
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Leu Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Phe Ile Trp Pro Pro
85 90 95
His Pro Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys Arg
100 105 110
<210> 235
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 235
cagagtgtta gcagcaac 18
<210> 236
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 236
Gln Ser Val Ser Ser Asn
1 5
<210> 237
<211> 9
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 237
ggtgcatcc 9
<210> 238
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 238
Gly Ala Ser
1
<210> 239
<211> 33
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 239
cagcagtatt ttatctggcc tccgcatccc act 33
<210> 240
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 240
Gln Gln Tyr Phe Ile Trp Pro Pro His Pro Thr
1 5 10
<210> 241
<211> 363
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 241
caggtgcagc tggtggagtc tgggggagcc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt tactatggca tgcactgggt ccgccaggct 120
ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcagtt atatcatatg atggaagtaa aaaatactat 180
gcagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240
ctgcaaatga acagcctgag agctgaggac acggctgtgt attactgtgc gaaagatctg 300
acagtagact tctactacgg tatggacgtc tggggccaag ggaccacggt caccgtctcc 360
tca 363
<210> 242
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 242
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Ala Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Tyr Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Lys Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Asp Leu Thr Val Asp Phe Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 243
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 243
ggattcacct tcagttacta tggc 24
<210> 244
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 244
Gly Phe Thr Phe Ser Tyr Tyr Gly
1 5
<210> 245
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 245
atatcatatg atggaagtaa aaaa 24
<210> 246
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 246
Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Lys Lys
1 5
<210> 247
<211> 42
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 247
gcgaaagatc tgacagtaga cttctactac ggtatggacg tc 42
<210> 248
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 248
Ala Lys Asp Leu Thr Val Asp Phe Tyr Tyr Gly Met Asp Val
1 5 10
<210> 249
<211> 324
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 249
gacatccaga tgacccagtc tccatcttcc gtgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgtc gggcgagtca gggtattagc agctggttag cctggtatca gcagaaacca 120
gggaaagccc ctaagctcct gatctatgct acatccagtt tgcaaagtgg ggccccatca 180
aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240
gaagattttg caacttactt ttgtcaacag gctaacagtt tcccatacac ttttggccag 300
gggaccaagc tggagatcaa acga 324
<210> 250
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 250
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Thr Ser Ser Leu Gln Ser Gly Ala Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Ala Asn Ser Phe Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg
100 105
<210> 251
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 251
cagggtatta gcagctgg 18
<210> 252
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 252
Gln Gly Ile Ser Ser Trp
1 5
<210> 253
<211> 9
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 253
gctacatcc 9
<210> 254
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 254
Ala Thr Ser
1
<210> 255
<211> 27
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 255
caacaggcta acagtttccc atacact 27
<210> 256
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 256
Gln Gln Ala Asn Ser Phe Pro Tyr Thr
1 5
<210> 257
<211> 342
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 257
caggtgcagc tgcaggagtc gggcccagga ctggtgaagc cttcggagac cctgtccctc 60
acctgcactg tctctgatgg ctccatcagt agttactact ggagctggat ccggcagccc 120
ccagggaggg gactggagtg gattgggttt atctattaca gtgggagcac cagctacaac 180
ccctccctca agagtcgagt caccatttca gtagacacgt ccatgagcca gttctccctg 240
aagctgaggt ctgtgaccgc cgcagacacg gccgtgtatt actgtgcgcg tgggagcccc 300
tttgactact ggggcccggg aaccctggtc accgtctcct ca 342
<210> 258
<211> 114
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 258
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Asp Gly Ser Ile Ser Ser Tyr
20 25 30
Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Arg Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Phe Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr Ser Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Met Ser Gln Phe Ser Leu
65 70 75 80
Lys Leu Arg Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Gly Ser Pro Phe Asp Tyr Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val Thr Val
100 105 110
Ser Ser
<210> 259
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 259
gatggctcca tcagtagtta ctac 24
<210> 260
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 260
Asp Gly Ser Ile Ser Ser Tyr Tyr
1 5
<210> 261
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 261
atctattaca gtgggagcac c 21
<210> 262
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 262
Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr
1 5
<210> 263
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 263
gcgcgtggga gcccctttga ctac 24
<210> 264
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 264
Ala Arg Gly Ser Pro Phe Asp Tyr
1 5
<210> 265
<211> 327
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 265
gaaattgtgt tgacgcagtc tccaggcacc ctgtctttgt ctccagggga aagagccacc 60
ctctcctgca gggccagtca gagtgttagc agcagctact tagcctggta ccagcaaaga 120
cctggccagg ctcccagcct cctcatctct ggtgcatcca ggagggccac tggcatccca 180
gacaggttca gtggcagtgg gtctgggaca gacttcactc tcaccatcag aagactggag 240
cctgaagatt ttgcaatgta ttactgtcag cagtatggta gttcacctcc cactttcggc 300
ggagggacca aggtggagat caaacga 327
<210> 266
<211> 109
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 266
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ala Pro Ser Leu Leu
35 40 45
Ile Ser Gly Ala Ser Arg Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Arg Arg Leu Glu
65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Met Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Pro
85 90 95
Pro Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
100 105
<210> 267
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 267
cagagtgtta gcagcagcta c 21
<210> 268
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 268
Gln Ser Val Ser Ser Ser Tyr
1 5
<210> 269
<211> 9
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 269
ggtgcatcc 9
<210> 270
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 270
Gly Ala Ser
1
<210> 271
<211> 27
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 271
cagcagtatg gtagttcacc tcccact 27
<210> 272
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 272
Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Pro Pro Thr
1 5
<210> 273
<211> 363
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 273
gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtccagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt cacgttcagt aactatgcta tgcactgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg gactggaata tgtttcagct attagtagta atgggggtag tacatattat 180
gcagactctg tgaagggcag aatcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240
cttcaaatgg gcagcctgag agctgaggat atggctgtgt attactgtgc gagagggcga 300
ccgtactact actacttcgg tatggacgtc tggggccaag ggaccacggt caccgtctcc 360
tca 363
<210> 274
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 274
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Tyr Val
35 40 45
Ser Ala Ile Ser Ser Asn Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Ile Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Gly Ser Leu Arg Ala Glu Asp Met Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Arg Pro Tyr Tyr Tyr Tyr Phe Gly Met Asp Val Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 275
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 275
ggattcacgt tcagtaacta tgct 24
<210> 276
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 276
Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr Ala
1 5
<210> 277
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 277
attagtagta atgggggtag taca 24
<210> 278
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 278
Ile Ser Ser Asn Gly Gly Ser Thr
1 5
<210> 279
<211> 42
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 279
gcgagagggc gaccgtacta ctactacttc ggtatggacg tc 42
<210> 280
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 280
Ala Arg Gly Arg Pro Tyr Tyr Tyr Tyr Phe Gly Met Asp Val
1 5 10
<210> 281
<211> 339
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 281
gatattgtga tgactcagac tccagtctcc tcacctgtca cccttggaca gccggcctcc 60
atctcctgca ggtctagtca aagcctcgta cacagtgatg gaaacaccta cttgagttgg 120
tttcagcaga ggccgggcca gcctccaaga ctcctaattt ataagatttc taaccggttc 180
tctggggtcc cagacagatt cagtggcagt ggggcaggga cagatttcac actgaaaatc 240
agcagggtgg aagctgagga tgtcggggtt tattactgca tgcaagctac acaatttcct 300
ctcaatttcg gcggagggac caaggtggag atcaaacga 339
<210> 282
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 282
Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Val Ser Ser Pro Val Thr Leu Gly
1 5 10 15
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser
20 25 30
Asp Gly Asn Thr Tyr Leu Ser Trp Phe Gln Gln Arg Pro Gly Gln Pro
35 40 45
Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Lys Ile Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ala Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Ala
85 90 95
Thr Gln Phe Pro Leu Asn Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
Arg
<210> 283
<211> 33
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 283
caaagcctcg tacacagtga tggaaacacc tac 33
<210> 284
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 284
Gln Ser Leu Val His Ser Asp Gly Asn Thr Tyr
1 5 10
<210> 285
<211> 9
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 285
aagatttct 9
<210> 286
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 286
Lys Ile Ser
1
<210> 287
<211> 27
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 287
atgcaagcta cacaatttcc tctcaat 27
<210> 288
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 288
Met Gln Ala Thr Gln Phe Pro Leu Asn
1 5
<210> 289
<211> 366
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 289
gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt cacctttagg acctatgcca tgacctgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctagactg ggtctcagct attactggtg atggtggtaa tacatactac 180
gcagactccg tgaagggccg gttcaccatt tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240
ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccatct attactgtgc gaaagatcag 300
agattcagct ttgctctata ctactttgac tactggggcc agggaaccct ggtcactgtc 360
tcctca 366
<210> 290
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 290
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Arg Thr Tyr
20 25 30
Ala Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Asp Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Thr Gly Asp Gly Gly Asn Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Asp Gln Arg Phe Ser Phe Ala Leu Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 291
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 291
ggattcacct ttaggaccta tgcc 24
<210> 292
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 292
Gly Phe Thr Phe Arg Thr Tyr Ala
1 5
<210> 293
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 293
attactggtg atggtggtaa taca 24
<210> 294
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 294
Ile Thr Gly Asp Gly Gly Asn Thr
1 5
<210> 295
<211> 45
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 295
gcgaaagatc agagattcag ctttgctcta tactactttg actac 45
<210> 296
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 296
Ala Lys Asp Gln Arg Phe Ser Phe Ala Leu Tyr Tyr Phe Asp Tyr
1 5 10 15
<210> 297
<211> 324
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 297
gacatccaga tgacccagtc tccatcttcc gtgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgtc gggcgagtca gggtattagc agctggttag cctggtatca gcagaaacca 120
gggaacgccc ctaagctcct gatctatgct gcattcagtt tgcaaagtgg ggtcccgtca 180
aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240
gaagattttg caacttacta ttgtcaacag gctaacaatt tcccgtggac gttcggccaa 300
gggaccaagg tggaaatcaa acga 324
<210> 298
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 298
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Asn Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Phe Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Asn Asn Phe Pro Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
100 105
<210> 299
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 299
cagggtatta gcagctgg 18
<210> 300
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 300
Gln Gly Ile Ser Ser Trp
1 5
<210> 301
<211> 9
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 301
gctgcattc 9
<210> 302
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 302
Ala Ala Phe
1
<210> 303
<211> 27
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 303
caacaggcta acaatttccc gtggacg 27
<210> 304
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 304
Gln Gln Ala Asn Asn Phe Pro Trp Thr
1 5
<210> 305
<211> 354
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 305
caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt aactatgaca tgcactgggt ccgccaggct 120
ccaggcaagg ggctggagtg gatggcagtt atatcatatg atggaattaa taaatattat 180
gcagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240
ctgcaaatga acagcctgag agctgaggac acggctgtgt attactgtgc gaaaggtact 300
tactcctggt acttcgatct ctggggccgt ggcaccctgg tcactgtctc ctca 354
<210> 306
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 306
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Asp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ile Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Gly Thr Tyr Ser Trp Tyr Phe Asp Leu Trp Gly Arg Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 307
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 307
ggattcacct tcagtaacta tgac 24
<210> 308
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 308
Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr Asp
1 5
<210> 309
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 309
atatcatatg atggaattaa taaa 24
<210> 310
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 310
Ile Ser Tyr Asp Gly Ile Asn Lys
1 5
<210> 311
<211> 33
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 311
gcgaaaggta cttactcctg gtacttcgat ctc 33
<210> 312
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 312
Ala Lys Gly Thr Tyr Ser Trp Tyr Phe Asp Leu
1 5 10
<210> 313
<211> 324
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 313
gacatccaga tgacccagtc tccttccacc ctgtctacat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgcc gggccagtca gactattagt agctggttgg cctggtatca gcagaaacca 120
gggaaagccc ctaagctcct gatctataag gcgtctcgtt tagaaagtgg ggtcccatca 180
aggttcagcg gcagtggatc tgggacagaa ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240
gatgattttg caacttatta ctgccaacag tataatagtt attcgtggac gttcggccaa 300
gggaccaagg tggaaatcaa acga 324
<210> 314
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 314
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Thr Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Thr Ile Ser Ser Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Lys Ala Ser Arg Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Ser Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
100 105
<210> 315
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 315
cagactatta gtagctgg 18
<210> 316
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 316
Gln Thr Ile Ser Ser Trp
1 5
<210> 317
<211> 9
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 317
aaggcgtct 9
<210> 318
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 318
Lys Ala Ser
1
<210> 319
<211> 27
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 319
caacagtata atagttattc gtggacg 27
<210> 320
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 320
Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Ser Trp Thr
1 5
<210> 321
<211> 366
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 321
gaagtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggcaggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt cacctttgat gcttatgcca tgcactgggt ccggcaagct 120
ccagggaagg gcctggagtg ggtctcaggt attagttgga atagtggtag cataggctat 180
gcggactctg tgaagggccg attcaccatt tccagagaca acgccaagaa ctccctgtat 240
ctgcaaatga acagtctgag agaagaggac acggccttgt attactgtgc aaaagataaa 300
attttggaac tttactacta cggtatggac gtctggggcc aagggaccac ggtcaccgtc 360
tcctca 366
<210> 322
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 322
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Ala Tyr
20 25 30
Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Gly Ile Ser Trp Asn Ser Gly Ser Ile Gly Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Glu Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Asp Lys Ile Leu Glu Leu Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 323
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 323
ggattcacct ttgatgctta tgcc 24
<210> 324
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 324
Gly Phe Thr Phe Asp Ala Tyr Ala
1 5
<210> 325
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 325
attagttgga atagtggtag cata 24
<210> 326
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 326
Ile Ser Trp Asn Ser Gly Ser Ile
1 5
<210> 327
<211> 45
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 327
gcaaaagata aaattttgga actttactac tacggtatgg acgtc 45
<210> 328
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 328
Ala Lys Asp Lys Ile Leu Glu Leu Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val
1 5 10 15
<210> 329
<211> 369
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 329
gaggtgcagc tggtggagtc tgggggagac ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgttcag cctctggatt cacctttaac atctatgcca tgagctgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtctcaggt attagtggta gtggtggtag cacatactac 180
gcagactccg tgaagggccg gttcaccatc tccagagaca attcaaagaa cacgctgtat 240
ttccaaatga atagcctgag agtcgaggac acggccgtat attactgtgc gaaaaaaata 300
agcagctcgt cctactacta ctacgctatg gacgtctggg gccaagggac cacggtcacc 360
gtctcctca 369
<210> 330
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 330
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Asp Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ser Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Ile Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Gly Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Phe Gln Met Asn Ser Leu Arg Val Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Lys Ile Ser Ser Ser Ser Tyr Tyr Tyr Tyr Ala Met Asp Val
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 331
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 331
ggattcacct ttaacatcta tgcc 24
<210> 332
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 332
Gly Phe Thr Phe Asn Ile Tyr Ala
1 5
<210> 333
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 333
attagtggta gtggtggtag caca 24
<210> 334
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 334
Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr
1 5
<210> 335
<211> 48
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 335
gcgaaaaaaa taagcagctc gtcctactac tactacgcta tggacgtc 48
<210> 336
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 336
Ala Lys Lys Ile Ser Ser Ser Ser Tyr Tyr Tyr Tyr Ala Met Asp Val
1 5 10 15
<210> 337
<211> 355
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 337
caggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtgaaggtc 60
tcctgcaagg cttctggagg caccttcagc agatatgata tcagctgggt gcgacaggcc 120
cctggacaag gacttgagtg gatgggaggg atcatcccta tctttggtac atcaaactac 180
gcacagaagt tccagggcag agtcacgatt accacggacg aatccacgag tacagtctac 240
atggagctga gcagtctgag atctgaagac acggccgtgt attattgtgc gagaggaggt 300
cgatatggct ggttcgaccc ctggggccag ggaaccctgg tcaccgtctc ctcag 355
<210> 338
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 338
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Arg Tyr
20 25 30
Asp Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Ser Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Thr Asp Glu Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Arg Tyr Gly Trp Phe Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 339
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 339
ggaggcacct tcagcagata tgat 24
<210> 340
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 340
Gly Gly Thr Phe Ser Arg Tyr Asp
1 5
<210> 341
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 341
atcatcccta tctttggtac atca 24
<210> 342
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 342
Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Ser
1 5
<210> 343
<211> 33
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 343
gcgagaggag gtcgatatgg ctggttcgac ccc 33
<210> 344
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 344
Ala Arg Gly Gly Arg Tyr Gly Trp Phe Asp Pro
1 5 10
<210> 345
<211> 375
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 345
gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt cacctttagc agctttgcca tgagctgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg aactggagtg ggtctcatct attagtggtc gtggtggtag cacatactac 180
gcagactccg tgaggggccg gttcaccatc tccagagaca attccaagat cacgctgtat 240
ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtat attactgtgc gaaagatatt 300
gtcttccggt ataccagctc ggcctactgg tacttcgatc tctggggccg tggcaccctg 360
gtcaccgtct cctca 375
<210> 346
<211> 125
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 346
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Phe
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ser Ile Ser Gly Arg Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Arg Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Ile Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Asp Ile Val Phe Arg Tyr Thr Ser Ser Ala Tyr Trp Tyr Phe
100 105 110
Asp Leu Trp Gly Arg Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 347
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 347
ggattcacct ttagcagctt tgcc 24
<210> 348
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 348
Gly Phe Thr Phe Ser Ser Phe Ala
1 5
<210> 349
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 349
attagtggtc gtggtggtag caca 24
<210> 350
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 350
Ile Ser Gly Arg Gly Gly Ser Thr
1 5
<210> 351
<211> 54
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 351
gcgaaagata ttgtcttccg gtataccagc tcggcctact ggtacttcga tctc 54
<210> 352
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 352
Ala Lys Asp Ile Val Phe Arg Tyr Thr Ser Ser Ala Tyr Trp Tyr Phe
1 5 10 15
Asp Leu
<210> 353
<211> 375
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 353
gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt cacctttagc agctatggca tgaactgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagtt attagtggta gtggtggtag cacatactac 180
gcagactccg tgaagggccg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240
ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtat attactgtgc gaaagatcgt 300
tggacgtatt actatgatag tagtggttcc ccctttgact actggggcca gggaaccctg 360
gtcaccgtct cctca 375
<210> 354
<211> 125
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 354
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Val Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Asp Arg Trp Thr Tyr Tyr Tyr Asp Ser Ser Gly Ser Pro Phe
100 105 110
Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 355
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 355
ggattcacct ttagcagcta tggc 24
<210> 356
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 356
Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Gly
1 5
<210> 357
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 357
attagtggta gtggtggtag caca 24
<210> 358
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 358
Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr
1 5
<210> 359
<211> 54
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 359
gcgaaagatc gttggacgta ttactatgat agtagtggtt ccccctttga ctac 54
<210> 360
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 360
Ala Lys Asp Arg Trp Thr Tyr Tyr Tyr Asp Ser Ser Gly Ser Pro Phe
1 5 10 15
Asp Tyr
<210> 361
<211> 324
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 361
gaaattgtgt tgacgcagtc tccaggcacc ctgtctttgt ctccagggga aagagccacc 60
ctctcctgca gggccagtca gagtgttagc agcagctact tagcctggta ccagcagaaa 120
cctggccagg ctcccaggct cctcatctat ggtgcatcca gcagggccac tggcatccca 180
gacaggttca gtggcagtgg gtctgggaca gacttcactc tcaccatcag cagactggag 240
cctgaagatt ttgcagtgta ttactgtcag cagtatggta gctcaccttg gacgttcggc 300
caagggacca aggtggaaat caaa 324
<210> 362
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 362
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu
65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Pro
85 90 95
Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 363
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 363
cagagtgtta gcagcagcta c 21
<210> 364
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 364
Gln Ser Val Ser Ser Ser Tyr
1 5
<210> 365
<211> 9
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 365
ggtgcatcc 9
<210> 366
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 366
Gly Ala Ser
1
<210> 367
<211> 27
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 367
cagcagtatg gtagctcacc ttggacg 27
<210> 368
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 368
Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Pro Trp Thr
1 5
<210> 369
<211> 363
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 369
gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc tttgtacagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt cacttttagc agttatgcca tgagttgggt ccgccaggct 120
ccaggtaagg ggctggagtg ggtctcagct attagtggta ctggtagtaa cacatactac 180
gcagactccg tgaagggccg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240
ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgttt actactgtgc gaaagatcgc 300
gtgactacag taacctacta ctttgactac tggggccagg gaaccctggt caccgtctcc 360
tca 363
<210> 370
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 370
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Phe Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Ser Gly Thr Gly Ser Asn Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Asp Arg Val Thr Thr Val Thr Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 371
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 371
ggattcactt ttagcagtta tgcc 24
<210> 372
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 372
Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala
1 5
<210> 373
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 373
attagtggta ctggtagtaa caca 24
<210> 374
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 374
Ile Ser Gly Thr Gly Ser Asn Thr
1 5
<210> 375
<211> 42
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 375
gcgaaagatc gcgtgactac agtaacctac tactttgact ac 42
<210> 376
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 376
Ala Lys Asp Arg Val Thr Thr Val Thr Tyr Tyr Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 377
<211> 372
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 377
gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggttt cacctttagc agctatgcca tgaactgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg gactggagtg ggtctcagct attagtggta gtggtgatag cacatactac 180
gcagactccg tgaagggccg gttcaccatc tccagagaca attccaggac cacgctgtct 240
ctgcaattga acagcctgag agccgaggac acggccgtat attactgtgc gaaagatcga 300
ctactatggt tcggggaatt aggatcccca tttcactact ggggccaggg aaccctggtc 360
accgtctcct ca 372
<210> 378
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 378
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Asp Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Arg Thr Thr Leu Ser
65 70 75 80
Leu Gln Leu Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Asp Arg Leu Leu Trp Phe Gly Glu Leu Gly Ser Pro Phe His
100 105 110
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 379
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 379
ggtttcacct ttagcagcta tgcc 24
<210> 380
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 380
Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala
1 5
<210> 381
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 381
attagtggta gtggtgatag caca 24
<210> 382
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 382
Ile Ser Gly Ser Gly Asp Ser Thr
1 5
<210> 383
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 383
gcgaaagatc gactactatg gttcggggaa ttaggatccc catttcacta c 51
<210> 384
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 384
Ala Lys Asp Arg Leu Leu Trp Phe Gly Glu Leu Gly Ser Pro Phe His
1 5 10 15
Tyr
<210> 385
<211> 363
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 385
gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggaacagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt cacctttagc agctatgcca tgagctgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagtc attagtggta gtggtggtta cacaaactac 180
gcagactccg tgaagggccg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240
ctgcaaatga accgcctgag agccgaggac tcggccgttt attactgtgc gaggcataat 300
tggaactacg actattacgg tatggacgtc tggggccagg ggaccacggt caccgtctcc 360
tca 363
<210> 386
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 386
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Glu Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Val Ile Ser Gly Ser Gly Gly Tyr Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Arg Leu Arg Ala Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg His Asn Trp Asn Tyr Asp Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 387
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 387
ggattcacct ttagcagcta tgcc 24
<210> 388
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 388
Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala
1 5
<210> 389
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 389
attagtggta gtggtggtta caca 24
<210> 390
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 390
Ile Ser Gly Ser Gly Gly Tyr Thr
1 5
<210> 391
<211> 42
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 391
gcgaggcata attggaacta cgactattac ggtatggacg tc 42
<210> 392
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 392
Ala Arg His Asn Trp Asn Tyr Asp Tyr Tyr Gly Met Asp Val
1 5 10
<210> 393
<211> 360
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 393
caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagt ctgggaggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag ccgctggatt caccttcagt aattatggca tgcactgggt ccgccaggct 120
ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcactt atgtcatttg atggaagtga taaatactat 180
gcagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgttgtat 240
ctgcaaatga acagcctgag agctgaggac acggctctgt attactgtgc gaaaggatac 300
gatttttgga gtggttattg ggactactgg ggccagggaa ccctggtcac cgtctcctca 360
<210> 394
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 394
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Ser Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ala Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Leu Met Ser Phe Asp Gly Ser Asp Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Gly Tyr Asp Phe Trp Ser Gly Tyr Trp Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 395
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 395
ggattcacct tcagtaatta tggc 24
<210> 396
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 396
Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr Gly
1 5
<210> 397
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 397
atgtcatttg atggaagtga taaa 24
<210> 398
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 398
Met Ser Phe Asp Gly Ser Asp Lys
1 5
<210> 399
<211> 39
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 399
gcgaaaggat acgatttttg gagtggttat tgggactac 39
<210> 400
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 400
Ala Lys Gly Tyr Asp Phe Trp Ser Gly Tyr Trp Asp Tyr
1 5 10
<210> 401
<211> 351
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 401
gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtacaac ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt cacctttagc acctatgcca tgagctgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggcttgagtg ggtctcaact attagtggtc gttctgatat tacatacttc 180
gcagactccg tgaagggccg gtttaccgtc tccagagaca attccaagac cacgctatat 240
ctccaaatga acagtctgag agccgaggac acggccgtat attactgtgc gacagatgac 300
gacctgcccc ttgactactg gggccaggga accctggtca ccgtctcctc a 351
<210> 402
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 402
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Thr Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Thr Ile Ser Gly Arg Ser Asp Ile Thr Tyr Phe Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Val Ser Arg Asp Asn Ser Lys Thr Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Thr Asp Asp Asp Leu Pro Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 403
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 403
ggattcacct ttagcaccta tgcc 24
<210> 404
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 404
Gly Phe Thr Phe Ser Thr Tyr Ala
1 5
<210> 405
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 405
attagtggtc gttctgatat taca 24
<210> 406
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 406
Ile Ser Gly Arg Ser Asp Ile Thr
1 5
<210> 407
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 407
gcgacagatg acgacctgcc ccttgactac 30
<210> 408
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 408
Ala Thr Asp Asp Asp Leu Pro Leu Asp Tyr
1 5 10
<210> 409
<211> 354
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 409
caggtgcagc tggtgcagtc tgggactgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtgaaggtc 60
tcctgcaagg cttctggagg caccttcagc agatatactt tcagctgggt gcgacaggcc 120
cctggacaag ggcttgagtg gatgggaggg atcatcccta tctttggtac aacaaactac 180
gcacagaagt tccagggcag agtcacgatt accacggacg aatccacgag cacagtctac 240
atggagctga gcagcctgag atctgaggac acggccgtgt attattgtac cagaggaggt 300
cgatatggct ggttcgaccc ctggggccag ggaaccctgg tcaccgtctc ctca 354
<210> 410
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 410
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Thr Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Arg Tyr
20 25 30
Thr Phe Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Thr Asp Glu Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Arg Gly Gly Arg Tyr Gly Trp Phe Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 411
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 411
ggaggcacct tcagcagata tact 24
<210> 412
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 412
Gly Gly Thr Phe Ser Arg Tyr Thr
1 5
<210> 413
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 413
atcatcccta tctttggtac aaca 24
<210> 414
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 414
Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Thr
1 5
<210> 415
<211> 33
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 415
accagaggag gtcgatatgg ctggttcgac ccc 33
<210> 416
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 416
Thr Arg Gly Gly Arg Tyr Gly Trp Phe Asp Pro
1 5 10
<210> 417
<211> 403
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<221> source
<223> /注释="His-myc标记的人类MSR1抗体(细胞外结构域)"
<400> 417
His His His His His His Glu Gln Lys Leu Ile Ser Glu Glu Asp Leu
1 5 10 15
Gly Gly Glu Gln Lys Leu Ile Ser Glu Glu Asp Leu Lys Trp Glu Thr
20 25 30
Lys Asn Cys Ser Val Ser Ser Thr Asn Ala Asn Asp Ile Thr Gln Ser
35 40 45
Leu Thr Gly Lys Gly Asn Asp Ser Glu Glu Glu Met Arg Phe Gln Glu
50 55 60
Val Phe Met Glu His Met Ser Asn Met Glu Lys Arg Ile Gln His Ile
65 70 75 80
Leu Asp Met Glu Ala Asn Leu Met Asp Thr Glu His Phe Gln Asn Phe
85 90 95
Ser Met Thr Thr Asp Gln Arg Phe Asn Asp Ile Leu Leu Gln Leu Ser
100 105 110
Thr Leu Phe Ser Ser Val Gln Gly His Gly Asn Ala Ile Asp Glu Ile
115 120 125
Ser Lys Ser Leu Ile Ser Leu Asn Thr Thr Leu Leu Asp Leu Gln Leu
130 135 140
Asn Ile Glu Asn Leu Asn Gly Lys Ile Gln Glu Asn Thr Phe Lys Gln
145 150 155 160
Gln Glu Glu Ile Ser Lys Leu Glu Glu Arg Val Tyr Asn Val Ser Ala
165 170 175
Glu Ile Met Ala Met Lys Glu Glu Gln Val His Leu Glu Gln Glu Ile
180 185 190
Lys Gly Glu Val Lys Val Leu Asn Asn Ile Thr Asn Asp Leu Arg Leu
195 200 205
Lys Asp Trp Glu His Ser Gln Thr Leu Arg Asn Ile Thr Leu Ile Gln
210 215 220
Gly Pro Pro Gly Pro Pro Gly Glu Lys Gly Asp Arg Gly Pro Thr Gly
225 230 235 240
Glu Ser Gly Pro Arg Gly Phe Pro Gly Pro Ile Gly Pro Pro Gly Leu
245 250 255
Lys Gly Asp Arg Gly Ala Ile Gly Phe Pro Gly Ser Arg Gly Leu Pro
260 265 270
Gly Tyr Ala Gly Arg Pro Gly Asn Ser Gly Pro Lys Gly Gln Lys Gly
275 280 285
Glu Lys Gly Ser Gly Asn Thr Leu Thr Pro Phe Thr Lys Val Arg Leu
290 295 300
Val Gly Gly Ser Gly Pro His Glu Gly Arg Val Glu Ile Leu His Ser
305 310 315 320
Gly Gln Trp Gly Thr Ile Cys Asp Asp Arg Trp Glu Val Arg Val Gly
325 330 335
Gln Val Val Cys Arg Ser Leu Gly Tyr Pro Gly Val Gln Ala Val His
340 345 350
Lys Ala Ala His Phe Gly Gln Gly Thr Gly Pro Ile Trp Leu Asn Glu
355 360 365
Val Phe Cys Phe Gly Arg Glu Ser Ser Ile Glu Glu Cys Lys Ile Arg
370 375 380
Gln Trp Gly Thr Arg Ala Cys Ser His Ser Glu Asp Ala Gly Val Thr
385 390 395 400
Cys Thr Leu
<210> 418
<211> 403
<212> PRT
<213> 食蟹猴(Macaca fascicularis)
<220>
<221> source
<223> /注释="His-myc标记的猴MSR1抗体(细胞外结构域)"
<400> 418
His His His His His His Glu Gln Lys Leu Ile Ser Glu Glu Asp Leu
1 5 10 15
Gly Gly Glu Gln Lys Leu Ile Ser Glu Glu Asp Leu Lys Trp Glu Thr
20 25 30
Lys Asn Cys Ser Ile Gly Ser Thr Asn Ala Asp Asp Ile Thr Gln Ser
35 40 45
Leu Thr Gly Lys Gly Asn Asp Ser Glu Ala Glu Thr Arg Phe Gln Glu
50 55 60
Val Phe Met Glu His Met Ser Asn Met Glu Lys Arg Ile Gln His Ile
65 70 75 80
Ser Asp Met Glu Ala Asn Leu Ile Asp Ala Glu His Phe Gln Asn Phe
85 90 95
Ser Met Thr Thr Asp Gln Arg Phe Asn Asp Ile Leu Leu Gln Leu Ser
100 105 110
Thr Leu Phe Ser Ser Val Gln Gly His Gly Asn Thr Ile Asp Glu Ile
115 120 125
Ser Lys Ser Leu Ile Ser Leu Asn Thr Thr Leu Leu Asp Leu Gln Leu
130 135 140
Asn Ile Glu Lys Leu Asn Gly Lys Ile Gln Glu Lys Thr Phe Lys Gln
145 150 155 160
Gln Glu Glu Ile Ser Lys Leu Glu Glu His Val Tyr Asn Val Ser Ala
165 170 175
Glu Ile Met Ala Met Lys Glu Glu Gln Val His Leu Glu Gln Glu Ile
180 185 190
Lys Gly Glu Val Lys Val Leu Asn Asn Ile Thr Asn Asp Leu Arg Leu
195 200 205
