KR20210107752A - 리파마이신 유사체 및 이의 항체-약물 접합체 - Google Patents

리파마이신 유사체 및 이의 항체-약물 접합체 Download PDF

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KR20210107752A
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토마스 니톨리
승용 션 최
므린모이 사하
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리제너론 파마슈티칼스 인코포레이티드
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Abstract

본 개시내용은 세균 성장(예컨대, 에스. 아우레우스 성장)을 억제하고 세균 감염(예컨대, 에스. 아우레우스 감염)을 치료할 수 있는 리파마이신 유사체 화합물, 이의 중간체 및 전구체, 및 약제학적 조성물에 관한 것이다. 본 개시내용은 또한 리파마이신 유사체 화합물과 항체, 예를 들면, 감염성 질환-관련 표적, 예를 들면, 막 당단백질 수용체(MSR1), 벽 테이코산(WTA) 또는 단백질 A에 대해 특이적인 항체의 항체-약물 접합체, 및 세균 성장을 억제하고 세균 감염을 치료하기 위한 이의 사용 방법에 관한 것이다.

Description

리파마이신 유사체 및 이의 항체-약물 접합체
관련 출원에 대한 전후 참고
본 출원은 2018년 12월 21일자로 출원된 미국 가특허원 제62/783,506호, 및 2019년 5월 8일자로 출원된 제62/844,860호에 대한 우선권을 청구하며, 이의 내용은 이의 전문이 본원에 참고로 포함된다.
개시내용의 분야
본 개시내용은 세균 성장을 억제하고 세균 감염을 치료할 수 있는 리파마이신 유사체 화합물 및 약제학적 조성물 뿐만 아니라 리파마이신 유사체 화합물과 항체, 예를 들면, 감염성 질환-관련 표적에 대해 특이적인 항체의 항체-약물 접합체, 및 이의 사용 방법에 관한 것이다.
서열 목록
본 출원은 ASCII 양식으로 전자 제출되고 이의 전문이 본원에 참고로 포함된 서열 목록을 함유한다. 2019년 12월 19일자로 생성된, 상기 ASCII 카피는 250298_000145_SL.TXT로 명명되고 크기는 409,310 바이트이다.
개시내용의 배경
스타필로코쿠스 아우레우스(Staphylococcus aureus)(에스. 아우레우스(S. aureus))는 피르미쿠테스(Firmicutes)의 구성원인 그람-양성의, 환형 세균이며, 이는 상기도관 속 및 피부 상에서 흔히 발견되는, 체내 미생물군(microbiota)의 일반적인 구성원이다. 이는 흔히 카탈라제 및 니트레이트 환원에 대해 양성이며 산소의 필요없이 성장할 수 있는 혐기성 미생물(facultative anaerobe)이다. 에스. 아우레우스가 사람 미생물군의 공생물로서 일반적으로 작용하지만, 이는 또한 종기(abscess), 기도 감염, 예를 들면, 부비강염(sinusitis), 및 식중독(food poisoning)을 포함하는 피부 감염의 일반적인 원인인, 기회 감염이 될 수 있다. 병원성 균주는 흔히 발병 인자(virulence factor), 예를 들면, 강력한 단백질 독소를 생산함으로써 감염, 및 항체에 결합하여 이를 불활성화시키는 세포-표면 단백질의 발현을 촉진한다.
사람 집단의 대략 20% 내지 30%는 에스. 아우레우스의 장기간 매개체(long-term carrier)이며, 이는 정상적인 피부 상재균(skin flora)의 부분으로서, 콧구멍 내에, 및 여성의 생식기 관(lower reproductive tract)의 정상적인 서식균으로서 발견될 수 있다. 에스. 아우레우스는 작은 피부 감염, 예를 들면, 여드름(pimple), 농가진(impetigo), 부스럼(boil), 봉와직염(cellulitis), 모낭염(folliculitis), 옹(carbuncle), 화상피부 증후군(scalded skin syndrome), 및 신경마비로부터 생명을 위협하는 질환, 예를 들면, 폐렴(pneumonia), 수막염(meningitis), 골수염(osteomyelitis), 심장내막염(endocarditis), 독성 쇼크 증후군(toxic shock syndrome), 균혈증(bacteremia), 및 패혈증(sepsis)에 이르는 광범위한 질병을 유발할 수 있다. 이는 여전히 병원 감염(hospital-acquired infection)의 5개의 가장 일반적인 원인 중 하나이며 흔히 수술 후 상처 감염의 원인이다. 매년, 미국의 병원에서 대략 500,000명의 환자가 주로 에스. 아루레우스에 의한, 스타필로코쿠스 감염에 걸린다. 미국에서 매년 50,000명 이하의 사망이 에스. 아우레우스 감염과 연관되어 있다(Schlecht LM et al, 2015, Microbiology, 161, 1, 168-181). 많은 연구 및 개발에도 불구하고, 에스. 아우레우스에 대한 백신은 현재까지 승인되지 않았다.
초기에, 에스. 아우레우스 감염에 대한 치료 선택은 페니실린이었다. 에스. 아우레우스에서 항생제 내성은 페니실린이 1943년에 처음 도입되었을 때 일반적이지 않았다. 1950년까지, 병원 에스. 아우레우스 단리체(isolate)의 40%는 페니실린-내성이었고; 1960년까지, 이는 80%로 상승하였다(Chambers HF, 2001, Emerging Infectious Diseases, 7, 2, 178-82). 오늘날, 에스. 아우레우스는 가장 일반적으로 사용된 항생제에 대해 내성이 되어 있다.
메티실린-내성 에스. 아우레우스(methicillin-resistant S. aureus)(MRSA)와 같은, 에스. 아우레우스의 항생제-내성 균주의 출현은 임상 의약에서 전세계적인 문제이다. MRSA 균주는 병원과 같은 기관과 관련하여 가장 흔히 발견되고 있지만, 지역사회-획득 감염(community-acquired infection)에서 우세하게 증가하고 있다. MRSA는 대부분의 β-락탐 항생제에 대해 내성이 되는 에스. 아우레우스의 가장 두려운 균주의 구성원 중 하나이다. 병원 및 지역사회 환경 둘 다에서 MRSA 감염은 비-β-락탐 항생제, 예를 들면, 클린다마이신(린코스아민) 및 코-트리목사졸(또한 트리메토프림/설파메톡사졸로 일반적으로 공지됨)으로 일반적으로 치료된다. 이러한 항생제에 대한 내성은, 또한 경구 약물로서 이의 이용가능성으로 인하여, 새로운, 광범위한 스펙트럼의 항-그램-양성 항생제, 예를 들면, 리네졸리드의 사용을 이끌었다. MRSA로 인한 심각한 침입성 감염의 제1 선 치료는 현재 글리코펩타이드 항생제(반코마이신 및 테이코플라닌)이다. 이러한 항생제를 사용한 다수의 문제, 예를 들면, 정맥내 투여 필요성(경구 제제는 이용 불가능함), 독성, 및 혈액 시험에 의해 규칙적으로 약물 수준을 모니터링 할 필요성이 발생한다. 또한, 글리코펩타이드 항생제는 감염된 조직 내로 매우 잘 침투하지 않는다(이는 뇌 및 뇌막 및 심내막염의 감염과 관련한 특수한 쟁점이다). 따라서, 일반적으로 에스. 아우레우스, 및 특히 세포내 에스. 아우레우스 감염에 촛점을 맞춘 에 대한 신규한 항생제 치료에 대한 충족되지 않은 강력한 요구가 존재한다.
안사마이신 항생제 계열의 소부류(subclass)인, 리파마이신은 세균 아미콜라톱시스 리파마이시니카(Amycolatopsis rifamycinica)에 의해 천연적으로 또는 인공적으로 합성된 항생제의 그룹이다. 리파마이신은 마이코박테리아에 대해 특히 효과적이므로, 폐결핵(tuberculosis), 나병(leprosy), 및 마이코박테리운 아비움 복합체(mycobacterium avium complex)(MAC) 감염을 치료하는데 사용된다. 리파마이신 그룹은 "전통적인" 리파마이신 약물 뿐만 아니라, 리파마이신 유사체 리팜피신(또는 리팜핀), 리파부틴, 리파펜틴, 리팔라질 및 리팍시민을 포함한다. 상표명 Aemcolo 하에 시판된 리파마이신 SV는 일부 환경에서 여행자 설사(travelers' diarrhea)의 치료용으로 FDA-승인되어 있다.
리파마이신 부류 항생제는 세균 RNA 폴리머라제(RNAP)를 억제하며 에스. 아루레우스에 대해 강력한 활성을 갖는다. 그러나, 당해 부류의 항생제를 사용한 단독치료요법은 치료 동안 내성 집단의 선택을 초래할 수 있다. 따라서, 리파마이신 항생제는 일반적으로 인공기관(prosthesis) 또는 외부 장치에서 결과를 개선시키는 제1선 항생제와 함께 사용될 수 있다.
대식구 스캐빈저 수용체(Macrophage scavenger 수용체) 1(MSR1)은 음으로 하전된/다가양이온성 리간드 시리즈, 예를 들면, 변형된 저 밀도 지단백질(LDL)(Krieger, M. 1994. Annu. Rev. Biochem. 63:601-637; Platt, N. and S. Gordon. 2001. J Clin Invest. 108(5):649-654) 및 소 혈청 알부민의 진전된 당화 말단 생성물(advanced glycation end products of bovine serum albumin)(AGE-BSA)(Smedsrød et al. 1997. Biochem J. 322(Pt 2):567-573)의 흡수를 매개하는 단일-통과(single-pass), 삼량체성 제II 형 막관통 당단백질 패턴 인식 수용체이다. MSR1 수용체는 많은 대식구-관련 생리학적 및 병리학적 공정, 예를 들면, 죽상경화증(atherosclerosis), 알츠하이머 질환(Alzheimer's disease), 및 숙주 방어(host defense)에 연관되어 왔다.
MSR1 발현은 원래 대식구-특이적인 것으로 고려되었다. 그러나, 이는 최근에 수지 세포의 상이한 부류에 존재하는 것으로 입증되었다(Herber et al. 2010. Nat. Med. 16(8): 880-886). 또한, MSR1은 내피 세포 및 평활근 세포에서 발현되는 것으로 나타난다. 이는 세포 표면에서 코팅된 핏(coated pit)을 통해 내재화되며 트랜스-골지체(trans-Golgi apparatus)로부터 세포 표면으로 다시 재순환되기 전에 산성 pH에서 이의 리간드를 방출한다(Doi et al. 1994. Journal of Biological Chemistry; Mori, T. 1994. Lab Invest.). 이는 단핵구-유래된 대식구의 거품 세포(foam cell)로의 전환을 촉진하며, 이는 죽상경화증 진행의 중요한 단계이다.
에스. 아우레우스는 대식구 및 다른 세포형에 의한 식세포작용에서 생존할 수 있는 조건적(facultative) 세포내 세균이다(Horn et al. 2018. Int. J. Med. Microbiol. 308(6): 607-624; Jubrail et al. 2016. Cell Microbiol. 18(1): 80-96; Mitchell et al. 2016. Microbiol. Spectr. 4(3)). 생체내 영상화(Intravital imaging)는 대식구가 에스. 아우레우스가 복제한 다음 감염 동안 다른 기관에 씨딩(seeding)시키는 저장기(reservoir)로서 제공될 수 있음이 입증되었다(Surewaard et al. 2016. J. Exp. Med. 213(7): 1141-51). 대부분의 항생제는 세포, 예를 들면, 대식구를 매우 잘 침투하지 않으며, 이는 세포내 에스. 아우레우스 저장기가 표중 보호 항생제를 사용한 치료를 피할 수 있음을 나타낸다(Lehar et al. 2015. Nature. 527(7578): 323-8). 그러나, 반코마이신의 리포좀 제형은 항생제의 대식구내로의 침투를 증가시켰고 에스. 아우레우스 기관 부담(burden)을 표준 보호 반코마이신보다 더 효과적으로 감소시켰다(Surewaard et al. 2016. J. Exp. Med. 213(7): 1141-51). 이와 함께, 이러한 데이타는 항생제를 대식구에 전달하는 것이 세포내 에스. 아루레우스 저장기를 제거하는 효과적인 방법이 될 수 있음을 나타낸다.
테이코산은 에스. 아우레우스를 포함하는 대부분의 그램-양성 세균의 세포벽내에서 많은 글리칸-결합 단백질에서 발견된 포스페이트가 풍부한 분자이다. 테이코산 뿐만 아니라 많은 다른 당단백질은 세포 막을 안정화시킬 뿐 아니라 이에 부착될 다른 분자에 대한 많은 부위를 제공하는 세균 주변에 다수의 펩티도글리칸 쉬쓰(sheath)를 형성한다. 벽 테이코산(wall teichoic acid)("WTA")은 테이코산의 하나의 유형이며, 이는 펩티도글리칸에 공유결합으로 부착하여 세포 벽을 통해서 및 이를 넘어 연장된다. WTA는 글리칸-결합 단백질에서 60%로 많은 총 세포벽 질량을 차지할 수 있다. 그 결과, 이는 에스. 아우레우스를 포함하는 그램-양성 세균에 대한 고도로 발현된 세포 표면 항원을 나타낸다.
에스. 아우레우스는 또한 다수의 표면 결정인자 항원, 예를 들면, 에스. 아우레우스 단백질 A(SpA) 및 다당류 폴리-N-아세틸글루코스아민(PNAG), 철-조절된 표면 결정인자 단백질 IsdA, IsdB, IsdC, IsdE 및 IsdH, 클럼핑 인자(clumping factor) 단백질 ClfA 및 ClfB, 캡슐 다당류형(capsular polysaccharide type)(CP) 5 및 CP8, 세린-아스파르트산 반복 단백질 SdrC, SdrD, 및 SdrE, 피브로넥틴 결합 단백질 A 및 B(FnBpA, FnBpB), Cna(콜라겐 결합 단백질), 및 SasG(에스. 아우레우스 표면 단백질 G)을 발현한다. 이러한 표면 항원은 숙주 조직의 콜로니화, 숙주 면역 반응의 회피, 및 세균 적응도(bacterial fitness)에서 역할을 담당한다.
따라서, 리파마이신 유사체를 포함하는 ADC의 개발은 대식구 세포내 리파마이신 유도체의 표적-특이적인 전달, 또는 세균 표면 위로 리파마이신 유사체의 테더링(t에테르ing)을 허용한다. 또한, 이러한 ADC는 예컨대, 내성 세균 표적에 대해 증진될 활성, 증진된 생체이용률, 및 증진된 치료학적 윈도우(therapeutic window)를 제공할 수 있다. 따라서, 리파마이신 유사체의 항체-약물 접합체를 사용하여 항생제-내성 세균의 효과적인 치료를 위한 지속된 요구가 존재한다.
따라서, 항생제-내성 에스. 아우레우스 균주를 포함하는, 항생제-내성 세균의 성장 문제를 근절하기 위해 효과적인 리파마이신 유사체를 개발하기 위한 강력한 충족되지 않은 요구가 존재한다. MSR1 항체는 이러한 화합물의 전신 투여로부터 발생하는 원치않는 부작용을 최소화할 뿐 아니라 대식구 세포내로 이러한 화합물의 내재화를 보조하는 리파마이신의 유사체와 같은 치료학적 분자의 특이적인 표적화 수단을 제공할 수 있다. 대안적으로, 세포 표면 항원(예컨대, WTA, 단백질 A)을 표적화하는 항체에 대한 접합은 리파마이신 유사체의 치료학적 효과를 증진시킬 수 있다.
상기 논의는 당해 분야에서 직면하는 문제점의 특성의 보다 우수한 이해를 제공하기 위해 단독으로 나타내며 어떠한 방식으로도 선행 기술에 대한 허용으로 해석되거나 본원의 어떠한 참고 문헌의 인용이 이러한 참고 문헌이 본 출원에 대한 "선행 기술"을 구성하는 것을 허용하는 것으로 해석되지 않아야 한다.
발명의 요약
본원에 논의된 바와 같이, 일반적으로 세균 감염 및 특히 에스. 아우레우스 감염에 대한 효과적인 치료를 개발하기 위한 강력한 요구가 존재한다. 본 개시내용은 신규한 리파마이신 유사체 화합물, 중간체 및 이의 전구체(precursor), 항체-약물 접합체, 약제학적 조성물, 및 이러한 화합물 및 약제학적 조성물을 기반으로 한 치료 방법을 제공함으로써 이러한 및 다른 요구에 초점을 맞추고 있다.
다양한 비-제한적 양태 및 구현예는 하기 기술되어 있다.
일 양태에서, 본 개시내용은 화학식 (A)의 구조를 갖는 리파마이신 유사체 화합물, 이의 중간체 또는 전구체 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 제공한다:
Figure pct00001
(A)
상기 화학식 (A)에서:
X는 -O- 및 -NR*-로부터 선택되고;
Za 및 Zb는 수소, -Cl, -Br, -OR1 및 -RN으로부터 독립적으로 선택되고; 단 Za 또는 Zb 중 적어도 하나는 수소가 아니고; 여기서:
R1은 수소, RN, 지방족 C1-C20 탄화수소, 방향족 C1-C20 탄화수소, 헤테로방향족 C1-C20 탄화수소, 사이클릭 지방족 C1-C20 탄화수소, 헤테로사이클릭 C1-C20 탄화수소, 및 이의 조합으로부터 선택되고, 이들 각각은 할로겐, O, N, 및 S로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함하고, 여기서 R1은 -F, -Cl, -Br, -I, -OH, -OR*, -NO, -NO2, -NO3, -O-NO, -N3, -NH2, -NHR*, -N(R*)2, -N(R*)3 +, -N(R*)-OH, -O-N(R*)2, -N(R*)-O-R*, -CN, -NC, -(C=O)-R*, -CHO, -CO2H, -CO2R*, -(C=O)-S-R*, -O-(C=O)-H, -O-(C=O)-R*, -S-(C=O)-R*,-(C=O)-NH2, -(C=O)-N(R*)2, -(C=O)-NHNH2, -O-(C=O)-NHNH2, -(C=S)-NH2, -(C=S)-N(R*)2, -N(R*)-CHO, -N(R*)-(C=O)-R*, -SCN, -NCS, -NSO, -SSR*, -SO2R*, -SO2-N(R*)2, -S(=O)-OR*, -S(=O)-R*, -Si(R*)3, -CF3, -O-CF3 및 이의 조합 중 하나 이상으로 임의 치환되고, 단 R1은 n-부틸 그룹이 아니고, X가 -O-이고 Ra가 수소인 경우, R1은 수소가 아니고;
RN은:
Figure pct00002
로부터 선택되고; 여기서
Figure pct00003
기호는 부착 점을 나타내고; R', R" 및 R"'는 수소, C1-C6 지방족 탄화수소, 및 플루오레닐메틸옥시카보닐(FMOC) 및 3급-부틸옥시카보닐(BOC)로부터 선택된 보호 그룹으로부터 선택되거나, 여기서 R' 및 R"는 함께 지방족 모노사이클릭, 지방족 비사이클릭, 또는 지방족 폴리사이클릭 구조를 형성하고;
R2, R3, 및 R4는 수소, 지방족 C1-C20 탄화수소, 및 -(C=O)-R*로부터 독립적으로 선택되고, 이들 각각은 할로겐, O, N, 및 S로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함하고;
Ra는 수소, -F, -Cl, -Br, -I, -OH, -OR*, -NH2, -NHR*, -N(R*)2, -N(R*) 3 +, -(C=O)-R*, -CHO, -CO2H, -CO2R*, -SR*, -SO2R*, 및 지방족 C1-C20 탄화수소로부터 선택되고, 이는 할로겐, O, N, 및 S로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함하고, 여기서 Ra는 -F, -Cl, -Br, -I, -OH, -OR* 중 하나 이상으로 임의 치환되고;
Rb는 수소, -F, -Cl, -Br, -I, -OH, -OR*, -(C=O)-R*, -CHO, -CO2H, -CO2R* 및 지방족 C1-C20 탄화수소로부터 선택되고, 이는 할로겐, O, 및 S로부터 선택된 0 내지 3개의 헤테로원자를 추가로 포함하고, 여기서 Rb는 -F, -Cl, -Br, -I, -OH, -OR* 중 하나 이상으로 임의 치환되고,
R*는 각각의 존재시 수소, 지방족 C1-C20 탄화수소, 방향족 C1-C20 탄화수소, 헤테로방향족 C1-C20 탄화수소, 사이클릭 지방족 C1-C20 탄화수소, 헤테로사이클릭 C1-C20 탄화수소, 및 이의 조합으로부터 독립적으로 선택되고, 이는 할로겐, O, N, 및 S 및 이의 조합으로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함한다.
일 양태에서, 본 개시내용은 화학식 (I)을 갖는 리파마이신 유사체 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 제공한다:
Figure pct00004
여기서:
X는 -O- 및 -NR*-로부터 선택되고;
R1은 RN, 수소, 지방족 C1-C20 탄화수소, 방향족 C1-C20 탄화수소, 헤테로방향족 C1-C20 탄화수소, 사이클릭 지방족 C1-C20 탄화수소, 헤테로사이클릭 C1-C20 탄화수소, 및 이의 조합으로부터 선택되고, 이들 각각은 할로겐, O, N, 및 S로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함하고, 여기서 R1은 -F, -Cl, -Br, -I, -OH, -OR*, -NO, -NO2, -NO3, -O-NO, -N3, -NH2, -NHR*, -N(R*)2, -N(R*)3 +, -N(R*)-OH, -O-N(R*)2, -N(R*)-O-R*, -CN, -NC, -(C=O)-R*, -CHO, -CO2H, -CO2R*, -(C=O)-S-R*, -O-(C=O)-H, -O-(C=O)-R*, -S-(C=O)-R*, -(C=O)-NH2, -(C=O)-N(R*)2, -(C=O)-NHNH2, -O-(C=O)-NHNH2, -(C=S)-NH2, -(C=S)-N(R*)2, -N(R*)-CHO, -N(R*)-(C=O)-R*, -SCN, -NCS, -NSO, -SSR*, -SO2R*, -SO2-N(R*)2, -S(=O)-OR*, -S(=O)-R*, -Si(R*)3, -CF3, -O-CF3 및 이의 조합 중 하나 이상으로 임의 치환되고, 단 R1은 n-부틸 그룹이 아니고, X가 -O-이고 Ra가 수소이면, R1은 수소가 아니고;
RN은:
Figure pct00005
로부터 선택되고; 여기서
Figure pct00006
기호는 부착 점을 나타내고; R', R" 및 R"'는 수소, C1-C6 지방족 탄화수소, 및 FMOC 및 BOC로부터 선택된 보호 그룹으로부터 선택되거나, 여기서 R' 및 R"는 함께 지방족 모노사이클릭, 지방족 비사이클릭, 또는 지방족 폴리사이클릭 구조를 형성하고;
R2, R3, 및 R4는 수소, 지방족 C1-C20 탄화수소, 또는 -(C=O)-R*로부터 독립적으로 선택되고 이들 각각은 할로겐, O, N, 및 S로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함하고;
Ra는 수소, F, -Cl, -Br, -I, -OH, -OR*, -NH2, -NHR*, -N(R*)2, -N(R*)3 +, -(C=O)-R*, -CHO, -CO2H, -CO2R*, -SR*, -SO2R*, 및 지방족 C1-C20 탄화수소로부터 선택되고, 이는 할로겐, O, N, 및 S로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함하고, 여기서 Ra는 -F, -Cl, -Br, -I, -OH, -OR* 중 하나 이상으로 임의 치환되고;
Rb는 수소, -F, -Cl, -Br, -I, -OH, -OR*, -(C=O)-R*, -CHO, -CO2H, -CO2R* 및 지방족 C1-C20 탄화수소로부터 선택되고, 이는 할로겐, O, 및 S로부터 선택된 0 내지 3개의 헤테로원자를 추가로 포함하고, 여기서 Rb는 -F, -Cl, -Br, -I, -OH, -OR* 중 하나 이상으로 임의 치환되고; R*는 각각의 존재시 수소, 지방족 C1-C20 탄화수소, 방향족 C1-C20 탄화수소, 헤테로방향족 C1-C20 탄화수소, 사이클릭 지방족 C1-C20 탄화수소, 헤테로사이클릭 C1-C20 탄화수소, 및 이의 조합으로부터 독립적으로 선택되고, 이는 할로겐, O, N, 및 S 및 이의 조합으로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함한다.
일 양태에서, 본 개시내용은 화학식 (I')의 구조를 갖는 리파마이신 유사체 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 제공한다:
Figure pct00007
여기서:
X는 -O- 및 -NR*-로부터 선택되고;
R1은 RN, 수소, 지방족 C1-C20 탄화수소, 방향족 C1-C20 탄화수소, 헤테로방향족 C1-C20 탄화수소, 사이클릭 지방족 C1-C20 탄화수소, 헤테로사이클릭 C1-C20 탄화수소, 및 이의 조합으로부터 선택되고, 이들 각각은 할로겐, O, N, 및 S로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함하고, 여기서 R1은 -F, -Cl, -Br, -I, -OH, -OR*, -NO, -NO2, -NO3, -O-NO, -N3, -NH2, -NHR*, -N(R*)2, -N(R*)3 +, -N(R*)-OH, -O-N(R*)2, -N(R*)-O-R*, -CN, -NC, -(C=O)-R*, -CHO, -CO2H, -CO2R*, -(C=O)-S-R*, -O-(C=O)-H, -O-(C=O)-R*, -S-(C=O)-R*, -(C=O)-NH2, -(C=O)-N(R*)2, -(C=O)-NHNH2, -O-(C=O)-NHNH2, -(C=S)-NH2, -(C=S)-N(R*)2, -N(R*)-CHO, -N(R*)-(C=O)-R*, -SCN, -NCS, -NSO, -SSR*, -SO2R*, -SO2-N(R*)2, -S(=O)-OR*, -S(=O)-R*, -Si(R*)3, -CF3, -O-CF3 및 이의 조합 중 하나 이상으로 임의 치환되고, 단, R1은 n-부틸 그룹이 아니고, X가 -O-이고 Ra가 수소이면, R1은 수소가 아니고;
RN은:
Figure pct00008
로부터 선택되고; 여기서
Figure pct00009
기호는 부착 점을 나타내고; R', R" 및 R"'는 수소, C1-C6 지방족 탄화수소, FMOC 및 BOC로부터 선택된 보호 그룹으로부터 선택되거나, 여기서 R' 및 R"는 함께 지방족 모노사이클릭, 지방족 비사이클릭, 또는 지방족 폴리사이클릭 구조를 형성하고;
R2, R3, 및 R4는 수소, 지방족 C1-C20 탄화수소, 또는 -(C=O)-R*로부터 독립적으로 선택되고, 이들 각각은 할로겐, O, N, 및 S로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함하고;
Ra는 수소, F, -Cl, -Br, -I, -OH, -OR*, -NH2, -NHR*, -N(R*)2, -N(R*)3 +, -(C=O)-R*, -CHO, -CO2H, -CO2R*, -SR*, -SO2R*, 및 지방족 C1-C20 탄화수소로부터 선택되고, 이는 할로겐, O, N, 및 S로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함하고, 여기서 Ra는 -F, -Cl, -Br, -I, -OH, -OR* 중 하나 이상으로 임의 치환되고;
Rb는 수소, -F, -Cl, -Br, -I, -OH, -OR*, -(C=O)-R*, -CHO, -CO2H, -CO2R* 및 지방족 C1-C20 탄화수소로부터 선택되고, 이는 할로겐, O, 및 S로부터 선택된 0 내지 3개의 헤테로원자를 추가로 포함하고, 여기서 Rb는 -F, -Cl, -Br, -I, -OH, -OR* 중 하나 이상으로 임의 치환되고;
R*는 각각의 존재시 수소, 지방족 C1-C20 탄화수소, 방향족 C1-C20 탄화수소, 헤테로방향족 C1-C20 탄화수소, 사이클릭 지방족 C1-C20 탄화수소, 헤테로사이클릭 C1-C20 탄화수소, 및 이의 조합으로부터 독립적으로 선택되고, 이는 할로겐, O, N, 및 S 및 이의 조합으로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함한다.
화학식 (A), (I), 또는 (I')의 화합물의 구현예에서, X는 -O-이고, R1은 지방족 C1-C3 탄화수소이고, R2는 메틸 그룹이고, R3은 Ac (-(C=O)-CH3)이고, R4는 수소이고, Ra는 수소이다.
화학식 (A), (I), 또는 (I')의 화합물의 구현예에서, X는 -O-이고, R1은 벤질 그룹이고, R2는 메틸 그룹이고, R3은 Ac (-(C=O)-CH3)이고, R4는 수소이고; Ra는 수소이고 Rb는 수소이다.
화학식 (A), (I), 또는 (I')의 화합물의 구현예에서, X는 -O-이고, R1은 O 및 N으로부터 선택된 1 내지 8개의 헤테로원자를 포함하는 지방족 C1-C8 탄화수소이고, R2는 메틸 그룹이고, R3은 Ac(-(C=O)-CH3)이고, R4는 수소이고; Ra는 수소이고 Rb는 수소이다.
화학식 (A), (I), 또는 (I')의 화합물의 구현예에서, X는 -O-이고; R1은 -NH2, -NHR*, -N(R*)2 중 하나 이상으로 치환된 지방족 C1-C8 탄화수소이고; R*는 수소 또는 지방족 C1-C3 탄화수소이고; R2는 메틸 그룹이고; R3은 Ac(-(C=O)-CH3)이고; R4는 수소이고; Ra는 수소이고 Rb는 수소이다.
화학식 (A), (I), 또는 (I')의 화합물의 구현예에서, X는 -NCH3-이고, R1은 -OH이고, R2는 메틸 그룹이고, R3은 Ac(-(C=O)-CH3)이고, R4는 수소이고, Ra는 수소이고 Rb는 수소이다.
일 구현예에서, 본 개시내용의 리파마이신 유사체 화합물은 화학식 (II)의 구조 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 갖는다:
Figure pct00010
여기서:
X는 -O- 및 -NR*-로부터 선택되고;
Ra는 수소, -Cl, 및 -OR*로부터 선택되고;
R1은 RN, 수소, 지방족 C1-C20 탄화수소, 방향족 C1-C20 탄화수소, 헤테로방향족 C1-C20 탄화수소, 사이클릭 지방족 C1-C20 탄화수소, 헤테로사이클릭 C1-C20 탄화수소, 및 이의 조합으로부터 선택되고, 이들 각각은 할로겐, O, N, 및 S로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함하고, 여기서 R1은 -F, -Cl, -Br, -I, -OH, -OR*, -NO, -NO2, -NO3, -O-NO, -N3, -NH2, -NHR*, -N(R*)2, -N(R*)3 +, -N(R*)-OH, -O-N(R*)2, -N(R*)-O-R*, -CN, -NC, -(C=O)-R*, -CHO, -CO2H, -CO2R*, -(C=O)-S-R*, -O-(C=O)-H, -O-(C=O)-R*, -S-(C=O)-R*, -(C=O)-NH2, -(C=O)-N(R*)2, -(C=O)-NHNH2, -O-(C=O)-NHNH2, -(C=S)-NH2, -(C=S)-N(R*)2, -N(R*)-CHO, -N(R*)-(C=O)-R*, -SCN, -NCS, -NSO, -SSR*, -SO2R*, -SO2-N(R*)2, -S(=O)-OR*, -S(=O)-R*, -Si(R*)3, -CF3, -O-CF3 및 이의 조합 중 하나 이상으로 임의 치환되고, 단, R1은 n-부틸 그룹이 아니고;
RN은:
Figure pct00011
로부터 선택되고; 여기서
Figure pct00012
기호는 부착 점을 나타내고; R', R" 및 R"'은 수소, C1-C6 지방족 탄화수소, 및 FMOC 및 BOC로부터 선택된 보호 그룹으로부터 선택되거나, 여기서 R' 및 R"는 함께 지방족 모노사이클릭, 지방족 비사이클릭, 또는 지방족 폴리사이클릭 구조를 형성하고;
R*는 각각의 존재시 수소, 지방족 C1-C20 탄화수소, 방향족 C1-C20 탄화수소, 헤테로방향족 C1-C20 탄화수소, 사이클릭 지방족 C1-C20 탄화수소, 헤테로사이클릭 C1-C20 탄화수소, 및 이의 조합으로부터 독립적으로 선택되고, 이는 할로겐, O, N, 및 S 및 이의 조합으로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함한다.
일 구현예에서, 본 개시내용의 리파마이신 유사체 화합물은 화학식 (II') 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염의 구조를 갖는다:
Figure pct00013
여기서:
X는 -O- 및 -NR*-로부터 선택되고;
Ra는 수소 및 -OR*로부터 선택되고;
R1은 RN, 수소, 지방족 C1-C20 탄화수소, 방향족 C1-C20 탄화수소, 헤테로방향족 C1-C20 탄화수소, 사이클릭 지방족 C1-C20 탄화수소, 헤테로사이클릭 C1-C20 탄화수소, 및 이의 조합으로부터 선택되고, 이들 각각은 할로겐, O, N, 및 S로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함하고, 여기서 R1은 -F, -Cl, -Br, -I, -OH, -OR*, -NO, -NO2, -NO3, -O-NO, -N3, -NH2, -NHR*, -N(R*)2, -N(R*)3 +, -N(R*)-OH, -O-N(R*)2, -N(R*)-O-R*, -CN, -NC, -(C=O)-R*, -CHO, -CO2H, -CO2R*, -(C=O)-S-R*, -O-(C=O)-H, -O-(C=O)-R*, -S-(C=O)-R*, -(C=O)-NH2, -(C=O)-N(R*)2, -(C=O)-NHNH2, -O-(C=O)-NHNH2, -(C=S)-NH2, -(C=S)-N(R*)2, -N(R*)-CHO, -N(R*)-(C=O)-R*, -SCN, -NCS, -NSO, -SSR*, -SO2R*, -SO2-N(R*)2, -S(=O)-OR*, -S(=O)-R*, -Si(R*)3, -CF3, -O-CF3 및 이의 조합 중 하나 이상으로 임의 치환되고, 단, R1은 n-부틸 그룹이 아니고;
RN은:
Figure pct00014
로부터 선택되고; 여기서
Figure pct00015
기호는 부착 점을 나타내고; R', R" 및 R"'은 수소, C1-C6 지방족 탄화수소, FMOC 및 BOC로부터 선택된 보호 그룹으로부터 선택되거나, 여기서 R' 및 R"는 함께 지방족 모노사이클릭, 지방족 비사이클릭, 또는 지방족 폴리사이클릭 구조를 형성하고;
R*는 각각의 존재시 수소, 지방족 C1-C20 탄화수소, 방향족 C1-C20 탄화수소, 헤테로방향족 C1-C20 탄화수소, 사이클릭 지방족 C1-C20 탄화수소, 헤테로사이클릭 C1-C20 탄화수소, 및 이의 조합으로부터 독립적으로 선택되고, 이는 할로겐, O, N, 및 S 및 이의 조합으로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함한다.
일 구현예에서, 본 개시내용의 리파마이신 유사체 화합물은 화학식 (III)의 구조 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 갖는다:
Figure pct00016
여기서:
Ra는 수소 및 -OR*로부터 선택되고;
R5는 RN, 지방족 C1-C20 탄화수소, 방향족 C1-C20 탄화수소, 헤테로방향족 C1-C20 탄화수소, 사이클릭 지방족 C1-C20 탄화수소, 헤테로사이클릭 C1-C20 탄화수소, 및 이의 조합으로부터 선택되고, 이들 각각은 할로겐, O, N, 및 S로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함하고, 여기서 R5는 -F, -Cl, -Br, -I, -OH, -OR*, -NH2, -NHR*, -N(R*)2, -N(R*)3 +, -N(R*)-(C=O)-R*, -(C=O)-R*, -CHO, -CO2H, -CO2R* 및 이의 조합 중 하나 이상으로 임의 치환되고, 단, R5는 n-부틸 그룹이 아니고;
R*는 각각의 존재시 수소, 지방족 C1-C20 탄화수소, 방향족 C1-C20 탄화수소, 헤테로방향족 C1-C20 탄화수소, 사이클릭 지방족 C1-C20 탄화수소, 헤테로사이클릭 C1-C20 탄화수소, 및 이의 조합으로부터 독립적으로 선택되고, 이는 할로겐, O, N, 및 S 및 이의 조합으로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함하고;
RN은:
Figure pct00017
Figure pct00018
로부터 선택되고; 여기서
Figure pct00019
기호는 부착 점을 나타내고; R', R" 및 R"'는 수소, C1-C6 지방족 탄화수소, 및 FMOC 및 BOC로부터 선택된 보호 그룹으로부터 선택되거나, 여기서 R' 및 R"는 함께 지방족 모노사이클릭, 지방족 비사이클릭, 또는 지방족 폴리사이클릭 구조를 형성한다.
일 구현예에서, 본 개시내용의 리파마이신 유사체 화합물은 화학식 (III')의 구조 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 갖는다:
Figure pct00020
여기서:
Ra는 수소 및 -OR*로부터 선택되고;
R5는 RN, 지방족 C1-C20 탄화수소, 방향족 C1-C20 탄화수소, 헤테로방향족 C1-C20 탄화수소, 사이클릭 지방족 C1-C20 탄화수소, 헤테로사이클릭 C1-C20 탄화수소, 및 이의 조합으로부터 선택되고, 이들 각각은 할로겐, O, N, 및 S로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함하고, 여기서 R5는 -F, -Cl, -Br, -I, -OH, -OR*, -NH2, -NHR*, -N(R*)2, -N(R*)3 +, -N(R*)-(C=O)-R*, -(C=O)-R*, -CHO, -CO2H, -CO2R* 및 이의 조합 중 하나 이상으로 임의 치환되고, 단, R5는 n-부틸 그룹이 아니고;
R*는 각각의 존재시 수소, 지방족 C1-C20 탄화수소, 방향족 C1-C20 탄화수소, 헤테로방향족 C1-C20 탄화수소, 사이클릭 지방족 C1-C20 탄화수소, 헤테로사이클릭 C1-C20 탄화수소, 및 이의 조합으로부터 독립적으로 선택되고, 이는 할로겐, O, N, 및 S 및 이의 조합으로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함하고;
RN은:
Figure pct00021
로부터 선택되고; 여기서
Figure pct00022
기호는 부착 점을 나타내고; R', R" 및 R"'는 수소, C1-C6 지방족 탄화수소, 및 FMOC 및 BOC로부터 선택된 보호 그룹으로부터 선택되거나, 여기서 R' 및 R"는 함께 지방족 모노사이클릭, 지방족 비사이클릭, 또는 지방족 폴리사이클릭 구조를 형성한다.
일 구현예에서, 본 개시내용의 리파마이신 유사체 화합물은 화학식 (IV)의 구조 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 갖는다:
Figure pct00023
여기서:
Ra는 수소 및 -OR*로부터 선택되고;
R5는 RN, 수소, 지방족 C1-C20 탄화수소, 방향족 C1-C20 탄화수소, 헤테로방향족 C1-C20 탄화수소, 사이클릭 지방족 C1-C20 탄화수소, 헤테로사이클릭 C1-C20 탄화수소, 및 이의 조합으로부터 선택되고, 이들 각각은 할로겐, O, N, 및 S로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함하고, 여기서 R5는 -F, -Cl, -Br, -I, -OH, -OR*, -NH2, -NHR*, -N(R*)2, -N(R*)3 +, -N(R*)-(C=O)-R*, -(C=O)-R*, -CHO, -CO2H, -CO2R* 및 이의 조합 중 하나 이상으로 임의 치환되고;
RN은:
Figure pct00024
Figure pct00025
로부터 선택되고; 여기서
Figure pct00026
기호는 부착 점을 나타내고; R', R" 및 R"'은 수소, C1-C6 지방족 탄화수소, 및 FMOC 및 BOC로부터 선택된 보호 그룹으로부터 선택되거나, 여기서 R' 및 R"는 함께 지방족 모노사이클릭, 지방족 비사이클릭, 또는 지방족 폴리사이클릭 구조를 형성하고;
R*는 각각의 존재시 수소, 지방족 C1-C20 탄화수소, 방향족 C1-C20 탄화수소, 헤테로방향족 C1-C20 탄화수소, 사이클릭 지방족 C1-C20 탄화수소, 헤테로사이클릭 C1-C20 탄화수소, 및 이의 조합으로부터 독립적으로 선택되고, 이는 할로겐, O, N, 및 S 및 이의 조합으로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함한다.
일 구현예에서, 본 개시내용의 리파마이신 유사체 화합물은 화학식 (IV')의 구조 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 갖는다:
Figure pct00027
여기서:
Ra는 수소 및 -OR*로부터 선택되고;
R5는 RN, 수소, 지방족 C1-C20 탄화수소, 방향족 C1-C20 탄화수소, 헤테로방향족 C1-C20 탄화수소, 사이클릭 지방족 C1-C20 탄화수소, 헤테로사이클릭 C1-C20 탄화수소, 및 이의 조합으로부터 선택되고, 이들 각각은 할로겐, O, N, 및 S로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함하고, 여기서 R5는 -F, -Cl, -Br, -I, -OH, -OR*, -NH2, -NHR*, -N(R*)2, -N(R*)3 +, -N(R*)-(C=O)-R*, -(C=O)-R*, -CHO, -CO2H, -CO2R* 및 이의 조합 중 하나 이상으로 임의 치환되고;
RN은:
Figure pct00028
로부터 선택되고; 여기서
Figure pct00029
기호는 부착 점을 나타내고; R', R" 및 R"'는 수소, C1-C6 지방족 탄화수소, 및 FMOC 및 BOC로부터 선택된 보호 그룹으로부터 선택되거나, 여기서 R' 및 R"는 함께 지방족 모노사이클릭, 지방족 비사이클릭, 또는 지방족 폴리사이클릭 구조를 형성하고;
R*는 각각의 존재시 수소, 지방족 C1-C20 탄화수소, 방향족 C1-C20 탄화수소, 헤테로방향족 C1-C20 탄화수소, 사이클릭 지방족 C1-C20 탄화수소, 헤테로사이클릭 C1-C20 탄화수소, 및 이의 조합으로부터 독립적으로 선택되고, 이는 할로겐, O, N, 및 S 및 이의 조합으로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함한다.
일 구현예에서, 본 개시내용의 리파마이신 유사체 화합물은 화학식 (V)의 구조 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 갖는다:
Figure pct00030
여기서:
X는 -O- 및 -NR*-로부터 선택되고;
Ra는 수소 및 -OR*로부터 선택되고;
R6은 RN, 지방족 C1-C20 탄화수소, 방향족 C1-C20 탄화수소, 헤테로방향족 C1-C20 탄화수소, 사이클릭 지방족 C1-C20 탄화수소, 헤테로사이클릭 C1-C20 탄화수소, 및 이의 조합으로부터 선택되고, 이들 각각은 할로겐, O, N, 및 S로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함하고, 여기서 R6은 -OH, -OR*, -NH2, -NHR*, -N(R*)2, -N(R*)3 +, -N(R*)-(C=O)-R*, -(C=O)-R*, -CHO, -CO2H, -CO2R* 및 이의 조합으중 하나 이상으로 임의 치환되고, 단, R6은 n-부틸 그룹이 아니고;
RN은:
Figure pct00031
Figure pct00032
로부터 선택되고; 여기서
Figure pct00033
기호는 부착 점을 나타내고; R', R" 및 R"'는 수소, C1-C6 지방족 탄화수소, 및 FMOC 및 BOC로부터 선택된 보호 그룹으로부터 선택되거나, 여기서 R' 및 R"는 함께 지방족 모노사이클릭, 지방족 비사이클릭, 또는 지방족 폴리사이클릭 구조를 형성하고;
R*는 각각의 존재시 수소, 지방족 C1-C20 탄화수소, 방향족 C1-C20 탄화수소, 헤테로방향족 C1-C20 탄화수소, 사이클릭 지방족 C1-C20 탄화수소, 헤테로사이클릭 C1-C20 탄화수소, 및 이의 조합으로부터 독립적으로 선택되고, 이는 할로겐, O, N, 및 S 및 이의 조합으로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함한다.
일 구현예에서, 본 개시내용의 리파마이신 유사체 화합물은 화학식 (V')의 구조 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 갖는다:
Figure pct00034
여기서:
X는 -O- 및 -NR*-로부터 선택되고;
Ra는 수소 및 -OR*로부터 선택되고;
R6은 RN, 지방족 C1-C20 탄화수소, 방향족 C1-C20 탄화수소, 헤테로방향족 C1-C20 탄화수소, 사이클릭 지방족 C1-C20 탄화수소, 헤테로사이클릭 C1-C20 탄화수소로부터 선택되고, 이들 각각은 할로겐, O, N, 및 S로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함하고, 여기서 R6은 -OH, -OR*, -NH2, -NHR*, -N(R*)2, -N(R*)3 +, -N(R*)-(C=O)-R*, -(C=O)-R*, -CHO, -CO2H, -CO2R* 및 이의 조합 중 하나 이상으로 임의 치환되고, 단, R6은 n-부틸 그룹이 아니고;
RN은:
Figure pct00035
로부터 선택되고; 여기서
Figure pct00036
기호는 부착 점을 나타내고; R', R" 및 R"'은 수소, C1-C6 지방족 탄화수소, 및 FMOC 및 BOC로부터 선택된 보호 그룹으로부터 선택되거나, 여기서 R' 및 R"는 함께 지방족 모노사이클릭, 지방족 비사이클릭, 또는 지방족 폴리사이클릭 구조를 형성하고;
R*는 각각의 존재시 수소, 지방족 C1-C20 탄화수소, 방향족 C1-C20 탄화수소, 헤테로방향족 C1-C20 탄화수소, 사이클릭 지방족 C1-C20 탄화수소, 헤테로사이클릭 C1-C20 탄화수소, 및 이의 조합으로부터 독립적으로 선택되고, 이는 할로겐, O, N, 및 S 및 이의 조합으로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함한다.
다른 양태에서, 본 개시내용은 화학식 (B)를 갖는 리파마이신 유사체 화합물, 이의 중간체 또는 전구체, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 제공한다:
Figure pct00037
여기서:
X는 -O- 및 -NR*-로부터 선택되고;
R1은 수소, RN, 지방족 C1-C20 탄화수소, 방향족 C1-C20 탄화수소, 헤테로방향족 C1-C20 탄화수소, 사이클릭 지방족 C1-C20 탄화수소, 헤테로사이클릭 C1-C20 탄화수소, 및 이의 조합으로부터 선택되고, 이들 각각은 할로겐, O, N, 및 S로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함하고, 여기서 R1은 -F, -Cl, -Br, -I, -OH, -OR*, -NO, -NO2, -NO3, -O-NO, -N3, -NH2, -NHR*, -N(R*)2, -N(R*)3 +, -N(R*)-OH, -O-N(R*)2, -N(R*)-O-R*, -CN, -NC, -(C=O)-R*, -CHO, -CO2H, -CO2R*, -(C=O)-S-R*, -O-(C=O)-H, -O-(C=O)-R*, -S-(C=O)-R*,-(C=O)-NH2, -(C=O)-N(R*)2, -(C=O)-NHNH2, -O-(C=O)-NHNH2, -(C=S)-NH2, -(C=S)-N(R*)2, -N(R*)-CHO, -N(R*)-(C=O)-R*, -SCN, -NCS, -NSO, -SSR*, -SO2R*, -SO2-N(R*)2, -S(=O)-OR*, -S(=O)-R*, -Si(R*)3, -CF3, -O-CF3 및 이의 조합 중 하나 이상으로 임의 치환되고, 단, R1은 n-부틸 그룹이 아니고, X가 -O-이고 Ra가 수소이면, R1은 수소가 아니고;
RN은:
Figure pct00038
Figure pct00039
로부터 선택되고; 여기서
Figure pct00040
기호는 부착 점을 나타내고; R', R" 및 R"'은 수소, C1-C6 지방족 탄화수소, 및 플루오레닐메틸옥시카보닐(FMOC) 및 3급-부틸옥시카보닐(BOC)로부터 선택된 보호 그룹으로부터 선택되거나, 여기서 R' 및 R"는 함께 지방족 모노사이클릭, 지방족 비사이클릭, 또는 지방족 폴리사이클릭 구조를 형성하고;
R2, R3, 및 R4는 수소, 지방족 C1-C20 탄화수소, 및 -(C=O)-R*로부터 독립적으로 선택되고, 이들 각각은 할로겐, O, N, 및 S로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함하고;
Ra는 수소, -F, -Cl, -Br, -I, -OH, -OR*, -NH2, -NHR*, -N(R*)2, -N(R*)3 +, -(C=O)-R*, -CHO, -CO2H, -CO2R*, -SR*, -SO2R*, 및 지방족 C1-C20 탄화수소로부터 선택되고, 이는 할로겐, O, N, 및 S로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함하고, 여기서 Ra는 -F, -Cl, -Br, -I, -OH, -OR* 중 하나 이상으로 임의 치환되고;
Rb는 수소, -F, -Cl, -Br, -I, -OH, -OR*, -(C=O)-R*, -CHO, -CO2H, -CO2R* 및 지방족 C1-C20 탄화수소로부터 선택되고, 이는 할로겐, O, 및 S로부터 선택된 0 내지 3개의 헤테로원자를 추가로 포함하고, 여기서 Rb는 -F, -Cl, -Br, -I, -OH, -OR* 중 하나 이상으로 임의 치환되고,
R*는 각각의 존재시 수소, 지방족 C1-C20 탄화수소, 방향족 C1-C20 탄화수소, 헤테로방향족 C1-C20 탄화수소, 사이클릭 지방족 C1-C20 탄화수소, 헤테로사이클릭 C1-C20 탄화수소, 및 이의 조합으로부터 독립적으로 선택되고, 이는 할로겐, O, N, 및 S 및 이의 조합으로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함한다.
다른 양태에서, 본 개시내용은 화학식 (B-1)의 구조를 갖는 리파마이신 유사체 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 제공한다:
Figure pct00041
여기서:
X는 -O- 및 -NR*-로부터 선택되고;
R1은 RN, 수소, 지방족 C1-C20 탄화수소, 방향족 C1-C20 탄화수소, 헤테로방향족 C1-C20 탄화수소, 사이클릭 지방족 CC1-C20 탄화수소, 헤테로사이클릭 C1-C20 탄화수소, 및 이의 조합으로부터 선택되고, 이들 각각은 할로겐, O, N, 및 S로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함하고, 여기서 R1은 -F, -Cl, -Br, -I, -OH, -OR*, -NO, -NO2, -NO3, -O-NO, -N3, -NH2, -NHR*, -N(R*)2, -N(R*)3 +, -N(R*)-OH, -O-N(R*)2, -N(R*)-O-R*, -CN, -NC, -(C=O)-R*, -CHO, -CO2H, -CO2R*, -(C=O)-S-R*, -O-(C=O)-H, -O-(C=O)-R*, -S-(C=O)-R*, -(C=O)-NH2, -(C=O)-N(R*)2, -(C=O)-NHNH2, -O-(C=O)-NHNH2, -(C=S)-NH2, -(C=S)-N(R*)2, -N(R*)-CHO, -N(R*)-(C=O)-R*, -SCN, -NCS, -NSO, -SSR*, -SO2R*, -SO2-N(R*)2, -S(=O)-OR*, -S(=O)-R*, -Si(R*)3, -CF3, -O-CF3 및 이의 조합 중 하나 이상으로 임의 치환되고, 단, R1은 n-부틸 그룹이 아니고;
RN은:
Figure pct00042
Figure pct00043
로부터 선택되고; 여기서
Figure pct00044
기호는 부착 점을 나타내고; R', R" 및 R"'은 수소, C1-C6 지방족 탄화수소, 및 FMOC 및 BOC로부터 선택된 보호 그룹으로부터 선택되거나, 여기서 R' 및 R"는 함께 지방족 모노사이클릭, 지방족 비사이클릭, 또는 지방족 폴리사이클릭 구조를 형성하고;
R*은 각각의 존재시 수소, 지방족 C1-C20 탄화수소, 방향족 C1-C20 탄화수소, 헤테로방향족 C1-C20 탄화수소, 사이클릭 지방족 C1-C20 탄화수소, 헤테로사이클릭 C1-C20 탄화수소, 및 이의 조합으로부터 독립적으로 선택되고, 이는 할로겐, O, N, 및 S 및 이의 조합으로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함한다.
다른 양태에서, 본 개시내용은 화학식 (B-2)의 구조를 갖는 리파마이신 유사체 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 제공한다:
Figure pct00045
여기서:
RN은:
Figure pct00046
로부터 선택되고; 여기서
Figure pct00047
기호는 부착 점을 나타내고; R', R" 및 R"'은 수소, C1-C6 지방족 탄화수소, 및 FMOC 및 BOC로부터 선택된 보호 그룹으로부터 선택되거나, 여기서 R' 및 R"는 함께 지방족 모노사이클릭, 지방족 비사이클릭, 또는 지방족 폴리사이클릭 구조를 형성한다.
다른 양태에서, 본 개시내용은 화학식 (B-2)의 구조를 갖는 리파마이신 유사체 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 제공한다:
Figure pct00048
여기서:
RN은
Figure pct00049
이고; 여기서
Figure pct00050
기호는 부착 점을 나타내고; R' 및 R"는 수소 및 C1-C6 지방족 탄화수소로부터 선택된다.
일 구현예에서, 리파마이신 유사체 화합물은 다음 화학식 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염에 따른 구조를 갖는다:
Figure pct00051
.
임의의 선행 화학식의 구현예에서 R1이 RN, 수소, 지방족 C1-C20 탄화수소, 방향족 C1-C20 탄화수소, 헤테로방향족 C1-C20 탄화수소, 사이클릭 지방족 C1-C20 탄화수소, 헤테로사이클릭 C1-C20 탄화수소, 및 이의 조합으로부터 선택되고, 이들 각각은 O 및 N로부터 선택된 0 내지 3개의 헤테로원자를 추가로 포함하고, 여기서 R1은 -F, -Cl, -Br, -I, -OH, C1-3 알콕사이드, -NH2, -NHR*, -N(R*)2, -N(R*)3 +, -N(R*)-OH, -O-N(R*)2, -N(R*)-O-R*, -N(R*)-(C=O)-R*, -(C=O)-R*, -CHO, -CO2H, -CO2R*, -O-(C=O)-H, -O-(C=O)-R*, -(C=O)-NH2, -(C=O)-N(R*)2, -Si(R*)3, -CF3, -O-CF3 및 이의 조합 중 하나 이상으로 임의 치환되고, 단, R1은 n-부틸 그룹이 아니고, X가 -O-이면, R1은 수소가 아니다.
임의의 선행 화학식의 구현예에서 R1이 지방족 C1-C20 탄화수소 및 방향족 C1-C20 탄화수소의 조합인 화합물이 제공된다.
임의의 선행 화학식의 구현예에서 R1이 지방족 C1-C20 탄화수소 및 헤테로방향족 C1-C20 탄화수소의 조합인 화합물이 제공된다.
임의의 선행 화학식의 구현예에서 R1이
Figure pct00052
로부터 선택된 화합물이 제공된다.
임의의 선행 화학식의 구현예에서 R1이 -NH2, -NHR*, -N(R*)2, 또는 -N(R*)-(C=O)-R* 중 하나 이상으로 치환된 지방족 C1-C20 탄화수소인 화합물이 제공된다.
임의의 선행 화학식의 구현예에서 R1이 -NH-(C=O)-CH3 또는 -N(CH3)-(C=O)-CH3로 치환된 지방족 C1-C20 탄화수소인 화합물이 제공된다.
임의의 선행 화학식의 구현예에서 Ra가 수소인 화합물이 제공된다.
임의의 선행 화학식의 구현예에서 Ra가 -OH인 화합물이 제공된다.
임의의 선행 화학식의 구현예에서 Ra가 -Cl인 화합물이 제공된다.
임의의 선행 화학식의 구현예에서 Ra가 -OR*이고, R*가 지방족 C1-C20 탄화수소, 방향족 C1-C20 탄화수소, 및 이의 조합으로부터 선택된 화합물이 제공된다.
임의의 선행 화학식의 구현예에서 RN이:
Figure pct00053
Figure pct00054
로부터 선택되고; 여기서
Figure pct00055
기호는 부착 점을 나타내고; R', R" 및 R"'가 수소, C1-C6 지방족 탄화수소, 및 FMOC 및 BOC로부터 선택된 보호 그룹으로부터 선택되거나, 여기서 R' 및 R"가 함께 지방족 모노사이클릭, 지방족 비사이클릭, 또는 지방족 폴리사이클릭 구조를 형성하는 화합물이 제공된다.
임의의 선행 화학식의 구현예에서 RN이:
Figure pct00056
, 및
Figure pct00057
로부터 선택되고; 여기서 R'가 수소, 지방족 탄화수소 또는 보호 그룹을 나타내고, 여기서
Figure pct00058
기호는 부착 점을 나타내는 화합물이 제공된다.
임의의 선행 화학식의 화합물의 구현예에서 R*이 각각의 존재시 수소, 지방족 C1-C6 탄화수소, 방향족 C4-C6 탄화수소, 및 이의 조합으로부터 독립적으로 선택되고, 이는 O, N 및 이의 조합으로부터 선택된 1 내지 3개의 헤테로원자를 임의로 포함하는 화합물이 제공된다.
일 구현예에서, 본 개시내용의 리파마이신 유사체 화합물은 다음으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 구조 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 갖는다:
Figure pct00059
Figure pct00060
Figure pct00061
Figure pct00062
.
일 구현예에서, 본 개시내용의 리파마이신 유사체 화합물은
Figure pct00063
로 이루어진 그룹으로부터 선택된 구조 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 갖는다.
일 양태에서, 본 개시내용은
(a) 구조:
Figure pct00064
를 갖는 리파마이신 S를 화학식 (VI):
Figure pct00065
(여기서 X'는 -OH 및 -NHR*로부터 선택된다)의 구조를 갖는 화합물과 접촉시키는 단계, 및
(b) 단계 (a)의 생성물을 산화제로 처리하는 단계를 포함하여, 화학식 (V)의 구조를 갖는 리파마이신 유사체 화합물을 제조하는 방법을 제공한다:
Figure pct00066
여기서 X는 -O- 및 NR*-로부터 선택되고;
R6은 RN, 수소, 지방족 C1-C20 탄화수소, 방향족 C1-C20 탄화수소, 헤테로방향족 C1-C20 탄화수소, 사이클릭 지방족 C1-C20 탄화수소, 헤테로사이클릭 C1-C20 탄화수소, 및 이의 조합으로부터 선택되고,
RN은:
Figure pct00067
로부터 선택되고; 여기서
Figure pct00068
기호는 부착 점을 나타내고; R', R" 및 R"'은 수소, C1-C6 지방족 탄화수소, 및 FMOC 및 BOC로부터 선택된 보호 그룹으로부터 선택되거나, 여기서 R' 및 R"는 함께 지방족 모노사이클릭, 지방족 비사이클릭, 또는 지방족 폴리사이클릭 구조를 형성하고;
R*은 각각의 존재시 수소, 지방족 C1-C20 탄화수소, 방향족 C1-C20 탄화수소, 헤테로방향족 C1-C20 탄화수소, 사이클릭 지방족 C1-C20 탄화수소, 헤테로사이클릭 C1-C20 탄화수소, 및 이의 조합으로부터 독립적으로 선택되고, 이는 할로겐, O, N, 및 S 및 이의 조합으로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함한다.
일 양태에서, 본 개시내용은
(a) 구조:
Figure pct00069
를 갖는 리파마이신 S를 화학식 (VI'):
Figure pct00070
(여기서 X'는 -OH 및 -NHR*로부터 선택된다)를 갖는 화합물과 접촉시키는 단계, 및
(b) 단계 (a)의 생성물을 산화제로 처리하는 단계를 포함하여, 화학식 (V')의 구조를 갖는 리파마이신 유사체 화합물을 제조하는 방법을 제공한다:
Figure pct00071
여기서 X는 -O- 및 NR*-로부터 선택되고;
R6은 RN, 수소, 지방족 C1-C20 탄화수소, 방향족 C1-C20 탄화수소, 헤테로방향족 C1-C20 탄화수소, 사이클릭 지방족 C1-C20 탄화수소, 헤테로사이클릭 C1-C20 탄화수소, 및 이의 조합으로부터 선택되고,
RN은:
Figure pct00072
로부터 선택되고; 여기서
Figure pct00073
기호는 부착 점을 나타내고; R', R" 및 R"'은 수소, C1-C6 지방족 탄화수소, 및 FMOC 및 BOC로부터 선택된 보호 그룹으로부터 선택되거나, 여기서 R' 및 R"는 함께 지방족 모노사이클릭, 지방족 비사이클릭, 또는 지방족 폴리사이클릭 구조를 형성하고;
R*는 각각의 존재시 수소, 지방족 C1-C20 탄화수소, 방향족 C1-C20 탄화수소, 헤테로방향족 C1-C20 탄화수소, 사이클릭 지방족 C1-C20 탄화수소, 헤테로사이클릭 C1-C20 탄화수소, 및 이의 조합으로부터 독립적으로 선택되고, 이는 할로겐, O, N, 및 S 및 이의 조합으로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함한다.
일 양태에서, 본 개시내용은
(a) 리파마이신 S를 화학식 (VII):
Figure pct00074
(여기서 PG는 보호 그룹이다)의 구조를 갖는 화합물과 접촉시키는 단계;
(b) 단계 (a)의 생성물을 산화제로 처리하는 단계, 및
(c) 보호 그룹 PG를 제거하는 단계를 포함하여, 구조:
Figure pct00075
를 갖는 화합물을 제조하는 방법을 제공한다.
일 구현예에서, 화학식 (VII)의 화합물은 화학식 (VIII):
Figure pct00076
(여기서 보호 그룹 PG 및 PG'는 서로 동일하거나 상이할 수 있다)의 화합물로부터 보호 그룹 PG'를 제거함으로써 제조된다.
일 구현예에서, 화학식 (VIII)의 화합물은 화학식 (IX):
Figure pct00077
의 화합물을 화학식 (X):
Figure pct00078
의 화합물과 접촉시켜 제조하며, 여기서 보호 그룹 PG 및 PG'는 서로 동일하거나 상이할 수 있다.
일 양태에서, 본 개시내용은 화학식 (XII):
Figure pct00079
의 구조를 갖는 화합물을 구조 R6-OH를 갖는 알코올과 접촉시킴을 포함하여, 화학식 (XI)를 갖는 화합물을 제조하는 방법을 제공한다:
Figure pct00080
여기서 R6은 RN, 지방족 C1-C20 탄화수소, 방향족 C1-C20 탄화수소, 헤테로방향족 C1-C20 탄화수소, 사이클릭 지방족 C1-C20 탄화수소, 헤테로사이클릭 C1-C20 탄화수소, 및 이의 조합으로부터 선택되고, 이는 할로겐, O, N, 및 S로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자 및 이의 조합을 추가로 포함하고 여기서 R6은 -F, -Cl, -Br, -I, -OH, -OR*, -NO, -NO2, -NO3, -O-NO, -N3, -NH2, -NHR*, -N(R*)2, -N(R*)3 +, -N(R*)-OH, -O-N(R*)2, -N(R*)-O-R*, -CN, -NC, -(C=O)-R*, CHO, -CO2H, -CO2R*, -(C=O)-S-R*, -O-(C=O)-H, -O-(C=O)-R*, -S-(C=O)-R*, -(C=O)-NH2, -(C=O)-N(R*)2, -(C=O)-NHNH2, -O-(C=O)-NHNH2, -(C=S)-NH2, -(C=S)-N(R*)2, -N(R*)-CHO, -N(R*)-(C=O)-R*, -SCN, -NCS, -NSO, -SSR*, -SO2R*, -SO2-N(R*)2, -S(=O)-OR*, -S(=O)-R*, -Si(R*)3, -CF3, -O-CF3 및 이의 조합 중 하나 이상으로 임의 치환되고;
RN은:
Figure pct00081
로부터 선택되고; 여기서
Figure pct00082
기호는 부착 점을 나타내고; R', R" 및 R"'은 수소, C1-C6 지방족 탄화수소, 및 FMOC 및 BOC로부터 선택된 보호 그룹으로부터 선택되거나, 여기서 R' 및 R"는 함께 지방족 모노사이클릭, 지방족 비사이클릭, 또는 지방족 폴리사이클릭 구조를 형성하고;
R*는 각각의 존재시 수소, 지방족 C1-C20 탄화수소, 방향족 C1-C20 탄화수소, 헤테로방향족 C1-C20 탄화수소, 사이클릭 지방족 C1-C20 탄화수소, 헤테로사이클릭 C1-C20 탄화수소, 및 이의 조합으로부터 독립적으로 선택되고, 이는 할로겐, O, N, 및 S 및 이의 조합로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함한다.
일 양태에서, 본 개시내용은
화학식 (XII):
Figure pct00083
의 구조를 갖는 화합물을 구조 Rcy-A-OH를 갖는 알코올과 접촉시킴을 포함하는, 화학식 (XIII)의 구조를 갖는 화합물의 제조 방법을 제공한다:
Figure pct00084
여기서 A는 결합(A는 부재한다) 또는 지방족 C1-C20 탄화수소로부터 선택되고;
Rcy는 C3-C14 지환족(cycloaliphatic) 탄화수소이고, 이는 할로겐, O, N, 및 S로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자 및 이의 조합을 추가로 포함하고 여기서 Rcy는 -F, -Cl, -Br, -I, -OH, -OR*, -NO, -NO2, -NO3, -O-NO, -N3, -NH2, -NHR*, -N(R*)2, -N(R*)3 +, -N(R*)-OH, -O-N(R*)2, -N(R*)-O-R*, -CN, -NC, -(C=O)-R*, -CHO, -CO2H, -CO2R*, -(C=O)-S-R*, -O-(C=O)-H, -O-(C=O)-R*, -S-(C=O)-R*, -(C=O)-NH2, -(C=O)-N(R*)2, -(C=O)-NHNH2, -O-(C=O)-NHNH2, -(C=S)-NH2, -(C=S)-N(R*)2, -N(R*)-CHO, -N(R*)-(C=O)-R*, -SCN, -NCS, -NSO, -SSR*, -SO2R*, -SO2-N(R*)2, -S(=O)-OR*, -S(=O)-R*, -Si(R*)3, -CF3, -O-CF3 및 이의 조합 중 하나 이상으로 임의 치환되고;
R*는 각각의 존재시 수소, 지방족 C1-C20 탄화수소, 방향족 C1-C20 탄화수소, 헤테로방향족 C1-C20 탄화수소, 사이클릭 지방족 C1-C20 탄화수소, 헤테로사이클릭 C1-C20 탄화수소, 및 이의 조합으로부터 독립적으로 선택되고, 이는 할로겐, O, N, 및 S 및 이의 조합으로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함한다.
일 양태에서, 본 개시내용은 화학식 (XII):
Figure pct00085
를 갖는 화합물을 구조 Rcy-A-OH를 갖는 알코올과 접촉시킴을 포함하는, 화학식 (XIII')의 구조를 갖는 화합물의 제조 방법을 제공한다:
Figure pct00086
여기서 A는 결합(A는 부재한다) 또는 지방족 C1-C20 탄화수소로부터 선택되고;
Rcy는 C3-C14 지환족 탄화수소이고, 이는 할로겐, O, N, 및 S 및 이의 조합으로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함하고 여기서 Rcy는 -F, -Cl, -Br, -I, -OH, -OR*, -NO, -NO2, -NO3, -O-NO, -N3, -NH2, -NHR*, -N(R*)2, -N(R*)3 +, -N(R*)-OH, -O-N(R*)2, -N(R*)-O-R*, -CN, -NC, -(C=O)-R*, -CHO, -CO2H, -CO2R*, -(C=O)-S-R*, -O-(C=O)-H, -O-(C=O)-R*, -S-(C=O)-R*, -(C=O)-NH2, -(C=O)-N(R*)2, -(C=O)-NHNH2, -O-(C=O)-NHNH2, -(C=S)-NH2, -(C=S)-N(R*)2, -N(R*)-CHO, -N(R*)-(C=O)-R*, -SCN, -NCS, -NSO, -SSR*, -SO2R*, -SO2-N(R*)2, -S(=O)-OR*, -S(=O)-R*, -Si(R*)3, -CF3, -O-CF3 및 이의 조합 중 하나 이상으로 임의 치환되고;
R*는 각각의 존재시 수소, 지방족 C1-C20 탄화수소, 방향족 C1-C20 탄화수소, 헤테로방향족 C1-C20 탄화수소, 사이클릭 지방족 C1-C20 탄화수소, 헤테로사이클릭 C1-C20 탄화수소, 및 이의 조합으로부터 독립적으로 선택되고, 이는 할로겐, O, N, 및 S 및 이의 조합으로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함한다.
일 양태에서, 본 개시내용은 화학식 (XII):
Figure pct00087
의 구조를 갖는 화합물을 구조
Figure pct00088
를 갖는 알코올과 접촉시킴을 포함하는, 화학식 (XIV)의 구조를 갖는 화합물의 제조 방법을 제공한다:
Figure pct00089
,
여기서 Y는 각각의 존재시 -O- 및 -NR'R"-로부터 선택되고; n은 독립적으로 각각의 존재시 1 내지 6의 정수이고, R', R", 및 R"'은 수소, 지방족 C1-C20 탄화수소로부터 각각 독립적으로 선택된다.
일 양태에서, 본 개시내용은 화학식 (XII'):
Figure pct00090
의 구조를 갖는 화합물을 구조
Figure pct00091
를 갖는 알코올과 접촉시킴을 포함하는, 화학식 (XIV')의 구조를 갖는 화합물의 제조 방법을 제공한다:
Figure pct00092
여기서 Y는 각각의 존재시 -O- 및 -NR'R"-로부터 선택되고; n은 독립적으로 각각의 존재시 1 내지 6의 정수이고, R', R", 및 R"'는 수소 및 지방족 C1-C20 탄화수소로부터 서로 독립적으로 선택된다.
일 구현예에서, 화학식 (XII)의 화합물은 리파마이신 S를 2-아미노-5-브로모페놀과 접촉시키고, 생성물을 산화제로 처리함으로써 제조된다.
일 구현예에서, 화학식 (XII')의 화합물은 리파마이신 S를 2-아미노-4-브로모페놀과 접촉시키고, 생성물을 산화제로 처리함으로써 제조된다.
일 양태에서, 본 개시내용은 상술한 바와 같은 화합물 하나 이상, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염, 및 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다.
다른 양태에서, 본 개시내용은 임의의 상술한 바와 같은 화합물 중 하나 이상, 또는 약제학적으로 허용되는 이의 염, 또는 상술한 바와 같은 약제학적 조성물을 포함하는 약제학적 투여형(pharmaceutical dosage form)을 제공한다.
다른 양태에서, 본 개시내용은 유효량의 본원에 제공된 바와 같은 화학식 (A), (B), (I), (I'), (II), (II'), (III), (III'), (IV), (IV'), (V), (V') 중 어느 하나에 따른 구조를 갖는 리파마이신 유사체 화합물을 투여함을 포함하여, 세균의 성장을 예방 또는 억제하는 방법을 제공한다.
일 구현예에서, 세균은 그램-양성 세균이다.
일 구현예에서, 세균은 페니실린-내성 세균이다.
일 구현예에서, 세균은 스타필로코쿠스 아우레우스(Staphylococcus aureus)이다.
일 구현예에서, 세균은 메티실린-내성 스타필로코쿠스 아우레우스(methicillin-resistant Staphylococcus aureus)(MRSA)이다.
일 구현예에서, 세균은 반코마이신-내성 스타필로코쿠스 아우레우스(Vancomycin-resistant Staphylococcus aureus)(VRSA)이다.
일 구현예에서, 세균은 메티실린-민감성 스타필로코쿠스 아우레우스(methicillin-susceptible Staphylococcus aureus)(MSSA)이다.
여전히 다른 양태에서, 본 개시내용은 이러한 치료를 필요로 하는 대상체에게 유효량의 화학식 (A), (B), (I), (I'), (II), (II'), (III), (III'), (IV), (IV'), (V), (V') 중 어느 하나에 따른 구조를 갖는 리파마이신 유사체 화합물을 투여함을 포함하여, 대상체에서 세균 감염을 치료하는 방법을 제공한다.
일 구현예에서, 세균 감염은 그램-양성 세균 감염이다.
일 구현예에서, 세균 감염은 페니실린 내성 세균 감염이다.
일 구현예에서, 세균 감염은 스타필로코쿠스 아우레우스 감염이다.
일 구현예에서, 세균 감염은 메티오닌 내성 스타필로코쿠스 아우레우스(MRSA) 감염이다.
일 구현예에서, 세균 감염은 반코마이신 내성 스타필로코쿠스 아우레우스(VRSA) 감염이다.
일 구현예에서, 여기서 세균 감염은 메티실린-민감성 스타필로코쿠스 아우레우스(MSSA) 감염이다.
일 구현예에서, 세균 감염은 세포내 세균 감염이다.
일 구현예에서, 대상체는 사람이다.
일 구현예에서, 방법은 제2의 치료제를 투여함을 추가로 포함한다.
일 구현예에서, 제2의 치료제는 제2의 항생제이다.
일 구현예에서, 제2의 치료제는 스타필로코쿠스 아우레우스에 대해 효과적이다.
일 구현예에서, 제2의 항생제는 아미노글리코시드, 베타-락탐, 마클로리드, 사이클릭 펩타이드, 테트라사이클린, 플루오로퀴놀린, 플루오로퀴놀론, 및 옥사졸리디논으로부터 선택된다.
일 구현예에서, 제2의 항생제는 클린다마이신, 노보비오신, 레타파물린, 답토마이신, 시타플록사신, 테이코플라닌, 트리클로산, 나프티리돈, 라데졸리드, 독소루비신, 암피실린, 반코마이신, 이미페넴, 도리페님, 겜시타빈, 달바반신, 및 아지트로마이신으로부터 선택된다.
일 구현예에서, 화합물은 대상체에게 경구적으로, 국소적으로, 비강내로, 정맥내로, 근육내로, 또는 피하로 투여된다.
다른 양태에서, 항체, 또는 항체의 항원-결합 단편을 포함하고, 리파마이신 유사체를 추가로 포함하는 항체-약물 접합체가 본원에 제공된다. 본 발명의 항체-약물 접합체의 일부 구현예에서, 항체, 또는 항체의 항원-결합 단편은 감염성 질환 관련 표적(infectious disease-related target)에 결합한다. 본 개시내용에 유용한 감염성 질환 관련 표적은 대식구 스캐빈저 수용체(Macrophage scavenger receptor) 1(MSR1), 벽 테이코산(WTA), 에스. 아우레우스 항원, 예를 들면, 단백질 A, IsdA, IsdB, IsdC, IsdE, IsdH, ClfA, ClfB, CP5, CP8, SdrC, SdrD, SdrE, FnBpA, FnBpB, Cna, 다당류 폴리-N-아세틸글루코스아민(PNAG), 및 SasG를 포함하나, 이에 한정되지 않는다.
일부 구현예에서, 항체, 또는 항체의 항원-결합 단편은 MSR1에 결합한다. 일부 구현예에서, 항체, 또는 항체의 항원-결합 단편은 WTA에 결합한다. 일부 구현예에서, 항체, 또는 항체의 항원-결합 단편은 단백질 A에 결합한다.
다른 양태에서, MSR1으로 공지된 막 당단백질 수용체에 결합하는, 항체, 또는 항체의 항원-결합 단편을 포함하고, 리파마이신 유사체를 추가로 포함하는 항체-약물 접합체가 본원에 제공된다. 항체는 특히 MSR1을 발현하는 세포, 예를 들면, 대식구 세포를 표적화하는데 유용하다.
다른 양태에서, 벽 테이코산(WTA)에 결합하는 항체, 또는 항체의 항원-결합 단편을 포함하고, 리파마이신 유사체를 추가로 포함하는 항체-약물 접합체가 본원에 제공된다.
다른 양태에서, 단백질 A에 결합하는 항체, 또는 항체의 항원-결합 단편을 포함하고, 리파마이신 유사체를 추가로 포함하는, 항체-약물 접합체가 본원에 제공된다.
다른 양태에서, 재조합 사람 항체 또는 이의 단편을 포함하고, 리파마이신 유사체, 및 약제학적으로 허용되는 담체를 추가로 포함하는 항체-약물 접합체를 포함하는 약제학적 조성물이 본원에 제공된다. 일부 구현예에서, 재조합 사람 항체 또는 이의 단편은 감염성 질환-관련 표적에 특이적으로 결합한다. 일부 구현예에서, 재조합 사람 항체 또는 이의 단편은 MSR1, WTA 또는 단백질 A에 특이적으로 결합한다. 관련 양태에서, 구현예는 본원에 기술된 항체를 포함하고, 리파마이신 유사체, 및 제2의 치료제를 추가로 포함하는 항체-약물 접합체의 조합인 조성물에 관한 것이다. 일 구현예에서, 제2의 치료제는 본원에 기술된 항체를 포함하는 항체-약물 접합체와 유리하게 조합된 임의의 제제이다. 일 구현예에서, 제2의 치료제는 제2의 약물 또는 치료제에 접합된 본원에 기술된 항체를 포함하는 항체-약물 접합체이다. 예시적인 조합 치료요법, 공-제형, 및 항체를 포함하는 ADC는 본원에 어딘가에 개시되어 있다.
또한 항체를 포함하는 항체-약물 접합체를 제조하는데 유용한, 리파마이신 유사체, 예를 들면, 화학식 (A), (B), (I), (I'), (II), (II'), (III), (III'), (IV), (IV'), (V), (V'), (B-1), (B-2)의 임의의 구현예에 따른 구조를 갖는 화합물을 포함하는 반응성 링커-페이로드(reactive linker-payload)가 본원에 제공된다. 일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 감염성 질환-관련 표적에 특이적으로 결합한다. 일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 MSR1, WTA 또는 단백질 A에 특이적으로 결합한다.
항체 또는 이의 항원-결합 단편 및 리파마이신 유사체를 포함하는 항체-약물 접합체(ADC)의 유효량을 투여함을 포함하는, 세균의 성장 방지 또는 억제 방법이 본원에 제공된다. 일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 감염성 질환-관련 표적에 특이적으로 결합한다. 일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 MSR1, WTA 또는 단백질 A에 특이적으로 결합한다.
또한 항체 또는 이의 항원-결합 단편 및 리파마이신 유사체를 포함하는 ADC의 유효량을 이를 필요로 하는 대상체에게 투여함을 포함하는 치료 방법이 본원에 제공된다. 치료 방법은 항체 또는 이의 항원-결합 단편 및 리파마이신 유사체를 포함하는 ADC를 포함하는 약제학적 조성물을 대상체에게 투여함을 포함한다. 치료된 장애는 감염성 질환-관련 표적의 표적화 및/또는 항생제의 투여에 의해 개선되거나, 완화되거나, 억제되거나 방지되는 임의의 질환 또는 상태이다. 일부 구현예에서, 질환 또는 상태는 감염성 질환, 대사 질환, 염증, 신경변성 질환, 또는 글루코코르티코이드 수용체 신호전달과 관련된 질환, 장애, 또는 상태이다. 이러한 구현예 중 일부에서, 접합되지 않은 리파마이신 유사체의 투여와 관련된 부작용이 감소된다. 본원에 기술된 임의의 질환, 장애 또는 상태의 치료를 위한, 본원에 기술된, 항체, 이의 항원-결합 단편, 또는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는 ADC의 용도가 본원에 제공된다. 일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 감염성 질환-관련 표적에 특이적으로 결합한다. 일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 MSR1, WTA 또는 단백질 A에 특이적으로 결합한다.
또한, 리파마이신 유사체 또는 항체 또는 이의 항원-결합 단편 및 리파마이신 유사체를 포함하는 ADC를, 이를 필요로 하는 대상체에게 투여함을 포함하여, 스타필로코쿠스 감염, 예를 들면, 에스. 아우레우스 감염과 관련된 질환 또는 장애 또는 상태를 치료하거나, 약독화시키거나, 완화시키기 위한 및/또는 이러한 질환, 장애 또는 상태와 관련된 적어도 하나의 증상을 완화시키기 위한 치료 방법이 본원에 제공된다. 이러한 질환, 장애 또는 상태는 봉와직염(cellulitis), 균혈증(bacteremia), 피부괴사증(dermonecrosis), 눈꺼풀 감염(eyelid infection), 눈 감염(eye infection), 신생아 결막염(neonatal conjunctivitis), 골수염(osteomyelitis), 농가진(impetigo), 종기(boils), 화상 피부 증후군(scalded skin syndrome), 식중독(food poisoning), 폐렴(pneumonia), 외과적 감염(surgical infection), 뇨관 감염(urinary tract infection), 화상 감염(burn infection), 수막염(meningitis), 심장내막염(endocarditis), 패혈증(septicemia), 독성 쇼크 증후군(toxic shock syndrome), 또는 패혈성 관절염(septic arthritis)일 수 있다. 일부 구현예에서, 대상체는 보철 관절(prosthetic joint)을 가지고 본원에 개시된 리파마이신 유사체 또는 항체 또는 이의 항원-결합 단편 및 리파마이신 유사체를 포함하는 ADC는 보철 관절 주변의 조직의 에스. 아루레우스 감염을 치료 및/또는 방지하는데 유용하다. 일부 구현예에서, 대상체는 카테터(catheter)를 가지고 본원에 개시된 리파마이신 유사체 또는 항체 또는 이의 항원-결합 단편 및 리파마이신 유사체를 포함하는 ADC는 카테터 및/또는 카테터 주변의 조직의 에스. 아우레우스 감염의 치료 및/또는 예방에 유용하다. 일부 구현예에서, 대상체는 이식된 외부체(foreign body)를 가지고, 본원에 개시된 리파마이신 유사체 또는 항체 또는 이의 항원-결합 단편 및 리파마이신 유사체를 포함하는 ADC는 외부체 및/또는 외부체 주변의 조직의 에스. 아우레우스 감염의 치료 및/또는 방지에 유용하다. 일부 구현예에서, 대상체는 유방염(mastitis)을 가지고, 본원에 개시된 항체는 유방염 치료에 유용하다. 치료 방법은 리파마이신 유사체 또는 항체 또는 이의 항원-결합 단편 및 리파마이신 유사체를 포함하는 ADC를 포함하는 약제학적 조성물의 치료학적 유효량을, 이를 필요로 하는 대상체에게 투여함을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 감염성 질환-관련 표적에 특이적으로 결합한다. 일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 MSR1, WTA 또는 단백질 A에 특이적으로 결합한다.
다른 양태에서, 본 개시내용은 링커를 경유하여 또는 링커-스페이서를 통해본 개시내용의 임의의 구현예의 리파마이신 유사체 화합물에 접합된 항체, 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는 항체-약물 접합체를 제공한다.
다양한 구현예에서, 항체, 또는 이의 항원-결합 단편은 대식구 스캐빈저 수용체 1(MSR1)에 결합한다. 다양한 구현예에서, 항체, 또는 이의 항원-결합 단편은 벽 테이코산(WTA)에 결합한다. 다양한 구현예에서, 항체, 또는 이의 항원-결합 단편은 에스. 아우레우스 단백질 A에 결합한다.
일 구현예에서, 항체, 또는 이의 항원-결합 단편은, (a) 표 9에 나타낸 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(HCVR)의 상보성 결정 영역(CDR); 및 (b) 표 9에 나타낸 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(LCVR)의 CDR을 포함할 수 있다.
일 구현예에서, 항-MSR1 항체, 또는 이의 항원-결합 단편은:
(i) 서열 번호: 4, 36, 52, 92, 및 284로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1 도메인;
(ii) 서열 번호: 6, 38, 54, 94, 및 286으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2 도메인;
(iii) 서열 번호: 8, 40, 56, 96, 및 288로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3 도메인;
(iv) 서열 번호: 12, 44, 60, 100, 및 292로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1 도메인;
(v) 서열 번호: 14, 46, 62, 102, 및 294로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2 도메인; 및
(vi) 서열 번호: 16, 48, 64, 104, 및 296으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3 도메인을 포함할 수 있다.
일 구현예에서, 항-WTA 항체, 또는 이의 항원-결합 단편은: (a) 표 2A에 나타낸 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(HCVR)의 상보성 결정 영역(CDR); 및 (b) 표 2A에 나타낸 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(LCVR)의 CDR을 포함할 수 있다.
일 구현예에서, 항-WTA 항체, 또는 이의 항원-결합 단편은:
(i) 서열 번호: 470, 476, 482, 및 488로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1 도메인;
(ii) 서열 번호: 471, 477, 483, 및 489로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2 도메인;
(iii) 서열 번호: 472, 478, 484, 및 490으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3 도메인;
(iv) 서열 번호: 467, 473, 479, 및 485로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1 도메인;
(v) 서열 번호: 468, 474, 480, 및 486으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2 도메인; 및
(vi) 서열 번호: 469, 475, 481, 및 487로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3 도메인을 포함할 수 있다.
일 구현예에서, 항-WTA 항체, 또는 이의 항원-결합 단편은, (a) 표 2B에 나타낸 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(HCVR)의 상보성 결정 영역(CDR); 및 (b) 표 2B에 나타낸 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(LCVR)의 CDR을 포함할 수 있다.
일 구현예에서, 항-WTA 항체, 또는 이의 항원-결합 단편은:
(i) 서열 번호: 502, 508, 514, 520, 526, 532, 538, 544, 550, 556, 562, 568, 및 574로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1 도메인;
(ii) 서열 번호: 503, 509, 515, 521, 527, 533, 539, 545, 551, 557, 563, 569, 및 575로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2 도메인;
(iii) 서열 번호: 504, 510, 516, 522, 528, 534, 540, 546, 552, 558, 564, 570, 576, 및 584로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3 도메인;
(iv) 서열 번호: 499, 505, 511, 517, 523, 529, 535, 541, 547, 553, 559, 565, 및 571로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1 도메인;
(v) 서열 번호: 500, 506, 512, 518, 524, 530, 536, 542, 548, 554, 560, 566, 및 572로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2 도메인; 및
(vi) 서열 번호: 501, 507, 513, 519, 525, 531, 537, 543, 549, 555, 561, 567, 및 573으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3 도메인을 포함할 수 있다.
일부 구현예에서, 항-WTA 항체, 또는 이의 항원-결합 단편은 경쇄 내에 V205C 돌연변이(EU 번호매김)를 포함한다.
일 구현예에서, 항-단백질 A 항체, 또는 이의 항원-결합 단편은 (a) 표 3A에 나타낸 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(HCVR)의 상보성 결정 영역(CDR); 및 (b) 표 3A에 나타낸 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(LCVR)의 CDR을 포함할 수 있다.
일 구현예에서, 항-단백질 A 항체, 또는 이의 항원-결합 단편은:
(i) 서열 번호: 632, 652, 및 672로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1 도메인;
(ii) 서열 번호: 634, 654, 및 674로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2 도메인;
(iii) 서열 번호: 636, 656, 및 676으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3 도메인;
(iv) 서열 번호: 640, 660, 및 680으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1 도메인;
(v) 서열 번호: 642 및 662로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2 도메인; 및
(vi) 서열 번호: 644, 664, 및 683으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3 도메인을 포함할 수 있다.
일부 구현예에서, 항-단백질 A 항체, 또는 이의 항원-결합 단편은 중쇄 Fc 내에 H435R 및 Y436F 돌연변이(EU 번호매김)을 포함한다.
다양한 구현예에서, 항체, 또는 이의 항원-결합 단편은 경쇄 내에 C103S 돌연변이를 포함한다.
다양한 구현예에서, 항체, 또는 이의 항원-결합 단편은 경쇄의 103번 위치에서 본 개시내용의 화합물에 접합된다.
일 구현예에서, 링커 또는 링커 스페이서(spacer)는
Figure pct00093
Figure pct00094
및
Figure pct00095
로부터 선택된다.
다른 양태에서, 본 개시내용은 화학식 (XVIII)에 따른 구조를 갖는 항체-약물 접합체를 제공한다:
Figure pct00096
여기서
BA는 항체, 또는 이의 항원-결합 단편이고;
RG는 말레이미드, N-하이드록시 석신이미드, 또는 석신이미드로부터 선택된 반응성 그룹이고;
SP는 부재하거나 C1-6 알킬, -NH-, -C(O)-, -CH2-CH2-C(O)-NH-, -(CH)u-C(O)-NH-, (-CH2-CH2-O)e, -NH-CH2-CH2-(-O-CH2-CH2)e-C(O)-, -C(O)-(CH2)u-C(O)-, -C(O)-NH-(CH2)v-, -(CH)u-C(O)-NH-(CH2-CH2-O)e-(CH)u-C(O)-NH-, -(CH)2-C(O)-NH-(CH2-CH2-O)8-(CH)2-C(O)-NH-, 및 이의 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 스페이서 그룹 잔기이고, 여기서 독립적으로 각각의 존재시 아래첨자(subscript) e는 0 내지 20의 정수이고, 아래첨자 u는 1 내지 8의 정수이고, 아래첨자 v는 1 내지 8의 정수이고;
AA는 발린-시트룰린; 시트룰린-발린; 발린-알라닌; 알라닌-발린; 발린-글리신, 또는 글리신-발린으로부터 선택된 링커이고;
B는 부재하거나,
Figure pct00097
이고, 여기서
Figure pct00098
는 이를 통해 B가 화학식 내 인접한 그룹에 결합된 원자를 나타내고;
n은 1 내지 30의 정수이고,
PA는 본 개시내용의 임의의 구현예에 따른 리파마이신 유사체이다.
일 구현예에서,
Figure pct00099
는
Figure pct00100
이다.
일 구현예에서,
Figure pct00101
는
Figure pct00102
이다.
일 구현예에서,
Figure pct00103
는
Figure pct00104
이고, 여기서
Figure pct00105
는 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 대한 결합이다. 일 양태에서, 본 개시내용은 화학식 (XIX)에 따른 구조를 갖는 항체-약물 접합체를 제공한다:
Figure pct00106
여기서
BA는 항체, 또는 이의 항원-결합 단편이고;
RG는 말레이미드, N-하이드록시 석신이미드, 또는 석신이미드로부터 선택되고;
SP 1 및 SP 2 는 독립적으로 부재하거나, C1-6 알킬, -NH-, -C(O)-, -CH2-CH2-C(O)-NH-
Figure pct00107
-(CH)u-C(O)-NH-, (-CH2-CH2-O)e, -NH-CH2-CH2-(-O-CH2-CH2)e-C(O)-, -C(O)-(CH2)u-C(O)-, -C(O)-NH-(CH2)v-, 및 이의 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 스페이서 그룹이고, 여기서 아래 첨자 e는 0 내지 4의 정수이고, 아래 첨자 u는 1 내지 8의 정수이고, 아래 첨자 v는 1 내지 8의 정수이고;
AA는 발린-시트룰린; 시트룰린-발린; 발린-알라닌; 알라닌-발린; 발린-글리신, 또는 글리신-발린으로부터 선택된 링커이고;
PEG는 1 및 30개의 폴리에틸렌 글리콜 잔기를 포함하는 폴리에틸렌 글리콜 쇄이고;
B는 부재하거나
Figure pct00108
이고, 여기서
Figure pct00109
는 이를 통해 B가 화학식내 인접합 그룹에 결합된 원자를 나타내고;
n은 1 내지 30의 정수이고;
m은 1 내지 20의 정수이고,
PA는 본 개시내용의 임의의 구현예에 따른 리파마이신 유사체이다.
일 구현예에서,
Figure pct00110
는
Figure pct00111
이다.
일 양태에서, 본 개시내용은 화학식 (XX)의 구조를 갖는 리파마이신 유사체 페이로드에 링커를 경유하여 또는 링커-스페이서를 통해 접합된 항체, 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는 항체-약물 접합체를 제공한다:
Figure pct00112
여기서:
X는 -O-, -S-, 및 -NR*-로부터 선택되고;
Za는 -OR1 및 -RN으로부터 선택되고;
R1은 결합; 지방족 C1-C20 탄화수소, 방향족 C1-C20 탄화수소, 헤테로방향족 C1-C20 탄화수소, 사이클릭 지방족 C1-C20 탄화수소, 헤테로사이클릭 C1-C20 탄화수소, 및 이의 조합으로부터 선택되고, 이들 각각은 할로겐, O, N, 및 S로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함하고, 여기서 R1은 -F; -Cl; -Br; -I; -OH, -OR*; -NO; -NO2; -NO3; -O-NO; -N3; -NH2; -NHR*; -N(R*)2; -N(R*)3 +; -N(R*)-OH; -O-N(R*)2; -N(R*)-O-R*; -CN; -NC; -(C=O)-R*; -CHO; -CO2H; -CO2R*; -(C=O)-S-R*; -O-(C=O)-H; -O-(C=O)-R*; -S-(C=O)-R*; -(C=O)-NH2; -(C=O)-N(R*)2; -(C=O)-NHNH2; -O-(C=O)-NHNH2; -(C=S)-NH2; -(C=S)-N(R*)2; -N(R*)-CHO; -N(R*)-(C=O)-R*; -SCN; -NCS; -NSO; -SSR*; -SO2R*; -SO2-N(R*)2; -S(=O)-OR*; -S(=O)-R*; -Si(R*)3; -CF3; -O-CF3 및 이의 조합 중 하나 이상으로 임의 치환되고;
RN은:
Figure pct00113
로부터 선택되고; 여기서
Figure pct00114
기호는 부착 점을 나타내고; R', R" 및 R"'은 수소, C1-C6 지방족 탄화수소, 및 FMOC 및 BOC로부터 선택된 보호 그룹으로부터 선택되거나, 여기서 R' 및 R"는 함께 지방족 모노사이클릭, 지방족 비사이클릭, 또는 지방족 폴리사이클릭 구조를 형성하고;
R2, R3, 및 R4는 수소, 직쇄, 측쇄 또는 사이클릭 지방족 C1-C20 탄화수소, 또는 -(C=O)-R*로부터 독립적으로 선택되고, 이들 각각은 할로겐, O, N, 및 S로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함하고;
Ra는 각각의 존재시, 수소, -F, -Cl, -Br, -I, -OH, OR*, -NH2, -NHR*, -N(R*)2, -N(R*)3 +, -(C=O)-R*, -CHO, -CO2H, -CO2R*, -SR*, -SO2R*, 및 지방족 C1-C20 탄화수소로부터 독립적으로 선택되고, 이는 할로겐, O, N, 및 S로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함하고, 여기서 Ra는 -F, -Cl, -Br, -I, -OH, -OR* 중 하나 이상으로 임의 치환되고;
R*는 각각의 존재시 수소, 지방족 C1-C20 탄화수소, 방향족 C1-C20 탄화수소, 헤테로방향족 C1-C20 탄화수소, 사이클릭 지방족 C1-C20 탄화수소, 헤테로사이클릭 C1-C20 탄화수소, 및 이의 조합으로부터 독립적으로 선택되고, 이는 할로겐, O, N, 및 S 및 이의 조합로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함하고,
여기서 그룹 Za는 링커에 결합된다.
그룹 R1이 결합(즉, R1은 부재한다), 또는 2가 그룹, 즉, 리파마이신 유도체의 -O- 뿐만 아니라 링커에 결합할 수 있는 R1임이 이해되어야 한다.
일 구현예에서, -OR1은 -O-(즉, R1은 부재한다),
Figure pct00115
Figure pct00116
또는
Figure pct00117
이다.
일 구현예에서, X는 -O-이고, -OR1은 3급 아민을 포함한다. 이러한 구현예 중 일부에서, -OR1은
Figure pct00118
또는
Figure pct00119
이다.
일부 구현예에서, 링커-리파마이신 유사체 페이로드를 포함하는 항체-약물 접합체는 하나 이상의 반대 이온(counterion)을 갖는 암모늄 염을 포함한다. 임의의 약제학적으로 허용되는 반대 이온이 적합할 수 있다. 예를 들면, 본 개시내용의 구현예에서, 적합한 반대 이온은 F-, Cl-, Br-, I-, OH-, -BF4, CF3SO3 -, 일염기성 설페이트, 이염기성 설페이트, 일염기성 포스페이트, 이염기성 포스페이트, 또는 삼염기성 포스페이트, NO3 -, PF6 -, NO2 -, 카복실레이트, CeFfSO3 -(여기서 e=2-10 및 f=2e+1이다), 아세테이트, 아스파르테이트, 벤젠설포네이트, 벤조에이트, 베실레이트, 비카보네이트, 비타르트레이트, 캄실레이트, 카보네이트, 시트레이트, 데카노에이트, 에데테이트, 에실레이트, 푸마레이트, 글루셉테이트, 글루코네이트, 글루타메이트, 글리콜레이트, 글리콜리알라르사닐레이트, 헥사노에이트, 하이드라바민, 하이드록시나프토에이트, 이소티오네이트, 락테이트, 락토비오네이트, 말레이트, 말레에이트, 만델레이트, 메실레이트, 메틸브로마이드, 메틸니트레이트, 무케이트, 납실레이트, 옥타노에이트, 올레이트, 파모에이트, 판토테네이트, 폴리갈락투로네이트, 프로피오네이트, 살리실레이트, 스테아레이트, 서브아세테이트, 석시네이트, 타르트레이트, 테오클레이트, 토실레이트, 또는 트리에티요오다이드로부터 선택된 음이온일 수 있다.
일부 구현예에서, Ra는 부재한다. 일부 구현예에서, Ra는 -OH이고 1회 존재한다.
일 양태에서, 본 개시내용은 링커를 경유하여 또는 링커-스페이서를 통해 화학식 (XXI)의 구조를 갖는 리파마이신 유도체에 접합된 항체, 또는 이의 항원-결합 단편을 제공한다:
Figure pct00120
여기서:
X는 -O-, -S-, 및 -NR*-로부터 선택되고;
R5는 결합; 할로겐, O, N, 및 S로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함하는 지방족 C1-C20 탄화수소;
Figure pct00121
또는
Figure pct00122
로부터 선택되고; 여기서 Y는 C 또는 N이고;
R2, R3, 및 R4는 수소, 직쇄, 측쇄 또는 사이클릭 지방족 C1-C20 탄화수소, 또는 -(C=O)-R*로부터 독립적으로 선택되고, 이들 각각은 할로겐, O, N, 및 S로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함하고,
R5c는 결합 또는 지방족 C1-C8 탄화수소이고,
여기서 그룹 R5는 링커에 결합된다.
그룹 R5는 결합(즉, R5는 부재한다), 또는 2가 그룹, 즉, 리파마이신의 -O- 뿐만 아니라 링커에 결합할 수 있는 R5임이 이해되어야 한다.
일 구현예에서, -OR5는 -O-(즉, R5는 부재한다),
Figure pct00123
,
Figure pct00124
또는
Figure pct00125
이다.
일 구현예에서, X는 O이고, -OR5는 3급 아민을 포함한다. 이러한 구현예 중 일부에서, -OR5는
Figure pct00126
또는
Figure pct00127
이다.
상기 중 임의의 일 구현예에서, R2는 메틸, 에틸, 프로필 또는 이소프로필이고; R3은 CH3-(C=O)-(아세틸) 그룹, CH3CH2-(C=O)-, CH3CH2CH2-(C=O)-, 또는 (CH3)2CH-(C=O)-이고, R4는 수소이다.
상기 중 임의의 일 구현예에서, R2는 메틸이고, R3은 아세틸이고, R4는 수소이다.
상기 중 임의의 일 구현예에서, 화합물은 다음으로 이루어진 그룹으로부터 선택된다:
Figure pct00128
Figure pct00129
Figure pct00130
Figure pct00131
Figure pct00132
Figure pct00133
여기서,
Figure pct00134
는 링커에 대한 결합이다.
일 양태에서, 본 개시내용은 화학식 (XXII)의 구조를 갖는 항체-약물 접합체를 제공한다:
Figure pct00135
여기서:
BA는 항체, 또는 이의 항원-결합 단편이고;
L은 링커이고;
SP는
Figure pct00136
Figure pct00137
로부터 선택된 스페이서 그룹이고, 여기서
Figure pct00138
기호는 부착 점을 나타내고; R', R" 및 R"'은 수소, C1-C6 지방족 탄화수소, 및 플루오레닐메틸옥시카보닐(FMOC) 및 3급-부틸옥시카보닐(BOC)로부터 선택된 보호 그룹이거나, 여기서 R' 및 R"는 함께 지방족 모노사이클릭, 지방족 비사이클릭, 또는 지방족 폴리사이클릭 구조를 형성하고;
Y는 C 또는 N이고;
R' 및 R"는 각각의 존재시 수소 및 C1-6 알킬로부터 독립적으로 선택되고,
X는 -O-, -S-, 및 -NR*로부터 선택된다.
일 구현예에서, 항체는 (a) 표 9에 나타낸 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(HCVR)의 상보성 결정 영역(CDR); 및 (b) 표 9에 나타낸 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(LDVR)의 CDR을 포함하는 항-MSR1 항체, 또는 이의 항원-결합 단편이다.
일 구현예에서, 항-MSR1 항체, 또는 이의 항원-결합 단편은:
(i) 서열 번호: 4, 36, 52, 92, 및 284로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1 도메인;
(ii) 서열 번호: 6, 38, 54, 94, 및 286으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2 도메인;
(iii) 서열 번호: 8, 40, 56, 96, 및 288로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3 도메인;
(iv) 서열 번호: 12, 44, 60, 100, 및 292로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1 도메인;
(v) 서열 번호: 14, 46, 62, 102, 및 294로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2 도메인; 및
(vi) 서열 번호: 16, 48, 64, 104, 및 296으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3 도메인을 포함한다.
일 구현예에서, 항-MSR1 항체, 또는 이의 항원-결합 단편은,
(i) 서열 번호: 52의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1 도메인;
(ii) 서열 번호: 54의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2 도메인;
(iii) 서열 번호: 56의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3 도메인;
(iv) 서열 번호: 60의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1 도메인;
(v) 서열 번호: 62의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2 도메인; 및
(vi) 서열 번호: 64의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3 도메인을 포함한다.
일 구현예에서, 항-MSR1 항체, 또는 이의 항원-결합 단편은 N297Q 돌연변이를 포함한다.
일 구현예에서, 항-WTA 항체, 또는 이의 항원-결합 단편은 (a) 표 2A에 나타낸 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(HCVR)의 상보성 결정 영역(CDR); 및 (b) 표 2A에 나타낸 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(LDVR)의 CDR을 포함할 수 있다.
일 구현예에서, 항-WTA 항체, 또는 이의 항원-결합 단편은:
(i) 서열 번호: 470, 476, 482, 및 488로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1 도메인;
(ii) 서열 번호: 471, 477, 483, 및 489로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2 도메인;
(iii) 서열 번호: 472, 478, 484, 및 490으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3 도메인;
(iv) 서열 번호: 467, 473, 479, 및 485로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1 도메인;
(v) 서열 번호: 468, 474, 480, 및 486으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2 도메인; 및
(vi) 서열 번호: 469, 475, 481, 및 487로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3 도메인을 포함할 수 있다.
일 구현예에서, 항-WTA 항체, 또는 이의 항원-결합 단편은 (a) 표 2B에 나타낸 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(HCVR)의 상보성 결정 영역(CDR); 및 (b) 표 2B에 나타낸 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(LDVR)의 CDR을 포함할 수 있다.
일 구현예에서, 항-WTA 항체, 또는 이의 항원-결합 단편은:
(i) 서열 번호: 502, 508, 514, 520, 526, 532, 538, 544, 550, 556, 562, 568, 및 574로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1 도메인;
(ii) 서열 번호: 503, 509, 515, 521, 527, 533, 539, 545, 551, 557, 563, 569, 및 575로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2 도메인;
(iii) 서열 번호: 504, 510, 516, 522, 528, 534, 540, 546, 552, 558, 564, 570, 576, 및 584로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3 도메인;
(iv) 서열 번호: 499, 505, 511, 517, 523, 529, 535, 541, 547, 553, 559, 565, 및 571로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1 도메인;
(v) 서열 번호: 500, 506, 512, 518, 524, 530, 536, 542, 548, 554, 560, 566, 및 572로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2 도메인; 및
(vi) 서열 번호: 501, 507, 513, 519, 525, 531, 537, 543, 549, 555, 561, 567, 및 573으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3 도메인을 포함할 수 있다.
일부 구현예에서, 항-WTA 항체, 또는 이의 항원-결합 단편은 경쇄 내에 V205C 돌연변이(EU 번호매김)를 포함한다.
일 구현예에서, 항-WTA 항체, 또는 이의 항원-결합 단편은 미국 특허원 공보 제20140356375호(이는 이의 전문이 본원에 참고로 포함된다)에 기술된 항체 4497로부터 유래된다. 일 구현예에서, 항-WTA 항체는 항체 4497을 추가로 포함하고 경쇄 내에 V205C 돌연변이를 추가로 포함한다.
일 구현예에서, 항-WTA 항체, 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 번호: 568-569-570-565-566-567의 HCDR1-HCDR2-HCDR3-LCDR1-LCDR2-LCDR3을 포함한다.
일부 구현예에서, 항-WTA 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열 번호: 586의 중쇄 가변 영역(HCVR) 아미노산 서열 내에 3개의 중쇄 상보성 결정 영역(HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3); 및 서열 번호: 585의 경쇄 가변 영역(LCVR) 아미노산 서열 내에 3개의 경쇄 상보성 결정 영역 (LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3)을 포함한다.
일부 구현예에서, 항-WTA 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열 번호: 586의 HCVR 아미노산 서열, 및 서열 번호: 585의 LCVR 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, 항-WTA 항체는 서열 번호: 602의 중쇄 아미노산 서열 및 서열 번호: 587 또는 서열 번호: 589의 경쇄 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 항-WTA 항체, 또는 이의 항원-결합 단편은 경쇄 내에 V205C 돌연변이를 포함한다.
일 구현예에서, 항-단백질 A 항체, 또는 이의 항원-결합 단편은: (a) 표 3A에 나타낸 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(HCVR)의 상보성 결정 영역(CDR); 및 (b) 표 3A에 나타낸 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(LDVR)의 CDR을 포함할 수 있다.
일 구현예에서, 항-단백질 A 항체, 또는 이의 항원-결합 단편은:
(i) 서열 번호: 632, 652, 및 672로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1 도메인;
(ii) 서열 번호: 634, 654, 및 674로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2 도메인;
(iii) 서열 번호: 636, 656, 및 676으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3 도메인;
(iv) 서열 번호: 640, 660, 및 680으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1 도메인;
(v) 서열 번호: 642 및 662로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2 도메인; 및
(vi) 서열 번호: 644, 664, 및 683로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3 도메인을 포함할 수 있다.
일부 구현예에서, 항-단백질 A 항체, 또는 이의 항원-결합 단편은 중쇄 Fc 내에 H435R 및 Y436F 돌연변이(EU 번호매김)를 포함한다.
일 구현예에서, 항-단백질 A 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열 번호: 630의 중쇄 가변 영역(HCVR) 아미노산 서열 내에 3개의 중쇄 상보성 결정 영역(HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3); 및 서열 번호: 638의 경쇄 가변 영역(LCVR) 아미노산 서열 내에 3개의 경쇄 상보성 결정 영역(LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3)을 포함한다. 일 구현예에서, 항-단백질 A 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열 번호: 632-634-636-640-642-644를 포함하는 6개의 CDR(HCDR1-HCDR2-HCDR3-LCDR1-LCDR2-LCDR3) 세트를 포함한다.
일 구현예에서, 항-단백질 A 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열 번호: 630의 HCVR 아미노산 서열; 및 서열 번호: 638의 LCVR 아미노산 서열을 포함한다.
일 구현예에서, 항-단백질 A 항체는 서열 번호: 666의 중쇄 아미노산 서열 및 서열 번호: 668의 경쇄 아미노산 서열을 포함한다. 일 구현예에서, 항-단백질 A 항체는, 중쇄 Fc 내에 H435R 및 Y436F 돌연변이(EU 번호매김)를 포함한다. 일 구현예에서, 항-단백질 A 항체는 경쇄 내에 C103S 돌연변이를 추가로 포함한다. 일 구현예에서, 항-단백질 A 항체, 또는 이의 항원-결합 단편은, 103번 경쇄 위치에서 본 개시내용의 화합물에 접합된다.
다양한 구현예에서, 항체, 또는 이의 항원-결합 단편은 경쇄 내에 C103S 돌연변이를 포함한다.
다양한 구현예에서, 항체, 또는 이의 항원-결합 단편은 경쇄의 103번 위치에서 본 개시내용의 화합물에 접합된다.
일 구현예에서, L은 화학식
Figure pct00139
를 갖는 링커이고, 여기서
RG는 말레이미드, N-하이드록시 석신이미드, 또는 석신이미드로부터 선택되고;
SP1 및 SP2는 독립적으로 부재하거나
Figure pct00140
; C1-6 알킬, -NH-, -C(O)-, -CH2-CH2-C(O)-NH-, -(CH)u-C(O)-NH-, (-CH2-CH2-O)e, -NH-CH2-CH2-(-O-CH2-CH2)e-C(O)-, -C(O)-(CH2)u-C(O)-, -C(O)-NH-(CH2)v-, 및 이의 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 스페이서 그룹이고, 여기서 아래 첨자 e는 0 내지 4의 정수이고, 아래 첨자 u는 1 내지 8의 정수이고, 아래 첨자 v는 1 내지 8의 정수이고;
AA2-4는 2 내지 4개의 아미노산을 포함하는 펩타이드 단위이고,
PEG는 1 내지 30개의 폴리에틸렌 글리콜 잔기를 포함하는 폴리에틸렌 글리콜 쇄이다.
일 구현예에서, AA2-4는 발린-시트룰린; 시트룰린-발린; 발린-알라닌; 알라닌-발린; 발린-글리신, 글리신-발린, 또는 알라닌-글리신, 알라닌-알라닌으로부터 선택된 디펩타이드이다.
일 구현예에서, AA2-4는 발린-시트룰린이다.
일 구현예에서, SP는
Figure pct00141
이고 R' 및 R"는 각각 C1-6 알킬이다.
일 구현예에서, SP는
Figure pct00142
이고 R' 및 R"는 각각 메틸이다.
일 구현예에서, SP1 및 SP2는 각각
Figure pct00143
이다.
일 구현예에서, PEG는 8개의 폴리에틸렌 글리콜 단위를 포함한다.
일 구현예에서, BA는 항체, 또는 이의 항원-결합 단편이고;
L은 화학식
Figure pct00144
를 갖는 링커이고, 여기서 RG는 말레이미드 또는 석신이미드로부터 선택되고;
SP1 및 SP2는 각각
Figure pct00145
이고;
AA2-4는 발린-시트룰린이고;
PEG는 8개의 폴리에틸렌 글리콜 잔기를 포함하는 폴리에틸렌 글리콜이고;
SP는
Figure pct00146
이고 R' 및 R"는 각각 메틸이고,
X는 -O-이다.
일 구현예에서, 항체-약물 접합체는 다음 구조를 갖는다:
Figure pct00147
여기서 BA는 항체, 또는 이의 항원-결합 단편이다.
다른 양태에서, 본 개시내용은 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 제공하고, 여기서 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 링커 또는 링커-스페이서를 통해 다음으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 페이로드에 직접 접합된다:
Figure pct00148
Figure pct00149
Figure pct00150
Figure pct00151
Figure pct00152
.
일 구현예에서, 페이로드는
Figure pct00153
로부터 선택된 구조를 갖는다.
일 구현예에서, 페이로드는 링커를 통해 접합되고, 링커는 구조:
Figure pct00154
를 갖고, 여기서 RG는 말레이미드 또는 석신이미드로부터 선택되고;
SP1 및 SP2는 독립적으로 부재하거나
Figure pct00155
; C1-6 알킬, -NH-, -C(O)-, -CH2-CH2-C(O)-NH-, -(CH)u-C(O)-NH-, (-CH2-CH2-O)e, -NH-CH2-CH2-(-O-CH2-CH2)e-C(O)-, -C(O)-(CH2)u-C(O)-, -C(O)-NH-(CH2)v-, 및 이의 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 스페이서 그룹이고, 여기서 아래 첨자 e는 0 내지 4의 정수이고, 아래 첨자 u는 1 내지 8의 정수이고, 아래 첨자 v는 1 내지 8의 정수이고;
AA2-4는 2 내지 4개의 아미노산을 포함하는 펩타이드 단위이고,
PEG는 1 내지 30개의 폴리에틸렌 글리콜 잔기를 포함하는 폴리에틸렌 글리콜 쇄이다.
일 구현예에서, AA2-4는 발린-시트룰린; 시트룰린-발린; 발린-알라닌; 알라닌-발린; 발린-글리신, 또는 글리신-발린으로부터 선택된 디펩타이드이다.
일 구현예에서, AA2-4는 발린-시트룰린이다.
일 구현예에서, SP는
Figure pct00156
이고 R' 및 R"는 각각 C1-6 알킬이다.
일 구현예에서, SP는
Figure pct00157
이고 R' 및 R"는 각각 메틸이다.
일 구현예에서, SP1 및 SP2는 각각
Figure pct00158
이다.
일 구현예에서, PEG는 8개의 폴리에틸렌 글리콜 단위를 포함한다.
일 구현예에서, 페이로드는 다음 구조를 갖는 링커를 통해 접합된다:
Figure pct00159
.
일 구현예에서, 페이로드는 다음 구조를 갖는 링커, 링커-페이로드를 통해 접합된다:
Figure pct00160
여기서
Figure pct00161
는 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 대한 결합이다.
일 구현예에서, 페이로드는 다음 구조를 갖는 링커, 링커-페이로드를 통해 접합된다:
Figure pct00162
여기서
Figure pct00163
는 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 대한 결합이다.
일 구현예에서, 대식구 스캐빈저 수용체 1(MSR1)에 결합하는 항체, 또는 이의 항원-결합 단편은: (a) 표 9에 나타낸 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(HCVR)의 상보성 결정 영역(CDR); 및 (b) 표 9에 나타낸 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(LDVR)의 CDR을 포함할 수 있다.
일 구현예에서, 항-MSR1 항체, 또는 이의 항원-결합 단편은:
(i) 서열 번호: 4, 36, 52, 92, 및 284로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1 도메인;
(ii) 서열 번호: 6, 38, 54, 94, 및 286으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2 도메인;
(iii) 서열 번호: 8, 40, 56, 96, 및 288로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3 도메인;
(iv) 서열 번호: 12, 44, 60, 100, 및 292로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1 도메인;
(v) 서열 번호: 14, 46, 62, 102, 및 294로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2 도메인; 및
(vi) 서열 번호: 16, 48, 64, 104, 및 296으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3 도메인을 포함한다.
일 구현예에서, 항-MSR1 항체, 또는 이의 항원-결합 단편은
(i) 서열 번호: 52의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1 도메인;
(ii) 서열 번호: 54의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2 도메인;
(iii) 서열 번호: 56의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3 도메인;
(iv) 서열 번호: 60의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1 도메인;
(v) 서열 번호: 62의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2 도메인; 및
(vi) 서열 번호: 64의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3 도메인을 포함한다.
일 구현예에서, 항-MSR1 항체, 또는 이의 항원-결합 단편은 N297Q 돌연변이를 포함한다.
일 구현예에서, 항-WTA 항체, 또는 이의 항원-결합 단편은 (a) 표 2A에 나타낸 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(HCVR)의 상보성 결정 영역(CDR); 및 (b) 표 2A에 나타낸 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(LDVR)의 CDR을 포함할 수 있다.
일 구현예에서, 항-WTA 항체, 또는 이의 항원-결합 단편은
(i) 서열 번호: 470, 476, 482, 및 488로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1 도메인;
(ii) 서열 번호: 471, 477, 483, 및 489로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2 도메인;
(iii) 서열 번호: 472, 478, 484, 및 490으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3 도메인;
(iv) 서열 번호: 467, 473, 479, 및 485로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1 도메인;
(v) 서열 번호: 468, 474, 480, 및 486으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2 도메인; 및
(vi) 서열 번호: 469, 475, 481, 및 487로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3 도메인을 포함한다.
일 구현예에서, 항-WTA 항체, 또는 이의 항원-결합 단편은 (a) 표 2B에 나타낸 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(HCVR)의 상보성 결정 영역(CDR); 및 (b) 표 2B에 나타낸 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(LDVR)의 CDR을 포함할 수 있다.
일 구현예에서, 항-WTA 항체, 또는 이의 항원-결합 단편은
(i) 서열 번호: 502, 508, 514, 520, 526, 532, 538, 544, 550, 556, 562, 568, 및 574로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1 도메인;
(ii) 서열 번호: 503, 509, 515, 521, 527, 533, 539, 545, 551, 557, 563, 569, 및 575로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2 도메인;
(iii) 서열 번호: 504, 510, 516, 522, 528, 534, 540, 546, 552, 558, 564, 570, 576, 및 584로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3 도메인;
(iv) 서열 번호: 499, 505, 511, 517, 523, 529, 535, 541, 547, 553, 559, 565, 및 571로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1 도메인;
(v) 서열 번호: 500, 506, 512, 518, 524, 530, 536, 542, 548, 554, 560, 566, 및 572로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2 도메인; 및
(vi) 서열 번호: 501, 507, 513, 519, 525, 531, 537, 543, 549, 555, 561, 567, 및 573으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3 도메인을 포함한다.
일부 구현예에서, 항-WTA 항체, 또는 이의 항원-결합 단편은 경쇄 내에 V205C 돌연변이(EU 번호매김)를 포함한다.
일 구현예에서, 항-WTA 항체, 또는 이의 항원-결합 단편은 미국 특허원 공보 제20140356375호(이는 이의 전문이 본원에 참고로 포함된다)에 기술된 항체 4497로부터 유래된다. 일 구현예에서, 항-WTA 항체는 항체 4497로부터 유래되고 경쇄 내에 V205C 돌연변이를 추가로 포함한다.
일 구현예에서, 항-WTA 항체, 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 번호: 568-569-570-565-566-567의 HCDR1-HCDR2-HCDR3-LCDR1-LCDR2-LCDR3을 포함한다.
일부 구현예에서, 항-WTA 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열 번호: 586의 중쇄 가변 영역(HCVR) 아미노산 서열 내에 3개의 중쇄 상보성 결정 영역(HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3); 및 서열 번호: 585의 경쇄 가변 영역(LCVR) 아미노산 서열 내에 3개의 경쇄 상보성 결정 영역(LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3)을 포함한다.
일부 구현예에서, 항-WTA 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열 번호: 586의 HCVR 아미노산 서열, 및 서열 번호: 585의 LCVR 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, 항-WTA 항체는 서열 번호: 602의 중쇄 아미노산 서열 및 서열 번호: 587 또는 서열 번호: 589의 경쇄 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 항-WTA 항체, 또는 이의 항원-결합 단편은 경쇄 내에 V205C 돌연변이를 포함한다.
일 구현예에서, 항-단백질 A 항체, 또는 이의 항원-결합 단편은 (a) 표 3A에 나타낸 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(HCVR)의 상보성 결정 영역(CDR); 및 (b) 표 3A에 나타낸 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(LDVR)의 CDR을 포함할 수 있다.
일 구현예에서, 항-단백질 A 항체, 또는 이의 항원-결합 단편은
(i) 서열 번호: 632, 652, 및 672로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1 도메인;
(ii) 서열 번호: 634, 654, 및 674로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2 도메인;
(iii) 서열 번호: 636, 656, 및 676으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3 도메인;
(iv) 서열 번호: 640, 660, 및 680으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1 도메인;
(v) 서열 번호: 642 및 662로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2 도메인; 및
(vi) 서열 번호: 644, 664, 및 683으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3 도메인을 포함할 수 있다.
일부 구현예에서, 항-단백질 A 항체, 또는 이의 항원-결합 단편은 중쇄 Fc 내에 H435R 및 Y436F 돌연변이(EU 번호매김)를 포함한다.
일부 구현예에서, 항-단백질 A 항체, 또는 이의 항원-결합 단편은 중쇄 Fc 내에 H435R 및 Y436F 돌연변이(EU 번호매김)를 포함한다.
일 구현예에서, 항-단백질 A 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열 번호: 630의 중쇄 가변 영역(HCVR) 아미노산 서열 내에 3개의 중쇄 상보성 결정 영역 (HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3); 및 서열 번호: 638의 경쇄 가변 영역(LCVR) 아미노산 서열 내에 3개의 경쇄 상보성 결정 영역(LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3)을 포함한다. 일 구현예에서, 항-단백질 A 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열 번호: 632-634-636-640-642-644를 포함하는 6개의 CDR(HCDR1-HCDR2-HCDR3-LCDR1-LCDR2-LCDR3)의 세트를 포함한다.
일 구현예에서, 항-단백질 A 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열 번호: 630의 HCVR 아미노산 서열; 및 서열 번호: 638의 LCVR 아미노산 서열을 포함한다.
일 구현예에서, 항-단백질 A 항체는 서열 번호: 666의 중쇄 아미노산 서열 및 서열 번호: 668의 경쇄 아미노산 서열을 포함한다. 일 구현예에서, 항-단백질 A 항체는, 중쇄 Fc 내에 H435R 및 Y436F 돌연변이(EU 번호매김)를 추가로 포함한다. 일 구현예에서, 항-단백질 A 항체는 경쇄 내에 C103S 돌연변이를 추가로 포함한다. 일 구현예에서, 항-단백질 A 항체, 또는 이의 항원-결합 단편은 경쇄 103번 위치에서 본 개시내용의 화합물에 접합된다.
다양한 구현예에서, 항체, 또는 이의 항원-결합 단편은 경쇄 내에 C103S 돌연변이를 포함한다.
다양한 구현예에서, 항체, 또는 이의 항원-결합 단편은 경쇄의 103번 위치에서 본 개시내용의 화합물에 접합된다.
일 양태에서, 본 개시내용은 유효량의 본원에 기술된 바와 같은 항체-약물 접합체를 투여함을 포함하여, 세균의 성장을 방지 또는 억제하는 방법을 제공한다.
일 구현예에서, 세균은 그램-양성 세균이다.
일 구현예에서, 세균은 페니실린-내성 세균이다.
일 구현예에서, 세균은 스타필로코쿠스 아우레우스이다.
일 구현예에서, 세균은 메티실린-내성 스타필로코쿠스 아우레우스(MRSA), 반코마이신-내성 스타스타필로코쿠스 아우레우스(VRSA), 및 메티실린-민감성 스타필로코쿠스 아우레우스(MSSA)로부터 선택된다.
일 양태에서, 본 개시내용은 이러한 치료가 필요한 대상체에게 유효량의 본원에 기술된 바와 같은 항체-약물 접합체를 투여함을 포함하여, 대상체에서 세균 감염을 치료하는 방법을 제공한다.
일 구현예에서, 세균 감염은 그램-양성 세균 감염이다.
일 구현예에서, 세균 감염은 페니실린-내성 세균 감염이다.
일 구현예에서, 세균 감염은 스타필로코쿠스 아우레우스 감염이다.
일 구현예에서, 세균 감염은 메티실린-내성 스타필로코쿠스 아우레우스(MRSA) 감염, 반코마이신-내성 스타필로코쿠스 아우레우스(VRSA) 감염, 및 메티실린-민감성 스타필로코쿠스 아우레우스(MSSA) 감염으로부터 선택된다.
일 구현예에서, 세균 감염은 세포내 세균 감염이다.
일 구현예에서, 대상체는 사람이다.
일 구현예에서, 방법은 제2의 치료제를 투여함을 추가로 포함한다.
일 구현예에서, 제2의 치료제는 제2의 항생제이다.
일 구현예에서, 제2의 치료제는 스타필로코쿠스 아우레우스에 대해 효과적이다.
일 구현예에서, 제2의 항생제는 아미노글리코시드, 베타-락탐, 마크롤리드, 사이클릭 펩타이드, 테트라사이클린, 플루오로퀴놀린, 플루오로퀴놀론, 및 옥사졸리디논으로부터 선택된다.
일 구현예에서, 제2의 항생제는 클린다마이신, 노보비오신, 레타파물린, 답토마이신, 시타플록사신, 테이코플라닌, 트리클로산, 나프티리돈, 라데졸리드, 독소루비신, 암피실린, 반코마이신, 이미페넴, 도리페님, 겜시타빈, 달바반신, 및 아지트로마이신으로부터 선택된다.
일 구현예에서, 항체-약물 접합체는 대상체에게 경구적으로, 국소적으로, 비강내로, 정맥내로, 근육내로, 또는 피하로 투여된다.
여전히 다른 양태에서, 본 개시내용은 대상체에게 유효량의 본원에 기술된 바와 같은 화합물, 항체-약물 접합체, 또는 약제학적 조성물을 투여함을 포함하여, 대상체에서 봉와직염, 균혈증, 피부괴사증, 눈꺼풀 감염, 눈 감염, 신생아 결막염, 골수염, 농가진, 종기, 화상 피부 증후군, 식중독, 폐렴, 외과적 감염, 뇨관 감염, 화상 감염, 수막염, 심장내막염, 패혈증, 독성 쇼크 증후군, 또는 패혈성 관절염, 유방염(mastitis), 보철 관절과 관련된 감염(infection associated with a prosthetic joint), 카테터와 관련된 감염(infection associated with a catheter), 또는 임플란트와 관련된 감염(infection associated with an implant)을 방지 또는 예방하는 방법을 제공한다.
본 개시내용의 이러한 및 다른 양태는 첨부된 청구범위를 포함하는, 본 개시내용의 다음의 상세한 설명을 판독한 후 당해 분야의 기술자에게 명백할 것이다.
도 1은 본 개시내용에 따른 리파마이신 유사체를 사용하여 수행된 에스. 아루레우스 성장 억제 검정의 결과의 플롯(plot)이다.
도 2는 본 개시내용에 따른 리파마이신 유사체를 사용하여 수행된 에스. 아우레우스 세포내 사멸 검정의 결과의 막대 그래프이다.
도 3은 본 개시내용에 따른 리파마이신 유사체를 사용하여 수행된 에스. 아우레우스 세포내 사멸 검정의 결과의 플롯이다.
도 4는 4일 에스. 아우레우스 감염 모델의 개략도이다.
도 5는 THP 세포를 사용한 세포내 사멸 검정에서 본 개시내용에 따른 항-스타필로코쿠스 아우레우스 ADC의 콜로니 형성 단위의 플롯이다.
도 6은 동형 대조군 및 항-WTA Ab-항생제 ncADC(항체-약물 접합체)를 2 mg/kg에서 반코마이신과 함께 처리한 마우스에서 평균 에스. 아우레우스 신장 부담(burden)을 나타낸다.
도 7은 동형 대조군 및 본 개시내용에 따른 항-단백질 A Ab-항생제 ncADC를 2 mg/kg에서 반코마이신과 함께 처리한 마우스에서 평균 에스. 아우레우스 신장 부담을 나타낸다.
도 8은 동형 대조군 및 본 개시내용에 따른 항-WTA Ab-항생제 ncADC를 5 mg/kg에서 반코마이신과 함께 처리한 마우스에서 평균 에스. 아우레우스 신장 부담을 나타낸다.
상세한 설명
본 개시내용의 상세한 구현예가 본원에 개시되어 있으나; 개시된 구현예는 다양한 형태로 구현될 수 있는 본 개시내용을 단지 나열하는 것이다. 또한, 본 개시내용의 다양한 구현예와 관련하여 제공된 실시예 각각은 설명하기 위한 것이며 제한하지 않는 것으로 의도된다. 따라서, 본원에 개시된 구체적인 구조 및 기능적 상세한 설명은 제한하는 것이 아니라, 단지 본 개시내용을 다양하게 사용하기 위해 당해 분야의 기술자에게 교시하기 위한 대표적인 기반으로서 해석되어야 한다.
정의
달리 정의하지 않는 한, 본원에 사용된 모든 기술적 및 과학적 용어는 본 개시내용이 속한 당해 분야의 통상의 기술자에 의해 일반적으로 이해되는 바와 동일한 의미를 갖는다.
명세서 및 첨부된 청구범위에 사용된 바와 같은, 단수형 하나("a", "an") 및 그것("the")은 맥락이 달리 명확하게 나타내지 않는 한 복수의 참고를 포함한다. 따라서, 예를 들어, "방법"에 대한 참고는 하나 이상의 방법, 및/또는 본원에 기술된 유형의 단계들을 포함하고/하거나 이는 본 개시내용의 판독시 당해 분야의 기술자에게 명백해질 것이다.
용어 양상(state), 장애 또는 상태(condition)를 "치료하다" 또는 "치료"는: (1) 양상, 장애 또는 상태로 피해를 입을 수 있거나 이에 취약할 수 있지만 양상, 장애 또는 상태를 아직 경험하지 않거나, 이의 임상 또는 준임상 증상을 나타내는 대상체에서 발달하는 형세, 장애 또는 상태의 적어도 하나의 임상 또는 준-임상 증상의 발생 및/또는 출현 가능성을 방지, 지연, 또는 감소시키거나; (2) 양상, 장애 또는 상태를 억제, 즉, 질환의 발달 또는 이의 재발 또는 적어도 하나의 임상 또는 이의 준-임상 증상을 정지, 감소 또는 지연시키거나; (3) 질환을 경감, 즉, 양상, 장애 또는 상태, 이의 임상 또는 준-임상 증상 중 적어도 하나의 차도를 유발시킴을 포함한다. 치료될 대상체에 대한 이점은 통계적으로 유의적이거나 환자 또는 주치의에게 적어도 감지될 수 있다.
본원에 사용된 바와 같은, 용어 "대상체" 또는 "환자" 또는 "개체(individual)" 또는 "동물"은 사람, 가축 동물(예컨대, 고양이, 개, 소, 말, 양, 돼지 등) 및 질환의 실험 동물 모델(예컨대, 마우스, 랫트)를 지칭한다. 일 구현예에서, 대상체는 사람이다.
본원에 사용된 바와 같은 용량 또는 양에 적용된 용어 "효과적인"은 이를 필요로 하는 대상체에게 투여시 목적한 활성을 생성하는데 충분한 화합물 또는 약제학적 조성물의 양을 지칭한다. 활성 성분의 조합물이 투여되는 경우, 조합물의 효과적인 양은 개별적으로 투여된 경우 효과적이었던 각각의 성분의 양을 포함하거나 포함하지 않을 수 있다. 필요한 정확한 양은 대상체의 종, 연령, 및 일반적인 상태, 치료되는 상태의 중증도, 사용된 특수한 약물 또는 약물들, 투여 방식 등에 따라 대상체별로 변할 것이다.
본 개시내용의 조성물과 함께 사용된 바와 같은 어구 "약제학적으로 허용되는"은 생리적으로 내성이고 포유동물(예컨대, 사람)에게 투여된 경우 원치않는 반응을 전형적으로 생산하지 않는 이러한 조성물의 분자 실체(entity) 및 다른 성분을 지칭한다. 바람직하게는, 본원에 사용된 바와 같이, 용어 "약제학적으로 허용되는"은 연방 및 주 정부 또는 미국 약전(U.S. Pharmacopeia) 또는 다른 일반적으로 인식된 약전의 규제 기관에 의해 포유동물, 및 보다 특히 사람 용으로 승인됨을 의미한다.
본원에 사용된 바와 같은, 어구 "치료학적 유효량"은 이것이 투여되는 목적한 효과를 생산하는 양을 지칭한다. 정확한 양은 치료 목적에 의존할 것이며, 공지된 기술을 사용하여 당해 분야의 기술자에 의해 추정될 것이다(참고: 예를 들면, Lloyd (1999) The Art, Science and Technology of Pharmaceutical Compounding).
범위는 본원에서 "약" 또는 "대략"의 하나의 특수한 값 및/또는 "약" 또는 "대략" 다른 특수한 값으로 표현될 수 있다. 이러한 범위가 표현된 경우, 다른 구현예는 하나의 특수한 값으로부터 및/또는 다른 특수한 값까지를 포함한다.
"포함하는(comprising)" 또는 "함유하는(containing)" 또는 "포괄하는(including)"은 적어도 명명된 화합물, 원소, 입자, 또는 방법 단계가 조성물 또는 물품 또는 방법에 존재하지만, 다른 이러한 화합물, 물질, 입자, 또는 방법 단계가 명명된 것과 동일한 기능을 가지는 경우에도, 다른 화합물, 물질, 입자, 또는 방법 단계의 존재를 배제하지 않음을 의미한다.
본 개시내용의 화합물은 본원에 일반적으로 기술된 것을 포함하고 또한 본원에 개시된 부류, 아부류, 및 종에 의해 추가로 나타낸다. 본원에 사용된 바와 같은, 다음의 정의는 달리 나타내지 않는 한 적용될 것이다. 본 개시내용의 목적을 위해서, 화학 원소는 원소 주기율표, CAS 버젼, Handbook of Chemistry and Physics, 75th-Ed에 따라 확인된다. 또한, 유기 화학의 일반적인 원리가 문헌 "Organic Chemistry", Thomas Sorrell, University Science Books, Sausalito: 1999, 및 "March's Advanced Organic Chemistry", 5th-Ed., Ed.: Smith, M.B. 및 March, J., John Wiley & Sons, New York: 2001에 기술되어 있으며, 이의 전체 내용은 본원에 참고로 포함된다. 보호 그룹의 화학은 예를 들면, 문헌: Wuts and Greene, Greene's Protective Groups in Organic Synthesis, 4th Ed., John Wiley & Sons: New York, 2006에서 찾을 수 있다.
용어 "탄화수소"는 탄소 및 수소를 포함하는 탄화수소 라디칼(다르게는 "그룹"으로서 지칭됨)을 포함하기 위해 본원에 사용되며 또한 이의 유도체를 포함하고 여기서 하나 이상의 탄소는 임의의 헤테로원자, 예를 들면, 산소, 질소, 황 및 인으로 대체되어 있다. 본 개시내용의 탄화수소는 산소, 질소, 황 및 인 함유 그룹에 의해 또는 할로겐에 의해 제한없이 임의 치환된다. 용어 탄화수소는 직쇄, 측쇄, 사이클릭 또는 다중사이클릭 지방족 그룹 뿐만 아니라 하기에 보다 상세히 논의된 바와 같은 방향족 및 헤테로방향족 그룹을 포함한다.
용어 "임의 치환된"은 치환된 원소가 임의의 원소의 "0-n개를 추가로 포함하는"과 동일한 의미를 가지며, 여기서 n은 일반적으로 0 내지 20, 또는 0 내지 10, 또는 1 내지 3개의 정수이다. 예를 들면, 지방족 탄화수소가 하나 이상의 헤테로원자를 임의로 포함하는 경우,이는 지방족 탄화수소가 0 내지 20개의 헤테로원자를 추가로 포함하는 것과 동일한 의미를 가질 수 있다.
본원에 사용된 바와 같은, 용어 "지방족" 또는 "지방족 그룹"은 완전히 포화되거나 하나 이상의 불포화 단위를 함유하는 직쇄(즉, 비측쇄), 측쇄, 치환되거나 비치환된 탄화수소 쇄, 또는 하나 이상의 불포화 단위를 함유하지만, 방향족이 아닌(또한 본원에서 "카보사이클", "지환족" 또는 "사이클로알킬"로 지칭됨), 모노사이클릭 탄화수소, 비사이클릭 탄화수소, 또는 트리사이클릭 탄화수소를 의미하며, 이는 분자의 나머지에 대해 단일의 부착점을 갖는다. 일부 구현예에서, 지방족 그룹은 직쇄 및 사이클릭 지방족 탄화수소의 조합(하이브리드)을 포함한다. 일부 구현예에서, 지방족 그룹은 직쇄 및 사이클릭 지방족 탄화수소의 조합을 포함한다. 달리 규정하지 않는 한, 지방족 그룹은 1 내지 30개의 지방족 탄소 원자를 함유한다. 일부 구현예에서, 지방족 그룹은 1 내지 20개의 지방족 탄소 원자를 함유한다. 다른 구현예에서, 지방족 그룹은 1 내지 10개의 지방족 탄소 원자를 함유한다. 여전히 다른 구현예에서, 지방족 그룹은 1 내지 6개의 지방족 탄소 원자를 함유하고, 여전히 다른 구현예에서, 지방족 그룹은 1, 2, 3, 또는 4개의 지방족 탄소 원자를 함유한다. 적합한 지방족 그룹은 직쇄 또는 측쇄의, 치환되거나 비치환된 알킬, 알케닐, 알키닐 그룹 및 이의 조합/하이브리드, 예를 들면, (사이클로알킬)알킬, (사이클로알케닐)알킬 또는 (사이클로알킬)알케닐을 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 단순한 지방족 탄화수소는 메틸, 에틸, 프로필, 부틸, t-부틸, n-부틸, 펜틸 등을 포함한다.
본원에 사용된 바와 같은, 용어 "지방족 사이클릭", "사이클릭 지방족", "카보사이클릭", "알리사이클릭(alicyclic)" 또는 "지환족(cycloaliphatic)"은 3 내지 14개의 구성원을 갖는 본원에 기술된 바와 같은, 포화되거나 부분 불포화된 사이클릭 지방족 모노사이클릭, 비사이클릭, 또는 폴리사이클릭 환 구조를 지칭하고, 여기서 지방족 환 시스템은 상기 정의한 바와 같이 및 본원에 기술된 바와 같이 임의 치환된다. 지환족 그룹은 제한없이, 사이클로프로필, 사이클로부틸, 사이클로펜틸, 사이클로펜테닐, 사이클로헥실, 사이클로헥세닐, 사이클로헵틸, 사이클로헵테닐, 사이클로옥틸, 사이클로옥테닐, 노르보르닐, 아다만틸, 및 사이클로옥타디에닐을 포함한다. 일부 구현예에서, 사이클로알킬은 3 내지 6개의 탄소를 갖는다. 지방족 사이클릭 구조는 또한 하나 이상의 방향족 또는 비방향족 환에 융합된 지방족 환, 예를 들면, 데카하이드로나프틸 또는 테트라하이드로나프틸을 포함하고, 여기서 라디칼 또는 부착 점은 지방족 환 상에 존재한다. 일부 구현예에서, 지방족 사이클릭 그룹은 비사이클릭이다. 일부 구현예에서, '카보사이클릭 그룹은 트리사이클릭이다. 일부 구현예에서, 지방족 사이클릭 그룹은 폴리사이클릭이다. 일부 구현예에서, 지방족 폴리사이클릭 그룹은 2개 이상의 환(환 시스템)의 트위스트 구조를 나타내는 스피로사이클릭 구조이고, 여기서 2 또는 3개의 환은 하나의 일반적인 원자에 서로 연결되어 있다. 다른 구현예에서, 지방족 폴리사이클릭 그룹은 융합된 비사이클릭 구조이고 여기서 2개의 환은 2개의 인접한 원자를 공유하는데, 즉, 환은 1개의 공유 결합을 공유하고, 즉, 소위 브릿지헤드 원자(bridgehead atom)가 직접 연결되어 있다(예컨대, α-투젠(thujene) 및 데칼린). 일부 구현예에서 지방족 폴리사이클릭 구조는 브릿지된 비사이클릭 구조이며, 여기서, 예컨대, 2개의 환은 적어도 하나의 원자를 함유하는 브릿지에 의해 2개의 브릿지된 원자를 분리하는 3개 이상의 원자를 공유한다. 예를 들면, 또한 비사이클로[2.2.1]헵탄으로 공지된 노르보르덴은 각각 이의 5개의 탄소 원자 중 3개를 공유하는 사이클로펜탄 환의 부분으로서 고려될 수 있다. 일부 구현예에서, "지방족 사이클릭"(또는 "카보사이클" 또는 "사이클로알킬")은 모노사이클릭 C3-C8 탄화수소, 또는 완전히 포화되거나 하나 이상의 불포화 단위를 함유하지만, 방향족이 아니고, 분자의 나머지에 대해 단일의 부착 점을 갖는 C6-C12 비사이클릭 탄화수소, 또는 완전히 포화되거나 하나 이상의 불포화 단위를 함유하고, 방향족이 아니며, 분자의 나머지에 대해 단일의 부착 점을 갖는 C9-C16 트리사이클릭 탄화수소를 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같은, 용어 "알킬"은 당해 분야에서 이의 통상의 의미를 가지며 포화된 지방족 그룹, 예를 들면, 직쇄 알킬 그룹, 측쇄 알킬 그룹, 사이클로알킬 그룹, 알킬 치환된 사이클로알킬 그룹, 및 사이클로알킬 치환된 알킬 그룹을 포함할 수 있다. 특정의 구현예에서, 직쇄 또는 측쇄 알킬은 이의 골격 내에 약 1 내지 20개의 탄소 원자(예컨대, 직쇄의 경우 C1-C20, 측쇄의 경우 C2-C20), 및 대안적으로, 약 1 내지 10개의 탄소 원자, 또는 약 1 내지 6개의 탄소 원자를 갖는다. 일부 구현예에서, 사이클로알킬 환은 이의 환 구조내에 약 3 내지 10개의 탄소 원자를 가지며 여기서 이러한 환은 모노사이클릭 또는 비사이클릭이고, 대안적으로 환 구조내에 약 5, 6 또는 7개의 탄소를 갖는다. 일부 구현예에서, 알킬 그룹은 저급 알킬 그룹일 수 있고, 여기서 저급 알킬 그룹은 1 내지 4개의 탄소 원자(예컨대, 직쇄 저급 알킬의 경우 C1-C4)를 갖는다.
본원에 사용된 바와 같은, 용어 "알케닐"은 하나 이상의 이중 결합을 갖는, 본원에 정의된 바와 같은 알킬 그룹을 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같은, 용어 "알키닐"은 하나 이상의 삼중 결합을 갖는, 본원에 정의된 바와 같은 알킬 그룹을 지칭한다.
용어 "헤테로알킬"은 당해 분야에서 이의 통상의 의미를 가지며 본원에 기술된 바와 같은 알킬 그룹을 지칭하고 여기서 하나 이상의 탄소 원자는 헤테로원자(예컨대, 할로겐, 산소, 질소, 황 등)로 대체된다. 헤테로알킬 그룹의 예는 알콕시, 폴리(에틸렌 글리콜)-, 알킬-치환된 아미노, 테트라하이드로푸라닐, 피페리디닐, 모르폴리닐 등을 포함하나, 이에 한정되지 않는다.
본원에 사용된 바와 같은, "방향족"은 5 내지 20개의 환 원자를 가질 수 있고, 임의로 1 내지 20개의 헤테로원자 치환체를 가질 수 있는 모노사이클릭 또는 폴리사이클릭, 방향족 또는 헤테로방향족 환을 지칭한다. 일부 구현예에서, 방향족 그룹은 임의로 1 내지 10개의 헤테로원자 치환체를 가질 수 있다. 일부 구현예에서, 방향족 그룹은 1 내지 5개의 헤테로원자 치환체를 가질 수 있다. 일부 구현예에서, 방향족 그룹은 모노사이클릭 또는 폴리사이클릭 방향족 환, 예를 들면, 사이클로펜타디에닐, 페닐, 나프틸 또는 안트라세닐이다. 일부 구현예에서, 방향족 그룹은 5 내지 10개의 환 원자를 갖는 모노사이클릭 또는 폴리사이클릭 방향족 환이다. 일부 구현예에서, 방향족 그룹은 5 내지 6개의 탄소 원자를 함유하는 모노사이클릭 방향족 환, 예를 들면, 페닐 및 사이클로펜타디에닐이다. 하나의 특수한 구현예에서, 방향족 그룹은 페닐 그룹이다.
단독으로 또는 "알킬", "아르알콕시" 또는 "아릴옥시알킬"에서와 같이 보다 큰 모이어티(moiety)의 부분으로서 사용된 용어 "아릴"은 총 5 내지 14개의 환 구성원을 갖는 모노사이클릭 또는 비사이클릭 환 시스템을 지칭하고, 여기서 시스템 내 적어도 하나의 환은 방향족이고 여기서 시스템내 각각의 환은 3 내지 7개의 환 구성원을 함유한다. 용어 "아릴"은 용어 "아릴 환"과 상호교환적으로 사용된다. 본 개시내용의 특정의 구현예에서, "아릴"은 하나 이상의 치환체를 지닐 수 있는, 페닐, 비페닐, 나프틸, 비나프틸, 안트라실 등을 포함하나, 이에 한정되지 않는 방향족 환 시스템을 지칭한다. 또한, 본원에 사용된 바와 같이, 용어 "아릴"의 영역 내에는 방향족 환이 하나 이상의 비-방향족 환에 융합된 그룹, 예를 들면, 인다닐, 프탈이미딜, 나프티미딜, 페난트리디닐, 또는 테트라하이드로나프틸 등이 포함된다.
용어 "헤테로방향족 탄화수소", "헤테로아릴" 및 보다 큰 모이어티, 예컨대, "헤테로아르알킬", 또는 "헤테로아르알콕시"의 부분으로서 단독 사용된 용어 "헤테로아르-"는 5 내지 10개의 환 원자(즉, 모노사이클릭 또는 비사이클릭), 일부 구현예에서 5, 6, 9, 또는 10개의 환 원자를 갖는 그룹을 지칭한다. 일부 구현예에서, 이러한 환은 사이클릭 배열로 공유된 6, 10, 또는 14개의 π 전자를 갖고; 또한 탄소 원자 외에, 1 내지 5개의 헤테로원자를 갖는다. 용어 "헤테로원자"는 질소, 산소, 또는 황을 지칭하고, 질소 또는 황의 임의의 산화된 형태, 및 염기성 질소의 임의의 사급화된 형태를 포함한다. 헤테로방향족 탄화수소 또는 헤테로아릴 그룹은 제한없이, 티에틸, 푸라닐, 피롤릴, 이미다졸릴, 피라졸릴, 트리아졸릴, 테트라졸릴, 옥사졸릴, 이속사졸린, 옥사디아졸릴, 티아졸릴, 이소티아졸릴, 티아디아졸릴, 피리딜, 피리다지닐, 피리미디닐, 피리미디닐, 피라지닐, 인돌리지닐, 푸니릴, 나프티리디닐, 및 프테리디닐을 포함한다. 일부 구현예에서, 헤테로아릴은 헤테로비아릴 그룹, 예를 들면, 비피리딜 등이다. 본원에 사용된 바와 같은, 용어 "헤테로아릴" 및 "헤테로아르"는 또한 헤테로방향족 환이 하나 이상의 아릴, 지환족, 또는 헤테로사이클릴 환에 융합된 그룹을 포함하고, 여기서 라디칼 또는 부착 점은 헤테로방향족 환 상에 존재한다. 비제한적 예는 인돌릴, 이소인돌릴, 벤노티에닐, 벤조푸라닐, 디벤조푸라닐, 인다졸릴, 벤즈이미다졸릴, 벤즈티아졸릴, 퀴놀릴, 이소퀴놀릴, 신놀리닐, 트탈라지닐, 퀴나졸리닐, 퀴녹살리닐, 4H-퀴놀리지닐, 카르바졸릴, 아크리디닐, 페나지닐, 페노티아지닐, 페녹사지닐, 테트라하이드로퀴놀리닐, 테트라하이드로이소퀴놀리닐, 및 피리도[2,3-b]-l,4-옥사진-3(4H)-온을 포함한다. 헤테로아릴 그룹은 모노사이클릭, 비사이클릭, 트리사이클릭, 테트라사이클릭, 및/또는 달리는 폴리사이클릭일 수 있다. 용어 "헤테로아릴"은 용어 "헤테로아릴 환", "헤테로아릴 그룹", 또는 "헤테로방향족"과 상호교환적으로 사용되고, 이들 용어 어느 것도 임의로 치환된 환을 포함한다. 용어 "헤테로아르알킬"은 헤테로아릴로 치환된 알킬 그룹을 지칭하고, 여기서 알킬 및 헤테로아릴 부위는 독립적으로 임의 치환된다.
본원에 사용된 바와 같은, 용어 "헤테로사이클", "헤테로사이클릴", "헤테로사이클릭 라디칼", 및 "헤테로사이클릭 환"은 상호교환적으로 사용되고 포화되거나 부분 불포화되고, 탄소 원자 외에, 하나 이상, 바람직하게는 1 내지 4개의 상기 정의된 바와 같은 헤테로원자를 갖는 안정한 5- 내지 7-원의 모노사이클릭 또는 7-10-원의 비사이클릭 헤테로사이클릭 모이어티를 지칭한다. 헤테로사이클의 환 원자를 참고로 사용된 경우, 용어 "질소"는 치환된 질소를 포함한다.
헤테로사이클릭 환은 임의의 헤테로원자 또는 안정한 구조를 생성하는 탄소 원자에서 이의 펜던트(pendant) 그룹에 부착될 수 있고 임의의 환 원자는 임의로 치환될 수 있다. 이러한 포화되거나 부분 불포화된 헤테로사이클릭 라디칼의 예는 제한없이, 테트라하이드로푸라닐, 테트라하이드로티오페닐 피롤리디닐, 피페리디닐, 피롤리닐, 테트라하이드로퀴놀리닐, 테트라하이드로이소퀴놀리닐, 데카하이드로퀴놀리닐, 옥사졸리디닐, 피페라지닐, 디옥사닐, 디옥솔라닐, 디아제피닐, 티아제피닐, 모르폴리닐, 및 퀴누클리디닐을 포함한다. 용어 "헤테로사이클", "헤테로사이클릴", "헤테로사이클릴 환", "헤테로사이클릭 그룹", "헤테로사이클릭 모이어티", 및 "헤테로사이클릭 라디킬"은 본원에서 상호교환적으로 사용되며, 또한 헤테로사이클릴 환이 하나 이상의 아릴, 헤테로아릴, 또는 지환족 환에 융함된 그룹, 예를 들면, 인돌리닐, 3H-인돌릴, 크로마닐, 페난트리디닐, 또는 테트라하이드로퀴놀리닐을 포함한다. 헤테로사이클릴 그룹은 모노사이클릭, 비사이클릭, 트리사이클릭, 테트라사이클릭, 및/또는 달리는 폴리사이클릭일 수 있다. 용어 "헤테로사이클릴알킬"은 헤테로사이클릴에 의해 치환된 알킬 그룹을 지칭하며, 여기서 알킬 및 헤테로사이클릴 부위는 독립적으로 임의 치환된다.
본원에 사용된 바와 같은, 용어 "부분 불포화된"은 적어도 하나의 이중 결합 또는 삼중 결합을 포함하는 환 모이어티를 지칭한다. 용어 "부분 불포화된"은 다수의 불포화 부위를 가진 환을 포함하는 것으로 의도되지만, 본원에 정의된 바와 같이, 아릴 또는 헤테로아릴 모이어티를 포함하는 것으로 의도되지 않는다.
용어 "헤테로원자"는 산소, 황, 질소, 인, 또는 규소(질소, 황, 인, 또는 규소의 임의의 산화된 형태, 임의의 염기성 질소의 사급화된 형태 또는; 헤테로사이클릭 환의 치환가능한 질소) 중 중 하나 이상을 의미한다.
본원에 사용된 바와 같은, 용어 "불포화된"은 하나 이상의 불포화 단위를 갖는 모이어티를 의미한다. 용어 "할로겐"은 F, Cl, Br, 또는 I를 의미하고; 용어 "할라이드"는 할로겐 라디칼 또는 치환체, 즉, -F, -Cl, -Br, 또는 -I를 지칭한다. 본원에 사용된 바와 같은, "할로알킬"은 상기 정의된 바와 같은 알킬을 지칭하고, 여기서 알킬은 할로겐, 예를 들면, 불소(F), 염소(Cl), 브롬(Br), 또는 요오드(I)로부터 선택된 적어도 하나의 치환체를 포함한다. 할로알킬의 예는 -CF3, -CH2CF3, -CCl2F, 및 -CCl3를 포함하나, 이에 한정되지 않는다.
본원에 사용된 바와 같은, 용어 "보호 그룹"은 후속적인 화학 반응에서 화학 선택성을 수득하기 위하여, 작용 그룹의 화학적 변형에 의해 분자내로 도입된 그룹, 예를 들면, 아미노 또는 알코올을 지칭한다. 하나의 비-제한적인 구현예에서, 보호 그룹은 1-클로로에틸 카보닐(ACE), 아세토일, 벤질(Bn), 벤질옥시 카보닐(CBz), 포르밀, 메틸 카보닐, 트리플루오로아세틸, t-부톡시 카보닐(Boc), 및 플루오레닐메틸옥시카보닐(Fmoc)을 포함할 수 있다. 다른 비-제한적인 구현예에서, 보호 그룹은 아르보벤질옥시(Cbz), p-메톡시벤질 카보닐(Moz 또는 MeOZ), 3급-부틸옥시카보닐(BOC), 9-플루오레닐메틸옥시카보닐(Fmoc), 아세틸 (Ac), 벤조일(Bz), 벤질(Bn), p-메톡시벤질(PMB), 3,4-디메톡시벤질(DMPM), p-메톡시페닐(PMP) 그룹, 토실(Ts), 트록(트리클로로에틸 클로로포르메이트), 설폰아미드, 예를 들면, 노실(Nosyl) 및 Nps를 포함한다. 추가의 비-제한적인 구현예에서, 보호 그룹은 β-메톡시에톡시메틸 에테르(MEM), 디메톡시트리틸, [비스-(4-메톡시페닐)페닐메틸](DMT), 메톡시메틸 에테르(MOM), 메톡시트리틸 [(4-메톡시페닐)디페닐메틸](MMT), 메틸티오메틸 에테르, 피발로일(Piv), 테트라하이드로피라닐(THP), 테트라하이드로푸란(THF), 트리틸(트리페닐메틸, Tr), 실릴 에테르 (TMS), 3급-부틸디메틸실릴(TBDMS), 트리-이소-프로필실릴옥시메틸(TOM), 및 트리이소프로필실릴(TIPS) 에테르), TBDMS 및 TOM; 메틸 에테르 및 에톡시에틸 에테르(EE)를 포함한다.
본원에 사용된 바와 같은, 용어 "O-아미노산" 또는 "HO-아미노산"은 아미노산 또는 아미노산 서열의 N-말단에서 천연의 아미노 그룹이 산소 또는 하이드록실 그룹으로 각각 대체된 아미노산을 지정한다. 예를 들면, "O-XXXX" 또는 "HO-XXXX"는 아미노산 서열(XXXX)를 지정하는 것으로 의도되며 여기서 N-말단에서 천연의 아미노 그룹은 산소 또는 하이드록실 그룹 각각으로 대체된다(예컨대,
Figure pct00164
, 여기서 각각의 R은 아미노산 측쇄이다). 유사하게, 용어 "O-아미노산 잔기" 또는 "HO-아미노산 잔기"는 화학 반응 후 남아있는 화합물내 화학 모이어티를 지칭한다. 예를 들면, "O-아미노산 잔기" 또는 "HO-아미노산 잔기"는 적합한 커플링 파트너에 대한 O-아미노산 또는 HO-아미노산의 아미드 커플링 또는 펩타이드 커플링의 생성물을 지칭하고; 여기서, 예를 들면, 물 분자는 O-아미노산 또는 HO-아미노산의 아미드 또는 펩타이드 커플링 후 배출되어, 이에 혼입된 O-아미노산 잔기 또는 HO-아미노산 잔기를 가진 생성물을 생성한다.
이의 입체화학을 규정하지 않는 아미노산 또는 아미노산 잔기의 지정은 아미노산의 L 형, 아미노산의 D 형, 또는 이의 라세미 혼합물을 포함하는 것으로 의도된다.
본원에 기술된 바와 같이, 개시내용의 화합물은 "임의 치환된" 모이어티를 함유할 수 있다. 일반적으로, 용어 "치환된"은, 용어 "임의로"가 선행되는지의 여부에 상관없이, 지정된 모이어티의 하나 이상의 수소가 적합한 치환체로 대체됨을 의미한다. 달리 나타내지 않는 한, "임의 치환된" 그룹은 그룹의 각각의 치환가능한 위치에서 적합한 치환체를 가질 수 있고, 임의의 주어진 구조내에서 하나 이상의 위치가 규정된 그룹으로부터 선택된 하나 이상의 치환체로 치환될 수 있는 경우, 치환체는 모든 위치에서 동일하거나 상이할 수 있다. 본 개시내용에 의해 고려되는 치환체의 조합은 바람직하게는 안정하거나 화학적으로 실현가능한 화합물의 형성을 야기하는 것이다. 본원에 사용된 바와 같은, 용어 "안정한"은 이의 생산, 검출, 및, 특정의 구현예에서, 본원에 개시된 목적 중 하나 이상을 위한 이의 회수, 정제, 및 사용을 허용하기 위한 상태에 적용되는 경우 실질적으로 변경되지 않는 화합물을 지칭한다.
달리 기술하지 않는 한, 본원에 나타낸 구조는 또한 구조의 모든 이성체(예컨대, 거울상이성체, 부분입체이성체, 및 기하학적(또는 구조적)) 형태; 예를 들면, 각각의 비대칭 중심에 대한 R 및 S 구조, (Z) 및 (E) 이중 결합 이성체, 및 (Z) 및 (E) 구조 이성체를 포함함을 의미한다. 따라서, 본 발명의 단일 입체화학 이성체 뿐만 아니라 거울상이성체, 부분입체이성체, 및 기하학적(또는 구조적) 혼합물은 본 개시내용의 영역 내에 있다.
달리 기술하지 않는 한, 본 개시내용의 화합물의 모든 호변이성체 형태는 본 개시내용의 영역내에 있다.
또한, 달리 기술하지 않는 한, 본원에 나타낸 구조는 또한 하나 이상의 동위원소적으로 풍부한 원자의 존재하에서 단지 상이한 화합물을 포함함을 의미한다. 예를 들면, 중수소 또는 삼중수소에 의한 수소의 대체, 또는 11C- 또는 13C- 또는 14C가 풍부한 탄소에 의한 탄소의 대체, 또는 17O- 또는 18O가 풍부한 산소에 의한 산소의 대체, 또는 15N이 풍부한 질소에 의한 질소의 대체는 본 개시내용의 영역내에 있다.
하나 이상의 방법 단계의 언급은 추가의 방법 단계 또는 표현하여 정의한 이러한 단계 사이에 개재되는 방법 단계의 존재를 배제하지 않는 것으로 이해되어야 한다. 유사하게, 장치 또는 시스템 내에서 하나 이상의 구성성분의 언급은 추가의 구성성분 또는 표현하여 확인된 구성성분 사이에 개재되는 구성성분의 존재를 배재하지 않는 것으로 이해되어야 한다.
달리 기술하지 않는 한, 본 개시내용의 화합물 및 이의 염의 모든 결정성 형태는 본 개시내용의 영역 내에 있다. 본 개시내용의 화합물은 다양한 무정형 및 결정성 다형체 형태로, 예를 들면, 그러나 이에 한정되지 않는 무수의, 수화된, 비-용매화된, 또는 용매화된 무수 및 결정성 다형체 형태로 단리될 수 있다. 수화물의 예는 반수화물, 일수화물, 이수화물 등을 포함한다. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 화합물은 무수 및 비-용매화된다. "무수"는 화합물의 결정성 형태가 결정 격자 구조내에 결합된 물을 필수적으로 함유하지 않음을, 즉, 화합물이 결정성 수화물을 형성하지 않음을 의미한다.
본원에 사용된 바와 같은, "결정성 형태"는 결정성 물질의 특정 격자 구조를 지칭함을 의미한다. 동일한 물질의 상이한 결정형(다형체 형태)는 전형적으로 결정성 형태 각각의 특징인 상이한 물리적 특성에 기여하는 상이한 결정성 격자(예컨대, 단위 셀(unit cell)을 갖는다. 일부 예에서, 상이한 격자 구조는 상이한 물 또는 용매 내용물을 갖는다. 상이한 결정성 격자는 고체상 특성화 방법, 예를 들면, X-선 분말 회절(PXRD)로 확인할 수 있다. 다른 특성화 방법은 차등 주사 열량계(DSC), 열무게 분석(TGA), 동적 증기 흡수(dynamic vapor sorption)(DVS), 고체 상 NMR, 및 결정성 형태를 확인하는데 도움을 줄 뿐 아니라 안전성 및 용매/물 함량을 측정하는데 도움을 주는 것이다.
물질의 결정성 형태는 용매화된(예컨대, 수화된) 및 비-수화된(예컨대, 무수) 형태를 포함한다. 수화된 형태는 결정성 격자 속에 물을 포함하는 결정성 형태이다. 수화된 형태는 화학량론적 수화물일 수 있으며, 여기서 물은 반수화물, 일수화물, 이수화물 등과 같이, 특정의 물/분자 비로 격자 속에 존재한다. 수화된 형태는 또한 비-화학량론적일 수 있으며, 여기서 물 함량은 가변적이고 외부 상태, 예를 들면, 습도에 의존한다.
일부 구현예에서, 본 개시내용의 화합물은 실질적으로 단리되어 있다. "실질적으로 단리된"은 특수한 화합물이 불순물로부터 적어도 부분적으로 단리되어 있음을 의미한다. 예를 들면, 일부 구현예에서 본 개시내용의 화합물은 약 50% 미만, 약 40% 미만, 약 30% 미만, 약 20% 미만, 약 15% 미만, 약 10% 미만, 약 5% 미만, 약 2.5% 미만, 약 1% 미만, 또는 약 0.5% 미만의 불순물을 포함한다. 불순물은 일반적으로 실질적으로 단리된 화합물이 아닌 임의의 것, 예를 들면, 다른 결정성 형태 및 다른 물질을 포함한다.
본원에 사용된 바와 같은, 용어 "항생제"(abx 또는 Abx)는 미생물, 예를 들면, 세균의 상장을 특이적으로 억제하거나 사멸시키지만, 각격을 투여 투여된 농도 및 투여량에서 숙주에게 치명적이지 않은 임의의 분자를 포함한다. 특수한 양태에서, 항생제는 투여된 농도 및 투여 간격에서 숙주에게 무-독성이다. 세균에 대해 효과적인 항생제는 살세균제(즉, 직접 사멸시키는) 또는 세균정지제 (즉, 분열을 방지하는)로 광범위하게 분류될 수 있다. 항-살세균성 항생제는 또한 협소한-스펙트럼 또는 광범위한 스펙트럼으로 아분류될 수 있다. 광범위-스펙트럼 항생제는 세균의 보다 작은 범위 또는 특이적인 과(family)에 대해 효과적인, 협소한 스펙트럼의 항생제와는 대조적으로, 그램-양성 및 그램-음성 세균을 포함하는 광범위한 세균에 대해 효과적인 것이다. 항생제의 예는 아미노글리코시드예컨대, 아미카신, 겐타마이신, 가나마이신, 네오마이신, 네틸마이신, 스트렙토마이신, 토브라마이신, 파로마이신, 안사마이신, 예컨대, 겔다나마이신, 헤르비마이신, 카르바세펨, 예컨대, 로라카르베프, 카르바페넴, 예컨대, 에르타페눔, 오리페넴, 이미페넴/실라스타틴, 메로페넴, 세팔로스포린(제1 세대), 예컨대, 세파드록실, 세파졸린, 세팔로틴, 세팔렉신, 세팔로스포린(제2 세대), 예컨대, 세플라클로르, 세파만돌, 세폭시틴, 세푸록심, 세팔로스포린(제3 세대), 예컨대, 세픽심, 세프디니르, 세프디토렌, 세포페라존, 세포탁심, 세프포독심, 세프타지딤, 세프티부텐, 세프티족심, 세프트리악손, 세팔로스포린(제4 세대), 예컨대, 세페핌, 세팔로스포린(제5 세대), 예컨대, 세프토비프롤, 글리코펩타이드, 예컨대, 테이코플라닌, 반코마이신, 마크롤리드, 예컨대, 악시트로마이신, 클라리트로마이신, 디리트로마이신, 에리트로마이신, 록시트로마이신, 트롤레안도마이신, 텔리트로마이신, 스펙티노마이신, 모노박탐, 예컨대, 악스트레오남, 페니실린, 예컨대, 아목시실린, 안피실린, 악슬로실린, 카르베니실린, 클록사실린, 디클록사실린, 플루클록사실린, 메즐로실린, 메티실린, 나프실린, 옥사실린, 페니실린, 페페라실린, 티카르실린, 항생제 폴리펩타이드, 예컨대, 바시크라신, 콜리스틴, 폴리믹신 B, 퀴놀론, 예컨대, 시프로플록사신, 에녹사신, 가티플록사신, 레보플록사신, 레메플록사신, 목시플록사신, 노르플록사신, 오르플록사신, 트로바플록사신, 설폰아미드, 예컨대, 마페니드, 프론토실, 설파세트아미드, 설파메티졸, 설파닐아미드, 설파살라진, 설피속사졸, 트리메토프림, 트리메토프림-설파메톡사졸(TMP-SMX), 테트라사이클린, 예컨대, 데메클로사이클린, 독소사이클린, 미노사이클린, 옥시테트라사이클린, 테트라사이클린 및 기타, 예를 들면, 아르스펜아미드, 클로로람페니콜, 클린다마이신, 린코마이신, 에탐부톨, 포스포마이신, 푸시드산, 푸라졸리돈, 이소니아지드, 리네졸리드, 메트로니다졸, 무피로신, 니트로푸란토인, 플라텐시마이신, 피라진아미드, 퀴누프리스틴/달포프리스틴, 리팜핀/리팜피신 또는 티미다졸을 포함한다.
대안적으로, 다중약물 내성 스타필로코쿠스 아우레우스 또는 옥사실린-내성 스타필로코쿠스 아우레우스(ORSA)로 알려져 있는, 용어 "메티실린-내성 스타필로코쿠스 아우레우스"(MRSA)는 페니실린(예컨대, 메티실린, 디클록사실린, 나프실린 등) 및 세팔로스포린을 포함하는 베타-락탐 항생제에 대해 내성인 스타필로코쿠스 아우레우스의 임의의 균주를 지칭한다. "메티실린민감성 스타필로코쿠스 아우레우스"(MSSA)는 베타락탐 항생제에 대해 민감성인 스타필로코쿠스 아우레우스의 임의의 균주를 지칭한다.
용어 "최소 억제 농도(minimum inhibitory concentration)"("MIC")는 밤새 항온처리 후 미생물의 가시적인 성장을 억제할 항미생물제의 최저 농도를 지칭한다. MIC를 측정하기 위한 검정은 알려져 있다. 한가지 방법은 하기 실시예에 기술된 바와 같다.
약물-대-항체 비(drug-to-antibody ratio)(DAR)는 항체 또는 항원-결합 단편에 접합된 약물의 평균 수이며, 이는 ADC의 효능, 잠재능 및 약동학에서 중요한 효과를 갖는다. 다양한 구현예에서, DAR은 항체 당 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 또는 8개의 약물 분자이다. 일부 구현예에서, DAR은 1 내지 8이다. 일부 구현예에서, DAR은 1 내지 6이다. 특정의 구현예에서, DAR은 2 내지 4이다. 일부 경우에, DAR은 2 내지 3이다. 특정의 경우에, DAR은 0.5 내지 3.5이다. 일부 구현예에서, DAR은 약 1, 또는 약 1.5, 또는 약 2, 또는 약 2.5, 또는 약 3, 또는 약 3.5이다.
본원에 사용된 바와 같이, 표현 "MSR1," "hMSR1" 등은 A 부류 대식구 스캐빈저 수용체의 다양한 형태 및 동형을 나타내는, (i) NCBI 수탁 번호 제NP_002436.1호로 나타낸 아미노산 서열, (ii) NCBI 수탁 번호 제NP_619729.1호로 나타낸 아미노산 서열, 및/또는 (iii) NCBI 수탁 번호 제NP_619730.1호로 나타낸 아미노산 서열을 포함하는 사람 단일-통과(human single-pass), 삼량체 제II형 막관통 당단백질 패턴 인식 수용체를 지칭한다. 표현 "MSR1"은 단량체성 및 다량체성 MSR1 분자 둘 다를 포함한다. 본원에 사용된 바와 같은, 표현 "단량체성 사람 MSR1"은 임의의 다량체화 도에인을 함유하거나 지니지 않고 정상 상태에서 다른 MSR1 분자에 대한 직접적인 물리적 연결없이 단일 MSR1 분자로서 존재하는 MSR1 단백질 또는 이의 부위를 의미한다. 예시적인 단량체성 MSR1 분자는 서열 번호:-393의 아미노산 서열을 포함하는 본원에서 "His-hMSR1"로서 지칭된 분자이다(참고: 예컨대, 본원의 실시예 25).
본원의 단백질, 폴리펩타이드 및 단백질 단편에 대한 모든 참고는 비-사람 종으로부터 유래된 것으로 명쾌하게 명시하지 않는 한 각각의 단백질, 단편, 폴리펩타이드 또는 단백질의 사람 버젼을 지칭하는 것으로 의도된다. 따라서, 표현 "MSR1"은 비-사람 종, 예컨대, "마우스 MSR1", "원숭이 MSR1" 등으로부터 유래된 것으로 명시하지 않는 한 사람 MSR1을 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같은, 표현 "세포 표면-발현된 MSR1"은 시험관내(in vitro) 또는 생체내(in vivo)에서 세포의 표면에 발현됨으로써, MSR1 단백질의 적어도 일부가 세포막의 세포외 측면에 노출되어 항체의 항원-결합 부위에 접근가능하게 된 하나 이상의 MSR1 단백질(들), 또는 이의 세포외 도메인을 지칭한다. "세포 표면-발현된 MSR1"은 정상적으로 MSR1 단백질을 발현하는 세포의 표면에서 발현된 MSR1 단백질을 포함하거나 이로 이루어질 수 있다. 대안적으로, "세포 표면-발현된 MSR1"은 이의 표면에 사람 MSR1을 발현하지 않지만 인공적으로 가공되어 이의 표면 상에 MSR1을 발현하는 세포의 표면에 발현된 MSR1 단백질을 포함하거나 이로 이루어질 수 있다.
본원에 사용된 바와 같은, 표현 "항-MSR1 항체"는 단일 특이성을 지닌 1가 항체 뿐만 아니라 MSR1에 결합하는 제1 아암(arm) 및 제2의(표적) 항원에 결합하는 제2의 아암을 포함하고, 여기서 항-MSR1 아암은 본원의 표 9에 나타낸 바와 같은 임의의 HCVR/LCVR 또는 CDR 서열을 포함한다. 표현 "항-MSR1 항체"는 또한 약물 또는 치료제에 접합된 항-MSR1 항체 또는 이의 항원-결합 부위를 포함하는 항체-약물 접합체 (ADC)를 포함한다. 표현 "항-MSR1 항체"는 또한 방사성핵종에 접합된 항-MSR1 항체 또는 이의 항원-결합 부위를 포함하는 항체-방사성핵종 접합체(ARC)를 포함한다.
용어 "벽 테이코산"(WTA)은 N-아세틸 쿠람산 당의 C6 하이드록실에 대한 포스포디에스테르 연결을 통해 펩티도글리칸에 공유결합으로 부착된 음이온성 글리코중합체(glycopolymer)를 지칭한다. 정확한 화학 구조는 유기체 중에서 변할 수 있지만, 일부 구현예에서, WTA는 2번 위치에서 D-리비톨 및 D-알라닐 에스테르의 1,5-포스포디에스테르의 반복 단위 및 4번 위치에서 글리코실 치환체를 지닌 리비톨 테이코산이다. 글리코실 그룹은 에스. 아우레우스에 존재하는 것으로서 N-아세틸글루코스아미닐 α(알파) 또는 β(베타)일 수 있다. 알디톨/당 알코올 포스페이트 상의 하이드록실은 양이온성 D-알라닌 에스테르 및 일당류, 예를 들면, N-아세틸글루코스아민으로 치환될 수 있다. 하이드록실 치환체는 D-알라닐 및 알파(α) 또는 베타(β) GlcNHAc를 포함할 수 있다. 하나의 구체적인 구현예에서, WTA는 다음 화학식의 화합물을 포함한다:
Figure pct00165
여기서 파선은 폴리알디톨-P 또는 펩티도글리칸의 반복 연결 단위 또는 부착 부위를 나타내고, 여기서 X는 D-알라닐 또는 -H이고; Y는 α(알파)-GlcNHAc 또는 β(베타)-GlcNHAc이다.
Figure pct00166
본원에 사용된 바와 같은, 용어 "항-WTA 항체"는 벽 테이코산(WTA) 알파 또는 WTA 베타에 상관없이 WTA에 결합하는 임의의 항체를 지칭한다. 용어 "항-벽 테이코산 알파 항체" 또는 "항-WTA 알파 항체" 또는 "항-αWTA" 또는 "항-αGlcNac WTA 항체"는 WTA 알파에 특이적으로 결합하는 항체를 지칭하는데 상호교환적으로 사용된다. 유사하게, 용어 "항-벽 테이코산 베타 항체" 또는 "항-WTA 베타 항체" 또는 "항-βWTA" 또는 "항-βGlcNac WTA 항체"는 WTA 베타에 특이적으로 결합하는 항체를 지칭하기 위해 상호교환적으로 사용된다. 표현 "항-WTA 항체"는 단일 특이성을 지닌 1가 항체 뿐만 아니라 WTA에 결합하는(WTA 알파 또는 WTA 베타에 상관없이) 제1의 아암 및 제2의(표적) 항원에 결합하는 제2의 아암을 포함하는 이특이적 항체를 포함하며, 여기서 항-WTA 아암은 본원의 표 2A 및 2B에 나타낸 바와 같은 임의의 HCVR/LCVR 또는 CDR 서열을 포함한다. 표현 "항-WTA 항체"는 또한 약물 또는 치료제에 접합된 항-WTA 항체 또는 이의 항원-결합 부위를 포함하는 항체-약물 접합체 (ADC)를 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같은, 용어 "항체"는 특수한 항원(예컨대, MSR1, WTA, 또는 단백질 A)에 특이적으로 결합하거나 이와 상호작용하는 적어도 하나의 상보성 결정 영역(CDR)을 포함하는 임의의 항원-결합 분자 또는 분자 복합체를 의미한다. 용어 "항체"는 이황화물 결합에 의해 상호-연결된 2개의 중(H) 쇄 및 2개의 경(L) 쇄의, 4개의 폴리펩타이드 쇄를 포함하는 면역글로불린 분자 뿐만 아니라 이의 다량체(예컨대, IgM)를 포함한다. 각각의 중쇄는 중쇄 가변 영역(본원에서 HCVR 또는 VH로 약술됨) 및 중쇄 불변 영역을 포함한다. 중쇄 불변 영역은 3개의 도메인, CH1, CH2 및 CH3를 포함한다. 각각의 경쇄는 경쇄 가변 영역(본원에서 LCVR 또는 VL로서 약술됨) 및 경쇄 불변 영역을 포함한다. 경쇄 불변 영역은 1개의 도메인(CL1)을 포함한다. VH 및 VL 영역은 또한 골격 영역(FR)로 명명된, 보다 보존된 영역이 배치된, 상보성 결정 영역(CDR)로 불리는, 초가변성 영역으로 추가로 아분될 수 있다. 각각의 VH 및 VL은 아미노-말단으로부터 카복시-말단까지 다음의 순서로 정렬된 3개의 CDR 및 4개의 FR로 구성된다: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4. 상이한 구현예에서, 항체(또는 이의 항원-결합 부위)의 FR은 사람 배선 서열과 동일하거나, 천연적으로 또는 인공적으로 변형될 수 있다. 아미노산 컨센수스 서열은 2개 이상의 CDR의 나란한 분석(side-by-side analysis)을 기반으로 정의될 수 있다.
본원에 사용된 바와 같은, 용어 "항체"는 또한 완전한 항체 분자의 항원-결합 단편을 포함한다. 본원에 사용된 바와 같은, 용어 항체의 "항원-결합 부위", 항체의 "항원-결합 단편" 등은 항원에 특이적으로 결합하여 복합체를 형성하는 임의의 천연적으로 존재하는, 효소적으로 수득가능한, 합성, 또는 유전적으로 가공된 폴리펩타이드 또는 당단백질을 포함한다. 항체의 항원-결합 단편은 예컨대, 임의의 적합한 표준 기술, 예를 들면, 단백질분해성 소화 또는 항체 가변 및 임의로 불변 도메인을 암호화하는 DNA의 조작 및 발현을 수반하는 재조합 유전 가공 기술을 사용함에 의해, 예컨대, 완전한 항체 분자로부터 유래될 수 있다. 이러한 DNA는 공지되어 있고/있거나 예컨대, 시판 공급원, DNA 라이브러리(예컨대, 파아지-항체 라이브러리 포함)으로부터 용이하게 이용가능하거나, 합성될 수 있다. DNA는 서열분석되거나 화학적으로 또는 분자 생물학 기술을 사용함으로써 조작하여, 예를 들면, 하나 이상의 가변 및/또는 불변 도메인을 적합한 구조로 정렬시키거나 코돈을 도입하거나, 시스테인 잔기를 생성시키거나, 아미노산 등을 변형, 첨가 또는 결실시킬 수 있다.
항원-결합 단편의 비-제한적 예는: (i) Fab 단편; (ii) -F(ab')2 단편; (iii) Fd 단편; (iv) Fv 단편; (v) -단일-쇄 Fv(scFv) 분자; (vi) dAb 단편; 및 (vii) 항체(예컨대, 단리된 상보성 결정 영역(CDR), 예를 들면, CDR3 펩타이드), 또는 구속된 FR3-CDR3-FR4 펩타이드의 초가변 영역을 모사하는 아미노산 잔기로 이루어진 최소-인식 단위를 포함한다. 다른 가공된 분자, 예를 들면, 도메인-특이적인 항체, 단일 도메인 항체, 도메인-결실된 항체, 키메라-항체, CDR-이식된 항체, 디아보디(diabody), 트리아보디(triabody), 테트라보디(tetrabody), 미니보디(minibody), 나노보디(nanobody)(예컨대, 1가 나노보디, 2가 나노보디 등), 작은 모듈러 면역약제(small modular immunopharmaceutical)(SMIP), 및 상어 가변 IgNAR 도메인이 또한 본원에 사용된 바와 같은, 표현 "항원-결합 단편" 내에 포함된다.
항체의 항원-결합 단편은 전형적으로 적어도 하나의 가변 도메인을 포함할 것이다. 가변 도메인은 임의의 크기 또는 아미노산 조성일 수 있고 일반적으로 하나 이상의 골격 서열에 인접하거나 프레임내(in frame)에 있는 적어도 하나의 CDR을 포함할 것이다. VL 도메인과 관련된 VH 도메인을 갖는 항원-결합 단편에서, VH 및 VL 도메인은 임의의 적합한 배열로 서로에 대해 위치할 수 있다. 예를 들면, 가변 영역은 이량체성일 수 있고 VH-VH, VH-VL 또는 VL-VL 이량체를 함유한다. 대안적으로, 항체의 항원-결합 단편은 단량체성 VH 또는 VL 도메인을 함유할 수 있다.
특정의 구현예에서, 항체의 항원-결합 단편은 적어도 하나의 불변 도메인에 공유결합으로 연결된 적어도 하나의 가변 도메인을 함유할 수 있다. 본 개시내용의 항체의 항원-결합 단편 내에서 발견될 수 있는 가변 및 불변 도메인의 비-제한적인, 예시적인 구조는 다음을 포함한다: (i) VH-CH1; (ii) VH-CH2; (iii) VH-CH3; (iv) VH-CH1-CH2; (v) VH-CH1-CH2-CH3; (vi) VH-CH2-CH3; (vii) VH-CL; (viii) VL-CH1; (ix) VL-CH2; (x) VL-CH3; (xi) VL-CH1-CH2; (xii) VL-CH1-CH2-CH3; (xiii) VL-CH2-CH3; 및 (xiv) VL-CL. 상기 나열한 임의의 예시적인 구조를 포함하는, 가변 및 불변 도메인의 임의의 구조에서, 가변 및 불변 도메인은 서로 직접 연결될 수 있거나 완전한 또는 부분적인 힌지 또는 링커 영역에 의해 연결될 수 있다. 힌지 영역은 단일의 폴리펩타이드 분자내 인접한 가변 및/또는 불변 도메인 사이에 유연성 또는 반-유연성 연결을 생성하는 적어도 2개(예컨대, 5, 10, 15, 20, 40, 60개 이상)의 아미노산으로 이루어질 수 있다. 더욱이, 본 개시내용의 항체의 항원-결합 단편은 서로 및/또는 하나 이상의 단량체성 VH 또는 VL 도메인(예컨대, 이황화물 결합(들)에 의해)과 비-공유결합적으로 연합된 상기 나열된 임의의 가변 및 불변 도메인 구조의 단독-이량체 또는 헤테로-이량체(또는 다른 다량체)를 포함할 수 있다.
완전한 항체 분자와 마찬가지로, 항원-결합 단편은 일특이적이거나 다특이적(예컨대, 이특이적)일 수 있다. 항체의 다특이적 항원-결합 단편은 전형적으로 적어도 2개의 상이한 가변 도메인을 포함할 것이고, 여기서 각각의 가변 도메인은 별도의 항원 또는 동일한 항원의 상이한 에피토프에 특이적으로 결합할 수 있다. 임의의 다특이적 항체 양식, 예를 들면, 본원에 개시된 예시적인 이특이적 항체는 당해 분야에서 이용가능한 통상의 기술을 사용하여 본 개시내용의 항체의 항원-결합 단편의 맥락에서 사용하기 위해 채택될 수 있다.
본 개시내용의 항체는 상보체-의존성 세포독성(complement-dependent cytotoxicity)(CDC) 또는 항체-의존성 세포-매개된 세포독성(antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity)(ADCC)을 통해 기능할 수 있다. "상보체-의존성 세포독성"(CDC)은 상보체의 존재하에서 본 개시내용의 항체에 의한 항원-발현 세포의 분해를 지칭한다. "항체-의존성 세포-매개된 세포독성"(ADCC)은 Fc 수용체(FcR)를 발현하는 비특이적인 세포독성 세포(예컨대, 천연 킬러(Natural Killer)(NK) 세포, 호중구, 및 대식구)가 표적 세포 상에서 결합된 항체를 인식함으로써 표적 세포의 분해를 초래하는 세포-매개된 반응을 지칭한다. CDC 및 ADCC는 당해 분야에 잘 공지되어 있고 이용가능한 검정을 사용하여 측정할 수 있다(참고: 예컨대, 미국 특허 제5,500,362호 및 제5,821,337호, 및 Clynes et al. (1998) Proc. Natl. Acad. Sci. (USA) 95:652-656). 항체의 불변 영역은 상보체를 고정시키고 세포-의존성 세포독성을 매개하는 항체의 능력에서 중요하다. 따라서, 항체의 동형은 이것이 항체가 세포독성을 매개하는 것이 바람직한지의 여부를 기준으로 선택할 수 있다.
특정의 구현예에서, 본원에 개시된 항체는 사람 항체이다. 본원에 사용된 바와 같은, 용어 "사람 항체"는 사람 배선 면역글로불린 서열로부터 유래된 가변 및 불변 영역을 갖는 항체를 포함하는 것으로 의도된다. 본 개시내용의 사람 항체는 예를 들면 CDR 및 특히 CDR3 내에서 사람 배선 면역글로불린 서열(예컨대, 시험관내에서 무작위 또는 부위-특이적인 돌연변이유발에 의해 또는 생체내에서 체세포 돌연변이에 의해 도입된 돌연변이)에 의해 암호화되지 않은 아미노산 잔기를 포함할 수 있다. 그러나, 본원에 사용된 바와 같은, 용어 "사람 항체"는 다른 포유동물 종, 예를 들면, 마우스의 배선으로부터 유래된 CDR 서열이 사람 골격 서열내로 이식된 항체를 포함하는 것으로 의도되지 않는다.
본원에 개시된 항체는 일부 구현예에서, 재조합 사람 항체일 수 있다. 본원에 사용된 바와 같은, 용어 "재조합 사람 항체"는 재조합 수단에 의해 제조, 발현, 생성 또는 단리된 모든 사람 항체, 예를 들면, 숙주 세포내로 형질감염된 재조합 발현 벡터를 사용하여 발현시킨 항체(하기에 추가로 기술됨), 재조합, 조합 사람 항체 라이브러리로부터 단리된 항체(하기에 추가로 기술됨), 사람 면역글로불린 유전자에 대해 유전자이식성인 동물(예컨대, 마우스)로부터 단리된 항체(참고: 예컨대, Taylor et al. (1992) Nucl. Acids Res. 20:6287-6295) 또는 다른 DNA 서열내로 사람 면역글로불린 유전자 서열의 스플라이싱을 포함하는 임의의 다른 수단에 의해 제조, 발현, 생성 또는 단리된 항체를 포함하는 것으로 의도된다. 이러한 재조합 사람 항체는 사람 배선 면역글로불린 서열로부터 유래된 가변 및 불변 영역을 갖는다. 그러나, 특정의 구현예에서, 이러한 재조합 사람 항체는 시험관내 돌연변이유발(또는, 사람 Ig 서열에 대해 유전자이식성인 동물을 사용한 경우, 생체내 체세포 돌연변이유발)에 적용되므로 재조합 항체의 VH 및 VL 영역의 아미노산 서열은 사람 배선 VH 및 VL 서열로부터 및 이와 관련되지만, 생체내에서 사람 항체 배선 레퍼토리 내에 천연적으로 존재하지 않을 수 있다.
사람 항체는 힌지 이종성(hinge heterogeneity)과 관련된 2개의 형태로 존재할 수 있다. 하나의 형태에서, 면역글로불린 분자는 대략 150 내지 160 kDa의 안정한 4개 쇄 작제물을 포함하며 여기서 이량체는 쇄간 중쇄 이황화물 결합에 의해 함께 유지된다. 제2 형태에서, 이량체는 쇄간 이황화물 결합을 통해 연결되지 않으며, 공유결합된 경쇄 및 중쇄(반(half)-항체)로 구성된 약 75 내지 80 kDa의 분자가 형성된다. 이러한 형재는 친화성 정제후에도, 분리하기 매우 어렵다.
다양한 완전한(intact) IgG 동형으로부터의 제2 형태의 출현 빈도는 항체의 힌지 영역 동형과 관련된 구조적 차이에 기인하나 이에 한정되지 않는다. 사람 IgG4 힌지의 힌지 영역내 단일 아미노산 치환은 제2 형태의 출현(Angal et al. (1993) Molecular Immunology 30:105)을 사람 IgG1 힌지를 사용하여 관찰된 수준으로 유의적으로 감소시킬 수 있다. 본원에 개시된 구현예는 예를 들면, 목적한 항체 형태의 수율을 증진시키기 위해, 예를 들면, 생산시, 바람직할 수 있는 힌지, CH2 또는 CH3 내 하나 이상의 돌연변이를 갖는 항체를 포함한다.
본원에 개시된 항체는 단리된 항체일 수 있다. 본원에 사용된 바와 같은, "단리된 항체"는 이의 천연 환경의 적어도 하나의 구성성분으로부터 확인 및 분리되고/되거나 회수된 항체를 의미한다. 예를 들면, 유기체의 적어도 하나의 구성성분, 또는 항체가 천연적으로 존재하거나 천연적으로 생산된 조직 또는 세포로부터 분리되거나 제거된 항체는 본 개시내용의 목적을 위한 "단리된 항체"이다. 단리된 항체는 또한 재조합 세포내에서 자체내 항체를 포함한다. 단리된 항체는 적어도 하나의 정제 또는 단리 단계에 적용된 항체이다. 특정의 구현예에 따라서, 단리된 항체는 다른 세포 물질 및/또는 화학물질을 실질적으로 함유하지 않을 수 있다.
본원에 개시된 항체는 이로부터 항체가 유래된 상응하는 배성 서열과 비교하여 골격 및/또는 중쇄 및 경쇄 가변 도메인 내에 하나 이상의 아미노산 치환, 삽입 및/또는 결실을 포함할 수 있따. 이러한 돌연변이는 본원에 개시된 아미노산 서열을 예를 들면, 공공의 항체 서열 데이타베이스로부터 이용가능한 배선 서열과 비교함으로써 용이하게 추정할 수 있다. 구현예는 본원에 개시된 임의의 아미노산 서열로부터 유래된 항체, 및 이의 항원-결합 단편을 포함하고, 여기서 하나 이상의 골격 및/또는 CDR 영역내 하나 이상의 아미노산은 이로부터 항체가 유래되는 배선 서열의 상응하는 잔기(들), 또는 다른 사람 배선 서열의 상응하는 잔기(들), 또는 상응하는 배선 잔기(들)의 보존적 아미노산 치환으로 돌연변이된다(이러한 서열 변화는 본원에서 총칭하여 "배선 돌연변이"로 지칭된다). 당해 분야의 통상의 기술자는 본원에 개시된 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열로부터 출발하여, 하나 이상의 개개 배선 돌연변이 또는 이의 조합을 포함하는 다수의 항체 및 항원-결합 단편을 용이하게 생산할 수 있다. 특정의 구현예에서, VH 및/또는 VL 도메인내 골격 및/또는 CDR 잔기 모두는 이로부터 항체가 유래되는 원래의 배선 서열에서 발견된 잔기로 역 돌연변이된다. 다른 구현예에서, 특정의 잔기 만, 예컨대, FR1의 처음 8개 아미노산 내에서 또는 FR4의 마지막 8개의 아미노산 내에서 발견된 돌연변이된 잔기, 또는 CDR1, CDR2 또는 CDR3 내에서 발견된 돌연변이된 잔기만이 원래의 배선 서열로 돌연변이된다. 다른 구현예에서, 하나 이상의 골격 및/또는 CDR 잔기(들)은 상이한 배선 서열(즉, 항체가 원래 유래된 배선 서열과는 상이한 배선 서열)의 상응하는 잔기(들)로 돌연변이된다. 또한, 본 개시내용의 항체는 골격 및/또는 CDR 영역내에 2개 이상의 배선 돌연변이의 임의의 조합을 함유할 수 있는데, 예컨대, 여기서 특정의 개개 잔기는 특수한 배선 서열의 상응하는 잔기로 돌연변이되지만 원래의 배선 서열과는 상이한 특정의 다른 잔기는 유지되거나 상이한 배선 서열의 상응하는 잔기로 돌연변이된다. 수득되면, 하나 이상의 배선 돌연변이를 함유하는 항체 및 항원-결합 단편은 하나 이상의 목적한 특성, 예를 들면, 증진된 결합 특이성, 증가된 결합 친화성, 증진되거나 향상된 길항 또는 작용성(agonistic) 생물학적 특성(존재하는 경우), 감소된 면역원성 등에 대해 용이하게 시험될 수 있다. 이러한 일반적인 방식으로 수득된 항체 및 항원-결합 단편은 본원에 개시된 구현예 내에 포함된다.
구현예는 또한 하나 이상의 보존적 치환을 갖는 본원에 개시된 임의의 HCVR, LCVR, 및/또는 CDR 아미노산 서열의 변이체를 포함하는 항체를 포함한다. 예를 들면, 구현예는 본원의 표 9에 나타낸 임의의 HCVR, LCVR, 및/또는 CDR 아미노산 서열에 대해 10개 이하, 8개 이하, 6개 이하, 4개 이하 등의 보존적 아미노산 치환을 지닌 HCVR, LCVR, 및/또는 CDR 아미노산 서열을 포함하는 항-MSR1 항체를 포함한다. 다른 예로서, 구현예는 본원의 표 2A 또는 2B에 나타낸 임의의 HCVR, LCVR, 및/또는 CDR 아미노산 서열에 대해 예컨대, 10개 이하, 8개 이하, 6개 이하, 4개 이하 등의 보존적 아미노산 치환을 지닌 HCVR, LCVR, 및/또는 CDR 아미노산 서열을 포함하는 항-WTA 항체를 포함한다. 여전히 다른 예로서, 구현예는 본원의 표 3A에 나타낸 임의의 HCVR, LCVR, 및/또는 CDR 아미노산 서열에 대해 예컨대, 10개 이하, 8개 이하, 6개 이하, 4개 이하 등의 보존적 아미노산 치환을 지닌 HCVR, LCVR, 및/또는 CDR 아미노산 서열을 포함하는 항-단백질 A 항체를 포함한다.
용어 "에피토프"는 파라토프(paratope)로서 공지된 항체 분자의 가변 영역내에 특이적인 항원 결합 부위와 상호작용하는 항원 결정인자를 지칭한다. 단일 항원은 하나 이상의 에피토프를 가질 수 있다. 따라서, 상이한 항체는 항원 상의 상이한 부위에 결합할 수 있고 상이한 생물학적 효과를 가질 수 있다. 에피토프는 구조적 또는 선형일 수 있다. 구조적 에피토프는 선형 폴리펩타이드 쇄의 상이한 분절로부터 공간적으로 병치된 아미노산에 의해 생산된다. 선형 에피토프는 폴리펩타이드 쇄내 인접한 아미노산 잔기에 의해 생산된 것이다. 특정의 환경에서, 에피토프는 항원 상의 사카라이드, 포스포릴 그룹, 또는 설포닐 그룹의 모이어티를 포함할 수 있다.
핵산 또는 이의 단편을 지칭하는 경우, 용어 "실질적인 동일성" 또는 "실질적으로 동일한"은, 다른 아미노산(또는 이의 상보성 가닥)과 적절한 뉴클레오타이드 삽입 또는 결실로 최적으로 정렬된 경우, 임의의 잘 공지된 서열 동일성의 알고리즘, 예를 들면, 하기 논의된 바와 같은 FASTA, BLAST 또는 GAP으로 측정되는 것으로서 적어도 약 95%, 및 보다 바람직하게는 적어도 약 96%, 97%, 98% 또는 99%의 뉴클레오타이드 염기내에 뉴클레오타이드 서열 동일성이 존재함을 나타낸다. 특정의 예에서, 참고 핵산 분자에 대해 실질적인 동일성을 가진 핵산 분자는 참고 핵산 분자에 의해 암호화된 폴리펩타이드로와 동일하거나 실질적으로 유사함 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩타이드를 암호화한다.
폴리펩타이드에 적용된 것으로서, 용어 "실질적인 유사성" 또는 "실질적으로 유사한"은 2개의 펩타이드 서열이, 최적으로 정렬된 경우, 디폴트 갭(gap) 중량을 사용하는 프로그램 GAP 또는 BESTFIT에 의해 적어도 95% 서열 동일성, 심지어 바람직하게는 적어도 98% 또는 99% 서열 동일성을 공유함을 의미한다. 바람직하게는, 동일하지 않은 잔기 위치는 보존적 아미노산 치환으로 상이하다. "보존적 아미노산 치환"은 아미노산 잔기가 유사한 화학적 특성(예컨대, 전하 또는 소수성)을 지닌 측쇄(R 그룹)를 가진 다른 아미노산 잔기에 의해 치환된 것이다. 일반적으로 보존적 아미노산 치환은 단백질의 기능적 특성을 실질적으로 변화시키지 않을 것이다. 2개 이상의 아미노산 서열이 서로 보존적 치환으로 상이한 경우, 서열 동일성 퍼센트 또는 유사성 정도는 치환의 보존적 특성에 대해 교정하기 위해 상향으로 조정될 수 있다. 이러한 조정을 이루는 방법은 당해 분야의 기술자에게 잘 공지되어 있다. 예컨대, 문헌: Pearson (1994) Methods Mol. Biol. 24: 307-331를 참고한다. 유사한 화학적 특성을 지닌 측쇄를 갖는 아미노산 그룹의 예는 (1) 지방족 측쇄: 글리신, 알라닌, 발린, 루이신 및 이소루이신; (2) 지방족-하이드록실 측쇄: 세린 및 트레오닌; (3) 아미드-함유 측쇄: 아스파라긴 및 글루타민; (4) 방향족 측쇄: 페닐알라닌, 타이로신, 및 트립토판; (5) 염기성 측쇄: 라이신, 아르기닌, 및 히스티딘; (6) 산성 측쇄: 아스파르테이트 및 글루타메이트, 및 (7) 황-함유 측쇄는 시스테인 및 메티오닌이다. 바람직한 보존적 아미노산 치환 그룹은: 발린-루이신-이소루이신, 페닐알라닌-타이로신, 라이신-아르기닌, 알라닌-발린, 글루타메이트-아스파르테이트, 및 아스파라긴-글루타민이다. 대안적으로, 보존적 대체(replacement)는 문헌: Gonnet et al. (1992) Science 256: 1443-1445에 개시된 PAM250 로그-경향성 매트릭스(log-likelihood matrix)에서 양성 값을 갖는 임의의 변화이다. "중간의 보존적" 대체는 PAM250 로그-경향성 매트릭스내 비음성 값을 갖는 임의의 변화이다.
서열 동일성으로 또한 지칭된, 폴리펩타이드에 대한 서열 유사성은 전형적으로 서열 분석 소프트웨어를 사용하여 측정된다. 단백질 분석 소프트웨어는 다양한 치환, 결실 및 다른 변형, 예를 들면, 보존적 아미노산 치환의 척도를 사용하여 유사 서열을 일치시킨다. 예를 들면, GCG 소프트웨어는 밀접하게 관련된 폴리펩타이드, 예를 들면, 유기체의 상이한 종으로부터 또는 야생형 단백질과 이의 돌연변이체 사이의 동족 폴리펩타이드 사이에 서열 상동성 또는 서열 동일성을 측정하기 위한 디폴트 매개변수(default parameter)와 함께 사용될 수 있는 GAP 및 BESTFIT와 같은 프로그램을 포함한다. 예컨대, GCG Version 6.1을 참고한다. 폴리펩타이드 서열은 또한 디폴트 또는 추천된 프로그램인, GCG Version 6.1에서의 프로그램을 사용하는 FASTA를 사용하여 비교할 수 있다. FASTA(예컨대, FASTA2 및 FASTA3)는 질의(query) 서열과 조사 서열 사이에 가장 우수한 오버랩의 영역의 정렬 및 서열 동일성 퍼센트를 제공한다(Pearson (2000) 상기). 개시내용의 서열을 상이한 유기체로부터의 다수의 서열을 함유하는 데이타베이스와 비교하는 경우 다른 바람직한 알고리즘은 디폴트 매개변수를 사용하는 컴퓨터 프로그램 BLAST, 특히 BLASTP 또는 TBLASTN이다. 예컨대, Altschul et al. (1990) J. Mol. Biol. 215:403-410 및 Altschul et al. (1997) Nucleic Acids Res. 25:3389-402를 참고한다.
본원에 사용된 바와 같은, "O-PEGn"은 말단 산소 원자를 통해 부착된 1가 모이어티를 지칭하며, 여기서 n은 1 내지 100이다. 예를 들어, n이 1이면, O-PEGn은 -O-CH2CH2OH이고; 여기서 n이 2이면, O-PEGn은 -O-CH2CH2O-CH2CH2OH이고; n이 3이면, O-PEGn은 -O-CH2CH2O-CH2CH2O-CH2CH2OH이다.
본원에 사용된 바와 같은, "결합제"는 임의의 분자, 예컨대, 주어진 결합 파트너, 예컨대, 항원에 대해 특이성으로 결합할 수 있는 임의의 분자, 예컨대, 단백질 또는 항체를 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같은, "링커"는 본원에 기술된 하나 이상의 화합물, 예를 들면, 본원에 기술된 바와 같은, 페이로드 화합물 및 친수성 화합물에 결합제를 공유결합으로 연결시키는 2가, 3가, 또는 다가 모이어티를 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같은, "반응성 그룹," 또는 RG는 다른 화학 모이어티와 반응하여 공유 결합을 형성할 수 있는, 예컨대, 이의 시스테인 또는 라이신 잔기에서 항체와 반응할 수 있는 부위를 이의 구조내에 포함하는 모이어티를 지칭한다. 본 개시내용을 위한 예시적인 반응성 그룹은 말레이미드, 석신이미드, N-하이드록시 석신이미드(NHS), 말단 1급 아민, 할로아세틸 그룹, 이소티오시아네이트, 티올, 알코올, 케톤, 알데하이드, 산, 에스테르, 하이드로진, 및 아닐린을 포함하지만, 이에 한정되지 않는다. RG는 또한 다음 구조를 갖는 모이어티를 포함한다:
Figure pct00167
또는
Figure pct00168
,
여기서 X는 -O- 또는 -NH-이고 LG은 이탈 그룹, 예컨대, Br이다.
본원에 사용된 바와 같은, "아미드 합성 상태"는 예컨대, 카복실산, 활성화된 카복실산, 또는 아실 할라이드와 아민의 반응에 의해 아미드를 형성시키기에 적합한 반응 상태를 지칭한다. 일부 예에서, 아미드 합성 상태는 카복실산과 아민 사이에 아미드 결합을 형성시키기에 적합한 반응 상태를 지칭한다. 이러한 예 중 일부에서, 카복실산은 우선 활성화된 카복실산이 아민과 반응하여 아미드를 형성하기 전에 활성화된 카복실산으로 전환시킨다. 아미드를 형성시키기에 적합한 상태는 카복실산과 아민, 예를 들면, 그러나 이에 한정되지 않는, 디사이클로헥실카보디이미드(DCC), 디이소프로필카보디이미드(DIC), (벤조트리아졸-1-일옥시)트리스(디메틸아미노)포스포늄 헥사플루오로포스페이트(BOP), (벤조트리아졸-1-일옥시)트리피롤리디노포스포늄 헥사플루오로포스페이트(PyBOP), (7-아자벤조트리아졸-1-일옥시)트리피롤리디노포스포늄 헥사플루오로포스페이트(PyAOP), 브로모트리피롤리딘포스포늄 헥사플루오로포스페이트(PyBrOP), O-(벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트(HBTU), O-(벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 테트라플루오로보레이트(TBTU), 1-비스(디메틸아미노)메틸렌]-1H-1,2,3-트리아졸로[4,5-b]피리디늄 3-옥시드 헥사플루오로포스페이트(HATU), N-에톡시카보닐-2-에톡시-1,2-디하이드로퀴놀린(EEDQ), N-에틸-N'-(3-디메틸아미노프로필)카보딩미드(EDC), 2-클로로-1,3-디메틸이미다졸리디늄 헥사플루오로포스페이트(CIP), 2-클로로-4,6-디메톡시-1,3,5-트리아진(CDMT), (1-시아노-2-에톡시-2-옥소에틸리덴아미노옥시)디메틸아미노-모르폴리노-카르베늄 헥사플루오로포스페이트(COMU), 및 카보닐디이미다졸(CDI)을 포함한다.
일부 예에서, 카복실산은 활성화된 카복실릭 에스테르를 아민으로 처리하여 아미드 결합을 형성시키기 전에 활성화된 카복실릭 에스테르로 전환시킨다. 특정의 구현예에서, 카복실산은 시약과 반응시킨다. 시약은 카복실산을 탈양성자화한 다음 양성자화된 시약 위로 탈양성자화된 카복실산에 의한 친핵성 공격의 결과로서 탈양성자화된 카복실산과 생성물 복합체를 형성함으로써 카복실산을 활성화시킨다. 특정의 카복실산에 대한 활성화된 카복실릭 에스테르는 후속적으로 이것이 활성화되기 전에 카복실산보다 아민에 의한 친핵성 공격에 대헤 보다 민감성이 된다. 이는 아미드 결합 형성을 야기한다. 따라서, 카복실산은 활성화된 것으로 기술된다. 예시적인 시약은 DCC 및 DIC를 포함한다.
본원에 사용된 바와 같은, "타우린"은 시약
Figure pct00169
, 또는 그룹
Figure pct00170
를 지칭하며 여기서
Figure pct00171
는 이를 통해 타우린이 화학식내 인접한 그룹에 결합된 원자를 나타낸다.
본 개시내용의 화합물
선행 목적 및 기타에 따라서, 본 개시내용은 이러한 치료가 필요한 대상체에서 세균 성장을 억제하고/하거나 세균 감염을 치료하기 위한, 리파마이신 유사체 화합물, 이의 전구체 및 중간체, 약제학적 조성물, 및 방법을 제공한다.
일 양태에서, 본 개시내용은 화학식 (A)의 구조를 갖는 리파마이신 유사체 화합물, 또는 이의 전구체 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 제공한다:
Figure pct00172
(A)
상기 화학식 (A)에서:
X는 -O- 및 -NR*-로부터 선택되고;
Za 및 Zb는 수소, -Cl, -Br, -OR1 및 -RN으로부터 독립적으로 선택되고; 단, Za 또는 Zb 중 적어도 하나는 수소가 아니고; 여기서:
R1은 수소, RN, 지방족 C1-C20 탄화수소, 방향족 C1-C20 탄화수소, 헤테로방향족 C1-C20 탄화수소, 사이클릭 지방족 C1-C20 탄화수소, 헤테로사이클릭 C1-C20 탄화수소, 및 이의 조합으로부터 선택되고, 이들 각각은 할로겐, O, N, 및 S로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함하고, 여기서 R1은 -F, -Cl, -Br, -I, -OH, -OR*, -NO, -NO2, -NO3, -O-NO, -N3, -NH2, -NHR*, -N(R*)2, -N(R*)3 +, -N(R*)-OH, -O-N(R*)2, -N(R*)-O-R*, -CN, -NC, -(C=O)-R*, -CHO, -CO2H, -CO2R*, -(C=O)-S-R*, -O-(C=O)-H, -O-(C=O)-R*, -S-(C=O)-R*,-(C=O)-NH2, -(C=O)-N(R*)2, -(C=O)-NHNH2, -O-(C=O)-NHNH2, -(C=S)-NH2, -(C=S)-N(R*)2, -N(R*)-CHO, -N(R*)-(C=O)-R*, -SCN, -NCS, -NSO, -SSR*, -SO2R*, -SO2-N(R*)2, -S(=O)-OR*, -S(=O)-R*, -Si(R*)3, -CF3, -O-CF3 및 이의 조합 중 하나 이상으로 임의 치환되고, 단 R1은 n-부틸 그룹이 아니고, X가 -O-이고 Ra가 수소인 경우, R1은 수소가 아니고;
RN은:
Figure pct00173
로부터 선택되고; 여기서
Figure pct00174
기호는 부착 점을 나타내고; R', R" 및 R"'는 수소, C1-C6 지방족 탄화수소, 및 플루오레닐메틸옥시카보닐(FMOC) 및 3급-부틸옥시카보닐(BOC)로부터 선택된 보호 그룹으로부터 선택되거나, 여기서 R' 및 R"는 함께 지방족 모노사이클릭, 지방족 비사이클릭, 또는 지방족 폴리사이클릭 구조를 형성하고;
R2, R3, 및 R4는 수소, 지방족 C1-C20 탄화수소, 및 -(C=O)-R*로부터 독립적으로 선택되고, 이들 각각은 할로겐, O, N, 및 S로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함하고;
Ra는 수소, -F, -Cl, -Br, -I, -OH, -OR*, -NH2, -NHR*, -N(R*)2, -N(R*) 3 +, -(C=O)-R*, -CHO, -CO2H, -CO2R*, -SR*, -SO2R*, 및 지방족 C1-C20 탄화수소로부터 선택되고, 이는 할로겐, O, N, 및 S로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함하고, 여기서 Ra는 -F, -Cl, -Br, -I, -OH, -OR* 중 하나 이상으로 임의 치환되고;
Rb는 수소, -F, -Cl, -Br, -I, -OH, -OR*, -(C=O)-R*, -CHO, -CO2H, -CO2R* 및 지방족 C1-C20 탄화수소로부터 선택되고, 이는 할로겐, O, 및 S로부터 선택된 0 내지 3개의 헤테로원자를 추가로 포함하고, 여기서 Rb는 -F, -Cl, -Br, -I, -OH, -OR* 중 하나 이상으로 임의 치환되고,
R*는 각각의 존재시 수소, 지방족 C1-C20 탄화수소, 방향족 C1-C20 탄화수소, 헤테로방향족 C1-C20 탄화수소, 사이클릭 지방족 C1-C20 탄화수소, 헤테로사이클릭 C1-C20 탄화수소, 및 이의 조합으로부터 독립적으로 선택되고, 이는 할로겐, O, N, 및 S 및 이의 조합으로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함한다.
일 양태에서, 본 개시내용은 화학식 (I)을 갖는 리파마이신 유사체 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 제공한다:
Figure pct00175
여기서:
X는 -O- 및 -NR*-로부터 선택되고;
R1은 RN, 수소, 지방족 C1-C20 탄화수소, 방향족 C1-C20 탄화수소, 헤테로방향족 C1-C20 탄화수소, 사이클릭 지방족 C1-C20 탄화수소, 헤테로사이클릭 C1-C20 탄화수소, 및 이의 조합으로부터 선택되고, 이들 각각은 할로겐, O, N, 및 S로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함하고, 여기서 R1은 -F, -Cl, -Br, -I, -OH, -OR*, -NO, -NO2, -NO3, -O-NO, -N3, -NH2, -NHR*, -N(R*)2, -N(R*)3 +, -N(R*)-OH, -O-N(R*)2, -N(R*)-O-R*, -CN, -NC, -(C=O)-R*, -CHO, -CO2H, -CO2R*, -(C=O)-S-R*, -O-(C=O)-H, -O-(C=O)-R*, -S-(C=O)-R*, -(C=O)-NH2, -(C=O)-N(R*)2, -(C=O)-NHNH2, -O-(C=O)-NHNH2, -(C=S)-NH2, -(C=S)-N(R*)2, -N(R*)-CHO, -N(R*)-(C=O)-R*, -SCN, -NCS, -NSO, -SSR*, -SO2R*, -SO2-N(R*)2, -S(=O)-OR*, -S(=O)-R*, -Si(R*)3, -CF3, -O-CF3 및 이의 조합 중 하나 이상으로 임의 치환되고, 단 R1은 n-부틸 그룹이 아니고, X가 -O-이고 Ra가 수소이면, R1은 수소가 아니고;
RN은:
Figure pct00176
로 부터 선택되고; 여기서
Figure pct00177
기호는 부착 점을 나타내고; R', R" 및 R"'는 수소, C1-C6 지방족 탄화수소, 및 FMOC 및 BOC로부터 선택된 보호 그룹으로부터 선택되거나, 여기서 R' 및 R"는 함께지방족 모노사이클릭, 지방족 비사이클릭, 또는 지방족 폴리사이클릭 구조를 형성하고;
R2, R3, 및 R4는 수소, 지방족 C1-C20 탄화수소, 또는 -(C=O)-R*로부터 독립적으로 선택되고 이들 각각은 할로겐, O, N, 및 S로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함하고;
Ra는 수소, F, -Cl, -Br, -I, -OH, -OR*, -NH2, -NHR*, -N(R*)2, -N(R*)3 +, -(C=O)-R*, -CHO, -CO2H, -CO2R*, -SR*, -SO2R*, 및 지방족 C1-C20 탄화수소로부터 선택되고, 이는 할로겐, O, N, 및 S로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함하고, 여기서 Ra는 -F, -Cl, -Br, -I, -OH, -OR* 중 하나 이상으로 임의 치환되고;
Rb는 수소, -F, -Cl, -Br, -I, -OH, -OR*, -(C=O)-R*, -CHO, -CO2H, -CO2R* 및 지방족 C1-C20 탄화수소로부터 선택되고, 이는 할로겐, O, 및 S로부터 선택된 0 내지 3개의 헤테로원자를 추가로 포함하고, 여기서 Rb는 -F, -Cl, -Br, -I, -OH, -OR* 중 하나 이상으로 임의 치환되고; R*는 각각의 존재시 수소, 지방족 C1-C20 탄화수소, 방향족 C1-C20 탄화수소, 헤테로방향족 C1-C20 탄화수소, 사이클릭 지방족 C1-C20 탄화수소, 헤테로사이클릭 C1-C20 탄화수소, 및 이의 조합으로부터 독립적으로 선택되고, 이는 할로겐, O, N, 및 S 및 이의 조합으로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함한다.
일 양태에서, 본 개시내용은 화학식 (I')의 구조를 갖는 리파마이신 유사체 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 제공한다:
Figure pct00178
여기서:
X는 -O- 및 -NR*-로부터 선택되고;
