CN112986467B - 一种伊班膦酸注射液中有关物质的测定方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种伊班膦酸注射液中有关物质的测定方法。本发明采用离子色谱法‑电导检测器，聚苯乙烯/二乙烯基苯为填料的色谱柱及保护柱，以氢氧化物作为淋洗液梯度洗脱，并对伊班膦酸注射液进行Ag系列前处理小柱处理，能够有效分离、测定伊班膦酸注射液中的有关物质。本发明与现有技术相比采用离子色谱法结合电导检测器，克服了伊班膦酸注射液的杂质没有紫外吸收的缺点，利用功能基为烷醇基季铵盐的聚苯乙烯/二乙烯基苯为填料的色谱柱，首次实现了可以同时测定有机杂质和无机杂质。
Description
技术领域
本发明涉及一种伊班膦酸注射液中有关物质的测定方法，属于药物分析技术领域。
背景技术
伊班膦酸注射液是第三代双膦酸类药物，由瑞士罗氏公司开发，于1996年在德国首次上市，商品名为主要用于治疗恶性肿瘤所致高钙血症及多发性骨髓瘤和实体瘤的骨转移，并可预防和治疗骨质疏松症。与其他的双膦酸盐类药物相比，伊班膦酸钠具有高效，低毒，使用方便，适应症广等优点，尤其是其肾毒性在膦酸盐类药物里最小，对肾脏安全性最高，在临床应用上具有更强的优势。
杂质水平是药品安全性和有效性的重要因素之一，因此如何准确测定伊班膦酸注射液相关杂质的含量则成为一个亟待解决的问题。
目前伊班膦酸注射液未收入药典，现有进口注册标准及国家标准，主要控制的杂质为磷酸盐和亚磷酸盐，未对其他有机杂质进行深入研究。有文献报道用薄层色谱法及高效液相色谱示差法检测磷酸盐和亚磷酸盐，上述方法存在灵敏度不高、方法重现性差的缺点。
专利文献CN103134886A，采用高效液相色谱紫外法检测伊班膦酸钠原料药中的有关物质，但该申请中的检测方法针对的是中间体杂质Ⅰ(3-N-甲基-N正戊基胺丙酸)和成品的降解产物杂质Ⅱ(1-羟基-3-(N-戊胺基)-亚丙基二膦酸)，其无法对伊班膦酸钠原料药的国家标准中主要控制的亚磷酸和磷酸杂质进行检测；另一篇专利文献CN109668975A，采用高效液相色谱-电雾式检测器检测伊班膦酸注射液中的有关物质，但该申请中的检测方法灵敏度不高，专利报道最低定量限只有0.08％，不满足ICH中对于报告阈值(0.05％)的要求，且实际检测中发现其中控制的伊班膦酸钠杂质E与磷酸的保留时间相当，未能分离，专属性较差。
为了有效分析药品质量，保证用药安全，需要开发出一种灵敏度高、专属性好、耐用性强、便捷、有效的杂质检测方法，能够同时检测磷酸、亚磷酸及其他有机杂质，并能排除伊班膦酸注射液辅料中氯离子的干扰。
发明内容
本发明根据伊班膦酸钠原料药合成工艺、伊班膦酸注射液处方工艺、结合强制降解实验结果，对伊班膦酸注射液中的杂质进行了全面的分析。采用离子色谱法，电导检测器，以聚苯乙烯/二乙烯基苯为填料的色谱柱，以氢氧化物为淋洗液梯度洗脱，优化伊班膦酸注射液样品的前处理方法，建立了适用于伊班膦酸注射液的有关物质测定方法。不仅能够有效实现了对无机杂质磷酸、亚磷酸的控制，还能对伊班膦酸钠杂质A、伊班膦酸钠杂质E及其他工艺杂质和降解杂质进行控制，该方法能排除伊班膦酸注射液中辅料氯离子的干扰，灵敏度高、专属性好、耐用性强、准确度高，能够对伊班膦酸注射液中有关物质进行严格的质量控制，保证了伊班膦酸注射液的安全性和可靠性，具有现实意义。
本发明的目的在于提供一种伊班膦酸注射液中有关物质的检测方法。
本发明提供一种伊班膦酸注射液中有关物质的检测方法，包括以下步骤：