Lys Asp Trp Glu His Ser Gln Thr Leu Arg Asn Ile Thr Leu Ile Gln
210 215 220
Gly Pro Pro Gly Pro Pro Gly Glu Lys Gly Asp Arg Gly Pro Thr Gly
225 230 235 240
Glu Ser Gly Pro Arg Gly Phe Pro Gly Pro Val Gly Pro Pro Gly Leu
245 250 255
Lys Gly Asp Arg Gly Ala Ile Gly Phe Pro Gly Ser Arg Gly Leu Pro
260 265 270
Gly Tyr Ala Gly Arg Pro Gly Asn Ser Gly Pro Lys Gly Gln Lys Gly
275 280 285
Glu Lys Gly Ser Gly Asn Thr Leu Thr Ser Phe Lys Lys Val Arg Leu
290 295 300
Val Gly Gly Ser Gly Pro His Glu Gly Arg Val Glu Ile Leu His Ser
305 310 315 320
Gly Gln Trp Gly Thr Ile Cys Asp Asp Arg Trp Glu Val Arg Val Gly
325 330 335
Gln Val Ile Cys Arg Ser Leu Gly Tyr Pro Gly Val Gln Ala Val His
340 345 350
Lys Ala Ala His Phe Gly Gln Gly Thr Gly Pro Ile Trp Leu Asn Glu
355 360 365
Val Tyr Cys Phe Gly Arg Glu Ser Ser Ile Glu Glu Cys Lys Ile Arg
370 375 380
Gln Trp Gly Thr Arg Thr Cys Ser His Ser Glu Asp Ala Gly Val Thr
385 390 395 400
Cys Thr Leu
<210> 419
<211> 360
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 419
gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ctggtcaagc cgggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt cactttcagt agatatagta tgaactgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtctcatcc attagcagta gcagtagtta catatactac 180
ggagacacag tgaagggccg attcaccatc tccagagaca acgccaagaa gtcactgtat 240
ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggctgtct attactgtgt gagagatcga 300
ggacagctcg tcctctactt tgactactgg ggccagggaa ccctggtcac cgtctcctca 360
<210> 420
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 420
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Tyr
20 25 30
Ser Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ser Ile Ser Ser Ser Ser Ser Tyr Ile Tyr Tyr Gly Asp Thr Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Lys Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Val Arg Asp Arg Gly Gln Leu Val Leu Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 421
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 421
ggattcactt tcagtagata tagt 24
<210> 422
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 422
Gly Phe Thr Phe Ser Arg Tyr Ser
1 5
<210> 423
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 423
attagcagta gcagtagtta cata 24
<210> 424
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 424
Ile Ser Ser Ser Ser Ser Tyr Ile
1 5
<210> 425
<211> 39
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 425
gtgagagatc gaggacagct cgtcctctac tttgactac 39
<210> 426
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 426
Val Arg Asp Arg Gly Gln Leu Val Leu Tyr Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 427
<211> 324
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 427
gacatccaga tgacccagtc tccagcctcc ctgtctacat ctataagaga cagagtcacc 60
atcacttgcc gggcaagtct gagcattagc agctttttaa attggtttca gcagagacca 120
gggaaagccc ctaaactcct gatctatgtt gcatccaatt tgcaaagtgg ggtcccatca 180
agattcagtg acagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag tctgcaacct 240
gaagattttg caacttacta ctgtcaacag aattacagta cccctccgat caccttcggc 300
caagggacac gactggagat taaa 324
<210> 428
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 428
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Thr Ser Ile Arg
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Leu Ser Ile Ser Ser Phe
20 25 30
Leu Asn Trp Phe Gln Gln Arg Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Val Ala Ser Asn Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Asp
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Asn Tyr Ser Thr Pro Pro
85 90 95
Ile Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 429
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 429
ctgagcatta gcagcttt 18
<210> 430
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 430
Leu Ser Ile Ser Ser Phe
1 5
<210> 431
<211> 9
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 431
gttgcatcc 9
<210> 432
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 432
Val Ala Ser
1
<210> 433
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 433
caacagaatt acagtacccc tccgatcacc 30
<210> 434
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 434
Gln Gln Asn Tyr Ser Thr Pro Pro Ile Thr
1 5 10
<210> 435
<211> 369
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 435
caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60
tcctgtgcgg gctctggatt caccttcagt agctatggct tgcactgggt ccgccaggct 120
ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcagtt atatcatatg atggaagtaa taaatattat 180
gcagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240
ctgcaaatga gcagcctgag agctgaggac acggctgtgt attactgtgc gaaagatcga 300
cttgtacgat attctgactg gccattcttt gactattggg gccagggaac cctggtcacc 360
gtctcctca 369
<210> 436
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 436
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Gly Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Gly Leu His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Ser Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Asp Arg Leu Val Arg Tyr Ser Asp Trp Pro Phe Phe Asp Tyr
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 437
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 437
ggattcacct tcagtagcta tggc 24
<210> 438
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 438
Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Gly
1 5
<210> 439
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 439
atatcatatg atggaagtaa taaa 24
<210> 440
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 440
Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys
1 5
<210> 441
<211> 48
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 441
gcgaaagatc gacttgtacg atattctgac tggccattct ttgactat 48
<210> 442
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 442
Ala Lys Asp Arg Leu Val Arg Tyr Ser Asp Trp Pro Phe Phe Asp Tyr
1 5 10 15
<210> 443
<211> 324
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 443
gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgcc gggcaagtca aaacattacc agctatttga attgctatca gcagaaacca 120
gggaaagccc ctaaactcct gatctatgct gcatccagtt tgyaaagtgg ggtcccatca 180
aggttcagtg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag tctgcaacct 240
gaagattttg caacttacta ctgtcaacag agtttcagta gtcctccgat caccttcggc 300
caagggacac gactggagat taca 324
<210> 444
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<220>
<221> MOD_RES
<222> (55)..(55)
<223> 任何氨基酸
<400> 444
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asn Ile Thr Ser Tyr
20 25 30
Leu Asn Cys Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Xaa Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Phe Ser Ser Pro Pro
85 90 95
Ile Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Thr
100 105
<210> 445
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 445
caaaacatta ccagctat 18
<210> 446
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 446
Gln Asn Ile Thr Ser Tyr
1 5
<210> 447
<211> 9
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 447
gctgcatcc 9
<210> 448
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 448
Ala Ala Ser
1
<210> 449
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 449
caacagagtt tcagtagtcc tccgatcacc 30
<210> 450
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 450
Gln Gln Ser Phe Ser Ser Pro Pro Ile Thr
1 5 10
<210> 451
<211> 348
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 451
caggtgcagc tgcaggagtc gggcccagga ctggtgaagc cttcggagac cctgtccctc 60
acctgcactg tctctggtgg ctccatcagt agttactact ggagctggat ccggcagccc 120
ccagggaagg gactggaatg gattgggtac atctattaca gtgggagcgc caactacaac 180
ccctccctca agagtcgagt caccatatca gtagacacgt ccaagaacca gttctccctg 240
aagctaagct ctgtgaccgc tgcggacacg gccgtgtatt actgtgtgag agaccgggac 300
ctactccttg accactgggg ccagggaacc ctggtcaccg tctcctca 348
<210> 452
<211> 116
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 452
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Tyr
20 25 30
Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Ala Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu
65 70 75 80
Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Val
85 90 95
Arg Asp Arg Asp Leu Leu Leu Asp His Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser
115
<210> 453
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 453
ggtggctcca tcagtagtta ctac 24
<210> 454
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 454
Gly Gly Ser Ile Ser Ser Tyr Tyr
1 5
<210> 455
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 455
atctattaca gtgggagcgc c 21
<210> 456
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 456
Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Ala
1 5
<210> 457
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 457
gtgagagacc gggacctact ccttgaccac 30
<210> 458
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 458
Val Arg Asp Arg Asp Leu Leu Leu Asp His
1 5 10
<210> 459
<211> 324
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 459
gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgcc gggcaagtca gagcattagc agctatttaa attggtatca gcagaaacca 120
gggaaagccc ctaagctcct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180
aggttcagtg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag tctgcaacct 240
gaagattttg caacttacta ctgtcaacag agttacagta cccctccgat caccttcggc 300
caagggacac gactggagat taaa 324
<210> 460
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 460
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Pro
85 90 95
Ile Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 461
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 461
cagagcatta gcagctat 18
<210> 462
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 462
Gln Ser Ile Ser Ser Tyr
1 5
<210> 463
<211> 9
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 463
gctgcatcc 9
<210> 464
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 464
Ala Ala Ser
1
<210> 465
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 465
caacagagtt acagtacccc tccgatcacc 30
<210> 466
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 466
Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Pro Ile Thr
1 5 10
<210> 467
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释="人工序列的描述：合成肽"
<400> 467
Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Ser Arg Ala Asn Asn Asn Tyr Tyr Val
1 5 10 15
Ala
<210> 468
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释="人工序列的描述：合成肽"
<400> 468
Trp Ala Ser Thr Arg Glu Phe
1 5
<210> 469
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释="人工序列的描述：合成肽"
<400> 469
Gln Gln Tyr Tyr Thr Ser Arg Arg Thr
1 5
<210> 470
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释="人工序列的描述：合成肽"
<400> 470
Asp Tyr Tyr Met His
1 5
<210> 471
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释="人工序列的描述：合成肽"
<400> 471
Trp Ile Asn Pro Lys Ser Gly Gly Thr Asn Tyr Ala Gln Arg Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 472
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释="人工序列的描述：合成肽"
<400> 472
Asp Cys Gly Ser Gly Gly Leu Arg Asp Phe
1 5 10
<210> 473
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释="人工序列的描述：合成肽"
<400> 473
Arg Ser Asn Gln Asn Leu Leu Ser Ser Ser Asn Asn Asn Tyr Leu Ala
1 5 10 15
<210> 474
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释="人工序列的描述：合成肽"
<400> 474
Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser
1 5
<210> 475
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释="人工序列的描述：合成肽"
<400> 475
Gln Gln Tyr Tyr Ala Asn Pro Arg Thr
1 5
<210> 476
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释="人工序列的描述：合成肽"
<400> 476
Asp Tyr Tyr Ile His
1 5
<210> 477
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释="人工序列的描述：合成肽"
<400> 477
Trp Ile Asn Pro Asn Thr Gly Gly Thr Tyr Tyr Ala Gln Lys Phe Arg
1 5 10 15
Asp
<210> 478
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释="人工序列的描述：合成肽"
<400> 478
Asp Cys Gly Arg Gly Gly Leu Arg Asp Ile
1 5 10
<210> 479
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释="人工序列的描述：合成肽"
<400> 479
Lys Ser Asn Gln Asn Val Leu Ala Ser Ser Asn Asp Lys Asn Tyr Leu
1 5 10 15
Ala
<210> 480
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释="人工序列的描述：合成肽"
<400> 480
Trp Ala Ser Ile Arg Glu Ser
1 5
<210> 481
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释="人工序列的描述：合成肽"
<400> 481
Gln Gln Tyr Tyr Thr Asn Pro Arg Thr
1 5
<210> 482
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释="人工序列的描述：合成肽"
<400> 482
Asp Tyr Tyr Ile His
1 5
<210> 483
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释="人工序列的描述：合成肽"
<400> 483
Trp Ile Asn Pro Asn Thr Gly Gly Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 484
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释="人工序列的描述：合成肽"
<400> 484
Asp Cys Gly Asn Ala Gly Leu Arg Asp Ile
1 5 10
<210> 485
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释="人工序列的描述：合成肽"
<400> 485
Lys Ser Ser Gln Asn Val Leu Tyr Ser Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu
1 5 10 15
Ala
<210> 486
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释="人工序列的描述：合成肽"
<400> 486
Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser
1 5
<210> 487
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释="人工序列的描述：合成肽"
<400> 487
Gln Gln Tyr Tyr Thr Ser Pro Pro Tyr Thr
1 5 10
<210> 488
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释="人工序列的描述：合成肽"
<400> 488
Ser Tyr Trp Ile Gly
1 5
<210> 489
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释="人工序列的描述：合成肽"
<400> 489
Ile Ile His Pro Gly Asp Ser Lys Thr Arg Tyr Ser Pro Ser Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 490
<211> 29
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释="人工序列的描述：合成肽"
<400> 490
Leu Tyr Cys Ser Gly Gly Ser Cys Tyr Ser Asp Arg Ala Phe Ser Ser
1 5 10 15
Leu Gly Ala Gly Gly Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Met Gly Val
20 25
<210> 491
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释="人工序列的描述：合成多肽"
<400> 491
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Ser Arg
20 25 30
Ala Asn Asn Asn Tyr Tyr Val Ala Trp Tyr Gln His Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Phe Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Asn Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln
85 90 95
Tyr Tyr Thr Ser Arg Arg Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile
100 105 110
Lys
<210> 492
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释="人工序列的描述：合成多肽"
<400> 492
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Arg Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Asn Pro Lys Ser Gly Gly Thr Asn Tyr Ala Gln Arg Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Gly Asp Thr Ser Ile Ser Ala Ala Tyr
65 70 75 80
Met Asp Leu Ala Ser Leu Thr Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Val Lys Asp Cys Gly Ser Gly Gly Leu Arg Asp Phe Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 493
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释="人工序列的描述：合成多肽"
<400> 493
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ser Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Arg Ser Asn Gln Asn Leu Leu Ser Ser
20 25 30
Ser Asn Asn Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro
35 40 45
Leu Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile
65 70 75 80
Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr
85 90 95
Tyr Ala Asn Pro Arg Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 494
<211> 119
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
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<400> 494
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Arg Val Glu Val Lys Arg Pro Gly Thr
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Thr Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Tyr Ile His Trp Val Arg Leu Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Leu Met
35 40 45
Gly Trp Ile Asn Pro Asn Thr Gly Gly Thr Tyr Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Arg Asp Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ala Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Glu Met Ser Ser Leu Thr Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Asp Cys Gly Arg Gly Gly Leu Arg Asp Ile Trp Gly Pro Gly
100 105 110
Thr Met Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 495
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释="人工序列的描述：合成多肽"
<400> 495
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Asn Gln Asn Val Leu Ala Ser
20 25 30
Ser Asn Asp Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Phe Gln His Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Leu Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Ile Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Arg Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln
85 90 95
Tyr Tyr Thr Asn Pro Arg Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Phe
100 105 110
Asn
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<211> 119
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释="人工序列的描述：合成多肽"
<400> 496
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Thr
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Tyr Ile His Trp Val Arg Leu Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Leu Met
35 40 45
Gly Trp Ile Asn Pro Asn Thr Gly Gly Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ala Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Thr Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Asp Cys Gly Asn Ala Gly Leu Arg Asp Ile Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115
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<211> 114
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释="人工序列的描述：合成多肽"
<400> 497
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Asn Val Leu Tyr Ser
20 25 30
Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln
85 90 95
Tyr Tyr Thr Ser Pro Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu
100 105 110
Ile Glu
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<220>
<221> source
<223> /注释="人工序列的描述：合成多肽"
<400> 498
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Ile Gly Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Ile Ile His Pro Gly Asp Ser Lys Thr Arg Tyr Ser Pro Ser Phe
50 55 60
Gln Gly Gln Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Trp Asn Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Leu Tyr Cys Ser Gly Gly Ser Cys Tyr Ser Asp Arg Ala Phe
100 105 110
Ser Ser Leu Gly Ala Gly Gly Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Met Gly Val Trp
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Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
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<220>
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Arg Ala Ser Gln Thr Ile Ser Gly Trp Leu Ala
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
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Lys Ala Ser Thr Leu Glu Ser
1 5
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
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<223> /注释="人工序列的描述：合成肽"
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Gln Gln Tyr Lys Ser Tyr Ser Phe Asn
1 5
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<211> 5
<212> PRT
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<220>
<221> source
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Ser Tyr Asp Ile Asn
1 5
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<211> 17
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
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<400> 503
