CN112979750B - 二氧六环修饰的四氢咔啉-3-甲酰-The-EDG、其制备、抗转移活性和应用 - Google Patents
二氧六环修饰的四氢咔啉-3-甲酰-The-EDG、其制备、抗转移活性和应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN112979750B CN112979750B CN201911214985.7A CN201911214985A CN112979750B CN 112979750 B CN112979750 B CN 112979750B CN 201911214985 A CN201911214985 A CN 201911214985A CN 112979750 B CN112979750 B CN 112979750B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- carboline
- tetrahydro
- dimethyl
- obzl
- formyl
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
- C07K7/06—Linear peptides containing only normal peptide links having 5 to 11 amino acids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
- A61P35/04—Antineoplastic agents specific for metastasis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Oncology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)
Abstract
Description
技术领域
本发明涉及3S-1-(1,1-二甲基-1,3-二氧六环-6-螺基)-1,2,3,4-四氢-β-咔啉-3-甲酰-The-Glu-Asp-Gly化合物,涉及它的制备方法,涉及它的抗肿瘤转移活性。因而本发明涉及该化合物在抗肿瘤转移药物中的应用。
背景技术
肿瘤已经成为严重威胁人类健康的常见病。例如2015年新增的肿瘤患者大约有392.9万,其中有233.8万肿瘤患者死亡。平均每天有超过1万人被确诊为肿瘤。目前,临床应用治疗癌症的方法主要有放射疗法,化学疗法,抗体治疗和免疫治疗等。然而由于严重的副作用,药物治疗后产生多药耐药性以及昂贵的治疗价格,使得癌症的治疗再度陷入困境。发明新型的抗肿瘤药物是药物研究的前沿之一。
3S-1-(1,1-二甲基-1,3-二氧六环-6-螺基)-1,2,3,4-四氢-β-咔啉-3-羧酸是具有多种生物活性的药效团,茶氨酸也是具有多种生物活性的药效团。发明人发现3S-1-(1,1-二甲基-1,3-二氧六环-6-螺基)-1,2,3,4-四氢-β-咔啉-3-羧酸与茶氨酸两个药效团融合形成的下式左的3S-1-(1,1-二甲基-1,3-二氧六环-6-螺基)-1,2,3,4-四氢-β-咔啉-3-甲酰-The具有抗肿瘤的作用。进一步的研究使,发明人认识到,在3S-1-(1,1-二甲基-1,3-二氧六环-6-螺基)-1,2,3,4-四氢-β-咔啉-3-甲酰-The的羧基端引入尿毒素三肽Glu-Asp-Gly生成的下式右的3S-1-(1,1-二甲基-1,3-二氧六环-6-螺基)-1,2,3,4-四氢-β-咔啉-3-甲酰-The-Glu-Asp-Gly还具有抗肿瘤转移作用。根据这种认识,发明人提出了本发明。
发明内容
本发明的第一个内容是提供下式的3S-1-(1,1-二甲基-1,3-二氧六环-6-螺基)-1,2,3,4-四氢-β-咔啉-3-甲酰-The-Glu-Asp-Gly。
本发明的第二个内容是提供3S-1-(1,1-二甲基-1,3-二氧六环-6-螺基)-1,2,3,4-四氢-β-咔啉-3-甲酰-The-Glu-Asp-Gly的制备方法,该方法包括:
1)合成(3S)-1,1-二羟甲基-四氢-β-咔啉-3-羧酸苄酯;
2)合成3S-1-(1,1-二甲基-1,3-二氧六环-6-螺基)-1,2,3,4-四氢-β-咔啉-3-羧酸苄酯;
3)合成3S-1-(1,1-二甲基-1,3-二氧六环-6-螺基)-1,2,3,4-四氢-β-咔啉-3-羧酸;
4)采用二环己基碳二亚胺(DCC)为缩合剂,1-羟基苯并三唑(HOBt)为催化剂的液相缩合的方法,合成3S-1-(1,1-二甲基-1,3-二氧六环-6-螺基)-1,2,3,4-四氢-β-咔啉-3-甲酰-The-OBzl;
