CN112970929A - 一种基于w1/o/w2型双重乳液结构的益生菌制剂、制备方法及应用 - Google Patents

一种基于w1/o/w2型双重乳液结构的益生菌制剂、制备方法及应用 Download PDF

Info

Publication number
CN112970929A
CN112970929A CN202110490478.7A CN202110490478A CN112970929A CN 112970929 A CN112970929 A CN 112970929A CN 202110490478 A CN202110490478 A CN 202110490478A CN 112970929 A CN112970929 A CN 112970929A
Authority
CN
China
Prior art keywords
preparation
oil
probiotic
emulsifier
phase
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN202110490478.7A
Other languages
English (en)
Inventor
陈义杰
陈金玉
周麒
李贝希
沈谦
郑威
罗依伦
丁爽
韩菲
杨柳青
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Huazhong Agricultural University
Original Assignee
Huazhong Agricultural University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Huazhong Agricultural University filed Critical Huazhong Agricultural University
Priority to PCT/CN2021/094769 priority Critical patent/WO2021238752A1/zh
Publication of CN112970929A publication Critical patent/CN112970929A/zh
Priority to US17/994,162 priority patent/US20230181658A1/en
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23G—COCOA; COCOA PRODUCTS, e.g. CHOCOLATE; SUBSTITUTES FOR COCOA OR COCOA PRODUCTS; CONFECTIONERY; CHEWING GUM; ICE-CREAM; PREPARATION THEREOF
    • A23G9/00—Frozen sweets, e.g. ice confectionery, ice-cream; Mixtures therefor
    • A23G9/32—Frozen sweets, e.g. ice confectionery, ice-cream; Mixtures therefor characterised by the composition containing organic or inorganic compounds
    • A23G9/36—Frozen sweets, e.g. ice confectionery, ice-cream; Mixtures therefor characterised by the composition containing organic or inorganic compounds containing microorganisms or enzymes; containing paramedical or dietetical agents, e.g. vitamins
    • A23G9/363—Frozen sweets, e.g. ice confectionery, ice-cream; Mixtures therefor characterised by the composition containing organic or inorganic compounds containing microorganisms or enzymes; containing paramedical or dietetical agents, e.g. vitamins containing microorganisms, enzymes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
    • A61K35/74—Bacteria
    • A61K35/741—Probiotics
    • A61K35/744—Lactic acid bacteria, e.g. enterococci, pediococci, lactococci, streptococci or leuconostocs
