CN110894473B - 一种复合型食用菌发酵培养基组合物及其发酵方法与菌粉制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种复合型食用菌发酵培养基组合物及其发酵方法与菌粉制备方法，属于生物技术领域。第一方面，本发明提供一种猴头菇、蛹虫草菌、松露菌复合型菌丝体液体发酵培养基组合物，菌丝体液体发酵培养基组合物包括蛋白胨、葡萄糖、马铃薯粉、磷酸二氢钾、硫酸镁，还包括花生粉；第二方面，本发明提供猴头菇、蛹虫草菌、松露菌复合型菌丝体液体发酵方法；第三方面，本发明还提供一种猴头菇、蛹虫草菌、松露菌复合型菌丝体多糖制备方法。利用本发明猴头菇、蛹虫草菌、松露菌复合型菌丝体液体发酵培养基组合物进行液体发酵得到的猴头菇、蛹虫草菌、松露菌复合型菌丝体产量、多糖含量、多糖纯度与现有技术相比，均有显著提高。
Description
技术领域
本发明涉及生物技术领域，具体而言，涉及一种复合型食用菌发酵培养基组合物及其发酵方法与菌粉制备方法。
背景技术
猴头菇，又叫猴头菌，只因外形酷似猴头而得名。猴蘑，猴头，猴菇，是中国传统的名贵菜肴，肉嫩、味香、鲜美可口。是四大名菜(猴头、熊掌、燕窝、鱼翅)之一。有“山珍猴头、海味鱼翅”之称。这种齿菌科的菌类，菌伞表面长有毛茸状肉刺，长约1～3厘米，它的子实体圆而厚，新鲜时白色，干后由浅黄至浅褐色，基部狭窄或略有短柄，上部膨大，直径3.5～10厘米，远远望去似金丝猴头，故称“猴头菇”，又像刺猬，故又有“刺猬菌”之称。猴头菌是鲜美无比的山珍，菌肉鲜嫩，香醇可口，有“素中荤”之称。
作为食用菌王国的珍品,猴头菇属于药食两用真菌,尤其是其医药方面的药用价值，受到广大消费者的青睐，具有健脾养胃、安神、抗癌的功效,对体虚乏力、消化不良、失眠、胃与十二指肠溃疡、慢性胃炎、消化道肿瘤等症有特效。
蛹虫草为子囊菌门，肉座目，麦角菌科、虫草属的模式种。学名为Cordycepsmilitaris(L.exFr.)Link.蛹虫草，又叫北冬虫夏草，北虫草，简称蛹草，一般把活体虫蛹培养的北虫草称为蛹虫草，两者是同种真菌，但在营养成分上含量相差较大。
蛹虫草世界性分布，天然资源数量很少。1950年，德国科学家Cunningham观察到被蛹虫草寄生的昆虫组织不易腐烂，进而从中分离出一种抗菌性物质，3'-脱氧腺苷，定名为虫草素。蛹虫草，多感染鳞翅目昆虫的蛹，由子座(即草部分，又称子实体)与菌核(即昆虫的尸体部分)两部分组成的复合体，简单来说，就是虫体与草的结合。中医认为，既能补肺阴，又能补肾阳，主治肾虚，阳痿遗精，腰膝酸痛，病后虚弱，久咳虚弱，劳咳痰血，自汗盗汗等，是一种能同时平衡、调节阴阳的中药。
松露菌，是一种主要生长在橡树、松树、榛树、栎树根部底下，一年生的天然蕈菇，种类约有三十多种，其中以白松露、黑松露最为珍贵。通常外观均是不规则球状，切开来看，里面则是犹如迷宫般的大理石纹路。松露对于生长环境非常挑剔，只要阳光，水量或土壤的酸碱值稍有变化就无法生长，这也是为何松露如此稀有并且价格不菲的缘故。我国四川攀枝花被称“松露之乡”，攀西地区以会东县、会理县和攀枝花产量最以多。周边地区也有，云南永仁县也多。块菌主要生在海拔2000～3000米的山林。黑块菌长在云南松(长毛松)和华山松(嗑松)林里，在沙性透气，凉爽、松软潮湿，松针松皮的腐殖土里，松树根边；白块菌爱长在栗木树林里。
松露菌英文叫Truffle，法语Truffe，德国人称Truffel，日本人称之为西洋松露(シヨウロ)，在中国称为“块菌”。一般意大利、法国出产的松露菌生长在橡木或榉树的根部，而中国松露则大多生长在松树下，因此中文得名“松露”。
白松露在欧美，与鹅肝酱和鱼子酱同称为三大珍品美食，被欧洲人誉为"餐桌上的钻石"。