Trp Met Asn Ala Asn Ser Gly Asn Thr Gly Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
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<211> 15
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Ser Ser Ile Leu Val Arg Gly Ala Leu Gly Arg Tyr Phe Asp Leu
1 5 10 15
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Arg Ala Ser Gln Thr Ile Ser Gly Trp Leu Ala
1 5 10
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<211> 7
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<220>
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Lys Ala Ser Thr Leu Glu Ser
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Gln Gln Tyr Lys Ser Tyr Ser Phe Asn
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<220>
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Ser Tyr Asp Ile Asn
1 5
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<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
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<400> 509
Trp Met Asn Ala Asn Ser Gly Asn Thr Gly Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
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Ser Ser Ile Leu Val Arg Gly Ala Leu Gly Arg Tyr Phe Asp Leu
1 5 10 15
<210> 511
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
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<223> /注释="人工序列的描述：合成肽"
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Arg Ala Ser Gln Phe Val Ser Arg Thr Ser Leu Ala
1 5 10
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<211> 7
<212> PRT
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<220>
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Glu Thr Ser Ser Arg Ala Thr
1 5
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<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
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His Lys Tyr Gly Ser Gly Pro Arg Thr
1 5
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<211> 5
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
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Asn Tyr Asp Phe Ile
1 5
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<211> 17
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
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<400> 515
Trp Met Asn Pro Asn Ser Tyr Asn Thr Gly Tyr Gly Gln Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
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Ala Val Arg Gly Gln Leu Leu Ser Glu Tyr
1 5 10
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<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
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Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser Tyr Leu Ala
1 5 10
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<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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Asp Ala Ser Ser Arg Ala Thr
1 5
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<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
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Gln Lys Tyr Gly Ser Thr Pro Arg Pro
1 5
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<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
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<400> 520
Ser Tyr Asp Ile Asn
1 5
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<211> 17
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
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Trp Met Asn Pro Asn Ser Gly Asn Thr Asn Tyr Ala Gln Arg Phe Gln
1 5 10 15
Gly
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<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
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<223> /注释="人工序列的描述：合成肽"
<400> 522
Glu Arg Trp Ser Lys Asp Thr Gly His Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp
1 5 10 15
Val
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<220>
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Arg Ala Ser Leu Asp Ile Thr Asn His Leu Ala
1 5 10
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
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Glu Ala Ser Ile Leu Gln Ser
1 5
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<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
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<400> 525
Glu Lys Cys Asn Ser Thr Pro Arg Thr
1 5
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<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
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<400> 526
Asn Tyr Asp Ile Asn
1 5
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<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
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<400> 527
Trp Met Asn Pro Ser Ser Gly Arg Thr Gly Tyr Ala Pro Lys Phe Arg
1 5 10 15
Gly
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<211> 18
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
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Gly Gly Gly Tyr Tyr Asp Ser Ser Gly Asn Tyr His Ile Ser Gly Leu
1 5 10 15
Asp Val
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<211> 12
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
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Arg Ala Ser Gln Ser Val Gly Ala Ile Tyr Leu Ala
1 5 10
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<211> 7
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
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Gly Val Ser Asn Arg Ala Thr
1 5
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<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
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Gln Leu Tyr Thr Ser Ser Arg Ala Leu Thr
1 5 10
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<211> 5
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
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Ala Tyr Ala Met Asn
1 5
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<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释="人工序列的描述：合成肽"
<400> 533
Ser Ile Thr Lys Asn Ser Asp Ser Leu Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
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<211> 10
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
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<400> 534
Leu Ala Ala Arg Ile Met Ala Thr Asp Tyr
1 5 10
<210> 535
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
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<223> /注释="人工序列的描述：合成肽"
<400> 535
Arg Ala Ser Gln Gly Ile Arg Asn Gly Leu Gly
1 5 10
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<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
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Pro Ala Ser Thr Leu Glu Ser
1 5
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<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
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Leu Gln Asp His Asn Tyr Pro Pro Thr
1 5
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<211> 5
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
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Tyr Tyr Ser Met Ile
1 5
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
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<400> 539
Ser Ile Asp Ser Ser Ser Arg Tyr Leu Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
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<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
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<223> /注释="人工序列的描述：合成肽"
<400> 540
Asp Gly Asp Asp Ile Leu Ser Val Tyr Arg Gly Ser Gly Arg Pro Phe
1 5 10 15
Asp Tyr
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<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
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Arg Ala Ser Gln Gly Ile Arg Asn Gly Leu Gly
1 5 10
<210> 542
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释="人工序列的描述：合成肽"
<400> 542
Pro Ala Ser Thr Leu Glu Ser
1 5
<210> 543
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释="人工序列的描述：合成肽"
<400> 543
Leu Gln Asp His Asn Tyr Pro Pro Ser
1 5
<210> 544
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释="人工序列的描述：合成肽"
<400> 544
Tyr Tyr Ser Met Ile
1 5
<210> 545
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释="人工序列的描述：合成肽"
<400> 545
Ser Ile Asp Ser Ser Ser Arg Tyr Arg Tyr Tyr Thr Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 546
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
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<223> /注释="人工序列的描述：合成肽"
<400> 546
Asp Gly Asp Asp Ile Leu Ser Val Tyr Gln Gly Ser Gly Arg Pro Phe
1 5 10 15
Asp Tyr
<210> 547
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
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Arg Ala Ser Gln Ser Val Arg Thr Asn Val Ala
1 5 10
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<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释="人工序列的描述：合成肽"
<400> 548
Gly Ala Ser Thr Arg Ala Ser
1 5
<210> 549
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释="人工序列的描述：合成肽"
<400> 549
Leu Gln Tyr Asn Thr Trp Pro Arg Thr
1 5
<210> 550
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释="人工序列的描述：合成肽"
<400> 550
Thr Asn Asp Met Ser
1 5
<210> 551
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释="人工序列的描述：合成肽"
<400> 551
Thr Ile Ile Gly Ile Asp Asp Thr Thr His Tyr Ala Asp Ser Val Arg
1 5 10 15
Gly
<210> 552
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释="人工序列的描述：合成肽"
<400> 552
Asn Ser Gly Ile Tyr Ser Phe
1 5
<210> 553
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释="人工序列的描述：合成肽"
<400> 553
Arg Ala Ser Gln Asp Ile Gly Ser Ser Leu Ala
1 5 10
<210> 554
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释="人工序列的描述：合成肽"
<400> 554
Ala Thr Ser Thr Leu Gln Ser
1 5
<210> 555
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释="人工序列的描述：合成肽"
<400> 555
Gln Gln Leu Asn Asn Tyr Val His Ser
1 5
<210> 556
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
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<400> 556
Asp Tyr Ala Met Gly
1 5
<210> 557
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释="人工序列的描述：合成肽"
<400> 557
Val Val Thr Gly His Ser Tyr Arg Thr His Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 558
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释="人工序列的描述：合成肽"
<400> 558
Arg Ile Trp Ser Tyr Gly Asp Asp Ser Phe Asp Val
1 5 10
<210> 559
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释="人工序列的描述：合成肽"
<400> 559
Arg Ala Ser Gln Ser Ile Gly Asp Arg Leu Ala
1 5 10
<210> 560
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释="人工序列的描述：合成肽"
<400> 560
Trp Ala Ser Asn Leu Glu Gly
1 5
<210> 561
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释="人工序列的描述：合成肽"
<400> 561
Gln Gln Tyr Lys Ser Gln Trp Ser
1 5
<210> 562
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释="人工序列的描述：合成肽"
<400> 562
Ser Tyr Ala Met Asn
1 5
<210> 563
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释="人工序列的描述：合成肽"
<400> 563
Tyr Ile Ser Ser Ile Glu Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly
1 5 10 15
<210> 564
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释="人工序列的描述：合成肽"
<400> 564
Asp Arg Leu Val Asp Val Pro Leu Ser Ser Pro Asn Ser
1 5 10
<210> 565
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释="人工序列的描述：合成肽"
<400> 565
Lys Ser Ser Gln Ser Ile Phe Arg Thr Ser Arg Asn Lys Asn Leu Leu
1 5 10 15
Asn
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<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释="人工序列的描述：合成肽"
<400> 566
Trp Ala Ser Thr Arg Lys Ser
1 5
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<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释="人工序列的描述：合成肽"
<400> 567
Gln Gln Tyr Phe Ser Pro Pro Tyr Thr
1 5
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<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
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<400> 568
Ser Phe Trp Met His
1 5
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<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释="人工序列的描述：合成肽"
<400> 569
Phe Thr Asn Asn Glu Gly Thr Thr Thr Ala Tyr Ala Asp Ser Val Arg
1 5 10 15
Gly
<210> 570
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释="人工序列的描述：合成肽"
<400> 570
Gly Asp Gly Gly Leu Asp Asp
1 5
<210> 571
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释="人工序列的描述：合成肽"
<400> 571
Arg Ala Ser Gln Phe Thr Asn His Tyr Leu Asn
1 5 10
<210> 572
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释="人工序列的描述：合成肽"
<400> 572
Val Ala Ser Asn Leu Gln Ser
1 5
<210> 573
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释="人工序列的描述：合成肽"
<400> 573
Gln Gln Ser Tyr Arg Thr Pro Tyr Thr
1 5
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<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释="人工序列的描述：合成肽"
<400> 574
Ser Gly Tyr Tyr Asn
1 5
<210> 575
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释="人工序列的描述：合成肽"
<400> 575
Tyr Ile Leu Ser Gly Ala His Thr Asp Ile Lys Ala Ser Leu Gly Ser
1 5 10 15
<210> 576
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 576
Ser Gly Val Tyr Ser Lys Tyr Ser Leu Asp Val
1 5 10
<210> 577
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“人工序列的描述：合成多肽”
<400> 577
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ile Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Thr Ile Ser Gly Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Ala Glu Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Lys Ala Ser Thr Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Asp Asp Phe Gly Ile Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Lys Ser Tyr Ser Phe
85 90 95
Asn Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 578
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“人工序列的描述：合成多肽”
<220>
<221> VARIANT
<222> (1)..(1)
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<220>
<221> VARIANT
<222> (2)..(2)
<223> /替换="Ile"或"Val"
<220>
<221> SITE
<222> (1)..(124)
<223> /注释="序列中给定变体残基相对于变体位置的注释中的那些不具有偏好"
<400> 578
Gln Met Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Glu Ala Ser Gly Tyr Thr Leu Thr Ser Tyr
20 25 30
Asp Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Thr Gly Gln Gly Pro Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Met Asn Ala Asn Ser Gly Asn Thr Gly Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Leu Thr Gly Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ser Ser Ile Leu Val Arg Gly Ala Leu Gly Arg Tyr Phe Asp
100 105 110
Leu Trp Gly Arg Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 579
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“人工序列的描述：合成多肽”
<400> 579
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ile Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Thr Ile Ser Gly Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Ala Glu Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Lys Ala Ser Thr Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Asp Asp Phe Gly Ile Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Lys Ser Tyr Ser Phe
85 90 95
Asn Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 580
<211> 453
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“人工序列的描述：合成多肽”
<400> 580
Gln Met Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Glu Ala Ser Gly Tyr Thr Leu Thr Ser Tyr
20 25 30
Asp Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Thr Gly Gln Gly Pro Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Met Asn Ala Asn Ser Gly Asn Thr Gly Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Leu Thr Gly Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ser Ser Ile Leu Val Arg Gly Ala Leu Gly Arg Tyr Phe Asp
100 105 110
Leu Trp Gly Arg Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys
115 120 125
Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly
130 135 140
Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro
145 150 155 160
Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr
165 170 175
Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val
180 185 190
Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn
195 200 205
Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro
210 215 220
Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu
225 230 235 240
Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
245 250 255
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
260 265 270
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
275 280 285
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn
290 295 300
Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp
305 310 315 320
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro
325 330 335
Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu
340 345 350
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn
355 360 365
Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
370 375 380
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
385 390 395 400
Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
405 410 415
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
420 425 430
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
435 440 445
Ser Leu Ser Pro Gly
450
<210> 581
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“人工序列的描述：合成多肽”
<400> 581
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ile Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Thr Ile Ser Gly Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Ala Glu Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Lys Ala Ser Thr Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Asp Asp Phe Gly Ile Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Lys Ser Tyr Ser Phe
85 90 95
Asn Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Cys Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 582
<211> 453
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“人工序列的描述：合成多肽”
<220>
<221> VARIANT
<222> (2)..(2)
<223> /替换="Ile"或"Val"
<220>
<221> SITE
<222> (1)..(453)
<223> /注释="序列中给定变体残基相对于变体位置的注释中的那些不具有偏好"
<400> 582
Glu Met Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Glu Ala Ser Gly Tyr Thr Leu Thr Ser Tyr
20 25 30
Asp Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Thr Gly Gln Gly Pro Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Met Asn Ala Asn Ser Gly Asn Thr Gly Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Leu Thr Gly Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ser Ser Ile Leu Val Arg Gly Ala Leu Gly Arg Tyr Phe Asp
100 105 110
Leu Trp Gly Arg Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys
115 120 125
Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly
130 135 140
Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro
145 150 155 160
Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr
165 170 175
Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val
180 185 190
Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn
195 200 205
Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro
210 215 220
Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu
225 230 235 240
Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
245 250 255
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
260 265 270
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
275 280 285
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn
290 295 300
Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp
305 310 315 320
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro
325 330 335
Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu
