CN113105545A - 一种ii型自免肝lkm-1、lc-1复合质控品及其制备方法、应用 - Google Patents

一种ii型自免肝lkm-1、lc-1复合质控品及其制备方法、应用 Download PDF

Info

Publication number
CN113105545A
CN113105545A CN202110473857.5A CN202110473857A CN113105545A CN 113105545 A CN113105545 A CN 113105545A CN 202110473857 A CN202110473857 A CN 202110473857A CN 113105545 A CN113105545 A CN 113105545A
Authority
CN
China
Prior art keywords
antibody
mouse
lkm
variable region
recombinant
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN202110473857.5A
Other languages
English (en)
Other versions
CN113105545B (zh
Inventor
刘欣
潘敬梅
秦枫
黄敬双
张小飞
颜松
周玥
张伟
万文琴
鲜静
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Sichuan Light Carrying Biotechnology Co ltd
Original Assignee
Sichuan Light Carrying Biotechnology Co ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Sichuan Light Carrying Biotechnology Co ltd filed Critical Sichuan Light Carrying Biotechnology Co ltd
Priority to CN202110473857.5A priority Critical patent/CN113105545B/zh
Publication of CN113105545A publication Critical patent/CN113105545A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN113105545B publication Critical patent/CN113105545B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
    • G01N33/54313—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals the carrier being characterised by its particulate form
    • G01N33/54326—Magnetic particles
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • G01N33/6854—Immunoglobulins
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • G01N33/6893—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids related to diseases not provided for elsewhere
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/96—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving blood or serum control standard
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2800/00—Nucleic acids vectors
    • C12N2800/22—Vectors comprising a coding region that has been codon optimised for expression in a respective host
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
    • G01N2800/08—Hepato-biliairy disorders other than hepatitis
    • G01N2800/085—Liver diseases, e.g. portal hypertension, fibrosis, cirrhosis, bilirubin

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

本发明公开了一种II型自免肝LKM‑1、LC‑1复合质控品及其制备方法、应用，制备方法包括以下步骤：S1、分别获取小鼠LKM‑1抗体的可变区基因序列和小鼠LC‑1抗体的可变区基因序列，分别如SEQ ID No.1和SEQ ID No.2所示；S2、在SEQ ID No.1和SEQ ID No.2之间插入刚性Linker连接，并在一端插入EcoR I酶切位点，另一端序列插入Nco I酶切位点合成全基因序列，如SEQ ID No.3所示；S3、将步骤S2获得的全基因序列引入pFUSE‑hIgG1‑Fc2载体中，制备同时含有小鼠LKM‑1抗体和小鼠LC‑1抗体可变区的重组质粒；S4、将步骤S3获得的重组质粒转染哺乳细胞，获取同时含有小鼠LKM‑1抗体和小鼠LC‑1抗体可变区的重组抗体。本发明解决了现有LKM‑1、LC‑1抗体质控品成本高、产量少、批间差较大的问题。