现代研究表明，猴头菇、蛹虫草菌、松露菌复合型菌丝体中多糖的含量高于猴头菇、蛹虫草菌、松露菌子实体，从猴头菇、蛹虫草菌、松露菌复合型菌丝体中提取多糖，具有菌丝体生长速度快，发酵步骤简单、易于控制等优点，从菌丝体中提取多糖可以缩短生产时间、提高生产效率。
鉴于此，本发明提供一种生产猴头菇、蛹虫草菌、松露菌复合型菌丝体发酵培养基组合物及其发酵方法与多糖制备方法。
发明内容
本发明的目的在于提供一种复合型食用菌发酵培养基组合物及其发酵方法与菌粉制备方法。
为了实现本发明的上述目的，特采用以下技术方案：
第一方面，本发明提供一种猴头菇、蛹虫草菌、松露菌复合型菌丝体液体发酵培养基组合物，菌丝体液体发酵培养基组合物包括蛋白胨、葡萄糖、马铃薯粉、磷酸二氢钾、硫酸镁。
进一步地，在本发明较佳的实施例中，按重量份数计，蛋白胨为5～15份、葡萄糖20～30份、马铃薯粉为6～16份、磷酸二氢钾0.3～1份、硫酸镁为0.3～1份。
进一步地，在本发明较佳的实施例中，按重量份数计，菌丝体液体发酵培养基组合物还包括花生粉。
进一步地，在本发明较佳的实施例中，按重量份数计，蛋白胨为8～12份、葡萄糖23～27份、马铃薯粉为9～11份、磷酸二氢钾0.3～1份、硫酸镁为0.3～1份和花生粉为6～10份。
进一步地，在本发明较佳的实施例中，按重量份数计，蛋白胨为10份、葡萄糖25份、马铃薯粉为10份、磷酸二氢钾0.7份、硫酸镁为0.7份、花生粉为8份。
第二方面，本发明提供一种猴头菇、蛹虫草菌、松露菌复合型菌丝体液体发酵方法，其包括：
猴头菇、蛹虫草菌、松露菌复合型菌丝体液体发酵培养基中蛋白胨5～15g/L、葡萄糖20～30g/L、马铃薯粉为6～16g/L、磷酸二氢钾0.3～1g/L、硫酸镁为0.3～1g/L，加蒸馏水补充到规定量，pH6.2～6.8，121℃灭菌15～30min后冷却制得液体培养基，将猴头菇、蛹虫草菌、松露菌母种先后按常规接种后进行液体发酵，温度25～27℃，通风并搅拌，发酵时间6～10d，将培养好的发酵液过滤或离心3500～8000rpm处理，收集菌丝体，经过洗涤、干燥得到猴头菇、蛹虫草菌、松露菌复合型菌丝体。
进一步地，猴头菇、蛹虫草菌、松露菌复合型菌丝体液体发酵培养基中所述蛋白胨为8～12g/L、葡萄糖23～27g/L、马铃薯粉为9～11g/L、磷酸二氢钾0.3～1g/L、硫酸镁为0.3～1g/L和花生粉为6～10g/L，加蒸馏水补充到规定量，pH6.2～6.8，121℃灭菌15～30min后冷却制得液体培养基，将猴头菇、蛹虫草菌、松露菌母种先后按常规接种后进行液体发酵，温度26℃，通风并搅拌，发酵时间8d，将培养好的发酵液离心4000rpm处理，收集菌丝体，经过洗涤、干燥得到猴头菇、蛹虫草菌、松露菌复合型菌丝体。
进一步地，在本发明较佳的实施例中，猴头菇、蛹虫草菌、松露菌复合型菌丝体液体发酵培养基中所述蛋白胨为10g/L、葡萄糖25g/L、马铃薯粉为10g/L、磷酸二氢钾0.7g/L、硫酸镁为0.7g/L和花生粉为8g/L，加蒸馏水补充到规定量，pH6.2～6.8，121℃灭菌15～30min后冷却制得液体培养基，将猴头菇、蛹虫草菌、松露菌母种先后按常规接种后进行液体发酵，温度26℃，通风并搅拌，发酵时间8d，将培养好的发酵液离心4000rpm处理，收集菌丝体，经过洗涤、干燥得到猴头菇、蛹虫草菌、松露菌复合型菌丝体。
第三方面，本发明还提供猴头菇、蛹虫草菌、松露菌复合型菌丝体多糖制备方法，其包括：常规方法粉碎后，菌丝体粉末与水以1﹕13～1﹕23的比例混合，调节pH值为7～9，水浴85～98℃，搅拌提取3～5h，4000rpm离心取上清液；浓缩所得上清液至原来体积的10～20％，加入30～35％的乙醇，4000rpm离心并收集上清液；离心后的菌丝体残渣按上述提取步骤再提取1～2次，合并上清液；上清液经过浓缩干燥得多糖。