    • A61K35/747—Lactobacilli, e.g. L. acidophilus or L. brevis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23C—DAIRY PRODUCTS, e.g. MILK, BUTTER OR CHEESE; MILK OR CHEESE SUBSTITUTES; MAKING THEREOF
    • A23C19/00—Cheese; Cheese preparations; Making thereof
    • A23C19/06—Treating cheese curd after whey separation; Products obtained thereby
    • A23C19/09—Other cheese preparations; Mixtures of cheese with other foodstuffs
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23C—DAIRY PRODUCTS, e.g. MILK, BUTTER OR CHEESE; MILK OR CHEESE SUBSTITUTES; MAKING THEREOF
    • A23C9/00—Milk preparations; Milk powder or milk powder preparations
    • A23C9/12—Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes
    • A23C9/123—Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes using only microorganisms of the genus lactobacteriaceae; Yoghurt
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23K—FODDER
    • A23K10/00—Animal feeding-stuffs
    • A23K10/10—Animal feeding-stuffs obtained by microbiological or biochemical processes
    • A23K10/16—Addition of microorganisms or extracts thereof, e.g. single-cell proteins, to feeding-stuff compositions
    • A23K10/18—Addition of microorganisms or extracts thereof, e.g. single-cell proteins, to feeding-stuff compositions of live microorganisms
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L2/00—Non-alcoholic beverages; Dry compositions or concentrates therefor; Their preparation
    • A23L2/52—Adding ingredients
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
    • A23L33/135—Bacteria or derivatives thereof, e.g. probiotics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23P—SHAPING OR WORKING OF FOODSTUFFS, NOT FULLY COVERED BY A SINGLE OTHER SUBCLASS
    • A23P10/00—Shaping or working of foodstuffs characterised by the products
    • A23P10/30—Encapsulation of particles, e.g. foodstuff additives
    • A23P10/35—Encapsulation of particles, e.g. foodstuff additives with oils, lipids, monoglycerides or diglycerides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
    • A61K35/74—Bacteria
    • A61K35/741—Probiotics
