CN113075269A - 一种用于特异性检测氯霉素的电化学发光适配体传感器及其制备方法和应用 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种用于特异性检测氯霉素的电化学发光适配体传感器及其制备方法和应用，具体属于电化学发光检测领域。包括：(1)黑磷掺杂的PTC‑NH₂的复合材料(BP/PTC‑NH₂)以及Co‑Ni/MOF的制备；(2)电化学发光适配体传感器的制备；(3)将BP/PTC‑NH₂与Co‑Ni/MOF共同修饰到玻碳电极表面，提高电化学发光的灵敏度和稳定性，随后负载适配体即可获得电化学发光适配体传感器，该传感器可特异性识别氯霉素,检测范围为1.0×10^‑13mol/L～1.0×10^‑6mol/L，最低检测限为2.9×10^‑14mol/L。本发明检测氯霉素的灵敏度高、特异性强、操作简单。

Description

一种用于特异性检测氯霉素的电化学发光适配体传感器及其 制备方法和应用

技术领域

本发明属于电化学发光检测领域，涉及一种用于特异性检测氯霉素的电化学发光适配体传感器及其检测方法。尤其涉及将适配体分子负载于 Co-Ni/MOF/BP/PTC-NH₂修饰的玻碳电极表面，即以 apt/Co-Ni/MOF/BP/PTC-NH₂/GCE电极为传感元件，定量检测河水中氯霉素的电化学发光分析方法。

背景技术

氯霉素(Chloramphenicol，CAP)，是首个可以完全经化学合成方法大量生产的广谱抗生素，具有药性稳定、价格低廉等优点，并对革兰氏阴性菌引起的感染性疾病有很好的治疗效果。基于此，氯霉素被广泛应用于人和动物细菌性疾病的治疗以及畜牧、水产饲料添加剂中。但CAP不仅具有严重的毒副作用，而且高温下稳定，不易分解，半衰期较长，一旦通过食物链传递给人类，将会抑制骨髓造血导致血小板减少，诱使细胞癌变，引起中枢或外围神经系统疾病。因此，自 1994年起，世界上多个国家和地区规定不得在食品中检测出CAP。中国农业部也于2000年将氯霉素从《中国兽药典》中删除。

目前，已有报道的检测氯霉素的方法包括微生物法，气相色谱-质谱法(GC-MS)，酶联免疫吸附测定法(ELISA)，高效液相色谱-质谱法(HPLC-MS)，光电化学分析法(PEC)及电化学法等。但大多数分析法的仪器操作专业度高，前处理过程复杂，耗时长，尤其是微生物法的结果容易出现假阳性、色谱法的检测费用昂贵，因此它们难以推广到市场中进行现场检测。基于此，开发一种简单快速、选择性好的检测氯霉素的方法是必要且极其重要的。

核酸适配体作为一种新型识别元件，合成简单快速、成本低、选择性好、性质稳定且易于修饰标记，是一种优良的抗体替代识别元件。电化学发光(ECL)也称为电致化学发光，是化学发光与电化学的结合和延伸，因而它具有化学发光方法优点如灵敏度高、线性范围宽、观察方便和仪器简单；同时具有许多化学发光方法无法比拟的优点，如重现性好、试剂稳定、控制容易等优点。并且，无需引入外部光源，在光电倍增管等光学仪器的辅助下采集发光强度图谱，并建立其与待测物关系从而实现微量分析的一种方法。目前在现有技术中，存在一些有关电化学发光适配体传感器，其中CN201911323033.9一种电化学发光适配体传感器及检测氯霉素的方法，制备得到Ti₃C₂-ZnO纳米复合材料修饰的电化学发光适配体传感器，用于对氯霉素检测,检测范围为0.1ng/mL～100ng/mL，最低检测限为 0.019ng/mL，检测范围窄。因此如何制备得到一种电极材料，得到一种新型高选择性高灵敏度的ECL传感器，更有利于氯霉素的检测，是本发明研究的重点。

