CN113018423A - 一种基于乙醇梯度洗脱的止血材料及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开一种基于乙醇梯度洗脱的止血材料及其制备方法：(1)将乙醇提取的精制纤维蛋白原反应液静置，离心，收集纤维蛋白原沉淀物；(2)向沉淀物中依次加入20％、40％、60％、80％、100％的乙醇进行梯度脱水；(3)然后离心，收集纤维蛋白原沉淀物并向沉淀物中加入有机溶剂，然后粉碎加入药用辅料，干燥，得到纤维蛋白原粉；(4)将乙醇提取的凝血酶反应液静置，离心，收集凝血酶沉淀物；(5)向凝血酶沉淀物中依次加入20％、40％、60％、80％、100％的乙醇进行梯度脱水；(6)最后一次脱水完成后离心，收集凝血酶沉淀物并向其中加入有机溶剂，粉碎后加入药用辅料，干燥，得到凝血酶粉；(7)将纤维蛋白原粉和凝血酶粉混合，辐射灭菌，得到止血材料。

Description

一种基于乙醇梯度洗脱的止血材料及其制备方法
技术领域
本发明涉及生物医用材料的技术领域，具体涉及一种基于乙醇梯度洗脱的止血材料及其制备方法。
背景技术
纤维蛋白粘合剂具有良好的止血、组织相容性和黏合性，能有效解决临床创面出血难以缝合及术后缝合渗血等问题。纤维蛋白粘合剂包含四组分：纤维蛋白原冻干粉及其稀释剂、凝血酶冻干粉及其稀释剂，整个制备工艺时间长且繁琐，除需将纤维蛋白原和凝血酶分装冻干以外，还需配备两瓶对应稀释剂。临床使用前需用对应稀释剂溶解两主成分，再混合使用，操作复杂，配制时间长，临床使用不便；且本品需低温贮存和冷链运输，成本较高，限制了其广泛应用。
CN201010200864.X公开了一种猪源纤维蛋白胶粉雾剂及其制备方法和应用。该方法需先制备纤维蛋白原冻干粉和凝血酶冻干粉，采用低温气流粉碎方法粉碎至75-180μm粒径，再与采用气流粉碎方法粉碎至90-250μm的氯化钠和/醋酸钠、氯化钙和/三羟甲基氨基甲烷、生理可接受的抗静电剂通过流化态混合方法进行混合，制得猪纤维蛋白胶微粉。整个制备工艺复杂，周期长，特别是纤维蛋白原冻干粉和凝血酶冻干粉需要冷冻干燥工艺，此工艺通常一次需要48-72小时。CN201480012686.4公开了包含凝血酶和纤维蛋白原的粉末制剂。该方法采用喷雾干燥技术分别制得纤维蛋白原粉和凝血酶粉，喷雾干燥过程中温度高，主成分活性降低明显，而且研究表明此方法收率较低。
发明内容
本发明的目的在于提供一种基于乙醇梯度洗脱的止血材料的制备方法，本发明的方法制备工艺简单、周期短、成本低。
本发明是通过如下技术方案实现的：
一种基于乙醇梯度洗脱的止血材料的制备方法，包括如下步骤：
一、纤维蛋白原粉制备：
(1)在低温条件下，将乙醇提取的精制纤维蛋白原反应液静置，然后离心，收集纤维蛋白原沉淀物；
(2)向所述纤维蛋白原沉淀物中依次加入20％、40％、60％、80％、100％体积分数的低温乙醇进行梯度脱水；在每次脱水过程中需将所述纤维蛋白原沉淀物粉碎，脱水后离心，收集沉淀物进行下一次脱水；
(3)最后一次脱水完成后离心，收集纤维蛋白原沉淀物并向沉淀物中加入有机溶剂，然后粉碎，粉碎后加入药用辅料，然后干燥，得到所述纤维蛋白原粉；
二、凝血酶粉的制备：
