CN112300244B - 茶氨酸单独及与rgds共同修饰的5-氟尿嘧啶,其合成,活性和应用 - Google Patents

茶氨酸单独及与rgds共同修饰的5-氟尿嘧啶,其合成,活性和应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了下式的茶氨酸单独及与RGDS共同修饰的5‑氟尿嘧啶,式中R或代表The,或者代表The‑Arg‑Gly‑Asp‑Ser。公开了它们的制备方法,公开了它们的抗肿瘤增殖和抗肿瘤转移活性,因而本发明公开了它们在制备抗肿瘤药物中的应用,在制备抗肿瘤转移药物中的应用和在制备抗肿瘤及抗肿瘤转移双重活性药物中的应用。
Figure RE-DDA0002206331790000011

Description

茶氨酸单独及与RGDS共同修饰的5-氟尿嘧啶,其合成,活性和 应用
技术领域
本发明涉及1-(CH2CO-R)-5-氟尿嘧啶及其制备方法,涉及它们的抗肿瘤活性和抗肿瘤转移活性,因而本发明涉及它们在制备抗肿瘤药物中的应用,在制备抗肿瘤转移药物中的应用和在制备抗肿瘤及抗肿瘤转移双重活性药物中的应用。本发明属于生物医药领域。
背景技术
5-氟尿嘧啶(5-FU)是嘧啶类抗代谢的抗肿瘤药物,抗瘤谱较广。多用于治疗消化道肿瘤,乳腺癌,卵巢癌,膀胱癌,肝癌。5-FU在临床应用中存在一些缺陷。例如口服首过效应明显,临床给药途径为静脉注射。静脉注射的半衰期不超过20min。为此,5-FU在临床应用中多采用静脉持续滴注。患者对静脉持续滴注依从性差。又例如5-FU的治疗剂量较大,对肿瘤的选择性差,会出现明显胃肠道反应(恶心,呕吐,腹泻)及骨髓抑制(血小板及白细胞数降低)等不良反应。这些缺陷限制了5-FU的临床应用。为了克服5-FU的缺陷,曾经完成了大量结构修饰。可是没有达到预期效果。发明人经过数年探索发现,在5-氟尿嘧啶的1位分别用CH2CO-The或CH2CO-The-Arg-Gly-Asp-Ser修饰不仅可以在极低剂量下口服,可以避免骨髓毒性,可以增强抗肿瘤活性,而且可以获得抗肿瘤转移活性。根据这些发现,发明人提出了本发明。
发明内容
本发明的第一个内容是提供下式的1-(CH2CO-The)-5-氟尿嘧啶和1-(CH2CO-The-Arg-Gly-Asp-Ser)-5-氟尿嘧啶。
Figure BDA0002149558190000011
本发明的第二个内容是提供1-(CH2CO-The)-5-氟尿嘧啶和1-(CH2CO-The-Arg-Gly-Asp-Ser)-5-氟尿嘧啶的合成方法,该方法包括：
(1)在KOH水溶液中5-氟尿嘧啶与溴乙酸60℃反应8h,然后0℃用浓盐酸处理,生成1-羧甲基-5-氟尿嘧啶；
(2)将1-羧甲基-5-氟尿嘧啶与The-OBzl偶联,制备1-(CH2CO-The-OBzl)-5-氟尿嘧啶；
(3)将1-(CH2CO-The-OBzl)-5-氟尿嘧啶经氢解反应脱除苄酯保护基得1-(CH2CO-The)-5-氟尿嘧啶；
(4)采用液相合成制备Boc-Arg(NO2)-Gly-Asp(OBzl)-Ser-OBzl；
(5)Boc-Arg(NO2)-Gly-Asp(OBzl)-Ser-OBzl在浓度为4N的氯化氢/乙酸乙酯试剂中脱除Boc保护基得Arg(NO2)-Gly-Asp(OBzl)-Ser-OBzl；
(6)将Arg(NO2)-Gly-Asp(OBzl)-Ser-OBzl与1-(CH2CO-The)-5-氟尿嘧啶偶联,制备1-[CH2CO-The-Arg(NO2)-Gly-Asp(OBzl)-Ser-OBzl]-5-氟尿嘧啶；
(7)将1-[CH2CO-The-Arg(NO2)-Gly-Asp(OBzl)-Ser-OBzl]-5-氟尿嘧啶脱保护,制备1-(CH2CO-The-Arg-Gly-Asp-Ser)-5-氟尿嘧啶。
