CN113189073B - 一种硫掺杂碳量子点结合酶抑制法检测食品中抗蚜威含量的方法 - Google Patents
一种硫掺杂碳量子点结合酶抑制法检测食品中抗蚜威含量的方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开了一种硫掺杂碳量子点结合酶抑制法检测食品中抗蚜威含量的方法。所述方法包括如下步骤:S1、配制不同浓度的抗蚜威标准溶液,分别加入至粉碎后的空白食品样品中;用水溶性DES进行提取,向提取液中加入乙酰胆碱酯酶,培养后加入碘化乙酰硫代胆碱、pH缓冲液和S‑CQDs,再次进行恒温培养;测定不同浓度溶液的荧光值,绘制标准曲线;S2、采用水溶性DES提取粉碎后的待测食品;S3、取S2得到的提取液后按S1操作,得到体系的荧光强度;根据标准曲线和测得的荧光强度即得。水溶性DES的提取液与后续的检测体系互溶,S‑CQDs表面含有大量负电荷可与乙酰硫代胆碱的水解产物硫代胆碱(+)产生静电相互作用导致荧光猝灭;抗蚜威会抑制酶活性,体系荧光增强,实现定量检测。
Description
技术领域
本发明涉及一种硫掺杂碳量子点结合酶抑制法检测食品中抗蚜威含量的方法,属于食品安全检测领域。
背景技术
农作物防虫防病是农业管理的一个重要方面。近年来,人们开发了许多杀虫剂来控制害虫,大大提高了农作物的总产量。抗蚜威具有触杀、熏蒸和叶面渗透作用,是一种高效、选择性强的氨基甲酸酯类杀蚜虫剂,适用于防治蔬菜、烟草、粮食作物上的蚜虫,是综合防治的理想药剂,使得在粮食和其它蔬菜种植中得到了广泛和大量的应用。但由于抗蚜威等农药的不合理使用也造成了食品安全问题。氨基甲酸酯类农药是哺乳动物乙酰胆碱酯酶(AchE)的阻断剂,主要是抑制胆碱酯酶活性,使酶活性中心丝氨酸的羟基被氨基甲酰化,因而失去酶对乙酰胆碱的水解能力,造成组织内乙酰胆碱的蓄积而中毒。氨基甲酸酯类农药可经呼吸道、消化道侵入机体,也可经皮肤黏膜缓慢吸收。在农田喷药及生产制造过程的包装工序中,很有可能经皮肤污染,造成厌食、记忆力减退、瘫痪等不良影响,会增加患阿尔茨海默氏病的风险,在极端情况下还会导致死亡。因此检测食品中的抗蚜威含量具有重要意义。
为了保障人民的身体健康,世界各国对氨基甲酸酯类农药的使用和残留都做了严格的规定并制定了相应的标准,国标规定粮食(包括大豆)中抗蚜威最大残留量≤0.05mg/kg,蔬菜中抗蚜威最大残留量≤1mg/kg,水果中抗蚜威最大残留量≤0.5mg/kg。到目前为止,已经发展了许多测定食品中抗蚜威含量的方法,如高效液相色谱法(HPLC)、高效液相色谱-质谱法(HPLC-MS)、气相色谱法(GC)、表面增强拉曼光谱法(SERS)、酶联免疫吸附法(ELISA)等。虽然上述检测方法结果灵敏准确,但在样品提取、样品检测等方面仍然有改进的空间。因此,需要建立一种绿色环保,检测结果准确、选择性强、操作简便的分析方法来测定食品中抗蚜威的残留量。
发明内容
本发明的目的是提供一种硫掺杂碳量子点结合酶抑制法检测食品中抗蚜威含量的方法,该方法检测方便,绿色环保,具有较高的精确度。
本发明提供的检测食品中抗蚜威含量的方法,包括如下步骤:
S1、配制不同浓度的抗蚜威标准溶液,分别加入至粉碎后的空白食品样品中静置;然后采用水溶性DES进行提取,向得到的提取液中分别加入乙酰胆碱酯酶,培养后加入碘化乙酰硫代胆碱、pH缓冲液和硫掺杂碳量子点,再次进行恒温培养;测定不同浓度溶液的荧光值,以抗蚜威浓度为横坐标,以荧光强度为纵坐标,绘制标准曲线;
S2、采用所述水溶性DES提取粉碎后的待测食品;
S3、取步骤S2得到的提取液后按步骤S1进行操作,得到体系的荧光强度;
S4、根据所述标准曲线和步骤S3测得的荧光强度,即得到待测食品中抗蚜威的含量。