    • A61K35/744—Lactic acid bacteria, e.g. enterococci, pediococci, lactococci, streptococci or leuconostocs
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
    • A61K35/74—Bacteria
    • A61K35/741—Probiotics
    • A61K35/744—Lactic acid bacteria, e.g. enterococci, pediococci, lactococci, streptococci or leuconostocs
    • A61K35/745—Bifidobacteria
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/24—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing atoms other than carbon, hydrogen, oxygen, halogen, nitrogen or sulfur, e.g. cyclomethicone or phospholipids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/26—Carbohydrates, e.g. sugar alcohols, amino sugars, nucleic acids, mono-, di- or oligo-saccharides; Derivatives thereof, e.g. polysorbates, sorbitan fatty acid esters or glycyrrhizin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
    • A61K47/34—Macromolecular compounds obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyesters, polyamino acids, polysiloxanes, polyphosphazines, copolymers of polyalkylene glycol or poloxamers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/44—Oils, fats or waxes according to two or more groups of A61K47/02-A61K47/42; Natural or modified natural oils, fats or waxes, e.g. castor oil, polyethoxylated castor oil, montan wax, lignite, shellac, rosin, beeswax or lanolin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/02—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by special physical form
    • A61K8/04—Dispersions; Emulsions
    • A61K8/06—Emulsions
    • A61K8/066—Multiple emulsions, e.g. water-in-oil-in-water
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/96—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution
    • A61K8/99—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution from microorganisms other than algae or fungi, e.g. protozoa or bacteria
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0087—Galenical forms not covered by A61K9/02 - A61K9/7023
    • A61K9/0095—Drinks; Beverages; Syrups; Compositions for reconstitution thereof, e.g. powders or tablets to be dispersed in a glass of water; Veterinary drenches
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/10—Dispersions; Emulsions
