CN113068782A

CN113068782A - 一种褐色活性乳酸菌饮品及其制备方法

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Publication number: CN113068782A
Application number: CN202110357517.6A
Authority: CN
Inventors: 张志东; 朱静; 艾尼江; 张轶腾; 曾军; 唐琦勇; 古丽尼沙·沙依木; 顾美英; 林杨; 吴天昊; 孙建
Original assignee: Institute Of Microbial Applications Xinjiang Academy Of Agricultural Sciences (china Xinjiang-Armenia Bioengineering Research And Development Center)
Current assignee: Institute Of Microbial Applications Xinjiang Academy Of Agricultural Sciences (china Xinjiang-Armenia Bioengineering Research And Development Center)
Priority date: 2021-04-01
Filing date: 2021-04-01
Publication date: 2021-07-06
Anticipated expiration: 2041-04-01
Also published as: CN113068782B

Abstract

本发明公开了一种褐色活性乳酸菌饮品及其制备方法。褐色活性乳酸菌饮品包括乳杆菌发酵液92～95％，蜂蜜4～7％，轻质碳酸钙0.3～0.5％，阿斯巴甜0.005～0.01％，琼脂0.05～0.15％，黄原胶0.05～0.15％，CMC‑Na0.1～0.2％。本发明利用从吉尔吉斯斯坦优良传统乳制品中筛选得到一株具有优良特性的乳酸菌，经鉴定为潜在的乳杆菌新菌株，利用其耐盐、耐酸、发酵产生γ‑氨基丁酸的特性，将其发酵液与蜂蜜、黄原胶等混合获得一种褐色活性乳酸菌饮品，制备工艺简单，产品风味独特、低糖低卡，同时活菌数含量高、储藏时间长，不仅能调节肠道菌群、提高免疫力，又能补充人体所需氨基酸、具有多种保健功效，有效解决了发酵乳在常温下货架期短且活菌数低的难题，具有良好的发展前景。

Description

一种褐色活性乳酸菌饮品及其制备方法

技术领域

本发明属于食品功能饮品发酵技术领域，具体地涉及一种褐色活性乳酸菌饮品及其制备方法。

背景技术

乳酸菌是人体肠道中正常菌群之一，在人体消化系统内，乳酸菌是不可缺少的有益菌类。我国早在5000年前就有食用乳酸菌的习惯，多体现在食品酿造及发酵工业上。乳酸菌在发酵过程中能将大分子的蛋白质分解成小分子的肽和氨基酸，将乳糖分解成乳酸；同时为食品工业中的重要菌种，乳酸菌还能产生多种代谢产物，赋予食品特有的风味和香气，改善食品的营养和品质。乳酸菌对人体具有很好的保健功能，主要表现在：乳酸菌能提高营养利用率、促进营养吸收、维持肠道菌群的微生态平衡、增强机体免疫功能和预防、抑制肿瘤发生，还能够控制内毒素、降低胆固醇及延缓机体衰老等。因此，乳酸菌在食品中被广泛应用，其中尤以乳饮品制品最为突出。

乳酸菌饮品是指以乳或乳制品为原料,经乳酸菌发酵制得的乳液中加入水,以及食糖和(或)甜味剂、酸味剂、果汁、茶、咖啡、植物提取液等的一种或几种调制而成的饮品。根据其是否经过杀菌处理而区分为杀菌型和未杀菌型，即：非活性乳酸菌饮品和活性乳酸菌饮品。非活性乳酸菌饮品，也就是通常所说的乳酸菌饮品，一般是以鲜乳或乳制品为原料，经杀菌、冷却，接种乳酸菌发酵剂，再向发酵乳中添加白砂糖、稳定剂等辅料调配，再经均质、杀菌、灌装、巴氏杀菌、包装而成，一般不具有活性，其中的乳酸菌在生产过程中的加热无菌处理阶段时已被杀灭，乳酸菌含量几乎为0cfu/ml。近几年来，在广大的饮品市场中流行着以乳酸菌为发酵菌种制备的非活性乳酸菌饮品，但随着人们生活水平的提高，消费者对养生保健越来越重视，对保健品的需求量也越来越大，人们对发酵乳饮品亦开始有了认识，活性乳酸菌饮品亦开始在市面上渐露头角。作为含有活性益生菌的健康型饮品，其风味独特、口感清爽，倍受消费者青睐，同时其生产工艺简便、成本较低，在我国乳饮品市场中的优势越来越强，但所占比例仍然较低。因此，开发具有新的功能、风味口感具佳的活性乳酸菌饮品具有良好的市场前景，另外，乳酸菌饮品的稳定性差仍然是目前亟待解决的问题之一。