340 345 350
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn
355 360 365
Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
370 375 380
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
385 390 395 400
Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
405 410 415
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
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Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
435 440 445
Ser Leu Ser Pro Gly
450
<210> 583
<211> 453
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“人工序列的描述：合成多肽”
<220>
<221> VARIANT
<222> (2)..(2)
<223> /替换="Ile"或"Val"
<220>
<221> SITE
<222> (1)..(453)
<223> /注释="序列中给定变体残基相对于变体位置的注释中的那些不具有偏好"
<400> 583
Glu Met Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Glu Ala Ser Gly Tyr Thr Leu Thr Ser Tyr
20 25 30
Asp Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Thr Gly Gln Gly Pro Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Met Asn Ala Asn Ser Gly Asn Thr Gly Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Leu Thr Gly Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
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Ala Arg Ser Ser Ile Leu Val Arg Gly Ala Leu Gly Arg Tyr Phe Asp
100 105 110
Leu Trp Gly Arg Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Cys Ser Thr Lys
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Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly
130 135 140
Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro
145 150 155 160
Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr
165 170 175
Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val
180 185 190
Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn
195 200 205
Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro
210 215 220
Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu
225 230 235 240
Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
245 250 255
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
260 265 270
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
275 280 285
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn
290 295 300
Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp
305 310 315 320
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro
325 330 335
Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu
340 345 350
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn
355 360 365
Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
370 375 380
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
385 390 395 400
Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
405 410 415
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
420 425 430
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
435 440 445
Ser Leu Ser Pro Gly
450
<210> 584
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 584
Gly Glu Gly Gly Leu Asp Asp
1 5
<210> 585
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“人工序列的描述：合成多肽”
<400> 585
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Ile Phe Arg Thr
20 25 30
Ser Arg Asn Lys Asn Leu Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Arg Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Arg Leu Leu Ile His Trp Ala Ser Thr Arg Lys Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Phe Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
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Ile Thr Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Ile Tyr Tyr Cys Gln Gln
85 90 95
Tyr Phe Ser Pro Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile
100 105 110
Lys
<210> 586
<211> 116
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“人工序列的描述：合成多肽”
<400> 586
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ser Ala Ser Gly Phe Ser Phe Asn Ser Phe
20 25 30
Trp Met His Trp Val Arg Gln Val Pro Gly Lys Gly Leu Val Trp Ile
35 40 45
Ser Phe Thr Asn Asn Glu Gly Thr Thr Thr Ala Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Arg Gly Arg Phe Ile Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Glu Met Asn Asn Leu Arg Gly Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Asp Gly Gly Leu Asp Asp Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser
115
<210> 587
<211> 220
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“人工序列的描述：合成多肽”
<400> 587
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Ile Phe Arg Thr
20 25 30
Ser Arg Asn Lys Asn Leu Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Arg Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Arg Leu Leu Ile His Trp Ala Ser Thr Arg Lys Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Phe Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Thr Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Ile Tyr Tyr Cys Gln Gln
85 90 95
Tyr Phe Ser Pro Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile
100 105 110
Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp
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Trp Met His Trp Val Arg Gln Val Pro Gly Lys Gly Leu Val Trp Ile
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Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Asp Leu Val Gln Pro Gly Gly
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Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
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Ala Met Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu
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Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val
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Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala
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Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val
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<220>
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Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Gly
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Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
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Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
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Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala
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Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
225 230 235 240
Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
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<223> /注释=“人工序列的描述：合成多肽”
<400> 606
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
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Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
20 25 30
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
35 40 45
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
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Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
65 70 75 80
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
85 90 95
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
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<210> 607
<211> 107
<212> PRT
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<220>
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<400> 607
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
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Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
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Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
35 40 45
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
50 55 60
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65 70 75 80
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
85 90 95
Pro Cys Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
100 105
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
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<223> /注释=“人工序列的描述：合成多肽”
<400> 608
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ser Ala Ser Gly Phe Ser Phe Asn Ser Phe
20 25 30
Trp Met His Trp Val Arg Gln Val Pro Gly Lys Gly Leu Val Trp Ile
35 40 45
Ser Phe Thr Asn Asn Glu Gly Thr Thr Thr Ala Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Arg Gly Arg Phe Ile Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Glu Met Asn Asn Leu Arg Gly Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Glu Gly Gly Leu Asp Asp Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
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Thr Val Ser Ser
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
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<223> /注释=“人工序列的描述：合成多肽”
<400> 609
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ser Ala Ser Gly Phe Ser Phe Asn Ser Phe
20 25 30
Trp Met His Trp Val Arg Gln Val Pro Gly Lys Gly Leu Val Trp Ile
35 40 45
Ser Phe Thr Asn Asn Glu Gly Thr Thr Thr Ala Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Arg Gly Arg Phe Ile Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Glu Met Asn Asn Leu Arg Gly Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
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Ala Arg Gly Glu Gly Gly Leu Asp Asp Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
100 105 110
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Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu
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Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly
145 150 155 160
Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser
165 170 175
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Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr
195 200 205
Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr
210 215 220
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe
225 230 235 240
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
245 250 255
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val
260 265 270
Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
275 280 285
Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
290 295 300
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
305 310 315 320
Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
325 330 335
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
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Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val
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Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
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Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
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Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
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Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
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Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
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Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ile Leu Ser Ala Ser Val Gly
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Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Thr Ile Ser Gly Trp
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Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Ala Glu Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Lys Ala Ser Thr Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
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Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
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Asp Asp Phe Gly Ile Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Lys Ser Tyr Ser Phe
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Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
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Phe Asn Arg Gly Glu Cys
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Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
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Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Phe Val Ser Arg Thr
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Ser Leu Ala Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Arg Leu Leu
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Ile Tyr Glu Thr Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser
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Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
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<220>
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Glu Thr Thr Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
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Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser
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Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Lys Val Leu
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Ile Tyr Asp Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser
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Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys
195 200 205
Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
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<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
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<223> /注释=“人工序列的描述：合成多肽”
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Asp Val Val Met Thr Gln Ser Ser Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
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Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Leu Asp Ile Thr Asn His
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Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Glu Leu Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Glu Ala Ser Ile Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
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65 70 75 80
Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Glu Lys Cys Asn Ser Thr Pro Arg
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Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
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Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
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Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
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Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
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Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
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Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
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Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
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<220>
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Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
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Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Gly Ala Ile
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Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Glu Pro Gly Arg Ala Pro Thr Leu Leu
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Ala Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val
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115 120 125
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Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr
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Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
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<220>
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<223> /注释=“人工序列的描述：合成多肽”
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Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
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Leu Gly Trp Tyr Gln Gln Thr Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
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65 70 75 80
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Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
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Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
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195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 616
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
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Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
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Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Arg Asn Gly
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Leu Gly Trp Tyr Gln Gln Ile Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
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Tyr Pro Ala Ser Thr Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
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Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
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Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
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Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
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Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly
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Val Ala Trp Tyr Arg His Lys Ala Gly Gln Ala Pro Met Ile Leu Val
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Phe Asn Arg Gly Glu Cys
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Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly
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Phe Asn Arg Gly Glu Cys
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Glu Thr Thr Leu Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly
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Asn Arg Gly Glu Cys
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Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
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210
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Leu Trp Gly Arg Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys
115 120 125
Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly
130 135 140
Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro
145 150 155 160
Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr
165 170 175
Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val
180 185 190
Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn
195 200 205
Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro
210 215 220
Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu
225 230 235 240
Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
245 250 255
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
260 265 270
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
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Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn
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Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
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420 425 430
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
435 440 445
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450
<210> 622
<211> 448
<212> PRT
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<220>
<221> source
<223> /注释=“人工序列的描述：合成多肽”
<400> 622
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20 25 30
