CN113194927A - 环孢菌素类似物的药物制剂 - Google Patents

Abstract

本公开内容涉及包含CRV431或其药学上可接受的盐的药物组合物。该组合物呈现出高的溶解度和稳定性。

Description

环孢菌素类似物的药物制剂

相关申请的交叉引用

本申请要求2018年11月26日提交的美国专利申请第62/771,453号的优先权权益，该美国专利申请的内容通过引用以其整体并入本文。

本公开内容的领域

本公开内容涉及环孢菌素A类似物(例如，CRV431，环孢菌素A的非免疫抑制类似物)的药物组合物(例如，自微乳化药物递送系统“SMEDDS”)。在一些实施方案中，SMEDDS是稳定的，可以容易地溶解CRV431，并且可以实现CRV431的高身体暴露(bodily exposure)。

本公开内容的背景

CRV431是一种正在临床开发的、用于治疗包括肝纤维化和肝细胞癌的肝病的小分子亲环蛋白抑制剂。在临床前研究中，CRV431在许多体内模型中显示出针对包括乙型肝炎、丙型肝炎和HIV的多种病毒的抗病毒活性以及肝中的抗纤维化活性。CRV431(在图1B中示出)是环孢菌素A(CsA)(在图1A中示出)的衍生物，一种由11个氨基酸组成的中性环肽，其中氨基酸1和氨基酸3已经被化学修饰，如图1B中所示。

本公开内容的概述

本公开内容提供了CRV431的稳定的SMEDDS制剂，其能够实现环孢菌素A的衍生物(例如，CRV431)的良好溶解度，并且能够实现健康受试者中在单一口服剂量后在人类中的显著的血液暴露。

在一个方面中，本公开内容提供了一种自微乳化药物递送系统(SMEDDS)，该自微乳化药物递送系统包含环孢菌素A的衍生物或类似物，诸如CRV431：

或其药学上可接受的盐。

在一些实施方案中，该系统还包含聚氧乙烯蓖麻油(polyoxyl castor oil)(也被称为聚氧乙烯40氢化蓖麻油、聚乙二醇甘油羟基硬脂酸酯(macrogolglycerolhydroxystearate)和PEG-40氢化蓖麻油，诸如

RH40和

RH40)。在一些实施方案中，该系统还包含乙醇。在一些实施方案中，该系统还包含二乙二醇单乙醚(也被称为2-(2-乙氧基乙氧基)乙醇，诸如

)。在一些实施方案中，该系统还包含丙二醇(PG)。在一些实施方案中，该系统还包含单亚油酸甘油酯，诸如

CC。在一些实施方案中，该系统还包含维生素E。

在一些实施方案中，该系统包含以1/1/5/5/2.4/4或1/1.5/2.5/5/2.4/5的重量比率的维生素E、

CC、丙二醇、

乙醇和

RH40。在一些实施方案中，该系统包含以从约10mg/mL至约90mg/mL的浓度的CRV431。在一些实施方案中，该系统包含以约90mg/mL的浓度的CRV431。

本公开内容还提供了一种药物组合物，该药物组合物包含：

(a)以90mg/mL的浓度的环孢菌素A的衍生物，诸如CRV431：

(b)维生素E；

(c)

CC；

(d)丙二醇；

(e)

(f)乙醇；和

(g)

RH40，其中维生素E、

CC、丙二醇、

乙醇和

RH40的重量比率分别为约(0.75-1.5)/(0.5-2)/(2-5)/(2-5)/(2-2.4)/(4-8)。

在另一个方面中，本公开内容提供了一种治疗有相应需要的受试者的疾病的方法，该方法包括向受试者施用本文公开的治疗有效量的自微乳化药物递送系统或治疗有效量的药物组合物。

在另一个方面中，本公开内容提供了一种预防有相应需要的受试者的疾病的方法，该方法包括向受试者施用本文公开的治疗有效量的自微乳化药物递送系统或治疗有效量的药物组合物。

在一些实施方案中，疾病为严重肝病。在一些实施方案中，疾病为乙型肝炎(HBV)、肝纤维化或肝细胞癌。在一些实施方案中，疾病为乙型肝炎(HBV)。在一些实施方案中，疾病为肝细胞癌。

在另一个方面中，本公开内容提供了用于治疗或预防受试者的疾病的自微乳化药物递送系统。

在另一个方面中，本公开内容提供了本文公开的治疗有效量的自微乳化药物递送系统或治疗有效量的药物组合物用于治疗或预防受试者的疾病的用途。

在另一个方面中，本公开内容提供了本文公开的治疗有效量的自微乳化药物递送系统或治疗有效量的药物组合物在制造用于治疗或预防受试者的疾病的药物中的用途。

在一些实施方案中，疾病为诸如严重肝病的疾病。在一些实施方案中，疾病为乙型肝炎(HBV)、肝纤维化或肝细胞癌。在一些实施方案中，疾病为乙型肝炎(HBV)。在一些实施方案中，疾病为肝细胞癌。

在一些实施方案中，受试者的血液中CRV431的浓度随时间变化的图的曲线下面积(AUC)为从约5000ng.hr/ml至约150000ng.hr/ml。在一些实施方案中，受试者的血液中CRV431的最大浓度(C_最大)为从约1500ng/ml至约2500ng/ml。在一些实施方案中，达到受试者的血液中CRV431的最大浓度的时间(T_最大)为从约0.5小时至约8小时。在一些实施方案中，受试者的血液中CRV431的消除半衰期(T_1/2)为从约10小时至约200小时。在一些实施方案中，受试者的肝中CRV431的浓度相对于受试者的血液中CRV431的浓度为从约1至约20。

在一些实施方案中，SMEDDS的治疗有效量为从约0.5mg/kg至约5mg/kg。

在一些实施方案中，从而受试者的疾病的症状被减轻和/或受试者的疾病的严重程度降低。在一些实施方案中，从而受试者的肝功能被改善。在一些实施方案中，从而引起疾病的病毒的负载量降低。

在一些实施方案中，药物组合物或SMEDDS在室温是稳定的。在一些实施方案中，药物组合物或SMEDDS持续从至少约25天至至少约200天是稳定的。在一些实施方案中，由分散在水溶液中的药物组合物或SMEDDS形成的颗粒为从约15nm至约40nm。

现在将关于本文提供的描述和方法更详细地描述本公开内容的前述方面和其他方面。应该理解，本发明可以以不同的形式体现，并且不应该被解释为限于本文阐述的实施方案。相反，这些实施方案被提供以使得本公开内容将是透彻的且完整的，并且将向本领域技术人员充分地传达本发明的范围。

附图简述

图1A示出了环孢菌素A的化学结构。

图1B示出了CRV431的化学结构。

图2是伪三元相图，示出了

RH40、

CC和共溶剂的比的油/水微乳液区域。

图3是通过LC-ESI-MS的CRV431系列1SMEDDS的稳定性的图。

图4是与系列1相比的系列2SMEDD的稳定性的图。

图5和图6是CRV431 SMEDDS含水分散体颗粒直径测量结果的图。

图7A是以线性标度(linear scale)的CRV431在人类中的药代动力学的图。

图7B是对于75mg剂量，以对数标度的CRV431在人类中的药代动力学的图。

图7C是对于225mg剂量，以对数标度的CRV431在人类中的药代动力学的图。

图8是Sprague Dawley大鼠中CRV431的全血水平和肝水平的图。

详述

一般定义

在本公开内容中使用的术语仅用于描述特定实施方案的目的，并且不意图限制本发明。如在本发明的实施方案的描述和所附权利要求中使用的，单数形式“一(a)”、“一(an)”和“该(the)”意图也包括复数形式，除非上下文另外清楚地指示。此外，如本文使用的，“和/或”是指并且包括相关的所列出的项目中的一个或更多个的任何和所有可能的组合。此外，如本文使用的术语“约”当提及可测量的值诸如化合物的量、剂量、时间、温度等时，意图包括指定量的20％、10％、5％、1％、0.5％或甚至0.1％的变化。

还将理解，术语“包括(comprises)”和/或“包括(comprising)”当在本说明书中使用时，指定所陈述的特征、整数、步骤、操作、要素和/或组分的存在，但不排除存在或加入一个或更多个其他特征、整数、步骤、操作、要素、部件和/或它们的组。除非另外定义，否则本说明书中使用的所有术语(包括技术术语和科学术语)具有如本发明所属领域的普通技术人员所通常理解的相同的含义。

当应用于本公开内容的组合物时，术语“基本上由……组成”(和语法变体)意指组合物可以包含另外的组分，只要另外的组分不实质性地改变该组合物。当应用于组合物时，术语“实质性地改变”是指与由所陈述的组分组成的组合物的有效性相比，该组合物的治疗有效性增加或减少至少约20％或更多。

如本文使用的，“乙型肝炎病毒”(或“HBV”)意图包括其所有亚型(adw、adr、ayw和ayr)和/或基因型(A、B、C、D、E、F、G和H)。本文公开的SMEDDS可以用于治疗HBV。