(1)在低温条件下，将乙醇提取的凝血酶反应液静置，然后离心，收集凝血酶沉淀物；
(2)向所述凝血酶沉淀物中依次加入20％、40％、60％、80％、100％体积分数的低温乙醇进行梯度脱水；在每次脱水过程中需将所述凝血酶沉淀物粉碎，脱水后离心，收集沉淀物进行下一次脱水；
(3)最后一次脱水完成后离心，收集凝血酶沉淀物并向沉淀物中加入无水乙醇，然后粉碎，粉碎后加入药用辅料，然后干燥，得到所述凝血酶粉；
三、止血材料的制备：
(1)将所述纤维蛋白原粉和所述凝血酶粉充分混合，然后辐射灭菌，得到所述止血材料。
进一步地，步骤一、纤维蛋白原粉制备：(1)在-3℃至4℃下，将乙醇提取的精制纤维蛋白原反应液静置1-12小时，然后离心，收集纤维蛋白原沉淀物。
进一步地，步骤一、纤维蛋白原粉制备：(2)中每次均加入所述纤维蛋白原沉淀物20-30倍体积且温度低于0℃的乙醇进行脱水，且每次脱水的时间均为1-6小时；所述的粉碎采用均质机进行粉碎，所述均质机的转速为10000-13000rpm，粉碎时间为5-10分钟。具体的，该步骤采用乙醇梯度脱水其制备过程具体如下：首先向所述的纤维蛋白原沉淀物中加入20-30倍体积的低温乙醇，并采用均质机将所述的纤维蛋白原沉淀物粉碎，粉碎后进行乙醇脱水，然后离心，收集纤维蛋白原沉淀物，此过程即完成第一次20％乙醇的脱水；第一次脱水后再向刚收集的纤维蛋白原沉淀物中加入40％的乙醇，重复上述过程进行第二次40％乙醇的脱水；如此重复直至完成最后的100％乙醇脱水，此过程即为乙醇梯度脱水过程。
进一步地，步骤一、纤维蛋白原粉制备：(3)最后一次脱水完成后离心，收集纤维蛋白原沉淀物并向沉淀物中加入无水乙醇，然后采用均质机进行粉碎，粉碎后加入粒径为5-200μm的药用辅料并混合均匀，然后在25-37℃下真空干燥1-6小时，得到所述纤维蛋白原粉；所述的均质机转速为10000-13000rpm，粉碎时间为5-10分钟。优选地，本发明中添加的药用辅料其粒径在5-200微米之间，粒径过小会导致颗粒聚集，影响止血效果。
进一步地，所述的药用辅料选自寡聚透明质酸或其盐、壳聚糖、海藻糖、蔗糖、右旋糖酐20、海藻酸钠、氯化钠、醋酸钠、枸橼酸钠、甘氨酸、盐酸精氨酸、组氨酸、赖氨酸、氯化钙中至少一种；所述的纤维蛋白原粉中所述纤维蛋白原占10-20wt％、药用辅料占80-90wt％。
进一步地，步骤二、凝血酶粉的制备：(1)在-3℃至4℃下，将乙醇提取的凝血酶反应液静置1-12小时，静置后离心，离心后收集凝血酶沉淀物。
进一步地，步骤二、凝血酶粉的制备：(2)中每次均加入所述凝血酶沉淀物20-30倍体积的乙醇进行脱水，且每次脱水的时间均为1-6小时；所述的粉碎采用均质机进行粉碎，所述均质机的转速为10000-13000rpm，粉碎时间为5-10分钟。
进一步地，步骤二、凝血酶粉的制备：(3)最后一次脱水完成后离心，收集凝血酶沉淀物并向沉淀物中加入无水乙醇，然后采用均质机进行粉碎，粉碎后加入粒径为5-200μm的药用辅料并混合均匀，然后在25-37℃下真空干燥1-6小时，即得到所述凝血酶粉；所述的均质机的转速为10000-13000rpm，且粉碎时间为5-10分钟；所述的药用辅料选自寡聚透明质酸或其盐、壳聚糖、海藻糖、蔗糖、右旋糖酐20、海藻酸钠、氯化钠、醋酸钠、枸橼酸钠、甘氨酸、盐酸精氨酸、组氨酸、赖氨酸、氯化钙中至少一种；所述凝血酶粉中凝血酶占0.1-0.5wt％，药用辅料占99.5-99.9wt％。