5)合成3S-1-(1,1-二甲基-1,3-二氧六环-6-螺基)-1,2,3,4-四氢-β-咔啉-3-甲酰-The;
6)采用DCC为缩合剂,HOBt为催化剂的液相缩合的方法,合成HCl·Glu(OBzl)-Asp(OBzl)-Gly-OBzl;
7)采用DCC为缩合剂,HOBt为催化剂的液相缩合的方法,合成3S-1-(1,1-二甲基-1,3-二氧六环-6-螺基)-1,2,3,4-四氢-β-咔啉-3-甲酰-The-Glu(OBzl)-Asp(OBzl)-Gly-OBzl;
8)合成3S-1-(1,1-二甲基-1,3-二氧六环-6-螺基)-1,2,3,4-四氢-β-咔啉-3-甲酰-The-Glu-Asp-Gly;
本发明的第三个内容是评价3S-1-(1,1-二甲基-1,3-二氧六环-6-螺基)-1,2,3,4-四氢-β-咔啉-3-甲酰-The-Glu-Asp-Gly的抗肿瘤转移的作用其中包括:
1.评价3S-1-(1,1-二甲基-1,3-二氧六环-6-螺基)-1,2,3,4-四氢-β-咔啉-3-甲酰-The-Glu-Asp-Gly抑制肿瘤细胞迁移及侵袭的能力
2.评价3S-1-(1,1-二甲基-1,3-二氧六环-6-螺基)-1,2,3,4-四氢-β-咔啉-3-甲酰-The-Glu-Asp-Gly体内抑制Lewis肺癌小鼠肿瘤转移活性
附图说明
图1.3S-1-(1,1-二甲基-1,3-二氧六环-6-螺基)-1,2,3,4-四氢-β-咔啉-3-甲酰-The-Glu-Asp-Gly的合成路线:i)三氟乙酸,1,3-二羟基丙酮;ii)浓硫酸,丙酮;iii)钯碳(Pd),H2;iv)二环己基碳二亚胺(DCC),1-羟基苯并三唑(HOBt),N-甲基吗啉(NMM);v)氯化氢的乙酸乙酯溶液(4M)。
具体实施方式
为了进一步阐述本发明,下面给出一系列实施例。这些实施例完全是例证性的,它们仅用来对本发明进行具体描述,不应当理解为对本发明的限制。
实施例1制备(3S)-1,1-二羟甲基-四氢-β-咔啉-3-羧酸苄酯(1)
往10mL二氯甲烷中加入2g(7.2mmol)L-色氨酸苄酯,充分搅拌使其溶解。冰浴条件下,往溶液中缓慢滴加1mL三氟醋酸。然后再往该溶液中加0.78g(8.6mmol)1,3-二羟基丙酮,室温反应7小时。TLC显示L-色氨酸苄酯消失(二氯甲烷/甲醇:30:1)。冰浴条件下,往溶液中加入50mL饱和NaHCO3溶液,充分搅拌,然后留下二氯甲烷层,再用饱和NaHCO3溶液(30mL×3)洗,再用饱和NaCl溶液(30mL×3)洗,二氯甲烷层用无水硫酸钠干燥12小时。过滤,滤液减压浓缩得到2.03g(77%)标题化合物,为黄色粉末。ESI-MS(m/e):367[M+H]+。
实施例2制备3S-1-(1,1-二甲基-1,3-二氧六环-6-螺基)-1,2,3,4-四氢-β-咔啉-3-羧酸苄酯(2)
往5mL无水丙酮中加入0.2g(0.55mmol)(3S)-1,1-二羟甲基-四氢-β-咔啉-3-羧酸苄酯(1)。在冰浴条件下,往里加入100μL浓硫酸,之后,室温搅拌3小时。TLC显示化合物1消失(石油醚/乙酸乙酯,4:1)。冰浴条件下,用饱和NaHCO3溶液调节反应液pH值为7,得到的溶液减压浓缩除去丙酮,残留液再加乙酸乙酯萃洗3遍,乙酸乙酯层用饱和NaCl溶液洗至中性。乙酸乙酯层用无水硫酸钠干燥12小时。过滤,滤液减压浓缩得到的棕黄色固体,经柱层层析分离(石油醚/乙酸乙酯,4:1)得到0.08g(35.8%)标题化合物,为白色国体。ESI-MS(m/e):407[M+H]+。
实施例3制备3S-1-(1,1-二甲基-1,3-二氧六环-6-螺基)-1,2,3,4-四氢-β-咔啉-3-羧酸(3)
往10mL甲醇中加入0.20g(0.5mmol)3S-1-(1,1-二甲基-1,3-二氧六环-6-螺基)-1,2,3,4-四氢-β-咔啉-3-羧酸苄酯(2)和0.02g Pd/C。搅拌并通12h氢气,TLC显示化合物2消失(石油醚/乙酸乙酯,4:1)。过滤除去钯碳(Pd/C),滤液减压浓缩。残留物用乙醚磨洗,得到0.14g(90%)标题化合物,为无色固体。ESI-MS(m/e):317[M+H]+。
实施例4制备3S-1-(1,1-二甲基-1,3-二氧六环-6-螺基)-1,2,3,4-四氢-β-咔啉-3-甲酰-The-OBzl(4)