R1은 RN, 수소, 지방족 C1-C20 탄화수소, 방향족 C1-C20 탄화수소, 헤테로방향족 C1-C20 탄화수소, 사이클릭 지방족 C1-C20 탄화수소, 헤테로사이클릭 C1-C20 탄화수소, 및 이의 조합으로부터 선택되고, 이들 각각은 할로겐, O, N, 및 S로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함하고, 여기서 R1은 -F, -Cl, -Br, -I, -OH, -OR*, -NO, -NO2, -NO3, -O-NO, -N3, -NH2, -NHR*, -N(R*)2, -N(R*)3 +, -N(R*)-OH, -O-N(R*)2, -N(R*)-O-R*, -CN, -NC, -(C=O)-R*, -CHO, -CO2H, -CO2R*, -(C=O)-S-R*, -O-(C=O)-H, -O-(C=O)-R*, -S-(C=O)-R*, -(C=O)-NH2, -(C=O)-N(R*)2, -(C=O)-NHNH2, -O-(C=O)-NHNH2, -(C=S)-NH2, -(C=S)-N(R*)2, -N(R*)-CHO, -N(R*)-(C=O)-R*, -SCN, -NCS, -NSO, -SSR*, -SO2R*, -SO2-N(R*)2, -S(=O)-OR*, -S(=O)-R*, -Si(R*)3, -CF3, -O-CF3 및 이의 조합 중 하나 이상으로 임의 치환되고, 단, R1은 n-부틸 그룹이 아니고, X가 -O-이고 Ra가 수소이면, R1은 수소가 아니고;
RN은:
Figure pct00179
로부터 선택되고; 여기서
Figure pct00180
기호는 부착 점을 나타내고; R', R" 및 R"'는 수소, C1-C6 지방족 탄화수소, FMOC 및 BOC로부터 선택된 보호 그룹으로부터 선택되거나, 여기서 R' 및 R"는 함께 지방족 모노사이클릭, 지방족 비사이클릭, 또는 지방족 폴리사이클릭 구조를 형성하고;
R2, R3, 및 R4는 수소, 지방족 C1-C20 탄화수소, 또는 -(C=O)-R*로부터 독립적으로 선택되고, 이들 각각은 할로겐, O, N, 및 S로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함하고;
Ra는 수소, F, -Cl, -Br, -I, -OH, -OR*, -NH2, -NHR*, -N(R*)2, -N(R*)3 +, -(C=O)-R*, -CHO, -CO2H, -CO2R*, -SR*, -SO2R*, 및 지방족 C1-C20 탄화수소로부터 선택되고, 이는 할로겐, O, N, 및 S로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함하고, 여기서 Ra는 -F, -Cl, -Br, -I, -OH, -OR*중 하나 이상으로 임의 치환되고;
Rb는 수소, -F, -Cl, -Br, -I, -OH, -OR*, -(C=O)-R*, -CHO, -CO2H, -CO2R* 및 지방족 C1-C20 탄화수소로부터 선택되고, 이는 할로겐, O, 및 S로부터 선택된 0 내지 3개의 헤테로원자를 추가로 포함하고, 여기서 Rb는 -F, -Cl, -Br, -I, -OH, -OR*중 하나 이상으로 임의 치환되고;
R*는 각각의 존재시 수소, 지방족 C1-C20 탄화수소, 방향족 C1-C20 탄화수소, 헤테로방향족 C1-C20 탄화수소, 사이클릭 지방족 C1-C20 탄화수소, 헤테로사이클릭 C1-C20 탄화수소, 및 이의 조합으로부터 독립적으로 선택되고, 이는 할로겐, O, N, 및 S 및 이의 조합으로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함한다.
화학식 (A), (I), 또는 (I')의 화합물의 구현예에서, X는 -O-이고, R1은 지방족 C1-C3 탄화수소이고, R2는 메틸 그룹이고, R3은 Ac (-(C=O)-CH3)이고, R4는 수소이고, Ra는 수소이다.
화학식 (A), (I), 또는 (I')의 화합물의 구현예에서, X는 -O-이고, R1은 벤질 그룹이고, R2는 메틸 그룹이고, R3은 Ac (-(C=O)-CH3)이고, R4는 수소이고; Ra는 수소이고 Rb는 수소이다.
화학식 (A), (I), 또는 (I')의 화합물의 구현예에서, X는 -O-이고, R1은 O 및 N으로부터 선택된 1 내지 8개의 헤테로원자를 포함하는 지방족 C1-C8 탄화수소이고, R2는 메틸 그룹이고, R3은 Ac(-(C=O)-CH3)이고, R4는 수소이고; Ra는 수소이고 Rb는 수소이다.
화학식 (A), (I), 또는 (I')의 화합물의 구현예에서, X는 -O-이고; R1은 -NH2, -NHR*, -N(R*)2 중 하나 이상으로 치환된 지방족 C1-C8 탄화수소이고; R*는 수소 또는 지방족 C1-C3 탄화수소이고; R2는 메틸 그룹이고; R3은 Ac(-(C=O)-CH3)이고; R4는 수소이고; Ra는 수소이고 Rb는 수소이다.
화학식 (A), (I), 또는 (I')의 화합물의 구현예에서, X는 -NCH3-이고, R1은 -OH이고, R2는 메틸 그룹이고, R3은 Ac(-(C=O)-CH3)이고, R4는 수소이고, Ra는 수소이고 Rb는 수소이다.
일 구현예에서, 본 개시내용의 리파마이신 유사체 화합물은 화학식 (II)의 구조 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 갖는다:
Figure pct00181
여기서:
X는 -O- 및 -NR*-로부터 선택되고;
Ra는 수소, -Cl, 및 -OR*로부터 선택되고;
R1은 RN, 수소, 지방족 C1-C20 탄화수소, 방향족 C1-C20 탄화수소, 헤테로방향족 C1-C20 탄화수소, 사이클릭 지방족 C1-C20 탄화수소, 헤테로사이클릭 C1-C20 탄화수소, 및 이의 조합으로부터 선택되고, 이들 각각은 할로겐, O, N, 및 S로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함하고, 여기서 R1은 -F, -Cl, -Br, -I, -OH, -OR*, -NO, -NO2, -NO3, -O-NO, -N3, -NH2, -NHR*, -N(R*)2, -N(R*)3 +, -N(R*)-OH, -O-N(R*)2, -N(R*)-O-R*, -CN, -NC, -(C=O)-R*, -CHO, -CO2H, -CO2R*, -(C=O)-S-R*, -O-(C=O)-H, -O-(C=O)-R*, -S-(C=O)-R*, -(C=O)-NH2, -(C=O)-N(R*)2, -(C=O)-NHNH2, -O-(C=O)-NHNH2, -(C=S)-NH2, -(C=S)-N(R*)2, -N(R*)-CHO, -N(R*)-(C=O)-R*, -SCN, -NCS, -NSO, -SSR*, -SO2R*, -SO2-N(R*)2, -S(=O)-OR*, -S(=O)-R*, -Si(R*)3, -CF3, -O-CF3 및 이의 조합 중 하나 이상으로 임의 치환되고, 단, R1은 n-부틸 그룹이 아니고;
RN은:
Figure pct00182
로 부터 선택되고; 여기서
Figure pct00183
기호는 부착 점을 나타내고; R', R" 및 R"'은 수소, C1-C6 지방족 탄화수소, 및 FMOC 및 BOC로부터 선택된 보호 그룹으로부터 선택되거나, 여기서 R' 및 R"는 함께 지방족 모노사이클릭, 지방족 비사이클릭, 또는 지방족 폴리사이클릭 구조를 형성하고;
R*는 각각의 존재시 수소, 지방족 C1-C20 탄화수소, 방향족 C1-C20 탄화수소, 헤테로방향족 C1-C20 탄화수소, 사이클릭 지방족 C1-C20 탄화수소, 헤테로사이클릭 C1-C20 탄화수소, 및 이의 조합으로부터 독립적으로 선택되고, 이는 할로겐, O, N, 및 S 및 이의 조합으로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함한다.
일 구현예에서, 본 개시내용의 리파마이신 유사체 화합물은 화학식 (II') 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염의 구조를 갖는다:
Figure pct00184
여기서:
X는 -O- 및 -NR*-로부터 선택되고;
Ra는 수소 및 -OR*로부터 선택되고;
R1은 RN, 수소, 지방족 C1-C20 탄화수소, 방향족 C1-C20 탄화수소, 헤테로방향족 C1-C20 탄화수소, 사이클릭 지방족 C1-C20 탄화수소, 헤테로사이클릭 C1-C20 탄화수소, 및 이의 조합으로부터 선택되고, 이들 각각은 할로겐, O, N, 및 S로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함하고, 여기서 R1은 -F, -Cl, -Br, -I, -OH, -OR*, -NO, -NO2, -NO3, -O-NO, -N3, -NH2, -NHR*, -N(R*)2, -N(R*)3 +, -N(R*)-OH, -O-N(R*)2, -N(R*)-O-R*, -CN, -NC, -(C=O)-R*, -CHO, -CO2H, -CO2R*, -(C=O)-S-R*, -O-(C=O)-H, -O-(C=O)-R*, -S-(C=O)-R*, -(C=O)-NH2, -(C=O)-N(R*)2, -(C=O)-NHNH2, -O-(C=O)-NHNH2, -(C=S)-NH2, -(C=S)-N(R*)2, -N(R*)-CHO, -N(R*)-(C=O)-R*, -SCN, -NCS, -NSO, -SSR*, -SO2R*, -SO2-N(R*)2, -S(=O)-OR*, -S(=O)-R*, -Si(R*)3, -CF3, -O-CF3 및 이의 조합 중 하나 이상으로 임의 치환되고, 단, R1은 n-부틸 그룹이 아니고;
RN은:
Figure pct00185
로부터 선택되고; 여기서
Figure pct00186
기호는 부착 점을 나타내고; R', R" 및 R"'은 수소, C1-C6 지방족 탄화수소, FMOC 및 BOC로부터 선택된 보호 그룹으로부터 선택되거나, 여기서 R' 및 R"는 함께 지방족 모노사이클릭, 지방족 비사이클릭, 또는 지방족 폴리사이클릭 구조를 형성하고;
R*는 각각의 존재시 수소, 지방족 C1-C20 탄화수소, 방향족 C1-C20 탄화수소, 헤테로방향족 C1-C20 탄화수소, 사이클릭 지방족 C1-C20 탄화수소, 헤테로사이클릭 C1-C20 탄화수소, 및 이의 조합으로부터 독립적으로 선택되고, 이는 할로겐, O, N, 및 S 및 이의 조합으로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함한다.
일 구현예에서, 본 개시내용의 리파마이신 유사체 화합물은 화학식 (III)의 구조 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 갖는다:
Figure pct00187
여기서:
Ra는 수소 및 -OR*로부터 선택되고;
R5는 RN, 지방족 C1-C20 탄화수소, 방향족 C1-C20 탄화수소, 헤테로방향족 C1-C20 탄화수소, 사이클릭 지방족 C1-C20 탄화수소, 헤테로사이클릭 C1-C20 탄화수소, 및 이의 조합으로부터 선택되고, 이들 각각은 할로겐, O, N, 및 S로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함하고, 여기서 R5는 -F, -Cl, -Br, -I, -OH, -OR*, -NH2, -NHR*, -N(R*)2, -N(R*)3 +, -N(R*)-(C=O)-R*, -(C=O)-R*, -CHO, -CO2H, -CO2R* 및 이의 조합 중 하나 이상으로 임의 치환되고, 단, R5는 n-부틸 그룹이 아니고;
R*는 각각의 존재시 수소, 지방족 C1-C20 탄화수소, 방향족 C1-C20 탄화수소, 헤테로방향족 C1-C20 탄화수소, 사이클릭 지방족 C1-C20 탄화수소, 헤테로사이클릭 C1-C20 탄화수소, 및 이의 조합으로부터 독립적으로 선택되고, 이는 할로겐, O, N, 및 S 및 이의 조합으로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함하고;
RN은:
Figure pct00188
Figure pct00189
로부터 선택되고; 여기서
Figure pct00190
기호는 부착 점을 나타내고; R', R" 및 R"'는 수소, C1-C6 지방족 탄화수소, 및 FMOC 및 BOC로부터 선택된 보호 그룹으로부터 선택되거나, 여기서 R' 및 R"는 함께 지방족 모노사이클릭, 지방족 비사이클릭, 또는 지방족 폴리사이클릭 구조를 형성한다.
일 구현예에서, 본 개시내용의 리파마이신 유사체 화합물은 화학식 (III')의 구조 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 갖는다:
Figure pct00191
여기서:
Ra는 수소 및 -OR*로부터 선택되고;
R5는 RN, 지방족 C1-C20 탄화수소, 방향족 C1-C20 탄화수소, 헤테로방향족 C1-C20 탄화수소, 사이클릭 지방족 C1-C20 탄화수소, 헤테로사이클릭 C1-C20 탄화수소, 및 이의 조합으로부터 선택되고, 이들 각각은 할로겐, O, N, 및 S로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함하고, 여기서 R5는 -F, -Cl, -Br, -I, -OH, -OR*, -NH2, -NHR*, -N(R*)2, -N(R*)3 +, -N(R*)-(C=O)-R*, -(C=O)-R*, -CHO, -CO2H, -CO2R* 및 이의 조합 중 하나 이상으로 임의 치환되고, 단, R5는 n-부틸 그룹이 아니고;
R*는 각각의 존재시 수소, 지방족 C1-C20 탄화수소, 방향족 C1-C20 탄화수소, 헤테로방향족 C1-C20 탄화수소, 사이클릭 지방족 C1-C20 탄화수소, 헤테로사이클릭 C1-C20 탄화수소, 및 이의 조합으로부터 독립적으로 선택되고, 이는 할로겐, O, N, 및 S 및 이의 조합으로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함하고;
RN은:
Figure pct00192
로부터 선택되고; 여기서
Figure pct00193
기호는 부착 점을 나타내고; R', R" 및 R"'는 수소, C1-C6 지방족 탄화수소, 및 FMOC 및 BOC로부터 선택된 보호 그룹으로부터 선택되거나, 여기서 R' 및 R"는 함께 지방족 모노사이클릭, 지방족 비사이클릭, 또는 지방족 폴리사이클릭 구조를 형성한다.
일 구현예에서, 본 개시내용의 리파마이신 유사체 화합물은 화학식 (IV)의 구조 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 갖는다:
Figure pct00194
여기서:
Ra는 수소 및 -OR*로부터 선택되고;
R5는 RN, 수소, 지방족 C1-C20 탄화수소, 방향족 C1-C20 탄화수소, 헤테로방향족 C1-C20 탄화수소, 사이클릭 지방족 C1-C20 탄화수소, 헤테로사이클릭 C1-C20 탄화수소, 및 이의 조합으로부터 선택되고, 이들 각각은 할로겐, O, N, 및 S로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함하고, 여기서 R5는 -F, -Cl, -Br, -I, -OH, -OR*, -NH2, -NHR*, -N(R*)2, -N(R*)3 +, -N(R*)-(C=O)-R*, -(C=O)-R*, -CHO, -CO2H, -CO2R* 및 이의 조합 중 하나 이상으로 임의 치환되고;
RN은:
Figure pct00195
Figure pct00196
로부터 선택되고; 여기서
Figure pct00197
기호는 부착 점을 나타내고; R', R" 및 R"'은 수소, C1-C6 지방족 탄화수소, 및 FMOC 및 BOC로부터 선택된 보호 그룹으로부터 선택되거나, 여기서 R' 및 R"는 함께 지방족 모노사이클릭, 지방족 비사이클릭, 또는 지방족 폴리사이클릭 구조를 형성하고;
R*는 각각의 존재시 수소, 지방족 C1-C20 탄화수소, 방향족 C1-C20 탄화수소, 헤테로방향족 C1-C20 탄화수소, 사이클릭 지방족 C1-C20 탄화수소, 헤테로사이클릭 C1-C20 탄화수소, 및 이의 조합으로부터 독립적으로 선택되고, 이는 할로겐, O, N, 및 S 및 이의 조합으로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함한다.
일 구현예에서, 본 개시내용의 리파마이신 유사체 화합물은 화학식 (IV')의 구조 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 갖는다:
Figure pct00198
여기서:
Ra는 수소 및 -OR*로부터 선택되고;
R5는 RN, 수소, 지방족 C1-C20 탄화수소, 방향족 C1-C20 탄화수소, 헤테로방향족 C1-C20 탄화수소, 사이클릭 지방족 C1-C20 탄화수소, 헤테로사이클릭 C1-C20 탄화수소, 및 이의 조합으로부터 선택되고, 이들 각각은 할로겐, O, N, 및 S로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함하고, 여기서 R5는 -F, -Cl, -Br, -I, -OH, -OR*, -NH2, -NHR*, -N(R*)2, -N(R*)3 +, -N(R*)-(C=O)-R*, -(C=O)-R*, -CHO, -CO2H, -CO2R* 및 이의 조합중 하나 이상으로 임의 치환되고;
RN은:
Figure pct00199
로부터 선택되고; 여기서
Figure pct00200
기호는 부착 점을 나타내고; R', R" 및 R"'는 수소, C1-C6 지방족 탄화수소, 및 FMOC 및 BOC로부터 선택된 보호 그룹으로부터 선택되거나, 여기서 R' 및 R"는 함께 지방족 모노사이클릭, 지방족 비사이클릭, 또는 지방족 폴리사이클릭 구조를 형성하고;
R*는 각각의 존재시 수소, 지방족 C1-C20 탄화수소, 방향족 C1-C20 탄화수소, 헤테로방향족 C1-C20 탄화수소, 사이클릭 지방족 C1-C20 탄화수소, 헤테로사이클릭 C1-C20 탄화수소, 및 이의 조합으로부터 독립적으로 선택되고, 이는 할로겐, O, N, 및 S 및 이의 조합으로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함한다.
일 구현예에서, 본 개시내용의 리파마이신 유사체 화합물은 화학식 (V)의 구조 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 갖는다:
Figure pct00201
여기서:
X는 -O- 및 -NR*-로부터 선택되고;
Ra는 수소 및 -OR*로부터 선택되고;
R6은 RN, 지방족 C1-C20 탄화수소, 방향족 C1-C20 탄화수소, 헤테로방향족 C1-C20 탄화수소, 사이클릭 지방족 C1-C20 탄화수소, 헤테로사이클릭 C1-C20 탄화수소, 및 이의 조합으로부터 선택되고, 이들 각각은 할로겐, O, N, 및 S로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함하고, 여기서 R6은 -OH, -OR*, -NH2, -NHR*, -N(R*)2, -N(R*)3 +, -N(R*)-(C=O)-R*, -(C=O)-R*, -CHO, -CO2H, -CO2R* 및 이의 조합으중 하나 이상으로 임의 치환되고, 단, R6은 n-부틸 그룹이 아니고;
RN은:
Figure pct00202
Figure pct00203
로부터 선택되고; 여기서
Figure pct00204
기호는 부착 점을 나타내고; R', R" 및 R"'는 수소, C1-C6 지방족 탄화수소, 및 FMOC 및 BOC로부터 선택된 보호 그룹으로부터 선택되거나, 여기서 R' 및 R"는 함께 지방족 모노사이클릭, 지방족 비사이클릭, 또는 지방족 폴리사이클릭 구조를 형성하고;
R*는 각각의 존재시 수소, 지방족 C1-C20 탄화수소, 방향족 C1-C20 탄화수소, 헤테로방향족 C1-C20 탄화수소, 사이클릭 지방족 C1-C20 탄화수소, 헤테로사이클릭 C1-C20 탄화수소, 및 이의 조합으로부터 독립적으로 선택되고, 이는 할로겐, O, N, 및 S 및 이의 조합으로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함한다.
일 구현예에서, 본 개시내용의 리파마이신 유사체 화합물은 화학식 (V')의 구조 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 갖는다:
Figure pct00205
여기서:
X는 -O- 및 -NR*-로부터 선택되고;
Ra는 수소 및 -OR*로부터 선택되고;
R6은 RN, 지방족 C1-C20 탄화수소, 방향족 C1-C20 탄화수소, 헤테로방향족 C1-C20 탄화수소, 사이클릭 지방족 C1-C20 탄화수소, 헤테로사이클릭 C1-C20 탄화수소로부터 선택되고, 이들 각각은 할로겐, O, N, 및 S로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함하고, 여기서 R6은 -OH, -OR*, -NH2, -NHR*, -N(R*)2, -N(R*)3 +, -N(R*)-(C=O)-R*, -(C=O)-R*, -CHO, -CO2H, -CO2R* 및 이의 조합 중 하나 이상으로 임의 치환되고, 단, R6은 n-부틸 그룹이 아니고;
RN은:
Figure pct00206
로부터 선택되고; 여기서
Figure pct00207
기호는 부착 점을 나타내고; R', R" 및 R"'은 수소, C1-C6 지방족 탄화수소, 및 FMOC 및 BOC로부터 선택된 보호 그룹으로부터 선택되거나, 여기서 R' 및 R"는 함께 지방족 모노사이클릭, 지방족 비사이클릭, 또는 지방족 폴리사이클릭 구조를 형성하고;
R*는 각각의 존재시 수소, 지방족 C1-C20 탄화수소, 방향족 C1-C20 탄화수소, 헤테로방향족 C1-C20 탄화수소, 사이클릭 지방족 C1-C20 탄화수소, 헤테로사이클릭 C1-C20 탄화수소, 및 이의 조합으로부터 독립적으로 선택되고, 이는 할로겐, O, N, 및 S 및 이의 조합으로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함한다.
다른 양태에서, 본 개시내용은 화학식 (B)를 갖는 리파마이신 유사체 화합물, 이의 중간체 또는 전구체, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 제공한다:
Figure pct00208
여기서:
X는 -O- 및 -NR*-로부터 선택되고;
R1은 수소, RN, 지방족 C1-C20 탄화수소, 방향족 C1-C20 탄화수소, 헤테로방향족 C1-C20 탄화수소, 사이클릭 지방족 C1-C20 탄화수소, 헤테로사이클릭 C1-C20 탄화수소, 및 이의 조합으로부터 선택되고, 이들 각각은 할로겐, O, N, 및 S로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함하고, 여기서 R1은 -F, -Cl, -Br, -I, -OH, -OR*, -NO, -NO2, -NO3, -O-NO, -N3, -NH2, -NHR*, -N(R*)2, -N(R*)3 +, -N(R*)-OH, -O-N(R*)2, -N(R*)-O-R*, -CN, -NC, -(C=O)-R*, -CHO, -CO2H, -CO2R*, -(C=O)-S-R*, -O-(C=O)-H, -O-(C=O)-R*, -S-(C=O)-R*,-(C=O)-NH2, -(C=O)-N(R*)2, -(C=O)-NHNH2, -O-(C=O)-NHNH2, -(C=S)-NH2, -(C=S)-N(R*)2, -N(R*)-CHO, -N(R*)-(C=O)-R*, -SCN, -NCS, -NSO, -SSR*, -SO2R*, -SO2-N(R*)2, -S(=O)-OR*, -S(=O)-R*, -Si(R*)3, -CF3, -O-CF3 및 이의 조합 중 하나 이상으로 임의 치환되고, 단, R1은 n-부틸 그룹이 아니고, X가 -O-이고 Ra가 수소이면, R1은 수소가 아니고;
RN은:
Figure pct00209
Figure pct00210
로부터 선택되고; 여기서
Figure pct00211
기호는 부착 점을 나타내고; R', R" 및 R"'은 수소, C1-C6 지방족 탄화수소, 및 플루오레닐메틸옥시카보닐(FMOC) 및 3급-부틸옥시카보닐(BOC)로부터 선택된 보호 그룹으로부터 선택되거나, 여기서 R' 및 R"는 함께 지방족 모노사이클릭, 지방족 비사이클릭, 또는 지방족 폴리사이클릭 구조를 형성하고;
R2, R3, 및 R4는 수소, 지방족 C1-C20 탄화수소, 및 -(C=O)-R*로부터 독립적으로 선택되고, 이들 각각은 할로겐, O, N, 및 S로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함하고;
Ra는 수소, -F, -Cl, -Br, -I, -OH, -OR*, -NH2, -NHR*, -N(R*)2, -N(R*)3 +, -(C=O)-R*, -CHO, -CO2H, -CO2R*, -SR*, -SO2R*, 및 지방족 C1-C20 탄화수소로부터 선택되고, 이는 할로겐, O, N, 및 S로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함하고, 여기서 Ra는 -F, -Cl, -Br, -I, -OH, -OR* 중 하나 이상으로 임의 치환되고;
Rb는 수소, -F, -Cl, -Br, -I, -OH, -OR*, -(C=O)-R*, -CHO, -CO2H, -CO2R* 및 지방족 C1-C20 탄화수소로부터 선택되고, 이는 할로겐, O, 및 S로부터 선택된 0 내지 3개의 헤테로원자를 추가로 포함하고, 여기서 Rb는 -F, -Cl, -Br, -I, -OH, -OR* 중 하나 이상으로 임의 치환되고,
R*는 각각의 존재시 수소, 지방족 C1-C20 탄화수소, 방향족 C1-C20 탄화수소, 헤테로방향족 C1-C20 탄화수소, 사이클릭 지방족 C1-C20 탄화수소, 헤테로사이클릭 C1-C20 탄화수소, 및 이의 조합으로부터 독립적으로 선택되고, 이는 할로겐, O, N, 및 S 및 이의 조합으로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함한다.
다른 양태에서, 본 개시내용은 화학식 (B-1)의 구조를 갖는 리파마이신 유사체 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 제공한다:
Figure pct00212
여기서:
X는 -O- 및 -NR*-로부터 선택되고;
R1은 RN, 수소, 지방족 C1-C20 탄화수소, 방향족 C1-C20 탄화수소, 헤테로방향족 C1-C20 탄화수소, 사이클릭 지방족 CC1-C20 탄화수소, 헤테로사이클릭 C1-C20 탄화수소, 및 이의 조합으로부터 선택되고, 이들 각각은 할로겐, O, N, 및 S로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함하고, 여기서 R1은 -F, -Cl, -Br, -I, -OH, -OR*, -NO, -NO2, -NO3, -O-NO, -N3, -NH2, -NHR*, -N(R*)2, -N(R*)3 +, -N(R*)-OH, -O-N(R*)2, -N(R*)-O-R*, -CN, -NC, -(C=O)-R*, -CHO, -CO2H, -CO2R*, -(C=O)-S-R*, -O-(C=O)-H, -O-(C=O)-R*, -S-(C=O)-R*, -(C=O)-NH2, -(C=O)-N(R*)2, -(C=O)-NHNH2, -O-(C=O)-NHNH2, -(C=S)-NH2, -(C=S)-N(R*)2, -N(R*)-CHO, -N(R*)-(C=O)-R*, -SCN, -NCS, -NSO, -SSR*, -SO2R*, -SO2-N(R*)2, -S(=O)-OR*, -S(=O)-R*, -Si(R*)3, -CF3, -O-CF3 및 이의 조합 중 하나 이상으로 임의 치환되고, 단, R1은 n-부틸 그룹이 아니고;
RN은:
Figure pct00213
Figure pct00214
로부터 선택되고; 여기서
Figure pct00215
기호는 부착 점을 나타내고; R', R" 및 R"'은 수소, C1-C6 지방족 탄화수소, 및 FMOC 및 BOC로부터 선택된 보호 그룹으로부터 선택되거나, 여기서 R' 및 R"는 함께 지방족 모노사이클릭, 지방족 비사이클릭, 또는 지방족 폴리사이클릭 구조를 형성하고;
R*은 각각의 존재시 수소, 지방족 C1-C20 탄화수소, 방향족 C1-C20 탄화수소, 헤테로방향족 C1-C20 탄화수소, 사이클릭 지방족 C1-C20 탄화수소, 헤테로사이클릭 C1-C20 탄화수소, 및 이의 조합으로부터 독립적으로 선택되고, 이는 할로겐, O, N, 및 S 및 이의 조합으로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함한다.
다른 양태에서, 본 개시내용은 화학식 (B-2)의 구조를 갖는 리파마이신 유사체 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 제공한다:
Figure pct00216
여기서:
RN은:
Figure pct00217
로부터 선택되고; 여기서
Figure pct00218
기호는 부착 점을 나타내고; R', R" 및 R"'은 수소, C1-C6 지방족 탄화수소, 및 FMOC 및 BOC로부터 선택된 보호 그룹으로부터 선택되거나, 여기서 R' 및 R"는 함께 지방족 모노사이클릭, 지방족 비사이클릭, 또는 지방족 폴리사이클릭 구조를 형성한다.
다른 양태에서, 본 개시내용은 화학식 (B-2)의 구조를 갖는 리파마이신 유사체 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 제공한다:
Figure pct00219
여기서:
RN은
Figure pct00220
이고; 여기서
Figure pct00221
기호는 부착 점을 나타내고; R' 및 R"는 수소 및 C1-C6 지방족 탄화수소로부터 선택된다.
일 구현예에서, 리파마이신 유사체 화합물은 다음 화학식 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염에 따른 구조를 갖는다:
Figure pct00222
.
임의의 선행 화학식의 구현예에서 R1이 RN, 수소, 지방족 C1-C20 탄화수소, 방향족 C1-C20 탄화수소, 헤테로방향족 C1-C20 탄화수소, 사이클릭 지방족 C1-C20 탄화수소, 헤테로사이클릭 C1-C20 탄화수소, 및 이의 조합으로부터 선택되고, 이들 각각은 O 및 N로부터 선택된 0 내지 3개의 헤테로원자를 추가로 포함하고, 여기서 R1은 -F, -Cl, -Br, -I, -OH, C1-3 알콕사이드, -NH2, -NHR*, -N(R*)2, -N(R*)3 +, -N(R*)-OH, -O-N(R*)2, -N(R*)-O-R*, -N(R*)-(C=O)-R*, -(C=O)-R*, -CHO, -CO2H, -CO2R*, -O-(C=O)-H, -O-(C=O)-R*, -(C=O)-NH2, -(C=O)-N(R*)2, -Si(R*)3, -CF3, -O-CF3 및 이의 조합 중 하나 이상으로 임의 치환되고, 단, R1은 n-부틸 그룹이 아니고, X가 -O-이면, R1은 수소가 아니다.
임의의 선행 화학식의 구현예에서 R1이 지방족 C1-C20 탄화수소 및 방향족 C1-C20 탄화수소의 조합인 화합물이 제공된다.
임의의 선행 화학식의 구현예에서 R1이 지방족 C1-C20 탄화수소 및 헤테로방향족 C1-C20 탄화수소의 조합인 화합물이 제공된다.
임의의 선행 화학식의 구현예에서 R1이
Figure pct00223
로부터 선택된 화합물이 제공된다.
임의의 선행 화학식의 구현예에서 R1이 -NH2, -NHR*, -N(R*)2, 또는 -N(R*)-(C=O)-R* 중 하나 이상으로 치환된 지방족 C1-C20 탄화수소인 화합물이 제공된다.
임의의 선행 화학식의 구현예에서 R1이 -NH-(C=O)-CH3 또는 -N(CH3)-(C=O)-CH3 중 하나 이상으로 치환된 지방족 C1-C20 탄화수소인 화합물이 제공된다.
임의의 선행 화학식의 구현예에서 Ra가 수소인 화합물이 제공된다.
임의의 선행 화학식의 구현예에서 Ra가 -OH인 화합물이 제공된다.
임의의 선행 화학식의 구현예에서 Ra가 -Cl인 화합물이 제공된다.
임의의 선행 화학식의 구현예에서 Ra가 -OR*이고, R*가 지방족 C1-C20 탄화수소, 방향족 C1-C20 탄화수소, 및 이의 조합으로부터 선택된 화합물이 제공된다.
임의의 선행 화학식의 구현예에서 RN이:
Figure pct00224
Figure pct00225
로부터 선택되고; 여기서
Figure pct00226
기호는 부착 점을 나타내고; R', R" 및 R"'가 수소, C1-C6 지방족 탄화수소, 및 FMOC 및 BOC로부터 선택된 보호 그룹으로부터 선택되거나, 여기서 R' 및 R"가 함께 지방족 모노사이클릭, 지방족 비사이클릭, 또는 지방족 폴리사이클릭 구조를 형성하는 화합물이 제공된다.
임의의 선행 화학식의 구현예에서 RN이:
Figure pct00227
, 및
Figure pct00228
로부터 선택되고; 여기서 R'가 수소, 지방족 탄화수소 또는 보호 그룹을 나타내고, 여기서
Figure pct00229
기호는 부착 점을 나타내는 화합물이 제공된다.
임의의 선행 화학식의 화합물의 구현예에서 R*이 각각의 존재시 수소, 지방족 C1-C6 탄화수소, 방향족 C6-C7 탄화수소, 및 이의 조합(이는 O, N 및 이의 조합으로부터 선택된 1 내지 3개의 헤테로원자를 임의로 포함한다); 지방족 C1-C20 탄화수소, 방향족 C1-C20 탄화수소, 헤테로방향족 C1-C20 탄화수소, 사이클릭 지방족 C1-C20 탄화수소, 헤테로사이클릭 C1-C20 탄화수소, 및 이의 조합(이는 할로겐, O 및 N 및 이의 조합.로부터 독립적으로 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함한다)로부서 독립적으로 선택된다.
본 개시내용에 따른 리파마이신 유사체 화합물의 일부 예시적인 비-제한적 구현예는 하기 표 1에 나타나 있다:
[표 1]
Figure pct00230
Figure pct00231
Figure pct00232
Figure pct00233
Figure pct00234
Figure pct00235
Figure pct00236
Figure pct00237
Figure pct00238
Figure pct00239
일 구현예에서, 본 개시내용의 리파마이신 유사체 화합물은 다음으로 이루어진 그룹 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염으로부터 선택된 구조를 갖는다:
Figure pct00240
Figure pct00241
.
일 양태에서, 본 개시내용의 화합물은 화학식 (IA)의 구조를 갖는다:
Figure pct00242
여기서:
X는 -O-, -S-, 및 -NR*-로부터 선택되고;
R1은 수소, 지방족 C1-C20 탄화수소, 방향족 C5-C20 탄화수소, 헤테로방향족 C1-C20 탄화수소, 아릴 C6-C20 탄화수소, 헤테로아릴 C1-C20 탄화수소, 및 이의 조합으로부터 선택되고, 이들 각각은 할로겐, O, N, 및 S로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함하고, 여기서 R1은 -F, -Cl, -Br, -I, -OH, -OR*, -NO, -NO2, -NO3, -O-NO, -N3, -NH2, -NHR*, -N(R*)2, -N(R*)3 +, -N(R*)-OH, -O-N(R*)2, -N(R*)-O-R*, -CN, -NC, -(C=O)-R*, -CHO, -CO2H, -CO2R*, -(C=O)-S-R*, -O-(C=O)-H, -O-(C=O)-R*, -S-(C=O)-R*, -(C=O)-NH2, -(C=O)-N(R*)2, -(C=O)-NHNH2, -O-(C=O)-NHNH2, -(C=S)-NH2, -(C=S)-N(R*)2, -N(R*)-CHO, -N(R*)-(C=O)-R*, -SCN, -NCS, -NSO, -SSR*, -SO2R*, -SO2-N(R*)2, -S(=O)-OR*, -S(=O)-R*, -Si(R*)3, -CF3, -O-CF3 및 이의 조합 중 하나 이상으로 임의 치환되고;
R2, R3, 및 R4는 수소, 직쇄, 측쇄 또는 사이클릭 지방족 C1-C20 탄화수소, 또는 -(C=O)-R*로부터 독립적으로 선택되고, 이들 각각은 할로겐, O, N, 및 S로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함하고;
Ra는 각각의 존재시 수소, -F, -Cl, -Br, -I, -OH, OR*, -NH2, -NHR*, -N(R*)2, -N(R*)3 +, -(C=O)-R*, -CHO, -CO2H, -CO2R*, -SR*, SO2R*, 및 지방족 C1-C20 탄화수소로부터 독립적으로 선택되고, 이는 할로겐, O, N, 및 S로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함하고, 여기서 Ra 및 Rb는 -F, -Cl, -Br, -I, -OH, -OR*중 하나 이상으로 임의 치환되고;
R*는 각각의 존재시 수소, 지방족 C1-C20 탄화수소, 방향족 C5-C20 탄화수소, 헤테로방향족 C1-C20 탄화수소, 아릴 C6-C20 탄화수소, 헤테로아릴 C1-C20 탄화수소, 및 이의 조합으로부터 독립적으로 선택되고, 이는 할로겐, O, N, 및 S 및 이의 조합으로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함한다.
일 구현예에서, X는 -O-이고, R1은 지방족 C1-C3 탄화수소이고, R2는 메틸 그룹이고, R3은 Ac (-(C=O)-CH3)이고, R4는 수소이고, Ra는 수소이다.
일 구현예에서, X는 -O-이고, R1은 벤질 그룹이고, R2는 메틸 그룹이고, R3은 Ac (-(C=O)-CH3)이고, R4는 수소이고, Ra는 수소이다.
일 구현예에서, X는 -O-이고, R1은 할로겐, O, N, 및 S로부터 선택된 1 내지 8개의 헤테로원자를 포함하는 지방족 C1-C8 탄화수소이고, R2는 메틸 그룹이고, R3은 Ac (-(C=O)-CH3)이고, R4는 수소이고, Ra는 수소이다.
일 구현예에서, X는 -O-이고, R1은 -NH2, -NHR*, -N(R*)2 중 하나 이상으로 치환된 지방족 C1-C8 탄화수소이고 R2는 메틸 그룹이고, R3은 Ac (-(C=O)-CH3)이고, R4는 수소이고, Ra는 수소이다.
일 구현예에서, X는 -NCH3-이고, R1은 -OH이고, R2는 메틸 그룹이고, R3은 Ac (-(C=O)-CH3)이고, R4는 수소이고, Ra는 수소이다.
본 개시내용은 또한 본원에 기술된 화합물의 염을 포함한다. 본원에 사용된 바와 같은, "염"은 개시된 화합물의 유도체를 지칭하고 여기서 모 화합물은 존재하는 산 또는 염기 모이어티를 이의 염 형태로 전환시킴으로써 개질된다. 염의 예는 무기산(예를 들면, HC1, HBr, H2SO4) 또는 유기산(예를 들면, 아세트산, 벤조산), 염기성 잔기의 트리플루오로아세트산 염, 예를 들면, 아민; 산성 잔기, 예를 들면, 카복실산의 알칼리(예를 들면, Li, Na, K, Mg, Ca) 또는 유기(예를 들면, 트리알킬암모늄) 염 등을 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 본 출원의 염은 염기성 또는 산성 모이어티를 함유하는 모 화합물로부터 통상의 화학적 방법으로 합성할 수 있다. 일반적으로, 이러한 염은 유리 산 또는 이러한 화합물의 염기 형태를 화학량론적 양의 적절한 염기 또는 산과 물 또는 유기 용매, 또는 2개의 혼합물 속에서 반응시킴으로써 제조할 수 있다. 일부 구현예에서, 비-수성 매질, 예를 들어, 에테르, 에틸 아세테이트, 에탄올, 이소프로판올, 또는 아세토니트릴(ACN)을 사용할 수 있다.
본 출원은 또한 본원에 기술된 화합물의 약제학적으로 허용되는 염을 포함한다. "약제학적으로 허용되는 염"은 예를 들면, 무-독성 무기 또는 유기 산으로부터 형성된 모 화합물의 통상의 무-독성 염인 상술한 "염"의 서브세트를 포함한다. 적합한 염의 목록은 문헌: Remington's Pharmaceutical Sciences, 17th ed., Mack Publishing Company, Easton, Pa., 1985, p. 1418 및 Berge, SM et al, Journal of Pharmaceutical Science, 1977, 66, 1, 1-19에서 찾을 수 있다. 어구 "약제학적으로 허용되는"은 본원에서 과도한 독성, 자극, 알레르기 반응, 또는 다른 문제 또는 합병증 없이 사람 및 동물의 조직과 접촉하여 사용하기 적합한, 의학적 판단 영역내에 있고, 충분한 이익/위험 비(benefit/risk ratio)로 어울리는 화합물, 물질, 조성물, 및/또는 투여량 형태를 지칭하기 위해 본원에 사용된다.
화합물의 제조는 다양한 화학 그룹의 보호 및 탈보호를 포함할 수 있다. 보호 및 탈보호, 및 적절한 보호 그룹의 선택에 대한 필요성은 당해 분야의 기술자에 의해 용이하게 측정될 수 있다. 보호 그룹의 화학은 예를 들면, 문헌: Wuts and Greene, Greene Protective Groups in Organic Synthesis, 4th Ed., John Wiley & Sons: New York, 2006에서 찾을 수 있다. 하나의 비-제한적인 구현예에서, 보호 그룹은 1-클로로에틸 카보닐(ACE), 아세토일, 벤질(Bn), 벤질옥시 카보닐(CBz), 포르밀, 메틸 카보닐, 트리플루오로아세틸, t-부톡시 카보닐(Boc), 및 플루오레닐메틸옥시카보닐(Fmoc)을 포함할 수 있다.
본원에 나타낸 리파마이신 유사체 화합물은 화합물의 모든 이성체(예컨대, 거울상이성체, 부분입체이성체, 및 기하학적(또는 구조적)) 형태; 예를 들면, 각각의 비대칭 중심에 대해 R 및 S 구조, (Z) 및 (E) 이중 결합 이성체, 및 (Z) 및 (E) 구조 이성체를 포함한다. 따라서, 모 화합물의 단일의 입체화학적 이성체 뿐만 아니라 거울상이성체, 부분입체이성체, 및 기하학적(또는 구조적) 혼합물이 본 개시내용의 영역내에 있다. 본원에 나타낸 화합물의 모든 호변이성체 형태 또한 본 개시내용의 영역내에 있다.
본원에 기술된 리파마이신 유사체 화합물은 또한 하나 이상의 동위원소적으로 풍부한 원자의 존재하에서만 상이한 모든 화합물을 포함한다. 예를 들면, 중수소 또는 삼중수소에 의한 수소의 대체, 또는 11C- 또는 13C- 또는 14C가 풍부한 탄소에 의한 탄소의 대체, 또는 17O- 또는 18O가 풍부산 산소에 의한 산소의 대체, 또는 15N가 풍부한 질소에 의한 질소의 대체를 제외하고는 본 구조를 갖는 화합물이 본 개시내용의 영역내에 있다.
본 개시내용의 화합물 및 이의 염의 결정성 형태는 본 개시내용의 영역 내에 있다. 본 개시내용의 화합물은 다양한 무정형 및 결정성 다형체 형태로, 예를 들면, 그러나 이에 한정되지 않는 무수의, 수화된, 비-용매화된, 또는 용매화된 무수 및 결정성 다형체 형태로 단리될 수 있다. 수화물의 예는 반수화물, 일수화물, 이수화물 등을 포함한다. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 화합물은 무수 및 비-용매화된다. "무수"는 화합물의 결정성 형태가 결정 격자 구조내에 결합된 물을 필수적으로 함유하지 않음을, 즉, 화합물이 결정성 수화물을 형성하지 않음을 의미한다.
제조 방법
일 양태에서, 본 개시내용은
(a) 구조:
Figure pct00243
를 갖는 리파마이신 S를 화학식 (VI):
Figure pct00244
(여기서 X'는 -OH 및 -NHR*로부터 선택된다)의 구조를 갖는 화합물과 접촉시키는 단계, 및
(b) 단계 (a)의 생성물을 산화제로 처리하는 단계를 포함하는, 화학식 (V)의 구조를 갖는 리파마이신 유사체 화합물의 제조 방법을 제공한다:
Figure pct00245
여기서 X는 -O- 및 NR*-로부터 선택되고;
R6은 RN, 수소, 지방족 C1-C20 탄화수소, 방향족 C1-C20 탄화수소, 헤테로방향족 C1-C20 탄화수소, 사이클릭 지방족 C1-C20 탄화수소, 헤테로사이클릭 C1-C20 탄화수소, 및 이의 조합으로부터 선택되고,
RN은:
Figure pct00246
로부터 선택되고; 여기서
Figure pct00247
기호는 부착 점을 나타내고; R', R" 및 R"'은 수소, C1-C6 지방족 탄화수소, 및 FMOC 및 BOC로부터 선택된 보호 그룹으로부터 선택되거나, 여기서 R' 및 R"는 함께 지방족 모노사이클릭, 지방족 비사이클릭, 또는 지방족 폴리사이클릭 구조를 형성하고;
R*은 각각의 존재시 수소, 지방족 C1-C20 탄화수소, 방향족 C1-C20 탄화수소, 헤테로방향족 C1-C20 탄화수소, 사이클릭 지방족 C1-C20 탄화수소, 헤테로사이클릭 C1-C20 탄화수소, 및 이의 조합으로부터 독립적으로 선택되고, 이는 할로겐, O, N, 및 S 및 이의 조합으로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함한다.
일 양태에서, 본 개시내용은
(a) 구조:
Figure pct00248
를 갖는 리파마이신 S를 화학식 (VI'):
Figure pct00249
(여기서 X'는 -OH 및 -NHR*로부터 선택된다)를 갖는 화합물과 접촉시키는 단계, 및
(b) 단계 (a)의 생성물을 산화제로 처리하는 단계를 포함하여, 화학식 (V')의 구조를 갖는 리파마이신 유사체 화합물을 제조하는 방법을 제공한다:
Figure pct00250
여기서 X는 -O- 및 NR*-로부터 선택되고;
R6은 RN, 수소, 지방족 C1-C20 탄화수소, 방향족 C1-C20 탄화수소, 헤테로방향족 C1-C20 탄화수소, 사이클릭 지방족 C1-C20 탄화수소, 헤테로사이클릭 C1-C20 탄화수소, 및 이의 조합으로부터 선택되고,
RN은:
Figure pct00251
로부터 선택되고; 여기서
Figure pct00252
기호는 부착 점을 나타내고; R', R" 및 R"'은 수소, C1-C6 지방족 탄화수소, 및 FMOC 및 BOC로부터 선택된 보호 그룹으로부터 선택되거나, 여기서 R' 및 R"는 함께 지방족 모노사이클릭, 지방족 비사이클릭, 또는 지방족 폴리사이클릭 구조를 형성하고;
R*는 각각의 존재시 수소, 지방족 C1-C20 탄화수소, 방향족 C1-C20 탄화수소, 헤테로방향족 C1-C20 탄화수소, 사이클릭 지방족 C1-C20 탄화수소, 헤테로사이클릭 C1-C20 탄화수소, 및 이의 조합으로부터 독립적으로 선택되고, 이는 할로겐, O, N, 및 S 및 이의 조합으로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함한다.
일 양태에서, 본 개시내용은
(a) 리파마이신 S를 화학식 (VII):
Figure pct00253
(여기서 PG는 보호 그룹이다)의 구조를 갖는 화합물과 접촉시키는 단계;
(b) 단계 (a)의 생성물을 산화제로 처리하는 단계, 및
(c) 보호 그룹 PG를 제거하는 단계를 포함하여, 구조:
Figure pct00254
를 갖는 화합물을 제조하는 방법을 제공한다.
일 구현예에서, 화학식 (VII)의 화합물은 화학식 (VIII):
Figure pct00255
(여기서 보호 그룹 PG 및 PG'는 서로 동일하거나 상이할 수 있다)의 화합물로부터 보호 그룹 PG'를 제거함으로써 제조된다.
일 구현예에서, 화학식 (VIII)의 화합물은 화학식 (IX):
Figure pct00256
의 화합물을 화학식 (X):
Figure pct00257
의 화합물과 접촉시켜 제조하며, 여기서 보호 그룹 PG 및 PG'는 서로 동일하거나 상이할 수 있다.
일 양태에서, 본 개시내용은 화학식 (XII):
Figure pct00258
의 구조를 갖는 화합물을 구조 R6-OH를 갖는 알코올과 접촉시킴을 포함하여, 화학식 (XI)를 갖는 화합물을 제조하는 방법을 제공한다:
Figure pct00259
여기서 R6은 RN, 지방족 C1-C20 탄화수소, 방향족 C1-C20 탄화수소, 헤테로방향족 C1-C20 탄화수소, 사이클릭 지방족 C1-C20 탄화수소, 헤테로사이클릭 C1-C20 탄화수소, 및 이의 조합으로부터 선택되고, 이는 할로겐, O, N, 및 S로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자 및 이의 조합을 추가로 포함하고 여기서 R6은 -F, -Cl, -Br, -I, -OH, -OR*, -NO, -NO2, -NO3, -O-NO, -N3, -NH2, -NHR*, -N(R*)2, -N(R*)3 +, -N(R*)-OH, -O-N(R*)2, -N(R*)-O-R*, -CN, -NC, -(C=O)-R*, CHO, -CO2H, -CO2R*, -(C=O)-S-R*, -O-(C=O)-H, -O-(C=O)-R*, -S-(C=O)-R*, -(C=O)-NH2, -(C=O)-N(R*)2, -(C=O)-NHNH2, -O-(C=O)-NHNH2, -(C=S)-NH2, -(C=S)-N(R*)2, -N(R*)-CHO, -N(R*)-(C=O)-R*, -SCN, -NCS, -NSO, -SSR*, -SO2R*, -SO2-N(R*)2, -S(=O)-OR*, -S(=O)-R*, -Si(R*)3, -CF3, -O-CF3 및 이의 조합 중 하나 이상으로 임의 치환되고;
RN은:
Figure pct00260
로부터 선택되고; 여기서
Figure pct00261
기호는 부착 점을 나타내고; R', R" 및 R"'은 수소, C1-C6 지방족 탄화수소, 및 FMOC 및 BOC로부터 선택된 보호 그룹으로부터 선택되거나, 여기서 R' 및 R"는 함께 지방족 모노사이클릭, 지방족 비사이클릭, 또는 지방족 폴리사이클릭 구조를 형성하고;
R*는 각각의 존재시 수소, 지방족 C1-C20 탄화수소, 방향족 C1-C20 탄화수소, 헤테로방향족 C1-C20 탄화수소, 사이클릭 지방족 C1-C20 탄화수소, 헤테로사이클릭 C1-C20 탄화수소, 및 이의 조합으로부터 독립적으로 선택되고, 이는 할로겐, O, N, 및 S 및 이의 조합로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함한다.
일 양태에서, 본 개시내용은
화학식 (XII'):
Figure pct00262
의 구조를 갖는 화합물을 구조 R6-OH를 갖는 알코올과 접촉시킴을 포함하는, 화학식 (XI')의 구조를 갖는 화합물의 제조 방법을 제공한다:
Figure pct00263
여기서 R6은 RN, 지방족, C1-C20 탄화수소, 방향족 C1-C20 탄화수소, 헤테로방향족 C1-C20 탄화수소, 사이클릭 지방족 C1-C20 탄화수소, 헤테로사이클릭 C1-C20 탄화수소, 및 이의 조합으로부터 선택되고, 이는 할로겐, O, N, 및 S 및 이의 조합으로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함하고 여기서 R6은 -F; -Cl; -Br; -I; -OH; -OR*; -NO; -NO2; -NO3; -O-NO; -N3; -NH2; -NHR*; -N(R*)2; -N(R*)3 +; -N(R*)-OH; -O-N(R*)2; -N(R*)-O-R*; -CN; -NC; -(C=O)-R*; -CHO; -CO2H; -CO2R*; -(C=O)-S-R*; -O-(C=O)-H; -O-(C=O)-R*; -S-(C=O)-R*; -(C=O)-NH2; -(C=O)-N(R*)2; -(C=O)-NHNH2; -O-(C=O)-NHNH2; -(C=S)-NH2; -(C=S)-N(R*)2; -N(R*)-CHO; -N(R*)-(C=O)-R*; -SCN; -NCS; -NSO; -SSR*; -SO2R*; -SO2-N(R*)2; -S(=O)-OR*; -S(=O)-R*; -Si(R*)3; -CF3; -O-CF3 및 이의 조합 중 하나 이상으로 임의 치환되고;
RN은:
Figure pct00264
로부터 선택되고, 여기서
Figure pct00265
기호는 부착 점을 나타내고; R', R" 및 R"'는 수소, C1-C6 지방족 탄화수소, 및 FMOC 및 BOC로부터 선택되거나, 여기서 R' 및 R"는 함께 지방족 모노사이클, 지방족 비사이클, 또는 지방족 폴리사이클릭 구조를 형성하고;
R*는 각각의 존재시 수소, 지방족 C1-C20 탄화수소, 방향족 C1-C20 탄화수소, 헤테로방향족 C1-C20 탄화수소, 사이클릭 지방족 C1-C20 탄화수소, 헤테로사이클릭 C1-C20 탄화수소, 및 이의 조합으로부터 독립적으로 선택되고, 이는 할로겐, O, N, 및 S 및 이의 조합으로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함한다.
일 양태에서, 본 개시내용은
화학식 (XII):
Figure pct00266
의 구조를 갖는 화합물을 구조 Rcy-A-OH를 갖는 알코올과 접촉시킴을 포함하는, 화학식 (XIII)의 구조를 갖는 화합물의 제조 방법을 제공한다:
Figure pct00267
여기서 A는 결합(A는 부재한다) 또는 지방족 C1-C20 탄화수소로부터 선택되고;
Rcy는 C3-C14 지환족 탄화수소이고, 이는 할로겐, O, N, 및 S로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자 및 이의 조합을 추가로 포함하고 여기서 Rcy는 -F, -Cl, -Br, -I, -OH, -OR*, -NO, -NO2, -NO3, -O-NO, -N3, -NH2, -NHR*, -N(R*)2, -N(R*)3 +, -N(R*)-OH, -O-N(R*)2, -N(R*)-O-R*, -CN, -NC, -(C=O)-R*, -CHO, -CO2H, -CO2R*, -(C=O)-S-R*, -O-(C=O)-H, -O-(C=O)-R*, -S-(C=O)-R*, -(C=O)-NH2, -(C=O)-N(R*)2, -(C=O)-NHNH2, -O-(C=O)-NHNH2, -(C=S)-NH2, -(C=S)-N(R*)2, -N(R*)-CHO, -N(R*)-(C=O)-R*, -SCN, -NCS, -NSO, -SSR*, -SO2R*, -SO2-N(R*)2, -S(=O)-OR*, -S(=O)-R*, -Si(R*)3, -CF3, -O-CF3 및 이의 조합 중 하나 이상으로 임의 치환되고;
R*는 각각의 존재시 수소, 지방족 C1-C20 탄화수소, 방향족 C1-C20 탄화수소, 헤테로방향족 C1-C20 탄화수소, 사이클릭 지방족 C1-C20 탄화수소, 헤테로사이클릭 C1-C20 탄화수소, 및 이의 조합으로부터 독립적으로 선택되고, 이는 할로겐, O, N, 및 S 및 이의 조합으로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함한다.
일 양태에서, 본 개시내용은 화학식 (XII):
Figure pct00268
의 구조를 갖는 화합물을 구조 Rcy-A-OH를 갖는 알코올과 접촉시킴을 포함하는, 화학식 (XIII')의 구조를 갖는 화합물의 제조 방법을 제공한다:
Figure pct00269
여기서 A는 결합(A는 부재한다) 또는 지방족 C1-C20 탄화수소로부터 선택되고;
Rcy는 C3-C14 지환족 탄화수소이고, 이는 할로겐, O, N, 및 S 및 이의 조합으로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함하고 및 여기서 Rcy는 -F, -Cl, -Br, -I, -OH, -OR*, -NO, -NO2, -NO3, -O-NO, -N3, -NH2, -NHR*, -N(R*)2, -N(R*)3 +, -N(R*)-OH, -O-N(R*)2, -N(R*)-O-R*, -CN, -NC, -(C=O)-R*, -CHO, -CO2H, -CO2R*, -(C=O)-S-R*, -O-(C=O)-H, -O-(C=O)-R*, -S-(C=O)-R*, -(C=O)-NH2, -(C=O)-N(R*)2, -(C=O)-NHNH2, -O-(C=O)-NHNH2, -(C=S)-NH2, -(C=S)-N(R*)2, -N(R*)-CHO, -N(R*)-(C=O)-R*, -SCN, -NCS, -NSO, -SSR*, -SO2R*, -SO2-N(R*)2, -S(=O)-OR*, -S(=O)-R*, -Si(R*)3, -CF3, -O-CF3 및 이의 조합 중 하나 이상으로 임의 치환되고;
R*는 각각의 존재시 수소, 지방족 C1-C20 탄화수소, 방향족 C1-C20 탄화수소, 헤테로방향족 C1-C20 탄화수소, 사이클릭 지방족 C1-C20 탄화수소, 헤테로사이클릭 C1-C20 탄화수소, 및 이의 조합으로부터 독립적으로 선택되고, 이는 할로겐, O, N, 및 S 및 이의 조합으로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함한다.
일 양태에서, 본 개시내용은 화학식 (XII):
Figure pct00270
의 구조를 갖는 화합물을 구조
Figure pct00271
를 갖는 알코올과 접촉시킴을 포함하는, 화학식 (XIV)의 구조를 갖는 화합물의 제조 방법을 제공한다:
Figure pct00272
,
여기서 Y는 각각의 존재시 -O- 및 -NR'R"-로부터 선택되고; n은 독립적으로 각각의 존재시 1 내지 6의 정수이고, R', R", 및 R"'은 수소, 지방족 C1-C20 탄화수소로부터 각각 독립적으로 선택된다.
일 양태에서, 본 개시내용은 화학식 (XII'):
Figure pct00273
의 구조를 갖는 화합물을 구조
Figure pct00274
를 갖는 알코올과 접촉시킴을 포함하는, 화학식 (XIV')의 구조를 갖는 화합물의 제조 방법을 제공한다:
Figure pct00275
여기서 Y는 각각의 존재시 -O- 및 -NR'R"-로부터 선택되고; n은 독립적으로 각각의 존재시 1 내지 6의 정수이고, R', R", 및 R"'는 수소 및 지방족 C1-C20 탄화수소로부터 서로 독립적으로 선택된다.
일 구현예에서, 화학식 (XII)의 화합물은 리파마이신 S를 2-아미노-5-브로모페놀과 접촉시키고, 생성물을 산화제로 처리함으로써 제조된다.
일 구현예에서, 화학식 (XII')의 화합물은 리파마이신 S를 2-아미노-4-브로모페놀과 접촉시키고, 생성물을 산화제로 처리함으로써 제조된다.
약제학적 조성물 및 투여형
본 개시내용은 또한 본원에 기술된 화합물을 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다. 약제로서 사용된 경우, 본 개시내용의 화합물은 본 개시내용의 화합물과 약제학적으로 허용되는 담체의 조합인 약제학적 조성물의 형태로 투여될 수 있다. 이러한 조성물은 약제 분야에 잘 공지된 방식으로 제조될 수 있으며, 다양한 경로로 투여될 수 있다. 이러한 약제학적 조성물은 전신계적으로 투여될 수 있다. 본원에 사용된 바와 같은, 용어 "전신계"는 비경구, 국소, 경피, 경구, 흡입/폐에 의해, 직장, 비강, 몰내, 및 설하 투여를 포함한다. 본원에 사용된 바와 같은, 용어 "비경구"는 피하, 경피, 근육내, 두개내, 및 복강내 투여를 포함한다. 일부 구현예에서, 화합물은 세균 감염(예컨대, 에스. 아우레우스 감염)을 치료하기 위한 치료학적 유효량으로 경구적으로, 국소적으로, 비강내로, 정맥내로, 근육내로, 또는 피하로 투여된다.
본 개시내용의 화합물을 함유하는 약제학적 조성물은 하나 이상의 약제학적으로 허용되는 담체와 함께 제조될 수 있다. 본 개시내용의 조성물의 제조시, 활성 성분은 전형적으로 부형제와 혼합되거나, 부형제에 의해 희석되거나 이러한 담체 내에서 예를 들면, 캡슐제, 사셰제(sachet), 종이, 또는 다른 용기의 형태로 봉입된다. 부형제가 희석제로서 제공된 경우, 이는 고체, 반고체, 또는 액체 물질일 수 있으며, 이는 활성 성분용 비히클, 담체 또는 매질로서 작용한다. 따라서, 조성물은 정제, 환제, 산제, 로젠지제, 사셰제, 엘릭서르제(elixir), 현탁제, 유제, 액제, 시럽제, 에어로졸제(고체 또는 액체 매질로서), 예를 들면, 10 중량% 이하의 활성 화합물을 함유하는 연고제, 연질 및 경질 젤라틴 캡슐제, 좌제, 멸균 주사가능한 액제, 및 멸균 포장된 산제의 형태일 수 있다.
일부 구현예에서, 본 개시내용의 약제학적 조성물은 액체 형태이다. 액체 형태는 비-제한적인 예로서, 유제, 액제, 현탁제, 시럽제, 슬러리제, 분산제, 콜로이드제(colloid) 등이다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 약제학적 조성물은 액체, 반고체 또는 고체(예컨대, 분말) 형태이다. 특수한 구현에에서, 본원에 기술된 약제학적 조성물은 반 고체 형태, 예컨대, 겔제, 겔 매트릭스제, 크림제, 페이스트제 등이다. 일부 구현예에서, 반 고체 형태는 액체 비히클을 포함한다. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 약제학적 조성물은 고체 투여량 형태, 예를 들면, 전제, 입제, 사셰제, 또는 산제이다. 또한 본 개시내용의 화합물 또는 약제학적으로 허용되는 이의 염을 포함하는, 용해 정제, 용해 와이퍼제(wafer), 캡슐제, 또는 겔 캡슐제(gel capsule)의 형태의 약제학적 조성물이 제공된다. 특정의 구현예에서, 본원에 기술된 고체 투여형은 고체 비히클(vehicle)(예컨대, 정제 중에 사용된 바와 같은), 및/또는 가스성 비히클(예컨대, DPI 속에 사용된 바와 같은)이다.
일부 구현예에서, 조성물은 경구, 비강내, 정맥내, 또는 환자에 대한 다른 투여용 단위 용량 제형으로 존재한다. 용어 "단위 투여량 형태"는 사람 대상체 및 다른 포유동물용의 일원화된 투여량(unitary dosage)으로서 적합한 물리적으로 구별된 단위를 지칭하며, 각각의 단위는 적합한 약제학적 부형제와 함께, 예정된 양의 목적한 치료학적 효과를 생산하도록 계된된 활성 성분을 함유한다.
활성 화합물은 광범위한 투여량 범위에 걸쳐 효과적일 수 있고 일반적으로 약제학적으로 유효한 양으로 투여된다. 그러나, 실제 투여된 화합물의 양은 일반적으로 관련 상황, 예를 들면, 치료될 상태, 선택된 투여 경로, 투여된 실제 화합물, 개인 환자의 연령, 체중, 및 반응, 환자 증상의 중증도 등에 따라 주치의에 의해 일반적으로 결정될 것이다.
일부 구현예에서, 본원에 기술된 조성물 또는 단위 투여량 형태는 유제, 액제, 현탁제, 시럽제, 슬러리제, 분산제, 콜로이드제, 용해 정제, 용해 와이퍼, 캡슐제, 겔 캡슐제, 반 고체, 고체 포마 겔제(solid forma gel), 겔 매트릭스제, 크림제, 페이스트제, 정제, 입제, 사셰제, 산제 등으로 투여된다. 특정의 양태에서, 1일당 또는 용량당, 약 0.000001 mg 내지 약 2000 mg, 약 0.00001 mg 내지 약 1000 mg, 또는 약 0.0001 mg 내지 약 750 mg, 약 0.001 mg 내지 약 500 mg, 약 0.01 mg 내지 약 250 mg, 약 0.1 mg 내지 약 100 mg, 약 0.5 mg 내지 약 75 mg, 약 1 mg 내지 약 50 mg, 약 2 mg 내지 약 40 mg, 약 5 mg 내지 약 20 mg, 또는 약 7.5 mg 내지 약 15 mg의 화학식 (I)의 화합물, 또는 본원에 제공된 것으로서 화학식 (A), (B), (I), (I'), (II), (II'), (III), (III'), (IV), (IV'), (V), (V')의 임의의 구현예에 따른 구조를 갖는 화합물이 개체에게 투여된다.
일부 구현예에서, 본 개시내용의 화합물은 본원에 기술된 조성물 또는 조성물의 단위 용량 속에 약 0.01 mg 내지 약 10 mg(예컨대, 약 0.1-10 mg, 약 0.25-5 mg, 약 0.25-2.5 mg, 약 1-2 mg 또는 약 2-3 mg, 약 0.5 mg 내지 약 2 mg, 약 1 내지 약 2 mg, 약 1 mg, 또는 약 2 mg)의 양으로 존재한다. 일부 구현예에서, 매일 또는 단위 용량으로 투여된 화합물의 양은 약 0.5 mg 내지 약 3 mg, 약 0.5 mg 내지 약 4 mg, 또는 약 0.35 mg 내지 약 4 mg이다. 다른 구현예에서, 단위 용량 속에 존재하거나 매일 투여된 화합물의 양은 약 1 내지 약 3 mg, 또는 약 1 내지 약 2 mg, 또는 약 2 내지 약 3 mg이다.
특정의 양태에서, 1일당 또는 용량당 약 0.05 mg 내지 약 50 mg, 약 0.25 mg 내지 약 20 mg, 약 0.25 mg 내지 약 15 mg, 약 0.25 mg 내지 약 10 mg, 또는 약 0.25 mg 내지 약 5 mg(예컨대, 약 0.1 내지 약 5 mg, 약 0.25 내지 약 2.5 mg, 약 0.3 mg 내지 약 2 mg, 약 0.5 mg 내지 약 1 mg, 약 0.7 mg 내지 약 1.5 mg, 약 0.375 mg, 약 0.75 mg, 약 1 mg, 약 1.25 mg, 약 1.5 mg 또는 약 2 mg)의 화합물이 환자에게 투여된다.
일부 구현예에서, 화합물은 약 5 mg 내지 약 500 mg의 양으로 단위 용량 속에 존재한다. 일부 구현예에서, 매일 또는 단위 용량으로 투여된 화합물의 양은 약 5 mg 내지 약 300 mg이다. 다른 구현예에서, 단위 용량 속에 존재하거나 매일 투여된 화합물의 양은 약 5 내지 약 250 mg, 또는 약 5 내지 약 200 mg, 약 5 mg 내지 약 150 mg, 약 5 mg 내지 약 100 mg, 또는 약 5 내지 약 50 mg이다.
제형의 제조시, 활성 화합물을 분쇄하여 다른 성분과 합하기 전에 적절한 입자 크기를 제공할 수 있다. 활성 화합물이 실질적으로 불용성인 경우, 이는 200 메쉬(mesh) 미만의 입자 크기로 분쇄할 수 있다. 활성 화합물이 실질적으로 수용성인 경우, 입자 크기를 분쇄로 예컨대, 약 40 메쉬로 조절하여 제형 속에 실질적으로 균일한 분포를 제공할 수 있다. 적합한 부형제의 일부 예는 락토즈, 덱스트로즈, 슈크로즈, 소르비톨, 만니톨, 전분, 검 아카시아, 인산칼슘, 알기네이트, 트라가칸트, 젤라틴, 규산칼슘, 미세결정설 셀룰로즈, 폴리비닐피롤리돈, 셀룰로즈, 물, 시럽, 및 메틸 셀룰로즈를 포함한다. 제형은 또한 다음을 포함할 수 있다: 윤활제, 예를 들면, 활석, 스테아르산마그네슘, 및 광 오일; 습윤제; 유화제 및 현탁화제; 방부제, 예를 들면, 메틸- 및 프로필하이드록시-벤조에이트; 감미제; 및 풍미제, 본 개시내용의 조성물은 당해 분야에 공지된 과정을 사용함으로서 환자에게 투여된 후 활성 성분의 신속한, 지속된 또는 지연된 방출을 제공할 수 있다.
정제와 같은 고체 조성물을 제조하기 위하여, 기본 활성 성분을 약제학적 부형제와 혼합하여 화학식 I의 화합물을 함유하는 고체 예비-제형 조성물을 형성시킨다. 이러한 예비-제형 조성물을 균질한 것으로 지칭하는 경우, 활성 성분을 전형적으로 조성물 전체에 균일하게 분산시켜 조성물이 동등하게 효과적인 단위 투여량 형태, 예를 들면, 정제, 환제 및 캡슐제로 용이하게 세분시킬 수 있다. 이러한 고체 예비-제형을 이후 예를 들면, 0.000001 내지 약 2000 mg의 본 출원의 활성 성분을 함유하는 상술한 유형의 단위 투여량 형태로 세분시킨다.
화학식 I의 화합물을 함유하는 정제 또는 환제는 코팅시키거나 달리는 화합시켜 연장된 작용의 장점을 제공하는 투여량 형태를 제공할 수 있다. 예를 들면, 정제 또는 환제는 내부 투여량 및 외부 투여량 구성성분을 포함할 수 있으며, 후자는 전자 위의 엔벨로프(envelope)의 형태이다. 2개의 구성성분은 위 속에서 붕해에 견디어 내부 구성성분이 회장내로 온전하게 통과하여 방출이 지연되도록 하는 장 층에 의해 분리될 수 있다. 다양한 물질을 이러한 장 층 또는 코팅에 사용할 수 있으며, 이러한 물질은 다수의 중합체 산 및 중합체 산과 쉘락(shellac), 세틸 알코올, 및 셀룰로즈 아세테이트로서 이러한 물질의 혼합물을 포함한다.
본 출원의 화합물 및 조성물이 경구적으로 또는 주사에 의한 투여용으로 혼입될 수 있는 액체 형태는 수성 액제, 적합하게 풍미된 시럽제, 수성 또는 유성 현탁제, 및 면화씨 오일, 참깨 오일, 코코넛 오일, 또는 땅콩 오일과 같은 식용 오일 뿐만 아니라 엘릭서르 및 유사한 약제학적 비히클과의 풍미된 유제를 포함한다.
흡입용 또는 통기(insufflation)용 조성물은 약제학적으로 허용되는, 수성 또는 유기 용매, 또는 이의 혼합물 속에 액체 및 현탁액, 및 분말을 포함한다. 액체 또는 고체 조성물은 상술한 바와 같은 적합한 약제학적으로 허용되는 부형제를 함유할 수 있다. 일부 구현예에서, 조성물은 국소 또는 전신 효과를 위해 경구 또는 비강 호흡 경로로 투여된다. 조성물은 불활성 가스를 사용함으로써 분무할 수 있다. 분무된 용액은 분무 장치로부터 직접 호흡될 수 있거나 분무 장치를 안면 마스크 텐트, 또는 간헐적인 양성 압력 호흡기(intermittent positive pressure breathing machine)에 부착시킬 수 있다. 액제, 현탁제, 또는 산제 조성물은 제형을 적절한 방식으로 전달하는 장치로부터 경구적으로 또는 비강적으로 투여될 수 있다.
환자에게 투여된 조성물은 상술한 약제학적 조성물의 형태일 수 있다. 이러한 조성물은 통상의 멸균 기술로 멸균시킬 수 있거나, 멸균 여과할 수 있다. 수용액은 자체로 사용하기 위해 포장하거나, 동결건조시킬 수 있고, 동결건조된 제제는 멸균 수성 담체와 투여 전에 합할 수 있다.화합물 제제의 pH는 전형적으로 3 내지 11, 보다 바람직하게는 5 내지 9일 것이다. 특정의 전술한 부형제, 담체, 또는 안정화제의 사용은 약제학적 염의 형성을 야기할 것으로 이해될 것이다.
본 개시내용의 화합물의 치료학적 투여량은 예를 들면, 치료가 이루어지기 위한 특수한 용도, 화합물의 투여 방식, 환자의 건장 및 상태, 및 처방하는 주치의의 판단에 따라 변할 수 있다. 약제학적 조성물 중 본 개시내용의 화합물의 비율 또는 농도는 투여량, 화학적 특성(예컨대, 소수성), 및 투여 경로를 포함하는 다수의 인자에 따라 변할 수 있다. 투여량은 질환 또는 장애의 유형 및 진행 정도, 환자의 전체적인 건강 상태, 선택된 화합물의 상대적인 생물학적 효능, 부형제의 제형, 이의 투여 경로와 같은 변수에 의존할 수 있따. 유효 용량은 시험관내 또는 동물 모델 시험 시스템으로부터 유도된 용량-반응 곡선으로부터 추정할 수 있다.
본 출원은 예를 들면, 세균 감염 (예컨대, 에스. 아우레우스 감염)의 치료시 유용한 약제학적 키트(kit)를 포함하며, 이는 치료학적 유효량의 본 개시내용의 화합물을 포함하는 약제학적 조성물을 함유하는 하나 이상의 용기를 포함한다.이러한 키트는 경우에 따라, 다양한 통상의 약제학적 키트 구성성분, 예를 들면,당해 분야의 기술자에게 용이하게 익숙해질, 하나 이상의 약제학적으로 허용되는 담체를 지닌 용기, 추가의 용기 등을 추가로 포함할 수 있다. 투여될 구성성분의 양, 투여에 대한 안내, 및/또는 구성성분의 혼합을 위한 안내를 나타내는 삽입물 또는 표지로서의 설명서가 또한 키트내에 포함될 수 있다.
전달 장치는 본 개시내용의 화합물을 전달할 뿐 아니라, 적절한 저장 환경을 제공하기 위해 중요하다. 이는 미생물 오염 및 화학적 분해로부터의 방지를 포함한다. 장치 및 제형은 잠재적인 누출 또는 흡수를 피하도록 혼용성이어야 한다. 전달 장치(또는 이의 포장)은 표지 및/또는 조성물이 비강으로 사용될 수 있음을 나타내는 사용 설명서와 함께 임의로 제공될 수 있다.
사용 방법
다른 양태에서, 본 개시내용은 유효량의 화학식 (A)의 구조를 갖는 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 투여함을 포함하여, 세균의 성장을 방지 또는 억제하는 방법을 제공한다:
Figure pct00276
(A)
상기 화학식 (A)에서:
X는 -O-, -S- 및 -NR*-로부터 선택되고;
Za 및 Zb는 수소, -Cl, -Br, -OR1 및 -RN으로부터 독립적으로 선택되고; 단 Za 또는 Zb 중 적어도 하나는 수소가 아니고; 여기서:
R1은 수소, RN, 지방족 C1-C20 탄화수소, 방향족 C1-C20 탄화수소, 헤테로방향족 C1-C20 탄화수소, 사이클릭 지방족 C1-C20 탄화수소, 헤테로사이클릭 C1-C20 탄화수소, 및 이의 조합으로부터 선택되고, 이들 각각은 할로겐, O, N, 및 S로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함하고, 여기서 R1은 -F, -Cl, -Br, -I, -OH, -OR*, -NO, -NO2, -NO3, -O-NO, -N3, -NH2, -NHR*, -N(R*)2, -N(R*)3 +, -N(R*)-OH, -O-N(R*)2, -N(R*)-O-R*, -CN, -NC, -(C=O)-R*, -CHO, -CO2H, -CO2R*, -(C=O)-S-R*, -O-(C=O)-H, -O-(C=O)-R*, -S-(C=O)-R*,-(C=O)-NH2, -(C=O)-N(R*)2, -(C=O)-NHNH2, -O-(C=O)-NHNH2, -(C=S)-NH2, -(C=S)-N(R*)2, -N(R*)-CHO, -N(R*)-(C=O)-R*, -SCN, -NCS, -NSO, -SSR*, -SO2R*, -SO2-N(R*)2, -S(=O)-OR*, -S(=O)-R*, -Si(R*)3, -CF3, -O-CF3 및 이의 조합 중 하나 이상으로 임의 치환되고, 단 R1은 n-부틸 그룹이 아니고, X가 -O-이고 Ra가 수소인 경우, R1은 수소가 아니고;
RN은:
Figure pct00277
로부터 선택되고; 여기서
Figure pct00278
기호는 부착 점을 나타내고; R', R" 및 R"'는 수소, C1-C6 지방족 탄화수소, 보호 그룹, 예를 들면, FMOC 및 BOC로부터 선택되거나, 여기서 R' 및 R"는 함께 지방족 모노사이클릭, 지방족 비사이클릭, 또는 지방족 폴리사이클릭 구조를 형성하고;
R2, R3, 및 R4는 수소, 지방족 C1-C20 탄화수소, 및 -(C=O)-R*로부터 독립적으로 선택되고, 이들 각각은 할로겐, O, N, 및 S로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함하고;
Ra는 수소, -F, -Cl, -Br, -I, -OH, -OR*, -NH2, -NHR*, -N(R*)2, -N(R*) 3 +, -(C=O)-R*, -CHO, -CO2H, -CO2R*, -SR*, -SO2R*, 및 지방족 C1-C20 탄화수소로부터 선택되고, 이는 할로겐, O, N, 및 S로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함하고, 여기서 Ra는 -F, -Cl, -Br, -I, -OH, -OR* 중 하나 이상으로 임의 치환되고;
Rb는 수소, -F, -Cl, -Br, -I, -OH, -OR*, -(C=O)-R*, -CHO, -CO2H, -CO2R* 및 지방족 C1-C20 탄화수소로부터 선택되고, 이는 할로겐, O, 및 S로부터 선택된 0 내지 3개의 헤테로원자를 추가로 포함하고, 여기서 Rb는 -F, -Cl, -Br, -I, -OH, -OR* 중 하나 이상으로 임의 치환되고,
R*는 각각의 존재시 수소, 지방족 C1-C20 탄화수소, 방향족 C1-C20 탄화수소, 헤테로방향족 C1-C20 탄화수소, 사이클릭 지방족 C1-C20 탄화수소, 헤테로사이클릭 C1-C20 탄화수소, 및 이의 조합으로부터 독립적으로 선택되고, 이는 할로겐, O, N, 및 S 및 이의 조합으로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함한다.
다른 양태에서, 본 개시내용은 유효량의 화학식 (I) 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 갖는 화합물을 투여함을 포함하여 세균의 성장을 방지 또는 억제하는 방법을 제공한다:
Figure pct00279
여기서:
X는 -O- 및 -NR*-로부터 선택되고;
R1은 RN, 수소, 지방족 C1-C20 탄화수소, 방향족 C1-C20 탄화수소, 헤테로방향족 C1-C20 탄화수소, 사이클릭 지방족 C1-C20 탄화수소, 헤테로사이클릭 C1-C20 탄화수소, 및 이의 조합으로부터 선택되고, 이들 각각은 할로겐, O, N, 및 S로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함하고, 여기서 R1은 -F, -Cl, -Br, -I, -OH, -OR*, -NO, -NO2, -NO3, -O-NO, -N3, -NH2, -NHR*, -N(R*)2, -N(R*)3 +, -N(R*)-OH, -O-N(R*)2, -N(R*)-O-R*, -CN, -NC, -(C=O)-R*, -CHO, -CO2H, -CO2R*, -(C=O)-S-R*, -O-(C=O)-H, -O-(C=O)-R*, -S-(C=O)-R*, -(C=O)-NH2, -(C=O)-N(R*)2, -(C=O)-NHNH2, -O-(C=O)-NHNH2, -(C=S)-NH2, -(C=S)-N(R*)2, -N(R*)-CHO, -N(R*)-(C=O)-R*, -SCN, -NCS, -NSO, -SSR*, -SO2R*, -SO2-N(R*)2, -S(=O)-OR*, -S(=O)-R*, -Si(R*)3, -CF3, -O-CF3 및 이의 조합 중 하나 이상으로 임의 치환되고, 단 R1은 n-부틸 그룹이 아니고, X가 -O-이고 Ra가 수소이면, R1은 수소가 아니고;
RN은:
Figure pct00280
로부터 선택되고; 여기서
Figure pct00281
기호는 부착 점을 나타내고; R', R" 및 R"'는 수소, C1-C6 지방족 탄화수소, 및 FMOC 및 BOC를 포함하는 보호 그룹으로부터 선택되거나, 여기서 R' 및 R"는 함께 지방족 모노사이클릭, 지방족 비사이클릭, 또는 지방족 폴리사이클릭 구조를 형성하고;
R2, R3, 및 R4는 수소, 지방족 C1-C20 탄화수소, 또는 -(C=O)-R*로부터 독립적으로 선택되고 이들 각각은 할로겐, O, N, 및 S로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함하고;
Ra는 수소, F, -Cl, -Br, -I, -OH, -OR*, -NH2, -NHR*, -N(R*)2, -N(R*)3 +, -(C=O)-R*, -CHO, -CO2H, -CO2R*, -SR*, -SO2R*, 및 지방족 C1-C20 탄화수소로부터 선택되고, 이는 할로겐, O, N, 및 S로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함하고, 여기서 Ra는 -F, -Cl, -Br, -I, -OH, -OR* 중 하나 이상으로 임의 치환되고;
Rb는 수소, -F, -Cl, -Br, -I, -OH, -OR*, -(C=O)-R*, -CHO, -CO2H, -CO2R* 및 지방족 C1-C20 탄화수소로부터 선택되고, 이는 할로겐, O, 및 S로부터 선택된 0 내지 3개의 헤테로원자를 추가로 포함하고, 여기서 Rb는 -F, -Cl, -Br, -I, -OH, -OR*중 하나 이상으로 임의 치환되고;
R*는 각각의 존재시 수소, 지방족 C1-C20 탄화수소, 방향족 C1-C20 탄화수소, 헤테로방향족 C1-C20 탄화수소, 사이클릭 지방족 C1-C20 탄화수소, 헤테로사이클릭 C1-C20 탄화수소, 및 이의 조합으로부터 독립적으로 선택되고, 이는 할로겐, O, N, 및 S 및 이의 조합으로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함한다.
다른 양태에서, 본 개시내용은 유효량의 화학식 (I')의 구조를 갖는 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 투여함을 포함하여 세균의 성장을 방지 또는 억제하는 방법을 제공한다:
Figure pct00282
여기서:
X는 -O- 및 -NR*-로부터 선택되고;
R1은 RN, 수소, 지방족 C1-C20 탄화수소, 방향족 C1-C20 탄화수소, 헤테로방향족 C1-C20 탄화수소, 사이클릭 지방족 C1-C20 탄화수소, 헤테로사이클릭 C1-C20 탄화수소, 및 이의 조합으로부터 선택되고, 이들 각각은 할로겐, O, N, 및 S로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함하고, 여기서 R1은 -F, -Cl, -Br, -I, -OH, -OR*, -NO, -NO2, -NO3, -O-NO, -N3, -NH2, -NHR*, -N(R*)2, -N(R*)3 +, -N(R*)-OH, -O-N(R*)2, -N(R*)-O-R*, -CN, -NC, -(C=O)-R*, -CHO, -CO2H, -CO2R*, -(C=O)-S-R*, -O-(C=O)-H, -O-(C=O)-R*, -S-(C=O)-R*, -(C=O)-NH2, -(C=O)-N(R*)2, -(C=O)-NHNH2, -O-(C=O)-NHNH2, -(C=S)-NH2, -(C=S)-N(R*)2, -N(R*)-CHO, -N(R*)-(C=O)-R*, -SCN, -NCS, -NSO, -SSR*, -SO2R*, -SO2-N(R*)2, -S(=O)-OR*, -S(=O)-R*, -Si(R*)3, -CF3, -O-CF3 및 이의 조합 중 하나 이상으로 임의 치환되고, 단, R1은 n-부틸 그룹이 아니고, X가 -O-이고 Ra가 수소이면, R1은 수소가 아니고;
RN은:
Figure pct00283
로부터 선택되고; 여기서
Figure pct00284
기호는 부착 점을 나타내고; R', R" 및 R"'는 수소, C1-C6 지방족 탄화수소, FMOC 및 BOC를 포함하는 보호 그룹으로부터 선택되거나, 여기서 R' 및 R"는 함께 지방족 모노사이클릭, 지방족 비사이클릭, 또는 지방족 폴리사이클릭 구조를 형성하고;
R2, R3, 및 R4는 수소, 지방족 C1-C20 탄화수소, 또는 -(C=O)-R*로부터 독립적으로 선택되고, 이들 각각은 할로겐, O, N, 및 S로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함하고;
Ra는 수소, F, -Cl, -Br, -I, -OH, -OR*, -NH2, -NHR*, -N(R*)2, -N(R*)3 +, -(C=O)-R*, -CHO, -CO2H, -CO2R*, -SR*, -SO2R*, 및 지방족 C1-C20 탄화수소로부터 선택되고, 이는 할로겐, O, N, 및 S로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함하고, 여기서 Ra는 -F, -Cl, -Br, -I, -OH, -OR*중 하나 이상으로 임의 치환되고;
Rb는 수소, -F, -Cl, -Br, -I, -OH, -OR*, -(C=O)-R*, -CHO, -CO2H, -CO2R* 및 지방족 C1-C20 탄화수소로부터 선택되고, 이는 할로겐, O, 및 S로부터 선택된 0 내지 3개의 헤테로원자를 추가로 포함하고, 여기서 Rb는 -F, -Cl, -Br, -I, -OH, -OR*중 하나 이상으로 임의 치환되고;
R*는 각각의 존재시 수소, 지방족 C1-C20 탄화수소, 방향족 C1-C20 탄화수소, 헤테로방향족 C1-C20 탄화수소, 사이클릭 지방족 C1-C20 탄화수소, 헤테로사이클릭 C1-C20 탄화수소, 및 이의 조합으로부터 독립적으로 선택되고, 이는 할로겐, O, N, 및 S 및 이의 조합으로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함한다.
다른 양태에서, 본 개시내용은 유효량의 화학식 (B)의 구조를 갖는 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 투여함을 포함하여 세균의 성장을 방지 또는 억제하는 방법을 제공한다;
Figure pct00285
여기서:
X는 -O- 및 -NR*-로부터 선택되고;
R1은 수소, RN, 지방족 C1-C20 탄화수소, 방향족 C1-C20 탄화수소, 헤테로방향족 C1-C20 탄화수소, 사이클릭 지방족 C1-C20 탄화수소, 헤테로사이클릭 C1-C20 탄화수소, 및 이의 조합으로부터 선택되고, 이들 각각은 할로겐, O, N, 및 S로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함하고, 여기서 R1은 -F, -Cl, -Br, -I, -OH, -OR*, -NO, -NO2, -NO3, -O-NO, -N3, -NH2, -NHR*, -N(R*)2, -N(R*)3 +, -N(R*)-OH, -O-N(R*)2, -N(R*)-O-R*, -CN, -NC, -(C=O)-R*, -CHO, -CO2H, -CO2R*, -(C=O)-S-R*, -O-(C=O)-H, -O-(C=O)-R*, -S-(C=O)-R*,-(C=O)-NH2, -(C=O)-N(R*)2, -(C=O)-NHNH2, -O-(C=O)-NHNH2, -(C=S)-NH2, -(C=S)-N(R*)2, -N(R*)-CHO, -N(R*)-(C=O)-R*, -SCN, -NCS, -NSO, -SSR*, -SO2R*, -SO2-N(R*)2, -S(=O)-OR*, -S(=O)-R*, -Si(R*)3, -CF3, -O-CF3 및 이의 조합 중 하나 이상으로 임의 치환되고, 단, R1은 n-부틸 그룹이 아니고, X가 -O-이고 Ra가 수소이면, R1은 수소가 아니고;
RN은:
Figure pct00286
Figure pct00287
로부터 선택되고; 여기서
Figure pct00288
기호는 부착 점을 나타내고; R', R" 및 R"'은 수소, C1-C6 지방족 탄화수소, 및 플루오레닐메틸옥시카보닐(FMOC) 및 3급-부틸옥시카보닐(BOC)로부터 선택된 보호 그룹으로부터 선택되거나, 여기서 R' 및 R"는 함께 지방족 모노사이클릭, 지방족 비사이클릭, 또는 지방족 폴리사이클릭 구조를 형성하고;
R2, R3, 및 R4는 수소, 지방족 C1-C20 탄화수소, 및 -(C=O)-R*로부터 독립적으로 선택되고, 이들 각각은 할로겐, O, N, 및 S로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함하고;
Ra는 수소, -F, -Cl, -Br, -I, -OH, -OR*, -NH2, -NHR*, -N(R*)2, -N(R*)3 +, -(C=O)-R*, -CHO, -CO2H, -CO2R*, -SR*, -SO2R*, 및 지방족 C1-C20 탄화수소로부터 선택되고, 이는 할로겐, O, N, 및 S로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함하고, 여기서 Ra는 -F, -Cl, -Br, -I, -OH, -OR* 중 하나 이상으로 임의 치환되고;
Rb는 수소, -F, -Cl, -Br, -I, -OH, -OR*, -(C=O)-R*, -CHO, -CO2H, -CO2R* 및 지방족 C1-C20 탄화수소로부터 선택되고, 이는 할로겐, O, 및 S로부터 선택된 0 내지 3개의 헤테로원자를 추가로 포함하고, 여기서 Rb는 -F, -Cl, -Br, -I, -OH, -OR* 중 하나 이상으로 임의 치환되고,
R*는 각각의 존재시 수소, 지방족 C1-C20 탄화수소, 방향족 C1-C20 탄화수소, 헤테로방향족 C1-C20 탄화수소, 사이클릭 지방족 C1-C20 탄화수소, 헤테로사이클릭 C1-C20 탄화수소, 및 이의 조합으로부터 독립적으로 선택되고, 이는 할로겐, O, N, 및 S 및 이의 조합으로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함한다.
다른 양태에서, 본 개시내용은 유효량의, 본원에 제공된 바와 같은 화학식 (IA) (II), (II'), (III), (III'), (IV), (IV'), (V), (V'), (B-1), 및 (B-2) 중 어느 하나에 따른 구조를 갖는 리파마이신 유사체 화합물을 투여함을 포함하여, 세균의 성장을 방지 또는 억제하는 방법을 제공한다. 일 구현예에서, 세균 감염은 그램-양성 세균 감염이다.
일 구현예에서, 세균은 페니실린-내성 세균이다.
일 구현예에서, 세균은 스타필로코쿠스 아우레우스이다.
일 구현예에서, 세균은 MRSA 및 VRSA로부터 선택된 내성 스타필로코쿠스 아우레우스 균주이다.
일 구현예에서, 세균은 메티실린-내성 스타필로코쿠스 아우레우스(MRSA)이다.
일 구현예에서, 세균은 반코마이신-내성 스타필로코쿠스 아우레우스(VRSA)이다.
일 구현예에서, 세균은 메티실린-민감성 스타필로코쿠스 아우레우스(MSSA)이다.
여전히 다른 양태에서, 본 개시내용은 유효량의 화학식 (A)의 구조를 갖는 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 대상체에게 투여함을 포함하여, 이러한 치료가 필요한 대상에서 세균 감염을 치료하는 방법을 제공한다:
Figure pct00289
(A)
상기 화학식 (A)에서:
X는 -O-, -S- 및 -NR*-로부터 선택되고;
Za 및 Zb는 수소, -Cl, -Br, -OR1 및 -RN으로부터 독립적으로 선택되고; 단 Za 또는 Zb 중 적어도 하나는 수소가 아니고; 여기서:
R1은 수소, RN, 지방족 C1-C20 탄화수소, 방향족 C1-C20 탄화수소, 헤테로방향족 C1-C20 탄화수소, 사이클릭 지방족 C1-C20 탄화수소, 헤테로사이클릭 C1-C20 탄화수소, 및 이의 조합으로부터 선택되고, 이들 각각은 할로겐, O, N, 및 S로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함하고, 여기서 R1은 -F, -Cl, -Br, -I, -OH, -OR*, -NO, -NO2, -NO3, -O-NO, -N3, -NH2, -NHR*, -N(R*)2, -N(R*)3 +, -N(R*)-OH, -O-N(R*)2, -N(R*)-O-R*, -CN, -NC, -(C=O)-R*, -CHO, -CO2H, -CO2R*, -(C=O)-S-R*, -O-(C=O)-H, -O-(C=O)-R*, -S-(C=O)-R*,-(C=O)-NH2, -(C=O)-N(R*)2, -(C=O)-NHNH2, -O-(C=O)-NHNH2, -(C=S)-NH2, -(C=S)-N(R*)2, -N(R*)-CHO, -N(R*)-(C=O)-R*, -SCN, -NCS, -NSO, -SSR*, -SO2R*, -SO2-N(R*)2, -S(=O)-OR*, -S(=O)-R*, -Si(R*)3, -CF3, -O-CF3 및 이의 조합 중 하나 이상으로 임의 치환되고, 단 R1은 n-부틸 그룹이 아니고, X가 -O-이고 Ra가 수소인 경우, R1은 수소가 아니고;
RN은:
Figure pct00290
로부터 선택되고; 여기서
Figure pct00291
기호는 부착 점을 나타내고; R', R" 및 R"'는 수소, C1-C6 지방족 탄화수소, 및 플루오레닐메틸옥시카보닐(FMOC) 및 3급-부틸옥시카보닐(BOC)로부터 선택된 보호 그룹으로부터 선택되거나, 여기서 R' 및 R"는 함께 지방족 모노사이클릭, 지방족 비사이클릭, 또는 지방족 폴리사이클릭 구조를 형성하고;
R2, R3, 및 R4는 수소, 지방족 C1-C20 탄화수소, 및 -(C=O)-R*로부터 독립적으로 선택되고, 이들 각각은 할로겐, O, N, 및 S로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함하고;
Ra는 수소, -F, -Cl, -Br, -I, -OH, -OR*, -NH2, -NHR*, -N(R*)2, -N(R*) 3 +, -(C=O)-R*, -CHO, -CO2H, -CO2R*, -SR*, -SO2R*, 및 지방족 C1-C20 탄화수소로부터 선택되고, 이는 할로겐, O, N, 및 S로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함하고, 여기서 Ra는 -F, -Cl, -Br, -I, -OH, -OR* 중 하나 이상으로 임의 치환되고;
Rb는 수소, -F, -Cl, -Br, -I, -OH, -OR*, -(C=O)-R*, -CHO, -CO2H, -CO2R* 및 지방족 C1-C20 탄화수소로부터 선택되고, 이는 할로겐, O, 및 S로부터 선택된 0 내지 3개의 헤테로원자를 추가로 포함하고, 여기서 Rb는 -F, -Cl, -Br, -I, -OH, -OR* 중 하나 이상으로 임의 치환되고,
R*는 각각의 존재시 수소, 지방족 C1-C20 탄화수소, 방향족 C1-C20 탄화수소, 헤테로방향족 C1-C20 탄화수소, 사이클릭 지방족 C1-C20 탄화수소, 헤테로사이클릭 C1-C20 탄화수소, 및 이의 조합으로부터 독립적으로 선택되고, 이는 할로겐, O, N, 및 S 및 이의 조합으로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함한다.
다른 양태에서, 본 개시내용은 유효량의 화학식 (I)의 구조를 갖는 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 대상체에게 투여함을 포함하여, 이러한 치료가 필요한 대상에서 세균 감염을 치료하는 방법을 제공한다:
Figure pct00292
여기서:
X는 -O- 및 -NR*-로부터 선택되고;
R1은 RN, 수소, 지방족 C1-C20 탄화수소, 방향족 C1-C20 탄화수소, 헤테로방향족 C1-C20 탄화수소, 사이클릭 지방족 C1-C20 탄화수소, 헤테로사이클릭 C1-C20 탄화수소, 및 이의 조합으로부터 선택되고, 이들 각각은 할로겐, O, N, 및 S로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함하고, 여기서 R1은 -F, -Cl, -Br, -I, -OH, -OR*, -NO, -NO2, -NO3, -O-NO, -N3, -NH2, -NHR*, -N(R*)2, -N(R*)3 +, -N(R*)-OH, -O-N(R*)2, -N(R*)-O-R*, -CN, -NC, -(C=O)-R*, -CHO, -CO2H, -CO2R*, -(C=O)-S-R*, -O-(C=O)-H, -O-(C=O)-R*, -S-(C=O)-R*, -(C=O)-NH2, -(C=O)-N(R*)2, -(C=O)-NHNH2, -O-(C=O)-NHNH2, -(C=S)-NH2, -(C=S)-N(R*)2, -N(R*)-CHO, -N(R*)-(C=O)-R*, -SCN, -NCS, -NSO, -SSR*, -SO2R*, -SO2-N(R*)2, -S(=O)-OR*, -S(=O)-R*, -Si(R*)3, -CF3, -O-CF3 및 이의 조합 중 하나 이상으로 임의 치환되고, 단 R1은 n-부틸 그룹이 아니고, X가 -O-이고 Ra가 수소이면, R1은 수소가 아니고;
RN은:
Figure pct00293
로 부터 선택되고; 여기서
Figure pct00294
기호는 부착 점을 나타내고; R', R" 및 R"'는 수소, C1-C6 지방족 탄화수소, 및 FMOC 및 BOC를 포함하는 보호 그룹으로부터 선택되거나, 여기서 R' 및 R"는 함께지방족 모노사이클릭, 지방족 비사이클릭, 또는 지방족 폴리사이클릭 구조를 형성하고;
R2, R3, 및 R4는 수소, 지방족 C1-C20 탄화수소, 또는 -(C=O)-R*로부터 독립적으로 선택되고 이들 각각은 할로겐, O, N, 및 S로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함하고;
Ra는 수소, F, -Cl, -Br, -I, -OH, -OR*, -NH2, -NHR*, -N(R*)2, -N(R*)3 +, -(C=O)-R*, -CHO, -CO2H, -CO2R*, -SR*, -SO2R*, 및 지방족 C1-C20 탄화수소로부터 선택되고, 이는 할로겐, O, N, 및 S로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함하고, 여기서 Ra는 -F, -Cl, -Br, -I, -OH, -OR* 중 하나 이상으로 임의 치환되고;
Rb는 수소, -F, -Cl, -Br, -I, -OH, -OR*, -(C=O)-R*, -CHO, -CO2H, -CO2R* 및 지방족 C1-C20 탄화수소로부터 선택되고, 이는 할로겐, O, 및 S로부터 선택된 0 내지 3개의 헤테로원자를 추가로 포함하고, 여기서 Rb는 -F, -Cl, -Br, -I, -OH, -OR*중 하나 이상으로 임의 치환되고;
R*는 각각의 존재시 수소, 지방족 C1-C20 탄화수소, 방향족 C1-C20 탄화수소, 헤테로방향족 C1-C20 탄화수소, 사이클릭 지방족 C1-C20 탄화수소, 헤테로사이클릭 C1-C20 탄화수소, 및 이의 조합으로부터 독립적으로 선택되고, 이는 할로겐, O, N, 및 S 및 이의 조합으로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함한다.
다른 양태에서, 본 개시내용은 유효량의 화학식 (I')의 구조를 갖는 화합물또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 대상체에게 투여함을 포함하여, 이러한 치료가 필요한 대상에서 세균 감염을 치료하는 방법을 제공한다:
Figure pct00295
여기서:
X는 -O- 및 -NR*-로부터 선택되고;
R1은 RN, 수소, 지방족 C1-C20 탄화수소, 방향족 C1-C20 탄화수소, 헤테로방향족 C1-C20 탄화수소, 사이클릭 지방족 C1-C20 탄화수소, 헤테로사이클릭 C1-C20 탄화수소, 및 이의 조합으로부터 선택되고, 이들 각각은 할로겐, O, N, 및 S로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함하고, 여기서 R1은 -F, -Cl, -Br, -I, -OH, -OR*, -NO, -NO2, -NO3, -O-NO, -N3, -NH2, -NHR*, -N(R*)2, -N(R*)3 +, -N(R*)-OH, -O-N(R*)2, -N(R*)-O-R*, -CN, -NC, -(C=O)-R*, -CHO, -CO2H, -CO2R*, -(C=O)-S-R*, -O-(C=O)-H, -O-(C=O)-R*, -S-(C=O)-R*, -(C=O)-NH2, -(C=O)-N(R*)2, -(C=O)-NHNH2, -O-(C=O)-NHNH2, -(C=S)-NH2, -(C=S)-N(R*)2, -N(R*)-CHO, -N(R*)-(C=O)-R*, -SCN, -NCS, -NSO, -SSR*, -SO2R*, -SO2-N(R*)2, -S(=O)-OR*, -S(=O)-R*, -Si(R*)3, -CF3, -O-CF3 및 이의 조합 중 하나 이상으로 임의 치환되고, 단, R1은 n-부틸 그룹이 아니고, X가 -O-이고 Ra가 수소이면, R1은 수소가 아니고;
RN은:
Figure pct00296
로부터 선택되고; 여기서
Figure pct00297
기호는 부착 점을 나타내고; R', R" 및 R"'는 수소, C1-C6 지방족 탄화수소, FMOC 및 BOC로부터 선택된 보호 그룹으로부터 선택되거나, 여기서 R' 및 R"는 함께 지방족 모노사이클릭, 지방족 비사이클릭, 또는 지방족 폴리사이클릭 구조를 형성하고;
R2, R3, 및 R4는 수소, 지방족 C1-C20 탄화수소, 또는 -(C=O)-R*로부터 독립적으로 선택되고, 이들 각각은 할로겐, O, N, 및 S로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함하고;
Ra는 수소, F, -Cl, -Br, -I, -OH, -OR*, -NH2, -NHR*, -N(R*)2, -N(R*)3 +, -(C=O)-R*, -CHO, -CO2H, -CO2R*, -SR*, -SO2R*, 및 지방족 C1-C20 탄화수소로부터 선택되고, 이는 할로겐, O, N, 및 S로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함하고, 여기서 Ra는 -F, -Cl, -Br, -I, -OH, -OR*중 하나 이상으로 임의 치환되고;
Rb는 수소, -F, -Cl, -Br, -I, -OH, -OR*, -(C=O)-R*, -CHO, -CO2H, -CO2R* 및 지방족 C1-C20 탄화수소로부터 선택되고, 이는 할로겐, O, 및 S로부터 선택된 0 내지 3개의 헤테로원자를 추가로 포함하고, 여기서 Rb는 -F, -Cl, -Br, -I, -OH, -OR*중 하나 이상으로 임의 치환되고;
R*는 각각의 존재시 수소, 지방족 C1-C20 탄화수소, 방향족 C1-C20 탄화수소, 헤테로방향족 C1-C20 탄화수소, 사이클릭 지방족 C1-C20 탄화수소, 헤테로사이클릭 C1-C20 탄화수소, 및 이의 조합으로부터 독립적으로 선택되고, 이는 할로겐, O, N, 및 S 및 이의 조합으로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함한다.
여전히 다른 양태에서, 본 개시내용은 유효량의 화학식 (B)의 구조를 갖는 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 대상체에게 투여함을 포함하여, 이러한 치료가 필요한 대상에서 세균 감염을 치료하는 방법을 제공한다:
Figure pct00298
여기서:
X는 -O- 및 -NR*-로부터 선택되고;
R1은 수소, RN, 지방족 C1-C20 탄화수소, 방향족 C1-C20 탄화수소, 헤테로방향족 C1-C20 탄화수소, 사이클릭 지방족 C1-C20 탄화수소, 헤테로사이클릭 C1-C20 탄화수소, 및 이의 조합으로부터 선택되고, 이들 각각은 할로겐, O, N, 및 S로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함하고, 여기서 R1은 -F, -Cl, -Br, -I, -OH, -OR*, -NO, -NO2, -NO3, -O-NO, -N3, -NH2, -NHR*, -N(R*)2, -N(R*)3 +, -N(R*)-OH, -O-N(R*)2, -N(R*)-O-R*, -CN, -NC, -(C=O)-R*, -CHO, -CO2H, -CO2R*, -(C=O)-S-R*, -O-(C=O)-H, -O-(C=O)-R*, -S-(C=O)-R*,-(C=O)-NH2, -(C=O)-N(R*)2, -(C=O)-NHNH2, -O-(C=O)-NHNH2, -(C=S)-NH2, -(C=S)-N(R*)2, -N(R*)-CHO, -N(R*)-(C=O)-R*, -SCN, -NCS, -NSO, -SSR*, -SO2R*, -SO2-N(R*)2, -S(=O)-OR*, -S(=O)-R*, -Si(R*)3, -CF3, -O-CF3 및 이의 조합 중 하나 이상으로 임의 치환되고, 단, R1은 n-부틸 그룹이 아니고, X가 -O-이고 Ra가 수소이면, R1은 수소가 아니고;
RN은:
Figure pct00299
Figure pct00300
로부터 선택되고; 여기서
Figure pct00301
기호는 부착 점을 나타내고; R', R" 및 R"'은 수소, C1-C6 지방족 탄화수소, 및 플루오레닐메틸옥시카보닐(FMOC) 및 3급-부틸옥시카보닐(BOC)로부터 선택된 보호 그룹으로부터 선택되거나, 여기서 R' 및 R"는 함께 지방족 모노사이클릭, 지방족 비사이클릭, 또는 지방족 폴리사이클릭 구조를 형성하고;
R2, R3, 및 R4는 수소, 지방족 C1-C20 탄화수소, 및 -(C=O)-R*로부터 독립적으로 선택되고, 이들 각각은 할로겐, O, N, 및 S로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함하고;
Ra는 수소, -F, -Cl, -Br, -I, -OH, -OR*, -NH2, -NHR*, -N(R*)2, -N(R*)3 +, -(C=O)-R*, -CHO, -CO2H, -CO2R*, -SR*, -SO2R*, 및 지방족 C1-C20 탄화수소로부터 선택되고, 이는 할로겐, O, N, 및 S로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함하고, 여기서 Ra는 -F, -Cl, -Br, -I, -OH, -OR* 중 하나 이상으로 임의 치환되고;
Rb는 수소, -F, -Cl, -Br, -I, -OH, -OR*, -(C=O)-R*, -CHO, -CO2H, -CO2R* 및 지방족 C1-C20 탄화수소로부터 선택되고, 이는 할로겐, O, 및 S로부터 선택된 0 내지 3개의 헤테로원자를 추가로 포함하고, 여기서 Rb는 -F, -Cl, -Br, -I, -OH, -OR* 중 하나 이상으로 임의 치환되고,
R*는 각각의 존재시 수소, 지방족 C1-C20 탄화수소, 방향족 C1-C20 탄화수소, 헤테로방향족 C1-C20 탄화수소, 사이클릭 지방족 C1-C20 탄화수소, 헤테로사이클릭 C1-C20 탄화수소, 및 이의 조합으로부터 독립적으로 선택되고, 이는 할로겐, O, N, 및 S 및 이의 조합으로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함한다.
다른 양태에서, 본 개시내용은 유효량의, 본원에 제공된 바와 같은 화학식 (IA) (II), (II'), (III), (III'), (IV), (IV'), (V), (V'), (B-1), 및 (B-2) 중 어느 하나에 따른 구조를 갖는 리파마이신 유사체 화합물을 투여함을 포함하여, 이러한 치료가 필요한 대상체에서 세균 감염을 치료하는 방법을 제공한다. 일 구현예에서, 세균 감염은 그램-양성 세균 감염이다.
일 구현예에서, 세균은 페니실린-내성 세균 감염이다.
일 구현예에서, 세균은 스타필로코쿠스 아우레우스 감염이다.
일 구현예에서, 세균 감염은 세포내 세균 감염이다.
일 구현예에서, 대상체는 사람이다.
일 구현예에서, 방법은 제2의 치료제를 투여함을 추가로 포함한다.
일 구현예에서, 제2의 치료제는 제2의 항생제이다.
일 구현예에서, 제2의 항생제는 스타필로코쿠스 아우레우스에 대해 효과적이다.
일 구현예에서, 제2의 항생제는 아미노글리코시드, 베타-락탐, 마크롤리드, 사이클릭 펩타이드, 테트라사이클린, 플루오로퀴놀린, 플루오로퀴놀론, 및 옥사졸리디논으로부터 선택된다.
일 구현예에서, 제2의 항생제는 클린다마이신, 노보비오신, 레타파물린, 답토마이신, 시타플록사신, 테이코플라닌, 트리클로산, 나프티리돈, 라데졸리드, 독소루비신, 암피실린, 반코마이신, 이미페넴, 도리페님, 겜시타빈, 달바반신, 및 아지트로마이신으로부터 선택된다.
일 구현예에서, 화합물은 대상체에게 경구적으로, 국소적으로, 비강내로, 정맥내로, 근육내로, 또는 피하로 투여된다.
다른 구현예에서, 본 개시내용은 유효량의 화학식 (I)의 구조를 갖는 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 투여함을 포함하여, 세균의 성장을 방지 또는 억제하는 방법을 제공한다:
Figure pct00302
여기서:
X는 -O-, -S- 및 -NR*-로부터 선택되고;
R1은 수소; 지방족 C1-C20 탄화수소; 방향족 C1-C20 탄화수소; 헤테로방향족 C1-C20 탄화수소; 사이클릭 지방족 C1-C20 탄화수소; 헤테로사이클릭 C1-C20 탄화수소; 및 이의 조합으로부터 선택되고, 이들 각각은 할로겐, O, N, 및 S로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함하고, 여기서 R1은 -F; -Cl; -Br; -I; -OH; -OR*; -NO; -NO2; -NO3; -O-NO; -N3; -NH2; -NHR*; -N(R*)2; -N(R*)3 +; -N(R*)-OH; -O-N(R*)2; -N(R*)-O-R*; -CN; -NC; -(C=O)-R*; -CHO; -CO2H; -CO2R*; -(C=O)-S-R*; -O-(C=O)-H; -O-(C=O)-R*; -S-(C=O)-R*; -(C=O)-NH2; -(C=O)-N(R*)2; -(C=O)-NHNH2; -O-(C=O)-NHNH2; -(C=S)-NH2; -(C=S)-N(R*)2; -N(R*)-CHO; -N(R*)-(C=O)-R*; -SCN; -NCS; -NSO; -SSR*; -SO2R*; -SO2-N(R*)2; -S(=O)-OR*; -S(=O)-R*; -Si(R*)3; -CF3; -O-CF3 및 이의 조합 중 하나 이상으로 임의 치환되고, 단 R1은 n-부틸 그룹이 아니고, 여기서 X가 -O-이고 Ra가 수소이면, R1은 수소가 아니고;
R2, R3, 및 R4는 수소, 직쇄, 측쇄 또는 사이클릭 지방족 C1-C20 탄화수소, 또는 -(C=O)-R*로부터 독립적으로 선택되고 이들 각각은 할로겐, O, N, 및 S로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함하고;
Ra는 수소; F; -Cl; -Br; -I; -OH; -OR*; -NH2; -NHR*; -N(R*)2; -N(R*)3 +; -(C=O)-R*; -CHO; -CO2H; -CO2R*; -SR*; -SO2R*; 및 지방족 C1-C20 탄화수소로부터 선택되고, 이는 할로겐, O, N, 및 S로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함하고, 여기서 Ra는 -F; -Cl; -Br; -I; -OH; -OR* 중 하나 이상으로 임의 치환되고;
Rb는 각각의 존재시 수소 원자이고,
R*는 각각의 존재시 수소, 지방족 C1-C20 탄화수소, 방향족 C1-C20 탄화수소, 헤테로방향족 C1-C20 탄화수소, 사이클릭 지방족 C1-C20 탄화수소, 헤테로사이클릭 C1-C20 탄화수소, 및 이의 조합으로부터 독립적으로 선택되고, 이는 할로겐, O, N, 및 S 및 이의 조합으로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함한다.
여전히 다른 양태에서, 본 개시내용은 유효량의 화학식 (I')의 구조를 갖는 리파마이신 유사체 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 투여함을 포함하여, 이러한 치료가 필요한 대상체에서 세균 감염을 치료하는 방법을 제공한다:
Figure pct00303
여기서:
X는 -O-, -S- 및 -NR*-로부터 선택되고;
R1은 수소; 지방족 C1-C20 탄화수소; 방향족 C1-C20 탄화수소; 헤테로방향족 C1-C20 탄화수소; 사이클릭 지방족 C1-C20 탄화수소; 헤테로사이클릭 C1-C20 탄화수소; 및 이의 조합으로부터 선택되고, 이들 각각은 할로겐, O, N, 및 S로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함하고, 여기서 R1은 -F; -Cl; -Br; -I; -OH; -OR*; -NO; -NO2; -NO3; -O-NO; -N3; -NH2; -NHR*; -N(R*)2; -N(R*)3 +; -N(R*)-OH; -O-N(R*)2; -N(R*)-O-R*; -CN; -NC; -(C=O)-R*; -CHO; -CO2H; -CO2R*; -(C=O)-S-R*; -O-(C=O)-H; -O-(C=O)-R*; -S-(C=O)-R*; -(C=O)-NH2; -(C=O)-N(R*)2; -(C=O)-NHNH2; -O-(C=O)-NHNH2; -(C=S)-NH2; -(C=S)-N(R*)2; -N(R*)-CHO; -N(R*)-(C=O)-R*; -SCN; -NCS; -NSO; -SSR*; -SO2R*; -SO2-N(R*)2; -S(=O)-OR*; -S(=O)-R*; -Si(R*)3; -CF3; -O-CF3 및 이의 조합 중 하나 이상으로 임의 치환되고, 단 R1은 n-부틸 그룹이 아니고, 여기서 X가 -O-이고 Ra가 수소이면, R1은 수소가 아니고;
R2, R3, 및 R4는 수소, 직쇄, 측쇄 또는 사이클릭 지방족 C1-C20 탄화수소, 또는 -(C=O)-R*로부터 독립적으로 선택되고 이들 각각은 할로겐, O, N, 및 S로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함하고;
Ra는 수소; F; -Cl; -Br; -I; -OH; -OR*; -NH2; -NHR*; -N(R*)2; -N(R*)3 +; -(C=O)-R*; -CHO; -CO2H; -CO2R*; -SR*; -SO2R*; 및 지방족 C1-C20 탄화수소로부터 선택되고, 이는 할로겐, O, N, 및 S로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함하고, 여기서 Ra는 -F; -Cl; -Br; -I; -OH; -OR* 중 하나 이상으로 임의 치환되고;
Rb는 각각의 존재시 수소 원자이고,
R*는 각각의 존재시 수소, 지방족 C1-C20 탄화수소, 방향족 C1-C20 탄화수소, 헤테로방향족 C1-C20 탄화수소, 사이클릭 지방족 C1-C20 탄화수소, 헤테로사이클릭 C1-C20 탄화수소, 및 이의 조합으로부터 독립적으로 선택되고, 이는 할로겐, O, N, 및 S 및 이의 조합으로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함한다.
일 양태에서, 본 개시내용은 유효량의 본 개시내용의 리파마이신 유사체 화합물, 또는 본 개시내용의 리파마이신 유사체 화합물을 포함하는 약제학적 조성물, 또는 본 개시내용의 리파마이신 유사체 화합물을 포함하는 약제학적 투여량 형태를 투여함을 포함하여 세균의 성장을 방지 또는 예방하는 방법을 제공한다.
다른 양태에서, 본 개시내용은 유효량의 본 개시내용의 리파마이신 유사체 화합물, 또는 본 개시내용의 리파마이신 유사체 화합물을 포함하는 약제학적 조성물, 또는 본 개시내용의 리파마이신 유사체 화합물을 포함하는 약제학적 투여량 형태를 투여함을 포함하여 이러한 치료가 필요한 대상체에서 세균 감염을 치료하는 방법을 제공한다.
일 구현예에서, 화합물, 조성물, 또는 투여량 형태는 대상체에게 경구적으로, 국소적으로, 비강내로, 정맥내로, 근육내로, 또는 피하로 투여된다.
ADC에 적합한 항-MSR1 항체
본원에 기술된 항체-약물 접합체는 전체 길이의 항-MSR1 항체(예를 들면, IgG1 또는 IgG4 항체)를 포함할 수 있거나, 항원-결합 부위 만(예를 들면, Fab, F(ab')2 또는 scFv 단편), 만을 포함할 수 있고 변형되어 기능성, 예컨대, 잔류 작용기 기능을 제거할 수 있다(Reddy et al., 2000, J. Immunol. 164:1925-1933).
본원에 기술된 항체-약물 접합체의 구현예는 표 9 및 10에 나타낸 항-MSR1 항체를 포함할 수 있다. 표 9는 예시적인 항-MSR1 항체의 중쇄 가변 영역(HCVR), 경쇄 가변 영역(LCVR), 중쇄 상보성 결정 영역(HCDR1, HCDR2 및 HCDR3), 및 경쇄 상보성 결정 영역(LCDR1, LCDR2 및 LCDR3)의 아미노산 서열 확인인자를 나타낸다. 표 10은 예시적인 항-MSR1 항체의 HCVR, LCVR, HCDR1, HCDR2 HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3의 핵산 서열 확인인자를 나타낸다.
본원에 기술된 항체-약물 접합체에 적합한 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 MSR1에 특이적으로 결합하는 것을 포함하고 표 9에 나타낸 임의의 HCVR 아미노산 서열로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HCVR, 또는 이에 대해 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 이의 실질적으로 유사한 서열을 포함한다.
MSR1에 특이적으로 결합하는 추가의 적합한 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 표 9에 나타낸 임의의 LCVR 아미노산 서열로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 LCVR, 또는 이에 대해 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 이의 실질적으로 유사한 서열을 포함한다.
추가로 MSR1에 특이적으로 결합하는 적합한 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 표 9에 나타낸 임의의 LCVR 아미노산 서열과 쌍을 이룬 표 9에 나타낸 임의의 HCVR 아미노산 서열을 포함하는 HCVR 및 LCVR 아미노산 서열 쌍(HCVR/LCVR)을 포함한다. 특정의 구현예는 표 9에 나타낸 예시적인 항-MSR1 항체내에 함유된 HCVR/LCVR 아미노산 서열 쌍을 포함하는, 항체, 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는 항체-약물 접합체에 관한 것이다. 일부 구현예에서, HCVR/LCVR 아미노산 서열 쌍은 2/10, 23/42, 50/58; 90/98, 및 282/290으로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.
본원에 기술된 항체-약물 접합체에 적합한 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 MSR1에 특이적으로 결합하고 표 9에 나타낸 임의의 HCDR1 아미노산 서열로부터 선택된 아미노산 서열 또는 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 이의 실질적으로 유사한 서열을 포함하는 중쇄 CDR1(HCDR1)을 포함하는 것을 포함한다.
MSR1에 특이적으로 결합하는 추가로 적합한 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 표 9에 나타낸 임의의 HCDR2 아미노산 서열로부터 선택된 아미노산 서열 또는 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 이의 실질적으로 유사한 서열로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR2(HCDR2)을 포함한다.
MSR1에 특이적으로 결합하는 추가로 적합한 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 표 9에 나타낸 임의의 HCDR3 아미노산 서열로부터 선택된 아미노산 서열 또는 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 이의 실질적으로 유사한 서열로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR3(HCDR3)을 포함한다.
본원에 기술된 항체-약물 접합체에 적합한 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 MSR1에 특이적으로 결합하고 표 9에 나타낸 임의의 LCDR1 아미노산 서열로부터 선택된 아미노산 서열 또는 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 이의 실질적으로 유사한 서열을 포함하는 경쇄 CDR1(LCDR1)을 포함하는 것을 포함한다.
MSR1에 특이적으로 결합하는 추가로 적합한 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 표 9에 나타낸 임의의 LCDR2 아미노산 서열로부터 선택된 아미노산 서열 또는 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 이의 실질적으로 유사한 서열로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR2(LCDR2)을 포함한다.
MSR1에 특이적으로 결합하는 추가로 적합한 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 표 9에 나타낸 임의의 LCDR3 아미노산 서열로부터 선택된 아미노산 서열 또는 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 이의 실질적으로 유사한 서열로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR3(LCDR3)을 포함한다.
MSR1에 특이적으로 결합하는 추가로 적합한 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 표 9에 나타낸 임의의 LCDR3 아미노산 서열과 쌍을 이룬 표 9에 나타낸 임의의 HCDR3 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3 및 LCDR3 아미노산 서열 쌍(HCDR3/LCDR3)을 포함한다. 특정의 구현예는 표 9에 나타낸 임의의 예시적인 항-MSR1 항체내에 함유된 HCDR3/LCDR3 아미노산 서열 쌍을 포함하는, 항체, 또는 이의 항원-결합 단편에 관한 것이다. 일부 구현예에서, HCDR3/LCDR3 아미노산 서열 쌍은 8/16, 40/48, 56/64; 96/104, 및 288/296으로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.
본원에 기술된 항체-약물 접합체에 적합한 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 MSR1에 특이적으로 결합하고 표 9에 나타낸 임의의 예시적인 항-MSR1 항체내에 함유된 6개의 CDR 세트(즉, HCDR1-HCDR2-HCDR3-LCDR1-LCDR2-LCDR3)를 포함한다. 특정의 구현예에서, HCDR1-HCDR2-HCDR3-LCDR1-LCDR2-LCDR3 아미노산 서열 세트는 4-6-8-12-14-16; 36-38-40-44-46-48; 52-54-56-60-62-64; 92-94-96-100-102-104, 및 284-286-288-292-294-296으로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.
관련 구현예에서, MSR1에 특이적으로 결합하는 적합한 항체, 또는 이의 항원-결합 단편은 표 9에 나타낸 예시적인 항-MSR1 항체에 정의된 바와 같은 HCVR/LCVR 아미노산 서열 쌍 내에 함유된 6개의 CDR 세트(즉, HCDR1-HCDR2-HCDR3-LCDR1-LCDR2-LCDR3)을 포함한다. 예를 들면, 본 개시내용은 MSR1에 특이적으로 결합하고 2/10, 23/42, 50/58, 90/98, 및 282/290으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 HCVR/LCVR 아미노산 서열 쌍내에 함유된 HCDR1-HCDR2-HCDR3-LCDR1-LCDR2-LCDR3 아미노산 서열 세트를 포함한다. HCVR 및 LCVR 아미노산 서열내 CDR을 확인하는 방법 및 기술은 당해 분야에 잘 공지되어 있고 본원에 개시된 구체적인 HCVR 및/또는 LCVR 아미노산 서열 내 CDR을 확인하는데 사용될 수 있다. CDR의 경계를 확인하는데 사용될 수 있는 예시적인 관례는 예컨대, 카밧 정의(Kabat definition), 초티아 정의(Chothia definition), 및 AbM 정의를 포함한다. 일반적인 용어에서, 카밧 정의는 서열 가변성을 기반으로 하고, 초티아 정의는 구조적 루프 영역의 위치를 기반으로 하며, AbM 정의는 카밧과 초티아 접근법 사이의 절충이다. 예컨대, 문헌: Kabat, "Sequences of Proeins of Immunological Interest," National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991); Al-Lazikani et al., J. Mol. Biol. 273:927-948 (1997); 및 Martin et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86:9268-9272 (1989)를 참고한다. 공공 데이타베이스가 또한 항체내 CDR 서열을 확인하는데 이용가능하다.
본원에 기술된 항체-약물 접합체의 제조를 위한 항-MSR1 항체 또는 이의 부위를 포함하는 핵산 분자가 또한 본원에 제공된다. 예를 들면, 표 9에 나타낸 임의의 HCVR 아미노산 서열을 암호화하는 핵산 분자가 본원에 제공되고; 특정의 구현예에서 핵산 분자는 표 10에 나타낸 임의의 HCVR 핵산 서열, 또는 이에 대해 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 이의 실질적으로 유사한 서열로부터 선택된 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함할 수 있다.
또한 표 9에 나타낸 임의의 LCVR 아미노산 서열을 암호화하는 핵산 분자가 본원에 제공되고; 특정의 구현예에서 핵산 분자는 표 10에 나타낸 임의의 LCVR 핵산 서열, 또는 이에 대해 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 이의 실질적으로 유사한 서열로부터 선택된 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함할 수 있다.
표 9에 나타낸 임의의 HCVR1 아미노산 서열을 암호화하는 핵산 분자가 또한 본원에 제공되고; 특정의 구현예에서 핵산 분자는 표 10에 나타낸 임의의 HCVR1 핵산 서열, 또는 이에 대해 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 이의 실질적으로 유사한 서열로부터 선택된 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함할 수 있다.
표 9에 나타낸 임의의 HCVR2 아미노산 서열을 암호화하는 핵산 분자가 또한 본원에 제공되고; 특정의 구현예에서 핵산 분자는 표 10에 나타낸 임의의 HCVR2 핵산 서열, 또는 이에 대해 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 이의 실질적으로 유사한 서열로부터 선택된 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함할 수 있다.
표 9에 나타낸 임의의 HCVR3 아미노산 서열을 암호화하는 핵산 분자가 또한 본원에 제공되고; 특정의 구현예에서 핵산 분자는 표 10에 나타낸 임의의 HCVR3 핵산 서열, 또는 이에 대해 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 이의 실질적으로 유사한 서열로부터 선택된 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함할 수 있다.
표 9에 나타낸 임의의 LCVR1 아미노산 서열을 암호화하는 핵산 분자가 또한 본원에 제공되고; 특정의 구현예에서 핵산 분자는 표 10에 나타낸 임의의 LCVR1 핵산 서열, 또는 이에 대해 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 이의 실질적으로 유사한 서열로부터 선택된 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함할 수 있다.
표 9에 나타낸 임의의 LCVR2 아미노산 서열을 암호화하는 핵산 분자가 또한 본원에 제공되고; 특정의 구현예에서 핵산 분자는 표 10에 나타낸 임의의 LCVR2 핵산 서열, 또는 이에 대해 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 이의 실질적으로 유사한 서열로부터 선택된 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함할 수 있다.
표 9에 나타낸 임의의 LCVR3 아미노산 서열을 암호화하는 핵산 분자가 또한 본원에 제공되고; 특정의 구현예에서 핵산 분자는 표 10에 나타낸 임의의 LCVR3 핵산 서열, 또는 이에 대해 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 이의 실질적으로 유사한 서열로부터 선택된 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함할 수 있다.
HCVR을 암호화하는 핵산 분자가 또한 본원에 제공되며, 여기서 HCVR은 3개의 CDR의 세트(즉, HCDR1-HCDR2-HCDR3)를 포함할 수 있고, 여기서 HCDR1-HCDR2-HCDR3 아미노산 서열 세트는 표 9에 나타낸 임의의 예시적인 항-MSR1 항체에 의해 정의된 바와 같다.
LCVR을 암호화하는 핵산 분자가 또한 본원에 제공되며, 여기서 LCVR은 3개의 CDR의 세트(즉, LCDR1-LCDR2-LCDR3)를 포함할 수 있고, 여기서 LCDR1-LCDR2-LCDR3 아미노산 서열 세트는 표 9에 나타낸 임의의 예시적인 항-MSR1 항체에 의해 정의된 바와 같다.
HCVR 및 LCVR을 암호화하는 핵산 분자가 또한 본원에 제공되며, 여기서 HCVR은 표 9에 나타낸 임의의 HCVR 아미노산 서열의 아미노산 서열을 포함할 수 있고, 여기서 LCVR은 표 9에 나타낸 임의의 LCVR 아미노산 서열의 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 특정의 구현예에서, 핵산 분자는 표 10에 나타낸 임의의 HCVR 핵산 서열로부터 선택된 폴리뉴클레오타이드 서열, 또는 이에 대해 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 이의 실질적으로 유사한 서열, 및 표 10에 나타낸 임의의 LCVR 핵산 서열로부터 선택된 폴리뉴클레오타이드 서열, 또는 이에 대해 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 이의 실질적으로 유사한 서열을 포함할 수 있다. 본 개시내용의 이러한 양태에 따른 특정의 구현예에서, 핵산 분자는 HCVR 및 LCVR을 암호화하고, 여기서 HCVR 및 LCVR은 둘 다 표 9에 나타낸 동일한 항-MSR1 항체로부터 유래된다.
본원에 기술된 항체-약물 접합체의 제조를 위한 항-MSR1 항체의 중쇄 또는 경쇄 가변 영역을 포함하는 폴리펩타이드를 발현할 수 있는 재조합 발현 벡터가 본원에 제공된다. 예를 들면, 구현예는 상기 언급한 임의의 핵산 분자, 즉, 표 9에 나타낸 임의의 HCVR, LCVR, 및/또는 CDR 서열을 포함하는 재조합 발현 벡터를 포함한다. 또한 이러한 벡터가 도입된 숙주 세포 뿐만 아니라 숙주 세포를 항체 또는 항체 단편의 생산을 허용하는 상태 하에 배양하고, 이렇게 생산된 항체 및 항체 단편을 회수함으로써 본원에 기술된 항체-약물 접합체를 제조하기 위한 항체 또는 이의 부위의 생산 방법이 본원에 제공된다.
본원에 기술된 항체-약물 접합체에 적합한 항-MSR1 항체는 변형된 글리코실화 패턴을 갖는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 목적하지 않은 글리코실화 부위를 제거하기 위한 변형이 유용할 수 있거나, 푸코즈 모이어티를 결여한 항체가 예를 들면, 항체 의존적 세포 세포독성(ADCC) 기능을 증가시키기 위해 올리고사카라이드 쇄 상에 존재한다(참고: Shield et al. (2002) JBC 277:26733). 다른 출원에서, 글리코실화의 변형은 상보체 의존성 세포독성(CDC)를 변형시키기 위하여 이루어질 수 있다. 다른 출원에서, 갈락토실화의 변형은 상보체 의존성 세포독성(CDC)을 변형시키기 위하여 이루어질 수 있다.
특정의 구현예에 따라서, 본 개시내용에 따른 항체-약물 접합체는 예컨대, 중성 pH와 비교하여 산성 pH에서, FcRn 수용체에 대한 항체 결합을 향상시키거나 약화시키는 하나 이상의 돌연변이를 포함하는 Fc 도메인을 포함하는 항-MSR1 항체를 포함한다. 예를 들면, Fc 도메인의 CH2 또는 CH3 영역내 돌연변이를 포함하는 항-MSR1 항체를 포함하는 항체-약물 접합체가 본원에 제공되고, 여기서 돌연변이(들)는 산성 환경(예컨대, pH가 약 5.5 내지 약 6.0의 범위인 엔도소옴)에서 FcRn에 대한 Fc 도메인의 친화성을 증가시킨다. 이러한 돌연변이는 동물에게 투여된 경우 항체의 혈청 반감기의 증가를 야기할 수 있다. 이러한 Fc 변형의 비-제한적 예는 예컨대, 변형 at position 250번(예컨대, E 또는 Q); 250 및 428번(예컨대, L 또는 F); 252번(예컨대, L/Y/F/W 또는 T), 254번(예컨대, S 또는 T), 및 256번(예컨대, S/R/Q/E/D 또는 T)에서의 변형; 또는 428 및/또는 433번(예컨대, H/L/R/S/P/Q 또는 K) 및/또는 434번(예컨대, H/F 또는 Y)에서의 변형; 또는 250번 및/또는 428번에서의 변형; 또는 307 또는 308번(예컨대, 308F, V308F), 및 434번에서의 변형을 포함한다. 일 구현예에서, 변형은 428L(예컨대, M428L) 및 434S(예컨대, N434S) 변형; 428L, 259I(예컨대, V259I), 및 308F(예컨대, V308F) 변형; 433K(예컨대, H433K) 및 434(예컨대, 434Y) 변형; 252, 254, 및 256(예컨대, 252Y, 254T, 및 256E) 변형; 250Q 및 428L 변형(예컨대, T250Q 및 M428L); 및 307 및/또는 308 변형(예컨대, 308F 또는 308P)을 포함할 수 있다.
예를 들면, 구현예는 250Q 및 248L(예컨대, T250Q 및 M248L); 252Y, 254T 및 256E(예컨대, M252Y, S254T 및 T256E); 428L 및 434S(예컨대, M428L 및 N434S); 및 433K 및 434F(예컨대, H433K 및 N434F)로 이루어진 그룹으로부터 선택된 돌연변이의 하나 이상의 쌍 또는 그룹을 포함하는 Fc 도메인을 포함하는 항-MSR1 항체를 포함하는 항체-약물 접합체를 포함한다. Fc 도메인 돌연변이, 및 본원에 개시된 항체 가변 도메인내 다른 돌연변이의 모든 가능한 조합은 본 개시내용의 범위내에서 고려된다.
항-MSR1 항체의 생물학적 특성
구현예는 사람 MSR1에 고 친화성으로 결합하는 리파마이신 유사체 및 항체 및 이의 항원-결합 단편을 포함하는 항체-약물 접합체를 포함한다. 예를 들면, 본 개시내용은 예컨대, 본원의 실시예 25에 정의된 바와 같은 검정 양식, 또는 실질적으로 유사한 검정을 사용하여, 25℃ 또는 37℃에서 표면 플라스몬 공명에 의해 측정된 것으로서 약 10 nM 미만의 KD로 N-말단 노나히스티딘 태그(서열 번호: 688)(예컨대, His9-hMSR1)와 함께 발현된 사람 MSR1 세포외 도메인을 결합시키는 항체-약물 접합체를 포함한다. 특정의 구현예에 따라서, 본원의 실시예 25에 정의된 바와 같은 검정 양식, 또는 실질적으로 유사한 검정을 사용하여, 표면 플라스몬 공명에 의해 측정된 것으로서, 37℃에서 약 10 nM 미만, 약 9 nM 미만, 약 8 nM 미만, 약 7 nM 미만, 약 6 nM 미만, 약 5 nM 미만, 약 4 nM 미만, 약 3 nM 미만, 약 2 nM 미만, 약 1 nM 미만, 약 900 pM 미만, 약 800 pM 미만, 약 700 pM 미만, 약 600 pM 미만, 약 500 pM 미만, 약 400 pM 미만, 약 300 pM 미만, 약 200 pM 미만, 약 100 pM 미만, 약 90 pM 미만, 약 80 pM 미만, 약 70 pM 미만, 약 60 pM 미만, 약 50 pM 미만, 약 40 pM 미만, 약 30 pM 미만, 약 20 pM, 또는 약 10 pM 미만의 KD로 사람 MSR1에 결합하는 항-MSR1 항체를 포함하는 항체-약물 접합체가 제공된다. 일부 구현예에서, 항체-약물 접합체는 본원의 실시예 25에 정의된 바와 같은 검정 양식, 또는 실질적으로 유사한 검정을 사용하여, 표면 플라스몬 공명에 의해 측정된 것으로서, 25℃에서 약 6 nM 미만, 약 5 nM 미만, 약 4 nM 미만, 약 3 nM 미만, 약 2 nM 미만, 약 1 nM 미만, 약 900 pM 미만, 약 800 pM 미만, 약 700 pM 미만, 약 600 pM 미만, 약 500 pM 미만, 약 400 pM 미만, 약 300 pM 미만, 약 200 pM 미만, 약 100 pM 미만, 약 90 pM 미만, 약 80 pM 미만, 약 70 pM 미만, 약 60 pM 미만, 약 50 pM 미만, 약 40 pM 미만, 약 30 pM, 또는 약 20 pM 미만의 KD로 사람 MSR1에 결합하는 본원에 개시된 항-MSR1 항체를 포함한다.
구현예는 또한 원숭이 MSR1에 고 친화성으로 결합하는 항체 및 이의 항원-결합 단편을 포함하는 항체-약물 접합체를 포함한다. 예를 들면, 예컨대, 본원의 실시예 25에 정의된 바와 같은 검정 양식, 또는 실질적으로 유사한 검정을 사용하여, 25℃ 또는 37℃에서 표면 플라스몬 공명에 의해 측정된 것으로서 약 20 nM 미만의 KD로 N-말단 myc-myc-헥사히스티딘 태그(서열 번호: 689로 개시된 "헥사히스티딘")(예컨대, HMM-mfMSR1)와 함께 발현된 원숭이 MSR1 세포외 도메인을 결합시키는 항체-약물 접합체가 본원에 제공된다. 특정의 구현예에 따라서, 본원의 실시예 25에 정의된 바와 같은 검정 양식, 또는 실질적으로 유사한 검정을 사용하여, 표면 플라스몬 공명에 의해 측정된 것으로서, 37℃에서 약 20 nM 미만, 약 18 pM 미만, 약 15 nM 미만, 약 12 nM 미만, 약 10 nM 미만, 약 9 nM 미만, 약 8 nM 미만, 약 7 nM 미만, 약 6 nM 미만, 약 5 nM 미만, 약 4 nM 미만, 약 3 nM 미만, 약 2 nM 미만, 약 1 nM 미만, 약 900 pM 미만, 약 800 pM 미만, 약 700 pM 미만, 약 600 pM 미만, 약 500 pM 미만, 약 400 pM 미만, 약 300 pM 미만, 약 200 pM 미만, 약 100 pM 미만, 약 90 pM 미만, 약 80 pM 미만, 약 70 pM 미만, 약 60 pM 미만, 약 50 pM 미만, 약 40 pM 미만, 약 30 pM 미만, 약 20 pM, 또는 약 10 pM 미만의 KD로 원숭이 msr1을 결합시키는 항-MSR1 항체를 포함하는 항체-약물 접합체가 제공된다. 일부 구현예에서, 본원에 개시된 항-MSR1 항체를 포함하는 항체-약물 접합체는 본원의 실시예 25에 정의된 바와 같은 검정 양식, 또는 실질적으로 유사한 검정을 사용하여, 표면 플라스몬 공명에 의해 측정된 것으로서, 25℃에서 약 12 nM 미만, 약 10 nM 미만, 약 9 nM 미만, 약 8 nM 미만, 약 7 nM 미만, 약 6 nM 미만, 약 5 nM 미만, 약 4 nM 미만, 약 3 nM 미만, 약 2 nM 미만, 약 1 nM 미만, 약 900 pM 미만, 약 800 pM 미만, 약 700 pM 미만, 약 600 pM 미만, 약 500 pM 미만, 약 400 pM 미만, 약 300 pM 미만, 약 200 pM 미만, 약 100 pM 미만, 약 90 pM 미만, 약 80 pM 미만, 약 70 pM 미만, 약 60 pM 미만, 약 50 pM 미만, 약 40 pM 미만, 약 30 pM, 또는 약 20 pM 미만의 KD로 원숭이 MSR1을 결합시킨다.
본 개시내용은 또한 예컨대, 본원의 실시예 25에 정의된 바와 같은 검정 양식, 또는 실질적으로 유사한 검정을 사용하여, 25℃ 또는 37℃에서 표면 플라스몬 공명에 의해 측정된 것으로서 약 5분 초과의 해리 반감기(t½)로 N-말단 노나히스티딘 태그(서열 번호: 688)(예컨대, His9-hMSR1)와 함께 발현된 사람 MSR1 세포외 도메인에 결합하는 항체 및 이의 항원-결합 단편을 포함하는 항체-약물 접합체를 포함한다. 특정의 구현예에 따라서, 본원의 실시예 25에 정의된 바와 같은 검정 양식, 또는 실질적으로 유사한 검정을 사용하여, 표면 플라스몬 공명에 의해 측정된 것으로서, 37℃에서 약 4분 초과, 약 5분 초과, 약 6분 초과, 약 8분 초과, 약 10분 초과, 약 12분 초과, 약 14분 초과, 약 16분 초과, 약 18분 초과, 약 20분 초과, 약 30분 초과, 약 40분 초과, 약 50분 초과, 약 60분 초과, 약 70분 초과, 약 80분 초과, 약 90분 초과, 약 120분 초과, 약 150분 초과, 약 180분 초과, 약 210분 초과, 약 240분 이상의 t½로 사람 MSR1을 결합시키는 항-MSR1 항체를 포함하는 항체-약물 접합체가 제공된다.
구현예는 또한 N-말단 myc-myc-헥사히스티딘 태그(서열 번호: 689로서 개시된 "헥사히스티딘")(예컨대, HMM-mfMSR1)와 함께 발현된 원숭이 MSR1 세포외 도메인에 고 친화성으로 결합하는 항체 및 이의 항원-결합 단편을 포함하는 항체-약물 접합체를 포함한다. 예를 들면, 본 개시내용은 예컨대, 본원의 실시예 25에 정의된 바와 같은 검정 양식, 또는 실질적으로 유사한 검정을 사용하여, 25℃ 또는 37℃에서 표면 플라스몬 공명에 의해 측정된 것으로서 약 20 nM 미만의 KD로 HMM-mfMSR1을 결합시키는 항-MSR1 항체를 포함하는 항체-약물 접합체가 본원에 제공된다. 특정의 구현예에 따라서, 본원의 실시예 25에 정의된 바와 같은 검정 양식, 또는 실질적으로 유사한 검정을 사용하여, 표면 플라스몬 공명에 의해 측정된 것으로서, 37℃에서 약 20 nM 미만, 약 15 nM 미만, 약 10 nM 미만, 약 9 nM 미만, 약 8 nM 미만, 약 7 nM 미만, 약 6 nM 미만, 약 5 nM 미만, 약 4 nM 미만, 약 3 nM 미만, 약 2-nM 미만, 약 1 nM 미만, 약 900 pM 미만, 약 800 pM 미만, 약 800-pM 미만, 약 700 pM 미만, 약 600 pM 미만, 약 500 pM 미만, 약 400 pM 미만, 약 300 pM 미만, 약 200 pM 미만, 약 150 pM 미만, 약 100 pM 미만, 약 90 pM 미만, 약 80 pM 미만, 약 70 pM 미만, 약 60 pM 미만, 약 50 pM 미만의 KD로 HMM-mfMSR1을 결합시키는 항-MSR1 항체를 포함하는 항체-약물 접합체가 제공된다. 일부 구현예에서, 본원에 개시된 항-MSR1 항체는 실시예 25에 정의된 바와 같은 검정 양식, 또는 실질적으로 유사한 검정을 사용하여, 표면 플라스몬 공명에 의해 측정된 것으로서, 25℃에서 약 12 nM 미만, 약 10 nM 미만, 약 9 nM 미만, 약 8 nM 미만, 약 7 nM 미만, 약 6 nM 미만, 약 5 nM 미만, 약 4 nM 미만, 약 3 nM 미만, 약 2 nM 미만, 약 1 nM 미만, 약 900 pM 미만, 약 800 pM 미만, 약 800 pM 미만, 약 700 pM 미만, 약 600 pM 미만, 약 500 pM 미만, 약 400 pM 미만, 약 300 pM 미만, 약 200 pM 미만, 약 150 pM 미만, 약 100 pM 미만, 약 90 pM 미만, 약 80 pM 미만, 약 70 pM 미만, 약 60 pM 미만, 또는 약 50 pM 미만의 KD로 HMM-mfMSR1을 결합시키는 항-MSR1 항체를 포함하는 항체-약물 접합체가 제공된다.
구현예는 또한 예컨대, 본원의 실시예 25에 정의된 바와 같은 검정 양식, 또는 실질적으로 유사한 검정을 사용하여, 25℃ 또는 37℃에서 표면 플라스몬 공명에 의해 측정된 것으로서 약 55분 초과의 해리 반감기(t½)로 N-말단 myc-myc-헥사히스티딘 태그(서열 번호: 689에 개시된 "헥사히스티딘)(예컨대, HMM-mfMSR1)와 함께 발현된 원숭이 MSR1 세포외 도메인에 결합하는 항체 및 이의 항원-결합 단편을 포함하는 항체-약물 접합체를 포함한다. 특정의 구현예에 따라서, 본원의 실시예 25에 정의된 바와 같은 검정 양식, 또는 실질적으로 유사한 검정을 사용하여, 표면 플라스몬 공명에 의해 측정된 것으로서, 37℃에서 약 2분 초과, 약 3분 초과, 약 4분 초과, 약 5분 초과, 약 6분 초과, 약 8분 초과, 약 10분 초과, 약 12분 초과, 약 14분 초과, 약 16분 초과, 약 18분 초과, 약 20분 초과, 약 30분 초과, 약 40분 초과, 약 50분 초과, 약 60분 초과, 약 70분 초과, 약 80분 초과, 약 90분 초과, 약 120분 초과, 약 150분 초과, 약 180분 초과, 약 210분 이상의 t½로 이량체성 사람 MSR1을 결합시키는 항-MSR1 항체를 포함하는 항체-약물 접합체가 제공된다.
구현예는 또한 본원의 실시예 27에 정의된 바와 같은 검정 양식, 또는 실질적으로 유사한 검정을 사용하여, 항체 결합 검정에 의해 측정된 것으로서, 적어도 약 2배, 적어도 약 3배, 적어도 약 4배, 적어도 약 5배, 적어도 약 6배, 적어도 약 7배, 적어도 약 8배, 적어도 약 9배, 적어도 약 10배, 적어도 약 12배, 적어도 약 15배, 적어도 약 20배, 적어도 약 25배, 적어도 약 30배, 적어도 약 35배, 적어도 약 40배, 적어도 약 45배, 적어도 약 50배 이상의 비-발현 세포에 대한 가공된 hMSR1-발현 세포의 결합비로 hMSR1 가공된 세포-표면 발현된 hMSR1을 결합시키는 항체 및 이의 항원-결합 단편을 포함하는 항체-약물 접합체를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원의 실시예 27에 정의된 바와 같은 검정 양식, 또는 실질적으로 유사한 검정을 사용하여, 항체 결합 검정에 의해 측정된 것으로서, 적어도 적어도 약 2배, 적어도 약 3배, 적어도 약 4배, 적어도 약 5배, 적어도 약 6배, 적어도 약 7배, 적어도 약 8배, 적어도 약 9배, 적어도 약 10배, 또는 greater 적어도 약 12배, 적어도 약 15배, 적어도 약 20배, 적어도 약 25배, 적어도 약 30배, 적어도 약 35배, 적어도 약 40배, 적어도 약 45배, 적어도 약 50배 이상의 비-발현 세포에 대한 내인성 hMSR1-발현 세포의 결합비로 내인성-발현된 hMSR1과 함께 세포를 결합시키는 항체를 포함하는 항체-약물 접합체가 본원에 제공된다. 일부 구현예에서, 항체-약물 접합체는 본원의 실시예 27에 정의된 바와 같은 검정 양식, 또는 실질적으로 유사한 검정을 사용하여, 항체 결합 검정에 의해 측정된 것으로서, 적어도 약 2배, 적어도 약 3배, 적어도 약 4배, 적어도 약 5배, 적어도 약 6배, 적어도 약 7배, 적어도 약 8배, 적어도 약 9배, 적어도 약 10배, 적어도 약 12배, 적어도 약 15배, 적어도 약 20배, 적어도 약 25배, 적어도 약 30배, 적어도 약 35배, 적어도 약 40배, 적어도 약 45배, 적어도 약 50배 이상의 비-발현 세포에 대한 내인성 마우스 MSR1-발현 세포의 결합비로 가공된 세포-표면 발현된 마우스 MSR1과 함께 본원에 개시된 MSR1 항체 또는 항원 결합 단편을 포함한다.
항체-약물 접합체는 전술한 생물학적 특징 중 하나 이상, 또는 이의 임의의 조합을 지닐 수 있는 본원에 개시된 항체를 포함한다. 본원에 개시된 항체의 생물학적 특성의 앞서의 목록은 철저한 것으로 의도되지 않는다. 본원에 개시된 항체의 다른 생물학적 특성이 본원의 작업 실시예를 포함하는 본 개시내용의 검토로부터 당해 분야의 통상의 기술자에게 명백할 것이다.
ADC에 적합한 항-WTA 항체
특정 구현예에 따라서, 본 개시내용의 항체-약물 접합체는 항-WTA 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 포함할 수 있다. 이러한 항-WTA 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 스타필로코쿠스 아우레우스를 포함하는 다수의 그램-양성 세균에서 발현된 벽 테이코산(WTA)에 결합한다. 항-WTA 항체는 예를 들면, 미국 특허 제8,283,294호; Meijer PJ et al (2006) J Mol Biol. 358(3):764-72; Lantto J, et al (2011) J Virol. 85(4):1820-33; 및 WO2016090038에 교시된 방법에 의해 선택 및 생산될 수 있고, 이들 각각은 모든 목적을 위해 이의 전문이 본원에 참고로 포함된다.
WTA의 화학 구조는 유기체 중에서 다양하다. 에스. 아우레우스에서, WTA는 N-아세틸글루코스아민(GlcNAc)-1-P 및 N-아세틸만노스아민(ManNAc)으로 구성된 이당류를 통해 N-아세틸 무람산(MurNAc)의 6-OH에 공유결합으로 연결되고, 이는 이후 글리세롤-포스페이트의 약 2 또는 3개 단위까지 연결된다. 실제 WTA 중합체는 이후 약 11 내지 40개의 리비톨-포스페이트(Rbo-P) 반복 단위로 구성된다. WTA의 단계식 합성은 우선 TagO라고 불리는 효소에 의해 개시되며, TagO 유전자를 결여한(유전자의 결실에 의해) 에스. 아우레우스는 어떠한 WTA도 만들지 못한다. 반복 단위는 C2-OH 위치에서 D-알라닌(D-Ala) 및/또는 C4-OH 위치에서 N-아세틸글루코스아민(GlcNAc)을 사용하여 α-(알파) 또는 β-(베타) 글리코시드 연결을 통해 추가로 조절될 수 있다. 에스. 아우레우스 균주, 또는 세균의 성장 상에 따라서 글리코시드 연결은 α-, β-, 또는 2개의 아노머의 혼합물이 될 수 있다. 이러한 GlcNAc 당 변형은 2개의 특이적인-에스. 아루레우스-유래된 글리코실트랜스퍼라제(Gtfs)에 의해 조정되고: TarM Gtf는 α-글리코시드 연결을 매개하지만, TarS Gtfs는 β-(베타)글리코시드 연결을 매개한다.
본 개시내용의 ADC에 적합한 항-WTA 항체는 항-WTAα 또는 항-WTAβ 항체일 수 있다. 항-WTA 항체는 에스. 아우레우스 감염된 환자로부터의 B 세포로부터 클로닝된다. 일 구현예에서, 항-WTA 항체는 사람 모노클로날 항체이다. 본 개시내용의 ADC는 본원에 기술된 항-WTA 항체의 CDR을 포함하는 키메라 항체 및 사람화된 항체를 포함한다.
본 개시내용의 항체-약물 접합체는 본원에 기술된 항-WTA 항체 중 임의의 하나, 또는 이의 항원-결합 단편을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 항-WTA 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 스타필로코쿠스 아우레우스에 결합한다.
일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체-약물 접합체는 항-WTAα 모노클로날 항체, 또는 이의 항원-결합 단편을 포함한다. 비-제한적인 예로서, 항-WTAα 항체, 또는 이의 항원-결합 단편은: (a) 표 2A에 나타낸 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(HCVR)의 상보성 결정 영역(CDR); 및 (b) 표 2A에 나타낸 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(LCVR)이 CDR을 포함한다.
[표 2A]
Figure pct00304
일 구현예에서, 항-WTAα 항체, 또는 이의 항원-결합 단편은 다음을 포함한다:
(i) 서열 번호: 470, 476, 482, 및 488로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1 도메인;
(ii) 서열 번호: 471, 477, 483, 및 489로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2 도메인;
(iii) 서열 번호: 472, 478, 484, 및 490로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3 도메인;
(iv) 서열 번호: 467, 473, 479, 및 485로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1 도메인;
(v) 서열 번호: 468, 474, 480, 및 486으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2 도메인; 및
(vi) 서열 번호: 469, 475, 481, 및 487로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3 도메인.
일부 구현예에서, 항-WTAα 항체, 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 번호: 492, 서열 번호: 494, 서열 번호: 496, 및 서열 번호: 498로부터 선택된 아미노산 서열, 또는 이에 대해 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 이의 실질적으로 유사한 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(HCVR)을 포함한다. 항체는 서열 번호: 491, 서열 번호: 493, 서열 번호: 495, 및 서열 번호: 497로부터 선택된 아미노산 서열, 또는 이에 대해 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 이의 실질적으로 유사한 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(LCVR)을 추가로 포함한다.
일 구현예에서, 항-WTAα 항체, 또는 이의 항원-결합 단편은, 서열 번호: 491의 아미노산 서열을 갖는 LCVR, 또는 이에 대해 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 이의 실질적으로 유사한 서열; 및 서열 번호: 492의 아미노산 서열을 갖는 HCVR, 또는 이에 대해 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 이의 실질적으로 유사한 서열을 포함한다.
다른 구현예에서, 항-WTAα 항체, 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 번호: 493의 아미노산 서열을 갖는 LCVR, 또는 이에 대해 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 이의 실질적으로 유사한 서열; 및 서열 번호: 494의 아미노산 서열을 갖는 HCVR, 또는 이에 대해 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 이의 실질적으로 유사한 서열을 포함한다.
다른 구현예에서, 항-WTAα 항체, 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 번호: 495의 아미노산 서열을 갖는 LCVR, 또는 이에 대해 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 이의 실질적으로 유사한 서열; 및 서열 번호: 496의 아미노산 서열을 갖는 HCVR, 또는 이에 대해 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 이의 실질적으로 유사한 서열을 포함한다.
다른 구현예에서, 항-WTAα 항체, 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 번호: 497의 아미노산 서열을 갖는 LCVR, 또는 이에 대해 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 이의 실질적으로 유사한 서열; 및 서열 번호: 498의 아미노산 서열을 갖는 HCVR, 또는 이에 대해 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 이의 실질적으로 유사한 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 개시내용 항체-약물 접합체는 항-WTAβ 모노클로날 항체, 또는 이의 항원-결합 단편을 포함한다. 본 발명의 예시적인 항- WTAβ 항체는 본원의 표 2B에 나타나 있다. 표 2B는 예시적인 항-WTAβ 항체의 중쇄 상보성 결정 영역(HCDR1, HCDR2 및 HCDR3), 및 경쇄 상보성 결정 영역(LCDR1, LCDR2 및 LCDR3)의 아미노산 서열 확인인자를 나타낸다.
[표 2B]
Figure pct00305
일 구현예에서, 항-WTAβ 항체, 또는 이의 항원-결합 단편은:
(i) 서열 번호: 502, 508, 514, 520, 526, 532, 538, 544, 550, 556, 562, 568, 및 574로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1 도메인;
(ii) 서열 번호: 503, 509, 515, 521, 527, 533, 539, 545, 551, 557, 563, 569, 및 575로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2 도메인;
(iii) 서열 번호: 504, 510, 516, 522, 528, 534, 540, 546, 552, 558, 564, 570, 576, 및 584로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3 도메인;
(iv) 서열 번호: 499, 505, 511, 517, 523, 529, 535, 541, 547, 553, 559, 565, 및 571로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1 도메인;
(v) 서열 번호: 500, 506, 512, 518, 524, 530, 536, 542, 548, 554, 560, 566, 및 572로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2 도메인; 및
(vi) 서열 번호: 501, 507, 513, 519, 525, 531, 537, 543, 549, 555, 561, 567, 및 573으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3 도메인을 포함한다.
본 발명은 또한 표 2B에 나타낸 임의의 HCDR1 아미노산 서열 또는 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 이의 실질적으로 유사한 서열로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1(HCDR1)을 포함하는 항-WTAβ 항체, 또는 이의 항원-결합 단편을 제공한다.
본 발명은 또한 표 2B에 나타낸 임의의 HCDR2 아미노산 서열 또는 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 이의 실질적으로 유사한 서열로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR2(HCDR2)를 포함하는 항-WTAβ 항체, 또는 이의 항원-결합 단편을 제공한다.
본 발명은 또한 표 2B에 나타낸 임의의 HCDR3 아미노산 서열 또는 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 이의 실질적으로 유사한 서열로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR3(HCDR3)을 포함하는 항-WTAβ 항체, 또는 이의 항원-결합 단편을 제공한다.
본 발명은 또한 표 2B에 나타낸 임의의 LCDR1 아미노산 서열 또는 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 이의 실질적으로 유사한 서열로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR1(LCDR1)을 포함하는 항-WTAβ 항체, 또는 이의 항원-결합 단편을 제공한다.
본 발명은 또한 표 2B에 나타낸 임의의 LCDR2 아미노산 서열 또는 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 이의 실질적으로 유사한 서열로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR2(LCDR2)를 포함하는 항-WTAβ 항체, 또는 이의 항원-결합 단편을 제공한다.
본 발명은 또한 표 2B에 나타낸 임의의 LCDR3 아미노산 서열 또는 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 이의 실질적으로 유사한 서열로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR3(LCDR3)을 포함하는 항-WTAβ 항체, 또는 이의 항원-결합 단편을 제공한다.
본 발명은 또한 표 2B에 나타낸 임의의 예시적인 항-WTAβ 항체 내에 6개의 CDR의 세트(즉, HCDR1-HCDR2-HCDR3-LCDR1-LCDR2-LCDR3)를 포함하는 항-WTAβ 항체, 또는 이의 항원-결합 단편을 제공한다. 특정의 구현예에서, HCDR1-HCDR2-HCDR3-LCDR1-LCDR2-LCDR3 아미노산 서열 세트는 서열 번호: 502-503-504-499-500-501, 508-509-510-505-506-507, 514-515-516-511-512-513, 520-521-522-517-518-519, 526-527-528-523-524-525, 532-533-534-529-530-531, 538-539-540-535-536-537, 544-545-546-541-542-543, 550-551-552-547-548-549, 556-557-558-553-554-555, 562-563-564-559-560-561, 568-569-570-565-566-567, 574-575-576-571-572-573, 및 568-569-584-565-566-567로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.
일 구현예에서, 항-WTAβ 항체, 또는 이의 항원-결합 단편은 미국 특허원 공보 제20140356375호(이는 이의 전문이 본원에 참고로 포함됨)에 기술된 항체 4497로부터 유래된다. 일부 구현예에서, 항체 4497로부터 유래된 항-WTAβ 항체, 또는 이의 항원-결합 단편은 경쇄 내에 V205C 돌연변이를 추가로 포함한다.
일 구현예에서, 항-WTAβ 항체, 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 번호: 568-569-570-565-566-567의 HCDR1-HCDR2-HCDR3-LCDR1-LCDR2-LCDR3을 포함한다.
일부 구현예에서, 항-WTAβ 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열 번호: 586의 중쇄 가변 영역(HCVR) 아미노산 서열 내에 3개의 중쇄 상보성 결정 영역 (HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3); 및 서열 번호: 585의 경쇄 가변 영역(LCVR) 아미노산 서열 내에 3개의 경쇄 상보성 결정 영역(LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3)을 포함한다.
일부 구현예에서, 항-WTAβ 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열 번호: 586의 HCVR 아미노산 서열, 및 서열 번호: 585의 LCVR 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, 항-WTAβ 항체는 서열 번호: 602의 중쇄 아미노산 서열 및 서열 번호: 587 또는 서열 번호: 589의 경쇄 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 항-WTAβ 항체, 또는 이의 항원-결합 단편은 경쇄 내에 V205C 돌연변이를 포함한다.
일부 구현예에서, 항-WTAβ 항체, 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 번호: 580, 621-628, 및 591-594로부터 선택된 전체 길이의 중쇄 서열의 1 내지 113번 카밧 위치에 상응하는 아미노산 서열, 또는 이에 대해 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 이의 실질적으로 유사한 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(HCVR)을 포함한다. 항체는 서열 번호: 579, 610-620, 및 587로부터 선택된 전체 길이의 경쇄 서열의 1 내지 107번 카밧 위치에 상응하는 아미노산 서열, 또는 이에 대해 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 이의 실질적으로 유사한 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(LCVR)을 포함한다. 전체 길이의 중쇄 및 전체 길이의 경쇄의 카밧 위치의 참고는 예를 들면, 모든 목적을 위해 이의 전문이 본원에 참고로 포함된, 미국 특허원 공보 제20180021450호의 도 15A-1, 15A-2, 및 15A-3, 및 도 15B-1, 15-B 2, 15-B 3, 15-B 4, 15-B5, 및 15-B 6에서 찾을 수 있다.
일 구현예에서, 항-WTAβ 항체, 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 번호: 577의 아미노산 서열, 또는 이에 대해 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 이의 실질적으로 유사한 서열을 포함하는 LCVR; 및 서열 번호: 578의 아미노산 서열(여기서 X는 Q 또는 E이고 X1은 M, I 또는 V이다), 또는 이에 대해 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 이의 실질적으로 유사한 서열을 포함하는 HCVR을 포함한다.
일 구현예에서, 항-WTAβ 항체, 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 번호: 579의 아미노산 서열, 또는 이에 대해 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 이의 실질적으로 유사한 서열을 포함하는 경쇄; 및 서열 번호: 580의 아미노산 서열, 또는 이에 대해 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 이의 실질적으로 유사한 서열을 포함하는 중쇄를 포함한다.
구체적인 구현예에서, 항-WTAβ 항체, 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 번호: 577의 아미노산 서열을 포함하는 LCVR, 및 서열 번호: 578의 아미노산 서열을 포함하는 HCVR을 포함한다. 여전히 보다 구체적인 구현예에서, 항-WTAβ 항체, 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 번호: 579의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄, 및 서열 번호: 580의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함한다.
일부 구현예에서, 본 개시내용의 ADC에 적합한 항-WTAβ 항체, 또는 이의 항원-결합 단편은 항체 경쇄 및/또는 중쇄 내에 하나 이상의 가공된 시스테인을 함유할 수 있다.
일부 구현예에서, 항-WTAβ 항체, 또는 이의 항원-결합 단편은 가공된 시스테인을 함유한다. 일 구현예에서, 항-WTAβ 항체, 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 번호: 581의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄; 및 서열 번호: 582의 아미노산 서열(여기서 X는 M, I 또는 V이다)을 포함하는 중쇄를 포함한다. 일 구현예에서, 항-WTAβ 항체, 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 번호: 581의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄; 및 서열 번호: 580의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함한다.
일부 구현예에서, 항-WTAβ 항체, 또는 이의 항원-결합 단편의 중쇄는 가공된 시스테인을 함유한다. 일 구현예에서, 항-WTAβ 항체, 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 번호: 579의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄; 및 서열 번호: 583의 아미노산 서열(여기서 X는 M, I 또는 V이다)을 포함하는 중쇄를 포함한다.
일부 구현예에서, 항-WTAβ 항체, 또는 이의 항원-결합 단편의 경쇄 및 중쇄 둘 다는 가공된 시스테인을 함유한다. 일 구현예에서, 항-WTAβ 항체, 또는 이의 항원-결합 단편은 가공된 시스테인을 함유하고 서열 번호: 581의 서열을 포함하는 경쇄; 가공된 시스테인을 함유하고 서열 번호: 583의 아미노산 서열(여기서 X는 M, I 또는 V이다)을 포함하는 중쇄를 포함한다.
일부 구현예에서, 항-WTAβ 항체, 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 번호: 585의 아미노산 서열, 또는 이에 대해 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 이의 실질적으로 유사한 서열을 갖는 LCVR; 및 서열 번호: 608의 아미노산 서열, 또는 이에 대해 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 이의 실질적으로 유사한 서열을 갖는 HCVR을 포함한다. 일 구현예에서, 항-WTAβ 항체, 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 번호: 585의 아미노산 서열을 갖는 LCVR, 및 서열 번호: 608의 아미노산 서열을 갖는 HCVR을 포함한다.
일 구현예에서, 항-WTAβ 항체, 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 번호: 587의 아미노산 서열을 갖는 경쇄; 및 서열 번호: 590의 아미노산 서열을 갖는 중쇄를 포함한다. 일 구현예에서, 항-WTAβ 항체, 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 번호: 589의 아미노산 서열을 갖는 경쇄; 및 서열 번호: 609의 아미노산 서열을 갖는 중쇄를 포함한다. 일 구현예에서, 항-WTAβ 항체, 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 번호: 589의 아미노산 서열을 갖는 경쇄; 및 서열 번호: 590의 아미노산 서열을 갖는 중쇄를 포함한다.
일부 구현예에서, 항-WTAβ 항체는 서열 번호: 585의 아미노산 서열을 갖는 LCVR 및 서열 번호: 586 또는 서열 번호: 608의 아미노산 서열을 갖는 HCVR을 포함한다.
일부 구현예에서, 항-WTAβ 항체는 서열 번호: 577의 아미노산 서열을 갖는 LCVR 및 서열 번호: 578의 아미노산 서열을 갖는 HCVR을 포함한다.
본 개시내용의 ADC의 일부 구현예에서, 항-WTA 항체는 본원에 개시된 항-WTA 항체의 임의의 하나와 동일한 에피토프에 결합한다.
본 발명의 ADC에 적합한 항-WTA 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 하나 이상의 잔기에서 변경되어, 예를 들면, 야생형의 변형되지 않은 항체와 비교하여 항원에 대해 실질적으로 거의 동일하거나 증진된 결합 친화성을 유지하면서, pK, 안정성, 발현, 제작능을 증진시킬 수 있다.
일부 구현예에서, 본 개시내용의 ADC는 Fc 영역을 결여하고 있는 항-WTA 항원-결합 단편을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 항원-결합 단편은 F(ab) 또는 F(ab')2이다. 일부 구현예에서, 항원-결합 단편은 중쇄 불변 영역 및/또는 경쇄 불변 영역을 추가로 포함하고, 여기서 중쇄 불변 영역 및/또는 경쇄 불변 영역은 시스테인 잔기로 치환된 하나 이상의 아미노산을 포함한다. 일부 구현예에서, 항원-결합 단편은 아미노산 치환 A118C 및/또는 S400C를 포함하는 중쇄 불변 영역, 및/또는 아미노산 치환 V205C를 포함하는 경쇄 불변 영역을 포함하고, 여기서 번호매김 시스템은 EU 번호매김에 따른다.
특정의 구현예에서, 시스테인 가공된 항-WTA 항체, 예컨대, 항체의 하나 이상의 잔기가 시스테인 잔기로 치환된 "thioMAbs"를 생성하는 것이 바람직할 수 있다. 항체의 임의의 형태는 이렇게 가공, 즉, 돌연변이될 수 있다. 예를 들면, 모 Fab 항체 단편는 가공되어 본원에서 "ThioFab"로 지칭된 시스테인 가공된 Fab를 형성할 수 있다. 유사하게 모 모노클로날 항체를 가공하여 "ThioMab"를 형성할 수 있다. IgG 항체의 이량체성 특성으로 인하여, 단일 부위 돌연변이는 ThioFab에서 단일의 가공된 시스테인 잔기를 생성하지만, 단일 부위 돌연변이는 ThioMab 내에 2개의 가공된 시스테인 잔기를 생성함에 주목하여야 한다. 특수한 구현예에서, 치환된 잔기는 항체의 수용가능한 부위에서 존재한다. 이러한 잔기를 시스테인으로 치환시킴으로써, 반응성 티올 그룹을 항체의 접근가능한 부위에 위치시켜 항체를 다른 모이어티, 예를 들면, 항생제 모이어티(예컨대, 리파마이신 유사체) 또는 링커-항생제 모이어티(예컨대, 링커-리파마이신 유사체 페이로드)에 접합시켜 본원에 추가로 기술된 항체-약물 접합체를 생성할 수 있다. 특정의 구현예에서, 다음의 잔기 중 임의의 하나 이상을 시스테인으로 치환시킬 수 있다: 경쇄의 V205(카밧 번호매김); 중쇄의 A118(EU 번호매김); 및 중쇄 Fc 영역의 5400(EU 번호매김). 항-WTA 항체의 비제한된 예시적인 시스테인 가공된 중쇄 A118C(서열 번호: 605) 및 경쇄 V205C(서열 번호: 607) 돌연변이체가 나타나 있다. 시스테인 가공된 항-WTA 항체는 예를 들면, Junutula, et al., 2008b Nature Biotech., 26(8):925-932; 미국 특허 제7,521,541호; US-2011/0301334; Lehar et al, Nature 2015 527, 323-328에 기술된 바와 같이 생성시킬 수 있으며, 이들 각각은 이의 전문이 본원에 참고로 포함된다.
가공된 시스테인 티올은 티올-반응성인, 친전자성 그룹, 예를 들면, 말레이미드 또는 알파-할로 아미드를 갖는 본 발명의 링커 시약 또는 링커-약물 중간체와 반응시켜 시스테인 가공된 항체(THIOMAB™ 또는 thioMabs) 및 항생제 모이어티(예컨대, 리파마이신 유사체)를 갖는 ADC를 형성시킬 수 있다. 따라서, 항생제 모이어티의 위치를 설계하고, 제어할 수 있으며, 공지되어 있다. 항생제 로딩은 가공된 시스테인 티올 그룹이 전형적으로 티올-반응성 링커 시약 또는 링커-항생제 중간체와 고 수율로 반응하므로 조절될 수 있다. 항-WTA 항체를 가공하여 중쇄 또는 중쇄 상의 단일 부위에 치환에 의해 시스테인 아미노산을 도입시키는 것은 대칭 사랑체 항체 상에 2개의 새로운 시스테인을 제공한다. 2에 가까운(near)의 항생제 로딩 및 ADC의 가까운 균일성을 달성할 수 있다.
ADC에 적합한 항-단백질 A 항체
특정의 구현예에 따라서, 본 개시내용의 항체-약물 접합체는 항-단백질 A 항체, 또는 이의 항원-결합 단편을 포함할 수 있다.
단백질 A는 분비된 및 막-관련된 형태 둘 다로 존재하고, 2개의 명백한 Ig-결합 활성을 갖는 42-kDa 단백질이며: 각각의 도메인은 Fc-, 작용기 기능에 포함된 IgG의 불변 영역, 및 Fab, 항원 인식에 관여하는 Ig 단편을 결합시킬 수 있다. 단백질 A는 이의 카복실 말단을 통해 스타필로코쿠스 세포 벽에 공유결합으로 정착된다(anchor). 단백질은 영역 Xr에 의해 세포 표면에 연결된 5개의 반복된 도메인(E, D, A, B, C)으로 구성되고, 각각의 도메인은 면역글로불린의 Fc 영역 및 VH3 서브부류의 면역글로불린의 Fab 영역에 고 친화성으로 결합할 수 있다. IgG Fc와의 상호작용은 작용기 기능을 방해한다. 또한, Fc 영역을 통해 단백질 A에 결합된 항체는 전통적인 경로에 의해 상보체 고정을 시뮬레이션할 수 없다.
본 개시내용의 ADC에 적합한 항-단백질 A 항체의 비-제한적 예는 본원의 표 3A 및 3B에 나타낸다. 표 3A는 이로부터 본 개시내용의 항체가 유래될 수 있는 중쇄 가변 영역(HCVR), 경쇄 가변 영역(LCVR), 중쇄 상보성 결정 영역(HCDR1, HCDR2 및 HCDR3), 및 경쇄 상보성 결정 영역(LCDR1, LCDR2 및 LCDR3)의 아미노산 서열 확인인자를 나타낸다. 표 3B는 예시적인 항-단백질 A 항체의 HCVR, LCVR, HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3의 핵산 서열 확인인자를 나타낸다.
일부 구현예에서, 본 개시내용의 ADC에 적합한 항-단백질 A 항체는 Fc 결합을 약화시켰다. 이러한 항체는 표 3A에 나타낸 HCVR 아미노산 서열 및 LCVR 아미노산 서열을 가지며 또한 서열 번호: 648의 IgG1 중쇄 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 이러한 IgG1 서열은 hIgG1 Fc 내에 H435R 및 Y436F 돌연변이(EU 색인 번호매김; 서열 번호: 648의 H318R 및 Y319F와 동일)를 포함하고, 이는 본원에서 "*/*" 또는 "**"로 나타낸다.
[표 3A]
Figure pct00306
[표 3B]
Figure pct00307
일 구현예에서, 항-단백질 A 항체, 또는 이의 항원-결합 단편은 다음을 포함한다:
(i) 서열 번호: 632, 652, 및 672로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1 도메인;
(ii) 서열 번호: 634, 654, 및 674로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2 도메인;
(iii) 서열 번호: 636, 656, 및 676으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3 도메인;
(iv) 서열 번호: 640, 660, 및 680으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1 도메인;
(v) 서열 번호: 642 및 662로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2 도메인; 및
(vi) 서열 번호: 644, 664, 및 683으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3 도메인.
일부 구현예에서, 본 개시내용 항체-약물 접합체는 서열 번호: 630, 650, 및 670으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HCVR, 또는 이에 대해 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 이의 실질적으로 유사한 서열을 포함하는, 단백질 A에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 개시내용 항체-약물 접합체는 서열 번호: 638, 658, 및 678로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 LCVR, 또는 이에 대해 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 이의 실질적으로 유사한 서열을 포함하는, 단백질 A에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 개시내용 항체-약물 접합체는 표 3A에 나타낸 항-단백질 A HCVR 아미노산 서열을 포함하는 HCVR 및 LCVR 아미노산 서열 쌍(HCVR/LCVR)을 포함하는 단백질 A에 특이적으로 결합한 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 포함한다. 특정의 구현예에 따라서, 본 개시내용의 항체-약물 접합체는 표 3A에 나타낸 예시적인 항-단백질 A 항체내에 함유된 HCVR/LCVR 아미노산 서열 쌍을 포함하는, 단백질 A에 특이적으로 결합한 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 포함한다. 특정의 구현예에서, HCVR/LCVR 아미노산 서열 쌍은 서열 번호: 630/638, 650/658, 및 670/678로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.
일부 구현예에서, 본 개시내용 항체-약물 접합체는 표 3A에 나타낸 임의의 예시적인 항-단백질 A 항체내에 함유된 6개의 CDR의 세트(즉, HCDR1-HCDR2-HCDR3-LCDR1-LCDR2-LCDR3)를 포함하는, 단백질 A에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 포함한다. 특정의 구현예에서, HCDR1-HCDR2-HCDR3-LCDR1-LCDR2-LCDR3 아미노산 서열 세트는 서열 번호: 632-634-636-640-642-644, 652-654-656-660-662-664, 또는 672-674-676-680-662-683을 포함한다.
관련된 구현예에서, 본 개시내용의 항체-약물 접합체는 표 3A에 나타낸 예시적인 항-단백질 A 항체로 정의된 바와 같은 HCVR/LCVR 아미노산 서열 쌍 내에 함유된 6개의 CDR의 세트(즉, HCDR1-HCDR2-HCDR3-LCDR1-LCDR2-LCDR3)를 포함하는, 단백질 A에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 포함한다. 예를 들면, 본 발명은 서열 번호: 630/638, 650/658, 및 670/678로 이루어진 그룹으로부터 선택된 HCVR/LCVR 아미노산 서열 상 내에 함유된 HCDR1-HCDR2-HCDR3-LCDR1-LCDR2-LCDR3 아미노산 서열을 포함하는, 단백질 A에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 포함한다.
일부 구현예에서, 항-단백질 A 항체, 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 번호: 666의 중쇄 아미노산 서열, 또는 이의 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 을 갖는 이의 실질적으로 유사한 서열을 포함한다. 일부 양태에서, 항-단백질 A 항체, 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 번호: 668의 경쇄 아미노산 서열, 또는 이의 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 을 갖는 이의 실질적으로 유사한 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, 항-단백질 A 항체, 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 번호: 685의 중쇄 아미노산 서열, 또는 이의 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 을 갖는 이의 실질적으로 유사한 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 항-단백질 A 항체, 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 번호: 687의 경쇄 아미노산 서열, 또는 이의 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 을 갖는 이의 실질적으로 유사한 서열을 포함한다.
일 구현예에서, 항-단백질 A 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열 번호: 630의 중쇄 가변 영역(HCVR) 아미노산 서열 내에 3개의 중쇄 상보성 결정 영역(HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3); 및 서열 번호: 638의 경쇄 가변 영역(LCVR) 아미노산 서열 내에 3개의 경쇄 상보성 결정 영역(LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3)을 포함하다. 일 구현예에서, 항-단백질 A 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열 번호: 632-634-636-640-642-644를 포함하는 6개의 CDR의 세트(HCDR1-HCDR2-HCDR3-LCDR1-LCDR2-LCDR3)를 포함한다.
일 구현예에서, 항-단백질 A 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열 번호: 630의 HCVR 아미노산 서열; 및 서열 번호: 638의 LCVR 아미노산 서열을 포함한다.
일 구현예에서, 항-단백질 A 항체는 서열 번호: 666의 HCVR 아미노산 서열; 및 서열 번호: 668의 LCVR 아미노산 서열을 포함한다. 일 구현예에서, 항-단백질 A 항체는 103번 위치에서 경쇄 돌연변이(C103S)를 포함한다. 일 구현예에서, 항-단백질 A 항체, 또는 이의 항원-결합 단편은 경쇄 103번 위치에서 본 개시내용의 화합물에 접합된다.
HCVR 및 LCVR 아미노산 서열내 CDR을 확인하는 방법 및 기술은 당해 분야에 잘 공지되어 있고 본원에 개시된 구체적인 HCVR 및/또는 LCVR 아미노산 서열 내 CDR을 확인하는데 사용될 수 있다. CDR의 경계를 확인하는데 사용될 수 있는 예시적인 관례는 예컨대, 카밧 정의, 초티아 정의, 및 AbM 정의를 포함한다. 일반적인 용어에서, 카밧 정의는 서열 가변성을 기반으로 하고, 초티아 정의는 구조적 루프 영역의 위치를 기반으로 하며, AbM 정의는 카밧과 초티아 접근법 사이의 절충이다. 예컨대, 문헌: Kabat, "Sequences of Proteins of Immunological Interest," National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991); Al-Lazikani et al., J. Mol. Biol. 273:927-948 (1997); 및 Martin et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86:9268-9272 (1989)를 참고한다. 공공 데이타베이스가 또한 항체내 CDR 서열을 확인하는데 이용가능하다.
본 개시내용의 ADC에 적합한 항-단백질 A 항체 또는 이의 부위를 암호화하는 핵산 분자가 또한 제공된다. 예를 들면, 표 3A에 나타낸 항-단백질 A HCVR 아미노산 서열 및 항-단백질 A LCVR 아미노산 서열이 표 3B에 나타낸 핵산 분자에 의해 암호화될 수 있다. 특정의 구현예에서, 핵산 분자는 표 3B에 나나탠 항-단백질 A HCVR 핵산 서열 및 항-단백질 A LCVR 핵산 서열, 또는 이에 대해 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 이의 실질적으로 유사한 서열로부터 선택된 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함한다.
예를 들면, 표 3A에 나타낸 항-단백질 A CDR 아미노산 서열은 표 3B에 나타낸 핵산 분자에 의해 암호화될 수 있다. 특정의 구현예에서, 핵산 분자는 표 3B에 나타낸 임의의 항-단백질 A CDR 핵산 서열, 또는 이에 대해 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 이의 실질적으로 유사한 서열로부터 선택된 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, 항-단백질 A 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는 핵산 분자는 HCVR을 암호화하는 핵산 분자를 포함할 수 있으며, 여기서 HCVR은 3개의 CDR 세트(즉, HCDR1-HCDR2-HCDR3)를 포함하고, 여기서 HCDR1-HCDR2-HCDR3 아미노산 서열 세트는 표 3A에 나타낸 예시적인 항-단백질 A 항체에 의해 정의된 바와 같다.
항-단백질 A 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 암호화하는 핵산 분자는 LCVR을 암호화하는 핵산 분자를 포함하고, 여기서 LCVR은 3개의 CDR 세트(즉, LCDR1-LCDR2-LCDR3)를 포함하고, 여기서 LCDR1-LCDR2-LCDR3 아미노산 서열 세트는 표 3A에 나타낸 예시적인 항-단백질 A 항체에 의해 정의된 바와 같다.
또한 항-단백질 A 항체의 중쇄 및 경쇄 가변 영역을 포함하는 폴리펩타이드를 발현할 수 있는 재조합 발현 벡터가 제공된다. 예를 들면, 본 개시내용은 상기 언급한 임의의 핵산 분자, 즉, 표 3A에 나타낸 바와 같은 임의의 HCVR, LCVR, 및/또는 CDR 서열을 암호화하는 핵산 분자를 포함하는 재조합 발현 벡터를 포함한다. 또한, 이러한 벡터가 도입된 숙주 세포, 뿐만 아니라 항체 또는 항체 단편의 생산을 허용하는 상태 하에서 숙주 세포를 배양하고, 이렇게 생산된 항체 및 항체 단편을 회수함으로써 항체 또는 이의 부위를 생산하는 방법이 본 발명의 영역 내에 포함된다.
본 개시내용의 ADC에 적합한 항-단백질 A 항체는 변형된 글리코실화 패턴을 가질 수 있다. 일부 구현예에서, 바람직하지 않는 글리코실화 부뤼를 제거하기 위한 변형이 유용할 수 있거나, 푸코즈 모이어티를 결여한 항체가 올리고사카라이드 쇄 상에 존재하여, 예를 들면, 항체 의존성 세포 세포독성(ADCC) 기능을 향상시킨다(참고: Shield et al. (2002) JBC 277:26733). 다른 적용에서 글리코실화의 변형을 이루어 상보체 의존성 세포독성(CDC)를 변경시킬 수 있다.
본원에 제공된 단백질 A에 특이적으로 결합하는 모노클로날 항체 및 이의 항원-결합 단편은 단백질 A(및/또는 SpsQ 또는 다른 동족 단백질)에 대해 약화된 Fc 결합을 가질 수 있다. 본 개시내용에서 이는 "*/*" 또는 "**"로 나타내고, EU 번호매김에 따라 hIgG1 Fc 내에 H435R 및 Y436F 돌연변이를 포함하는 항체, 또는 이의 항원-결합 단편을 지칭한다. H435R 및 Y436F 돌연변이는 서열 번호: 648의 H318R 및 Y319F, hIgG1 중쇄와 동일하다. */* 돌연변이 부위가 EU 번호매김에 따른 H435R 및 Y436F를 지칭하지만, */* 돌연변이는 가변 도메인 서열 길이에 따라 제공된 항체(또는 이의 항원-결합 단편)에 대해 실제 중쇄내 상이한 부위에서 발견될 수 있다.
상술한 */* 변이체 외에, 특정의 추가의 Fc 변이체가 본원에 고려된다. 특정의 구현예에 따라서, 단백질 A에 대해 구체화된 항체는 항체의 Fc 영역내에서 변형되어 단백질 A 또는 각각의 동물 종에 적절한 동족 단백질에 의한 결합을 약화시킬 것이다.
특정의 구현예에 따라서, 본 개시내용의 ACD에 적합한 단백질 A에 대한 항체는 예컨대, 중성 pH와 비교하여 산성 pH에서, FcRn 수용체에 대한 항체 결합을 향상시키거나 약화시키는 하나 이상의 돌연변이를 포함하는 Fc 도메인을 포함한다. 예를 들면, 본 발명은 Fc 도메인의 CH2 또는 CH3 영역내에 돌연변이를 포함하는 단백질 A에 대한 항체를 포함하며, 여기서 돌연변이(들)는 산성 환경(예를 들면, pH가 약 5.5 내지 약 6.0이 범위인 엔도소옴내)에서 FcRn에 대한 Fc 도메인의 친화성을 증가시킨다. 이러한 돌연변이는 동물에게 투여된 경우 항체의 혈청 반감기에서의 증가를 야기할 수 있다. 이러한 Fc 변형의 비-제한적 예는 예컨대, 250번(예컨대, E 또는 Q); 250 및 428번(예컨대, L 또는 F); 252번(예컨대, L/Y/F/W 또는 T), 254번(예컨대, S 또는 T), 및 256번(예컨대, S/R/Q/E/D 또는 T) 위치에서의 변형; 또는 428 및/또는 433번(예컨대, H/L/R/S/P/Q 또는 K) 및/또는 434번(예컨대, H/F 또는 Y) 위치에서의 변형; 또는 250 및/또는 428번 위치에서의 변형; 또는 307 또는 308번(예컨대, 308F, V308F), 및 434번 위치에서의 변형을 포함한다. 일 구현예에서, 변형은 428L(예컨대, M428L) 및 434S(예컨대, N434S) 변형; 428L, 259I (예컨대, V259I), 및 308F(예컨대, V308F) 변형; 433K(예컨대, H433K) 및 434(예컨대, 434Y) 변형; 252, 254, 및 256(예컨대, 252Y, 254T, 및 256E) 변형; 250Q 및 428L 변형(예컨대, T250Q 및 M428L); 및 307 및/또는 308 변형(예컨대, 308F 또는 308P)을 포함한다.
예를 들면, 단백질 A에 대한 항체는 250Q 및 248L(예컨대, T250Q 및 M248L); 252Y, 254T 및 256E(예컨대, M252Y, S254T 및 T256E); 428L 및 434S(예컨대, M428L 및 N434S); 및 433K 및 434F(예컨대, H433K 및 N434F)로 이루어진 그룹으로부터 선택된 돌연변이의 하나 이상의 쌍 또는 그룹을 포함하는 Fc 도메인을 포함한다. 본원에 개시된 항체 가변 도메인 내 앞서의 Fc 도메인 돌연변이, 및 다른 돌연변이의 모든 가능한 조합은 본 개시내용의 영역 내에서 고려된다.
본 개시내용의 ADC에 적합한 단백질 A에 대한 항체는 변경된 작용기 기능, 예를 들면, 증가 또는 감소된 작용기 기능을 갖는 변형된 Fc 도메인을 포함할 수 있다. 본원에 사용된 바와 같은, "변형된 작용기 기능"을 갖는 변형된 Fc 도메인은 면역글로불린의 임의의 Fc 부위가 야생형의, 천연적으로 존재하는 Fc 도메인에 대해 변형됨으로써 변형된 Fc를 포함하는 분자가 세포 사멸(예컨대, ADCC 및/또는 CDC), 상보체 활성화, 식세포작용 및 옵소닌화(opsonization)로 이루어진 그룹으로부터 선택된 적어도 하나의 효과의 중증도 또는 정도에 있어서의 증가 또는 감소를 나타내는, 돌연변이된, 트렁케이트된 등의 면역글로불린의 임의의 Fc 부위를 의미한다. 특정의 구현예에서, "변경된 작용기 기능을 갖는 변형된 Fc 도메인"은 Fc 수용체(예컨대, FcγR)에 대해 감소된 또는 약화된 결합을 갖는 Fc 도메인이다. 예시적인 변형된 Fc 도메인은 이의 전문이 본원에 참고로 포함된 US 2006/0024298에 기술되어 있다. 일부 구현예에서, 변형은 G236A이다.
특정의 구현예에서, 변형된 Fc 도메인은 힌지 영역내에 치환을 포함하는 변이체 IgG1 Fc 또는 변이체 IgG4 Fc이다. 예를 들면, 본 발명의 맥락에서 사용하기 위한 변형된 Fc는 변이체 IgG1 Fc를 포함할 수 있고, 여기서 IgG1 Fc 힌지 영역의 적어도 하나의 아미노산은 IgG2 Fc 힌지 영역으로부터의 상응하는 아미노산으로 대체된다. 대안적으로, 본 발명의 맥락에서 사용하기 위한 변형된 Fc는 변이체 IgG4 Fc를 포함할 수 있고 여기서 IgG4 Fc 힌지 영역의 적어도 하나의 아미노산은 IgG2 Fc 힌지 영역으로부터의 상응하는 아미노산으로 대체된다. 본 발명의 맥락에서 사용될 수 있는 비-제한적인, 예시적인 변형된 Fc 영역, 뿐만 아니라 여기에 나타낸 변형된 Fc 영역의 임의의 기능적으로 등가인 변이체는 미국 특허원 공보 제2014/0243504호에 나타나 있고, 이의 개시내용은 이의 전문이 본원에 참고로 포함된다.
본 발명의 맥락에서 사용될 수 있는 다른 변형된 Fc 도메인 및 Fc 변형은 US 2014/0171623; US 8,697,396; US 2014/0134162; WO 2014/043361에 나타낸 임의의 변형을 포함하며, 이의 개시내용은 이의 전문이 본원에 참고로 포함된다. 본원에 기술된 바와 같은 변형된 Fc 도메인을 포함하는 항체 또는 다른 항체-결합 융합 단백질을 작제하는 방법은 당해 분야에 공지되어 있다.
항체-약물 접합체(ADC)
약물 또는 치료제에 접합된 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는 항체-약물 접합체(ADC)가 본원에 제공된다. 일부 구현예에서, 치료제는 리파마이신 유사체일 수 있다. 또한 반응성 링커-페이로드(linker-payload)는 ADC를 제조하는데 유용한 예를 들면, 본원에 제공된 바와 같은 화학식 (A), (B), (I), (I'), (II), (II'), (III), (III'), (IV), (IV'), (V), (V')의 임의의 구현예에 따른 구조를 갖는 화합물일 수 있다. 또한 ADC를 제조하는데 유용한 변형된 항체 또는 변형된 항체-결합 단편이 본원에 제공된다.
일부 구현예에서, 본 개시내용의 ADC를 제조하는데 적합한 항체, 또는 항체의 항원-결합 단편은 감염성 질환-관련 표적에 결합한다. 일부 구현예에서, 항체, 또는 항체의 항원-결합 단편은 MSR1에 결합한다. 일부 구현예에서, 항체, 또는 항체의 항원-결합 단편은 WTA에 결합한다. 일부 구현예에서, 항체, 또는 항체의 항원-결합 단편은 단백질 A에 결합한다.
ADC는 일반적으로 화학식 (XV): BA - [L - PA]n을 갖는다. 화학식에서, BA는 결합제, 예를 들면, 항체, 또는 이의 항원-결합 단편이다. L은 하기 상세히 기술된 링커이다. PA는 페이로드, 예를 들면, 본원에 기술된 바와 같은 리파마이신 유사체이다. 화학식에서, n은 1 내지 30의 정수, 예를 들면, 1 내지 4, 예컨대, 2 또는 4이다. 각각의 L - PA는 PA의 기능성 그룹에 공유결합으로 결합된다. 특수한 구현예에서, 각각의 L - PA는 라이신 측쇄, 시스테인 측쇄, 글루타민 측쇄, 또는 BA의 아미노 말단에 공유결합으로 결합된다.
일부 구현예에서, L - PA는 결합제 BA, 예를 들면, 항체, 또는 이의 항원-결합 단편에, 반응성 그룹, 또는 RG를 통해 공유결합으로 결합된다. 결합제에 대한 접합 후, 반응성 그룹은 링커 L of the ADC having the 화학식 (XV): BA - [L - PA]n을 갖는 ADC의 링커 L의 부분이 된다. 본 개시내용에 유용한 예시적인 반응성 그룹 RG는 말레이미드, 석신이미드, N-하이드록시 석신이미드(NHS), 말단 1급 아민, 할로아세틸 그룹, 이소티오시아네이트, 티올, 알코올, 케톤, 알데하이드, 산, 에스테르, 하이드로지드, 및 아닐린을 포함하는 것을 포함하나, 이에 한정되지 않는다. RG는 또한 다음 구조를 갖는 모이어티를 포함한다:
Figure pct00308
또는
Figure pct00309
,
여기서 X는 -O- 또는 -NH-이고 LG는 이탈 그룹, 예컨대, Br이다.
일부 구현예에서, 반응성 링커는
Figure pct00310
이고, 여기서 b는 2 내지 8의 정수이다.
일부 구현예에서, 반응성 링커는
Figure pct00311
이고 여기서 b는 2 내지 8의 정수이다.
일부 구현예에서, 반응성 링커는
Figure pct00312
이고 여기서 b는 2 내지 8의 정수이고, RN은 수소 원자 또는 알킬 그룹이고, RM은 알킬 그룹이다.
일부 구현예에서, 반응성 링커는
Figure pct00313
이고, 여기서 b는 2 내지 8의 정수이다.
일부 구현예에서, 반응성 링커는
Figure pct00314
이고, 여기서 b는 2 내지 8의 정수이다.
일부 구현예에서, 반응성 링커는
Figure pct00315
이고 여기서 b는 2 내지 8의 정수이고, RN은 수소 원자 또는 알킬 그룹이고, RM은 알킬 그룹이다.
항체 또는 항원 결합 단편의 잔기에 접합시키기 위한 기술 및 링커는 당해 분야에 공지되어 있다. 당해 양태의 맥락에서 사용될 수 있는 예시적인 아미노산, 예컨대, 라이신(참고: 예컨대, US 5,208,020; US 2010/0129314; Hollander et al., Bioconjugate Chem., 2008, 19:358-361; WO 2005/089808; US 5,714,586; US 2013/0101546; 및 US-2012/0585592), 시스테인(참고: 예컨대, US 2007/0258987; WO 2013/055993; WO 2013/055990; WO 2013/053873; WO 2013/053872; WO 2011/130598; US 2013/0101546; 및 US 7,750,116), 셀레노시스테인(참고: 예컨대, WO 2008/122039; 및 Hofer et al., Proc. Natl. Acad. Sci., USA, 2008, 105:12451-12456), 포르밀 글리신(참고: 예컨대, Carrico et al., Nat. Chem. Biol., 2007, 3:321-322; Agarwal et al., Proc. Natl. Acad. Sci., USA, 2013, 110:46-51, 및 Rabuka et al., Nat. Protocols, 2012, 10:1052-1067), 비-천연 아미노산(참고: 예컨대, WO 2013/068874, 및 WO 2012/166559), 및 산성 아미노산(참고: 예컨대, WO 2012/05982) 부착. 라이신 접합은 또한 NHS(N-하이드록시 석신이미드)를 통해 진행시킬 수 있다. 링커는 또한 시스테인 잔기, 예를 들면, 절단된 쇄간 이황화물 결합의 시스테인 잔기에 티올사이에 탄소 브릿지를 형성시킴으로써 접합시킬 수 있다(참고: 예컨대, US 9,951,141, 및 US 9,950,076). 링커는 또한 항원-결합 단백질에 탄수화물(참고: 예컨대, US 2008/0305497, WO 2014/065661, 및 Ryan et al., Food & Agriculture Immunol., 2001, 13:127-130) 및 이황화물 링커(참고: 예컨대, WO 2013/085925, WO 2010/010324, WO 2011/018611, 및 Shaunak et al., Nat. Chem. Biol., 2006, 2:312-313)에 대한 부착을 통해 접합시킬 수 있다. 부위 특이적인 접합 기술을 또한 사용하여 항체 또는 항원 결합 단백질의 특수한 잔기에 대한 접합을 지시할 수 있다(참고: 예컨대, Schumacher et al. J Clin Immunol (2016) 36(Suppl 1): 100). 부위 특이적인 접합 기술은 트랜스글루타미나제를 경유한 글루타민 접합을 포함하나, 이에 한정되지 않는다(참고: 예컨대, Schibli, Angew Chemie Inter Ed. 2010, 49 ,9995).
링커는 하나 이상의 글루타민 잔기에 트랜스글루타미나제-기반 화학-효소 접합을 통해 접합시킬 수 있다(참고: 예컨대, Dennler et al., Bioconjugate Chem. 2014, 25, 569-578, 및 WO 2017/147542). 예를 들면, 트랜스글루타미나제의 존재하에서, 항체의 하나 이상의 글루타민 잔기를 1급 아민 화합물에 커플링시킬 수 있다, 일부 구현예에서, 글루타민 잔기(예컨대, Gln295 잔기)를 갖는 항체를 하기 보다 상세히 기술된 1급 아민 화합물로, 효소 트랜스글루타미나제의 존재하에 처리한다. 1급 아민 화합물은 페이로드 또는 링커-페이로드를 포함하며, 이는 트랜스글루타미나제-매개된 커플링을 통해 항체 약물 접합체를 직접 제공한다. 1급 아민 화합물은 도한 후속적으로 항체 약물 접합체의 합성을 향해 추가의 화합물과 후속적으로 반응할 수 있는 반응성 그룹으로 작용화시킨 링커 및 스페이서를 포함한다. 글루타민 잔기를 포함하는 항체는 천연 공급원으로부터 단리될 수 있거나 하나 이상의 글루타민 잔기를 포함하도록 가공될 수 있다. 글루타민 잔기를 항체 폴리펩타이드 쇄(글루타미닐-변형된 항체 또는 항원 결합 분자)로 가공하기 위한 기술은 당해 분야의 숙련가의 기술내에 있다. 특정의 구현예에서, 항체는 아글리코실화된다.
특정의 구현예에서, 항체 또는 글루타미닐-변형된 항체 또는 항원 결합 분자는 적어도 하나의 폴리펩타이드 쇄 서열 내에 적어도 하나의 글루타민 잔기를 포함할 수 있다. 특정의 구현예에서, 항체 또는 글루타미닐-변형된 항체 또는 항원 결합 분자는 2개의 중쇄 폴리펩타이드를 포함할 수 있고, 각각은 하나의 Gln295 잔기를 지닌다. 추가의 구현예에서, 항체 또는 글루타미닐-변형된 항체 또는 항원 결합 분자는 중쇄 295번 이외의 부위에서 하나 이상의 글루타민 잔기를 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 항체는 부위-지시된 돌연변이유발에 의해 장애가 있는 항체 기능 또는 장애가 있는 항체 기능 또는 결합을 생성하지 않고 부위에서 글루타민 잔기를 삽입시킴에 의해 제조할 수 있다. 예를 들면, 본원에 기술된 바와 같은 Asn297Gln(N297Q) 돌연변이(들)을 지닌 항체가 본원에 포함된다. 일부 구현예에서, Gln295 잔기 및/또는 N297Q 돌연변이를 지닌 항체는 이의 가변 영역내에 하나 이상의 추가의 천연적으로 존재하는 글루타민 잔기를 함유하며, 이는 트랜스글루타미나제에 접근가능하므로 링커 또는 링커-페이로드에 접합할 수 있다. 예시적인 천연적으로 존재하는 글루타민 잔기는 예컨대, 경쇄의 Q55에서 찾을 수 있다. 이러한 예에서, 트랜스글루타미나제를 경유해 접합된 항체는 예측된 DAR 값보다 더 큰 값을 가질 수 있다(예컨대, 4보다 큰 DAR). 임의의 이러한 항체는 천연 또는 인공 공급원으로부터 단리할 수 있다.
다양한 구현예에서, 본 개시내용의 ADC에 적합한 항체, 또는 이의 항원-결합 단편은 접합을 위한 하나 이상의 부위-특이적인 시스테인 돌연변이를 포함할 수 있다. 일 구현예에서, 항체, 또는 이의 항원-결합 단편은 103번 위치에서 경쇄 돌연변이(Cys103Ser 또는 C103S)를 포함한다. 일 구현예에서, 항체, 또는 이의 항원-결합 단편은 103번 경쇄 위치에서 본 개시내용의 화합물에 접합된다.
비-제한적 예로서, 항-단백질 A 항체, 또는 이의 항원-결합 단편은 접합을 위한 하나 이상의 부위-특이적인 시스테인 돌연변이를 포함할 수 있다. 일 구현예에서, 항-단백질 A 항체, 또는 이의 항원-결합 단편은 103번 위치에서 경쇄 돌연변이(C103S)를 포함한다. 일 구현예에서, 항-단백질 A 항체, 또는 이의 항원-결합 단편은 103번 경쇄 위치에서 본 개시내용의 화합물에 접합된다.
항체(또는 항원 결합 화합물)의 트랜스글루타미나제 매개된 커플링에 유용한 글루타민을 포함하는 1급 아민 화합물은 통상의 기술의 숙련가에 의해 유용한 것으로 여겨지는 임의의 1급 아민 화합물일 수 있다. 일반적으로, 1급 아민 화합물은 화학식 H2N-R을 가지고, 여기서 R은 항체 및 반응 상태와 혼용성인 임의의 그룹일 수 있다. 특정의 구현예에서, R은 알킬, 치환된 알킬, 헤테로알킬, 또는 치환된 헤테로알킬이다.
일부 구현예에서, 1급 아민 화합물은 반응성 그룹 또는 보호된 반응성 그룹을 포함할 수 있다. 유용한 반응성 그룹은 아지드, 알킨, 사이클로알킨, 티올, 알코올, 케톤, 알데하이드, 산, 에스테르, 하이드로지드, 아닐린, 및 아민을 포함한다. 특정의 구현예에서, 반응성 그룹은 아지드, 알킨, 설프하이드릴, 사이클로알킨, 알데하이드, 및 카복실로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.
특정의 구현예에서, 1급 아민 화합물은 화학식 H2N-LL-X에 따르고, 여기서 LL은 2가 스페이서이고 X는 반응성 그룹 또는 보호된 반응성 그룹이다. 특수한 구현예에서, LL는 2가 폴리에틸렌 글리콜(PEG) 그룹이다. 특정의 구현예에서, X는 -SH, -N3, 알킨, 알데하이드, 및 테트라졸로 이루어진 그룹으로부터 선택된다. 특수한 구현예에서, X는 -N3이다.
특정의 구현예에서, t1급 아민 화합물은 다음의 화학식 중 하나에 따른다:
H2N-(CH2)n-X;
H2N-(CH2CH2O)n-(CH2)p-X;
H2N-(CH2)n-N(H)C(O)-(CH2)m-X;
H2N-(CH2CH2O)n-N(H)C(O)-(CH2CH2O)m-(CH2)p-X;
H2N-(CH2)n-C(O)N(H)-(CH2)m-X;
H2N-(CH2CH2O)n-C(O)N(H)-(CH2CH2O)m-(CH2)p-X;
H2N-(CH2)n-N(H)C(O)-(CH2CH2O)m-(CH2)p-X;
H2N-(CH2CH2O)n-N(H)C(O)-(CH2)m-X;
H2N-(CH2)n-C(O)N(H)-(CH2CH2O)m-(CH2)p-X; 및
H2N-(CH2CH2O)n-C(O)N(H)-(CH2)m-X;
여기서 n은 1 내지 12로부터 선택된 정수이고; m은 0 내지 12로부터 선택된 정수이고; p는 0 내지 2로부터 선택된 정수이고; X는 -SH, -N3, -C≡CH, -C(O)H, 테트라졸, 및 임의의
Figure pct00316
로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.
상기에서, 임의의 알킬 또는 알킬렌(즉, -CH2-) 그룹은 예를 들면, C1-8알킬, 메틸포르밀, 또는 -SO3H로 임의 치환될 수 있다. 특정의 구현예에서, 알킬 그룹은 비치환된다.
특정의 구현예에서, 1급 아민 화합물은 다음으로 이루어진 그룹으로부터 선택된다:
Figure pct00317
및
Figure pct00318
특수한 구현예에서, 1급 아민 화합물은
Figure pct00319
이다.
따라서, 하나 이상의 1급 아민 화합물에 연결된 변형된 항체, 및 이의 항원-결합 단편이 본원에 제공된다. 특수한 구현예에서, 다음 화학식에 따른 변형된 항체, 및 이의 항원-결합 단편이 본원에 제공된다:
Figure pct00320
화학식에서, BA는 항체, 또는 이의 항원 결합 단편이다. 변수 n은 1 내지 30의 정수이다. 특정의 구현예에서, n은 1 내지 BA내 글루타민 잔기의 수이다. 특정의 구현예에서, n은 1 내지 4이다. 특정의 구현예에서, n은 1, 2, 3, 또는 4이다. 일부 구현예에서, n은 2이다. 일부 구현예에서, n은 4이다. 변형된 항체, 및 이의 항원-결합 단편은 예를 들면, 하나 이상의 L - PA 분자를 연결시켜 ADC를 형성하는데 유용하다.
특정의 구현예에서, BA는 2개 또는 4개의 글루타민 잔기를 포함할 수 있다. 특정의 구현예에서, BA는 Q295 잔기를 포함할 수 있다. 특정의 구현예에서, BA는 N297Q 돌연변이를 포함할 수 있다. 특정의 구현예에서, BA는 Q295 및 N297Q를 포함할 수 있다. 이러한 구현에에서, BA는 이량체일 수 있으므로, BA는 L - PA 모이어티에 대한 접합을 위해 4개의 글루타민 잔기를 갖는다.
화학식 (XV) BA - [L - PA]n에서, PA는 유용한 것으로 고려되는 임의의 페이로드일 수 있다. 특정의 구현예에서, PA는 본 개시내용에 따른 리파마이신 유사체이다.
화학식 (XV)의 일부 구현예에서, L은 -L 1 -L 2 -(L 3 )0-1-이고 L 2 는
Figure pct00321
Figure pct00322
Figure pct00323
Figure pct00324
-OCH2C(O)-, 또는 사이클로덱스트린 잔기(CD); 또는 이의 조합을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, L은 -L 1 -L 2 -(L 3 )0-1-이고 L 2 는
Figure pct00325
Figure pct00326
Figure pct00327
또는 CD, 또는 이의 조합을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, L은 -L 1 -L 2 -(L 3 )0-1-이고 L 2 는 CD를 포함할 수 있고 여기서 CD는 다음으로 이루어진 그룹으로부터 선택된다:
Figure pct00328
Figure pct00329
.
화학식 (XV)의 일부 구현예에서, L은 -L 1 -L 2 -(L 3 )0-1-이고 L 2 는
Figure pct00330
를 포함할 수 있다.
일부 구현예에서, L은 -L1-L2-(L3)0-1-이고 -L1은
Figure pct00331
또는 이의 레지오이성체(regioisomer) 또는 이성체의 혼합물;
Figure pct00332
Figure pct00333
(여기서 S는 이를 통해 반응성 그룹이 BA에 부착된 시스테인 잔기 상의 S 원자를 지칭하고; 여기서 N은 이를 통해 반응성 그룹 잔기가 BA에 부착된 라이신 잔기 상의 N 원자를 지칭한다) 또는 이의 입체이성체 또는 입체이성체의 혼합물; 및
Figure pct00334
(여기서 N은 이를 통해 반응성 그룹 잔기가 BA에 부착된 라이신 잔기 상의 N 원자를 지칭한다)로부터 선택된 L 1 을 포함할 수 있다.
일부 구현예에서, L은 -L 1 -L 2 -(L 3 )0-1-이고 -L 2 -(L 3 )0-1-은 다음을 포함할 수 있다:
Figure pct00335
Figure pct00336
Figure pct00337
Figure pct00338
Figure pct00339
.
화학식 (XV), BA - [L - PA]n에서, PA는 적합한 것으로 여겨지는 임의의 링커 L를 사용하여 BA에 연결시킬 수 있다. 링커는 본원에 기술된 항체 또는 항원-결합 단백질을 치료학적 모이어티, 예컨대, 리파마이신 유사체와 연결시키거나, 접속시키거나, 결합시킨 임의의 그룹 또는 모이어티이다. 적합한 링커는 예를 들면, Antibody-Drug Conjugates and Immunotoxins; Phillips, G. L., Ed.; Springer Verlag: New York, 2013; Antibody-Drug Conjugates; Ducry, L., Ed.; humana Press, 2013; Antibody-Drug Conjugate; Wang, J., Shen, W.-C., 및 Zaro, J. L., Eds.; Springer International Publishing, 2015에서 찾을 수 있고, 이의 각각의 내용은 이의 전문이 본원에 참고로 포함된다. 일반적으로, 본원에 기술된 항체 접합체에 대한 적합한 결합제 링커는 항체의 순환 반감기를 활용하기에 충분히 안정하고, 동시에 접합체의 항원-매개된 내재화 후 이의 페이로드를 방출할 수 있는 것이다. 링커는 절단가능하거나 절단가능하지 않을 수 있다. 절단가능한 링커는 세포대 물질대사에 이은 내재화, 예컨대, 가수분해, 환원, 또는 효소 반응을 경유한 절단에 의해 절단된 링커를 포함한다. 절단가능하지 않은 링커는 항체의 라이소솜 분해에 이은 내재화를 경유해 부착된 페이로드를 방출하는 링커를 포함한다. 적합한 링커는 산에 불안정한 링커, 가수분해에 불안정한 링커, 효소적으로 절단가능한 링커, 환원에 불안정한 링커, 자가-용해성(self-immolative) 링커, 및 절단가능하지 않은 링커를 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 적합한 링커는 또한 펩타이드, 글루쿠로니드, 석신이미드-티오에테르, 폴리에틸렌 글리콜(PEG) 단위, 하이드라존, 말-카프로일 단위, 디펩타이드 단위, 발린-시트룰린 단위, 및 파라-아미노벤질(PAB) 단위이거나 이를 포함하는 것을 포함하나, 이에 한정되지 않는다.