(1)称取醋酸钠、氯化钠、亚磷酸、碳酸钠、磷酸二氢钠、伊班膦酸钠、伊班膦酸钠杂质A、伊班膦酸钠杂质E各适量，制备系统适用性溶液；
(2)称取伊班膦酸钠、伊班膦酸钠杂质A、伊班膦酸钠杂质E、磷酸二氢钠、亚磷酸各适量，制备对照品溶液；
(3)取伊班膦酸注射液，经强酸性阳离子交换树脂前处理小柱过滤，再经微孔滤膜过滤，取续滤液，作为供试品溶液；
(4)采用离子色谱法分别对所述系统适用性溶液、对照品溶液、供试品溶液进行检测，
其中所述离子色谱法的检测条件为：
仪器：离子色谱仪-电导检测器；
色谱柱及保护柱的固定相为聚苯乙烯/二乙烯基苯；
淋洗液为氢氧化物；
(5)采用梯度洗脱方式洗脱；
其中所述伊班膦酸钠杂质A的结构式为：
其中所述伊班膦酸钠杂质E的结构式为：
作为本发明方法的优选，所述的步骤(3)取伊班膦酸注射液，经Ag-H型或Ag-Na型强酸性阳离子交换树脂复合前处理小柱过滤，再经微孔滤膜过滤，取续滤液作为供试品溶液；或者取待检的伊班膦酸注射液，经Ag型强酸性阳离子交换树脂前处理小柱过滤，再经H型或Na型强酸性阳离子交换树脂前处理小柱过滤，再经微孔滤膜过滤，取续滤液，作为供试品溶液。
本发明的上述测定方法，优选地，步骤(3)中：所述Ag-H型强酸性阳离子交换树脂复合小柱的规格为1cc～10cc，优选1cc～2.5cc；所述Ag-Na型强酸性阳离子交换树脂复合小柱的规格为1cc～10cc，优选1cc～2.5cc；所述Ag型强酸性阳离子交换树脂复合小柱的规格为1cc～10cc，优选1cc～2.5cc；所述H型强酸性阳离子交换树脂复合小柱的规格为1cc～10cc，优选1cc～2.5cc；所述Na型强酸性阳离子交换树脂复合小柱的规格为1cc～10cc，优选1cc～2.5cc。
本发明的上述测定方法，优选地，步骤(3)中：所述微孔滤膜的孔径为0.22μm，材质为亲水混合纤维素MCE。
本发明的上述测定方法，一个优选的实施例中，步骤4)中所述色谱柱的固定相的功能基为烷醇基季铵盐，长度为250mm，内径为4mm，粒径为7.5μm；保护柱的功能基为烷醇基季铵盐，长度为50mm，内径为4mm，粒径为7.5μm。
本发明的上述测定方法，一个优选的实施例中，步骤4)中所述淋洗液为氢氧化钾。
本发明的上述测定方法，其中，步骤4)中所述色谱柱及保护柱的柱温为20℃～45℃；优选30℃。
本发明的上述测定方法，其中，在梯度洗脱过程中，淋洗液的流速为0.5ml/min～2.0ml/min；优选1.0ml/min。
本发明的上述测定方法，其中，在梯度洗脱过程中，进样体积为10μl～50μl；优选25μl。
在本发明的一个优选实施例中，梯度洗脱程序为：
| 时间(min) | 淋洗液浓度(mmol/L) |
| 0～20 | 12.0 |
| 20～25 | 12.0～42.0 |
| 25～55 | 42.0 |
| 55～75 | 12.0 |
结果计算：
对于已知杂质(伊班膦酸钠杂质A、伊班膦酸钠杂质E、磷酸盐、亚磷酸)均按外标法以峰面积计算；对于其他单个未知杂质，按伊班膦酸为对照的峰面积外标法计算。
本发明提供的一种伊班膦酸注射液中有关物质的测定方法，有益效果如下：
(1)本发明与现有技术相比采用离子色谱法结合电导检测器，克服了伊班膦酸注射液的杂质没有紫外吸收的缺点，利用功能基为烷醇基季铵盐的聚苯乙烯/二乙烯基苯为填料的色谱柱，首次实现了可以同时测定有机杂质和无机杂质(磷酸和亚磷酸)。
(2)本发明首次将Ag-H，Ag-Na型强酸性阳离子交换树脂复合小柱用于伊班膦酸注射液的前处理，避免了伊班膦酸注射液中高浓度氯离子对有关物质测定的干扰。前处理方法操作简便，容易控制，所需样品量较少，成本较低。
