CN111793114B

CN111793114B - 二羟甲基四氢-咔啉-3-甲酰-The-HGE其合成，活性和应用

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Publication number: CN111793114B
Application number: CN201910273812.6A
Authority: CN
Inventors: 赵明; 彭师奇; 张筱宜; 郤思远
Original assignee: Capital Medical University
Current assignee: Capital Medical University
Priority date: 2019-04-07
Filing date: 2019-04-07
Publication date: 2022-08-02
Anticipated expiration: 2039-04-07
Also published as: CN111793114A

Abstract

本发明公开了(3S)‑1,1‑二羟甲基‑四氢‑β‑咔啉‑3‑甲酰‑The‑His‑Gly‑Glu,公开了该化合物的制备方法,公开了该化合物的抗肿瘤增殖活性和抗肿瘤转移活性。因而本发明公开了它在制备抗肿瘤和抗肿瘤转移药物中的应用。

Description

二羟甲基四氢-咔啉-3-甲酰-The-HGE其合成，活性和应用

技术领域

本发明涉及下面结构的(3S)-1,1-二羟甲基-四氢-β-咔啉-3-甲酰-The-His-Gly-Glu,涉及它的制备方法，涉及它的抗肿瘤活性及抗肿瘤转移活性。因而本发明涉及该化合物在制备抗肿瘤药物及抗肿瘤转移药物中的应用。本发明属于生物医药领域。

背景技术

无论在发达国家还是在发展中国家，恶性肿瘤的死亡率和发病率都在逐年上升。在我国，恶性肿瘤已成为占第一位的致死性疾病。众所周知，几乎所有的恶性肿瘤都可以通过血液或者淋巴道转移。大量临床研究表明，在恶性肿瘤的死亡病例中转移致死者占70％以上。发明具有抗肿瘤和抗肿瘤转移双重作用的药物一直是生物医药领域的前沿领域之一。同样，在过去的十多年间发明人所在的团队为发明具有抗肿瘤和抗肿瘤转移双重作用的药物付出了艰辛的创造。期间，发明人发现(3S)-1,1-二羟甲基-四氢-β-咔啉-3-羧酸是潜在的药效团。之后，发明人发现使用The-His-Gly-Glu修饰(3S)-1,1-二羟甲基-四氢-β-咔啉-3-羧酸的羧基生成的下面结构的(3S)-1,1-二羟甲基-四氢-β-咔啉-3-甲酰-The-His-Gly-Glu具有抗肿瘤及抗肿瘤转移双重作用。根据这个发现，发明人提出来本发明。

发明内容

本发明的第一个内容是提供下面结构的(3S)-1,1-二羟甲基-四氢-β-咔啉-3-甲酰-The-His-Gly-Glu。

本发明的第二个内容是提供制备(3S)-1,1-二羟甲基-四氢-β-咔啉-3-甲酰-The-His-Gly-Glu的方法，该方法包括10个步骤：

第一个步骤是制备(3S)-1,1-二羟甲基-四氢-β-咔啉-3-羧酸；

第二个步骤是制备(3S)-1,1-二羟甲基-四氢-β-咔啉-3-羧酸甲酯；

第三个步骤是制备(3S)-1,1-二(叔丁基二甲基硅氧基)甲基-四氢-β-咔啉-3-羧酸甲酯；

第四个步骤是制备(3S)-1,1-二(叔丁基二甲基硅氧基)甲基-四氢-β-咔啉-3-羧酸；

第五个步骤是采用二环己基碳二亚胺(DCC)为缩合剂，1-羟基苯并三唑(HOBt)为催化剂液相缩合制备(3S)-1,1-二(叔丁基二甲基硅氧基)甲基-四氢-β-咔啉-3-甲酰-The-OMe；

