CN113186106A - 一种杏鲍菇液体培养基及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种杏鲍菇液体培养基及其应用，所述杏鲍菇液体培养基的原料按质量份数配比如下：黄豆粉3份、酵母膏0.1份、葡萄糖3份、硫酸镁0.05份、硫酸铁0.01份、磷酸二氢钾0.05份、维生素B10.001份、水100份；本申请的杏鲍菇液体培养基培养出来的杏鲍菇菌丝干重、蛋白质含量、可溶性总糖、菌球回接平板生长速度以及菌球直径方面远远高于现有技术其他培养基。
Description
技术领域
本发明涉及液体培养基技术领域，尤其涉及一种杏鲍菇液体培养基及其应用。
背景技术
杏鲍菇的营养十分丰富，植物蛋白含量高达25％，含18种氨基酸和具有提高人体免疫力、防癌抗癌的多糖。同时，它含有大量的寡糖，它与胃肠中的双岐菌协同作用，具有很好的促进消化、吸收功能。
杏鲍菇菌肉肥厚，质地脆嫩，特别是菌柄组织致密、结实、乳白，可全部食用，且菌柄比菌盖更脆滑、爽口，被称为“平菇王”、“干贝菇”，具有愉快的杏仁香味及如鲍鱼的口感，适合保鲜、加工。
发明内容
本发明公开了一种杏鲍菇液体培养基及其应用，综合考虑菌丝干重、蛋白质含量、可溶性总糖、菌球回接平板生长速度以及菌球直径方面，为杏鲍菇工厂化栽培提供指导。
本发明提出的一种杏鲍菇液体培养基，所述杏鲍菇液体培养基的原料按质量份数配比如下：黄豆粉3份、酵母膏0.1份、葡萄糖3份、硫酸镁0.05份、硫酸铁0.01份、磷酸二氢钾0.05份、维生素B10.001份、水100份。
本发明还公开了一种杏鲍菇液体培养基在杏鲍菇培养中的应用。
进一步的，所述应用步骤为：
第一步，菌种活化：制备PDA平板培养基，在培养基中央加入一块0.5cm2大小的杏鲍菇斜面菌种，放入25±1℃的恒温培养箱中培养至菌丝布满或达到培养基2/3程度时，取出备用；
第二步，发酵培养基的制备与菌丝培养：按质量份数配比称取黄豆粉3份、酵母膏0.1份、葡萄糖3份、硫酸镁0.05份、硫酸铁0.01份、磷酸二氢钾0.05份、维生素B10.001份、水100份，同时做3个平行培养基，用250ml规格的锥形瓶，装液量为80ml，各接入0.5×1.5cm2的菌丝块，放入摇床中培养9天，温度为25±1℃，转速为150r/min；
第三步，蛋白质含量测定：在第7天的培养基中吸取15ml菌液，过筛得菌球，加入3mL蒸馏水并放入5g石英砂于冰水浴中研磨成匀浆，4℃离心15min，离心转速4000r/min，得到粗提液，利用考马斯亮蓝G-250染色法测定，利用牛血清白蛋白(Bovine serum albumin,BSA)制作标准曲线；
第四步，可溶性总糖含量测定：从粗提液取500μL再加入500μL蒸馏水，浸入冰水浴中冷却再加入4mL的蒽酮试剂，于沸水浴中煮沸10min，取出用自来水冷却后室温放置10min，进行比色，读取620nm处的吸光值，并利用标准葡萄糖溶液制作标准曲线；
第五步，菌丝生物量测定：待第9天培养结束后，用80目的筛网将培养好的菌球及培养基悬液过筛，收集菌球，用清水清洗3遍，抽滤并放入烘干箱55℃下烘干4h后取出，待冷却后，放入分析天平称重；
第六步，菌球回接生长速度以及菌球直径测量：待培养结束后，取单个菌球，接入PDA平板中，用直尺测量初始菌球直径，若形状不规则，按照从三个方向测量取平均值的方法，之后放置于恒温培养箱中培养2天，恒温培养箱温度为25±1℃，两天后按照同样的方法测定直径，算出生长速度。
进一步的，所述PDA培养基由马铃薯100g、葡萄糖10g、琼脂10g，加水至500ml制得。
进一步的，所述考马斯亮蓝G-250染色法测定具体步骤为取1mL粗提液，加入4mL考马斯亮蓝G-250染色液，震荡摇匀，室温放置3min后读取595nm处的吸光度值。
有益效果：
本发明提供的一种杏鲍菇液体培养基及其应用和现有技术相比具有以下优点：
1.本申请的杏鲍菇液体培养基培养出来的杏鲍菇菌丝干重、蛋白质含量、可溶性总糖、菌球回接平板生长速度以及菌球直径方面远远高于现有技术其他培养基。