如本文使用的，“治疗有效量”是指将提供受试者的至少一种临床症状的某种减轻、缓解和/或减少的量。本领域技术人员将理解，治疗效果不需要是完全的或治愈的，只要向受试者提供一些益处。

“治疗”包括任何导致状况、疾病、紊乱等的改善的效果，例如减轻、减少、调节或消除。疾病状态的“治疗(treating)”或“治疗(treatment)”包括：(1)抑制疾病状态，即，阻止疾病状态或其临床症状的发展；(2)缓解疾病状态，即，引起疾病状态或其临床症状的暂时或永久的消退；或(3)减少或减轻疾病状态的症状。

在一些实施方案中，可以在一种或更多种症状发展之后施用治疗。在其他实施方案中，可以在不存在症状的情况下施用治疗。在症状消退之后，也可以继续治疗。

如本文使用的，术语“预防(prevention)”、“预防(prevent)”和“预防(preventing)”是指使可能暴露于疾病状态或易患疾病状态但尚未经历或表现出疾病状态的症状的受试者不发展疾病状态的临床症状。在一些实施方案中，可以在不存在症状的情况下施用预防。例如，可以在症状出现之前(例如，根据症状的历史和/或根据遗传因素或其他易感性因素)向易感个体施用预防。在症状消退之后，也可以继续预防，例如，以延迟其复发。

“SMEDDS”是指自微乳化药物递送系统。

CRV431溶解度

本公开内容提供了一种用于口服递送环孢菌素A(CsA)的衍生物的自微乳化药物递送系统(SMEDDS)制剂，环孢菌素A(CsA)的衍生物诸如CRV431，一种环孢菌素A的非免疫抑制类似物。在一些实施方案中，相对于环孢菌素A，CRV431在脂质溶剂中可能溶解不良，并且因此对开发用于临床使用的具有足够口服生物利用度的制剂提出了挑战。因此，本公开内容提供了一种用于向患者(例如，人类)递送CRV431的SMEDDS系统。

如本文阐述的，在一系列常用的表面活性剂、油和共溶剂中确定环孢菌素A衍生物CRV431的溶解度。由最易溶解的赋形剂和原型制剂构建伪三元相图，并且开发了系列1和系列2。使用液相色谱法-电喷雾电离-质谱法(LC-ESI-MS)在健康人类志愿者中研究了1mg/kg和3mg/kg的CRV431SMEDDS的单一口服剂量后的药代动力学。

系列1制剂的最大药物负载量低于40mg/mL。调节赋形剂比率允许系列2制剂的开发，与系列1相比，系列2制剂对CRV431具有更高的药物负载能力(drug loading capacity)和稳定性。进一步的调节允许开发含有高达90mg/ml CRV431的SMEDDS制剂，并且该SMEDDS制剂当分散到含水介质中时产生25nm的微乳液平均粒度。本文公开的CRV431 SMEDDS的药代动力学在人类中显示出优异的全身暴露和与剂量成比例的效果，并且在大鼠的肝中显示出高药物水平。

在一些实施方案中，本文公开的SMEDDS制剂可以用于CRV431的有效临床开发。例如，本文公开的制剂可以靶向治疗肝病，包括乙型肝炎(HBV)、肝纤维化和肝细胞癌。

发现CRV431的水溶解度比CsA大约4倍(115μg/ml相对于30μg/ml)，并且这也反映在所计算的极性表面积上(308埃相对于273埃)。不希望受理论束缚，虽然水溶解度的增加被预期可能导致较低的血浆蛋白结合(较高的游离分数)，但CRV431仍被认为微溶于水，并且因此不希望受理论束缚，如果配制成固体片剂，预期将不具有任何明显的临床效用。CRV431的所计算的Log P(3.98)仍然非常高，并且因此，其在脂质中的溶解度预期将与环孢菌素A相似。然而，CRV431在多种脂质表面活性剂和油中的实际溶解度远低于环孢菌素A在多种脂质表面活性剂和油中的实际溶解度(表3)。不希望受理论束缚，CRV431在任何给定的SMEDDS制剂中的固有溶解度预期将明显低于CsA的固有溶解度，导致较低的负载能力。不希望受理论束缚，对于形成SMEDDS制剂的微乳液，必须至少包含油/表面活性剂混合物。可以向该混合物中添加多种共溶剂以提高药物溶解度。

在一些实施方案中，对于CRV431具有最高溶解度的表面活性剂包括

RH40、Lauroglycol^TM 90和Capryol^TM 90。Lauroglycol^TM 90和Capryol^TM 90两者均是不溶于水的表面活性剂，并且不希望受理论束缚，预期将不可用于形成水包油微乳液。观察到Lauroglycol^TM 90或Capryol^TM90与油和共溶剂赋形剂的混合物在水中形成油滴，而不是可混溶的分散体(数据未示出)。因此，由于CRV431在

RH40中的溶解度，选择

RH40作为表面活性剂。基于CRV431在所测试的油和共溶剂中的溶解度，赋形剂：维生素E；

CC；乙醇；

丙二醇，连同

RH40被选择用于SMEDDS原型开发。在不存在药物的情况下，通过绘制

CC(油)相对于

RH40(表面活性剂)相对于共溶剂混合物的配制百分比(formulationpercentage)来构建伪三元相图(图2)。这些研究指示，小于3的

CC组合比率不形成微乳液(通过视觉检查为白色不透明)。微乳液形成(在水分散体中是澄清的)的相界(phase boundary)被清楚地划定，并且代表相图的总面积的约40％。

基于伪三元相图，制备了原型SMEDDS制剂(表4：制剂#1)，其含有以9/3/3/2/1的比的

CC/PG/乙醇/维生素E，并且含有50mg/mL CRV431。SMEDDS制剂保持澄清持续若干天，之后透明晶体变得明显并粘附至玻璃容器的底部。开发了一系列SMEDDS(系列1，表5)，其中

共溶剂的比例增加，以试图促进进一步的溶解度和减少的晶体形成。当分散在水中时，所有系列1制剂形成微乳液；然而，它们在室温也是不稳定的。一般来说，不希望受理论束缚，随着

的水平增加，存在制剂不稳定性的增加。这不太可能与

的增加有关，而更可能与CRV431在其中也适度可溶解的其他共溶剂的减少有关。基于系列1的结果，产生了系列2制剂，以探索具有较大稳定性的制剂。

不希望受理论束缚，由于伪三元图(图2)指示，以较低的表面活性剂和油的比，也存在微乳液区，系列2CRV431 SMEDDS制剂的开发的基本原理是增加CRV431在其中最易溶解的赋形剂共溶剂(维生素E、丙二醇、

和乙醇)，并且最小化CRV431在其中最不易溶解的表面活性剂和油组分，同时保持在含水分散体中形成清楚的(clear)微乳液的能力。

相对于原始原型制剂(9/3/3/2/1)，所有系列2SMEDDS都具有大幅延长的稳定性(图4)。在室温储存77天之后，若干种SMEDDS没有可观察到的药物损失，并且因此被认为是稳定的。不希望受理论束缚，增加的稳定性是合理的，因为CRV431在这些SMEDDS中的增加的溶解度，使得CRV431不像系列1SMEDDS的情况处于其溶解度极限。事实上，SMEDDS1/1/5/5/2/4和1/1.5/2.5/5/2.4/5(维生素

CC/丙二醇

乙醇

RH40(w/w/w/w/w/w))也容易以75mg/ml制备。由于制剂开发的目标是增加CRV431的药物负载量，所以乙醇的重量比率从2增加到2.4。在一些实施方案中，临床SMEDDS制剂将作为软胶囊被制造并递送至患者，因此不考虑乙醇的进一步增加，因为乙醇的该量将接近软胶囊的相容性极限。

发现CRV431 SMEDDS(1/1/5/5/2.4/4)具有90mg/ml-100mg/ml的溶解度极限，并且被认为是稳定的。当1/1/5/5/2.4/4和1/1.5/2.5/5/2.4/5(维生素

CC/丙二醇

乙醇

RH40(w/w/w/w/w/w))CRV431 SMEDDS分散在含水介质中时，粒度被测量为约25nm，这与

SMEDDS的报告粒度(30nm)一致。

在人类健康受试者中研究了以1mg/kg和3mg/kg的CRV431SMEDDS(1/1/5/5/2.4/4)的药代动力学。观察到优异的暴露和剂量比例性。相对于在健康人类受试者中报告的环孢菌素A(2.5mg/kg)暴露，CRV431 C_最大略大于

并且总暴露(AUC)比

大约14倍，

是环孢菌素A的一种口服制剂，其在含水环境中立即形成微乳液并且含有

RH40作为非活性成分。不希望受理论束缚，这看起来主要是由于CRV431的半衰期(约100小时)相对于环孢菌素A的大的差异，据报告，环孢菌素A的半衰期在从健康受试者中的6.3小时至严重肝病中的20.4小时的范围内。