发明内容

本发明针对乳酸菌因其生存环境苛刻，以鲜乳、果蔬等为发酵基质，大量的益生成分不能够完全代谢出来，导致其发酵产量较低，从而限制了乳酸菌的开发和应用，且现有文献和专利未见有报道有关新发现的新菌种乳杆菌Lactobacillus sp.Z6在乳酸饮品中的应用。本发明旨在于提供一种利用筛选获得的新菌种活性乳酸菌发酵液配制保健饮品及其制备方法，采用从吉尔吉斯斯坦特色乳制品中分离筛选获得一株乳杆菌Lactobacillus sp.潜在新菌种Z6，利用乳杆菌Lactobacillus sp.Z6的发酵液与蜂蜜、轻质碳酸钙、阿斯巴甜等混合获得褐色活性乳酸菌饮品，该方法获得的产品配方简明、工艺简单、安全健康，保留了乳酸菌发酵产物中所有功能性物质，提高了功效性成份的利用率，更利于人体吸收利用，对于充分利用乳酸菌资源、增加乳酸菌制品的种类、提高乳酸菌的经济价值都具有较高的理论意义和市场价值。

本发明提供一种褐色活性乳酸菌饮品，以重量百分比计，包括以下原料组分：乳杆菌发酵液92～95％，蜂蜜4～7％，轻质碳酸钙(食品级)0.3～0.5％，阿斯巴甜0.005～0.01％，琼脂0.05～0.15％，黄原胶0.05～0.15％，CMC-Na 0.1～0.2％。

本发明中，所述乳杆菌发酵液活菌数≥1×10¹⁰个/mL

本发明中，乳杆菌Lactobacillus sp.Z6筛选分离来自吉尔吉斯斯坦特色乳制品中，并经过本领域熟知公认的菌种系统分子水平鉴定及菌种的生理生化系统试验验证，证实获得的乳杆菌范畴内属于一种典型的新菌种，该菌种乳杆菌Lactobacillus sp.Z6已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏号：CGMCC No.19870，保藏日期：2020年5月25日。

本发明中，乳杆菌Lactobacillus sp.Z6的16S rDNA和pheS序列如SEQID NO:1和SEQ ID NO:2所示。

本发明同时提供一种褐色活性乳酸菌饮品的制备方法，具体包括如下步骤：

(1)将斜面保藏的乳杆菌Lactobacillus sp.Z6接种到专用固体培养基上，于恒温培养箱中30℃条件下培养1～2d，得到活化的乳杆菌Lactobacillus sp.Z6菌种。

(2)挑取步骤(1)所得活化的乳杆菌Lactobacillus sp.Z6菌种一环转接至200mL三角瓶专用液体培养基中，于30～37℃，摇床转速120～150r/min，振荡培养24h，得到乳杆菌Lactobacillus sp.Z6种子培养液。

(3)将步骤(2)中的种子培养液转接至200mL三角瓶专用发酵培养基中，按照质量体积比3～5％的接种量接种，温度30～37℃，摇床转速120～150r/min，振荡培养2～3d，发酵瓶中乳酸菌含量≥1×10¹⁰个/mL时，得到乳杆菌发酵液。

(4)将步骤(3)所得乳杆菌发酵液与蜂蜜、轻质碳酸钙、阿斯巴甜混合均匀，加入加热至完全溶解黄原胶、CMC-Na与琼脂，混和均匀，分别进行灌装检测，制备得到褐色活性乳酸菌饮品。