第六个步骤是制备(3S)-1,1-二(叔丁基二甲基硅氧基)甲基-四氢-β-咔啉-3-甲酰-The；

第七个步骤是采用DCC为缩合剂，HOBt为催化剂液相缩合制备HCl·His-Gly-Glu(OBzl)-OBzl；

第八个步骤是采用DCC为缩合剂，HOBt为催化剂液相缩合制备(3S)-1,1-二(叔丁基二甲基硅氧基)甲基-四氢-β-咔啉-3-甲酰-The-His-Gly-Glu(OBzl)-OBzl；

第九个步骤是制备(3S)-1,1-二(叔丁基二甲基硅氧基)甲基-四氢-β-咔啉-3-甲酰-The-His-Gly-Glu；

第十个步骤是制备(3S)-1,1-二羟甲基-四氢-β-咔啉-3-甲酰-The-His-Gly-Glu。

本发明的第三个内容是评价(3S)-1,1-二羟甲基-四氢-β-咔啉-3-甲酰-The-His-Gly-Glu的抗肿瘤活性及抗肿瘤转移活性。

附图说明

图1.(3S)-1,1-二羟甲基-四氢-β-咔啉-3-甲酰-The-Glu-Asp-Gly的合成路线：i)H₂SO₄,，1,3-二羟基丙酮(dihydroxyacetone)；ii)二氯亚砜，CH₃OH；iii)叔丁基二甲基氯硅烷(TBDMSCl)，咪唑(Imidazole)；iv)CH₃OH，NaOH；v)DCC，HOBt，N-甲基吗啉(NMM)；vi)Pd/C，H₂；vii)氯化氢的乙酸乙酯溶液。

具体实施方式

为了进一步阐述本发明，下面给出一系列实施例。这些实施例完全是例证性的，它们仅用来对本发明进行具体描述，不应当理解为对本发明的限制。

实施例1制备(3S)-1,1-二羟甲基-四氢-β-咔啉-3-羧酸(1)

往50mL蒸馏水中加入3.06g(15mmol)L-色氨酸，使其充分搅拌混悬。冰浴条件下，缓慢滴加浓硫酸直至L-色氨酸完全溶解。然后再往上述反应液中加入1.62g(18mmol)1,3-二羟基丙酮，室温反应84小时。TLC显示L-色氨酸消失(乙酸乙酯/水/冰醋酸，4/1/1)。过滤，滤饼用冰水冲洗，得到2.90g(70％)标题化合物，为黄色粉末。

实施例2制备(3S)-1,1-二羟甲基-四氢-β-咔啉-3-羧酸甲酯(2)

冰浴下往50mL甲醇中缓慢滴加4.7mL二氯亚砜，搅拌30分钟后往里加入5.0g(18mmol)(3S)-1,1-二羟甲基-四氢-β-咔啉-3-羧酸(1)。搅拌至化合物1完全溶解。之后，室温搅拌10小时。TLC显示化合物1消失(二氯甲烷/甲醇，20:1)。反应混合物减压浓缩，残留物加乙酸乙酯磨洗。去上清，残留物再加乙酸乙酯磨洗。得到的棕黄色固体用100mL乙酸乙酯溶解。该溶液依次用饱和NaHCO₃水溶液(30mL×3),饱和NaCl水溶液洗(30mL×3)，乙酸乙酯层用无水硫酸钠干燥12小时。过滤，滤液减压浓缩，得到4.73g(90％)标题化合物，为黄色固体。ESI-MS(m/e):291[M+H]⁺。

实施例3制备(3S)-1,1-二(叔丁基二甲基硅氧基)甲基-四氢-β-咔啉-3-羧酸甲酯(3)