    • A61K9/107—Emulsions ; Emulsion preconcentrates; Micelles
    • A61K9/113—Multiple emulsions, e.g. oil-in-water-in-oil
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q19/00—Preparations for care of the skin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2800/00—Properties of cosmetic compositions or active ingredients thereof or formulation aids used therein and process related aspects
    • A61K2800/10—General cosmetic use

Abstract

本发明属于生物技术领域，尤其涉及一种基于W1/O/W2型双重乳液结构的益生菌制剂、制备方法及应用。制备过程包括：将包含益生菌菌体的溶液或益生菌菌体与益生菌保护剂混合后作为内水相W1；将乳化剂溶于脂质相形成脂质相O，将脂质相O与内水相W1初步混合后，经搅拌、低能乳化法或高能乳化法乳化，得到初乳W1/O；以乳化剂的溶液为外水相W2，向初乳W1/O中加入W2，经搅拌、低能乳化法或高能乳化法乳化，得到W1/O/W2型双重乳液，即益生菌制剂。本发明采用双重乳液体系对益生菌进行包埋，使得益生菌在低温贮藏和冻融过程中保持活性，降低外部环境对益生菌的影响，提高益生菌在产品货架期内的贮藏和冻融稳定性。

Description

一种基于W1/O/W2型双重乳液结构的益生菌制剂、制备方法及 应用
技术领域
本发明属于生物技术领域，尤其涉及一种基于W1/O/W2型双重乳液结构的益生菌制剂、制备方法及应用。
背景技术
益生菌是一类对宿主有益的活性微生物，是定植于人体肠道、生殖系统内的，能够产生确切健康功效从而改善宿主微生态平衡、发挥有益作用的活性有益微生物的总称。大量研究表明，益生菌具有多种生理活性，如：调节肠道健康、提高体内营养素的合成及其生物利用度、降低胆固醇水平、降血压、缓解肿瘤、预防肠道癌症、提高机体免疫水平等。
以益生菌为原料制成的产品也就是通常所说的微生态制剂中，植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)、鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)、嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)、罗伊氏乳杆菌(Lactobacillus reuteri)、保加利亚乳杆菌(Lactobacillus bulgaricus)、动物双歧杆菌(Bifidobacterium)、两歧双歧杆菌(Bifidobacterium bifidum)、青春双歧杆菌(Bifidobacterium adolescentis)和嗜热链球菌(Streptococcus thermophilus)等均为具有代表性的菌种。研究表明，益生菌的最小摄入量必须要达到6～7log/mL才能够充分发挥其生理作用，这就要求益生菌产品在贮藏和机体消化过程中都保持稳定。
但是，大多数益生菌都属于兼性厌氧型，在加工贮藏过程中容易受到氧气的影响，且在环境pH值、温度的影响下，益生菌的贮藏稳定性降低；而后续益生菌经人体口腔摄入进入消化道时，经由胃液、消化酶、胆盐作用后会进一步失活，最终定植于肠道中的活菌数通常低于理论上能够发挥生理作用的最小值。
目前国内生产的益生菌产品尚存在较多的不足，如产品质量不稳定、益生菌的贮藏稳定性差，在反复冻融和贮藏过程的较短时间内益生菌产品中活益生菌数量急剧降低，往往达不到有效的活菌摄入量。为了保证益生菌的存活率、保持其生理活性，提高益生菌在产品货架期内的贮藏稳定性，目前国内外研究较多的是益生菌的微胶囊包埋技术及其衍生的其它多种包埋技术。这些包埋技术中，益生菌存活率和稳定性主要取决于菌体浓度与种类、微胶囊壁材的种类、喷雾干燥器的出口温度等，影响因素较多、制备工艺繁复、无法有效避免部分菌体的死亡现象，且胶囊在机体降解时间长，很难控制产品的质量标准；同时，益生菌微胶囊应用于食品中时，往往会对食品的感官性状和风味产生不良影响。
有研究者将益生菌包埋在内水相凝胶化的多重乳液中，但该水相凝胶化的多重乳液主要针对益生菌的抗消化问题和益生菌的肠道定植问题进行设计，未考虑益生菌的长期贮藏问题。此外，曹晨(中国油脂2019，44(12)，143-148)和郭战阳、郑召军(中国油脂2019，44(08)，65-71)等人在对凝胶乳的制备及特性进行研究优化时，发现冻融过程对其影响较大，乳液的冻融稳定性较差，因此，将该乳液在食品中进行应用时，冻融过程在对乳液的稳定性产生影响的同时，也会影响益生菌的活性。
发明内容