发明内容

本发明的目的是提供一种检测氯霉素的电化学发光适配体传感器，具有灵敏度高、重现性好、选择性好和线性范围宽的优点。

本发明是基于适配体负载在由纳米复合材料Co-Ni/MOF/BP/PTC-NH₂修饰玻碳电极的表面而成。本发明充分利用Co-Ni/MOF与BP/PTC-NH₂两者的静电相互作用共同修饰到玻碳电极表面，使得电化学发光的灵敏度和稳定性显著提高该共同修饰后灵敏度提高，是由于导电性、电化学性能改善导致的，并且 BP/PTC-NH₂和Co-Ni/MOF之间具有协同作用，Co-Ni/MOF还具有催化作用，可以进一步提升BP/PTC-NH₂的ECL响应值。

再通过静电吸附作用负载适配体进而获得电化学发光适配体传感器(简称 apt/Co-Ni/MOF/BP/PTC-NH₂/GCE传感器)，可特异性识别目标分子氯霉素，提高了对氯霉素检测的选择性。

进一步的，该电化学发光适配体传感器是由含有5'-ACT TCA GTG AGT TGT CCCACG GTC GGC GAG TCG GTG GTA G-3'碱基序列的适配体

进一步的，纳米复合材料Co-Ni/MOF/BP/PTC-NH₂修饰玻碳电极的制备方法如下：

S1.BP/PTC-NH₂的制备：通过液相剥离法制备得到黑磷量子点(BPQDs)悬浮液，将3,4,9,10-苝四酸二酐(PTCDA)溶解于丙酮中，并向其中加入乙二胺和黑磷量子点悬浮液，冰水浴下搅拌、离心、洗涤、干燥，得到红棕色粉末，即 BP/PTC-NH₂；将BP/PTC-NH₂分散于超纯水中，使其分散均匀，得到BP/PTC-NH₂的水分散液

S2.Co-Ni/MOF复合材料的制备：分别将硝酸钴和硝酸镍、2-甲基咪唑溶解于甲醇中，混合、搅拌均匀，静置、离心、洗涤、干燥，得到淡黄色粉末，即 Co-Ni/MOF；将Co-Ni/MOF分散于超纯水中，使其分散均匀，得到Co-Ni/MOF 的水分散液。

S3.修饰电极apt/Co-Ni/MOF/BP/PTC-NH₂/GCE的制备：将玻碳电极抛光，依次用硝酸和无水乙醇、去离子水分别超声，自然晾干待用，依次移取步骤S1 中的BP/PTC-NH₂水分散液和步骤S2中的Co-Ni/MOF水分散液滴涂在玻碳电极表面，自然晾干后得到Co-Ni/MOF/BP/PTC-NH₂修饰电极，再通过静电吸附作用将所述适配体负载在Co-Ni/MOF/BP/PTC-NH₂纳米复合材料修饰的玻碳电极表面，自然晾干，制得所述电化学发光适配体传感器(apt/Co-Ni/MOF/BP/PTC-NH₂/GCE)。

进一步的，步骤S1中所得BP/PTC-NH₂的分散液的浓度为0.5mg/mL。 Co-Ni/MOF复合时，BP/PTC-NH₂在此浓度下可以达到最佳复合效果，得到最佳电化学发光强度，如果浓度过高，会使电化学发光强度值超量程，而无法准确测量，无法进行检测。

进一步的，将适配体负载在Co-Ni/MOF/BP/PTC-NH₂纳米复合材料修饰的玻碳电极表面的具体方法为：首先向含有KCl、NaCl、MgCl₂和乙二胺四乙酸的Tris-HCl缓冲溶液中加入所述适配体，配制适配体浓度为0.5～4μmol/L的适配体溶液，然后移取所述适配体溶液并将其滴涂在所述Co-Ni/MOF/BP/PTC-NH₂纳米复合材料修饰的玻碳电极表面。

进一步的，适配体溶液中适配体的浓度为2μmol/L。在本发明中，对适配体浓度进行优化，优化范围为0.5～4μmol/L，最优选的适配体浓度为2μmol/L，因为在此浓度下，电化学发光强度猝灭效果不大，减少非导电蛋白质对光强的影响，从而实现更好的检测效果。

