CN113122607A - 一种新型cck8细胞活力检测试剂盒及其应用 - Google Patents

一种新型cck8细胞活力检测试剂盒及其应用 Download PDF

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Abstract

本发明提供一种CCK8检测试剂盒及其应用，所述CCK8检测试剂盒包括添加因子一和添加因子二；所述添加因子一包括以下终浓度的组分：透明质酸酶0.5‑1mg/mL，EDTA 0.1‑0.5mg/mL，盐酸0.02‑0.05mol/L；所述添加因子二包括以下终浓度的组分：wst‑8 0.08‑0.2mg/mL，1‑Methoxy PMS0.05‑0.3mg/mL，钙盐0.1‑0.5mg/mL；所述添加因子一和所述添加因子二的溶剂均为无菌水。该试剂盒应用在类器官药敏活力检测中，反应时间短，准确性和重复性方面优于一般的CCK8药敏检测方法。

Description

一种新型CCK8细胞活力检测试剂盒及其应用
技术领域
本发明属于生物医药技术领域，具体涉及一种CCK8检测试剂盒及其应用。
背景技术
CCK8法是一种常见的检测方法，其检测原理为活细胞中的琥珀酸脱氢酶与WST–8进行反应生成黄色甲臜产物，它是一种高度水溶性黄色甲臜染料，黄色甲臜染料的数量与活细胞成正比，因此可以反映活细胞数量。
一般的CCK8检测试剂盒只能作用于2D细胞，可以实现快速检测，且稳定准确，但是在3D类器官上却表现出反应不完全，反应时间长等现象，且药敏结果也呈现重复性及稳定性较差的情况，因此，亟待开发一种可以用于类器官的CCK8药敏检测试剂盒，以实现类器官药敏活力的快速、稳定、准确地检测。
发明内容
有鉴于此，本发明旨在提供一种CCK8检测试剂盒及其应用以解决上述问题。本发明的技术方案为：
第一个方面，本发明提供一种CCK8检测试剂盒，包括添加因子一和添加因子二；所述添加因子一包括以下终浓度的组分：透明质酸酶0.5-1mg/mL，EDTA0.1-0.5mg/mL，盐酸0.02-0.05mol/L；所述添加因子二包括以下终浓度的组分：wst-8 0.08-0.2mg/mL，1-Methoxy PMS0.05-0.3mg/mL，钙盐0.1-0.5mg/mL；所述添加因子一和所述添加因子二的溶剂均为无菌水。
进一步地，所述添加因子一的制备及保存方法为：按照组分的终浓度配料，将透明质酸酶、EDTA和盐酸混合均匀并溶解后，0.22μm滤膜过滤，于-20℃保存。
进一步地，所述添加因子二的制备及保存方法为：按照组分的终浓度配料，将wst-8、1-Methoxy PMS、钙盐和无菌水混合均匀并溶解后，0.22μm滤膜过滤，于-20℃保存。
进一步地，所述钙盐包括氯化钙、硝酸钙、硫酸钙、磷酸钙中的至少一种。
优选地，所述钙盐为氯化钙。
第二个方面，本发明提供上述CCK8检测试剂盒在类器官药敏活力检测中的应用。
第三个方面，本发明提供一种类器官药敏活力检测方法，包括：
(1)将类器官样本接种于孔板中，培养48-72h后进行药物接触；
(2)加药96h后在孔板中加入添加因子一继续培养20～30min；
(3)继续在孔板中加入添加因子二培养2-4h，于450nm进行活力检测。
本发明提供了一种新的CCK8检测试剂盒及药敏检测方法，与传统CCK8检测方法相比，具有以下几个优点：。
1、本发明在类器官药敏实验上的反应时间短，更快速。
2、本发明在类器官药敏实验的准确性方面优于一般的CCK8药敏检测方法。
3、本发明在类器官药敏实验的重复性方面优于一般的CCK8药敏检测方法。
附图说明
图1为本发明实施例6的人肺癌类器官细胞活力随来那替尼药物浓度变化的曲线图。
图2为本发明实施例7的人肠癌类器官细胞活力随瑞戈非尼药物浓度变化的曲线图。
图3为本发明实施例8的人乳腺癌类器官细胞活力随阿法替尼药物浓度变化的曲线图。
图4为本发明实施例9的人卵巢癌类器官细胞活力随奥拉帕利药物浓度变化的曲线图。
图5为本发明实施例10的人胃癌类器官细胞活力随伊立替康药物浓度变化的曲线图。