上述的方法中,步骤S1中,所述抗蚜威标准溶液添加至空白食品样品后,所述抗蚜威的浓度为0.05~5mg/kg;配制8种不同浓度的含有抗蚜威的样品,如0.05mg/kg、0.25mg/kg、0.5mg/kg、1mg/kg、2mg/kg、3mg/kg、4mg/kg和5mg/kg。
上述的方法中,步骤S1中,空白样品添加抗蚜威后静置时间至少为20min。
上述的方法中,步骤S1中,所述水溶性DES为氯化胆碱与丁二醇的混合液;
所述氯化胆碱与所述丁二醇的摩尔比为1:1;
所述水溶性DES的用量为:1g待测食品:0.5~1mL所述水溶性DES。
上述的方法中,步骤S1中,所述提取液的用量为50~100μL。
上述的方法中,步骤S1中,所述乙酰胆碱酯酶的活力可为5~100mU/mL,最优选50mU/mL,如在100μL的上清液中加入50μL的所述乙酰胆碱酯酶;加入所述乙酰胆碱酯酶后,于37℃的条件下恒温培养40~60min,优选50min。
上述的方法中,步骤S1中,所述碘化乙酰硫代胆碱以其水溶液的形式加入,所述浓度可为0.5~5mmol/L,优选2mmol/L;
上述的方法中,步骤S1中,所述pH缓冲液的pH值可为6.6~7.4,优选7;所述pH缓冲液为由磷酸二氢钠和磷酸氢二钠配制而成的缓冲液。
上述的方法中,步骤S1中,所述量子点由柠檬酸和硫化钠由水热法制备得到;具体可将0.400g的所述柠檬酸,0.113g的所述硫化钠,溶于40mL去离子水中;
所述水热法的温度为160~200℃,时间为6~12h;
所述硫掺杂碳量子点用量为50μL。
上述的方法中,步骤S1中,加入所述硫掺杂碳量子点后,于37℃的条件下培养30~50min,优选40min。
上述的方法中,步骤S1中,采用酶标仪进行荧光检测;
在激发波长为325nm、发射波长为395nm的条件下进行检测。
本发明方法能够对大米、小麦、小米、燕麦等食品中的抗蚜威含量进行检测。
本发明方法具有如下有益效果:
1、本发明提供的检测食品中抗蚜威残留量的方法,采用水溶性DES直接提取食品中的抗蚜威,提取液与后续的检测体系互溶,能够避免使用高毒性的有机溶剂以及出现相分离的现象,具有操作简单快速、提取剂用量少、易于收集、绿色环保、回收率好等显著优势。
2、本发明方法合成的硫掺杂碳量子点探针不但克服了传统荧光探针中有机染料的使用,而且由于合成的硫掺杂碳量子点分子量和粒径小、荧光稳定性高,表面含有大量负电荷可以与乙酰硫代胆碱的水解产物硫代胆碱(+)产生静电相互作用,降低荧光强度;然而抗蚜威可以抑制酶的活性,增强量子点的荧光,提高检测灵敏度。
3、本发明方法采用的检测设备不仅可以一次性处理大量样品,而且样本试剂用量少,检测速度快效率高。
附图说明
图1为本发明检测方法的原理示意图。
图2为本发明实施例1制备的硫掺杂碳量子点的荧光光谱图。
图3为本发明实施例2中反应后两种体系的荧光强度。
图4为本发明实施例3中采用不同水溶性DES提取时的抗蚜威的回收率。
图5为本发明实施例3采用不同酶活力的乙酰胆碱脂酶时的体系的F0/F。
图6为本发明实施例3采用不同pH值的缓冲液时的体系的F0/F。
图7为本发明实施例3采用不同碘化乙酰硫代胆碱浓度时的体系的F0/F。
图8为本发明实施例3中不同的酶与提取液的作用时间时的体系的F0/F。
图9为本发明实施例3中不同的硫掺杂碳量子点与反应底物的作用时间时的体系的F0/F。
图10为本发明实施例4测定的抗蚜威浓度与体系的F0/F之间的标准曲线。
具体实施方式
下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明,均为常规方法。
下述实施例中所用的材料、试剂等,如无特殊说明,均可从商业途径得到。