进一步的，依次移取步骤S1中BP/PTC-NH₂的分散液为1μL，步骤S2中 Co-Ni/MOF的分散液为2μL，适配体为3μL。

一种基于电化学发光适配体传感器检测氯霉素的方法，所述方法为：

以如上所述的电化学发光适配体传感器作为工作电极，Ag/AgCl为参比电极，铂丝电极为对电极组成三电极体系，样品中的氯霉素被定量捕捉到传感器的表面，通过产生的发光信号用于检测。

进一步的，具体步骤为：

步骤1，含K₂S₂O₈的PBS缓冲溶液的配制：用pH为7.4的0.1mol/L的PBS 缓冲溶液配制含0.05mol/L K₂S₂O₈的PBS缓冲溶液；

步骤2，不同浓度的氯霉素标准溶液的配制：准确称取一定量的氯霉素，用水配制1.0×10^-4mol/L溶液，将一定量氯霉素溶液加入含0.05mol/L K₂S₂O₈的0.1 mol/L pH＝7.4的PBS缓冲溶液中，得到一系列不同浓度的氯霉素标准溶液，浓度范围为1.0×10^-13mol/L～1.0×10^-6mol/L。

步骤3，标准曲线的绘制：将所述电化学发光适配体传感器置于步骤2配制的不同浓度的氯霉素标准溶液中浸泡相同时间，使电化学发光适配体传感器结合氯霉素，然后取出并淋洗，作为工作电极，Ag/AgCl为参比电极，铂电极为对电极，组成三电极体系，以步骤1中的含K₂S₂O₈的PBS缓冲溶液为电解液，在-1.7～ 0V的电化学窗口范围内，光电倍增管高压700V，扫速0.1V/s，进行循环伏安扫描，记录发光强度-时间曲线，建立电化学发光适配体传感器结合氯霉素前后的发光强度差值与氯霉素标准溶液中的氯霉素浓度对数值的线性关系，得到相应的线性回归方程；

步骤4，样品中氯霉素的检测：所述样品先经过预处理再用步骤1中的含 K₂S₂O₈的PBS缓冲溶液调节pH，然后放入电化学发光适配体传感器浸泡相同时间，使电化学发光适配体传感器结合氯霉素，然后取出并淋洗，作为工作电极，再采用步骤3方法检测发光强度，再根据线性回归方程计算出样品中氯霉素的浓度。

进一步的，步骤3中浸泡时间为25min。

相较于现有技术，本发明具有以下有益效果：

目前PTCA的衍生物PTC-NH₂，在电化学发光方面的应用很少，且由于 PTC-NH₂的电化学发光响应值不稳定且较低，导致其应用受限，本发明发现掺杂了黑磷量子点(BPQDs)后，可使其光强有所增加；而Co-Ni/MOF单独使用时ECL响应值很低，难以起到识别作用。而将基于黑磷量子点掺杂的PTC-NH₂与双金属有机框架Co-Ni/MOF纳米复合材料的电化学发光适配体传感器，两者材料通过静电相互作用结合，可以获稳定的电化学发光性能。此外Co-Ni/MOF 具有催化作用，协同后使整体的响应值大幅提升并且十分稳定。

本发明充分利用了适配体和电化学发光传感器的优势，通过氯霉素对该体系 ECL信号强度的增强的机理，成功实现对氯霉素的灵敏检测，该传感平台可特异性识别检测物氯霉素，具有高选择性。本发明的检测范围为1.0×10^-13～1.0× 10^-6mol/L，最低检测限为2.9×10^-14mol/L。本发明检测氯霉素的操作简单、选择性好、检测成本低、灵敏度高。本发明对推广适配体传感器在环境及食品安全方面的实际应用具有重要的意义。

附图说明

图1为实施例1中所构建的电化学发光适配体传感器在与不同浓度的氯霉素结合后的ECL响应图，其中氯霉素的浓度按曲线峰值高低从前到后依次为： 1.0×10^-13mol/L、1.0×10^-12mol/L、1.0×10^-11mol/L、1.0×10^-10mol/L、1.0×10^-9mol/L、 1.0×10^-8mol/L、1.0×10^-7mol/L、1.0×10^-6mol/L。

