CN113046072A - 一种用于比率定量检测阿霉素的生物质碳点荧光探针及其制备方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明属于荧光探针技术领域,提供一种用于比率定量检测阿霉素的生物质碳点荧光探针及其制备方法和应用。以150目的玉米芯粉末作为碳源、氮源、硫源和磷源,在180℃高压反应釜中加热碳化12 h,制备生物质碳点溶液;离心除去不溶物,冷冻干燥得到生物质碳点固体粉末。利用比率荧光检测法确定阿霉素浓度与生物质碳点荧光强度之间的线性关系;利用所构筑的线性方程检测实际尿样中阿霉素的含量以及加标回收率。该方法操作简便,抗干扰性强,不需要昂贵的仪器设备,检测成本低,具有自校准性能,可快速、高效、灵敏、定量检测实际样品中阿霉素,具有良好的重现性。
Description
技术领域
本发明属于荧光探针技术领域,具体涉及一种用于比率定量检测阿霉素的生物质碳点荧光探针及其制备方法和应用。采用简便快速的方法制备的一种生物质碳点,并用于比率定量检测阿霉素。
背景技术
阿霉素,又名多索柔比星。它是一种可用于抵抗肿瘤的抗生素,对RNA和DNA的合成有抑制作用,其中对RNA的抑制作用最强,抗瘤谱较广,属周期非特异性药物,对各种生长周期的肿瘤细胞都有杀灭作用。适用于多种病症,例如急性白血病、恶性淋巴瘤、乳腺癌、支气管肺癌、卵巢癌、胃癌、肝癌等。
目前已用于检测阿霉素的方法有:极谱法、电子吸收光谱检测法、高效液相色谱法、液相色谱质谱法等。这些方法具有独特的优势,但也存在以下缺陷:测试条件复杂,繁琐耗时,仪器设备价格昂贵,检测周期长,技术要求高,成本高,抗干扰能力差以及准确度较低等,导致这些检测方法无法得到广泛应用。因此,亟需发展一种简便、快速、灵敏检测阿霉素的新方法。
碳量子点具有优异的发光性能、良好的生物相容性和水溶性、高稳定性、低细胞毒性等优点,已成为碳家族中的一颗新星。目前,基于碳量子点已经构筑了多种荧光探针用于金属离子、氨基酸、药物、环境污染物等的检测。基于此,以碳量子点为基础,构筑快速、高效、灵敏检测阿霉素的荧光方法具有重要的意义及广阔的应用前景。
申请号为2015101475587,发明名称为以玉米芯为碳源一步合成荧光碳点的方法,该发明以玉米芯为碳源一步合成荧光碳点的方法,将经过预处理的玉米芯、乙二胺和去离子水混合均匀后并分别通过水热法、微波法和超声法加热反应制得荧光碳点或者将经过预处理的玉米芯直接煅烧制得荧光碳点。但是乙二胺的加入使制备过程过于复杂,无法获得单纯玉米芯所制备碳量子点的性质,导致玉米芯在碳量子点制备领域以及所得碳量子点应用受限,因此,以单一的玉米芯为碳源制备碳量子点,详细研究所制备碳量子点的性质和应用,具有重要的意义。
发明内容
本发明的目的在于提供一种用于比率定量检测阿霉素的生物质碳点荧光探针及其制备方法和应用。
本发明由如下技术方案实现:一种用于比率定量检测阿霉素的生物质碳点荧光探针,以玉米芯粉末作为碳源、氮源、硫源和磷源,在180℃高压反应釜中加热碳化12 h,制备生物质碳点溶液;离心除去不溶物,冷冻干燥得到生物质碳点固体粉末。
制备权利要求1所述的用于比率定量检测阿霉素的生物质碳点荧光探针的方法,具体步骤如下:
(1)玉米芯前处理:玉米芯磨碎成150目粉末,准确称量0.5 g玉米芯粉末,向其中加入10 mL超纯水,搅拌均匀;
(2)将玉米芯超纯水悬液180℃高压反应釜中加热碳化12 h,得到淡黄色生物质碳点溶液;
(3)荧光探针的制备:高压反应釜自然冷却至室温,将淡黄色溶液在8000转/分钟下离心10分钟,得到浅黄色上清液,上清液冷冻干燥即为生物质碳点固体粉末荧光探针。
所述的用于比率定量检测阿霉素的生物质碳点荧光探针的用途,所述生物质碳点荧光探针在检测阿霉素中的应用,具体方法为:
(1)生物质碳点储备液的制备:准确称量0.1 g生物质碳点固体粉末,并加入10 mL超纯水中,搅拌使其充分溶解,得到浓度为10 mg/mL的生物质碳点储备液;