Description

一种II型自免肝LKM-1、LC-1复合质控品及其制备方法、应用
技术领域
本发明涉及体外诊断技术领域，具体涉及一种II型自免肝LKM-1、LC-1复合质控品及其制备方法、应用。
背景技术
自身免疫性肝病(AIH)是一种多病因性疾病，病毒、细菌、化学物质诱发遗传敏感个体自身参与炎症性疾病过程，但免疫调节功能的缺陷常常是导致AIH的基本原因。
临床分型根据不同的免疫血清学标志，目前主要将AIH分为4型，I型AIH旧称经典型或狼疮型，是本病最常见的类型，约占全部AIH的60％～80％。其特征为：ANA和(或)SMA阳性，高球蛋白血症，女性发病多见(占7l％)，激素治疗有效，易并发甲状腺炎、溃疡性结肠炎、类风湿关节炎等肝外自身免疫疾病。
II型AIH相对少见，多见于欧洲及南美某些国家。血清学抗LKM-1阳性，高丙种球蛋白血症较少，血清IGA水平可能低下，易合并溶血性贫血、I型糖尿病、皮肤白斑病等。Ⅱ型与HCV感染有密切关系，分为2个亚型：II a型不伴HCV感染，多为年轻女性，有家族自身免疫性疾病史，LKM-1及ALT水平高，LC-1阳性，糖皮质激素反应好；Ⅱb型伴有HCV感染，以老年男性患者为主，无家族史，LKM-l及ALT水平低，使用激素可加重病情。
Ⅲ型AIH少见，SLA/LP是此型特征性抗体，患者多为女性，其临床表现与I型相似，故有人认为Ⅲ型实为I型变种，对免疫抑制剂反应好。
lV型AIH又称不明原因性肝炎。约13％的AIH患者采用标准免疫血清学方法测不到自身抗体，但患者有AIH的表现，如高丙种球蛋白血症、HLA抗原表达异常、对激素治疗有效。
II型AIH以检出抗肝肾微粒体抗体(AnTi-liver/kidneymiCrosomAlAnTibody，nTi-LKM)和抗肝细胞溶质抗原I型抗体(AnTi-liverCyTosolAnTibodyTypel，AnTi—C-l)为特征。抗LKM通常出现在无SMA及ANA的II型AIH患者，是II型AIH的标志性抗体。
抗LKM-1抗体是在1973年在自身免疫性面型活动性肝炎患者血清中发现。其靶抗原为P450酶复合物和UDP-葡萄糖醛酸转移酶。抗体分为三类LKM-1、LKM-2以及LKM-3，在II型AIH中的抗LKM-1抗体的主要的靶抗原是细胞色素，研究显示，LKM-1抗体能够在体外抑制CYP2D6的酶的活性。抗LKM-1是II型AIH的标志性抗体，II型AIH患者多为女性伴高免疫球蛋白血症，病情较重。抗LKM-1抗体阳性率达到90％，此外，也可见于2％-10％的慢性丙型病毒性肝炎患者。检测抗LKM-1抗体对AIH的诊断、鉴别诊断及预后评估具有重要临床价值。
抗LC-l抗体是于1988年发现的肝脏特异性的自身抗体。亚胺代甲基转移酶一环化脱氨酶(formiminoTrAnsferAseCyClodeAminAse，FTCD)被认为是该抗体的靶抗原，而对LC-1抗体靶抗原表位的进一步研究分析表明FT的抗原优势表位可能是引发自身免疫反应最初的和最重要的因索。抗LC-1抗体在40岁以上的患者中极其罕见，而在20岁以下的患者中阳性率较高，但在儿童爆发性AIH患者中常为阴性。研究显示该抗体与II型AIH相关，阳性率为30％，但可在SMA及ANA阳性的I型AIH和PSC的患者中同时出现，也存在于少数慢性丙型肝炎患者血清中。出现抗LC-I抗体的患者通常可伴发其它免疫性疾病、显著的肝细胞炎症、并且很快进展为肝硬化。该抗体如与LKM-1抗体同时阳性时，在用间接免疫荧光法检测时易被后者掩盖。抗LC-1抗体的效价随疾病的活动性而变动，故可作为判断疾病严重度的一个指标，也是患者残余肝细胞数量的标志。
自免项目LKM-1、LC-1化学发光检测试剂盒的的研发、产品质量控制及产业标准化都离不开抗体质控品。目前常规的制备LKM-1、LC-1抗体质控品的方式主要是收集自免阳性血清，这种方式有巨大的缺陷，一是阳性血清不易收集，成本非常高，经常供应量不足；二是批间差较大，量又少，很难规模化、产业化制备；三是作为常规质控品很难有效保证一致性。
发明内容
本发明的目的在于提供一种II型自免肝LKM-1、LC-1复合质控品及其制备方法，解决现有LKM-1、LC-1抗体质控品成本高、产量少、批间差较大的问题。
此外，本发明还提供一种II型自免肝LKM-1、LC-1复合质控品的应用以及包括I型自免肝LKM-1、LC-1复合质控品的试剂盒。
本发明通过下述技术方案实现：
一种II型自免肝LKM-1、LC-1复合质控品的制备方法，包括以下步骤：
S1、分别获取小鼠LKM-1抗体的可变区基因序列和小鼠LC-1抗体的可变区基因序列，分别如SEQ ID No.1和SEQ ID No.2所示；
S2、在SEQ ID No.1和SEQ ID No.2之间插入刚性Linker连接，并在一端插入EcoRI酶切位点，另一端序列插入Nco I酶切位点合成全基因序列，如SEQ ID No.3所示；
S3、将步骤S2获得的全基因序列引入pFUSE-hIgG1-Fc2载体中，制备同时含有小鼠LKM-1抗体和小鼠LC-1抗体可变区的重组质粒；
S4、将步骤S3获得的重组质粒转染哺乳细胞，获取同时含有小鼠LKM-1抗体和小鼠LC-1抗体可变区的重组抗体。
在国内，检测自免项目正处于拓展阶段，各类试剂盒的产品大都处于试剂盒性能还需要优化的阶段，本发明的复合质控品，能有效减小试剂盒质控品的批间差，减少质控血清的使用。
本发明通过抗体制备的质控品相对简单易得、批间差异小。
本发明的关键在于获取小鼠LKM-1抗体的可变区基因序列和小鼠LC-1抗体的可变区基因序列，以及小鼠LKM-1抗体的可变区基因和小鼠LC-1抗体的可变区基因融合，通过设计合理的小鼠LKM-1抗体的可变区基因序列和小鼠LC-1抗体的可变区基因序列，才能合成符合要求的全基因序列，进而构建同时含有小鼠LKM-1抗体和小鼠LC-1抗体可变区的重组抗体。
进一步地，步骤S1中可变区基因序列的获取过程如下：
利用重组抗原LKM-1和重组抗原LC-1分别免疫小鼠制备小鼠LKM-1抗体和小鼠LC-1抗体，通过抗体氨基酸序列测序得到小鼠LKM-1抗体和小鼠LC-1抗体的可变区氨基酸序列，根据哺乳动物密码子偏爱性，合成小鼠LKM-1抗体的可变区基因序列和小鼠LC-1抗体的可变区基因序列。
进一步地，小鼠LKM-1抗体和小鼠LC-1抗体的获取过程如下：
重组抗原LKM-1、重组抗原LC-1通过多次免疫小鼠分别获得可表达小鼠LKM-1抗体、小鼠LC-1抗体的脾细胞；提取脾细胞与Sp2/0细胞融合、筛选、验证分别得到可高效表达LKM-1和LC-1单克隆抗体的细胞株；细胞株进一步进行小鼠腹腔注射，抽取腹水纯化得到相应的单克隆抗体。
进一步地，步骤S4中，哺乳细胞为CHO细胞。
一种同时含有小鼠LKM-1抗体和小鼠LC-1抗体可变区的重组抗体。
一种II型自免肝LKM-1、LC-1复合质控品，包括同时含有小鼠LKM-1抗体和小鼠LC-1抗体可变区的重组抗体。
一种II型自免肝LKM-1、LC-1复合质控品由含有重组抗体的缓冲液配制而成。
同时含有小鼠LKM-1抗体和小鼠LC-1抗体可变区的重组抗体在LKM-1试剂盒、LC-1试剂盒中的应用。
一种LKM-1试剂盒，包括R1试剂、R2试剂、M试剂和校准品，所述校准品由如权利要求1-4任一项所述制备方法制备的同时含有小鼠LKM-1抗体和小鼠LC-1抗体可变区的重组抗体溶于缓冲液中制备而成；M试剂为已偶联LKM-1抗原的磁微粒溶于缓冲液中制备而成。
一种LC-1试剂盒，包括R1试剂、R2试剂、M试剂和校准品，所述校准品由如权利要求1-4任一项所述制备方法制备的同时含有小鼠LKM-1抗体和小鼠LC-1抗体可变区的重组抗体溶于缓冲液中制备而成；M试剂为已偶联LC-1抗原的磁微粒溶于缓冲液中制备而成。
本发明与现有技术相比，具有如下的优点和有益效果：
1、本发明制备的复合质控品的基质效应小。