Asp Phe Ile Trp Val Arg Gln Ala Thr Gly Gln Gly Pro Glu Trp Met
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Gly Trp Met Asn Pro Asn Ser Tyr Asn Thr Gly Tyr Gly Gln Lys Phe
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65 70 75 80
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Ala Arg Ala Val Arg Gly Gln Leu Leu Ser Glu Tyr Trp Gly Gln Gly
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Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe
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Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu
130 135 140
Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp
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165 170 175
Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser
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Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro
195 200 205
Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys
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Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro
225 230 235 240
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
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Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
275 280 285
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Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
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Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys
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<211> 455
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<220>
<221> source
<223> /注释=“人工序列的描述：合成多肽”
<400> 623
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
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Ser Val Lys Val Ser Cys Arg Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
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Asp Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
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Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys
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Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
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<210> 624
<211> 456
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<220>
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<223> /注释=“人工序列的描述：合成多肽”
<400> 624
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Arg Pro Gly Ala
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Ser Val Lys Val Ser Cys Glu Ala Ser Gly Tyr Thr Val Ser Asn Tyr
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Asp Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Thr Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
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Gly Trp Met Asn Pro Ser Ser Gly Arg Thr Gly Tyr Ala Pro Lys Phe
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Met Glu Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
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Ala Arg Gly Gly Gly Tyr Tyr Asp Ser Ser Gly Asn Tyr His Ile Ser
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Gly Leu Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala
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Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser
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Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe
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Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly
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Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr
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Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro
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Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
245 250 255
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
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Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
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Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
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Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
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<210> 625
<211> 448
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“人工序列的描述：合成多肽”
<400> 625
Gln Ile Thr Leu Lys Glu Ser Gly Gly Gly Leu Ile Lys Pro Gly Gly
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Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Thr Ser Gly Phe Pro Phe Ser Ala Tyr
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Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp
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Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
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Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys
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Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
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Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440 445
<210> 626
<211> 456
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“人工序列的描述：合成多肽”
<400> 626
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Glu
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Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Phe Asp Tyr Tyr
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Ser Met Ile Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
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Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser
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Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
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Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
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Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
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<210> 627
<211> 456
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“人工序列的描述：合成多肽”
<400> 627
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Gly Gly Leu Val Asn Pro Gly Glu
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Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Phe Asn Tyr Tyr
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<210> 628
<211> 445
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
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<400> 628
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Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu
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Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr
195 200 205
Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr
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245 250 255
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val
260 265 270
Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
275 280 285
Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
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<223> /注释=“合成的”
<400> 629
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tcctgtacag cctctggatt ctcctttagc agctatgtca tgagctgggt ccgccagtct 120
cctgggaagg ggctggagtg ggtctcagct attggtggta gtggtactag tacatactac 180
agagactccg tgaagggccg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacactgaat 240
ctgcaaatga gcagcctgag agccgaggac acggccgtat attactgtgc gagagatggg 300
ctggggcacc gggactactg gggccaggga accctggtca ccgtctcctc a 351
<210> 630
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 630
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35 40 45
Ser Ala Ile Gly Gly Ser Gly Thr Ser Thr Tyr Tyr Arg Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Asn
65 70 75 80
Leu Gln Met Ser Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Gly Leu Gly His Arg Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 631
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 631
ggattctcct ttagcagcta tgtc 24
<210> 632
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 632
Gly Phe Ser Phe Ser Ser Tyr Val
1 5
<210> 633
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 633
attggtggta gtggtactag taca 24
<210> 634
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 634
Ile Gly Gly Ser Gly Thr Ser Thr
1 5
<210> 635
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 635
gcgagagatg ggctggggca ccgggactac 30
<210> 636
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 636
Ala Arg Asp Gly Leu Gly His Arg Asp Tyr
1 5 10
<210> 637
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 637
gacatccaga tgacccagtc tccatcttcc gtgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgtc gggcgagtca gggtattaac agctggttag cctggtatca gcagaaacca 120
gggaaagccc ctaaactcct gatctatgct gcatccagtt tacaaagtgg ggtcccatca 180
aggttcagcg gcagtggttc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctccagcct 240
gaagattttg caacttacta ttgtcaacag gctaacagtt tcccattcac tttcggccct 300
gggaccaaag tggatatcaa a 321
<210> 638
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 638
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Asn Ser Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Asn Ser Phe Pro Phe
85 90 95
Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys
100 105
<210> 639
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 639
cagggtatta acagctgg 18
<210> 640
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 640
Gln Gly Ile Asn Ser Trp
1 5
<210> 641
<211> 9
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 641
gctgcatcc 9
<210> 642
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 642
Ala Ala Ser
1
<210> 643
<211> 27
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 643
caacaggcta acagtttccc attcact 27
<210> 644
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 644
Gln Gln Ala Asn Ser Phe Pro Phe Thr
1 5
<210> 645
<211> 990
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> hIgG1重链(WT) NA
<400> 645
gcctccacca agggcccatc ggtcttcccc ctggcaccct cctccaagag cacctctggg 60
ggcacagcgg ccctgggctg cctggtcaag gactacttcc ccgaaccggt gacggtgtcg 120
tggaactcag gcgccctgac cagcggcgtg cacaccttcc cggctgtcct acagtcctca 180
ggactctact ccctcagcag cgtggtgacc gtgccctcca gcagcttggg cacccagacc 240
tacatctgca acgtgaatca caagcccagc aacaccaagg tggacaagaa agttgagccc 300
aaatcttgtg acaaaactca cacatgccca ccgtgcccag cacctgaact cctgggggga 360
ccgtcagtct tcctcttccc cccaaaaccc aaggacaccc tcatgatctc ccggacccct 420
gaggtcacat gcgtggtggt ggacgtgagc cacgaagacc ctgaggtcaa gttcaactgg 480
tacgtggacg gcgtggaggt gcataatgcc aagacaaagc cgcgggagga gcagtacaac 540
agcacgtacc gtgtggtcag cgtcctcacc gtcctgcacc aggactggct gaatggcaag 600
gagtacaagt gcaaggtctc caacaaagcc ctcccagccc ccatcgagaa aaccatctcc 660
aaagccaaag ggcagccccg agaaccacag gtgtacaccc tgcccccatc ccgggatgag 720
ctgaccaaga accaggtcag cctgacctgc ctggtcaaag gcttctatcc cagcgacatc 780
gccgtggagt gggagagcaa tgggcagccg gagaacaact acaagaccac gcctcccgtg 840
ctggactccg acggctcctt cttcctctac agcaagctca ccgtggacaa gagcaggtgg 900
cagcagggga acgtcttctc atgctccgtg atgcatgagg ctctgcacaa ccactacacg 960
cagaagtccc tctccctgtc tccgggtaaa 990
<210> 646
<211> 330
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> hIgG1重链(WT)
<400> 646
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu
225 230 235 240
Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325 330
<210> 647
<211> 990
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> hIgG1重链*/*突变NA
<400> 647
gcctcaacta agggcccaag cgtctttcca ttggctccat ccagtaaatc aacttcaggg 60
gggaccgcag ctctggggtg cctcgtgaag gactacttcc ctgaacctgt cacagtctcc 120
tggaactccg gggctctgac cagcggagtt cacacctttc ctgccgtgct tcagtcttcc 180
gggctgtact cattgagcag tgtcgttact gtaccatcct cctccctggg tactcaaacc 240
tacatctgta atgtgaacca caagccctcc aacaccaagg ttgacaaaaa ggtggaacca 300
aagagttgtg ataagactca tacctgcccc ccatgtcctg cccccgagct gctgggagga 360
ccttcagtgt tcttgttccc tcccaaacca aaagacactt tgatgatttc acgaacccct 420
gaagtgacct gtgtggtggt cgatgtcagc cacgaagacc ctgaagttaa gtttaactgg 480
tatgtggatg gcgtagaggt tcacaacgct aagactaaac ccagagagga gcaatataat 540
agtacctata gggtcgtgtc tgtgctgaca gtcttgcatc aggactggct taacggtaag 600
gagtacaagt gtaaggtgtc aaacaaggca ctgcctgcac ctatcgagaa gaccatctct 660
aaggccaaag gtcaaccaag ggagccccag gtatatactt tgccaccctc tcgggacgag 720
ctgacaaaaa atcaggtgag tctgacctgt ctcgtgaaag gattttaccc tagcgacatc 780
gccgtggagt gggagagtaa tggccagccc gagaataact acaagaccac cccaccagtt 840
ctggactctg acgggtcttt cttcctttat agtaagctga ccgtagataa gtctcgctgg 900
cagcaaggca atgtattctc ttgcagtgtc atgcacgagg ccctccataa ccgattcacc 960
caaaaatctc tgtctctgtc tcctggaaag 990
<210> 648
<211> 330
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> hIgG1重链*/* 突变(H435R、Y436F)
<400> 648
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu
225 230 235 240
Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn Arg Phe Thr
305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325 330
<210> 649
<211> 378
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 649
caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag tgtctggact catcttcagt aactatggca tgcactgggt ccgccaggct 120
ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcagtt atatggtatg atggaagtaa taaatactat 180
gtagactccg tgaagggccg cttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240
ctgcaaatga acagcctgag aggcgaggac acggctatat attactgtgc gagagatcgg 300
agagggctgg aactatttaa ctactactac cacggtttgg acgtctgggg ccaagggacc 360
acggtcaccg tctcctca 378
<210> 650
<211> 126
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 650
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Leu Ile Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Trp Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Val Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Gly Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Arg Arg Gly Leu Glu Leu Phe Asn Tyr Tyr Tyr His Gly
100 105 110
Leu Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 651
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 651
ggactcatct tcagtaacta tggc 24
<210> 652
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 652
Gly Leu Ile Phe Ser Asn Tyr Gly
1 5
<210> 653
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 653
atatggtatg atggaagtaa taaa 24
<210> 654
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 654
Ile Trp Tyr Asp Gly Ser Asn Lys
1 5
<210> 655
<211> 57
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 655
gcgagagatc ggagagggct ggaactattt aactactact accacggttt ggacgtc 57
<210> 656
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 656
Ala Arg Asp Arg Arg Gly Leu Glu Leu Phe Asn Tyr Tyr Tyr His Gly
1 5 10 15
Leu Asp Val
<210> 657
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 657
gacatccaga tgacccagtc tccatcctca ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgtc gggcgagtca gggcattagc aattttttag cctggtttca gcagaaacca 120
gggaaagccc ctaagtccct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180
aagttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240
gaagattttg caacttatta ctgccaacag tataatagtt acccattcac tttcggccct 300
gggaccaaag tggatatcaa a 321
<210> 658
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 658
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asn Phe
20 25 30
Leu Ala Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Ser Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Lys Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Phe
85 90 95
Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys
100 105
<210> 659
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 659
cagggcatta gcaatttt 18
<210> 660
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 660
Gln Gly Ile Ser Asn Phe
1 5
<210> 661
<211> 9
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 661
gctgcatcc 9
<210> 662
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 662
Ala Ala Ser
1
<210> 663
<211> 27
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 663
caacagtata atagttaccc attcact 27
<210> 664
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 664
Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Phe Thr
1 5
<210> 665
<211> 1371
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 665
caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag tgtctggact catcttcagt aactatggca tgcactgggt ccgccaggct 120
ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcagtt atatggtatg atggaagtaa taaatactat 180
gtagactccg tgaagggccg cttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240
ctgcaaatga acagcctgag aggcgaggac acggctatat attactgtgc gagagatcgg 300
agagggctgg aactatttaa ctactactac cacggtttgg acgtctgggg ccaagggacc 360
acggtcaccg tctcctcagc ctcaacaaaa ggtccctcag tctttcctct tgctccatcc 420
tccaaaagta catcaggagg taccgcagcc cttggatgcc tcgtcaagga ttattttccc 480
gaaccagtta ccgtttcctg gaactcaggc gctctcacct ctggagtaca tacttttcct 540
gcagtcctcc aatcctctgg cctttactcc ctttctagcg tagtaaccgt accatcatca 600
tccctcggaa cccaaactta tatctgtaat gttaatcaca aacccagcaa caccaaagta 660
gacaaaaaag ttgaacctaa atcatgcgat aaaacccaca cttgcccccc ctgtccagca 720
ccagaactcc ttggcggccc ctcagttttc ctttttccac caaagcccaa agacaccctt 780
atgatctcca gaacccccga agttacatgc gtagtcgttg acgtttctca cgaagatcca 840
gaagtcaaat tcaattggta cgttgatggc gttgaagtcc ataatgcaaa aacaaaaccc 900
cgagaagaac agtacaattc aacatatcga gtagttagcg tacttacagt tctgcaccaa 960
gattggctga acggaaaaga atataaatgt aaagtctcta acaaagcact ccctgcccca 1020
attgaaaaaa caatctcaaa agccaaaggc caacctcgcg aacctcaggt ttacacactt 1080
cccccctccc gcgacgaact gactaaaaac caggtttcct tgacatgcct tgtaaaaggt 1140
ttttacccct ccgatatcgc cgtagaatgg gaatctaatg gacaaccaga aaacaattac 1200
aaaactaccc ctcctgtgct cgattccgat ggctcttttt tcctctattc taagctcacc 1260
gttgacaagt ctcgttggca gcagggaaac gtattcagtt gcagcgtcat gcacgaagcc 1320
cttcataata gattcaccca aaagtctctt tctctctctc ctggtaagta g 1371
<210> 666
<211> 456
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 666
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Leu Ile Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Trp Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Val Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Gly Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Arg Arg Gly Leu Glu Leu Phe Asn Tyr Tyr Tyr His Gly
100 105 110
Leu Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser
115 120 125
Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr
130 135 140
Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro
145 150 155 160
Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val
165 170 175
His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser
180 185 190
Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile
195 200 205
Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val
210 215 220
Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala
225 230 235 240
Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro
245 250 255
Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val
260 265 270
Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val
275 280 285
Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln
290 295 300
Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln
305 310 315 320
Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala
325 330 335
Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro
340 345 350
Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr
355 360 365
Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser
370 375 380
Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr
385 390 395 400
Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr
405 410 415
Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe
420 425 430
Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn Arg Phe Thr Gln Lys
435 440 445
Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
450 455
<210> 667
<211> 645
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 667
gacatccaga tgacccagtc tccatcctca ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgtc gggcgagtca gggcattagc aattttttag cctggtttca gcagaaacca 120
gggaaagccc ctaagtccct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180
aagttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240
gaagattttg caacttatta ctgccaacag tataatagtt acccattcac tttcggccct 300
gggaccaaag tggatatcaa acgaactgtg gctgcaccat ctgtcttcat cttcccgcca 360
tctgatgagc agttgaaatc tggaactgcc tctgttgtgt gcctgctgaa taacttctat 420
cccagagagg ccaaagtaca gtggaaggtg gataacgccc tccaatcggg taactcccag 480
gagagtgtca cagagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctcagcag caccctgacg 540
ctgagcaaag cagactacga gaaacacaaa gtctacgcct gcgaagtcac ccatcagggc 600
ctgagctcgc ccgtcacaaa gagcttcaac aggggagagt gttag 645
<210> 668
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 668
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asn Phe
20 25 30
Leu Ala Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Ser Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Lys Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Phe
85 90 95
Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 669
<211> 354
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 669
gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ctggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt cacctttaac agctatgcca tgagctggtt ccgccagact 120
ccagggaagg ggctggagtg gctctcagct atgactggta gtggtggtaa cacatactac 180
gcagactccg tgaagggccg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240
ctgcaaatga acaacctgag agccgaggac acggccgtat attactgtgc ggtggataca 300
accatggccc actttgacta ctggggccag ggaaccctgg tcaccgtctc ctca 354
<210> 670
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 670
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Phe Arg Gln Thr Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu
35 40 45
Ser Ala Met Thr Gly Ser Gly Gly Asn Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Asn Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Val Asp Thr Thr Met Ala His Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 671
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 671
ggattcacct ttaacagcta tgcc 24
<210> 672
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 672
Gly Phe Thr Phe Asn Ser Tyr Ala
1 5
<210> 673
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 673
atgactggta gtggtggtaa caca 24
<210> 674
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 674
Met Thr Gly Ser Gly Gly Asn Thr
1 5
<210> 675
<211> 33
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 675
gcggtggata caaccatggc ccactttgac tac 33
<210> 676
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 676
Ala Val Asp Thr Thr Met Ala His Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 677
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 677
gacatccaga tgacccagtc tccatcttcc gtgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgtc gggcgagtca gggtattagc agctggttag cctggtatca gcagaaacca 120
gggaaagccc ctaagctcct gatctatgct gcttccactt tacaaagtgg ggtcccatca 180
aggttcagtg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240
gaagattttg caacttacta ttgtcaacgg attaacagtt tcccattcac tttcggccct 300
gggaccaaag tggatatcaa a 321
<210> 678
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 678
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Arg Ile Asn Ser Phe Pro Phe
85 90 95
Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys
100 105
<210> 679
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 679
cagggtatta gcagctgg 18
<210> 680
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 680
Gln Gly Ile Ser Ser Trp
1 5
<210> 681
<211> 9
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 681
gctgcttcc 9
<210> 682
<211> 27
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 682
caacggatta acagtttccc attcact 27
<210> 683
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 683
Gln Arg Ile Asn Ser Phe Pro Phe Thr
1 5
<210> 684
<211> 1347
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 684
gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ctggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt cacctttaac agctatgcca tgagctggtt ccgccagact 120
ccagggaagg ggctggagtg gctctcagct atgactggta gtggtggtaa cacatactac 180
gcagactccg tgaagggccg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240
ctgcaaatga acaacctgag agccgaggac acggccgtat attactgtgc ggtggataca 300
accatggccc actttgacta ctggggccag ggaaccctgg tcaccgtctc ctcagcctca 360
acaaaaggtc cctcagtctt tcctcttgct ccatcctcca aaagtacatc aggaggtacc 420
gcagcccttg gatgcctcgt caaggattat tttcccgaac cagttaccgt ttcctggaac 480
tcaggcgctc tcacctctgg agtacatact tttcctgcag tcctccaatc ctctggcctt 540
tactcccttt ctagcgtagt aaccgtacca tcatcatccc tcggaaccca aacttatatc 600
tgtaatgtta atcacaaacc cagcaacacc aaagtagaca aaaaagttga acctaaatca 660
tgcgataaaa cccacacttg ccccccctgt ccagcaccag aactccttgg cggcccctca 720
gttttccttt ttccaccaaa gcccaaagac acccttatga tctccagaac ccccgaagtt 780
acatgcgtag tcgttgacgt ttctcacgaa gatccagaag tcaaattcaa ttggtacgtt 840
gatggcgttg aagtccataa tgcaaaaaca aaaccccgag aagaacagta caattcaaca 900
tatcgagtag ttagcgtact tacagttctg caccaagatt ggctgaacgg aaaagaatat 960
aaatgtaaag tctctaacaa agcactccct gccccaattg aaaaaacaat ctcaaaagcc 1020
aaaggccaac ctcgcgaacc tcaggtttac acacttcccc cctcccgcga cgaactgact 1080
aaaaaccagg tttccttgac atgccttgta aaaggttttt acccctccga tatcgccgta 1140
gaatgggaat ctaatggaca accagaaaac aattacaaaa ctacccctcc tgtgctcgat 1200
tccgatggct cttttttcct ctattctaag ctcaccgttg acaagtctcg ttggcagcag 1260
ggaaacgtat tcagttgcag cgtcatgcac gaagcccttc ataatagatt cacccaaaag 1320
tctctttctc tctctcctgg taagtag 1347
<210> 685
<211> 448
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 685
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Phe Arg Gln Thr Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu
35 40 45
Ser Ala Met Thr Gly Ser Gly Gly Asn Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Asn Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Val Asp Thr Thr Met Ala His Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro
115 120 125
Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly
130 135 140
Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn
145 150 155 160
Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln
165 170 175
Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser
180 185 190
Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser
195 200 205
Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr
210 215 220
His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser
225 230 235 240
Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg
245 250 255
Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro
260 265 270
Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala
275 280 285
Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val
290 295 300
Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr
305 310 315 320
Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr
325 330 335
Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu
340 345 350
Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys
355 360 365
Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser
370 375 380
Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp
385 390 395 400
Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser
405 410 415
Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala
420 425 430
Leu His Asn Arg Phe Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440 445
<210> 686
<211> 645
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 686
gacatccaga tgacccagtc tccatcttcc gtgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgtc gggcgagtca gggtattagc agctggttag cctggtatca gcagaaacca 120
gggaaagccc ctaagctcct gatctatgct gcttccactt tacaaagtgg ggtcccatca 180
aggttcagtg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240
gaagattttg caacttacta ttgtcaacgg attaacagtt tcccattcac tttcggccct 300
gggaccaaag tggatatcaa acgaactgtg gctgcaccat ctgtcttcat cttcccgcca 360
tctgatgagc agttgaaatc tggaactgcc tctgttgtgt gcctgctgaa taacttctat 420
cccagagagg ccaaagtaca gtggaaggtg gataacgccc tccaatcggg taactcccag 480
gagagtgtca cagagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctcagcag caccctgacg 540
ctgagcaaag cagactacga gaaacacaaa gtctacgcct gcgaagtcac ccatcagggc 600
ctgagctcgc ccgtcacaaa gagcttcaac aggggagagt gttag 645
<210> 687
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“合成的”
<400> 687
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Arg Ile Asn Ser Phe Pro Phe
85 90 95
Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 688
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 688
His His His His His His His His His
1 5
<210> 689
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 689
His His His His His His
1 5
<210> 690
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> source
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 690
His His His His His
1 5

Claims (133)

1.一种具有式(A)的结构的化合物，
Figure FDA0003124860190000011
或其药学上可接受的盐，其中：
X选自-O-和-NR*-；
Za和Zb独立地选自氢、-Cl、-Br、-OR1和-RN；条件是Za或Zb中的至少一个不是氢；其中：
R1选自氢、RN、脂肪族C1-C20烃、芳香族C1-C20烃、杂芳香族C1-C20烃、环状脂肪族C1-C20烃、杂环C1-C20烃及其组合，它们中的每一个还包含0-8个选自卤素、O、N和S的杂原子，并且其中R1任选地被以下中的一种或更多种取代：-F、-Cl、-Br、-I、-OH、-OR*、-NO、-NO2、-NO3、-O-NO、-N3、-NH2、-NHR*、-N(R*)2、-N(R*)3 +、-N(R*)-OH、-O-N(R*)2、-N(R*)-O-R*、-CN、-NC、-(C＝O)-R*、-CHO、-CO2H、-CO2R*、-(C＝O)-S-R*、-O-(C＝O)-H、-O-(C＝O)-R*、-S-(C＝O)-R*、-(C＝O)-NH2、-(C＝O)-N(R*)2、-(C＝O)-NHNH2、-O-(C＝O)-NHNH2、-(C＝S)-NH2、-(C＝S)-N(R*)2、-N(R*)-CHO、-N(R*)-(C＝O)-R*、-SCN、-NCS、-NSO、-SSR*、-SO2R*、-SO2-N(R*)2、-S(＝O)-OR*、-S(＝O)-R*、-Si(R*)3、-CF3、-O-CF3及其组合，条件是R1不是正丁基基团，并且当X是-O-且Ra是氢时，R1不是氢；
RN选自：
Figure FDA0003124860190000021
Figure FDA0003124860190000023
其中符号
Figure FDA0003124860190000024
表示附接点；并且R’、R”和R”’选自氢、C1-C6脂肪族烃和选自以下的保护基团：芴基甲氧羰基(FMOC)和叔丁氧羰基(Boc)，或者其中R’和R”一起形成脂肪族单环的、脂肪族双环的或脂肪族多环的结构；
R2、R3和R4独立地选自氢、脂肪族C1-C20烃和-(C＝O)-R*，它们中的每一个还包含0-8个选自卤素、O、N和S的杂原子；
Ra选自氢、-F、-Cl、-Br、-I、-OH、-OR*、-NH2、-NHR*、-N(R*)2、-N(R*)3 +、-(C＝O)-R*、-CHO、-CO2H、-CO2R*、-SR*、-SO2R*和脂肪族C1-C20烃，它还包含0-8个选自卤素、O、N和S的杂原子，并且其中Ra任选地被以下中的一种或更多种取代：-F、-Cl、-Br、-I、-OH、-OR*；
Rb选自氢、-F、-Cl、-Br、-I、-OH、-OR*、-(C＝O)-R*、-CHO、-CO2H、-CO2R*和脂肪族C1-C20烃，它还包含0-3个选自卤素、O和S的杂原子，并且其中Rb任选地被以下中的一种或更多种取代：-F、-Cl、-Br、-I、-OH、-OR*，并且
R*在每次出现时独立地选自氢、脂肪族C1-C20烃、芳香族C1-C20烃、杂芳香族C1-C20烃、环状脂肪族C1-C20烃、杂环C1-C20烃及其组合，它还包含0-8个选自卤素、O、N和S及其组合的杂原子。
2.根据权利要求1所述的化合物，具有根据式(I)的结构
Figure FDA0003124860190000031
或其药学上可接受的盐，其中：
X选自-O-和-NR*-；
R1选自RN、氢、脂肪族C1-C20烃、芳香族C5-C20烃、杂芳香族C1-C20烃、环状脂肪族C1-C20烃、杂环C1-C20烃及其组合，它们中的每一个还包含0-8个选自卤素、O、N和S的杂原子，并且其中R1任选地被以下中的一种或更多种取代：-F、-Cl、-Br、-I、-OH、-OR*、-NO、-NO2、-NO3、-O-NO、-N3、-NH2、-NHR*、-N(R*)2、-N(R*)3 +、-N(R*)-OH、-O-N(R*)2、-N(R*)-O-R*、-CN、-NC、-(C＝O)-R*、-CHO、-CO2H、-CO2R*、-(C＝O)-S-R*、-O-(C＝O)-H、-O-(C＝O)-R*、-S-(C＝O)-R*、-(C＝O)-NH2、-(C＝O)-N(R*)2、-(C＝O)-NHNH2、-O-(C＝O)-NHNH2、-(C＝S)-NH2、-(C＝S)-N(R*)2、-N(R*)-CHO、-N(R*)-(C＝O)-R*、-SCN、-NCS、-NSO、-SSR*、-SO2R*、-SO2-N(R*)2、-S(＝O)-OR*、-S(＝O)-R*、-Si(R*)3、-CF3、-O-CF3及其组合，条件是R1不是正丁基基团，并且当X是-O-且Ra是氢时，R1不是氢；
RN选自：
Figure FDA0003124860190000032
Figure FDA0003124860190000041
Figure FDA0003124860190000043
其中符号
Figure FDA0003124860190000044
表示附接点；并且R’、R”和R”’选自氢、C1-C6脂肪族烃和选自以下的保护基团：FMOC和Boc，或者其中R’和R‖一起形成脂肪族单环的、脂肪族双环的或脂肪族多环的结构；
R2、R3和R4独立地选自氢、脂肪族C1-C20烃或-(C＝O)-R*，它们中的每一个还包含0-8个选自卤素、O、N和S的杂原子；
Ra选自氢、-F、-Cl、-Br、-I、-OH、-OR*、-NH2、-NHR*、-N(R*)2、-N(R*)3 +、-(C＝O)-R*、-CHO、-CO2H、-CO2R*、-SR*、-SO2R*和脂肪族C1-C20烃，它还包含0-8个选自卤素、O、N和S的杂原子，并且其中Ra任选地被以下中的一种或更多种取代：-F、-Cl、-Br、-I、-OH、-OR*；
Rb选自氢、-F、-Cl、-Br、-I、-OH、-OR*、-(C＝O)-R*、-CHO、-CO2H、-CO2R*和脂肪族C1-C20烃，它还包含0-3个选自卤素、O和S的杂原子，并且其中Rb任选地被以下中的一种或更多种取代：-F、-Cl、-Br、-I、-OH、-OR*，并且
R*在每次出现时独立地选自氢、脂肪族C1-C20烃、芳香族C5-C20烃、杂芳香族C1-C20烃、环状脂肪族C1-C20烃、杂环C1-C20烃及其组合，它还包含0-8个选自卤素、O、N和S及其组合的杂原子。
3.根据权利要求1所述的化合物，具有根据式(I’)的结构
Figure FDA0003124860190000051
或其药学上可接受的盐，其中：
X选自-O-和-NR*-；
R1选自RN、氢、脂肪族C1-C20烃、芳香族C5-C20烃、杂芳香族C1-C20烃、环状脂肪族C1-C20烃、杂环C1-C20烃及其组合，它们中的每一个还包含0-8个选自卤素、O、N和S的杂原子，并且其中R1任选地被以下中的一种或更多种取代：-F、-Cl、-Br、-I、-OH、-OR*、-NO、-NO2、-NO3、-O-NO、-N3、-NH2、-NHR*、-N(R*)2、-N(R*)3 +、-N(R*)-OH、-O-N(R*)2、-N(R*)-O-R*、-CN、-NC、-(C＝O)-R*、-CHO、-CO2H、-CO2R*、-(C＝O)-S-R*、-O-(C＝O)-H、-O-(C＝O)-R*、-S-(C＝O)-R*、-(C＝O)-NH2、-(C＝O)-N(R*)2、-(C＝O)-NHNH2、-O-(C＝O)-NHNH2、-(C＝S)-NH2、-(C＝S)-N(R*)2、-N(R*)-CHO、-N(R*)-(C＝O)-R*、-SCN、-NCS、-NSO、-SSR*、-SO2R*、-SO2-N(R*)2、-S(＝O)-OR*、-S(＝O)-R*、-Si(R*)3、-CF3、-O-CF3及其组合，条件是R1不是正丁基基团，并且当X是-O-且Ra是氢时，R1不是氢；
RN选自：
Figure FDA0003124860190000061
Figure FDA0003124860190000063
其中符号
Figure FDA0003124860190000064
表示附接点；并且R’、R”和R”’选自氢、C1-C6脂肪族烃和选自以下的保护基团：FMOC和Boc，或者其中R’和R‖一起形成脂肪族单环的、脂肪族双环的或脂肪族多环的结构；
R2、R3和R4独立地选自氢、脂肪族C1-C20烃或-(C＝O)-R*，它们中的每一个还包含0-8个选自卤素、O、N和S的杂原子；
Ra选自氢、-F、-Cl、-Br、-I、-OH、-OR*、-NH2、-NHR*、-N(R*)2、-N(R*)3 +、-(C＝O)-R*、-CHO、-CO2H、-CO2R*、-SR*、-SO2R*和脂肪族C1-C20烃，它还包含0-8个选自卤素、O、N和S的杂原子，并且其中Ra任选地被以下中的一种或更多种取代：-F、-Cl、-Br、-I、-OH、-OR*；
Rb选自氢、-F、-Cl、-Br、-I、-OH、-OR*、-(C＝O)-R*、-CHO、-CO2H、-CO2R*和脂肪族C1-C20烃，它还包含0-3个选自卤素、O和S的杂原子，并且其中Rb任选地被以下中的一种或更多种取代：-F、-Cl、-Br、-I、-OH、-OR*，并且
R*在每次出现时独立地选自氢、脂肪族C1-C20烃、芳香族C5-C20烃、杂芳香族C1-C20烃、环状脂肪族C1-C20烃、杂环C1-C20烃及其组合，它还包含0-8个选自卤素、O、N和S及其组合的杂原子。
4.根据权利要求1或2所述的化合物，具有式(II)的结构
Figure FDA0003124860190000071
或其药学上可接受的盐，其中：
X选自-O-和-NR*-；
Ra选自氢、-Cl和-OR*；
R1选自RN、氢、脂肪族C1-C20烃、芳香族C5-C20烃、杂芳香族C1-C20烃、环状脂肪族C1-C20烃、杂环C1-C20烃及其组合，它们中的每一个还包含0-8个选自卤素、O、N和S的杂原子，并且其中R1任选地被以下中的一种或更多种取代：-F、-Cl、-Br、-I、-OH、-OR*、-NO、-NO2、-NO3、-O-NO、-N3、-NH2、-NHR*、-N(R*)2、-N(R*)3 +、-N(R*)-OH、-O-N(R*)2、-N(R*)-O-R*、-CN、-NC、-(C＝O)-R*、-CHO、-CO2H、-CO2R*、-(C＝O)-S-R*、-O-(C＝O)-H、-O-(C＝O)-R*、-S-(C＝O)-R*、-(C＝O)-NH2、-(C＝O)-N(R*)2、-(C＝O)-NHNH2、-O-(C＝O)-NHNH2、-(C＝S)-NH2、-(C＝S)-N(R*)2、-N(R*)-CHO、-N(R*)-(C＝O)-R*、-SCN、-NCS、-NSO、-SSR*、-SO2R*、-SO2-N(R*)2、-S(＝O)-OR*、-S(＝O)-R*、-Si(R*)3、-CF3、-O-CF3及其组合，条件是R1不是正丁基基团；
RN选自：
Figure FDA0003124860190000081
Figure FDA0003124860190000083
其中符号
Figure FDA0003124860190000084
表示附接点；并且R’、R”和R”’选自氢、C1-C6脂肪族烃和选自以下的保护基团：FMOC和Boc，或者其中R’和R‖一起形成脂肪族单环的、脂肪族双环的或脂肪族多环的结构；并且
R*在每次出现时独立地选自氢、脂肪族C1-C20烃、芳香族C5-C20烃、杂芳香族C1-C20烃、环状脂肪族C1-C20烃、杂环C1-C20烃及其组合，它还包含0-8个选自卤素、O、N和S及其组合的杂原子。
5.根据权利要求1或3所述的化合物，具有根据式(II’)的结构
Figure FDA0003124860190000085
其中：
X选自-O-和-NR*-；
Ra选自氢、-Cl和-OR*；
R1选自RN、氢、脂肪族C1-C20烃、芳香族C5-C20烃、杂芳香族C1-C20烃、环状脂肪族C1-C20烃、杂环C1-C20烃及其组合，它们中的每一个还包含0-8个选自卤素、O、N和S的杂原子，并且其中R1任选地被以下中的一种或更多种取代：-F、-Cl、-Br、-I、-OH、-OR*、-NO、-NO2、-NO3、-O-NO、-N3、-NH2、-NHR*、-N(R*)2、-N(R*)3 +、-N(R*)-OH、-O-N(R*)2、-N(R*)-O-R*、-CN、-NC、-(C＝O)-R*、-CHO、-CO2H、-CO2R*、-(C＝O)-S-R*、-O-(C＝O)-H、-O-(C＝O)-R*、-S-(C＝O)-R*、-(C＝O)-NH2、-(C＝O)-N(R*)2、-(C＝O)-NHNH2、-O-(C＝O)-NHNH2、-(C＝S)-NH2、-(C＝S)-N(R*)2、-N(R*)-CHO、-N(R*)-(C＝O)-R*、-SCN、-NCS、-NSO、-SSR*、-SO2R*、-SO2-N(R*)2、-S(＝O)-OR*、-S(＝O)-R*、-Si(R*)3、-CF3、-O-CF3及其组合，条件是R1不是正丁基基团；RN选自：
Figure FDA0003124860190000091
Figure FDA0003124860190000093
其中符号
Figure FDA0003124860190000094
表示附接点；并且R’、R”和R”’选自氢、C1-C6脂肪族烃和选自以下的保护基团：FMOC和Boc，或者其中R’和R”一起形成脂肪族单环的、脂肪族双环的或脂肪族多环的结构；并且
R*在每次出现时独立地选自氢、脂肪族C1-C20烃、芳香族C5-C20烃、杂芳香族C1-C20烃、环状脂肪族C1-C20烃、杂环C1-C20烃及其组合，它还包含0-8个选自卤素、O、N和S及其组合的杂原子。
6.根据权利要求1、2或4所述的化合物，具有根据式(III)的结构
Figure FDA0003124860190000101
或其药学上可接受的盐，其中：
Ra选自氢和-OR*；
R5选自RN、脂肪族C1-C20烃、芳香族C5-C20烃、杂芳香族C1-C20烃、环状脂肪族C1-C20烃、杂环C1-C20烃及其组合，它们中的每一个还包含0-8个选自卤素、O、N和S的杂原子，并且其中R5任选地被以下中的一种或更多种取代：-F、-Cl、-Br、-I、-OH、-OR*、-NH2、-NHR*、-N(R*)2、-N(R*)3 +、-(C＝O)-R*、-CHO、-CO2H、-CO2R*及其组合，条件是R5不是正丁基基团；
R*在每次出现时独立地选自氢、脂肪族C1-C20烃、芳香族C5-C20烃、杂芳香族C1-C20烃、环状脂肪族C1-C20烃、杂环C1-C20烃及其组合，它还包含0-8个选自卤素、O、N和S及其组合的杂原子；并且
RN选自：
Figure FDA0003124860190000111
Figure FDA0003124860190000113
其中符号
Figure FDA0003124860190000114
表示附接点；并且R’、R”和R”’选自氢、C1-C6脂肪族烃和选自以下的保护基团：FMOC和Boc，或者其中R’和R”一起形成脂肪族单环的、脂肪族双环的或脂肪族多环的结构。
7.根据权利要求1、3或5所述的化合物，具有根据式(III’)的结构
Figure FDA0003124860190000115
或其药学上可接受的盐，其中：
Ra选自氢和-OR*；
R5选自RN、脂肪族C1-C20烃、芳香族C5-C20烃、杂芳香族C1-C20烃、环状脂肪族C1-C20烃、杂环C1-C20烃及其组合，它们中的每一个还包含0-8个选自卤素、O、N和S的杂原子，并且其中R5任选地被以下中的一种或更多种取代：-F、-Cl、-Br、-I、-OH、-OR*、-NH2、-NHR*、-N(R*)2、-N(R*)3 +、-(C＝O)-R*、-CHO、-CO2H、-CO2R*及其组合，条件是R5不是正丁基基团；
R*在每次出现时独立地选自氢、脂肪族C1-C20烃、芳香族C5-C20烃、杂芳香族C1-C20烃、环状脂肪族C1-C20烃、杂环C1-C20烃及其组合，它还包含0-8个选自卤素、O、N和S及其组合的杂原子；并且
RN选自：
Figure FDA0003124860190000121
Figure FDA0003124860190000123
其中符号
Figure FDA0003124860190000124
表示附接点；并且R’、R”和R”’选自氢、C1-C6脂肪族烃和选自以下的保护基团：FMOC和Boc，或者其中R’和R”一起形成脂肪族单环的、脂肪族双环的或脂肪族多环的结构。
8.根据权利要求1、2或4所述的化合物，具有根据式(IV)的结构
Figure FDA0003124860190000131
或其药学上可接受的盐，其中：
Ra选自氢和-OR*；
R5选自RN、氢、脂肪族C1-C20烃、芳香族C6-C20烃、杂芳香族C1-C20烃、环状脂肪族C1-C20烃、杂环C1-C20烃及其组合，它们中的每一个还包含0-8个选自卤素、O、N和S的杂原子，并且其中R5任选地被以下中的一种或更多种取代：-F、-Cl、-Br、-I、-OH、-OR*、-NH2、-NHR*、-N(R*)2、-N(R*)3 +、-(C＝O)-R*、-CHO、-CO2H、-CO2R*及其组合；
RN选自：
Figure FDA0003124860190000132
Figure FDA0003124860190000134
其中符号
Figure FDA0003124860190000135
表示附接点；并且R’、R”和R”’选自氢、C1-C6脂肪族烃和选自以下的保护基团：FMOC和Boc，或者其中R’和R”一起形成脂肪族单环的、脂肪族双环的或脂肪族多环的结构；并且
R*在每次出现时独立地选自氢、脂肪族C1-C20烃、芳香族C5-C20烃、杂芳香族C1-C20烃、环状脂肪族C1-C20烃、杂环C1-C20烃及其组合，它还包含0-8个选自卤素、O、N和S及其组合的杂原子。
9.根据权利要求1、3或5所述的化合物，具有根据式(IV’)的结构
Figure FDA0003124860190000141
或其药学上可接受的盐，其中：
Ra选自氢和-OR*；
R5选自RN、氢、脂肪族C1-C20烃、芳香族C6-C20烃、杂芳香族C1-C20烃、环状脂肪族C1-C20烃、杂环C1-C20烃及其组合，它们中的每一个还包含0-8个选自卤素、O、N和S的杂原子，并且其中R5任选地被以下中的一种或更多种取代：-F、-Cl、-Br、-I、-OH、-OR*、-NH2、-NHR*、-N(R*)2、-N(R*)3 +、-(C＝O)-R*、-CHO、-CO2H、-CO2R*及其组合；
RN选自：
Figure FDA0003124860190000142
Figure FDA0003124860190000151
Figure FDA0003124860190000152
以及
Figure FDA0003124860190000153
其中符号
Figure FDA0003124860190000154
表示附接点；并且R’、R”和R”’选自氢、C1-C6脂肪族烃和选自以下的保护基团：FMOC和Boc，或者其中R’和R”一起形成脂肪族单环的、脂肪族双环的或脂肪族多环的结构；并且
R*在每次出现时独立地选自氢、脂肪族C1-C20烃、芳香族C5-C20烃、杂芳香族C1-C20烃、环状脂肪族C1-C20烃、杂环C1-C20烃及其组合，它还包含0-8个选自卤素、O、N和S及其组合的杂原子。
10.根据权利要求1、2或4所述的化合物，具有根据式(V)的结构
Figure FDA0003124860190000155
或其药学上可接受的盐，其中：
X选自-O-和-NR*-；
Ra选自氢和-OR*；
R6选自RN、脂肪族C1-C20烃、芳香族C5-C20烃、杂芳香族C1-C20烃、环状脂肪族C1-C20烃、杂环C1-C20烃及其组合，它们中的每一个还包含0-8个选自卤素、O、N和S的杂原子，并且其中R6任选地被以下中的一种或更多种取代：-OH、-OR*、-NH2、-NHR*、-N(R*)2、-N(R*)3 +、-N(R*)-(C＝O)-R*、-(C＝O)-R*、-CHO、-CO2H、-CO2R*及其组合，条件是R6不是正丁基基团；
RN选自：
Figure FDA0003124860190000161
Figure FDA0003124860190000163
其中符号
Figure FDA0003124860190000164
表示附接点；并且R’、R”和R”’选自氢、C1-C6脂肪族烃和选自以下的保护基团：FMOC和Boc，或者其中R’和R”一起形成脂肪族单环的、脂肪族双环的或脂肪族多环的结构；并且
R*在每次出现时独立地选自氢、脂肪族C1-C20烃、芳香族C5-C20烃、杂芳香族C1-C20烃、环状脂肪族C1-C20烃、杂环C1-C20烃及其组合，它还包含0-8个选自卤素、O、N和S及其组合的杂原子。
11.根据权利要求1、3或5所述的化合物，具有根据式(V’)的结构
Figure FDA0003124860190000171
或其药学上可接受的盐，其中：
X选自-O-和-NR*-；
Ra选自氢和-OR*；
R6选自RN、脂肪族C1-C20烃、芳香族C5-C20烃、杂芳香族C1-C20烃、环状脂肪族C1-C20烃、杂环C1-C20烃及其组合，它们中的每一个还包含0-8个选自卤素、O、N和S的杂原子，并且其中R6任选地被以下中的一种或更多种取代：-OH、-OR*、-NH2、-NHR*、-N(R*)2、-N(R*)3 +、-N(R*)-(C＝O)-R*、-(C＝O)-R*、-CHO、-CO2H、-CO2R*及其组合，条件是R6不是正丁基基团；
RN选自：
Figure FDA0003124860190000172
Figure FDA0003124860190000181
其中符号
Figure FDA0003124860190000182
表示附接点；并且R’、R”和R”’选自氢、C1-C6脂肪族烃和选自以下的保护基团：FMOC和Boc，或者其中R’和R‖一起形成脂肪族单环的、脂肪族双环的或脂肪族多环的结构；并且
R*在每次出现时独立地选自氢、脂肪族C1-C20烃、芳香族C5-C20烃、杂芳香族C1-C20烃、环状脂肪族C1-C20烃、杂环C1-C20烃及其组合，它还包含0-8个选自卤素、O、N和S及其组合的杂原子。
12.根据权利要求1-11中任一项所述的化合物，其中Ra是氢。
13.根据权利要求1-11中任一项所述的化合物，其中Ra是-OH。
14.根据权利要求1-5中任一项所述的化合物，其中X是-O-；R1是脂肪族C1-C3烃；R2是甲基基团；R3是Ac(-(C＝O)-CH3)；R4是氢；并且Ra是氢。
15.根据权利要求1-5中任一项所述的化合物，其中X是-O-；R1是苄基基团；R2是甲基基团；R3是Ac(-(C＝O)-CH3)；R4是氢；并且Ra是氢。