(2)阿霉素储备液的制备:准确称量0.0544 g 阿霉素粉末,加入到10 mL超纯水中,搅拌溶解,配制浓度为10 mmol/L的阿霉素储备液;
(3)获得阿霉素含量与生物质碳点荧光强度之间的线性方程:将若干体积的阿霉素储备液加入到浓度为0.148 mg/mL的生物质碳点溶液中,在357 nm激发波长下,记录生物质碳点在437 nm处的荧光强度值;通过Origin软件线性拟合阿霉素浓度与生物质碳点荧光强度,得到线性方程;
当阿霉素浓度为0.50~15.40 μmol/L时,线性方程为:I553/I435 = 0.0538c(阿霉素) +0.1379,R2 = 0.9997;当阿霉素的浓度为20.36~70.15 μmol/L时,线性方程为:I553/I435 =0.0206c(阿霉素) + 0.6053,R2 = 0.9992;其中,I553、I435分别为生物质碳点与阿霉素混合液在553 nm和435 nm处的荧光强度,最低检出限为3.7 nmol/L;
(4)阿霉素实际样品的检测:将实际样品溶于超纯水中,测量加入实际样品后生物质碳点在553 nm和435 nm处的荧光强度,计算比值代入线性方程,即可求得实际样品中阿霉素的含量;
(5)实际样品中阿霉素加标回收率的测定:向实际样品中加入生物质碳点储备液,使体系中生物质碳点的终浓度为0.15 mg/mL;阿霉素储备液用超纯水稀释为浓度1.0mmol/L的阿霉素标准溶液,然后将10 µL阿霉素标准溶液加入上述体系中,测试实际样品中阿霉素的加标回收率。
本方法的优点在于:玉米芯绿色环保,充分利用废弃物,无需引入其他物质,制备成本低。探针制备方法简单,无需昂贵仪器,可快速、高效、比率、定量检测阿霉素。所制备的比率荧光探针性能稳定,抗干扰能力强。
总而言之,与其他检测阿霉素的方法相比,该方法具有绿色环保,快速简便,抗干扰能力强,无需昂贵的仪器设备,高效灵敏,检测成本低等优点,是一种新型的检测阿霉素的方法。
附图说明
图1为实施例1中所制备的生物质碳点的紫外光谱图以及荧光光谱图;
图2为实施例1中所制备的生物质碳点的激发波长依赖性光谱图;
图3为实施例1中所制备的生物质碳点的透射电镜图(左)和粒径分布图(右);
图4为实施例1中所制备的生物质碳点的红外光谱图(左)和X射线光电子能谱图(右);
图5为实施例1所制备的生物质碳点的推断结构图;
图6为实施例2中药物(生物素、阿莫西林、林可霉素、青霉素G钠、卡那霉素、硫胺素、抗坏血酸)对阿霉素检测的干扰实验结果图;
图7为实施例2中各种氨基酸(甘氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸、酪氨酸、谷氨酸、天冬酰胺、苏氨酸、丙氨酸、谷氨酰胺、半胱氨酸、赖氨酸、缬氨酸、异亮氨酸、丝氨酸、组氨酸、色氨酸、亮氨酸、天冬氨酸、脯氨酸)对阿霉素检测的干扰实验结果图;
图8为实施例4中阿霉素滴定生物质碳点溶液,生物质碳点荧光强度变化曲线图;
图9为实施例4中阿霉素浓度为0.50~15.40 μmol/L时,阿霉素浓度与生物质碳点荧光强度的线性拟合图;
图10为实施例4中阿霉素浓度为20.36~70.15 μmol/L时,阿霉素浓度与生物质碳点荧光强度的线性拟合图。
具体实施方式
为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚,下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述,显然,所描述的实施例是本发明的一部分实施例,而不是全部的实施例;基于本发明中的实施例,本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例,都属于本发明保护的范围。
实施例1:生物质碳点的制备及表征