往20mL四氢呋喃中加入0.19g(0.6mmol)3S-1-(1,1-二甲基-1,3-二氧六环-6-螺基)-1,2,3,4-四氢-β-咔啉-3-羧酸(3),0.15g(0.72mmol)N,N'-二环己基碳二亚胺(DCC)和0.09g(0.72mmol)1-羟基苯并三唑(HOBt)。冰浴下搅拌30分钟。之后,再向反应液中加入0.20g(0.66mmol)HCl·The-OBzl。之后,向反应液中滴加N-甲基吗啉(NMM)调节反应液的pH值为9。室温搅拌6小时,TLC显示化合物3消失(二氯甲烷/甲醇,30/1)。滤除二环己基脲(DCU),滤液减压浓缩,得到的残留物用30mL乙酸乙酯溶解,溶液再过滤除去DCU。滤液依次用5%NaHCO3水溶液萃洗(15mL×3),饱和NaCl水溶液洗(15mL×3),5%KHSO4水溶液洗(15mL×3),饱和NaCl水溶液洗(15mL×3),5%NaHCO3水溶液洗(15mL×3),饱和NaCl水溶液洗(15mL×3),用无水硫酸钠干燥12小时。过滤,滤液减压浓缩,得到的黄色粉末经硅胶柱层析纯化(石油醚/乙酸乙酯,10/1),得到0.27g(80%)标题化合物,为无色粉末。ESI-MS(m/e):563[M+H]+;1H-NMR(300MHz,DMSO-d6):δ/ppm=10.94(s,1H),8.28(t,J=7.2Hz,1H),7.79(s,1H),7.37(m,6H),7.07(m,1H),7.02(m,1H),5.16(s,1H),5.12(s,1H),4.40(m,1H),4.21(m,1H),3.99(m,1H),3.75(m,1H),3.61(m,2H),3.02(m,2H),2.12(m,2H),1.82(m,2H),1.65(s,3H),1.42(s,3H),1.22(m,2H),1.01(m,3H)。
实施例5制备3S-1-(1,1-二甲基-1,3-二氧六环-6-螺基)-1,2,3,4-四氢-β-咔啉-3-甲酰-The(5)
往10mL甲醇中加入0.28g(0.5mmol)3S-1-(1,1-二甲基-1,3-二氧六环-6-螺基)-1,2,3,4-四氢-β-咔啉-3-甲酰-The-OBzl(4)和0.02g钯碳(Pd/C)。搅拌并通12h氢气,TLC显示化合物4消失(二氯甲烷/甲醇,30/1)。过滤除去Pd/C,滤液减压浓缩。残留物用乙醚磨洗,得到0.21g(90%)标题化合物,为黄色固体。ESI-MS(m/e):473[M+H]+,1H-NMR(300MHz,DMSO-d6):δ/ppm=10.98(s,1H),8.18(d,J=7.5Hz,1H),7.79(s,1H),7.40(dt,J1=4.8Hz,J2=8.1Hz,2H),7.02(td,J1=8.1Hz,J2=4.8Hz,2H),4.40(m,1H),4.28(m,1H),4.12(m,1H),4.02(m,1H),3.81(m,1H),3.61(m,1H),3.02(m,2H),2.14(m,2H),1.82(m,2H),1.65(s,3H),1.41(s,3H),1.22(m,2H),1.03(m,3H)。
实施例6制备Boc-Asp(OBzl)-Gly-OBzl
采用实施例3的方法,从1.61g(5mmol)Boc-Asp(OBzl)和1.86g(5.5mmol)Tos·Gly-OBzl得到1.99g(85%)标题化合物,为无色固体。
实施例7制备HCl·Asp(OBzl)-Gly-OBzl
冰浴下将1.41g(3mmol)Boc-Asp(OBzl)-Gly-OBzl用20mL氯化氢的乙酸乙酯溶液(4M)溶解并反应4小时。TLC监测显示反应完全(体系为二氯甲烷/甲醇,30/1)。反应混合物减压浓缩,残留物用无水乙酸乙酯溶解,得到的溶液再减压浓缩。该操作重复3次。得到的白色粉末样物质用无水乙醚充分磨洗,得到1.01g(90%)标题化合物,为无色固体。
实施例8制备Boc-Glu(OBzl)-Asp(OBzl)-Gly-OBzl
采用实施例3的方法从1.68g(5mmol)Boc-Glu(OBzl)和2.44g(6mmol)HCl·Asp(OBzl)-Gly-OBzl得到2.76g(80%)标题化合物,为无色固体。ESI-MS(m/e):712[M+Na]+。
实施例9制备HCl·Glu(OBzl)-Asp(OBzl)-Gly-OBzl
采用实施例6的方法从2.06g(3mmol)Boc-Glu(OBzl)-Asp(OBzl)-Gly-OBzl得到1.69g(90%)标题化合物,为无色固体。
实施例10制备3S-1-(1,1-二甲基-1,3-二氧六环-6-螺基)-1,2,3,4-四氢-β-咔啉-3-甲酰-The-Glu(OBzl)-Asp(OBzl)-Gly-OBzl(6)