图6为本发明对比例1的人肺癌类器官细胞活力随来那替尼药物浓度变化的曲线图。
图7为本发明对比例2的人肠癌类器官细胞活力随瑞戈非尼药物浓度变化的曲线图。
图8为本发明对比例3的人乳腺癌类器官细胞活力随阿法替尼药物浓度变化的曲线图。
图9为本发明对比例4的人卵巢癌类器官细胞活力随奥拉帕利药物浓度变化的曲线图。
图10为本发明对比例5的人胃癌类器官细胞活力随伊立替康药物浓度变化的曲线图。
图11为本发明对比例6的人肠癌类器官细胞活力随瑞戈非尼药物浓度变化的曲线图。
图12为本发明对比例7的人乳腺癌类器官细胞活力随阿法替尼药物浓度变化的曲线图。
图13为本发明对比例8的人卵巢癌类器官细胞活力随依托泊苷药物浓度变化的曲线图。
具体实施方式
本发明实施例采用的传统CCK8检测试剂盒购自碧云天生物技术有限公司，货号为C0039。
在本发明的描述中，需要说明的是，实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
下面结合附图和具体的实施例对本发明做进一步详细说明，所述是对本发明的解释而不是限定。
实施例1
本实施例提供一种CCK8检测试剂盒，包括添加因子一和添加因子二；所述添加因子一包括以下终浓度的组分：透明质酸酶0.5mg/mL，EDTA 0.1mg/mL，盐酸0.02mol/L；所述添加因子二包括以下终浓度的组分：wst-8 0.08mg/mL，1-Methoxy PMS 0.05mg/mL，氯化钙0.1mg/mL；所述添加因子一和所述添加因子二的溶剂均为无菌水。所述添加因子一的制备及保存方法为：按照组分的终浓度配料，将透明质酸酶、EDTA和盐酸混合均匀并溶解后，0.22μm滤膜过滤，于-20℃保存。所述添加因子二的制备及保存方法为：按照组分的终浓度配料，将wst-8、1-Methoxy PMS、氯化钙和无菌水混合均匀并溶解后，0.22μm滤膜过滤，于-20℃保存。
实施例2
本实施例提供一种CCK8检测试剂盒，包括添加因子一和添加因子二；所述添加因子一包括以下终浓度的组分：透明质酸酶0.6mg/mL，EDTA 0.2mg/mL，盐酸0.02mol/L；所述添加因子二包括以下终浓度的组分：wst-8 0.10mg/mL，1-Methoxy PMS 0.1mg/mL，氯化钙0.2mg/mL；所述添加因子一和所述添加因子二的溶剂均为无菌水。所述添加因子一和所述添加因子二的制备及保存方法同实施例1。
实施例3
本实施例提供一种CCK8检测试剂盒，包括添加因子一和添加因子二；所述添加因子一包括以下终浓度的组分：透明质酸酶0.7mg/mL，EDTA 0.3mg/mL，盐酸0.02mol/L；所述添加因子二包括以下终浓度的组分：wst-8 0.12mg/mL，1-Methoxy PMS 0.15mg/mL，磷酸钙0.3mg/mL；所述添加因子一和所述添加因子二的溶剂均为无菌水。所述添加因子一和所述添加因子二的制备及保存方法同实施例1。
实施例4
本实施例提供一种CCK8检测试剂盒，包括添加因子一和添加因子二；所述添加因子一包括以下终浓度的组分：透明质酸酶0.8mg/mL，EDTA 0.4mg/mL，盐酸0.02mol/L；所述添加因子二包括以下终浓度的组分：wst-8 0.15mg/mL，1-Methoxy PMS 0.2mg/mL，硫酸钙0.4mg/mL；所述添加因子一和所述添加因子二的溶剂均为无菌水。所述添加因子一和所述添加因子二的制备及保存方法同实施例1。
实施例5
本实施例提供一种CCK8检测试剂盒，包括添加因子一和添加因子二；所述添加因子一包括以下终浓度的组分：透明质酸酶1.0mg/mL，EDTA 0.5mg/mL，盐酸0.02mol/L；所述添加因子二包括以下终浓度的组分wst-8 0.2mg/mL，1-Methoxy PMS 0.3mg/mL，硝酸钙0.5mg/mL；所述添加因子一和所述添加因子二的溶剂均为无菌水。所述添加因子一和所述添加因子二的制备及保存方法同实施例1。
实施例6