在大鼠重复剂量研究中，肝中的CRV431水平(10μg/g组织)比在全血中大至少6.5倍。

本公开内容的SMEDDS

本公开内容的SMEDDS中不同组分的相对重量比率可以变化。在一些实施方案中，本公开内容的SMEDDS可以包含相对于SMEDDS中的非CRV431组分以约0.75和约1.5之间(例如，约0.75、约1、约1.25、约1.5)的重量比率的维生素E。例如，SMEDDS可以包含相对于SMEDDS中的

CC、丙二醇、

乙醇和

RH40中的一种或更多种以约0.75和约1.5之间(例如，约0.75、约1、约1.25、约1.5)的重量比率的维生素E。在一些实施方案中，SMEDDS可以包含相对于SMEDDS中的其他非CRV431组分(包括但不限于

CC、丙二醇、

乙醇和

RH40)中的一种或更多种，以以下重量比率、约以下重量比率、至少以下重量比率、或至多以下重量比率的维生素E：0.75、0.80、0.85、0.90、0.95、1.00、1.05、1.10、1.15、1.20、1.25、1.30、1.35、1.40、1.45、1.50，或这些值中的任何两个之间的数字或范围。

在一些实施方案中，本公开内容的SMEDDS可以包含相对于SMEDDS中的非CRV431组分以约0.5和约2之间(例如，约0.5、约0.75、约1、约1.25、约1.5、约1.75、约2)的重量比率的

CC。例如，SMEDDS可以包含相对于SMEDDS中的维生素E、丙二醇、

乙醇和

RH40中的一种或更多种以约0.75和约1.5之间(例如，约0.75、约1、约1.25、约1.5)的重量比率的

CC。在一些实施方案中，SMEDDS可以包含相对于SMEDDS中的其他非CRV431组分(包括但不限于维生素E、丙二醇、

乙醇和

RH40)中的一种或更多种，以以下重量比率、约以下重量比率、至少以下重量比率、或至多以下重量比率的

CC：0.75、0.8、0.85、0.9、0.95、1、1.05、1.1、1.15、1.2、1.25、1.3、1.35、1.4、1.45、1.5、1.55、1.6、1.65、1.7、1.75、1.8、1.85、1.9、1.95、2，或这些值中的任何两个之间的数字或范围。

在一些实施方案中，本公开内容的SMEDDS可以包含相对于SMEDDS中的非CRV431组分以约2和约5之间(例如，约2、约2.25、约2.5、约2.75、约3、约3.25、约3.5、约3.75、约4、约4.25、约4.5、约4.75、约5)的重量比率的丙二醇。例如，SMEDDS可以包含相对于SMEDDS中的维生素E、

CC、

乙醇和

RH40中的一种或更多种以约0.75和约1.5之间(例如，约0.75、约1、约1.25、约1.5)的重量比率的丙二醇。在一些实施方案中，SMEDDS可以包含相对于SMEDDS中的其他非CRV431组分(包括但不限于维生素E、

CC、

乙醇和

RH40)中的一种或更多种，以以下重量比率、约以下重量比率、至少以下重量比率、或至多以下重量比率的丙二醇：2、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4、4.1、4.2、4.3、4.4、4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5，或这些值中的任何两个之间的数字或范围。

在一些实施方案中，本公开内容的SMEDDS可以包含相对于SMEDDS中的非CRV431组分以约2和约5之间(例如，约2、约2.25、约2.5、约2.75、约3、约3.25、约3.5、约3.75、约4、约4.25、约4.5、约4.75、约5)的重量比率的

例如，SMEDDS可以包含相对于SMEDDS中的维生素E、

CC、丙二醇、乙醇和

RH40中的一种或更多种以约0.75和约1.5之间(例如，约0.75、约1、约1.25、约1.5)的重量比率的

在一些实施方案中，SMEDDS可以包含相对于SMEDDS中的其他非CRV431组分(包括但不限于维生素E、

CC、丙二醇、乙醇和

RH40)中的一种或更多种，以以下重量比率、约以下重量比率、至少以下重量比率、或至多以下重量比率的

2、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4、4.1、4.2、4.3、4.4、4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5，或这些值中的任何两个之间的数字或范围。

在一些实施方案中，本公开内容的SMEDDS可以包含相对于SMEDDS中的非CRV431组分以约2和约2.4之间(例如，约2、约2.25、约2.4)的重量比率的乙醇。例如，SMEDDS可以包含相对于SMEDDS中的维生素E、

CC、丙二醇、

和

RH40中的一种或更多种以约0.75和约1.5之间(例如，约0.75、约1、约1.25、约1.5)的重量比率的乙醇。在一些实施方案中，SMEDDS可以包含相对于SMEDDS中的其他非CRV431组分(包括但不限于维生素E、

CC、丙二醇、

和

RH40)中的一种或更多种，以以下重量比率、约以下重量比率、至少以下重量比率、或至多以下重量比率的乙醇：2.1、2.11、2.12、2.13、2.14、2.15、2.16、2.17、2.18、2.19、2.2、2.21、2.22、2.23、2.24、2.25、2.26、2.27、2.28、2.29、2.3、2.31、2.32、2.33、2.34、2.35、2.36、2.37、2.38、2.39、2.4，或这些值中的任何两个之间的数字或范围。

在一些实施方案中，本公开内容的SMEDDS可以包含相对于SMEDDS中的非CRV431组分以约4和约8之间(例如，约4、约4.25、约4.5、约4.75、约5、约5.25、约5.5、约5.75、约6、约6.25、约6.5、约6.75、约7、约7.25、约7.5、约7.75、约8)的重量比率的

RH40。例如，SMEDDS可以包含相对于SMEDDS中的维生素E、

CC、丙二醇、

和乙醇中的一种或更多种以约0.75和约1.5之间(例如，约0.75、约1、约1.25、约1.5)的重量比率的

RH40。在优选的实施方案中，本公开内容的SMEDDS可以包含以约4和约6之间的重量比率的

RH40。在一些实施方案中，SMEDDS可以包含相对于SMEDDS中的其他非CRV431组分(包括但不限于维生素E、

CC、丙二醇、

和

RH40)中的一种或更多种，以以下重量比率、约以下重量比率、至少以下重量比率、或至多以下重量比率的

RH40：4、4.1、4.2、4.3、4.4、4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8、7.9、8，或这些值中的任何两个之间的数字或范围。在一些实施方案中，SMEDDS包含以约(0.75-1.5)/(0.5-2)/(2-5)/(2-5)/(2-2.4)/(4-8)的重量比率的维生素E、

CC、丙二醇、

乙醇和

RH40。

在一些实施方案中，本公开内容的SMEDDS可以包含以约1mg/mL和约100mg/mL之间(例如，约5mg/mL、约10mg/mL、约15mg/mL、约20mg/mL、约25mg/mL、约30mg/mL、约35mg/mL、约40mg/mL、约45mg/mL、约50mg/mL、约55mg/mL、约60mg/mL、约65mg/mL、约70mg/mL、约75mg/mL、约80mg/mL、约85mg/mL、约90mg/mL、约95mg/mL、约100mg/mL)的浓度的CRV431。在优选的实施方案中，本公开内容的SMEDDS可以包含以约10mg/mL至约90mg/mL的浓度的CRV431。在一些实施方案中，SMEDDS可以包含以以下浓度、约以下浓度、至少以下浓度或至多以下浓度的环孢菌素A(CsA)的衍生物，诸如CRV431：1mg/mL、2mg/mL、3mg/mL、4mg/mL、5mg/mL、6mg/mL、7mg/mL、8mg/mL、9mg/mL、10mg/mL、11mg/mL、12mg/mL、13mg/mL、14mg/mL、15mg/mL、16mg/mL、17mg/mL、18mg/mL、19mg/mL、20mg/mL、21mg/mL、22mg/mL、23mg/mL、24mg/mL、25mg/mL、26mg/mL、27mg/mL、28mg/mL、29mg/mL、30mg/mL、31mg/mL、32mg/mL、33mg/mL、34mg/mL、35mg/mL、36mg/mL、37mg/mL、38mg/mL、39mg/mL、40mg/mL、41mg/mL、42mg/mL、43mg/mL、44mg/mL、45mg/mL、46mg/mL、47mg/mL、48mg/mL、49mg/mL、50mg/mL、51mg/mL、52mg/mL、53mg/mL、54mg/mL、55mg/mL、56mg/mL、57mg/mL、58mg/mL、59mg/mL、60mg/mL、61mg/mL、62mg/mL、63mg/mL、64mg/mL、65mg/mL、66mg/mL、67mg/mL、68mg/mL、69mg/mL、70mg/mL、71mg/mL、72mg/mL、73mg/mL、74mg/mL、75mg/mL、76mg/mL、77mg/mL、78mg/mL、79mg/mL、80mg/mL、81mg/mL、82mg/mL、83mg/mL、84mg/mL、85mg/mL、86mg/mL、87mg/mL、88mg/mL、89mg/mL、90mg/mL、91mg/mL、92mg/mL、93mg/mL、94mg/mL、95mg/mL、96mg/mL、97mg/mL、98mg/mL、99mg/mL、100mg/mL，或这些值中的任何两个之间的数字或范围。