进一步地，步骤三、止血材料的制备：中所述纤维蛋白原粉和所述凝血酶粉的质量比为1：(1-5)。
一种基于乙醇梯度洗脱的止血材料，采用上述的制备方法制得。
本发明的有益效果：
为解决现有纤维蛋白粘合剂制品制备工艺复杂、临床使用不便、贮存和运输成本较高等一系列技术问题，而提供一种基于乙醇梯度洗脱的止血材料及其制备方法。本发明将纤维蛋白粘合剂四组分变为单组分粉，整体制备工艺简单、周期短；可室温贮存及运输，成本更低；使用时即开即用，更符合临床需求。本发明方法制得的止血材料具有显著的临床优势，具有更广阔的临床应用和市场前景。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例的技术方案，下面将对实施例描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域的技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他附图。
图1、图2为本发明实施例1-3制备的止血材料以及市售纤维蛋白粘合剂对肝脏出血创面的止血效果图；
图3、图4为本发明实施例1-3制备的止血材料以及市售纤维蛋白粘合剂的稳定性测试结果。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明的一部分实施例，而不是全部的实施例。以下对至少一个示例性实施例的描述实际上仅仅是说明性的，决不作为对本发明及其应用或使用的任何限制。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1
一种基于乙醇梯度洗脱的止血材料的制备方法，包括如下步骤：
一、纤维蛋白原粉制备：
(1)在保持1℃下，将乙醇提取的精制纤维蛋白原反应液静置1小时，静置后离心，然后收集纤维蛋白原沉淀物；
(2)向所述的纤维蛋白原沉淀物中加入25倍沉淀物用量的20％体积分数的乙醇(乙醇的温度小于0℃)并采用均质机粉碎5分钟(均质机的转速为12000转/分钟)，然后搅拌脱水1小时，脱水后离心，并再次收集纤维蛋白原沉淀物完成第一次脱水；然后向经过第一次脱水后的纤维蛋白原沉淀物中再次加入25倍沉淀物体积的40％的乙醇，继续采用均质机粉碎5分钟(均质机的转速为12000转/分钟)，然后搅拌脱水1小时，脱水后离心，并再次收集纤维蛋白原沉淀物完成第二次脱水；然后以此重复上述步骤对纤维蛋白原沉淀物依次采用60％、80％和100％体积分数的乙醇进行梯度脱水；
(3)最后经过100％的乙醇脱水完成后离心，继续收集纤维蛋白原沉淀物并向该沉淀物中加入无水乙醇，然后继续采用均质机进行粉碎5分钟，粉碎后加入粒径为5-200微米的药用辅料(该药用辅料包括69wt％海藻糖、5wt％寡聚透明质酸、4wt％壳聚糖、5wt％氯化钠、3wt％甘氨酸、4wt％醋酸钠、1wt％枸橼酸钠、9wt％盐酸精氨酸)，然后在30℃下真空干燥5小时，即可得到所述纤维蛋白原粉；且所述的纤维蛋白原粉中纤维蛋白原占15.8wt％、药用辅料占84.2％；