(3)本发明分析方法灵敏度高、专属性强、准确度好，且操作简便快速，完善了伊班膦酸注射液有关物质检测的质量标准。
附图说明
图1为本发明Ag-H型强酸性阳离子交换树脂复合前处理小柱外形图；
图2为本发明Ag-Na型强酸性阳离子交换树脂复合前处理小柱外形图；
图3为本发明专属性试验系统适用性溶液色谱图；
图4为本发明准确度试验中对照品溶液色谱图；
图5为本发明准确度试验中供试品溶液色谱图；
图6为本发明准确度试验中加标供试品溶液色谱图；
具体实施方式
下面通过实施例来进一步说明本发明。应当理解为：本发明的实施例仅仅是用于说明本发明而给出，而不是对本发明的限制，在本发明技术方案的前提下对本发明的简单改进均属于本发明的保护范围。
本发明具体实施方式中使用的伊班膦酸注射液、设备、对照品、前处理小柱、微孔滤膜均为已知产品，伊班膦酸注射液为本公司制备品，设备、对照品、前处理小柱、微孔滤膜通过购买市售产品获得。
主要设备来源如下：
ICS-900型离子色谱仪，购自ThermoFisher公司；
DS5型电导检测器，购自ThermoFisher公司；
AS18色谱柱(4mm×250mm，7.5μm)，购自ThermoFisher公司；
AG18保护柱(4mm×50mm，7.5μm)，购自ThermoFisher公司；
供试品及杂质对照品的主要来源如下：
伊班膦酸注射液的批号为190701，来源于南京恒生制药有限公司；处方组成为：伊班膦酸钠、冰醋酸、醋酸钠、氯化钠、注射用水；
伊班膦酸钠杂质A对照品批号为181212B，含量为100.0％，来源于南京生命能科技开发有限公司；
伊班膦酸钠杂质E对照品批号为190806，含量为95.7％，来源于南京生命能科技开发有限公司；
伊班膦酸钠对照品批号为190130，含量为94.7％，来源于南京生命能科技开发有限公司；
磷酸二氢钠批号为J1819169，含量为99.02％，来源于Aladdin公司；
亚磷酸批号为L1821017，含量为99.9908％，来源于Aladdin公司；
本发明中所用对照品的化学名称及结构式分别如下：
伊班膦酸钠化学名称为1-羟基-3-(N-甲基-戊胺基)-亚丙基二膦酸一钠盐一水合物；
伊班膦酸钠杂质A化学名称为1-羟基-3-戊胺基-亚丙基二膦酸一钠盐一水合物；
伊班膦酸钠杂质E化学名称为1-羟基-3-甲氨基-亚丙基二膦酸一钠盐；
实施例1本发明的检测分析方法的方法学研究
本实施例中各种试验均采用如下条件：
仪器：ICS-900离子色谱仪-DS5电导检测器
色谱柱：AS18，规格为40mm×250mm，7.5μm
保护柱：AG18，规格为40mm×50mm，7.5μm
淋洗液：氢氧化钾
稀释液：超纯水(电阻率≥18.2Ω)
进样体积：25μl
柱温：30℃
按下表进行线性梯度洗脱：
检测步骤：
取适量稀释液，作为空白溶液。
取醋酸钠、氯化钠、亚磷酸、碳酸钠、磷酸二氢钠、伊班膦酸钠杂质A、伊班膦酸钠杂质E、伊班膦酸钠各适量，用稀释液溶解并稀释制成每1ml中约含醋酸根、氯离子、亚磷酸根、碳酸根、磷酸根、伊班膦酸钠杂质A、伊班膦酸钠杂质E各约3μg，伊班膦酸钠约为1mg的溶液，作为系统适用性溶液。
取磷酸二氢钠、亚磷酸、伊班膦酸钠、伊班膦酸钠杂质A、伊班膦酸钠杂质E各适量，用稀释液溶解并稀释制成每1ml中约含磷酸根3μg，亚磷酸根2μg，伊班膦酸、伊班膦酸钠杂质A、伊班膦酸钠杂质E各约1μg的溶液，作为对照品溶液。