附图说明
图1为本申请提供的杏鲍菇液体培养基蛋白质标准曲线图；
图2为本申请杏鲍菇液体培养基可溶性总糖标准曲线图。
具体实施方式
下面结合附图和具体实施例，进一步阐明本发明，应理解这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围，在阅读了本发明之后，本领域技术人员对本发明的各种等价形式的修改均落于本申请所附权利要求所限定的范围。
对比例1
杏鲍菇液体培养材料：葡萄糖3％、玉米面2.5％、麦麸2％、酵母膏0.5％，KH2PO40.3％、MgSO40.2％；
对比例2
杏鲍菇液体培养材料：玉米面3％，蛋白胨0.5％，葡萄糖2％，KH2PO40.15％，MgSO40.1％，p H 6.0～6.5；
对比例3
杏鲍菇液体培养材料：马铃薯100g/L，麦麸30g/L，蔗糖27g/L，蛋白胨1.40g/L，KH2PO40.85g/L，MgSO41 g/L；
对比例4
杏鲍菇液体培养材料：黄豆饼粉60g/L、葡萄糖20g/L、KH2PO40.5 g/L、MgSO40.5 g/L、VB10.01 g/L、蛋白胨3g/L；
对比例5
杏鲍菇液体培养材料：葡萄糖60g/L，蛋白胨5g/L，黄豆饼粉60g/L，KH2PO40.5g/L，MgSO40.5g/L，维生素B10.01g/L；
对比例6
杏鲍菇液体培养材料：葡萄糖10g/L，蛋白胨5g/L，黄豆饼粉60g/L，KH2PO40.5g/L，MgSO40.5g/L，VB10.01g/L；
对比例7
杏鲍菇液体培养材料：红糖或白砂糖3％，豆饼粉0.5％，KH2PO40.15％，MgSO40.1％，pH自然；
对比例8
杏鲍菇液体培养材料：葡萄糖2％,蛋白胨0.25％,酵母膏0.25％,氯化锰0.1％,KH2PO40.1％,MgSO40.1％,水1000ml,pH自然。
实施例1
一种杏鲍菇液体培养基及其应用，所述杏鲍菇液体培养基的原料按质量份数配比如下：黄豆粉3份、酵母膏0.1份、葡萄糖3份、硫酸镁0.05份、硫酸铁0.01份、磷酸二氢钾0.05份、维生素B10.001份、水100份。
PDA培养基：马铃薯100g，葡萄糖10g，琼脂10g，加水至500ml(pH自然)。
杏鲍菇液体培养基应用实验方法：
第一步，菌种活化：制备PDA平板培养基,在培养基中央加入一块0.5cm2大小的杏鲍菇斜面菌种，放入恒温培养箱中培养(25±1℃)至菌丝布满或达到培养基2/3程度时，取出备用；
第二步，发酵培养基的制备与菌丝培养：按照上述对比例1-对比例8和实施例1的培养基配方，每个培养基配方做3个平行。用250ml规格的锥形瓶，装液量为80ml，各接入0.5×1.5cm2的菌丝块，放入摇床中培养9天，温度为25±1℃，转速为150r/min；
第三步，菌丝生物量测定：待第9天培养结束后，用80目的筛网将培养好的菌球及培养基悬液过筛，收集菌球，用清水清洗3遍，抽滤并放入烘干箱55℃，4h后取出，待冷却后，放入分析天平称重；
第四步，蛋白质含量测定：在第7天的培养基中吸取15ml菌液，过筛得菌球，加入3mL蒸馏水并放入5g石英砂于冰水浴中研磨成匀浆，4℃离心15min，4000r/min，得到粗提液。利用考马斯亮蓝G-250染色法测定。取1mL粗提液，加入4mL考马斯亮蓝G-250染色液，震荡摇匀，室温放置3min后读取595nm处的吸光度值。利用牛血清白蛋白(Bovine serum albumin,BSA)制作标准曲线；
第五步，可溶性总糖含量测定：从上述步骤中所得的粗提液取500μL再加入500μL蒸馏水，浸入冰水浴中冷却再加入4mL的蒽酮试剂,于沸水浴中煮沸10min，取出用自来水冷却后室温放置10min，进行比色，读取620nm处的吸光值。并利用标准葡萄糖溶液制作标准曲线；