本发明褐色活性乳酸菌饮品的制备方法中，所述专用液体培养基为：蛋白胨10g，牛肉膏5g，酵母粉4g，葡萄糖20g，吐温801mL，K₂HPO₄·7H₂O 2g，无水乙酸钠3.02g，柠檬酸三铵2g，MnSO₄·4H₂O0.05g，MgSO₄·7H₂O 0.2g，H₂O 1000mL，pH 5.7左右，于121℃灭菌15min，冷却备用；专用固体培养基：液体培养基中加入2％的琼脂，121℃，灭菌15min；3％CaCO₃的固体培养基：专用固体培养基中加入3％的CaCO₃，121℃，灭菌15min。

本发明褐色活性乳酸菌饮品的制备方法中，所述专用发酵培养基为：蛋白胨10g，酵母粉4g，葡萄糖20g，K₂HPO₄·7H₂O 2g，无水乙酸钠3.02g，柠檬酸三铵2g，MnSO₄·4H₂O0.05g，MgSO₄·7H₂O 0.2g，H₂O 1000mL，pH＝5.7左右，于121℃灭菌15min，冷却备用。

通过本发明提供的上述技术方案实施本发明内容，可以达到以下有益效果：

(1)本发明提供的乳杆菌Lactobacillus sp.潜在新菌种Z6，具有耐低温和高温生长的特点，菌种生长温度范围比常见的乳杆菌具有明显差异，耐高盐和高pH，具有良好的蛋白质水解能力，能将食品中的大分子物质分解为小分子肽，从而更利于人体对营养物质的吸收。同时其具有良好的抑菌性能，在一定程度上能防止食品的污染变质，延缓保质期。

(2)本发明提供的乳杆菌(Lactobacillus)Z6发酵液经过48h的发酵，发酵液中的乳酸菌含量≥1×10¹⁰CFU/mL，pH为3.5左右，活菌数高，符合作为乳酸菌饮品调配的基质。

(3)本发明制备的褐色活性乳酸菌饮品，生产工艺简单，得到的产品口感细腻、丰富、纯正。酸甜可口，香气、风味等感官良好；感官评价试验结果显示，色泽得分1.8分；气味得分2.5分；口感得分2.6分；组织状态得分2.2分；100人中有90以上的人喜欢本发明产品。产品安全健康，常温下保藏，活菌数大于10⁹CFU/mL的保质期大于3个月。

(4)本发明褐色活性乳酸菌饮品保留了乳酸菌发酵产物中的所有功能性物质，富含蛋白质及多种氨基酸物质，且没有检测到糖类物质，属于低卡饮品，符合现代消费观念。

(5)本发明制备的褐色活性乳酸菌饮品是一种含有活性乳酸菌、颜色呈现褐色的饮品，属于发酵型酸性乳饮品，该饮品也可作为基料经过二次配料后便可制得褐色活性乳酸菌饮品，其特殊益生菌经长时间发酵，可产生高达300亿的活菌数量，能快速提升人体肠道益生菌水平，从而有效抑制腐败菌和致病菌的繁殖和成活，调节人体肠道菌群，更利于人体吸收利用，对于充分利用乳酸菌资源、增加乳酸菌制品的种类、提高乳酸菌的经济价值都具有较高的理论意义和市场价值。

附图说明：

图1为乳杆菌Lactobacillus sp.Z6的16S rDNA基因序列系统发育树。

图2为乳杆菌Lactobacillus sp.Z6的pheS基因序列系统发育树。

图3为乳杆菌Lactobacillus sp.Z6的菌落形态。

图4为本发明褐色活性乳酸菌饮品的制备流程图。

图5为本发明乳酸菌发酵液制备过程中的乳酸菌含量及其酸度变化。

具体实施方式

下面，举实施例说明本发明，但是，本发明并不限于下述的实施例。本发明中选用的所有原辅材料，以及选用的菌种培养方法都为本领域熟知选用的，本发明中涉及到的％都为重量百分比，除非特别指出除外。