步骤一,称量0.5 g玉米芯粒状粉末,向其中加入10 mL超纯水,在180℃高压反应釜中加热碳化12 h,得到淡黄色生物质碳点溶液。
步骤二,待反应釜冷却至室温后,淡黄色溶液于8000转/分钟下离心10分钟,得到澄清的生物质碳点溶液,冷冻干燥制得生物质碳点固体粉末。
步骤三,准确称量0.1 g生物质碳点固体粉末于烧杯中,向其中加入10 mL超纯水,搅拌使其充分溶解,得到浓度为10 mg/mL的生物质碳点储备液。
性质表征见图1和图2。图1在生物质碳点的紫外-可见吸收光谱图中,有两个明显的吸收峰位于281 nm和323 nm,分别由C=O的n→π*跃迁和N/S/P掺杂产生的表面缺陷引起;图1中生物质碳点的最佳激发和发射峰分别位于357 nm和437 nm。图2是生物质碳点不同激发波长下的发射光谱图,当激发波长从290 nm变化到490 nm时,发射波长由425 nm红移到520 nm,说明生物质碳点具有激发波长依赖性。图3为生物质碳点的投射电镜图(左)和粒径分布图(右),生物质碳点为均匀的球形,粒径范围为0.25~4.25 nm,平均粒径约为2.05 ±0.2 nm。图4(左)为生物质碳点的红外光谱图,生物质碳点在3325~3469 cm-1和2913 cm-1处有两个明显的特征峰,分别归因于胺基的O-H/N-H伸缩和C-H振动;生物质碳点在1604 cm-1处的特征峰对应芳香族C=C伸缩振动;生物质碳点在1247 cm-1和1195 cm-1处的特征峰分别对应P=O和S-O,表明生物质碳点表面存在磷酸和烷基硫化物官能团。图4(右)为生物质碳点的X射线光电子能谱图,图中有五个明显的特征峰,分别位于532.6 eV、401.5 eV、286.2eV、168.6 eV和133.3 eV,分别对应O 1s、N 1s、C 1s、S 2p和P 2p,表明生物质碳点中掺杂有氮硫磷三种杂原子。图5为根据上述表征结果推断的生物质碳点的结构图,生物质碳点表面富含C=C、N-H、C-H、S-O、C=O、O-H、C-C、P=O等官能团。
实施例2:阿霉素检测的抗干扰实验
步骤一,称量不同质量的药物(生物素、阿莫西林、林可霉素、青霉素G钠、卡那霉素、硫胺素、抗坏血酸),加入10 mL超纯水,配制成浓度为 0.01 mol/L的药物储备液。
步骤二,称量不同质量的氨基酸(甲硫氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、酪氨酸、脯氨酸、异亮氨酸、苯基丙氨酸、亮氨酸、苏氨酸、丙氨酸、半胱氨酸、丝氨酸、甘氨酸、赖氨酸、精氨酸、缬氨酸、组氨酸、谷氨酰胺、高半胱氨酸),加入10 mL超纯水,配制成浓度为0.01 mol/L的氨基酸储备液。
步骤三,测量0.148 mg/mL 生物质碳点溶液(2030 μL)的荧光强度,记为F0;向其中加入100 μL药物储备液,此时药物的浓度为469 μmol/L,测量此时溶液的荧光强度,记为F1;再向其中加入10 µL 阿霉素储备液,此时阿霉素浓度为46.7 µmol/L,测量此时溶液的荧光强度,分别记为I553和I435,通过计算F1/F0得到黑色柱状图,计算I553/I435得到灰色柱状图,实验结果见图6。
步骤四,测量0.291 mg/mL 生物质碳点溶液(2060 μL)的荧光强度,记为F0;向其中加入100 µL氨基酸储备液,此时氨基酸浓度为463 μmol/L,测量此时溶液的荧光强度,记为F1;再向其中加入10 µL 阿霉素储备液,此时阿霉素浓度为46.0 µmol/L,测量此时溶液的荧光强度,分别记为I553和I435,通过计算F1/F0得到黑色柱状图,计算I553/I435得到灰色柱状图,实验结果见图7。
图6是不同药物对阿霉素检测的干扰性研究,说明阿霉素检测不受其他药物的干扰;图7是不同氨基酸对阿霉素检测的干扰性研究,说明阿霉素检测不受氨基酸的干扰。结果表明生物质碳点对阿霉素检测具有良好的抗干扰性。