进一步地，在本发明较佳的实施例中，常规方法粉碎后，菌丝体粉末与水以1﹕18的比例混合，水浴为90℃，乙醇浓度为33％。
本发明中液体发酵所用猴头菇、蛹虫草菌、松露菌母种按常规方法制备。
与现有技术相比，本发明的有益效果包括：
猴头菇、蛹虫草菌、松露菌的菌丝体干重、多糖量、多糖纯度与现有技术相比，均有显著提高。
具体实施方式
下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限制本发明的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
以下结合实施例对本发明的特征和性能作进一步的详细描述：
实施例1
猴头菇、蛹虫草菌、松露菌复合型菌丝体液体发酵培养基中蛋白胨5g/L、葡萄糖30g/L、马铃薯粉6g/L、磷酸二氢钾1g/L、硫酸镁0.3g/L，加蒸馏水补充到规定量，pH6.8，121℃灭菌30min后冷却。
将猴头菇、蛹虫草菌、松露菌母种先后按常规接种后进行液体发酵，温度27℃，通风并搅拌，发酵时间6d，将培养好的发酵液离心6000rpm处理，收集菌丝体，经过洗涤、干燥得到猴头菇、蛹虫草菌、松露菌复合型菌丝体。
常规方法粉碎后，菌丝体粉末与水以1﹕13的比例混合，调节pH值为9，水浴85℃，搅拌提取5h，4000rpm离心取上清液；浓缩所得上清液至原来体积的20％，加入30％的乙醇，4000rpm离心并收集上清液；离心后的菌丝体残渣按上述提取步骤再提取2次，合并上清液；上清液经过浓缩干燥得多糖。
实施例2
猴头菇、蛹虫草菌、松露菌复合型菌丝体液体发酵培养基中蛋白胨15g/L、葡萄糖20g/L、马铃薯粉为16g/L、磷酸二氢钾0.3g/L、硫酸镁为1g/L，加蒸馏水补充到规定量，pH6.2，121℃灭菌15min后冷却。
将猴头菇、蛹虫草菌、松露菌母种先后按常规接种后进行液体发酵，温度25℃，通风并搅拌，发酵时间10d，将培养好的发酵液用60kg的压力进行板框压滤，收集菌丝体，经过洗涤、干燥得到猴头菇、蛹虫草菌、松露菌复合型菌丝体。
常规方法粉碎后，菌丝体粉末与水以1﹕23的比例混合，调节pH值为7，水浴98℃，搅拌提取3h，4000rpm离心取上清液；浓缩所得上清液至原来体积的10％，加入35％的乙醇，4000rpm离心并收集上清液；离心后的菌丝体残渣按上述提取步骤再提取1次，合并上清液；上清液经过浓缩干燥得多糖。
实施例3
猴头菇、蛹虫草菌、松露菌复合型菌丝体液体发酵培养基中蛋白胨为8g/L、葡萄糖27g/L、马铃薯粉为9g/L、磷酸二氢钾1g/L、硫酸镁为0.3g/L和花生粉为6g/L，加蒸馏水补充到规定量，pH6.8，121℃灭菌20min后冷却。
将猴头菇、蛹虫草菌、松露菌母种先后按常规接种后进行液体发酵，温度25℃，通风并搅拌，发酵时间10d，将培养好的发酵液离心2800rpm处理，收集菌丝体，经过洗涤、干燥得到猴头菇、蛹虫草菌、松露菌复合型菌丝体。
常规方法粉碎后，菌丝体粉末与水以1﹕13的比例混合，调节pH值为9，水浴85℃，搅拌提取5h，4000rpm离心取上清液；浓缩所得上清液至原来体积的20％，加入30％的乙醇，4000rpm离心并收集上清液；离心后的菌丝体残渣按上述提取步骤再提取2次，合并上清液；上清液经过浓缩干燥得多糖。
实施例4
猴头菇、蛹虫草菌、松露菌复合型菌丝体液体发酵培养基中蛋白胨为12g/L、葡萄糖23g/L、马铃薯粉为11g/L、磷酸二氢钾0.3g/L、硫酸镁为1g/L和花生粉为10g/L，加蒸馏水补充到规定量，pH6.5，121℃灭菌20min后冷却。
将猴头菇、蛹虫草菌、松露菌母种先后按常规接种后进行液体发酵，温度26℃，通风并搅拌，发酵时间8d，将培养好的发酵液离心3000rpm处理，收集菌丝体，经过洗涤、干燥得到猴头菇、蛹虫草菌、松露菌复合型菌丝体。