往30mL无水四氢呋喃中加入0.47g(1mmol)3S-1-(1,1-二甲基-1,3-二氧六环-6-螺基)-1,2,3,4-四氢-β-咔啉-3-甲酰-The(5)、0.25g(1.2mmol)DCC和0.16g(1.2mmol)HOBt,冰浴下,搅拌30分钟。之后,向反应液中加入0.69g(1.1mmol)HCl·Glu(OBzl)-Asp(OBzl)-Gly-OBzl。滴入N-甲基吗啉(NMM)调节反应液的pH值为9。室温反应8小时。TLC显示化合物5消失(二氯甲烷/甲醇,15/1),滤除二环己基脲(DCU),滤液减压浓缩。残留物用100mL乙酸乙酯溶解,溶液再过滤除去DCU。滤液依次用5%NaHCO3水溶液洗(30mL×3),饱和NaCl水溶液洗(30mL×3),5%KHSO4水溶液洗(30mL×3),饱和NaCl水溶液洗(30mL×3),5%NaHCO3水溶液洗(30mL×3),饱和NaCl水溶液洗(30mL×3),用无水硫酸钠干燥12小时。过滤,滤液减压浓缩,得到黄色粉末,经硅胶柱层析纯化(二氯甲烷/甲醇,15/1),得到0.71g(70%)标题化合物,为黄色粉末。ESI-MS(m/e):1045[M+H]+;1H-NMR(300MHz,DMSO-d6):δ/ppm=10.92(s,1H),8.25(m,2H),8.18(m,1H),8.03(m,1H),7.76(m,1H),7.30(m,17H),7.07(m,1H),6.96(m,1H),5.06(m,6H),4.70(m,1H),4.30(m,3H),4.00-3.75(m,4H),3.63(m,2H),3.02(m,4H),2.83(m,1H),2.67(m,1H),2.44(m,2H),2.13(m,2H),2.12(m,2H),1.87(m,2H),1.61(s,3H),1.38(s,3H),0.97(t,J=7.2Hz,3H)。
实施例11制备3S-1-(1,1-二甲基-1,3-二氧六环-6-螺基)-1,2,3,4-四氢-β-咔啉-3-甲酰-The-Glu-Asp-Gly(7)
往10mL甲醇中加入0.05g(0.05mmol)3S-1-(1,1-二甲基-1,3-二氧六环-6-螺基)-1,2,3,4-四氢-β-咔啉-3-甲酰-The-Glu(OBzl)-Asp(OBzl)-Gly-OBzl(6)和0.005g Pd/C,搅拌并通12h氢气,TLC显示化合物6消失(乙酸乙酯:水:冰醋酸,4:1:1)。过滤除去钯碳(Pd/C),滤液减压浓缩。残留物用乙醚磨洗,得到0.03g(85%)标题化合物,为无色固体。ESI-MS(m/e):773[M-H]-,1H-NMR(300MHz,DMSO-d6):δ/ppm=10.92(s,1H),8.23(m,1H),8.16(m,1H),8.03(m,2H),7.40(m,2H),7.00(m,2H),4.56(m,2H),4.25(m,1H),4.01(m,1H),3.89(m,2H),3.72-3.52(m,4H),2.72(m,1H),2.61(m,1H),2.31(m,2H),2.12(m,2H),1.98(m,2H),1.89(m,2H),1.62(s,3H),1.40(s,3H),1.02(t,J=7.2Hz,3H).13CNMR(125MHz,DMSO-d6):δ/ppm=174.54,172.10,171.83,171.80,171.45,171.39,171.28,136.53,121.62,119.13,118.20,111.75,109.02,98.16,64.55,52.92,52.57,52.45,49.82,41.28,36.50,33.82,32.28,30.46,28.31,27.72,26.30,20.24,15.16。
实施例12用Transwell小室实验评价化合物7抑制肿瘤细胞迁移的能力
实验方法:
取生长状态良好处于对数生长期的A549细胞,0.25%胰酶消化,镜下观察,加入血清终止消化并3000rpm离心3min,计数,配成单细胞悬液,密度为2×106个/mL。Transwell小室上室每孔加入100μL细胞悬液,同时加入化合物7的溶液,使终浓度为20μM。下室加入600μL的含10%FBS的1640培养基,在37℃和5%CO2培养箱中培养6小时,用棉签擦去基质胶和上室内的细胞,用4%的多聚甲醛固定细胞30min,吸除固定液,用PBS洗3次;用0.1%的结晶紫染液染色15min,吸除染色液,用PBS洗3次,在每个小室选取9个视野进行拍照并计数,细胞数以表示。
实验结果:
实验结果列入表1:
表1化合物7抑制A549细胞迁移的活性
注:n=6,给药方式均为灌胃,经t检验,a)与空白对照组相比,P<0.05.