2、采用本发明的复合质控品用于试剂盒检测，能够降低用于平行比对的成本，且质控参数可长期使用。
3、本发明制备的复合质控品稳定性好，可减少浪费，避免由于质控品的问题导致的假失控。
4、采用本发明的复合质控品用于试剂盒检测，能够降低医院检测项目的成本。
5、本发明通过抗体制备的质控品相对简单易得、批间差异小。
附图说明
此处所说明的附图用来提供对本发明实施例的进一步理解，构成本申请的一部分，并不构成对本发明实施例的限定。在附图中：
图1为pFUSE-hIgG1-FC2载体质粒质谱图；
图2为蛋白质电泳图。
具体实施方式
为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚明白，下面结合实施例和附图，对本发明作进一步的详细说明，本发明的示意性实施方式及其说明仅用于解释本发明，并不作为对本发明的限定。
实施例1：
一种II型自免肝LKM-1、LC-1复合质控品的制备方法，包括以下步骤：
S1、分别获取小鼠LKM-1抗体的可变区基因序列和小鼠LC-1抗体的可变区基因序列，分别如SEQ ID No.1和SEQ ID No.2所示；
可变区基因序列的获取过程如下：
重组抗原LKM-1、重组抗原LC-1通过多次免疫小鼠分别获得可表达小鼠LKM-1抗体、小鼠LC-1抗体的脾细胞；提取脾细胞与Sp2/0细胞融合、筛选、验证分别得到可高效表达LKM-1和LC-1单克隆抗体的细胞株；细胞株进一步进行小鼠腹腔注射，抽取腹水纯化得到相应的单克隆抗体，通过抗体氨基酸序列测序得到小鼠LKM-1抗体和小鼠LC-1抗体的可变区氨基酸序列，根据哺乳动物密码子偏爱性，合成小鼠LKM-1抗体的可变区基因序列和小鼠LC-1抗体的可变区基因序列；
LKM-1的单克隆抗体的可变区序列(SEQ ID No.1)，由轻链可变区序列和重链可变区序列通过linker连接而成：
轻链可变区序列：
ATGGCCGGCTTCCCTCTCCTCCTCACCCTCCTCACTCACTGTGCAGGGTCCTGGGCCCAGTCTGTGATGACTCAGCGTGCCTGGGCATATGTGGCCCCCG CCCAGAGGGTCACCATCTCTTGTTCTGGAAGCAGCTCCAACATCGGAAGTAAGGTTGTATATATGTACCAGCAACTCCCAGGAACGGCCCCCAAACTCCTCATCTATAGTGATAATCAGCGGCCCTCAGGGGTCCCTGACCGATTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCACCTCAGGTGCCAGTGCGCGGAGTCAGCTCCGGTCCGAGGATGAGGCTGATTATTACTGTGCAACA
重链可变区序列：
ATGGAGTTTGGGCTGAGCTGGCTTTTTCTTGTGGCGATTTTAAAAGGTGTCCAGTGTGAGGTGCAGTTGTTGGAGTCTGGGGGAGACTTGGTGGTATGTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTTAGCACTCGATCCAAGAGTGTGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAATGGGTCTCAGGTATTGGTGATAGTGGTCATAGCATATACTATGCAGACTCCGTGAAGGGCCGCTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAATTGCACGCGGAGACTGCGGTTAAATAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCCGTATATTACTGTGCGACCGGCLC-1的单克隆抗体的可变区序列(SEQ ID No.2)，由轻链可变区序列和重链可变区序列通过linker连接而成：
轻链可变区序列：
ATGGCCGGCTTCCCTCTCCTCCTCACCCTCCTCACTCACTGTGCAGGGTCCTGGGCCCAGTCTGTGATGACAAGTGGAATAATGGCGTGTGAACCTGTCGACCAGAGGGTCACCATCTCTTGTTCTGGAAGCAGCTCCAACATCGGAAGTTGTTAGTTAAAAGTGCGCCAGCAACTCCCAGGAACGGCCCCCAAACTCCTCATCTATAGTGATAATCAGCGGCCCTCAGGGGTCCCTGACCGATTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCACCTCAGCAACCCTGGCACACAGTGGCCTCCGGTCCGAGGATGAGGCTGATTATTACTGTGCAACA
重链可变区序列：
ATGGAGTTTGGGCTGAGCTGGCTTTTTCTTGTGGCGATTTTAAAAGGTGTCCAGTGTGAGGTGCAGTTGTTGGAGTCTGGGGGAGACTTGGTACGGAAGGCCGGTTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTTAGCACTATTGCCGCGAGACGAATCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAATGGGTCTCAGGTATTGGTGATAGTGGTCATAGCATATACTATGCAGACTCCGTGAAGGGCCGCTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGCGTAGGCGTTATGTCCACCGTAATAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCCGTATATTACTGTGCGACCGGC
S2、在SEQ ID No.1和SEQ ID No.2之间插入刚性Linker连接，并在一端插入EcoRI酶切位点，另一端序列插入Nco I酶切位点合成全基因序列，如SEQ ID No.3所示；
柔性Linker氨基酸序列：
-EGKSSGSGSESKSTESKST-
柔性Linker核苷酸序列：
-GAGGTAAAATCATCGGGAAGCGGAAGCGAGTCAAAATCTACTGAATCAAAATCCACT-
刚性Linker氨基酸序列：
-EAAAKEAAAKEAAAKEAAAK-
刚性Linker核苷酸序列：
-GAAGCAGCAGCAAAGGAAGCAGCAGCAAAGGAAGCAGCAGCAAAGGAAGCAGCAGCAAAG-
酶切位点：
EcoRI：(-GAATTC-)
NcoI：(-CCATGG-)
全基因序列(SEQ ID No.3)：