二、凝血酶粉的制备：
(1)在保持1℃下，将乙醇提取的凝血酶反应液静置1小时，静置后离心，然后收集凝血酶沉淀物；
(2)向所述的凝血酶沉淀物中加入25倍沉淀物用量的20％体积分数的乙醇(乙醇的温度小于0℃)并采用均质机粉碎5分钟(均质机的转速为12000转/分钟)，然后搅拌脱水1小时，脱水后离心，并再次收集凝血酶沉淀物完成第一次脱水；然后向经过第一次脱水后的凝血酶沉淀物中再次加入25倍沉淀物体积的40％的乙醇，继续采用均质机粉碎5分钟(均质机的转速为12000转/分钟)，然后搅拌脱水1小时，脱水后离心，并再次收集凝血酶沉淀物完成第二次脱水；然后以此重复上述步骤对凝血酶沉淀物依次采用60％、80％和100％体积分数的乙醇进行梯度脱水；
(3)最后经过100％的乙醇脱水完成后离心，继续收集凝血酶沉淀物并向该沉淀物中加入无水乙醇，然后继续采用均质机进行粉碎5分钟，粉碎后加入粒径为5-200微米的药用辅料(且该药用辅料包括80wt％海藻糖、5wt％寡聚透明质酸、4wt％壳聚糖、3wt％氯化钙、3wt％蔗糖、5wt％甘氨酸)，然后在35℃下真空干燥3小时，即可得到所述凝血酶粉；所述的凝血酶粉中凝血酶占0.3wt％、药用辅料占99.7wt％；
三、止血材料的制备：
(1)将上述纤维蛋白原粉和凝血酶粉充分混合(纤维蛋白原粉和凝血酶粉的比例是1：4)，然后辐射灭菌，得到所述止血材料。
实施例2
一种基于乙醇梯度洗脱的止血材料的制备方法，包括如下步骤：
一、纤维蛋白原粉制备：
(1)在保持1℃下，将乙醇提取的精制纤维蛋白原反应液静置6小时，静置后离心，然后收集纤维蛋白原沉淀物；
(2)向所述的纤维蛋白原沉淀物中加入20倍沉淀物用量的20％体积分数的乙醇(乙醇的温度小于0℃)并采用均质机粉碎10分钟(均质机的转速为10000转/分钟)，然后搅拌脱水3小时，脱水后离心，并再次收集纤维蛋白原沉淀物完成第一次脱水；然后向经过第一次脱水后的纤维蛋白原沉淀物中再次加入20倍沉淀物体积的40％的乙醇，继续采用均质机粉碎10分钟(均质机的转速为10000转/分钟)，然后搅拌脱水3小时，脱水后离心，并再次收集纤维蛋白原沉淀物完成第二次脱水；然后以此重复上述步骤对纤维蛋白原沉淀物依次采用60％、80％和100％体积分数的乙醇进行梯度脱水；
(3)最后经过100％的乙醇脱水完成后离心，继续收集纤维蛋白原沉淀物并向该沉淀物中加入无水乙醇，然后继续采用均质机进行粉碎10分钟，粉碎后加入粒径为5-200微米的药用辅料(该药用辅料包括75wt％海藻糖、3wt％寡聚透明质酸、3wt％壳聚糖、4wt％氯化钠、3wt％甘氨酸、4wt％醋酸钠、1wt％枸橼酸钠、7wt％盐酸精氨酸)，然后在30℃下真空干燥3小时，即可得到所述纤维蛋白原粉；且所述的纤维蛋白原粉中纤维蛋白原占15.8wt％、药用辅料占84.2％；
二、凝血酶粉的制备：
(1)在保持1℃下，将乙醇提取的凝血酶反应液静置6小时，静置后离心，然后收集凝血酶沉淀物；