在一些实施方案中，SMEDDS的除CRV431之外的组分的重量比率是相对于SMEDDS的除CRV431之外的其他组分。在一些实施方案中，本公开内容的SMEDDS通过以下来制备：将SMEDDS的除CRV431之外的组分(例如，维生素E、

CC、丙二醇、

乙醇和

RH40)以本文公开的重量比率合并(例如，混合)成混合物，之后将CRV431与混合物合并(例如，将CRV431溶解到混合物中，或将混合物添加到CRV431)以获得具有本文公开的任何浓度(例如，90mg/mL)的CRV431的SMEDDS。在一些实施方案中，本公开内容的SMEDDS通过一次合并(例如，混合)SMEDDS的组分来制备。

在一些实施方案中，SMEDDS在室温是稳定的。在一些实施方案中，SMEDDS在4℃、5℃、6℃、7℃、8℃、9℃、10℃、11℃、12℃、13℃、14℃、15℃、16℃、17℃、18℃、19℃、20℃、21℃、22℃、23℃、24℃、25℃、26℃、27℃、28℃、29℃、30℃、31℃、32℃、33℃、34℃、35℃、36℃、37℃、38℃、39℃、40℃、45℃、50℃、55℃、60℃，或这些值中的任何两个之间的数字或范围是稳定的。

本文公开的SMEDDS在储存中是稳定的。例如，SMEDDS可以持续几个小时、几天、几个月或几年是稳定的。在一些实施方案中，SMEDDS持续约一个月至约三年是稳定的。在一些实施方案中，SMEDDS持续从至少约25天至至少约一年是稳定的。SMEDDS可以持续以下时间、约以下时间、至少以下时间或至多以下时间是稳定的：25天、26天、27天、28天、29天、30天、31天、32天、33天、34天、35天、36天、37天、38天、39天、40天、41天、42天、43天、44天、45天、46天、47天、48天、49天、50天、51天、52天、53天、54天、55天、56天、57天、58天、59天、60天、61天、62天、63天、64天、65天、66天、67天、68天、69天、70天、71天、72天、73天、74天、75天、76天、77天、78天、79天、80天、81天、82天、83天、84天、85天、86天、87天、88天、89天、90天、91天、92天、93天、94天、95天、96天、97天、98天、99天、100天、111天、112天、113天、114天、115天、116天、117天、118天、119天、120天、121天、122天、123天、124天、125天、126天、127天、128天、129天、130天、131天、132天、133天、134天、135天、136天、137天、138天、139天、140天、141天、142天、143天、144天、145天、146天、147天、148天、149天、150天、151天、152天、153天、154天、155天、156天、157天、158天、159天、160天、161天、162天、163天、164天、165天、166天、167天、168天、169天、170天、171天、172天、173天、174天、175天、176天、177天、178天、179天、180天、181天、182天、183天、184天、185天、186天、187天、188天、189天、190天、191天、192天、193天、194天、195天、196天、197天、198天、199天、200天，或这些值中的任何两个之间的数字或范围。SMEDDS可以持续以下时间、约以下时间、至少以下时间或至多以下时间是稳定的：1个月、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月、12个月、13个月、14个月、15个月、16个月、17个月、18个月、19个月、20个月、21个月、22个月、23个月、24个月、2.5年、3年，或这些值中的任何两个之间的数字或范围。例如，如果CRV431大体上没有结晶或沉淀，和/或没有结晶或沉淀到视觉上可观察到的程度，则SMEDDS可以被认为是稳定的。

例如，如果SMEDDS中的CRV431没有结晶或沉淀到这样的程度：使得溶解在SMEDDS中的CRV431的浓度降低超过0.1％、0.2％、0.3％、0.4％、0.5％、0.6％、0.7％、0.8％、0.9％、1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％或这些值中的任何两个之间的数字或范围，则SMEDDS可以被认为是稳定的。例如，如果SMEDDS中的CRV431没有结晶或沉淀到这样的程度：使得溶解在SMEDDS中的CRV431的浓度降低超过0.1mg/ml、0.2mg/ml、0.3mg/ml、0.4mg/ml、0.5mg/ml、0.6mg/ml、0.7mg/ml、0.8mg/ml、0.9mg/ml、1mg/ml、2mg/ml、3mg/ml、4mg/ml、5mg/ml、6mg/ml、7mg/ml、8mg/ml、9mg/ml、10mg/ml或这些值中的任何两个之间的数字或范围，则SMEDDS可以被认为是稳定的。

在一些实施方案中，由分散在水溶液中的SMEDDS形成的颗粒的直径为从约15nm至约40nm。在一些实施方案中，由分散在水溶液中的SMEDDS形成的颗粒的直径是以下、约以下、至少以下或至多以下：15nm、16nm、17nm、18nm、19nm、20nm、21nm、22nm、23nm、24nm、25nm、26nm、27nm、28nm、29nm、30nm、31nm、32nm、33nm、34nm、35nm、36nm、37nm、38nm、39nm、40nm或这些值中的任何两个之间的数字或范围。

本公开内容的药物组合物的用途

本公开内容的活性化合物(例如，作为SMEDDS组合物的一部分)可以任选地与一种或更多种可用于治疗如本文描述的病毒感染的其他活性化合物和/或剂组合(或联合)施用。两种或更多种化合物的“组合”或“联合”施用意指两种或更多种化合物在时间上足够接近地施用，以具有组合作用，例如加性作用和/或协同作用。两种或更多种化合物可以同时(simultaneously)(同时(concurrently))或依次施用，或者在彼此之前或之后的短时间内可以发生两个或更多个事件。同时施用可以通过在施用之前使化合物混合来进行，或者通过在相同的时间点但在不同的解剖部位或使用不同的施用途径施用化合物来进行。在一些实施方案中，其他抗病毒剂可以任选地同时施用。

例如，在一些实施方案中，本公开内容的药物组合物(例如，SMEDDS组合物)可以与另一种活性剂(例如，另一种抗病毒剂或增强剂(booster agent))时间接近地施用。在一些实施方案中，“时间接近”意指一种治疗剂(例如，本公开内容的药物组合物)的施用发生在另一种治疗剂(例如，另外的抗病毒剂)的施用之前或之后的一段时间内，使得一种治疗剂的治疗效果与另一种治疗剂的治疗效果重叠。在一些实施方案中，一种治疗剂的治疗效果与另一种治疗剂的治疗效果完全重叠。在一些实施方案中，“时间接近”意指一种治疗剂的施用发生在另一种治疗剂的施用之前或之后的一段时间内，使得一种治疗剂和另一种治疗剂之间存在协同效应。“时间接近”可以根据多种因素而变化，包括但不限于待施用治疗剂的受试者的年龄、性别、体重、遗传背景、医学状况、病史和治疗史；待治疗或改善的疾病或状况；待实现的治疗结果；治疗剂的剂量、给药频率和给药持续时间；治疗剂的药代动力学和药效动力学；以及施用治疗剂的途径。在一些实施方案中，“时间接近”意指15分钟内、30分钟内、1小时内、2小时内、4小时内、6小时内、8小时内、12小时内、18小时内、24小时内、36小时内、2天内、3天内、4天内、5天内、6天内、1周内、2周内、3周内、4周内、6周内或8周内。在一些实施方案中，一种治疗剂的多次施用可以与另一种治疗剂的单次施用时间接近地发生。在一些实施方案中，时间接近可以在治疗周期期间或在给药方案内改变。

在一些实施方案中，本公开内容的SMEDDS可以用于治疗疾病，例如肝病，诸如严重肝病、乙型肝炎(HBV)、肝纤维化或肝细胞癌。肝病的非限制性实例包括肝内胆汁淤积症(alagille综合症、胆汁性肝硬化)、脂肪肝(酒精性脂肪肝、reye综合征)、肝静脉血栓形成、肝豆状核变性、肝肿大(hepatomegaly)、肝脓肿(阿米巴肝脓肿)、肝硬化(酒精性、胆汁性和实验性)、酒精性肝病(脂肪肝、肝炎、肝硬化)、寄生虫病(parasitic)(肝包虫病(hepaticechinococcosis)、肝片吸虫病(fascioliasis)、阿米巴肝脓肿)、黄疸(溶血性、肝细胞性和胆汁淤积性)、胆汁淤积症、门静脉高压症、肝肿大(liver enlargement)、腹水、肝炎(酒精性肝炎、动物性肝炎、慢性肝炎(药物诱导的自身免疫性乙型肝炎、丙型肝炎、丁型肝炎)、中毒性肝炎、人类病毒性肝炎(甲型肝炎、乙型肝炎、丙型肝炎、丁型肝炎、戊型肝炎)、威尔逊病、肉芽肿性肝炎、继发性胆汁性肝硬化、肝性脑病、静脉曲张、原发性胆汁性肝硬化、原发性硬化性胆管炎、肝细胞腺瘤、血管瘤、胆结石、肝衰竭(肝性脑病、急性肝衰竭)和肝肿瘤(血管肌脂肪瘤、钙化肝转移、囊性肝转移、上皮肿瘤、纤维板层肝癌、局灶性结节性增生、肝腺瘤、肝胆管囊腺瘤、肝母细胞瘤、肝细胞癌、肝细胞瘤、肝癌、肝血管内皮瘤、间叶性错构瘤、间叶性肝肿瘤、结节性再生性增生、良性肝肿瘤(肝囊肿[单纯性囊肿、多囊肝病、肝胆管囊腺瘤、胆总管囊肿]、间叶性肿瘤[间叶性错构瘤、婴儿血管内皮瘤、血管瘤、肝紫癜症、脂肪瘤、炎性假瘤、混杂的(miscellaneous)]、上皮肿瘤[胆管上皮(胆管错构瘤、胆管腺瘤)、肝细胞(腺瘤、局灶性结节性增生、结节性再生性增生)]、恶性肝肿瘤[肝细胞性、肝母细胞瘤、肝细胞癌、胆管细胞性、胆管癌、囊腺癌、血管肿瘤、血管肉瘤、卡波西肉瘤、血管内皮瘤、胚胎肉瘤、肝中纤维肉瘤、平滑肌肉瘤、横纹肌肉瘤、癌肉瘤、畸胎瘤、类癌、鳞状细胞癌、原发性淋巴瘤])、肝紫癜症、红细胞生成性肝性卟啉症(erythrohepatic porphyria)、肝卟啉症(急性间歇性卟啉症、迟发性皮肤卟啉症)、泽尔韦格综合征(Zellweger syndrome))。在一些实施方案中，肝病是肝炎、肝硬化、胆汁淤积症或肝衰竭。