GAATTCATGGCCGGCTTCCCTCTCCTCCTCACCCTCCTCACTCACTGTGCAGGGTCCTGGGCCCAGTCTGTGATGACTCAGCGTGCCTGGGCATATGTGGCCCCCGCCCAGAGGGTCACCATCTCTTGTTCTGGAAGCAGCTCCAACATCGGAAGTAAGGTTGTATATATGTACCAGCAACTCCCAGGAACGGCCCCCAAACTCCTCATCTATAGTGATAATCAGCGGCCCTCAGGGGTCCCTGACCGATTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCACCTCAGGTGCCAGTGCGCGGAGTCAGCTCCGGTCCGAGGATGAGGCTGATTATTACTGTGCAACAGAGGTAAAATCATCGGGAAGCGGAAGCGAGTCAAAATCTACTGAATCAAAATCCACTATGGAGTTTGGGCTGAGCTGGCTTTTTCTTGTGGCGATTTTAAAAGGTGTCCAGTGTGAGGTGCAGTTGTTGGAGTCTGGGGGAGACTTGGTGGTATGTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTTAGCACTCGATCCAAGAGTGTGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAATGGGTCTCAGGTATTGGTGATAGTGGTCATAGCATATACTATGCAGACTCCGTGAAGGGCCGCTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAATTGCACGCGGAGACTGCGGTTAAATAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCCGTATATTACTGTGCGACCGGCGAAGCAGCAGCAAAGGAAGCAGCAGCAAAGGAAGCAGCAGCAAAGGAAGCAGCAGCAAAGATGGCCGGCTTCCCTCTCCTCCTCACCCTCCTCACTCACTGTGCAGGGTCCTGGGCCCAGTCTGTGATGACAAGTGGAATAATGGCGTGTGAACCTGTCGACCAGAGGGTCACCATCTCTTGTTCTGGAAGCAGCTCCAACATCGGAAGTTGTTAGTTAAAAGTGCGCCAGCAACTCCCAGGAACGGCCCCCAAACTCCTCATCTATAGTGATAATCAGCGGCCCTCAGGGGTCCCTGACCGATTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCACCTCAGCAACCCTGGCACACAGTGGCCTCCGGTCCGAGGATGAGGCTGATTATTACTGTGCAACAGAGGTAAAATCATCGGGAAGCGGAAGCGAGTCAAAATCTACTGAATCAAAATCCACTATGGAGTTTGGGCTGAGCTGGCTTTTTCTTGTGGCGATTTTAAAAGGTGTCCAGTGTGAGGTGCAGTTGTTGGAGTCTGGGGGAGACTTGGTACGGAAGGCCGGTTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTTAGCACTATTGCCGCGAGACGAATCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAATGGGTCTCAGGTATTGGTGATAGTGGTCATAGCATATACTATGCAGACTCCGTGAAGGGCCGCTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGCGTAGGCGTTATGTCCACCGTAATAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCCGTATATTACTGTGCGACCGGCCCATGG
S3、将步骤S2获得的全基因序列引入pFUSE-hIgG1-Fc2载体中，pFUSE-hIgG1-Fc2载体如图1所示，制备同时含有小鼠LKM-1抗体和小鼠LC-1抗体可变区的重组质粒；
S4、将步骤S3获得的重组质粒通过Lipo 3000试剂转染CHO细胞中，通过Zeo筛选体系获得单克隆细胞株，大量培养细胞，收集细胞培养物，10000rpm、15min条件下离心取细胞上清，即获取同时含有小鼠LKM-1抗体和小鼠LC-1抗体可变区的重组抗体。
对本实施例制备的重组抗体进行纯化和鉴定：
1)、将实施例1中获取的细胞上清用Protein A亲和柱纯化。利用Gly-HCl进行梯度洗脱，去除杂蛋白，结果如图2所示，得到含针对LKM-1和LC-1的单克隆抗体的两种可变区融合的人源化IgG；
图2
2)、使用抗肝细胞溶质抗原1型(LC-1)抗体IgG检测试剂盒(磁微粒化学发光法)试剂盒测试验证纯化后的人IgG效价，通过计算软件计算得到该抗体IgG的浓度约为215424RU/mL；
3)、使用抗肝肾微粒体1型(LKM-1)抗体IgG检测试剂盒(磁微粒化学发光法)试剂盒测试验证纯化后的人IgG效价，通过计算软件计算得到该抗体IgG的浓度约为223654RU/mL。
因此：成功表达的抗体经验证可作为抗肝细胞溶质抗原1型(LC-1)抗体IgG检测试剂盒(磁微粒化学发光法)、抗肝肾微粒体1型(LKM-1)抗体IgG检测试剂盒(磁微粒化学发光法)2个试剂盒的质控品使用。可作为后续LKM-1、LC-1试剂盒产品研发及优化的备选原料。
实施例1：
使用LKM-1和LC-1两种试剂盒测试II型自免肝(LKM-1、LC-1)复合质控血清的效价及稳定性验证：
一种抗肝肾微粒体1型(LKM-1)抗体IgG检测试剂盒(磁微粒化学发光法)试剂盒主要成分如下表1所示：
表1
Figure BDA0003046368590000081
一种抗肝细胞溶质抗原1型(LC-1)抗体IgG检测试剂盒(磁微粒化学发光法)试剂盒主要成分如下表2所示：
表2
Figure BDA0003046368590000082
1)效价：将复合质控按1/100、1/1000、1/10000、1/100000稀释梯度小样，使用LKM-1、LC-1试剂盒测试，根据计算软件反算出复合质控原液浓度，结果如表3所示：
表3
Figure BDA0003046368590000083
备注：试剂盒的线性范围在2-400RU/mL，根据稀释比例回算，反算原液效价在200000-240000RU/mL。
2)稳定性：将母液用0.01MPBS(含有1‰BSA、2％甘油及1‰ProClin-300)稀释成低中高三个浓度，分别置于4℃30天、37℃7天，与初测值进行比较，数据如表4所示：
表4
Figure BDA0003046368590000091
从实验结果可以得出：2-8℃保存30天和37℃热破坏7天，浓度的保留率都在90％以上，稳定性较好。
综上，本发明的复合质控血清表达与应用，可以减小试剂盒的批间差。同时，降低成本，方便操作，一个质控品可以检测2个项目，质控品方便管理。利用SA的级联放大作用，增强抗体的检测灵敏度；利用磁微粒化学发光法进行试剂盒的开发，检测时间短，60分钟内出160个测试结果，重复性好，全自动操作。
以上所述的具体实施方式，对本发明的目的、技术方案和有益效果进行了进一步详细说明，所应理解的是，以上所述仅为本发明的具体实施方式而已，并不用于限定本发明的保护范围，凡在本发明的精神和原则之内，所做的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
序列表
<110> 四川携光生物技术有限公司
<120> 一种II型自免肝LKM-1、LC-1复合质控品及其制备方法、应用
<160> 3
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 684
<212> DNA
<213> 人工序列1(人工序列)
<400> 1
atggccggct tccctctcct cctcaccctc ctcactcact gtgcagggtc ctgggcccag 60
tctgtgatga ctcagcgtgc ctgggcatat gtggcccccg cccagagggt caccatctct 120
tgttctggaa gcagctccaa catcggaagt aaggttgtat atatgtacca gcaactccca 180