(2)向所述的凝血酶沉淀物中加入20倍沉淀物用量的20％体积分数的乙醇(乙醇的温度小于0℃)并采用均质机粉碎10分钟(均质机的转速为10000转/分钟)，然后搅拌脱水3小时，脱水后离心，并再次收集凝血酶沉淀物完成第一次脱水；然后向经过第一次脱水后的凝血酶沉淀物中再次加入20倍沉淀物体积的40％的乙醇，继续采用均质机粉碎10分钟(均质机的转速为10000转/分钟)，然后搅拌脱水3小时，脱水后离心，并再次收集凝血酶沉淀物完成第二次脱水；然后以此重复上述步骤对凝血酶沉淀物依次采用60％、80％和100％体积分数的乙醇进行梯度脱水；
(3)最后经过100％的乙醇脱水完成后离心，继续收集凝血酶沉淀物并向该沉淀物中加入无水乙醇，然后继续采用均质机进行粉碎5分钟，粉碎后加入粒径为5-200微米的药用辅料(且该药用辅料包括83wt％海藻糖、3wt％寡聚透明质酸、5wt％壳聚糖、2wt％氯化钙、3wt％蔗糖、4wt％甘氨酸)，然后在30℃下真空干燥3小时，即可得到所述凝血酶粉；所述的凝血酶粉中凝血酶占0.3wt％、药用辅料占99.7wt％；
三、止血材料的制备：
(1)将上述纤维蛋白原粉和凝血酶粉充分混合(纤维蛋白原粉和凝血酶粉的比例是1：2)，然后辐射灭菌，得到所述止血材料。
实施例3
一种基于乙醇梯度洗脱的止血材料的制备方法，包括如下步骤：
一、纤维蛋白原粉制备：
(1)在保持1℃下，将乙醇提取的精制纤维蛋白原反应液静置12小时，静置后离心，然后收集纤维蛋白原沉淀物；
(2)向所述的纤维蛋白原沉淀物中加入30倍沉淀物用量的20％体积分数的乙醇(乙醇的温度小于0℃)并采用均质机粉碎7分钟(均质机的转速为13000转/分钟)，然后搅拌脱水6小时，脱水后离心，并再次收集纤维蛋白原沉淀物完成第一次脱水；然后向经过第一次脱水后的纤维蛋白原沉淀物中再次加入30倍沉淀物体积的40％的乙醇，继续采用均质机粉碎7分钟(均质机的转速为13000转/分钟)，然后搅拌脱水6小时，脱水后离心，并再次收集纤维蛋白原沉淀物完成第二次脱水；然后以此重复上述步骤对纤维蛋白原沉淀物依次采用60％、80％和100％体积分数的乙醇进行梯度脱水；
(3)最后经过100％的乙醇脱水完成后离心，继续收集纤维蛋白原沉淀物并向该沉淀物中加入无水乙醇，然后继续采用均质机进行粉碎8分钟，粉碎后加入粒径为5-200微米的药用辅料(该药用辅料包括78wt％海藻糖、5wt％氯化钠、3wt％甘氨酸、4wt％醋酸钠、1wt％枸橼酸钠、9wt％盐酸精氨酸)，然后在37℃下真空干燥2小时，即可得到所述纤维蛋白原粉；且所述的纤维蛋白原粉中纤维蛋白原占15.8wt％、药用辅料占84.2％；
二、凝血酶粉的制备：
(1)在保持1℃下，将乙醇提取的凝血酶反应液静置12小时，静置后离心，然后收集凝血酶沉淀物；
(2)向所述的凝血酶沉淀物中加入30倍沉淀物用量的20％体积分数的乙醇(乙醇的温度小于0℃)并采用均质机粉碎7分钟(均质机的转速为13000转/分钟)，然后搅拌脱水6小时，脱水后离心，并再次收集凝血酶沉淀物完成第一次脱水；然后向经过第一次脱水后的凝血酶沉淀物中再次加入30倍沉淀物体积的40％的乙醇，继续采用均质机粉碎7分钟(均质机的转速为13000转/分钟)，然后搅拌脱水6小时，脱水后离心，并再次收集凝血酶沉淀物完成第二次脱水；然后以此重复上述步骤对凝血酶沉淀物依次采用60％、80％和100％体积分数的乙醇进行梯度脱水；