取待检的伊班膦酸注射液样品，经Ag-Na型强酸性阳离子交换树脂复合前处理小柱(如图2所示，规格1cc)过滤，再经0.22μm MCE微孔滤膜过滤，取续滤液，作为供试品溶液。
1、系统适用性及系统精密度试验
空白溶液：取适量稀释液至进样管中，即得。
系统适用性溶液：精密称取醋酸钠、氯化钠、亚磷酸、碳酸钠、磷酸二氢钠、伊班膦酸钠杂质A、伊班膦酸钠杂质E、伊班膦酸钠各适量，用稀释液溶解并稀释制成每1ml中约含醋酸根、氯离子、亚磷酸根、碳酸根、磷酸根、伊班膦酸钠杂质A、伊班膦酸钠杂质E各约3μg，伊班膦酸钠约为1mg的溶液，即得。
对照品溶液：精密称取磷酸二氢钠、亚磷酸、伊班膦酸钠、伊班膦酸钠杂质A、伊班膦酸钠杂质E各适量，用稀释液溶解并稀释制成每1ml中约含磷酸根3μg，亚磷酸根2μg，伊班膦酸、伊班膦酸钠杂质A、伊班膦酸钠杂质E各约1μg的溶液，即得。
检测：精密量取空白溶液、系统适用性溶液、对照品溶液各25μl，注入离子色谱仪，结果见表1，表2。
表1系统适用性试验结果表
| 系统适用性指标 | 结果 |
| 伊班膦酸钠杂质A与主峰的分离度 | 1.1 |
| 其它各杂质峰之间的分离度 | 2.3～22.1 |
表2系统精密度试验结果表
结果表明：系统适用性溶液中伊班膦酸钠杂质A与主峰分离度不低于1.0，其它各杂质峰的分离度不低于1.5，系统分离度符合要求；6针对照品溶液中各杂质峰面积RSD均小于10.0％，6针对照品溶液中各杂质保留时间RSD均小于1.0％，系统精密度符合要求。
2、专属性试验
空白辅料溶液：称取氯化钠1720mg、醋酸钠40.8mg、冰醋酸102mg，加水200ml混匀，再取上述溶液约4ml，经Ag-Na前处理小柱过滤，再经0.22μm MCE滤膜过滤，弃去初滤液约2ml，取续滤液即得。
空白溶液、系统适用性溶液同第1项下。
检测：精密量取空白溶液、空白辅料溶液、系统适用性溶液各25μl，注入离子色谱仪，专属性试验系统适用性溶液色谱图如图3所示。专属性结果见表3。
表3专属性结果
结果表明：空白溶液及空白辅料对样品测试无干扰，各杂质峰均能达到基线分离。
3、检测限与定量限
线性储备液：称取磷酸二氢钠、亚磷酸、伊班膦酸钠、伊班膦酸钠杂质A、伊班膦酸钠杂质E各适量，用稀释液溶解并稀释制成每1ml中约含磷酸根、亚磷酸根、伊班膦酸、伊班膦酸钠杂质A、伊班膦酸钠杂质E各约40μg的溶液，混匀即得。
检测限溶液：精密量取1.5ml线性储备液，置200ml量瓶中，用稀释液稀释至刻度，混匀即得。
定量限溶液：精密量取2.5ml线性储备液，置200ml量瓶中，用稀释液稀释至刻度，混匀即得。
检测：精密量取空白溶液、检测限溶液、定量限溶液各25μl，注入离子色谱仪，检测限结果见表4、定量限结果见表5。
表4检测限结果
| 名称 | 浓度(μg/mL) | 检测限S/N | 检测限(％) |
| 亚磷酸根 | 0.3150 | 108 | 0.03 |
| 伊班膦酸钠杂质E | 0.3043 | 84 | 0.03 |
| 磷酸根 | 0.3023 | 189 | 0.03 |
| 伊班膦酸钠杂质A | 0.3091 | 36 | 0.03 |
| 伊班膦酸 | 0.2978 | 29 | 0.03 |
表5定量限结果
| 名称 | 浓度(μg/mL) | 定量限S/N | 定量限(％) |
| 亚磷酸根 | 0.5250 | 147 | 0.05 |
| 伊班膦酸钠杂质E | 0.5071 | 116 | 0.05 |
| 磷酸根 | 0.5038 | 264 | 0.05 |
| 伊班膦酸钠杂质A | 0.5151 | 48 | 0.05 |