往50mL无水N,N-二甲基甲酰胺(DMF)中加入4.35g(15mmol)1,1-二羟甲基-β-咔啉-3-羧酸甲酯(2)。搅拌至化合物2完全溶解。之后，冰浴下往该溶液中加入3.66g(64.8mmol)咪唑。搅拌至咪唑完全溶解。之后，往该溶液中加入6.79g(45mmol)叔丁基二甲基氯硅烷(TBDMSCl)。反应化合物室温搅拌6个小时。TLC显示化合物2消失(石油醚/乙酸乙酯，20/1)。反应混合物减压浓缩，残留物加100mL饱和NaCl水溶液稀释。得到的溶液用乙酸乙酯萃取(60mL×3)，乙酸乙酯层再依次用饱和NaHCO₃水溶液(30mL×3),饱和NaCl水溶液洗(30mL×3)，无水硫酸钠干燥12小时。过滤，滤液减压浓缩。黄色残留物经硅胶柱层析纯化(石油醚/乙酸乙酯，10/1)，得到4.82g(88％)标题化合物，为无色固体。ESI-MS(m/e):519[M+H]⁺。

实施例4制备(3S)-1,1-二(叔丁基二甲基硅氧基)甲基-四氢-β-咔啉-3-羧酸(4)

往40mL四氢呋喃/甲醇(v/v，1/1)混合溶液中加入5.18g(10mmol)(3S)-1,1-二(叔丁基二甲基硅氧基)甲基-四氢-β-咔啉-3-羧酸甲酯(3)。搅拌至化合物3完全溶解。冰浴下往溶液中滴加NaOH水溶液(4M)，调节反应液的pH值为13。搅拌30分钟后，TLC显示化合物3消失(石油醚/乙酸乙酯，20/1)。冰浴下，往反应混合物中滴加饱和KHSO₄水溶液调节pH为值7。反应混合物减压浓缩。冰浴下，残留物滴加饱和KHSO₄水溶液调节pH值为2。得到的溶液用乙酸乙酯萃取(30mL×3)，乙酸乙酯层用饱和NaCl水溶液洗，无水硫酸钠干燥12小时。过滤，滤液减压浓缩得到4.64g(90％)标题化合物，为无色粉末。ESI-MS(m/e):505[M+H]⁺。

实施例5制备(3S)-1,1-二(叔丁基二甲基硅氧基)甲基-四氢-β-咔啉-3-甲酰-The-OMe(5)

往50mL DMF中加入5.04g(10mmol)(3S)-1,1-二(叔丁基二甲基硅氧基)甲基-四氢-β-咔啉-3-羧酸(4)、2.47g(12mmol)N,N'-二环己基碳二亚胺(DCC)和1.62g(12mmol)1-羟基苯并三唑(HOBt)。冰浴下搅拌30分钟。之后，再向反应液中加入2.48g(11mmol)HCl·The-OMe。之后，向反应液中滴加N-甲基吗啉(NMM)调节反应液的pH值为9。室温搅拌6小时，TLC显示化合物4消失(二氯甲烷/甲醇，30/1)。滤除二环己基脲(DCU)，滤液减压浓缩。残留物用60mL乙酸乙酯溶解，溶液再过滤除去DCU。滤液依次用5％NaHCO₃水溶液洗(30mL×3)，饱和NaCl水溶液洗(30mL×3)，5％KHSO₄水溶液洗(30mL×3)，饱和NaCl水溶液洗(30mL×3)，5％NaHCO₃水溶液洗(30mL×3)，饱和NaCl水溶液洗(30mL×3)，用无水硫酸钠干燥12小时。过滤，滤液减压浓缩，得到的黄色粉末经硅胶柱层析纯化(石油醚/乙酸乙酯，10/1)，得到5.4g(80％)标题化合物，为无色粉末。ESI-MS(m/e):675[M+H]⁺。

实施例6制备(3S)-1,1-二(叔丁基二甲基硅氧基)甲基-四氢-β-咔啉-3-甲酰-The(6)

采用实施例4的方法，从3.72g(5mmol)(3S)-1,1-二(叔丁基二甲基硅氧基)甲基-四氢-β-咔啉-3-甲酰-The-OMe(5)得到2.64g(80％)标题化合物，为无色粉末。ESI-MS(m/e):661[M+H]⁺。