당해 분야에 공지된 임의의 링커 분자 또는 링커 기술을 사용하여 본 개시내용의 ADC를 생성시키거나 작제할 수 있다. 특정의 구현예에서, 링커는 절단가능한 링커이다. 다른 구현예에 따라서, 링커는 절단가능하지 않은 링커이다. 본 개시내용의 맥락에서 사용될 수 있는 예시적인 링커는 예컨대, MC (6-말레이미도카프로일), MP(말레이미도프로파노일), val-cit(발린-시트룰린), val-ala(발린-알라닌), 프로테아제-절단가능한 링커내 디펩타이드, ala-phe(알라닌-페닐알라닌), 프로테아제-절단가능한 링커내 디펩타이드, PAB (p-아미노벤질옥시카보닐), SPP(N-석신이미딜4-(2-피리딜티오)펜타노에이트), SMCC(N-석신이미딜4-(N-말레이미도메틸)사이클로헥산-1 카복실레이트), SIAB(N-석신이미딜(4-요오도-아세틸)아미노벤조에이트), 및 변이체 및 이의 조합을 포함하거나 이로 이루어진 링커를 포함한다. 본 개시내용의 맥락에서 사용될 수 있는 링커의 추가의 예는 예컨대, US 7,754,681 및 Ducry, Bioconjugate Chem., 2010, 21:5-13, 및 여기서 인용된 참고문헌에서 제공되며, 이의 내용은 이의 전문이 참고로 본원에 포함된다.
특정의 구현예에서, 링커는 생리학적 상태에서 안정하다. 특정의 구현예에서, 링커는 절단될 수 있는데, 예를 들면, 효소의 존재하에서 또는 특수한 pH 범위 또는 값에서 적어도 페이로드 부위를 방출할 수 있다. 일부 구현예에서, 링커는 효소-절단가능한 모이어티를 포함할 수 있다. 예시적인 효소-절단가능한 모이어티는 효소-절단가능한 모이어티를 포함한다. 예시적인 효소-절단가능한 모이어티는 펩타이드 결합, 에스테르 연결, 하이드라존 및 이황화물 연결을 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 일부 구현예에서, 링커는 카텝신-절단가능한 링커를 포함할 수 있다.
일부 구현예에서, 링커는 절단가능하지 않은 모이어티를 포함할 수 있다.
적합한 링커는 또한 단일 결합제, 예컨대 항체의 2개의 시스테인 잔기에 화학적으로 결합된 것을 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 이러한 링커는 접합 공정의 결과로서 파괴되는 항체의 이황화물 결합을 모사하도록 제공될 수 있다.
일부 구현예에서, 링커는 하나 이상의 아미노산을 포함할 수 있다. 적합한 아미노산은 천연, 비-천연, 표준, 비-표준, 단백질생성, 비-단백질생성, 및 L- 또는 D-α-아미노산을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 링커는 알라닌, 발린, 글리신, 루이신, 이소루이신, 메티오닌, 트립토판, 페닐알라닌, 프롤린, 세린, 트레오닌, 시스테인, 타이로신, 아스파라긴, 글루타민, 아스파르트산, 글루탐산, 라이신, 아르기닌, 히스티딘, 또는 시트룰린, 이의 유도체, 또는 이의 조합을 포함한다. 특정의 구현예에서, 아미노산의 하나 이상의 측쇄은 후술한 측쇄 그룹에 연결된다. 일부 구현예에서, 링커는 발린 및 시트룰린을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 링커는 라이신, 발린, 및 시트룰린을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 링커는 라이신, 발린, 및 알라닌을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 링커는 발린 및 알라닌을 포함할 수 있다.
일부 구현예에서, 링커는 자가-용해성 그룹을 포함할 수 있다. 자가-용해성 그룹은 기술자에게 공지왼 임의의 이러한 그룹일 수 있다. 특수한 구현예에서, 자가-용해성 그룹은 p-아미노벤질(PAB), 또는 이의 유도체일 수 있다. 유용한 유도체는 p-아미노벤질옥시카보닐(PABC)을 포함한다. 기술자는 자가-용해성 그룹이 페이로드로부터 링커의 남아있는 원자를 방출하는 화학 반응을 수행할 수 있음을 인식할 것이다.
일부 구현예에서, 링커는
Figure pct00340
일 수 있고, 여기서
Figure pct00341
는 항체 또는 항원-결합 단백질(예컨대, 라이신 잔기를 통해)에 대한 결합이고
Figure pct00342
는 페이로드에 대한 결합이다. 일부 구현예에서, 링커는
Figure pct00343
일 수 있고, 여기서
Figure pct00344
는 항체 또는 항원-결합 단백질(예컨대, 라이신 잔기를 통해)에 대한 결합이고
Figure pct00345
는 페이로드에 대한 결합이다. 특정의 구현예에서, 링커는
Figure pct00346
일 수 있다.
특정의 구현예에서, 링커는
Figure pct00347
일 수 있다.
일부 구현예에서, 링커는 말레이미딜메틸-4-트랜스-사이클로헥산카복시석시네이트로부터 유래될 수 있다:
Figure pct00348
일부 구현예에서, 링커는
Figure pct00349
일 수 있고, 여기서
Figure pct00350
는 항체 또는 항원-결합 단백질(예컨대, 라이신 또는 세린 잔기를 통해)에 대한 결합이고
Figure pct00351
는 페이로드에 대한 결합이다.
일부 구현예에서, L은 절단가능한 링커일 수 있다. 일부 구현예에서, L은 절단가능하지 않은 링커일 수 있다. 일부 구현예에서, L은 디펩타이드를 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, L은
Figure pct00352
모이어티를 포함할 수 있다.
일부 구현예에서, L은 다음 구조를 갖는 모이어티를 포함할 수 있다:
Figure pct00353
일부 구현예에서, L은 다음 구조를 갖는 모이어티를 포함할 수 있다:
Figure pct00354
.
일부 구현예에서, L은 다음 구조를 갖는 모이어티를 포함할 수 있다:
Figure pct00355
.
일부 구현예에서, L은 다음으로부터 선택된 구조를 갖는 모이어티를 포함할 수 있다:
Figure pct00356
Figure pct00357
또는
Figure pct00358
.
특정의 구현예에서, 링커는 사이클로덱스트린 그룹을 포함할 수 있다. 특정의 구현예에서, 링커는 화학식(XVa)에 따른 ADC를 제공한다:
Figure pct00359
.
화학식 (XVa)에서, BA는 항체, 또는 이의 항원-결합 단편이고, LL은 3가 링커이고, RG는 반응성 링커 잔기이고, SP는, 독립적으로 각각의 예에서, 부재하거나 스페이서 그룹이고, 아래 첨자 n은 1 내지 30의 정수이고; PA는 페이로드이다. 특정의 구현예에서, n은 1 내지 4이다. 특정의 구현예에서, n은 4이다. 특정의 구현예에서, n은 2이다. 특정의 구현예에서, n은 1이다. 특정의 구현예에서, n은 3이다.
특정의 구현예에서, 링커는 사이클로덱스트린 그룹을 포함할 수 있다. 특정의 구현예에서, 링커는 화학식 (XVb)에 따른 ADC를 제공한다:
Figure pct00360
.
화학식 (XVb)에서, BA는 항체, 또는 이의 항원-결합 단편이고; RG는 반응성 그룹 잔기이고; SP1 및 SP2는 각각, 독립적으로 각각의 예에서, 부재하거나 스페이서 그룹 잔기이고, 여기서 SP1은 3가 링커를 포함할 수 있고; AA1은 아미노산 잔기를 포함하는 3가 링커이고; AA2는 디-펩타이드 잔기이고; PEG는 1 내지 30개의 폴리에틸렌 글리콜 잔기를 포함할 수 있고; B는 부재하거나
Figure pct00361
또는
Figure pct00362
이고, 여기서
Figure pct00363
는 이를 통해 B가 화학식내 인접한 그룹에 결합된 원자를 나타내고, CD는, 독립적으로 각각의 예에서, 부재하거나 사이클로덱스트린 잔기이고, 여기서 적어도 하나의 CD는 존재하고, 아래 첨자 n은 1 내지 30의 정수이고; 아래 첨자 m은 0 내지 5의 정수이고; PA는 페이로드 모이어티이다. 이러한 예에서, 아래 첨자 m은 0, 1, 2, 3, 4, 또는 5이다. 일부 예에서, 아래 첨자 m은 0이다. 일부 예에서, 아래 첨자 m은 1이다. 일부 예에서, 아래 첨자 m은 2이다. 일부 예에서, 아래 첨자 m은 3이다. 일부 예에서, 아래 첨자 m은 4이다. 일부 예에서, 아래 첨자 m은 5이다. 일부 예에서, B는 부재한다. 일부 예에서, B는
Figure pct00364
이다. 일부 예에서, B는
Figure pct00365
이다. 일부 예에서, AA 1 또는 AA 2 중 어느 하나는, 독립적으로 각각의 예에서, 알라닌, 발린, 루이신, 이소루이신, 메티오닌, 트립토판, 페닐알라닌, 프롤린, 세린, 트레오닌, 시스테인, 타이로신, 아스파라긴, 글루타민, 아스파르트산, 글루탐산, 라이신, 아르기닌, 히스티딘, 또는 시트룰린, 이의 유도체, 및 이의 조합으로부터 선택된 아미노산을 포함할 수 있다. 특정의 구현예에서, AA 1 은 알라닌, 발린, 루이신, 이소루이신, 메티오닌, 트립토판, 페닐알라닌, 프롤린, 글리신, 세린, 트레오닌, 시스테인, 타이로신, 아스파라긴, 글루타민, 아스파르트산, 글루탐산, 라이신, 아르기닌, 히스티딘, 또는 시트룰린, 이의 유도체, 및 이의 조합으로부터 선택된 아미노산이다. 특정의 구현예에서, AA 1 은 라이신이다. 특정의 구현예에서, AA 1 은 라이신 또는 라이신의 유도체이다. 특정의 구현예에서, AA 2 는 발린-시트룰린이다. 일부 구현예에서, AA 2 는 시트룰린-발린이다. 일부 구현예에서, AA 2 는는 발린-알라닌이다. 일부 구현예에서, AA 2 는 알라닌-발린이다. 일부 구현예에서, AA 2 는 발린-글리신이다. 일부 구현예에서, AA 2 는 글리신-발린이다. 일부 구현예에서, AA 1 -AA 2 는 글루타민-발린-시트룰린이다. 일부 구현예에서, AA 1 -AA 2 는 글루타민-발린-시트룰린이다. 일부 구현예에서, AA 1 -AA 2 는 라이신-발린-알라닌이다. 일부 구현예에서, AA 1 -AA 2 는 라이신-발린-시트룰린이다. 일부 구현예에서, AA 1 -AA 2 는 글루타민-발린-시트룰린이다. 특정의 구현예에서, 라이신은 L-라이신이다. 특정의 구현예에서, 라이신은 D-라이신이다. 일부 예에서, SP 1 은 독립적으로 각각의 예에서, C1-6 알킬렌, -NH-, -C(O)-, (-CH2-CH2-O)e, -NH-CH2-CH2-(-O-CH2-CH2)e-C(O)-, -C(O)-(CH2)u-C(O)-, -C(O)-NH-(CH2)v-, 및 이의 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택되고, 여기서 아래 첨자 e는 0 내지 4의 정수이고, 아래 첨자 u는 1 내지 8의 정수이고, 아래 첨자 v는 1 내지 8의 정수이다. 일부 예에서, SP 2 는 독립적으로 각각의 예에서, C1-6 알킬렌, -NH-, -C(O)-, (-CH2-CH2-O)e, -NH-CH2-CH2-(-O-CH2-CH2)e-C(O)-, -C(O)-(CH2)u-C(O)-, -C(O)-NH-(CH2)v-, 및 이의 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택되고, 여기서 아래 첨자 e는 0 내지 4의 정수이고, 아래 첨자 u는 1 내지 8의 정수이고, 아래 첨자 v는 1 내지 8의 정수이다.
특정의 구현예에서, 링커는 말단 친수성 그룹(HG)을 포함할 수 있다. 특정의 구현예에서, 링커는 타우린 그룹을 포함할 수 있다. 특정의 구현예에서, 링커는 말단 설폰산 그룹을 포함할 수 있다. 특정의 구현예에서, 링커는 화학식 (XVI)에 따른 ADC를 제공한다:
Figure pct00366
여기서, 화학식 (XVI)에서, BA는 결합제이고; LL은 3가 링커이고; RG 1 및 RG 2 는 반응성 그룹 잔기이고; SP 1 및 SP 2 는 독립적으로, 각각의 예에서, 부재하거나, 또는 스페이서 그룹 잔기이고; HG는 친수성 잔기이고; PA는 페이로드 잔기이고; 아래 첨자 n은 1 내지 30의 정수이고; 아래 첨자 q는 0 또는 1이다. 일부 예에서, 하나 이상의 3가 링커 LL은 존재할 수 있다. 일부 예에서, n은 1 내지 4의 정수이다. 일부 예에서 n은 1이다. 일부 예에서 n은 2이다. 일부 예에서 n은 3이다. 일부 예에서 n은 4이다. 일부 예에서 HG는 말단 친수성 그룹이다. 일부 예에서, HG는 하나의 말단 설폰산 그룹 또는 이의 염을 포함할 수 있다. 다른 예에서, HG는 하나 이상의 말단 설폰산 그룹 또는 이의 염을 포함할 수 있다. 일부 예에서, HG는 하나의 말단 포스폰산 그룹 또는 이의 염을 포함할 수 있다. 다른 예에서, HG는 하나 이상의 말단 포스폰산 그룹 또는 이의 염을 포함할 수 있다. 일부 예에서, HG는 하나의 말단 3급 아민 그룹 또는 이의 염을 포함할 수 있다. 다른 예에서, HG는 하나 이상의 말단 3급 아민 그룹 또는 이의 염을 포함할 수 있다. 일부 예에서, HG는 하나의 말단 폴리올(예컨대, 글루코즈, 말토즈) 또는 이의 유도체를 포함할 수 있다. 다른 예에서, HG는 하나 이상의 말단 폴리올(예컨대, 글루코즈, 말토즈) 또는 이의 유도체를 포함할 수 있다.
다른 예에서, 화학식 (XVI)의 화합물은 화학식 (XVII)에 따른다:
Figure pct00367
화학식 (XVII)에서, BA, RG1, SP 1 , RG 2 , SP 2 및 HG는 상기 정의된 바와 같고, AA 1 은 아미노산 잔기를 포함하는 3가 링커이고; AA 2 는 디펩타이드 잔기이고; B는
Figure pct00368
이고, 여기서
Figure pct00369
는 이를 통해 B가 화학식내 인접한 그룹에 결합된 원자를 나타내고; 아래 첨자 p는 0 또는 1이고; 아래 첨자 q는 0 또는 1이다. 일부 예에서, 아래 첨자 p는 0이고 아래 첨자 q는 0이다. 일부 예에서, 아래 첨자 p는 1이고; 아래 첨자 q는 0이다. 일부 예에서, 아래 첨자 p는 0이고; 아래 첨자 q는 1이다. 일부 예에서, 아래 첨자 p는 1이고; 아래 첨자 q는 1이다. 일부 예에서 SP 1 은 0 내지 5개의 폴리에틸렌 글리콜(PEG) 잔기를 포함할 수 있다. 일부 예에서 SP 2 는 0 내지 5개의 PEG 잔기를 포함할 수 있다. 일부 예에서, SP 1 은 독립적으로 각각의 예에서 C1-6 알킬렌, -NH-, -C(O)-, (-CH2-CH2-O)e, -NH-CH2-CH2-(-O-CH2-CH2)e-C(O)-, -C(O)-(CH2)u-C(O)-, -C(O)-NH-(CH2)v-, 및 이의 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택되고, 여기서 아래 첨자 e는 0 내지 4의 정수이고, 아래 첨자 u는 1 내지 8의 정수이고, 아래 첨자 v는 1 내지 8의 정수이다. 일부 예에서, SP 2 는 독립적으로 각각의 예에서, C1-6 알킬렌, -NH-, -C(O)-, (-CH2-CH2-O)e, -NH-CH2-CH2-(-O-CH2-CH2)e-C(O)-, -C(O)-(CH2)u-C(O)-, -C(O)-NH-(CH2)v-, 및 이의 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택되고, 여기서 e는 0 내지 4의 정수이고, 아래 첨자 u는 1 내지 8의 정수이고, 아래 첨자 v는 1 내지 8의 정수이다. 일부 예에서, AA 1 또는 AA 2 중 어느 하나는, 독립적으로 각각의 예에서, 알라닌, 발린, 루이신, 이소루이신, 메티오닌, 트립토판, 페닐알라닌, 프롤린, 세린, 트레오닌, 시스테인, 타이로신, 아스파라긴, 글루타민, 아스파르트산, 글루탐산, 라이신, 아르기닌, 히스티딘, 또는 시트룰린, 이의 유도체, 및 이의 조합으로부터 선택된 아미노산이다. 특정의 구현예에서, AA 1 은 알라닌, 발린, 루이신, 이소루이신, 메티오닌, 트립토판, 페닐알라닌, 프롤린, 글리신, 세린, 트레오닌, 시스테인, 타이로신, 아스파라긴, 글루타민, 아스파르트산, 글루탐산, 라이신, 아르기닌, 히스티딘, 또는 시트룰린, 이의 유도체, 및 이의 조합으로부터 선택된 아미노산이다. 특정의 구현예에서, AA 1 은 라이신이다. 특정의 구현예에서, AA 1 은 라이신 또는 라이신의 유도체이다. 특정의 구현예에서, AA 1 은 글루탐산이다. 특정의 구현예에서, AA 2 는 발린-시트룰린이다. 일부 구현예에서, AA 2 는 시트룰린-발린이다. 일부 구현예에서, AA 2 는 발린-알라닌이다. 일부 구현예에서, AA 2 는 알라닌-발린이다. 일부 구현예에서, AA 2 는 발린-글리신이다. 일부 구현예에서, AA 2 는 글리신-발린이다. 일부 구현예에서, AA 1 -AA 2 는 글루타민-발린-시트룰린이다. 일부 구현예에서, AA 1 -AA 2 는 라이신-발린-시트룰린이다. 일부 구현예에서, AA 1 -AA 2 는 라이신-발린-알라닌이다. 일부 구현예에서, AA 1 -AA 2 는 글루타민-발린-알라닌이다. 특정의 구현예에서, 라이신은 L-라이신이다. 특정의 구현예에서, 라이신은 D-라이신이다.
특정의 구현예에서, 링커는 화학식 (XVIII)에 따른 ADC를 제공한다:
Figure pct00370
화학식 (XVIII)에서, BA는 항체, 또는 이의 항원-결합 단편이고; RG는 반응성 그룹 잔기, 예컨대, 말레이미드 또는 석신이미드 잔기이고; SP는 부재하거나 스페이서 그룹 잔기이고; AA는 이-펩타이드 잔기(di-peptide residue), 예컨대, 발린-시트룰린 링커이고; B는 부재하거나
Figure pct00371
이고, 여기서
Figure pct00372
는 이를 통해 B가 화학식내 인접한 그룹에 결합된 원자를 나타내고, 아래 첨자 n은 1 내지 30의 정수이고; PA는 페이로드 모이어티, 예컨대, 리파마이신 유사체이다. 일부 예에서, B는 부재한다. 일부 예에서, B는
Figure pct00373
이다. 일부 예에서, AA는, 독립적으로 각각의 예에서, 알라닌, 발린, 루이신, 이소루이신, 메티오닌, 트립토판, 페닐알라닌, 프롤린, 세린, 트레오닌, 시스테인, 타이로신, 아스파라긴, 글루타민, 아스파르트산, 글루탐산, 라이신, 아르기닌, 히스티딘, 또는 시트룰린, 이의 유도체, 및 이의 조합으로부터 선택된 아미노산이다. 특정의 구현예에서, AA는 발린-시트룰린이다. 일부 구현예에서, AA는 시트룰린-발린이다. 일부 구현예에서, AA는 발린-알라닌이다. 일부 구현예에서, AA는 알라닌-발린이다. 일부 구현예에서, AA는 발린-글리신이다. 일부 구현예에서, AA는 글리신-발린이다. 일부 구현예에서, SP는 C1-6 알킬, -NH-, -C(O)-, -CH2-CH2-C(O)-NH-, -(CH)u-C(O)-NH-, (-CH2-CH2-O)e, -NH-CH2-CH2-(-O-CH2-CH2)e-C(O)-, -C(O)-(CH2)u-C(O)-, -C(O)-NH-(CH2)v-, -(CH)u-C(O)-NH-(CH2-CH2-O)e-(CH)u-C(O)-NH-, -(CH)2-C(O)-NH-(CH2-CH2-O)8-(CH)2-C(O)-NH-, 및 이의 조합으로 이루어진 그룹으부터 선택되고, 여기서 독립적으로 각각의 존재시 아래 첨자 e는 1 내지 20의 정수이고, 아래 첨자 u는 1 내지 8의 정수이고, 아래 첨자 v는 1 내지 8의 정수이다.
특정의 구현예에서, 링커는 사이클로덱스트린 그룹을 포함할 수 있다. 특정의 구현예에서, 링커는 화학식 (XIX)에 따른 ADC를 제공한다:
Figure pct00374
화학식 (XIX)에서, BA는 항체, 또는 이의 항원-결합 단편이고; RG는 반응성 그룹 잔기, 예컨대, 말레이미드 또는 석신이미드 잔기이고; SP 1 및 SP 2 는 각각, 독립적으로 각각의 예에서, 부재하거나 스페이서 그룹 잔기, 예컨대,
Figure pct00375
이고; AA는 재-펩타이드 잔기, 예컨대, 발린-시트룰린 링커이고; PEG는 1 내지 30개의 폴리에틸렌 글리콜 잔기를 포함하는 폴리에틸렌 글리콜이고; B는 부재하거나
Figure pct00376
이고, 여기서
Figure pct00377
는 이를 통해 B가 화학식내 인접한 그룹에 결합된 원자를 나타내고, 아래 첨자 n은 1 내지 30의 정수이고; 아래 첨자 m은 1 내지 20의 정수이고; 아래 첨자 p는 0 또는 1이고; PA는 페이로드 모이어티, 예컨대, 리파마이신 유사체이다. 이러한 에에서, 아래 첨자 m은 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 또는 20이다. 일부 예에서, 아래 첨자 m은 0이다. 일부 예에서, 아래 첨자 m은 1이다. 일부 예에서, 아래 첨자 m은 2이다. 일부 예에서, 아래 첨자 m은 5이다. 일부 예에서, 아래 첨자 m은 8이다. 일부 예에서, 아래 첨자 m은 10이다. 일부 예에서, B는 부재한다. 일부 예에서, B는
Figure pct00378
이다. 일부 예에서, AA는, 독립적으로 각각의 예에서, 알라닌, 발린, 루이신, 이소루이신, 메티오닌, 트립토판, 페닐알라닌, 프롤린, 세린, 트레오닌, 시스테인, 타이로신, 아스파라긴, 글루타민, 아스파르트산, 글루탐산, 라이신, 아르기닌, 히스티딘, 또는 시트룰린, 이의 유도체, 및 이의 조합으로부터 선택된 아미노산을 포함한다. 특정의 구현예에서, AA는 발린-시트룰린이다. 일부 구현예에서, AA는 시트룰린-발린이다. 일부 구현예에서, AA는 발린-알라닌이다. 일부 구현예에서, AA는 알라닌-발린이다. 일부 구현예에서, AA는 발린-글리신이다. 일부 구현예에서, AA는 글리신-발린이다. 일부 구현예에서, SP1은 독립적으로 각각의 예에서, C1-6 알킬, -NH-, -C(O)-, -CH2-CH2-C(O)-NH-, -(CH)u-C(O)-NH-, (-CH2-CH2-O)e, -NH-CH2-CH2-(-O-CH2-CH2)e-C(O)-, -C(O)-(CH2)u-C(O)-, -C(O)-NH-(CH2)v-, 및 이의 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택되고, 여기서 아래 첨자 e는 0 내지 4의 정수이고, 아래 첨자 u는 1 내지 8의 정수이고, 아래 첨자 v는 1 내지 8의 정수이다. 일부 예에서, SP 2 는 독립적으로 각각의 예에서, C1-6 알킬렌, -NH-, -C(O)-, -CH2-CH2-C(O)-NH-, -(CH)u-C(O)-NH-, (-CH2-CH2-O)e, -NH-CH2-CH2-(-O-CH2-CH2)e-C(O)-, -C(O)-(CH2)u-C(O)-, -C(O)-NH-(CH2)v-, 및 이의 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택되고, 여기서 아래 첨자 e는 0 내지 4의 정수이고, 아래 첨자 u는 1 내지 8의 정수이고, 아래 첨자 v는 1 내지 8의 정수이다.
또한, 이의 약제학적으로 허용되는 염, 용매화물, 입체이성체 형태, 이의 레지오이성체, 또는 이의 레지오이성체의 혼합물이 본 예에 포함되고, 여기서 각각의
Figure pct00379
는 결합제에 대한 결합이고; 각각의
Figure pct00380
는 페이로드에 대한 결합이다.
일부 구현예에서, 링커-리파마이신 유사체 페이로드를 포함하는 항체-약물 접합체는 하나 이상의 반대 이온을 갖는 염, 예컨대, 암모늄 염을 포함한다. 임의의 약제학적으로 허용되는 반대 이온이 적합할 수 있다. 예를 들면, 본 개시내용의 구현예에서 적합한 반대 이온은 F-, Cl-, Br-, I-, OH-, -BF4, CF3SO3-, 일염기성 설페이트, 이염기성 설페이트, 일염기성 포스페이트, 이염기성 포스페이트, 또는 삼염기성 포스페이트, NO3-, PF6-, NO2-, 카복실레이트, CeFfSO3-(여기서 e는 2 내지 10이고 f는 2e+1이다), 아세테이트, 아스파르테이트, 벤젠설포네이트, 벤조에이트, 베실레이트, 비카보네이트, 비타르트레이트, 캄실레이트, 카보네이트, 시트레이트, 데카노에이트, 에데테이트, 에실레이트, 푸마레이트, 글루셉테이트, 글루코네이트, 글루타메이트, 글리콜레이트, 글리콜이랄아르사닐레이트, 헥세네이트, 하이드라바민, 하이드록시나프토에이트, 이스티오네이트, 락테이트, 락토비오네이트, 말레이트, 말레에이트, 만델레이트, 메실레이트, 메틸브로마이드, 메틸니트레이트, 무케이트, 납실레이트, 옥타노에이트, 올레이트, 파모에이트, 판토테네이트, 폴리갈락투로네이트, 프로피오네이트, 살리실레이트, 스테아레이트, 서브아세테이트, 석시네이트, 타르트레이트, 테오클레이트, 토실레이트, 또는 트리에티요오다이드로부터 선택된 음이온일 수 있다.
본원에 기술된 항체 약물 접합체는 당해 분야의 통상의 기술자에게 공지된 접합 상태를 사용하여 제조할 수 있다(참고: 예컨대, Doronina et al. Nature Biotechnology 2003, 21, 7, 778, 이는 이의 전문이 본원에 참고로 포함된다). 일부 구현예에서 ADC는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 목적한 링커 및 페이로드를 포함하는 화합물과 접촉시켜 제조하고, 여기서 상기 링커는 예컨대, 항체 또는 항원-결합 단백질의 목적한 잔기에서 항체 또는 항원-결합 단백질과 반응성인 모이어티를 지닌다. 예시적인 상태는 하기 실시예에 기술되어 있다.
일부 양태에서, 페이로드 PA는 본원에 제공된 바와 같은 화학식 (A), (B), (I), (I'), (II), (II'), (III), (III'), (IV), (IV'), (V), (V')에 따른 구조를 갖는 화합물의 임의의 상기 구현예에 기술된 바와 같은 리파마이신 유사체이다.
일 양태에서, 페이로드 PA는 화학식 (XX)의 구조를 갖는 리파마이신 유사체이다:
Figure pct00381
여기서:
X는 -O-, -S-, 및 -NR*-로부터 선택되고;
R1은 결합; 지방족 C1-C20 탄화수소; 방향족 C5-C20 탄화수소; 헤테로방향족 C1-C20 탄화수소; 아릴 C6-C20 탄화수소; 헤테로아릴 C1-C20 탄화수소, 및 이의 조합으로부터 선택되고, 이들 각각은 할로겐, O, N, 및 S로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함하고, 여기서 R1은 -F; -Cl; -Br; -I; -OH, -OR*; -NO; -NO2; -NO3; -O-NO; -N3; -NH2; -NHR*; -N(R*)2; -N(R*)3 +; -N(R*)-OH; -O-N(R*)2; -N(R*)-O-R*; -CN; -NC; -(C=O)-R*; -CHO; -CO2H; -CO2R*; -(C=O)-S-R*; -O-(C=O)-H; -O-(C=O)-R*; -S-(C=O)-R*; -(C=O)-NH2; -(C=O)-N(R*)2; -(C=O)-NHNH2; -O-(C=O)-NHNH2; -(C=S)-NH2; -(C=S)-N(R*)2; -N(R*)-CHO; -N(R*)-(C=O)-R*; -SCN; -NCS; -NSO; -SSR*; -SO2R*; -SO2-N(R*)2; -S(=O)-OR*; -S(=O)-R*; -Si(R*)3; -CF3; -O-CF3 및 이의 조합 하나 이상으로 임의 치환되고;
R2, R3, 및 R4는 수소, 직쇄, 측쇄 또는 사이클릭 지방족 C1-C20 탄화수소, 또는 -(C=O)-R*로부터 독립적으로 선택되고, 이들 각각은 할로겐, O, N, 및 S로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함하고;
Ra는 각각의 존재시 수소, -F; -Cl; -Br; -I; -OH; OR*; -NH2; -NHR*; -N(R*)2; -N(R*)3 +; -(C=O)-R*; -CHO; -CO2H; -CO2R* 및 지방족 C1-C20 탄화수소로부터 독립적으로 선택되고, 이는 할로겐, O, N, 및 S로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함하고, 여기서 Ra 및 Rb는 -F; -Cl; -Br; -I; -OH; -OR* 중 하나 이상으로 임의 치환되고;
R*는 각각의 존재시 수소; 지방족 C1-C20 탄화수소; 방향족 C5-C20 탄화수소; 헤테로방향족 C1-C20 탄화수소; 아릴 C6-C20 탄화수소; 헤테로아릴 C1-C20 탄화수소, 및 이의 조합으로부터 독립적으로 선택되고, 이는 할로겐, O, N, 및 S 및 이의 조합으로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함하고,
여기서 그룹 R1은 링커에 결합된다.
그룹 R1이 결합(즉, R1은 부재한다), 또는 2가 그룹인 것은 이해되어야 한다.
다른 양태에서, 페이로드 PA는 화학식 (XXI)의 구조를 갖는 리파마이신 유사체이다:
Figure pct00382
여기서:
X는 -O-, -S-, 및 -NR*-로부터 선택되고;
R5는 결합; 지방족 C1-C20 탄화수소로부터 선택되고 이는 할로겐, O, N, 및 S;
Figure pct00383
또는
Figure pct00384
로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함하고; 여기서 Y는 C 또는 N이고;
R2, R3, 및 R4는 수소, 직쇄, 측쇄 또는 사이클릭 지방족 C1-C20 탄화수소, 또는 -(C=O)-R*로부터 독립적으로 선택되고, 이들 각각은 할로겐, O, N, 및 S로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함하고,
R5c는 결합 또는 지방족 C1-C8 탄화수소이고;
여기서 그룹 R5는 링커에 결합된다.
다른 양태에서, 페이로드 PA는 화학식 (XXI')의 구조를 갖는 리파마이신 유사체이다:
Figure pct00385
여기서:
X는 -O-, -S-, 및 -NR*-로부터 선택되고;
R5는 결합; 할로겐, O, N, 및 S로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함하는 지방족 C1-C20 탄화수소;
Figure pct00386
Figure pct00387
로 부터 선택되고; 여기서 Y는 C 또는 N이고;
R2, R3, 및 R4는 수소, 직쇄, 측쇄 또는 사이클릭 지방족 C1-C20 탄화수소, 또는 -(C=O)-R*로부터 독립적으로 선택되고, 이들 각각은 할로겐, O, N, 및 S로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함하고,
여기서 그룹 R5는 링커에 결합된다.
그룹 R5는 결합(즉, R5는 부재한다), 또는 2가 그룹임이 이해되어야 하며, 즉, R5는 리파마이신의 -O- 뿐만 아니라 링커에 결합할 수 있다.
화학식 (A), (B), (I) 내지 (XVI) 및 (I') 내지 (XVI')의 일부 또는 임의의 구현예에서, Ra는 수소이고/이거나 Rb는 수소이다. 화학식 (A), (I) 내지 (XVI), 및 (I') 내지 (XVI')의 일부 또는 임의의 구현예에서 Ra는 -OH이다. 화학식 (A), (I) 내지 (XVI) 및 (I') 내지 (XVI')의 일부 또는 임의의 구현예에서, R2는 메틸, 에틸, 프로필 또는 이소프로필이다. 일 구현예에서, R2는 메틸이다. 화학식 (A), (I) 내지 (XVI) 및 (I') 내지 (XVI')의 일부 또는 임의의 구현예에서, R3은 CH3-(C=O)-(아세틸 그룹), CH3CH2-(C=O)-CH3CH2CH2-(C=O)-, 또는 (CH3)2CH-(C=O)-이다. 일 구현예에서, R3은 아세틸이다. 화학식 (A), (I) 내지 (XVI) 및 (I') 내지 (XVI')의 일부 또는 임의의 구현예에서, R4는 수소이다.
화학식 (XX) 또는 (XX')의 일부 구현예에서, -OR1은 -O-(즉, R1은 부재한다),
Figure pct00388
Figure pct00389
이다.
화학식 (XXI) 또는 (XXI')의 일부 구현예에서, -OR5는 -O-(즉, R5는 부재한다),
Figure pct00390
Figure pct00391
및
Figure pct00392
이다.
화학식 (XX)의 일부 또는 임의의 구현예에서, X는 -O-이고, -OR1은 3급 아민을 포함한다. 일부 이러한 구현예에서, -OR1은
Figure pct00393
또는
Figure pct00394
이다.
화학식 (XXI) 또는 (XXI')의 일부 또는 임의의 구현예에서, X는 O이고, -OR5는 3급 아민을 포함한다. 일부 이러한 구현예에서, -OR5는
Figure pct00395
또는
Figure pct00396
이다.
일부 구현예에서. 화학식 (XX),(XXI), (XX') 또는 (XXI')의 화합물은 다음으로 이루어진 그룹으로부터 선택된다:
Figure pct00397
Figure pct00398
Figure pct00399
Figure pct00400
여기서
Figure pct00401
는 링커에 대한 결합이다.
일 양태에서, 본 개시내용은 화학식 (XXII)의 구조를 갖는 항체-약물 접합체를 제공한다:
Figure pct00402
여기서:
BA는 항체, 또는 이의 항원-결합 단편이고;
L은 링커이고;
SP는
Figure pct00403
Figure pct00404
Figure pct00405
로부터 선택된 스페이서 그룹이고; 여기서 Y는 C 또는 N이고; 여기서
Figure pct00406
기호는 부착 점을 나타내고; R', R" 및 R"'는 수소, C1-C6 지방족 탄화수소, 및 플루오레닐메틸옥시카보닐(FMOC) 및 3급-부틸옥시카보닐(BOC)로부터 선택된 보호 그룹으로부터 선택되거나, R' 및 R"는 함께 지방족 모노사이클릭, 지방족 비사이클릭, 또는 지방족 폴리사이클릭 구조를 형성하고;
R' 및 R"는 각각의 존재시 수소 및 C1-6 알킬로부터 독립적으로 선택되고,
X는 -O-, -S-, 및 -NR*로부터 선택된다.
일부 구현예에서, 항체, 또는 이의 항원-결합 단편은 MSR1에 결합한다. 일 구현예에서, 항-MSR1 항체, 또는 이의 항원-결합 단편은 (a) 표 9에 나타낸 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(HCVR)의 상보성 결정 영역(CDR); 및 (b) 표 9에 나타낸 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(LCVR)의 CDR을 포함한다.
일 구현예에서, 항-MSR1 항체, 또는 이의 항원-결합 단편은:
(i) 서열 번호: 4, 36, 52, 92, 및 284로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1 도메인;
(ii) 서열 번호: 6, 38, 54, 94, 및 286으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2 도메인;
(iii) 서열 번호: 8, 40, 56, 96, 및 288로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3 도메인;
(iv) 서열 번호: 12, 44, 60, 100, 및 292로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1 도메인;
(v) 서열 번호: 14, 46, 62, 102, 및 294로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2 도메인; 및
(vi) 서열 번호: 16, 48, 64, 104, 및 296으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3 도메인을 포함한다.
일 구현예에서, 항-MSR1 항체, 또는 이의 항원-결합 단편은
(i) 서열 번호: 52의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1 도메인;
(ii) 서열 번호: 54의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2 도메인;
(iii) 서열 번호: 56의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3 도메인;
(iv) 서열 번호: 60의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1 도메인;
(v) 서열 번호: 62의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2 도메인; 및
(vi) 서열 번호: 64의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3을 포함한다.
일 구현예에서, 항-MSR1 항체, 또는 이의 항원-결합 단편은 N297Q 돌연변이를 포함한다.
일부 구현예에서, 항체, 또는 이의 항원-결합 단편은 WTAα에 결합한다. 일 구현예에서, 항-WTAα 항체, 또는 이의 항원-결합 단편은: (a) 표 2A에 나타낸 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(HCVR)의 상보성 결정 영역(CDR); 및 (b) 표 2A에 나타낸 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(LCVR)의 CDR을 포함한다.
일 구현예에서, 항-WTAα 항체, 또는 이의 항원-결합 단편은:
(i) 서열 번호: 470, 476, 482, 및 488로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1 도메인;
(ii) 서열 번호: 471, 477, 483, 및 489로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2 도메인;
(iii) 서열 번호: 472, 478, 484, 및 490으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3 도메인;
(iv) 서열 번호: 467, 473, 479, 및 485로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1 도메인;
(v) 서열 번호: 468, 474, 480, 및 486으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2 도메인; 및
(vi) 서열 번호: 469, 475, 481, 및 487로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3 도메인을 포함한다.
일부 구현예에서, 항체, 또는 이의 항원-결합 단편은 WTAβ에 결합한다. 일 구현예에서, 항-WTAβ 항체, 또는 이의 항원-결합 단편은: (a) 표 2B에 나타낸 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(HCVR)의 상보성 결정 영역(CDR); 및 (b) 표 2B에 나타낸 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(LCVR)의 CDR을 포함한다.
일 구현예에서, 항-WTAβ 항체, 또는 이의 항원-결합 단편은:
(i) 서열 번호: 502, 508, 514, 520, 526, 532, 538, 544, 550, 556, 562, 568, 및 574로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1 도메인;
(ii) 서열 번호: 503, 509, 515, 521, 527, 533, 539, 545, 551, 557, 563, 569, 및 575로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2 도메인;
(iii) 서열 번호: 504, 510, 516, 522, 528, 534, 540, 546, 552, 558, 564, 570, 576, 및 584로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3 도메인;
(iv) 서열 번호: 499, 505, 511, 517, 523, 529, 535, 541, 547, 553, 559, 565, 및 571로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1 도메인;
(v) 서열 번호: 500, 506, 512, 518, 524, 530, 536, 542, 548, 554, 560, 566, 및 572로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2 도메인; 및
(vi) 서열 번호: 501, 507, 513, 519, 525, 531, 537, 543, 549, 555, 561, 567, 및 573으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3 도메인을 포함한다.
일부 구현예에서, 항-WTA 항체, 또는 이의 항원-결합 단편은 V205C 돌연변이를 포함한다.
일 구현예에서, 항-WTA 항체, 또는 이의 항원-결합 단편은 미국 특허원 공보 제20140356375호(이는 이의 전문이 본원에 참고로 포함됨)에 기술된 항체 4497로부터 유래된다. 일 구현예에서, 항-WTA 항체는 항체 4497로부터 유래되고 경쇄내에 V205C 돌연변이를 추가로 포함한다.
일 구현예에서, 항-WTA 항체, 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 번호: 568-569-570-565-566-567의 HCDR1-HCDR2-HCDR3-LCDR1-LCDR2-LCDR3을 포함한다.
일부 구현예에서, 항-WTA 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열 번호: 586의 중쇄 가변 영역(HCVR) 아미노산 서열 내에 3개의 중쇄 상보성 결정 영역(HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3); 및 서열 번호: 585의 경쇄 가변 영역(LCVR) 아미노산 서열 내에 3개의 경쇄 상보성 결정 영역(LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3)을 포함한다.
일부 구현예에서, 항-WTA 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열 번호: 586의 HCVR 아미노산 서열, 및 서열 번호: 585의 LCVR 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, 항-WTA 항체는 서열 번호: 602의 중쇄 아미노산 서열 및 서열 번호: 587 또는 서열 번호: 589의 경쇄 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 항-WTA 항체, 또는 이의 항원-결합 단편은 경쇄 내에 V205C 돌연변이를 포함한다.
일부 구현예에서, 항체, 또는 이의 항원-결합 단편은 단백질 A에 결합한다. 일 구현예에서, 항-단백질 A 항체, 또는 이의 항원-결합 단편은 (a) 표 3A에 나타낸 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(HCVR)의 상보성 결정 영역(CDR); 및 (b) 표 3A에 나타낸 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(LCVR)의 CDR을 포함한다.
일 구현예에서, 항-단백질 A 항체, 또는 이의 항원-결합 단편은:
(i) 서열 번호: 632, 652, 및 672로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1 도메인;
(ii) 서열 번호: 634, 654, 및 674로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2 도메인;
(iii) 서열 번호: 636, 656, 및 676으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3 도메인;
(iv) 서열 번호: 640, 660, 및 680으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1 도메인;
(v) 서열 번호: 642 및 662로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2 도메인; 및
(vi) 서열 번호: 644, 664, 및 683으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3 도메인을 포함한다.
일부 구현예에서, 항-단백질 A 항체, 또는 이의 항원-결합 단편은 중쇄 Fc 내에 H435R 및 Y436F 돌연변이(EU 번호매김)를 포함한다.
일 구현예에서, 항-단백질 A 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열 번호: 630의 중쇄 가변 영역(HCVR) 아미노산 서열 내에 3개의 중쇄 상보성 결정 영역(HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3); 및 서열 번호: 638의 경쇄 가변 영역(LCVR) 아미노산 서열 내에 3개의 경쇄 상보성 결정 영역(LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3)을 포함한다. 일 구현예에서, 항-단백질 A 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열 번호: 632-634-636-640-642-644를 포함하는 6개의 CDR 세트(HCDR1-HCDR2-HCDR3-LCDR1-LCDR2-LCDR3)를 포함한다.
일 구현예에서, 항-단백질 A 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열 번호: 630의 HCVR 아미노산 서열; 및 서열 번호: 638의 LCVR 아미노산 서열을 포함한다.
일 구현예에서, 항-단백질 A 항체는 서열 번호: 666의 중쇄 아미노산 서열 및 서열 번호: 668의 경쇄 아미노산 서열을 포함한다. 일 구현예에서s, 항-단백질 A 항체는, 중쇄 Fc 내에 H435R 및 Y436F 돌연변이(EU 번호매김)를 추가로 포함한다. 일 구현예에서, 항-단백질 A 항체는 경쇄 내에 C103S 돌연변이를 추가로 포함한다. 일 구현예에서, 항-단백질 A 항체, 또는 이의 항원-결합 단편은 103변 경쇄 위치에서 본 개시내용의 화합물에 접합된다.
다양한 구현예에서, 항체, 또는 이의 항원-결합 단편은 경쇄 내에 C103S 돌연변이를 포함한다.
다양한 구현예에서, 항체, 또는 이의 항원-결합 단편은 경쇄의 103번 위치에서 본 개시내용의 화합물에 접합된다.
일 구현예에서, L은 화학식
Figure pct00407
를 갖는 링커이고, 여기서
RG는 말레이미드, N-하이드록시석신이미드, 또는 석신이미드로부터 선택되고;
SP1 및 SP2는 독립적으로 부재하거나
Figure pct00408
C1-6 알킬, -NH-, -C(O)-, -CH2-CH2-C(O)-NH-, -(CH)u-C(O)-NH-, (-CH2-CH2-O)e, -NH-CH2-CH2-(-O-CH2-CH2)e-C(O)-, -C(O)-(CH2)u-C(O)-, -C(O)-NH-(CH2)v-, 및 이의 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 스페이서 그룹이고, 여기서 아래 첨자 e는 0 내지 4의 정수이고, 아래 첨자 u 1 내지 8의 정수이고, 아래 첨자 v 1 내지 8의 정수이고;
AA2-4는 2 내지 4개의 아미노산을 포함하는 펩타이드 단위이고,
PEG는 1 내지 30개의 폴리에틸렌 글리콜 잔기를 포함하는 폴리에틸렌 글리콜 쇄이다.
일 구현예에서, AA2-4는 발린-시트룰린; 시트룰린-발린; 발린-알라닌; 알라닌-발린; 발린-글리신, 또는 글리신-발린으로부터 선택된 디펩타이드이다.
일 구현예에서, AA2-4는 발린-시트룰린이다.
일 구현예에서, SP는
Figure pct00409
이고 R' 및 R"는 각각 C1-6 알킬이다.
일 구현예에서, SP는
Figure pct00410
이고 R' 및 R"는 각각 메틸이다.
일 구현예에서, SP1 및 SP2는 각각
Figure pct00411
이다.
일 구현예에서, PEG는 8개의 폴리에틸렌 글리콜 단위를 포함한다.
일 구현예에서, 항체-약물 접합체는 다음 구조를 갖고:
Figure pct00412
여기서 BA는 항체, 또는 이의 항원-결합 단편이다.
다른 양태에서, 본 개시내용은 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 제공하고, 여기서 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 직접적으로 또는 링커 또는 링커-스페이서를 통해 다음으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 구조를 갖는 페이로드에 접합된다:
Figure pct00413
Figure pct00414
Figure pct00415
Figure pct00416
Figure pct00417
.
일 구현예에서, 페이로드는 다음으로부터 선택된 구조를 갖는다:
Figure pct00418
및
Figure pct00419
일 구현예에서, 페이로드는 링커를 통해 접합되고, 링커는 구조:
Figure pct00420
를 갖고, 여기서 RG는 말레이미드, N-하이드록시석신이미드, 또는 석신이미드로부터 선택되고;
SP1 및 SP2는 독립적으로 부재하거나
Figure pct00421
C1-6 알킬, -NH-, -C(O)-, -CH2-CH2-C(O)-NH-, -(CH)u-C(O)-NH-, (-CH2-CH2-O)e, -NH-CH2-CH2-(-O-CH2-CH2)e-C(O)-, -C(O)-(CH2)u-C(O)-, -C(O)-NH-(CH2)v-, 및 이의 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 스페이서 그룹이고, 여기서 아래 첨자 e는 0 내지 4의 정수이고, 아래 첨자 u 1 내지 8의 정수이고, 아래 첨자 v 1 내지 8의 정수이고;
AA2-4는 2 내지 4개의 아미노산을 포함하는 펩타이드 단위이고,
PEG는 1 내지 30개의 폴리에틸렌 글리콜 잔기를 포함하는 폴리에틸렌 글리콜 쇄이다.
일 구현예에서, AA2-4는 발린-시트룰린; 시트룰린-발린; 발린-알라닌; 알라닌-발린; 발린-글리신, 또는 글리신-발린으로부터 선택된 디펩타이드이다.
일 구현예에서, AA2-4는 발린-시트룰린이다.
일 구현예에서, SP는
Figure pct00422
이고 R' 및 R"는 각각 C1-6 알킬이다.
일 구현예에서, SP는
Figure pct00423
이고 R' 및 R"는 각각 메틸이다.
일 구현예에서, SP1 및 SP2는 각각
Figure pct00424
이다.
일 구현예에서, PEG는 8개의 폴리에틸렌 글리콜 단위를 포함한다.
일 구현예에서, 페이로드는 다음 구조를 갖는 링커를 통해 접합된다:
Figure pct00425
.
일 구현예에서, 페이로드는 다음 구조를 갖는 링커, 링커-페이로드를 통해 접합된다:
Figure pct00426
여기서
Figure pct00427
는 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 대한 결합이다.
일 구현예에서, 페이로드는 다음 구조를 갖는 링커, 링커-페이로드를 통해 접합된다:
Figure pct00428
.
여기서
Figure pct00429
는 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 대한 결합이다.
일 구현예에서, 페이로드는 다음 구조를 갖는 링커, 링커-페이로드를 통해 접합된다:
Figure pct00430
,
여기서
Figure pct00431
는 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 대한 결합이다.
일 구현예에서, 페이로드는 다음 구조를 갖는 링커, 링커-페이로드를 통해 접합된다:
Figure pct00432
,
여기서
Figure pct00433
는 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 대한 결합이다.
일 구현예에서, 대식구 스캐빈저 수용체(macrophage scavenger 수용체) 1(MSR1)에 결합하는 항체, 또는 이의 항원-결합 단편은: (a) 표 9에 나타낸 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(HCVR)의 상보성 결정 영역(CDR); 및 (b) 표 9에 나타낸 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(LCVR)의 CDR을 포함할 수 있다.
일부 구현예에서, 항체, 또는 이의 항원-결합 단편은 MSR1에 결합한다. 일 구현예에서, 항-MSR1 항체, 또는 이의 항원-결합 단편은 (a) 표 9에 나타낸 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(HCVR)의 상보성 결정 영역(CDR); 및 (b) 표 9에 나타낸 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(LCVR)의 CDR을 포함할 수 있다.
일 구현예에서, 항-MSR1 항체, 또는 이의 항원-결합 단편은:
(i) 서열 번호: 4, 36, 52, 92, 및 284로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1 도메인;
(ii) 서열 번호: 6, 38, 54, 94, 및 286으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2 도메인;
(iii) 서열 번호: 8, 40, 56, 96, 및 288로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3 도메인;
(iv) 서열 번호: 12, 44, 60, 100, 및 292로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1 도메인;
(v) 서열 번호: 14, 46, 62, 102, 및 294로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2 도메인; 및
(vi) 서열 번호: 16, 48, 64, 104, 및 296으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3 도메인을 포함한다.
일 구현예에서, 항-MSR1 항체, 또는 이의 항원-결합 단편은
(i) 서열 번호: 52의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1 도메인;
(ii) 서열 번호: 54의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2 도메인;
(iii) 서열 번호: 56의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3 도메인;
(iv) 서열 번호: 60의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1 도메인;
(v) 서열 번호: 62의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2 도메인; 및
(vi) 서열 번호: 64의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3 도메인을 포함한다.
일 구현예에서, 항-MSR1 항체, 또는 이의 항원-결합 단편은 N297Q 돌연변이를 포함한다.
일부 구현예에서, 항체, 또는 이의 항원-결합 단편은 WTAα에 결합한다. 일 구현예에서, 항-WTAα 항체, 또는 이의 항원-결합 단편은: (a) 표 2A에 나타낸 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(HCVR)의 상보성 결정 영역(CDR); 및 (b) 표 2A에 나타낸 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(LCVR)의 CDR을 포함할 수 있다.
일 구현예에서, 항-WTAα 항체, 또는 이의 항원-결합 단편은:
(i) 서열 번호: 470, 476, 482, 및 488로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1 도메인;
(ii) 서열 번호: 471, 477, 483, 및 489로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2 도메인;
(iii) 서열 번호: 472, 478, 484, 및 490으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3 도메인;
(iv) 서열 번호: 467, 473, 479, 및 485로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1 도메인;
(v) 서열 번호: 468, 474, 480, 및 486으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2 도메인; 및
(vi) 서열 번호: 469, 475, 481, 및 487로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3 도메인을 포함한다.
일부 구현예에서, 항체, 또는 이의 항원-결합 단편은 WTAβ에 결합한다. 일 구현예에서, 항-WTAβ 항체, 또는 이의 항원-결합 단편은 (a) 표 2B에 나타낸 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(HCVR)의 상보성 결정 영역(CDR); 및 (b) 표 2B에 나타낸 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(LCVR)의 CDR을 포함한다.
일 구현예에서, 항-WTAβ 항체, 또는 이의 항원-결합 단편은:
(i) 서열 번호: 502, 508, 514, 520, 526, 532, 538, 544, 550, 556, 562, 568, 및 574로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1 도메인;
(ii) 서열 번호: 503, 509, 515, 521, 527, 533, 539, 545, 551, 557, 563, 569, 및 575로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2 도메인;
(iii) 서열 번호: 504, 510, 516, 522, 528, 534, 540, 546, 552, 558, 564, 570, 576, 및 584로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3 도메인;
(iv) 서열 번호: 499, 505, 511, 517, 523, 529, 535, 541, 547, 553, 559, 565, 및 571로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1 도메인;
(v) 서열 번호: 500, 506, 512, 518, 524, 530, 536, 542, 548, 554, 560, 566, 및 572로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2 도메인; 및
(vi) 서열 번호: 501, 507, 513, 519, 525, 531, 537, 543, 549, 555, 561, 567, 및 573으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3 도메인을 포함한다.
일부 구현예에서, 항-WTA 항체, 또는 이의 항원-결합 단편은 V205C 돌연변이를 포함한다.
일 구현예에서, 항-WTA 항체, 또는 이의 항원-결합 단편은 미국 특허원 공보 제20140356375호(이는 이의 전문이 본원에 참고로 포함된다)에 기술된 항체 4497로부터 유래된다. 일 구현예에서, 항-WTA 항체는 항체 4497을 추가로 포함하고 경쇄 내에 V205C 돌연변이를 추가로 포함한다.
일 구현예에서, 항-WTA 항체, 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 번호: 568-569-570-565-566-567의 HCDR1-HCDR2-HCDR3-LCDR1-LCDR2-LCDR3를 포함한다.
일부 구현예에서, 항-WTA 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열 번호: 585의 중쇄 가변 영역(HCVR) 아미노산 서열 내에 3개의 중쇄 상보성 결정 영역(HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3); 및 서열 번호: 586의 경쇄 가변 영역(LCVR) 아미노산 서열 내에 3개의 경쇄 상보성 결정 영역 (LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3)을 포함한다.
일부 구현예에서, 항-WTA 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열 번호: 586의 HCVR 아미노산 서열, 및 서열 번호: 585의 LCVR 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, 항-WTA 항체는 서열 번호: 602의 중쇄 아미노산 서열 및 서열 번호: 587 또는 서열 번호: 589의 경쇄 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 항-WTA 항체, 또는 이의 항원-결합 단편은 경쇄 내에 V205C 돌연변이를 포함한다.
일 구현예에서, 항-단백질 A 항체, 또는 이의 항원-결합 단편은: (a) 표 3A에 나타낸 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(HCVR)의 상보성 결정 영역(CDR); 및 (b) 표 3A에 나타낸 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(LDVR)의 CDR을 포함할 수 있다.
일 구현예에서, 항-단백질 A 항체, 또는 이의 항원-결합 단편은:
(i) 서열 번호: 632, 652, 및 672로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1 도메인;
(ii) 서열 번호: 634, 654, 및 674로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2 도메인;
(iii) 서열 번호: 636, 656, 및 676으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3 도메인;
(iv) 서열 번호: 640, 660, 및 680으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1 도메인;
(v) 서열 번호: 642 및 662로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2 도메인; 및
(vi) 서열 번호: 644, 664, 및 683으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3 도메인을 포함한다.
일부 구현예에서, 항-단백질 A 항체, 또는 이의 항원-결합 단편은 중쇄 Fc 내에 H435R 및 Y436F 돌연변이(EU 번호매김)를 포함한다.
일 구현예에서, 항-단백질 A 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열 번호: 630의 중쇄 가변 영역(HCVR) 아미노산 서열 내에 3개의 중쇄 상보성 결정 영역(HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3); 및 서열 번호: 638의 경쇄 가변 영역(LCVR) 아미노산 서열 내에 3개의 경쇄 상보성 결정 영역 (LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3)을 포함한다. 일부 구현예에서, 항-WTA 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열 번호: 632-634-636-640-642-644를 포함하는 6개의 CDR의 세트(HCDR1-HCDR2-HCDR3-LCDR1-LCDR2-LCDR3)를 포함한다.
일 구현예에서, 항-단백질 A 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열 번호: 630의 HCVR 아미노산 서열; 및 서열 번호: 638의 LCVR 아미노산 서열을 포함한다.
일 구현예에서, 항-단백질 A 항체는 서열 번호: 666의 중쇄 아미노산 서열 및 서열 번호: 668의 경쇄 아미노산 서열을 포함한다. 일 구현예에서, 항-단백질 A 항체는 중쇄 Fc 내에 H435R 및 Y436F 돌연변이(EU 번호매김)를 추가로 포함한다. 일 구현예에서, 항-단백질 A 항체는 경쇄내에 C103S 돌연변이를 추가로 포함한다. 일 구현예에서, 항-단백질 A 항체, 또는 이의 항원-결합 단편은 103번 경쇄 위치에서 본 개시내용의 화합물에 접합된다.
다양한 구현예에서, 항체, 또는 이의 항원-결합 단편은 경쇄 내에 C103S 돌연변이를 포함한다.
다양한 구현예에서, 항체, 또는 이의 항원-결합 단편은 경쇄의 103번 위치에서 본 개시내용의 화합물에 접합된다.
본 개시내용의 예시적인 항체-약물 접합체
일 구현예에서, 본 개시내용 항체-약물 접합체는 서열 번호: 52-54-56-60-62-64를 포함하는 6개의 CDR 세트(HCDR1-HCDR2-HCDR3-LCDR1-LCDR2-LCDR3), 및 N297Q 돌연변이를 포함하는 항-MSR1 항체, 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하고, 상기 항-MSR1 항체, 또는 이의 항원-결합 단편은 다음 구조를 갖는 화합물에 접합된다:
Figure pct00434
.
일 구현예에서, 본 개시내용 항체-약물 접합체는 서열 번호: 52-54-56-60-62-64를 포함하는 6개의 CDR 세트(HCDR1-HCDR2-HCDR3-LCDR1-LCDR2-LCDR3), 및 N297Q 돌연변이를 포함하는 항-MSR1 항체, 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하고, 상기 항-MSR1 항체, 또는 이의 항원-결합 단편은 다음 구조를 갖는 화합물에 접합된다:
Figure pct00435
.
일 구현예에서, 본 개시내용 항체-약물 접합체는 서열 번호: 52-54-56-60-62-64를 포함하는 6개의 CDR 세트(HCDR1-HCDR2-HCDR3-LCDR1-LCDR2-LCDR3), 및 N297Q 돌연변이를 포함하는 항-MSR1 항체, 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하고, 상기 항-MSR1 항체, 또는 이의 항원-결합 단편은 다음 구조를 갖는 화합물에 접합된다:
Figure pct00436
.
일 구현예에서, 본 개시내용 항체-약물 접합체는 서열 번호: 52-54-56-60-62-64를 포함하는 6개의 CDR 세트(HCDR1-HCDR2-HCDR3-LCDR1-LCDR2-LCDR3), 및 N297Q 돌연변이를 포함하는 항-MSR1 항체, 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하고, 상기 항-MSR1 항체, 또는 이의 항원-결합 단편은 다음 구조를 갖는 화합물에 접합된다:
Figure pct00437
.
일 구현예에서, 본 개시내용 항체-약물 접합체는 서열 번호: 52-54-56-60-62-64를 포함하는 6개의 CDR 세트(HCDR1-HCDR2-HCDR3-LCDR1-LCDR2-LCDR3), 및 N297Q 돌연변이를 포함하는 항-MSR1 항체, 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하고, 상기 항-MSR1 항체, 또는 이의 항원-결합 단편은 다음 구조를 갖는 화합물에 접합된다:
Figure pct00438
.
일 구현예에서, 본 개시내용 항체-약물 접합체는 서열 번호: 52-54-56-60-62-64를 포함하는 6개의 CDR 세트(HCDR1-HCDR2-HCDR3-LCDR1-LCDR2-LCDR3), 및 N297Q 돌연변이를 포함하는 항-MSR1 항체, 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하고, 상기 항-MSR1 항체, 또는 이의 항원-결합 단편은 다음 구조를 갖는 화합물에 접합된다:
Figure pct00439
일부 구현예에서, 항-MSR1 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열 번호: 50의 HCVR 아미노산 서열; 및 서열 번호: 58의 LCVR 아미노산 서열을 포함한다.
일 구현예에서, 본 개시내용 항체-약물 접합체는 568-569-570-565-566-567을 포함하는 6개의 CDR 세트(HCDR1-HCDR2-HCDR3-LCDR1-LCDR2-LCDR3), 및 경쇄 내에 V205C 돌연변이를 포함하는 항-WTA 항체, 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하고, 상기 항-WTA 항체, 또는 이의 항원-결합 단편은 다음 구조를 갖는 화합물에 접합된다:
Figure pct00440
.
일 구현예에서, 본 개시내용 항체-약물 접합체는 568-569-570-565-566-567을 포함하는 6개의 CDR 세트(HCDR1-HCDR2-HCDR3-LCDR1-LCDR2-LCDR3), 및 경쇄 내에 V205C 돌연변이를 포함하는 항-WTA 항체, 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하고, 상기 항-WTA 항체, 또는 이의 항원-결합 단편은 다음 구조를 갖는 화합물에 접합된다:
Figure pct00441
.
일 구현예에서, 본 개시내용 항체-약물 접합체는 568-569-570-565-566-567을 포함하는 6개의 CDR 세트(HCDR1-HCDR2-HCDR3-LCDR1-LCDR2-LCDR3), 및 경쇄 내에 V205C 돌연변이를 포함하는 항-WTA 항체, 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하고, 상기 항-WTA 항체, 또는 이의 항원-결합 단편은 다음 구조를 갖는 화합물에 접합된다:
Figure pct00442
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일 구현예에서, 본 개시내용 항체-약물 접합체는 568-569-570-565-566-567을 포함하는 6개의 CDR 세트(HCDR1-HCDR2-HCDR3-LCDR1-LCDR2-LCDR3), 및 경쇄 내에 V205C 돌연변이를 포함하는 항-WTA 항체, 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하고, 상기 항-WTA 항체, 또는 이의 항원-결합 단편은 다음 구조를 갖는 화합물에 접합된다:
Figure pct00443
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일 구현예에서, 본 개시내용 항체-약물 접합체는 568-569-570-565-566-567을 포함하는 6개의 CDR 세트(HCDR1-HCDR2-HCDR3-LCDR1-LCDR2-LCDR3), 및 경쇄 내에 V205C 돌연변이를 포함하는 항-WTA 항체, 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하고, 상기 항-WTA 항체, 또는 이의 항원-결합 단편은 다음 구조를 갖는 화합물에 접합된다:
Figure pct00444
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일부 구현예에서, 항-WTA 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열 번호: 586의 HCVR 아미노산 서열, 및 서열 번호: 585의 LCVR 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, 항-WTA 항체는 서열 번호: 602의 중쇄 아미노산 서열 및 서열 번호: 587 또는 서열 번호: 589의 경쇄 아미노산 서열을 포함한다.
일 구현예에서, 본 개시내용 항체-약물 접합체는 서열 번호: 632-634-636-640-642-644를 포함하는 6개의 CDR 세트(HCDR1-HCDR2-HCDR3-LCDR1-LCDR2-LCDR3), 및 중쇄 Fc내에 H435R 및 Y436F 돌연변이를 포함하는 항-단백질 A 항체, 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하고, 상기 항-단백질 A 항체, 또는 이의 항원-결합 단편은 다음 구조를 갖는 화합물에 접합된다:
Figure pct00445
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일 구현예에서, 본 개시내용 항체-약물 접합체는 서열 번호: 632-634-636-640-642-644를 포함하는 6개의 CDR 세트(HCDR1-HCDR2-HCDR3-LCDR1-LCDR2-LCDR3), 및 중쇄 Fc내에 H435R 및 Y436F 돌연변이를 포함하는 항-단백질 A 항체, 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하고, 상기 항-단백질 A 항체, 또는 이의 항원-결합 단편은 다음 구조를 갖는 화합물에 접합된다:
Figure pct00446
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일 구현예에서, 본 개시내용 항체-약물 접합체는 서열 번호: 632-634-636-640-642-644를 포함하는 6개의 CDR 세트(HCDR1-HCDR2-HCDR3-LCDR1-LCDR2-LCDR3), 및 중쇄 Fc내에 H435R 및 Y436F 돌연변이를 포함하는 항-단백질 A 항체, 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하고, 상기 항-단백질 A 항체, 또는 이의 항원-결합 단편은 다음 구조를 갖는 화합물에 접합된다:
Figure pct00447
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일 구현예에서, 본 개시내용 항체-약물 접합체는 서열 번호: 632-634-636-640-642-644를 포함하는 6개의 CDR 세트(HCDR1-HCDR2-HCDR3-LCDR1-LCDR2-LCDR3), 및 중쇄 Fc내에 H435R 및 Y436F 돌연변이를 포함하는 항-단백질 A 항체, 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하고, 상기 항-단백질 A 항체, 또는 이의 항원-결합 단편은 다음 구조를 갖는 화합물에 접합된다:
Figure pct00448
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일 구현예에서, 본 개시내용 항체-약물 접합체는 서열 번호: 632-634-636-640-642-644를 포함하는 6개의 CDR 세트(HCDR1-HCDR2-HCDR3-LCDR1-LCDR2-LCDR3), 및 중쇄 Fc내에 H435R 및 Y436F 돌연변이를 포함하는 항-단백질 A 항체, 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하고, 상기 항-단백질 A 항체, 또는 이의 항원-결합 단편은 다음 구조를 갖는 화합물에 접합된다:
Figure pct00449
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일 구현예에서, 항-단백질 A 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열 번호: 630의 HCVR 아미노산 서열; 및 서열 번호: 638의 LCVR 아미노산 서열을 포함한다.
일 구현예에서, 항-단백질 A 항체는 서열 번호: 666의 중쇄 아미노산 서열 및 서열 번호: 668의 경쇄 아미노산 서열을 포함한다.
에피토프 맵핑(Epitope Mapping) 및 관련 기술
본 개시내용의 항체를 포함하는 항체-약물 접합체가 결합한 에피토프는 항원(예컨대, MSR1 단백질 또는 단백질 A)(예컨대, 도메인내 선형 에피토프) 내에 위치한 3개 이상(예컨대, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20개 이상)의 아미노산의 단일의 연속된 서열로 이루어질 수 있다. 대안적으로, 에피토프는 MSR1의 다수의 비-연속적인 아미노산(또는 아미노산 서열)로 이루어질 수 있다. 일부 구현예에서, 에피토프는 MSR1의 변형된 LDL-결합 도메인 상에 또는 근처에 위치한다. 다른 구현예에서, 에피토프는 MSR1의 변형된 LDL-결합 도메인의 외부, 예컨대, 항체가, 이러한 에피토프에 결합되는 경우, 항원(예컨대, 구조적 에피토프)에 대해 변형된-LDL 결합을 방해하지 않는 MSR1의 표면 상의 위치에 위치한다.
당해 분야의 통상의 기술자에게 공지된 다양한 기술을 사용하여 항체가 폴리펩타이드 또는 단백질내 "하나 이상의 아미노산과 상호작용"하는지의 여부를 측정할 수 있다. 예시적인 기술은 예컨대, 통상의 가교-차단 검정(cross-blocking assay), 예를 들면, Antibodies, Harlow and Lane (Cold Spring Harbor Press, Cold Spring Harb., NY)에 기술된 것, 알라닌 주사 돌연변이 분석, 펩타이드 블롯 분석(Reineke, 2004, Methods Mol Biol 248:443-463), 및 펩타이드 절단 분석을 포함한다. 또한, 에피토프 절개, 에피토프 추출 및 항원의 화학적 변형과 같은 방법을 사용할 수 있다(Tomer, 2000, Protein Science 9:487-496). 항체가 상호작용하는 폴리펩타이드내 아미노산을 확인하는데 사용될 수 있는 다른 방법은 질량 분광법에 의해 검출된 수소/중수소 교환이다. 일반적으로 말해서, 수소/중수소 교환 방법은 목적한 단백질의 중수소-표지에 이어 항체를 중수소-표지된 단백질에 결합시킴을 포함한다. 다음에, 단백질/항체 복합체를 물로 이전시켜 수소-중수소 교환이 항체에 의해 보호된 잔기(중수소-표지된 채로 남아있는)를 제외한 모든 잔기에서 일어나도록 한다. 항체의 해리 후, 표적 단백질을 프로테아제 절단 및 질량 분광법 분석에 적용시킴으로써, 항체가 상호작용하는 특이적인 아미노산에 상응하는 중수소-표지된 잔기를 나타낸다. 참고: 예컨대, Ehring (1999) Analytical Biochemistry 267(2):252-259; Engen 및 Smith (2001) Anal. Chem. 73:256A-265A.
구현예는 본원에 기술된 임의의 특이적이고 예시적인 항체와 동일한 에피토프에 결합하는 항-MSR1 항체(예컨대, 본원의 표 9에 나타낸 임의의 아미노산 서열을 포함하는 항-MSR1 항체; 본원의 표 2A 및 2B에 나타낸 임의의 아미노산 서열을 포함하는 항-WTA 항체; 또는 본원의 표 3A에 나타낸 임의의 아미노산 서열을 포함하는 항-단백질 A 항체)를 포함하는 항체-약물 접합체를 포함한다. 유사하게, 구현예는 또한 동일한 항원에 대한 결합에 대해 본원에 기술된 임의의 특이적이고 예시적인 항체와 경쟁하는 항-MSR1 항체(예컨대, 본원의 표 9에 나타낸 임의의 아미노산 서열을 포함하는 항-MSR1 항체; 본원의 표 2A 및 2B에 나타낸 임의의 아미노산 서열을 포함하는 항-WTA 항체; 또는 본원의 표 3A에 나타낸 임의의 아미노산 서열을 포함하는 항-단백질 A 항체)를 포함하는 항체-약물 접합체를 포함한다.
항체가 당해 분야에 공지되거나 본원, 예컨대, 실시예 29에 예시된 통상의 방법을 사용함으로써, 참고 항체와 동일한 에피토프에 결합하거나, 참고 항체와 결합에 대해 졍쟁하는지의 여부를 용이하게 측정할 수 있다. 예를 들면, 시험 항체가 본원에 개시된 참고 참고 항-MSR1 항체와 동일한 에피토프에 결합하는지를 측정하기 위해, 참고 항체가 MSR1 단백질에 결합하도록 한다. 다음에, MSR1 분자에 결합하는 시험 항체의 능력을 평가한다. 시험 항체가 MSR1에 결합한 후 참고 항-MAR1 항체와 포화 결합할 수 있는 경우, 시험 항체가 참고 항-MSR1 항체 이외에 상이한 에피토프에 결합한다고 결론지을 수 있다. 다른 한편, 시험 항체가 MSR1 분자에 결합한 후 참고 항-MSR1 항체와 포화 결합할 수 없는 경우, 시험 항체는 본 개시내용의 참고 항-MSR1 항체에 의해 결합된 에피토프와 동일한 에피토프에 결합할 수 있다. 추가의 통상의 실험(예컨대, 펩타이드 돌연변이 및 결합 분석)을 이후 수행하여 시험 항체의 결합의 관찰된 결여가 실제로 참고 항체와 동일한 에피토프에 대한 결합에 기인하는지의 여부 또는 장채 차단(또는 다른 현상)이 관찰된 결합의 결여에 관여하는지의 여부를 확인할 수 있다. 이러한 부류의 실험은 ELISA, RIA, Biacore, 유동 세포분석법 또는 당해 분야에서 이용가능한 임의의 다른 정량적 또는 정성적 항체-결합 검정을 사용하여 수행할 수 있다. 본 개시내용의 특정의 구현예에 따라서, 2개의 항체는 동일한(또는 오버랩핑된) 에피토프에 결합하는데, 예컨대, 1-, 5-, 10-, 20- 또는 100배 과량의 하나의 항체는 다른 것의 결합을 경쟁적 결합 검정에서 측정한 바와 같이 적어도 50% 까지 그러나 바람직하게는 75%, 90% 또는 심지어 99%까지 억제한다(참고: 예컨대, Junghans et al., Cancer Res. 1990:50:1495-1502). 대안적으로, 2개의 항체는 ㅎ하나의 항체의 결합을 감소시키거나 제거하는 항원내 필수적으로 모든 아미노산 돌연변이가 다른 것의 결합을 감소시키거나 제거하는 경우 동일한 에피토프에 결합하는 것으로 고려된다. 2개의 항체는 하나의 항체의 결합을 감소시키거나 제거하는 아미노산 돌연변이의 소세트만이 다른 것의 결합을 감소시키거나 제거하는 경우 "오버래핑(overlapping) 에피토프"를 갖는 것으로 고려된다.
예를 들면, 항체가 참고 항-MAR1 항체와 결합에 대해 경쟁하는지(또는 결합에 대해 가교-경쟁하는지)를 측정하기 위하여, 상술한 결합 방법론을 2개의 배향으로 수행한다. 제1 배향에서는, 참고 항체가 포화 상태에서 MSR1 단백질에 결합하도록 한 다음 MSR1 분자에 대한 시험 항체의 결합을 평가한다. 제2 배향에서는, 시험 항체가 포화 상태 하에서 MSR1 분자에 결합하도록 한 다음 MSR1 분자에 대한 참고 항체의 결합을 평가한다. 배향 둘 다에서, 제1(포화) 항체 만기 MSR1 분자에 결합할 수 있는 경우, 시험 항체 및 참고 항체가 MSR1에 대한 결합에 대해 경쟁한다고 결론지어진다. 당해 분야의 통상의 기술자에게 명백할 바와 같이, 참고 항체와 결합ㅇ 대해 경잰하는 항체는 참고 항체와 동일한 에피토프에 필수적으로 결합할 수 없지만, 오버랩핑 또는 인접한 에피토프에 결합함으로써 참고 항체의 결합을 입체적으로 차단할 수 있다.
ADC에 적합한 사람 항체의 제조
본원에 기술된 항체-약물 접합체에 적합한 항체는 완전한 사람 항체일 수 있다. 완전한 사람 모노클로날 항체를 포함하는 사람 모노클로날 항체를 제조하는 방법은 당해 분야에 공지되어 있다. 임의의 이러한 공지된 방법을 본 개시내용의 맥락에서 사용하여 표적 항원, 예를 들면, 감염성 질환-관련 표적(예컨대, MSR1, WTA 또는 단백질 A)에 특이적으로 결합하는 사람 항체를 제조할 수 있다.
예를 들면, VELOCIMMUNE™ 기술, 또는 완전한 사람 모노클로날 항체를 생성하는 임의의 다른 유사한 공지된 방법을 사용하여, 사람 가변 영역 및 마우스 불변 영역을 갖는 MSR1에 대한 고 친화성 키메라 항체를 초기에 단리한다. 하기 실험 단락에서와 같이, 항체는 목적한 특성, 예를 들면, 친화성, 리간드 차단 활성, 선택성, 에피토프 등에 대해 특성화하고 선택한다. 필요한 경우, 마우스 불변 영역을 목적한 사람 불변 영역, 예를 들면 야생형 또는 변형된 IgG1 또는 IgG4로 대체시켜 완전한 사람 항체를 생성할 수 있다. 선택된 불변 영역이 특수한 용도에 따라 변할 수 있지만, 고 친화성 항원-결합 및 표적 특이성 특성은 가변 영역내에 있다. 특정의 예에서, 완전한 사람 항체는 항원-양성 B 세포로부터 직접 단리된다.
생물학적 동등성
본원에 개시된 항체 및 항체 단편을 포함하는 항체-약물 접합체는 기술된 항체의 것과는 상이한 아미노산 서열을 가지지만 표적 항원, 예를 들면, 감염성 질병-관련된 표적(예컨대, MSR1, WTA 또는 단백질 A)에 대한 능력을 보유하는 단백질을 포함한다. 이러한 변이체 항체 및 항체 단편은 모 서열과 비교하는 경우 아미노산의 하나 이상의 첨가, 결실, 또는 치환을 포함하지만, 기술된 항체의 것과 필수적으로 동일한 생물학적 활성을 나타낸다. 유사하게, 본원에 개시된 항체-암호화 DNA 서열은 개시된 서열과 비교하는 경우 뉴클레오타이드의 하나 이상의 결실, 결실, 또는 치환을 포함하는 서열을 포함하지만, 본원에 개시된 항체 또는 항체 단편에 대해 필수적으로 생물학적 동등성인 항체 또는 항체 단편을 암호화한다. 이러한 변이체 아미노산 및 DNA 서열의 예는 상기 논의?? 있다.
2개의 항원-결합 단백질, 또는 항체는 예를 들어, 이들이 이의 약제학적 등가물 또는 이의 흡수 속도 및 정도가 유사한 실험 상태 하에서 동일한 몰 용량에서 단일 용량 또는 다수 용량으로 투여될 때 유의적인 차이를 나타내지 않는 생물학적 동등성 또는 약제학적 대체제인 경우, 생물학적동등성인 것으로 고려된다. 일부 항체는 이들이 이의 흡수 정도에서 등가이지만 이의 흡수 속도에서는 그렇지 않은 경우 생물학적 동등성 또는 약제학적 대체제인 것으로 고려될 것이고 흡수 속도에 있어서 이러한 차이가 의도적이며 표지에서 반영되어 있고 예컨대, 만성 사용에서 효과적인 신체 약물 농도의 획득에 필수적이지 않고, 연구된 특수한 약물 생성물에 대해 의약적으로 비유의적인 것으로 고려되므로, 여전히 생물학적동등성인 것으로 고려될 수 있다.
일 구현예에서, 2개의 항원-결합 단백질은, 이의 안전성, 순도, 및 잠재능에서 임상적으로 의미있는 차이가 없는 경우 생물학적 등가성이다.
일 구현예에서, 2개의 항원-결합 단백질은, 환자가 이러한 스위칭없는 연속된 치료요법과 비교하여, 부작용, 예를 들면, 면역원성에 있어서 임상적으로 유의적인 변화, 또는 감소된 효능의 위험에 있어서 예측된 증가없이 참고 생성물과 생물학적 생성물 사이에서 스위치(switch) 될 수 있는 경우 생물학적동등성이다.
일 구현예에서, 2개의 항원-결합 단백질은, 이들 둘 다가 사용 상태 또는 상태들에 대해 이들이 일반적인 작용 메카니즘 또는 메카니즘들로 이러한 메카니즘이 알려져 있는 정도까지 작용하는 경우 생물학적동등성이다.
생물학적 동등성은 생체내 및 시험관내 방법으로 입증할 수 있다. 생물학적 동등성 측정은, 예컨대, (a) 사람 또는 다른 포유동물에서 시험관내 시험(여기서 항체 또는 이의 대사물질의 농도는 시간의 함수로서 혈액, 혈장, 혈청, 또는 다른 생물학적 유체 속에서 측정된다); (b) 사람 생체내 생체이용률 데이타와 관련되고 이를 충분히 예측하는 시험관내 시험; (c) 사람 또는 다른 포유동물에서 생체내 시험(여기서 항체(또는 이의 표적)의 적절한 실제 약리학적 효과는 시간의 함수로 측정된다); 및 (d) 항체의 안전성, 효능, 또는 생이용능 또는 생물학적동등성을 확립하는 잘-조절된 임상 시험.
본원에 개시된 항체-약물 접합체에 적합한 항체의 생물학적동등성인 변이체는 예를 들면, 잔기 또는 서열의 다양한 치환을 만들거나 생물학적 활성에 필요하지 않는 말단 또는 내부 잔기 또는 서열을 결실시킴으로써 작제할 수 있다. 예를 들면, 생물학적 활성에 필수적이지 않은 시스테인 잔기를 결실시키거나 다른 아미노산으로 대체하여 변성시 불필요하거나 부정확한 분가간 이황화물 브릿지의 형성을 방지할 수 있다. 다른 맥락에서, 생물학적동등성인 항체는 항체의 글리코실화 특성을 변형시키는 아미노산 변화, 예컨대, 글리코실화를 없애거나 제거하는 돌연변이를 포함하는 항체 변이체를 포함할 수 있다.
종 선택성 및 종 가교-반응성
특정의 구현예에 따라서, 사람 MSR1에 결합하지만 다른 종으로부터의 MSR1에 결합하지 않는 항-MSR1 항체를 포함하는 항체-약물 접합체가 본원에 제공된다. 구현예는 또한 사람 MSR1 또는 하나 이상의 비-사람 종으로부터의 MSR1에 결합하는 항-MSR1 항체를 포함하는 항체-약물 접합체를 포함한다. 예를 들면, 본원에 기술된 항-MSR1 항체를 포함하는 항체-약물 접합체는 사람 MSR1에 결합할 수 있고 경우에 따라, 하나 이상의 마우스, 랫트, 기니아 피그(guinea pig), 햄스터, 저빌(gerbil), 돼지, 고양이, 개, 토끼, 염소, 양, 소, 말, 카멜(camel), 시노몰구스(cynomologous), 마모셋(marmoset), 레서스(rhesus) 또는 침팬지 MSR1에 결합하거나 결합하지 않을 수 있다. 특정의 예시적인 구현예에 따라서, 사람 MSR1 및 시노몰구스 원숭이(예컨대, 마카마 파스키쿨라리스(Macaca fascicularis)) MSR1에 특이적으로 결합하는 항-MSR1 항체를 포함하는 항체-약물 접합체가 제공된다. 본원에 개시된 항-MSR1 항체를 포함하는 다른 항체-약물 접합체는 사람 MSR1에 결합하지만, 시노몰구스 원숭이 MSR1에 결합하지 않거나, 단지 약하게 결합한다.
다특이적 항체
본원에 개시된 항체-약물 접합체에 적합한 항체는 일특이적 또는 다특이적(예컨대, 이특이적)일 수 있다. 다특이적 항체는 하나의 표적 폴리펩타이드의 상이한 에피토프에 대해 특이적일 수 있거나 하나 이상의 표적 폴리펩타이드에 대해 특이적인 항원-결합 도메인을 함유할 수 있다. 참고: 예컨대, Tutt et al., 1991, J. Immunol. 147:60-69; Kufer et al., 2004, Trends Biotechnol. 22:238-244. 본원에 개시된 항체는 다른 작용성 분자, 예컨대, 다른 펩타이드 또는 단백질에 연결되거나 이와 함께 공-발현될 수 있다. 예를 들면, 항체 또는 이의 단편은 하나 이상의 다른 분자 실체, 예를 들면, 다른 항체 또는 항체 단편에 기능적으로 연결(예컨대, 화학적 커플링, 유전적 융합, 비공유결합성 연합 등에 의해)되어 제2 항체 결합 특이성을 진니 이특이적 또는 다특이적 항체를 생산할 수 있다.
구현예는 이특이적 항체를 포함하는 항체-약물 접합체를 포함하며 여기서 면역글로불린의 하나의 아암(arm)은 제1의 항원에 결합하고, 면역글로불린의 다른 아암은 제2의 항원에 대해 특이적이다. 항원은 감염성 질환-관련 표적일 수 있다. 비-제한적인 예로서, 항체-약물 접합체는 이특이적 항체를 포함할 수 있고 여기서 면역글로불린의 하나의 아암은 사람 MSR1에 결합하고, 면역글로불린의 다른 아암은 WTA 또는 단백질 A에 대해 특이적이다. 다른 비-제한적 예로서, 항체-약물 접합체는 이특이적 항체를 포함할 수 있고 여기서 면역글로불린의 하나의 아암은 WTA에 결합하고, 면역글로불린의 다른 아암은 단백질 A에 대해 특이적이다.
예를 들면, MSR1-결합 아암은 본원의 표 9에 나타낸 바와 같은 임의의 HCVR/LCVR 또는 CDR 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 특정의 구현예에서, MSR1-결합 아암은 사람 MSR1에 결합하고 MSR1에 대한 변형된 LDL 결합을 차단한다. 다른 구현예에서, MSR1-결합 아암은 사람 MSR1에 결합하지만 MSR1에 대한 변형된 LDL 결합을 차단하지 않는다. 일부 구현예에서, MSR1 결합 아암은 사람 MSR1에 결합하여 MSR1 신호전달을 활성화시킨다. 다른 구현예에서, MSR1 결합 아암은 MSR1-매개된 수용체 자극을 차단한다. 구현예는 또한 이특이적 항체를 포함하며 여기서 항체의 하나의 아암은 사람 MSR1의 제1 에피토프에 결합하고 상기 항체의 다른 아암은 사람 MSR1의 제2의 명백한 에피코프에 결합한다.
본 개시내용에 따른 항체-약물 접합체의 맥락에서 사용될 수 있는 예시적인 이특이적 항체 양식은 제1의 면역글로불린(Ig) CH3 도메인 및 제2의 Ig CH3 도메인의 사용을 포함하고, 여기서 제1 및 제2의 Ig CH3 도메인은 서로 적어도 하나의 아미노산까지 상이하고, 여기서 적어도 하나의 아미노산 차이는 아미노산 차이가 없는 이특이적 항체와 비교하여 단백질 A에 대한 이특이적 항체의 결합을 감소시킨다. 일 구현예에서, 제1의 Ig CH3 도메인은 단백질 A에 결합하고 제2의 Ig CH3 도메인은 H95R 변형(IMGT 엑손 번호매김에 의함; EU 번호매김에 의해 H435R)과 같은 단백질 A 결합을 감소시키거나 폐기하는 돌연변이를 함유한다. 제2의 CH3는 Y96F 변형(IMGT; EU에 의해 Y436F)을 추가로 포함할 수 있다. 제2의 CH3내에서 발견될 수 있는 추가의 변형은 IgG1 항체;의 경우에 D16E, L18M, N44S, K52N, V57M, 및 V82I(IMGT에 의함; EU에 의해 D356E, L358M, N384S, K392N, V397M, 및 V422I); IgG2 항체의 경우에 N44S, K52N, 및 V82I (IMGT; EU에 의해 N384S, K392N, 및 V422I); 및 IgG4 항체의 경우에 Q15R, N44S, K52N, V57M, R69K, E79Q, 및 V82I(IMGT에 의함; EU에 의해 Q355R, N384S, K392N, V397M, R409K, E419Q, 및 V422I). 상술된 이특이적인 항체 양식에서 변이는 본 개시내용의 영역내에서 고려된다.
본 개시내용의 맥락에서 사용될 수 있는 다른 예시적인 이특이적 양식은, 제한 없이, 예컨대, scFv-기반 또는 디아보디 이특이적인 양식, IgG-scFv 융합, 이중의 가변 도메인(DVD)-Ig, 쿼드로마(Quadroma), 놉스-인투-홀스(knobs-into-holes), 일반적인 경쇄(예컨대, 놉스-인투-홀스를 지닌 일반적인 경쇄 등), CrossMab, CrossFab, (SEED)보디, 루이신 지퍼(zipper), 듀오보디(Duobody), IgG1/IgG2, 이중 작용 Fab(DAF)-IgG, 및 Mab2 이특이적인 양식을 포함한다(참고: 선행 포맷의 고찰을 위해서, 예컨대, Klein et al. 2012, mAbs 4:6, 1-11, 및 여기에 인용된 참고 문헌). 이특이적 항체는 또한 펩타이드/핵산 구조를 사용하여 작제할 수 있고, 예컨대, 여기서 직교 화학 반응성을 지닌 비천연 아미노산을 사용하여 부위-특이적인 항체-올리고뉴클레오타이드 접합체를 생성할 수 있고, 이는 이후 정의된 조성, 원자가 및 기하학을 지닌 다가 복합체로 자가-조립된다(참고: 예컨대, Kazane et al., J. Am. Chem. Soc. [Epub: Dec. 4, 2012]).
조합 치료
상기 방법 중 임의의 일 구현예에서, 방법은 제2의 치료제를 투여함을 포함한다.
일 구현예에서, 제2의 치료제는 제2의 항생제이다.
일 구현예에서, 제2의 치료제는 일반적으로 에스. 아우레우스 및/또는 특히 MRSA에 대한 항생제를 포함하는 항생제이다.
일 구현예에서, 제2의 항생제는 아미노글리코시드, 베타-락탐, 마크롤리드, 사이클릭 펩타이드, 테트라사이클린, 플루오로퀴놀린, 플루오로퀴놀론, 및 옥사졸리디논으로부터 선택된 제2의 항생제이다.
일 구현예에서, 제2의 항생제는 클린다마이신, 노보비오신, 레타파물린, 답토마이신, 시타플록사신, 테이코플라닌, 트리클로산, 나프티리돈, 라데졸리드, 독소루비신, 암피실린, 반코마이신, 이미페넴, 도리페님, 겜시타빈, 달바반신, 및 아지트로마이신으로부터 선택된 제2의 항생제이다.
구현예는 하나 이상의 치료학적으로 활성인 구성성분과 함께 임의의 본원에 기술된 항생제 또는 ADC를 포함하는 조성물 및 치료학적 제형을 포함한다.
본원에 개시된 항체 또는 ADC는 사이토킨 억제제, 예를 들면, 소-분자 사이토킨 억제제 및 사이토킨, 예를 들면, IL-1, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-8, IL-9, IL-11, IL-12, IL-13, IL-17, IL-18, 또는 이의 각각의 수용체에 결합하는 항체로 이루어진 그룹으로부터 선택된 하나 이상의 추가의 치료학적 활성 구성성분(들)과 함께 공-제형화되고/되거나 투여될 수 있다.
본원에 개시된 항체 또는 ADC는 또한 소염제, 면역조절제, 진통제, 코르티코스테로이드, 스테로이드, 항산화제, COX 억제제, 심장보호제, 금속 킬레이트제, IFN-감마, 및/또는 NSAID와 함께 투여되고/되거나 공-제형화될 수 있다. 일부 구현예에서, 항체 또는 ADC는 항-PCSK9 항체, 항-ANGPTL3 항체, 스타틴, 에제티미베 및 다른 지질 저하 치료요법과 함께 투여되고/되거나 공-제형화될 수 있다.
추가의 치료학적 활성 구성성분(들), 예컨대, 상기 나열된 임의의 제제 또는 이의 유도체는 본원에 개시된 항체 또는 ADC의 투여 직전, 이와 동시에, 또는 직후에 투여될 수 있다(본 개시내용의 목적을 위해, 이러한 투여 요법은 추가의 치료학적 활성 구성성분"과 함께" 항체 또는 ADC의 투여를 고려한다). 구현예는 본원에 개시된 항체 또는 ADC가 본원의 어딘가에 기술된 바와 같은 하나 이상의 추가의 치료학적으로 활성인 구성성분(들) 중 하나 이상과 공-제형화되는 약제학적 조성물을 포함한다.
실시예
다음의 실시예는 본 설명의 구체적인 양태를 나타낸다. 실시예는 단지 구현예의 상세한 이해 및 실시를 제공하기 위한 것이므로, 제한하는 것으로 해석되지 않아야 한다.
본원에 사용된 바와 같은, 본원의 공정, 및 실시예에 사용된 기호 및 협약(convention)은 달리 이와 반대로 명시하지 않는 한, 동시대의 과학 문헌, 예를 들면, Journal of the American Chemical Society or the Journal of Biological Chemistry에 사용된 것과 일치한다. 구체적으로, 그러나 제한없이, 다음의 약어가 실시예 및 명세서 전체에서 사용될 수 있다:
Figure pct00450
Figure pct00451
Figure pct00452
본원에 사용된 바와 같은, 이러한 공정, 반응식, 및 실시예에 사용된 기호 및 조약은 특수한 약어가 구체적으로 정의되어있는지의 여부에 상관없이, 통상의 과학 문헌, 예를 들면, Journal of the American Chemical Society 또는 the Journal of Biological Chemistry에 사용된 것과 일치한다.
일반적인 방법
사용된 모든 용매는 Sigma Aldrich 또는 Fisher Scientific으로부터 시판되며 추가의 정제없이 사용되었다. 리파마이신 S는 Bosche Scientific으로부터 구입하였다. 1H-NMR 스펙트럼은 Varian Inova 300 MHz 및 500 MHz NMR 장치에 기록하였다. 화학적 이동(δ)은 분석에 사용된 NMR 용매와 관련하여 ppm으로 기록하고 s - 단일선, d - 이중선, t - 삼중선, q - 사중선, dd - 이중선의 이중선, dt - 삼중선의 이중선, dq - 사중선의 이중선, 및 m - 다중선으로 기록한다. 커플링 상수(J)는 헤르츠(Hz)로 기록한다. 크로마토그래피 순도는 Agilent 1100, 1260 Infinity, 또는 1200 Series LC/MS 시스템에서 Chromolith® FastGradient RP-18e 분석 컬럼(50 × 2 mm, Merck KGaA, P/N 1.52007.0001) 및 후속적인 분석 HPLC 방법: 주입 용적 5 또는 10 μL; 유동 속도 1 mL/min; 4분에 걸쳐 5 내지 95%의 수중 아세토니트릴; λ = 254 nm에서 Agilent 다이오드 배열 검출기; 실온에서 측정하였다. 저 해상도 질량 분광법을 Agilent 시스템에서 전기스프레이 이온화 공급원을 사용하여 수행하고 단일 사중극(single quadrupole) 또는 이온 트랩 질량 검출기로 분석하였다.
실시예 1: 본 개시내용에 따른 유사체 1a-1d의 합성
하기 반응식 1은 상업적으로 이용가능한 출발 물질로부터 본 개시내용에 따른 예시적인 화합물 1a-1d의 합성을 나타낸다.
Figure pct00453
실시예 1A: 리파마이신 4-MeO-페놀 유사체 (1a):
실시예 1의 일반적인 커플링 과정을 사용하여 표제 화합물을 제조한다: 15 mL의 톨루엔 중 리파마이신 S(200 mg, 0.287 mmol)의 아르곤하 교반 용액에 실온에서 2-아미노-5-메톡시페놀(44 mg, 0.316 mmol)을 가하였다. 혼합물 용액을 3일 동안 실온에서 교반하였다. 반응의 진행을 LC/MS로 모니터링한 다음, 혼합물을 증발 건조시켰다. 암색 잔사를 10 mL의 에탄올 속에 용해하고, 100 mg(1.14 mmol)의 산화망간(MnO2)을 에탄올 용액에 한번에 가하였다. 슬러시 혼합물을 15시간 동안 실온에서 교반하였다. 불용성 물질을 셀라이트 패드를 사용하여 여과한 후, 여액을 감압하에 증발시켰다. 암색 잔사를 40 g의 HP 실리카 겔 Gold RediSep 컬럼 상에서 ISCO(구배 용출: 헥산 중 5 → 95% EA)를 통해 정제하고 순수한 분획을 증발시키고 진공하에 건조시켜 표제 화합물 1a를 암적색 고체(85 mg, 37%)로서 수득하였다. MS(ESI, pos.): C44H50N2O13에 대한 계산치, 814.33; 실측치 815.3 (M+H), 837.3 (M+Na). 1H NMR (500 MHz; CDCl3) δ 7.96 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 7.47 (s, 1H), 7.05 - 7.01 (m, 2H), 6.86 (s, 1H), 5.99 (s, 2H), 4.97 (dd, J = 12.4, 7.4 Hz, 2H), 3.93 (s, 3H), 3.08 (s, 3H), 3.00 - 2.99 (m, 1H), 2.30 (s, 3H), 2.13 (s, 3H), 2.03 (d, J = 18.1 Hz, 3H), 1.81 (s, 3H), 1.70 - 1.67 (m, 1H), 1.59 - 1.54 (m, 16H), 1.53 (s, 3H), 0.96 - 0.95 (m, 3H).
실시예 1B: 리파마이신 4-BnO-페놀 유사체(1b) :
유사체 1b를 중간체 2를 사용하여 제조하였고, 이의 합성은 하기 반응식 2에 나타낸다.
Figure pct00454
화합물 2의 합성. 6-(벤질옥시)벤조[d]옥사졸-2(3H)-온(500 mg, 2.07 mmol) 및 메탄올(6 mL)을 6 mL의 물 중 1.2 g의 NaOH의 용액으로 처리하였다. 현탁액을 90℃에서 밤새 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 혼합물을 6N HCl(5 mL)로 처리한 다음 여과하였다. 여액을 포화된 수성 NaHCO3로 pH = 8-9로 조절하고 침전물을 여과하고, 물로 세척하고 암색 고체를 수득하고, 이를 40 g HP 실리카 겔 Gold RediSep 컬럼(헥산 중 0 → 90%)으로 정제하여 220 mg(49%)의 화합물 2를 수득하였다. MS (ESI, pos.): C13H13NO2에 대한 계산치, 215.09; 실측치 216.1 (M+H). 1H NMR (500 MHz; DMSO-d6) δ 7.39 - 7.37 (m, 5H), 7.31 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 6.49 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 6.37 (d, J = 2.7 Hz, 1H), 6.25 (dd, J = 8.4, 2.7 Hz, 1H), 4.91 (s, 2H).
유사체 1b 의 합성 1 mL의 톨루엔 중 리파마이신 S(20 mg, 0.0287 mmol)의 교반 용액에 아르곤 하에 실온에서 2-아미노-5-(벤질옥시)페놀 2(6.8 mg, 0.0316 mmol)로 처리하였다. 용액을 3일 동안 실온에서 교반하고 추가의 2-아미노-5-(벤질옥시)페놀(6.8 mg)을 가하였다. 반응의 진행을 LC/MS로 모니터링하였다. 5일 후, 혼합물을 증발 건조시켰다. 암색 잔사를 3.5 mL의 에탄올 속에 용해하고 10 mg(0.11 mmol)의 산화망간(MnO2)을 에탄올 용액에 한번에 가하였다. 슬러시 혼합물을 3시간 동안 실온에서 교반하였다. 불용성 물질을 셀라이트 패드를 사용하여 여과한 후, 여액을 감압하에 증발시켰다. 암색 잔사를 24 g HP 실리카 겔 Gold RediSep 컬럼 위에서 ISCO(구배 용출: 헥산 중 5 → 98% EA)를 경유해 정제하고 순수한 분획을 증발시키고 진공하에 건조시켜 표제 화합물 1b를 암적색 고체(8.5 mg, 33%)로서 수득하였다. MS (ESI, pos.): C50H54N2O13에 대한 계산치, 890.36; 실측치 891.3 (M+H). 1H NMR (500 MHz; CDCl3) δ 7.97 (s, 1H), 7.49 (s, 1H), 7.44 - 7.41 (m, 5H), 7.14 - 7.11 (m, 2H), 7.07 (s, 1H), 6.94 (s, 1H), 5.32 (s, 1H), 5.23 (s, 1H), 5.18 (d, J = 11.9 Hz, 2H), 4.99 (s, 2H), 3.11 (s, 3H), 3.04 (dd, J = 2.0, 0.6 Hz, 1H), 2.32 (s, 3H), 2.07 (s, 6H), 1.83 (s, 3H), 1.71 - 1.69 (m, 1H), 1.61 (d, J = 0.4 Hz, 9H), 1.58-1.52 (m, 6H), 1.28 (s, 1H), 0.97 (td, J = 1.9, 1.2 Hz, 3H), 0.79 (t, J = 0.8 Hz, 1H).
실시예 1C: 리파마이신 4-OH-페놀 유사체( 1c ):
유사체 1c를 중간체 4를 사용하여 제조하였으며, 이의 합성은 하기 반응식 3에 나타낸다.
Figure pct00455
2-아미노-5-((3급-부틸디메틸실릴) 옥시)페놀(4) :
화합물 3 의 합성 . 화합물 8을 실시예 1B에서의 생성물로부터 제조하였다. DMF(2 mL) 중 3-벤질옥시-4-니트로페놀 8(400 mg, 1.63 mmol)의 용액에 아르곤 하에 TBSCl(0.247 mL, 2.44 mmol), 이미다졸(222 mg, 3.26 mmol), 및 DMAP(0.5 mg)를 가하였다. 혼합물을 실온에서 밤새 교반한 다음 에틸 아세테이트(25 mL)로 희석시키고, 물(2 x 10 mL), 염수 용액(10 mL)으로 세척하고, 황산나트륨 위에서 건조시켰다. 조 물질을 40g HP 실리카 겔 Gold RediSep 컬럼 위에서 ISCO(구배 용출: 헥산 중 0 → 20% EA)를 경유에 정제하고 순수한 분획을 증발시켜 목적한 화합물 3(540 mg, 92%)을 수득하였다. MS(ESI, pos.): C19H25N2O4Si에 대한 계산치, 359.16; 실측치 382.1 (M+Na).
화합물 4 의 합성 . 아르곤 하에 3 mL의 메탄올(아르곤으로 3회 탈기시킴) 중 화합물 3(120 mg, 0.33 mmol)의 용액에 10% Pd/C(10 mg)를 가하였다. 혼합물을 다시 탈기시키고 벌룬(balloon)으로부터 수소로 버블링하였다. 수소 벌룬을 셉타(septa)를 통해 삽입하고 혼합물을 밤새 숙성시켰다. 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하고 농축시켜 암녹색 고체(71 mg, 90%)를 수득하였다. MS (ESI, pos.): C12H21NO2Si에 대한 계산치, 239.13; 실측치 240.2 (M+H).
유사체 1c 의 합성 . 아르곤 하에 10 mL의 톨루엔 중 리파마이신 S(120 mg, 0.172 mmol)의 교반 용액에 실온에서 화합물 4(46 mg, 0.192 mmol)를 가하였다. 혼합물 용액을 3일 동안 실온에서 교반하였다. 반응의 진행을 LC/MS로 모니터링한 다음, 혼합물을 증발 건조시켰다. 암색 잔사를 10 mL의 에탄올 속에 용해하고, 50 mg(0.6 mmol)의 산화망간(MnO2)을 에탄올 용액에 한번에 가하였다. 슬러시 혼합물을 12시간 동안 실온에서 교반하였다. 불용성 물질을 셀라이트 패드를 사용하여 여과한 후, 여액을 감압하에 증발시켰다. 암색 잔사를 24 g의 HP 실리카 겔 Gold RediSep 컬럼 위에서 ISCO(구배 용출: 헥산 중 5 → 95% EA)를 경유해 정제하였다. 순수한 분획을 증발시키고 진공하에 건조시켜 표제 화합물 1c를 암적색 고체(48 mg, 35%)로서 수득하였다. MS: C43H48N2O13에 대한 계산치, 800.32; 실측치 801.3 (M+H), 799.2 (M-H). 1H NMR (500 MHz; DMSO-d6) δ 11.43 (d, J = 1.7 Hz, 1H), 9.33 - 9.32 (m, 1H), 7.82 (dt, J = 2.0, 1.0 Hz, 1H), 7.02 - 7.01 (m, 1H), 6.89 (t, J = 1.3 Hz, 1H), 6.04 (dd, J = 2.5, 0.9 Hz, 1H), 5.83 (dt, J = 1.9, 1.0 Hz, 1H), 5.25 - 5.24 (m, 1H), 4.78 - 4.77 (m, 1H), 4.14 - 4.14 (m, 1H), 3.52 (d, J = 0.8 Hz, 1H), 3.07 (d, J = 0.7 Hz, 1H), 3.03 (t, J = 0.6 Hz, 3H), 2.89 (s, 1H), 2.78 (t, J = 2.7 Hz, 1H), 2.19 (d, J = 16.7 Hz, 3H), 1.99 (d, J = 12.2 Hz, 4H), 1.95 (t, J = 0.5 Hz, 4H), 1.67 (d, J = 1.9 Hz, 3H), 1.24 (s, 2H), 0.89 (dd, J = 2.5, 1.1 Hz, 2H), 0.85 (d, J = 6.5 Hz, 6H), 0.69 (d, J = 1.5 Hz, 3H).
Figure pct00456
실시예 1D: 리파마이신 4-OH-페놀 N-메틸 유사체 (1d):
유사체 1d를 중간체 7을 사용하여 제조하였으며, 이의 합성은 하기 반응식 4에 나타낸다.
Figure pct00457
5-((3급-부틸디메틸실릴)옥시)-N1-메틸벤젠-1,2-디아민( 7 ) :
화합물 5 의 합성 . 표제 화합물을 PTC 국제 출원 제2008051805호에 개시된 방법을 사용하여 제조하였다. 밀봉 튜브에 3-플루오로-4-니트로페닐(1 g, 6.36 mmol) 및 2 mL의 40% 메틸아민 수용액의 혼합물을 두었다. 플라스크를 격막을 경유해 밀봉하고, 아르곤으로 퍼징하고, 80℃에서 오일 욕 속에서 18시간 동안 가열하였다. 반응을 LCMS 분석으로 완료시키고 실온으로 냉각시켰다. 용액을 물(15-20 mL)을 가하여 용해시키고 에틸 아세테이트(3 x 30 mL)를 사용하여 추출하였다. 이어서 합한 유기 층을 물, 염수로 세척하고, 건조(Na2SO4)시킨 다음, 농축시켜 조 생성물을, 5의 갈색 흰색 고체(900 mg, 84%)로서 수득하고, 이를 다음 단계에서 추가의 정제없이 사용하였다. MS(ESI, pos.): C7H8N2O3에 대한 계산치, 168.05; 실측치 169.1 (M+H).
화합물 6 의 합성 . 아르곤 하에 3-(메틸아미노)-4-니트로페놀 5(200 mg, 1.19 mmol) 및 이미다졸(162 mg, 2.38 mmol)을 무수 DMF 속에 촉매 DMAP(0.7 mg)의 존재하에 용해하였다. 교반된 황색 오일을 빙욕 속에서 냉각시키고 TBSCl(269 mg, 1.79 mmol)을 황색 용액에 한번에 가하였다. 5분 후 욕을 제거하고 용액을 실온으로 밤새 가온시켰다. 혼합물을 포화된 NaHCO3 용액으로 퀀칭(quenching)시키고 에틸 아세테이트(2 x 25 mL)로 추출하였다. 합한 유기물을 Na2SO4를 가하여 건조시키고 농축시켜 조 생성물을 수득하였다. 잔사를 24g의 HP 실리카 겔 Gold RediSep 컬럼 위에서 ISCO(구배 용출: 헥산 중 0 → 90%)를 통해 정제한 다음, 순수한 분획을 증발시키고 진공하에 건조시켜 표제 화합물 6을 황색 고체(220 mg, 66%)로서 수득하였다. MS: C13H22N2O3Si에 대한 계산치, 282.14; 실측치 283.1 (M+H)
화합물 7 의 합성 . 아르곤 하에 5-((3급-부틸디메틸실릴)옥시)-N1-메틸벤젠-1,2-디아민 6(50 mg, 0.177 mmol)을 2 mL의 메탄올 속에 용해하였다. 용액을 아르곤으로 3회 탈기시킨 후 Pd/C(5 mg)를 가하였다. 혼합물을 아르곤으로 추가로 탈기시키고 수소 벌룬에 격막을 통해 연결하였다. 2.5시간 후, LC/MS에 의한 공정중 분취량으로부터의 분석은 반응이 완료되었음을 나타내었다. 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하고 농축시켜 46 mg의 화합물 7을 정량적으로 수득하고, 이를 다음 단계에서 추가의 정제없이 즉시 사용하였다. MS: C13H24N2OSi에 대한 계산치, 252.17; 실측치 253.2 (M+H).
유사체 1d 의 합성 . 아르곤 하에 3 mL의 톨루엔 중 리파마이신 S(58 mg, 0.083 mmol)의 교반 용액에 실온에서 화합물 7(21 mg, 0.083 mmol)을 가하였다. 용액을 실온에서 2일 동안 교반하였다. 반응의 진행을 LC/MS로 모니터링한 다음, 용액을 증발 건조시켰다. 암색 잔기를 5 mL의 에탄올 속에 용해하고 10 mg의 산화망간(MnO2)을 한번에 에탄올 용액에 가하였다. 슬러시 혼합물을 12시간 동안 실온에서 교반하였다. 불용성 물질을 셀라이트 패드를 사용하여 여과한 후, 여액을 감압하에 증발시켰다. 암색 잔기를 12 g의 HP 실리카 겔 Gold RediSep 컬럼 위에서 ISCO(구배 용출: 헥산 중 5 → 95% EA)를 통해 정제한 다음 순수한 분획을 진공하에 건조시켜 표제 화합물 1d를 암적색 고체(22.3 mg, 33%)로서 수득하였다. 이는 LC/MS에 의해 불순한 것으로 밝혀졌으므로, 이를 MeCN/물 속에 용해하고 15.5 g의 C18 Aq Gold 컬럼(구배 용출: 수중 10 - 95% MeCN, 욕 중 0.05% 아세트산, 20분에 걸쳐)을 통해 재정제하였다. 생성물 분획을 합하고, 드라이아이스 상에서 동결시키고, 동결건조시켜 표제 화합물 1d를 백색 고체(13.5 mg, 20%)로서 수득하였다. MS: C44H51N3O12에 대한 계산치, 813.35; 실측치 814.3 (M+H), 812.3 (M-H). 1H NMR (500 MHz; DMSO-d6) δ 11.31 (b, J = 0.8 Hz, 2H), 9.41 (s, 1H), 9.22 (s, 1H), 8.86 (s, 1H), 8.01 - 7.95 (m, 2H), 7.19 - 7.13 (m, 2H), 7.04 (s, 2H), 6.79 - 6.74 (m, 1H), 6.39 - 6.37 (m, 1H), 6.19 (t, J = 11.4 Hz, 2H), 6.08 (d, J = 12.4 Hz, 1H), 6.02 - 5.92 (m, 1H), 5.73 (d, J = 26.4 Hz, 1H), 5.49 (d, J = 11.2 Hz, 1H), 5.28 (d, J = 0.6 Hz, 1H), 5.09 - 5.02 (m, 2H), 4.82 (dd, J = 11.5, 10.2 Hz, 1H), 4.54 (d, J = 6.6 Hz, 1H), 4.36 (d, J = 2.6 Hz, 1H), 3.96 (d, J = 4.4 Hz, 1H), 3.88 (s, 1H), 3.83 (s, 1H), 3.79 (s, 1H), 3.70 (s, 1H), 3.09 (s, 1H), 2.91 (s, 3H), 2.21 (s, 3H), 2.15 (d, J = 5.9 Hz, 1H), 1.97 (s, 2H), 1.72 (s, 2H), 1.64 (s, 2H), 1.59 (s, 2H), 0.90 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 0.70 (d, J = 6.6 Hz, 1H), 0.62 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 0.20 - 0.18 (m, 1H), 0.07 (d, J = 0.7 Hz, 1H).
Figure pct00458
실시예 2: 본 개시내용에 따른 유사체 14의 합성
리파마이신 유사체 14를 리파마이신 S로부터 하기 반응식 5에 나타내고, 하기 기술된 바와 같이 합성하였다.
Figure pct00459
실시예 2A: 화합물( 10 및 13 )의 제조 :
중간체 10 및 13을 하기 나타낸 반응식 6에 따라 제조하였다.
Figure pct00460
화합물 8 의 합성 . 표제 화합물을 오텐(Otten) 등이 보고한 약간 변형된 방법(Bioconjugate Chem. 2001, 12, 76-83)을 사용하여 제조하였다. DMSO(10 mL) 중 3-플루오로-4-니트로페닐(2.09 g, 8.45 mmol)의 용액에 1M NaOH(10 mL)을 가하고 80℃에서 가열 블롯 위에서 18시간 동안 가열하였다. 반응을 LCMS로 완료시키고 실온으로 냉각하였다. 반응물을 1M HCl(15-20 mL)로 pH가 3-4가 될때까지 산성화시키고 수득되는 용액을 에틸 아세테이트(3 x 30 mL)를 사용하여 추출하였다. 합한 유기 층을 물, 염수로 세척하고, 건조(Na2SO4)시키고, 진공 하에 농축시켰다. 이후에, 조 오일을 80 g의 HP 실리카 겔 Gold RediSep 컬럼 위에서 ISCO(구배 용출: 헥산 중 0 → 100% 에틸 아세테이트)를 통해 정제한 다음 순수한 분획을 진공하에 건조시켜 표제 화합물 8을 황백색 고체(1.51 g, 73%)로서 수득하였다. MS(ESI, pos.): C13H11NO4에 대한 계산치, 245.1; 실측치 268.1 (M+Na), 244.1 (M-H).
화합물 9 의 합성 . 아르곤 하에 THF(16 mL) 중 화합물 8 1.51 g, 6.157 mmol)의 교반 용액에 실온에서 BOC-피페리딘-4-올(1.61 g, 8.005 mmol) 및 PPh3(2.91 g, 11.083 mmol)를 가하였다. THF(9 mL) 중 DBAD(2.55 g, 11.083 mmol)의 용액을 반응 혼합물에 적가하였다. 16시간 동안 교반한 후, 혼합물을 증발 건조시키고 잔사를 40 g의 HP 실리카 겔 Gold RediSep 컬럼 위에서 ISCO(구배 용출: 헥산 중 0 → 100% 에틸 아세테이트)를 통해 정제한 다음 순수한 분획을 진공하에 건조시켜 표제 화합물 9를 황백색 고체(2.41 g, 91%)로서 수득하였다. MS: 에 대한 계산치:C23H28N2O6, 428.2; 실측치 451.1 (M+Na).
화합물 10 의 합성 . 아르곤 하에 3 mL의 메탄올 중 화합물 9(100 mg, 0.233 mmol)의 탈기된 용액에 5 mg의 10% Pd/C를 가하였다. 혼합물을 추가로 탈기시키고 수소 벌룬에 연결하였다. 2.5 시간 후, 공정 중 분취량으로부터 LC/MS에 의한 분석은 반응이 완료되었음을 나타내었다. 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하고 농축시켜 75 mg의 화합물 10을 정량적으로 수득하고, 이를 즉시 다음 단계에서 추가의 정제없이 사용하였다. MS: C16H24N2O4에 대한 계산치, 308.17; 실측치 331.2 (M+Na), 307.1 (M-H).
화합물 11 의 합성 . 1,4-디옥산(15 mL) 중 화합물 9(1100 mg, 2.561 mmol)의 용액에 1,4-디옥산(5 mL) 중 4 M HCl을 가하였다.15시간 동안 교반한 후, 공정 중 분취량은 반응이 완료되었음을 나타내었다. 당해 용액에 디에틸 에테르(50 mL)를 가한 다음, 혼합물을 백색 침전물이 형성될 때까지 1시간 동안 격렬하게 교반하였다. 고체를 여과하고 에테르로 세척하여 11의 HCl 염을 수득하였다. 백색 고체에 EtOAc(10 mL) 및 포화된 NaHCO3(15 mL)를 pH가 8-9이 될 때까지 가하고 15분 동안 교반하였다. 2개 층을 분리하고 수성 층을 EtOAc(3 x 30 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 건조(Na2SO4)시키고 진공하에 농축시켜 화합물 11(372 mg, 44%)을 수득하고 이를 즉시 다음 단계에서 추가의 정제없이 사용하였다. MS: C18H21N2O4에 대한 계산치, 328.1; 실측치 329.1 (M+H).
화합물 12 의 합성 . 아르곤 하에 1,4-디옥산/물(v/v, 10:1, 11 mL) 중 화합물 11(372 mg, 1.128 mmol)의 용액에 Fmoc-OSu(399 mg, 1.184 mmol)를 가하였다. 15시간 교반 후, 공정 중 LC/MS 분석은 반응이 완료되었음을 나타내었다. 반응 혼합물을 진공 중 농축시켜 화합물 12를 수득하고 이를 즉시 다음 단계에서 추가의 정제없이 사용하였다. MS: C33H30N2O6에 대한 계산치, 550.2; 실측치 551.2 (M+H).
화합물 13 의 합성 . 아르곤 하에 2 mL의 메탄올 중 아르곤으로 탈기시킨 화합물 12(72 mg, 0.131 mmol)의 용액에 9 mg의 10% Pd/C를 가하였다. 혼합물을 아르곤으로 추가로 탈기시키고 수소 벌룬에 연결시켰다. 45분 후, 공정중 분취량으로부터 LC/MS에 의한 분석은 반응이 완료되었음을 나타내었다. 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하고 진공중 농축시켜 55 mg의 화합물 13을 정량적으로 수득하고, 이를 즉시 다음 단계에서 추가의 정제없이 사용하였다. MS: C26H26N2O4에 대한 계산치, 430.1; 실측치 431.2 (M+H).
실시예 2B: 중간체 10 으로부터 유사체 14 의 제조
화합물 14-Bac 의 합성 : 5 mL의 톨루엔 중 리파마이신 S(100 mg, 0.143 mmol)의 교반 용액에 실온에서 화합물 10(44 mg, 0.143 mmol)을 가하였다. 혼합물 용액을 4일 동안 실온에서 교반하였다. 반응의 진행을 LC/MS로 완료될 때까지 모니터링한 다음, 혼합물을 증발 건조시켰다. 암색 잔기를 10 mL의 에탄올 속에 용해하고 62 mg(0.715 mmol)의 산화망간(MnO2)을 에탄올 용액에 한번에 가하였다. 슬러시 혼합물을 15시간 동안 실온에서 교반하였다. 셀라이트 패드를 사용한 불용성 물질의 여과 후, 여액을 감압하에 증발시켰다. 암색 잔기를 12g의 HP 실리카 겔 Gold RediSep 컬럼 위에서 ISCO(구배 용출: 헥산 중 5% → 95% 에틸 아세테이트)를 통해 정제하였다. 감압하에 농축시킨 후, 조 생성물(약 85% 순도)을 50 g의 C18 Aq Gold 컬럼(구배 용출: 수중 10 - 95% MeCN, 욕중 0.05% 아세트산) 위에서 재정제하였다. 순수한 분획을 합하고, 드라이 아이스 위에서 동결시키고, 동결건조시켜 14-Boc 암적색 고체(36 mg, 26%)를 수득하였다. MS: C53H65N3O15에 대한 계산치, 983.44; 실측치 984.4 (M+H).
Figure pct00461
화합물 14 의 합성 : 14-Boc(30 mg, 0.03 mmol)를 TFA/아세토니트릴/물(0.25 mL/5 mL/5 mL)의 혼합물로 실온에서 20시간 동안 처리하여 화합물 14를 수득하였다. 반응 혼합물을 15.5g의 C18 수성 Gold 컬럼 위에서 ISCO 시스템(구배 용출: 수중 10% - 100% MeCN, 욕 중 0.05% 아세트산, 30분에 걸쳐)을 통해 정제하였다. 생성물 함유 분획을 합하고, 드라이 아이스 위에서 동결시키고 밤새 동결건조시켜 표제 화합물 14(10 mg, 37%)를 암적색 고체로서 수득하였다. MS: C48H57N3O13에 대한 계산치, 883.4; 실측치 884.3 (M+H).
실시예 2C: 중간체 13 으로부터 유사체 14 의 제조
화합물 14 의 합성 : 하이드록시아닐린 13(55 mg, 0.1278 mmol)이 들어있는 환저 플라스크에 톨루엔(1.5 mL) 및 리파마이신 S(67 mg, 0.0956 mmol)를 가하였다. 반응 혼합물을 1분 동안 초음파처리하여 반응 혼합물을 용해하고, 고무 격막을 통해 밀봉하고, 아르곤으로 퍼징하고, 반응물을 주위 온도에서 교바낳여싸. 2일 후 하이드록시아닐린(45 mg, 0.1045 mmol)의 다른 부분을 가하고 1일 동안 교반하였다. 반응물을 진공하에 농축시켜 톨루엔을 제거하고, EtOH(6 mL) 속에 용해하고 MnO2(20 mg)를 가하였다. 3일 동안 교반한 후, 반응물을 진공하에 농축시키고 40 g의 HP 실리카 겔 Gold RediSep 컬럼 위에서 ISCO(구배 용출: 헥산 중 0 → 100% 에틸 아세테이트)를 통해 크로마토그래피로 정제하였다. 순수한 분획을 증발시키고 진공하에 건조시켜 표제 화합물 14-Fmoc를 암적색 고체(35 mg, 33%)로서 수득하였다. MS(ESI, pos.): C63H67N3O15에 대한 계산치, 1105.4; 실측치 1106.5 (M+H), 1128.5 (M+Na).
Figure pct00462
아르곤 하에 N,N-디메틸포름아미드(DMF, 1 mL) 중 선행 단계의 Fmoc-리파마이신-피페리딘-O-페놀 14-Fmoc(35 mg, 0.0361 mmol)의 교반 용을 DMF 중 2% 피페리딘(3.5 mg, 0.2 mL, 0.0411 mmol) 용액으로 처리하고 반응물을 주위 온도에서 교반하였다. 2시간 후, 반응물을 50 g C18 RediSep Gold 컬럼 위에서 ISCO 시스템(구배 용출: 수중 0 - 100% MeCN, 욕 중 0.05% 아세트산, 30분에 걸쳐)을 통해 직접 정제하였다. 생성물 함유 min). 생성물 함유 분획을 합하고, 드라이 아이스 위에서 동결시키고 밤새 동결건조시켜 표제 화합물 14를 암적색 고체(12 mg, 43%)로서 수득하였다. MS: C48H57N3O13에 대한 계산치, 883.4; 실측치 884.3 (M+H). 1H NMR (500 MHz; DMSO-d6) δ 9.40 (s, 1H), 7.87 (d, J = 8.9 Hz, 1H), 7.16 - 7.23 (m, 4H), 5.99 - 6.05 (m, 2H), 5.76 - 5.85 (m, 2H), 5.18 - 5.23 (m, 2H), 4.83 - 4.95 (m, 2H), 4.80 (br. s, 2H), 4.12 (br. S., 1H), 2.91 - 3.18 (m, 13H), 2.88 (s, 1H), 2.78 (t, J = 0.9 Hz, 2H), 2.67 (s, 2H), 2.22 (d, J = 3.7 Hz, 4H), 2.15 (s, 2H), 2.02 (s, 2H), 1.96 (d, J = 1.2 Hz, 2H), 1.90 (s, 1H), 1.68 (s, 2H), 0.85 - 0.92 (m, 12H), 0.69 (br. s, 9H).
실시예 3: 본 개시내용에 따른 16a-16z-1 유사체의 합성
리파마이신 유사체 16a-16z-1을 하기 반응식 7 및 반응식 7a에 나타내고, 하기 기술한 바와 같이 리파마이신 S로부터 합성하였다.
반응식 7
Figure pct00463
Pd-촉매된 O-알킬화( 16a-16z-1 ):
화합물 15 의 합성 . 아르곤 하에 80 mL의 톨루엔 중 리파마이신 S(2.0 g, 2.87 mmol)의 교반 용액에 실온에서 2-아미노-5-브로모페놀(0.54 g, 2.87 mmol)을 가하였다. 용액을 2일 동안 실온에서 교반하였다. 이후에, 반응 혼합물을 증발 건조시키고 암색 잔기를 20 mL의 에탄올 속에 용해하고 300 mg의 산화망간(MnO2)을 에탄올 용액에 한번에 가하였다. 슬러시 혼합물을 아르곤 하에 15시간 동안 실온에서 교반하였다. 불용성 물질을 셀라이트 패드를 사용하여 여과한 후, 여액을 감압하에 증발시켰다. 암색 잔기를 120 g의 HP 실리카 겔 Gold RediSep 컬럼 위에서 ISCO(구배 용출: 헥산 중 5 → 95% EA)를 통해 정제하였다. 순수한 분획을 증발시키고 진공하에 건조시켜 표제 화합물 15를 암적색 고체(1.6 g, 65%)로서 수득하였다. MS (ESI, pos.): C43H47BrN2O13에 대한 계산치, 862.23; 실측치 863.1 및 865.1 (M+H), 885.1 및 888.0 (M+Na). 1H NMR (500 MHz; DMSO-d6): δ 9.49 (d, J = 6.0 Hz, 1H), 7.92 (ddd, J = 3.6, 2.9, 1.8 Hz, 1H), 7.86 - 7.85 (m, 1H), 7.75 - 7.74 (m, 1H), 6.06 - 6.05 (m, 1H), 5.84 (dt, J = 2.6, 1.4 Hz, 2H), 5.25 - 5.23 (m, 2H), 4.80 (dt, J = 2.5, 1.0 Hz, 1H), 4.23 (td, J = 2.4, 1.0 Hz, 1H), 3.49 (d, J = 1.1 Hz, 1H), 3.10 - 3.09 (m, 2H), 3.03 (s, 3H), 2.79 (s, 1H), 2.19 (s, 3H), 2.01 (s, 4H), 1.96 (s, 4H), 1.81 (d, J = 2.2 Hz, 1H), 1.68 (s, 3H), 1.60 (dq, J = 2.8, 0.9 Hz, 1H), 1.48 (t, J = 1.4 Hz, 1H), 0.90 (dt, J = 2.1, 1.1 Hz, 2H), 0.84 (d, J = 7.1 Hz, 4H), 0.69 (dd, J = 2.2, 1.2 Hz, 5H).
화합물 16a 의 합성 . 부츠발트 에스. 엘.(Buchwald S. L.) 등의 문헌(Org. Lett. 2018, 20, 1580)에 보고된 유사한 방법을 사용하여, 1급 알코올과 화합물 15의 백금-촉매된 C-O 커플링을 표제 화합물 16a-16c에 대해 사용하였다. 교반 바아가 장착되고, 스크류 캡(screw cap)으로 밀봉된 2 드램(dram) 스크류-상단(screw-top) 오븐-건조 시험 튜브에 화합물 15(40 mg, 0.0463 mmol, 1.00 eq.), 2-(디메틸아미노)에탄-1-올(42 mg, 0.462 mmol, 10 eq.), tBuBrettPhos Pd G3-팔라다사이클(11.8 mg, 30 mol%), 및 NaOt-Bu(5 mg, 0.051 mmol, 1.1 eq.)를 충전시켰다. 반응 튜브를 격막으로 재캡핑하고 첨부된 바늘로 뚫어서 배기시키고 아르곤을 역충전시킨 다음(당해 공정을 2회 반복하였다) 1,4-디옥산(2.0 mL)을 주사기를 통해 첨가하였다. 반응물을 오일 욕 속에서 아르곤 압력 하에 15시간 동안 55℃ ± 5에서 가열하고, 반응물을 Celite®의 패드를 통해 여과하기 전에 실온으로 냉각되도록 하고 EtOAc로 세정하였다. 조 물질을 진공 속에서 농축시키고 15.5 g의 C18 Aq Gold 컬럼(구배 용출: 수 중 10 - 95% MeCN, 욕 중 0.05% 아세트산)을 통해 정제하였다. 생성물 분획을 합하고, 드라이 아이스 위에서 동결시키고 동결건조시켜 표제 화합물 16a의 암적색 고체(12.5 mg, 32%)를 수득하였다. MS: C47H57N3O13에 대한 계산치, 871.39; 실측치 872.3 (M+H), 870.2 (M-H). 1H NMR (300 MHz; DMSO-d6) δ 9.40 (s, 1H), 7.87 (d, J = 8.9 Hz, 1H), 7.23-7.16 (m, 2H), 6.83 (dt, J = 2.3, 1.1 Hz, 1H), 6.23 (d, J = 4.6 Hz, 1H), 6.06 (dd, J = 5.9, 1.1 Hz, 1H), 5.82 (dd, J = 2.3, 1.5 Hz, 2H), 5.24 (dt, J = 1.4, 0.7 Hz, 1H), 4.83-4.75 (m, 1H), 4.24 (d, J = 29.9 Hz, 3H), 3.80 (d, J = 1.3 Hz, 1H), 3.03 (t, J = 0.5 Hz, 3H), 2.88 (s, 1H), 2.78 (t, J = 0.9 Hz, 2H), 2.67 (s, 2H), 2.22 (d, J = 3.7 Hz, 4H), 2.15 (s, 2H), 2.02 (s, 2H), 1.96 (d, J = 1.2 Hz, 2H), 1.90 (s, 1H), 1.68 (s, 2H), 0.85 (d, J = 6.7 Hz, 3H), 0.69 (t, J = 1.2 Hz, 3H).
화합물 16b 의 합성 . 교반 바아가 장착되고 스크류 캡으로 밀봉된 8 mL의 스크류-상단 오븐 건조 바이알에 화합물 15(40 mg, 0.0463 mmol, 1.00 eq.), Fmoc-글리신올(131 mg, 0.463 mmol, 10 eq.), t-BuBrettPhos-Pd-G3-팔라다사이클(16 mg, 0.4 eq.), 및 K3PO4(20 mg, 0.0942 mmol, 2.0 eq.)를 충전시켰다. 반응 바이알을 고무 격막으로 캡핑하고, 장착된 바늘로 뚫어서 배기시키고 아르곤으로 역충전시킨 다음(당해 공정을 2회 반복하였다), 1,4-디옥산(2.0 mL)을 첨가하였다. 반응물을 가열 블록 속에서 아르곤 압력 하에 15시간 동안 60℃에서 가열하고, 반응물을 Celite®의 패드를 통해 여과하기 전에 실온으로 냉각되도록 하고 MeOH로 세정하였다. 조 물질을 진공 속에서 농축시키고 50 g의 C18 Aq Gold 컬럼(구배 용출: 수 중 5 - 100% MeCN, 욕 중 0.05% 아세트산)을 통해 정제하였다. 생성물 분획을 합하고, 드라이 아이스 위에서 동결시키고 동결건조시켜 표제 화합물 16b의 암적색 고체(19 mg, 38%)를 수득하였다. MS (ESI, pos.): C60H63N3O15에 대한 계산치, 1065.4; 실측치 1066.4 (M+H).
화합물 16d 의 합성 . 선행 단계의 화합물 16b(26 mg, 0.0244 mmol)를 DMF(1 mL) 속에 용해하고, DMF 중 2% 피페리딘(3.1 mg, 0.2 mL, 0.0366 mmol) 용액으로 처리하고 반응물을 아르곤 하에 주위 온도에서 교반하였다. 2시간 후, 반응물을 50 g의 C18 Aq Gold 컬럼 위에서 ISCO 시스템(구배 용출: 수중 0 - 100% MeCN, 욕 중 0.05% 아세트산, 30분에 걸쳐)을 통해 정제하였다. 생성물 함유 분획을 합하고, 드라이 아이스 위에서 동결시키고 밤새 동결건조시켜 표제 화합물 16d를 암청색 고체(9 mg, 44%)로서 수득하였다. MS: C45H53N3O13에 대한 계산치, 843.4; 실측치 844.4 (M+H), 842.3 (M-H). 1H NMR (500 MHz; CD3OD): δ 7.83 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 6.91 - 7.03 (m, 2H), 6.55 (s, 1H), 6.43 (d, J = 11.2 Hz, 1H), 6.21 - 6.30 (m, 2H), 4.98 - 5.08 (m, 2H), 3.76 (br. s, 3H), 3.43 - 3.47 (m, 1H), 3.41 (d, J = 5.37 Hz, 2H), 3.12 (br. s, 1H), 2.97 - 3.04 (m, 4H), 2.39 (br. s, 1H), 2.19 - 2.32 (m, 4H), 2.09 - 2.14 (m, 4H), 1.95 - 2.07 (m, 4H), 1.78 (s, 4H), 1.67 (d, J = 6.84 Hz, 1H), 1.31 (br. s., 2H), 0.97 (br. s, 8H), 0.66 - 0.85 (m, 4H), 0.08 (d, J = 5.5 Hz, 3H), -0.26 (d, J = 6.5 Hz, 3H).
화합물 16c 의 합성 . 교반 바아가 장착되고 스크류 캡으로 밀봉된, 8 mL의 스크류-상단 오븐-건조 바이알에 화합물 15(80 mg, 0.0926 mmol, 1.00 eq.), Fmoc-사르코신올(275 mg, 0.9262 mmol, 10 eq.), t-BuBrettPhos-Pd-G3-팔라다사이클(40 mg, 0.5 eq.), 및 K3PO4(39 mg, 0.1852 mmol, 2 eq.)를 충전시켰다. 반응 바이알을 고무 격막으로 캡핑하고, 첨부된 침으로 뚫어 배기시키고 아르곤으로 역충전시킨 다음(당해 공정을 2회 반복하였다) 1,4-디옥산(3.0 mL)을 주사기를 통해 첨가하였다. 반응물을 가열 블록 속에서 아르곤 압력 하에 15시간 동안 60℃에서 가열하고, Celite®의 패드를 통해 여과하기 전에 실온으로 냉각되도록 하고 MeOH로 세정하였다. 조 물질을 진공 속에서 농축시키고 50 g의 C18 Aq Gold 컬럼(구배 용출: 수중 5 - 100% MeCN, 욕 중 0.05% 아세트산)을 통해 정제하였다. 생성물 분획을 합하고, 드라이 아이스 위에서 동결시키고 동결건조시켜 표제 화합물 16c를 암적색 고체(49 mg, 49%)로서 수득하였다. MS: C61H65N3O15에 대한 계산치, 1079.4; 실측치 1080.5 (M+H).
화합물 16e 의 합성. 선행 단계의 화합물 16c(49 mg, 0.045 mmol)를 DMF(1 mL) 속에 용해하고, DMF 중 2% 피페리딘(7.7 mg, 0.45 mL, 0.091 mmol) 용액으로 처리하고 반응물을 아르곤 하에 주위 온도에서 교반하였다. 2시간 후, 반응물을 50 g의 C18 Aq Gold 컬럼 위에서 ISCO 시스템(구배 용출: 수중 0 - 100% MeCN, 욕 중 0.05% 아세트산, 30분에 걸쳐)을 통해 정제하였다. 생성물 함유 분획을 합하고, 드라이 아이스 위에서 동결시키고 밤새 동결건조시켜 표제 화합물 16e를 암청색 고체(18 mg, 46%)로서 수득하였다. MS: C46H55N3O13에 대한 계산치, 857.3; 실측치 858.3 (M+H). 1H NMR (500 MHz; CD3OD): δ 7.84 (d, J = 8.79 Hz, 1H), 7.11 - 7.20 (m, 1H), 6.88 - 6.96 (m, 1H), 6.64 ( s, 1H), 6.42 (d, J = 10.26 Hz, 1H), 6.17 - 6.28 (m, 2H), 4.93 - 5.06 (m, 2H), 3.86 (br. s, 1H), 3.66 - 3.84 (m, 8H), 3.18 - 3.31 (m, 7H), 3.10 (br. s, 2H), 2.94 - 3.05 (m, 6H), 2.37 (br. s, 1H), 2.25 (d, J = 4.88 Hz, 4H), 2.05 - 2.22 (m, 7H), 1.85 - 2.05 (m, 7H), 1.78 (s, 6H), 1.65 (br. s, 1H), 1.30 (br. s., 2H), 0.95 (br. s, 8H), 0.82 - 0.92 (m, 4H), 0.78 (br. s., 1H), 0.70 (br. s, 1H), 0.03 (d, J = 5.86 Hz, 3H), -0.28 (d, J = 5.86 Hz, 3H).
반응식 7a
Figure pct00464
화합물 16f : 교반 바아가 장착되고 스크류 캡으로 밀봉된 8 mL의 스크류-상단 오븐-건조 바이알에 화합물 15(40 mg, 0.0463 mmol, 1.00 eq.), (1-메틸피페리딘-3-일)메탄올(60 mg, 0.463 mmol, 10 eq.), t-BuBrettPhos-Pd-G3-팔라다사이클(19 mg, 0.0222 mmol, 0.5 eq.), 및 K3PO4(20 mg, 0.0942 mmol, 2.0 eq.)를 충전하였다. 반응 바이알을 고무 격막으로 캡핑하고. 격막을 첨부된 침으로 뚫어 배기시키고 아르곤으로 역충전시킨 다음(당해 공정을 2회 반복하였다) 1,4-디옥산(2.0 mL)을 첨가하였다. 반응물을 가열 블록 속에서 아르곤 압력하에 15시간 동안 60℃에서 가열하고, 반응물을 Celite®의 패드를 통해 여과하기 전에 실온으로 냉각되도록 하고 MeOH로 세정하였다. 조 물질을 진공 속에서 농축시키고 50 g의 C18 Aq Gold 컬럼(구배 용출: 수 중 5 - 100% MeCN, 욕 중 0.05% 아세트산) 위에서 정제하였다. 순수한 분획을 합하고, 드라이 아이스 위에서 동결시키고 동결건조시켜 표제 화합물 16f를 암적색 고체(16.2 mg, 39%)로서 수득하였다. MS: C50H61N3O13에 대한 계산치, 911.4; 실측치 912.4 (M+H). 1H-NMR (500 MHz; DMSO-d6): δ 9.38 (s, 1H), 7.86-7.84 (m, 1H), 7.19-7.18 (m, 2H), 6.06 (td, J = 2.9, 1.9 Hz, 1H), 5.86-5.80 (m, 1H), 5.24-5.21 (m, 1H), 4.80-4.76 (m, 1H), 4.08-4.07 (m, 2H), 3.51 (ddq, J = 5.7, 2.9, 1.0 Hz, 1H), 3.09 (t, J = 0.6 Hz, 2H), 3.02-3.01 (m, 3H), 2.77 (d, J = 0.7 Hz, 3H), 2.61-2.59 (m, 1H), 2.14 (s, 6H), 2.00 (s, 3H), 1.95-1.94 (m, 3H), 1.83-1.76 (m, 2H), 1.66 (s, 9H), 1.50-1.47 (m, 3H), 1.37 (d, J = 15.9 Hz, 3H), 1.27-1.20 (m, 2H), 1.07 (d, J = 6.5 Hz, 2H), 0.85 (d, J = 6.5 Hz, 6H), 0.70-0.67 (m, 3H).
화합물 16g : 16g을 16b에 대해 기술된 바에 따라 일반적인 과정을 사요?謗? 제조하였다. 화합물 15(40 mg, 0.0463 mmol, 1.00 eq.), (1-메틸피페리딘-4-일)-메탄올(90 mg, 0.719 mmol, 15 eq.), t-BuBrettPhos-Pd-G3-팔라다사이클(21 mg, 0.0245 mmol, 0.5 eq.), 및 K3PO4(23 mg, 0.108 mmol, 2.3 eq.)로 표제 화합물 16g(5.6 mg, 13%)를 수득하였다. MS: C50H61N3O13에 대한 계산치, 911.4; 실측치 912.4 (M+H). 1H NMR (500 MHz, CD3OD): δ 8.01 (br. s., 1H), 7.18 (br. s., 1H), 6.94 (br. s., 2H), 6.43 (br. s., 1H), 6.23 (br. s., 2H), 5.06 (br. s., 1H), 5.01 (br. s., 1H), 4.01 - 4.19 (m, 1H), 3.93 (br. s., 1H), 3.75 (br. s., 1H), 3.07 (br. s., 1H), 2.86 - 3.05 (m, 7H), 2.33 - 2.45 (m, 4H), 2.30 (br. s., 4H), 2.11 - 2.20 (m, 5H), 1.98 (br. s., 4H), 1.83 - 1.93 (m, 4H), 1.78 (br. s., 4H), 1.48 (d, J = 11.72 Hz, 2H), 1.32 (d, J = 18.07 Hz, 1H), 0.95 (br. s., 8H), 0.80 (br. s., 2H), 0.03 (br. s., 2H), -0.23 (br. s., 2H).
화합물 16h : 16h을 16b에 대해 기술된 바와 같이 일반적인 과정을 사용하여 제조하였다: 화합물 15(40 mg, 0.0463 mmol, 1.00 eq.), 2-(4-메틸피페라진-1-일)에탄-1-올(80 mg, 0.554 mmol, 12 eq.), t-BuBrettPhos-Pd-G3-팔라다사이클(20 mg, 0.0234 mmol, 0.5 eq.), 및 K3PO4 23 mg, 0.108 mmol, 2.3 eq.)로 표제 화합물 16h(9.6 mg, 22%)를 수득하였다. MS: C50H62N4O13에 대한 계산치, 926.4; 실측치 927.4 (M+H), 925.3 (M-H). 1H NMR (500 MHz; DMSO-d6): δ 9.36-9.41 (m, 1H), 7.87 (br. s., 1H), 7.19 (br. s., 2H), 5.81 (br. s., 1H), 5.25 (br. s., 1H), 4.78 (br. s., 1H), 4.31 (br. s., 1H), 4.23 (br. s., 1H), 4.16 (br. s., 1H), 3.51 (br. s., 1H), 3.03 (br. s., 2H), 2.86 (d, J = 10.75 Hz, 1H), 2.78 (br. s., 1H), 2.72 (br. s., 3H), 2.31 (br. s., 5H), 2.14 (br. s., 7H), 2.10 (br. s., 1H), 2.01 (br. s., 5H), 1.95 (br. s., 3H), 1.90 (br. s., 2H), 1.67 (br. s., 3H), 1.59 (br. s., 1H), 1.51 (br. s., 1H), 1.26 - 1.46 (m, 1H), 1.23 (br. s., 1H), 0.85 (br. s., 8H), 0.79 (br. s., 2H), 0.69-0.67 (m, 5H).
화합물 16i : 16i를 16b에 대해 기술된 바와 같이 일반적인 과정을 사용하여 제조하였다: 화합물 15(30 mg, 0.0347 mmol, 1.00 eq.), 2-모르폴리노에탄-1-올(46 mg, 0.347 mmol, 10 eq.), t-BuBrettPhos-Pd-G3-팔라다사이클(15 mg, 0.0173 mmol, 0.5 eq.), 및 K3PO4(15 mg, 0.0704 mmol, 2.0 eq.)로 69%(22 mg)를 수득하였다. MS: C49H59N3O14에 대한 계산치, 913.40; 실측치 914.3 (M+H). 1H NMR (500 MHz; DMSO-d6): δ 9.41-9.40 (m, 1H), 7.86 (dd, J = 5.2, 2.0 Hz, 1H), 7.23-7.18 (m, 2H), 6.06-6.03 (m, 1H), 5.83-5.81 (m, 1H), 5.25-5.24 (m, 1H), 4.79-4.78 (m, 1H), 4.33-4.31 (m, 1H), 4.33-4.16 (m, 3H), 3.58 (s, 5H), 3.09-3.03 (m, 4H), 2.73 (s, 2H), 2.16 (s, 4H), 1.99 (d, J = 29.4 Hz, 8H), 1.67 (s, 3H), 1.52 (d, J = 4.2 Hz, 2H), 1.13 (d, J = 13.8 Hz, 1H), 0.85 (d, J = 6.5 Hz, 10H), 0.69-0.67 (m, 8H).
화합물 16j : 16j를 16b에 대해 기술된 바와 같이 일반적인 과정을 사용하여 제조하였다: 화합물 15(30 mg, 0.0347 mmol, 1.00 eq.), (1-메틸피롤리딘-3-일)메탄올(40 mg, 0.347 mmol, 10 eq.), t-BuBrettPhos-Pd-G3-팔라다사이클(15 mg, 0.0173 mmol, 0.5 eq.), 및 K3PO4(15 mg, 0.0704 mmol, 2.0 eq.)로 23%(7.0 mg)를 수득하였다. MS: C49H59N3O13에 대한 계산치, 897.40; 실측치 898.4 (M+H). 1H NMR (500 MHz; DMSO-d6): δ 9.39-9.38 (m, 1H), 7.89-7.86 (m, 1H), 7.19 (t, J = 7.0 Hz, 2H), 6.05-6.03 (m, 1H), 5.86-5.80 (m, 1H), 5.25-5.23 (m, 1H), 4.80-4.78 (m, 1H), 4.17-4.15 (m, 1H), 4.14-4.09 (m, 1H), 3.99 (s, 1H), 3.52-3.49 (m, 1H), 3.09-3.03 (m, 3H), 2.78-2.77 (m, 1H), 2.37 (dt, J = 5.5, 2.7 Hz, 2H), 2.21 (d, J = 35.5 Hz, 6H), 1.98 (d, J = 31.1 Hz, 7H), 1.67-1.59 (m, 3H), 1.60-1.58 (m, 1H), 1.53-1.47 (m, 2H), 1.39-1.34 (m, 2H), 0.84 (d, J = 6.8 Hz, 11H), 0.67 (t, J = 2.9 Hz, 7H).
화합물 16k : 16k를 16b에 대해 기술된 바와 같이 일반적인 과정을 사용하여 제조하였다: 화합물 15(50 mg, 0.0579 mmol, 1.00 eq.), 2-(피롤리딘-1-일)에탄-1-올(67 mg, 0.579 mmol, 10 eq.), t-BuBrettPhos-Pd-G3-팔라다사이클(25 mg, 0.0289 mmol, 0.5 eq.), 및 K3PO4(25 mg, 0.1158 mmol, 2.0 eq.)로 46%(23.6 mg)를 수득하였다. MS: C49H59N3O13에 대한 계산치, 897.40; 실측치 898.4 (M+H), 896.3 (M-H). 1H NMR (500 MHz; DMSO-d6): δ 9.38 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 7.88-7.87 (m, 1H), 7.21 (s, 1H), 6.05-6.03 (m, 1H), 5.82 (dd, J = 1.3, 0.7 Hz, 1H), 5.25-5.20 (m, 1H), 4.81-4.79 (m, 1H), 4.33-4.30 (m, 1H), 4.24-4.15 (m, 1H), 3.54-3.50 (m, 2H), 3.09-3.03 (m, 6H), 2.85-2.78 (m, 6H), 2.18 (s, 4H), 1.99 (d, J = 31.9 Hz, 5H), 1.70 (s, 6H), 1.15-1.05 (m, 1H), 0.85 (d, J = 6.7 Hz, 11H), 0.68 (dt, J = 3.6, 0.9 Hz, 9H).
화합물 16l : 16l를 16b에 대해 기술된 바와 같이 일반적인 과정을 사용하여 제조하였다: 화합물 15(50 mg, 0.0579 mmol, 1.00 eq.), (1-메틸피롤리딘-2-일)메탄올(67 mg, 0.579 mmol, 10 eq.), t-BuBrettPhos-Pd-G3-팔라다사이클(25 mg, 0.0289 mmol, 0.5 eq.), 및 K3PO4(25 mg, 0.1158 mmol, 2.0 eq.)로 35%(17.7 mg)를 수득하였다. MS: C49H59N3O13에 대한 계산치, 897.40; 실측치 898.4 (M+H), 896.3 (M-H). 1H NMR (500 MHz; DMSO-d6): δ 9.38-9.37 (m, 1H), 7.88-7.87 (m, 1H), 7.20-7.18 (m, 1H), 6.06-6.04 (m, 1H), 5.84-5.82 (m, 1H), 5.25-5.24 (m, 1H), 4.81-4.79 (m, 1H), 4.19-4.11 (m, 2H), 3.54-3.50 (m, 1H), 3.10-3.07 (m, 1H), 3.03 (s, 2H), 2.97-2.96 (m, 1H), 2.79-2.78 (m, 3H), 2.64-2.61 (m, 6H), 2.37 (s, 3H), 2.18 (s, 3H), 1.99 (d, J = 32.7 Hz, 6H), 1.68 (s, 3H), 1.68-1.57 (m, 3H), 1.55-1.45 (m, 1H), 0.85 (d, J = 6.7 Hz, 11H), 0.69-0.67 (m, 7H).
화합물 16m : 16m을 16b에 대해 기술된 바와 같이 일반적인 과정을 사용하여 제조하였다: 화합물 15(50 mg, 0.0579 mmol, 1.00 eq.), 2-(피페리딘-1-일)에탄-1-올(75 mg, 0.579 mmol, 10 eq.), t-BuBrettPhos-Pd-G3-팔라다사이클(25 mg, 0.0289 mmol, 0.5 eq.), 및 K3PO4(25 mg, 0.1158 mmol, 2.0 eq.)로 54%(28.3 mg)를 수득하였다. MS: C50H61N3O13에 대한 계산치, 911.42; 실측치 912.4 (M+H), 910.3 (M-H). 1H NMR (500 MHz; DMSO-d6): δ 9.38-9.36 (m, 1H), 7.88-7.86 (m, 1H), 7.22 (dt, J = 1.7, 0.8 Hz, 1H), 6.07-6.05 (m, 1H), 5.83-5.82 (m, 1H), 5.26-5.22 (m, 1H), 4.81-4.78 (m, 1H), 4.31 (dd, J = 2.5, 1.0 Hz, 1H), 4.23-4.15 (m, 1H), 3.54-3.50 (m, 1H), 3.10-3.01 (m, 3H), 2.79-2.77 (m, 1H), 2.69 (s, 2H), 2.44 (d, J = 0.7 Hz, 6H), 2.17 (s, 6H), 1.99 (d, J = 32.3 Hz, 5H), 1.68 (s, 6H), 1.50 (s, 3H), 1.38-1.37 (m, 2H), 0.85 (d, J = 6.7 Hz, 9H), 0.69-0.67 (m, 7H).
화합물 16n : 16n을 16b에 대해 기술된 바와 같이 일반적인 과정을 사용하여 제조하였다: 화합물 15(50 mg, 0.0579 mmol, 1.00 eq.), 2-(아제판-1-일)에탄-1-올 (83 mg, 0.579 mmol, 10 eq.), t-BuBrettPhos-Pd-G3-팔라다사이클(25 mg, 0.0289 mmol, 0.5 eq.), 및 K3PO4(25 mg, 0.1158 mmol, 2.0 eq.)로 53%(28.4 mg)를 수득하였다. MS: C51H63N3O13에 대한 계산치, 925.44; 실측치 926.5 (M+H), 924.3 (M-H). 1H NMR (500 MHz; DMSO-d6): δ 9.42-9.34 (m, 1H), 7.85-7.84 (m, 1H), 7.16 (td, J = 1.8, 0.5 Hz, 2H), 6.07-6.04 (m, 1H), 5.84-5.82 (m, 1H), 5.24 (s, 1H), 4.81-4.77 (m, 1H), 4.26-4.25 (m, 1H), 4.19-4.13 (m, 2H), 3.57-3.48 (m, 1H), 3.12-3.10 (m, 2H), 3.02-2.99 (m, 4H), 2.89 (s, 6H), 2.89-2.76 (m, 3H), 2.69 (s, 3H), 2.15-2.14 (m, 3H), 2.01 (s, 3H), 1.95 (s, 3H), 1.90 (s, 3H), 1.67 (s, 3H), 1.58-1.54 (m, 6H), 0.86 (d, J = 6.5 Hz, 8H), 0.71-0.67 (m, 6H).
화합물 16o : 16o를 16b에 대해 기술된 바와 같이 일반적인 과정을 사용하여 제조하였다: 화합물 15(30 mg, 0.0347 mmol, 1.0 eq.), N,N-디메틸아미노프로판-1-올(35 mg, 0.339 mmol, 10 eq.), t-BuBrettPhos-Pd-G3-팔라다사이클(15 mg, 0.0176 mmol, 0.5 eq.), 및 K3PO4(15 mg, 0.0707 mmol, 2.0 eq.)로 55%(17 mg)를 수득하였다. MS: C48H59N3O13에 대한 계산치, 885.4; 실측치 886.4 (M+H). 1H NMR (500 MHz, CD3OD) δ 7.86 - 8.10 (m, 1H), 7.16 (s, 1H), 6.93 (br. s., 1H), 6.43 (br. s., 1H), 6.22 (br. s., 2H), 5.06 (br. s., 1H), 4.98 (br. s., 1H), 4.24 (br. s., 1H), 4.15 (br. s., 1H), 3.75 (br. s., 1H), 2.90 - 3.13 (m, 5H), 2.58 (br. s., 2H), 2.34 (br. s., 7H), 2.26 (br. s., 3H), 2.09 - 2.17 (m, 4H), 2.05 (br. s., 3H), 1.98 (br. s., 3H), 1.82 - 1.95 (m, 3H), 1.79 (s, 3H), 1.73 (s, 1H), 0.77 - 1.00 (m, 8H), 0.03 (s, 2H), -0.25 (s, 2H).
화합물 16p : 16p를 16b에 대해 기술된 바와 같이 일반적인 과정을 사용하여 제조하였다: 화합물 15(30 mg, 0.0347 mmol, 1.0 eq.), N,N-디메틸아미노부탄-1-올(40 mg, 0.341 mmol, 10 eq.), t-BuBrettPhos-Pd-G3-팔라다사이클(15 mg, 0.0176 mmol, 0.5 eq.), 및 K3PO4(15 mg, 0.0707 mmol, 2.0 eq.)로 35%(11 mg)를 수득하였다. MS: C49H61N3O13에 대한 계산치, 899.42; 실측치 900.4 (M+H). 1H NMR (500 MHz, CD3OD) δ 7.98 (br. s., 1H), 7.18 (br. s., 1H), 6.93 (br. s., 1H), 6.22 (br. s., 2H), 5.06 (br. s., 1H), 4.99 (br. s., 1H), 4.93 (br. s., 1H), 4.22 (br. s., 2H), 4.12 (br. s., 1H), 3.83 - 3.96 (m, 1H), 3.63 - 3.83 (m, 2H), 3.08 (br. s., 2H), 3.01 (d, J = 8.79 Hz, 5H), 2.51 (br. s., 3H), 2.35 (br. s., 6H), 2.28 (br. s., 3H), 2.09 - 2.17 (m, 3H), 2.07 (br. s., 1H), 1.98 (br. s., 3H), 1.81 - 1.92 (m, 3H), 1.68 - 1.81 (m, 2H), 1.52 - 1.65 (m, 2H), 1.36 - 1.52 (m, 3H), 1.32 (d, J = 18.56 Hz, 2H), 0.95 (br. s., 3H), 0.88 (d, J = 6.84 Hz, 4H) 0.04 (s, 2H), -0.24 (s, 2H).
화합물 16q : 16q를 16b에 대해 기술된 바와 같이 일반적인 과정을 사용하여 제조하였다: 화합물 15(50 mg, 0.0579 mmol, 1.00 eq.), 2-(2-아자비사이클로[2.2.1]헵탄-2-일)에탄-1-올 (82 mg, 0.579 mmol, 10 eq.), t-BuBrettPhos-Pd-G3-팔라다사이클(25 mg, 0.0289 mmol, 0.5 eq.), 및 K3PO4(25 mg, 0.1158 mmol, 2.0 eq.)로 55%(29 mg)를 수득하였다. MS: C51H61N3O13에 대한 계산치, 923.42; 실측치 924.4 (M+H), 922.3 (M-H). 1H NMR (500 MHz; DMSO-d6): δ 9.34-9.32 (m, 1H), 7.88-7.86 (m, 1H), 7.18-7.17 (m, 2H), 6.06-6.03 (m, 1H), 5.84-5.81 (m, 1H), 5.25-5.22 (m, 1H), 4.82-4.78 (m, 1H), 4.21-4.13 (m, 3H), 3.46-3.39 (m, 1H), 3.13 (t, J = 2.6 Hz, 3H), 3.02-3.01 (m, 3H), 2.81-2.79 (m, 3H), 2.29 (d, J = 0.8 Hz, 3H), 2.18 (s, 3H), 2.02 (s, 3H), 1.95 (s, 3H), 1.68 (s, 5H), 1.55-1.50 (m, 3H), 1.40 (s, 3H), 1.22 (d, J = 9.2 Hz, 6H), 0.86 (d, J = 6.8 Hz, 8H), 0.69-0.68 (m, 5H).
화합물 16r : 16r을 16b에 대해 기술된 바와 같이 일반적인 과정을 사용하여 제조하였다: 화합물 15(50 mg, 0.0579 mmol, 1.00 eq.), 2-(아지리딘-1-일)에탄-1-올(50.4 mg, 0.579 mmol, 10 eq.), t-BuBrettPhos-Pd-G3-팔라다사이클(25 mg, 0.0289 mmol, 0.5 eq.), 및 K3PO4(25 mg, 0.1158 mmol, 2.0 eq.)로 11%(5.6 mg)를 수득하였다. MS: C51H64N4O14에 대한 계산치, 956.44; 실측치 957.4 (M+H), 955.3 (M-H). 1H NMR (500 MHz; DMSO-d6): δ 9.37-9.35 (m, 1H), 7.87-7.84 (m, 1H), 7.20-7.18 (m, 1H), 6.07-6.03 (m, 1H), 5.83-5.81 (m, 1H), 5.25-5.21 (m, 1H), 4.78 (dq, J = 2.8, 0.9 Hz, 1H), 4.34-4.31 (m, 2H), 4.23-4.15 (m, 1H), 3.47 (d, J = 5.8 Hz, 5H), 3.09-3.08 (m, 2H), 3.02 (dddd, J = 3.6, 2.6, 2.4, 1.3 Hz, 3H), 2.78-2.77 (m, 1H), 2.71-2.70 (m, 2H), 2.63 (d, J = 1.2 Hz, 2H), 2.41-2.34 (m, 8H), 2.17-2.15 (m, 3H), 2.01 (t, J = 0.4 Hz, 3H), 1.94 (t, J = 0.9 Hz, 3H), 1.89 (s, 2H), 1.66 (d, J = 0.4 Hz, 3H), 1.61-1.53 (m, 1H), 1.38 (d, J = 15.9 Hz, 2H), 0.86-0.84 (m, 9H), 0.69-0.67 (m, 6H).
화합물 16s : 16s를 16b에 대해 기술된 바와 같이 일반적인 과정을 사용하여 제조하였다: 화합물 15(30 mg, 0.0347 mmol, 1.0 eq.), 2-(2-(디메틸아미노)에톡시)에탄-1-올(50 mg, 0.375 mmol, 10 eq.), t-BuBrettPhos-Pd-G3-팔라다사이클(15 mg, 0.0176 mmol, 0.5 eq.), 및 K3PO4(15 mg, 0.0707 mmol, 2.0 eq.)로 35%(11 mg)를 수득하였다. MS: C49H61N3O14에 대한 계산치, 915.4; 실측치 916.4 (M+H). 1H NMR (500 MHz, CD3OD) δ 8.01 (d, J = 15.1 Hz, 1H), 7.20 (br. s., 1H), 6.96 (br. s., 1H), 6.44 (br. s., 1H), 6.15 - 6.32 (m, 2H), 5.07 (d, J = 16.2 Hz, 1H), 4.34 (br. s., 2H), 4.24 (br. s., 1H), 3.86 (br. s., 3H), 3.78 (d, J = 11.7 Hz, 1H), 3.69 (br. s., 3H), 3.18 (br. s., 1H), 3.06 - 3.15 (m, 2H), 3.02 (d, J = 9.77 Hz, 5H), 2.51 - 2.70 (m, 2H), 2.32 (d, J = 11.7 Hz, 6H), 2.11 (s., 3H), 1.94 - 2.07 (m, 6H), 1.90 (br. s., 1H), 1.75 - 1.86 (m, 5H), 1.73 (br. s., 1H), 1.67 (br. s., 2H), 1.24 - 1.45 (m, 3H), 0.89- 0.96 (m, 8H), 0.06 (s, 2H), -0.20 (s, 2H).
화합물 16t : 16t를 16b에 대해 기술된 바와 같이 일반적인 과정을 사용하여 제조하였다: 화합물 15(30 mg, 0.0347 mmol, 1.0 eq.), 2-디에틸아미노에탄-1-올 (45 mg, 0.383 mmol, 11 eq.), t-BuBrettPhos-Pd-G3-팔라다사이클(15 mg, 0.0176 mmol, 0.5 eq.), 및 K3PO4(15 mg, 0.0707 mmol, 2.0 eq.)로 14%(4.5 mg)를 수득하였다. MS: C49H61N3O13에 대한 계산치, 899.4; 실측치 900.4 (M+H), 898.3 (M-H). 1H NMR (500 MHz, CD3OD) δ 8.06 (br. s., 1H), 7.26 (br. s., 1H), 7.02 (br. s., 1H), 6.44 (br. s., 1H), 6.23 (br. s., 2H), 5.10 (br. s., 1H), 5.00 (br. s., 2H), 4.48 (br. s., 1H), 4.38 (br. s., 1H), 3.77 (br. s., 1H), 3.46 (br. s., 2H), 3.15 (s, 4H), 3.18 (s, 3H), 3.03 (d, J = 9.28 Hz, 6H), 2.32 (br. s., 4H), 2.09 - 2.16 (m, 4H), 1.99 (br. s., 4H), 1.78 (br. s., 4H), 1.38 (br. s., 1H), 1.30 (br. s., 10H), 0.96 (br. s., 8H), 0.11 (s, 2H), -0.20 (s, 2H).
화합물 16u : 16u를 16b에 대해 기술된 바와 같이 일반적인 과정을 사용하여 제조하였다: 화합물 15(30 mg, 0.0347 mmol, 1.0 eq.), 2-디이소프로필아미노에탄-1-올(45 mg, 0.383 mmol, 11 eq.), t-BuBrettPhos-Pd-G3-팔라다사이클(15 mg, 0.0176 mmol, 0.5 eq.), 및 K3PO4(15 mg, 0.0707 mmol, 2.0 eq.)로 31%(10 mg)를 수득하였다. MS: C51H65N3O13에 대한 계산치, 927.45; 실측치 928.4 (M+H), 926.3 (M-H). 1H NMR (500 MHz, CD3OD) δ 8.03 (br. s., 1H), 7.10 - 7.29 (m, 1H), 6.94 (br. s., 1H), 6.23 (br. s., 1H), 5.01 - 5.06 (m, 2H), 4.23 (br. s., 1H), 3.18 (br. s., 1H), 3.12 (br. s., 2H), 2.91 - 3.06 (m, 4H), 2.31 (br. s., 4H), 2.11 (s, 4H), 1.98 (br. s., 4H), 1.78 (br. s., 4H), 1.64 (br. s., 1H), 1.28 - 1.41 (m, 2H), 1.18 (br. s., 14H), 1.06 (d, J = 6.84 Hz, 1H), 0.95 (s, 9H), 0.81 (s, 2H), 0.07 - 0.13 (m, 1H), 0.04 (s, 2H), -0.23 (s, 2H).
화합물 16v : 16v를 16b에 대해 기술된 바와 같이 일반적인 과정을 사용하여 제조하였다: 화합물 15(40 mg, 0.0463 mmol, 1.0 eq.), 2-(메틸(피리딘-2-일)아미노)에탄-1-올(75 mg, 0.463 mmol, 10 eq.), t-BuBrettPhos-Pd-G3-팔라다사이클(20 mg, 0.0213 mmol, 0.5 eq.), 및 K3PO4(20 mg, 0.094 mmol, 2.0 eq.)로 표제 화합물 16v(15.6 mg, 36%)를 수득하였다. MS: C51H58N4O13에 대한 계산치, 934.40; 실측치 935.3 (M+H), 933.3 (M-H). 1H NMR (500 MHz, CD3OD): δ 8.09 (t, J = 1.4 Hz, 1H), 8.02-8.00 (m, 1H), 7.56-7.53 (m, 1H), 7.19-7.17 (m, 1H), 7.07 (s, 1H), 6.86-6.84 (m, 1H), 6.70-6.68 (m, 2H), 6.61 (td, J = 1.8, 0.7 Hz, 2H), 6.42-6.41 (m, 1H), 6.22-6.20 (m, 2H), 5.04-5.02 (m, 1H), 4.59 (s, 2H), 4.39-4.36 (m, 1H), 4.32-4.29 (m, 1H), 4.01 (s, 2H), 3.72-3.68 (m, 1H), 3.15 (s, 7H), 3.00-2.99 (m, 4H), 2.31 (s, 4H), 2.11 (s, 4H), 1.95 (d, J = 22.7 Hz, 3H), 1.77 (s, 3H), 1.63-1.60 (m, 1H), 1.30 (s, 2H), 0.94 (d, J = 6.6 Hz, 4H), 0.80-0.79 (m, 4H), -0.03 (dd, J = 2.4, 0.5 Hz, 2H), -0.24 (dd, J = 2.3, 1.1 Hz, 2H).
화합물 16w : 16w를 16b에 대해 기술된 바와 같이 일반적인 과정을 사용하여 제조하였다: 화합물 15(40 mg, 0.0463 mmol, 1.0 eq.), (2-((디메틸아미노)메틸)페닐)메탄올(76 mg, 0.463 mmol, 10 eq.), t-BuBrettPhos-Pd-G3-팔라다사이클(20 mg, 0.0213 mmol, 0.5 eq.), 및 K3PO4(20 mg, 0.094 mmol, 2.0 eq.)로 표제 화합물 16w(5.6 mg, 18%)를 수득하였다. MS: C53H61N3O13에 대한 계산치, 947.42; 실측치 948.4 (M+H), 946.3 (M-H). 1H NMR (500 MHz, CD3OD): δ 8.05-8.04 (m, 1H), 7.46-7.44 (m, 1H), 7.34-7.33 (m, 1H), 7.07-7.05 (m, 1H), 6.80 (d, J = 4.2 Hz, 1H), 6.53-6.48 (m, 1H), 6.24-6.22 (m, 1H), 5.51 (d, J = 12.1 Hz, 1H), 5.44-5.42 (m, 1H), 5.07-5.00 (m, 1H), 4.59 (s, 1H), 3.82-3.69 (m, 2H), 3.55 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 3.31-3.11 (m, 12H), 3.03-3.01 (m, 4H), 2.33 (s, 3H), 2.24 (s, 5H), 2.09 (dd, J = 1.9, 1.0 Hz, 3H), 1.99 (s, 3H), 1.92 (s, 1H), 1.77 (d, J = 0.5 Hz, 4H), 1.67-1.61 (m, 1H), 1.30 (d, J = 0.3 Hz, 1H), 0.96-0.87 (m, 5H), 0.11 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 0.06-0.04 (m, 3H), -0.20-0.22 (m, 2H).
화합물 16x : 16x를 16b에 대해 기술된 바와 같이 일반적인 과정을 사용하여 제조하였다: 화합물 15(40 mg, 0.0463 mmol, 1.0 eq.), N-(2-하이드록시에틸)아세트아미드(48 mg, 0.463 mmol, 10 eq.), t-BuBrettPhos-Pd-G3-팔라다사이클(20 mg, 0.0213 mmol, 0.5 eq.), 및 K3PO4(20 mg, 0.094 mmol, 2.0 eq.)로 표제 화합물 16x(20 mg, 41%)를 수득하였다. MS: C47H55N3O14에 대한 계산치, 885.37; 실측치 886.3 (M+H). 1H NMR (500 MHz, CD3OD) δ 7.98 (br. s., 1H), 7.18 (s, 2H), 6.94 (br. s., 1H), 6.23 (br. s., 1H), 5.01 - 5.06 (m, 2H), 4.14 (br. s., 1H), 3.62 (br. s., 4H), 2.94 - 3.18 (m, 5H), 2.31 (br. s., 5H), 2.11 (s, 5H), 1.98 (br. s., 10H), 1.78 (br. s., 5H), 1.64 (br. s., 1H), 1.28 - 1.41 (m, 2H), 1.06 (d, J = 6.84 Hz, 1H), 0.95 (s, 8H), 0.07 - 0.13 (m, 1H), 0.04 (s, 2H), -0.23 (s, 2H).
화합물 16y : 16y를 16b에 대해 기술된 바와 같이 일반적인 과정을 사용하여 제조하였다: 화합물 15(40 mg, 0.0463 mmol, 1.0 eq.), 2-(1H-이미다졸-1-일)에탄-1-올(52 mg, 0.463 mmol, 10 eq.), t-BuBrettPhos-Pd-G3-팔라다사이클(20 mg, 0.0213 mmol, 0.5 eq.), 및 K3PO4(20 mg, 0.094 mmol, 2.0 eq.)로 표제 화합물 16y(8 mg, 8%)를 수득하였다. MS: C48H54N4O13에 대한 계산치, 894.37; 실측치 895.3 (M+H). 1H NMR (500 MHz, CD3OD) δ 7.75 (br. s., 1H), 7.16 - 7.26 (m, 2H), 6.98 (s, 1H), 6.94 (s, 1H), 4.58 (br. s., 5H), 4.44 - 4.54 (m, 3H), 4.31 - 4.35 (m, 1H), 3.83 - 3.90 (m, 2H), 3.72 (br. s., 1H), 3.66 (s, 1H), 3.55 (s, 1H), 3.33 - 3.36 (m, 1H), 3.00 (d, J = 8.30 Hz, 3H), 2.30 (br. s., 3H), 2.00 - 2.11 (m, 4H), 1.92 - 2.00 (m, 3H), 1.90 (s, 2H), 1.76 (br. s., 3H), 1.70 (d, J = 6.84 Hz, 1H), 1.52 - 1.65 (m, 2H), 1.49 (d, J = 15.14 Hz, 2H), 1.32 - 1.41 (m, 2H), 1.11 - 1.32 (m, 3H), 0.83 - 1.00 (m, 6H), 0.09 - 0.10 (m, 1H), 0.00 (br. s., 2H), -0.23 (br. s., 1H).
화합물 16z : 16z를 16b에 대해 기술된 바와 같이 일반적인 과정을 사용하여 제조하였다: 화합물 15(40 mg, 0.0463 mmol, 1.0 eq.), N-(2-하이드록시에틸)-N-메틸아세트아미드(54 mg, 0.463 mmol, 10 eq.), t-BuBrettPhos-Pd-G3-팔라다사이클(20 mg, 0.0213 mmol, 0.5 eq.), 및 K3PO4(20 mg, 0.094 mmol, 2.0 eq.)로 표제 화합물 16z(6.5 mg, 16%)를 수득하였다. MS: C48H57N3O14에 대한 계산치, 899.38; 실측치 900.4 (M+H). 1H NMR (500 MHz, CD3OD) δ 8.03 (br. s., 1H), 7.20 (br. s., 2H), 6.42 (br. s., 1H), 6.22 (br. s., 1H), 5.06 (br. s., 1H), 4.99 (br. s., 2H), 4.58 (s, 3H), 4.38 (d, J = 3.91 Hz, 1H), 4.31 (br. s., 2H), 4.23 (br. s., 2H), 3.86 (br. s., 2H), 3.80 (br. s., 2H), 3.74 (br. s., 1H), 3.19 (s, 3H), 2.96 - 3.06 (m, 5H), 2.31 (br. s., 2H), 2.20 (s, 2H), 2.11 (d, J = 6.84 Hz, 3H), 2.04 (s, 1H), 1.97 (br. s., 6H), 1.93 (s, 2H), 1.76 (br. s., 3H), 1.65 (br. s., 2H), 1.29 (s, 1H), 0.94 (br. s., 3H), 0.10 (d, J = 2.93 Hz, 1H), 0.03 (br. s., 2H), -0.23 (br. s., 2H).
화합물 16z-1 : 16z-1을 16b에 대해 기술된 바와 같이 일반적인 과정을 사용하여 제조하였다: 화합물 15(40 mg, 0.0463 mmol, 1.0 eq.), 2-(아제티딘-1-일)에탄-1-올(47 mg, 0.463 mmol, 10 eq.), t-BuBrettPhos-Pd-G3-팔라다사이클(20 mg, 0.0213 mmol, 0.5 eq.), 및 K3PO4(20 mg, 0.094 mmol, 2.0 eq.)로 표제 화합물 16z-1(8.7 mg, 21%)를 수득하였다. MS: C48H57N3O13에 대한 계산치, 883.39; 실측치 884.4 (M+H). 1H NMR (500 MHz, CD3OD) δ 7.19 (br. s., 1H), 4.58 (br. s., 2H), 4.19 (br. s., 1H), 3.83 - 3.89 (m, 1H), 3.73 - 3.82 (m, 1H), 3.52 (s, 1H), 3.46 (br. s., 6H), 3.00 (br. s., 1H), 2.30 (br. s., 4H), 2.13 - 2.22 (m, 3H), 2.10 (br. s., 3H), 1.97 (br. s., 3H), 1.92 (s, 8H), 1.76 (br. s., 4H), 1.56 - 1.69 (m, 2H), 1.43 (s, 2H), 1.46 (s, 2H), 1.31 - 1.39 (m, 2H), 1.29 (br. s., 1H), 1.24 (d, J = 14.17 Hz, 1H), 1.15 (d, J = 5.86 Hz, 1H), 0.95 (br. s., 3H), 0.10 (d, J = 2.44 Hz, 2H), 0.03 (br. s., 2H), -0.23 (br. s., 1H).
실시예 4: 환원적 아민화
리파마이신 유사체(17)을 하기 반응식 8에 나타낸 바와 같이 환원적 아민화를 사용함으로써 화합물 14로부터 합성하였다.
Figure pct00465
1.0 mL의 무수 DCM 중 화합물 14(9 mg, 0.0102 mmol) 및 파라포름알데하이드(1.52 mg, 0.051 mmol)의 용액에 실온에서 NaBH(OAc)3(4.3 mmol, 0.0204 mmol)를 가하였다. 혼합물을 1시간 동안 교반하였다. 반응 진행을 LC/MS로 모니터링하여 목적한 생성물을 수득하였다. 조 반응 혼합물을 물 2 내지 3 방울을 가하여 퀀칭시켰다. 모든 휘발물을 감압하게 제거한 다음, DMSO(0.5 mL)로 희석시켰다. 조 혼합물을 제조 HPLC(Gemini, 5μm, 150 mm x 30 mm, 용출액: 수 중 10 - 95% MeCN, 0.05% AcOH)로 정제하고 순수한 분획을 합하고 동결건조시켜 6 mg(66%)의 17을 적색 고체(reddish solid)로서 수득하였다. MS (ESI, pos.): C49H59N3O13에 대한 계산치, 897.40; 실측치 898.4 (M+H). 1H NMR (500 MHz; DMSO-d6): δ 9.38 (br. s., 1H), 7.86 (br. s., 1H), 7.17 - 7.25 (m, 4H), 6.04 (d, J = 6.35 Hz, 1H), 5.81 (br. s., 2H), 4.79 (br. s., 2H), 4.70 (br. s., 2H), 4.15 (br. s., 1H), 3.53 (br. s., 1H), 3.30 (br. s., 5H), 3.09 (br. s., 3H), 3.03 (br. s., 4H), 2.87 (s, 1H), 2.78 (br. s., 2H), 2.58 - 2.66 (m, 6H), 2.54 (br. s., 8H), 2.37 (d, J = 1.47 Hz, 2H), 2.15 - 2.27 (m, 20H), 2.12 (br. s., 1H), 2.03 - 2.09 (m, 3H), 2.00 (s, 9H), 1.95 (br. s., 10H), 1.91 (s, 3H), 1.72 (br. s., 3H), 1.67 (br. s., 8H), 1.58 (s, 1H), 1.50 (br. s., 1H), 1.24 (br. s., 2H), 0.81 - 0.94 (m, 15H), 0.78 (d, J = 6.84 Hz, 3H), 0.69 (br. s., 9H).
실시예 5: 화합물 29의 제조
리파마이신 유사체 29를 하기 반응식 9에 나타내고 하기 기술된 바와 같이 제조하였다.
Figure pct00466
화합물 26 의 합성. 350 mL의 무수 DCM 중 2,6-디메톡시아닐린(9.0 g, 58.7 mmol, 1.0 eq)의 교반 용액에 30분에 걸쳐 50 mL의 무수 DCM 중 Br2 용액을 4℃에서 적가하였다. 추가의 200 mL를 슬러리에 가하여 반-균질한 용액을 달성하였다. 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 암갈색 혼합물을 4℃로 냉각시키고 1.0 M NaOH 용액(약 100 mL)을 첨가하여 pH = 10-11로 염기성화하였다. 혼합물을 200 mL의 DCM으로 희석시키고 층을 분리하였다. 수성 층을 DCM(총 200 mL)으로 추출하였다. 합한 DCM 층을 물, 염수로 세척하고, Na2SO4 위에서 건조시켰다. 진공 속에서 농축시킨 후, 조 생성물을 담적색 고체로서 수득하였다. 잔기를 DCM(8 mL) 속에 용해하고 220 g의 HP 실리카 겔 Gold RediSep 컬럼 위에 로딩하고 ISCO(구배 용출: 헥산 중 5 - 95% EA)를 통해 정제하고, 순수한 분획을 합하고, 용매를 진공 하에 증발시켰다. 고체를 DCM 및 헥산으로 연마하고 여과하였다. 회백색 고체를 진공하에 건조시켜 표제 화합물 26을 회백색 고체(9.4 g, 70%)로서 수득하였다. MS (ESI, pos.): C8H10BrNO2에 대한 계산치, 230.99; 실측치 231.9 및 234.0 (M+H). 1H NMR (500 MHz; CDCl3) δ 6.66 (s, 2H), 3.84 (s, 6H).
화합물 27 의 합성. 화합물 26(2.2 g, 9.47 mmol, 1.0 eq)을 10 mL의 무수 DCM 속에 용해하고 BBr3 용액을 10분에 걸쳐 40℃에서 적가하였다(10 mL, DCM 중 1.0 M 용액). 반응은 발열성이며 침전물을 생산하였다. 추가 양의 BBr3(9 mL, 94.7 mmol, 10 eq)를 가하고 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 적색 현탁액을 LC/MS로 점검하여 목적한 생성물을 확인하였다. 반응 혼합물을 250 mL의 플라스크에 이전시키고 4℃로 냉각시켰다. 혼합물을 물로 조심스럽게 퀀칭한 다음 수성의 포화된 NaHCO3 용액으로 처리하여 pH = 7-8을 수득하였다. 혼합물을 DCM으로 추출하고 수성 층을 4℃로 냉각시켜 암갈색 침전물을 수득하였다. 혼합물을 여과하고 갈색 고체를 10 mL의 메탄올 속에 용해하고 Na2SO4 위에서 건조시켜 목적한 생성물 27(1.9 g, 100%)을 수득하였다. MS (ESI, pos.): C6H6BrNO2에 대한 계산치, 202.96; 실측치 204.0 및 206.1 (M+H). 1H NMR (500 MHz; CD3OD) δ 6.45 (s, 2H), 4.87 (s, 2H).
화합물 28 의 합성. 톨루엔(20 mL) 및 THF(20 mL)의 혼합물 중 화합물 27(0.146 g, 0.72 mmol)의 교반 용액에 실온에서 리파마이신 S(0.5 g, 0.72 mmol)를 가하였다. 용액을 3일 동안 실온에서 교반하여 목적한 생성물을 수득하였다. 용매를 진공하에 제거하고, 암색 잔기를 10 mL의 에탄올에 이어 100 mg의 이산화망간(MnO2) 속에 용해하였다. 슬러시 혼합물을 5시간 동안 실온에서 교반하였다. 불용성 물질을 셀라이트 패드를 사용하여 여과한 후, 여액을 진공 속에서 증발시켰다. 암색 잔기를 120 g의 HP 실리카 겔 Gold RediSep 컬럼 위에서 ISCO(구배 용출: 헥산 중 5 - 95% EA)를 통해 정제하였다. 순수한 분획을 합하고 진공 하에 증발시켜 표제 화합물 28을 암적색 고체(270 mg, 43%)로서 수득하였다. MS (ESI, pos.): C43H47BrN2O13에 대한 계산치, 878.23; 실측치 879.2 및 880.2 (M+H), 878.1 및 879.1 (M-1). 1H NMR (500 MHz; DMSO-d6) δ 10.22 (br. s., 1H), 9.52 (br. s., 1H), 7.43 (br. s., 1H), 7.35 (br. s., 1H), 6.04 (br. s., 1H), 5.83 (br. s., 2H), 5.21 (d, J = 6.35 Hz, 2H), 4.89 (t, J = 10.50 Hz, 1H), 4.16 (br. s., 1H), 3.51 (br. s., 1H), 3.15 (br. s., 2H), 3.02 (br. s., 4H), 2.80 (t, J = 8.55 Hz, 1H), 2.21 (br. s., 3H), 2.08 (br. s., 1H), 1.96 (s, 4H), 1.99 (s, 4H), 1.78 (br. s., 1H), 1.71 (br. s., 3H), 1.60 (br. s., 1H), 1.47 (br. s., 1H), 0.84 (d, J = 6.84 Hz, 6H), 0.69 (br. s., 6H).
화합물 29 의 합성. 교반 바아가 장착된 8 mL의 스크류-상단 오븐-건조 바이알에 화합물 15(60 mg, 0.069 mmol, 1.00 eq), 2-(디메틸아미노)에탄-1-올(61 mg, 0.69 mmol, 10 eq), t-BuBrettPhos-Pd-G3-팔라다사이클(31 mg, 0.0345 mmol, 0.5 eq), 및 K3PO4(30 mg, 0.141 mmol, 2.0 eq.)를 충전하였다. 반응 바이알을 고무 격막으로 캡핑하였다. 격막을 첨부된 침으로 뚫어 배기시키고 아르곤으로 역충전시킨 다음(당해 공정을 2회 반복하였다) 1,4-디옥산(1.5 mL)을 첨가하였다. 반응물을 60℃에서 아르곤 압력 하에 15시간 동안 가열하고, 반응물이 실온으로 냉각되도록 하고, Celite® 패드를 통해 여과하고, MeOH로 세정하였다. 조 물질을 진공 속에서 농축시키고 50 g의 C18 Aq 컬럼(구배 용출: 수중 10 - 95% MeCN, 욕 중 0.05% 아세트산) 위에서 정제하였다. 생성물 분획을 합하고 및 동결건조시켜 표제 화합물 29를 암적색 고체(21 mg, 35%)로서 수득하였다. MS (ESI, pos.): C47H57N3O14에 대한 계산치, 887.38; 실측치 888.3 (M+H). 1H NMR (500 MHz; DMSO-d6) δ 10.12 (br. s., 1H), 9.39 (br. s., 1H), 6.75 (br. s., 1H), 6.70 (br. s., 1H), 6.03 (br. s., 1H), 5.77 (d, J = 15.14 Hz, 1H), 5.21 (br. s., 1H), 4.83 - 4.90 (m, 1H), 4.15 - 4.30 (m, 2H), 4.08 (br. s., 1H), 3.53 (br. s., 1H), 3.29 (s, 1H), 3.16 (br. s., 1H), 3.03 (br. s., 3H), 2.87 (br. s., 1H), 2.79 (br. s., 1H), 2.62 - 2.71 (m, 2H), 2.36 (s, 1H), 2.23 (s, 6H), 2.19 (br. s., 3H), 1.93 - 2.11 (m, 7H), 1.91 (s, 1H), 1.76 (br. s., 1H), 1.69 (br. s., 3H), 1.53 - 1.65 (m, 1H), 1.50 (br. s., 1H), 1.32 - 1.45 (m, 1H), 0.76 - 0.94 (m, 6H), 0.68 (br. s., 5H).
Figure pct00467
화합물 29a : 29a를 29에 대해 기술된 바와 같이 일반적인 과정을 사용하여 제조하였다: 화합물 28(50 mg, 0.0568mmol, 1.00 eq.), (1-메틸피롤리딘-3-일)메탄올(65 mg, 0.568 mmol, 10 eq.), t-BuBrettPhos-Pd-G3-팔라다사이클(24 mg, 0.0284 mmol, 0.5 eq.), 및 K3PO4(24 mg, 0.115 mmol, 2.0 eq.)로 19%(9.8 mg)를 수득하였다. MS: C49H59N3O14에 대한 계산치, 913.40; 실측치 914.4 (M+H), 912.3 (M-H). 1H NMR (500 MHz; DMSO-d6): δ 9.38-9.34 (m, 1H), 6.74-6.64 (m, 1H), 6.26 (s, 1H), 6.02-6.00 (m, 1H), 5.80-5.78 (m, 1H), 5.23-5.19 (m, 1H), 4.87-4.82 (m, 1H), 4.06-4.03 (m, 2H), 3.55-3.51 (m, 1H), 3.17-3.15 (m, 1H), 3.03 (dd, J = 3.2, 1.1 Hz, 2H), 2.87 (s, 3H), 2.78 (tdd, J = 2.8, 1.5, 0.6 Hz, 3H), 2.64-2.58 (m, 1H), 2.37 (s, 1H), 2.30 (s, 6H), 2.18 (s, 6H), 1.97 (d, J = 16.7 Hz, 5H), 1.69 (t, J = 0.4 Hz, 3H), 1.53-1.51 (m, 2H), 0.85 (dt, J = 2.6, 1.3 Hz, 11H), 0.69-0.67 (m, 4H).
Figure pct00468
화합물 29b : 29b를 29에 대해 기술된 바와 같인 일반적인 과정을 사용하여 제조하였다: 화합물 28(60 mg, 0.068 mmol, 1.00 eq.), (1-메틸피페리딘-4-일)메탄올(88 mg, 0.683 mmol, 10 eq.), t-BuBrettPhos-Pd-G3-팔라다사이클(29 mg, 0.034 mmol, 0.5 eq.), 및 K3PO4(29mg, 0.136 mmol, 2.0 eq.)로 9.5%(6.0 mg)를 수득하였다. MS: C50H61N3O14에 대한 계산치, 927.42; 실측치 928.4 (M+H), 926.3 (M-H). 1H NMR (500 MHz; DMSO-d6): δ 8.84 (dd, J = 1.5, 0.9 Hz, 1H), 7.13 (dd, J = 1.7, 0.9 Hz, 1H), 6.92-6.88 (m, 1H), 6.29-6.26 (m, 1H), 6.21-6.18 (m, 1H), 5.67 (t, J = 0.6 Hz, 1H), 5.00-4.99 (m, 1H), 4.75-4.73 (m, 1H), 3.92-3.90 (m, 1H), 3.81-3.79 (m, 4H), 2.85 (d, J = 2.5 Hz, 2H), 2.75-2.72 (m, 1H), 2.63 (s, 2H), 2.36 (s, 3H), 2.12 (t, J = 5.7 Hz, 6H), 1.93 (d, J = 9.7 Hz, 4H), 1.81 (ddd, J = 3.6, 3.0, 1.4 Hz, 2H), 1.72 (s, 6H), 1.66 (s, 6H), 1.37-1.34 (m, 5H), 0.88-0.85 (m, 7H), 0.69-0.64 (m, 4H).
Figure pct00469
화합물 29c : 29c를 29에 대해 기술된 바와 같인 일반적인 과정을 사용하여 제조하였다: 화합물 28(60 mg, 0.068 mmol, 1.00 eq.), 2-(피롤리딘-1-일)에탄-1-올(88 mg, 0.682 mmol, 10 eq.), t-BuBrettPhos-Pd-G3-팔라다사이클(29 mg, 0.034 mmol, 0.5 eq.), 및 K3PO4(29mg, 0.136 mmol, 2.0 eq.)로 26%(16.2 mg)를 수득하였다. MS: C49H59N3O14에 대한 계산치, 913.40; 실측치 914.4 (M+H), 912.3 (M-H). 1H NMR (500 MHz; DMSO-d6): δ 9.40-9.39 (m, 1H), 6.77-6.76 (m, 1H), 6.67-6.65 (m, 1H), 6.02-6.00 (m, 1H), 5.78-5.76 (m, 1H), 5.21-5.19 (m, 1H), 4.86 (t, J = 10.6 Hz, 1H), 4.27-4.20 (m, 2H), 4.08-4.06 (m, 1H), 3.54-3.50 (m, 1H), 3.17-3.14 (m, 1H), 3.03 (d, J = 0.8 Hz, 3H), 2.86 (d, J = 0.4 Hz, 3H), 2.79-2.77 (m, 1H), 2.64-2.57 (m, 4H), 2.18 (s, 8H), 1.97 (d, J = 18.7 Hz, 7H), 1.70 (s, 7H), 1.60-1.56 (m, 1H), 1.51-1.46 (m, 1H), 0.84 (d, J = 5.8 Hz, 7H), 0.67 (dt, J = 1.5, 0.7 Hz, 5H).
Figure pct00470
화합물 29d : 29d를 29에 대해 기술된 바와 같인 일반적인 과정을 사용하여 제조하였다: 화합물 28(60 mg, 0.068 mmol, 1.00 eq.), 2-(2-아자비사이클로[2.2.1]헵탄-2-일)에탄-1-올(96 mg, 0.682 mmol, 10 eq.), t-BuBrettPhos-Pd-G3-팔라다사이클(29 mg, 0.034 mmol, 0.5 eq.), 및 K3PO4(29mg, 0.136 mmol, 2.0 eq.)로 37%(23.7 mg)를 수득하였다. MS: C51H61N3O14에 대한 계산치, 939.42; 실측치 940.5 (M+H), 938.3 (M-H). 1H NMR (500 MHz; DMSO-d6): δ 9.37-9.35 (m, 1H), 6.72-6.65 (m, 1H), 6.04-6.00 (m, 1H), 5.79 (tdd, J = 3.6, 1.8, 1.1 Hz, 1H), 5.22-5.19 (m, 1H), 4.86-4.82 (m, 1H), 4.19-4.16 (m, 2H), 4.07-4.05 (m, 2H), 3.54-3.52 (m, 1H), 3.17-3.14 (m, 1H), 3.07-3.02 (m, 2H), 2.86-2.80 (m, 3H), 2.80-2.77 (m, 1H), 2.32 (d, J = 1.2 Hz, 3H), 2.18 (s, 7H), 1.98-1.91 (m, 8H), 1.69 (d, J = 0.5 Hz, 3H), 1.58 (ddd, J = 5.0, 2.0, 0.9 Hz, 1H), 1.52-1.43 (m, 2H), 1.42-1.40 (m, 2H), 1.27-1.24 (m, 2H), 0.85 (dt, J = 2.2, 1.1 Hz, 9H), 0.68-0.67 (m, 5H).
Figure pct00471
화합물 29e : 29e를 29에 대해 기술된 바와 같인 일반적인 과정을 사용하여 제조하였다: 화합물 28(60 mg, 0.068 mmol, 1.00 eq.), 2-(4-메틸피페라진-1-일)에탄-1-올(100 mg, 0.693 mmol, 10 eq.), t-BuBrettPhos-Pd-G3-팔라다사이클(30 mg, 0.0351 mmol, 0.5 eq.), 및 K3PO4(30 mg, 0.141 mmol, 2.0 eq.)로 15%(9.8 mg)를 수득하였다. MS: C50H62N4O14에 대한 계산치, 942.43; 실측치 943.4 (M+H). 1H NMR (500 MHz, CD3OD) δ 6.53 - 6.63 (m, 2H), 6.24 (br. s., 1H), 4.99 - 5.11 (m, 2H), 4.27 - 4.40 (m, 2H), 3.67 (s, 1H), 3.01 (d, J = 8.30 Hz, 4H), 2.89 (br. s., 2H), 2.56 - 2.68 (m, 6H), 2.46 (br. s., 1H), 2.32 (s, 8H), 2.12 (br. s., 3H), 2.06 (s, 1H), 1.92 - 2.04 (m, 3H), 1.83 (s, 3H), 1.65 (d, J = 8.79 Hz, 2H), 1.56 (s, 1H), 1.31 (br. s., 3H), 1.03 (br. s., 1H), 0.95 (s, 8H), 0.81 (s, 4H), 0.01 (s, 2H), -0.28 (s, 2H).
Figure pct00472
화합물 29f : 29f를 29에 대해 기술된 바와 같인 일반적인 과정을 사용하여 제조하였다: 화합물 28(60 mg, 0.068 mmol, 1.00 eq.), 2-(2-(디메틸아미노)에톡시)에탄-1-올 (100 mg, 0.693 mmol, 10 eq.), t-BuBrettPhos-Pd-G3-팔라다사이클(30 mg, 0.0351 mmol, 0.5 eq.), 및 K3PO4(30 mg, 0.141 mmol, 2.0 eq.)로 11%(7.1 mg)를 수득하였다. MS: C49H61N3O15에 대한 계산치, 931.41; 실측치 932.3 (M+H). 1H NMR (500 MHz, CD3OD) δ 6.49 - 6.59 (m, 2H), 6.21 (br. s., 1H), 4.95 - 5.07 (m, 2H), 4.24 - 4.40 (m, 2H), 3.87 (br. s., 3H), 3.72 (br. s., 3H), 3.00 (d, J = 8.79 Hz, 5H), 2.67 (d, J = 4.88 Hz, 3H), 2.36 (s, 10H), 2.30 (s, 5H), 2.11 (s, 5H), 1.99 (s, 5H), 1.82 (s, 4H), 1.30 (s, 2H), 0.93 (s, 6H), 0.00 (s, 2H), -0.30 (s, 2H).
Figure pct00473
화합물 29g : 29g를 29에 대해 기술된 바와 같인 일반적인 과정을 사용하여 제조하였다: 화합물 28(50 mg, 0.0568 mmol, 1.00 eq.), 2-모르폴리노에탄-1-올 (75 mg, 0.568 mmol, 10 eq.), t-BuBrettPhos-Pd-G3-팔라다사이클(24 mg, 0.028 mmol, 0.5 eq.), 및 K3PO4(24mg, 0.115 mmol, 2.0 eq.)로 12%(5.8 mg)를 수득하였다. MS: C49H59N3O15에 대한 계산치, 929.39; 실측치 930.4 (M+H). 1H NMR (500 MHz; DMSO-d6): δ 10.14-10.11 (m, 1H), 9.38-9.31 (m, 1H), 6.76-6.59 (m, 1H), 6.34-6.20 (m, 1H), 6.04-6.01 (m, 1H), 5.79-5.76 (m, 2H), 5.21 (td, J = 2.0, 1.1 Hz, 1H), 4.83 (t, J = 0.8 Hz, 1H), 4.27-4.22 (m, 1H), 4.06-4.05 (m, 1H), 3.57 (s, 6H), 3.15 (d, J = 0.7 Hz, 3H ), 3.03 (d, J = 1.5 Hz, 4H), 2.86 (s, 1H), 2.71 (dt, J = 2.0, 1.5 Hz, 4H), 2.17 (s, 3H), 1.97 (d, J = 15.3 Hz, 6H), 1.69 (s, 3H), 1.60-1.59 (m, 3H), 1.50-1.44 (m, 3H), 1.37 (s, 1H), 1.24 (d, J = 1.0 Hz, 2H), 1.15-1.14 (m, 1H), 0.85 (td, J = 1.9, 0.8 Hz, 6H), 0.67 (dtd, J = 4.1, 2.1, 0.9 Hz, 4H).
Figure pct00474
화합물 29h : 29h를 29에 대해 기술된 바와 같인 일반적인 과정을 사용하여 제조하였다: 화합물 28(40 mg, 0.0454 mmol, 1.0 eq.), 2-(메틸(피리딘-2-일)아미노)에탄-1-올(69 mg, 0.454 mmol, 10 eq.), t-BuBrettPhos-Pd-G3-팔라다사이클(20 mg, 0.0223 mmol, 0.5 eq.), 및 K3PO4(20mg, 0.0921 mmol, 2.0 eq.)로 29h(5.6mg, 13%)를 수득하였다. MS: C51H58N4O14에 대한 계산치, 950.39; 실측치 951.3 (M+H). 1H NMR (500 MHz, CD3OD): δ 8.07 (d, J = 3.91 Hz, 1H), 7.53 (t, J = 7.08 Hz, 1H), 6.69 (d, J = 8.79 Hz, 1H), 6.59 - 6.66 (m, 2H), 6.44 (d, J = 1.95 Hz, 1H), 6.22 (d, J = 10.26 Hz, 1H), 5.95 (d, J = 1.95 Hz, 1H), 5.74 (d, J = 11.72 Hz, 1H), 5.13 - 5.18 (m, 2H), 4.58 (s, 5H), 4.30 (d, J = 6.35 Hz, 2H), 4.22 (dd, J = 2.93, 5.86 Hz, 1H), 4.00 (t, J = 5.62 Hz, 2H), 3.86 (d, J = 10.26 Hz, 1H), 3.35 (br. s., 2H), 3.13 (s, 2H), 2.95 - 3.03 (m, 3H), 2.11 - 2.17 (m, 2H), 2.03 - 2.11 (m, 4H), 1.92 - 2.00 (m, 8H), 1.71 (br. s., 1H), 1.42 (d, J = 2.93 Hz, 1H), 1.35 (d, J = 6.35 Hz, 2H), 1.22 - 1.32 (m, 5H), 0.85 - 1.00 (m, 3H), 0.33 (d, J = 6.84 Hz, 2H), 0.09 - 0.10 (m, 1H), -0.33 (d, J = 7.33 Hz, 2H).
Figure pct00475
화합물 29i : 29i를 29에 대해 기술된 바와 같인 일반적인 과정을 사용하여 제조하였다: 화합물 28(40 mg, 0.0454 mmol, 1.0 eq.), 2N-(2-하이드록시에틸)아세트아미드(47 mg, 0.454 mmol, 10 eq.), t-BuBrettPhos-Pd-G3-팔라다사이클(20 mg, 0.0227 mmol, 0.5 eq.), 및 K3PO4(20mg, 0.0939 mmol, 2.0 eq.)로 29i(12.2 mg, 31%)를 수득하였다. MS: C47H55N3O15에 대한 계산치, 901.36; 실측치 902.3 (M+H), 900.3 (M-H). 1H NMR (500 MHz; CD3OD): 6.65 - 6.84 (m, 1H), 6.43 - 6.64 (m, 3H), 6.31 - 6.43 (m, 1H), 6.07 - 6.28 (m, 2H), 4.92 - 5.10 (m, 2H), 4.08 - 4.24 (m, 4H), 3.62 (br. s., 5H), 2.91 - 3.09 (m, 4H), 2.29 (s, 5H), 2.11 (br. s., 5H), 2.04 (s, 2H), 1.90 - 2.02 (m, 7H), 1.82 (s, 5H), 0.91 (br. s., 5H), 0.10 (s, 3H), -0.34 (s, 2H).
Figure pct00476
화합물 29j : 29j를 29에 대해 기술된 바와 같인 일반적인 과정을 사용하여 제조하였다: 화합물 28(40 mg, 0.0454 mmol, 1.0 eq.), N-(2-하이드록시에틸)-N-메틸아세트아미드(53 mg, 0.454 mmol, 10 eq.), t-BuBrettPhos-Pd-G3-팔라다사이클(20 mg, 0.0227 mmol, 0.5 eq.), 및 K3PO4(20 mg, 0.0939 mmol, 2.0 eq.)로 29j(7 mg, 17%)를 수득하였다. MS: C48H57N3O15에 대한 계산치, 915.38; 실측치 916.3 (M+H). 1H NMR (500 MHz; CD3OD): δ 6.45 - 6.68 (m, 2H), 6.30 - 6.45 (m, 1H), 6.11 - 6.30 (m, 1H), 5.09 - 5.34 (m, 1H), 4.95 - 5.09 (m, 5H), 4.58 (s, 3H), 4.18 - 4.40 (m, 2H), 3.73 - 3.90 (m, 2H), 3.14 - 3.23 (m, 2H), 2.99 (d, J = 9.28 Hz, 6H), 2.31 (br. s., 5H), 2.10 (s, 5H), 2.13 (s, 2H), 2.04 (s, 1H), 1.98 (br. s., 3H), 1.93 (s, 1H), 1.81 (s, 6H), 0.79 - 1.02 (m, 6H), -0.10 - 0.04 (m, 2H), -0.21 - 0.41 (m, 2H).
Figure pct00477
화합물 29k : 29k는 화합물 28로 출발하는 모든 C-O 교차 커플링 반응에 대한 부산물이었다. MS: C43H48N2O14에 대한 계산치, 816.3; 실측치 817.3 (M+H), 839.3 (M+Na). 1H NMR (500 MHz; DMSO-d6): δ 10.09 (s, 1H), 9.31 (s, 1H), 6.44 (s, 2H), 6.00 (s, 1H), 5.77 (br. s., 2H), 5.20 (br. s., 1H), 4.81 - 4.88 (m, 2H), 4.05 (br. s., 1H), 3.48 - 3.54 (m, 1H), 3.16 (br. s., 1H), 3.02 (br. s., 3H), 2.97 (br. s., 1H), 2.77 (br. s., 1H), 2.51 - 2.54 (m, 1H), 2.12 - 2.21 (m, 4H), 2.00 (br. s., 1H), 1.92 - 1.98 (m, 5H), 1.90 (s, 1H), 1.74 (s, 3H), 1.61 - 1.71 (m, 6H), 1.43 - 1.61 (m, 3H), 1.22 - 1.24 (m, 1H), 0.83 (d, J = 6.35 Hz, 2H), 0.66 (br. s., 3H), 0.06 (d, J = 0.98 Hz, 1H).
실시예 6: 화합물 35의 제조
리파마이신 유사체 35를 하기 반응식 10에 나타내고, 하기 기술한 바와 같이 리파마이신 S로부터 합성하였다.
Figure pct00478
화합물 31 의 합성 . 1,4-디옥산/물(v/v, 10:1, 11 mL) 중 화합물 30(200 mg, 1.920 mmol)의 용액에 아르곤 하에 Fmoc-OSu(1360 mg, 4.032 mmol)를 가하였다. 5시간 동안 교반한 후 LC/MS 분석은 반응이 완료되었음을 나타내었다. 반응 혼합물을 포화된 NaHCO3(5 mL)로 처리하고 EtOAc(3 X 15 mL)로 추출하였다. 이후에, 합한 유기 층을 염수(10 mL)로 처리하고, 건조(Na2SO4) 및 진공 하에 농축시켜 조 화합물 31을 백색 발포체(800 mg, 76%)로서 수득하고, 이를 다음 단계에서 즉시 추가의 정제없이 사용하였다. MS: C34H32N2O5에 대한 계산치, 548.2; 실측치 549.2 (M+H).
화합물 32 의 합성 . 아르곤 하에 THF (2 mL) 중 화합물 8(160 mg, 0.652 mmol)의 교반 용액에 실온에서 알코올 31(432 mg, 0.788 mmol) 및 PPh3(308 mg, 1.174 mmol)를 가하였다. 이후에, THF(1 mL) 중 DBAD(270 mg, 1.174 mmol)의 용액을 반응 혼합물에 적가하였다. 15시간 동안 교반한 후, 혼합물을 증발 건조시키고 잔사를 40 g의 HP 실리카 겔 Gold RediSep 컬럼 위에서 ISCO(구배 용출: 헥산 중 0 - 100% 에틸 아세테이트)를 통해 정제하고, 순수한 분획을 증발시키고 진공하에 건조시켜 표제 화합물 32를 황백색 고체(286 mg, 56%)로서 수득하였다. MS: C47H41N3O8에 대한 계산치, 775.3; 실측치 776.3 (M+H), 798.2 (M+Na).
화합물 33 의 합성 . 아르곤 하에 5 mL의 메탄올/EtOAc(2:3) 중 및 아르곤으로 탈기시킨 화합물 32(220 mg, 0.284 mmol)에 31 mg의 10% Pd/C를 가하였다. 혼합물을 아르곤으로 추가로 탈기시키고 수소 벌룬에 연결하였다. 2시간 후, 공정중 분취량으로부터 LC/MS에 의한 분석은 반응이 완료되었음을 나타내었다. 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하고 농축시켜 150 mg의 화합물 33(LC/MS에 의해 85% 순도)을 황색 오일로서 수득하고, 이를 다음 단계에서 즉시 추가의 정제없이 사용하였다. MS: C40H37N3O6에 대한 계산치, 655.3; 실측치 656.3 (M+H).
화합물 34 의 합성 . 하이드록시아닐린 33(150 mg, 0.194 mmol, 85% 순도)이 들어있는 환저 플라스크에 톨루엔(2 mL) 및 리파마이신 S(129 mg, 0.185 mmol)를 가하였다. 반응 혼합물을 1분 동안 초음파처리하여 반응 혼합물을 용해시키고, 고무 격막을 통해 밀봉하고, 아르곤으로 퍼징하고, 반응물을 주위 온도에서 교반하였다. 1일 후 톨루엔(2 mL) 중 다른 부위의 하이드록시아닐린 33(45 mg, 0.059 mmol, 86% 순도, 앞서 기술된 동일한 과정을 사용하여 합성함)을 가하고 5일 동안 교반하였다. 반응물을 진공하에 농축시켜 톨루엔을 제거하고, EtOH(4 mL) 속에 용해하고 MnO2(20 mg)를 가하였다. 4일 동안 교반한 후, 반응물을 진공하에 농축시키고 40 g의 HP 실리카 겔 Gold RediSep 컬럼 위에서 ISCO(구배 용출: 헥산 중 0 - 100% 에틸 아세테이트)를 통해 정제하였다. 순수한 분획을 증발시키고 진공하에 건조시켜 표제 화합물 34를 암적색 고체(65 mg, 26%)로서 수득하였다. MS (ESI, pos.): C77H78N4O17에 대한 계산치, 1330.5; 실측치, 1353.5 (M+Na).
화합물 35 의 합성 . 아르곤 하에 THF(1 mL) 중 화합물 34(28 mg, 0.021 mmol)의 교반 용액을 TBAF(13 mg, 0.05 mL, 0.050 mmol, THF 중 1M)로 처리하고 반응물을 주위 온도에서 교반하였다. 2시간 후, 반응물을 50 g의 C18 RediSep Gold 컬럼 위에서 ISCO 시스템(구배 용출: 수 중 0 - 100% MeCN, 욕 중 0.05% 아세트산, 30분에 걸쳐)을 통해 정제하였다. 생성물 함유 분획을 합하고, 드라이 아이스 위에서 동결시키고 밤새 동결건조시켜 표제 화합물 35를 암적색 고체(9 mg, 48%)로서 수득하였다. MS: C47H58N4O13에 대한 계산치, 886.4; 실측치 887.3 (M+H). 1H-NMR (500 MHz; CD3OD): δ 7.86-7.74 (m, 1H), 7.18-7.08 (m, 1H), 6.98-6.84 (m, 1H), 6.78-6.68 (m, 1H), 6.53-6.40 (m, 1H), 6.23-6.15 (m, 1H), 6.23-6.15 (m, 1H), 6.00-5.79 (m, 1H), 6.00-5.79 (m, 1H), 5.30-4.95 (m, 2H), 3.81-3.65 (m, 6H), 3.35 (s, 3H), 3.09-2.93 (m, 7H), 2.25-2.20 (m, 2H), 2.17-2.03 (m, 4H), 2.00-1.87 (m, 5H), 1.76-1.68 (m, 4H), 1.03-0.85 (m, 7H), 0.78-0.65 (m, 2H), 0.14-0.03 (m, 4H), 0.13-0.00 (m, 3H), -0.30 (m, 2H).
실시예 7: 본 개시내용의 유사체 38의 합성
리파마이신 유사체 38을 하기 반응식 11에 나타내고, 하기 기술된 바와 같이 리파마이신 S로부터 합성하였다.
반응식 11
Figure pct00479
실시예 6A: Pd-촉매된 O-알킬화( 37 ) :
화합물 37 : 실시예 3에 기술된 바와 같이, 80 mL의 톨루엔 중 리파마이신 S(2.0 g, 2.87 mmol)을 실온에서 2-아미노-4-브로모페놀(0.54 g, 2.87 mmol)로 처리하였다. 혼합물 용액을 2일 동안 실온에서 교반하였다. 이후에, 혼합물을 증발 건조시키고 잔사를 20 mL의 에탄올에 용해하고 300 mg의 산화망간(MnO2)을 한번에 에탄올 용액에 가하였다. 혼합물을 아르곤 하에 15시간 동안 실온에서 교반하였다. 불용성 물질을 셀라이트 패드를 사용하여 여과한 후, 여액을 감압하에 증발시켰다. 암색 잔기를 120 g의 HP 실리카 겔 Gold RediSep 컬럼 위에서 ISCO(구배 용출: 헥산 중 5 - 95% EA)를 통해 정제하였다. 순수한 분획을 증발시키고 진공하에 건조시켜 표제 화합물 37을 암적색 고체(1.5 g, 60%)로서 수득하여다. MS (ESI, pos.): C43H47BrN2O12에 대한 계산치, 862.23; 실측치 863.1 및 865.1 (M+H), 885.1 및 888.0 (M+Na). 1H NMR (500 MHz; CDCl3): δ 8.19-8.19 (m, 1H), 7.66-7.64 (m, 1H), 7.48 (s, 2H), 7.06 (s, 1H), 6.23-6.18 (m, 1H), 6.01 (d, J = 12.3 Hz, 2H), 5.06-5.05 (m, 1H), 4.98 (dd, J = 12.2, 7.1 Hz, 2H), 3.11 (s, 3H), 3.03-3.00 (m, 2H), 2.33 (s, 6H), 2.13 (s, 3H), 2.07 (s, 6H), 1.83 (s, 6H), 1.70 (s, 2H), 1.54 (s, 1H), 0.97 (d, J = 6.6 Hz, 3H), 0.80 (d, J = 5.2 Hz, 6H), 0.58-0.57 (m, 4H).