结果表明,加入化合物7的组别的细胞迁移数(207.56±11.50)与阴性对照组生理盐水有显著性差别(243.00±44.92,P<0.01)。可见,20μmol/L浓度的化合物7可抑制人非小细胞肺癌细胞A549的迁移。
实施例13用Transwell小室实验评价化合物7抑制肿瘤细胞侵袭的能力
实验方法:
包被基质胶:预先将保存在-20℃冰箱中呈黄色固态的Matrigel基质胶置于4℃冰箱约12h使之成为粉红色具有良好流动性的液态。尽快取240μL Matrigel基质胶加入到960μL相应肿瘤细胞所需的无血清培养基中,吹打将其稀释5倍分散均匀,上室每孔加100μL后于37℃,5%CO2的细胞孵箱中孵育5h,使基质胶均匀铺至聚碳酸酯膜小孔中。
水化基底膜:使用移液枪小心吸除上室残液,加入50μL相应无血清培养基,再次于37℃,5%CO2的细胞孵箱中孵育30min后,使用移液枪小心吸除上室残液备用。
取生长状态良好处于对数生长期的A549细胞,0.25%胰酶消化,镜下观察,加入血清终止消化并3000rpm离心3min,计数,配成单细胞悬液,密度为2×106个/mL。Transwell小室上室每孔加入100μL细胞悬液,同时加入化合物7的溶液,使终浓度为20μM。下室加入600μL的含10%FBS的1640培养基,,置于37℃5%CO2的细胞孵箱内培养(A549细胞培养12h),待各细胞株所需时间过后进行后处理,用棉签擦去基质胶和上室内的细胞,用4%的多聚甲醛固定细胞30min,吸除固定液,用PBS洗3次;用0.1%的结晶紫染液染色15min,吸除染色液,用PBS洗3次,在每个小室选取9个视野进行拍照并计数,细胞数以表示。
实验结果:
实验结果列入表2:
表2化合物7抑制A549细胞侵袭的活性
注:n=6,给药方式均为灌胃,经t检验;a)与空白对照组相比,P<0.01且与RGDS组相比P>0.05.
结果表明,加入化合物7的组别的细胞侵袭数(183.22±21.94)与阴性对照组生理盐水有显著性差别(252.78±17.49,P<0.01),且与阳性对照组RGDS无显著差别(183.22±21.94,P>0.05)。可见,20μmol/L浓度的化合物7可抑制人非小细胞肺癌细胞A549的侵袭,并与同浓度下的RGDS组抑制癌细胞侵袭的活性相当。
实施例14评价化合物7抑制小鼠肿瘤转移的活性
实验动物:
C57BL/6小鼠,雄性,20±2g,购自北京维通利华实验动物技术有限公司。
给药剂量及给药方式:
本发明的化合物3S-1-(1,1-二甲基-1,3-二氧六环-6-螺基)-1,2,3,4-四氢-β-咔啉-3-甲酰-The-Glu-Asp-Gly(化合物7)的口服剂量为0.23μmol/kg,阳性对照RGDS四肽的注射剂量为20μmol/kg,阴性对照为生理盐水。
实验方法:实验采用小鼠Lewis抗肺癌转移模型。
实验操作:
Lewis小鼠肺癌细胞(LLC),购自ATCC。选用DMEM培养基,其中含10%经灭活的胎牛血清,1×105U/L青霉素和100mg/L链霉素。按照贴壁细胞培养方法,每两天传代一次,富集细胞。待细胞生长状态良好,处于对数生长期时,消化细胞。用生理盐水调整细胞浓度至2×107个/mL,胎盘蓝(Tryanblue)染色计数,活细胞数>95%。取近交系C57BL/6雄性小鼠,左手固定小鼠,用75%乙醇消毒小鼠右前肢腋窝皮肤,右手持1mL无菌注射器于小鼠腋部皮下注射LLC肿瘤细胞悬液0.2mL/只。小鼠接种后10天可以长出直径约4-5mm的肿瘤,作为瘤源备用。
取接种8-10天生长良好的Lewis肺癌荷瘤小鼠,乙醚麻醉,脱颈椎处死,用75%的乙醇浸泡消毒10min,在超净工作台上剥离瘤体,选择生长良好的肿瘤组织,在无菌平皿中剪碎,放置于玻璃组织匀浆器内,按瘤块重(g):生理盐水体积(mL)为1:3的比例加入4℃预冷的生理盐水轻轻研磨,制成细胞悬液,过200目细胞筛制成单细胞悬液,用生理盐水调整细胞浓度为2×107个/mL,胎盘蓝染色计数,活细胞数>95%。
取近交系C57BL/6雄性小鼠,左手固定小鼠,用75%乙醇消毒小鼠右前肢腋窝皮肤,右手持1mL无菌注射器于小鼠腋部皮下注射LLC肿瘤细胞悬液0.2mL/只。接种10天后长出直径约4-5mm的肿瘤,测量肿瘤体积,按肿瘤平均体积随机分组,
从接种肿瘤第10天后开始给药,共给药10次,每隔两天测量并记录肿瘤体积。第22天后,乙醚麻醉小鼠,脱颈椎处死,取出肿瘤称重,并记录肿瘤的肺部转移率和转移瘤结数。
实验结果:
实验结果列入表3:
表3化合物7抑制肿瘤肺转移的活性
注:n=12,RGDS为腹腔注射给药,其他均为灌胃方式给药,经t检验;a)与生理盐水组相比,P<0.05且与RGDS组相比,P>0.05.