本实施例提供一种人肺癌类器官的药敏活力检测方法，是采用实施例1的CCK8检测试剂盒进行，药物为来那替尼，该检测方法包括以下步骤：
(1)将人肺癌类器官样本以3000cell/孔接种于96孔板中，培养72h后进行药物接触(6浓度，3复孔)；
(2)加药96h后在孔板中加入添加因子一继续培养30min；
(3)继续在孔板中加入添加因子二培养2h，于450nm进行活力检测，进行3次平行试验，检测结果如表1所示。
表1实施例6人肺癌类器官的药敏活力检测结果
Figure BDA0002997077910000061
图1提供了人肺癌类器官细胞活力随来那替尼药物浓度变化的曲线，表明：该试剂盒在该类器官实验上的重复性、准确性以及稳定性较好。
实施例7
本实施例提供一种人肠癌类器官的药敏活力检测方法，是采用实施例2的CCK8检测试剂盒进行，药物为瑞戈非尼，检测方法和步骤同实施例6，结果如表2所示。
表2实施例7人肠癌类器官的药敏活力检测结果
Figure BDA0002997077910000062
图2提供了人肠癌类器官细胞活力随瑞戈非尼药物浓度变化的曲线，表明：该试剂盒在该类器官实验上的重复性、准确性以及稳定性较好。
实施例8
本实施例提供一种人乳腺癌类器官的药敏活力检测方法，是采用实施例3的CCK8检测试剂盒进行，药物为阿法替尼，检测方法和步骤同实施例6，结果如表3所示。
表3实施例8人乳腺癌类器官的药敏活力检测结果
Figure BDA0002997077910000071
图3提供了人乳腺癌类器官细胞活力随阿法替尼药物浓度变化的曲线，表明：该试剂盒在该类器官实验上的重复性、准确性以及稳定性较好。
实施例9
本实施例提供一种人卵巢癌类器官的药敏活力检测方法，是采用实施例4的CCK8检测试剂盒进行，药物为奥拉帕利，检测方法和步骤同实施例6，结果如表4所示。
表4实施例9人卵巢癌类器官的药敏活力检测结果
Figure BDA0002997077910000072
图4提供了人卵巢癌类器官细胞活力随奥拉帕利药物浓度变化的曲线，表明：该试剂盒在该类器官实验上的重复性、准确性以及稳定性较好。
实施例10
本实施例提供一种人胃癌类器官的药敏活力检测方法，是采用实施例5的CCK8检测试剂盒进行，药物为伊立替康，检测方法和步骤同实施例6，结果如表5所示。
Figure BDA0002997077910000081
图5提供了人胃癌类器官细胞活力随伊立替康药物浓度变化的曲线，表明：该试剂盒在该类器官实验上的重复性、准确性以及稳定性较好。
对比例1
本对比例提供一种人肺癌类器官的药敏活力检测方法，是采用传统的CCK8检测试剂盒进行，药物为来那替尼，该检测方法包括以下步骤：
(1)将类器官样本以3000cell/孔接种于96孔板中，培养72h后进行药物接触(6浓度，3复孔)；
(2)加药96h后在孔板中加入CCK试剂，继续培养4h；
(3)于450nm进行活力检测，进行3次平行试验，检测结果如表6所示。
表6对比例1人肺癌类器官的药敏活力检测结果
Figure BDA0002997077910000082
图6提供了本对比例人肺癌类器官细胞活力随来那替尼药物浓度变化的曲线，表明：该试剂盒在该类器官实验上的重复性、准确性以及稳定性较差。
对比例2
本对比例提供一种人肠癌类器官的药敏活力检测方法，是采用传统的CCK8检测试剂盒进行，药物为瑞戈非尼，检测方法和步骤同实对比例1，检测结果如表7所示。
表7对比例2人肠癌类器官的药敏活力检测结果
Figure BDA0002997077910000091
图7提供了本对比例人肠癌类器官细胞活力随瑞戈非尼药物浓度变化的曲线，表明：该试剂盒在该类器官实验上的重复性、准确性以及稳定性较差。
对比例3
本对比例提供一种人乳腺癌类器官的药敏活力检测方法，是采用传统的CCK8检测试剂盒进行，药物为阿法替尼，检测方法和步骤同实对比例1，检测结果如表8所示。
表8对比例3人乳腺癌类器官的药敏活力检测结果
Figure BDA0002997077910000092
图8提供了本对比例人乳腺癌类器官细胞活力随阿法替尼药物浓度变化的曲线，表明：该试剂盒在该类器官实验上的重复性、准确性以及稳定性较差。