图2为实施例1加入氯霉素前后发光强度的差值与氯霉素胺浓度对数值的标准曲线；

图3为制备的BP/PTC-NH₂(A)、Co-Ni/MOF(B)的扫描电镜图。

图4为实施例1传感器对氯霉素的特异性检测。

具体实施例

本发明结合下面实施例作进一步详述：

实施例1：

(1)BP/PTC-NH₂复合材料的制备：

将5mg黑磷块状固体分散到1mL NMP中，研磨20min，将混合物分散在含有4mL NMP的小玻璃瓶中。仔细密封后，将该小瓶在100W的功率下在冰浴中超声处理8h，随后将所得分散体在7000rpm下离心20min，取上清液，最后以12000rpm离心20min，最后获得BPQDs悬浮液。

将0.2g PTCDA溶解于10mL丙酮中，并向其中加入2mL乙二胺和6mL黑磷量子点悬浮液，冰水浴下搅拌2h，通过离心、洗涤、干燥，得到红棕色粉末，即BP/PTC-NH₂，并将5mg复合材料分散在10mL水中以备使用。

(2)Co-Ni/MOF复合材料的制备：

将0.262g Co(NO₃)₂·6H₂O和0.291g Ni(NO₃)₂·6H₂O溶解于30mL甲醇中，得到溶液A，将0.164g 2-甲基咪唑溶解于10mL甲醇中，得到溶液B；将两者混合，搅拌均匀，室温静置24h，通过离心、洗涤、干燥，得到淡黄色粉末，即 Co-Ni/MOF，并将10mg复合材料分散在10mL水中以备使用。

(3)修饰电极apt/Co-Ni/MOF/BP/PTC-NH₂/GCE的制备：

将玻碳电极抛光，依次用硝酸和无水乙醇、去离子水分别超声，自然晾干待用，用微量注射器依次移取1μL 0.5mg/mL的BP/PTC-NH₂水分散液，待自然晾干后，再滴涂2μL1mg/mL的Co-Ni/MOF水分散液，自然晾干后得到 Co-Ni/MOF/BP/PTC-NH₂/GCE修饰电极，自然晾干待用；在 Co-Ni/MOF/BP/PTC-NH₂/GCE修饰电极表面再滴涂3μL配制好的含适配体的Tris-HCl缓冲溶液，自然晾干6h，得到apt/Co-Ni/MOF/BP/PTC-NH₂修饰电极，置于4℃的冰箱中放置6h，即得到ECL适配体传感器。

识别分子apt序列为：apt:5'-ACT TCA GTG AGT TGT CCC ACG GTC GGC GAG TCGGTG GTA G-3'(厂家为生工生物工程(上海)股份有限公司)

(4)标准曲线的绘制

将修饰电极apt/Co-Ni/MOF/BP/PTC-NH₂/GCE作为工作电极，铂电极作为辅助电极，Ag/AgCl作为参比电极，组成三电极体系，将三电极体系置于一系列氯霉素浓度(1.0×10^-13mol/L、1.0×10^-12mol/L、1.0×10^-11mol/L、1.0×10^-10mol/L、 1.0×10^-9mol/L、1.0×10^-8mol/L、1.0×10^-7mol/L和1.0×10^-6mol/L)含有0.05mol/L 的K₂S₂O₈的pH 7.4的0.1mol/L PBS的缓冲溶液中，在-1.7～0V的电化学窗口范围内，光电倍增管高压700V，扫速0.1V/s，进行循环伏安扫描，记录电位-发光强度曲线(E-ECL)，建立加入氯霉素前后的发光强度差值与氯霉素浓度对数值的线性关系，得到相应的线性回归方程为：△ I_ECL＝5227.72334+1034.95524LogC(mol/L)，相关系数(R)为0.9968。线性回归方程的检测范围为1.0×10^-13～1.0×10^-6mol/L，最低检测限为2.9×10^-14mol/L。

(5)样品的检测

取某河水水样，自然静置一段时间后，离心分离吸取上层溶液，通过0.22μm 滤膜过滤收集滤液，加入含有0.05mol/LK₂S₂O₈的0.1mol/L的PBS缓冲溶液调 pH至7.4，取25mL所得溶液用于电化学发光分析，按照步骤(3)同样的电化学发光测试条件进行测试，记录发光强度，按步骤(4)所得的线性回归方程计算出待检测样品中氯霉素的浓度，其结果列于表1中。