实施例3:阿霉素滴定生物质碳点的线性方程
步骤一,测量0.148 mg/mL 生物质碳点的荧光强度,记为I437和I553。
步骤二,向上述溶液中逐滴滴加阿霉素储备液,分别记录荧光强度I437和I553,荧光强度变化见图8。
步骤三,利用Origin 软件,拟合荧光强度变化(I555/I435)和阿霉素浓度之间的线性方程,结果见图9和图10。
图8表明随着阿霉素储备液的加入,生物质碳点与阿霉素混合液在435 nm处的荧光逐渐被猝灭,在553 nm处的荧光逐渐增强。图9、图10是生物质碳点与阿霉素混合液荧光强度的变化值与阿霉素浓度之间的线性关系图,图9中,线性方程为:I553/I435 =0.0538c(阿霉素) + 0.1379,线性范围为0.50~15.40 μmol/L,最低检出限为3.7 nmol/L,相关性系数R2 = 0.9997;图10中,线性方程为I553/I435 = 0.0206c(阿霉素) + 0.6053,线性范围为20.36~70.15 μmol/L,相关性系数R2 = 0.9992。
实施例4:实际样品中阿霉素含量检测
步骤一,采集健康男性和女性两种不同的尿液,备用;
步骤二,利用超纯水将男性和女性尿液分别稀释100倍,备用;
步骤三,分别量取100 µL步骤二中的男性和女性尿样,溶于10 mL超纯水中,超声10 min使其完全溶解,在8000转/分钟下离心10 min,去除不溶物,上清液利用0.45 µm的滤孔过滤,备用;
步骤四,分别向1990 μL步骤三的男性和女性尿样中加10 µL生物质碳点储备液,此时生物质碳点的浓度为0.05 mg/mL,测量此时的荧光强度I553和I435;
步骤五,将I553/I435代入线性方程,计算得到所对应实际尿样中阿霉素的含量,结果见表1。
表1表明健康男性和女性尿样中不含有阿霉素,本方法可用于实际尿样中阿霉素含量的检测,不会受到尿样中其他杂质的干扰。
表1:两种实际尿样中阿霉素的含量
ND:未检出。
实施例5:实际样品中阿霉素的加标回收实验
步骤一,准确量取1 mL阿霉素储备液(10 mmol/L)稀释至10 mL,此时阿霉素浓度为1.0 mmol/L,命名为阿霉素标准液,备用。
步骤二,向2000 µL男性尿样(实施例4步骤三)中加30 µL生物质碳点储备液,混合均匀后,继续滴加10 µL阿霉素标准液(1.0 mmol/L),此时阿霉素的浓度为4.90 µmol/L,测量此时435 nm和 553 nm处的荧光强度,记为I553和I435。
步骤三,向2000 µL女性尿样(实施例4步骤三)中加30 µL生物质碳点储备液,混合均匀后,继续滴加10 µL阿霉素标准液(1.0 mmol/L),此时阿霉素的浓度为4.90 µmol/L,测量此时435 nm和 553 nm处的荧光强度,记为I553和I435。
步骤四,将I553/I435代入线性方程,计算得到两种实际尿样中阿霉素的加标回收率。
结果见表2,表2说明两种实际样品中阿霉素的加标回收率介于98.57%与100.61%之间,相对标准偏差小于2.22%,表明生物质碳点可用于实际样品中阿霉素的检测,该方法具有良好的重现性。
表2:两种实际尿样中阿霉素的加标回收实验结果
最后应说明的是:以上各实施例仅用以说明本发明的技术方案,而非对其限制;尽管参照前述各实施例对本发明进行了详细的说明,本领域的普通技术人员应当理解:其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改,或者对其中部分或者全部技术特征进行等同替换;而这些修改或者替换,并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的范围。
Claims (3)