下述实施例中,氯化胆碱、乙二醇、丙二醇、丁二醇、乙酰胆碱酯酶、碘化乙酰硫代胆碱、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、柠檬酸、硫化钠、甲醇均购自上海阿拉丁生化科技股份有限公司。
本发明检测方法的机理如图1所示。
本发明合成的亲水性低共熔溶剂(丁二醇:氯化胆碱)可实现直接粮食样品中残留的抗蚜威高效提取;采用一步水热法以Na2S为硫源、柠檬酸为碳源合成了激发波长在325nm处的S-CQDs,合成的量子点表面含有大量负电荷,作为本发明检测方法的荧光探针。乙酰胆碱酯酶(AChE)可以催化碘化乙酰硫代胆碱(ATC)水解成带有正电荷的硫代胆碱(TC),与带负电的S-CQDs相互作用导致量子点聚集,荧光猝灭。抗蚜威可以抑制AChE的活性,水解产物TC减少,S-CQDs荧光增强,通过测定S-CQDs的荧光,即可实现粮食中的抗蚜威的定量检测。
实施例1、硫掺杂碳量子点的合成
称取0.400g柠檬酸溶于40mL去离子水中,溶解后加入0.113g硫化钠,搅拌溶解后置于50mL高压反应釜中,高温(190℃)下加热反应12h合成硫掺杂碳量子点(S-CDQs),确定其最佳的激发波长的发射波长。
本实施例制备的硫掺杂碳量子点的荧光光谱如图2所示。
由图2可以看出,本发明合成的S-CDQs最佳激发波长为325nm,最佳发射波长为395nm。
实施例2、试验的可行性验证
为了验证本发明检测方法的可行性,配制了2种不同的反应体系,a:乙酰胆碱酯酶+碘化乙酰硫代胆碱+缓冲液(pH=7)+S-CQDs,b:抗蚜威+乙酰胆碱酯酶+碘化乙酰硫代胆碱+缓冲液(pH=7)+S-CQDs,在最佳激发波长下测定荧光光谱。其中,体系a添加100μL甲醇溶液于96孔板中,然后添加50mU/mL的乙酰胆碱酯酶50μL,37℃下恒温培养50min。之后加入2mmol/L的碘化乙酰硫代胆碱50μL,pH=7的缓冲液50μL和硫掺杂碳量子点50μL,37℃下恒温培养40min,测定荧光值。体系b添加100μL浓度为200μmol/L的抗蚜威于96孔板中然后,添加2mU/mL的乙酰胆碱酯酶50μL,37℃下恒温培养50min,充分抑制酶的活性。之后加入2mmol/L的碘化乙酰硫代胆碱50μL,pH=7的缓冲液50μL和硫掺杂碳量子点50μL,37℃下恒温培养40min,测定荧光值。
反应后两种体系的荧光强度如图3所示。
由图3可以看出,当抗蚜威存在于反应体系的时荧光值较高。即抗蚜威可以抑制乙酰胆碱酯酶的活性,碘化乙酰硫代胆碱的水解产物硫代胆碱(+)减少,S-CQDs(-)与硫代胆碱通过静电相互作用导致量子点聚集减少,荧光增强。因此,通过测定S-CQDs的荧光,即可实现粮食中的抗蚜威的定量检测。
实施例3、硫掺杂碳量子点结合酶抑制法检测抗蚜威的条件优化
A.水溶性DES组分
配制三种不同的水溶性DES(体积大于1mL),a:氯化胆碱+乙二醇;b:氯化胆碱+丙二醇;c:氯化胆碱+丁二醇;将氯化胆碱和乙/丙/丁二醇按摩尔比为1:1加热至无明显颗粒呈透明状即可。称取1g粉碎空白样品(大米)至于10mL离心管中,加入150μmol/L的抗蚜威50μL,静置20min。加入合成的不同种DES(体积为1mL)在2500r/min的条件下涡旋提取15s。提取完成后取100μL提取液加入96孔板,分别添加50mU/mL的乙酰胆碱酯酶50μL,37℃下恒温培养50min,充分抑制酶的活性。之后加入2mmol/L的碘化乙酰硫代胆碱50μL,pH=7的缓冲液50μL和硫掺杂碳量子点50μL,37℃下恒温培养40min,测定荧光值,计算回收率,结果如图4所示。
由图4可以看出,在相同的提取条件下,以氯化胆碱和丁二醇为基础合成的亲水性DES对目标物质的提取效果最好,这是因为氯化胆碱和丁二醇合成的DES比其它DESs具有较弱的极性,形成的空间结构更合适抗蚜威的萃取。所以最优选氯化胆碱和丁二醇合成的亲水性DES作为提取剂。