实施例1：乳杆菌Lactobacillus sp.Z6的分离、筛选及鉴定

(一)分离、筛选：

采集吉尔吉斯斯坦地区的特色乳制品，通过梯度稀释法进行微生物的分离和纯化。采用的专用液体培养基：蛋白胨10g，牛肉膏5g，酵母粉4g，葡萄糖20g，吐温801mL，K₂HPO₄·7H₂O 2g，无水乙酸钠3.02g，柠檬酸三铵2g，MnSO₄·4H₂O 0.05g，MgSO₄·7H₂O0.2g，H₂O1000mL，pH＝5.72，121℃，灭菌15min；专用固体培养基：专用液体培养基中加入2％的琼脂，121℃，灭菌15min；3％CaCO₃的固体培养基：固体培养基中加入3％的CaCO₃，121℃，灭菌15min。无菌操作吸取乳品1mL于9ml生理盐水中，震荡均匀，再用生理盐水依次稀释至10^-5浓度。分别吸取10^-3、10^-4及10^-5三个梯度的稀释液各100μL，采用常规涂布法在含3％CaCO₃的专用固体培养基平板上涂布，于37℃恒温培养箱内培养48h，待平板上长出菌落后，挑取有溶钙圈的单菌落进行纯化培养，直至无杂菌落。从中优选出一株溶钙圈最大、编号为Z6的菌株，转接到含3％CaCO₃的专用培养基斜面上保存备用。

(二)分类、鉴定：

1、乳杆菌Lactobacillus sp.Z616S rDNA和pheS的基因序列测定与分析：

(1)PCR模板DNA的提取：

将纯化后的菌种Z6接种到专用液体培养基中，37℃摇床培养2d，收集菌体，采用DNA抽提试剂盒提取基因组总DNA。

(2)PCR扩增

16S rDNA基因扩增特异性引物：

27F:5'-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3'，

1492R:5'-GGTTACCTTGTTACGACTT-3'；

采用16S rDNA特异性引物进行目的片段的PCR扩增，PCR反应体系总体积25μL，PCR扩增条件为，94℃5min；94℃30s，54℃30s，72℃1min 30s，35个循环；72℃10min。

pheS基因扩增特异性引物：

pheS-21-F:5'-CATCCGGCACGAGATATGC-3'，

pheS-23-R:5'-GGATGGACCATGCCTGCACC-3；

采用pheS特异性引物进行目的片段的PCR扩增，PCR反应体系总体积25μL，PCR扩增条件为，95℃5min；95℃30s，46℃2min，72℃1min，35个循环；72℃10min。

(3)序列测定

PCR扩增产物经电泳检测和纯化后测序，获取长度为1445bp的16S rDNA基因序列，序列参见附后提供的SEQ ID NO:1所示，所得序列经常见的NCBI网站进行比对分析，利用本领域常见采用的MEGA7.0软件通过Neighbor-Joining方法建立系统进化树，系统发育树参见附图1，经比对分析发现，菌株Z6与该菌属标准模式菌LactiplantibacilluspentosusDSM 20314^T、Lactobacillus argentoratensis DSM 16365^T和Lactiplantibacillusplantarum ATCC 14917^T的相似性分别为99.58％、99.52％和99.52％，暂不能确定其分类。

同时，研究获取长度为455bp的pheS基因序列，序列参见附后提供的SEQ ID NO:2所示，所得序列经常见的NCBI网站进行比对分析，并构建系统发育树，系统发育树参见附图2，经比对分析发现，菌株Z6与该菌属标准模式菌Lactiplantibacillus pentosusDSM20314^T、Lactiplantibacillusparaplantarum DSM 10667^T和Lactobacillusargentoratensis DSM 16365^T的相似性分别为87.5％、77.5％和74.6％，初步确定其为潜在新种，暂命名为乳杆菌Lactobacillus sp.Z6。