结果表明,0.23μmol/kg剂量下口服化合物7治疗的小鼠的体内抗肿瘤转移瘤结数(4.45±2.11)与阴性对照组生理盐水有显著性差别(9.38±2.62,P<0.05),且与阳性对照组RGDS无显著性差别(4.50±2.25,P>0.05)可见,化合物7在口服剂量低至0.23μmol/kg时与腹腔注射剂量为20μmol/kg/天的RGDS的抑制肿瘤转移的活性相当。可见,本发明有突出的技术效果。
Claims (2)
2.权利要求1所述的3S-1-(1,1-二甲基-1,3-二氧六环-6-螺基)-1,2,3,4-四氢-β-咔啉-3-甲酰-The-Glu-Asp-Gly在制备抗肿瘤转移药物中的应用,其特征在于,所述化合物3S-1-(1,1-二甲基-1,3-二氧六环-6-螺基)-1,2,3,4-四氢-β-咔啉-3-甲酰-The-Glu-Asp-Gly的合成方法,包括以下步骤:
1)合成(3S)-1,1-二羟甲基-四氢-β-咔啉-3-羧酸苄酯;
2)合成3S-1-(1,1-二甲基-1,3-二氧六环-6-螺基)-1,2,3,4-四氢-β-咔啉-3-羧酸苄酯;
3)合成3S-1-(1,1-二甲基-1,3-二氧六环-6-螺基)-1,2,3,4-四氢-β-咔啉-3-羧酸;
4)采用二环己基碳二亚胺为缩合剂,1-羟基苯并三唑为催化剂液相合成3S-1-(1,1-二甲基-1,3-二氧六环-6-螺基)-1,2,3,4-四氢-β-咔啉-3-甲酰-The-OBzl;
5)合成3S-1-(1,1-二甲基-1,3-二氧六环-6-螺基)-1,2,3,4-四氢-β-咔啉-3-甲酰-The;
6)采用二环己基碳二亚胺为缩合剂,1-羟基苯并三唑为催化剂液相合成HCl·Glu(OBzl)-Asp(OBzl)-Gly-OBzl;
7)采用二环己基碳二亚胺为缩合剂,1-羟基苯并三唑为催化剂的方法合成3S-1-(1,1-二甲基-1,3-二氧六环-6-螺基)-1,2,3,4-四氢-β-咔啉-3-甲酰-The-Glu(OBzl)-Asp(OBzl)-Gly-OBzl;
8)合成3S-1-(1,1-二甲基-1,3-二氧六环-6-螺基)-1,2,3,4-四氢-β-咔啉-3-甲酰-The-Glu-Asp-Gly。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201911214985.7A CN112979750B (zh) | 2019-12-02 | 2019-12-02 | 二氧六环修饰的四氢咔啉-3-甲酰-The-EDG、其制备、抗转移活性和应用 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201911214985.7A CN112979750B (zh) | 2019-12-02 | 2019-12-02 | 二氧六环修饰的四氢咔啉-3-甲酰-The-EDG、其制备、抗转移活性和应用 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN112979750A CN112979750A (zh) | 2021-06-18 |
CN112979750B true CN112979750B (zh) | 2022-06-24 |
Family
ID=76331099
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201911214985.7A Active CN112979750B (zh) | 2019-12-02 | 2019-12-02 | 二氧六环修饰的四氢咔啉-3-甲酰-The-EDG、其制备、抗转移活性和应用 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN112979750B (zh) |
Citations (10)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2362579C1 (ru) * | 2007-11-26 | 2009-07-27 | Общество С Ограниченной Ответственностью "Сиа Пептайдс" | Фармацевтическая композиция на основе пептида, обладающего противоопухолевым действием |
CN101899086A (zh) * | 2009-05-26 | 2010-12-01 | 首都医科大学 | 饱和脂肪链酸Glu-Asp-Gly三肽酰胺及其合成方法和应用 |