B.酶活力影响
配制6个不同活力的乙酰胆碱脂酶溶液(0.1mU/mL,1mU/mL,5mU/mL,50mU/mL,100mU/mL,200mU/mL)。称取1g粉碎空白样品(小麦)至于10mL离心管中,加入150μmol/L的抗蚜威50μL,静置20min。加入1mL DES(氯化胆碱:丁二醇)在2500r/min的条件下涡旋提取15s。提取完成后取上清液100μL加入96孔板,分别添加50μL不同活力的乙酰胆碱酯酶到96孔板中,37℃恒温培养50min,充分抑制酶的活性。之后加入2mmol/L的碘化乙酰硫代胆碱50μL、pH=7的缓冲液50μL和硫掺杂碳量子点50μL,37℃恒温培养40min测定荧光值,计算F0/F(F0表示未加农药时的荧光值,即抗蚜威浓度为零时体系的荧光强度,F表示样品实际测定的荧光强度),如图5所示。
由图5可以看出,随着酶浓度的增强,F0/F逐渐升高,酶浓度达到50mU/mL时F0/F为最大值,之后F0/F逐渐降低。因此,最优选50mU/mL的乙酰胆碱酯酶。
C.缓冲液pH的影响
配制6个不同pH的缓冲液(0.2mmol/L磷酸二氢钠和0.2mmol/L磷酸氢二钠配置)分别是:5.8、6.2、6.6、7.0、7.4、7.8。称取1g粉碎空白样品(小米)至于10mL离心管中,加入150μmol/L的抗蚜威50μL,静置20min。加入1mL DES(氯化胆碱:丁二醇)在2500r/min的条件下涡旋提取15s。提取完成后取上清液100μL加入96孔板,分别添加50mU/mL乙酰胆碱酯酶50μL,37℃恒温培养50min,充分抑制酶的活性。之后加入2mmol/L的碘化乙酰硫代胆碱50μL,不同pH的缓冲液50μL和硫掺杂碳量子点50μL,37℃恒温培养40min测定荧光值,计算F0/F,如图6所示。
由图6可以看出,随着pH的升高F0/F逐渐升高,pH=7.0达到最大,之后F0/F逐渐降低。表明乙酰胆碱酯酶在7.0时酶活力达到最大,乙酰胆碱增多促进了S-CQDs量子点的猝灭。所以最优选pH=7.0作为最佳的反应pH。
D.碘化乙酰硫代胆碱的浓度影响
配制6个不同浓度的碘化乙酰硫代胆碱,分别是:50μmol/L、100μmol/L、500μmol/L、2mmol/L、5mmol/L、10mmol/L。称取1g粉碎空白样品(燕麦)至于10mL离心管中,加入150μmol/L的抗蚜威50μL,静置20min。加入1mL DES(氯化胆碱:丁二醇)在2500r/min的条件下涡旋提取15s。提取完成后取上清液100μL加入96孔板,分别添加50mU/mL乙酰胆碱酯酶50μL,37℃恒温培养50min,充分抑制酶的活性。之后加入不同浓度的碘化乙酰硫代胆碱50μL,pH=7的缓冲液50μL和硫掺杂碳量子点50μL,37℃恒温培养40min测定荧光值,计算F0/F,如图7所示。
由图7可以看出,随着乙酰胆碱浓度增大,F0/F逐渐升高,2mmoL/L之后随着乙酰胆碱浓度逐渐变大,F0/F逐渐降低,所以最优选2mmoL/L的碘化乙酰硫代胆碱。
E.酶与提取液作用时间的影响
称取1g粉碎空白样品(大米)至于10mL离心管中,加入150μmol/L的抗蚜威50μL,静置20min。加入1mL DES(氯化胆碱:丁二醇)在2500r/min的条件下涡旋提取15s。提取完成后取上清液100μL加入96孔板,然后加入50μL浓度为50mU/mL的乙酰胆碱酯酶,37℃下分别温浴10min、20min、30min、40min、50min、60min、70min、80min、90min、100min,之后加入2mmol/L的碘化乙酰硫代胆碱50μL,pH=7的缓冲液50μL和硫掺杂碳量子点50μL,37℃恒温培养40min测定荧光值,计算F0/F,如图8所示。