ggaacggccc ccaaactcct catctatagt gataatcagc ggccctcagg ggtccctgac 240
cgattctctg gctccaagtc tggcacctca ggtgccagtg cgcggagtca gctccggtcc 300
gaggatgagg ctgattatta ctgtgcaaca atggagtttg ggctgagctg gctttttctt 360
gtggcgattt taaaaggtgt ccagtgtgag gtgcagttgt tggagtctgg gggagacttg 420
gtggtatgtg gggggtccct gagactctcc tgtgcagcct ctggattcac ctttagcact 480
cgatccaaga gtgtggtccg ccaggctcca gggaaggggc tggaatgggt ctcaggtatt 540
ggtgatagtg gtcatagcat atactatgca gactccgtga agggccgctt caccatctcc 600
agagacaatt ccaattgcac gcggagactg cggttaaata gcctgagagc cgaggacacg 660
gccgtatatt actgtgcgac cggc 684
<210> 2
<211> 684
<212> DNA
<213> 人工序列2(人工序列)
<400> 2
atggccggct tccctctcct cctcaccctc ctcactcact gtgcagggtc ctgggcccag 60
tctgtgatga caagtggaat aatggcgtgt gaacctgtcg accagagggt caccatctct 120
tgttctggaa gcagctccaa catcggaagt tgttagttaa aagtgcgcca gcaactccca 180
ggaacggccc ccaaactcct catctatagt gataatcagc ggccctcagg ggtccctgac 240
cgattctctg gctccaagtc tggcacctca gcaaccctgg cacacagtgg cctccggtcc 300
gaggatgagg ctgattatta ctgtgcaaca atggagtttg ggctgagctg gctttttctt 360
gtggcgattt taaaaggtgt ccagtgtgag gtgcagttgt tggagtctgg gggagacttg 420
gtacggaagg ccggttccct gagactctcc tgtgcagcct ctggattcac ctttagcact 480
attgccgcga gacgaatccg ccaggctcca gggaaggggc tggaatgggt ctcaggtatt 540
ggtgatagtg gtcatagcat atactatgca gactccgtga agggccgctt caccatctcc 600
agagacaatt ccaagcgtag gcgttatgtc caccgtaata gcctgagagc cgaggacacg 660
gccgtatatt actgtgcgac cggc 684
<210> 3
<211> 1554
<212> DNA
<213> 人工序列3(人工序列)
<400> 3
gaattcatgg ccggcttccc tctcctcctc accctcctca ctcactgtgc agggtcctgg 60
gcccagtctg tgatgactca gcgtgcctgg gcatatgtgg cccccgccca gagggtcacc 120
atctcttgtt ctggaagcag ctccaacatc ggaagtaagg ttgtatatat gtaccagcaa 180
ctcccaggaa cggcccccaa actcctcatc tatagtgata atcagcggcc ctcaggggtc 240
cctgaccgat tctctggctc caagtctggc acctcaggtg ccagtgcgcg gagtcagctc 300
cggtccgagg atgaggctga ttattactgt gcaacagagg taaaatcatc gggaagcgga 360
agcgagtcaa aatctactga atcaaaatcc actatggagt ttgggctgag ctggcttttt 420
cttgtggcga ttttaaaagg tgtccagtgt gaggtgcagt tgttggagtc tgggggagac 480
ttggtggtat gtggggggtc cctgagactc tcctgtgcag cctctggatt cacctttagc 540
actcgatcca agagtgtggt ccgccaggct ccagggaagg ggctggaatg ggtctcaggt 600
attggtgata gtggtcatag catatactat gcagactccg tgaagggccg cttcaccatc 660
tccagagaca attccaattg cacgcggaga ctgcggttaa atagcctgag agccgaggac 720
acggccgtat attactgtgc gaccggcgaa gcagcagcaa aggaagcagc agcaaaggaa 780
gcagcagcaa aggaagcagc agcaaagatg gccggcttcc ctctcctcct caccctcctc 840
actcactgtg cagggtcctg ggcccagtct gtgatgacaa gtggaataat ggcgtgtgaa 900
cctgtcgacc agagggtcac catctcttgt tctggaagca gctccaacat cggaagttgt 960
tagttaaaag tgcgccagca actcccagga acggccccca aactcctcat ctatagtgat 1020
aatcagcggc cctcaggggt ccctgaccga ttctctggct ccaagtctgg cacctcagca 1080
accctggcac acagtggcct ccggtccgag gatgaggctg attattactg tgcaacagag 1140
gtaaaatcat cgggaagcgg aagcgagtca aaatctactg aatcaaaatc cactatggag 1200
tttgggctga gctggctttt tcttgtggcg attttaaaag gtgtccagtg tgaggtgcag 1260
ttgttggagt ctgggggaga cttggtacgg aaggccggtt ccctgagact ctcctgtgca 1320
gcctctggat tcacctttag cactattgcc gcgagacgaa tccgccaggc tccagggaag 1380
gggctggaat gggtctcagg tattggtgat agtggtcata gcatatacta tgcagactcc 1440
gtgaagggcc gcttcaccat ctccagagac aattccaagc gtaggcgtta tgtccaccgt 1500
aatagcctga gagccgagga cacggccgta tattactgtg cgaccggccc atgg 1554