本发明的第三个内容是评价1-(CH2CO-The)-5-氟尿嘧啶和1-(CH2CO-The-Arg-Gly-Asp-Ser)-5-氟尿嘧啶的抗肿瘤活性。
本发明的第四个内容是评价1-(CH2CO-The)-5-氟尿嘧啶和1-(CH2CO-The-Arg-Gly-Asp-Ser)-5-氟尿嘧啶的抗肿瘤转移活性。
本发明的第五个内容是评价1-(CH2CO-The)-5-氟尿嘧啶和1-(CH2CO-The-Arg-Gly-Asp-Ser)-5-氟尿嘧啶的骨髓毒性。
附图说明
图1 1-(CH2CO-The)-5-氟尿嘧啶和1-(CH2CO-The-Arg-Gly-Asp-Ser)-5-氟尿嘧啶的合成路线.i)二环己基碳二亚胺,1-羟基苯并三唑,N-甲基吗啉；ii)氯化氢/乙酸乙酯溶液(4M)；iii)氢氧化钠溶液(2M)；iv)60℃,溴乙酸,浓盐酸；v)Pd/C,H2；vi)三氟乙酸,三氟甲磺酸。
具体实施方式
为了进一步阐述本发明,下面给出一系列实施例。这些实施例完全是例证性的,它们仅用来对本发明进行具体描述,不应当理解为对本发明的限制。
实施例1制备Boc-Arg(NO2)-Gly-OBzl
0℃将3.19g(10mmol)Boc-R(NO2)用无水四氢呋喃溶解(THF),向得到的溶液中依次加入1.35g(10mmol)1-羟基苯并三唑和2.68g(13mmol)二环己基羰二亚胺。搅拌30min后,向反应液中加入3.71g(1.1mmol)Gly-OBzl的四氢呋喃溶液,反应液于0℃滴加N-甲基吗啉,调节pH 8。反应液室温搅拌至TLC显示反应完全。反应混合物过滤,滤液减压浓缩,残留物用乙酸乙酯溶液溶解。经硅胶柱层析纯化得3.53g(75％)标题化合物,为无色固体。ESI-MS(m/e)：467[M+H]+。
实施例2制备Boc-Asp(OBzl)-Ser-OBzl
采用实施例1的方法从3.32g(10mmol)Boc-Asp(OBzl)和2.78g(1.2mmol)Ser-OBzl得到3.86g(77％)标题化合物,为无色固体。ESI-MS(m/e)：501[M+H]+。
实施例3制备Boc-Arg(NO2)-Gly
0℃将5.33g(5mmol)Boc-Arg(NO2)-Gly-OBzl用甲醇溶解,用氢氧化钠溶液(2M)调节反应液pH值至13。持续0℃反应至TLC监测反应完全。反应用2N盐酸溶液调节pH值至中性。减压浓缩除去甲醇。0℃下继续滴加2N盐酸溶液调节pH值至2。溶液用乙酸乙酯萃取。乙酸乙酯层用饱和氯化钠水溶液洗至中性,加入无水硫酸钠干燥。过滤,滤液经减压浓缩除去溶剂,得1.63g(86％)标题化合物,白色固体。
ESI-MS(m/e)：375[M-H]-。
实施例4制备Asp(OBzl)-Ser-OBzl
0℃将2.50g(5mmol)Boc-Asp(OBzl)-Ser-OBzl溶于氯化氢的乙酸乙酯溶液(4M),搅拌至TLC显示反应完全。之后,反应液37℃减压浓缩,使彻底除去游离氯化氢。得到的固体悬浮于5mL无水乙醚中,充分洗涤。收集沉淀,得2.05g(94％)标题化合物,无色固体。ESI-MS(m/e)：399[M-H]-。
实施例5制备Boc-Arg(NO2)-Gly-Asp(OBzl)-Ser-OBzl
采用实施例1的方法从3.08g(8mmol)Boc-Arg(NO2)-Gly和3.50g Asp(OBzl)-Ser-OBzl(8mmol)中得到2.07g(68％)标题化合物,无色固体。ESI-MS(m/e)：759[M+H]+。1HNMR(300MHz,DMSO-d6):δ/ppm＝8.490(s,1H),8.186(t,J＝7.2Hz,1H),8.062(m,1H),7.362(m,10H),6.948(d,J＝7.5Hz,1H),5.132(m,3H),5.501(t,J＝5.4Hz,1H),4.742(m,1H),4.380(m,1H),3.931(m,1H),3.720(m,1H),3.126(m,2H),2.730(m,1H),2.541(m,1H),1.591(m,1H),1.502(m,1H),1.383(s,9H)。