| 伊班膦酸 | 0.4963 | 39 | 0.05 |
结果表明：亚磷酸根、伊班膦酸钠杂质E、磷酸根、伊班膦酸钠杂质A、伊班膦酸的检测限S/N均大于3，定量限的S/N均大于10，均符合要求。
4、线性和范围
线性储备液同第3项下；
线性溶液：分别精密量取线性储备液2.5ml、2.0ml、2.5ml、3.0ml、3.75ml、5.0ml、3.75ml、4.5ml，置于200ml、100ml、100ml、100ml、100ml、100ml、50ml、50ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，分别作为0.05％、0.08％、0.1％、0.12％、0.15％、0.20％、0.30％、0.36％限度浓度的线性溶液。
检测：精密量取空白溶液、各限度浓度水平的线性溶液25μl，注入离子色谱仪，结果见表6。
表6线性试验结果
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结果表明：亚磷酸根线性范围为0.5250μg/ml～3.7798μg/ml(0.05％～0.38％)；伊班膦酸钠杂质E线性范围为0.5071μg/ml～3.6513μg/ml(0.05％～0.36％)；磷酸盐的线性范围为0.5038μg/ml～3.6274μg/ml(0.05％～0.36％)；伊班膦酸钠杂质A线性范围为0.5151μg/ml～3.7089μg/ml(0.05％～0.37％)；伊班膦酸线性范围为0.4963μg/ml～3.5737μg/ml(0.05％～0.36％)；各已知杂质及伊班膦酸的相关系数R、|Y轴截距|/100％浓度响应值、响应因子的RSD(％)均符合法规要求，峰面积与浓度线性关系较好。
5、方法精密度
供试品溶液：取伊班膦酸注射液约4ml，经Ag-Na型前处理小柱过滤，再经0.22μmMCE滤膜过滤，弃去初滤液2ml，取续滤液即得，平行配制6份。
检测：按照本发明的检测方法进行检测，计算有关物质结果，方法精密度结果见表7。
表7方法精密度结果
由上述结果可知，本发明测定方法的精密度良好。
6、准确度
伊班膦酸注射液加标储备液：称取磷酸二氢钠、亚磷酸、伊班膦酸钠杂质A、伊班膦酸钠杂质E各适量，用稀释液溶解并稀释制成每1ml中约含磷酸根120μg、亚磷酸根80μg、伊班膦酸钠杂质A、伊班膦酸钠杂质E各约40μg的溶液，混匀即得。
准确度溶液1(加标LOQ限度)：精密量取0.25ml线性储备液，置20ml量瓶中，加伊班膦酸注射液稀释至刻度，摇匀。取上述溶液约4ml，过串联0.22μm MCE微孔滤膜的Ag-Na前处理小柱，弃去初滤液约2ml，取续滤液即得。平行配制2份。
准确度溶液2(加标100％限度)：精密量取0.5ml伊班膦酸注射液加标储备液，置20ml量瓶中，加伊班膦酸注射液稀释至刻度，摇匀。取上述溶液约4ml，过串联0.22μm MCE微孔滤膜的Ag-Na前处理小柱，弃去初滤液约2ml，取续滤液即得。平行配制2份。
准确度溶液3(加标150％限度)：精密量取0.75ml伊班膦酸注射液加标储备液，置20ml量瓶中，加伊班膦酸注射液稀释至刻度，摇匀。取上述溶液约4ml，过串联0.22μm MCE微孔滤膜的Ag-Na前处理小柱，弃去初滤液约2ml，取续滤液即得。平行配制2份。
测定：取空白溶液、对照品溶液、供试品溶液及准确度溶液进样，记录色谱图，计算各限度供试品溶液的回收率及回收率RSD，考察准确度，准确度结果见表8。
表8准确度结果