常规方法粉碎后，菌丝体粉末与水以1﹕23的比例混合，调节pH值为7，水浴98℃，搅拌提取3h，4000rpm离心取上清液；浓缩所得上清液至原来体积的10％，加入35％的乙醇，4000rpm离心并收集上清液；离心后的菌丝体残渣按上述提取步骤再提取1次，合并上清液；上清液经过浓缩干燥得多糖。
实施例5
猴头菇、蛹虫草菌、松露菌复合型菌丝体液体发酵培养基中蛋白胨为10g/L、葡萄糖25g/L、马铃薯粉为10g/L、磷酸二氢钾0.7g/L、硫酸镁为0.7g/L和花生粉为8g/L，加蒸馏水补充到规定量，pH6.5，121℃灭菌25min后冷却。
将猴头菇、蛹虫草菌、松露菌母种先后按常规接种后进行液体发酵，温度26℃，通风并搅拌，发酵时间8d，将培养好的发酵液离心4000rpm处理，收集菌丝体，经过洗涤、干燥得到猴头菇、蛹虫草菌、松露菌复合型菌丝体。
常规方法粉碎后，菌丝体粉末与水以1﹕18的比例混合，调节pH值为8，水浴90℃，搅拌提取4h，4000rpm离心取上清液；浓缩所得上清液至原来体积的15％，加入33％的乙醇，4000rpm离心并收集上清液；离心后的菌丝体残渣按上述提取步骤再提取1次，合并上清液；上清液经过浓缩干燥得多糖。
对比例1
猴头菇菌丝体液体发酵培养基中蛋白胨为10g/L、葡萄糖25g/L、马铃薯粉为10g/L、磷酸二氢钾0.7g/L、硫酸镁为0.7g/L和花生粉为8g/L，加蒸馏水补充到规定量，pH6.5，121℃灭菌25min后冷却。
将猴头菇母种按常规接种后进行液体发酵，温度26℃，通风并搅拌，发酵时间8d，将培养好的发酵液离心4000rpm处理，收集菌丝体，经过洗涤、干燥得到猴头菇菌丝体。
常规方法粉碎后，菌丝体粉末与水以1﹕18的比例混合，调节pH值为8，水浴90℃，搅拌提取4h，4000rpm离心取上清液；浓缩所得上清液至原来体积的15％，加入33％的乙醇，4000rpm离心并收集上清液；离心后的菌丝体残渣按上述提取步骤再提取1次，合并上清液；上清液经过浓缩干燥得多糖。
对比例2
蛹虫草菌丝体液体发酵培养基中蛋白胨为10g/L、葡萄糖25g/L、马铃薯粉为10g/L、磷酸二氢钾0.7g/L、硫酸镁为0.7g/L和花生粉为8g/L，加蒸馏水补充到规定量，pH6.5，121℃灭菌25min后冷却。
将蛹虫草菌母种先后按常规接种后进行液体发酵，温度26℃，通风并搅拌，发酵时间8d，将培养好的发酵液离心4000rpm处理，收集菌丝体，经过洗涤、干燥得到蛹虫草菌丝体。
常规方法粉碎后，菌丝体粉末与水以1﹕18的比例混合，调节pH值为8，水浴90℃，搅拌提取4h，4000rpm离心取上清液；浓缩所得上清液至原来体积的15％，加入33％的乙醇，4000rpm离心并收集上清液；离心后的菌丝体残渣按上述提取步骤再提取1次，合并上清液；上清液经过浓缩干燥得多糖。
对比例3
松露菌丝体液体发酵培养基中蛋白胨为10g/L、葡萄糖25g/L、马铃薯粉为10g/L、磷酸二氢钾0.7g/L、硫酸镁为0.7g/L和花生粉为8g/L，加蒸馏水补充到规定量，pH6.5，121℃灭菌25min后冷却。
将松露菌母种按常规接种后进行液体发酵，温度26℃，通风并搅拌，发酵时间8d，将培养好的发酵液离心4000rpm处理，收集菌丝体，经过洗涤、干燥得到、松露菌丝体。
常规方法粉碎后，菌丝体粉末与水以1﹕18的比例混合，调节pH值为8，水浴90℃，搅拌提取4h，4000rpm离心取上清液；浓缩所得上清液至原来体积的15％，加入33％的乙醇，4000rpm离心并收集上清液；离心后的菌丝体残渣按上述提取步骤再提取1次，合并上清液；上清液经过浓缩干燥得多糖。
本发明的有益效果如下表：
| 菌丝体干重(g/L) | 多糖量(g/L) | 多糖纯度(％) | |