Claims (10)

1.一种II型自免肝LKM-1、LC-1复合质控品的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1、分别获取小鼠LKM-1抗体的可变区基因序列和小鼠LC-1抗体的可变区基因序列，分别如SEQ ID No.1和SEQ ID No.2所示；
S2、在SEQ ID No.1和SEQ ID No.2之间插入刚性Linker连接，并在一端插入EcoR I酶切位点，另一端序列插入Nco I酶切位点合成全基因序列，如SEQ ID No.3所示；
S3、将步骤S2获得的全基因序列引入pFUSE-hIgG1-Fc2载体中，制备同时含有小鼠LKM-1抗体和小鼠LC-1抗体可变区的重组质粒；
S4、将步骤S3获得的重组质粒转染哺乳细胞，获取同时含有小鼠LKM-1抗体和小鼠LC-1抗体可变区的重组抗体。
2.根据权利要求1所述的一种II型自免肝LKM-1、LC-1复合质控品的制备方法，其特征在于，步骤S1中可变区基因序列的获取过程如下：
利用重组抗原LKM-1和重组抗原LC-1分别免疫小鼠制备小鼠LKM-1抗体和小鼠LC-1抗体，通过抗体氨基酸序列测序得到小鼠LKM-1抗体和小鼠LC-1抗体的可变区氨基酸序列，根据哺乳动物密码子偏爱性，合成小鼠LKM-1抗体的可变区基因序列和小鼠LC-1抗体的可变区基因序列。
3.根据权利要求2所述的一种II型自免肝LKM-1、LC-1复合质控品的制备方法，其特征在于，小鼠LKM-1抗体和小鼠LC-1抗体的获取过程如下：
重组抗原LKM-1、重组抗原LC-1通过多次免疫小鼠分别获得可表达小鼠LKM-1抗体、小鼠LC-1抗体的脾细胞；提取脾细胞与Sp2/0细胞融合、筛选、验证分别得到可高效表达LKM-1和LC-1单克隆抗体的细胞株；细胞株进一步进行小鼠腹腔注射，抽取腹水纯化得到相应的单克隆抗体。
4.根据权利要求1所述的一种II型自免肝LKM-1、LC-1复合质控品的制备方法，其特征在于，步骤S4中，哺乳细胞为CHO细胞。
5.如权利要求1-4任一项所述制备方法制备的同时含有小鼠LKM-1抗体和小鼠LC-1抗体可变区的重组抗体。
6.一种II型自免肝LKM-1、LC-1复合质控品，其特征在于，包括如权利要求1-4任一项所述制备方法制备的同时含有小鼠LKM-1抗体和小鼠LC-1抗体可变区的重组抗体。
7.根据权利要求6所述的一种II型自免肝LKM-1、LC-1复合质控品，其特征在于，由含有重组抗体的缓冲液配制而成。
8.如权利要求1-4任一项所述制备方法制备的同时含有小鼠LKM-1抗体和小鼠LC-1抗体可变区的重组抗体在LKM-1试剂盒、LC-1试剂盒中的应用。
9.一种LKM-1试剂盒，其特征在于，包括R1试剂、R2试剂、M试剂和校准品，所述校准品由如权利要求1-4任一项所述制备方法制备的同时含有小鼠LKM-1抗体和小鼠LC-1抗体可变区的重组抗体溶于缓冲液中制备而成；M试剂为已偶联LKM-1抗原的磁微粒溶于缓冲液中制备而成。
10.一种LC-1试剂盒，其特征在于，包括R1试剂、R2试剂、M试剂和校准品，所述校准品由如权利要求1-4任一项所述制备方法制备的同时含有小鼠LKM-1抗体和小鼠LC-1抗体可变区的重组抗体溶于缓冲液中制备而成；M试剂为已偶联LC-1抗原的磁微粒溶于缓冲液中制备而成。
CN202110473857.5A 2021-04-29 2021-04-29 一种ii型自免肝lkm-1、lc-1复合质控品及其制备方法、应用 Active CN113105545B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202110473857.5A CN113105545B (zh) 2021-04-29 2021-04-29 一种ii型自免肝lkm-1、lc-1复合质控品及其制备方法、应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202110473857.5A CN113105545B (zh) 2021-04-29 2021-04-29 一种ii型自免肝lkm-1、lc-1复合质控品及其制备方法、应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN113105545A true CN113105545A (zh) 2021-07-13
CN113105545B CN113105545B (zh) 2022-04-08