针对现有技术存在的问题，本发明提供了一种基于W1/O/W2型双重乳液结构的益生菌制剂、制备方法及应用，目的在于解决现有技术中的一部分问题或至少缓解现有技术中的一部分问题。
本发明开发出了一种新型包载益生菌的乳液体系，可应用于食品、饲料、动物保健产品、个人护理或药物产品，所述食品、饲料、动物保健产品、个人护理或药物产品，包含如前述权利要求中任一项所述的乳液。其应用包括但不限于冰淇淋、雪糕、酸奶、奶酪、饮料、动物保健产品、个人护理或药物产品。本发明解决了该体系中益生菌在贮藏和冻融过程中容易失活的问题，提高了益生菌的贮藏和冻融稳定性，有利于益生菌更好地发挥其生理活性作用。
本发明是这样实现的，一种基于W1/O/W2型双重乳液结构的益生菌制剂的制备方法，包括以下步骤：
S1：将含有益生菌菌体或益生菌菌体与益生菌保护剂的混合物溶液涡旋处理，使其均匀分散形成内水相W1；
S2：将脂质相O与内水相W1初步混合，利用乳化剂稳定，经搅拌，低能乳化法或高能乳化法乳化，得到油包水型初乳W1/O，W1在所述脂质相O内部稳定化；
S3：以含有乳化剂的溶液为外水相W2，向所述初乳W1/O中加入外水相W2，经搅拌、低能乳化法或高能乳化法乳化，得到W1/O/W2型双重乳液，低温保存，即可得到益生菌制剂。
进一步地，步骤S1中内水相W1中含有益生菌菌体或益生菌菌体与益生菌保护剂混合物；
所述益生菌可以是任何益生菌，包括但不限于植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、保加利亚乳杆菌、两歧双歧杆菌、长双歧杆菌、乳酸乳球菌或嗜热链球菌中的至少一种；
所述益生菌保护剂包括但不限于糖类、蛋白质、氨基酸盐、醇、无机盐、抗氧化剂、生物碱、聚合物和复合物中的至少一种；内水相中保护剂的浓度优选地是至少0.01wt％；
步骤S1中所述益生菌保护剂包括但不限于甘油、脱脂乳粉、抗坏血酸、乳清分离蛋白、海藻糖、蔗糖、果糖、麦芽糖、乳糖、葡聚糖、明胶、蛋白胨、甲基纤维素、甜菜碱、谷氨酸钠、木糖醇、聚乙二醇1000、十二烷基磺酸钠中的至少一种
进一步地，步骤S2中所述低能乳化法包括但不限于相转变法、自发乳化法、膜乳化法；所述高能乳化法包括但不限于高速剪切、高压均质乳化、微射流乳化。
进一步地，步骤S2中所述乳化剂包括但不限于油溶性乳化剂(包括但不限于天然或人工合成的油溶性小分子乳化剂、油溶性大分子乳化剂、油溶性聚合物和复合物中的至少一种)、亲水性乳化剂(包括但不限于天然或人工合成的亲水性小分子乳化剂、亲水性大分子乳化剂、亲水性聚合物和复合物中的至少一种)和两亲性乳化剂(包括但不限于天然或人工合成的两亲性小分子乳化剂、两亲性大分子乳化剂、两亲性性聚合物和复合物中的至少一种)中的至少一种。
步骤S2中所述油溶性乳化剂包括但不限于聚甘油蓖麻醇酸酯(PGPR)、司班20、司班60、司班65、司班80、司班85、乙二醇脂肪酸酯、丙二醇单硬脂酸酯、单硬脂酸甘油酯、玉米醇溶蛋白中的至少一种；所述亲水性乳化剂包括但不限于吐温80、果胶、羟丙基甲基纤维素、乳清分离蛋白、乳清浓缩蛋白、酪蛋白中、β乳球蛋白纤维的至少一种；所述两亲性乳化剂包括但不限于卵磷脂、蔗糖酯等中的至少一种。
进一步地，所述乳化剂的添加量优选地是至少为脂质相O质量的0.1％。
进一步地，步骤S2中所述脂质相包括但不限于在环境温度(20摄氏度)下为液体的脂肪、固醇、类脂中的至少一种和为固体的脂肪、固醇、类脂中的至少一种；
所述液体脂肪包括改性的或未改性的植物油和动物油，包括棕榈油、鳄梨油、芥子油、亚麻籽油、葡萄油、花生油、椰子油、橄榄油、蓟油、葡萄籽油、芝麻油、大豆油、向日葵油、亚麻仁油、棉油、菜籽油、低芥酸菜籽油、玉米油、稻米油、红花油、木棉油、芝麻油、月见草油、鱼油和海产动物油中的至少一种；所述固体脂肪包括改性的或未改性的植物油和动物油，包括可可脂、牛油树脂、婆罗双树脂、鸡脂、牛脂、乳脂、猪油中的至少一种；所述固醇、类脂，包括改性的或未改性的蜂蜡、石蜡、葵花籽蜡、稻米蜡、小烛树蜡、棕榈蜡、谷甾醇中的至少一种。所述改性包括氢化、分馏和/或酯交换反应。
进一步地，相对于所述乳液的总重量，所述脂质相O的量至多是90wt％。
进一步地，步骤S3中所述低能乳化法包括但不限于相转变法、自发乳化法、膜乳化法；所述高能乳化法包括但不限于高速剪切、高压均质乳化、微射流乳化。
进一步地，所述乳化剂包括但不限于小分子乳化剂、多糖乳化剂、多肽乳化剂、蛋白质乳化剂、聚合物和复合物中的至少一种。
所述乳化剂包括但不限于吐温80、果胶、羟丙基甲基纤维素、乳清分离蛋白、乳清浓缩蛋白、酪蛋白、β乳球蛋白纤维中的至少一种。
进一步地，外水相W2中，乳化剂的质量百分比优选地是至少为0.1wt％。
进一步地，外水相W2与初乳W1/O的体积比至多是99％。
一种基于W1/O/W2型双重乳液结构的益生菌制剂，利用上述的制备方法制得。
如上述的基于W1/O/W2型双重乳液结构的益生菌制剂在益生菌产品中的应用。
进一步地，所述益生菌产品包括食品(包括常温或低温食品)、饲料、动物保健产品、个人护理或药物产品。
进一步地，所述产品包括但不限于冰淇淋、雪糕、酸奶、奶酪、饮料、饲料、动物保健产品、个人护理或药物产品。
综上所述，本发明的优点及积极效果为：