由图8可以看出,随着时间的延长,酶的活性被充分抑制,硫代胆碱的含量逐渐增加,猝灭的量子点数量不断增加。作用时间为50min时F0/F达到最大值。50min之后随着时间增长,F0/F逐渐降低,这是因为酶在最适温度下温浴过长时间会导致酶活力降低。所以酶与提取液作用的时间最优选为50min。
F.硫掺杂碳量子点与反应底物作用时间的影响
称取1g粉碎空白样品(大米)至于10mL离心管中,加入150μmol/L的抗蚜威50μL,静置20min。加入1mL DES(氯化胆碱:丁二醇)在2500r/min的条件下涡旋提取15s。提取完成后取上清液100μL加入96孔板,然后加入50μL浓度为50mU/mL的乙酰胆碱酯酶,37℃下温浴50min,充分抑制酶的活性。之后加入2mmol/L的碘化乙酰硫代胆碱50μL,pH=7的缓冲液50μL和硫掺杂碳量子点50μL,37℃分别恒温培养10min、20min、30min、40min、50min、60min,恒温培养后取出测定荧光值,计算F0/F,如图9所示。
由图9可以看出,随着时间的增长,F0/F逐渐升高,40min之后随着时间增长,F0/F逐渐降低。所以硫掺杂碳量子点与反应底物作用的时间最优选为40min。
实施例4、抗蚜威标准曲线的制作
称取1g粉碎空白样品(大米),添加50μL不同浓度的抗蚜威标品,使得样品中抗蚜威的浓度为0.05mg/kg、0.25mg/kg、0.5mg/kg、1mg/kg、2mg/kg、3mg/kg、4mg/kg、5mg/kg,静置20min。添加1mL水溶性DES(氯化胆碱:丁二醇)在2500r/min的条件下涡旋提取15s。提取完成后取上清液100μL加入96孔板,分别添加50mU/mL乙酰胆碱酯酶50μL到96孔板中,37℃恒温培养50min,充分抑制酶的活性。之后加入2mmol/L的碘化乙酰硫代胆碱50μL、pH=7的缓冲液50μL和硫掺杂碳量子点50μL,37℃恒温培养40min测定荧光值。以农药浓度为横坐标,荧光强度为纵坐标。做10个空白计算其标准偏差,根据定量限(LOQ)的计算公式:LOQ=10σ/K和检出限(LOD)的计算公式:LOD=3σ/K(σ为空白样的标准偏差;K工作曲线的斜率)计算出此优化条件下的定量限和检出限。
所得标准曲线如图10所示,可以看出,抗蚜威浓度在0.05mg/kg~5mg/kg内存在良好的线性关系,y=(12.1396x+5.8915)×107,R2=0.9965。定量限(LOQ)为0.024mg/kg,检出限(LOD)为0.007mg/kg,表明本发明方法具有较高的灵敏度和准确度。
实施例5、测定实际样品提取液抗蚜威含量
准确称取1g粉碎实际样品(小麦,燕麦,小米,大米)于10mL离心管中,加入1mL DES(氯化胆碱:丁二醇)在2500r/min的条件下涡旋提取15s。提取完成后取上清液100μL加入96孔板,分别添加50mU/mL乙酰胆碱酯酶50μL,37℃恒温培养50min,充分抑制酶的活性。再加入2mmol/L的碘化乙酰硫代胆碱50μL,pH=7的缓冲液50μL和硫掺杂碳量子点50μL,37℃恒温培养40min测定荧光值,进行实际样品检测。结果表明实际样品中抗蚜威的含量低于本实验的检出限。因而进行加标回收实验(抗蚜威添加浓度分别为0.05mg/kg、0.5mg/kg、5mg/kg),将所得数据代入制备的标准曲线得到样品中抗蚜威的浓度。按下列公式计算回收率:
Cfound:表示在实际样品中加入已知浓度的标准物后得到的分析物的总浓度;Creal:实际样品中待测物的初始浓度;Cadded:添加已知待测物的浓度。
实验结果如表1所示。
表1食品样品的添加回收率