实施例6制备Arg(NO2)-Gly-Asp(OBzl)-Ser-OBzl
采用实施例4的方法从758mg(1mmol)Boc-Arg(NO2)-Gly-Asp(OBzl)-Ser-OBzl得327mg(94％)标题化合物,淡黄色粉末。ESI-MS(m/e)：657[M-H]-。
实施例7 1-(CH2CO2H)-5-氟尿嘧啶(1)
0℃将2.6g(20mmol)5-氟尿嘧啶(5FU)用氢氧化钾水溶液溶解。之后于60℃活化1小时。向内滴加4.14g(30mmol)溴乙酸水溶液,60℃搅拌8h。TLC检测反应完全后反应混合物冷却至室温。反应混合物于0℃用浓盐酸调节pH至5,搅拌30min。过滤,滤液滴加浓盐酸调节pH至2。0℃搅拌2.5h。过滤,滤渣用蒸馏水洗3次,晾干得3.05g(81％)标题化合物,为无色固体。ESI-MS(m/e)：187[M-H]-。1H NMR(300MHz,DMSO-d6):δ/ppm＝11.889(d,J＝2.7Hz,1H),8.069(d,J＝3.9Hz,1H),4.366(s,1H)。
实施例8制备1-(CH2CO-The-OBzl)-5-氟尿嘧啶(2)
0℃将1.88g(10mmol)1-(CH2CO2H)-5-氟尿嘧啶(1)用无水N,N-二甲基甲酰胺(DMF)搅拌溶解。向得到的溶液中依次加入1.35g(10mmol)1-羟基苯并三唑和2.68g(13mmol)二环己基羰二亚胺。搅拌30min后,向反应液中加入3.00g(10mmol)The-OBzl的DMF溶液。反应液于0℃滴加N-甲基吗啉,调节pH 8。反应液室温搅拌至TLC显示反应完全,过滤,滤饼用甲醇洗3次。将滤液减压浓缩,得淡黄色油状物。经硅胶柱层析纯化得到3.10g(72％)标题化合物,为无色固体。Mp:150-151℃；
Figure BDA0002149558190000041
＝-48.6(c＝0.10,H2O)；ESI-MS(m/e):433[M-H]-；1HNMR(300MHz,DMSO-d6):δ/ppm＝11.872(s,1H),8.731(d,J＝7.5Hz,1H),8.011(d,J＝6.6Hz,1H),7.775(t,J＝5.1Hz,1H),7.338(m,5H),5.125(s,2H),4.319(m,3H),3.034(m,2H),2.138(t,J＝7.5Hz,2H),1.898(m,2H),0.979(t,J＝7.2Hz,3H)。13C NMR(75MHz,DMSO-d6):δ/ppm＝171.8,171.0,167.3,158.8,157.9,150.1,140.6,138.8,136.3,131.5,128.9,128.5,128.2,66.5,52.2,29.7,33.7,31.7,27.4,15.1。
实施例9制备1-(CH2CO-The)-5-氟尿嘧啶(3)
将434mg(1mmol)1-(CH2CO-The-OBzl)-5-氟尿嘧啶(2)用甲醇溶解,加入43mg Pd/C,通入氢气,室温搅拌至TLC显示反应完全。过滤除去Pd/C,滤液减压浓缩至干。得到的固体用无水乙醚磨洗之后,用水溶解。水溶液用饱和碳酸氢钠溶液调节pH至8。之后,经C18柱层析纯化。收集组分冻干,得无色固体212mg(62％)标题化合物,为无色粉末。Mp:248-249℃；
Figure BDA0002149558190000042