(3)最后经过100％的乙醇脱水完成后离心，继续收集凝血酶沉淀物并向该沉淀物中加入无水乙醇，然后继续采用均质机进行粉碎5分钟，粉碎后加入粒径为5-200微米的药用辅料(且该药用辅料包括89wt％海藻糖、3wt％氯化钙、5wt％蔗糖、3wt％甘氨酸)，然后在37℃下真空干燥1小时，即可得到所述凝血酶粉；所述的凝血酶粉中凝血酶占0.3wt％、药用辅料占99.7wt％；
三、止血材料的制备：
(1)将上述纤维蛋白原粉和凝血酶粉充分混合(纤维蛋白原粉和凝血酶粉的比例是1：3)，然后辐射灭菌，得到所述止血材料。
测试例1
测试上述实施例1-3所制得的止血材料的止血效果：在大鼠肝左外叶下缘以上0.8cm处快速切除左外叶小部分使其流血，切口长度约20mm，宽度约5mm，切口后迅速给予上述实施例1-3制得的止血材料，记录肝脏创面的出血时间和出血量，并空白设置对照组进行对比(空白对照组为不给予任何止血材料的空白试验)，考察本发明各实施例制备的止血材料对肝脏出血创面的止血作用，并与市售纤维蛋白粘合剂对比，结果见图1和图2。
由图1、图2可以看出，与空白对照组相比，本发明实施例1-3制备的止血材料具有显著的止血作用；与市售纤维蛋白粘合剂相比，本发明实施例1-3制备的止血材料出血时间和出血量均更少。
测试例2
测试本发明实施例1-3制备的止血材料的稳定性：分别将市售纤维蛋白粘合剂和本发明实施例1-3制得的止血材料置于25℃、60％RH条件放置24个月，然后取市售纤维蛋白粘合剂与实施例1-3制得的止血材料检测成胶性能，包括成胶时间、粘合力，结果见图3和图4。
从图3、图4可以看出，本发明实施例1-3制得的止血材料与市售纤维蛋白粘合剂相比，其成胶时间和粘合力更稳定，符合质量要求，说明本发明制得止血材料能室温贮存和运输。
上述为本发明的较佳实施例仅用于解释本发明，并不用于限定本发明。凡由本发明的技术方案所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明的保护范围之中。

Claims (10)

1.一种基于乙醇梯度洗脱的止血材料的制备方法，其特征在于，该方法包括如下步骤：
一、纤维蛋白原粉制备：
(1)在低温条件下，将乙醇提取的精制纤维蛋白原反应液静置，然后离心，收集纤维蛋白原沉淀物；
(2)向所述纤维蛋白原沉淀物中依次加入20％、40％、60％、80％、100％体积分数的低温乙醇进行梯度脱水；在每次脱水过程中需将所述纤维蛋白原沉淀物粉碎，脱水后离心，收集沉淀物进行下一次脱水；
(3)最后一次脱水完成后离心，收集纤维蛋白原沉淀物并向沉淀物中加入有机溶剂，然后粉碎，粉碎后加入药用辅料，然后干燥，得到所述纤维蛋白原粉；
二、凝血酶粉的制备：
(1)在低温条件下，将乙醇提取的凝血酶反应液静置，然后离心，收集凝血酶沉淀物；
(2)向所述凝血酶沉淀物中依次加入20％、40％、60％、80％、100％体积分数的低温乙醇进行梯度脱水；在每次脱水过程中需将所述凝血酶沉淀物粉碎，脱水后离心，收集沉淀物进行下一次脱水；
(3)最后一次脱水完成后离心，收集凝血酶沉淀物并向沉淀物中加入无水乙醇，然后粉碎，粉碎后加入药用辅料，然后干燥，得到所述凝血酶粉；
三、止血材料的制备：
(1)将所述纤维蛋白原粉和所述凝血酶粉充分混合，然后辐射灭菌，得到所述止血材料。