表1中的数据可知,实际样品测定的加标回收率为96.60%~108.21%,相对标准偏差(RSD)<5%,结果表明本发明方法的检测结果准确可靠,可以用于粮食样品的实际检测。
本发明建立了一种硫掺杂碳量子点结合酶抑制法检测谷物中抗蚜威含量的方法。
本发明合成了绿色环保的亲水性低共熔熔剂(氯化胆碱:丁二醇)作为抗蚜威的提取剂,能够避免使用高毒性的有机提取剂,且提取剂使用量少,绿色环保;合成的硫掺杂碳点量子点荧光稳定性好。在最佳的反应条件下,抗蚜威在0.05mg/kg~5mg/kg的范围内与荧光亲强度呈线性关系。
本发明建立的方法成功应用于实际样品(大米、小麦、小米和燕麦)中抗蚜威含量的测定。上述实验结果表明,本发明方法具有简单、高效、绿色环保的优点,方法的重现性,准确度、精密度及检出限均可满足日常快速测定粮食中抗蚜威残留量的分析要求。
以上所述,仅是本发明的较佳实施例而已,并非是对本发明做其它形式的限制,任何本领域技术人员可以利用上述公开的技术内容加以变更或改型为等同变化的等效实施例。但是凡是未脱离本发明技术方案内容,依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与改型,仍属于本发明技术方案的保护范围。
Claims (8)
1.一种检测食品中抗蚜威含量的方法,包括如下步骤:
S1、配制不同浓度的抗蚜威标准溶液,分别加入至粉碎后的空白食品样品中静置;然后采用水溶性DES进行提取,向得到的提取液中分别加入乙酰胆碱酯酶,培养后加入碘化乙酰硫代胆碱、pH缓冲液和硫掺杂碳量子点,再次进行恒温培养;测定不同浓度溶液的荧光值,以抗蚜威浓度为横坐标,以荧光强度为纵坐标,绘制标准曲线;
步骤S1中,所述水溶性DES为氯化胆碱与丁二醇的混合液;
S2、采用所述水溶性DES提取粉碎后的待测食品;
S3、取步骤S2得到的提取液后按步骤S1进行操作,得到体系的荧光强度;
S4、根据所述标准曲线和步骤S3测得的荧光强度,即得到待测食品中抗蚜威的含量。
2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于:步骤S1中,所述抗蚜威标准溶液添加至食品中后,所述抗蚜威的浓度为0.05~5mg/kg;
配置8种不同浓度的所述抗蚜威标准溶液;
所述静置的时间至少为20min。
3.根据权利要求1或2所述的方法,其特征在于:步骤S1中,所述氯化胆碱与所述丁二醇的摩尔比为1:1;
所述水溶性DES的用量为:1g待测食品:0.5~1mL所述水溶性DES。
4.根据权利要求1或2所述的方法,其特征在于:步骤S1中,所述提取液的用量50~100μL;
所述乙酰胆碱酯酶的活力为5~100mU/mL;
加入所述乙酰胆碱酯酶后,于37℃的条件下恒温培养40~60min。
5.根据权利要求1或2所述的方法,其特征在于:步骤S1中,所述碘化乙酰硫代胆碱以其水溶液的形式加入,所述浓度为0.5~5mmol/L;
所述pH缓冲液的pH值为6.6~7.4,为由磷酸二氢钠和磷酸氢二钠形成的缓冲液。
6.根据权利要求1或2所述的方法,其特征在于:步骤S1中,所述硫掺杂碳量子点由柠檬酸和硫化钠由水热法制备得到;
所述水热法的温度为160~200℃,时间为6~12h;
合成的硫掺杂碳量子点用量为50μL;
加入所述硫掺杂碳量子点后,于37℃的条件下培养30~50min。
7.根据权利要求1或2所述的方法,其特征在于:步骤S2中,采用酶标仪进行荧光检测;
在激发波长为325nm、发射波长为395nm的条件下进行检测。
8.根据权利要求1或2所述的方法,其特征在于:所述食品为大米、小麦、小米和/或燕麦。
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