对比例4
本对比例提供一种人卵巢类器官的药敏活力检测方法，是采用传统的CCK8检测试剂盒进行，药物为奥拉帕利，检测方法和步骤同实对比例1，检测结果如表9所示。
表9对比例4人卵巢癌类器官的药敏活力检测结果
Figure BDA0002997077910000101
图9提供了本对比例人卵巢癌类器官细胞活力随奥拉帕利药物浓度变化的曲线，表明：该试剂盒在该类器官实验上的重复性、准确性以及稳定性较差。
对比例5
本对比例提供一种人胃癌类器官的药敏活力检测方法，是采用传统的CCK8检测试剂盒进行，药物为伊立替康，检测方法和步骤同实对比例1，检测结果如表10所示。
表10对比例5人胃癌类器官的药敏活力检测结果
Figure BDA0002997077910000102
图10提供了本对比例人胃癌类器官细胞活力随伊立替康药物浓度变化的曲线，表明：该试剂盒在该类器官实验上的重复性、准确性以及稳定性较差。
对比例6
本对比例提供一种人肠癌类器官的药敏活力检测方法，所采用的CCK8检测试剂盒与实施例2相近，区别在于：将钙盐替换成氯化锌，其具体成分包括添加因子一和添加因子二；所述添加因子一包括以下终浓度的组分：透明质酸酶0.6mg/mL，EDTA 0.2mg/mL，盐酸0.02mol/L；所述添加因子二包括以下终浓度的组分：wst-8 0.10mg/mL，1-Methoxy PMS0.1mg/mL，氯化锌0.2mg/mL；所述添加因子一和所述添加因子二的溶剂均为无菌水。所述添加因子一和所述添加因子二的制备及保存方法同实施例1，
所采用的药物为瑞戈非尼，检测方法和步骤同实施例6，结果如表11所示。
表11对比例6人肠癌类器官的药敏活力检测结果
Figure BDA0002997077910000111
图11提供了本对比例人肠癌类器官细胞活力随瑞戈非尼药物浓度变化的曲线，表明：该试剂盒在该类器官实验上的重复性、准确性以及稳定性较差。
对比例7
本对比例提供一种人乳腺癌类器官的药敏活力检测方法，所采用的CCK8检测试剂盒与实施例3相近，区别在于：不含有钙盐，其具体成分包括添加因子一和添加因子二；所述添加因子一包括以下终浓度的组分：透明质酸酶0.7mg/mL，EDTA 0.3mg/mL，盐酸0.02mol/L；所述添加因子二包括以下终浓度的组分：wst-8 0.12mg/mL，1-Methoxy PMS 0.15mg/mL；所述添加因子一和所述添加因子二的溶剂均为无菌水。所述添加因子一和所述添加因子二的制备及保存方法同实施例1。
所采用的药物为阿法替尼，检测方法和步骤同实施例6，结果如表12所示。
表12对比例7人乳腺癌类器官的药敏活力检测结果
Figure BDA0002997077910000112
图12提供了本对比例人乳腺癌类器官细胞活力随阿法替尼药物浓度变化的曲线，表明：该试剂盒在该类器官实验上的重复性、准确性以及稳定性较差。
对比例8
本实施例提供一种人卵巢癌类器官的药敏活力检测方法，所采用的CCK8检测试剂盒与实施例4相近，区别在于：将透明质酸酶替换为果胶酶，并且采用的为氯化钙，其具体成分包括添加因子一和添加因子二；所述添加因子一包括以下终浓度的组分：果胶酶0.8mg/mL，EDTA 0.4mg/mL，盐酸0.02mol/L；所述添加因子二包括以下终浓度的组分：wst-80.15mg/mL，1-Methoxy PMS0.2mg/mL，氯化钙0.4mg/mL；溶剂为无菌水。所述添加因子一和所述添加因子二的制备及保存方法同实施例1。
所采用的药物为依托泊苷，检测方法和步骤同实施例6，结果如表13所示。
表13对比例7人卵巢癌类器官的药敏活力检测结果
Figure BDA0002997077910000121
图13提供了本对比例人卵巢癌类器官细胞活力随依托泊苷药物浓度变化的曲线，表明：该试剂盒在该类器官实验上的重复性、准确性以及稳定性较差。
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。