实施例7制备Boc-Gly-Glu(OBzl)-OBzl

采用实施例5的方法，从0.88g(5mmol)Boc-Gly和2.00g(5.5mmol)Hcl·Glu(OBzl)-OBzl得到1.93g(80％)标题化合物，为无色固体。

实施例8制备HCl·Gly-Glu(OBzl)-OBzl

冰浴下将1.45g(3mmol)Boc-Gly-Glu(OBzl)-OBzl用20mL氯化氢的乙酸乙酯溶液(4M)溶解并反应4小时。TLC监测显示原料消失(体系为二氯甲烷/甲醇，30/1)。反应混合物减压浓缩，残留物用无水乙酸乙酯溶解，得到的溶液再减压浓缩。该操作重复3次。得到的白色粉末样物质用无水乙醚充分磨洗，得到1.14g(90％)标题化合物，为无色固体。

实施例9制备Boc-His(Boc)-Gly-Glu(OBzl)-OBzl

采用实施例5的方法从1.77g(5mmol)Boc-His(Boc)和2.52g(6mmol)HCl·Gly-Glu(OBzl)-OBzl得到2.56g(67％)标题化合物，为无色固体。ESI-MS(m/e):722[M+H]⁺。

实施例10制备HCl·His-Gly-Glu(OBzl)-OBzl

采用实施例8的方法从1.44g(2mmol)Boc-His(Boc)-Gly-Glu(OBzl)-OBzl得到1.03g(92％)标题化合物，为无色固体。

实施例11制备(3S)-1,1-二(叔丁基二甲基硅氧基)甲基-四氢-β-咔啉-3-甲酰-The-His-Gly-Glu(OBzl)-OBzl(7)

往30mL无水四氢呋喃中加入1.32g(2mmol)(3S)-1,1-二(叔丁基二甲基硅氧基)甲基-四氢-β-咔啉-3-甲酰-The(6)、0.49g(2.4mmol)DCC和0.32g(2.4mmol)HOBt。冰浴下，搅拌30分钟。之后，向反应液中加入1.23g(2.2mmol)HCl·His-Gly-Glu(OBzl)-Obzl。滴入N-甲基吗啉(NMM)调节反应液的pH值为9。室温反应8小时。TLC显示化合物6消失(二氯甲烷/甲醇，15/1)。滤除二环己基脲(DCU)，滤液减压浓缩。残留物用100mL乙酸乙酯溶解，溶液再过滤除去DCU。滤液依次用5％NaHCO₃水溶液洗(30mL×3)，饱和NaCl水溶液洗(30mL×3)，5％KHSO₄水溶液洗(30mL×3)，饱和NaCl水溶液洗(30mL×3)，5％NaHCO₃水溶液洗(30mL×3)，饱和NaCl水溶液洗(30mL×3)，用无水硫酸钠干燥12小时。过滤，滤液减压浓缩，得到黄色粉末，经硅胶柱层析纯化(二氯甲烷/甲醇，15/1)，得到0.8g(34.36％)标题化合物，为黄色粉末。ESI-MS(m/e):1166[M+H]⁺。

实施例12制备(3S)-1,1-二(叔丁基二甲基硅氧基)甲基-四氢-β-咔啉-3-甲酰-The-His-Gly-Glu(8)

往15mL甲醇中加入0.58g(0.5mmol)(3S)-1,1-二(叔丁基二甲基硅氧基)甲基-四氢-β-咔啉-3-甲酰-The-His-Gly-Glu(OBzl)-OBzl(7)和0.06g Pd/C。搅拌并通12h氢气，TLC显示化合物7消失(乙酸乙酯:水:冰醋酸＝4:1:1)。过滤除去钯碳(Pd/C)，滤液减压浓缩。残留物用乙醚磨洗，得到0.41g(85％)标题化合物，为无色固体。ESI-MS(m/e):983[M-H]^-。