| 实施例1 | 21.5 | 12.6 | 51.5 |
| 实施例2 | 21.7 | 13.9 | 51.9 |
| 实施例3 | 23.2 | 13.6 | 53.0 |
| 实施例4 | 23.9 | 15.0 | 53.2 |
| 实施例5 | 25.2 | 15.9 | 56.1 |
| 对比例1 | 16.7 | 11.5 | 50.2 |
| 对比例2 | 17.5 | 10.3 | 46.8 |
| 对比例3 | 15.9 | 11.1 | 49.6 |
从上表可以看出，本发明实施例1～5中利用本发明猴头菇、蛹虫草菌、松露菌复合型菌丝体液体发酵培养基组合物进行液体发酵得到的猴头菇、蛹虫草菌、松露菌复合型菌丝体产量、多糖含量、多糖纯度与现有技术对比例1～3相比，均有显著提高。
本发明中未详细说明的环节均为本领域普通技术人员可自行选择的公知常识。虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域普通技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。
Claims (9)
1.一种猴头菇、蛹虫草菌、松露菌复合型菌丝体液体发酵方法，其特征在于，将包括蛋白胨、葡萄糖、马铃薯粉、磷酸二氢钾、硫酸镁的菌丝体液体发酵培养基组合物加蒸馏水补充到规定量，pH6.2～6.8，121℃灭菌15～30min后冷却制得液体培养基，将猴头菇、蛹虫草菌、松露菌母种接种至所述的液体培养基中，进行液体发酵，温度25～27℃，通风并搅拌，发酵时间6～10d，将培养好的发酵液过滤或离心3500～8000rpm处理，收集菌丝体，经过洗涤、干燥得到猴头菇、蛹虫草菌、松露菌复合型菌丝体。
2.根据权利要求1所述的菌丝体液体发酵方法，其特征在于，所述菌丝体液体发酵培养基组合物还包括花生粉。
3.根据权利要求1所述的菌丝体液体发酵方法，其特征在于，按重量份数计，所述蛋白胨为5～15份、所述葡萄糖20～30份、所述马铃薯粉为6～16份、所述磷酸二氢钾0.3～1份和所述硫酸镁为0.3～1份。
4.根据权利要求2所述的菌丝体液体发酵方法，其特征在于，按重量份数计，所述蛋白胨为8～12份、所述葡萄糖23～27份、所述马铃薯粉为9～11份、所述磷酸二氢钾0.3～1份、所述硫酸镁为0.3～1份和所述花生粉为6～10份。
5.根据权利要求2所述的菌丝体液体发酵方法，其特征在于，按重量份数计，所述蛋白胨为10份、所述葡萄糖25份、所述马铃薯粉为10份、所述磷酸二氢钾0.7份、所述硫酸镁为0.7份和所述花生粉为8份。
6.根据权利要求5所述的发酵方法，其特征在于，所述液体发酵温度为26℃，所述发酵时间为8d，所述发酵液离心速度为4000rpm。
7.一种猴头菇、蛹虫草菌、松露菌复合型菌丝体多糖制备方法，其特征在于，将如权利要求1～5所述的猴头菇、蛹虫草菌、松露菌复合型菌丝体粉碎得到菌丝体粉末；常规方法粉碎后，菌丝体粉末与水以1﹕13～1﹕23的比例混合，调节pH值为7～9，水浴85～98℃，搅拌提取3～5h，4000rpm离心取上清液；浓缩所得上清液至原来体积的10～20％，加入30～35％的乙醇，4000rpm离心并收集上清液；离心后的菌丝体残渣按上述提取步骤再提取1～2次，合并上清液；上清液经过浓缩干燥得多糖。
8.根据权利要求7所述的猴头菇、蛹虫草菌、松露菌复合型菌丝体多糖制备方法，其特征在于，所述常规方法粉碎后，菌丝体粉末与水以1﹕18的比例混合。
9.根据权利要求7所述的猴头菇、蛹虫草菌、松露菌复合型菌丝体多糖制备方法，其特征在于，所述水浴为90℃，所述乙醇浓度为33％。
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