2.根据权利要求1所述的一种基于乙醇梯度洗脱的止血材料的制备方法，其特征在于，步骤一、纤维蛋白原粉制备：(1)在-3℃至4℃下，将乙醇提取的精制纤维蛋白原反应液静置1-12小时，然后离心，收集纤维蛋白原沉淀物。
3.根据权利要求1所述的一种基于乙醇梯度洗脱的止血材料的制备方法，其特征在于，步骤一、纤维蛋白原粉制备：(2)中每次均加入所述纤维蛋白原沉淀物20-30倍体积的乙醇进行脱水，且每次脱水的时间均为1-6小时；所述的粉碎采用均质机进行粉碎，所述均质机的转速为10000-13000rpm，粉碎时间为5-10分钟。
4.根据权利要求1所述的一种基于乙醇梯度洗脱的止血材料的制备方法，其特征在于，步骤一、纤维蛋白原粉制备：(3)最后一次脱水完成后离心，收集纤维蛋白原沉淀物并向沉淀物中加入无水乙醇，然后采用均质机进行粉碎，粉碎后加入粒径为5-200μm的药用辅料并混合均匀，然后在25-37℃下真空干燥1-6小时，得到所述纤维蛋白原粉；所述均质机转速为10000-13000rpm，粉碎时间为5-10分钟。
5.根据权利要求4所述的一种基于乙醇梯度洗脱的止血材料的制备方法，其特征在于，所述的药用辅料选自寡聚透明质酸或其盐、壳聚糖、海藻糖、蔗糖、右旋糖酐20、海藻酸钠、氯化钠、醋酸钠、枸橼酸钠、甘氨酸、盐酸精氨酸、组氨酸、赖氨酸、氯化钙中至少一种；所述的纤维蛋白原粉中所述纤维蛋白原占10-20wt％、药用辅料占80-90wt％。
6.根据权利要求1所述的一种基于乙醇梯度洗脱的止血材料的制备方法，其特征在于，步骤二、凝血酶粉的制备：(1)在-3℃至4℃下，将乙醇提取的凝血酶反应液静置1-12小时，然后离心，收集凝血酶沉淀物。
7.根据权利要求1所述的一种基于乙醇梯度洗脱的止血材料的制备方法，其特征在于，步骤二、凝血酶粉的制备：(2)中每次均加入所述凝血酶沉淀物20-30倍体积的乙醇进行脱水，且每次脱水的时间均为1-6小时；所述的粉碎采用均质机进行粉碎，所述均质机的转速为10000-13000rpm，粉碎时间为5-10分钟。
8.根据权利要求1所述的一种基于乙醇梯度洗脱的止血材料的制备方法，其特征在于，步骤二、凝血酶粉的制备：(3)最后一次脱水完成后离心，收集凝血酶沉淀物并向沉淀物中加入无水乙醇，然后采用均质机进行粉碎，粉碎后加入粒径为5-200μm的药用辅料并混合均匀，然后在25-37℃下真空干燥1-6小时，即得到所述凝血酶粉；所述的均质机的转速为10000-13000rpm，且粉碎时间为5-10分钟；所述的药用辅料选自寡聚透明质酸或其盐、壳聚糖、海藻糖、蔗糖、右旋糖酐20、海藻酸钠、氯化钠、醋酸钠、枸橼酸钠、甘氨酸、盐酸精氨酸、组氨酸、赖氨酸、氯化钙中至少一种；所述凝血酶粉中凝血酶占0.1-0.5wt％，药用辅料占99.5-99.9wt％。
9.根据权利要求1所述的一种基于乙醇梯度洗脱的止血材料的制备方法，其特征在于，步骤三、止血材料的制备：中所述纤维蛋白原粉和所述凝血酶粉的质量比为1：(1-5)。
10.一种基于乙醇梯度洗脱的止血材料，其特征在于，采用权利要求1-9任一项所述的制备方法制得。
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