实施例13制备(3S)-1,1-二羟甲基-四氢-β-咔啉-3-甲酰-The-His-Gly-Glu(9)

往30mL氯化氢的乙酸乙酯(4M)中加入0.09g(0.1mmol)(3S)-1,1-二(叔丁基二甲基硅氧基)甲基-四氢-β-咔啉-3-甲酰-The-His-Gly-Glu(8)，冰浴下搅拌4小时，TLC显示化合物8消失(乙酸乙酯:水:冰醋酸，4:1:1)。反应混合物减压浓缩，残留物用无水乙酸乙酯溶解，得到的溶液再减压浓缩。该操作重复3次。得到的无色粉末用无水乙醚充分磨洗，残留物经¹⁸C柱层析纯化得到0.061g(80％)标题化合物，为黄色固体，ESI-MS(m/e):754[M+H]^-，¹H-NMR(300MHz,DMSO-d₆):δ/ppm＝10.59(s,1H),8.47(s,1H),8.33(d,2H),8.21(m,1H),8.01(s,1H),7.85(s,1H),7.66(s,1H),7.38(d,J＝7.2Hz,2H),6.93(t,J＝7.2Hz,2H),4.63(m,1H),4.36(m,1H),3.75(m,1H),3.71(m,1H),3.62-3.5(m,4H),3.12(m,2H),2.91(m,1H),2.71(m,1H),2.75(m,2H),2.25(m,2H),2.15(m.2H),1.95(m,2H),1.94(m.2H),1.24(s,2H),1.01(t,J＝7.2Hz,3H)。

实施例14评价化合物9体内抑制S180移植性小鼠肉瘤的活性

实验动物：ICR小鼠，雄性，20±2g，购自北京维通利华实验动物技术有限公司。瘤源为S180肉瘤小鼠，购自北京大学医学部动物实验中心，自行传代维持。

给药剂量及给药方式：本发明的化合物9的口服剂量为0.23μmol/Eg，阳性对照阿霉素的注射剂量为2μmol/kg，阴性对照为生理盐水。

实验操作：于无菌条件下抽取生长旺盛的S180肉瘤小鼠的瘤液，用生理盐水稀释成(1∶2)并充分混合为肿瘤细胞悬液，之后用新鲜配制的0.2％台盼蓝染色并混匀。染蓝色者为死细胞，不染色者为活细胞。然后，按白细胞计数方法计数并按如下公式计算细胞浓度和细胞存活率。

细胞浓度(细胞数/mL)＝4大方格内活细胞数/4×10⁴×稀释倍数

细胞存活率＝活细胞数/(活细胞数+死细胞数)×100％

将存活率大于90％的瘤液用匀浆法制备成1.5×10⁷个/mL的细胞悬液，皮下接种于ICR小鼠腋下，0.1mL/10g/只，制造S180荷瘤小鼠。从接种肿瘤第7天后开始给药，每天一次，共给药10次。第17天后，小鼠乙醚麻醉之后脱颈椎处死，然后用镊子固定小鼠右腋肿瘤生长部位，剪开皮肤，暴露肿瘤，钝性剥离，之后称重。

实验结果：实验结果列入表1。

表1化合物9抑制S180移植性小鼠肉瘤生长的活性

n＝12，a)与生理盐水比P<0.01，b)与阿霉素比P>0.05.

结果表明，在0.23μmol/kg口服剂量下化合物9的抗肿瘤活性不仅显著强于生理盐水而且与2μmol/kg注射剂量下的阿霉素没有显著性差异。可见，本发明的化合物9有突出的技术效果。