本发明的显著优点是开发了一种检测氯霉素的电化学发光传感器及其制备方法，与普通的电化学发光传感器相比，具有以下显著优点：在材料上，以 BP/PTC-NH₂为基底材料，通过二次滴涂Co-Ni/MOF得到纳米复合材料， BP/PTC-NH₂第一次被应用到电化学发光领域，其次Co-Ni/MOF作为双金属MOF，不仅材料新颖，还具有催化作用，可以大幅度提高BP/PTC-NH₂的电化学发光强度以及传感器的稳定性。基于此，将两种材料结合，从而实现进一步的信号放大，加入适配体，使得该传感器可以特异性检测氯霉素。

并将实施例1制备的用于检测氯霉素的电化学发光传感器进步抗干扰检测，其中将适配体孵育后的工作电极分别在10^-6M卡那霉素(KAN)、链霉素(SM)、四环素(TE)、林可霉素(LIN)及环丙沙星(CIP)干扰物，以及在10^-8M的氯霉素(CAP)标准液中测试，并再将工作电极在上述物质的混合液中检测，检测结果见图4。

从图4可知，具有优异电化学性能的修饰电极上孵育适配体后对氯霉素起到选择性识别效果，混合后100倍浓度的干扰物对氯霉素的检测影响也很微小。因此该工作电极可以实现氯霉素抗干扰的选择性检测。

比较例1：

(1)apt/BP/PTC-NH₂/GCE修饰电极的制备

将玻碳电极抛光，依次用硝酸和无水乙醇、去离子水分别超声，自然晾干待用。用微量进样器移取1.0μL 0.5mg/mL BP/PTC-NH₂水溶液滴于洁净的玻碳电极表面，室温干燥，得到BP/PTC-NH₂/GCE修饰电极；在BP/PTC-NH₂/GCE修饰电极表面再滴涂1.0μL 2μM适配体(同实施例1)，自然晾干6h，得到 apt/BP/PTC-NH₂/GCE传感器，作为电化学发光测试的工作电极。

(2)标准曲线的绘制

以apt/BP/PTC-NH₂/GCE修饰电极作为工作电极，铂电极作为辅助电极， Ag/AgCl作为参比电极，组成三电极体系，并以含有0.05mol/L的K₂S₂O₈的 pH＝7.4的0.1mol/L PBS缓冲液为空白溶液检测发光强度，将三电极体系置于一系列氯霉素浓度(1.0×10^-13mol/L、1.0×10^-12mol/L、1.0×10^-11mol/L、1.0× 10^-10mol/L、1.0×10^-9mol/L、1.0×10^-8mol/L、1.0×10^-7mol/L和1.0×10^-6mol/L)的标准液中浸泡25min，取出后淋洗，作为工作电极，在-1.7～0V的电化学窗口范围内，光电倍增管高压700V，扫速0.1V/s,进行循环伏安扫描，记录E-ECL 曲线，建立加入氯霉素前后的发光强度差值与氯霉素浓度对数值的线性关系，得到相应的线性回归方程。

(3)样品的检测

取25mL的处理后的河水加入到含有0.05mol/L的K₂S₂O₈的pH 7.4的0.1 mol/L PBS的缓冲溶液中，用于电化学发光检测，按上述步骤(2)所对应的线性回归方程计算出待检测样品中氯霉素的浓度，其结果列于表1中。

比较例2：

(1)apt/Co-Ni/MOF/GCE修饰电极的制备

将玻碳电极抛光，依次用硝酸和无水乙醇、去离子水分别超声，自然晾干待用。用微量进样器移取2.0μL 1.0mg/mL Co-Ni/MOF材料的水溶液滴于洁净的玻碳电极表面，室温干燥，得到Co-Ni/MOF/GCE修饰电极；在Co-Ni/MOF/GCE 修饰电极表面再滴涂3.0μL 2μM适配体(同实施例1)，自然晾干6h，得到apt/ Co-Ni/MOF/GCE传感器，作为电化学发光测试的工作电极。