＝-73.4(c＝0.1,H2O)；ESI-MS(m/e)：343[M-H]-；1H NMR(300MHz,DMSO-d6):δ/ppm＝11.850(d,J＝6.0Hz,1H),8.567(d,J＝7.8Hz,1H),8.027(d,J＝6.9Hz,1H),7.787(t,J＝5.4Hz,1H),4.339(s,2H),4,197(m,1H),3.041(m,2H),2.117(t,J＝7.5Hz,2H),1.873(m,2H),0.984(t,J＝7.2Hz,3H)。13C NMR(75MHz,DMSO-d6):δ/ppm＝173.4,171.2,167.1,158.1,157.8,141.2,138.1,131.7,131.2,52.0,49.8,33.7,32.0,27.2,15.1。
实施例10制备1-[CH2CO-The-Arg(NO2)-Gly-Asp(OBzl)-Ser-OBzl]-5-氟尿嘧啶(4)
采用实施例8的方法从172mg(0.5mmol)1-(CH2CO-The)-5-氟尿嘧啶(3)和347mg(0.5mmol)Arg(NO2)-Gly-Asp(OBzl)-Ser-OBzl得300mg(61％)标题化合物,为无色固体。ESI-MS(m/e)：983[M-H]-；1H NMR(300MHz,DMSO-d6):δ/ppm＝11.838(d,J＝4.5Hz,1H),8.438(d,J＝7.8Hz,1H),8.291(d,J＝7.8Hz,1H),8.172(s,1H),7.984(m,2H),7.753(s,1H),7.350(m,10H),5.098(m,5H),4.800(m,5H),4.353(m,4H),3.059(m,4H),2.756(m,1H),2.596(m,1H),2.091(m,2H),1.883(m,1H),1.702(m,2H),1.528(m,3H),0.979(t,J＝7.2Hz,3H)。13C NMR(75MHz,DMSO-d6):δ/ppm＝172.1,171.6,171.4,171.0,170.6,170.2,169.0,166.9,162.7,158.1,157.9,150.2,140.6,138.8,136.4,136.3,131.6,131.4,128.8,128.4,128.3,128.1,66.4,66.1,61.5,55.4,52.6,50.0,49.4,42.2,36.8,36.2,33.7,32.1,31.2,29.6,28.8,15.1。
实施例11制备1-(CH2CO-The-Arg-Gly-Asp-Ser)-5-氟尿嘧啶(5)
0℃将254mg(0.25mmol)1-[CH2CO-The-Arg(NO2)-Gly-Asp(OBzl)-Ser-OBzl]-5-氟尿嘧啶(4)溶于2mL三氟乙酸中,加入0.7mL三氟甲磺酸溶解,反应完全后加入预冷的无水乙醚,搅拌40min至有固体析出。离心,弃去上清液,反复三次,将离心所得固体晾干。加入H2O溶解,0℃下用饱和碳酸氢钠溶液调节pH值至7,过滤除去滤渣。滤液经Sephdax-G10凝胶柱层析及C18柱层析分离纯化,冷冻干燥后得到82mg(42％)标题化合物,无色固体。测定Mp:160～161℃,
Figure BDA0002149558190000051