WO2012102645A2 (en) * | 2011-01-27 | 2012-08-02 | «Garmonia», Ltd. | Peptide pharmaceutical composition, means for treatment of helicobacter pylori induced gastroduodenal diseases on the basis thereof, and a method of use thereof |
CN104211760A (zh) * | 2013-06-05 | 2014-12-17 | 首都医科大学 | 饱和脂肪链醇,地塞米松和Glu-Asp-Gly的缀合物,其制备,纳米结构及应用 |
CN105273054A (zh) * | 2014-06-11 | 2016-01-27 | 首都医科大学 | YIGSR修饰的β-咔啉,其制备,纳米结构,活性和应用 |
CN106349340A (zh) * | 2015-07-13 | 2017-01-25 | 首都医科大学 | 吡啶并吲哚并咪唑酮丁酰-Asp-氨基葡萄糖,其制备,活性和应用 |
CN109134607A (zh) * | 2017-06-16 | 2019-01-04 | 首都医科大学 | 1,1-二羟甲基-四氢-β-咔啉-3-甲酰-GRGDS,其合成,活性和应用 |
CN109134606A (zh) * | 2017-06-16 | 2019-01-04 | 首都医科大学 | 1,1-二羟甲基-四氢-β-咔啉-3-甲酰-GRGDV,其合成,活性和应用 |
CN109134605A (zh) * | 2017-06-16 | 2019-01-04 | 首都医科大学 | 1,1-二羟甲基-四氢-β-咔啉-3-甲酰-GYIGSK,其合成,活性和应用 |
CN109134603A (zh) * | 2017-06-13 | 2019-01-04 | 首都医科大学 | 1,1-二羟甲基-四氢-β-咔啉-3-甲酰-GYIGSR,其合成,活性和应用 |
-
2019
- 2019-12-02 CN CN201911214985.7A patent/CN112979750B/zh active Active
Patent Citations (10)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2362579C1 (ru) * | 2007-11-26 | 2009-07-27 | Общество С Ограниченной Ответственностью "Сиа Пептайдс" | Фармацевтическая композиция на основе пептида, обладающего противоопухолевым действием |
CN101899086A (zh) * | 2009-05-26 | 2010-12-01 | 首都医科大学 | 饱和脂肪链酸Glu-Asp-Gly三肽酰胺及其合成方法和应用 |
WO2012102645A2 (en) * | 2011-01-27 | 2012-08-02 | «Garmonia», Ltd. | Peptide pharmaceutical composition, means for treatment of helicobacter pylori induced gastroduodenal diseases on the basis thereof, and a method of use thereof |
CN104211760A (zh) * | 2013-06-05 | 2014-12-17 | 首都医科大学 | 饱和脂肪链醇,地塞米松和Glu-Asp-Gly的缀合物,其制备,纳米结构及应用 |
CN105273054A (zh) * | 2014-06-11 | 2016-01-27 | 首都医科大学 | YIGSR修饰的β-咔啉,其制备,纳米结构,活性和应用 |
CN106349340A (zh) * | 2015-07-13 | 2017-01-25 | 首都医科大学 | 吡啶并吲哚并咪唑酮丁酰-Asp-氨基葡萄糖,其制备,活性和应用 |
CN109134603A (zh) * | 2017-06-13 | 2019-01-04 | 首都医科大学 | 1,1-二羟甲基-四氢-β-咔啉-3-甲酰-GYIGSR,其合成,活性和应用 |
CN109134607A (zh) * | 2017-06-16 | 2019-01-04 | 首都医科大学 | 1,1-二羟甲基-四氢-β-咔啉-3-甲酰-GRGDS,其合成,活性和应用 |
CN109134606A (zh) * | 2017-06-16 | 2019-01-04 | 首都医科大学 | 1,1-二羟甲基-四氢-β-咔啉-3-甲酰-GRGDV,其合成,活性和应用 |