Family

ID=76720413

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202110473857.5A Active CN113105545B (zh) 2021-04-29 2021-04-29 一种ii型自免肝lkm-1、lc-1复合质控品及其制备方法、应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN113105545B (zh)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113687002A (zh) * 2021-09-15 2021-11-23 谱天（天津）生物科技有限公司 一种排除样本异质性及高丰度干扰能力的质控方法
CN117949656A (zh) * 2024-03-22 2024-04-30 吉林省继明生物科技有限责任公司 一种细胞色素p4502d6代谢酶检测试剂盒及其应用

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH10101698A (ja) * 1996-09-24 1998-04-21 Hoken Kagaku Kenkyusho:Kk ヒトＩＩ型自己免疫性肝炎（Ａｕｔｏ Ｉｍｍｕｎｏ Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ ＴｙｐｅＩＩ；ＡＩＨ ＴｙｐｅＩＩ）に出現する肝腎マイクロゾーム（Ｌｉｖｅｒ／ｋｉｄｎｅｙ ｍｉｃｒｏｓｏｍｅ；ＬＫＭ）１抗体、その対応抗原チトクロームＰ４５００ＩＩｄ６上においての、ヒトＣ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）感染の有無による、ＬＫＭ１抗体が認識する抗原決定基部位の違い検出方法及びアミノ酸配列
CN102707055A (zh) * 2012-06-11 2012-10-03 郑州安图绿科生物工程有限公司 一种联合或单独检测自身免疫性肝病相关抗体的试剂盒及其检测方法
CN102955029A (zh) * 2012-06-11 2013-03-06 郑州安图绿科生物工程有限公司 检测自身免疫性肝病相关抗体抗lkm-1抗体的试剂盒及其检测方法
CN104459159A (zh) * 2014-12-23 2015-03-25 广州南杰生物技术有限公司 一种检测自身免疫肝病相关自身抗体谱的试剂盒
CN109142743A (zh) * 2018-07-25 2019-01-04 滴准生物科技（常州）有限公司 一种自免肝抗体的多项检测试剂盒