＝-43.4(c＝0.10,H2O)；ESI-MS(m/e)：758[M-H]-；1H NMR(300MHz,DMSO-d6):δ/ppm＝9.976(s,1H),8.593(d,J＝8.1Hz,1H),8.473(m,2H),8.202(d,J＝7.5Hz,1H),8.105(d,J＝6.6Hz,1H),7.739(d,J＝5.4Hz,1H),7.348(d,J＝6.6Hz,1H),7.000(s,1H),4.340(m,5H),4.109(m,1H),3.870(m,1H),3.589(m,4H),3.048(m,4H),2.570(m,1H),2.450(m,1H),2.105(t,J＝7.5Hz,2H),1.898(m,2H),1.624(m,4H),0.995(t,J＝7.2Hz,3H)。13CNMR(75MHz,DMSO-d6):δ/ppm＝174.5,173.1,172.9,171.6,171.5,170.9,169.0,166.9,157.8,157.6,150.2,141.2,138.1,131.7,62.4,55.6,52.9,50.1,49.0,43.0,37.3,33.7,32.1,30.2,28.8,25.0,15.1。
实施例12测定化合物3和5的抗肿瘤活性
1)化合物3和5以及阳性药5-FU用生理盐水溶解,用生理盐水作为阴性对照；
2)化合物3和5以及5-FU和生理盐水均灌胃,化合物3的给药剂量为10nmol/kg/天,化合物5的给药剂量为1nmol/kg/天,5-FU的给药剂量为150μmol/kg/天；生理盐水的给药量为0.1mL/10g/天。
3)实验动物为清洁级ICR雄性小鼠,体重为20±2g。
4)移植性小鼠S180腹水型纤维肉瘤模型建立所用瘤源为S180小鼠腹水瘤细胞,购自北京大学医学部动物实验中心。取传代一周后,生长状态良好的SPF级ICR雄性小鼠(瘤源鼠),经麻醉后处死,无菌条件下,取其腹腔中S 180瘤液,经1000rpm离心10min,弃去上清液,加入少量4℃预冷的生理盐水洗涤,除去浮血、组织细胞碎片及其他非细胞成分,经台盼蓝染色进行细胞计数,按公式计算活细胞浓度,及细胞活力。
将细胞活力大于90％的瘤液用4℃生理盐水稀释,制成2×107个/mL的细胞悬液。以0.2mL/只瘤液接种于ICR小鼠右侧腋下(尽快完成接种)。每天观察小鼠腋下肿瘤生长情况。按照瘤体积进行均匀分组,每组12只。分组后小鼠,按照上面描述的剂量每天口服化合物3,化合物5或5-FU或生理盐水,连续给药8天。第9天将各组小鼠称重,麻醉,眼球取血于含EDTA的取血管中,进行血常规计数,观察受试化合物对血常规细胞的影响。将小鼠处死,钝性分离小鼠腋下肿瘤组织,取出肉瘤后,称重。肿瘤重量以均值±SD g表示,用SPSS统计分析软件对实验数据进行统计学分析。结果见表1。可以看出,在10nmol/kg/天口服剂量下的化合物3和1nmol/kg/天口服剂量下的化合物5能够有效抑制肿瘤的生长。可见,化合物3和5在低于5-FU 15000和150000倍的剂量下仍具有抗肿瘤活性。本发明有显著的技术效果。
表1化合物3和5的抗肿瘤活性
Figure BDA0002149558190000061
a)与生理盐水比P<0.01；n＝12.
实施例13测定化合物3和5的抗肿瘤细胞迁移活性
1)化合物3和5用含0.1％DMSO的培养基配制成所需浓度。
2)肿瘤细胞为A549(人非小细胞肺癌细胞)及95D(人高转移非小细胞肺癌细胞)均选用RPMI-1640培养基培养,培养基中均含有10％经灭活的胎牛血清和1×105U/L青霉素和100mg/L链霉素。
3)将生长状态良好,处于对数生长期的A549细胞按照5×105个/mL的密度而95D细胞按照1×106个/mL的密度制备细胞悬液。使用无血清的培养基接种在Transwell的上室,每室加入100μL,加入化合物3,5(终浓度为20μM)。同时在下室加入600μL含有10％FBS的培养基,将Transwell小室放入24孔培养板中,于37℃的5％二氧化碳培养箱中培养48h,用棉签拭去上室的细胞,吸弃下室的培养基,用4％多聚甲醛固定液固定细胞0.5h,弃固定液,用PBS洗2次,用结晶紫染色10min,清水洗去浮色,用400倍显微镜观察。随机选取9个不同的视野观察细胞并计算迁移数。结果见表2。可以确认,在20μM浓度下化合物3,5有效地抑制肿瘤细胞迁移。此外,化合物5的抗细胞迁移活性优于20μM浓度下Arg-Gly-Asp-Ser(RGDS,P<0.05)。这是本发明的突出的技术效果。