第六步，菌球回接生长速度以及菌球直径测量：回接速度：待培养结束后，随机抽取各个培养基的单个菌球，接入PDA平板中，用直尺测量初始菌球直径，若形状不规则，按照从三个方向测量取平均值的方法，之后放置于恒温培养箱中培养2天，25±1℃。两天后按照同样的方法测定直径，算出生长速度。
菌球直径：量取培养好的菌液5mL，置于空培养基中，必要时稀释，将菌球排成直线并测定长度，进行比较。
结果分析：蛋白质标准曲线与可溶性总糖标准曲线如图1和图2所示。R2均为0.99以上，可以作为蛋白质和可溶性糖的测定的标准曲线。
数据总结：
对于液体杏鲍菇菌种来说，菌丝的干重代表着菌种的品质越好；菌球的密度也就是菌球总直径越大，表示菌种的流动性越强，接种后越容易分散，发散点也就越多；菌球回接平板后速度越快，说明该菌种的活性就越强，越有利于后期的工厂生产；而蛋白质含量以及可溶性总糖含量，彰显了该菌种所含的营养成分的多少。综合考虑诸多因素，得出结论：实施例1培养基为杏鲍菇液体菌种培养的最优培养基,菌种品质适当，流动性好，发散性强，菌种活性大。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
Claims (5)
1.一种杏鲍菇液体培养基，其特征在于，所述杏鲍菇液体培养基的原料按质量份数配比如下：黄豆粉 3 份、酵母膏 0.1 份、葡萄糖 3 份、硫酸镁 0.05 份、硫酸铁 0. 01 份、磷酸二氢钾 0.05份、维生素 B1 0.001 份、水100份。
2.一种杏鲍菇液体培养基在杏鲍菇培养中的应用。
3.根据权利要求2所述的杏鲍菇液体培养基在杏鲍菇培养中的应用，其特征在于，所述应用步骤为：
第一步，菌种活化：制备PDA平板培养基，在培养基中央加入一块0.5cm2的杏鲍菇斜面菌种，放入25±1℃的恒温培养箱中培养至菌丝布满或达到培养基2/3程度时，取出备用；
第二步，发酵培养基的制备与菌丝培养：按质量份数配比称取黄豆粉 3 份、酵母膏0.1 份、葡萄糖 3 份、硫酸镁 0.05 份、硫酸铁 0. 01 份、磷酸二氢钾 0.05份、维生素 B10.001 份、水100份，同时做3个平行培养基，用250ml规格的锥形瓶，装液量为80ml，各接入0.5×1.5 cm2的菌丝块，放入摇床中培养9天，温度为25±1℃，转速为150r/min；
第三步，蛋白质含量测定：在第7天的培养基中吸取15ml菌液，过筛得菌球，加入 3 m L蒸馏水并放入5g石英砂于冰水浴中研磨成匀浆，4℃离心15 min，离心转速4000r/min，得到粗提液，利用考马斯亮蓝 G-250 染色法测定，利用牛血清白蛋白（Bovine serum albumin,BSA）制作标准曲线；
第四步，可溶性总糖含量测定：从粗提液取500μL再加入500μL蒸馏水，浸入冰水浴中冷却再加入4 mL的蒽酮试剂，于沸水浴中煮沸10 min，取出用自来水冷却后室温放置10 min，进行比色，读取620 nm 处的吸光值，并利用标准葡萄糖溶液制作标准曲线；
第五步，菌丝生物量测定：待第9天培养结束后，用80目的筛网将培养好的菌球及培养基悬液过筛，收集菌球，用清水清洗3遍，抽滤并放入烘干箱55℃下烘干4h后取出，待冷却后，放入分析天平称重；
第六步，菌球回接生长速度以及菌球直径测量：待培养结束后，取单个菌球，接入PDA平板中，用直尺测量初始菌球直径，若形状不规则，按照从三个方向测量取平均值的方法，之后放置于恒温培养箱中培养2天，恒温培养箱温度为25±1℃，两天后按照同样的方法测定直径，算出生长速度。
4.根据权利要求3所述的杏鲍菇液体培养基在杏鲍菇培养中的应用，其特征在于：所述PDA培养基由马铃薯100g、葡萄糖10g、琼脂10g，加水至500ml制得。
5.根据权利要求3所述的杏鲍菇液体培养基在杏鲍菇培养中的应用，其特征在于：所述考马斯亮蓝 G-250 染色法测定具体步骤为取 1 mL 粗提液，加入 4 mL 考马斯亮蓝 G-250 染色液，震荡摇匀，室温放置 3 min 后读取 595 nm 处的吸光度值。
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