实施例15评价化合物9抑制小鼠Lewis肺癌小鼠肺转移的活性

实验动物：C57BL/6小鼠，雄性，20±2g，购自北京维通利华实验动物技术有限公司。

给药剂量及给药方式：本发明的化合物9的口服剂量为0.23μmol/Eg，阳性对照RGDS四肽的注射剂量为20μmol/Eg，阴性对照为生理盐水。

实验方法：实验采用小鼠Lewis抗肺癌转移模型。

实验操作：Lewis小鼠肺癌细胞(LLC)，购自ATCC。选用DMEM培养基。培养基中含10％经灭活的胎牛血清，1×10⁵U/L青霉素和100mg/L链霉素。按照贴壁细胞培养方法，Lewis小鼠肺癌细胞每天传代一次。富集细胞。待细胞生长状态良好并处于对数生长期时，消化细胞。用生理盐水调整细胞浓度至2×10⁷个/mL，台盼蓝染色计数表明活细胞数>95％。取近交系C57BL/6雄性小鼠，左手固定小鼠，用75％乙醇消毒小鼠右前肢腋窝皮肤，右手持1mL无菌注射器于小鼠腋部皮下注射Lewis小鼠肺癌细胞悬液(0.2mL/只)。接种后10天可以长出直径约4-5mm的肿瘤。将该Lewis肺癌荷瘤小鼠用乙醚麻醉，脱颈椎处死，用75％的乙醇浸泡消毒10min，在超净工作台上剥离瘤体，在无菌平皿中剪碎，放置于玻璃组织匀浆器内，按瘤块重(g):生理盐水体积(mL)为1:3的比例用预冷至4℃的生理盐水轻轻研磨，制成细胞悬液，过200目细胞筛制成单细胞悬液，用生理盐水调整细胞浓度为2×10⁷个/mL，台盼蓝染色计数表明活细胞数>95％。

取近交系C57BL/6雄性小鼠，左手固定小鼠，用75％乙醇消毒小鼠右前肢腋窝皮肤，右手持1mL无菌注射器于小鼠腋部皮下注射Lewis小鼠肺癌细胞悬液(0.2mL/只)。接种10天后测量长出的肿瘤直径约4-5mm，按肿瘤平均直径随机分组。然后开始给药，每天1次，共给10次。每隔两天测量并记录肿瘤体积。第22天后，小鼠乙醚麻醉，脱颈椎处死，取出肿瘤称重，并记录肿瘤的肺部转移的瘤结数。

实验结果：实验结果列入表2。

表2化合物9抑制Lewis肺癌小鼠肺转移的活性

n＝12，a)与生理盐水组比P<0.01，b)与RGDS比P>0.05.

结果表明，在0.23μmol/kg口服剂量下本发明的化合物9抑制Lewis肺癌小鼠肺转移的活性不仅显著强于生理盐水，而且与20μmol/kg注射剂量下的RGDS无显著性差别。可见，本发明的化合物9有突出的技术效果。

实施例16评价化合物9抑制肿瘤细胞迁移的活性

实验方法：取生长状态良好处于对数生长期的A549细胞，0.25％胰酶消化，镜下观察，加入血清终止消化并3000rpm离心3min，计数，配成单细胞悬液，密度为2×10⁶个/mL。Transwell小室上室每孔加入100μL细胞悬液，同时加入化合物9的溶液，使终浓度为20μM。下室加入600μL的含10％FBS的1640培养基，在37℃和5％CO₂培养箱中培养6小时，用棉签擦去基质胶和上室内的细胞，用4％的多聚甲醛固定细胞30min，吸除固定液，用PBS溶液洗3次；用0.1％的结晶紫染液染色15min，吸除染色液，用PBS洗3次，在每个小室选取9个视野进行拍照并计数，细胞数以(