表2化合物3和5对A549和95D细胞迁移的影响
Figure BDA0002149558190000071
a)与空白对照比P<0.01；b)与空白对照比P<0.01,与RGDS比P<0.05；n＝3。
实施例14测定化合物3和5的抗肿瘤细胞侵袭活性
1)化合物3和5用含0.1％DMSO的培养基配制成所需浓度。
2)肿瘤细胞为A549(人非小细胞肺癌细胞)及95D(人高转移非小细胞肺癌细胞)均选用RPMI-1640培养基培养,培养基中均含有10％经灭活的胎牛血清和1×105U/L青霉素和100mg/L链霉素。
3)将生长状态良好,处于对数生长期的A549细胞按照5×105个/mL的密度而95D细胞按照1×106个/mL的密度使用无血清的培养基接种在Transwell的上室,每室加入100μL,加入化合物3和化合物5(终浓度为20μM)同时在下室加入600μL含有10％FBS的培养基,将Transwell小室放入24孔培养板中,37℃的5％二氧化碳培养箱中培养48h,用棉签拭去上室的细胞,弃下室的培养基,用4％多聚甲醛固定液固定细胞0.5h,弃固定液,用PBS洗2次,用结晶紫染色10min,清水洗去浮色,用400倍显微镜观察。随机选取9个不同的视野观察细胞并计算侵袭数。结果见表3,可以看到,在20μM浓度下化合物3和化合物5有效地抑制肿瘤细胞侵袭。此外,化合物5的活性与20μM浓度下Arg-Gly-Asp-Ser(RGDS)的活性无显著性差异。这是本发明的突出的技术效果。
表3化合物3和5对A549和95D细胞侵袭的影响
Figure BDA0002149558190000081
a)与空白对照比P<0.01；b)与空白对照比P<0.01,与RGDS比P>0.05；n＝3。
实施例15测定化合物3和5的抗肿瘤转移活性
将化合物3和5溶于生理盐水。Lewis小鼠肺癌细胞(LLC,购自ATCC)用含有10％FBS和1×105U·L-1青霉素和100mg·L-1链霉素的DMEM培养基培养。每天传代一次,富集细胞。待细胞处于对数生长期且生长状态良好时消化细胞。用生理盐水调整细胞密度至2×107个/mL。
体重为20±2g的近交系C57BL/6雄性小鼠用左手固定,用75％乙醇涂在小鼠右前肢腋窝皮肤处消毒,右手以1mL无菌注射器于消毒皮下处注射肿瘤细胞悬液,每只注射0.2mL,取接种10天生长状态良好的Lewis肺癌荷瘤小鼠,乙醚麻醉后颈椎脱臼处死。用75％乙醇浸泡消毒10min,在超净台上操作剥离瘤体,选择生长良好的肿瘤组织,在无菌培养皿中剪碎,放置于玻璃组织匀浆器中研磨。研磨时按照瘤块重量(g)/生理盐水体积(mL)为1/3的比例加4℃预冷的生理盐水。研磨制得的细胞悬液用200目的尼龙网过滤,收集的细胞用生理盐水调浓度为2×107个/mL。取体重为20±2g的近交系C57BL/6雄性小鼠,左手固定小鼠,用75％乙醇涂在小鼠右前肢腋窝皮肤处消毒,右手以1mL无菌注射器于消毒皮下处注射肿瘤细胞悬液,每只注射0.2mL,接种后10天可以长成绿豆大小的肿瘤。测量肿瘤体积,肿瘤直径为4-6mm的小鼠随机分组。化合物3组小鼠每天一次口服给药,剂量为1nmol/kg/天,化合物5组小鼠每天一次口服给药,剂量为0.1nmol/kg/天,连续给10天。Arg-Gly-Asp-Ser(RGDS,腹腔注射剂量为20μmol/kg/天,连续给10天)作阳性对照。空白组小鼠每日口服生理盐水,剂量为0.2mL/只/天,连续给10天。给药第11天称小鼠体重,乙醚麻醉,剖取各组小鼠的肺计算转移的瘤节数,并剖取各组小鼠的肿瘤称重。结果见表4。可以看到,在1nmol/kg/天剂量下的化合物3和0.1nmol/kg/天剂量下的化合物5有效地抑制肿瘤向肺转移,且与20μmol/kg/天剂量下RGDS的活性无显著性差异。可见,本发明有突出的技术效果。