CN109134605A (zh) * | 2017-06-16 | 2019-01-04 | 首都医科大学 | 1,1-二羟甲基-四氢-β-咔啉-3-甲酰-GYIGSK,其合成,活性和应用 |
Non-Patent Citations (2)
Title |
---|
Heat Shock Proteins: Changes Related to Aging, Development of Thrombotic Complications, and Peptide Regulation of the Genome;B. I. Kuznik等;《Advances in Gerontology》;20121231;第2卷(第3期);第175-186页 * |
四氢咔啉类纺锤体驱动蛋白抑制剂的合成和抗肿瘤活性研究;阮秀琴 等;《药学学报》;20131231;第48卷(第7期);第1119-1123页 * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN112979750A (zh) | 2021-06-18 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN109081801B (zh) | 酸性氨基酸修饰的吲哚乙醇衍生物,其合成,活性和应用 | |
CN108976159B (zh) | 芳香氨基酸修饰的吲哚乙醇衍生物,其合成,活性和应用 | |
CN112979750B (zh) | 二氧六环修饰的四氢咔啉-3-甲酰-The-EDG、其制备、抗转移活性和应用 | |
CN112898379B (zh) | 二氧六环修饰的四氢咔啉-3-甲酰-The-HGE、其制备、抗肿瘤活性和应用 | |
CN112898376B (zh) | 二氧六环修饰的四氢咔啉-3-甲酰-The-HGK,其制备,抗肿瘤活性和应用 | |
CN112094317B (zh) | His-Gly-Lys修饰的甲氨蝶呤,其合成,抗转移活性和应用 | |
CN112979752B (zh) | 二氧六环修饰的四氢咔啉-3-甲酰-The-EDG、其制备、抗肿瘤活性和应用 | |
CN108929320B (zh) | 3r-吲哚甲基-6r-恶唑烷酮修饰的哌嗪-2,5-二酮,其合成,活性和应用 | |
CN108948137B (zh) | 3s-吲哚乙基-6s-极性氨基酸修饰的哌嗪-2,5-二酮,其合成,活性和应用 | |
CN112390854B (zh) | 茶氨酸与rgds共同修饰的5-氟尿嘧啶,其合成,活性和应用 | |
CN111793114B (zh) | 二羟甲基四氢-咔啉-3-甲酰-The-HGE其合成,活性和应用 | |
CN112010811B (zh) | 茶氨酸与苯丙氨酸共同修饰的5-氟尿嘧啶,其合成,活性和应用 | |
CN112300244B (zh) | 茶氨酸单独及与rgds共同修饰的5-氟尿嘧啶,其合成,活性和应用 | |
CN110577568B (zh) | 甲基吲哚和酰胺侧链氨基酸修饰的二酮哌嗪,其合成,活性和应用 | |
CN112300245B (zh) | Rgds和茶氨酸共同修饰的5-氟尿嘧啶,其合成,活性和应用 | |
CN112300246B (zh) | 天冬酰茶氨酸rgds修饰的5-氟尿嘧啶,其合成,活性和应用 | |
CN112094321A (zh) | His-Gly-Glu修饰的甲氨蝶呤,其合成,抗转移活性和应用 | |
CN111793113B (zh) | 二羟甲基四氢咔啉-3-甲酰-The-HGK其合成,活性和应用 | |
CN110577518B (zh) | 甲基吲哚和酰胺侧链氨基酸修饰的二酮哌嗪,其合成及应用 | |
CN112110987B (zh) | 天冬胺酰茶氨酸苯丙氨酸修饰的5-氟尿嘧啶,其合成,活性和应用 | |
CN110551119A (zh) | 6-氨基酰氨基正己酰咔啉羧酸苄酯,其制备和应用 | |
CN110551121A (zh) | 谷氨酰胺酰氨基正己酰咔啉羧酸苄酯,其制备,活性和应用 | |
CN110551108B (zh) | 3r-吲哚甲基-6r-氨基酸修饰的2,5-二酮哌嗪,其合成,活性和应用 | |
CN111793115A (zh) | 二羟甲基四氢咔啉-3-甲酰-The-EDG,其合成,活性和应用 | |
CN110551175B (zh) | 氨基酸和氨甲环酸修饰的二酮哌嗪,其制备,活性及应用 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
GR01 | Patent grant | ||
GR01 | Patent grant |