화합물 38 : 표제 화합물 15 및 29와 유사한 1급 알코올의 팔라듐-촉매된 C-O 커플링을 사용하였다. 화합물 37(60 mg, 0.069 mmol, 1.00 eq)에 2-(디메틸아미노)에탄-1-올(62 mg, 0.69 mmol, 10 eq), t-BuBrettPhos-Pd-G3-팔라다사이클(30 mg, 0.0345 mmol, 0.5 eq), 및 K3PO4(30 mg, 0.141 mmol, 2.0 eq.)를 가하였다. 격막을 침을 뚫어 배기시키고 아르곤으로 역충전한 다음(당해 공정을 2회 반복하였다) 1,4-디옥산(1.5 mL)을 첨가하였다. 반응물을 오일 욕 속에서 아르곤 압력 하에 15시간 동안 60℃에서 가열하였다. 조 물질을 진공 속에서 농축시키고 50 g의 C18 Aq 컬럼(구배 용출: 수중 10 - 95% MeCN, 욕 중 0.05% 아세트산) 위에서 정제하였다. 생성물 분획을 합하고, 드라이 아이스 위에서 동결시키고 동결건조시켜 표제 화합물 38을 암적색 고체(6.8 mg, 12%)로서 수득하였다. 제조 HPLC(Gemini, 5μm, 150 mm x 30 mm, 용출제: 수중 10 - 95% MeCN, 0.05% AcOH)에 의한 다른 정제를 수행하고 동결건조시켜 순수한 생성물(4.5 mg)을 수득하였다. MS (ESI, pos.): C47H57N3O13에 대한 계산치, 871.39; 실측치 872.4 (M+H). 1H NMR (500 MHz; DMSO-d6) δ 9.48-9.32 (m, 2H), 7.68-7.49 (m, 2H), 7.44-7.27 (m, 1H), 6.11-5.95 (m, 1H), 5.88-5.76 (m, 2H), 5.28-5.16 (m, 2H), 4.84-4.71 (m, 1H), 4.21-4.18 (m, 1H), 3.57-3.43 (m, 2H), 3.09-3.01 (m, 1H), 2.82-2.75 (m, 1H), 2.67 (dd, J = 15.5, 10.1 Hz, 3H), 2.29-2.23 (m, 13H), 2.19 (d, J = 0.6 Hz, 9H), 1.99-1.91 (m, 1H), 1.69 (s, 1H), 1.64-1.56 (m, 1H), 1.55-1.43 (m, 1H), 1.24 (s, 1H), 0.85-0.84 (m, 7H), 0.69-0.68 (m, 4H).
실시예 8: 화합물 43의 제조
리파마이신 유사체 43을 하기 반응식 12에 나타내고, 하기 기술된 바와 같이 리파마이신 S로부터 합성하였다.
반응식 12
Figure pct00480
화합물 39 : 15 mL의 메탄올 중 5-브로모-1,3-디플루오로-2-니트로벤젠(2.0 g, 8.40 mmol, 1.0 eq.)의 교반 용액에 실온에서 KOH(504 mg, 8.98 mmol, 1.07 eq.)를 가하였다. 수득되는 혼합물을 90℃에서 1시간 동안 환류시켰다. 반응이 완료된 후, 혼합물을 실온에서 냉각시키고 감압하에 농축시켰다. 잔사를 에틸 아세테이트(20 mL)로 희석시키고 물, 염수로 세척하고, Na2SO4 위에서 건조시켰다. 진공 속에서 농축시킨 후, 조 생성물을 암색 고체로서 수득하였다. 잔사를 DCM(5 mL) 속에 용해하고 80 g의 HP 실리카 겔 Gold RediSep 컬럼 위에서 ISCO(구배 용출: 헥산 - 헥산 중 90% EA)를 통해 정제하고, 순수한 분획을 증발시켜 39의 담황색 고체(1.48g, 70%)를 수득하였다. MS (ESI, pos.): C7H5BrFNO3에 대한 계산치, 250.02; 실측치 273.2 (M+Na). 1H-NMR (500 MHz; CDCl3): δ 7.06 (dd, J = 8.6, 1.5 Hz, 1H), 7.02 (s, 1H), 3.95 (s, 3H).
화합물 40 : DMSO(3 mL) 중 5-브로모-1-플루오로-3-메톡시-2-니트로벤젠 39(400 mg, 1.56 mmol)의 교반 용액에 1M NaOH(2 mL, 2 mmol)를 가하고 오일 욕 속에서 15시간 동안 85℃까지 가열하였다. 반응을 LCMS로 완료시키고 실온으로 냉각시킨 다음 1M HCl로 pH = 2-3이 될 때까지 산성화하였다. 수득되는 용액을 에틸 아세테이트(2 x 10 mL)를 사용하여 추출하였다. 합한 유기 층을 물, 염수로 세척하고, 건조(Na2SO4)한 다음, 농축시켰다. 이후에, 조 오일을 24 g의 HP 실리카 겔 Gold RediSep 컬럼 상에서 ISCO(구배 용출: 헥산 중 0 - 100% 에틸 아세테이트)를 통해 정제하고, 순수한 분획을 증발시키고 진공하에 건조시켜 40을 황백색 고체(0.35 g, 89%)로서 수득하였다. MS (ESI, pos.): C7H6BrNO4에 대한 계산치, 248.03; 실측치 247.9 및 248.9 동위원소(M+H). 1H-NMR (500 MHz; CDCl3): δ10.50 (t, J = 0.4 Hz, 1H), 6.94 (s, 1H), 6.71 (s, 1H), 3.97 (s, 3H).
화합물 41 : 무수 THF(3 mL) 중 5-브로모-3-메톡시-2-니트로페놀 40(150 mg, 0.605 mmol, 1.0 eq.) 및 암모늄 아세테이트(114 mg, 1.814 mmol, 3.0 eq.)의 교반 용액에 실온에서 Zn 분진(dust)(593 mg, 9.07 mmol, 15 eq.)을 가하고 질소로 탈기시켰다. 혼합물을 오일 욕 속에서 밤새 50℃로 가열하였다. 반응을 LCMS로 완료시켰다. 반응물을 실온으로 냉각시키고 조 물질을 셀라이트 패드를 통해 여과하고 농축시켰다. 이후에, 조 오일을 24 g의 HP 실리카 겔 Gold RediSep 컬럼 위에서 ISCO (구배 용출: 메탄올 중 0 - 20% DCM)를 통해 정제하고, 순수한 분획을 증발시키고 진공하에 건조시켜 41을 갈색 고체(40 mg, 31%)로서 수득하였다. MS (ESI, pos.): C7H8BrNO2에 대한 계산치, 218.05; 실측치 219.9 및 220.9 동위원소(M+H). 1H-NMR (500 MHz; CDCl3): δ 6.65 (s, 1H), 6.62 (s, 1H), 3.85 (s, 3H), 1.45 (s, 2H).
화합물 42 : 실시예 3에서의 일반적인 과정에 따라서, 아르곤 하에 4 mL의 톨루엔 중 리파마이신 S(118 mg, 0.169 mmol)의 교반 용액에 실온에서 2-아미노-5-브로모-3-메톡시페놀 41(37 mg, 0.169 mmol)을 가하였다. 혼합물 용액을 2일 동안 실온에서 교반하였다. 이후에, 혼합물을 증발 건조시키고 암색 잔사를 5 mL의 에탄올 속에 용해하고 30 mg의 산화망간(MnO2)을 에탄올 용액에 한번에 가하였다. 슬러시 혼합물을 아르곤 하에 15시간 동안 실온에서 교반하였다. 불용성 물질을 셀라이트 패드를 사용하여 여과한 후, 여액을 감압하에 증발시켰다. 암색 잔사를 24 g의 HP 실리카 겔 Gold RediSep 컬럼 위에서 ISCO(구배 용출: 헥산 중 5 - 95% EA)를 통해 정제하였다. 순수한 분획을 증발시키고 진공하에 건조시켜 표제 화합물 42를 암적색 고체(70 mg, 47%)로서 수득하였다. MS (ESI, pos.): C44H49BrN2O13에 대한 계산치, 893.78; 실측치 893.7 및 895.7 (M+H), 891.3 및 893.1 (M-H). 1H-NMR (500 MHz; CDCl3): δ 7.06 (d, J = 9.8 Hz, 1H), 6.00-5.98 (m, 1H), 5.32 (s, 1H), 5.10-5.05 (m,1H), 5.00-4.96 (m, 1H), 4.13 (s, 4H), 3.11 (s, 3H), 3.03-3.01 (m, 1H), 2.32 (s, 3H), 2.13 (s, 3H), 2.07 (d, J = 4.3 Hz, 4H), 1.85 (s, 3H), 1.74 (dtd, J = 6.2, 1.7, 1.2 Hz, 1H), 1.67-1.65 (m, 1H), 1.54 (s, 2H), 1.29-1.26 (m, 1H), 0.99-0.97 (m, 3H), 0.85-0.80 (m, 3H), 0.63-0.59 (m, 3H).
화합물 43 : 43을 16b에 대해 기술된 바와 같이 일반적인 과정을 사용하여 제조하였다. 화합물 42(37 mg, 0.0447 mmol, 1.0 eq.), 2-(디메틸아미노)에탄-1-올(40 mg, 0.447 mmol, 10 eq.), t-BuBrettPhos-Pd-G3-팔라다사이클(20 mg, 0.0223 mmol, 0.5 eq.), 및 K3PO4(20 mg, 0.091 mmol, 2.0 eq.)로 표제 화합물 43(15.0 mg, 40%)을 수득하였다. MS: C48H59N3O14에 대한 계산치, 901.40; 실측치 902.3 (M+H), 900.3 (M-H). 1H-NMR (500 MHz; DMSO-d6): δ 9.31-9.30 (m, 1H), 6.79-6.76 (m, 1H), 6.70 (d, J = 6.2 Hz, 2H), 6.05-6.03 (m, 1H), 5.81-5.80 (m, 2H), 5.25-5.22 (m, 2H), 4.77-4.77 (m, 2H), 4.29 (dt, J = 1.9, 1.0 Hz, 2H), 4.21-4.13 (m, 3H), 4.00 (s, 3H), 3.57-3.54 (m, 1H), 3.04 (t, J = 0.9 Hz, 4H), 2.96-2.87 (m, 1H), 2.80-2.76 (m, 2H), 2.66 (s, 6H), 2.22 (s, 2H), 2.15 (s, 3H), 2.00 (s, 3H), 1.95 (s, 3H), 1.80-1.78 (m, 1H), 1.66-1.59 (m, 3H), 0.85-0.84 (m, 6H), 0.69-0.66 (m, 6H).
실시예 9: 화합물 45의 제조
리파마이신 유사체 45를 하기 반응식 13에 나타내고, 하기 기술된 바와 같이 리파마이신 S로부터 합성하였다.
반응식 13
Figure pct00481
화합물 44 : 실시예 3에서의 일반적인 과정에 따라, 아르곤 하에 5 mL의 톨루엔 중 리파마이신 S(250 mg, 0.359 mmol)의 용액에 실온에서 상업적으로 이용가능한 2-아미노-5-브로모-3-클로로페놀(80 mg, 0.359 mmol)을 가하였다. 혼합물 용액을 실온에서 밤새 교반하였다. 이후에, 혼합물을 증발 건조시키고 암적색 잔사를 15 mL의 에탄올에 용해시키고 300 mg의 산화망간(MnO2)을 에탄올 용액에 한번에 가하였다. 슬러시 혼합물을 아르곤 하에 15시간 동안 실온에서 교반하였다. 불용성 물질을 셀라이트 패드를 사용하여 여과한 후, 여액을 감압하에 증발시켰다. 암색 잔사를 40 g의 HP 실리카 겔 Gold RediSep 컬럼 위에서 ISCO(구배 용출: 헥산 - 헥산 중 95% EA)를 통해 정제하였다. 순수한 분획을 증발시키고 진공하에 건조시켜 표제 화합물 44를 암적색 고체(161 mg, 50%)로서 수득하였다. MS (ESI, pos.): C43H46BrClN2O12에 대한 계산치, 898.19; 실측치 899.1 (M+H). 1H-NMR (500 MHz; CDCl3): δ 13.81 (s, 1H), 7.65 (d, J = 1.7 Hz, 1H), 7.44 (s, 1H), 6.24-6.22 (m, 1H), 6.01 (d, J = 12.2 Hz, 1H), 5.07-5.05 (m, 1H), 4.99 (dd, J = 12.3, 6.8 Hz, 1H), 3.11 (s, 3H), 3.04-3.02 (m, 1H), 2.32 (s, 3H), 2.13 (s, 3H), 2.08 (s, 4H), 1.84 (s, 3H), 1.74-1.71 (m, 1H), 1.71-1.66 (m, 1H), 1.60 (s, 9H), 0.98 (d, J = 6.5 Hz, 4H), 0.82-0.81 (m, 4H), 0.63 (d, J = 0.5 Hz, 4H).
화합물 45 : 45를 16b에 대해 기술된 바와 같이 일반적인 과정을 사용하여 제조하였다: 화합물 44(20 mg, 0.0222 mmol, 1.0 eq.), 2-(디메틸아미노)에탄-1-올 (20 mg, 0.222 mmol, 10 eq.), t-BuBrettPhos-Pd-G3-팔라다사이클(9.5 mg, 0.0111 mmol, 0.5 eq.), 및 K3PO4(9.6 mg, 0.045 mmol, 2.0 eq.)로 표제 화합물 45(6.8 mg, 34%)를 수득하였다. MS: C47H56ClN3O13에 대한 계산치, 905.35; 실측치 906.3 (M+H). 1H-NMR (500 MHz; CD3OD): δ 7.30 (d, J = 0.4 Hz, 1H), 6.93-6.92 (m, 1H), 6.78-6.76 (m, 1H), 6.39-6.37 (m, 1H), 6.20 (dd, J = 12.5, 0.4 Hz, 2H), 5.09-5.07 (m, 1H), 4.58 (dq, J = 2.2, 0.6 Hz, 1H), 4.30 (dd, J = 9.1, 4.5 Hz, 1H), 4.21 (dtd, J = 2.8, 1.4, 0.7 Hz, 1H), 3.04 (d, J = 9.5 Hz, 6H), 2.83 (s, 3H), 2.36 (s, 6H), 2.31 (s, 3H), 2.11 (s, 1H), 2.00 (s, 2H), 1.91 (s, 4H), 1.76 (s, 3H), 1.73-1.62 (m, 2H), 1.30 (s, 1H), 0.96 (d, J = 5.4 Hz, 6H), 0.88 (d, J = 6.4 Hz, 4H), 0.25 (d, J = 6.6 Hz, 1H), 0.11 (s, 2H), -0.16--0.19 (m, 2H).
실시예 10: 화합물 48의 제조
리파마이신 유사체 48을 하기 반응식 14에 나타내고, 하기 기술된 바와 같이 리파마이신 S로부터 합성하였다.
반응식 14
Figure pct00482
화합물 46 : 무수 THF(5 mL) 중 상업적으로 이용가능한 5-브로모-4-클로로-2-니트로페놀(100 mg, 0.396 mmol, 1.0 eq.) 및 암모늄 아세테이트(75 mg, 1.188 mmol, 3.0 eq.)의 교반 용액에 실온에서 Zn 분진(388 mg, 5.94 mmol, 15 eq.)을 가하고 질소로 탈기시켰다. 혼합물을 오일 욕 속에서 2시간 동안 50℃로 가열하였다. 반응을 LCMS로 완료시키고 실온으로 냉각하였다. 조 물질을 셀라이트 패드를 통해 여과하고 농축시켰다. 이후에, 조 오일을 24 g의 HP 실리카 겔 Gold RediSep 컬럼 위에서 ISCO(구배 용출: 메탄올 중 0 - 20% DCM)를 통해 정제하고, 순수한 분획을 증발시키고 진공하에 건조시켜 46을 갈색 오일(37 mg, 42%)로서 수득하였다. MS (ESI, pos.): C6H5BrClNO에 대한 계산치, 222.47; 실측치 222.9 및 223.9 동위원소(M+H). 1H-NMR (500 MHz; CD3OD): δ 6.89 (s, 1H), 6.81 (s, 1H) NH2 및 OH는 관찰되지 않음.
화합물 47 : 실시예 3에서의 일반적인 과정에 따라, 아르곤 하에 1.5 mL의 톨루엔 및 0.25 mL의 THF 중 리파마이신 S(62 mg, 0.0899 mmol)의 교반 용액에 실온에서 2-아미노-5-브로모-4-클로로페놀 46(20 mg, 0.0899 mmol)을 가하였다. 혼합물 용액을 7일 동안 실온에서 교반하였다. 이후에, 혼합물을 증발 건조시키고 암적색 잔사를 10 mL의 에탄올 속에 용해하고 100 mg의 산화망간(MnO2)을 에탄올 용액에 한번에 가하였다. 슬러시 혼합물을 아르곤 하에 15시간 동안 실온에서 교반하였다. 불용성 물질을 셀라이트 패드를 사용하여 여과한 후, 여액을 감압하에 증발시켰다. 암색 잔사를 40 g의 HP 실리카 겔 Gold RediSep 컬럼 위에서 ISCO(구배 용출: 헥산 - 헥산 중 95% EA)를 통해 정제하였다. 순수한 분획을 증발시키고 진공하에 건조시켜 표제 화합물 47을 암적색 고체(40 mg, 51%)로서 수득하였다. MS (ESI, pos.): C43H46BrClN2O12에 대한 계산치, 898.19; 실측치 899.1 (M+H). 1H-NMR (500 MHz; CDCl3): δ 13.87 (s, 1H), 8.11 (s, 1H), 7.67 (s, 1H), 6.32 (s, 1H), 6.01 (d, J = 12.4 Hz, 2H), 5.04-5.04 (m, 1H), 4.98 (dd, J = 12.2, 6.5 Hz, 2H), 3.11 (s, 6H), 3.03-3.01 (m, 2H), 2.34 (s, 6H), 2.14 (s, 7H), 2.07 (s, 6H), 1.83 (s, 6H), 1.73 (dt, J = 6.4, 0.6 Hz, 3H), 1.65-1.56 (m, 17H), 0.99 (d, J = 6.2 Hz, 6H), 0.83-0.82 (m, 6H), 0.60 (t, J = 0.7 Hz, 5H).
화합물 48 : 48을 16b에 대해 기술된 바와 같이 일반적인 과정을 사용하여 제조하였다.: 화합물 47(20 mg, 0.0222 mmol, 1.0 eq.), 2-(디메틸아미노)에탄-1-올 (20 mg, 0.222 mmol, 10 eq.), t-BuBrettPhos-Pd-G3-팔라다사이클(9.5 mg, 0.0111 mmol, 0.5 eq.), 및 K3PO4(9.6 mg, 0.045 mmol, 2.0 eq.)로 표제 화합물 48(2.8 mg, 12%)을 수득하였다. MS: C47H56ClN3O13에 대한 계산치, 905.35; 실측치 906.3 (M+H). 1H-NMR (500 MHz; CD3OD): δ 8.04 (t, J = 0.6 Hz, 1H), 7.15-7.14 (m, 1H), 6.90-6.89 (m, 2H), 6.42-6.41 (m, 2H), 6.22-6.20 (m, 1H), 5.02-4.99 (m, 1H), 4.59 (s, 1H), 4.42-4.41 (m, 1H), 4.24-4.21 (m, 1H), 3.77-3.74 (m, 1H), 3.04-3.02 (m, 1H), 2.94 (d, J = 0.4 Hz, 1H), 2.43 (s, 6H), 2.31 (s, 5H), 2.12 (s, 6H), 1.99 (s, 5H), 1.92 (s, 4H), 1.79 (s, 1H), 1.69 (t, J = 1.4 Hz, 1H), 1.31 (s, 1H), 0.96 (t, J = 0.5 Hz, 6H), 0.85-0.70 (m,4H ), 0.11 (s, 1H), -0.22 (td, J = 2.3, 1.2 Hz, 1H).
실시예 11: 화합물 50의 제조
리파마이신 유사체 50을 하기 반응식 15에 나타내고, 하기 기술된 바와 같이 화합물 28로부터 합성하였다.
반응식 15
Figure pct00483
화합물 49 : 1.5 mL의 무수 DMF 중 화합물 28(50 mg, 0.0568 mmol, 1.0 eq.)의 교반 용액에 실온에서 K2CO3(12 mg, 0.0852 mmol, 1.5 eq.)를 가한 후 n-BuBr(15.5 mg, 0.1136 mmol, 2.0 eq.)을 첨가하였다. 수득되는 혼합물을 50℃에서 밤새 환류시켰다. 조 생성물을 아세토니트릴/물로 희석시키고, ISCO 시스템 상에서 EZ 제조 컬럼(용출제: 수중 10 - 95% MeCN, AcOH 중 0.05%)으로 정제하였다. LC/MS에 의해 순수한 분획을 수집하고, 드라이아이스/아세톤 욕에서 동결시키고, 30시간 동안 동결건조시켜 34 mg(65%)의 49를 수득하였다. MS (ESI, pos.): C47H55BrN2O13에 대한 계산치, 935.85; 실측치 935.2 및 937.2(M+H). 1H-NMR (500 MHz; CDCl3): δ 7.48 (s, 2H), 7.13 (s, 1H), 7.07 (s, 2H), 7.02 (s, 1H), 5.92 - 6.07 (m, 1H), 4.98 (dd, J = 6.84, 12.21 Hz, 1H), 4.18 - 4.25 (m, 2H), 3.11 (s, 3H), 3.02 (br. s., 1H), 2.31 (s, 3H), 2.13 (s, 3H), 2.07 (s, 4H), 1.95 - 2.03 (m, 2H), 1.80 (s, 4H), 1.74 (br. s., 2H), 1.60 - 1.71 (m, 2H), 1.50 - 1.59 (m, 12H), 1.05 (t, J = 7.33 Hz, 4H), 0.98 (br. s., 3H), 0.81 (br. s., 2H), 0.62 (br. s., 2H)
화합물 50 : 50을 16b에 대해 기술된 바와 같이 일반적인 과정을 사용하여 제조하였다. 화합물 49(20 mg, 0.0213 mmol, 1.0 eq.), 2-(디메틸아미노)에탄-1-올 (19 mg, 0.213 mmol, 10 eq.), t-BuBrettPhos-Pd-G3-팔라다사이클(9.1 mg, 0.01065 mmol, 0.5 eq.), 및 K3PO4(9.2 mg, 0.043 mmol, 2.0 eq.)로 표제 화합물 50(6.1 mg, 30%)을 수득하였다. ISCO EZ 제조 컬럼(Gemini)을 사용하여 목적한 생성물을 정제하였다(용출제: 수 중 10 - 95% MeCN, AcOH 중 0.05%). MS: C51H65N3O14, 943.45; 실측치 944.4 (M+H), 942.3 (M-H). 1H-NMR (500 MHz; CD3OD): δ 6.82-6.81 (m, 2H), 6.70 (s, 1H), 6.58-6.55 (m, 1H), 6.38-6.37 (m, 2H), 6.23 (ddd, J = 3.0, 1.6, 0.8 Hz, 2H), 5.07 (bs, 2H), 4.59 (s, 6H), 4.29 (t, J = 5.3 Hz, 4H), 4.20-4.14 (m, 2H), 3.74-3.71 (m, 2H), 3.03 (s, 6H), 2.83 (d, J = 0.3 Hz, 2H), 2.36 (s, 6H), 2.31 (s, 1H), 2.11 (s, 3H), 1.98 (s, 2H), 1.76 (s, 3H), 1.69-1.60 (m, 1H), 1.30 (s, 2H), 1.08 (s, 6H), 0.97-0.91 (m, 4H), 0.11 (s, 3H), -0.21 (dd, J = 2.2, 0.9 Hz, 2H).
실시예 12: 화합물 52의 제조
리파마이신 유사체 52를 하기 반응식 16에 나타내고, 하기 기술된 바와 같이 화합물 28로부터 합성하였다.
반응식 16
Figure pct00484
화합물 51 : 1.5 mL의 무수 DMF 중 화합물 28(50 mg, 0.0568 mmol, 1.0 eq.)의 교반 용액에 실온에서 K2CO3(12 mg, 0.0852 mmol, 1.5 eq.)를 가하고 벤질 브로마이드(19.4 mg, 0.1136 mmol, 2.0 eq.)를 첨가하였다. 수득되는 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. ISCO 시스템 EZ 제조 컬럼을 사용하여 목적한 생성물(용출제: 수 중 10 - 95% MeCN, AcOH 중 0.05%)을 정제하였다. LC/MS에 의한 순수한 분획을 수집하고 드라이아이스/아세톤 욕에서 동결시키고, 30시간 동안 동결건조시켜 25 mg(45%)의 51를 수득하였다. MS (ESI, pos.): C50H53BrN2O13에 대한 계산치, 969.88; 실측치 969.2 및 971.2 (M+H). 1H-NMR (500 MHz; CDCl3): δ 7.68-7.66 (m, 1H), 7.45-7.42 (m, 2H), 7.39-7.37 (m, 2H), 7.19 (dt, J = 1.0, 0.5 Hz, 2H), 7.14 (t, J = 0.4 Hz, 2H), 5.99 (dd, J = 12.2, 0.4 Hz, 1H), 5.44-5.38 (m, 1H), 5.29-5.22 (m, 2H), 5.00-4.96 (m, 2H), 3.10 (s, 3H), 3.03-3.01 (m, 1H), 2.31 (s, 6H), 2.14 (s, 3H), 2.07 (s, 3H), 1.78 (d, J = 0.4 Hz, 3H), 1.66-1.64 (m, 3H), 1.54 (s, 3H), 1.27 (s, 3H), 1.00-0.98 (m, 3H), 0.90 (dd, J = 8.5, 4.8 Hz, 3H), 0.83 (dddd, J = 2.9, 2.1, 1.5, 0.7 Hz, 2H), 0.63-0.61 (m, 1H), 0.14 (s, 1H).
화합물 52 : 52를 16b에 대해 기술된 바와 같이 일반적인 과정을 사용하여 제조하였다. 화합물 51(26 mg, 0.0268 mmol, 1.0 eq.), 2-(디메틸아미노)에탄-1-올 (24 mg, 0.268 mmol, 10 eq.), t-BuBrettPhos-Pd-G3-팔라다사이클(11.4 mg, 0.0134 mmol, 0.5 eq.), 및 K3PO4(11.5 mg, 0.054 mmol, 2.0 eq.)로 표제 화합물 52(7.0 mg, 27%)를 수득하였다. ISCO EZ 제조 컬럼(Gemini)을 사용하여 목적한 생성물을 정제하였다(용출제: 수 중 10 - 95% MeCN, AcOH 중 0.05%). MS: C54H63N3O14에 대한 계산치, 977.43; 실측치 978.4 (M+H), 976.3 (M-H). 1H-NMR (500 MHz; CD3OD): δ 7.73 (d, J = 7.0 Hz, 2H), 7.43 (d, J = 4.3 Hz, 2H), 7.38-7.37 (m, 1H), 6.81 (s, 2H), 6.58 (d, J = 0.9 Hz, 1H), 6.42-6.40 (m, 1H), 6.21-6.18 (m, 1H), 6.03 (d, J = 12.6 Hz, 1H), 5.41-5.36 (m, 2H), 5.05-5.01 (m, 1H), 4.59 (s, 1H), 4.29 (d, J = 5.1 Hz, 1H), 4.18 (dt, J = 2.6, 1.3 Hz, 1H), 3.72-3.70 (m, 1H), 3.00 (d, J = 9.9 Hz, 4H), 2.83 (s, 2H), 2.37 (s, 7H), 2.29 (s, 3H), 2.11 (s, 3H), 2.03 (d, J = 18.5 Hz, 6H), 1.74 (s, 4H), 1.64-1.63 (m, 1H), 1.30 (s, 1H), 0.96-0.90 (m, 10H), 0.11-0.09 (m, 2H), -0.25 (t, J = 0.6 Hz, 2H).
실시예 13: 화합물 55의 제조
리파마이신 유사체 55를 하기 반응식 17에 나타내고, 하기 기술된 바와 같이 리파마이신 S로부터 합성하였다.
반응식 17
Figure pct00485
화합물 53 : 실온에서, 질소로 탈기시킨 무수 THF(5 mL) 중 상업적으로 이용가능한 5-브로모-3-플루오로-2-니트로페놀 (150 mg, 0.635 mmol, 1.0 eq.) 및 암모늄 아세테이트(120 mg, 1.906 mmol, 3.0 eq.)의 용액에 Zn 분진(622 mg, 9.52 mmol, 15 eq.)을 가하였다. 혼합물을 오일 욕 속에서 2시간 동안 50℃로 가열시켰다. 반응을 LCMS로 완료시키고 실온으로 냉각시켰다. 조 물질을 셀라이트 패드를 통해 여과하고 농축시켰다. 이후에 조 오일을 24 g의 HP 실리카 겔 Gold RediSep 컬럼위에서 ISCO 시스템(구배 용출: 메탄올 중 0 - 20% DCM)을 통해 정제하고, 순수한 분획을 증발시키고 진공하에 건조시켜 53을 갈색 고체(67 mg, 52%)로서 수득하였다. MS (ESI, pos.): C6H5BrFNO에 대한 계산치, 206.01; 실측치 205.9 및 207.9 동위원소(M+H). 1H-NMR (500 MHz; CD3OD): δ 6.71-6.67 (m, 2H). NH2 및 OH는 관찰되지 않음.
화합물 54 : 실시예 9에서의 일반적인 과정에 따라, 아르곤 하에 1.5 mL의 톨루엔 중 리파마이신 S(120 mg, 0.172 mmol)의 교반 용액에 실온에서 화합물 53(36 mg, 0.172 mmol)을 가하여 표제 화합물 54를 암적색 고체(92 mg, 61%)로서 수득하였다. MS (ESI, pos.): C43H46BrFN2O12에 대한 계산치, 881.75; 실측치 882.1 및 883.2 (M+H), 880.1 및 881.1 (M-H). 1H-NMR (500 MHz; DMSO-d6): δ 9.54 (s, 1H), 7.80-7.79 (m, 2H), 6.04-6.01 (m, 1H), 5.74 (s, 1H), 5.22 (s, 2H), 4.80-4.76 (m, 1H), 4.23 (dt, J = 1.4, 0.6 Hz, 1H), 3.09-3.02 (m, 5H), 2.78 (td, J = 10.0, 1.8 Hz, 1H), 2.16 (s, 3H), 1.99 (s, 4H), 1.95 (s, 4H), 1.65 (s, 3H), 1.60-1.59 (m, 2H), 1.46 (dt, J = 1.9, 0.9 Hz, 1H), 0.88-0.85 (m, 2H), 0.83 (t, J = 7.8 Hz, 4H), 0.67 (s, 5H).
화합물 55 : 55를 16b에 대해 기술된 바와 같이 일반적인 과정을 사용하여 제조하였다: 화합물 54(40 mg, 0.0453 mmol, 1.0 eq.), 2-(디메틸아미노)에탄-1-올 (40 mg, 0.453 mmol, 10 eq.), t-BuBrettPhos-Pd-G3-팔라다사이클(19.3 mg, 0.0226 mmol, 0.5 eq.), 및 K3PO4(19.6 mg, 0.0919 mmol, 2.0 eq.)로 표제 화합물 55(16.8 mg, 42%)를 수득하였다. MS: C47H56FN3O13에 대한 계산치, 889.38; 실측치 890.4 (M+H), 888.3 (M-H). 1H-NMR (500 MHz; DMSO-d6): δ 9.43-9.42 (m, 1H), 7.15-7.12 (m, 1H), 7.05-7.03 (m, 1H), 6.04 (dtd, J = 4.5, 2.2, 1.1 Hz, 1H), 5.85-5.80 (m, 1H), 5.23 (dtd, J = 3.5, 1.8, 1.0 Hz, 1H), 4.79-4.75 (m, 1H), 4.27 (s, 1H), 4.19-4.18 (m, 2H), 3.52-3.51 (m, 1H), 3.09-2.99 (m, 4H), 2.80-2.75 (m, 1H), 2.64-2.63 (m, 2H), 2.15 (s, 9H), 1.99 (s, 3H), 1.94 (s, 2H), 1.64 (s, 2H), 1.48-1.44 (m, 1H), 1.36-1.33 (m, 1H), 1.23-1.22 (m, 1H), 1.14-1.13 (m, 1H), 1.05 (d, J = 12.0 Hz, 1H), 0.83 (d, J = 6.8 Hz, 6H), 0.68-0.66 (m, 5H).
Figure pct00486
화합물 55a : 55a는 화합물 54로 출발하는 C-O 교차 커플링 반응의 부산물이었다. MS: C43H47N2O13에 대한 계산치, 818.3; 실측치 819.3 (M+H), 817.2 (M-H). 1H NMR (500 MHz; DMSO-d6): δ 9.31 (s, 1H), 5.82 (s, 2H), 4.76 (s, 2H), 4.13 (br. s., 1H), 3.52 (d, J = 5.86 Hz, 1H), 3.08 (br. s., 2H), 3.02 (br. s., 3H), 2.97 (s, 1H), 2.88 (s, 1H), 2.77 (br. s., 2H), 2.72 (s, 1H), 2.52 (d, J = 8.79 Hz, 1H), 2.19 (br. s., 1H), 2.14 (br. s., 3H), 1.92 - 2.01 (m, 7H), 1.90 (s, 1H), 1.64 (br. s., 3H), 1.58 (br. s., 2H), 1.22 (s, 1H), 0.72 - 0.95 (m, 6H), 0.67 (br. s., 3H), 0.06 (s, 2H).
실시예 14: 화합물 60 및 61의 제조
리파마이신 유사체 60 및 61을 하기 반응식 18에 나타내고, 하기 기술된 바와 같이 리파마이신 S로부터 합성하였다.
반응식 18
Figure pct00487
화합물 56 : 빙 욕 속에서 7.5 mL의 DMF 중 5-브로모-1,3-디플루오로-2-니트로벤젠(1.0 g, 4.2 mmol, 1.0 eq.)의 교반 용액에 2.5 mL의 물 중 CH3SNa(320 mg, 4.6 mmol, 1.1 eq.)을 가하였다. 수득되는 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 황색 현탁액을 물(5 mL)로 희석시키고 여과하여 황색 고체(0.91g)를 디-설파이드 부산물의 불순물과 함께 수득하였다. MS (ESI, pos.): C7H5BrFNO2S에 대한 계산치, 266.08; 실측치 299.1 (M+Na).
화합물 57 : DMSO(10 mL) 중 조 물질 56(900 mg)을 1M NaOH(6 mL, 6 mmol)로 처리하고 오일 욕 속에서 1.5 시간 동안 85℃로 가열하였다. 반응을 LCMS로 완료시키고 실온으로 냉각시켰다. 반응물을 1M HCl로 pH = 2-3까지 산성화시키고 수득되는 용액을 에틸 아세테이트(2 x 10 mL)를 사용하여 추출하였다. 합한 유기 층을 물, 염수로 세척하고, 건조(Na2SO4)시킨 다음, 농축시켰다. 이후에, 조 생성물을 24 g의 HP 실리카 겔 Gold RediSep 컬럼위에서 ISCO 시스템(구배 용출: 헥산 중 0 - 100% 에틸 아세테이트)를 통해 정제하고, 순수한 분획을 증발시키고 진공하에 건조시켜 57을 황백색 고체(0.51 g, 46%)로서 수득하였다. MS (ESI, pos.): C7H6BrNO3S에 대한 계산치, 264.09; 실측치 263.9 및 262.9 동위원소(M-H). 1H-NMR (500 MHz; CDCl3): δ 11.40 (s, 1H), 7.10 (dd, J = 2.0, 1.1 Hz, 1H), 6.91 (d, J = 1.1 Hz, 1H), 6.91 (d, J = 1.1 Hz, 1H), 2.48 (s, 3H).
화합물 58 : 무수 THF(7 mL) 중 화합물 57(200 mg, 0.757 mmol, 1.0 eq.) 및 암모늄 아세테이트 (143 mg, 2.271 mmol, 3.0 eq.)의 용액에 실온에서 Zn 분진(495 mg, 7.57 mmol, 10 eq.)을 가하고 질소로 탈기시켰다. 혼합물을 오일 욕 속에서 2시간 동안 50℃로 가열하였다. 반응을 LCMS로 완료시키고 실온으로 냉각시켰다. 조 물질을 셀라이트 패드를 통해 여과하고 농축시켰다. 이후에, 조 물질을 24 g의 HP 실리카 겔 Gold RediSep 컬럼위에서 ISCO 시스템(구배 용출: 메탄올 중 0 - 20% DCM)을 통해 정제하고, 순수한 분획을 증발시키고 진공하에 건조시켜 58을 담갈색 고체(120 mg, 68%)로서 수득하였다. MS (ESI, pos.): C7H8BrNOS에 대한 계산치, 234.11; 실측치 235.9 및 236.9 동위원소(M+H), 232.9 및 231.9 동위원소(M-H). 1H-NMR (300 MHz; CDCl3): δ 7.09 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 6.84 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 5.07-5.06 (m, 1H), 4.15-4.09 (m, 2H), 2.42 (s, 3H).
화합물 59 : 실시예 9에서의 일반적인 과정에 따라, 5 mL의 톨루엔 중 아르곤 하에 리파마이신 S(267 mg, 0.384 mmol)의 교반된 용액에 실온에서 화합물 58 (90 mg, 0.384 mmol)을 가하였다. 2일 후, 반응물을 진공하에 농축시켜 톨루엔을 제거하고, EtOH(10 mL) 속에 용해하고 및 MnO2(30 mg)을 가하였다. 1일 동안 교반한 후, 반응물을 진공하에 농축시켰다. 조 물질을 40 g의 HP 실리카 겔 Gold RediSep 컬럼위에서 ISCO 시스템(구배 용출: 헥산 중 0 - 100% 에틸 아세테이트)를 통해 정제함으로써 표제 화합물 59를 암적색 고체(181 mg, 52%)로서 수득하였다. MS (ESI, pos.): C44H49BrN2O12S에 대한 계산치, 909.84; 실측치 910.2 및 911.2 (M+H), 908.1 및 907.1 (M-H). 1H-NMR (500 MHz; CD3OD): δ 7.35 (s, 1H), 7.25-7.23 (m, 1H), 6.74 (dt, J = 1.7, 0.9 Hz, 1H), 6.37-6.35 (m, 1H), 6.26-6.22 (m, 2H), 5.20 (ddt, J = 7.1, 2.9, 1.1 Hz, 1H), 5.09-5.08 (m, 1H), 3.70-3.68 (m, ), 3.05-3.03 (m, 4H), 2.57 (s, 3H), 2.30 (s, 3H), 2.09 (s, 3H), 1.99 (s, 3H), 1.75 (s, 3H), 1.67-1.64 (m, 1H), 0.94 (d, J = 6.9 Hz, 3H), 0.87-0.86 (m, 3H), 0.07-0.06 (m, 2H), -0.17--0.18 (m, 1H).
화합물 60 : 60을 16b에 대해 기술된 바와 같이 일반적인 과정을 사용하여 제조하였다: 화합물 59(40 mg, 0.044 mmol, 1.0 eq.), 2-(디메틸아미노)에탄-1-올 (40 mg, 0.439 mmol, 10 eq.), t-BuBrettPhos-Pd-G3-팔라다사이클(19 mg, 0.022 mmol, 0.5 eq.), 및 K3PO4(19 mg, 0.089 mmol, 2.0 eq.)로 표제 화합물 60(22 mg, 55%)을 수득하였다. MS: C48H59N3O13S에 대한 계산치, 917.38; 실측치 918.4 (M+H), 916.3 (M-H). 1H-NMR (500 MHz; CD3OD): δ 6.85-6.81 (m, 2H), 6.68-6.67 (m, 1H), 6.41-6.39 (m, 1H), 6.27 (dt, J = 1.5, 0.7 Hz, 1H), 6.19-6.16 (m, 1H), 5.25-5.22 (m, 1H), 5.03-5.02 (m, 1H), 4.30 (t, J = 5.1 Hz, 1H), 4.19-4.17 (m, 1H), 3.68 (ddd, J = 5.5, 2.2, 1.0 Hz, 1H), 3.48-3.44 (m, 1H), 3.02 (d, J = 8.9 Hz, 6H), 2.81 (d, J = 4.9 Hz, 3H), 2.56 (s, 3H), 2.43-2.37 (m, 6H), 2.29 (s, 4H), 2.14-2.04 (m, 3H), 1.98 (s, 3H), 1.79-1.71 (m, 3H), 1.63-1.59 (m, 2H), 1.25-1.22 (m, 2H), 1.08-1.05 (m, 2H), 0.94 (d, J = 7.0 Hz, 6H), 0.89-0.87 (m, 3H), 0.05-0.03 (m, 2H), -0.24 (ddt, J = 2.8, 2.2, 1.4 Hz, 2H).
화합물 61 : 빙 욕 속에서 3 mL의 무수 DCM 중 화합물 60(12 mg, 0.013 mmol)의 교반 용액에 m-CPBA(6.8 mg, 0.039 mmol)를 가하였다. 수득되는 용액을 실온으로 3시간 동안 가온시켜 표제 화합물 61을 수득하였다. 조 물질을 농축시키고 ISCO 시스템 EZ 제조 HPLC 컬럼(Gemini, 5μm, 150 mm x 30 mm, 용출제: 수 중 10 - 95% MeCN, 0.05% AcOH)을 통해 정제하였다. 순수한 분획을 수집하고, 드라이아이스/아세톤 욕 속에서 동결시키고, 동결건조시로 30시간 동안 건조시켜 6.5 mg(52%)의 61을 적자주색 고체로서 수득하였다. MS (ESI, pos.): C48H59N3O15S에 대한 계산치, 949.37; 실측치 950.37 (M+H), 948.2 (M-H). 1H-NMR (500 MHz; CD3OD): δ 7.94-7.85 (m, 1H), 7.59 (d, J = 0.7 Hz, 1H), 7.42 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 7.37 (dd, J = 7.2, 0.6 Hz, 1H), 7.18-7.15 (m, 1H), 6.85-6.81 (m, 1H), 6.41-6.36 (m, 1H), 6.23-6.21 (m, 1H), 5.11-5.08 (m, 1H), 4.74-4.72 (m, 2H), 3.83-3.81 (m, 4H), 3.14-3.06 (m, 2H), 3.03 (dd, J = 10.2, 2.1 Hz, 6H), 2.33 (s, 6H), 2.11 (d, J = 5.2 Hz, 4H), 2.04 (s, 3H), 1.98 (s, 3H), 1.77 (d, J = 10.6 Hz, 2H), 1.70-1.65 (m, 1H), 1.29 (s, 1H), 0.94 (d, J = 6.9 Hz, 6H), 0.87-0.86 (m, 3H), 0.10 (d, J = 2.8 Hz, 3H), 0.05-0.02 (m, 2H), -0.17--0.19 (m, 2H).
실시예 15: 화합물 68의 제조
리파마이신 유사체 68을 하기 반응식 19에 나타내고, 하기 기술된 바와 같이 리파마이신 S로부터 합성하였다.
반응식 19
Figure pct00488
화합물 62 : 빙욕 속에서 5 mL의 무수 THF 중 1,3,5-트리플루오로-2-니트로벤젠(1.0 g, 5.65 mmol, 1.0 eq.)의 교반 용액에 7 mL의 THF 중 벤질 알코올(1.34 g, 12.42 mmol, 2.2 eq.)의 용액을 적가하고, 이를 이후에 THF 중 KOtBu (12 mL, 11.86 mmol, 2.1 eq.)의 용액으로 아르곤 하에 처리하였다. 수득되는 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반하였다. 수득되는 용액을 에틸 아세테이트(2 x 40 mL)를 사용하여 추출하였다. 합한 유기 층을 물, 염수로 세척하고, 건조(Na2SO4)시킨 다음, 농축시켰다. 조 생성물을 THF/에탄올로 재결정화시켜 화합물 62의 회백색 고체(1.63 g, 82%)를 수득하였다. MS (ESI, pos.): C20H16FNO4에 대한 계산치, 353.35; 실측치 376.1 (M+Na). 1H-NMR (500 MHz; CDCl3): δ 7.40-7.35 (m, 10H), 6.40 (d, J = 10.1 Hz, 2H), 5.16 (s, 4H).
화합물 63 : DMSO(7 mL) 중 화합물 62(1.4g, 3.96 mmol)를 2M NaOH(5 mL, 10 mmol)로 처리하고 오일 욕 속에서 85℃로 밤새 가열하였다. 반응을 LCMS로 완료시키고 실온으로 냉각시켰다. 반응물을 1M HCl로 pH 2-3이 될 때까지 산성화시키고수득되는 용액을 에틸 아세테이트(2 x 30 mL)를 사용하여 추출하였다. 합한 유기 층을 물, 염수로 세척하고, 건조(Na2SO4)시킨 다음, 농축시켰다. 이후에 조 생성물을 80 g의 HP 실리카 겔 Gold RediSep 컬럼위에서 ISCO 시스템(구배 용출: 헥산 중 0 - 100% 에틸 아세테이트)를 통해 정제하고, 순수한 분획을 증발시키고 진공하에 건조시켜 63을 황색 고체(1.29 g, 82%)로서 수득하였다. MS (ESI, pos.): C20H17NO5에 대한 계산치, 351.11; 실측치 374.1 (M+H) 및 350.1 (M-H). 1H-NMR (300 MHz; CDCl3): δ 7.40-7.35 (m, 10H), 6.20 (d, J = 10.1 Hz, 2H), 5.15(s, 4H).
화합물 64 : 표제 화합물을 실시예 2에서와 동일한 방법을 사용하여 제조하였다. 아르곤 하에 THF(5 mL) 중 화합물 63(200 mg, 0.569 mmol)의 교반 용액에 실온에서 BOC-피페리딘-4-올(115 mg, 0.569 mmol) 및 PPh3(224 mg, 0.853 mmol)를 가한 후 THF(2 mL) 중 DBAD (157 mg, 0.682 mmol)를 첨가하였다. 밤새 교반한 후, 혼합물을 증발 건조시키고 잔사를 40 g의 HP 실리카 겔 Gold RediSep 컬럼위에서 ISCO 시스템(구배 용출: 헥산 중 0 - 100% 에틸 아세테이트)을 통해 정제하고, 순수한 분획을 증발시키고 진공하에 건조시켜 표제 화합물 64를 회백색 고체(285 mg, 93%)로서 수득하였다. MS: C30H34N2O7에 대한 계산치, 534.24; 실측치 557.2 (M+Na). 1H-NMR (500 MHz; CDCl3): δ 7.39 (d, J = 4.3 Hz, 6H), 7.34 (d, J = 4.7 Hz, 4H), 6.14 (s, 2H), 5.15 (s, 4H), 4.29 (dd, J = 3.6, 3.0 Hz, 1H), 3.67-3.63 (m, 2H), 3.28-3.26 (m, 2H), 1.79-1.76 (m, 2H), 1.63-1.56 (m, 2H), 1.49 (d, J = 2.0 Hz, 9H.
화합물 65 : 1,4-디옥산(2.0 mL) 중 화합물 64(285 mg, 0.54 mmol)의 용액에 1,4-디옥산(1.4 mL) 중 4 M HCl을 가하였다. 15시간 동안 교반한 후, 공정 중 분취량은 반응이 완료되었음을 나타내었다. 용액에 디에틸 에테르(50 mL)를 가한 다음, 혼합물을 1시간 동안 백색 침전물이 형성될 때까지 격렬하게 교반하였다. 고체를여과하고 에테르로 세척하여 상응하는 아민의 HCl 염을 수득하고, 이를 다음 단계에서 즉시 추가의 정제없이 사용하였다. MS: C25H26N2O5에 대한 계산치, 434.18; 실측치 435.2 (M+H).
1,4-디옥산/물(v/v, 1:1, 6 mL) 중 HCl 염의 용액에 NaHCO3(182 mg, 2.17 mmol, 4.0 eq.)를 가한 다음 Fmoc-OSu(219 mg, 0.65 mmol, 1.2 eq.)를 첨가하였다. 5시간 동안 교반한 후 공정 중 LC/MS 분석은 반응이 완료되었음을 나타내었다. 반응 혼합물을 물(5 mL)로 처리하고 EtOAc(3 x 15 mL)로 추출하였다. 이후에, 합한 유기 층을 염수(10 mL)로 처리하고, 건조(Na2SO4)시키고 진공 하에 농축시켰다. 조 화합물을 24g의 HP 실리카 겔 Gold RediSep 컬럼위에서 ISCO 시스템(구배 용출: 헥산 중 0 - 100% 에틸 아세테이트)를 통해 정제하고, 순수한 분획을 증발시켜 회백색 발포체(250 mg, 70%)를 수득하였다. MS: C40H36N2O7에 대한 계산치, 656.25; 실측치 657.2 (M+H), 689.3 (M+Na). 1H-NMR (500 MHz; CDCl3): δ 7.79 (d, J = 7.5 Hz, 2H), 7.59 (d, J = 7.4 Hz, 2H), 7.40 (quintet, J = 5.6 Hz, 10H), 7.34 (t, J = 6.9 Hz, 4H), 6.13 (s, 2H), 5.15 (s, 4H), 4.48-4.47 (m, 2H), 4.31-4.30 (m, 1H), 4.26 (t, J = 6.5 Hz, 1H), 3.63 (dddt, J = 5.1, 2.7, 1.7, 0.9 Hz, 2H), 3.35-3.32 (m, 2H), 1.74-1.72 (m, 2H), 1.62-1.58 (m, 2H ).
화합물 66 : 아르곤으로 탈기시킨, 5 mL의 메탄올/EtOAc(2:3) 중 화합물 65(220 mg, 0.304 mmol)의 용액에 28 mg의 10% Pd/C를 가하였다. 혼합물을 아르곤으로 추가로 탈기시키고 수소 벌룬에 연결하였다. 2시간 후, 공정중 분취량으로부터 LC/MS에 의한 분석은 반응이 완료되었음을 나타내었다. 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하고, MeOH(2 X 10 mL) 및 EtOAc(10 mL)로 세척하고 농축시켜 130 mg의 화합물 66(LC/MS에 의해 70% 순도)을 황색 오일로서 수득하고 이를 다음 단계에서 즉시 추가의 정제없이 사용하였다. MS: C26H26N2O5에 대한 계산치, 446.1; 실측치 447.1 (M+H).
화합물 67 : 하이드록시아닐린 66(130 mg, 0.204 mmol, 70% 순도)이 들어있는 환저 플라스크에 THF(1 mL)를 가하고 1분 동안 초음파처리하였다. 이후에, 리파마이신 S(135 mg, 0.194 mmol) 및 톨루엔(5 mL)을 가하고 반응 혼합물을 2분 동안 초음파처리하여 암색 황색 고체를 용해하고, 고무 격막을 통해 밀봉하고, 아르곤으로 퍼징하고, 반응물을 주위 온도에서 격렬하게 교반하였다. 10일 후, 반응물을 진공하에 농축시키고 톨루엔/THF를 제거하고, EtOH(10 mL) 속에 용해하고 MnO2(70 mg, 0.805 mmol)을 가하였다. 4일 동안 교반한 후, 반응물을 진공하에 농축시키고 24 g의 HP 실리카 겔 Gold RediSep 컬럼위에서 ISCO 시스템(구배 용출: 0 - 50% MeOH/DCM)을 통해 크로마토그래피로 정제하였다. 상대적으로 순수한 분획을 증발시키고 진공하에 건조시켜 표제 화합물 67을 암적색 고체(120 mg, 38%)로서 수득하였다. 화합물 67은 LCMS에서 이온화하지 않았다.
화합물 68 : 아르곤 하에 DMF(2 mL) 중 조 화합물 67(120 mg, 0.041 mmol, 38% 순도)의 교반 용액에 피페리딘(0.5 mL, DMF 중 2%)의 용액으로 처리하고 반응물을 주위 온도에서 교반하였다. 1시간 후, 반응물을 직접 50 g의 C18 RediSep Gold 컬럼위에서 ISCO 시스템(구배 용출: 수 중 0 - 100% MeCN, 욕 중 0.05% 아세트산, 30분에 걸쳐)을 통해 정제하였다. 생성물 함유 분획을 합하고, 드라이 아이스 위에서 동결시키고 밤새 동결건조시켜 Fmoc 탈보호된 생성물을 암정색 고체(9 mg, 25%)로서 수득하였다. MS: C48H57N3O14에 대한 계산치, 899.4; 실측치 900.4 (M+H).
아르곤 하에 DCM(2 mL) 중 생성물(7 mg, 0.0078 mmol)의 교반 용액에, 파라포름알데하이드(3.5 mg, 0.1167 mmol) 및 Na(OAc)3BH(6.6 mg, 0.0312 mmol)를 주위 온도에서 가하였다. 4시간 후, 다른 부위의 파라포름알데하이드(3.5 mg, 0.1167 mmol) 및 Na(OAc)3BH(6.0 mg, 0.0283 mmol)를 반응 혼합물에 가하였다. 1시간 후, 반응물을 셀라이트를 통해 여과하고, MeOH(2 X 10 mL)로 세척하고, 농축시키고 15.5 g의 C18 RediSep Gold 컬럼위에서 ISCO 시스템(구배 용출: 수 중 0 - 100% MeCN, 욕 중 0.05% 아세트산, 30분에 걸쳐)을 통해 직접 정제하였다. 생성물 함유 분획을 합하고, 드라이 아이스 위에서 동결시키고 밤새 동결건조시켜 표제 화합물 68을 수득하였다. 화합물을 EZ 제조 HPLC 컬럼(Gemini, 5μm, 150 mm x 30 mm, 용출제: 수 중 10 - 95% MeCN, 0.05% AcOH)으로 재정제하였다. 순수한 분획을 합하고, 드라이아이스/아세톤 상에서 동결시키고, 밤새 동결건조시켜 표제 화합물 68을 암적색 고체(2 mg, 28%)로서 수득하였다. MS: C49H59N3O14에 대한 계산치, 913.4; 실측치 914.4 (M+H). 1H-NMR (500 MHz; CD3OD): δ 6.68 (br. s., 1H), 6.47 - 6.58 (m, 1H), 6.32 - 6.46 (m, 1H), 6.13 - 6.32 (m, 1H), 4.64 - 4.75 (m, 1H), 4.59 (br. s., 1H), 3.46 (s, 1H), 3.18 (br. s., 1H), 2.91 - 3.12 (m, 4H), 2.76 (br. s., 2H), 2.51 (br. s., 2H), 2.35 - 2.42 (m, 3H), 2.31 (br. s., 2H), 2.22 (br. s., 2H), 2.04 - 2.17 (m, 3H), 1.97 - 2.04 (m, 3H), 1.94 (s, 6H), 1.90 (br. s., 2H), 1.72 - 1.83 (m, 6H), 1.55 - 1.71 (m, 3H), 1.39 - 1.52 (m, 3H), 1.25 - 1.37 (m, 3H), 0.76 - 1.06 (m, 4H), 0.02 (br. s., 2H), -0.25 (br. s., 3H).
실시예 16: 화합물 71의 제조
리파마이신 유사체 71을 하기 반응식 20에 나타내고, 하기 기술된 바와 같이 리파마이신 S로부터 합성하였다.
반응식 20
Figure pct00489
화합물 69 : 3-(벤질옥시)-2-니트로페놀(500 mg, 2.03 mmol, 1.0 eq.), 2-클로로-N,N-디메틸에탄-1-아민 HCl 염(380 mg, 2.65 mmol, 1.3 eq.), 및 Cs2CO3(1.65 g, 5.07 mmol, 2.5 eq.)의 교반된 혼합물에 무수 아세톤(7 mL)을 가하고 50℃에서 밤새 교반하였다. 반응을 LC/MS로 완료시키고 실온으로 냉각시켰다. 조 물질을 셀라이트 패드를 통해 여과하고 농축시켰다. 이후에, 조 물질을 40 g의 HP 실리카 겔 Gold RediSep 컬럼 위에서 ISCO(구배 용출: 메탄올 중 0 - 20% DCM)를 통해 정제하고, 순수한 분획을 증발시키고 진공하에 건조시켜 69를 암색 오일(428 mg, 67%)로서 수득하였다. MS (ESI, pos.): C17H20N2O4에 대한 계산치, 316.36; 실측치 317.2 (M+H). 1H-NMR (500 MHz; CDCl3): δ 7.39-7.29 (m, 6H), 6.65 (t, J = 8.5 Hz, 2H), 5.18 (s, 2H), 4.17 (t, J = 5.9 Hz, 2H), 2.75 (t, J = 5.9 Hz, 2H), 2.33 (s, 6H).
화합물 70 : 아르곤 하에, 메탄올(3 mL) 중 화합물 69(185 mg, 0.585 mmol)의 교반 용액에 37 mg의 20% Pd(OH)2/C(~50% 물을 함유함)을 가하였다. 혼합물을 아르곤으로 추가로 탈기시키고 수소 벌룬에 연결시켰다. 2시간 후, 공정중 분취량으로부터 LC/MS에 의한 분석은 반응이 완료되었음을 나타내었다. 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하고 농축시켜 110 mg의 표제 화합물 70(LC/MS에 의해 85% 순도)을 암황색 오일로서 수득하고, 이를 다음 단계에서 즉시 추가의 정제없이 사용하였다. MS: 에 대한 계산치: C10H16N2O2, 196.1; 실측치 197.1 (M+H).
화합물 71 : 하이드록시아닐린 70(110 mg, 0.476 mmol, 85% 순도)이 들어있는 환저 플라스크에 1,4-디옥산(6.8 mL) 및 리파마이신 S(663 mg, 0.953 mmol)를 가하였다. 반응 혼합물을 고무 격막을 통해 밀봉시키고, 아르곤으로 퍼징하고, 반응물을 주위 온도에서 격렬하게 교반하였다. 7일 후, 반응물을 진공하에 농축시키고, MeOH(10 mL) 속에 용해하고 MnO2(104 mg, 1.191 mmol)을 가하였다. 4주 동안 교반한 후, 반응물을 셀라이트를 통해 여과하고, MeOH(2 X 20 mL)로 세척하고 진공 하에 농축시키고 40 g의 HP 실리카 겔 Gold RediSep 컬럼위에서 ISCO 시스템(구배 용출: 0 - 10%에 이어서 10 - 50% MeOH/DCM)을 경유하는 크로마토그래피로 정제하였다. 순수한 분획을 증발시키고 진공하에 건조시켰다. 농축된 분획을 MeCN/H2O(1:1) 속에 용해하고, 드라이아이스/아세톤 상에서 동결시키고, 밤새 동력건조시켜 표제 화합물 71을 암적색 고체(48 mg, 12%)로서 수득하였다. MS (ESI, pos.): C47H57N3O13에 대한 계산치, 871.4; 실측치, 872.4 (M+H). 1H-NMR (500 MHz; DMSO-d6): δ 9.37 (s, 1H), 7.65 (t, J = 8.55 Hz, 1H), 7.15 (d, J = 8.30 Hz, 1H), 5.23 (br. s., 1H), 4.33 (br. s., 2H), 4.28 (br. s., 1H), 3.13 (br. s., 1H), 3.01 (br. s., 4H), 2.95 (br. s., 1H), 2.91 (br. s., 3H), 2.78 (t, J = 9.28 Hz, 1H), 2.31 (br. s., 9H), 2.17 (br. s., 4H), 1.98 (s, 5H), 1.94 (br. s., 4H), 1.67 (br. s., 3H), 1.59 (br. s., 1H), 0.80 - 0.93 (m, 8H), 0.78 (br. s., 1H), 0.67 (br. s., 6H).
실시예 17: 화합물 72의 제조
리파마이신 유사체 72를 하기 반응식 21에 나타내고, 하기 기술된 바와 같이 화합물 15로부터 합성하였다.
반응식 21
Figure pct00490
화합물 72 : 표제 화합물을 소노가시라 커플링 반응(Sonogashira coupling reaction)을 사용하여 제조하였다. 무수 THF(3 mL) 중 화합물 15(100 mg, 0.115 mmol, 1.0 eq.), N,N-디메틸프로프-2-인-1-아민(19μL, 0.173 mmol, 1.5 eq.), CuI(1.1 mg, 0.00575 mmol, 0.05 eq.), Pd(PPh3)4(3.3 mg, 0.00287 mmol, 0.025 eq.), 및 트리에틸아민(64μL, 0.46 mmol, 4.0 eq.)을 실온에서 탈기시키고, 밤새 교반하였다. 반응의 진행을 LC/MS로 모니터링하고 추가의 촉매(10 mg)를 가하였다. 혼합물을 빙욕 속에서 40℃로 밤새 가열하였다. 반응을 LC/MS로 완료하였다. 조 물질을 셀라이트 패드를 통해 여과하고 농축시켰다. 이후에, 조 물질을 C18 50g 컬럼에 의해 정제한 다음 ISCO EZ 제조 HPLC 컬럼(Gemini, 5μm, 150 mm x 30 mm, 용출제: 수 중 10 - 95% MeCN, 0.05% AcOH)로 달리 정제하였다. 순수한 분획을 수집하고, 드라이아이스/아세톤 욕 속에서 동결시키고, 동결건조기 속에서 20시간 동안 건조시켜 12 mg(9%)의 72를 적색고체로서 수득하였다. MS (ESI, pos.): C48H55N3O12에 대한 계산치, 865.38; 실측치 866.4 (M+H), 864.4 (M-H). 1H-NMR (500 MHz; CD3OD): δ 7.97-7.94 (m, 1H), 7.54 (t, J = 1.7 Hz, 1H), 7.39-7.35 (m, 1H), 6.89-6.86 (m, 1H), 6.38-6.35 (m, 1H), 6.17-6.15 (m, 2H), 5.12-5.09 (m, 1H), 4.95-4.93 (m, 2H), 3.82-3.79 (m, 1H), 3.58 (s, 2H), 3.02 (s, 6H), 2.40 (s, 3H), 2.27-2.27 (m, 4H), 2.12-2.01 (m, 3H), 1.97 (d, J = 10.6 Hz, 8H), 1.74 (s, 4H), 1.72-1.68 (m, 2H), 1.54-1.49 (m, 1H), 1.29 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 0.95 (s, 3H), 0.89 (dd, J = 5.2, 1.5 Hz, 3H), 0.21-0.17 (m, 2H), -0.08--0.12 (m, 2H).
실시예 18: 화합물 75의 제조
리파마이신 유사체 75를 하기 반응식 22에 나타내고, 하기 기술된 바와 같이 리파마이신 S로부터 합성하였다.
반응식 22
Figure pct00491
화합물 73 : 무수 THF(15 mL) 중 2-(벤질옥시)-4-브로모-1-니트로벤젠(500 mg, 1.622 mmol, 1.0 eq.), N,N-디메틸프로프-2-인-1-아민(262 μL, 2.433 mmol, 1.5 eq.), CuI(15.4 mg, 0.0811 mmol, 0.05 eq.), Pd(PPh3)4(47 mg, 0.0405 mmol, 0.025 eq.), 및 트리에틸아민(904 μL, 6.488 mmol, 4.0 eq.)의 혼합물을 실온에서, 탈기시키고 5시간 동안 교반하였다. 반응의 진행을 LC/MS로 모니터링하였다. 조 물질을 셀라이트 패드를 통해 여과하고 농축시켰다. 이후에, 조 물질을 40 g의 HP 실리카 겔 Gold RediSep 컬럼위에서 ISCO 시스템(구배 용출: 메탄올 중 0 - 20% DCM)을 통해 정제하고, 순수한 분획을 증발시키고 진공하에 건조시켜 73(492 mg, 98%)을 수득하였다. MS (ESI, pos.): C18H18N2O3에 대한 계산치, 310.13; 실측치 311.2 (M+H). 1H-NMR (500 MHz; CD3OD): δ 7.81 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.47 (d, J = 7.6 Hz, 2H), 7.38 (dd, J = 8.4, 1.4 Hz, 4H), 7.14 (dd, J = 8.3, 1.5 Hz, 1H), 5.28 (s, 2H), 3.52 (s, 2H), 2.36 (dd, J = 1.3, 0.6 Hz, 6H).
화합물 74 : 아르곤 하에 메탄올(4 mL) 중 화합물 73(100 mg, 0.322 mmol)의 용액에 20 mg의 20% Pd(OH)2/C를 가하였다. 혼합물을 아르곤으로 추가로 탈기시키고 수소 벌룬에 연결시켰다. 16시간 후, 공정중 분취량으로부터 LC/MS에 의한 분석은 반응이 완료되었음을 나타내었다. 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하고, MeOH(2 X 10 mL)로 세척하고 농축시켜 72 mg의 표제 화합물 74를 적황색 오일로서 수득하고, 이를 다음 단계에서 즉시 추가의 정제없이 사용하였다. MS: C11H18N2O에 대한 계산치, 194.1; 실측치 195.2 (M+H).
화합물 75 : 하이드록시아닐린 74(72 mg, 0.304 mmol, 82% 순도)이 들어있는 환저 플라스크에 1,4-디옥산(3 mL) 및 리파마이신 S(423 mg, 0.608 mmol)를 가하였다. 반응 혼합물을 고무 격막을 통해 밀봉시키고, 아르곤으로 퍼징하고, 반응물을 주위 온도에서 격렬하게 교반하였다. 12일 후, 반응물을 진공하에 농축시켜 디옥산을 제거하고, MeOH(6 mL) 속에 용해하고 MnO2(106 mg, 1.216 mmol)을 가하였다. 20시간 동안 교반한 후, 반응물을 셀라이트를 통해 여과하고, MeOH(2 X 10 mL)로 세척하고, 진공 하에 농축시키고, 50 g의 C18 RediSep Gold 컬럼위에서 ISCO 시스템(구배 용출: 수 중 0 - 100% MeCN, 욕 중 0.05% 아세트산)을 통해 직접 정제하였다. 생성물 함유 분획을 합하고, 드라이아이스/아세톤 위에 동결시키고, 밤새 동결건조시켜 표제 화합물 75를 수득하였다. 화합물을 EZ 제조 HPLC 컬럼(Gemini, 5μm, 150 mm x 30 mm, 용출제: 수 중 10 - 95% MeCN, 욕 중 10 mM NH4OAc)로 재-정제하였다. 순수한 분획을 합하고, 드라이아이스/아세톤 위에서 동결시키고, 밤새 동결건조시켜 표제 화합물 75를 적갈색 고체(6 mg, 2.2%)로서 수득하였다. MS: C48H59N3O12에 대한 계산치, 869.4; 실측치 870.4 (M+H). 1H-NMR (500 MHz; CD3OD): δ 8.46 (s, 1H), 7.67 (s, 1H), 7.00 (s, 1H), 6.28 (d, J = 8.79 Hz, 1H), 6.20 (s, 1H), 5.98 - 6.11 (m, 2H), 5.21 (dd, J = 6.11, 12.46 Hz, 1H), 5.11 (d, J = 10.26 Hz, 1H), 3.85 - 3.99 (m, 2H), 3.76 (s, 3H), 3.65 - 3.70 (m, 3H), 3.58 (s, 3H), 3.45 (br. s., 3H), 3.04 - 3.15 (m, 3H), 2.35 (br. s., 3H), 2.03 (s, 3H), 1.99 (s, 3H), 1.77 (s, 3H), 1.61 - 1.69 (m, 3H), 1.29 (s, 3H), 1.00 (d, J = 6.84 Hz, 3H), 0.92 (d, J = 7.33 Hz, 3H), 0.75 - 0.89 (m, 3H), 0.63 (d, J = 6.84 Hz, 3H), 0.10 (s, 3H), 0.00 (d, J = 6.84 Hz, 2H).
실시예 19: 링커-페이로드 화합물의 제조
링커-페이로드 화학을 사용하여 하기 반응식 23에 나타내고, 하기 기술된 바와 같이, 화합물 20을 제조하였다.
반응식 23
Figure pct00492
화합물 18 의 합성 . 표제 화합물을 PCT 국제 출원 제2014145090호에서의 과정을 사용하여 제조하였다. 3급-부틸 ((들)-1-(((들)-1-((4-(하이드록시메틸) 페닐)아미노)-1-옥소-5-우레이도펜탄-2-일)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카바메이트 18a(500 mg, 1.04 mmol)를 CH3CN/H2O/TFA(3:1:1 = v/v/v, 12 mL/4 mL/4 mL)의 혼합물 속에서 용해하였다. 반응 혼합물을 실온에서 48시간 동안 교반하였따. 반응의 진행을 LCMS로 완료된 것으로 측정하였다. 진공 속에서 농축시킨 ㅎ, 조 생성물을 18b(0.9 g wet)를 다음 단계를 위해 추가의 정제없이 직접 사용하였다. MS (ESI, pos.): C18H29N5O4에 대한 계산치, 379.22; 실측치 380.2 (M+H).
물(8 mL) 중 18b(700 mg, 1.47 mmol, 1.0 eq)의 용액을 2 mL의 수성 NaHCO3 용액으로 4℃에서 희석시키고 혼합물(pH = 8.0)을 10 mL의 아세토니트릴 중 상업적으로 이용가능한 2,5-디옥소피롤리딘-1-일 6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)헥사노에이트(408 mg, 0.9 eq)로 처리하였다. 현탁액을 실온에서 16시간 동안 반응이 완료될 때까지 교반하였다. 조 생성물을 감압하에 농축시키고 DMSO(5 mL)로 희석시켰다. 조 생성물을 ISCO 150g C18 컬럼(용출제: 수 중 10 - 95% MeCN, AcOH 중 0.05%)를 통해 정제하였다. 순수한 분획을 합하고 동결건조시켜 368 mg(44%)의 화합물 18을 백색 고체로서 수득하였다. MS (ESI, pos.): C28H40N6O7에 대한 계산치, 572.30; 실측치 573.6 (M+H), (2M+H), 1145.9. 1H NMR (500 MHz; DMSO-d6): δ 9.89 (s, 1H), 8.05 (d, J = 7.33 Hz, 1H), 7.81 (d, J = 8.79 Hz, 1H), 7.52 - 7.57 (m, J = 8.79 Hz, 2H), 7.21 - 7.26 (m, J = 8.79 Hz, 2H), 6.99 - 7.02 (m, 2H), 5.98 (br. s., 1H), 5.40 (s, 2H), 5.10 (t, J = 5.62 Hz, 1H), 4.35 - 4.45 (m, 3H), 4.18 (dd, J = 6.84, 8.30 Hz, 1H), 3.26 - 3.33 (m, 2H), 2.91 - 3.06 (m, 2H), 2.08 - 2.22 (m, 2H), 1.93 - 2.01 (m, 1H), 1.66 - 1.74 (m, 1H), 1.59 (dd, J = 4.40, 9.28 Hz, 1H), 1.43 - 1.55 (m, 5H), 1.32 - 1.43 (m, 1H), 1.19 (quin, J = 7.57 Hz, 2H), 0.84 (d, J = 8.30 Hz, 3H), 0.80 - 0.89 (m, 3H).
화합물 19 의 합성 . 18(100 mg, 0.174 mmol, 1.0 eq)의 교반된 현탁액에 실온에서 SOCl2(14 μL, 0.192 mmol, 1.1 eq)를 미세 주사기를 사용하여 서서히 가하였다. 슬러리 반응 혼합물을 1.5 시간 동안 교반하고, LC/MS로 분석한 분취량은 목적물의 형성을 나타내었다. 조 혼합물을 농축시켜 모든 휘발물을 감압하에 제거하였다. 혼합물을 2 mL의 DMSO로 희석시키고 ISCO C18 Aq 50g 컬럼 위에 정제(수 중 10 - 95% MeCN, 0.05% AcOH)를 위해 로딩시켰다. 순수한 분획을 합하고 동결건조시켜 72 mg(71%)의 19를 회백색 고체로서 수득하였다. MS (ESI, pos.): C28H39ClN6O6에 대한 계산치, 590.26; 실측치 591.3 (M+H), 1181.5 (2M+H). 1H NMR (500 MHz; DMSO-d6) δ 10.03 (s, 1H), 8.03 - 8.11 (m, 1H), 7.79 (d, J = 8.30 Hz, 1H), 7.57 - 7.63 (m, J = 8.79 Hz, 2H), 7.34 - 7.38 (m, J = 8.79 Hz, 2H), 6.99 - 7.02 (m, 2H), 5.97 (br. s., 1H), 5.40 (br. s., 2H), 4.71 (s, 2H), 4.34 - 4.43 (m, 2H), 4.16 - 4.21 (m, 1H), 3.36 - 3.42 (m, 3H), 2.90 - 3.06 (m, 3H), 2.07 - 2.22 (m, 3H), 1.91 - 2.00 (m, 1H), 1.66 - 1.73 (m, 1H), 1.31 - 1.41 (m, 1H), 1.18 (quin, J = 7.69 Hz, 3H), 0.79 - 0.89 (m, 7H).
화합물 20 의 합성 . 2 그램의 바이알 속의 19(13.5 mg, 0.0228 mmol, 1.2 eq), 16a(16.6 mg, 0.0190 mmol, 1.0 eq), 및 NaI(14.2 mg, 0.095 mmol)의 혼합물을 1 mL의 무수 DMF 속에 용해시켰다. DMF 중 촉매량(10 μL)의 0.5 M DIPEA 용액을 주사기로 가하였다. 혼합물을 오일 욕 속에서 밤새 55℃에서 가열하였다. 반응을 LC/MS로 완료시켜 목적한 생성물을 수득하였다. 혼합물을 4℃로 냉각시키고 1 mL의 물로 희석시켰다. 여과 후, 암색 조 혼합물을 EZ 제조 HPLC 컬럼(Gemini, 5μm, 150 mm x 30 mm, 용출제: 수 중 10 - 95% MeCN, 0.05% AcOH) 위에 로딩하였다. 순수한 분획을 합하고 동결건조시켜 14.6 mg (55%)의 20을 암적색 고체로서 수득하였다. MS (ESI, pos.): C75H96N9O19+에 대한 계산치, 1426.68; 실측치 1427.3 (M+1) 및 1425.5 (M-1). 1H NMR (500 MHz; DMSO-d6) δ 10.25 (s, 1H), 8.19 (d, J = 6.84 Hz, 1H), 7.82 (d, J = 8.30 Hz, 2H), 7.76 (d, J = 8.79 Hz, 3H), 7.50 (d, J = 8.30 Hz, 3H), 7.00 (s, 2H), 6.12 (d, J = 12.70 Hz, 1H), 6.03 (br. s., 1H), 5.43 (s, 2H), 4.70 - 4.80 (m, 2H), 4.58 (br. s., 3H), 4.36 - 4.41 (m, 1H), 4.18 (t, J = 7.82 Hz, 1H), 3.77 (br. s., 2H), 3.36 - 3.45 (m, 8H), 3.13 (d, J = 8.30 Hz, 1H), 2.89 - 3.06 (m, 12H), 2.78 (t, J = 9.04 Hz, 1H), 2.06 - 2.22 (m, 3H), 2.03 (br. s., 1H), 1.91 - 2.00 (m, 10H), 1.85 (s, 3H), 1.66 - 1.74 (m, 1H), 1.56 - 1.64 (m, 6H), 1.42 - 1.56 (m, 8H), 1.38 (d, J = 6.84 Hz, 2H), 1.15 - 1.25 (m, 3H), 0.75 - 0.88 (m, 14H), 0.07 (s, 1H).
링커-페이로드 화합물 25를 하기 반응식 24에 나타낸 바와 같이, 및 하기 기술된 바와 같이 제조하였다.
반응식 24
Figure pct00493
화합물 23 의 합성 . 무수 DMF(1.5 mL) 중 22(100 mg, 0.144 mmol) 및 18b(82 mg, 0.217 mmol)의 혼합물에 이후 DIEA(50 μL, 0.288 mmol)로 미세 주사기를 통해 처리하였다. 반응 혼합물을 2시간 동안 실온에서 교반하고 측정하여 LC/MS로 23을 수득하였다. 조 혼합물을 ISCO C18 100g Aq 컬럼(용출제: 수 중 10 - 95% MeCN, AcOH 중 0.05%)으로 정제하고, 순수한 분획을 합하고 동결건조시켜 84.4 mg(62%)의 23을 수득하였다. MS (ESI, pos.): C44H71N7O16에 대한 계산치, 953.50; 실측치 954.4 (M+H), 976.4 (M+Na), 952.4 (M-H). 1H NMR (500 MHz; DMSO-d6) δ 9.88 (s, 1H), 8.08 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 8.00 (s, 1H), 7.86 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.55 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.23 (d, J = 8.3 Hz, 2H), 7.00 (s, 2H), 5.98 (s, 1H), 5.40 (s, 1H), 4.43 (s, 2H), 4.39 (d, J = 5.4 Hz, 1H), 4.23 (dd, J = 8.3, 6.8 Hz, 2H), 3.60 (d, J = 6.9 Hz, 6H), 3.44 - 3.54 (m, 30H), 3.37 (t, J = 5.8 Hz, 3H), 3.15 (d, J = 5.7 Hz, 2H), 2.99 (d, J = 29.6 Hz, 2H), 2.33 (t, J = 7.3 Hz, 3H), 1.98 (d, J = 6.7 Hz, 1H), 1.71 - 1.70 (m, 1H), 1.61 - 1.58 (m, 1H), 1.44 - 1.36 (m, 2H), 0.85 (dd, J = 15.5, 6.7 Hz, 7H).
화합물 24 의 합성 . 바이알 중 23(15 mg, 0.0157 mmol, 1.0 eq)의 교반 현탁액에 실온에서 SOCl2(1.3 μL, 0.0173 mmol, 1.1 eq)를 미세 주사기를 통해 서서히 가하였다. 1시간 후, LC/MS로 분석한 분취량은 목적한 생성물의 형성을 나타내었다. 조 혼합물을 농축시켜 모든 휘발물을 감압하에 제거하였다. 조 혼합물을 0.8 mL의 MeCN으로 희석시키고 EZ 제조 HPLC 컬럼 상에 로딩하고 용출(Gemini, 5μm, 150 mm x 30 mm, 용출제: 수 중 10 - 95% MeCN, 0.05% AcOH)시켰다. 순수한 분획을 합하고 동결건조시켜 9.5 mg(63%)의 24를 회백색 고체로서 수득하였다. MS (ESI, pos.): C44H70ClN7O15에 대한 계산치, 971.46; 실측치 972.4 (M+H), 994.4 (M+Na), 970.3 (M-1).
링커-페이로드 화합물 25 의 합성 . 1 드램의 바아일 중 24(9.5 mg, 0.00976 mmol, 1.0 eq), 16a (8.51 mg, 0.00976 mmol, 1.0 eq), 및 NaI(7.3 mg, 0.0488 mmol)의 혼합물을 1 mL의 무수 DMF 속에 용해하였다. DMF 중 촉매량(20 μL)의 0.5M DIEA 용액을 주사기로 가하였다. 혼합물을 빙 욕 속에서 55℃에서 밤새 교반하였다. 반응을 LC/MS로 완료시키고 목적한 생성물을 수득하였다. 혼합물을 빙욕 속에 냉각시키고 1 mL의 물로 희석시켰다. 여과 후, 암색 조 혼합물을 EZ 제조 HPLC 컬럼(Gemini, 5μm, 150 mm x 30 mm, 용출제: 수 중 10 - 95% MeCN, 0.05% AcOH)으로 정제하였다. 순수한 분획을 합하고 동결건조시켜 7.4 mg(42%)의 25을 암적색 고체로서 수득하였다. MS (ESI, pos.): C91H127N10O28 +에 대한 계산치, 1807.88; 실측치 1808.8 (M+H) 및 1806.5 (M-1). 1H NMR (500 MHz; DMSO-d6) δ 10.23 (s, 1H), 8.22-8.17 (m, 1H), 8.03-7.98 (m, 1H), 7.86 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.75 (d, J = 8.2 Hz, 4H), 7.50 (d, J = 8.3 Hz, 3H), 7.00 (s, 2H), 6.01 (s, 1H), 5.76 (s, 1H), 5.43 (s, 1H), 4.80-4.80 (m, 1H), 4.58 (s, 1H), 4.43-4.41 (m, 1H), 4.27-4.23 (m, 1H), 3.76 (t, J = 0.6 Hz, 2H), 3.59 (t, J = 7.3 Hz, 5H), 3.49 (d, J = 2.9 Hz, 54H), 3.14 (d, J = 5.8 Hz, 4H), 3.03 (s, 8H), 2.90 (t, J = 0.7 Hz, 3H), 2.77 (d, J = 0.7 Hz, 1H), 2.33 (t, J = 7.3 Hz, 4H), 2.08 (d, J = 6.1 Hz, 4H), 1.94 (d, J = 18.9 Hz, 10H), 1.83 (s, 5H), 1.59 (s, 8H), 0.85 (dd, J = 16.1, 6.7 Hz, 8H).
링커-페이로드 화합물 36을 하기 반응식 25에 나타내고 하기 기술된 바와 같이 제조하였다.
반응식 25
Figure pct00494
화합물 36 : 1 드램의 바이알(dram vial) 중 24(14.4 mg, 0.00149 mmol, 1.2 eq), 16a(11.0 mg, 0.00123 mmol, 1.0 eq), 및 NaI(9.1mg, 0.0615 mmol)의 혼합물을 1 mL의 무수 DMF 속에 용해하였다. DMF(10 μL) 중 촉매량의 0.5M DIEA 용액을 주사기를 통해 가하였다. 혼합물을 55℃에서 오일 욕 속에서 밤새 교반하였다. LC/MS 검정시 반응이 완료되고 목적한 생성물을 수득하였다. 혼합물을 빙욕 속에서 냉?B키고 0.5 mL의 물로 희석시켰다. 여과 후, 암색 조 혼합물을 EZ 제조 HPLC 컬럼(Gemini, 5μm, 150 mm x 30 mm, 용출제: 수 중 10 - 95% MeCN, 0.05% AcOH)으로 정제하였다. 순수한 분획을 수집하고, 동결시키고, 동결건조시켜 11.7 mg(53%)의 36을 암적색 고체로서 수득하였다. MS (ESI, pos.): C91H127N10O29 +에 대한 계산치, 1823.88; 실측치 1824.8 (M+H) 및 1821.7 (M-1). 1H NMR (500 MHz; DMSO-d6): δ 10.22 (s, 1H), 8.85 (d, J = 0.8 Hz, 1H), 8.18-8.17 (m, 1H), 8.01 (s, 1H), 7.86 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.75-7.73 (m, 2H), 7.49-7.47 (m, 2H), 7.00 (s, 2H), 6.28 (dd, J = 9.9, 0.9 Hz, 1H), 6.21 (dd, J = 12.4, 0.6 Hz, 1H), 6.00-5.98 (m, 1H), 5.86 (s, 1H), 5.48 (s, 1H), 5.42 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 5.04-4.99 (m, 1H), 4.72-4.69 (m, 1H), 4.58-4.50 (m, 3H), 4.40-4.38 (m, 1H), 4.25-4.22 (m, 1H), 3.89-3.87 (m, 1H), 3.73-3.70 (m, 4H), 3.62-3.58 (m, 7H), 3.54-3.47 (m, 29H), 3.36 (t, J = 5.8 Hz, 7H), 3.15 (d, J = 5.7 Hz, 4H), 3.03-2.98 (m, 4H), 2.85 (s, 3H), 2.66 (d, J = 23.9 Hz, 3H), 2.34 (dd, J = 16.4, 9.2 Hz, 4H), 2.12-2.05 (m, 3H), 1.92 (d, J = 18.7 Hz, 13H), 1.67 (s, 3H), 1.61 (t, J = 0.6 Hz, 3H), 1.47-1.37 (m, 3H), 1.24 (d, J = 0.6 Hz, 1H), 0.88-0.78 (m, 8H), 0.78-0.65 (m, 4H), 0.17-0.16 (m, 1H), 0.07 (s, 1H), -0.41 (td, J = 2.5, 0.9 Hz, 1H).
링커-페이로드 화합물 25a를 하기 반응식 26에 나타내고 하기 기술된 바와 같이 제조하였다.
반응식 26
Figure pct00495
화합물 23a 의 합성 . 무수 DMF(1.5 mL) 중 22a(100 mg, 0.144 mmol) 및 18b(82 mg, 0.217 mmol)의 혼합물을 이후 DIEA(50 μL, 0.288 mmol)로 미세 주사기를 통해 처리하였다. 반응 혼합물을 2시간 동안 실온에서 교반하고 LC/MS로 측정하여 23a를 수득하였다. 조 혼합물을 ISCO C18 100g Aq 컬럼(용출제: 수 중 10 - 95% MeCN, AcOH 중 0.05%)으로 정제하고, 순수한 분획을 합하고 동결건조시켜 84.4 mg(62%)의 23을 수득하였다. MS (ESI, pos.): C44H71N7O16에 대한 계산치, 953.50; 실측치 954.4 (M+H), 976.4 (M+Na), 952.4 (M-H). 1H NMR (500 MHz; DMSO-d6) δ 9.88 (s, 1H), 8.08 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 8.00 (s, 1H), 7.86 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.55 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.23 (d, J = 8.3 Hz, 2H), 7.00 (s, 2H), 5.98 (s, 1H), 5.40 (s, 1H), 4.43 (s, 2H), 4.39 (d, J = 5.4 Hz, 1H), 4.23 (dd, J = 8.3, 6.8 Hz, 2H), 3.60 (d, J = 6.9 Hz, 6H), 3.44 - 3.54 (m, 30H), 3.37 (t, J = 5.8 Hz, 3H), 3.15 (d, J = 5.7 Hz, 2H), 2.99 (d, J = 29.6 Hz, 2H), 2.33 (t, J = 7.3 Hz, 3H), 1.98 (d, J = 6.7 Hz, 1H), 1.71 - 1.70 (m, 1H), 1.61 - 1.58 (m, 1H), 1.44 - 1.36 (m, 2H), 0.85 (dd, J = 15.5, 6.7 Hz, 7H).
화합물 24a 의 합성 . 바이알 중 23a(15 mg, 0.0157 mmol, 1.0 eq)의 교반 현탁액에 실온에서 SOCl2(1.3 μL, 0.0173 mmol, 1.1 eq)를 미세 주사기를 통해 가하였다. 1시간 후, LC/MS로 분석한 분취량은 목적한 생성물의 형성을 나타내었다. 조 혼합물을 농축시켜 모든 휘발물을 감압하에 제거하였다. 조 혼합물을 0.8 mL의 MeCN으로 희석시키고 EZ 제조 HPLC 컬럼 위에 로딩하고 용출시켰다(Gemini, 5μm, 150 mm x 30 mm, 용출제: 수 중 10 - 95% MeCN, 0.05% AcOH). 순수한 분획을 합하고 동결건조시켜 9.5 mg(63%)의 24를 회백색 고체로서 수득하였다. MS (ESI, pos.): C44H70ClN7O15에 대한 계산치, 971.46; 실측치 972.4 (M+H), 994.4 (M+Na), 970.3 (M-1).
링커-페이로드 화합물 25a 의 합성 1 드램의 바이알 중 24a(9.5 mg, 0.00976 mmol, 1.0 eq), 16a(8.51 mg, 0.00976 mmol, 1.0 eq), 및 NaI(7.3 mg, 0.0488 mmol)의 혼합물에 1 mL의 무수 DMF를 용해하였다. DMF 중 촉매량(20 μL)의 0.5M DIEA 용액을 주사기로 가하였다. 혼합물을 빙욕 속에서 밤새 55℃에서 가열하였다. 반응을 LC/MS로 완료하여 목적한 생성물을 수득하였다. 혼합물을 빙 욕 속에 냉각시키고 1 mL의 물로 희석시켰다. 여과 후, 암색 조 혼합물을 EZ 제조 HPLC 컬럼(Gemini, 5μm, 150 mm x 30 mm, 용출제: 수 중 10 - 95% MeCN, 0.05% AcOH)으로 정제하였다. 순수한 분획을 합하고 동결건조시켜 7.4 mg(42%)의 25를 암적색 고체로서 수득하였다. MS (ESI, pos.): C91H127N10O28 +에 대한 계산치, 1807.88; 실측치 1808.8 (M+H) 및 1806.5 (M-1). 1H NMR (500 MHz; DMSO-d6) δ 10.23 (s, 1H), 8.22-8.17 (m, 1H), 8.03-7.98 (m, 1H), 7.86 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.75 (d, J = 8.2 Hz, 4H), 7.50 (d, J = 8.3 Hz, 3H), 7.00 (s, 2H), 6.01 (s, 1H), 5.76 (s, 1H), 5.43 (s, 1H), 4.80-4.80 (m, 1H), 4.58 (s, 1H), 4.43-4.41 (m, 1H), 4.27-4.23 (m, 1H), 3.76 (t, J = 0.6 Hz, 2H), 3.59 (t, J = 7.3 Hz, 5H), 3.49 (d, J = 2.9 Hz, 54H), 3.14 (d, J = 5.8 Hz, 4H), 3.03 (s, 8H), 2.90 (t, J = 0.7 Hz, 3H), 2.77 (d, J = 0.7 Hz, 1H), 2.33 (t, J = 7.3 Hz, 4H), 2.08 (d, J = 6.1 Hz, 4H), 1.94 (d, J = 18.9 Hz, 10H), 1.83 (s, 5H), 1.59 (s, 8H), 0.85 (dd, J = 16.1, 6.7 Hz, 8H).
링커-페이로드 화합물 36a를 하기 반응식 27에 나타내고 하기 기술된 바와 같이 제조하였다.
반응식 27
Figure pct00496
화합물 36a : 1 드램의 바이알 중 24a(14.4 mg, 0.00149 mmol, 1.2 eq), 16a(11.0 mg, 0.00123 mmol, 1.0 eq), 및 NaI(9.1mg, 0.0615 mmol)의 혼합물을 1 mL의 무수 DMF 속에 용해하였다. DMF(10 μL) 중 촉매량의 0.5M DIEA 용액을 주사기를 통해 가하였다. 혼합물을 오일 욕 속에서 밤새 55℃에서 가열하였다. LC/MS에 의한 분석시 반응을 완료하여 목적한 생성물을 수득하였다. 혼합물을 빙욕 속에서 냉각시키고 0.5 mL의 물로 희석시켰다. 여과 후, 암색 조 홈합물을 EZ 제조 HPLC 컬럼(Gemini, 5μm, 150 mm x 30 mm, 용출제: 수 중 10 - 95% MeCN, 0.05% AcOH)으로 정제하였다. 순수한 분획을 수집하고, 동결시키고, 동결건조시켜 11.7 mg(53%)의 36을 암적색 고체로서 수득하였다. MS (ESI, pos.): C91H127N10O29 +에 대한 계산치, 1823.88; 실측치 1824.8 (M+H) 및 1821.7 (M-1). 1H NMR (500 MHz; DMSO-d6): δ 10.22 (s, 1H), 8.85 (d, J = 0.8 Hz, 1H), 8.18-8.17 (m, 1H), 8.01 (s, 1H), 7.86 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.75-7.73 (m, 2H), 7.49-7.47 (m, 2H), 7.00 (s, 2H), 6.28 (dd, J = 9.9, 0.9 Hz, 1H), 6.21 (dd, J = 12.4, 0.6 Hz, 1H), 6.00-5.98 (m, 1H), 5.86 (s, 1H), 5.48 (s, 1H), 5.42 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 5.04-4.99 (m, 1H), 4.72-4.69 (m, 1H), 4.58-4.50 (m, 3H), 4.40-4.38 (m, 1H), 4.25-4.22 (m, 1H), 3.89-3.87 (m, 1H), 3.73-3.70 (m, 4H), 3.62-3.58 (m, 7H), 3.54-3.47 (m, 29H), 3.36 (t, J = 5.8 Hz, 7H), 3.15 (d, J = 5.7 Hz, 4H), 3.03-2.98 (m, 4H), 2.85 (s, 3H), 2.66 (d, J = 23.9 Hz, 3H), 2.34 (dd, J = 16.4, 9.2 Hz, 4H), 2.12-2.05 (m, 3H), 1.92 (d, J = 18.7 Hz, 13H), 1.67 (s, 3H), 1.61 (t, J = 0.6 Hz, 3H), 1.47-1.37 (m, 3H), 1.24 (d, J = 0.6 Hz, 1H), 0.88-0.78 (m, 8H), 0.78-0.65 (m, 4H), 0.17-0.16 (m, 1H), 0.07 (s, 1H), -0.41 (td, J = 2.5, 0.9 Hz, 1H).
링커-페이로드 화합물 80을 하기 반응식 28에 나타내고 하기 기술된 바와 같이 제조하였다.
반응식 28
Figure pct00497
화합물 77 : 무수 DMF(1.5 mL) 중 상업적으로 이용가능한 화합물 76(100 mg, 0.131 mmol) 및 18b(71 mg, 0.144 mmol)의 용액에 DIEA(34 μL, 0.197 mmol)를 미세 주사기를 통해 가하였다. 반응 혼합물을 1시간 동안 실온에서 교반하였다. 반응을 LC/MS로 완료시키고 진공하에 농축시켰다. 조 생성물을 ISCO 시스템으로 C18 100g Aq 컬럼(용출제: 수 중 10 - 95% MeCN, AcOH 중 0.05%)을 사용하여 정제하였다. LC/MS에 의한 순수한 분획을 수집하고 드라이아이스/아세톤 욕 속에서 동결시키고, 24시간 동안 동결건조시켜 114 mg(85%)의 77을 수득하였다. MS(ESI, pos.): C52H76N6O15에 대한 계산치, 1024.54; 실측치 1025.5 (M+H), 1047.4 (M+Na).
화합물 78 : 1.5 mL의 무수 DCM 중 77(46 mg, 0.0448 mmol, 1.0 eq)의 교반 현탁액에 실온에서 SOCl2(3.6 μL, 0.0493 mmol, 1.1 eq)를 미세 주사기를 사용하여 서서히 가하였다. 30분 후, 공정 중 분취량을 LC/MS로 분석하여 목적한 생성물의 형성을 나타내었다. 조 혼합물을 진공 속에서 농축시키고 1 mL의 MeCN으로 희석하였다. 용액을 ISCO 시스템 C18 50g Ag 컬럼(용출제: 수 중 10 - 95% MeCN, 0.05% AcOH)으로 정제하였다. 순수한 분획을 수집하고, 드라이아이스/아세톤 욕 속에서 냉각시키고, 동결건조시켜 40 mg(85%)의 77을 회백색 고체로서 수득하였다. MS (ESI, pos.): C52H75ClN6O14에 대한 계산치, 1042.50; 실측치 1043.4 (M+H), 1065.4 (M+Na).
화합물 79 : 2 드램 바이알 중 78(35 mg, 0.0337 mmol, 1.2 eq), 29(25 mg, 0.0281 mmol, 1.0 eq), 및 NaI(21 mg, 0.145 mmol, 5.0 eq.)의 혼합물에 1.5 mL의 무수 DMF를 가하였다. DMF(20 μL) 중 촉매량의 0.5M DIEA 용액을 격막을 통해 주사기로 가하였다. 혼합물을 오일 욕 속에서 밤새 55℃에서 가열하였다. LC/MS로 반응을 완료시키고 목적한 생성물을 수득하였다. 혼합물을 빙욕 속에 냉각시키고 1 mL의 물로 희석시켰다. 여과 후, 암색 조 혼합물을 EZ 제조 HPLC 컬럼(Gemini, 5μm, 150 mm x 30 mm, 용출제: 수 중 10 - 95% MeCN, 0.05% AcOH)으로 정제하였다. 순수한 분획을 수집하고, 드라이아이스/아세톤 욕 속에서 동결시키고, 동결건조시켜 42 mg(79%)의 79를 암적색 고체로서 수득하였다 MS (ESI, pos.): C99H132N9O28 +에 대한 계산치, 1894.92; 실측치 1895.9 (M+H). 1H-NMR (500 MHz; DMSO-d6): δ 10.22 (s, 1H), 8.85 (s, 1H), 8.19-8.17 (m, 1H), 7.89-7.84 (m, 2H), 7.74-7.73 (m, 2H), 7.70-7.68 (m, 2H), 7.48-7.46 (m, 2H), 7.41 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 7.32 (t, J = 7.4 Hz, 2H), 6.91-6.87 (m, 1H), 6.28-6.26 (m, 1H), 6.20 (dd, J = 12.8, 0.7 Hz, 1H), 6.09-6.07 (m, 1H), 6.06-5.97 (m, 2H), 5.85 (t, J = 0.7 Hz, 1H), 5.72-5.65 (m, 1H), 5.48 (d, J = 0.7 Hz, 1H), 5.42 (s, 3H), 5.23-5.22 (m, 1H), 5.04-4.98 (m, 2H), 4.71-4.69 (m, 1H), 4.51 (t, J = 0.8 Hz, 6H), 4.39-4.38 (m, 12H), 4.29 (d, J = 6.9 Hz, 3H), 4.23-4.20 (m, 2H), 3.87 (dd, J = 8.2, 1.1 Hz, 1H), 3.70 (dd, J = 1.7, 0.9 Hz, 4H), 3.59 (d, J = 5.7 Hz, 4H), 3.46 (s, 12H), 3.40 (d, J = 5.8 Hz, 3H), 3.13-3.11 (m, 2H), 3.03-2.97 (m, 6H), 2.85 (s, 3H), 2.68 (dd, J = 1.3, 0.8 Hz, 2H), 2.63 (d, J = 1.7 Hz, 5H), 2.36 (dd, J = 3.5, 1.7 Hz, 4H), 2.22-2.18 (m, 1H), 2.12 (s, 3H), 2.05 (dd, J = 1.4, 0.7 Hz, 1H), 1.98-1.93 (m, 3H), 1.86 (s, 1H), 1.67 (s, 1H), 1.60 (t, J = 0.8 Hz, 3H), 1.45-1.44 (m, 2H), 1.38-1.37 (m, 1H), 1.24-1.20 (m, 1H), 0.85 (dd, J = 16.5, 6.6 Hz, 2H), 0.78-0.76 (m, 3H), 0.70-0.60 (m, 2H), 0.17-0.16 (m, 2H), -0.42 (dd, J = 5.2, 0.8 Hz, 2H).
화합물 80 : 2 mL의 DMF 중 화합물 79(25 mg, 0.0131 mmol)의 교반 용액에 DMF 중 5% 피페리딘(400 μL)을 가하고 반응물을 주위 온도에서 가열하였다. 1시간 후, LC/MS로 반응을 완료시켰다. 이후에, 조 물질을 EZ 제조 HPLC 컬럼(Gemini, 5μm, 150 mm x 30 mm, 용출제: 수 중 10 - 95% MeCN, 0.05% AcOH)으로 정제하였다. 순수한 분획을 수집하고, 드라이아이스/아세톤 욕 속에서 동결시키고, 동결건조시켜 18.6 mg(82%)의 80을 적색 고체로서 수득하였다. MS (ESI, pos.): C84H122N9O26 +에 대한 계산치, 1672.85(유리 염기); 실측치 1673.8 (M+H). 1H-NMR (500 MHz; DMSO-d6): δ 10.26 (s, 1H), 8.85 (d, J = 0.9 Hz, 1H), 8.23 (dd, J = 6.3, 0.4 Hz, 1H), 7.89-7.87 (m, 1H), 7.75-7.74 (m, 2H), 7.48-7.47 (m, 2H), 6.90-6.87 (m, 1H), 6.28-6.26 (m, 1H), 6.21-6.19 (m, 1H), 6.04 (t, J = 10.3 Hz, 2H), 5.88-5.85 (m, 1H), 5.74-5.72 (m, 1H), 5.50 (ddt, J = 3.3, 1.0, 0.8 Hz, 1H), 5.43 (s, 2H), 5.03-4.98 (m, 1H), 4.71-4.69 (m, 1H), 4.52 (s, 4H), 4.38 (d, J = 5.4 Hz, 1H), 4.23 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 3.89-3.87 (m, 1H), 3.70 (d, J = 0.7 Hz, 3H), 3.60 (d, J = 5.2 Hz, 4H), 3.48 (s, 24H), 3.00-2.97 (m, 12H), 2.85 (s, 2H), 2.64 (s, 2H), 2.39-2.36 (m, 1H), 2.23-2.20 (m, 1H), 2.11 (d, J = 0.4 Hz, 3H), 1.93 (s, 9H), 1.83 (s, 3H), 1.67-1.60 (m, 6H), 1.46-1.38 (m, 3H), 1.24 (s, 1H), 0.85 (dd, J = 16.2, 6.6 Hz, 12H), 0.76 (d, J = 8.3 Hz, 5H), 0.15-0.15 (m, 2H), 0.07 (s, 1H), -0.40 (d, J = 1.9 Hz, 1H).
링커-페이로드 화합물 82를 하기 반응식 29에 나타내고 하기 기술된 바와 같이 제조하였다.
반응식 29
Figure pct00498
화합물 81 : 2 드램의 바이알 중 78(43 mg, 0.0414 mmol, 1.0 eq), 16a(36 mg, 0.0412 mmol, 1.0 eq), 및 NaI(30 mg, 0.206 mmol, 5.0 eq.)의 혼합물을 2 mL의 무수 DMF 속에 용해하였다. DMF 중 촉매량(20 μL)의 0.5M DIEA 용액을 주사기를 통해 가하였다. 혼합물을 빙욕 속에서 밤새 55℃에서 가열하였다. LC/MS로 반응을 완료시켰다. 혼합물을 빙욕 속에 냉각시키고 1 mL의 물로 희석시켰다. 여과 후, 암색 조 혼합무를 EZ 제조 HPLC 컬럼(Gemini, 5μm, 150 mm x 30 mm, 용출제: 수 중 10 - 95% MeCN, 0.05% AcOH)으로 정제하였다. 순수한 분획을 수집하고, 드라이아이스/아세톤 욕 속에 동결시키고, 동결건조시켜 48 mg (62%)의 81을 암적색 고체로서 수득하였다. MS (ESI, pos.): C99H132N9O27 +에 대한 계산치, 1878.92; 실측치 1879.9 (M+H). 1H-NMR (500 MHz; DMSO-d6): δ 10.35 (s, 1H), 8.86-8.81 (m, 1H), 8.34-8.33 (m, 1H), 7.93 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 7.89 (t, J = 12.9 Hz, 3H), 7.75 (d, J = 8.7 Hz, 3H), 7.68 (d, J = 7.5 Hz, 2H), 7.48 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 7.40 (t, J = 7.4 Hz, 2H), 7.31 (td, J = 7.4, 0.8 Hz, 3H), 7.05-7.03 (m, 1H), 6.81-6.74 (m, 1H), 6.70-6.67 (m, 1H), 6.22-6.19 (m, 1H), 6.13-6.08 (m, 2H), 5.44 (s, 2H), 5.12-5.09 (m, 1H), 4.75 (dd, J = 12.8, 8.4 Hz, 1H), 4.71-4.68 (m, 1H), 4.56 (s, 3H), 4.37-4.35 (m, 1H), 4.28 (d, J = 6.9 Hz, 2H), 4.20 (dd, J = 9.5, 2.8 Hz, 2H), 3.75 (s, 3H), 3.58 (d, J = 5.5 Hz, 4H), 3.49-3.46 (m, 32H), 3.12 (d, J = 6.0 Hz, 4H), 3.02 (s, 8H), 2.88 (d, J = 0.4 Hz, 3H), 2.78-2.74 (m, 1H), 2.62 (quintet, J = 1.8 Hz, 1H), 2.37-2.34 (m, 1H), 1.95-1.91 (m, 10H), 1.74 (s, 5H), 1.58 (s, 5H), 1.45-1.43 (m, 2H), 1.37-1.34 (m, 1H), 0.83 (dd, J = 16.3, 6.8 Hz, 13H), 0.29 (s, 1H), 0.21-0.16 (m, 2H), 0.03-0.02 (m, 1H).
화합물 82 : 1.5 mL의 DMF 중 화합물 81(26 mg, 0.0138 mmol)의 교반 용액에 DMF 중 5% 피페리딘(500 μL)의 용액을 가하고 반응물을 주위 온도에서 교반하였다. 50분 후, 반응을 LC/MS로 완료하였다. 이후에, 조 물질을 EZ 제조 HPLC 컬럼(Gemini, 5μm, 150 mm x 30 mm, 용출제: 수 중 10 - 95% MeCN, 0.05% AcOH)으로 정제하였다. 순수한 분획을 수집하고, 드라이아이스/아세톤 욕 속에서 동결시키고, 동결건조시켜 17.6 mg(77%)의 82을 적색 고체로서 수득하였다. MS (ESI, pos.): C84H122N9O25 +에 대한 계산치, 1656.85 (유리 염기); 실측치 1658.7 (M+H), 1655.7 (M-H). 1H-NMR (500 MHz; DMSO-d6): δ 10.25 (d, J = 1.1 Hz, 1H), 8.26-8.17 (m, 1H), 7.89-7.87 (m, 1H), 7.75 (d, J = 8.4 Hz, 3H), 7.49 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.08-7.05 (m, 1H), 6.12-6.09 (m, 1H), 6.04-6.01 (m, 1H), 5.42 (s, 2H), 5.13-5.09 (m, 1H), 4.76 (dd, J = 12.6, 8.7 Hz, 1H), 4.70 (dq, J = 3.2, 1.0 Hz, 1H), 4.57 (s, 3H), 4.37-4.36 (m, 1H), 4.23-4.20 (m, 1H), 3.75 (s, 2H), 3.58 (t, J = 5.5 Hz, 3H), 3.48 (t, J = 1.9 Hz, 32H), 3.14-3.07 (m, 3H), 3.02 (d, J = 9.5 Hz, 10H), 2.96-2.93 (m, 4H), 2.91-2.87 (m, 4H), 2.78-2.76 (m, 1H), 2.63-2.62 (m, 3H), 2.38-2.35 (m, 1H), 1.95 (dd, J = 3.4, 0.7 Hz, 8H), 1.92 (s, 3H), 1.83 (s, 3H), 1.68 (dd, J = 2.2, 1.6 Hz, 1H), 1.59 (s, 5H), 1.45-1.43 (m, 2H), 1.38-1.35 (m, 1H), 1.22 (s, 1H), 0.84 (dt, J = 12.6, 5.0 Hz, 10H), 0.79-0.77 (m, 2H), 0.06-0.01 (m, 1H).
링커-페이로드 화합물 84를 하기 반응식 30에 나타내고 하기 기술된 바와 같이 제조하였다.
반응식 30
Figure pct00499
화합물 84 : 무수 2.5 mL DMF 중 상업적으로 이용가능한 화합물 83(14 mg, 0.0186 mmol, 1.5 eq.) 및 화합물 14(11 mg, 0.0124 mmol, 1.0 eq.)의 교반된 용액에 DIEA(4.3 μL, 0.0248 mmol, 2.0 eq.)를 가하고 반응물을 주위 온도에서 교반하였다. 15분 후, 반응을 LC/MS로 완료하였다. 이후에, 조 물질을 EZ 제조 HPLC 컬럼(Gemini, 5μm, 150 mm x 30 mm, 용출제: 수 중 10 - 95% MeCN, 0.05% AcOH)으로 정제하였다. 순수한 분획을 수집하고, 드라이아이스/아세톤 욕 속에서 동결시키고, 동결건조시켜 11.4 mg(64%)의 84를 갈색 고체로서 수득하였다. MS (ESI, pos.): C77H95N9O21에 대한 계산치, 1481.66; 실측치 1482.6 (M+H), 1480.6 (M-H). 1H-NMR (500 MHz; DMSO-d6): δ 9.99 (s, 1H), 8.08 (d, J = 7.33 Hz, 1H), 7.87 (br. s., 1H), 7.80 (d, J = 8.30 Hz, 1H), 7.60 (d, J = 8.30 Hz, 2H), 7.24 - 7.34 (m, 3H), 7.21 (d, J = 8.79 Hz, 1H), 7.00 (s, 2H), 5.95 - 6.00 (m, 1H), 5.81 (br. s., 1H), 5.40 (s, 2H), 5.02 (s, 2H), 4.91 (br. s., 1H), 4.79 (br. s., 1H), 4.35 - 4.41 (m, 1H), 4.19 (t, J = 7.57 Hz, 2H), 3.73 (br. s., 2H), 3.38 (br. s., 2H), 3.08 (s, 3H), 3.10 (s, 3H), 2.82 - 3.05 (m, 6H), 2.78 (br. s., 1H), 2.64 (br. s., 1H), 2.54 (br. s., 1H), 2.37 (d, J = 4.40 Hz, 6H), 2.25 (br. s., 1H), 2.02 - 2.23 (m, 6H), 1.93 - 2.02 (m, 9H), 1.90 (s, 2H), 1.67 (br. s., 5H), 1.60 (br. s., 4H), 1.43 - 1.55 (m, 6H), 1.28 - 1.43 (m, 2H), 1.14 - 1.28 (m, 3H), 0.72 - 0.95 (m, 6H), 0.67 (br. s., 2H), 0.07 (s, 1H).
링커-페이로드 화합물 86을 하기 반응식 31에 나타내고 하기 기술된 바와 같이 제조하였다.
반응식 31
Figure pct00500
화합물 85 : 아르곤 하에 무수 DMF(2.5 mL) 중 화합물 23(85 mg, 0.0894 mmol, 1.0 eq.) 및 비스(4-니트로페닐) 카보네이트(82 mg, 0.2682 mmol, 3.0 eq.)의 교반 용액에 DIEA(31 μL, 0.1788 mmol, 2.0 eq.)를 가하고 반응물을 주위 온도에서 밤새 교반하였다. 반응을 LC/MS 분석으로 완료하였다. 수득되는 혼합물을 100 g의 C18 Aq. 컬럼위에서 ISCO 시스템(구배 용출: 수 중 10 - 100% MeCN, 욕 중 0.05% 아세트산, 30분에 걸쳐) 상에서 정제하였다. 생성물 함유 분획을 합하고, 드라이 아이스 위에서 동결시키고 밤새 동결건조시켜 표제 화합물 85을 암적색 고체(68 mg, 69%)로서 수득하였다. MS: C51H74N8O20에 대한 계산치, 1118.50; 실측치 1120.0 (M+H).
화합물 86 : 표제 화합물을 화합물 84에서의 링커-페이로드 화학을 사용하여 제조하였다. 무수 DMF(1.5 mL) 중 화합물 85(12 mg, 0.01085 mmol, 1.2 eq.) 및 화합물 14(8 mg, 0.00905 mmol, 1.0 eq.)의 교반 용액에 DIEA(3.2 μL, 0.0180 mmol, 2.0 eq.)를 가하고 반응물을 주위 온도에서 교반하였다. 30분 후, 반응을 완료시켜 목적한 생성물을 LC/MS로 수득하였다. 이후에, 조 물질을 EZ 제조 HPLC 컬럼(Gemini, 5μm, 150 mm x 30 mm, 용출제: 수 중 10 - 95% MeCN, 0.05% AcOH)으로 정제하였다. 순수한 분획을 수집하고, 드라이아이스/아세톤 욕 속에서 동결시키고, 동결건조시켜 12.5 mg (74%)의 86을 적색 고체로서 수득하였다. MS (ESI, pos.): C93H126N10O30에 대한 계산치, 1862.86; 실측치 1863.8 (M+H), 1886.8 (M+Na). 1H-NMR (500 MHz; DMSO-d6): δ 9.99 (s, 1H), 9.38 (s, 1H), 8.11 (d, J = 7.33 Hz, 1H), 8.00 (t, J = 5.37 Hz, 1H), 7.86 (d, J = 8.79 Hz, 2H), 7.60 (d, J = 8.30 Hz, 2H), 7.25 - 7.34 (m, 3H), 7.21 (d, J = 8.79 Hz, 1H), 7.00 (s, 2H), 5.97 (t, J = 5.62 Hz, 1H), 5.81 (br. s., 1H), 5.40 (s, 2H), 5.24 (br. s., 1H), 5.02 (s, 2H), 4.91 (br. s., 1H), 4.78 (br. s., 1H), 4.35 - 4.41 (m, 1H), 4.21 - 4.25 (m, 1H), 3.74 (br. s., 2H), 3.53 - 3.69 (m, 5H), 3.43 - 3.53 (m, 38H), 3.34 - 3.39 (m, 3H), 3.29 (br. s., 1H), 3.06 - 3.18 (m, 4H), 2.84 - 3.06 (m, 5H), 2.78 (br. s., 1H), 2.45 - 2.49 (m, 1H), 2.30 - 2.40 (m, 3H), 2.17 (br. s., 2H), 1.93 - 2.05 (m, 9H), 1.90 (s, 1H), 1.72 (br. s., 1H), 1.53 - 1.69 (m, 7H), 1.42 - 1.53 (m, 1H), 1.33 - 1.42 (m, 1H), 0.86 (d, J = 6.84 Hz, 6H), 0.82 (d, J = 6.84 Hz, 6H), 0.67 (br. s., 4H).
링커-페이로드 화합물 89를 하기 반응식 32에 나타내고 하기 기술된 바와 같이 제조하였다.
반응식 32
Figure pct00501
화합물 87 : 표제 화합물을 화합물 85에 대해 기술된 동일한 과정을 사용하여 제조하였다. 아르곤 하에 무수 DMF(1.5 mL) 중 화합물 77(56 mg, 0.0546 mmol, 1.0 eq.) 및 비스(4-니트로페닐) 카보네이트(50 mg, 0.1638 mmol, 3.0 eq.)의 교반 용액에 DIEA(19 μL, 0.1092 mmol, 2.0 eq.)를 가하여 암적색 고체(43 mg, 67%)를 수득하였다. MS: C59H79N7O19에 대한 계산치, 1189.54; 실측치 1190.5 (M+H), 1212.5 (M+Na).
화합물 88 : 표제 화합물을 화합물 86에서의 링커-페이로드 화학을 사용하여 제조하였다. 무수 DMF(3 mL) 중 화합물 87(40.3 mg, 0.039 mmol, 1.0 eq.) 및 화합물 14(30 mg, 0.0339 mmol, 1.0 eq.)의 용액을 실온에서 교반하여 50.7 mg(77%)의 88을 적색 고체로서 수득하였다. MS: C101H131N9O29에 대한 계산치, 1933.91; 실측치 1935.7 (M+H), 1957.8 (M+Na).
화합물 89 : 무수 THF(2.5 mL) 중 화합물 88(34 mg, 0.0175 mmol, 1.0 eq.)의 교반 용액에 TBAF(THF 중 1.0 M 용액, 35 μL, 0.0351 mmol, 2.0 eq.)을 가하고 반응물을 주위 온도에서 교반하였다. 30분 후, 반응을 LC/MS로 완료시켰다. 조 물질을 EZ 제조 HPLC 컬럼(Gemini, 5μm, 150 mm x 30 mm, 용출제: 수 중 10 - 95% MeCN, 0.05% AcOH)으로 정제하였다. 순수한 분획을 수집하고, 드라이아이스/아세톤 욕 속에서 정제하고, 30시간 동안 동결건조시켜 23.5 mg(79%)의 89를 적색 고체로서 수득하였다. MS (ESI, pos.): C86H121N9O27에 대한 계산치, 1711.84; 실측치 1713.7 (M+H), 1711.6 (M-H). 1H-NMR (500 MHz; DMSO-d6): 9.99 (s, 1H), 8.11 (d, J = 7.33 Hz, 1H), 7.83 - 7.89 (m, 2H), 7.58 - 7.62 (m, J = 8.79 Hz, 2H), 7.29 - 7.33 (m, J = 8.30 Hz, 2H), 7.18 (br. s., 1H), 5.97 (t, J = 5.37 Hz, 1H), 5.40 (s, 2H), 5.02 (s, 2H), 4.89 (br. s., 1H), 4.76 - 4.83 (m, 1H), 4.35 - 4.41 (m, 1H), 4.21 - 4.25 (m, 1H), 3.73 (br. s., 2H), 3.44 - 3.68 (m, 39H), 3.38 (t, J = 5.62 Hz, 3H), 3.29 (br. s., 2H), 2.90 - 3.14 (m, 7H), 2.75 - 2.81 (m, 1H), 2.68 (t, J = 5.62 Hz, 2H), 2.64 (d, J = 1.95 Hz, 1H), 2.45 - 2.48 (m, 1H), 2.35 - 2.41 (m, 2H), 2.15 (br. s., 3H), 1.92 - 2.02 (m, 10H), 1.90 (s, 1H), 1.63 - 1.72 (m, 5H), 1.59 (d, J = 9.28 Hz, 3H), 1.45 (d, J = 6.84 Hz, 1H), 1.37 (dd, J = 6.35, 16.12 Hz, 1H), 0.73 - 0.93 (m, 13H), 0.68 (br. s., 3H).
실시예 20: 브로쓰(Broth) 최소 억제 농도(Minimum Inhibitory Concentration)(MIC) 검정 1
시험관내에서 본 개시내용의 리파마이신 유사체의 효능을 시험하기 위하여, 브로쓰 성장 억제 검정을 개발하였다. 검정을 위해, 에스. 아우레우스 NRS384를 트립틱 대두 브로쓰(Tryptic Soy Broth)(TSB) 속에서 밤새 성장시킨 다음, 신선한 TSB 속에서 1:50로 아-배양하고 추가로 2시간 동안 성장시켰다. 이후에, 배양물을 원심분리를 통해 펠렛화하고 PBS 속에서 2회 세척하였다. 이후에, 배양물을 1x104 cfu/mL로 TSB 속에서 희석시키고 50 μL의 현탁액을 웰당 96 웰 미세역가 디쉬에 중복하여 가하였다. 나타낸 항생제(본 개시내용에 따른 유사체 또는 이미 공지된 유사체 리파마이신)의 희석 시리즈를 1:3 희석을 지닌 1x10-5 M의 최종 출발 농도에 대해 1:1로 가하였다. 플레이트를 37℃에서 진탕하면서 24시간 동안 항온처리한 다음 OD600 nm를 Spectramax i3 Minimax 300에서 판독하였다.
사용된 시약 및 로트 번호(lot number)는 하기 표 4에 나타낸다.
[표 4]
Figure pct00502
에스. 아우레우스의 성장을 억제한 최저 농도(최소 억제 농도, MIC)를 표 5에 나타낸다. 본 개시내용에 따른 리파마이신 유사체로 수행된 에스. 아우레우스 억제 검정의 플롯은 도 1에 나타낸다.
[표 5]
Figure pct00503
표 5에 나타낸 바와 같이, 본 개시내용에 따른 모든 리파마이신 유사체는 준-마이크로몰 내지 나노몰 농도에서 에스. 아우레우스의 성장을 억제하는데 효과적이다. 유사체 16a는 에스. 아우레우스의 성장을 리팜피신보다 1.5 x 10-9M의 MIC로 보다 강력하게 억제하였다.
실시예 21: 세포내 사멸 검정 1
에스. 아우레우스에 대한 리파마이신 유사체 화합물의 활성을 세포내 "사멸" 검정에서 시험하였다.
사용된 시약 및 로트 번호는 하기 표 6에 나타낸다.
[표 6]
Figure pct00504
THP-1 단핵 세포주를 배지(RMPI + 10% FBS + 1% 페니실린/스트렙토마이신) 속에서 성장시킨 다음, 96 웰 플레이트 속에서 1e5개의 세포/웰의 밀도에서 씨딩하고 200 nM PMA를 사용하여 감염시키기 전 3일 동안 대식구내로 분화시켰다. 에스. 아우레우스 NRS384의 밤샘 배양물을 RPMI 속에서 성잔시키고, PBS로 2회 세척하고 PBS 속에서 1e7 cfu/mL에서 재현탁시켰다. THP-1을 따뜻한 배지(FBS가 들어있지 않은 RMPI)로 세척하여 페니실린/스트렙토마이신을 제거한 다음 에스. 아우레우스 현탁액으로 10:1(에스. 아우레우스: 대식구)의 감염 다중도(multiplicity of infection)에서 감염시켰다. 플레이트를 300 xg에서 5분 동안 회전시켜 세균의 부착을 발생시킨 다음, 37℃에서 2시간 동안 항온처리하였다. 자유로이-부유하는(free-floating) 세균을 따뜻한 배지로 2회 세척하여 제거하고 남아있는 세포외 에스. 아우레우스는 겐타마이신(50 ug/mL)을 함유하는 배지를 첨가하여 사멸시켰다. 1시간 후, 배지를 흡인하고 나타낸 화합물을 50 μg/mL의 겐타마이신을 함유하는 배지 속 감염된 대식구에 가하였다. 2시간 후, 플레이트를 FBS가 들어있지 않은 따뜻한 RPMI로 2회 세척하고, 100 ul의 THP-1 분해 완충액(PBS 중 0.1% 트리톤)을 각각의 웰에 가하였다. 에스. 아우레우스 생존을 일련 희석을 통한 콜로니형성 단위 및 TSA 상에서의 플레이팅에 의해 열거하였다.
세포내 사멸 검정의 결과는 표 7 및 도 2 및 도 3에 나타낸다. 최소 억제 농도(MIC)는 세포내 에스. 아우레우스 근절을 야기하는 각각의 화합물의 최저 농도에 상응한다.
[표 7]
Figure pct00505
상기 표 및 도 2 및 3이 입증하는 바와 같이, 화합물 1a, 14, 16a, 16d, 및 16e는 리팜피신과 비교하여 세포내 에스. 아우레우스 사멸 능력을 증가시켰으며, 화합물 16a가 최고의 활성을 가졌다.
실시예 22: MSR1 항체-약물 접합체
50 mM HEPES, 150 mM NaCl, pH 7.5 중 MSR1 항체(1-10 mg/ml)를 1 mM 디티오트레이톨로 37℃에서 30분 동안 처리하였다. 겔 여과(G-25, pH 4.5 나트륨 아세테이트) 후, DMSO(10 mg/ml) 중 말레이미도 링커 페이로드 유도체 화합물 25(1.2 당량/SH 그룹)를 감소된 항체에 가하고 혼합물을 1 M HEPES(pH 7.4)를 사용하여 pH 7.0로 조절하였다. 1시간 후, 반응물 과량의 N-에틸 말레이미드로 퀀칭시켰다. 접합체를 5% 글리세롤이 들어있는 PBS를 사용하여 크기 배제 크로마토그래피로 정제하고 여액을 여과하였다. 단백질 농도 및 페이로드 대 항체 비를 UV 스펙트럼 분석으로 측정하였다. 크기-배제 HPLC는 사용된 모든 접합체가 >90% 단량체성임을 확립하고, RP-HPLC는 <1%의 접합되지 않은 링커 페이로드가 존재함을 확립한다. 모든 접합된 항체를 HIC로 링커 페이로드 로딩 값에 대해 분석하였다. 페이로드 대 항체 비를 표 8에 기록한다.
[표 8]
Figure pct00506
소수성 상호작용 크로마토그래피(Hydrophobic Interaction Chromatography)(HIC)에 의한 접합체의 특성화
항체 위에 링커-페이로드의 로딩을 측정하기 위하여, 접합체를 Agilent 1260 위에서 TSK-NPR 부틸 HIC 컬럼을 사용하여 1M 인산칼륨 pH 8.5 내지 물의 선형 구배로 60분 동안 작동시켰다. 페이로드 로딩을 접합된 종 및 접합되지 않은 항체에 상응하는 피크 영역을 통합하여 측정하였다.
실시예 23: 항-MSR1 항체의 생성
항-MSR1 항체를 사람 면역글로불린 중쇄 및 카파 경쇄 가변 영역을 암호화하는 DNA를 포함하는 유전적으로 가공된 마우스를 N-말단 노나히스티딘 태그(서열 번호: 688)(R&D 시스템, 카탈로그 번호 2708-MS-050, 미네소타주 미네아폴리스 소재)에 융합된 재조합 사람 MSR1 세포외 도메인으로 면역화시켜 수득하였다. 면역화에 사용된 마우스는 Velocimmune 마우스 또는 "공통의 경쇄"를 발현한 마우스("ULC" 마우스)이었다. 항체 생산 ULC 마우스는 상이한 중쇄 가변 영역, 그러나 필수적으로 동일한 경쇄 가변 도메인을 갖는다.
항체 면역 반응을 MSR1-특이적인 면역검정으로 모니터링하였다. 목적한 면역 반응이 달성되면, 비장세포슬 수거하고 마우스 골수종 세포와 융합시켜 이의 생존능을 보존하고 하이브리도마 세포를 형성시켰다. 하이브리도마 세포주를 스크리닝하고 선택하여 MSR1-특이적인 항체를 생산하는 세포주를 확인하였다. 당해 기술을 사용하여 수개의 항-MSR1 키메라 항체(즉, 사람 가변 도메인 및 마우스 불변 도메인을 지닌 항체)를 수득하였다. 또한, 수개의 완전한 사람 항-MSR1 항체를 제US 2007/0280945A1호에 기술한 바와 같이 골수종 세포에 대한 융합없이 항원-양성 B 세포로부터 직접 단리하였다.
당해 실시예의 방법에 따라 생성된 예시적인 항-MSR1 항체의 특정의 생물학적 특성을 하기 나타낸 실시예에서 상세히 기술한다.
실시예 24: 중쇄 및 경쇄 가변 영역 아미노산 및 핵산 서열
표 9는 본원에 기술된 선택된 항-MSR1 항체의 중쇄 및 경쇄 가변 영역 및 CDR의 아미노산 서열 확인인자를 나타낸다. 상응하는 핵산 서열 확인인자는 표 10에 나타낸다.
[표 9]
Figure pct00507
Figure pct00508
[표 10]
Figure pct00509
Figure pct00510
항체는 전형적으로 다음의 명명법에 따라 본원에서 지칭된다: 표 9 및 10에 나타낸 바와 같이, Fc 접두사(예컨대, "H1H," "H2aM" 등)에 이어 숫자 확인인자(예컨대, "21227," "21228," "21231" 등)에 이어, "P," "N," 또는 "P2" 접미어. 따라서, 명명법에 따라서, 항체는 본원에서 예컨대, "H1H21227N," "H2aM21228N," "H1H27729P," "H1H27760P2" 등으로 지칭된다. 본원에 사용된 항체 명칭에서 접두사는 항체의 특수한 Fc 영역을 나타낸다. 특히, "H1H" 항체는 사람 IgG1 Fc(모든 가변 영역은 항체 명칭에서 첫번째 'H'로 나타낸 바와 같이 완전한 사람이다)를 가지지만, "H2aM" 항체는 마우스 IgG2a Fc를 갖는다. 당해 분야의 통상의 기술자에게 인식될 바와 같이, 특수한 Fc 동형을 갖는 항체는 상이한 Fc 동형을 갖는 항체로 전환될 수 있지만(예컨대, 마우스 IgG4 Fc를 갖는 항체는 사람 IgG1를 갖는 항체로 전환될 수 있다, 등), 어떠한 경우에도, 표 9 및 10에 나타낸 수치 확인인자로 나타낸, 가변 도메인(CDR 포함)은 동일하게 남을 것이며, 결합 특성은 Fc 도메인의 특성과 상관없이 동일하거나 실질적으로 유사한 것으로 예측된다.
항체 변형. 실시예 23에서 기술된 3개의 항-MSR1 항체(21227N, 21231N, 21234N)를 원래의 사람 Fcγ 부위 뿐만 아니라 모든 3개의 항-MSR1 항체에 대한 N297Q 단일 점 돌연변이를 지닌 버젼을 사용하여 생산하였다. 본원에 기술된 모든 다른 항체는 사람 Fcγ 부위에서 N297Q 단일 점 돌연변이을 사용하여 제조하였다. 제3 버젼, N297D 돌연변이는 21227N 항체에 대해서만 생산하였다.
실시예 25: 사람 모노클로날 항-MSR1 항체의 표면 플라스몬 공명 유래된 결합 친화성 및 역학 상수
상이한 MSR1 시약에 대한 사람 항-MSR1 항체의 결합 친화성 및 역학 상수를 실시간 표면 플라스몬 공명(Biacore 4000)으로 측정하였다. 모든 결합 연구는 10mM HEPES, 150mM NaCl, 3mM EDTA, 및 0.05% v/v 표면 트윈(Tween)-20, pH 7.4 (HBS-ET) 작동 완충액 속에서 25℃ 및 37℃°에서 수행하였다. Biacore CM4 센서 칩 표면을 우선 염소 항-사람 Fcγ 특이적인 폴리클로날 항체(Jackson ImmunoResearch Laboratories, 카탈로그 번호 BR-1008-39)와 아민 커플링시켜 항-MSR1 모노클로날 항체를 포획함으로써 유도체화하였다. 결합 연구는 N-말단 노나히스티딘 태그(서열 번호: 688)와 함께 발현된 사람 MSR1 세포외 도메인(His9-hMSR1; R&D 시스템, 카탈로그 번호 2708-MS), 및 N-말단 헥사히스티딘-myc-myc 태그(서열 번호: 689로 개시된 "헥사히스티딘")와 함께 발현된 원숭이 MSR1 세포외 도메인(HMM-mfMSR1; 서열 번호:-418)에서 수행하였다. 상이한 농도의 His9-hMSR1 및 HMM-mfMSR1(100-nM - 3.7-nM; 3배의 일련 희석물)을 우선 HBS-ET 작동 완충액 속에서 제조하고 항-사람 Fcγ 포획된 항-MSR1 모노클로날 항체 표면 위에 3분 동안 30 μL/분의 유동 속도로 주입하지만, 모노클로날 항체 결합된 MSR1 시약의 해리는 10분 동안 HBS-ET 작동 완충액 속에서 모니터링하였다.
결합 속도(k a ) 및 해리 속도(k d )는 실시간 결합 센소그램(real-time binding sensorgram)을 1:1 결합 모델에 대해 질량 수송 제한으로 Scrubber 2.0c 곡선-보정 소프트웨어(curve-fitting software)를 사용하여 보정함으로써 측정하였다. 결합 해리 평형 상수(KD) 및 해리 반감기(t½)는 다음과 같은 역학 비(kinetic rate)로부터 계산하였다:
Figure pct00511
25℃ 및 37℃에서 상이한 항-MSR1 모노클로날 항체에 대한 His9-hMSR1 또는 HMM-mfMSR1 결합의 결합 역학 매개변수를 표 11 및 12에 각각 나타낸다.
[표 11]
Figure pct00512
Figure pct00513
Figure pct00514
*는 His9-hMSR1 또는 HMM-mfMSR1의 해리가 현재의 실험 상태 하에 관찰되지 않았고 k d 값은 데이타를 보정하는 동안 1.00E-05에서 수동으로 보정하였음을 나타낸다.
$는 결합이 현재의 실험 상태 하에서 관찰되지 않았음을 나타낸다.
[표 12]
Figure pct00515
Figure pct00516
*는 His9-hMSR1 또는 HMM-mfMSR1의 해리가 현재의 실험 상태 하에 관찰되지 않았고 k d 값은 데이타를 보정하는 동안 1.00E-05에서 수동으로 보정하였음을 나타낸다.
$는 결합이 현재의 실험 상태 하에서 관찰되지 않았음을 나타낸다.
25℃에서, 본 개시내용에 따른 모든 항-MSR1 모노클로날 항체는, 표 11에 나타낸 바와 같이, His9-hMSR1에 12 pM 내지 5.45 nM의 범위의 KD로 결합하였다. 37℃에서, 본 개시내용의 모든 항-MSR1 모노클로날 항체는 표 12에 나타낸 바와 같이 His9-hMSR1에 3.66 pM 내지 8.53 nM의 범위의 KD로 결합하였다.
25℃에서, 본 개시내용에 따른 모든 항-MSR1 모노클로날 항체는, 표 11에 나타낸 바와 같이, HMM-mfMSR1에 3.66 pM 내지 8.53 nM의 범위의 KD로 결합하였다. 37℃에서, 본 개시내용의 모든 항-MSR1 모노클로날 항체는 표 12에 나타낸 바와 같이 HMM-mfMSR1에 3.62 pM 내지 18.4 nM의 범위의 KD로 결합하였다.
실시예 26: 사람 모노클로날 항-MSR1 항체의 Octet-유래된 결합 친화성 및 역학 상수
상이한 MSR1 시약에 대한 사람 항-MSR1 항체의 결합 친화성 및 역학 상수를 실시간, 표지가 없는 바이오-층 간섭측정 검정(real time, label-free bio-layer interferometry assay)을 사용하여 OCTET® HTX 바이오센서 플랫폼(Pall ForteBio Corp., 캘리포니아주 멘로 파크 소재)에서 측정하였다. 실험은 25℃에서 10-mM HEPES, 150-mM NaCl, 3-mM EDTA, 0.05% v/v 표면 트윈-20, 및 1-mg/mL BSA, pH7.4 (HBS-EBT) 완충액 속에서 플레이트 진탕으로 1000rpm의 속도에서 측정하였다. 결합 연구는 N-말단 노나히스티딘 태그(서열 번호: 688)와 함께 발현된 사람 MSR1 세포외 도메인(His9-hMSR1; R&D systems, 카탈로그 번호 2708-MS), N-말단 myc-myc-헥사히스티딘 태그(HMM-mfMSR1; 서열 번호: 418)와 함께 발현된 원숭이 MSR1 세포외 도메인, 및 N-말단 노나히스티딘 태그(서열 번호: 688)(서열 번호: 689로 개시된 "헥사히스티딘")와 함께 발현된 마우스 MSR1 세포외 도메인(His9-mMSR1; R&D systems, 카탈로그 번호 1797-MS) 위에서 수행하였다. 항-MSR1 모노클로날 항체는 항-사람 Fc(AHC) 또는 항-마우스 Fc(AMC) Octet 바이오센서를 5 μg/mL 또는 10 μg/mL의 항-MSR1 모노클로날 항체를 함유하는 웰 속에 45 내지 90초 동안 침지시켜 포획하였다. 이후에, AHC 포획된 항-MSR1 모노클로날 항체를 50 nM의 His9-mMSR1을 함유하는 웰 속에 침지시키는 한편, AMC 포획된 항-MSR1 모노클로날 항체는 상이한 농도의 His9-hMSR1 또는 HMM-mfMSR1(100 nM, 25 nM) 또는 100 nM의 His9-mMSR1을 함유하는 웰 속에 침지시켰다. 포획된 항-MSR1 모노클로날 항체에 대한 상이한 MSR1 시약의 결합을 4분 동안 측정하고, MSR1 시약에 결합된 모노클로날 항체의 해리는 HBS-EBT 완충액 속에서 8 내지 10분 동안 모니터링하였다.
결합 속도(k a ) 및 해리 속도(k d )는 실시간 결합 센소그램을 1:1 결합 모델에 대해 질량 수송 제한으로 Scrubber 2.0c 곡선-보정 소프트웨어를 사용하여 보정함으로써 측정하였다. 결합 해리 평형 상수(KD) 및 해리 반감기(t½)는 다음과 같은 역학 비로부터 계산하였다:
Figure pct00517
25℃에서 본 개시내용의 상이한 항-MSR1 모노클로날 항체에 대한 His9-hMSR1, HMM-mfMSR1 또는 His9-mMSR1결합의 결합 역학 매개변수를 표 13 및 14에 나타낸다.
[표 13]
Figure pct00518
$는 결합이 현재의 실험 상태 하에서 관찰되지 않았음을 나타낸다.
[표 14]
Figure pct00519
*는 His9-mMSR1의 해리가 현재의 실험 상태 하에 관찰되지 않았고 k d 값은 데이타를 보정하는 동안 5.00E-05에서 수동으로 보정하였음을 나타낸다.
$는 결합이 현재의 실험 상태 하에서 관찰되지 않았음을 나타낸다.
#는 결합 데이타가 비결정적(IC)임을 나타낸다.
항-MSR1 모노클로날 항체는 표 13에 나타낸 바와 같이, His9-hMSR1에 205 pM 내지 2.2 nM의 범위의 KD 값으로 결합하였다. 항-MSR1 모노클로날 항체는 표 13에 나타낸 바와 같이, HMM-mfMSR1에 208 pM 내지 19.7 nM의 범위의 KD 값으로 결합하였다.
표 14에 나타낸 바와 같이, 35 중 23개의 항-MSR1 모노클로날 항체는 His9-mMSR1에 결합하지 않았지만, 6개의 항-MSR1 모노클로날 항체에 대한 결합은 비결정적이었다. 35개 중 6개의 항-MSR1 모노클로날 항체는 표 14에 나타낸 바와 같이, His9-mMSR1에 1.09 nM 내지 5.2 nM의 범위의 KD 값으로 결합하였다.
실시예 27: 세포 표면-발현된 사람 및 원숭이 MSR1에 대한 항-MSR1 항체 디스플레이 특이적인 결합
사람 또는 원숭이 MSR1 발현 세포에 결합하는 항-MSR1 모노클로날 항체의 능력을 전기화학발광성(electrochemi발광성)(ECL) 기반한 검출로 측정하였다.
MSR1-발현 세포주의 생성. 사람 또는 원숭이 MSR1을 생성하는 2개의 세포주를 생성하였다. 사람 MSR1 과발현 세포주를 생성시키기 위해, 사람 배아 신장(HEK) 293 세포를 C-말단 Myc 태그와 함께 전체 길이의 사람 MSR1(hMSR1, 수탁 번호 제NP_619729.1호의 아미노산 M1-L451)을 암호화하는 하이그로마이신 내성 렌티바이러스 벡터로 형질도입함으로써 가공하였다. 수득되는 세포주를 HEK293.Myc.hMSR1으로 지칭하였다. 유사하게, 원숭이 MSR1 과발현 세포주를 생성시키기 위해, HEK293 세포를 전체 길이의 원숭이 MSR1(마카카 파스키쿨라리스(Macaca fascicularis), mfMSR1, 수탁 번호 제XP_005562705.1호의 아미노산 M1-L451)를 암호화하는 게네티신 내성 발현 플라스미드로 형질감염시켜 가공하였다. 수득되는 세포주는 HEK293.mfMSR1 세포로 지칭하였다. 내인성 발현된 사람 MSR1에 결합하는 항체의 능력을 측정하기 위하여, THP-1 사람 단핵구 세포를 200 nM의 포르볼 12-미리스테이트 13-아세테이트(PMA; Sigma, 카탈로그 번호 P8139)로 72시간 동안 처리하여 항체 결합 전에 고 MSR1 발현을 유도하였다. 형질감염되지 않은 HEK293 세포는 유전자 발현의 차세대 서열 분석에 의해 MSR1의 검출가능한 발현을 가지지 않으므로(데이타는 나타내지 않음), 비-특이적인 결합 대조군으로서 포함시켰다.
항체 결합 검정. 항체 결합 검정을 수행하기 위하여, 상술한 각각의 세포주로부터의 세포를 Ca2+/Mg2+가 들어있지 않은 PBS 속에서 1회 세정하고 5분 동안 37℃에서 효소 유리된 세포 해리 용액(Millipore, 카탈로그 번호 S-004-C, 매사츄세츠주 벌링톤 소재)과 함께 항온처리하여 세포를 플라스크로부터 탈착시켰다. 모든 세포를 Ca2+/Mg2+이 들어있는 1xPBS로 1회 세척하고 CellometerTM Auto T4 세포 계수기(Nexcelom Bioscience)를 사용하여 계수하였다. 대략 1.0x104개의 세포를 별도로 96-웰 탄소 전극 플레이트[MULTI- ARRAY 고 결합 플레이트, Meso Scale Diagnostics] 상에 씨딩하고 1시간 동안 37℃에서 항온처리하였다. 이어서 비-특이적인 결합 부위를 Ca2+/Mg2+가 들어있는 PBS 중 2% BSA(w/v)로 1시간 동안 실온에서 차단시켰다. THP-1 세포를 0.5 시간 동안 실온에서 1) 항-MSR1-mFc 항체를 사용하여 시험하는 웰에 대해 THP-1 세포 표면[전체 분자 사람 IgG(Jackson Immunoresearch, 카탈로그 번호 009-000-003)에서 Fc 감마 수용체를 차단하기 위한 1 mg/mL의 Fc 수용체 차단 시약 또는 2) 항-MSR1-hFc 항체를 사용하여 시험하는 웰에 대한 전체 분자 mIgG(Jackson Immunoresearch, 카탈로그 번호 015-000-003)가 들어있는 샘플 희석 완충액 속에서 예비-항온처리하였다. HEK293.Myc.hMSR1, HEK293.mfMSR1 및 HEK293 세포에서의 항체 결합을 Fc 수용체 차단 시약의 부재하에서 시험하였다. 플레이트-결합된 HEK293.Myc.hMSR1, HEK293.mfMSR1 및 HEK293 세포 또는 THP-1+Fc 블록에, 1.7 pM 내지 100 nM 범위의 일련 희석의 항-MSR1 또는 대조군 항체의 용액, 및 항체가 존재하지 않는 용액을 중복해서 가하고, 플레이트를 1시간 동안 실온에서 항온처리하였다. 이후에, 플레이트를 세척하고 결합하지 않은 항체를 세포 세척 헤드가 장착된 AquaMax2000 플레이트 세척기(MDS Analytical Technologies)로 제거하였다. 플레이트-결합된 항체를 Fc 단편에 대해 특이적인 SULFO-TAGTM-접합된 염소 폴리클로날 항-사람 IgG 항체(Jackson Immunoresearch, 카탈로그 번호 109-005-098) 또는 Fc 단편에 대해 특이적인 SULFO-TAGTM-접합된 염소 폴리클로날 항-마우스 IgG 항체(Jackson Immunoresearch, 카탈로그 번호 115-005-164)를 사용하여 1시간 동안 실온에서 검출하였다. 플레이트를 세척하고 판독 완충액(Meso Scale Diagnostics, 카탈로그 번호 R92TD-2)로 제조업자의 추천된 과정에 따라 전개시키고 발광성 신호를 SECTOR 영상기(Imager) 600(Meso Scale Diagnostics)를 사용하여 기록하였다. 상대적인 광 단위(RLU)로 측정된, 발광성 강도를 기록하여 농도 범위에서 각각의 항체의 결합 강도를 나타내었다. 동형 대조군 항체에 대해 각각의 항-MSR 항체의 세포-표면 결합에 대해 검출한 신호의 비(둘 다 11 nM에서)를 MSR1 결합의 특이성의 지표로 기록하였다. 모 HEK293 세포에서의 비와 비교하여 2배 미만의 결합 비를 지닌 항체를 나타낸 바와 같이 비-결합인자로 분류하였다(참고: 표 15).
[표 15]
Figure pct00520
Figure pct00521
표 15에 나타낸 바와 같이, 39개 중 38개의 시험한 항-MSR1 항체가 11nM 항-MSR1 항체 농도에서 동형 대조군보다 5- 내지 166배 범위의 결합 비로 HEK293.Myc.hMSR1 세포에 결합하였다. 이러한 항-MSR1 항체 중 33개는 PMA 세포 분화 후 11 nM에서 동형 대조군보다 3 내지 66배 범위의 세포 결합 비로 사람 MSR1을 내인성으로 발현하는 THP-1 세포에 결합하였다. 가공된 hMSR1 세포에 결합된 35개의 항-MSR1 항체는 또한 11 nM에서 동형 대조군보다 6 내지 77배 범위의 세포 결합 비로 mfMSR1 가공된 세포에 결합하였다. 12개의 항-MSR1 항체(H1H21234N-N297Q, H1H27731P-N297Q, H1H27732P-N297Q, H1H27734P-N297Q, H1H27736P-N297Q, H1H27751P-N297Q, H1H27754P-N297Q, H1H27756P-N297Q, H2aM25695N, H2aM21235N, H2aM21229N, H1H27766P2-N297Q)는 동형 대조군보다 5배 이상의 비로 모 HEK293 세포에 결합하였다. N297Q 또는 N297D 단일 점 돌연변이를 함유하는 사람 IgG1을 사용하여 생산된 항-MSR1 항체는 이의 상응하는 변형되지 않은 모 항체와 비교가능하게 세포에 결합하였다.
1개의 항-MSR1 항체, H1xH29273P2는 11 nM의 항체 농도에서 HEK293 세포와 비교하여 2 미만의 비로 MSR1 세포에 결합하므로, 이를 비-특이적인 결합인자로 특성화하였다. hIgG1 및 mIgG1 동형 대조군은 예측한 바와 같이 특이적이지 않았다.
실시예 28: 세포 표면-발현된 마우스 MSR1에 대한 항-MSR1 항체의 상대적인 결합
마우스 MSR1 발현 세포에 대한 항-MSR1 항체의 상대적인 세포 표면 결합을 유동 세포분석기로 MSR1 양성 RAW264.7 세포(ATCC, 카탈로그 번호 TIB-71) 및 MSR1 음성 B16F10.9 세포(Lin et al. 1998. PNAS 95:8829-8834)를 사용하여 측정하였다. 검정을 위해, 세포를 칼슘 및 마그네슘이 없는 PBS(VWR 제품 번호 45000-446) 및 2% FBS(Saradigm 카탈로그 번호 1500-500)(염색 완충액(Staining Buffer)) 속에 96 웰 V-바닥 플레이트(Axygen Scientific, 제품 번호 P-96-450-V-C-S) 내에서 플레이팅하였다. Fc 수용체에 대한 결합을 차단하기 위하여, RAW264.7 세포를 30분 동안 4℃에서 염색 완충액 속에 희석시킨 500 μg/mL의 마우스 IgG(Jackson ImmunoResearch, 제품 번호 015-000-003)와 함께 항온처리하였지만, B16F10.9 세포는 염색 완충액 속에 잔류시켰다. Fc 수용체 차단 후, 10 μg/mL의 항-MSR1 항체 또는 동형 대조군 항체를 세포에 가하고 후속적으로 빙상에서 30분 동안 항온처리하였다. 양성 대조군의 경우, 시판되는 항-마우스 MSR1(Sino Biological, 카탈로그 번호 50129-R004) 항체를 사용한 반면, 토끼 IgG 항체(Thermo Scientific, 카탈로그 번호 26102)는 음성 대조군으로 사용하였다. 이후에, 세포를 염색 완충액으로 세척하고 APC 접합된 항-사람 Fc 제2 항체(Jackson ImmunoResearch, 카탈로그 번호 109-136-170) 또는 Alexa-Flour 647 접합된 항-토끼 Fc 제2 항체[Jackson ImmunoResearch 카탈로그 번호 111-606-046]화 함께 10 μg/mL에서 30분 동안 4℃에서 항온처리하였다. 세포를 후속적으로 세척하고 PBS 속에 희석시킨 Cytofix(BD Biosciences, 카탈로그 번호 554655)의 50% 용액으로 고정시켰다. 샘플을 Beckman Coulter Cytoflex 위에서 작동시키고 결과를 Flowjo 10.2 소프트웨어(BD)로 분석하여 평균 형광성 강도(MFI; 표 16)를 계산하였다. 신호 대 노이즈(signal to noise)(S/N)는 염색되지 않은 샘플 MFI에 대한 항-MSR1 항체 또는 대조군 항체 MFI의 비를 계산함으로써 측정하였다(표 16).
[표 16]
Figure pct00522
표 16에 나타낸 바와 같이, 2개의 항-MSR1 항체(H1H21227N-N297Q 및 H1H21234N-N297Q)는 RAW264.7 세포에 각각 5 및 3의 S/N 값ㅇ로 약하게 결합하였다. 비-결합 대조군 항체는 RAW264.7 세포에 결합하지 않았다. 22개의 항-MSR1 항체 중 어느 것도 B16F10.9 세포에 결합하지 않았다. 참고 양성 대조군(마우스 MSR1/CD204 항체, Sino Biological, 카탈로그 번호 50129-R004)은 Raw 264.7 세포에 97의 S/N으로 결합하였다.
실시예 29: 항-MSR1 항체는 MSR1 수용체 상의 명백한 에피토프에 결합하고/항-MSR1 항체 사이에서 교차-경쟁한다
상이한 항-MSR1 항체 사이에서 결합 경쟁을 실시간, 표지가 없는 바이오-층 간섭측정 검정으로 OCTET® HTX 바이오센서 플랫폼(Pall ForteBio Corp., 캘리포니아주 멘로 파크 소재)에서 측정하였다. 실험은 25℃에서 10 mM HEPES, 150 mM NaCl, 3 mM EDTA, 0.05% v/v 표면 트윈-20, 및 1 mg/mL BSA, pH7.4 (HBS-EBT) 완충액 속에서 플레이트 진탕으로 1000rpm의 속도에서 측정하였다.
상이한 항체가 N-말단 노나히스티딘 태그(서열 번호: 688)와 함께 발현된 재조합 사람 MSR1 세포외 도메인(His9-hMSR1; R&D systems, 카탈로그 번호 2708-MS)에서 이의 각각의 에피토프에 대한 결합에 대해 서로 경쟁할 수 있는지를 평가하기 위하여, 바이오센서 팁(tip)을 45초 동안 20 μg/mL의 His9-hMSR1 용액을 함유하는 웰 내로 침지시킴으로써 대략 0.59 내지 0.79 nM의 His9-hMSR1를 우선 항-펜타-His 항체 코팅된 OCTET® 바이오센서 팁(서열 번호: 690으로 개시된 "Penta-His")(Pall ForteBio Corp., # 18-5122) 위에 우선 포획시켰다. 이후에, 50 μg/mL의 mAb-1의 용액을 함유하는 웰 내로 4분 동안 함침하여 항원-포획된 바이오센서 팁을 제1의 항-MSR1 모노클로날 항체(후속적으로 "mAb-1"로서 지칭됨)로 포화시켰다. 이후에, 바이오센서 팁을 50 μg/mL의 제2 항-MSR1 모노클로날 항체(후속적으로 "mAb-2"로서 지칭됨)의 용액을 함유하는 웰내로 함침시켜 항원-포획된 바이오센서 팁을 제1의 항-MSR1 모노클로날 항체(후속적으로 "mAb-1"로서 지칭됨)로 포화시켰다. 모든 바이오센서 팁을 HBS-EBT 완충액 속에서 실험의 각각의 단계 사이에서 세척하였다. 실시간 결합 반응을 실험 과정 동안 모니터링하고 각각의 단계 말기에서 결합 반응을 기록하였다. mAB-1으로 예비-복합체화시킨 His9-hMSR1에 대한 mAb-2 결합의 반응을 비교하고, 상이한 항-MSR1 모노클로날 항체의 경쟁/비-경쟁 거동을 50% 억제 역치(inhibition threshold)로 측정하였다. 표 17은 결합 순서와는 독립적으로, 양 방향에서 경쟁하는 항체의 관계를 명쾌하게 정의한다.
[표 17]
Figure pct00523
Figure pct00524
Figure pct00525
*는 'mAb-1'으로 포획된 경우 MSR1에 대한 결합에 대해 임의의 다른 mAb와 교차 경쟁하지 않는다
**mAb는 MSR1 표면을 포화시키는데 실패하였거나 MSR1 표면에 결합하지 않았다.
실시예 30: 항-MSR1 항체의 리간드 흡수
MSR1은 화학적으로 변형된 또는 변경된 다가음이온성 분자, 예를 들면, 변형된 저 밀도 지단백질(LDL)에 결합하여 내재화시킬 수 있다(Platt, N. 및 S. Gordon. 2001. J Clin Invest. 108(5):649-654). 생물검정을 생성하여 특정의 MSR1 리간드의 흡수를 조절하는 예시적인 항-MSR1 항체의 능력을 평가하였다.
검정을 위한 MSR1-발현 세포주의 생성. 사람 배아 신장 세포(HEK293)를 형질도입시켜 C-말단 Myc 태그를 지닌 사람 MSR1(UniProtKB 수탁 번호 NP_619729.1의 아미노산 1-451)을 안정하게 발현시켰다. 본원에서 "HEK293.Myc.hMSR1"로 지칭된 수득되는 세포주를 선택하고 10% FBS, NEAA, 페니실린/스트렙토마이신, L-글루타민, 및 100-g/mL 하이드로마이신을 함유하는 DMEM 속에 유지시켰다.
리간드 흡수 검정. 생물검정을 위해, HEK293.Myc.hMSR1 세포를 96-웰 폴리-D-라이신-코팅된 검정 프레이트(Greiner Bio One, 카탈로그 번호 655946) 우에 웰당 20,000개의 세포에 0.1% FBS, 페니실린/스트렙토마이신, 및 L-글루타민(검정 배지)을 함유하는 Opti-MEM 내에서 플레이팅하고 37℃에서 5% CO2 속에서 밤새 항온처리하였다. 다음날, 항체를 300 nM 내지 5.08 pM(1:3의 희석 비)로 일련 희석시키고 검정 배지 만을 함유하는 음성 대조군과 함께, 세포와 30분 동안 37℃에서 5% CO2 속에서 예비-항온처리하였다. 30분 후, 1,1' 디옥타데실-3,3,3',3'-테트라메틸인도카보시아닌 퍼클로레이트(각각 "DiI-OxLDL" 또는 "DiI-AcLDL"로서 지칭됨)로 표지된 산화된 또는 아세틸화된 저-밀도 지단백질(LDL)을 세포에 10 g/mL의 고정 농도에서 가하였다. 리간드 흡수의 용량 반응을 측정하기 위하여, DiI-OxLDL 또는 DiI-AcLDL을 25 g/mL 내지 24.4 pg/mL(및 LDL이 없는 배지 만)로 희석시켰다. 37℃에서 5% CO2 속에서 밤새 항온처리한 후, 세포를 BD CytoFixTM(BD Biosciences, 카탈로그 번호 554655)으로 2시간 동안 4℃에서 고정시키고, 리간드 흡수를 Flexstation3 플레이트 판독기(Molecular Devices)를 사용하여 514 nm에서의 여기 및 565 nm에서의 배출로 평가하였다. 결과는 비선형 회귀(4-매개변수 로지스틱스(parameter logistics)를 사용하여 Prism 7 프로그램으로 분석함으로써 EC50 및 IC50 값을 수득하였다. 억제 퍼센트는 다음의 수학식을 사용하여 상대적인 형광성 단위(Relative Fluorescent Unit)(RFU) 값으로 계산하였다:
Figure pct00526
수학식에서, "RFU기본선"은 항체의 분재하에 10 μg/mL의 리간드로 처리한 세포로부터의 형광성 값이고, "RFU억제"는 10 μg/mL 리간드를 지닌 특수한 항체에 대한 최소 형광성 값이고, "RFU배경"은 임의의 리간드 또는 항체의 부재하에서 세포로부터의 형광성 값이다. 리간드 흡수 검정의 결과 및 계산된 값은 표 18에 제공된다.
[표 18]
Figure pct00527
Figure pct00528
적합한 항체 후보물은 비교적 효율적인 억제(예컨대, 약 10 nM 미만의 IC50 값)를 나타낸다. 일부 구현예에서, 적합한 항체 후보물은 또한 최대 약 65% 미만의 리간드 흡수의 최대 억제를 나타낸다.
표 18에 나타낸 바와 같이(열 1 내지 10), 8개의 항체는 HEK293.Myc.hMSR1 세포에서 DiI-OxLDL 흡수의 억제를 26% 내지 90%의 범위의 최대 억제 및 2.3 nM 내지 >100 nM의 범위의 IC50 값으로 나타내었다. 8개의 항체 중 7개는 DiI-AcLDL 흡수의 억제를 10% 내지 62%의 범위의 최대 억제 및 1.8 nM 내지 >100 nM의 범위의 IC50 값으로 나타내었다. 항체 H2aM21229N은 DiI-AcLDL 흡수의 억제를 나타내지 않았다.
표 18에 나타낸 바와 같이(열 11 내지 15), 4개의 항체는 MSR1-매개된 DiI-OxLDL 흡수의 억제를 43% 내지 91%의 범위의 최대 억제 및 1.7 nM 내지 >100 nM의 범위의 IC50 값으로 나타내었다. 본 개시내용의 4개의 항체는 MSR1-매개된 DiI-AcLDL 흡수를 22% 내지 79%의 범위의 최대 억제 및 2.1 nM 내지 >100 nM의 범위의 IC50 값으로 나타내었다.
표 18(열 16 내지 42)에 나타낸 바와 같이, 25개의 항체 중 24개는 DiI-OxLDL의 MSR1-매개된 흡수의 억제를 22% 내지 94%의 범위의 최대 억제 및 1.7 nM 내지 >100 nM의 범위의 IC50 값을 나타내었다. 25개의 항체 중 23개는 DiI-AcLDL 흡수의 억제를 26% 내지 65%의 범위의 최대 억제 및 0.42 nM 내지 >100 nM의 범위의 IC50 값을 나타내었다. 항체 H1H27729P-N297Q는 DiI-OxLDL 흡수의 억제를 나타내지 않았지만 항체 H1H27739P-N297Q 및 H1H27734P-N297Q는 HEK293.Myc.hMSR1 세포에서 DiI-AcLDL 흡수의 억제를 나타내지 않았다.
사람 및 마우스 동형 대조군 항체는 임의의 검정에서 HEK293.Myc.hMSR1 세포에 의한 DiI-OxLDL 및 DiI-AcLDL 흡수의 억제를 나타내지 않았다.
실시예 31: 항-MSR1 항체에 의한 세포-표면 발현된 MSR1의 결합 및 내재화
예시적인 항-MSR1를 MSR1을 발현하는 세포에서 MSR1에 결합하여 내재화하는 이의 능력에 대해 평가하였다.
검정을 위해, THP-1 세포[ATCC, 카탈로그 번호 TIB-202]를 96 웰 PDL 코팅된 플레이트(Perkin Elmer, 카탈로그 번호 6055500)내로 10% FBS(ATCC, 카탈로그 번호 30-2020), 페니실린/스트렙토마이신/L-글루타민(Gibco, 카탈로그 번호10378-016), 50-μM 베타-머캅토에탄올(Sigma, 카탈로그 번호 M7522)(성장 배지) 및 200 nM 포르볼 미리스테이트 아세테이트(PMA; Sigma, 카탈로그 번호 P1585)를 함유하는 RPMI(Irvine Scientific, 카탈로그 번호 9160)속에 씨딩하였다. THP-1 세포를 4일 동안 37℃에서 5% CO2 속에서 분화하도록 하였다. 염색시키기 위해, 세포의 4개 플레이트를 칼슘 및 마그네슘이 들어있지 않는 PBS(Irving, 카탈로그 번호 9240)(염색 완충액) 속에서 2% FBS 속에 희석시킨 10 μg/mL의 항-MSR1 항체와 함께 30분 동안 4℃에서 항온처리하였다. 세포를 Alexa-Flour 488 접합된 제2 Ab(Jackson Immunoresearch, 카탈로그 번호 115-547-003 또는 Jackson Immunoresearch, 카탈로그 번호 109-547-003)와 함께 10 μg/mL에서 30분 동안 4℃에서 항온처리하고 후속적으로 염색 완충액으로 2회 이상 세척하였다. 2개의 플레이트를 즉시 고정시키고 PBS 중 4% 파라포름알데하이드(PFA; ThermoFisher, 카탈로그 번호28908) + 5 μM DRAQ5(ThermoFisher, 카탈로그 번호 62251)로 20분 동안 염색하였다(비-내재화 플레이트). 나머지 2개의 플레이트를 37℃에서 1ㅅ간 동안 항온처리한 후 고정시키고 20분 동안 PBS 속에 희석시킨 4% PFA + 5 μM DRAQ5의 용액을 사용하여 염색하였다(내재화 플레이트). 고정 후, 모든 플레이트를 PBS로 1회 세척하였다. 1개의 비-내재화 플레이트 및 1개의 내재화 플레이트를 항-Alexa Fluor 488 항체(Regeneron)와 함께 50 μg/mL에서 PBS 속에서 밤새 4℃에서 항온처리하여 표면 Alexa Fluor 488 형광성을 퀀칭시켰다. 나머지 플레이트를 PBS 만으로 항온처리하였다. 공초점 영상을 Opera Phenix(Perkin Elmer)에서 40X 확대로 획득하였다. Harmony 분석 소프트웨어(Perkin Elmer)를 이용하여 DRAQ5-표지된 세포를 확인하고 세포 당 총 Alexa-Fluor 488 상대 형광성 단위(RFU)를 측정하였다. 4℃에서 총 결합(4℃에서 퀀칭되지 않은 웰의 RFU 값), 37℃에서 총 결합(37℃에서 퀀칭되지 않은 웰의 RFU 값), 총 내재화된 RFU, 및 내재화%를 표 19에 나타낸 바와 같이 각각의 항체에 대해 측정하였다.
모든 계산을 위해, 염색되지 않은 웰로부터의 배경 형광성을 모든 웰로부터 감하였다. 총 내재화된 RFU를 다음과 같이 계산하였다: 37℃에서 퀀칭되지 않은 웰의 총 RFU - 37℃에서 표면 RFU. 표면 RFU는 37℃에서 퀀칭되지 않은 RFU - 37℃에서 퀀칭된 RFU) / QE로 정의된다. QE(퀀칭 효능)은 1-(4℃에서 퀀칭된 샘플에서 총 RFU / 4℃ 퀀칭된 샘플의 총 RFU). 내재화%는 다음의 식으로부터 측정하였다: (37℃에서 총 내재화된 RFU / 37℃에서 총 RFU)*100.
[표 19]
Figure pct00529
ND*: 내재화%는 퀀칭 효능을 측정하기 위해 약한 결합 및/또는 불능으로 인해 측정될 수 없었다.
**: A% 내재화된 값 >100%는 37℃에서 총 결합보다 약간 더 높은 총 내재화된 값에 기인한다. 100%의 내재화는 37℃에서 혈관 구조내로 모든 Alex488 형광성의 출현에 의해 가시적으로 확인하였다.
표 19에 나타낸 바와 같이, 21개의 검정된 항-MSR1 항체 중 19개는 13.3% 내지 117.9% 내재화의 범위의 분화된 THP-1 세포로의 내재화를 입증하였다. 21개의 항-MSR1 항체 중 2개의 경우, 내재화는 퀀칭 효능을 측정하기 위한 약한 결합 및/불능으로 인하여 측정할 수 없었다. 대조군으로서, 동형 대조군은 임의의 측정가능한 내재화를 입증하지 않았다.
실시예 32: 사람 MSR1에 대한 항-MSR1 항체의 차단 능력 검정
사람 MSR1에 대한 다양한 리간드의 결합을 차단하기 위한 본원에 개시된 항-MSR1 항체의 능력을 3개의 경쟁 샌드위치 ELISA 검정을 사용하여 측정하였다. 검정에 사용된 리간드는 다음과 같았다: (1) 아세틸화된 LDL(Ac-LDL), (2) 산화된 LDL(Ox-LDL), 및 (3) 소 혈청 알부민의 진전된 당화 최종-생성물(advanced glycation end-products of bovine serum albumin)(AGE-BSA).
검정을 위해, N-말단 9-히스티딘 태그(서열 번호: 688)와 함께 발현된 사람 MSR1 세포외 도메인(His9-hMSR1; R&D systems, 카탈로그 번호 2708-MS)의 부위로 구성된 재조합 단량체성 사람 MSR1 단백질을 PBS 속에서 2 μg/mL의 농도로 96-웰 미세역가 플레이트에서 밤새 4℃에서 Ac-LDL, Ox-LDL, 또는 바이오티닐화된-AGE-BSA("biot-AGE-BSA")를 사용한 경쟁 ELISA 검정에서 사용하기 위해 코팅하였다. 비특이적인 결합 부위를 포스페이트-완충된 염수(PBS) 속에서 소 혈청 알부민(BSA)의 0.5%(w/v) 용액을 사용하여 후속적으로 차단하였다. 항-MSR1 항체 또는 동형 대조군 항체를 각각의 시험한 리간드에 대해 적절하게 희석시키고 His9-hMSR1로 코팅된 미세역가 플레이트에 대한 각각의 일련의 희석 세트에 대해 중복으로 가하였다. 완충제 만을 또한 각각의 코트 상에서 웰에 가하였다. 세척하지 않고, 실온에서 1시간 항온처리 후, 50 pM의 Ac-LDL(Life Technologies/ThermoFisher Scientific, 카탈로그 번호 L-35354), 5 nM 또는 10 nM Ox-LDLAlfa Aesar, 카탈로그 번호 J65591), 또는 400 pM biot-AGE-BSA(R&D systems, 카탈로그 번호 BT4127)의 최종 고정 농도를 His9-hMSR1을 지닌 플레이트에 가하고, 플레이트를 실온에서 추가로 1시간 동안 항온처리하였다. (항체 억제 검정에 대한 Ac-LDL, Ox-LDL 및 biot-AGE-BSA의 농도를 플레이트-코팅된 His9-hMSR1에 대한 Ac-LDL, Ox-LDL 또는 biot-AGE-BSA의 개개 결합 곡선의 선형 부분 내 적절한 중간점으로부터 선택하였다). 웰을 세척하고, 플레이트-결합된 Ac-LDL 또는 Ox-LDL을 서양 고추냉이 퍼옥시다제(HRP)(JacksonImmunoResearch, 카탈로그 번호 711-035-152)와 접합된 항-토끼 IgG(H+L) 특이적인 당나귀 폴리클로날 항체와 함께 항-LDL 토끼 항체(Alfa Aesar, 카탈로그 번호 J64398)로 검출하고 biot-AGE-BSA를 스트렙타비딘-HRP(ThermoFisher Scientific, 카탈로그 번호 N200)로 검출하였다. 플레이트를 TMB 기질 용액(BD Biosciences, 카탈로그 번호 51-2606KC & 카탈로그 번호 51-2607KC)을 사용하여 제조업자의 추천에 따라 전개시키고 450 nm에서의 흡광도를 VictorTM 멀티레벨 플레이트 판독기(Multilabel Plate Reader)(PerkinElmer)로 측정하였다. 당해 검정은 4개의 상이한 검정 작동으로 수행하였다.
데이타 분석을 S자형 용량-반응 모델(sigmoidal dose-response model)을 사용하여 Prism™ 소프트웨어(GraphPad)로 수행하였다. 각각의 검정에서 시험한 항체의 최대 농도에서 차단 퍼센트는 검정의 기본선에 대해 플레이트에서 His9-hMSR1에 대한 Ac-LDL, Ox-LDL 또는 biot-AGE-BSA의 결합을 차단하는 항체의 능력의 지표로서 계산하였다. 계산시 항체의 부재하에 검정에 사용된 동일한 농도의 Ac-LDL, Ox-LDL, 또는 biot-AGE-BSA의 결합 신호를 100% 결합 또는 0% 차단으로 지칭하는 반현, MSR1 리간드 또는 항체의 부재하에서 완충액의 샘플의 결합 신호로서 정의된, 검정의 기본선은 0% 결합 또는 100% 차단으로 지칭하였따. 각각의 검정에서 시험된 항체의 최고 농도에서 최대 차단 퍼센트를 모든 항체에 대해 기록한다. 부정적인 차단 퍼센트 숫자는 항체의 존재하에서 His9-hMSR1로 코팅된 플레이트에 대한 보다 높은 MSR1 리간드 결합을 반영하였다. 차단 결과는 표 20에 요약한다.
[표 20]
Figure pct00530
Figure pct00531
35개의 검정된 항-MSR1 항체 중 4개는 hMAR1에 대한 Ac-LDL, Ox-LDL, 및 biot-AGE-BSA 결합의 >50%를 차단하는 것으로 확인되었다. 이러한 4개의 항-MSR1 항체는 His9-hMSR1에 대한 50 pM의 Ac-LDL, 10-nM Ox-LDL 및 400-pM biot-AGE-BSA 결합의 95% 초과를 차단하였다.
시험한 항체의 최대 농도에서, 35개의 항-MSR1 항체 중 4개는 hMSR1에 대한Ac-LDL 및/또는 Ox-LDL 결합을 >50% 차단하였지만 hMSR1에 대한 biot-AGE-BSA 결합을 차단하지 않았다. 이러한 항체 중 3개는 hMSR1에 대한 50 pM의 Ac-LDL 및 10 nM의 Ox-LDL 결합 둘 다를 52% 내지 98% 차단까지 차단하였다. 1개의 항체(H1H21234N-N297Q)는 hMSR1에 대한 50 pM의 Ac-LDL 결합 만을 75% 차단으로 차단하였다.
35개의 항-MSR1 항체 중 27개 및 관련이 없는 동형 대조군 항체는 hMSR1에 대한 Ac-LDL, Ox-LDL, 및 biot-AGE-BSA 결합의 <50%를 차단하였다.
3개의 항-MSR1 항체(21227N, 21231N, 21234N)를 원래의 사람 Fcγ 부위 및 N297Q 단일의 점 돌연변이를 지닌 버젼 둘 다에서 생산하였다. 21227N 항체는 또한 N297D 돌연변이를 지닌 제3 버젼으로 생산되었다. 21227N(H1H21227N-N297Q 및 H1H21227N-N297D) 및 21231N(H1H21231N-N297Q) 항-MSR1 항체의 변형된 버젼은 모 특성을 보유하였다. 항체 H1H21227N-N297Q 및 H1H21227N-N297D은 hMSR1에 대한 Ac-LDL, Ox-LDL, 및 biot-AGE-BSA 결합의 >50%를 차단한 반면, 항체 H1H21231N-N297Q는 hMSR1에 대한 Ac-LDL, Ox-LDL, 및 biot-AGE-BSA 결합의 <50%를 차단하였다. 항-MSR1 변형된 항체 H1H21234N-N297Q는 hMSR1에 대한 Ac-LDL 및 Ox-LDL 결합 둘 다에 대해 >50%를 차단한, 변형되지 않은 H1H21234N 항체와 비교하여 hMSR1에 대한 50 pM의 Ac-LDL 결합 만을 차단하였다.
실시예 33: 세포내 에스. 아우레우스 항체-약물 접합체 사멸 검정 1(MSR1)
사용된 시약은 하기 표 21에 나타낸다.
[표 21]
Figure pct00532
시험관 내에서 본 개시내용에 따른 항-MSR1 Ab-항생제 ncADC의 효능을 시험하기 위하여, 세포내 에스. 아우레우스 사멸 검정을 이용하였다. 검정을 위해, THP-1 단핵구 세포주를 10% FBS 및 1% 페니실린/스트렙토마이신을 함유하는 RPMI로 구성된 배지에서 성장시킨 다음, 96 웰 플레이트 속에서 1x105개의 세포/웰의 밀도에서 씨딩하고 200 nM의 포르볼 미리스테이트 아세테이트(PMA)를 사용하여 감염 전 3일 동안 대식구로 분화시켰다. 에스. 아우레우스 MRSA 균주 NRS384의 밤샘 배양물을 RPMI 속에서 성장시키고, PBS로 2회 세척하고 후속적으로 PBS 속에서 1x107 cfu/mL에서 재현탁시켰다. THP-1 세포를 따뜻한 배지(FBS가 들어있지 않은 RPMI)로 세척하여 페니실린/스트렙토마이신을 제거한 다음 에스. 아우레우스 현탁액을 사용하여 10:1(에스. 아우레우스: 대식구)의 감염 다중도로 감염시켰다. 플레이트를 300 xg에서 5분 동안 회전시켜 세균의 부착을 동시발생시킨 다음 37℃에서 2시간 동안 항온처리하였다. 자유 부유하는 세균을 따뜻한 배지로 2회 세척함으로써 제거하고 남아있는 세포외 에스. 아우레우스는 100 μg/mL의 겐타마이신을 함유하는 배지를 첨가하여 사멸시켰다. 1시간 후, 배지를 흡인하고 상이한 용량(10 μg/mL, 3.3 μg/mL, 1.1 μg/mL, 0.4 μg/mL, 0.1 μg/mL, 및 0.04 μg/mL)에서 쇄간 시스테인을 통해 본 개시내용에 따른 말레이미도 링커 페이로드 유도체 화합물 25 및 80에 접합되고 10 μg/mL에서 동형 대조군- 항생제 ncADC(동형 대조군-N297Q-25 및 동형 대조군-N297Q-80)에 접합된 항-MSR1 Ab-항생제 ncADC(H1H21234N-N297Q-25 및 H1H21234N-N297Q-80)를 50 μg/mL의 겐타마이신을 함유하는 배지 속의 감염된 대식구에 가하여 에스. 아우레우스의 세포외 성장을 방지하였다. 어떠한 ncADC도 함유하지 않는 샘플을 또한 참고로 포함시켰다. 24시간 후, 플레이트를 FBS가 들어있지 않은 따뜻한 RPMI로 2회 세척한 다음 PBS 중 100 μL의 트리톤 X-100을 가하고 10분 동안 항온처리하여 THP-1을 분해하였다. 에스. 아우레우스 생존을 PBS 속에서 일련 희석 및 트립티카제 대두 아가 플레이트 상에서의 플레이팅을 통한 콜로니 형성 단위에 의해 열거하였다.
DAR은 하기 표 22에 요약한다.
[표 22]
Figure pct00533
결과는 하기 표 23에 요약한다.
[표 23]
Figure pct00534
표 23에 나타낸 바와 같이, 항-MSR1 Ab-항생제 ncADC(H1H21234N-N297Q-25 및 H1H21234N-N297Q-80)는 처리되지 않은 대조군과 비교하여 시험관내에서 감염된 대식구로부터 세포내 에스. 아우레우스를 용량-의존적 방식으로 감소시키는 능력을 입증하였다. 10 μg/mL에서 동형 대조군- 항생제 ncADC(동형 대조군-N297Q-25 및 동형 대조군-N297Q-80)로 처리한 대식구는 처리되지 않은 대조군과 유사한 수준으로 세포내 에스. 아우레우스를 지녔다. 이러한 데이타는 본 개시내용에 따른 항-MSR1 Ab-항생제 ncADC가 대식구 저장기(reservoir)내에 잔존하는 병원체를 효과적으로 사멸시키는데 사용될 수 있음을 입증한다.
실시예 34: 에스. 아우레우스 IV 전파된 감염 마우스 모델
생체내에서 본 개시내용에 따른 항-MSR1 Ab-항생제 ncADC의 효능을 시험하기 위해, 정맥내 전파된 감염 모델을 이용하였다. 에스. 아우레우스 MRSA 균주 NRS384를 트립틱 대두 브로쓰(TSB) 속에서 밤새 성장시키고 중간-대수기 상으로 아-배양하였다. 이후에, 세균을 PBS로 2회 세척하고 PBS 속에서 1.2x10^8 cfu/mL의 농도로 재현탁시켰다. 이후에, 마우스 MSR1 세포외 및 막관통 도메인 대신에 사람 MSR1 세포외 도메인 및 막관통 도메인(사람화된 MSR, MAID 7343-MSR1 HumIn delHyg)을 균질하게 발현하는 마우스를 꼬리 정맥을 통해 100 μL의 세균 현탁액을, 1.2x10^7 cfu/마우스의 최종 감염 용량을 위해 정맥내 감염시켰다. 감염 후 1 내지 3일 후, 마우스를 110 mg/kg의 반코마이신으로 나타낸 경우 매일 2회 피하 치료하였다. 본 개시내용에 따라 링커 페이로드 유도체 화합물 25에 쇄간 시스테인을 통해 접합된 본 개시내용에 따른 항-MSR1 항체, 말레이미도 링커 페이로드 유도체 화합물 25에 접합된 동형 대조군 항체 또는 ncADC 동형 대조군인, 항-MSR1 모노클로날 항체(H1H21234N-N297Q), 항-MSR1 Ab-항생제 ncADC(H1H21234N-N297Q-25) 하나를 표 24에 기술된 바와 같이, 나타낸 용량에서 감염 1일 후 피하 투여하였다. 마우스를 감염 전체에서 체중 손실 및 신체 조건화 점수에 대해 모니터링하였다. 감염 4일 후, 마우스를 희생시키고 에스. 아우레우스 신장 부담(burden)을 조직 균질화에 이은 PBS 속에서 일련 희석 및 트리피카제 대두 아가 플레이트에 플레이팅을 통한 콜로니 형성 단위에 의해 정량화하였다.
[표 24]
Figure pct00535
검출 한계 = 250개의 콜로니 형성 단위(cfu)
상기 표 24에 나타낸 바와 같이, 에스. 아우레우스 MRSA 균주 NRS384를 사용한 정맥내 감염은 신장내 높은 세균 부담을 야기하며, 표준 보호 항생제 반코마이신을 사용한 마우스의 치료는 에스. 아우레우스 신장 부담을 대략 2 로그까지 감소시키나, 마우스 중 어느 것도 검출 한계(LOD) 이하로 감소된 에스. 아우레우스를 가지지 않았다. 반코마이신과 함께 1 및 0.1 mg/kg의 용량에서 항-MSR1 Ab-항생제 ncADC(H1H21234N-N297Q-25)는 마우스의 77% 및 75%에서 LOD 이하의 에스. 아우레우스 수준을 생성하였고, 이는 Ab-항생제 ncADC 조합 치료요법을 사용하여 치료한 마우스에서 에스. 아루레우스 청소에 있어 현저한 증진을 입증한다. 에스. 아우레우스 청소는 동형 대조군 ncADC 접합체(동형 대조군-N297Q-25) 및 반코마이신으로 치료한 마우스에서 거의 분명하지 않았고, 이는 대식구를 표적화하는 페이로드의 이점을 입증한다.
실시예 35: 아미노-링커-페이로드에 대한 아글리코실화된 항체에 대한 접합 방법
화합물 80 및 82의 세균 트랜스글루타미나제 접합
당해 부위에서 Fc의 N-연결된 글리코시드화를 제거하는, N297Q 돌연변이를 함유하는 항-MSR1 항체 H1H21234N를 사용하였다. 당해 돌연변이는 항체가 중쇄의 295Q 및 297Q에서 4의 최대 로딩으로 접합되도록 하였다. 동일한 N297Q 돌연변이를 함유하는 비표적화 항체 대조군은 비-결합 동형 대조군으로서 사용하였다.
탈글리코실화된 대조군 및 MSR1 항체를 PBS pH 7.4 속에서 1 mg/mL로 접합시켰다. 화합물 80 또는 82를 항체보다 10 내지 40배 몰 과량으로 가하고 효소 반응을 항체 mg당 12 단위의 세균 트랜스글루타미나제(Zedira, T1001)를 가하여 개시하고 37℃에서 4 내지 16시간 동안 항온처리하였다. 샘플을 SEC에 의해 PBS내로 정제하였다. 접합체를 약물 대 항체 비(DAR)의 측정을 위해 ESI-MS로 및 소수성 상호작용 크로마토그래피(HIC)로 분석하였다. 결과는 표 25에 나타낸다.
[표 25]
Figure pct00536
소수성 상호작용 크로마토그래피(HIC)에 의한 접합체의 특성화
항체에서 링커-페이로드의 로딩을 측정하기 위하여, 접합체를 Agilent 1260 위에서 TSK-NPR 부틸 HIC 컬럼을 사용하여 수 중 1M 인산칼륨 pH 8.5의 선형 구배로 60분 동안 작동시켰다. 페이로드 로딩은 접합된 및 접합되지 않은 항체의 종에 상응하는 피크 면적의 통합으로 측정하였다.
ESI-MS에 의한 접합체의 특성화
크로마토그래피 분리를 C4 컬럼(0.3 X 50 mm ACQUITY UPLC BEH 단백질 C4, 1.7 um, 300 A) 위에서 10분 구배(분: 이동상 B의 퍼센트; 0:5%, 2:50%, 2.1:26%, 6.5:40%, 6.6:90%, 8.5:90%, 8.6:5%, 10:5%, 10.5:90%, 12.5:90%, 12.9:5%, 15:5%)로 달성하였다. 이동상 A는 수중 0.1% 포름산이고 이동상 B는 아세토니트릴 중 0.1% 포름산이었다. 유동 속도는 8 μL/min에서 설정하였다. 검출기 TOF 스캔을 m/z 500-4500로부터 나타낸 주요 매개변수(모세관 전압 3.0 kV; 샘플링 콘(Sampling Cone) 80V; 100V에서 공급원 오프셋(Source Offset); 공급원 온도 150℃; 탈용매화 온도 400℃; 콘 가스(Cone gas) 0 L/hr; 탈용매화 가스 600 L/hr)를 사용하여 설정하였다. 스펙트럼을 MassLynx 소프트웨어 내에서 MaxEnt 함수를 사용하여 디컨벌루션(deconvolution)시켰다.
평균 약물 대 항체 비(DAR) 계산은 다음의 수학식을 사용한 디컨벌루션된 질량 스펙트럼 피크 강도를 기반으로 하였다:
Figure pct00537
여기서 PI는 피크 강도이고 D는 개개 DAR이다.
실시예 36: 항체 가공된 시스테인 탈차단
항-단백질 A(H1xH15140P*/*) 및 비표적화 항체 대조군 가공된 항체를 쇄간 이황화물 형성 중쇄 C103S를 돌연변이시켜 생성하였다. 항체를 CHO 세포내에서 발현시키며 30배 몰 과량의 환원제, TCEP를 첨가한 다음 완충액 교환에 의해 실온에서 PBS 중 온화한 환원을 사용하여 천연 경쇄 시스테인에 탈차단할 필요가 있다. 2개의 중쇄 쇄간 이황화물 결합을 재형성시키기 위하여, 항체를 3시간 동안 실온에서 CuSO4 또는 dhAA와 함께 2 내지 20배 몰 과량으로 항온처리하였다. 환원된 및 산화된 항체를 PBS로 교환하여 산화제를 제거하였다. 당해 공정은 경쇄에 잔류하고 마레이미드 접합에 이용가능한 2개의 유리 티올을 생산한다.
항-WTA 가공된 항체를 문헌(Lehar et al, Nature-2015 527,-323-328; 이의 내용이 본원에 이의 전문으로 참고로 인용된, US20140356375 및 WO2016090038에 기술된 항체 4497)으로부터 구하고 경쇄 돌연변이 V205C를 가짐으로써 말레이미드 접합을 위한 2개 부위를 제공하였다. 동일한 과정을 사용하여 가공된 시스테인을 탈차단시켰다.
링커 페이로드에 대한 항체 가공되고 탈차단된 시스테인의 접합
PBS pH 7.5 중 환원된 및 산화된 항체(1 내지 10 mg/ml)에, 말레이미도 링커 페이로드(2 당량/SH 그룹, Lehar et al, Nature 527,-323-328), 또는 DMSO(10 mg/ml) 중 이러한 충전물(filing)의 링커 페이로드를 가하였다. 반응을 2시간 동안 진행시켰다. 접합체를 PBS로 크기 배제 크로마토그래피에 의해 정제하고 멸균 여과하였다. 단백질 농도 및 페이로드 대 항체 비를 UV 스펙트럼 분석으로 측정하였다. 크기-배제 HPLC는 사용된 모든 접합체가 >95% 단량체성임을 확립하였고, RP-HPLC는 <1%의 접합되지 않은 링커 페이로드가 존재함을 확립하였다. 모든 접합된 항체를 HIC로 링커 페이로드 로딩 값에 대해 분석하였다. 페이로드 대 항체 비를 표 26에 기록한다.
아글리코실화된 항체(H1H21234N 및 비표적화 항체 대조군)에 대한 접합 방법
50 mM HEPES, 150 mM NaCl, pH 7.5 중 항체(1 내지 10 mg/ml)를 1 mM 디티오트레이톨로 37℃에서 30분 동안 처리하였다. 겔 여과(G-25, pH 4.5 아세트산나트륨) 후, DMSO(10 mg/ml) 중 말레이미도 링커 페이로드 유도체 화합물 25(1.2 당량/SH 그룹)을 환원된 항체게 가하고 혼합물을 1 M HEPES(pH 7.4)를 사용햐어 pH 7.0으로 조정하였다. 접합체를 PBS를 사용하여 5% 글리세롤로 크기 배제 크로마토그래피에 의해 정제하고 멸균 여과하였다. 단백질 농도 및 페이로드 대 항체 비를 UV 스펙트럼 분석으로 측정하였다. 크기-배제 HPLC는 사용된 모든 접합체가 >95% 단량체성이었음을 확립하였다. 모든 접합된 항체를 HIC로 링커 페이로드 로딩 값에 대해 분석하였다. 페이로드 대 항체 비는 표 26에 기록한다.
[표 26]
Figure pct00538
리팔로그(Lehar et al, Nature-2015 527,-323-328; WO2016090038):
Figure pct00539
소수성 상호작용 크로마토그래피(HIC)에 의한 접합체의 특성화
항체에서 링커-페이로드의 로딩을 측정하기 위하여, 접합체를 Agilent 1260에서 TSK-NPR 부틸 HIC 컬럼을 사용하여 1M 인산칼륨 pH 8.5 내지 물의 선형 구배로 60분에 걸쳐 작동시켰다. 페이로드 로딩을 접합된 및 접합되지 않은 항체의 종에 상응하는 피크 면적의 통합으로 측정하였다.
ESI-MS에 의한 접합체의 특성화
항체(시스테인 접합체)에서 링커-페이로드의 로딩을 측정하기 위하여, 접합체를 탈글리코실화하고, 환원시키고, LC-MS로 분석하였다.
검정을 위해, 50 μg의 접합체를 mili-Q 물로 1 mg/mL의 최종 농도로 희석시켰다. 10 μL의 PNGase F 용액[PNGase F 용액은 150 μL의 PNGase F 스톡(New England Biolabs, 카탈로그 번호 P0704L) 및 850 μL의 밀리-Q 물(mili-Q water)을 가하고 잘 혼합하여 제조하였다]을 희석된 접합체 용액에 가하고 37℃에서 밤새 항온처리하였다. 2.4 μL의 0.5 M TCEP를 샘플에 가함으로써 수득되는 물질이 20 mM의 최종 TCEP 농도를 갖도록 하고 이를 이후에 50℃에서 30분 동안 항온처리하였다. 10 μL의 각각의 샘플의 주입을 LC-MS(Waters Synat G2-Si)에서 이루고 0.1 mL/분의 이동상 B의 구배 이동상 20 내지 40%으로 25분에 걸쳐 용출시켰다(이동상 A: H2O 중 0.1% v/v FA; 이동상 B: 아세토니트릴 중 0.1% v/v FA). LC 분리를 Waters Acquity BEH C18 컬럼(1.0 X 50 mM, 1.7 μM)에서 달성하였다.
질량 분광법 스펙트럼을 탈컨벌루션시키고 확인된 경쇄 및 중쇄 피크는 링커-페이로드 값이 0 및 1인 경쇄(L), 링커-페이로드 값이 0, 1, 2, 및 3인 중쇄(H)를 나타내었다. 각각의 종의 강도 값으로부터, 약물 대 항체 비(DAR)를 단독-이량체 항체 접합체에 대해 하기 수학식을 사용하여 계산하였다.
Figure pct00540
실시예 37: 브로쓰(Broth) 최소 억제 농도(MIC) 검정 2
시험관내에서 본 개시내용의 리파마이신 유사체의 잠재능을 시험하기 위하여, 브로쓰 성장 억제 검정을 개발하였다. 검정을 위해, 에스. 아우레우스 NRS384을 트립틱 대두 브로쓰(TSB) 속에서 밤새 성장시킨 다음, 신선한 TSB 속에서 1:50으로 아-배양(sub-culturing)시키고 추가로 2시간 동안 성장시켰다. 이후에, 배양물을 원심분리를 통해 펠렛화하고 PBS 속에서 2회 세척하여다. 배양물을 이후에 TSB 속에서 1x106 cfu/mL로 희석시키고 100 μL의 현탁액을 웰당 2 mL 희석 플레이트에 3중으로 가하였다. 나타낸 항생제(본 개시내용에 따른 유사체 또는 앞서 공지된 유사체 리팜피신)의 희석 시리즈를 1x10-5 M의 최종 출발 농도에 대해 1:1, 이후 1x10-6 M에 대해 1:10 희석, 이후 총 11개의 점에 대해 2.5x10-5 M, 6.25x10-8 M, 1.56x10-8 M, 3.91x10-9 M, 9.77x10-10 M, 2.44x10-10 M, 6.1x10-11 M, 1.53x10-11 M, 및 3.81x10-12 M를 포함하도록 1:4 희석으로 가하였다. 플레이트를 밀봉시키고 37℃에서 24시간 동안 진탕하면서 항온처리한 다음, 150 μL의 각각의 샘플을 96 웰 미세역가 플레이트에 가하고 OD600 nm를 Spectramax i3 Minimax 300에서 판독하였다.
사용된 시약은 하기 표 27에 나타낸다.
[표 27]
Figure pct00541
에스. 아우레우스의 성장을 억제한 최소 농도(최소 억제 농도, MIC)를 표 28에 나타낸다. 표 28에 나타낸 바와 같이, 본 개시내용에 따른 모든 리파마이신 유사체는 준-마이크로몰(sub-micromolar) 내지 나노몰 농도에서 에스. 아우레우스의 성장을 억제하는데 효과적이다. 브로쓰 MIC 실험은 적어도 2개의 별도의 실험에서 평가하였으며 중간 값(median value)은 달리 나타내지 않는 한 하기에서 포착한다.
[표 28]
Figure pct00542
Figure pct00543
실시예 38: 세포내 사멸 검정 2
에스. 아우레우스에 대한 리파마이신 유사체 화합물의 활성을 세포내 '사멸' 검정에서 시험하였다.
사용된 결과는 하기 표 29에 나타낸다.
[표 29]
Figure pct00544
THP-1 단핵구 세포주를 배지(RMPI + 10% FBS + 1% 페니실린/스트렙토마이신) 속에서 성장시킨 다음, 1e5개의 세포/웰의 밀도로 96 웰 플레이트 속에 씨딩하고 200 nM PMA를 사용한 감염 전 3일 동안 대식구로 분화시켰다. 에스. 아우레우스 NRS384의 밤샘 배양물을 RPMI 속에서 성장시키고, PBS로 2회 세척하고 PBS 속에 1e7 cfu/mL로 재현탁시켰다. THP-1를 따뜻한 배지(FBS가 없는 RMPI)로 세척하여 페니실린/스트렙토마이신을 제거한 다음 에스. 아우레우스 현탁액으로 10:1(에스. 아우레우스 : 대식구)의 감염 다중도로 감염시켰다. 플레이트를 300 xg에서 5분 동안 회전시켜 세균의 부착을 발생시킨 다음 37℃에서 2시간 동안 항온처리하였다. 자유-부유하는 세균을 따뜻한 배지로 2회 세척하여 제거하고 잔류하는 세포외 에스. 아우레우스는 겐타마이신(50 ug/mL)을 함유하는 배지를 첨가하여 사멸시켰다. 1시간 후, 배지를 흡인하고 나타낸 화합물을 감염된 대식구에 1e-6 M에서 출발하여, 6 점(1.0x10-6 M, 2.0x10-7 M, 4.0x10-8 M, 8.0x10-9 M, 1.6x10-9 M, 및 3.2x10-10 M)에 대해 1:5의 희석으로 가하였다. 화합물을 50 μg/mL의 겐타마이신을 함유하는 배지에 가하여, 에스. 아우레우스의 세포외 성장을 방지하였다. 2시간 후, 플레이트를 FBS가 들어있지 않은 따뜻한 RPMI으로 2회 세척하고, 100 ul의 THP-1 분해 완충액(PBS 중 0.1% 트리톤)을 각각의 웰에 가하였다. 에스. 아우레우스 생존은 일련 희석 및 TSA에 플레이팅을 통한 콜로니 형성 단위에 의해 열거하였다.
세포내 사멸 검정의 결과는 표 30에 나타낸다. 최소 억제 농도(MIC)는 검출 한계(50 cfu/mL) 이하의 세포내 에스. 아우레우스를 생성한 각각의 화합물의 최저 농도에 상응한다. 세포내 MIC 값은 달리 나타내지 않는 한 적어도 2개의 별개의 실험의 중간 값을 나타낸다.
[표 30]
Figure pct00545
Figure pct00546
표 30이 입증하는 바와 같이, 본 개시내용에 따른 리파마이신 유사체(및 리팜피신)에 대한 세포내 사멸 MIC는 >1e-6 M 내지 4e-8 M의 범위이었고, 8개의 신규한 리파마이신 유사체는 강력한 세포내 사멸 활성을 나타내었다.
실시예 39: 세포내 에스. 아우레우스 항체-약물 접합체 사멸 검정 2(항-WTA 및 항-단백질 A)
사용된 시약은 하기 표 31에 나타낸다.
[표 31]
Figure pct00547
본 개시내용의 리파마이신 유사체 화합물을 항-WTA 항체(항-WTA mAb, hIgG1), 항-단백질 A 항체(항-단백질 A mAb, hIgG1** C103S), 또는 대조군 항체 (비-표적화 동형 대조군, hIgG1**)에 접합시켰다.
시험관내에서 본 개시내용의 항-스타필로코쿠스 아우레우스 항체-약물 접합체(ADC)의 효능을 시험하기 위하여, 에스. 아우레우스 세포내 사멸 검정을 개발하였다. 검정을 위해, THP-1 단핵구 세포주를 배지(RMPI + 10% FBS + 1% 페니실린/스트렙토마이신) 속에서 성장시킨 다음, 1e5개의 세포/웰의 밀도로 48 웰 플레이트 속에 씨딩하고 200 nM PMA를 사용한 감염 전 3일 동안 대식구로 분화시켰다. 에스. 아우레우스 NRS384의 밤샘 배양물을 RPMI 속에서 성장시키고, PBS로 2회 세척하고 1e7 cfu/mL로 PBS 속에 재현탁시켰다. 에스. 아우레우스 현탁액을 나타낸 항-에스. 아우레우스 ADC와 함께 10 ug/mL로 출발하는 희석 시리즈에서, 6점(10, 3.3, 1.1, 0.37, 0.12, 및 0.041 μg/mL의 최종 농도)에 대해 1:3 희석으로 예비항온처리하고 동형 대조군 ADC를 최고 농도에서만 시험하였다. THP-1를 따뜻한 배지(FBS가 들어있지 않은 RMPI)로 세척하고 페니실린/스트렙토마이신을 제거한 다음 예비-항온처리한 에스. 아우레우스 현탁액 및 ADC, 네이키드(naked) 항체 또는 mAb 없이 10:1(에스. 아우레우스: 대식구)의 감염 다중도에서 감염시켰다. 플레이트를 300 xg에서 5분 동안 회전시켜 세균의 부착을 발생시키고, 37℃에서 2시간 동안 항온처리하였다. 자유-부유하는 세균을 따뜻한 배지로 2회 세척함으로써 제거하고 잔류하는 세포외 에스. 아우레우스는 겐타마이신(50 μg/mL)을 함유하는 배지를 첨가하여 사멸시켰다. 24시간 후, 배지를 흡인하고 FBS가 들어있지 않는 따뜻한 RPMI로 2회 세척하고, 100 μl의 THP-1 분해 완충액(PBS 중 0.1% 트리톤) 및 150 μl의 PBS를 각각의 웰에 가하였다. 에스. 아우레우스 생존은 일련 희석 및 TSA 에서의 플레이팅을 통한 콜로니 형성 단위에 의해 열거하였다.
세포내 사멸 검정의 결과는 도 5 및 표 32에 나타내며, 검출 한계는 50 cfu/mL이다.
[표 32]
Figure pct00548
사람 IgG1 동형이어서 에스. 아우레우스에서 단백질 A에 결합할 수 있는 대조군 ADC(비-표적화 동형 대조군 접합체)는 세포내 에스. 아우레우스 생존능(viability)을 처리되지 않은 대조군과 비교하여 ~1 로그 이하까지 감소시켰다. 리팜피신 페이로드를 방출하는 항-WTA mAb-21은 대조군 ADC와 유사하게 세포 부담을 감소시켰다. 페이로드를 강력한 세포내 사멸 활성으로 전달하는 항-에스. 아우레우스 ADC(항-WTA mAb-25, 항-단백질 A mAb-36, 항-WTA mAb-Rifalog, 및 항-WTA mAb-36)는 세포내 에스. 아우레우스를 감소시키는데 있어 처리되지 않은 대조군과 비교하여 3 로그 이상의 감소로 리팜피신(항-WTA mAb-21) 보다 더 효과적이었다. 항-WTA mAb-36은 다수 실험에서 항-WTA mAb-리팔로그보다 더 에스. 아우레우스 생존능을 지속적으로 감소시켰다.
실시예 40: 세포내 에스. 아우레우스 항체-약물 접합체 사멸 검정 3(MSR1)
사용된 시약은 하기 표 33에 나타낸다.
[표 33]
Figure pct00549
시험관내에서 본 개시내용의 항-MSR1 Ab-항생제 ncADC의 효능을 시험하기 위하여, 세포내 에스. 아우레우스 사멸 검정을 이용하였다. 검정을 위해, THP-1 단핵구 세포주를 10% FBS 및 1% 페니실린/스트렙토마이신을 함유하는 RPMI로 구성된 배지 속에서 성장시킨 다음, 1x105개의 세포/웰의 밀도로 48 웰 플레이트 속에 씨딩하고 200 nM 포르볼 미리스테이트 아세테이트(PMA)를 사용한 감염 전 3일 동안 대식구로 분화시켰다. 에스. 아우레우스 MRSA 균주 NRS384의 밤샘 배양물을 RPMI 속에서 성장시키고, PBS로 2회 세척하고 후속적으로 1x107 cfu/mL로 PBS 속에 재현탁시켰다. THP-1 세포를 따뜻한 배지(FBS가 들어있지 않은 RMPI)로 세척하여 페니실린/스트렙토마이신을 제거한 다음 에스. 아우레우스 현탁액으로 10:1(에스. 아우레우스: 대식구)의 감염 다중도에서 감염시켰다. 플레이트를 300 xg에서 5분 동안 회전시켜 세균의 부착을 발생시키고, 37℃에서 2시간 동안 항온처리하였다. 자유-부유하는 세균을 따뜻한 배지로 2회 세척함으로써 제거하고 잔류하는 세포외 에스. 아우레우스는 50 μg/mL의 겐타마이신을 함유하는 배지를 첨가하여 사멸시켰다. 1시간 후, 배지를 흡인하고 항-MSR1 Ab-항생제 ncADC(H1H21234N-N297Q-25 및 H1H21234N-N297Q-80)를 상이한 용량(10 μg/mL, 3.3 μg/mL, 1.1 μg/mL, 0.4 μg/mL, 0.1 μg/mL 및 0.04 μg/mL)에서 및 동형 대조군- 항생제 ncADC(동형 대조군-N297Q-25 및 동형 대조군-N297Q-80)를 10 μg/mL에서 감염된 대식구에 50 μg/mL 겐타마이신을 함유하는 배지 속에서 가하여 에스. 아우레우스의 세포외 성장을 방지하였다. 어떠한 ncADC도 없는 샘플을 또한 참고로 항온처리하였다. 24시간 후, 플레이트를 FBS가 들어있지 않는 따뜻한 RPMI로 2회 세척하고, PBS 중 100 μl의 0.1% 트리톤 X-100을 가하고 10분 동안 항온처리하여 THP-1을 분해하였다. 에스. 아우레우스 생존은 PBS 속에서 일련 희석 및 트립티카제 대두 아가 플레이트에서 플레이팅을 통한 콜로니 형성 단위에 의해 열거하였다.
결과는 하기 표 34에 요약한다.
[표 34]
Figure pct00550
표 34에 나타낸 바와 같이, 항-MSR1 Ab-항생제 ncADC(H1H21234N-N297Q-25 및 H1H21234N-N297Q-80)는 처리되지 않은 대조군과 비교하여 시험관내에서 대식구내 세포내 에스. 아우레우스를 용량-의존적 방식으로 감소시키는 능력을 입증하였다. 동형 대조군- 항생제 ncADC (동형 대조군-N297Q-25 및 동형 대조군-N297Q-80)를 10 μg/mL에서 처리한 대식구는 처리되지 않은 대조군과 유사한 수준에서 세포내 에스. 아우레우스를 지녔다. 이러한 데이타는 본 개시내용에 따른 항-MSR1 Ab-항생제 ncADC가 대식구 저장기 내에 잔존하는 병원체를 효과적으로 사멸시키는데 사용될 수 있음을 입증한다.
실시예 41: 에스. 아우레우스 IV 전파된 감염 마우스 모델(4일 모델)
생체내에서 단독으로 또는 보호 표준 MRSA 항생체 반코마이신과 함께 본 개시내용의 항-에스. 아우레우스 Ab-항생제 ncADCof의 효능을 시험하기 위해, 4일 정맥내 전파된 감염 모델을 사용하였다. 에스. 아우레우스 MSRA 균주 NRS384를 트립틱 대두 브로쓰(TSB) 속에서 밤새 성장시키고 중간-대수상까지 아-배양하였다. 이후에, 세균을 PBS로 2회 세척하고 PBS 속에 1.5x10^8 cfu/mL의 농도로 재현탁시켰다. 이후에 Balb/c 마우스를 고리 정맥을 통해 100 μL의 세균 현탁액으로, 1.5x10^7 cfu/마우스의 최종 감염 용량을 위해 정맥내 감염시켰다. 연구에서, 마우스를 반코마이신 단독, 리팔로그에 접합된 항-WTA 항체인 동형 대조군 Ab-항생제 ncADC(동형 대조군 Ab-항생제 ncADC-리팔로그), 항-WTA 항체, 본 개시내용에 따른 화합물 36에 접합된 항-WTA 항체인 항-WTA Ab-항생제 ncADC(항-WTA Ab-항생제 ncADC-36), 본 개시내용의 화합물 25에 접합된 항-WTA 항체인 제2의 항-WTA Ab-항생제 ncADC(항-WTA Ab-항생제 ncADC-25), 또는 제3의 항-WTA Ab-항생제 ncADC(항-WTA Ab-항생제 ncADC-리팔로그), 동형 대조군 Ab-항생제 ncADC(동형 대조군 Ab-항생제 ncADC-리팔로그) 및 반코마이신, 항-WTA 항체 및 반코마이신, 항-WTA Ab-항생제 ncADC(항-WTA Ab-항생제 ncADC-36), 제2의 항-WTA Ab-항생제 ncADC(항-WTA Ab-항생제 ncADC-25) 및 반코마이신, 또는 제3의 항-WTA Ab-항생제 ncADC(항-WTA Ab-항생제 ncADC-리팔로그) 및 반코마이신으로 치료하였다. 반코마이신을 포함한 치료 그룹의 경우, 이는 감염 후 1 내지 3일 동안 110 mg/kg에서 1일 2회 피하 투여하였다. 항체 및 ncADC를 포함한 치료 그룹의 경우, 이들을 감염후 2일 동안 1 mg/kg에서 피하 투여하였다. 비 치료 감염된 대조군 및 감염되지 않은 대조군을 연구에 포함시켰다. 마우스를 감염 전체에서 체중 손실 및 신체 상태에 대해 모니터링하였다. 감염 4일째에, 마우스를 희생시키고, 에스. 아우레우스 신장 부담을 정량화하였다. 정량화를 위해, 신장을 균질화한 다음 PBS 속에서 일련 희석 및 트립티카제 대두 아가 플레이트에 플레이팅을 통해 콜로니 형성 단위을 열거하였다. 감염 개략도는 도 4에 나타낸다. 데이타는 마우스에서 중간 에스. 아우레우스 신장 부담으로 표 35에 나타낸다.
[표 35]
Figure pct00551
검출 한계 = 250개 콜로니 형성 단위(cfu)
표 35에 나타낸 바와 같이, 에스. 아우레우스 MRSA 균주 NRS384를 사용한 정맥내 감염은 3.63E+07 cfus/신장 쌍의 신장내 높은 중간 세균 부담을 야기한다. 단독치료요법으로서, 항-WTA Ab 항생제 ncADC-25 및 항-WTA Ab 항생제 ncADC-36은 신장 세균 부담을 ~2 로그까지 감소시켰다. 시험한 항-WTA Ab 항생제 ncADC를 반코마이신과 함께 투여한 경우, 모든 치료 그룹은 반코마이신 치료된 대조군과 비교하여 신장 세균 부담을 ~3 로그까지 추가로 감소시켰다.
실시예 42: 에스. 아우레우스 IV 진전되고 전파된 감염 마우스 모델(8일 모델)
생체내에서 보호 표준 반코마이신과의 조합 치료요법에서 본 개시내용의 항-에스. 아우레우스 Ab-항생제 ncADC의 효능을 시험하기 위해, 2개의 상이한 8일 정맥내 전파된 감염 모델을 수행하였다. 당해 모델에서, 치료는 종기가 이미 형성된 진전된 감염 단계에서 개시하였다. 에스. 아우레우스 MSRA 균주 NRS384를 트립틱 대두 브로쓰(TSB) 속에서 밤새 성장시키고 중간-대수 상(mid-logarithmic phase)까지 아-배양하였다. 이후에, 세균을 PBS로 2회 세척하고 PBS 속에 1.5x10^8 cfu/mL의 농도에서 재현탁시켰다. 이후에, Balb/c 마우스를 꼬리 정맥을 통해 100 uL의 세균 현탁액을 사용하여, 1.5x10^7 cfu/마우스의 최종 감염 용량을 위해 정맥내 감염시켰다. 제1 연구에서, 마우스를 반코마이신 단독, 동형 대조군 항체 및 반코마이신, 동형 대조군 Ab-ncADC(동형 대조군-36) 및 반코마이신, 항-WTA 항체 및 반코마이신, 항-WTA Ab-항생제 ncADC(항-WTA Ab-항생제 ncADC-36), 또는 상이한 항-WTA Ab-항생제 ncADC(항-WTA Ab-항생제 ncADC-25) 및 반코마이신으로 치료하였다. 마우스를 또한 반코마이신 단독, 동형 대조군 항체 및 반코마이신, 동형 대조군 Ab-항생제 ncADC(동형 대조군 Ab-항생제 ncADC-36) 및 반코마이신, 항-단백질 A 항체 및 반코마이신, 또는 항-단백질 A Ab-항생제 ncADC(항-단백질 A Ab-항생제 ncADC-36)으로 치료하였다.
제2의 연구에서, 마우스를 반코마이신 단독, 동형 대조군 항체 및 반코마이신, 동형 대조군 Ab-항생제 ncADC(동형 대조군 Ab-항생제 ncADC-36) 및 반코마이신, 제2의 동형 대조군 Ab-항생제 ncADC(동형 대조군 Ab-항생제 ncADC-25) 및 반코마이신, 제3의 동형 대조군 Ab-항생제 ncADC(동형 대조군 Ab-항생제 ncADC-21) 및 반코마이신, 항-WTA 항체 및 반코마이신, 항-WTA Ab-항생제 ncADC(항-WTA Ab-항생제 ncADC-36), 제2의 항-WTA Ab-항생제 ncADC(항-WTA Ab-항생제 ncADC-25) 및 반코마이신, 또는 제3의 항-WTA Ab-항생제 ncADC(항-WTA Ab-항생제 ncADC-21) 및 반코마이신으로 치료하였다. 모든 연구에서, 반코마이신을 포함한 치료 그룹의 경우, 이를 감염 후 3 내지 7일 동안 110 mg/kg에서 1일 2회 피하 투여하였다. 항체 및 ncADC를 포함한 치료 그룹의 경우, 이들은 감염후 4일 동안 제1 연구의 경우 2 mg/kg으로 또는 제2 연구의 경우 5 mg/kg으로 피하 투여하였다. 치료하지 않은 감염된 대조군 및 감염되지 않은 대조군을 연구 각각에 포함시켰다. 마우스를 감염 전체에서 체중 손실 및 신체 상태에 대해 모니터링하였다. 감염후 8일째에, 마우스를 희생시키고, 에스. 아우레우스 신장 부담을 정량화하였다. 정량화를 위해, 신장을 균질화한 다음 PBS 속에서 일련 희석 및 트립티카제 대두 아가 플레이트 상에 플레이팅을 통해 콜로니 형성 단위을 열거하였다. 데이타 점은 시험한 개개 마우스로부터의 신장 부담을 나타낸다.
[표 36]
Figure pct00552
제1 연구를 위해, 도 6 및 표 36에 나타낸 바와 같이, 에스. 아우레우스 MRSA 균주 NRS384를 사용한 정맥내 감염은 4.63E+08 cfu/신장 쌍의 신장내 고 중간 세균 부담을 생성한다. 반코마이신 치료 단독은 에스. 아우레우스 신장 부담을 1 내지 2 로그까지 감소시켰다. 반코마이신과 동형 대조군 mAb, 항-WTA 모노클로날 mAb, 및 동형 대조군 Ab-항생제 ncADC-36의 조합 치료는 반코마이신 치료된 마우스와 비교하여 신장 세균 부담의 추가의 감소를 야기하지 않았다. 항-WTA Ab-항생제 ncADC-36 및 항-WTA Ab-항생제 ncADC-25를 반코마이신과 함께 투여한 경우, 중간 신장 세균 부담에서 추가로 각각 ~100 및 ~10,000배의 감소가 존재하였다.
[표 37]
Figure pct00553
또한 제1 연구에서, 도 7 및 표 37에 나타낸 바와 같이, 에스. 아우레우스 MRSA 균주 NRS384를 사용한 정맥내 감염은 4.63E+08 cfu/신장 쌍의 신장에서 고 중간 세균 부담을 야기한다. 반코마이신 치료 단독은 에스. 아우레우스 신장 세균 부담을 1 내지 2 로그까지 감소시켰다. 반코마이신과 동형 대조군 mAb 및 동형 대조군 Ab-항생제 ncADC-36의 조합 치료는 반코마이신 치료된 마우스와 비교하여 신장 세균 부담의 추가의 감소를 야기하지 않았다. 항-단백질 A mAb 및 항-단백질 A Ab-항생제 ncADC-36을 반코마이신과 함께 투여한 경우, 중간 신장 세균 부담에서 추가로 각각 ~100 및 ~1,000배의 감소가 존재하였다.
[표 38]
Figure pct00554
제2 연구를 위해, 도 8 및 표 38에 나타낸 바와 같이, 에스. 아우레우스 MRSA 균주 NRS384를 사용한 정맥내 감염은 2.50E+07 cfus/신장 쌍의 신장내 고 중간 세균 부담을 생성한다. 반코마이신 치료 단독은 에스. 아우레우스 신장 부담을 1 내지 2 로그까지 감소시켰다. 반코마이신과 동형 대조군 mAb, 항-WTA mAb, 동형 대조군 Ab-항생제 ncADC, 항-WTA Ab-항생제 ncADC-36, 또는 항-WTA-Ab-항생제 ncADC-21(리팜피신 ADC)를 사용한 조합 치료는 반코마이신 치료된 마우스와 비교하여 신장 세균 부담의 추가의 감소를 야기하지 않았다. 그러나, 시험한 항-WTA Ab-항생제 ncADC-25를 반코마이신과 함께 투여한 경우, 중간 신장 세균 부담에서 추가로 ~100배의 감소가 존재하였다.
실시예 43: 항체 가공된 시스테인 탈차단
항-단백질 A(H1xH15140P*/*) 및 비표적화 항체 대조군 가공된 항체는 쇄간 이황화물 형성 중쇄 C103S를 돌연변이시킴으로써 생성하였다. 항체를 CHO 세포에서 발현시키고 30배 몰 과량의 환원제, TCEP의 첨가에 이은 완충액 교환으로 실온에서 PBS 속에서 약한 환원을 사용하여 천연 경쇄 시스테인에서 탈차단할 필요가 있다. 2개의 중쇄 쇄간 이황화물 결합을 재형성시키기 위해, 항체를 3시간 동안 실온에서 CuSO4 또는 dhAA와 함께 2 내지 20배 몰 과량에서 항온처리하였다. 환원된 및 산화된 항체를 PBS 내로 완충액 교환시켜 산화제를 제거하였다. 당해 공정은 경쇄내 잔류하는 2개의 유리 티올(free thiol)을 생산하며 말레이미드 접합에 이용가능하다.
항-WTA 가공된 항체를 문헌(이의 내용이 본원에 이의 전문으로 참고로 포함된, Lehar et al, Nature-2015 527, 323-328; US20140356375 및 WO2016090038에 기술된 항체 4497)로부터 취하고 경쇄 돌연변이 V205C를 가짐으로써 말레이미드 접합을 위한 2개 부위를 제공하였다. 상기 동일한 과정을 사용하여 가공된 시스테인을 탈차단하였다.
링커 페이로드에 대한 항체 가공되고 탈차단된 시스테인의 접합
PBS pH 7.5 중 환원된 및 산화된 항체(1 내지 10 mg/ml)에, DMSO(10 mg/ml) 중, 마레이미도 링커 페이로드(2 당량/SH 그룹, Lehar et al, Nature 527,-323-328), 또는 당해 충전물의 링커 페이로드를 가하였다. 반응을 2시간 동안 진행시켰다. 접합체를 PBS내로 크기 배제 크로마토그래피에 의해 정제하고 멸균 여과하였다. 단백질 농도 및 페이로드 대 항체 비를 UV 스펙트럼 분석으로 측정하였다. 크기-배제 HPLC는 사용된 모든 접합체가 >95% 단량체성이었음을 확립하였고, RP-HPLC는 <1%의 접합되지 않은 링커 페이로드가 존재하였음을 확립하였다. 모든 접합된 항체를 HIC에 의해 링커 페이로드 로딩 값에 대해 분석하였다. 페이로드 대 항체 비는 표 39에 기록한다.
아글리코실화된 항체(H1H21234N 및 비표적화 항체 대조군 2)에 대한 접합 방법
50 mM HEPES, 150 mM NaCl, pH 7.5 중 항체(1 내지 10 mg/ml)를 1 mM 디티오트레이톨로 37℃에서 30분 동안 처리하였다. 겔 여과(G-25, pH 4.5 아세트산나트륨) 후, DMSO(10 mg/ml) 중 말레이미도 링커 페이로드 유도체 화합물 25(리파날로그 M2767)(1.2 당량/SH 그룹)를 환원된 항체에 가하고 혼합물을 1 M HEPES(pH 7.4)를 사용하여 pH 7.0로 조정하였다. 접합체를 5% 글리세롤이 들어있는 PBS를 사용하여 크기 배제 크로마토그래피로 정제하고 멸균 여과하였다. 단백질 농도 및 페이로드 대 항체 비를 UV 스펙트럼 분석으로 측정하였다. 크기-배제 HPLC는 사용된 모든 접합체가 >95% 단량체성이었음을 확립하였다. 모든 접합된 항체를 HIC로 링커 페이로드 로딩 값에 대해 분석하였다. 페이로드 대 항체 비를 표 39에 기록한다.
[표 39]
Figure pct00555
소수성 상호작용 크로마토그래피(HIC)에 의한 접합체의 특성화
항체에서 링커-페이로드의 로딩을 측정하기 위하여, 접합체를 Agilent 1260에서 TSK-NPR 부틸 HIC 컬럼을 사용하여 1M 인산칼륨 pH 8.5 내지 물의 선형 구배로 60분에 걸쳐 작동시켰다. 페이로드 로딩을 접합된 및 접합되지 않은 항체의 종에 상응하는 피크 면적을 통합하여 측정하였다.
ESI-MS에 의한 접합체의 특성화
항체 (시스테인 접합체)에서 링커-페이로드의 로딩을 측정하기 위하여, 접합체를 탈글리코실화하고, 환원시키고, LC-MS로 분석하였다.
검정을 위해, 50 μg의 접합체를 밀리-Q 물로 1 mg/mL의 최종 농도로 희석시켰다. 10 μL의 PNGase F 용액[PNGase F 용액은 150 μL의 PNGase F 스톡(New England Biolabs, 카탈로그 번호 P0704L) 및 850 μL의 밀리-Q 물을 가하고 잘 혼합하여 제조하였다]을 희석된 접합체 용액에 가한 다음 37℃에서 밤새 항온처리하였다. 2.4 μL의 0.5 M TCEP를 샘플에 가함으로써 수득되는 물질이 20 mM의 최종 TCEP 농도를 갖도록 한 다음 이를 50℃에서 30분 동안 항온처리하였다. 10 μL의 각각의 샘플을 LC-MS(Waters Synat G2-Si)에서 주입하고 이동상 B의 0.1 mL/분의 구배 이동상 20-40%을 25분에 걸쳐(이동상 A: H2O 중 0.1%v/v FA; 이동상 B: 아세토니트릴 중 0.1% v/v FA) 용출시켰다. LC 분리를 Waters Acquity BEH C18 컬럼(1.0 X 50 mM, 1.7 μM)에서 달성하였다.
질량 분광광도법 스펙트럼을 디컨벌루션시키고 확인된 경쇄 및 중쇄 피크는링커-페이로드 값이 0 및 1인 경쇄 (L), 링커-페이로드 값이 0, 1, 2, 및 3인 중쇄 (H)를 나타낸다. 각각의 종의 강도 값으로부터, 약물 대 항체 비(DAR)를 단독 이량체 항체 접합체에 대해 하기 수학식을 사용하여 계산하였다.
Figure pct00556
다양한 변화가 본 개시내용의 영역 및 취지로부터 벗어나지 않고 상술한 주제에서 이루어질 수 있으므로, 상기 설명에 포함되거나, 첨부된 청구범위에서 정의된 모든 주제는 본 개시내용의 설명 및 예시로서 해석되는 것으로 의도된다. 본 개시내용의 많은 변형 및 변화가 상기 교시의 측면에서 가능하다. 따라서, 본 설명은 첨부된 청구범위의 영역내에 속한 모든 이러한 변경, 변형, 및 변화를 포함하는 것으로 의도된다.
본원에 인용된 모든 특허, 특허원, 공보, 시험 방법, 문헌, 및 다른 물질은 본 명세서에 물리적으로 나타낸 경우와 같이 이의 전문이 참고로 본원에 포함된다.
SEQUENCE LISTING <110> REGENERON PHARMACEUTICALS, INC. <120> RIFAMYCIN ANALOGS AND ANTIBODY-DRUG CONJUGATES THEREOF <130> IPA211009-US <140> PCT/US2019/067914 <141> 2019-12-20 <150> US 62/844,860 <151> 2019-05-08 <150> US 62/783,506 <151> 2018-12-21 <160> 690 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 363 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Synthetic" <400> 1 caggtccaat tggtacagtc tggggctgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtg 60 tcctgcaagg tttccggata caccctcact gaattatcca tacactgggt gcgccaggtt 120 cctggaaaag gacttgagtg gatgggaggt tttgatcctg aagagggtga aacaatcttc 180 gcacaggagt tccgggacag agtcaccttg accgaggaca catctccaga cacagcctac 240 atggagttga gcagcctgaa atctgaggac gcggccgtat attactgtac aaccccccga 300 tattgtaata atggtatatg ttatgactac tggggccagg gaaccctggt caccgtctct 360 tca 363 <210> 2 <211> 121 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Synthetic" <400> 2 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 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ccagggaagg ggctggagtg gctctcagct atgactggta gtggtggtaa cacatactac 180 gcagactccg tgaagggccg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acaacctgag agccgaggac acggccgtat attactgtgc ggtggataca 300 accatggccc actttgacta ctggggccag ggaaccctgg tcaccgtctc ctcagcctca 360 acaaaaggtc cctcagtctt tcctcttgct ccatcctcca aaagtacatc aggaggtacc 420 gcagcccttg gatgcctcgt caaggattat tttcccgaac cagttaccgt ttcctggaac 480 tcaggcgctc tcacctctgg agtacatact tttcctgcag tcctccaatc ctctggcctt 540 tactcccttt ctagcgtagt aaccgtacca tcatcatccc tcggaaccca aacttatatc 600 tgtaatgtta atcacaaacc cagcaacacc aaagtagaca aaaaagttga acctaaatca 660 tgcgataaaa cccacacttg ccccccctgt ccagcaccag aactccttgg cggcccctca 720 gttttccttt ttccaccaaa gcccaaagac acccttatga tctccagaac ccccgaagtt 780 acatgcgtag tcgttgacgt ttctcacgaa gatccagaag tcaaattcaa ttggtacgtt 840 gatggcgttg aagtccataa tgcaaaaaca aaaccccgag aagaacagta caattcaaca 900 tatcgagtag ttagcgtact tacagttctg caccaagatt ggctgaacgg aaaagaatat 960 aaatgtaaag tctctaacaa agcactccct gccccaattg aaaaaacaat ctcaaaagcc 1020 aaaggccaac ctcgcgaacc tcaggtttac acacttcccc cctcccgcga cgaactgact 1080 aaaaaccagg tttccttgac atgccttgta aaaggttttt acccctccga tatcgccgta 1140 gaatgggaat ctaatggaca accagaaaac aattacaaaa ctacccctcc tgtgctcgat 1200 tccgatggct cttttttcct ctattctaag ctcaccgttg acaagtctcg ttggcagcag 1260 ggaaacgtat tcagttgcag cgtcatgcac gaagcccttc ataatagatt cacccaaaag 1320 tctctttctc tctctcctgg taagtag 1347 <210> 685 <211> 448 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Synthetic" <400> 685 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Ser Tyr 20 25 30 Ala Met Ser Trp Phe Arg Gln Thr Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu 35 40 45 Ser Ala Met Thr Gly Ser Gly Gly Asn Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Asn Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Val Asp Thr Thr Met Ala His Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro 115 120 125 Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly 130 135 140 Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn 145 150 155 160 Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln 165 170 175 Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser 180 185 190 Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser 195 200 205 Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr 210 215 220 His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser 225 230 235 240 Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg 245 250 255 Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro 260 265 270 Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala 275 280 285 Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val 290 295 300 Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr 305 310 315 320 Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr 325 330 335 Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu 340 345 350 Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys 355 360 365 Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser 370 375 380 Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp 385 390 395 400 Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser 405 410 415 Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala 420 425 430 Leu His Asn Arg Phe Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445 <210> 686 <211> 645 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Synthetic" <400> 686 gacatccaga tgacccagtc tccatcttcc gtgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60 atcacttgtc gggcgagtca gggtattagc agctggttag cctggtatca gcagaaacca 120 gggaaagccc ctaagctcct gatctatgct gcttccactt tacaaagtgg ggtcccatca 180 aggttcagtg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240 gaagattttg caacttacta ttgtcaacgg attaacagtt tcccattcac tttcggccct 300 gggaccaaag tggatatcaa acgaactgtg gctgcaccat ctgtcttcat cttcccgcca 360 tctgatgagc agttgaaatc tggaactgcc tctgttgtgt gcctgctgaa taacttctat 420 cccagagagg ccaaagtaca gtggaaggtg gataacgccc tccaatcggg taactcccag 480 gagagtgtca cagagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctcagcag caccctgacg 540 ctgagcaaag cagactacga gaaacacaaa gtctacgcct gcgaagtcac ccatcagggc 600 ctgagctcgc ccgtcacaaa gagcttcaac aggggagagt gttag 645 <210> 687 <211> 214 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Synthetic" <400> 687 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Arg Ile Asn Ser Phe Pro Phe 85 90 95 Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110 Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly 115 120 125 Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 130 135 140 Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln 145 150 155 160 Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 165 170 175 Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 190 Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 195 200 205 Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 688 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 688 His His His His His His His His His 1 5 <210> 689 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic 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Claims (133)