1.一种用于比率定量检测阿霉素的生物质碳点荧光探针,其特征在于:以玉米芯粉末作为碳源、氮源、硫源和磷源,在180℃高压反应釜中加热碳化12 h,制备生物质碳点溶液;离心除去不溶物,冷冻干燥得到生物质碳点固体粉末。
2.制备权利要求1所述的用于比率定量检测阿霉素的生物质碳点荧光探针的方法,其特征在于:具体步骤如下:
(1)玉米芯前处理:玉米芯磨碎成150目粉末,准确称量0.5 g玉米芯粉末,向其中加入10 mL超纯水,搅拌均匀;
(2)将玉米芯超纯水悬液180℃高压反应釜中加热碳化12 h,得到淡黄色生物质碳点溶液;
(3)荧光探针的制备:高压反应釜自然冷却至室温,将淡黄色溶液在8000转/分钟下离心10分钟,得到浅黄色上清液,上清液冷冻干燥即为生物质碳点固体粉末荧光探针。
3.权利要求1所述的用于比率定量检测阿霉素的生物质碳点荧光探针的用途,其特征在于:所述生物质碳点荧光探针在检测阿霉素中的应用,具体方法为:
(1)生物质碳点储备液的制备:准确称量0.1 g生物质碳点固体粉末,并加入10 mL超纯水中,搅拌使其充分溶解,得到浓度为10 mg/mL的生物质碳点储备液;
(2)阿霉素储备液的制备:准确称量0.0544 g 阿霉素粉末,加入到10 mL超纯水中,搅拌溶解,配制浓度为10 mmol/L的阿霉素储备液;
(3)获得阿霉素含量与生物质碳点荧光强度之间线性方程:将若干体积的阿霉素储备液加入到浓度为0.148 mg/mL的生物质碳点溶液中,在357 nm激发波长下,记录生物质碳点在437 nm处的荧光强度值;通过Origin软件线性拟合阿霉素浓度与生物质碳点荧光强度,得到线性方程;
当阿霉素浓度为0.50~15.40 μmol/L时,线性方程为:I553/I435 = 0.0538c(阿霉素) +0.1379,R2 = 0.9997;当阿霉素的浓度为20.36~70.15 μmol/L时,线性方程为:I553/I435 =0.0206c(阿霉素) + 0.6053,R2 = 0.9992;其中,I553、I435分别为生物质碳点与阿霉素混合液在553 nm和435 nm处的荧光强度,最低检出限为3.7 nmol/L;
(4)阿霉素实际样品的检测:将实际样品溶于超纯水中,测量加入实际样品后生物质碳点在553 nm和435 nm处荧光强度,计算比值代入线性方程,即可求得实际样品中阿霉素的含量;
(5)实际样品中阿霉素加标回收率的测定:向实际样品中加入生物质碳点储备液,使体系中生物质碳点的终浓度为0.15 mg/mL;阿霉素储备液用超纯水稀释为浓度1.0 mmol/L的阿霉素标准溶液,然后将10 µL阿霉素标准溶液加入上述体系中,测试实际样品中阿霉素的加标回收率。
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CN105038781A (zh) * | 2015-04-01 | 2015-11-11 | 河南师范大学 | 以玉米芯为碳源一步合成荧光碳点的方法 |
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2021
- 2021-03-17 CN CN202110285389.9A patent/CN113046072B/zh active Active
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Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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CN105038781A (zh) * | 2015-04-01 | 2015-11-11 | 河南师范大学 | 以玉米芯为碳源一步合成荧光碳点的方法 |
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