2、生理生化性能测定

(1)通过生长条件研究结果显示乳杆菌Lactobacillus sp.Z6为革兰氏染色阳性，杆状，0.3-0.8×1-3μm，不形成内孢子。生长在MRS培养基上培养1-2d后，菌落为圆形、边缘整齐、略微凸起的乳白色菌落，菌落形态见附图3所示。

(2)乳杆菌Lactobacillus sp.Z6的氧化氢酶和氧化酶活性均为阳性。

(3)使用Biolog菌种鉴定仪GNIII测试板鉴定，确定乳杆菌Lactobacillus sp.Z6能利用的糖类碳源为a-D-葡萄糖、D-甘露糖、D-果糖、阿拉伯糖、棉子糖、松三糖。

(4)挑取乳杆菌Lactobacillus sp.Z6单菌落接种于含有5mL纯牛奶的试管中，置于37℃恒温培养箱中，发现牛奶在24h内出现了钝化现象，且钝化效果均匀细腻，散发着清香的奶香味。

综合16S rDNA和pheS序列分析、系统发育分析、微生物学特性分析结果，表明本发明提供的乳杆菌Lactobacillus sp.Z6是乳杆菌属的潜在新菌种，将其暂命名为乳杆菌Lactobacillus sp.Z6。该菌于2020年05月25日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编：100101，保藏日期为2020年05月25日，保藏号为CGMCC No.19870。

实施例2：褐色活性乳酸菌饮品

一种褐色活性乳酸菌饮品，按照重量百分比计，包括乳杆菌发酵液92～95％，蜂蜜4～7％，轻质碳酸钙(食品级)0.3～0.5％，阿斯巴甜0.005～0.01％，琼脂0.05～0.15％，黄原胶0.05～0.15％，CMC-Na0.1～0.2％，其中，乳杆菌发酵液活菌数≥1×10¹⁰CFU/mL。

实施例3：褐色活性乳酸菌饮品

本实施例在实施例1的基础上，提供一种褐色活性乳酸菌饮品，包括乳杆菌发酵液9.3kg，蜂蜜600g，轻质碳酸钙(食品级)40g，阿斯巴甜0.8g，琼脂10g，黄原胶12g，CMC-Na15g，其中，乳杆菌发酵液活菌数≥1×10¹⁰CFU/mL。

实施例4：褐色活性乳酸菌饮品

本实施例在实施例1的基础上，提供一种褐色活性乳酸菌饮品，包括乳杆菌发酵液9.2kg，蜂蜜400g，轻质碳酸钙(食品级)30g，阿斯巴甜0.5g，琼脂5g，黄原胶5g，CMC-Na 10g，其中，乳杆菌发酵液活菌数≥1×10¹⁰CFU/mL。

实施例5：褐色活性乳酸菌饮品

本实施例在实施例1的基础上，提供一种褐色活性乳酸菌饮品，包括乳杆菌发酵液9.5kg，蜂蜜700g，轻质碳酸钙(食品级)50g，阿斯巴甜1.0g，琼脂15g，黄原胶15g，CMC-Na20g，其中，乳杆菌发酵液活菌数≥1×10¹⁰CFU/mL。

实施例6：褐色活性乳酸菌饮品

本实施例在实施例1的基础上，提供一种褐色活性乳酸菌饮品，包括乳杆菌发酵液9.4kg，蜂蜜600g，轻质碳酸钙(食品级)40g，阿斯巴甜0.6g，琼脂10g，黄原胶12g，CMC-Na18g，其中，乳杆菌发酵液活菌数≥1×10¹⁰CFU/mL。

实施例7：褐色活性乳酸菌饮品的制备

本实施例在实施例1-5的基础上，提供一种褐色活性乳酸菌饮品的制备方法，工艺流程图如附图4所示，具体包括如下步骤：

(3)将步骤(2)中的种子培养液转接至200mL三角瓶专用发酵培养基中，按照质量体积比3～5％的接种量接种，温度30～37℃，摇床转速120～150r/min，振荡培养2～3d，发酵瓶中乳酸菌含量≥1×10¹⁰CFU/mL时，得到乳杆菌发酵液。