  1. 화학식 (A)의 구조를 갖는 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염:
    Figure pct00557
    (A)
    상기 화학식 (A)에서:
    X는 -O- 및 -NR*-로부터 선택되고;
    Za 및 Zb는 수소, -Cl, -Br, -OR1 및 -RN으로부터 독립적으로 선택되고; 단 Za 또는 Zb 중 적어도 하나는 수소가 아니고; 여기서:
    R1은 수소, RN, 지방족 C1-C20 탄화수소, 방향족 C1-C20 탄화수소, 헤테로방향족 C1-C20 탄화수소, 사이클릭 지방족 C1-C20 탄화수소, 헤테로사이클릭 C1-C20 탄화수소, 및 이의 조합으로부터 선택되고, 이들 각각은 할로겐, O, N, 및 S로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함하고, 여기서 R1은 -F, -Cl, -Br, -I, -OH, -OR*, -NO, -NO2, -NO3, -O-NO, -N3, -NH2, -NHR*, -N(R*)2, -N(R*)3 +, -N(R*)-OH, -O-N(R*)2, -N(R*)-O-R*, -CN, -NC, -(C=O)-R*, -CHO, -CO2H, -CO2R*, -(C=O)-S-R*, -O-(C=O)-H, -O-(C=O)-R*, -S-(C=O)-R*,-(C=O)-NH2, -(C=O)-N(R*)2, -(C=O)-NHNH2, -O-(C=O)-NHNH2, -(C=S)-NH2, -(C=S)-N(R*)2, -N(R*)-CHO, -N(R*)-(C=O)-R*, -SCN, -NCS, -NSO, -SSR*, -SO2R*, -SO2-N(R*)2, -S(=O)-OR*, -S(=O)-R*, -Si(R*)3, -CF3, -O-CF3 및 이의 조합 중 하나 이상으로 임의 치환되고, 단 R1은 n-부틸 그룹이 아니고, X가 -O-이고 Ra가 수소인 경우, R1은 수소가 아니고;
    RN은:
    Figure pct00558
    로부터 선택되고; 여기서
    Figure pct00559
    기호는 부착 점을 나타내고; R', R" 및 R"'는 수소, C1-C6 지방족 탄화수소, 및 플루오레닐메틸옥시카보닐(FMOC) 및 3급-부틸옥시카보닐(BOC)로부터 선택된 보호 그룹으로부터 선택되거나, 여기서 R' 및 R"는 함께 지방족 모노사이클릭, 지방족 비사이클릭, 또는 지방족 폴리사이클릭 구조를 형성하고;
    R2, R3, 및 R4는 수소, 지방족 C1-C20 탄화수소, 및 -(C=O)-R*로부터 독립적으로 선택되고, 이들 각각은 할로겐, O, N, 및 S로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함하고;
    Ra는 수소, -F, -Cl, -Br, -I, -OH, -OR*, -NH2, -NHR*, -N(R*)2, -N(R*) 3 +, -(C=O)-R*, -CHO, -CO2H, -CO2R*, -SR*, -SO2R*, 및 지방족 C1-C20 탄화수소로부터 선택되고, 이는 할로겐, O, N, 및 S로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함하고, 여기서 Ra는 -F, -Cl, -Br, -I, -OH, -OR* 중 하나 이상으로 임의 치환되고;
    Rb는 수소, -F, -Cl, -Br, -I, -OH, -OR*, -(C=O)-R*, -CHO, -CO2H, -CO2R* 및 지방족 C1-C20 탄화수소로부터 선택되고, 이는 할로겐, O, 및 S로부터 선택된 0 내지 3개의 헤테로원자를 추가로 포함하고, 여기서 Rb는 -F, -Cl, -Br, -I, -OH, -OR* 중 하나 이상으로 임의 치환되고,
    R*는 각각의 존재시 수소, 지방족 C1-C20 탄화수소, 방향족 C1-C20 탄화수소, 헤테로방향족 C1-C20 탄화수소, 사이클릭 지방족 C1-C20 탄화수소, 헤테로사이클릭 C1-C20 탄화수소, 및 이의 조합으로부터 독립적으로 선택되고, 이는 할로겐, O, N, 및 S 및 이의 조합으로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함한다.
  2. 제1항에 있어서, 화학식 (I)이 구조를 갖는 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염:
    Figure pct00560