在一些实施方案中，在治疗期间或之后，受试者的疾病的症状被减轻和/或受试者的疾病的严重程度降低。症状的非限制性实例包括皮肤和眼睛出现黄色(黄疸)、腹痛和腹胀、腿部和脚踝肿胀、皮肤瘙痒、深尿液颜色、浅粪便颜色或带血或焦油色的粪便、慢性疲劳、恶心或呕吐、食欲不振、容易擦伤的倾向。疾病的严重程度可以增加(或降低)1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、25、30、40、50、60、70、80、90、100或这些值中的任何两个之间的数字或范围的疾病严重程度评分单位(例如，终末期肝病模型(MELD)评分单位)。在一些实施方案中，在治疗期间或之后，受试者的肝功能被改善。例如，受试者的肝功能被改善5％、10％、15％、20％、25％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、100％或这些值中的任何两个之间的数字或范围。在一些实施方案中，在治疗期间或之后，引起疾病的病毒的负载量降低。例如，引起疾病的病毒的负载量可以降低以下值、约以下值、至少以下值或至多以下值：5％、10％、15％、20％、25％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、99％、100％或这些值中的任何两个之间的数字或范围。

关于疾病或紊乱的治疗，“有效量”参考SMEDDS的推荐剂量来确定。所选择的剂量将取决于所选择的化合物的活性、施用途径、所治疗的状况的严重程度以及所治疗的患者的状况和既往病史而变化。然而，以低于实现期望治疗效果所需的水平开始化合物的给药并且逐渐增加剂量直到实现期望的效果在本领域的技术范围内。如果需要，为了施用的目的，有效日剂量可以分成多个剂，例如，每天两剂至四剂。然而，将理解，任何特定患者的具体剂量水平将取决于多种因素，包括体重、一般健康状况、饮食、时间和施用途径以及与其他药物的组合，以及所治疗的疾病的严重程度。

在一些实施方案中，本公开内容的SMEDDS例如以从约1mg/kg至约13mg/kg的剂量，例如以从约1mg/kg至约10mg/kg的剂量施用。例如，所述化合物可以以以下剂量、约以下剂量、至少以下剂量或至多以下剂量被施用至所述受试者：1mg/kg、1.1mg/kg、1.2mg/kg、1.3mg/kg、1.4mg/kg、1.5mg/kg、1.6mg/kg、1.7mg/kg、1.8mg/kg、1.9mg/kg、2mg/kg、2.1mg/kg、2.2mg/kg、2.3mg/kg、2.4mg/kg、2.5mg/kg、2.6mg/kg、2.7mg/kg、2.8mg/kg、2.9mg/kg、3mg/kg、3.1mg/kg、3.2mg/kg、3.3mg/kg、3.4mg/kg、3.5mg/kg、3.6mg/kg、3.7mg/kg、3.8mg/kg、3.9mg/kg、4mg/kg、4.1mg/kg、4.2mg/kg、4.3mg/kg、4.4mg/kg、4.5mg/kg、4.6mg/kg、4.7mg/kg、4.8mg/kg、4.9mg/kg、5mg/kg、6mg/kg、7mg/kg、8mg/kg、9mg/kg、10mg/kg、11mg/kg、12mg/kg、13mg/kg或这些值中的任何两个之间的数字或范围。可选择地或另外地，所述化合物以以下的量、约以下的量、至少以下的量或至多以下的量被施用至所述受试者：25mg、50mg、75mg、100mg、125mg、150mg、175mg、200mg、250mg、300mg、350mg、400mg、450mg、500mg、600mg、700mg、800mg、900mg、1000mg或这些值中的任何两个之间的数字或范围。本公开内容的SMEDDS可以例如作为单一剂量被每天或每周施用。在本文公开的任何实施方案中，SMEDDS可以被口服施用。

每个治疗过程的给药次数可以不同。在一些实施方案中，每个治疗过程的给药次数可以是以下值、约以下值、至少以下值或至多以下值：1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20或这些值中的任何两个之间的数字或范围。给药可以在紧接先前给药之后数天、数周或数月施用，诸如1天、2天、3天、4天、5天、6天、1周、2周、3周、4周、1个月、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月、12个月、1年、2年、3年、4年、5年或更长时间或这些值中的任何两个之间的数字或范围。

受试者接受的治疗过程的数目可以不同。在一些实施方案中，治疗过程的数目可以是以下值、约以下值、至少以下值或至多以下值：1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20，或这些值中的任何两个之间的数字或范围。治疗过程可以在紧接先前治疗过程之后数天、数周或数月施用，诸如1天、2天、3天、4天、5天、6天、1周、2周、3周、4周、1个月、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月、12个月或这些值中的任何两个之间的数字或范围。

在一些实施方案中，本文描述的SMEDDS可以例如作为单一剂量、每周、或每隔一周、或每三周、或每月被施用。本公开内容的SMEDDS可以每天施用一次，持续1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天或10天或更长时间。例如，含有5mg的CRV431的SMEDDS可以每天施用。例如，含有10mg的CRV431的SMEDDS可以每天施用。例如，含有15mg的CRV431的SMEDDS可以每天施用。例如，含有20mg的CRV431的SMEDDS可以每天施用。例如，含有25mg的CRV431的SMEDDS可以每天施用。例如，含有50mg的CRV431的SMEDDS可以每天施用。例如，含有100mg的CRV431的SMEDDS可以每天施用。例如，含有150mg的CRV431的SMEDDS可以每天施用。例如，含有200mg的CRV431的SMEDDS可以每天施用。例如，含有300mg的CRV431的SMEDDS可以每天施用。例如，含有350mg的CRV431的SMEDDS可以每天施用。例如，含有400mg的CRV431的SMEDDS可以每天施用。例如，含有450mg的CRV431的SMEDDS可以每天施用。例如，含有500mg的CRV431的SMEDDS可以每天施用。例如，含有750mg的CRV431的SMEDDS可以每天施用。例如，含有1000mg的CRV431的SMEDDS可以每天施用。本公开内容的SMEDDS可以每天施用一次，持续1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天或更长时间。本公开内容的SMEDDS可以每天施用一次，持续1周、2周、3周、4周、5周、6周、7周、8周、9周或10周或更长时间。例如，含有5mg的CRV431的SMEDDS可以每周施用。例如，含有10mg的CRV431的SMEDDS可以每周施用。例如，含有15mg的CRV431的SMEDDS可以每周施用。例如，含有20mg的CRV431的SMEDDS可以每周施用。例如，含有25mg的CRV431的SMEDDS可以每周施用。例如，含有50mg的CRV431的SMEDDS可以每周施用。例如，含有100mg的CRV431的SMEDDS可以每周施用。例如，含有150mg的CRV431的SMEDDS可以每周施用。例如，含有200mg的CRV431的SMEDDS可以每周施用。例如，含有300mg的CRV431的SMEDDS可以每周施用。例如，含有350mg的CRV431的SMEDDS可以每周施用。例如，含有400mg的CRV431的SMEDDS可以每周施用。例如，含有450mg的CRV431的SMEDDS可以每周施用。例如，含有500mg的CRV431的SMEDDS可以每周施用。例如，含有750mg的CRV431的SMEDDS可以每周施用。例如，含有1000mg的CRV431的SMEDDS可以每周施用。例如，含有1250mg的CRV431的SMEDDS可以每周施用。例如，含有1500mg的CRV431的SMEDDS可以每周施用。例如，含有1750mg的CRV431的SMEDDS可以每周施用。例如，含有2000mg的CRV431的SMEDDS可以每周施用。