图4为本发明准确度试验中对照品溶液色谱图；图5为本发明准确度试验中伊班膦酸注射液供试品溶液色谱图；图6为本发明准确度试验中伊班膦酸注射液加标供试品溶液色谱图。结果表明：伊班膦酸注射液各6份准确度溶液中，各限度浓度下，各杂质回收率在80.0％～120.0％，RSD均小于10.0％，均符合准确度要求。
7、溶液稳定性
供试品溶液同第5项下。
检测：按照本发明的检测方法对供试品溶液分别在0小时，12小时，1天，3天，进行检测，计算有关物质结果，供试品溶液稳定性结果见表9。
表9供试品溶液稳定性结果
注：ND表示未检测到，N/A表示不适用。
结果表明：供试品溶液在室温条件下，于不同天测定，不同时间点各已知杂质及未知杂质含量均在定量限0.05％以下，无新杂质产生，室温放置3天稳定。
8、耐用性
将通过改变各种色谱条件来测定供试品有关物质含量，以此评估测定条件有一定的变动时，系统和测定结果不受影响的承受程度，各种试验条件见表10，测定结果见表11。
表10耐用性试验条件
| 试验 | 流速 | 柱温(℃) | 树脂复合小柱 | 微孔滤膜孔径 | 进样体积 | 淋洗液 |
| 初始 | 1.0 | 30 | Ag-Na,1cc | 0.22μm | 25μl | 氢氧化钾 |
| 试验1 | 0.5 | 30 | Ag-Na,1cc | 0.22μm | 25μl | 氢氧化钾 |
| 试验2 | 2.0 | 30 | Ag-Na,1cc | 0.22μm | 25μl | 氢氧化钾 |
| 试验3 | 1.0 | 20 | Ag-Na,1cc | 0.22μm | 25μl | 氢氧化钾 |
| 试验4 | 1.0 | 45 | Ag-Na,1cc | 0.22μm | 25μl | 氢氧化钾 |
| 试验5 | 1.0 | 30 | Ag-Na,2.5cc | 0.22μm | 25μl | 氢氧化钾 |
| 试验6 | 1.0 | 30 | Ag-Na,10cc | 0.22μm | 25μl | 氢氧化钾 |
| 试验7 | 1.0 | 30 | Ag-H,1cc | 0.22μm | 25μl | 氢氧化钾 |
| 试验8 | 1.0 | 30 | Ag-H,2.5cc | 0.22μm | 25μl | 氢氧化钾 |
| 试验9 | 1.0 | 30 | Ag-H,10cc | 0.22μm | 25μl | 氢氧化钾 |
| 试验10 | 1.0 | 30 | Ag-Na,1cc | 0.45μm | 25μl | 氢氧化钾 |
| 试验11 | 1.0 | 30 | Ag-Na,1cc | 0.22μm | 10μl | 氢氧化钾 |
| 试验12 | 1.0 | 30 | Ag-Na,1cc | 0.22μm | 50μl | 氢氧化钾 |
| 试验13 | 1.0 | 30 | Ag-Na,1cc | 0.22μm | 25μl | 氢氧化钠 |
表11耐用性试验结果
结果表明：改变试验条件后，供试品溶液的测定结果未发生改变，表明此方法的耐用性较好。
综上所述，本发明提供了一种同时适用于伊班膦酸注射液有关物质测定的方法，首次将注射液中空白辅料处理技术应用于该有关物质方法中，该方法专属性好，辅料、各已知杂质峰之间均能达到基线分离；系统适用性良好；该方法的灵敏度极高，各已知杂质的检测限能达到0.3μg/ml；方法的耐用性、精密度、准确度均较好，为监控伊班膦酸注射液中的有关物质，提供了一种便捷的检测方法，保证了产品质量和患者用药安全。
Claims (8)