    여기서:
    X는 -O- 및 -NR*-로부터 선택되고;
    R1은 RN, 수소, 지방족 C1-C20 탄화수소, 방향족 C1-C20 탄화수소, 헤테로방향족 C1-C20 탄화수소, 사이클릭 지방족 C1-C20 탄화수소, 헤테로사이클릭 C1-C20 탄화수소, 및 이의 조합으로부터 선택되고, 이들 각각은 할로겐, O, N, 및 S로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함하고, 여기서 R1은 -F, -Cl, -Br, -I, -OH, -OR*, -NO, -NO2, -NO3, -O-NO, -N3, -NH2, -NHR*, -N(R*)2, -N(R*)3 +, -N(R*)-OH, -O-N(R*)2, -N(R*)-O-R*, -CN, -NC, -(C=O)-R*, -CHO, -CO2H, -CO2R*, -(C=O)-S-R*, -O-(C=O)-H, -O-(C=O)-R*, -S-(C=O)-R*, -(C=O)-NH2, -(C=O)-N(R*)2, -(C=O)-NHNH2, -O-(C=O)-NHNH2, -(C=S)-NH2, -(C=S)-N(R*)2, -N(R*)-CHO, -N(R*)-(C=O)-R*, -SCN, -NCS, -NSO, -SSR*, -SO2R*, -SO2-N(R*)2, -S(=O)-OR*, -S(=O)-R*, -Si(R*)3, -CF3, -O-CF3 및 이의 조합 중 하나 이상으로 임의 치환되고, 단 R1은 n-부틸 그룹이 아니고, X가 -O-이고 Ra가 수소이면, R1은 수소가 아니고;
    RN은:
    Figure pct00561
    로부터 선택되고; 여기서
    Figure pct00562
    기호는 부착 점을 나타내고; R', R" 및 R"'는 수소, C1-C6 지방족 탄화수소, 및 FMOC 및 BOC로부터 선택된 보호 그룹으로부터 선택되거나, 여기서 R' 및 R"는 함께 지방족 모노사이클릭, 지방족 비사이클릭, 또는 지방족 폴리사이클릭 구조를 형성하고;
    R2, R3, 및 R4는 수소, 지방족 C1-C20 탄화수소, 또는 -(C=O)-R*로부터 독립적으로 선택되고, 이들 각각은 할로겐, O, N, 및 S로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함하고;
    Ra는 수소, F, -Cl, -Br, -I, -OH, -OR*, -NH2, -NHR*, -N(R*)2, -N(R*)3 +, -(C=O)-R*, -CHO, -CO2H, -CO2R*, -SR*, -SO2R*, 및 지방족 C1-C20 탄화수소로부터 선택되고, 이는 할로겐, O, N, 및 S로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함하고, 여기서 Ra는 -F, -Cl, -Br, -I, -OH, -OR* 중 하나 이상으로 임의 치환되고;
    Rb는 수소, -F, -Cl, -Br, -I, -OH, -OR*, -(C=O)-R*, -CHO, -CO2H, -CO2R* 및 지방족 C1-C20 탄화수소로부터 선택되고, 이는 할로겐, O, 및 S로부터 선택된 0 내지 3개의 헤테로원자를 추가로 포함하고, 여기서 Rb는 -F, -Cl, -Br, -I, -OH, -OR* 중 하나 이상으로 임의 치환되고;
    R*는 각각의 존재시 수소, 지방족 C1-C20 탄화수소, 방향족 C1-C20 탄화수소, 헤테로방향족 C1-C20 탄화수소, 사이클릭 지방족 C1-C20 탄화수소, 헤테로사이클릭 C1-C20 탄화수소, 및 이의 조합으로부터 독립적으로 선택되고, 이는 할로겐, O, N, 및 S 및 이의 조합으로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함한다.
  3. 제1항에 있어서, 화학식 (I')의 구조를 갖는 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염:
    Figure pct00563