在一些实施方案中，在施用剂量之后，受试者的血液中CRV431的浓度随时间变化的图的曲线下面积(AUC)为从约5000ng.hr/ml至约150000ng.hr/ml。受试者的血液中CRV431的浓度随时间变化的图的AUC可以是以下值、约以下值、至少以下值或至多以下值：5000ng.hr/ml、10000ng.hr/ml、11000ng.hr/ml、12000ng.hr/ml、13000ng.hr/ml、14000ng.hr/ml、15000ng.hr/ml、16000ng.hr/ml、17000ng.hr/ml、18000ng.hr/ml、19000ng.hr/ml、20000ng.hr/ml、30000ng.hr/ml、40000ng.hr/ml、50000ng.hr/ml、60000ng.hr/ml、70000ng.hr/ml、80000ng.hr/ml、90000ng.hr/ml、100000ng.hr/ml、110000ng.hr/ml、120000ng.hr/ml、130000ng.hr/ml、140000ng.hr/ml、150000ng.hr/ml或这些值中的任何两个之间的数字或范围。

在一些实施方案中，在施用单一剂量(例如，本文公开的单一剂量，包括1mg/kg或3mg/kg或者1mg/kg或3mg/kg之间的数字或范围的CRV431的单一剂量)之后，受试者的血液中CRV431的最大浓度(C_最大)为从约1500ng/ml至约2500ng/ml。例如，C_最大可以是以下值、约以下值、至少以下值或至多以下值：1500ng/ml、1550ng/ml、1600ng/ml、1650ng/ml、1700ng/ml、1750ng/ml、1800ng/ml、1850ng/ml、1900ng/ml、1950ng/ml、2000ng/ml、2050ng/ml、2100ng/ml、2150ng/ml、2200ng/ml、2250ng/ml、2300ng/ml、2350ng/ml、2400ng/ml、2450ng/ml、2500ng/ml或这些值中的任何两个之间的数字或范围。在一些实施方案中，受试者的血液中CRV431的C_最大在本公开内容的SMEDDS的多个剂量之后被测量。例如，在多个剂量之后的C_最大可以是以下值、约以下值、至少以下值或至多以下值：1500ng/ml、1550ng/ml、1600ng/ml、1650ng/ml、1700ng/ml、1750ng/ml、1800ng/ml、1850ng/ml、1900ng/ml、1950ng/ml、2000ng/ml、2050ng/ml、2100ng/ml、2150ng/ml、2200ng/ml、2250ng/ml、2300ng/ml、2350ng/ml、2400ng/ml、2450ng/ml、2500ng/ml、3000ng/ml、3500ng/ml、4000ng/ml、4500ng/ml、5000ng/ml或这些值中的任何两个之间的数字或范围。

在一些实施方案中，在施用剂量之后，在受试者的血液中达到CRV431的最大浓度的时间(T_最大)为从约0.5小时至约8小时。T_最大可以是以下值、约以下值、至少以下值或至多以下值：0.5小时、1小时、1.5小时、2小时、2.5小时、3小时、3.5小时、4小时、4.5小时、5小时、5.5小时、6小时、6.5小时、7小时、7.5小时、8小时或这些值中的任何两个之间的数字或范围。

在一些实施方案中，受试者的血液中CRV431的消除半衰期(T_1/2)为从约10小时至约200小时。T_1/2可以是以下值、约以下值、至少以下值或至多以下值：10小时、11小时、12小时、13小时、14小时、15小时、16小时、17小时、18小时、19小时、20小时、25小时、30小时、35小时、40小时、45小时、50小时、60小时、70小时、80小时、90小时、100小时、110小时、120小时、130小时、140小时、150小时、160小时、170小时、180小时、190小时、200小时或这些值中的任何两个之间的数字或范围。

在一些实施方案中，受试者的肝中CRV431的浓度相对于受试者的血液中CRV431的浓度为从约1至约20。

实施例

本公开内容通过以下实施例被进一步说明，这些实施例不应被解释为将本公开内容的范围或精神限制于本文描述的具体程序。应当理解，提供实施例以说明某些实施方案，并且因此不意图对本公开内容的范围进行限制。还应当理解，在不偏离本公开内容的精神和/或所附权利要求的范围的情况下，可以求助于其本身可以被本领域技术人员想到的各种其他实施方案、修改及其等同物。

实施例1-自微乳化药物递送系统的开发

药物和试剂

通过修饰CsA来合成纯度为97.3％的CRV431并储存在5℃。CsA从IVAX(Opava,Czech Republic)获得。Lauroglycol^TM 90、

M 2125、

1944、Peceol^TM、Labrafac^TM WL 1349、Capryol^TM 90、

CC和

购自Gattefosse(Montreal，加拿大)。丙二醇、过滤水、乙腈、甲醇、闪烁小瓶(scintillationvial)和12×75ml硼硅酸盐试管购自Fischer Scientific(Pittsburgh,USA)。无水乙醇购自Commercial Alcohols(Toronto，加拿大)。维生素E、

80、

40、

20、蓖麻油、二甲基亚砜、

EL和Chremophor RH 40购自Sigma-Aldrich(St.Louis,USA)。

80购自EMD Millipore Corporation(Burlington,USA)。聚乙二醇400(PEG 400)购自BDH Incorporated(Mississauga，加拿大)。

物理化学性质

为了确定CRV431和CsA的水溶解度，将在二甲基亚砜(DMSO)中的20mM的药物储备液在磷酸盐缓冲盐水(PBS，pH 7.4)中稀释30倍，以实现666μM的最终浓度，放置在振荡器上过夜，并以3,300rpm离心持续5min，以沉淀(pellet)不溶性药物。收集上清液，用甲醇1:1稀释，并且通过HPLC(Agilent 1100系列，UV检测)相对于标准曲线测量药物浓度。使用Molinspiration Cheminformatics(V2018.10,USA)计算极性表面积和log P。血浆蛋白结合通过平衡透析测定来确定。通过将2.5mM DMSO-药物储备液稀释500倍来制备药物血浆样品，以实现人类血浆中5μM的最终浓度。将血浆溶液(300μl)和pH 7.4的PBS(500μl)添加到快速平衡透析单元(Thermo Scientific；8K MWCO)的相邻室中。将板用塑料膜密封，并且在轨道振荡器上以225rpm在37℃振荡持续4.5小时。收集血浆样品和PBS样品，并且用硫酸锌/甲醇沉淀法提取药物。在以3,300rpm离心持续10min之后，甲醇上清液中的可溶性药物通过液相色谱法(LC)电喷雾电离(ESI)质谱法(LC-ESI-MS)(Agilent 1100系列,Santa Clara,USA)进行分析，并相对于标准曲线进行定量。

赋形剂溶解度

在用于制备适合用于水分散体和软胶囊的SMEDDS制剂的表面活性剂、油和共溶剂的组中测量了CRV431的溶解度。将CRV431(50mg)添加到75×125mm玻璃试管的底部，并且用赋形剂达到1ml标记。将样品放置在摇杆上，并且在混合过夜之后视觉上评估溶解度。如果没有达到溶解度，以0.5ml增量添加赋形剂，随后混合过夜，直到得到澄清的溶液。视觉评估用于赋形剂之间，以及相对于CsA的溶解度区分。

伪三元相图的构建

为了构建伪三元相图，评价了含有不同组成的

RH40(表面活性剂)、

CC(油)和共溶剂(维生素E、丙二醇、

和乙醇)的混合物，以评估各种赋形剂比率的微乳液形成(看起来是澄清的)和非微乳液形成(看起来是混浊的)之间的相界。

CRV431 SMEDDS开发

将CRV431(50mg-100mg)添加到75×125mm玻璃试管的底部。将赋形剂(例如，维生素E、

CC、丙二醇、

乙醇和

RH40)单独地组合并且充分混合，然后添加到CRV431并达到1ml标记。制备了若干个系列的SMEDDS制剂，并对其在含水介质中的药物溶解度、稳定性(通过LC-ESI-MS)以及微乳液的形成和稳定性(视觉检查)进行评估。

SMEDDS制剂中的CRV431的LC-ESI-MS定量

对于所有SMEDDS制剂分析，取出10μl并添加到闪烁小瓶中的10ml甲醇中。将样品涡旋持续10秒以混合，并且将1ml的该溶液添加到另一个闪烁小瓶中的9ml甲醇中(总共10,000倍稀释)。还制备了在甲醇中的5μg/ml CRV431标准物。将样品(1ml)转移到注射小瓶中，并且通过液相色谱法-电喷雾电离质谱法(LC-ESI-MS)在Agilent HP 1100LC-MS上进行分析。将样品放置在保持在5℃的自动进样器中。将样品和CRV431标准物注射(1μl)到保持在75℃的Zorbax SB-C18反相HPLC柱(1.8μm Rapid Resolution HT Cartridge，4.6×30mm)上，该柱使用含有0.02％冰乙酸和20μM乙酸钠的乙腈-水梯度体系(表1)。