1.一种伊班膦酸注射液中有关物质的测定方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)配制含醋酸钠、氯化钠、亚磷酸、碳酸钠、磷酸二氢钠、伊班膦酸钠、伊班膦酸钠杂质A、伊班膦酸钠杂质E的溶液作为系统适用性溶液；
(2)配制含伊班膦酸钠、伊班膦酸钠杂质A、伊班膦酸钠杂质E、磷酸二氢钠、亚磷酸的溶液作为对照品溶液；
(3)取伊班膦酸注射液，经Ag-H型或Ag-Na型强酸性阳离子交换树脂复合前处理小柱过滤，再经微孔滤膜过滤，取续滤液作为供试品溶液；或者取待检的伊班膦酸注射液，经Ag型强酸性阳离子交换树脂前处理小柱过滤，再经H型或Na型强酸性阳离子交换树脂前处理小柱过滤，再经微孔滤膜过滤，取续滤液，作为供试品溶液；
(4)采用离子色谱法分别对所述系统适用性溶液、对照品溶液、供试品溶液进行检测，其中所述离子色谱法的检测条件为：
仪器：离子色谱仪-电导检测器；
色谱柱及保护柱的固定相为聚苯乙烯/二乙烯基苯，柱温为30℃；
所述色谱柱的固定相的功能基为烷醇基季铵盐，长度为250mm，内径为4mm，粒径为7.5μm；保护柱的功能基为烷醇基季铵盐，长度为50mm，内径为4mm，粒径为7.5μm；
淋洗液为氢氧化钾溶液，流速为0.5ml/min～2.0ml/min；
采用如下梯度洗脱：0～20min，淋洗液浓度12.0mmol/L；20～25min，淋洗液浓度12.0～42.0mmol/L；25～55min，淋洗液浓度42.0mmol/L；55～75min，淋洗液浓度12.0mmol/L；
其中所述伊班膦酸钠杂质A的结构式为：
其中所述伊班膦酸钠杂质E的结构式为：
2.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于，步骤(3)中所述Ag-H型强酸性阳离子交换树脂复合小柱的规格为1cc～10cc；所述Ag-Na型强酸性阳离子交换树脂复合小柱的规格为1cc～10cc；所述Ag型强酸性阳离子交换树脂复合小柱的规格为1cc～10cc；所述H型强酸性阳离子交换树脂复合小柱的规格为1cc～10cc；所述Na型强酸性阳离子交换树脂复合小柱的规格为1cc～10cc。
3.根据权利要求2所述的测定方法，其特征在于，步骤(3)中所述Ag-H型强酸性阳离子交换树脂复合小柱的规格为1cc～2.5cc；所述Ag-Na型强酸性阳离子交换树脂复合小柱的规格为1cc～2.5cc；所述Ag型强酸性阳离子交换树脂复合小柱的规格为1cc～2.5cc；所述H型强酸性阳离子交换树脂复合小柱的规格为1cc～2.5cc；所述Na型强酸性阳离子交换树脂复合小柱的规格为1cc～2.5cc。
4.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于，步骤(3)中所述微孔滤膜的孔径为0.22～0.45μm。
5.根据权利要求4所述的测定方法，其特征在于，步骤(3)中所述微孔滤膜的孔径为0.22μm。
6.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于，在梯度洗脱过程中，淋洗液的流速为1.0ml/min。
7.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于，在梯度洗脱过程中，进样体积为10μl～50μl。
8.根据权利要求7所述的测定方法，其特征在于，在梯度洗脱过程中，进样体积为25μl。
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