    여기서:
    X는 -O- 및 -NR*-로부터 선택되고;
    R1은 RN, 수소, 지방족 C1-C20 탄화수소, 방향족 C1-C20 탄화수소, 헤테로방향족 C1-C20 탄화수소, 사이클릭 지방족 C1-C20 탄화수소, 헤테로사이클릭 C1-C20 탄화수소, 및 이의 조합으로부터 선택되고, 이들 각각은 할로겐, O, N, 및 S로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함하고, 여기서 R1은 -F, -Cl, -Br, -I, -OH, -OR*, -NO, -NO2, -NO3, -O-NO, -N3, -NH2, -NHR*, -N(R*)2, -N(R*)3 +, -N(R*)-OH, -O-N(R*)2, -N(R*)-O-R*, -CN, -NC, -(C=O)-R*, -CHO, -CO2H, -CO2R*, -(C=O)-S-R*, -O-(C=O)-H, -O-(C=O)-R*, -S-(C=O)-R*, -(C=O)-NH2, -(C=O)-N(R*)2, -(C=O)-NHNH2, -O-(C=O)-NHNH2, -(C=S)-NH2, -(C=S)-N(R*)2, -N(R*)-CHO, -N(R*)-(C=O)-R*, -SCN, -NCS, -NSO, -SSR*, -SO2R*, -SO2-N(R*)2, -S(=O)-OR*, -S(=O)-R*, -Si(R*)3, -CF3, -O-CF3 및 이의 조합 중 하나 이상으로 임의 치환되고, 단, R1은 n-부틸 그룹이 아니고, X가 -O-이고 Ra가 수소이면, R1은 수소가 아니고;
    RN은:
    Figure pct00564
    로부터 선택되고; 여기서
    Figure pct00565
    기호는 부착 점을 나타내고; R', R" 및 R"'는 수소, C1-C6 지방족 탄화수소, FMOC 및 BOC로부터 선택된 보호 그룹으로부터 선택되거나, 여기서 R' 및 R"는 함께 지방족 모노사이클릭, 지방족 비사이클릭, 또는 지방족 폴리사이클릭 구조를 형성하고;
    R2, R3, 및 R4는 수소, 지방족 C1-C20 탄화수소, 또는 -(C=O)-R*로부터 독립적으로 선택되고, 이들 각각은 할로겐, O, N, 및 S로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함하고;
    Ra는 수소, F, -Cl, -Br, -I, -OH, -OR*, -NH2, -NHR*, -N(R*)2, -N(R*)3 +, -(C=O)-R*, -CHO, -CO2H, -CO2R*, -SR*, -SO2R*, 및 지방족 C1-C20 탄화수소로부터 선택되고, 이는 할로겐, O, N, 및 S로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함하고, 여기서 Ra는 -F, -Cl, -Br, -I, -OH, -OR* 중 하나 이상으로 임의 치환되고;
    Rb는 수소, -F, -Cl, -Br, -I, -OH, -OR*, -(C=O)-R*, -CHO, -CO2H, -CO2R* 및 지방족 C1-C20 탄화수소로부터 선택되고, 이는 할로겐, O, 및 S로부터 선택된 0 내지 3개의 헤테로원자를 추가로 포함하고, 여기서 Rb는 -F, -Cl, -Br, -I, -OH, -OR* 중 하나 이상으로 임의 치환되고;
    R*는 각각의 존재시 수소, 지방족 C1-C20 탄화수소, 방향족 C1-C20 탄화수소, 헤테로방향족 C1-C20 탄화수소, 사이클릭 지방족 C1-C20 탄화수소, 헤테로사이클릭 C1-C20 탄화수소, 및 이의 조합으로부터 독립적으로 선택되고, 이는 할로겐, O, N, 및 S 및 이의 조합으로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함한다.
  4. 제1항 또는 제2항에 있어서, 화학식 (II)의 구조를 갖는 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염:
    Figure pct00566