表1.用于洗脱CRV431的梯度条件。

在正离子模式下，使用电喷雾电离(ESI)通过质谱法(MS)分析CRV431的钠加合物(1326m/z)。用设定在350℃的N₂气体温度以及以12L/min的干燥气体进行ESI-MS。碎裂电压(fragmentor voltage)和毛细管电压分别设定在260伏和4000伏。雾化器压力设定在40psig。通常在6.0分钟观察到CRV431洗脱时间。通过与一点标准(5μg/ml)进行峰面积比较来计算制剂的浓度。

分散体研究

将约5mL的所选择的介质(水、0.1N HCl或磷酸盐缓冲液(pH 6.8))放置在小瓶中，并且添加四(4)滴(约40mg)的1/1/5/5/2.4/4(维生素

CC/丙二醇

乙醇

RH40(w/w/w/w/w/w))SMEDDS。在倒置之后并且在添加1/1/5/5/2.4/4(维生素

CC/丙二醇

乙醇

RH40(w/w/w/w/w/w))SMEDDS 1小时之后，最初观察混合物。该相同的程序也针对1/1.5/2.5/5/2.4/5SMEDDS进行。

粒度

1/1/5/5/2.4/4和1/1.5/2.5/5/2.4/5(维生素

CC/丙二醇

乙醇

RH40(w/w/w/w/w/w))SMEDDS两者的平均颗粒直径在25℃通过动态光散射(Zetasizer Nano,Malvern Instruments,Malvern,UK)在173°的角度测量。每个样品一式三份地测量。值被表示为平均值±标准偏差。平均值为约25nm。

人类中1/1.5/2.5/5/2.4/5(维生素

CC/丙二醇

乙醇

RH40(w/w/w/w/w/w))CRV431SMEDDS的药代动力学

将CRV431 SMEDDS以1mg/kg或3mg/kg(75mg或225mg)的单一剂量口服施用至6名健康的禁食人类志愿者。该研究是在研究药物的临床研究设施(Celerion,Arizona,USA)作为1期临床单一递增剂量(SAD)研究的一部分进行的，并遵循所有FDA伦理准则。根据用于I期SAD研究的标准化纳入/排除标准来选择患者。18-55岁且没有以下证据的健康志愿者被纳入研究：正在进行的疾病(如由研究的研究者确定的)，或任何尼古丁使用(在筛选之前30天)，或药物滥用(在先前的2年内)，或使用长期处方药(在30天内)，或急性处方药(在14天内)，或包括维生素和草药/天然补充剂的全身非处方药(systemic over-the-countermedication)(在研究剂之前的7天内)。将SMEDDS分配(约3ml)到100ml Gibco透明瓶中，并添加15倍过量的过滤水(HPLC级)。将混合物温和涡旋持续1-2分钟，直到完全分散。将SMEDDS水中剂放置于冰箱中，并在2小时内口服施用。在0.5小时、1小时、2小时、4小时、6小时、8小时、12小时、24小时、48小时和72小时，通过静脉穿刺将全血样品(0.5ml)抽取到K2-EDTA血液收集管中。样品被立即冷冻，并且在5天内通过LC-ESI-MS进行分析。简言之，全血样品被解冻并且使用硫酸锌/甲醇沉淀法提取。通过经验证的LC-ESI-MS方法，针对7点全血标准曲线进行定量分析。使用商业软件(WinNonlin Professional Edition,版本7.0,Pharsight软件)进行非房室分析以计算药代动力学参数(C_最大、AUC、t_1/2和T_最大)。

大鼠中CRV431 SMEDDS的药代动力学

系列1 1/3/3/2/9(维生素

CC/丙二醇/乙醇

RH40(w/w/w/w/w))CRV431 SMEDDS(50mg/ml)以30mg/kg/天通过口服灌胃(oral gavage)被施用至Sprague Dawley大鼠(n＝6)持续7天。在第7天在给药后12小时，处死动物，并且提取全血和肝并冷冻。使用LC-ESI-MS(如用于人类药代动力学研究)定量全血中的CRV431。为了将肝中的CRV431定量，将1克的肝组织样品添加到9ml的均质化溶液(在水中的1％甲酸)中，并且使用TissueLyser(Qiagen)在30Hz均质化持续10分钟。取出等分试样并通过如上文描述的LC-ESI-MS进行分析。

CRV431的物理化学性质

表2中示出的CRV431和CsA的物理化学性质指示，CRV431相对于CsA具有更高的水溶解度，这反映于较高的血浆游离分数和较高的极性表面积(PSA)。两种药物的Log P值都是高的。不希望受理论束缚，CsA和CRV431两者均不适合于口服开发为干片剂。

表2.CRV431和CsA的物理化学性质。

赋形剂溶解度

在用于商业制备适合用于口服剂型的水分散体和软胶囊的SMEDDS制剂的表面活性剂、油和共溶剂的组中测量了CRV431的溶解度。

选择用于SMEDDS开发的赋形剂

基于在

RH40中CRV431的溶解度，选择

RH40作为表面活性剂。对于油相，发现CRV431在维生素E中具有最高的溶解度，其次是

CC。而对于共溶剂，CRV431的溶解度在乙醇中最高，其次是

和丙二醇。因此，所有以上赋形剂都被选择用于初步的制剂原型开发。

表3.在21℃，CRV431和CsA的赋形剂溶解度

CRV431在所测试的表面活性剂中的溶解度(如表3中所示)在10mg/ml-30mg/ml之间的范围内，相比之下，CsA的溶解度为至少50mg/ml，并且在大多数情况下>100mg/ml。鉴于CRV431的高亲脂性，相对低的溶解度是一个令人惊讶的发现。CRV431的溶解度在

RH40、Lauroglycol^TM 90和Capryol^TM 90中最高。除维生素E(25mg/ml)外，CRV431在所测试的油中的溶解度(通常为10mg/ml)低于CsA(>100mg/ml)。发现CRV431在多种共溶剂中的溶解度比在所测试的表面活性剂和油中高(10mg/ml-50mg/ml)，尽管CsA的溶解度通常也更大。

CRV431 SMEDDS的开发

初步制剂研究涉及在不存在药物的情况下，评估多种赋形剂比率对SMEDDS混溶性和微乳液形成的影响。研究结果(表4)指示，当分散在水中时，

RH40/Maisine组合比率小于3不形成微乳液。微乳液形成是通过视觉检查来评估的，并且必须看起来是澄清的，才被考虑继续开发。具有小于3的

RH40/Maisine比率的水分散体都是混浊的。数据以伪三元相图图解表示(图2)，其中微乳液形成的相界被清楚地划定。

表4.初步SMEDDS研究：作为赋形剂比率的函数的赋形剂相容性和微乳液形成

CRV431 SMEDDS制剂的开发和稳定性：系列1和系列2

系列1

基于初步SMEDDS微乳液研究，原型SMEDDS制剂(表5：制剂#1)被制备并且评估其CRV431溶解度和稳定性。目的是产生混溶且稳定的SMEDDS制剂，该制剂将CRV431溶解至至少50mg/ml，并在含水介质中形成澄清的微乳液。虽然制剂#1最初将CRV431溶解至50mg/ml并产生澄清的微乳液，但在随后的储存时，粘附至玻璃容器的CRV431晶体的形成在几天内变得明显，并且与如通过LCMS定量的CRV431损失相一致(图3)。制剂#1落在图2中的相图的左上方圆圈中。

表5.系列1赋形剂和比率

开发了另外的SMEDDS(系列1，表5)，其中

共溶剂的比例增加，以试图促进进一步的溶解度和减少的晶体形成。当分散在水中时，所有系列1制剂能够发展微乳液(显示在图2相图的中间圆圈内)。然而，稳定性结果(图3)示出所有系列1SMEDDS都是不稳定的，并且在室温储存时形成明显的CRV431晶体。

系列2SMEDDS

所有系列2SMEDDS形成澄清的SMEDDS溶液(表6)。这些制剂被示出落在伪三元相图的微乳液相中(图2的右下方圆圈)。

表6. 系列2 SMEDDS

CRV431 SMEDDS

为了进一步提高CRV431溶解度，将乙醇含量增加。表7和表8证明，当乙醇重量比率增加到2.4时，CRV431的药物负载量可以增加到至少90mg/ml，并且被认为是稳定的。制备了100mg/ml的样品，但没有充分溶解CRV431，并且因此没有进行进一步的测试。当在室温储存54天之后测量时，所有样品制品都是稳定的。因此，含有以1/1/5/5/2.4/4和1/1.5/2.5/5/2.4/5的重量比率的维生素

CC/丙二醇

乙醇

RH40的CRV431SMEDDS制剂被认为是具有高溶解度和稳定性的CRV431 SMEDDS。

表7.CRV431在1/1/5/5/2.4/4(维生素

CC/丙二醇

乙 醇

RH40(w/w/w/w/w/w))SMEDDS中的溶解度和稳定性

表8.CRV431(70mg/ml)在1/1.5/2.5/5/2.4/5(维生素

CC/丙二醇

乙醇

RH40(w/w/w/w/w/w))SMEDDS中的稳定性

如图2中所示，在左上方圆圈区域内的SMEDDS代表具有高表面活性剂的原型制剂。在中间圆圈区域内的SMEDDS代表含有高共溶剂量的系列1制剂。在右下方区域内的SMEDDS代表具有低表面活性剂和高共溶剂量的系列2制剂。如表6中所示，除指示的情况外，所有制剂都含有50mg/ml的CRV431。在指定的时间取出SMEDDS制剂的等分试样，并且通过LCMS进行分析。相对于原始系列1SMEDDS原型(1/3/3/9/2)，来自系列2的所有SMEDDS都显示出具有延长的稳定性(图4)。系列2SMEDDS在室温储存77天之后没有可观察到的药物损失。