16.根据权利要求1-5中任一项所述的化合物，其中X是-O-；R1是包含1-8个选自卤素、O、N和S的杂原子的脂肪族C1-C8烃；R2是甲基基团；R3是Ac(-(C＝O)-CH3)；R4是氢；并且Ra是氢。
17.根据权利要求1-5中任一项所述的化合物，其中X是-O-；R1是被-NH2、-NHR*、-N(R*)2中的一种或更多种取代的脂肪族C1-C8烃；R2是甲基基团；R3是Ac(-(C＝O)-CH3)；R4是氢；并且Ra是氢。
18.根据权利要求1-5中任一项所述的化合物，其中X是-NCH3-；R1是-OH；R2是甲基基团；R3是Ac(-(C＝O)-CH3)；R4是氢；并且Ra是氢。
19.根据权利要求1-18中任一项所述的化合物，其中RN选自：
Figure FDA0003124860190000191
Figure FDA0003124860190000193
其中符号
Figure FDA0003124860190000194
表示附接点；并且R’、R”和R”’选自氢、C1-C6脂肪族烃和选自以下的保护基团：FMOC和Boc，或者其中R’和R‖一起形成脂肪族单环的、脂肪族双环的或脂肪族多环的结构。
20.根据权利要求1-19中任一项所述的化合物，其中RN选自：
Figure FDA0003124860190000201
Figure FDA0003124860190000202
其中R’是氢、脂肪族烃或保护基团，并且其中符号
Figure FDA0003124860190000203
表示附接点。
21.根据权利要求1-20中任一项所述的化合物，其中R*在每次出现时独立地选自氢、脂肪族C1-C20烃、芳香族C6-C7烃及其组合，它任选地包含1-3个选自O、N及其组合的杂原子。
22.一种具有选自由以下组成的组的结构的化合物：
Figure FDA0003124860190000211
Figure FDA0003124860190000221
Figure FDA0003124860190000231
Figure FDA0003124860190000241
Figure FDA0003124860190000251
或其药学上可接受的盐。
23.一种具有以下结构的化合物：
Figure FDA0003124860190000252
或其药学上可接受的盐。
24.一种药物组合物，包含根据权利要求1-23中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐以及药学上可接受的载体。
25.一种药物剂型，包含根据权利要求1-23中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，或者根据权利要求24所述的药物组合物。
26.一种防止或抑制细菌的生长的方法，包括施用有效量的具有式(A)的结构的化合物：
Figure FDA0003124860190000261
或其药学上可接受的盐，其中：
X选自-O-、-S-和-NR*-；
Za和Zb独立地选自氢、-Cl、-Br、-OR1和-RN；条件是Za或Zb中的至少一个不是氢；其中：
R1选自氢、RN、脂肪族C1-C20烃、芳香族C1-C20烃、杂芳香族C1-C20烃、环状脂肪族C1-C20烃、杂环C1-C20烃及其组合，它们中的每一个还包含0-8个选自卤素、O、N和S的杂原子，并且其中R1任选地被以下中的一种或更多种取代：-F、-Cl、-Br、-I、-OH、-OR*、-NO、-NO2、-NO3、-O-NO、-N3、-NH2、-NHR*、-N(R*)2、-N(R*)3 +、-N(R*)-OH、-O-N(R*)2、-N(R*)-O-R*、-CN、-NC、-(C＝O)-R*、-CHO、-CO2H、-CO2R*、-(C＝O)-S-R*、-O-(C＝O)-H、-O-(C＝O)-R*、-S-(C＝O)-R*、-(C＝O)-NH2、-(C＝O)-N(R*)2、-(C＝O)-NHNH2、-O-(C＝O)-NHNH2、-(C＝S)-NH2、-(C＝S)-N(R*)2、-N(R*)-CHO、-N(R*)-(C＝O)-R*、-SCN、-NCS、-NSO、-SSR*、-SO2R*、-SO2-N(R*)2、-S(＝O)-OR*、-S(＝O)-R*、-Si(R*)3、-CF3、-O-CF3及其组合，条件是R1不是正丁基基团，并且当X是-O-且Ra是氢时，R1不是氢；
RN选自：
Figure FDA0003124860190000271
Figure FDA0003124860190000273
其中符号
Figure FDA0003124860190000274
表示附接点；并且R’、R”和R”’选自氢、C1-C6脂肪族烃和选自以下的保护基团：芴基甲氧羰基(FMOC)和叔丁氧羰基(Boc)，或者其中R’和R”一起形成脂肪族单环的、脂肪族双环的或脂肪族多环的结构；
R2、R3和R4独立地选自氢、脂肪族C1-C20烃和-(C＝O)-R*，它们中的每一个还包含0-8个选自卤素、O、N和S的杂原子；
Ra选自氢、-F、-Cl、-Br、-I、-OH、-OR*、-NH2、-NHR*、-N(R*)2、-N(R*)3 +、-(C＝O)-R*、-CHO、-CO2H、-CO2R*、-SR*、-SO2R*和脂肪族C1-C20烃，它还包含0-8个选自卤素、O、N和S的杂原子，并且其中Ra任选地被以下中的一种或更多种取代：-F、-Cl、-Br、-I、-OH、-OR*；
Rb选自氢、-F、-Cl、-Br、-I、-OH、-OR*、-(C＝O)-R*、-CHO、-CO2H、-CO2R*和脂肪族C1-C20烃，它还包含0-3个选自卤素、O和S的杂原子，并且其中Rb任选地被以下中的一种或更多种取代：-F、-Cl、-Br、-I、-OH、-OR*，并且
R*在每次出现时独立地选自氢、脂肪族C1-C20烃、芳香族C1-C20烃、杂芳香族C1-C20烃、环状脂肪族C1-C20烃、杂环C1-C20烃及其组合，它还包含0-8个选自卤素、O、N和S及其组合的杂原子。
27.一种防止或抑制细菌的生长的方法，包括施用有效量的具有根据权利要求1-23中任一项所述的结构的化合物。
28.根据权利要求26或27所述的方法，其中所述细菌是革兰氏阳性细菌。
29.根据权利要求26或27所述的方法，其中所述细菌是耐青霉素细菌。
30.根据权利要求26或27中任一项所述的方法，其中所述细菌是金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)。
31.根据权利要求26-30中任一项所述的方法，其中所述细菌是耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)。
32.根据权利要求26-30中任一项所述的方法，其中所述细菌是耐万古霉素金黄色葡萄球菌(VRSA)。
33.根据权利要求26-30中任一项所述的方法，其中所述细菌是甲氧西林易感性金黄色葡萄球菌(MSSA)。
34.一种治疗需要相应治疗的受试者的细菌感染的方法，包括向所述受试者施用有效量的具有式(A)的结构的化合物：
Figure FDA0003124860190000281
或其药学上可接受的盐，其中：
X选自-O-、-S-和-NR*-；
Za和Zb独立地选自氢、-Cl、-Br、-OR1和-RN；条件是Za或Zb中的至少一个不是氢；其中：
R1选自氢、RN、脂肪族C1-C20烃、芳香族C1-C20烃、杂芳香族C1-C20烃、环状脂肪族C1-C20烃、杂环C1-C20烃及其组合，它们中的每一个还包含0-8个选自卤素、O、N和S的杂原子，并且其中R1任选地被以下中的一种或更多种取代：-F、-Cl、-Br、-I、-OH、-OR*、-NO、-NO2、-NO3、-O-NO、-N3、-NH2、-NHR*、-N(R*)2、-N(R*)3 +、-N(R*)-OH、-O-N(R*)2、-N(R*)-O-R*、-CN、-NC、-(C＝O)-R*、-CHO、-CO2H、-CO2R*、-(C＝O)-S-R*、-O-(C＝O)-H、-O-(C＝O)-R*、-S-(C＝O)-R*、-(C＝O)-NH2、-(C＝O)-N(R*)2、-(C＝O)-NHNH2、-O-(C＝O)-NHNH2、-(C＝S)-NH2、-(C＝S)-N(R*)2、-N(R*)-CHO、-N(R*)-(C＝O)-R*、-SCN、-NCS、-NSO、-SSR*、-SO2R*、-SO2-N(R*)2、-S(＝O)-OR*、-S(＝O)-R*、-Si(R*)3、-CF3、-O-CF3及其组合，条件是R1不是正丁基基团，并且当X是-O-且Ra是氢时，R1不是氢；
RN选自：
Figure FDA0003124860190000291
Figure FDA0003124860190000293
其中符号
Figure FDA0003124860190000294
表示附接点；并且R’、R”和R”’选自氢、C1-C6脂肪族烃和选自以下的保护基团：FMOC和Boc，或者其中R’和R”一起形成脂肪族单环的、脂肪族双环的或脂肪族多环的结构；
R2、R3和R4独立地选自氢、脂肪族C1-C20烃和-(C＝O)-R*，它们中的每一个还包含0-8个选自卤素、O、N和S的杂原子；
Ra选自氢、-F、-Cl、-Br、-I、-OH、-OR*、-NH2、-NHR*、-N(R*)2、-N(R*)3 +、-(C＝O)-R*、-CHO、-CO2H、-CO2R*、-SR*、-SO2R*和脂肪族C1-C20烃，它还包含0-8个选自卤素、O、N和S的杂原子，并且其中Ra任选地被以下中的一种或更多种取代：-F、-Cl、-Br、-I、-OH、-OR*；
Rb选自氢、-F、-Cl、-Br、-I、-OH、-OR*、-(C＝O)-R*、-CHO、-CO2H、-CO2R*和脂肪族C1-C20烃，它还包含0-3个选自卤素、O和S的杂原子，并且其中Rb任选地被以下中的一种或更多种取代：-F、-Cl、-Br、-I、-OH、-OR*，并且
R*在每次出现时独立地选自氢、脂肪族C1-C20烃、芳香族C1-C20烃、杂芳香族C1-C20烃、环状脂肪族C1-C20烃、杂环C1-C20烃及其组合，它还包含0-8个选自卤素、O、N和S及其组合的杂原子。
35.一种治疗需要相应治疗的受试者的细菌感染的方法，包括向受试者施用有效量的具有根据权利要求1-23中任一项所述的结构的化合物。
36.根据权利要求34或35所述的方法，其中所述细菌感染是革兰氏阳性细菌感染。
37.根据权利要求34或35所述的方法，其中所述细菌感染是耐青霉素细菌感染。
38.根据权利要求34-37中任一项所述的方法，其中所述细菌感染是金黄色葡萄球菌感染。
39.根据权利要求34-38中任一项所述的方法，其中所述细菌感染是耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)感染。
40.根据权利要求34-38中任一项所述的方法，其中所述细菌感染是耐万古霉素金黄色葡萄球菌(VRSA)感染。
41.根据权利要求34-38中任一项所述的方法，其中所述细菌感染是甲氧西林易感性金黄色葡萄球菌(MSSA)感染。
42.根据权利要求34-38中任一项所述的方法，其中所述细菌感染是细胞内细菌感染。
43.根据权利要求34-42中任一项所述的方法，其中所述受试者是人类。
44.根据权利要求34-43中任一项所述的方法，还包括施用第二治疗剂。
45.根据权利要求44所述的方法，其中所述第二治疗剂是第二抗生素。
46.根据权利要求45所述的方法，其中所述第二抗生素针对金黄色葡萄球菌是有效的。
47.根据权利要求45所述的方法，其中所述第二抗生素选自氨基糖苷、β-内酰胺、大环内酯、环肽、四环素、氟喹啉、氟喹诺酮和噁唑烷酮。
48.根据权利要求45所述的方法，其中所述第二抗生素选自克林霉素、新生霉素、瑞他莫林、达托霉素、西他沙星、替考拉宁、三氯生、萘啶酮、雷德唑胺、多柔比星、氨苄西林、万古霉素、亚胺培南、多利培南、吉西他滨、达巴万星和阿奇霉素。
49.根据权利要求34-48中任一项所述的方法，其中所述化合物被口服地、局部地、鼻内地、静脉内地、肌内地或皮下地施用至所述受试者。
50.一种制造具有式(V)的结构的化合物的方法：
Figure FDA0003124860190000311
其中：X选自-O-和-NR*-；
R6选自氢、RN、脂肪族C1-C20烃、芳香族C1-C20烃、杂芳香族C1-C20烃、环状脂肪族C1-C20烃、杂环C1-C20烃及其组合，
RN选自：
Figure FDA0003124860190000321
Figure FDA0003124860190000323
其中符号
Figure FDA0003124860190000324
表示附接点；并且R’、R”和R”’选自氢、C1-C6脂肪族烃和选自以下的保护基团：FMOC和Boc，或者其中R’和R‖一起形成脂肪族单环的、脂肪族双环的或脂肪族多环的结构；并且
R*在每次出现时独立地选自氢、脂肪族C1-C20烃、芳香族C1-C20烃、杂芳香族C1-C20烃、环状脂肪族C1-C20烃、杂环C1-C20烃及其组合，它还包含0-8个选自卤素、O、N和S及其组合的杂原子，
所述方法包括以下步骤：
(a)使具有以下结构的利福霉素S：
Figure FDA0003124860190000331
与具有式(VI)的结构的化合物：
Figure FDA0003124860190000332
接触，
其中X’选自-OH和-NHR*；以及
(b)将步骤(a)的产物用氧化剂进行处理。
51.一种制造具有式(V’)的结构的化合物的方法：
Figure FDA0003124860190000333
其中：X选自-O-和-NR*-；
R6选自RN、氢、脂肪族C1-C20烃、芳香族C1-C20烃、杂芳香族C1-C20烃、环状脂肪族C1-C20烃、杂环C1-C20烃及其组合，
RN选自：
Figure FDA0003124860190000341
Figure FDA0003124860190000343
其中符号
Figure FDA0003124860190000344
表示附接点；并且R’、R”和R”’选自氢、C1-C6脂肪族烃和选自以下的保护基团：FMOC和Boc，或者其中R’和R”一起形成脂肪族单环的、脂肪族双环的或脂肪族多环的结构；并且
R*在每次出现时独立地选自氢、脂肪族C1-C20烃、芳香族C1-C20烃、杂芳香族C1-C20烃、环状脂肪族C1-C20烃、杂环C1-C20烃及其组合，它还包含0-8个选自卤素、O、N和S及其组合的杂原子，
所述方法包括以下步骤：
(a)使具有以下结构的利福霉素S：
Figure FDA0003124860190000345
与具有式(VI’)的结构的化合物：
Figure FDA0003124860190000351
接触，
其中X’选自-OH和-NHR*；以及
(b)将步骤(a)的产物用氧化剂进行处理。
52.一种制造具有以下结构的化合物的方法：
Figure FDA0003124860190000352
所述方法包括以下步骤：
(a)使利福霉素S与具有式(VII)的结构的化合物：
Figure FDA0003124860190000353
接触，
其中PG是保护基团；
(b)将步骤(a)的产物用氧化剂进行处理；以及
(c)去除所述保护基团PG。
53.根据权利要求52所述的方法，其中所述式(VII)的化合物通过从式(VIII)的化合物中去除保护基团PG’来制备，
Figure FDA0003124860190000361
其中，保护基团PG和PG’彼此能够是相同的或不同的。
54.根据权利要求53所述的方法，其中所述式(VIII)的化合物通过使式(IX)的化合物：
Figure FDA0003124860190000362
与式(X)的化合物：
Figure FDA0003124860190000363
接触来制备，其中，保护基团PG和PG’彼此能够是相同的或不同的。
55.一种制造具有式(XI)的结构的化合物的方法：
Figure FDA0003124860190000364
其中：R6选自RN、脂肪族C1-C20烃、芳香族C1-C20烃、杂芳香族C1-C20烃、环状脂肪族C1-C20烃、杂环C1-C20烃及其组合，它还包含0-8个选自卤素、O、N和S及其组合的杂原子，并且其中R6任选地被以下中的一种或更多种取代：-F、-Cl、-Br、-I、-OH、-OR*、-NO、-NO2、-NO3、-O-NO、-N3、-NH2、-NHR*、-N(R*)2、-N(R*)3 +、-N(R*)-OH、-O-N(R*)2、-N(R*)-O-R*、-CN、-NC、-(C＝O)-R*、-CHO、-CO2H、-CO2R*、-(C＝O)-S-R*、-O-(C＝O)-H、-O-(C＝O)-R*、-S-(C＝O)-R*、-(C＝O)-NH2、-(C＝O)-N(R*)2、-(C＝O)-NHNH2、-O-(C＝O)-NHNH2、-(C＝S)-NH2、-(C＝S)-N(R*)2、-N(R*)-CHO、-N(R*)-(C＝O)-R*、-SCN、-NCS、-NSO、-SSR*、-SO2R*、-SO2-N(R*)2、-S(＝O)-OR*、-S(＝O)-R*、-Si(R*)3、-CF3、-O-CF3及其组合；
RN选自：
Figure FDA0003124860190000371
Figure FDA0003124860190000373
其中符号
Figure FDA0003124860190000374
表示附接点；并且R’、R”和R”’选自氢、C1-C6脂肪族烃和选自以下的保护基团：FMOC和Boc，或者其中R’和R”一起形成脂肪族单环的、脂肪族双环的或脂肪族多环的结构；并且
R*在每次出现时独立地选自氢、脂肪族C1-C20烃、芳香族C1-C20烃、杂芳香族C1-C20烃、环状脂肪族C1-C20烃、杂环C1-C20烃及其组合，它还包含0-8个选自卤素、O、N和S及其组合的杂原子，
所述方法包括使具有式(XII)的结构的化合物：
Figure FDA0003124860190000381
与具有结构R6-OH的醇接触。
56.一种制造具有式(XI’)的结构的化合物的方法：
Figure FDA0003124860190000382
其中：R6选自RN、脂肪族C1-C20烃、芳香族C1-C20烃、杂芳香族C1-C20烃、环状脂肪族C1-C20烃、杂环C1-C20烃及其组合，它还包含0-8个选自卤素、O、N和S及其组合的杂原子，并且其中R6任选地被以下中的一种或更多种取代：-F、-Cl、-Br、-I、-OH、-OR*、-NO、-NO2、-NO3、-O-NO、-N3、-NH2、-NHR*、-N(R*)2、-N(R*)3 +、-N(R*)-OH、-O-N(R*)2、-N(R*)-O-R*、-CN、-NC、-(C＝O)-R*、-CHO、-CO2H、-CO2R*、-(C＝O)-S-R*、-O-(C＝O)-H、-O-(C＝O)-R*、-S-(C＝O)-R*、-(C＝O)-NH2、-(C＝O)-N(R*)2、-(C＝O)-NHNH2、-O-(C＝O)-NHNH2、-(C＝S)-NH2、-(C＝S)-N(R*)2、-N(R*)-CHO、-N(R*)-(C＝O)-R*、-SCN、-NCS、-NSO、-SSR*、-SO2R*、-SO2-N(R*)2、-S(＝O)-OR*、-S(＝O)-R*、-Si(R*)3、-CF3、-O-CF3及其组合；
RN选自：
Figure FDA0003124860190000391
Figure FDA0003124860190000393
其中符号
Figure FDA0003124860190000394
表示附接点；并且R’、R”和R”’选自氢、C1-C6脂肪族烃和选自以下的保护基团：FMOC和Boc，或者其中R’和R‖一起形成脂肪族单环的、脂肪族双环的或脂肪族多环的结构；并且
R*在每次出现时独立地选自氢、脂肪族C1-C20烃、芳香族C1-C20烃、杂芳香族C1-C20烃、环状脂肪族C1-C20烃、杂环C1-C20烃及其组合，它还包含0-8个选自卤素、O、N和S及其组合的杂原子，
所述方法包括使具有式(XII’)的结构的化合物：
Figure FDA0003124860190000401
与具有结构R6-OH的醇接触。
57.一种制造具有式(XIII)的结构的化合物的方法：
Figure FDA0003124860190000402
其中：A选自键(A不存在)或脂肪族C1-C20烃；
Rcy是C3-C14环脂肪族烃，它还包含0-8个选自卤素、O、N和S及其组合的杂原子，并且其中Rcy任选地被以下中的一种或更多种取代：-F、-Cl、-Br、-I、-OH、-OR*、-NO、-NO2、-NO3、-O-NO、-N3、-NH2、-NHR*、-N(R*)2、-N(R*)3 +、-N(R*)-OH、-O-N(R*)2、-N(R*)-O-R*、-CN、-NC、-(C＝O)-R*、-CHO、-CO2H、-CO2R*、-(C＝O)-S-R*、-O-(C＝O)-H、-O-(C＝O)-R*、-S-(C＝O)-R*、-(C＝O)-NH2、-(C＝O)-N(R*)2、-(C＝O)-NHNH2、-O-(C＝O)-NHNH2、-(C＝S)-NH2、-(C＝S)-N(R*)2、-N(R*)-CHO、-N(R*)-(C＝O)-R*、-SCN、-NCS、-NSO、-SSR*、-SO2R*、-SO2-N(R*)2、-S(＝O)-OR*、-S(＝O)-R*、-Si(R*)3、-CF3、-O-CF3及其组合；并且
R*在每次出现时独立地选自氢、脂肪族C1-C20烃、芳香族C1-C20烃、杂芳香族C1-C20烃、环状脂肪族C1-C20烃、杂环C1-C20烃及其组合，它还包含0-8个选自卤素、O、N和S及其组合的杂原子，
所述方法包括使具有式(XII)的结构的化合物：
Figure FDA0003124860190000411
与具有结构Rcy-A-OH的醇接触。
58.一种制造具有式(XIII’)的结构的化合物的方法：
Figure FDA0003124860190000412
其中：A选自键(A不存在)或脂肪族C1-C20烃；
Rcy是C3-C14环脂肪族烃，它还包含0-8个选自卤素、O、N和S及其组合的杂原子，并且其中Rcy任选地被以下中的一种或更多种取代：-F、-Cl、-Br、-I、-OH、-OR*、-NO、-NO2、-NO3、-O-NO、-N3、-NH2、-NHR*、-N(R*)2、-N(R*)3 +、-N(R*)-OH、-O-N(R*)2、-N(R*)-O-R*、-CN、-NC、-(C＝O)-R*、-CHO、-CO2H、-CO2R*、-(C＝O)-S-R*、-O-(C＝O)-H、-O-(C＝O)-R*、-S-(C＝O)-R*、-(C＝O)-NH2、-(C＝O)-N(R*)2、-(C＝O)-NHNH2、-O-(C＝O)-NHNH2、-(C＝S)-NH2、-(C＝S)-N(R*)2、-N(R*)-CHO、-N(R*)-(C＝O)-R*、-SCN、-NCS、-NSO、-SSR*、-SO2R*、-SO2-N(R*)2、-S(＝O)-OR*、-S(＝O)-R*、-Si(R*)3、-CF3、-O-CF3及其组合；并且
R*在每次出现时独立地选自氢、脂肪族C1-C20烃、芳香族C1-C20烃、杂芳香族C1-C20烃、环状脂肪族C1-C20烃、杂环C1-C20烃及其组合，它还包含0-8个选自卤素、O、N和S及其组合的杂原子，
所述方法包括使具有式(XII’)的结构的化合物：
Figure FDA0003124860190000421
与具有结构Rcy-A-OH的醇接触。
59.一种制造具有式(XIV)的结构的化合物的方法：
Figure FDA0003124860190000422
其中：Y在每次出现时选自-O-和-NR’R”-；n在每次出现时独立地是从1-6的整数；并且R’、R‖和R”’各自独立地选自氢、脂肪族C1-C20烃；所述方法包括使具有式(XII)的结构的化合物：
Figure FDA0003124860190000423
与具有结构R″R′N-Y-(CH2)n-Y-(CH2)n-OH的醇接触。
60.一种制造具有式(XIV’)的结构的化合物的方法：
Figure FDA0003124860190000431
其中：Y在每次出现时选自-O-和-NR’R”-；n在每次出现时独立地是从1至6的整数；并且R’、R‖和R”’各自独立地选自氢和脂肪族C1-C20烃；所述方法包括使具有式(XII’)的结构的化合物：
Figure FDA0003124860190000432
与具有结构R″R′N-Y-(CH2)n-Y-(CH2)n-OH的醇接触。
61.根据权利要求55、57或59中任一项所述的方法，其中所述式(XII)的化合物通过使利福霉素S与2-氨基-5-溴苯酚接触，并且用氧化剂处理所述产物来制备。
62.根据权利要求56、58或60中任一项所述的方法，其中所述式(XII’)的化合物通过使利福霉素S与2-氨基-4-溴苯酚接触，并且用氧化剂处理所述产物来制备。
63.一种抗体-药物缀合物，包含抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段经由连接基或通过连接基-间隔基缀合至根据权利要求1-23中任一项所述的化合物。
64.根据权利要求63所述的抗体-药物缀合物，其中所述抗体或其抗原结合片段结合感染性疾病相关的靶标。
65.根据权利要求63或权利要求64所述的抗体-药物缀合物，其中所述抗体或其抗原结合片段结合巨噬细胞清道夫受体1(MSR1)。
66.根据权利要求63或权利要求64所述的抗体-药物缀合物，其中所述抗体或其抗原结合片段结合壁磷壁酸(WTA)。
67.根据权利要求63或权利要求64所述的抗体-药物缀合物，其中所述抗体或其抗原结合片段结合金黄色葡萄球菌蛋白A。
68.根据权利要求63-67中任一项所述的抗体-药物缀合物，其中所述抗体或其抗原结合片段包含轻链中的C103S突变。
69.根据权利要求63-68中任一项所述的抗体-药物缀合物，其中抗体或其抗原结合片段在轻链的103位缀合至根据权利要求1-23中任一项所述的化合物。
70.根据权利要求63-69中任一项所述的抗体-药物缀合物，其中所述连接基或连接基-间隔基选自：
Figure FDA0003124860190000441
Figure FDA0003124860190000451
71.一种抗体-药物缀合物，具有根据式(XVIII)的结构：
Figure FDA0003124860190000452
其中：
BA是抗体或其抗原结合片段；
RG选自马来酰亚胺、N-羟基琥珀酰亚胺、伯胺或琥珀酰亚胺；
SP不存在或是间隔基残基，所述间隔基残基选自由以下组成的组：C1-6烷基、-NH-、-C(O)-、-CH2-CH2-C(O)-NH-、-(CH)u-C(O)-NH-、(-CH2-CH2-O)e、-NH-CH2-CH2-(-O-CH2-CH2)e-C(O)-、-C(O)-(CH2)u-C(O)-、-C(O)-NH-(CH2)v-、-(CH)u-C(O)-NH-(CH2-CH2-O)e-(CH)u-C(O)-NH-、-(CH)2-C(O)-NH-(CH2-CH2-O)8-(CH)2-C(O)-NH-及其组合，其中在每次出现时独立地，下标e是从0至20的整数，下标u是从1至8的整数，并且下标v是从1至8的整数；
AA是选自以下的连接基：缬氨酸-瓜氨酸、瓜氨酸-缬氨酸、缬氨酸-丙氨酸、丙氨酸-缬氨酸、缬氨酸-甘氨酸或甘氨酸-缬氨酸；
B不存在或是
Figure FDA0003124860190000461
其中
Figure FDA0003124860190000462
指示B通过其被键合至所述式中相邻基团的原子；
n是从1至30的整数；并且
PA是根据权利要求1-23中任一项所述的化合物。
72.根据权利要求71所述的抗体-药物缀合物，其中：
Figure FDA0003124860190000463
是
Figure FDA0003124860190000464
73.一种抗体-药物缀合物，具有根据式(XIX)的结构：
Figure FDA0003124860190000465
其中：
BA是抗体或其抗原结合片段；
RG选自马来酰亚胺、N-羟基琥珀酰亚胺或琥珀酰亚胺；
SP1和SP2独立地不存在或是间隔基，所述间隔基选自由以下组成的组：C1-6烷基、-NH-、-C(O)-、-CH2-CH2-C(O)-NH-、-(CH)u-C(O)-NH-、(-CH2-CH2-O)e、-NH-CH2-CH2-(-O-CH2-CH2)e-C(O)-、-C(O)-(CH2)u-C(O)-、-C(O)-NH-(CH2)v-及其组合，其中下标e是从0至4的整数，下标u是从1至8的整数，并且下标v是从1至8的整数；
AA是选自以下的连接基：缬氨酸-瓜氨酸、瓜氨酸-缬氨酸、缬氨酸-丙氨酸、丙氨酸-缬氨酸、缬氨酸-甘氨酸或甘氨酸-缬氨酸；
PEG是包含在1个和30个之间的聚乙二醇残基的聚乙二醇链；
B不存在或是
Figure FDA0003124860190000471
其中
Figure FDA0003124860190000472
指示B通过其被键合至所述式中相邻基团的原子；
n是从1至30的整数；
m是从0至20的整数；
并且PA是根据权利要求1-11中任一项所述的化合物。
74.根据权利要求73所述的抗体-药物缀合物，其中：
Figure FDA0003124860190000473
是
Figure FDA0003124860190000474
75.根据权利要求73所述的抗体-药物缀合物，其中：
Figure FDA0003124860190000475
是
Figure FDA0003124860190000476
76.根据权利要求73所述的抗体-药物缀合物，其中：
Figure FDA0003124860190000477
是
Figure FDA0003124860190000481
77.根据权利要求73所述的抗体-药物缀合物，其中：
Figure FDA0003124860190000482
是
Figure FDA0003124860190000483
78.一种抗体-药物缀合物，包含抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段经由连接基或通过连接基-间隔基缀合至利福霉素类似物，所述利福霉素类似物具有式(XX)的结构：
Figure FDA0003124860190000484
其中：
X选自-O-、-S-和-NR*-；
Za选自-OR1和-RN；
R1选自键、脂肪族C1-C20烃、芳香族C1-C20烃、杂芳香族C1-C20烃、环状脂肪族C1-C20烃、杂环C1-C20烃及其组合，它们中的每一个还包含0-8个选自卤素、O、N和S的杂原子，并且其中R1任选地被以下中的一种或更多种取代：-F、-Cl、-Br、-I、-OH、-OR*、-NO、-NO2、-NO3、-O-NO、-N3、-NH2、-NHR*、-N(R*)2、-N(R*)3 +、-N(R*)-OH、-O-N(R*)2、-N(R*)-O-R*、-CN、-NC、-(C＝O)-R*、-CHO、-CO2H、-CO2R*、-(C＝O)-S-R*、-O-(C＝O)-H、-O-(C＝O)-R*、-S-(C＝O)-R*、-(C＝O)-NH2、-(C＝O)-N(R*)2、-(C＝O)-NHNH2、-O-(C＝O)-NHNH2、-(C＝S)-NH2、-(C＝S)-N(R*)2、-N(R*)-CHO、-N(R*)-(C＝O)-R*、-SCN、-NCS、-NSO、-SSR*、-SO2R*、-SO2-N(R*)2、-S(＝O)-OR*、-S(＝O)-R*、-Si(R*)3、-CF3、-O-CF3及其组合；
RN选自：
Figure FDA0003124860190000491
Figure FDA0003124860190000493
其中符号
Figure FDA0003124860190000494
表示附接点；并且R’、R”和R”’选自氢、C1-C6脂肪族烃和选自以下的保护基团：FMOC和Boc，或者其中R’和R‖一起形成脂肪族单环的、脂肪族双环的或脂肪族多环的结构；
R2、R3和R4独立地选自氢，直链的、支链的或环状的脂肪族C1-C20烃，或者-(C＝O)-R*，它们中的每一个还包含0-8个选自卤素、O、N和S的杂原子；
Ra在每次出现时独立地选自氢、-F、-Cl、-Br、-I、-OH、-OR*、-NH2、-NHR*、-N(R*)2、-N(R*)3 +、-(C＝O)-R*、-CHO、-CO2H、-CO2R*、-SR*、-SO2R*和脂肪族C1-C20烃，它还包含0-8个选自卤素、O、N和S的杂原子，并且其中Ra任选地被以下中的一种或更多种取代：-F、-Cl、-Br、-I、-OH、-OR*；
R*在每次出现时独立地选自氢、脂肪族C1-C20烃、芳香族C1-C20烃、杂芳香族C1-C20烃、环状脂肪族C1-C20烃、杂环C1-C20烃及其组合，它还包含0-8个选自卤素、O、N和S及其组合的杂原子；并且
其中基团Za被键合至所述连接基。
79.根据权利要求78所述的抗体-药物缀合物，其中-OR1是-O-(即，R1不存在)、
Figure FDA0003124860190000501
Figure FDA0003124860190000502
Figure FDA0003124860190000511
80.根据权利要求79所述的抗体-药物缀合物，其中X是O，并且-OR1包括叔胺。
81.根据权利要求80所述的抗体-药物缀合物，其中-OR1是
Figure FDA0003124860190000512
Figure FDA0003124860190000513
82.一种抗体-药物缀合物，包含抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段经由连接基或通过连接基-间隔基缀合至利福霉素类似物，所述利福霉素类似物具有式(XXI)的结构：
Figure FDA0003124860190000514
其中：
X选自-O-、-S-和-NR*-；
R5选自键；脂肪族C1-C20烃，它还包含0-8个选自卤素、O、N和S的杂原子；
Figure FDA0003124860190000515
其中Y是C或N；
R2、R3和R4独立地选自氢，直链的、支链的或环状的脂肪族C1-C20烃，或者-(C＝O)-R*，它们中的每一个还包含0-8个选自卤素、O、N和S的杂原子；并且
R5c是键或脂肪族C1-C8烃；
其中基团R5被键合至所述连接基。
83.根据权利要求82所述的抗体-药物缀合物，其中-OR5是-O-(即，R5不存在)、
Figure FDA0003124860190000521
Figure FDA0003124860190000522
84.根据权利要求82所述的抗体-药物缀合物，其中X是O，并且-OR5包括叔胺。
85.根据权利要求82所述的抗体-药物缀合物，其中-OR5是
Figure FDA0003124860190000523
Figure FDA0003124860190000524
86.根据权利要求78-85所述的抗体-药物缀合物，其中R2是甲基、乙基、丙基或异丙基；R3是CH3-(C＝O)-(乙酰基)、CH3CH2-(C＝O)-、CH3CH2CH2-(C＝O)-或(CH3)2CH-(C＝O)-；并且R4是氢。
87.根据权利要求78-86所述的抗体-药物缀合物，其中R2是甲基，R3是乙酰基，并且R4是氢。
88.根据权利要求78-87所述的抗体-药物缀合物，其中所述化合物选自由以下组成的组：
Figure FDA0003124860190000531
Figure FDA0003124860190000541
Figure FDA0003124860190000551
Figure FDA0003124860190000561
Figure FDA0003124860190000571
其中
Figure FDA0003124860190000572
是至所述连接基的键。
89.一种抗体-药物缀合物，具有式(XXII)的结构：
Figure FDA0003124860190000581
其中：
BA是抗体或其抗原结合片段；
L是连接基；
SP是选自以下的间隔基：
Figure FDA0003124860190000582
Figure FDA0003124860190000583
Y是C或N；其中符号
Figure FDA0003124860190000584
表示附接点；并且R’、R”和R”’选自氢、C1-C6脂肪族烃和选自以下的保护基团：芴基甲氧羰基(FMOC)和叔丁氧羰基(Boc)，或者其中R’和R‖一起形成脂肪族单环的、脂肪族双环的或脂肪族多环的结构；
R’和R”在每次出现时独立地选自氢和C1-6烷基；并且
X选自-O-、-S-和-NR*-。
90.根据权利要求89所述的抗体-药物缀合物，其中L是具有以下式的连接基：
Figure FDA0003124860190000591
其中：
RG选自马来酰亚胺、N-羟基琥珀酰亚胺或琥珀酰亚胺；
SP1和SP2独立地不存在或是间隔基，所述间隔基选自由以下组成的组：
Figure FDA0003124860190000592
C1-6烷基、-NH-、-C(O)-、-CH2-CH2-C(O)-NH-、-(CH)u-C(O)-NH-、(-CH2-CH2-O)e、-NH-CH2-CH2-(-O-CH2-CH2)e-C(O)-、-C(O)-(CH2)u-C(O)-、-C(O)-NH-(CH2)v-及其组合，其中下标e是从0至4的整数，下标u是从1至8的整数，并且下标v是从1至8的整数；
AA2-4是包含从2个至4个氨基酸的肽单元；并且
PEG是包含在1个和30个之间的聚乙二醇残基的聚乙二醇链。
91.根据权利要求90所述的抗体-药物缀合物，其中AA2-4是选自以下的二肽：缬氨酸-瓜氨酸、瓜氨酸-缬氨酸、缬氨酸-丙氨酸、丙氨酸-缬氨酸、缬氨酸-甘氨酸或甘氨酸-缬氨酸。
92.根据权利要求90或91所述的抗体-药物缀合物，其中AA2-4是缬氨酸-瓜氨酸。
93.根据权利要求89-92中任一项所述的抗体-药物缀合物，其中SP是
Figure FDA0003124860190000593
并且R’和R”各自是C1-6烷基。
94.根据权利要求93所述的抗体-药物缀合物，其中SP是
Figure FDA0003124860190000594
并且R’和R”各自是甲基。
95.根据权利要求89-94中任一项所述的抗体-药物缀合物，其中SP1和SP2各自是
Figure FDA0003124860190000595
96.根据权利要求89-95中任一项所述的抗体-药物缀合物，其中PEG包含8个聚乙二醇单元。
97.根据权利要求89-96中任一项所述的抗体-药物缀合物，其中所述抗体-药物缀合物具有以下结构：
Figure FDA0003124860190000601
其中BA是抗体或其抗原结合片段。
98.根据权利要求89-96中任一项所述的抗体-药物缀合物，其中所述抗体-药物缀合物具有以下结构：
Figure FDA0003124860190000602
其中BA是抗体或其抗原结合片段。
99.根据权利要求89-96中任一项所述的抗体-药物缀合物，其中所述抗体-药物缀合物具有以下结构：
Figure FDA0003124860190000603
其中BA是抗体或其抗原结合片段。
100.根据权利要求89-96中任一项所述的抗体-药物缀合物，其中所述抗体-药物缀合物具有以下结构：
Figure FDA0003124860190000611
其中BA是抗体或其抗原结合片段。
101.根据权利要求89-96中任一项所述的抗体-药物缀合物，其中所述抗体-药物缀合物具有以下结构：
Figure FDA0003124860190000612
其中BA是抗体或其抗原结合片段。
102.根据权利要求71-101中任一项所述的抗体-药物缀合物，其中所述抗体或其抗原结合片段结合感染性疾病相关的靶标。
103.根据权利要求71-102中任一项所述的抗体-药物缀合物，其中所述抗体或其抗原结合片段结合巨噬细胞清道夫受体1(MSR1)。
104.根据权利要求71-102中任一项所述的抗体-药物缀合物，其中所述抗体或其抗原结合片段结合壁磷壁酸(WTA)。
105.根据权利要求71-102中任一项所述的抗体-药物缀合物，其中所述抗体或其抗原结合片段结合金黄色葡萄球菌蛋白A。
106.根据权利要求71-105中任一项所述的抗体-药物缀合物，其中所述抗体或其抗原结合片段包含轻链中的C103S突变。
107.根据权利要求71-106中任一项所述的抗体-药物缀合物，其中所述抗体或其抗原结合片段在轻链的103位缀合至所述化合物。
108.根据权利要求63-107中任一项所述的抗体-药物缀合物，具有在约1和约8之间的药物-抗体比率(DAR)。
109.根据权利要求63-107中任一项所述的抗体-药物缀合物，具有在约1和约6之间的药物-抗体比率(DAR)。
110.根据权利要求63-107中任一项所述的抗体-药物缀合物，具有在约0.6和约3.2之间的药物-抗体比率(DAR)。
111.根据权利要求63-107中任一项所述的抗体-药物缀合物，具有约1的药物-抗体比率(DAR)。
112.根据权利要求63-107中任一项所述的抗体-药物缀合物，具有约2的药物-抗体比率(DAR)。
113.根据权利要求63-107中任一项所述的抗体-药物缀合物，具有约3的药物-抗体比率(DAR)。
114.根据权利要求63-107中任一项所述的抗体-药物缀合物，具有约4的药物-抗体比率(DAR)。
115.一种预防或抑制细菌的生长的方法，包括施用有效量的根据权利要求63-114中任一项所述的抗体-药物缀合物。
116.根据权利要求115所述的方法，其中所述细菌是革兰氏阳性细菌。
117.根据权利要求115或116所述的方法，其中所述细菌是耐青霉素细菌。
118.根据权利要求115-117中任一项所述的方法，其中所述细菌是金黄色葡萄球菌。
119.根据权利要求115-118中任一项所述的方法，其中所述细菌选自耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)、耐万古霉素金黄色葡萄球菌(VRSA)和甲氧西林易感性金黄色葡萄球菌(MSSA)。
120.一种治疗需要相应治疗的受试者的细菌感染的方法，包括向所述受试者施用有效量的根据权利要求63-114中任一项所述的抗体-药物缀合物。
121.根据权利要求120所述的方法，其中所述细菌感染是革兰氏阳性细菌感染。
122.根据权利要求120所述的方法，其中所述细菌感染是耐青霉素细菌感染。
123.根据权利要求120-122中任一项所述的方法，其中所述细菌感染是金黄色葡萄球菌感染。
124.根据权利要求120-123中任一项所述的方法，其中所述细菌感染选自耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)感染、耐万古霉素金黄色葡萄球菌(VRSA)感染和甲氧西林易感性金黄色葡萄球菌(MSSA)感染。
125.根据权利要求120-124中任一项所述的方法，其中所述细菌感染是细胞内细菌感染。
126.根据权利要求120-125中任一项所述的方法，其中所述受试者是人类。
127.根据权利要求120-126中任一项所述的方法，还包括施用第二治疗剂。
128.根据权利要求127所述的方法，其中所述第二治疗剂是第二抗生素。
129.根据权利要求127所述的方法，其中所述第二抗生素针对金黄色葡萄球菌是有效的。
130.根据权利要求127所述的方法，其中所述第二抗生素选自氨基糖苷、β-内酰胺、大环内酯、环肽、四环素、氟喹啉、氟喹诺酮和噁唑烷酮。
131.根据权利要求127所述的方法，其中所述第二抗生素选自克林霉素、新生霉素、瑞他莫林、达托霉素、西他沙星、替考拉宁、三氯生、萘啶酮、雷德唑胺、多柔比星、氨苄西林、万古霉素、亚胺培南、多利培南、吉西他滨、达巴万星和阿奇霉素。
132.根据权利要求115-131中任一项所述的方法，其中所述抗体-药物缀合物被口服地、局部地、鼻内地、静脉内地、肌内地或皮下地施用至所述受试者。
133.一种在受试者中预防或治疗蜂窝组织炎、菌血症、皮肤坏死、眼睑感染、眼部感染、新生儿结膜炎、骨髓炎、脓疱病、疖子、烫伤样皮肤综合征、食物中毒、肺炎、外科手术感染、尿道感染、烧伤感染、脑膜炎、心内膜炎、败血症、中毒性休克综合征、脓毒性关节炎、乳腺炎、与假肢关节相关的感染、与导管相关的感染或与植入物相关的感染的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效治疗量的根据权利要求1-23中任一项所述的化合物或根据权利要求24所述的药物组合物或根据权利要求63-114中任一项所述的抗体-药物缀合物。
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