表4化合物3和5的抗肿瘤转移活性
Figure BDA0002149558190000082
Figure BDA0002149558190000091
a)与空白对照比P<0.01；b)与空白对照比P<0.01,与RGDS比P>0.05；n＝10。
实施例16测定化合物3和5对S180小鼠的骨髓毒性
5-FU的骨髓抑制毒性主要表现在降低血液中白细胞和血小板计数。为了考察化合物3和5治疗的潜在骨髓毒性，本发明采用迈瑞全自动三分类血球分析仪BC3000测定了化合物3和5治疗的S180小鼠血液中白细胞和血小板计数。数据见表5。数据表明在在10nmol/kg/天剂量下的化合物3和1nmol/kg/天剂量下的化合物5对S180小鼠血液中白细胞和血小板计数的影响与生理盐水没有差异。可见，化合物3和5治疗对S180小鼠没有骨髓毒性。相反，在150μmol/kg/天剂量下5-FU对S180小鼠血液中白细胞和血小板计数的影响与生理盐水有显著性差异。可见，5-FU对S180小鼠有骨髓毒性。在具有抗肿瘤活性的前提下化合物3和5没有骨髓毒性，体现了本发明的突出技术效果。
表5化合物3和5对小鼠外周血中白细胞和血小板个数的影响
Figure BDA0002149558190000092
a)与生理盐水比P<0.05；b)与生理盐水比P>0.05,n＝8。

Claims (5)

1.下面结构的化合物1-(CH2CO-R)-5-氟尿嘧啶,
Figure FDA0003870405300000011
式中R代表The-Arg-Gly-Asp-Ser。
2.权利要求1所述结构的化合物1-(CH2CO-R)-5-氟尿嘧啶的制备方法,该方法包括：
(1)在KOH水溶液中5-氟尿嘧啶与溴乙酸60℃反应8h,然后0℃用浓盐酸处理,生成1-羧甲基-5-氟尿嘧啶；
(2)将1-羧甲基-5-氟尿嘧啶与The-OBzl偶联,制备1-(CH2CO-The-OBzl)-5-氟尿嘧啶；
(3)将1-(CH2CO-The-OBzl)-5-氟尿嘧啶经氢解反应脱除苄酯保护基,得权利要求1中的1-(CH2CO-The)-5-氟尿嘧啶；
(4)采用液相合成制备Boc-Arg(NO2)-Gly-Asp(OBzl)-Ser-OBzl；
(5)Boc-Arg(NO2)-Gly-Asp(OBzl)-Ser-OBzl在浓度为4N的氯化氢/乙酸乙酯试剂中脱除Boc保护基得Arg(NO2)-Gly-Asp(OBzl)-Ser-OBzl；
(6)将Arg(NO2)-Gly-Asp(OBzl)-Ser-OBzl与1-(CH2CO-The)-5-氟尿嘧啶偶联,得1-[CH2CO-The-Arg(NO2)-Gly-Asp(OBzl)-Ser-OBzl]-5-氟尿嘧啶；
(7)将1-[CH2CO-The-Arg(NO2)-Gly-Asp(OBzl)-Ser-OBzl]-5-氟尿嘧啶脱保护,得权利要求1中的1-(CH2CO-The-Arg-Gly-Asp-Ser)-5-氟尿嘧啶。
3.权利要求1所述的化合物1-(CH2CO-R)-5-氟尿嘧啶在制备抗肿瘤药物中的应用。
4.权利要求1所述的化合物1-(CH2CO-R)-5-氟尿嘧啶在制备抗肿瘤转移药物中的应用。
5.权利要求1所述的化合物1-(CH2CO-R)-5-氟尿嘧啶在制备具有抗肿瘤及抗肿瘤转移双重作用药物中的应用。
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