    여기서:
    X는 -O- 및 -NR*-로부터 선택되고;
    Ra는 수소, -Cl, 및 -OR*로부터 선택되고;
    R1은 RN, 수소, 지방족 C1-C20 탄화수소, 방향족 C1-C20 탄화수소, 헤테로방향족 C1-C20 탄화수소, 사이클릭 지방족 C1-C20 탄화수소, 헤테로사이클릭 C1-C20 탄화수소, 및 이의 조합으로부터 선택되고, 이들 각각은 할로겐, O, N, 및 S로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함하고, 여기서 R1은 -F, -Cl, -Br, -I, -OH, -OR*, -NO, -NO2, -NO3, -O-NO, -N3, -NH2, -NHR*, -N(R*)2, -N(R*)3 +, -N(R*)-OH, -O-N(R*)2, -N(R*)-O-R*, -CN, -NC, -(C=O)-R*, -CHO, -CO2H, -CO2R*, -(C=O)-S-R*, -O-(C=O)-H, -O-(C=O)-R*, -S-(C=O)-R*, -(C=O)-NH2, -(C=O)-N(R*)2, -(C=O)-NHNH2, -O-(C=O)-NHNH2, -(C=S)-NH2, -(C=S)-N(R*)2, -N(R*)-CHO, -N(R*)-(C=O)-R*, -SCN, -NCS, -NSO, -SSR*, -SO2R*, -SO2-N(R*)2, -S(=O)-OR*, -S(=O)-R*, -Si(R*)3, -CF3, -O-CF3 및 이의 조합 중 하나 이상으로 임의 치환되고, 단, R1은 n-부틸 그룹이 아니고;
    RN은:
    Figure pct00567
    로부터 선택되고; 여기서
    Figure pct00568
    기호는 부착 점을 나타내고; R', R" 및 R"'은 수소, C1-C6 지방족 탄화수소, 및 FMOC 및 BOC로부터 선택된 보호 그룹으로부터 선택되거나, 여기서 R' 및 R"는 함께 지방족 모노사이클릭, 지방족 비사이클릭, 또는 지방족 폴리사이클릭 구조를 형성하고;
    R*는 각각의 존재시 수소, 지방족 C1-C20 탄화수소, 방향족 C1-C20 탄화수소, 헤테로방향족 C1-C20 탄화수소, 사이클릭 지방족 C1-C20 탄화수소, 헤테로사이클릭 C1-C20 탄화수소, 및 이의 조합으로부터 독립적으로 선택되고, 이는 할로겐, O, N, 및 S 및 이의 조합으로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함한다.
  5. 제1항 또는 제3항에 있어서, 화학식 (II')의 구조를 갖는 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염:
    Figure pct00569

    여기서:
    X는 -O- 및 -NR*-로부터 선택되고;
    Ra는 수소, -Cl 및 -OR*로부터 선택되고;
    R1은 RN, 수소, 지방족 C1-C20 탄화수소, 방향족 C1-C20 탄화수소, 헤테로방향족 C1-C20 탄화수소, 사이클릭 지방족 C1-C20 탄화수소, 헤테로사이클릭 C1-C20 탄화수소, 및 이의 조합으로부터 선택되고, 이들 각각은 할로겐, O, N, 및 S로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함하고, 여기서 R1은 -F, -Cl, -Br, -I, -OH, -OR*, -NO, -NO2, -NO3, -O-NO, -N3, -NH2, -NHR*, -N(R*)2, -N(R*)3 +, -N(R*)-OH, -O-N(R*)2, -N(R*)-O-R*, -CN, -NC, -(C=O)-R*, -CHO, -CO2H, -CO2R*, -(C=O)-S-R*, -O-(C=O)-H, -O-(C=O)-R*, -S-(C=O)-R*, -(C=O)-NH2, -(C=O)-N(R*)2, -(C=O)-NHNH2, -O-(C=O)-NHNH2, -(C=S)-NH2, -(C=S)-N(R*)2, -N(R*)-CHO, -N(R*)-(C=O)-R*, -SCN, -NCS, -NSO, -SSR*, -SO2R*, -SO2-N(R*)2, -S(=O)-OR*, -S(=O)-R*, -Si(R*)3, -CF3, -O-CF3 및 이의 조합 중 하나 이상으로 임의 치환되고, 단, R1은 n-부틸 그룹이 아니고;
    RN은:
    Figure pct00570
    로부터 선택되고; 여기서
    Figure pct00571
    기호는 부착 점을 나타내고; R', R" 및 R"'은 수소, C1-C6 지방족 탄화수소, FMOC 및 BOC로부터 선택된 보호 그룹으로부터 선택되거나, 여기서 R' 및 R"는 함께 지방족 모노사이클릭, 지방족 비사이클릭, 또는 지방족 폴리사이클릭 구조를 형성하고;
    R*는 각각의 존재시 수소, 지방족 C1-C20 탄화수소, 방향족 C1-C20 탄화수소, 헤테로방향족 C1-C20 탄화수소, 사이클릭 지방족 C1-C20 탄화수소, 헤테로사이클릭 C1-C20 탄화수소, 및 이의 조합으로부터 독립적으로 선택되고, 이는 할로겐, O, N, 및 S 및 이의 조합으로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함한다.
  6. 제1항, 제2항 또는 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 화학식 (III)의 구조를 갖는 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염:
    Figure pct00572

    여기서:
    Ra는 수소 및 -OR*로부터 선택되고;
    R5는 RN, 지방족 C1-C20 탄화수소, 방향족 C1-C20 탄화수소, 헤테로방향족 C1-C20 탄화수소, 사이클릭 지방족 C1-C20 탄화수소, 헤테로사이클릭 C1-C20 탄화수소, 및 이의 조합으로부터 선택되고, 이들 각각은 할로겐, O, N, 및 S로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함하고, 여기서 R5는 -F, -Cl, -Br, -I, -OH, -OR*, -NH2, -NHR*, -N(R*)2, -N(R*)3 +, -N(R*)-(C=O)-R*, -(C=O)-R*, -CHO, -CO2H, -CO2R* 및 이의 조합 중 하나 이상으로 임의 치환되고, 단, R5는 n-부틸 그룹이 아니고;
    R*는 각각의 존재시 수소, 지방족 C1-C20 탄화수소, 방향족 C1-C20 탄화수소, 헤테로방향족 C1-C20 탄화수소, 사이클릭 지방족 C1-C20 탄화수소, 헤테로사이클릭 C1-C20 탄화수소, 및 이의 조합으로부터 독립적으로 선택되고, 이는 할로겐, O, N, 및 S 및 이의 조합으로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함하고;
    RN은:
    Figure pct00573

    Figure pct00574
    로부터 선택되고; 여기서
    Figure pct00575
    기호는 부착 점을 나타내고; R', R" 및 R"'는 수소, C1-C6 지방족 탄화수소, 및 FMOC 및 BOC로부터 선택된 보호 그룹으로부터 선택되거나, 여기서 R' 및 R"는 함께 지방족 모노사이클릭, 지방족 비사이클릭, 또는 지방족 폴리사이클릭 구조를 형성한다.
  7. 제1항, 제3항, 또는 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 화학식 (III')의 구조를 갖는 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염:
    Figure pct00576

    여기서:
    Ra는 수소 및 -OR*로부터 선택되고;
    R5는 RN, 지방족 C1-C20 탄화수소, 방향족 C1-C20 탄화수소, 헤테로방향족 C1-C20 탄화수소, 사이클릭 지방족 C1-C20 탄화수소, 헤테로사이클릭 C1-C20 탄화수소, 및 이의 조합으로부터 선택되고, 이들 각각은 할로겐, O, N, 및 S로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함하고, 여기서 R5는 -F, -Cl, -Br, -I, -OH, -OR*, -NH2, -NHR*, -N(R*)2, -N(R*)3 +, -N(R*)-(C=O)-R*, -(C=O)-R*, -CHO, -CO2H, -CO2R* 및 이의 조합 중 하나 이상으로 임의 치환되고, 단, R5는 n-부틸 그룹이 아니고;
    R*는 각각의 존재시 수소, 지방족 C1-C20 탄화수소, 방향족 C1-C20 탄화수소, 헤테로방향족 C1-C20 탄화수소, 사이클릭 지방족 C1-C20 탄화수소, 헤테로사이클릭 C1-C20 탄화수소, 및 이의 조합으로부터 독립적으로 선택되고, 이는 할로겐, O, N, 및 S 및 이의 조합으로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함하고;
    RN은:
    Figure pct00577
    로부터 선택되고; 여기서
    Figure pct00578
    기호는 부착 점을 나타내고; R', R" 및 R"'는 수소, C1-C6 지방족 탄화수소, 및 FMOC 및 BOC로부터 선택된 보호 그룹으로부터 선택되거나, 여기서 R' 및 R"는 함께 지방족 모노사이클릭, 지방족 비사이클릭, 또는 지방족 폴리사이클릭 구조를 형성한다.
  8. 제1항, 제2항 또는 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 화학식 (IV)의 구조를 갖는 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염:
    Figure pct00579

    여기서:
    Ra는 수소 및 -OR*로부터 선택되고;
    R5는 RN, 수소, 지방족 C1-C20 탄화수소, 방향족 C1-C20 탄화수소, 헤테로방향족 C1-C20 탄화수소, 사이클릭 지방족 C1-C20 탄화수소, 헤테로사이클릭 C1-C20 탄화수소, 및 이의 조합으로부터 선택되고, 이들 각각은 할로겐, O, N, 및 S로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함하고, 여기서 R5는 -F, -Cl, -Br, -I, -OH, -OR*, -NH2, -NHR*, -N(R*)2, -N(R*)3 +, -N(R*)-(C=O)-R*, -(C=O)-R*, -CHO, -CO2H, -CO2R* 및 이의 조합 중 하나 이상으로 임의 치환되고;
    RN은:
    Figure pct00580

    Figure pct00581
    로부터 선택되고; 여기서
    Figure pct00582
    기호는 부착 점을 나타내고; R', R" 및 R"'은 수소, C1-C6 지방족 탄화수소, 및 FMOC 및 BOC로부터 선택된 보호 그룹으로부터 선택되거나, 여기서 R' 및 R"는 함께 지방족 모노사이클릭, 지방족 비사이클릭, 또는 지방족 폴리사이클릭 구조를 형성하고;
    R*는 각각의 존재시 수소, 지방족 C1-C20 탄화수소, 방향족 C1-C20 탄화수소, 헤테로방향족 C1-C20 탄화수소, 사이클릭 지방족 C1-C20 탄화수소, 헤테로사이클릭 C1-C20 탄화수소, 및 이의 조합으로부터 독립적으로 선택되고, 이는 할로겐, O, N, 및 S 및 이의 조합으로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함한다.
  9. 제1항, 제3항, 또는 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 화학식 (IV')의 구조를 갖는 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염:
    Figure pct00583

    여기서:
    Ra는 수소 및 -OR*로부터 선택되고;
    R5는 RN, 수소, 지방족 C1-C20 탄화수소, 방향족 C1-C20 탄화수소, 헤테로방향족 C1-C20 탄화수소, 사이클릭 지방족 C1-C20 탄화수소, 헤테로사이클릭 C1-C20 탄화수소, 및 이의 조합으로부터 선택되고, 이들 각각은 할로겐, O, N, 및 S로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함하고, 여기서 R5는 -F, -Cl, -Br, -I, -OH, -OR*, -NH2, -NHR*, -N(R*)2, -N(R*)3 +, -N(R*)-(C=O)-R*, -(C=O)-R*, -CHO, -CO2H, -CO2R* 및 이의 조합 중 하나 이상으로 임의 치환되고;
    RN은:
    Figure pct00584
    로부터 선택되고; 여기서
    Figure pct00585
    기호는 부착 점을 나타내고; R', R" 및 R"'는 수소, C1-C6 지방족 탄화수소, 및 FMOC 및 BOC로부터 선택된 보호 그룹으로부터 선택되거나, 여기서 R' 및 R"는 함께 지방족 모노사이클릭, 지방족 비사이클릭, 또는 지방족 폴리사이클릭 구조를 형성하고;
    R*는 각각의 존재시 수소, 지방족 C1-C20 탄화수소, 방향족 C1-C20 탄화수소, 헤테로방향족 C1-C20 탄화수소, 사이클릭 지방족 C1-C20 탄화수소, 헤테로사이클릭 C1-C20 탄화수소, 및 이의 조합으로부터 독립적으로 선택되고, 이는 할로겐, O, N, 및 S 및 이의 조합으로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함한다.
  10. 제1항, 제2항, 또는 제4항에 있어서, 화학식 (V)의 구조를 갖는 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염:
    Figure pct00586

    여기서:
    X는 -O- 및 -NR*-로부터 선택되고;
    Ra는 수소 및 -OR*로부터 선택되고;
    R6은 RN, 지방족 C1-C20 탄화수소, 방향족 C1-C20 탄화수소, 헤테로방향족 C1-C20 탄화수소, 사이클릭 지방족 C1-C20 탄화수소, 헤테로사이클릭 C1-C20 탄화수소, 및 이의 조합으로부터 선택되고, 이들 각각은 할로겐, O, N, 및 S로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함하고, 여기서 R6은 -OH, -OR*, -NH2, -NHR*, -N(R*)2, -N(R*)3 +, -N(R*)-(C=O)-R*, -(C=O)-R*, -CHO, -CO2H, -CO2R* 및 이의 조합으중 하나 이상으로 임의 치환되고, 단, R6은 n-부틸 그룹이 아니고;
    RN은:
    Figure pct00587

    Figure pct00588
    로부터 선택되고; 여기서
    Figure pct00589
    기호는 부착 점을 나타내고; R', R" 및 R"'는 수소, C1-C6 지방족 탄화수소, 및 FMOC 및 BOC로부터 선택된 보호 그룹으로부터 선택되거나, 여기서 R' 및 R"는 함께 지방족 모노사이클릭, 지방족 비사이클릭, 또는 지방족 폴리사이클릭 구조를 형성하고;
    R*는 각각의 존재시 수소, 지방족 C1-C20 탄화수소, 방향족 C1-C20 탄화수소, 헤테로방향족 C1-C20 탄화수소, 사이클릭 지방족 C1-C20 탄화수소, 헤테로사이클릭 C1-C20 탄화수소, 및 이의 조합으로부터 독립적으로 선택되고, 이는 할로겐, O, N, 및 S 및 이의 조합으로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함한다.
  11. 제1항, 제3항, 또는 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 화학식 (V')의 구조를 갖는 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염:
    Figure pct00590

    여기서:
    X는 -O- 및 -NR*-로부터 선택되고;
    Ra는 수소 및 -OR*로부터 선택되고;
    R6은 RN, 지방족 C1-C20 탄화수소, 방향족 C1-C20 탄화수소, 헤테로방향족 C1-C20 탄화수소, 사이클릭 지방족 C1-C20 탄화수소, 헤테로사이클릭 C1-C20 탄화수소 및 이의 조합으로부터 선택되고, 이들 각각은 할로겐, O, N, 및 S로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함하고, 여기서 R6은 -OH, -OR*, -NH2, -NHR*, -N(R*)2, -N(R*)3 +, -N(R*)-(C=O)-R*, -(C=O)-R*, -CHO, -CO2H, -CO2R* 및 이의 조합 중 하나 이상으로 임의 치환되고, 단, R6은 n-부틸 그룹이 아니고;
    RN은:
    Figure pct00591
    로부터 선택되고; 여기서
    Figure pct00592
    기호는 부착 점을 나타내고; R', R" 및 R"'은 수소, C1-C6 지방족 탄화수소, 및 FMOC 및 BOC로부터 선택된 보호 그룹으로부터 선택되거나, 여기서 R' 및 R"는 함께 지방족 모노사이클릭, 지방족 비사이클릭, 또는 지방족 폴리사이클릭 구조를 형성하고;
    R*는 각각의 존재시 수소, 지방족 C1-C20 탄화수소, 방향족 C1-C20 탄화수소, 헤테로방향족 C1-C20 탄화수소, 사이클릭 지방족 C1-C20 탄화수소, 헤테로사이클릭 C1-C20 탄화수소, 및 이의 조합으로부터 독립적으로 선택되고, 이는 할로겐, O, N, 및 S 및 이의 조합으로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함한다.
  12. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, Ra가 수소인 화합물.
  13. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, Ra가 -OH인 화합물.
  14. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, X가 -O-이고; R1이 지방족 C1-C3 탄화수소이고; R2가 메틸 그룹이고; R3이 Ac (-(C=O)-CH3)이고; R4가 수소이고, Ra가 수소인 화합물.
  15. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, X가 -O-이고; R1이 벤질 그룹이고; R2가 메틸 그룹이고; R3이 Ac(-(C=O)-CH3)이고; R4가 수소이고, Ra가 수소인 화합물.
  16. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, X가 -O-이고; R1이 할로겐, O, N, 및 S로부터 선택된 1 내지 8개의 헤테로원자를 포함하는 지방족 C1-C8 탄화수소이고; R2가 메틸 그룹이고; R3이 Ac(-(C=O)-CH3)이고; R4가 수소이고, Ra가 수소인 화합물.
  17. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, X가 -O-이고; R1이 -NH2; -NHR*; -N(R*)2 중 하나 이상으로 치환된 지방족 C1-C8 탄화수소이고; R2가 메틸 그룹이고; R3이 Ac(-(C=O)-CH3)이고; R4가 수소이고, Ra가 수소인 화합물.
  18. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, X가 -NCH3-이고; R1이 -OH이고; R2가 메틸 그룹이고; R3이 Ac(-(C=O)-CH3)이고; R4가 수소이고; Ra가 수소인 화합물.
  19. 제1항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, RN이:
    Figure pct00593

    Figure pct00594
    및
    Figure pct00595
    로부터 선택되고; 여기서
    Figure pct00596
    기호는 부착 점을 나타내고; R', R" 및 R"'는 수소, C1-C6 지방족 탄화수소, 및 FMOC 및 BOC로부터 선택된 보호 그룹으로부터 선택되거나, 여기서 R' 및 R"는 함께 지방족 모노사이클릭, 지방족 비사이클릭, 또는 지방족 폴리사이클릭 구조를 형성하는 화합물.
  20. 제1항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, RN이:
    Figure pct00597
    Figure pct00598
    및
    Figure pct00599
    로부터 선택되고: 여기서 R'는 수소, 지방족 탄화수소 또는 보호 그룹이고, 여기서
    Figure pct00600
    기호는 부착 점을 나타내는 화합물.
  21. 제1항 내지 제20항 중 어느 한 항에 있어서, R*가 각각의 존재시 수소, 지방족 C1-C6 탄화수소, 방향족 C6-C7 탄화수소, 및 이의 조합으로부터 독립적으로 선택되고, 이는 O, N 및 이의 조합으로부터 선택된 1 내지 3개의 헤테로원자를 임의로 포함하는 화합물.
  22. 다음으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 구조를 갖는 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염:
    Figure pct00601
    Figure pct00602
    Figure pct00603
    Figure pct00604
    Figure pct00605
    Figure pct00606
    및
    Figure pct00607
    .
  23. 화학식
    Figure pct00608
    의 구조를 갖는 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염.
  24. 제1항 내지 제23항 중 어느 한 항에 따른 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염 및 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는 약제학적 조성물.
  25. 제1항 내지 제23항 중 어느 한 항에 따른 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염 또는 제24항에 따른 약제학적 조성물을 포함하는 약제학적 투여형(pharmaceutical dosage form).
  26. 유효량의 화학식 (A)의 구조를 갖는 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 투여함을 포함하여, 세균의 성장을 방지하거나 억제하는 방법:
    Figure pct00609
    (A)
    상기 화학식 (A)에서:
    X는 -O-, -S- 및 -NR*-로부터 선택되고;
    Za 및 Zb는 수소, -Cl, -Br, -OR1 및 -RN으로부터 독립적으로 선택되고; 단 Za 또는 Zb 중 적어도 하나는 수소가 아니고; 여기서:
    R1은 수소, RN, 지방족 C1-C20 탄화수소, 방향족 C1-C20 탄화수소, 헤테로방향족 C1-C20 탄화수소, 사이클릭 지방족 C1-C20 탄화수소, 헤테로사이클릭 C1-C20 탄화수소, 및 이의 조합으로부터 선택되고, 이들 각각은 할로겐, O, N, 및 S로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함하고, 여기서 R1은 -F, -Cl, -Br, -I, -OH, -OR*, -NO, -NO2, -NO3, -O-NO, -N3, -NH2, -NHR*, -N(R*)2, -N(R*)3 +, -N(R*)-OH, -O-N(R*)2, -N(R*)-O-R*, -CN, -NC, -(C=O)-R*, -CHO, -CO2H, -CO2R*, -(C=O)-S-R*, -O-(C=O)-H, -O-(C=O)-R*, -S-(C=O)-R*,-(C=O)-NH2, -(C=O)-N(R*)2, -(C=O)-NHNH2, -O-(C=O)-NHNH2, -(C=S)-NH2, -(C=S)-N(R*)2, -N(R*)-CHO, -N(R*)-(C=O)-R*, -SCN, -NCS, -NSO, -SSR*, -SO2R*, -SO2-N(R*)2, -S(=O)-OR*, -S(=O)-R*, -Si(R*)3, -CF3, -O-CF3 및 이의 조합 중 하나 이상으로 임의 치환되고, 단 R1은 n-부틸 그룹이 아니고, X가 -O-이고 Ra가 수소인 경우, R1은 수소가 아니고;
    RN은:
    Figure pct00610
    로부터 선택되고; 여기서
    Figure pct00611
    기호는 부착 점을 나타내고; R', R" 및 R"'는 수소, C1-C6 지방족 탄화수소, 및 플루오레닐메틸옥시카보닐(FMOC) 및 3급-부틸옥시카보닐(BOC)로부터 선택된 보호 그룹으로부터 선택되거나, 여기서 R' 및 R"는 함께 지방족 모노사이클릭, 지방족 비사이클릭, 또는 지방족 폴리사이클릭 구조를 형성하고;
    R2, R3, 및 R4는 수소, 지방족 C1-C20 탄화수소, 및 -(C=O)-R*로부터 독립적으로 선택되고, 이들 각각은 할로겐, O, N, 및 S로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함하고;
    Ra는 수소, -F, -Cl, -Br, -I, -OH, -OR*, -NH2, -NHR*, -N(R*)2, -N(R*) 3 +, -(C=O)-R*, -CHO, -CO2H, -CO2R*, -SR*, -SO2R*, 및 지방족 C1-C20 탄화수소로부터 선택되고, 이는 할로겐, O, N, 및 S로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함하고, 여기서 Ra는 -F, -Cl, -Br, -I, -OH, -OR* 중 하나 이상으로 임의 치환되고;
    Rb는 수소, -F, -Cl, -Br, -I, -OH, -OR*, -(C=O)-R*, -CHO, -CO2H, -CO2R* 및 지방족 C1-C20 탄화수소로부터 선택되고, 이는 할로겐, O, 및 S로부터 선택된 0 내지 3개의 헤테로원자를 추가로 포함하고, 여기서 Rb는 -F, -Cl, -Br, -I, -OH, -OR* 중 하나 이상으로 임의 치환되고,
    R*는 각각의 존재시 수소, 지방족 C1-C20 탄화수소, 방향족 C1-C20 탄화수소, 헤테로방향족 C1-C20 탄화수소, 사이클릭 지방족 C1-C20 탄화수소, 헤테로사이클릭 C1-C20 탄화수소, 및 이의 조합으로부터 독립적으로 선택되고, 이는 할로겐, O, N, 및 S 및 이의 조합으로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함한다.
  27. 유효량의 제1항 내지 제23항 중 어느 한 항에 따른 구조를 갖는 화합물을 투여함을 포함하여, 세균의 성장을 방지하거나 억제하는 방법.
  28. 제26항 또는 제27항에 있어서, 세균이 그램-양성 세균인 방법.
  29. 제26항 또는 제27항에 있어서, 세균이 페니실린-내성 세균인 방법.
  30. 제26항 또는 제27항에 있어서, 세균이 스타필로코쿠스 아우레우스(Staphylococcus aureus)인 방법.
  31. 제26항 내지 제30항 중 어느 한 항에 있어서, 세균이 메티실린-내성 스타필로코쿠스 아우레우스(methicillin-resistant Staphylococcus aureus)(MRSA)인 방법.
  32. 제26항 내지 제30항 중 어느 한 항에 있어서, 세균이 반코마이신-내성 스타필로코쿠스 아우레우스(Vancomycin-resistant Staphylococcus aureus)(VRSA)인 방법.
  33. 제26항 내지 제30항 중 어느 한 항에 있어서, 세균이 메티실린-민감성 스타필로코쿠스 아우레우스(methicillin-susceptible Staphylococcus aureus)(MSSA)인 방법.
  34. 유효량의 화학식 (A)의 구조를 갖는 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 세균 감염의 치료가 필요한 대상체에게 투여함을 포함하여, 대상체에서 세균 감염을 치료하는 방법:
    Figure pct00612
    (A)
    상기 화학식 (A)에서:
    X는 -O-, -S- 및 -NR*-로부터 선택되고;
    Za 및 Zb는 수소, -Cl, -Br, -OR1 및 -RN으로부터 독립적으로 선택되고; 단 Za 또는 Zb 중 적어도 하나는 수소가 아니고; 여기서:
    R1은 수소, RN, 지방족 C1-C20 탄화수소, 방향족 C1-C20 탄화수소, 헤테로방향족 C1-C20 탄화수소, 사이클릭 지방족 C1-C20 탄화수소, 헤테로사이클릭 C1-C20 탄화수소, 및 이의 조합으로부터 선택되고, 이들 각각은 할로겐, O, N, 및 S로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함하고, 여기서 R1은 -F, -Cl, -Br, -I, -OH, -OR*, -NO, -NO2, -NO3, -O-NO, -N3, -NH2, -NHR*, -N(R*)2, -N(R*)3 +, -N(R*)-OH, -O-N(R*)2, -N(R*)-O-R*, -CN, -NC, -(C=O)-R*, -CHO, -CO2H, -CO2R*, -(C=O)-S-R*, -O-(C=O)-H, -O-(C=O)-R*, -S-(C=O)-R*,-(C=O)-NH2, -(C=O)-N(R*)2, -(C=O)-NHNH2, -O-(C=O)-NHNH2, -(C=S)-NH2, -(C=S)-N(R*)2, -N(R*)-CHO, -N(R*)-(C=O)-R*, -SCN, -NCS, -NSO, -SSR*, -SO2R*, -SO2-N(R*)2, -S(=O)-OR*, -S(=O)-R*, -Si(R*)3, -CF3, -O-CF3 및 이의 조합 중 하나 이상으로 임의 치환되고, 단 R1은 n-부틸 그룹이 아니고, X가 -O-이고 Ra가 수소인 경우, R1은 수소가 아니고;
    RN은:
    Figure pct00613
    로부터 선택되고; 여기서
    Figure pct00614
    기호는 부착 점을 나타내고; R', R" 및 R"'는 수소, C1-C6 지방족 탄화수소, 및 FMOC 및 BOC로부터 선택된 보호 그룹으로부터 선택되거나, 여기서 R' 및 R"는 함께 지방족 모노사이클릭, 지방족 비사이클릭, 또는 지방족 폴리사이클릭 구조를 형성하고;
    R2, R3, 및 R4는 수소, 지방족 C1-C20 탄화수소, 및 -(C=O)-R*로부터 독립적으로 선택되고, 이들 각각은 할로겐, O, N, 및 S로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함하고;
    Ra는 수소, -F, -Cl, -Br, -I, -OH, -OR*, -NH2, -NHR*, -N(R*)2, -N(R*) 3 +, -(C=O)-R*, -CHO, -CO2H, -CO2R*, -SR*, -SO2R*, 및 지방족 C1-C20 탄화수소로부터 선택되고, 이는 할로겐, O, N, 및 S로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함하고, 여기서 Ra는 -F, -Cl, -Br, -I, -OH, -OR* 중 하나 이상으로 임의 치환되고;
    Rb는 수소, -F, -Cl, -Br, -I, -OH, -OR*, -(C=O)-R*, -CHO, -CO2H, -CO2R* 및 지방족 C1-C20 탄화수소로부터 선택되고, 이는 할로겐, O, 및 S로부터 선택된 0 내지 3개의 헤테로원자를 추가로 포함하고, 여기서 Rb는 -F, -Cl, -Br, -I, -OH, -OR* 중 하나 이상으로 임의 치환되고,
    R*는 각각의 존재시 수소, 지방족 C1-C20 탄화수소, 방향족 C1-C20 탄화수소, 헤테로방향족 C1-C20 탄화수소, 사이클릭 지방족 C1-C20 탄화수소, 헤테로사이클릭 C1-C20 탄화수소, 및 이의 조합으로부터 독립적으로 선택되고, 이는 할로겐, O, N, 및 S 및 이의 조합으로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함한다.
  35. 유효량의 제1항 내지 제23항 중 어느 한 항에 따른 구조를 갖는 화합물을 세균 감염의 치료가 필요한 대상체에게 투여함을 포함하여, 대상체에서 세균 감염을 치료하는 방법.
  36. 제34항 또는 제35항에 있어서, 세균 감염이 그램-양성 세균 감염인 방법.
  37. 제34항 또는 제35항에 있어서, 세균 감염이 페니실린-내성 세균 감염인 방법.
  38. 제34항 내지 제37항 중 어느 한 항에 있어서, 세균 감염이 스타필로코쿠스 아우레우스 감염인 방법.
  39. 제34항 내지 제38항 중 어느 한 항에 있어서, 세균 감염이 메티실린-내성 스타필로코쿠스 아우레우스(MRSA) 감염인 방법.
  40. 제34항 내지 제38항 중 어느 한 항에 있어서, 세균 감염이 반코마이신-내성 스타필로코쿠스 아우레우스(VRSA) 감염인 방법.
  41. 제34항 내지 제38항 중 어느 한 항에 있어서, 세균 감염이 메티실린-민감성 스타필로코쿠스 아우레우스(MSSA) 감염인 방법.
  42. 제34항 내지 제38항 중 어느 한 항에 있어서, 세균 감염이 세포내 세균 감염인 방법.
  43. 제34항 내지 제42항 중 어느 한 항에 있어서, 대상체가 사람인 방법.
  44. 제34항 내지 제43항 중 어느 한 항에 있어서, 제2의 치료제를 투여함을 추가로 포함하는 방법.
  45. 제44항에 있어서, 제2의 치료제가 제2의 항생제인 방법.
  46. 제45항에 있어서, 제2의 항생제가 스타필로코쿠스 아우레우스에 대해 효과적인 방법.
  47. 제45항에 있어서, 제2의 항생제가 아미노글리코시드, 베타-락탐, 마클로리드, 사이클릭 펩타이드, 테트라사이클린, 플루오로퀴놀린, 플루오로퀴놀론, 및 옥사졸리디논으로부터 선택되는 방법.
  48. 제45항에 있어서, 제2의 항생제가 클린다마이신, 노보비오신, 레타파물린, 답토마이신, 시타플록사신, 테이코플라닌, 트리클로산, 나프티리돈, 라데졸리드, 독소루비신, 암피실린, 반코마이신, 이미페넴, 도리페님, 겜시타빈, 달바반신, 및 아지트로마이신으로부터 선택되는 방법.
  49. 제34항 내지 제48항 중 어느 한 항에 있어서, 화합물이 대상체에게 경구적으로, 국소적으로, 비강내로, 정맥내로, 근육내로, 또는 피하로 투여되는 방법.
  50. (a) 구조:
    Figure pct00615
    를 갖는 리파마이신 S를 화학식 (VI):
    Figure pct00616
    (여기서 X'는 -OH 및 -NHR*로부터 선택된다)의 구조를 갖는 화합물과 접촉시키는 단계, 및
    (b) 단계 (a)의 생성물을 산화제로 처리하는 단계를 포함하여, 화학식 (V)의 구조를 갖는 화합물을 제조하는 방법:
    Figure pct00617

    여기서 X는 -O- 및 NR*-로부터 선택되고;
    R6은 수소, RN, 지방족 C1-C20 탄화수소, 방향족 C1-C20 탄화수소, 헤테로방향족 C1-C20 탄화수소, 사이클릭 지방족 C1-C20 탄화수소, 헤테로사이클릭 C1-C20 탄화수소, 및 이의 조합으로부터 선택되고,
    RN은:
    Figure pct00618
    로부터 선택되고; 여기서
    Figure pct00619
    기호는 부착 점을 나타내고; R', R" 및 R"'은 수소, C1-C6 지방족 탄화수소, 및 FMOC 및 BOC로부터 선택된 보호 그룹으로부터 선택되거나, 여기서 R' 및 R"는 함께 지방족 모노사이클릭, 지방족 비사이클릭, 또는 지방족 폴리사이클릭 구조를 형성하고;
    R*은 각각의 존재시 수소, 지방족 C1-C20 탄화수소, 방향족 C1-C20 탄화수소, 헤테로방향족 C1-C20 탄화수소, 사이클릭 지방족 C1-C20 탄화수소, 헤테로사이클릭 C1-C20 탄화수소, 및 이의 조합으로부터 독립적으로 선택되고, 이는 할로겐, O, N, 및 S 및 이의 조합으로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함한다.
  51. (a) 구조:
    Figure pct00620
    를 갖는 리파마이신 S를 화학식 (VI'):
    Figure pct00621
    (여기서 X'는 -OH 및 -NHR*로부터 선택된다)를 갖는 화합물과 접촉시키는 단계, 및
    (b) 단계 (a)의 생성물을 산화제로 처리하는 단계를 포함하여, 화학식 (V')의 구조를 갖는 화합물을 제조하는 방법:
    Figure pct00622

    여기서 X는 -O- 및 NR*-로부터 선택되고;
    R6은 RN, 수소, 지방족 C1-C20 탄화수소, 방향족 C1-C20 탄화수소, 헤테로방향족 C1-C20 탄화수소, 사이클릭 지방족 C1-C20 탄화수소, 헤테로사이클릭 C1-C20 탄화수소, 및 이의 조합으로부터 선택되고,
    RN은:
    Figure pct00623
    로부터 선택되고; 여기서
    Figure pct00624
    기호는 부착 점을 나타내고; R', R" 및 R"'은 수소, C1-C6 지방족 탄화수소, 및 FMOC 및 BOC로부터 선택된 보호 그룹으로부터 선택되거나, 여기서 R' 및 R"는 함께 지방족 모노사이클릭, 지방족 비사이클릭, 또는 지방족 폴리사이클릭 구조를 형성하고;
    R*는 각각의 존재시 수소, 지방족 C1-C20 탄화수소, 방향족 C1-C20 탄화수소, 헤테로방향족 C1-C20 탄화수소, 사이클릭 지방족 C1-C20 탄화수소, 헤테로사이클릭 C1-C20 탄화수소, 및 이의 조합으로부터 독립적으로 선택되고, 이는 할로겐, O, N, 및 S 및 이의 조합으로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함한다.
  52. (a) 리파마이신 S를 화학식 (VII):
    Figure pct00625
    (여기서 PG는 보호 그룹이다)의 구조를 갖는 화합물과 접촉시키는 단계;
    (b) 단계 (a)의 생성물을 산화제로 처리하는 단계, 및
    (c) 보호 그룹 PG를 제거하는 단계를 포함하여, 구조:
    Figure pct00626
    를 갖는 화합물을 제조하는 방법.
  53. 제52항에 있어서, 화학식 (VII)의 화합물이 화학식 (VIII):
    Figure pct00627
    (여기서 보호 그룹 PG 및 PG'는 서로 동일하거나 상이할 수 있다)의 화합물로부터 보호 그룹 PG'를 제거함으로써 제조되는 방법.
  54. 제53항에 있어서, 화학식 (VIII)의 화합물이 화학식 (IX):
    Figure pct00628
    의 화합물을 화학식 (X):
    Figure pct00629
    (여기서 보호 그룹 PG 및 PG'가 서로 동일하거나 상이할 수 있다)의 화합물과 접촉시켜 제조되는 방법:
  55. 화학식 (XII):
    Figure pct00630
    의 구조를 갖는 화합물을 구조 R6-OH를 갖는 알코올과 접촉시킴을 포함하여, 화학식 (XI)의 구조를 갖는 화합물을 제조하는 방법:
    Figure pct00631

    여기서 R6은 RN, 지방족 C1-C20 탄화수소, 방향족 C1-C20 탄화수소, 헤테로방향족 C1-C20 탄화수소, 사이클릭 지방족 C1-C20 탄화수소, 헤테로사이클릭 C1-C20 탄화수소, 및 이의 조합으로부터 선택되고, 이는 할로겐, O, N, 및 S로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자 및 이의 조합을 추가로 포함하고 여기서 R6은 -F, -Cl, -Br, -I, -OH, -OR*, -NO, -NO2, -NO3, -O-NO, -N3, -NH2, -NHR*, -N(R*)2, -N(R*)3 +, -N(R*)-OH, -O-N(R*)2, -N(R*)-O-R*, -CN, -NC, -(C=O)-R*, CHO, -CO2H, -CO2R*, -(C=O)-S-R*, -O-(C=O)-H, -O-(C=O)-R*, -S-(C=O)-R*, -(C=O)-NH2, -(C=O)-N(R*)2, -(C=O)-NHNH2, -O-(C=O)-NHNH2, -(C=S)-NH2, -(C=S)-N(R*)2, -N(R*)-CHO, -N(R*)-(C=O)-R*, -SCN, -NCS, -NSO, -SSR*, -SO2R*, -SO2-N(R*)2, -S(=O)-OR*, -S(=O)-R*, -Si(R*)3, -CF3, -O-CF3 및 이의 조합 중 하나 이상으로 임의 치환되고;
    RN은:
    Figure pct00632
    로부터 선택되고; 여기서
    Figure pct00633
    기호는 부착 점을 나타내고; R', R" 및 R"'은 수소, C1-C6 지방족 탄화수소, 및 FMOC 및 BOC로부터 선택된 보호 그룹으로부터 선택되거나, 여기서 R' 및 R"는 함께 지방족 모노사이클릭, 지방족 비사이클릭, 또는 지방족 폴리사이클릭 구조를 형성하고;
    R*는 각각의 존재시 수소, 지방족 C1-C20 탄화수소, 방향족 C1-C20 탄화수소, 헤테로방향족 C1-C20 탄화수소, 사이클릭 지방족 C1-C20 탄화수소, 헤테로사이클릭 C1-C20 탄화수소, 및 이의 조합으로부터 독립적으로 선택되고, 이는 할로겐, O, N, 및 S 및 이의 조합로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함한다.
  56. 화학식 (XII'):
    Figure pct00634
    의 구조를 갖는 화합물을 구조 R6-OH를 갖는 알코올과 접촉시킴을 포함하는, 화학식 (XI')의 구조를 갖는 화합물의 제조 방법:
    Figure pct00635

    여기서 R6은 RN, 지방족, C1-C20 탄화수소, 방향족 C1-C20 탄화수소, 헤테로방향족 C1-C20 탄화수소, 사이클릭 지방족 C1-C20 탄화수소, 헤테로사이클릭 C1-C20 탄화수소, 및 이의 조합으로부터 선택되고, 이는 할로겐, O, N, 및 S 및 이의 조합으로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함하고 여기서 R6은 -F; -Cl; -Br; -I; -OH; -OR*; -NO; -NO2; -NO3; -O-NO; -N3; -NH2; -NHR*; -N(R*)2; -N(R*)3 +; -N(R*)-OH; -O-N(R*)2; -N(R*)-O-R*; -CN; -NC; -(C=O)-R*; -CHO; -CO2H; -CO2R*; -(C=O)-S-R*; -O-(C=O)-H; -O-(C=O)-R*; -S-(C=O)-R*; -(C=O)-NH2; -(C=O)-N(R*)2; -(C=O)-NHNH2; -O-(C=O)-NHNH2; -(C=S)-NH2; -(C=S)-N(R*)2; -N(R*)-CHO; -N(R*)-(C=O)-R*; -SCN; -NCS; -NSO; -SSR*; -SO2R*; -SO2-N(R*)2; -S(=O)-OR*; -S(=O)-R*; -Si(R*)3; -CF3; -O-CF3 및 이의 조합 중 하나 이상으로 임의 치환되고;
    RN은:
    Figure pct00636
    로부터 선택되고, 여기서
    Figure pct00637
    기호는 부착 점을 나타내고; R', R" 및 R"'는 수소, C1-C6 지방족 탄화수소, 및 FMOC 및 BOC로부터 선택되거나, 여기서 R' 및 R"는 함께 지방족 모노사이클, 지방족 비사이클, 또는 지방족 폴리사이클릭 구조를 형성하고;
    R*는 각각의 존재시 수소, 지방족 C1-C20 탄화수소, 방향족 C1-C20 탄화수소, 헤테로방향족 C1-C20 탄화수소, 사이클릭 지방족 C1-C20 탄화수소, 헤테로사이클릭 C1-C20 탄화수소, 및 이의 조합으로부터 독립적으로 선택되고, 이는 할로겐, O, N, 및 S 및 이의 조합으로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함한다.
  57. 화학식 (XII):
    Figure pct00638
    의 구조를 갖는 화합물을 구조 Rcy-A-OH를 갖는 알코올과 접촉시킴을 포함하는, 화학식 (XIII)의 구조를 갖는 화합물의 제조 방법:
    Figure pct00639

    여기서 A는 결합(A는 부재한다) 또는 지방족 C1-C20 탄화수소로부터 선택되고;
    Rcy는 C3-C14 지환족(cycloaliphatic) 탄화수소이고, 이는 할로겐, O, N, 및 S로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자 및 이의 조합을 추가로 포함하고 여기서 Rcy는 -F, -Cl, -Br, -I, -OH, -OR*, -NO, -NO2, -NO3, -O-NO, -N3, -NH2, -NHR*, -N(R*)2, -N(R*)3 +, -N(R*)-OH, -O-N(R*)2, -N(R*)-O-R*, -CN, -NC, -(C=O)-R*, -CHO, -CO2H, -CO2R*, -(C=O)-S-R*, -O-(C=O)-H, -O-(C=O)-R*, -S-(C=O)-R*, -(C=O)-NH2, -(C=O)-N(R*)2, -(C=O)-NHNH2, -O-(C=O)-NHNH2, -(C=S)-NH2, -(C=S)-N(R*)2, -N(R*)-CHO, -N(R*)-(C=O)-R*, -SCN, -NCS, -NSO, -SSR*, -SO2R*, -SO2-N(R*)2, -S(=O)-OR*, -S(=O)-R*, -Si(R*)3, -CF3, -O-CF3 및 이의 조합 중 하나 이상으로 임의 치환되고;
    R*는 각각의 존재시 수소, 지방족 C1-C20 탄화수소, 방향족 C1-C20 탄화수소, 헤테로방향족 C1-C20 탄화수소, 사이클릭 지방족 C1-C20 탄화수소, 헤테로사이클릭 C1-C20 탄화수소, 및 이의 조합으로부터 독립적으로 선택되고, 이는 할로겐, O, N, 및 S 및 이의 조합으로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함한다.
  58. 화학식 (XII'):
    Figure pct00640
    의 구조를 갖는 화합물을 구조 Rcy-A-OH를 갖는 알코올과 접촉시킴을 포함하는, 화학식 (XIII')의 구조를 갖는 화합물의 제조 방법:
    Figure pct00641

    여기서 A는 결합(A는 부재한다) 또는 지방족 C1-C20 탄화수소로부터 선택되고;
    Rcy는 C3-C14 지환족 탄화수소이고, 이는 할로겐, O, N, 및 S 및 이의 조합으로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함하고 여기서 Rcy는 -F, -Cl, -Br, -I, -OH, -OR*, -NO, -NO2, -NO3, -O-NO, -N3, -NH2, -NHR*, -N(R*)2, -N(R*)3 +, -N(R*)-OH, -O-N(R*)2, -N(R*)-O-R*, -CN, -NC, -(C=O)-R*, -CHO, -CO2H, -CO2R*, -(C=O)-S-R*, -O-(C=O)-H, -O-(C=O)-R*, -S-(C=O)-R*, -(C=O)-NH2, -(C=O)-N(R*)2, -(C=O)-NHNH2, -O-(C=O)-NHNH2, -(C=S)-NH2, -(C=S)-N(R*)2, -N(R*)-CHO, -N(R*)-(C=O)-R*, -SCN, -NCS, -NSO, -SSR*, -SO2R*, -SO2-N(R*)2, -S(=O)-OR*, -S(=O)-R*, -Si(R*)3, -CF3, -O-CF3 및 이의 조합 중 하나 이상으로 임의 치환되고;
    R*는 각각의 존재시 수소, 지방족 C1-C20 탄화수소, 방향족 C1-C20 탄화수소, 헤테로방향족 C1-C20 탄화수소, 사이클릭 지방족 C1-C20 탄화수소, 헤테로사이클릭 C1-C20 탄화수소, 및 이의 조합으로부터 독립적으로 선택되고, 이는 할로겐, O, N, 및 S 및 이의 조합으로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함한다.
  59. 화학식 (XII):
    Figure pct00642
    의 구조를 갖는 화합물을 구조
    Figure pct00643
    를 갖는 알코올과 접촉시킴을 포함하는, 화학식 (XIV)의 구조를 갖는 화합물의 제조 방법:
    Figure pct00644
    ,
    여기서 Y는 각각의 존재시 -O- 및 -NR'R"-로부터 선택되고; n은 독립적으로 각각의 존재시 1 내지 6의 정수이고, R', R", 및 R"'은 수소, 지방족 C1-C20 탄화수소로부터 각각 독립적으로 선택된다.
  60. 화학식 (XII'):
    Figure pct00645
    의 구조를 갖는 화합물을 구조
    Figure pct00646
    를 갖는 알코올과 접촉시킴을 포함하는, 화학식 (XIV')의 구조를 갖는 화합물의 제조 방법:
    Figure pct00647

    여기서 Y는 각각의 존재시 -O- 및 -NR'R"-로부터 선택되고; n은 독립적으로 각각의 존재시 1 내지 6의 정수이고, R', R", 및 R"'는 수소 및 지방족 C1-C20 탄화수소로부터 각각 독립적으로 선택된다.
  61. 제55항, 제57항, 또는 제59항 중 어느 한 항에 있어서, 화학식 (XII)의 화합물이 리파마이신 S를 2-아미노-5-브로모페놀과 접촉시키고, 생성물을 산화제로 처리함으로써 제조되는 방법.
  62. 제56항, 제58항, 또는 제60항 중 어느 한 항에 있어서, 화학식 (XII')의 화합물이 리파마이신 S를 2-아미노-4-브로모페놀과 접촉시키고, 생성물을 산화제로 처리함으로써 제조되는 방법.
  63. 링커(linker)를 경유하여 또는 링커-스페이서(spacer)를 통해 제1항 내지 제23항 중 어느 한 항에 따른 화합물에 접합된, 항체, 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는 항체-약물 접합체.
  64. 제63항에 있어서, 항체, 또는 이의 항원-결합 단편이 감염성 질환 관련 표적(infectious disease-related target)에 결합하는 항체-약물 접합체.
  65. 제63항 또는 제64항에 있어서, 항체, 또는 이의 항원-결합 단편이 대식구 스캐빈저(scavenger) 수용체 1(MSR1)에 결합하는 항체-약물 접합체.
  66. 제63항 또는 제64항에 있어서, 항체, 또는 이의 항원-결합 단편이 벽 테이코산(wall teichoic acid; WTA)에 결합하는 항체-약물 접합체.
  67. 제63항 또는 제64항에 있어서, 항체, 또는 이의 항원-결합 단편이 에스. 아우레우스 단백질 A에 결합하는 항체-약물 접합체.
  68. 제63항 내지 제67항 중 어느 한 항에 있어서, 항체, 또는 이의 항원-결합 단편이 경쇄내에 C103S 돌연변이를 포함하는 항체-약물 접합체.
  69. 제63항 내지 제68항 중 어는 한 항에 있어서, 항체, 또는 이의 항원-결합 단편이 경쇄의 103번 위치에서 제1항 내지 제23항 중 어느 한 항에 따른 화합물에 접합되는 항체-약물 접합체.
  70. 제63항 내지 제69항 중 어느 한 항에 있어서, 링커 또는 링커 스페이서가 다음으로부터 선택되는 항체-약물 접합체:
    Figure pct00648
    또는
    Figure pct00649
    .
  71. 화학식 (XVIII)에 따른 구조를 갖는 항체-약물 접합체:
    Figure pct00650

    여기서
    BA는 항체, 또는 이의 항원-결합 단편이고;
    RG는 말레이미드, N-하이드록시 석신이미드, 1급 아민, 또는 석신이미드로부터 선택되고;
    SP는 부재하거나 C1-6 알킬, -NH-, -C(O)-, -CH2-CH2-C(O)-NH-, -(CH)u-C(O)-NH-, (-CH2-CH2-O)e, -NH-CH2-CH2-(-O-CH2-CH2)e-C(O)-, -C(O)-(CH2)u-C(O)-, -C(O)-NH-(CH2)v-, -(CH)u-C(O)-NH-(CH2-CH2-O)e-(CH)u-C(O)-NH-, -(CH)2-C(O)-NH-(CH2-CH2-O)8-(CH)2-C(O)-NH-, 및 이의 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 스페이서 그룹 잔기이고, 여기서 독립적으로 각각의 존재시 아래첨자(subscript) e는 0 내지 20의 정수이고, 아래첨자 u는 1 내지 8의 정수이고, 아래첨자 v는 1 내지 8의 정수이고;
    AA는 발린-시트룰린; 시트룰린-발린; 발린-알라닌; 알라닌-발린; 발린-글리신, 또는 글리신-발린으로부터 선택된 링커이고;
    B는 부재하거나,
    Figure pct00651
    이고, 여기서
    Figure pct00652
    는 이를 통해 B가 화학식 내 인접한 그룹에 결합된 원자를 나타내고;
    n은 1 내지 30의 정수이고,
    PA는 제1항 내지 제23항 중 어느 한 항에 따른 화합물이다.
  72. 제71항에 있어서,
    Figure pct00653
    가
    Figure pct00654
    인 항체-약물 접합체.
  73. 화학식 (XIX)에 따른 구조를 갖는 항체-약물 접합체:
    Figure pct00655

    여기서
    BA는 항체, 또는 이의 항원-결합 단편이고;
    RG는 말레이미드, N-하이드록시 석신이미드, 또는 석신이미드로부터 선택되고;
    SP 1 및 SP 2 는 독립적으로 부재하거나, C1-6 알킬, -NH-, -C(O)-, -CH2-CH2-C(O)-NH-, -(CH)u-C(O)-NH-, (-CH2-CH2-O)e, -NH-CH2-CH2-(-O-CH2-CH2)e-C(O)-, -C(O)-(CH2)u-C(O)-, -C(O)-NH-(CH2)v-, 및 이의 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 스페이서 그룹이고, 여기서 아래 첨자 e는 0 내지 4의 정수이고, 아래 첨자 u는 1 내지 8의 정수이고, 아래 첨자 v는 1 내지 8의 정수이고;
    AA는 발린-시트룰린; 시트룰린-발린; 발린-알라닌; 알라닌-발린; 발린-글리신, 또는 글리신-발린으로부터 선택된 링커이고;
    PEG는 1 내지 30개의 폴리에틸렌 글리콜 잔기를 포함하는 폴리에틸렌 글리콜 쇄이고;
    B는 부재하거나
    Figure pct00656
    이고, 여기서
    Figure pct00657
    는 이를 통해 B가 화학식내 인접합 그룹에 결합된 원자를 나타내고;
    n은 1 내지 30의 정수이고;
    m은 1 내지 20의 정수이고,
    PA는 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 따른 화합물이다.
  74. 제73항에 있어서,
    Figure pct00658
    가
    Figure pct00659
    인 항체-약물 접합체.
  75. 제73항에 있어서,
    Figure pct00660
    가
    Figure pct00661
    인 항체-약물 접합체.
  76. 제73항에 있어서,
    Figure pct00662
    가
    Figure pct00663
    인 항체-약물 접합체.
  77. 제73항에 있어서,
    Figure pct00664
    가
    Figure pct00665
    인 항체-약물 접합체.
  78. 화학식 (XX)의 구조를 갖는 리파마이신 유사체에 링커를 경유하여 또는 링커-스페이서를 통해 접합된, 항체, 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는 항체-약물 접합체:
    Figure pct00666

    여기서:
    X는 -O-, -S-, 및 -NR*-로부터 선택되고;
    Za는 -OR1 및 -RN으로부터 선택되고;
    R1은 결합; 지방족 C1-C20 탄화수소, 방향족 C1-C20 탄화수소, 헤테로방향족 C1-C20 탄화수소, 사이클릭 지방족 C1-C20 탄화수소, 헤테로사이클릭 C1-C20 탄화수소, 및 이의 조합으로부터 선택되고, 이들 각각은 할로겐, O, N, 및 S로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함하고, 여기서 R1은 -F; -Cl; -Br; -I; -OH, -OR*; -NO; -NO2; -NO3; -O-NO; -N3; -NH2; -NHR*; -N(R*)2; -N(R*)3 +; -N(R*)-OH; -O-N(R*)2; -N(R*)-O-R*; -CN; -NC; -(C=O)-R*; -CHO; -CO2H; -CO2R*; -(C=O)-S-R*; -O-(C=O)-H; -O-(C=O)-R*; -S-(C=O)-R*; -(C=O)-NH2; -(C=O)-N(R*)2; -(C=O)-NHNH2; -O-(C=O)-NHNH2; -(C=S)-NH2; -(C=S)-N(R*)2; -N(R*)-CHO; -N(R*)-(C=O)-R*; -SCN; -NCS; -NSO; -SSR*; -SO2R*; -SO2-N(R*)2; -S(=O)-OR*; -S(=O)-R*; -Si(R*)3; -CF3; -O-CF3 및 이의 조합 중 하나 이상으로 임의 치환되고;
    RN은:
    Figure pct00667
    로부터 선택되고; 여기서
    Figure pct00668
    기호는 부착 점을 나타내고; R', R" 및 R"'은 수소, C1-C6 지방족 탄화수소, 및 FMOC 및 BOC로부터 선택된 보호 그룹으로부터 선택되거나, 여기서 R' 및 R"는 함께 지방족 모노사이클릭, 지방족 비사이클릭, 또는 지방족 폴리사이클릭 구조를 형성하고;
    R2, R3, 및 R4는 수소, 직쇄, 측쇄 또는 사이클릭 지방족 C1-C20 탄화수소, 또는 -(C=O)-R*로부터 독립적으로 선택되고, 이들 각각은 할로겐, O, N, 및 S로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함하고;
    Ra는 각각의 존재시, 수소, -F, -Cl, -Br, -I, -OH, OR*, -NH2, -NHR*, -N(R*)2, -N(R*)3 +, -(C=O)-R*, -CHO, -CO2H, -CO2R*, -SR*, -SO2R*, 및 지방족 C1-C20 탄화수소로부터 독립적으로 선택되고, 이는 할로겐, O, N, 및 S로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함하고, 여기서 Ra는 -F, -Cl, -Br, -I, -OH, -OR* 중 하나 이상으로 임의 치환되고;
    R*는 각각의 존재시 수소, 지방족 C1-C20 탄화수소, 방향족 C1-C20 탄화수소, 헤테로방향족 C1-C20 탄화수소, 사이클릭 지방족 C1-C20 탄화수소, 헤테로사이클릭 C1-C20 탄화수소, 및 이의 조합으로부터 독립적으로 선택되고, 이는 할로겐, O, N, 및 S 및 이의 조합로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함하고,
    여기서 그룹 Za는 링커에 결합된다.
  79. 제78항에 있어서, -OR1이 -O-(즉, R1은 부재한다),
    Figure pct00669
    Figure pct00670
    및
    Figure pct00671
    인 항체-약물 접합체.
  80. 제79항에 있어서, X가 -O-이고, -OR1이 3급 아민을 포함하는 항체-약물 접합체.
  81. 제80항에 있어서, -OR1이
    Figure pct00672
    또는
    Figure pct00673
    인 항체-약물 접합체.
  82. 링커를 경유하여 또는 링커-스페이서를 통해 화학식 (XXI)의 구조를 갖는 리파마이신 유도체에 접합된 항체, 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는 항체-약물 접합체:
    Figure pct00674

    여기서:
    X는 -O-, -S-, 및 -NR*-로부터 선택되고;
    R5는 결합; 할로겐, O, N, 및 S로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함하는 지방족 C1-C20 탄화수소;
    Figure pct00675
    또는
    Figure pct00676
    로부터 선택되고; 여기서 Y는 C 또는 N이고;
    R2, R3, 및 R4는 수소, 직쇄, 측쇄 또는 사이클릭 지방족 C1-C20 탄화수소, 또는 -(C=O)-R*로부터 독립적으로 선택되고, 이들 각각은 할로겐, O, N, 및 S로부터 선택된 0 내지 8개의 헤테로원자를 추가로 포함하고,
    R5c는 결합 또는 지방족 C1-C8 탄화수소이고,
    여기서 그룹 R5는 링커에 결합된다.
  83. 제82항에 있어서, -OR5가 -O-(즉, R1은 부재한다),
    Figure pct00677
    Figure pct00678
    및
    Figure pct00679
    인 항체-약물 접합체.
  84. 제82항에 있어서, X가 O이고, -OR5가 3급 아민을 포함하는 항체-약물 접합체.
  85. 제82항에 있어서, -OR5가
    Figure pct00680
    또는
    Figure pct00681
    인 항체-약물 접합체.
  86. 제78항 내지 제85항 중 어느 한 항에 있어서, R2가 메틸, 에틸, 프로필 또는 이소프로필이고; R3이 CH3-(C=O)- (아세틸), CH3CH2-(C=O)-, CH3CH2CH2-(C=O)-, 또는 (CH3)2CH-(C=O)-이고, R4가 수소인 항체-약물 접합체.
  87. 제78항 내지 제86항 중 어느 한 항에 있어서, R2가 메틸이고, R3이 아세틸이고, R4가 수소인 항체-약물 접합체.
  88. 제78항 내지 제87항 중 어느 한 항에 있어서, 화합물이 다음으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 항체-약물 접합체:
    Figure pct00682

    Figure pct00683
    Figure pct00684
    Figure pct00685
    Figure pct00686
    Figure pct00687
    및
    Figure pct00688

    여기서
    Figure pct00689
    는 링커에 대한 결합이다.
  89. 화학식 (XXII)의 구조를 갖는 항체-약물 접합체:
    Figure pct00690

    여기서:
    BA는 항체, 또는 이의 항원-결합 단편이고;
    L은 링커이고;
    SP는
    Figure pct00691
    Figure pct00692
    및
    Figure pct00693
    로부터 선택된 스페이서 그룹이고; Y는 C 또는 N이고; 여기서
    Figure pct00694
    기호는 부착 점을 나타내고; R', R" 및 R"'은 수소, C1-C6 지방족 탄화수소, 및 플루오레닐메틸옥시카보닐(FMOC) 및 3급-부틸옥시카보닐(BOC)로부터 선택된 보호 그룹이거나, 여기서 R' 및 R"는 함께 지방족 모노사이클릭, 지방족 비사이클릭, 또는 지방족 폴리사이클릭 구조를 형성하고;
    R' 및 R"는 각각의 존재시 수소 및 C1-6 알킬로부터 독립적으로 선택되고,
    X는 -O-, -S-, 및 -NR*로부터 선택된다.
  90. 제89항에 있어서, L이 화학식
    Figure pct00695
    를 갖는 링커이고, 여기서
    RG는 말레이미드, N-하이드록시 석신이미드, 또는 석신이미드로부터 선택되고;
    SP1 및 SP2는 독립적으로 부재하거나
    Figure pct00696
    ; C1-6 알킬, -NH-, -C(O)-, -CH2-CH2-C(O)-NH-, -(CH)u-C(O)-NH-, (-CH2-CH2-O)e, -NH-CH2-CH2-(-O-CH2-CH2)e-C(O)-, -C(O)-(CH2)u-C(O)-, -C(O)-NH-(CH2)v-, 및 이의 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 스페이서 그룹이고, 여기서 아래 첨자 e는 0 내지 4의 정수이고, 아래 첨자 u는 1 내지 8의 정수이고, 아래 첨자 v는 1 내지 8의 정수이고;
    AA2-4는 2 내지 4개의 아미노산을 포함하는 펩타이드 단위이고,
    PEG는 1 내지 30개의 폴리에틸렌 글리콜 잔기를 포함하는 폴리에틸렌 글리콜 쇄인 항체-약물 접합체.
  91. 제90항에 있어서, AA2-4가 발린-시트룰린; 시트룰린-발린; 발린-알라닌; 알라닌-발린; 발린-글리신, 또는 글리신-발린으로부터 선택된 디펩타이드인 항체-약물 접합체.
  92. 제90항 또는 제91항에 있어서, AA2-4가 발린-시트룰린인 항체-약물 접합체.
  93. 제89항 내지 제92항 중 어느 한 항에 있어서, SP가
    Figure pct00697
    이고 R' 및 R"가 각각 C1-6 알킬인 항체-약물 접합체.
  94. 제93항에 있어서, SP가
    Figure pct00698
    이고 R' 및 R"는 각각 메틸인 항체-약물 접합체.
  95. 제89항 내지 제94항 중 어느 한 항에 있어서, SP1 및 SP2가 각각
    Figure pct00699
    인 항체-약물 접합체.
  96. 제89항 내지 제95항 중 어느 한 항에 있어서, PEG가 8개의 폴리에틸렌 글리콜 단위를 포함하는 항체-약물 접합체.
  97. 제89항 내지 제96항 중 어느 한 항에 있어서, 항체-약물 접합체가 구조:
    Figure pct00700
    를 갖고, 여기서 BA가 항체, 또는 이의 항원-결합 단편인 항체-약물 접합체.
  98. 제89항 내지 제96항 중 어느 한 항에 있어서, 항체-약물 접합체가 구조:
    Figure pct00701
    를 갖고, 여기서 BA가 항체, 또는 이의 항원-결합 단편인 항체-약물 접합체.
  99. 제89항 내지 제96항 중 어느 한 항에 있어서, 항체-약물 접합체가 구조:
    Figure pct00702
    를 갖고, 여기서 BA가 항체, 또는 이의 항원-결합 단편인 항체-약물 접합체.
  100. 제89항 내지 제96항 중 어느 한 항에 있어서, 항체-약물 접합체가 구조:
    Figure pct00703
    를 갖고, 여기서 BA가 항체, 또는 이의 항원-결합 단편인 항체-약물 접합체.
  101. 제89항 내지 제96항 중 어느 한 항에 있어서, 항체-약물 접합체가 구조:
    Figure pct00704
    를 갖고, 여기서 BA가 항체, 또는 이의 항원-결합 단편인 항체-약물 접합체.
  102. 제71항 내지 제101항 중 어느 한 항에 있어서, 항체, 또는 항체의 항원-결합 단편이 감염성 질환-관련 표적에 결합하는 항체-약물 접합체.
  103. 제71항 내지 제102항 중 어느 한 항에 있어서, 항체, 또는 항체의 항원-결합 단편이 대식구 스캐빈저 수용체 1(MSR1)에 결합하는 항체-약물 접합체.
  104. 제71항 내지 제102항 중 어느 한 항에 있어서, 항체, 또는 항체의 항원-결합 단편이 벽 테이코산(wall teichoic acid)(WTA)에 결합하는 항체-약물 접합체.
  105. 제71항 내지 제102항 중 어느 한 항에 있어서, 항체, 또는 항체의 항원-결합 단편이 에스. 아우레우스 단백질 A에 결합하는 항체-약물 접합체.
  106. 제71항 내지 제105항 중 어느 한 항에 있어서, 항체, 또는 항체의 항원-결합 단편이 경쇄 내에 C103S 돌연변이를 포함하는 항체-약물 접합체.
  107. 제71항 내지 제106항 중 어느 한 항에 있어서, 항체, 또는 항체의 항원-결합 단편이 경쇄의 103번 위치에서 화합물에 접합되는 항체-약물 접합체.
  108. 제63항 내지 제107항 중 어느 한 항에 있어서, 약 1 내지 약 8의 약물-항체 비(drug-antibody ratio)(DAR)를 갖는 항체-약물 접합체.
  109. 제63항 내지 제107항 중 어느 한 항에 있어서, 약 1 내지 약 6의 약물-항체 비(DAR)를 갖는 항체-약물 접합체.
  110. 제63항 내지 제107항 중 어느 한 항에 있어서, 약 0.6 내지 약 3.2의 약물-항체 비(DAR)를 갖는 항체-약물 접합체.
  111. 제63항 내지 제107항 중 어느 한 항에 있어서, 약 1의 약물-항체 비(DAR)를 갖는 항체-약물 접합체.
  112. 제63항 내지 제107항 중 어느 한 항에 있어서, 약 2의 약물-항체 비(DAR)를 갖는 항체-약물 접합체.
  113. 제63항 내지 제107항 중 어느 한 항에 있어서, 약 3의 약물-항체 비(DAR)를 갖는 항체-약물 접합체.
  114. 제63항 내지 제107항 중 어느 한 항에 있어서, 약 4의 약물-항체 비(DAR)를 갖는 항체-약물 접합체.
  115. 유효량의 제63항 내지 제114항 중 어느 한 항에 따른 항체-약물 접합체를 투여함을 포함하여, 세균의 성장을 방지하거나 억제하는 방법.
  116. 제115항에 있어서, 세균이 그램-양성 세균인 방법.
  117. 제115항 또는 제116항에 있어서, 세균이 페니실린-내성 세균인 방법.
  118. 제115항 내지 제117항 중 어느 한 항에 있어서, 세균이 스타필로코쿠스 아우레우스인 방법.
  119. 제115항 내지 제118항 중 어느 한 항에 있어서, 세균이 메티실린-내성 스타필로코쿠스 아우레우스(MRSA), 반코마이신-내성 스타스타필로코쿠스 아우레우스(VRSA), 및 메티실린-민감성 스타필로코쿠스 아우레우스(MSSA)로부터 선택되는 방법.
  120. 세균 감염의 치료가 필요한 대상체에게 유효량의 제63항 내지 제114항 중 어느 한 항에 따른 항체-약물 접합체를 투여함을 포함하여, 대상체에서 세균 감염을 치료하는 방법.
  121. 제120항에 있어서, 세균 감염이 그램-양성 세균 감염인 방법.
  122. 제120항에 있어서, 세균 감염이 페니실린-내성 세균 감염인 방법.
  123. 제120항 내지 제122항 중 어느 한 항에 있어서, 세균 감염이 스타필로코쿠스 아우레우스 감염인 방법.
  124. 제120항 내지 제123항 중 어느 한 항에 있어서, 세균 감염이 메티실린-내성 스타필로코쿠스 아우레우스(MRSA) 감염, 반코마이신-내성 스타필로코쿠스 아우레우스(VRSA) 감염, 및 메티실린-민감성 스타필로코쿠스 아우레우스(MSSA) 감염으로부터 선택되는 방법.
  125. 제120항 내지 제124항 중 어느 한 항에 있어서, 세균 감염이 세포내 세균 감염인 방법.
  126. 제120항 내지 제125항 중 어느 한 항에 있어서, 대상체가 사람인 방법.
  127. 제120항 내지 제126항 중 어느 한 항에 있어서, 제2의 치료제를 투여함을 추가로 포함하는 방법.
  128. 제127항에 있어서, 제2의 치료제가 제2의 항생제인 방법.
  129. 제127항에 있어서, 제2의 항생제가 스타필로코쿠스 아우레우스에 대해 효과적인 방법.
  130. 제127항에 있어서, 제2의 항생제가 아미노글리코시드, 베타-락탐, 마크롤리드, 사이클릭 펩타이드, 테트라사이클린, 플루오로퀴놀린, 플루오로퀴놀론, 및 옥사졸리디논으로부터 선택되는 방법.
  131. 제127항에 있어서, 제2의 항생제가 클린다마이신, 노보비오신, 레타파물린, 답토마이신, 시타플록사신, 테이코플라닌, 트리클로산, 나프티리돈, 라데졸리드, 독소루비신, 암피실린, 반코마이신, 이미페넴, 도리페님, 겜시타빈, 달바반신, 및 아지트로마이신으로부터 선택되는 방법.
  132. 제115항 내지 제131항 중 어느 한 항에 있어서, 항체-약물 접합체가 대상체에게 경구적으로, 국소적으로, 비강내로, 정맥내로, 근육내로, 또는 피하로 투여되는 방법.
  133. 대상체에게 유효량의 제1항 내지 제23항 중 어느 한 항에 따른 화합물, 또는 제24항에 따른 약제학적 조성물, 또는 제63항 내지 제114항 중 어느 한 항에 따른 항체-약물 접합체를 투여함을 포함하여, 대상체에서 봉와직염(cellulitis), 균혈증(bacteremia), 피부괴사증(dermonecrosis), 눈꺼풀 감염(eyelid infection), 눈 감염(eye infection), 신생아 결막염(neonatal conjunctivitis), 골수염(osteomyelitis), 농가진(impetigo), 종기(boils), 화상 피부 증후군(scalded skin syndrome), 식중독(food poisoning), 폐렴(pneumonia), 외과적 감염(surgical infection), 뇨관 감염(urinary tract infection), 화상 감염(burn infection), 수막염(meningitis), 심장내막염(endocarditis), 패혈증(septicemia), 독성 쇼크 증후군(toxic shock syndrome), 패혈성 관절염(septic arthritis), 유방염(mastitis), 보철 관절과 관련된 감염(infection associated with a prosthetic joint), 카테터와 관련된 감염(infection associated with a catheter), 또는 임플란트와 관련된 감염(infection associated with an implant)을 방지 또는 예방하는 방법.
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Families Citing this family (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP7330101B2 (ja) 2016-11-08 2023-08-21 レゲネロン ファーマシューティカルス，インコーポレーテッド ステロイド及びそのタンパク質コンジュゲート
WO2022103724A1 (en) 2020-11-10 2022-05-19 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Selenium antibody conjugates
BR112023019720A2 (pt) * 2021-03-26 2024-01-23 Regeneron Pharma Uso de análogos de rifamicina em combinação com vancomicina, composição farmacêutica compreendendo esses compostos, método in vitro para prevenir ou inibir o crescimento de uma bactéria e kit
CN117147824A (zh) * 2022-05-29 2023-12-01 菲鹏生物股份有限公司 一种抗体缀合物及其应用
CN115057871B (zh) * 2022-08-17 2022-11-15 北京丹大生物技术有限公司 利福平半抗原衍生物、利福平完全抗原、利福平抗体及应用

Family Cites Families (45)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS59231092A (ja) * 1983-06-11 1984-12-25 Kanebo Ltd フエノチアジン型リフアマイシンおよびその医薬用途
JPS6345282A (ja) * 1986-04-14 1988-02-26 Kanegafuchi Chem Ind Co Ltd アシル基及び置換アルキル基を有するリフアマイシン誘導体
IL85035A0 (en) 1987-01-08 1988-06-30 Int Genetic Eng Polynucleotide molecule,a chimeric antibody with specificity for human b cell surface antigen,a process for the preparation and methods utilizing the same
JPH01207293A (ja) * 1987-03-24 1989-08-21 Kanegafuchi Chem Ind Co Ltd 置換ベンゾキサジノリフアマイシン誘導体
JPH01175938A (ja) * 1987-12-29 1989-07-12 Kanegafuchi Chem Ind Co Ltd ウイルス感染症治療剤
US5208020A (en) 1989-10-25 1993-05-04 Immunogen Inc. Cytotoxic agents comprising maytansinoids and their therapeutic use
DK0590058T3 (da) 1991-06-14 2004-03-29 Genentech Inc Humaniseret heregulin-antistof
US5714586A (en) 1995-06-07 1998-02-03 American Cyanamid Company Methods for the preparation of monomeric calicheamicin derivative/carrier conjugates
US20070258987A1 (en) 2000-11-28 2007-11-08 Seattle Genetics, Inc. Recombinant Anti-Cd30 Antibodies and Uses Thereof
US8188231B2 (en) 2002-09-27 2012-05-29 Xencor, Inc. Optimized FC variants
US7375078B2 (en) 2004-02-23 2008-05-20 Genentech, Inc. Heterocyclic self-immolative linkers and conjugates
TW200539855A (en) 2004-03-15 2005-12-16 Wyeth Corp Calicheamicin conjugates
KR101270829B1 (ko) 2004-09-23 2013-06-07 제넨테크, 인크. 시스테인 유전자조작 항체 및 접합체
US8008443B2 (en) 2005-04-26 2011-08-30 Medimmune, Llc Modulation of antibody effector function by hinge domain engineering
US7750116B1 (en) 2006-02-18 2010-07-06 Seattle Genetics, Inc. Antibody drug conjugate metabolites
US20080051805A1 (en) 2006-08-28 2008-02-28 Leonard Pinchuk Hair Follicle Coring Tool and System Based Thereon
WO2008140603A2 (en) 2006-12-08 2008-11-20 Macrogenics, Inc. METHODS FOR THE TREATMENT OF DISEASE USING IMMUNOGLOBULINS HAVING FC REGIONS WITH ALTERED AFFINITIES FOR FCγR ACTIVATING AND FCγR INHIBITING
EP2121920B1 (en) 2007-03-01 2011-08-24 Symphogen A/S Method for cloning cognate antibodies
WO2008122039A2 (en) 2007-04-02 2008-10-09 The Government Of The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Selenocysteine mediated hybrid antibody molecules
EP2167963B1 (en) 2007-05-23 2019-04-17 Ventana Medical Systems, Inc. Polymeric carriers for immunohistochemistry and in situ hybridization
BRPI0911442A2 (pt) 2008-04-30 2019-03-12 Immunogen, Inc. conjugados potentes e ligantes hidrofílicos
AU2009275358C1 (en) 2008-07-21 2015-09-24 Polytherics Limited Novel reagents and method for conjugating biological molecules
KR101000067B1 (ko) 2008-12-30 2010-12-10 엘지전자 주식회사 고효율 태양전지용 레이저 소성장치 및 고효율 태양전지 제조방법
DK2889624T3 (en) 2009-08-10 2018-12-10 Ucl Business Plc Reversible covalent bonding of functional molecules
US20130028917A1 (en) 2010-04-15 2013-01-31 Spirogen Developments Sàrl Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof
WO2011156328A1 (en) 2010-06-08 2011-12-15 Genentech, Inc. Cysteine engineered antibodies and conjugates
WO2012005982A2 (en) 2010-07-06 2012-01-12 Board Of Supervisors Of Louisiana State University And Agricultural And Mechanical College Reporter for rna polymerase ii termination
EP2714685B1 (en) 2011-05-27 2016-10-19 Ambrx, Inc. Compositions containing, methods involving, and uses of non-natural amino acid linked dolastatin derivatives
US8815226B2 (en) 2011-06-10 2014-08-26 Mersana Therapeutics, Inc. Protein-polymer-drug conjugates
WO2013053872A1 (en) 2011-10-14 2013-04-18 Spirogen Sàrl Synthesis method and intermediates useful in the preparation of pyrrolobenzodiazepines
CN103997893B (zh) 2011-10-14 2019-04-12 西雅图基因公司 吡咯并苯并二氮杂卓和靶向结合物
KR101891859B1 (ko) 2011-10-14 2018-08-24 메디뮨 리미티드 피롤로벤조디아제핀
WO2013055990A1 (en) 2011-10-14 2013-04-18 Seattle Genetics, Inc. Pyrrolobenzodiazepines and targeted conjugates
WO2013068874A1 (en) 2011-11-11 2013-05-16 Pfizer Inc. Antibody-drug conjugates
IN2014CN04961A (ko) 2011-12-05 2015-09-18 Igenica Biotherapeutics Inc
MX366103B (es) 2012-09-12 2019-06-27 Genzyme Corp Polipeptidos que contienen fc con glicosilacion alterada y funcion efectora reducida.
CN110201186A (zh) 2012-10-23 2019-09-06 西纳福克斯股份有限公司 经修饰的抗体、抗体-缀合物及其制备方法
TWI682941B (zh) 2013-02-01 2020-01-21 美商再生元醫藥公司 含嵌合恆定區之抗體
US20140356375A1 (en) 2013-05-31 2014-12-04 Genentech, Inc. Anti-wall teichoic antibodies and conjugates
CN106573074B (zh) 2014-06-02 2022-04-12 里珍纳龙药品有限公司 生物活性分子偶联物、试剂和制备方法及其治疗用途
CA2965540A1 (en) 2014-12-03 2016-06-09 Genentech, Inc. Anti-staphylococcus aureus antibody rifamycin conjugates and uses thereof
CN114478801A (zh) 2016-01-25 2022-05-13 里珍纳龙药品有限公司 美登素类化合物衍生物、其偶联物和使用方法
WO2017147542A2 (en) 2016-02-26 2017-08-31 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Optimized transglutaminase site-specific antibody conjugation
US10336683B2 (en) * 2016-03-04 2019-07-02 Genentech, Inc. Process for the preparation of an antibody-rifamycin conjugate
BR112020022400A2 (pt) * 2018-05-09 2021-02-02 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. anticorpos anti-msr1 e métodos de uso dos mesmos

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