CRV431 SMEDDS制剂(1/1/5/5/2.4/4和1/1.5/2.5/5/2.4/5(维生素

CC/丙二醇

乙醇

RH40(w/w/w/w/w/w))的表征

CRV431 SMEDDS的微乳液形成和稳定性

当CRV431 SMEDDS(1/1/5/5/2.4/4和1/1.5/2.5/5/2.4/5(维生素

CC/丙二醇

乙醇

RH40(w/w/w/w/w/w))被分散在含水介质中时，在少于一分钟的温和涡旋和/或倒置(inversion)内形成视觉上澄清的溶液。水、0.1NHCl和磷酸盐缓冲微乳液溶液在37℃保持澄清持续多达1小时(表9)。

表9.对于1/1.5/2.5/5/2.2/5和1/1/5/5/2.4/4CRV431 SMEDDS，在37℃在含水介 质中的微乳液稳定性

粒度

当分散在水中时，1/1.5/2.5/5/2.4/5CRV431 SMEDDS制剂的平均颗粒直径被测量为24.6±5.7nm(平均值±标准偏差)(图5)。该尺寸与所报告的

含水分散体的粒度一致。此外，1/1/5/5/2.4/4SMEDDS制剂具有大致相同的粒度(图6)。

CRV431 SMEDDS的药代动力学

1/1.5/2.5/5/2.4/5CRV431 SMEDDS在人类中的药代动力学展示出优异的暴露和近似的剂量比例性(图7A-图7C和表10)。患者(n＝6)被给予单一剂量的CRV431，并在指定的时间点通过LC-ESI-MS分析全血等分试样。误差棒表示平均值±标准偏差。(图7A：线性标度。图7B：75mg剂量的对数标度。图7C：225mg剂量的对数标度)。相对于健康人类受试者(23名)中报告的环孢菌素A(2.5mg/kg)暴露，CRV431 C_最大略大于

并且总暴露(AUC)比

大约14倍。

表10. 6名健康人类志愿者中CRV431相对于环孢菌素A的单一剂量药代动力学。值 表示平均值±标准偏差。

一项单独的大鼠研究测量了分布在肝中的CRV431水平相对于分布在血液中的CRV431水平(参见图8)。在本研究中，Sprague Dawley大鼠(n＝6)通过口服灌胃被给药(30mg/kg)1/3/3/2/9(维生素

CC/丙二醇/乙醇/

RH40(w/w/w/w/w))CRV431SMEDDS(50mg/ml)持续7天，并且在最终给药之后12小时通过LC-ESI-MS来分析全血等分试样和肝匀浆。发现分布在肝中的CRV431水平(10μg/g组织)比分布在全血部分中的CRV431水平高6.5倍。误差棒表示平均值±标准偏差。

Claims (32)

1.一种自微乳化药物递送系统(SMEDDS)，包含CRV431：

或其药学上可接受的盐。

2.根据权利要求1所述的自微乳化药物递送系统，其中所述系统包含

RH40。

3.根据上述权利要求中任一项所述的自微乳化药物递送系统，其中所述系统包含乙醇。

4.根据上述权利要求中任一项所述的自微乳化药物递送系统，其中所述系统包含

5.根据上述权利要求中任一项所述的自微乳化药物递送系统，其中所述系统包含丙二醇。

6.根据上述权利要求中任一项所述的自微乳化药物递送系统，其中所述系统包含

CC。

7.根据上述权利要求中任一项所述的自微乳化药物递送系统，其中所述系统包含维生素E。

8.根据上述权利要求中任一项所述的自微乳化药物递送系统，其中所述系统包含以1/1/5/5/2.4/4或1/1.5/2.5/5/2.4/5的重量比率的维生素E、

CC、丙二醇、

乙醇和

RH40。

9.根据上述权利要求中任一项所述的自微乳化药物递送系统，其中所述系统包含以从约10mg/mL至约90mg/mL的浓度的CRV431。

10.根据上述权利要求中任一项所述的自微乳化药物递送系统，其中所述系统包含以约90mg/mL的浓度的CRV431。

11.一种药物组合物，包含：

(a)以从约10mg/mL至约90mg/mL的浓度的CRV431：

(b)维生素E；

(c)

CC；

(d)丙二醇；

(e)

(f)乙醇；和

(g)

RH40，其中维生素E、

CC、丙二醇、

乙醇和

RH40的重量比率分别为约(0.75-1.5)/(0.5-2)/(2-5)/(2-5)/(2-2.4)/(4-8)。

12.一种治疗有相应需要的受试者的疾病的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的根据权利要求1-10中任一项所述的自微乳化药物递送系统(SMEDDS)或治疗有效量的根据权利要求11所述的药物组合物。

13.一种预防有相应需要的受试者的疾病的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的根据权利要求1-10中任一项所述的自微乳化药物递送系统(SMEDDS)或治疗有效量的根据权利要求11所述的药物组合物。

14.根据权利要求1-10中任一项所述的自微乳化药物递送系统(SMEDDS)，或根据权利要求11所述的药物组合物，用于治疗或预防受试者的疾病。

15.治疗有效量的根据权利要求1-10中任一项所述的自微乳化药物递送系统(SMEDDS)或根据权利要求11所述的药物组合物在制造用于治疗或预防受试者的疾病的药物中的用途。

16.根据权利要求12-13中任一项所述的方法，根据权利要求14所述的SMEDDS或药物组合物，或根据权利要求15所述的用途，其中所述疾病为严重肝病。

17.根据权利要求12-13中任一项所述的方法，根据权利要求14所述的SMEDDS或药物组合物，或根据权利要求15所述的用途，其中所述疾病为乙型肝炎(HBV)、肝纤维化或肝细胞癌。

18.根据权利要求12-13中任一项所述的方法，根据权利要求14所述的SMEDDS或药物组合物，或根据权利要求15所述的用途，其中所述疾病为乙型肝炎(HBV)。

19.根据权利要求12-13中任一项所述的方法，根据权利要求14所述的SMEDDS或药物组合物，或根据权利要求15所述的用途，其中所述疾病为肝纤维化。

20.根据权利要求12-13中任一项所述的方法，根据权利要求14所述的SMEDDS或药物组合物，或根据权利要求15所述的用途，其中所述疾病为肝细胞癌。

21.根据权利要求12-20中任一项所述的方法、SMEDDS、药物组合物或用途，其中所述受试者的血液中CRV431的浓度随时间变化的图的曲线下面积(AUC)为从约5000ng.hr/ml至约150000ng.hr/ml。

22.根据权利要求12-21中任一项所述的方法、SMEDDS、药物组合物或用途，其中所述受试者的血液中CRV431的最大浓度(C_最大)为从约1500ng/ml至约2500ng/ml。

23.根据权利要求12-22中任一项所述的方法、SMEDDS、药物组合物或用途，其中达到所述受试者的血液中CRV431的最大浓度的时间(T_最大)为从约0.5小时至约8小时。

24.根据权利要求12-23中任一项所述的方法、SMEDDS、药物组合物或用途，其中所述受试者的血液中CRV431的消除半衰期(T_1/2)为从约10小时至约200小时。

25.根据权利要求12-24中任一项所述的方法、SMEDDS、药物组合物或用途，其中所述受试者的肝中CRV431的浓度相对于所述受试者的血液中CRV431的浓度为从约1至约20。

26.根据权利要求12-25中任一项所述的方法、SMEDDS、药物组合物或用途，其中所述SMEDDS的治疗有效量为从约0.5mg/kg至约5mg/kg。

27.根据权利要求12-26中任一项所述的方法、SMEDDS、药物组合物或用途，从而所述受试者的所述疾病的症状被减轻和/或所述受试者的所述疾病的严重程度降低。

28.根据权利要12-27中任一项所述的方法、SMEDDS、药物组合物或用途，从而所述受试者的肝功能被改善。

29.根据权利要求12-28中任一项所述的方法、SMEDDS、药物组合物或用途，从而引起所述疾病的病毒的负载量降低。

30.根据前述权利要求中任一项所述的SMEDDS、药物组合物、方法或用途，其中所述药物组合物或所述SMEDDS在室温是稳定的。

31.根据前述权利要求中任一项所述的SMEDDS、药物组合物、方法或用途，其中所述药物组合物或所述SMEDDS持续从至少约25天至至少约200天是稳定的。

32.根据前述权利要求中任一项所述的SMEDDS、药物组合物、方法或用途，其中由分散在水溶液中的所述药物组合物或所述SMEDDS形成的颗粒的直径为从约15nm至约40nm。

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