Claims (7)

1.一种CCK8检测试剂盒，其特征在于：包括添加因子一和添加因子二；所述添加因子一包括以下终浓度的组分：透明质酸酶0.5-1mg/mL，EDTA0.1-0.5mg/mL，盐酸0.02-0.05mol/L；所述添加因子二包括以下终浓度的组分：wst-8 0.08-0.2mg/mL，1-Methoxy PMS0.05-0.3mg/mL，钙盐0.1-0.5mg/mL；所述添加因子一和所述添加因子二的溶剂均为无菌水。
2.根据权利要求1所述的一种CCK8检测试剂盒，其特征在于：所述添加因子一的制备及保存方法为：按照组分的终浓度配料，将透明质酸酶、EDTA和盐酸混合均匀并溶解后，0.22μm滤膜过滤，于-20℃保存。
3.根据权利要求1所述的一种CCK8检测试剂盒，其特征在于：所述添加因子二的制备及保存方法为：按照组分的终浓度配料，将wst-8、1-Methoxy PMS、钙盐和无菌水混合均匀并溶解后，0.22μm滤膜过滤，于-20℃保存。
4.根据权利要求1或3所述的一种CCK8检测试剂盒，其特征在于：所述钙盐包括氯化钙、硝酸钙、硫酸钙、磷酸钙中的至少一种。
5.根据权利要求4所述的一种CCK8检测试剂盒，其特征在于：所述钙盐为氯化钙。
6.权利要求1～5任意一项所述的一种CCK8检测试剂盒在类器官药敏活力检测中的应用。
7.一种类器官药敏活力检测方法，其特征在于：包括：
(1)将类器官样本接种于孔板中，培养48-72h后进行药物接触；
(2)加药96h后在孔板中加入权利要求1～5任意一项所述的添加因子一继续培养20～30min；
(3)继续在孔板中加入添加因子二培养2-4h，于450nm进行活力检测。
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Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106232830A (zh) * 2014-04-18 2016-12-14 株式会社同仁化学研究所 脱氢酶及其基质浓度的测定方法，电子中介和包含该电子中介的脱氢酶及其基质用测定试剂
CN107365827A (zh) * 2016-05-11 2017-11-21 杭州健昵福生物科技有限公司 一种将单磺酸四氮唑盐用于检测细胞活力的用途及方法
CN111979183A (zh) * 2020-08-10 2020-11-24 创芯国际生物科技(广州)有限公司 一种基于肝脏类器官模型的药物肝毒性评价方法

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106232830A (zh) * 2014-04-18 2016-12-14 株式会社同仁化学研究所 脱氢酶及其基质浓度的测定方法，电子中介和包含该电子中介的脱氢酶及其基质用测定试剂
CN107365827A (zh) * 2016-05-11 2017-11-21 杭州健昵福生物科技有限公司 一种将单磺酸四氮唑盐用于检测细胞活力的用途及方法
CN111979183A (zh) * 2020-08-10 2020-11-24 创芯国际生物科技(广州)有限公司 一种基于肝脏类器官模型的药物肝毒性评价方法

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
INDAH S. TANTULAR等: "An improved, simple screening method for detection of glucose-6-phosphate dehydrogenase deficiency", 《TROPICAL MEDICINE & INTERNATIONAL HEALTH》 *

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