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH10101698A (ja) * 1996-09-24 1998-04-21 Hoken Kagaku Kenkyusho:Kk ヒトＩＩ型自己免疫性肝炎（Ａｕｔｏ Ｉｍｍｕｎｏ Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ ＴｙｐｅＩＩ；ＡＩＨ ＴｙｐｅＩＩ）に出現する肝腎マイクロゾーム（Ｌｉｖｅｒ／ｋｉｄｎｅｙ ｍｉｃｒｏｓｏｍｅ；ＬＫＭ）１抗体、その対応抗原チトクロームＰ４５００ＩＩｄ６上においての、ヒトＣ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）感染の有無による、ＬＫＭ１抗体が認識する抗原決定基部位の違い検出方法及びアミノ酸配列
CN102707055A (zh) * 2012-06-11 2012-10-03 郑州安图绿科生物工程有限公司 一种联合或单独检测自身免疫性肝病相关抗体的试剂盒及其检测方法
CN102955029A (zh) * 2012-06-11 2013-03-06 郑州安图绿科生物工程有限公司 检测自身免疫性肝病相关抗体抗lkm-1抗体的试剂盒及其检测方法
CN104459159A (zh) * 2014-12-23 2015-03-25 广州南杰生物技术有限公司 一种检测自身免疫肝病相关自身抗体谱的试剂盒
CN109142743A (zh) * 2018-07-25 2019-01-04 滴准生物科技（常州）有限公司 一种自免肝抗体的多项检测试剂盒

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113687002A (zh) * 2021-09-15 2021-11-23 谱天（天津）生物科技有限公司 一种排除样本异质性及高丰度干扰能力的质控方法
CN117949656A (zh) * 2024-03-22 2024-04-30 吉林省继明生物科技有限责任公司 一种细胞色素p4502d6代谢酶检测试剂盒及其应用
CN117949656B (zh) * 2024-03-22 2024-05-28 吉林省继明生物科技有限责任公司 一种细胞色素p4502d6代谢酶检测试剂盒及其应用

Also Published As

Publication number Publication date
CN113105545B (zh) 2022-04-08

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN113105545B (zh) 一种ii型自免肝lkm-1、lc-1复合质控品及其制备方法、应用
CN111239394B (zh) 一种基于混合抗原快速检测新型冠状病毒抗体试剂盒
CN111393532B (zh) 新型冠状病毒优势表位融合蛋白、诊断试剂及应用
KR100916992B1 (ko) Ｂ형 간염 바이러스 ｓ 항원의 검출법
EP1778880B1 (en) Methods and reagents for diagnosing hantavirus infection
CN111398581B (zh) 一种covid-19快速诊断试剂盒及其制备方法
EP2757111B1 (en) Anti-human norovirus gii antibody
Sadeghi et al. HBsAg mutations related to occult hepatitis B virus infection in HIV‐positive patients result in a reduced secretion and conformational changes of HBsAg
JP3563631B2 (ja) 自己免疫性肝炎の診断薬及び治療薬
CN109111507B (zh) 病毒重组糖蛋白及其真核细胞高效表达方法与应用
JPH01163665A (ja) イムノアツセイおよびそれに使用される生物学的構築体
CN114349855A (zh) 新型冠状病毒Delta突变株特异性抗体及其应用
CN116239684B (zh) 针对人钙网蛋白的兔单克隆抗体及其制备方法和应用
JP5712513B2 (ja) ヒトサイトメガロウイルス感染の検出方法
US6111088A (en) Nucleotide sequence encoding a 52 kDa Ro/SSA autoantigen
EP1308730B1 (en) Method of detecting or assaying hbv
CN111548423A (zh) 肺炎支原体融合抗原及其制备方法和应用
EP0537626B1 (en) Diagnostic reagent for hepatitis C
Saunders et al. Vaccine induction of CD4-mimicking broadly neutralizing antibody precursors in macaques
CN111848787A (zh) preS1抗体、乙型肝炎病毒前S1抗体酶免检测试剂盒、制备方法、使用方法
JP3176570B2 (ja) Ｈｃｖの検出又は測定方法
CN112521461B (zh) 甲型肝炎病毒重组蛋白的制备及其快速检测方法
JP3831754B2 (ja) トキソプラズマ・ゴンディ抗原、これをコードする核酸並びに該抗原に対する抗体
CN116253795A (zh) 一种识别EB病毒gL蛋白的单克隆抗体及其应用
CN116284348A (zh) 一种识别EB病毒gp42蛋白的单克隆抗体及其应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant
PE01 Entry into force of the registration of the contract for pledge of patent right

Denomination of invention: A type II self immune liver LKM-1 and LC-1 composite quality control product and its preparation method and application

Effective date of registration: 20231113

Granted publication date: 20220408

Pledgee: China Construction Bank Co.,Ltd. Chengdu Eighth Branch

Pledgor: Sichuan light carrying Biotechnology Co.,Ltd.

Registration number: Y2023510000248

PE01 Entry into force of the registration of the contract for pledge of patent right