实施例8：本发明褐色活性乳酸菌饮品感官评价及理化性能

(1)本发明发酵液制备过程中的乳酸菌含量及其酸度变化

本试验对发酵液制备过程中的乳酸菌含量及其酸度变化进行检测，具体结果参见附图5所示。

由附图5数据可知，本发明提供的乳酸菌发酵液经过48h发酵，发酵液中的乳酸菌含量≥1×10¹⁰CFU/mL，pH为3.5左右，符合作为乳酸菌饮品调配的基质。

(2)感官评价

本试验在实施例2-6的基础上，对本发明提供的褐色乳酸菌饮品的色泽、气味、口感和组织状态进行感官评价，评价标准见表1。测试人数为100人。品尝方式：采用不记名的方式进行打分。分别单独进行色泽、气味、口感和组织状态打分，统计总分并计算平均分；平均分数越高，代表产品效果越好。并对产品的整体喜好程度给出意见，统计对每个单品的喜好人数，统计结果见表2。

表1：感官评价指标

表2：本发明与对照组产品感官评价结果

由表2数据可知，本发明提供的褐色活性乳酸菌饮品从感官上来说，普遍优于对照组，其中实施例3所提供的配方最受消费者的喜爱，其蜂蜜和轻质碳酸钙的添加量都较少，口感较淡，同时随着蜂蜜和轻质碳酸钙的添加量提高，产品酸度减少、甜度增加，受喜欢程度减小。

(3)体系稳定性检测

本试验在试验1的基础上，对本发明提供的褐色活性乳酸菌饮品、对照样品以及实施例4-6提供的产品进行活菌数和离心沉淀率的检测。以离心管取待测样品30mL，并测定样品质量M₀后，以5000r/min离心15min后取出，除去上清液，测残余物的质量M。每个样品进行3次平行测定后取平均值。离心沉淀率按下式计算：WHC(％)＝(M/M₀)×100，测试结果见表3所示。

表3：本发明与对照组产品活菌数和离心沉淀率的检测结果

样品	乳酸菌活菌数(CFU/mL)	离心沉淀率(％)
			实施例3	9.98×10<sup>9</sup>	1.34
对照1	2.35×10<sup>8</sup>	1.86
			对照2	3.67×10<sup>8</sup>	1.79
实施例4	9.82×10<sup>9</sup>	1.61
			实施例5	9.85×10<sup>9</sup>	1.58
实施例6	9.96×10<sup>9</sup>	1.44

由表3数据可知，本发明提供的褐色活性乳酸菌饮品与对照样品相比，乳酸菌活菌数显著提高，活菌数≥9.8×10⁹CFU/mL，离心沉淀率亦降低，本发明产品在观察期内均体现出良好的稳定性，其中实施例3产品的产品状态和稳定性均有良好的体现。

(4)产品贮藏期的乳酸菌活菌数检测

本试验在试验1的基础上，对本发明提供的褐色活性乳酸菌饮品、对照样品以及实施例4-6提供的产品进行贮藏期(常温)的乳酸菌活菌数检测，结果参见表4。

表4：本发明与对照组产品贮藏期乳酸菌活菌数检测结果

由表4数据可知，本发明所制备的褐色活性乳酸菌饮品的活性乳酸菌数均达到1×10⁹cfu/mL以上，且常温(10～25℃)保质期≥90天，说明本发明饮品更富含高活性的乳酸菌，且保质期得到了显著差异的延长。