个)表示。

实验结果：实验结果列入表3。

表3化合物9抗肿瘤细胞迁移的活性

n＝6，a)与空白对照比P<0.05

结果表明，化合物9可显著抑制人非小细胞肺癌细胞A549迁移。可见，本发明的化合物9有突出的技术效果。

实施例17评价化合物9抑制肿瘤细胞侵袭的活性

实验方法：预先将保存在-20℃冰箱中呈黄色固态的Matrigel基质胶置于4℃冰箱约12h，使之成为粉红色具有良好流动性的液态。尽快取240μL Matrigel基质胶加入到960μL相应肿瘤细胞所需的无血清培养基中稀释5倍，吹打使分散均匀，上室每孔加100μL后于37℃，5％CO₂的细胞孵箱中孵育5h，使基质胶均匀铺至聚碳酸酯膜小孔中。用移液枪小心吸除上室残液，加入50μL相应无血清培养基，再次于37℃，5％CO₂的细胞孵箱中孵育30min。之后，用移液枪小心吸除上室残液备用。

取生长状态良好处于对数生长期的A549细胞，0.25％胰酶消化，镜下观察，加入血清终止消化并3000rpm离心3min，计数，配成单细胞悬液，密度为2×10⁶个/mL。Transwell小室上室每孔加入100μL细胞悬液，同时加入化合物9的溶液，使终浓度为20μM。下室加入600μL含10％FBS的1640培养基，置于37℃，5％CO₂的细胞孵箱内培养12h，用棉签擦去基质胶和上室内的细胞，用4％的多聚甲醛固定细胞30min，吸除固定液，用PBS溶液洗3次，用0.1％的结晶紫染液染色15min，吸除染色液，用PBS溶液洗3次，在每个小室选取9个视野进行拍照并计数，细胞数以(

个)表示。

实验结果：实验结果列入表4。

表4化合物9抗肿瘤细胞侵袭的活性

结果表明，化合物9可显著抑制人非小细胞肺癌细胞A549侵袭。可见，本发明的化合物9有突出的技术效果。

Claims

1.结构如下的(3S)-1,1-二羟甲基-四氢-β-咔啉-3-甲酰-The-His-Gly-Glu,

2.制备权利要求1的(3S)-1,1-二羟甲基-四氢-β-咔啉-3-甲酰-The-His-Gly-Glu的方法，该方法包括10个步骤：

(1)制备(3S)-1,1-二羟甲基-四氢-β-咔啉-3-羧酸；

(2)制备(3S)-1,1-二羟甲基-四氢-β-咔啉-3-羧酸甲酯；

(3)制备(3S)-1,1-二(叔丁基二甲基硅氧基)甲基-四氢-β-咔啉-3-羧酸甲酯；

(4)制备(3S)-1,1-二(叔丁基二甲基硅氧基)甲基-四氢-β-咔啉-3-羧酸；

(5)采用二环己基碳二亚胺(DCC)为缩合剂，1-羟基苯并三唑(HOBt)为催化剂液相缩合制备(3S)-1,1-二(叔丁基二甲基硅氧基)甲基-四氢-β-咔啉-3-甲酰-The-OMe；

(6)制备(3S)-1,1-二(叔丁基二甲基硅氧基)甲基-四氢-β-咔啉-3-甲酰-The；

(7)采用DCC为缩合剂，HOBt为催化剂液相缩合制备HCl·His-Gly-Glu(OBzl)-OBzl；

(8)采用DCC为缩合剂，HOBt为催化剂液相缩合制备(3S)-1,1-二(叔丁基二甲基硅氧基)甲基-四氢-β-咔啉-3-甲酰-The-His-Gly-Glu(OBzl)-OBzl；

(9)制备(3S)-1,1-二(叔丁基二甲基硅氧基)甲基-四氢-β-咔啉-3-甲酰-The-His-Gly-Glu；

(10)制备(3S)-1,1-二羟甲基-四氢-β-咔啉-3-甲酰-The-His-Gly-Glu。

3.权利要求1的(3S)-1,1-二羟甲基-四氢-β-咔啉-3-甲酰-The-His-Gly-Glu在制备抗肿瘤药物中的应用。

4.权利要求1的(3S)-1,1-二羟甲基-四氢-β-咔啉-3-甲酰-The-His-Gly-Glu在制备抗肿瘤转移药物中的应用。