(2)标准曲线的绘制

以apt/Co-Ni/MOF/GCE修饰电极作为工作电极，铂电极作为辅助电极， Ag/AgCl作为参比电极，组成三电极体系，并以含有0.05mol/L的K₂S₂O₈的pH＝7.4的0.1mol/L PBS缓冲液为空白溶液检测发光强度，将三电极体系置于一系列氯霉素浓度(1.0×10^-13mol/L、1.0×10^-12mol/L、1.0×10^-11mol/L、1.0×10^-10mol/L、 1.0×10^-9mol/L、1.0×10^-8mol/L、1.0×10^-7mol/L和1.0×10^-6mol/L)含有0.05mol/L的 K₂S₂O₈的pH 7.4的0.1mol/L PBS的缓冲溶液中，在-1.7～0V的电化学窗口范围内，光电倍增管高压700V，扫速0.1V/s，进行循环伏安扫描，记录E-ECL曲线，建立加入氯霉素前后的发光强度差值与氯霉素浓度对数值的线性关系，得到相应的线性回归方程。

(3)样品的检测

取25mL经处理后的河水加入到含有0.05mol/L的K₂S₂O₈的pH 7.4的0.1 mol/L PBS的缓冲溶液中，用于电化学发光检测，按上述步骤(2)所对应的线性回归方程计算出待检测样品中氯霉素的浓度，其结果列于表1中。

表1河水中氯霉素的测定结果

备注：a为三次测定的平均值

如表1所示，样品平行检测3次，相对标准偏差小于5％，加标回收率范围为97％～102％。以上结果表明，不用Co-Ni/MOF/BP/PTC-NH₂复合材料修饰而单独用BP/PTC-NH₂或是Co-Ni/MOF修饰的玻碳电极后进一步组装传感元件虽然会有ECL响应值的变化，但无法检测出一系列不同浓度的氯霉素，这也是由于BP/PTC-NH₂和Co-Ni/MOF单独的ECL响应值很低且稳定性不是很好，导致灵敏度低，达不到检测效果。本发明的复合电极材料用于检测河水中的氯霉素是可行的。

以上所述，仅是本发明的较佳实施例而已，并非对本发明作任何形式上的限制，虽然本发明已以较佳实施例揭露如上，然而并非用以限定本发明，任何熟悉本专业的技术人员，在不脱离本发明技术方案范围内，当可利用上述揭示的技术内容做出些许更动或修饰为等同变化的等效实施例，但凡是未脱离本发明技术方案的内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与修饰，均仍属于本发明技术方案的范围内。

Claims (10)

1.一种用于特异性检测氯霉素的电化学发光适配体传感器，其特征在于：所述的电化学发光适配体传感器由适配体负载于复合材料Co-Ni/MOF/BP/PTC-NH₂修饰玻碳电极的表面而成，用于电化学发光检测氯霉素。

2.根据权利要求1所述的用于特异性检测氯霉素的电化学发光适配体传感器，其特征在于：所述氯霉素适配体核苷酸序列如下所示：

apt:5'-ACT TCA GTG AGT TGT CCC ACG GTC GGC GAG TCG GTG GTA G-3'。

3.根据权利要求1所述用于特异性检测氯霉素的电化学发光适配体传感器的制备方法，其特征在于：所述apt/Co-Ni/MOF/BP/PTC-NH₂/GCE的制备方法如下：

S1.BP/PTC-NH₂的制备：首先通过液相剥离法制得黑磷量子点(BPQDs)悬浮液，将PTCDA溶解在丙酮、乙二胺中，然后向其中加入黑磷量子点悬浮液，通过离心得到红棕色沉淀物，最终洗涤、干燥，制得深红色粉末，即BP/PTC-NH₂；将BP/PTC-NH₂分散于超纯水中，使其分散均匀，得到BP/PTC-NH₂的水分散液；

S2.Co-Ni/MOF的制备：将硝酸钴和硝酸镍溶解于甲醇中，得到溶液A；将2-甲基咪唑溶解于甲醇中，得到溶液B；将A、B溶液混合静置，通过离心、洗涤、干燥，得到淡黄色粉末，即Co-Ni/MOF；将Co-Ni/MOF分散于超纯水中，超声使其分散均匀，得到Co-Ni/MOF的水分散液；