(5)产品理化和微生物指标检测

本试验在试验1-3的基础上，对本发明实施例3所提供的褐色活性乳酸菌饮品进行理化和微生物指标检测，具体结果参见表5-6所示。

表5：本发明产品理化指标检测结果

表6：本发明产品微生物指标检测结果

由表5数据可知，本发明实施例3所提供的产品富含蛋白质及多种氨基酸物质，且没有检测到糖类物质，属于低卡饮品，符合现代消费观念；由表6数据可知，本发明实施例3制备的褐色活性乳酸菌饮品符合GB/T 21732-2008微生物指标检测要求，表明本发明提供的乳杆菌Lactobacillus sp.Z6用于制备褐色活性乳酸菌饮品具有制备工艺简单，产品活菌数高，且富含蛋白质及多种氨基酸物质，解决了乳酸菌因其生存环境苛刻，以鲜乳、果蔬等为发酵基质，大量的益生成分不能够完全代谢出来，且发酵产量较低的问题，为拓展乳酸菌的开发应用提供了数据支持。

上述实施例仅仅是为清楚地说明本发明所作的举例，而并非对实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而由此所延伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明的保护范围之中。

序列表

<110> 新疆农业科学院微生物应用研究所（中国新疆—亚美尼亚生物工程研究开发中心）

<120> 一种褐色活性乳酸菌饮品及其制备方法

<160> 2

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 1445

<212> DNA

<213> 乳杆菌Z6(Lactobacillus sp. Z6)

<400> 1

tgcagtcgaa cgaactctgg tattgattgg tgcttgcatc atgatttaca tttgagtgag 60

tggcgaactg gtgagtaaca cgtgggaaac ctgcccagaa gcgggggata acacctggaa 120

acagatgcta ataccgcata acaacttgga ccgcatggtc cgagtttgaa agatggcttc 180

ggctatcact tttggatggt cccgcggcgt attagctaga tggtggggta acggctcacc 240

atggcaatga tacgtagccg acctgagagg gtaatcggcc acattgggac tgagacacgg 300

cccaaactcc tacgggaggc agcagtaggg aatcttccac aatggacgaa agtctgatgg 360

agcaacgccg cgtgagtgaa gaagggtttc ggctcgtaaa actctgttgt taaagaagaa 420

catatctgag agtaactgtt caggtattga cggtatttaa ccagaaagcc acggctaact 480

acgtgccagc agccgcggta atacgtaggt ggcaagcgtt gtccggattt attgggcgta 540

aagcgagcgc aggcggtttt ttaagtctga tgtgaaagcc ttcggctcaa ccgaagaagt 600

gcatcggaaa ctgggaaact tgagtgcaga agaggacagt ggaactccat gtgtagcggt 660

gaaatgcgta gatatatgga agaacaccag tggcgaaggc ggctgtctgg tctgtaactg 720

acgctgaggc tcgaaagtat gggtagcaaa caggattaga taccctggta gtccataccg 780

taaacgatga atgctaagtg ttggagggtt tccgcccttc agtgctgcag ctaacgcatt 840

aagcattccg cctggggagt acggccgcaa ggctgaaact caaaggaatt gacgggggcc 900

cgcacaagcg gtggagcatg tggtttaatt cgaagctacg cgaagaacct taccaggtct 960

tgacatacta tgcaaatcta agagattaga cgttcccttc ggggacatgg atacaggtgg 1020

tgcatggttg tcgtcagctc gtgtcgtgag atgttgggtt aagtcccgca acgagcgcaa 1080

cccttattat cagttgccag cattaagttg ggcactctgg tgagactgcc ggtgacaaac 1140

cggaggaagg tggggatgac gtcaaatcat catgcccctt atgacctggg ctacacacgt 1200

gctacaatgg atggtacaac gagttgcgaa ctcgcgagag taagctaatc tcttaaagcc 1260

attctcagtt cggattgtag gctgcaactc gcctacatga agtcggaatc gctagtaatc 1320

gcggatcagc atgccgcggt gaatacgttc ccgggccttg tacacaccgc ccgtcacacc 1380

atgagagttt gtaacaccca aagtcggtgg ggtaaccttt taggaaccag ccgcctaagg 1440

gggat 1445

<210> 2

<211> 455

<212> DNA

<213> 乳杆菌Z6(Lactobacillus sp. Z6)