S3.修饰电极apt/Co-Ni/MOF/BP/PTC-NH₂/GCE的制备：将玻碳电极抛光，超声清洗，室温下晾干，获得前处理后的玻碳电极待用；依次移取步骤S1中的BP/PTC-NH₂的水分散液和步骤S2中的Co-Ni/MOF的水分散液并将其滴涂在经前处理后的玻碳电极表面，自然晾干，得到所述的Co-Ni/MOF/BP/PTC-NH₂/GCE；然后，再滴涂适配体，得到apt/Co-Ni/MOF/BP/PTC-NH₂/GCE，低温储存备用，得到ECL适配体传感器。

4.根据权利要求3所述用于特异性检测氯霉素的电化学发光适配体传感器的制备方法，其特征在于：所述步骤S1中所得BP/PTC-NH₂的水分散液的浓度为0.5mg/mL。

5.根据权利要求3所述的用于特异性检测氯霉素的电化学发光适配体传感器的制备方法，其特征在于，所述步骤S2所得Co-Ni/MOF的水分散液的浓度为1mg/mL。

6.根据权利要求3所述的用于特异性检测氯霉素的电化学发光适配体传感器的制备方法，其特征在于，将适配体负载在Co-Ni/MOF/BP/PTC-NH₂纳米复合材料修饰的玻碳电极表面的具体方法为：首先向含有KCl、NaCl、MgCl₂和乙二胺四乙酸的Tris-HCl缓冲溶液中加入所述适配体，配制适配体浓度为0.5～4μmol/L的适配体溶液，然后移取所述适配体溶液并将其滴涂在所述Co-Ni/MOF/BP/PTC-NH₂纳米复合材料修饰的玻碳电极表面。

7.根据权利要求6所述的用于特异性检测氯霉素的电化学发光适配体传感器的制备方法，其特征在于，所述适配体溶液中适配体的浓度为2μmol/L。

8.一种检测氯霉素的电化学发光适配体传感器的应用，其特征在于，以权利要求1-2任一项所述的电化学发光适配体传感器作为工作电极，Ag/AgCl为参比电极，铂丝电极为对电极组成三电极体系，样品中的氯霉素被定量捕捉到传感器的表面，通过产生的发光信号实现氯霉素的检测。

9.根据权利要求8所述的检测氯霉素的电化学发光适配体传感器的应用，其特征在于，具体步骤为：

A1.含K₂S₂O₈的PBS缓冲溶液的配制：

A2.不同浓度的氯霉素标准溶液的配制：首先配制1×10^-4mol/L的氯霉素溶液，用水溶解，然后将1×10^-4mol/L的氯霉素溶液用水溶液进行稀释，得到若干不同浓度的氯霉素标准溶液，氯霉素标准溶液的浓度范围为1.0×10^-13～1.0×10^-6mol/L；

A3.标准曲线的绘制：将所述电化学发光适配体传感器置于步骤A2配制的不同浓度的氯霉素标准溶液中浸泡相同时间，使电化学发光适配体传感器结合氯霉素，然后取出并淋洗，作为工作电极，Ag/AgCl为参比电极，铂电极为对电极，组成三电极体系，以步骤A1中的含K₂S₂O₈的PBS缓冲溶液为电解液，在-1.7～0V的电化学窗口范围内，光电倍增管高压700V，扫速0.1V/s，进行循环伏安扫描，记录发光强度-时间曲线，建立电化学发光适配体传感器结合氯霉素前后的发光强度差值与氯霉素标准溶液中的氯霉素浓度对数值的线性关系，得到相应的线性回归方程；

A4.样品中氯霉素的检测：所述样品先经过预处理再用步骤A1中的含K₂S₂O₈的PBS缓冲溶液调节pH，然后放入电化学发光适配体传感器浸泡相同时间，使电化学发光适配体传感器结合氯霉素，然后取出并淋洗，作为工作电极，再采用步骤A3方法检测发光强度，再根据线性回归方程计算出样品中氯霉素的浓度。

10.根据权利要求9所述的检测氯霉素的电化学发光适配体传感器的应用，其特征在于，含K₂S₂O₈的PBS缓冲溶液的配制为：用pH为7.4的0.1mol/L的PBS缓冲溶液配制含0.05mol/L K₂S₂O₈的PBS缓冲溶液。

Images