<400> 2

aggatacctt ttacattacc aaggacgttc tcttgcggac gcaaacttct gcggaccaac 60

cacggtcact tgaaaactca tgatttctca agggcacgtt aaaagtgttc tcacctggcc 120

gcgtttaccg gcgcgacaca gatgatgcga cccactccca tcacttccat cagattgaag 180

gattagtagt cgataagcat atcacgatgg ctgacttgaa aggtaccttg atcttagttt 240

ccacaacgtt gtttggtgac gagtttgatg tacggctgcg gccaagcttc ttcccattca 300

cggaaccgtc tgttgaagct gacgtgacct gcttcaactg taacggcaag ggttgtgcca 360

tctgtaagca aacgggttgg atcgaagtct taggcgcagg gatggtgcat ccccacgtgt 420

tagaaatgtc tgggattgat cctgaagaat acggt 455

Claims

1.一种褐色活性乳酸菌饮品，其特征在于，按照重量百分比计，该乳酸菌饮品包括乳杆菌发酵液92～95％，蜂蜜4～7％，轻质碳酸钙(食品级)0.3～0.5％，阿斯巴甜0.005～0.01％，琼脂0.05～0.15％，黄原胶0.05～0.15％，CMC-Na 0.1～0.2％。

2.如权利要求1所述的一种褐色活性乳酸菌饮品，其特征在于，所述乳杆菌发酵液由乳杆菌Lactobacillus sp.Z6发酵获得，乳杆菌Lactobacillus sp.Z6的保藏号为：CGMCCNo.19870。

3.如权利要求1或者2所述的褐色活性乳酸菌饮品，其特征在于，所述乳杆菌Lactobacillus sp.Z6的16S rDNA和pheS序列如SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示。

4.如权利要求1所述的一种褐色活性乳酸菌饮品，其特征在于，所述乳杆菌Lactobacillus sp.Z6发酵液活菌数≥1×10¹⁰个/mL。

5.一种褐色活性乳酸菌饮品的制备方法，其特征在于，具体包括如下步骤：

(1)将斜面保藏的乳杆菌Lactobacillus sp.Z6接种到专用固体培养基上，于恒温培养箱中30℃条件下培养1～2d，得到活化的乳杆菌Lactobacillus sp.Z6菌种；

(2)挑取步骤(1)所得活化的乳杆菌Lactobacillus sp.Z6菌种一环转接至200mL三角瓶专用液体培养基中，于30～37℃，摇床转速120～150r/min，振荡培养24h，得到乳杆菌Lactobacillus sp.Z6种子培养液；

(3)将步骤(2)中的种子培养液转接至200mL三角瓶专用发酵培养基中，按照质量体积比3～5％的接种量接种，温度30～37℃，摇床转速120～150r/min，振荡培养2～3d，发酵瓶中乳酸菌含量≥1×10¹⁰个/mL时，得到乳杆菌发酵液；

6.如权利要求5所述的一种褐色活性乳酸菌饮品的制备方法，其特征在于，所述专用液体培养基为：蛋白胨10g，牛肉膏5g，酵母粉4g，葡萄糖20g，吐温80 1mL，K₂HPO₄·7H₂O 2g，无水乙酸钠3.02g，柠檬酸三铵2g，MnSO₄·4H₂O 0.05g，MgSO₄·7H₂O 0.2g，H₂O 1000mL，pH＝5.7左右，于121℃灭菌15min，冷却备用；专用固体培养基：液体培养基中加入2％的琼脂，121℃，灭菌15min；3％CaCO₃的固体培养基：专用固体培养基中加入3％的CaCO₃，121℃，灭菌15min。

7.如权利要求5所述的一种褐色活性乳酸菌饮品的制备方法，其特征在于，所述专用发酵培养基为：蛋白胨10g，酵母粉4g，葡萄糖20g，K₂HPO₄·7H₂O 2g，无水乙酸钠3.02g，柠檬酸三铵2g，MnSO₄·4H₂O 0.05g，MgSO₄·7H₂O 0.2g，H₂O 1000mL，pH 5.7左右，于121℃灭菌15min，冷却备用。