本申请发明人长期致力于益生菌制剂的加工研究，经过大量的研究和探索，得出了上述制备益生菌制剂的加工工艺。本工艺制备的益生菌制剂可保证益生菌存活率，同时能够延长其贮藏时间，从而提高益生菌的稳定性，制得有利于益生菌更好地发挥其生理活性作用的益生菌制剂。
本发明采用W1/O/W2双重乳液体系对益生菌进行保护包埋，该益生菌包埋体系可使得益生菌在贮藏和冻融过程中保持活性，降低外部环境对益生菌的影响，提高益生菌在产品货架期内的贮藏和冻融稳定性。同时，将益生菌包埋在双重乳液内水相中，油膜和界面膜可使益生菌免受氧气等外部环境的破坏，从而进一步提高益生菌的存活率，及其贮藏和冻融稳定性，有效解决了益生菌产品质量不稳定，有效活菌数不足，益生菌产品中益生菌存活时间短等问题。
本发明制备工艺简单，有效的降低了成本，对于延长益生菌产品货架期内益生菌的存活率、贮藏和冻融稳定性、保障益生菌产品的活性功能具有重要应用价值。该双重乳液的益生菌制剂可用于冰淇淋、雪糕、酸奶、奶酪、饮料、饲料、动物保健产品、个人护理或药物产品，应用前景广阔。
附图说明
图1是包埋益生菌的双重乳液样品图；
图2是包埋益生菌的双重乳液CLSM图；
图3是实施例1的平板计数检测结果图；
图4是实施例2的平板计数检测结果图；
图5是实施例3的平板计数检测结果图；
图6是实施例4的平板计数检测结果图。
图7是实施例5的平板计数检测结果图；
图8是实施例6的平板计数检测结果图；
图9是实施例7的平板计数检测结果图；
图10是实施例8的平板计数检测结果图。
图11是实施例9的平板计数检测结果图；
图12是实施例10的平板计数检测结果图；
图13是实施例11的平板计数检测结果图；
图14是实施例12的平板计数检测结果图。
图15是实施例13的平板计数检测结果图；
图16是实施例14的平板计数检测结果图；
图17是实施例15的平板计数检测结果图；
图18是实施例16的平板计数检测结果图。
图19是实施例17的平板计数检测结果图；
图20是实施例18的平板计数检测结果图。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。此处所描述的具体实施例仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
本发明披露了一种基于W1/O/W2型双重乳液结构的益生菌制剂、制备方法及应用，具体如下各实施例所示。本发明中的益生菌可以是任何益生菌，包括但不限于植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、保加利亚乳杆菌、两歧双歧杆菌、长双歧杆菌、乳酸乳球菌或嗜热链球菌，由于各益生菌在适应于本发明的技术方案中时不会产生显著差异，因此下述仅以部分益生菌为例进行详细阐述。本发明对脂质相没有特殊限制，能满足食用的相关要求即可。除非特别说明，本发明采用的试剂、方法和设备为本技术领域常规试剂、方法和设备，各实施例所用玻璃器皿、离心管、移液器吸头，以及所使用的悬浮液、溶液均在121℃下灭菌15min。
实施例1双重乳液益生菌制剂制备及性能检测
1、制备方法主要包括以下步骤：
(1)菌悬液的制备：将益生菌植物乳杆菌用MRS肉汤培养基进行活化，在30℃恒温培养箱培养14h后，将菌液离心分离，得到菌体。
(2)内水相W1的制备：配制10wt％保护剂(本实施例中为海藻糖)溶液作为益生菌保护剂，在121℃下灭菌15min，冷却至室温后，将菌体与保护剂混合后，涡旋使其均匀分散形成内水相W1。
内水相中保护剂的浓度优选地是至少0.01wt％，更优选为2～20wt％。
益生菌保护剂配方包括但不限于糖类、蛋白质、氨基酸盐、醇、无机盐、抗氧化剂、生物碱、聚合物或复合物等中的至少一种；优选地，包括但不限于甘油、脱脂乳粉、抗坏血酸、乳清分离蛋白、海藻糖、蔗糖、果糖、麦芽糖、乳糖、葡聚糖、明胶、蛋白胨、甲基纤维素、甜菜碱、谷氨酸钠、木糖醇、聚乙二醇1000、十二烷基磺酸钠中的至少一种
(3)脂质相O的制备：向94g油(本实施例中为大豆油)中加入6g乳化剂(本实施例中为聚甘油蓖麻醇酸酯(PGPR))，以500rpm磁力搅拌5～45min，得到6wt％聚甘油蓖麻醇酸酯，即为脂质相O。
乳化剂的添加量优选地是至少为脂质相O质量的0.1％，更优选为3％～10％，最优选为添加量是脂质相O质量的6％。磁力搅拌条件为：以200～800rpm磁力搅拌5～45min。
乳化剂包括但不限于油溶性乳化剂、亲水性乳化剂、两亲性乳化剂中的至少一种；包括但不限于聚甘油蓖麻醇酸酯(PGPR)、司班20、司班60、司班65、司班80、司班85、乙二醇脂肪酸酯、丙二醇单硬脂酸酯、单硬脂酸甘油酯、玉米醇溶蛋白、吐温80、果胶、羟丙基甲基纤维素、乳清分离蛋白、乳清浓缩蛋白、酪蛋白、β乳球蛋白纤维、卵磷脂、蔗糖酯等中的至少一种。
(4)初乳W1/O的制备：将内水相W1边搅拌边滴入脂质相O中，内水相W1与脂质相O的质量比为1:3，搅拌速度1000rpm；滴加速度为10～100mL/min，后继续搅拌2～5min，利用高能乳化法(本实施例中为10000～18000rpm的转速剪切8～15min)进行乳化，得到初乳W1/O。
脂质相O与内水相W1的质量比更优选为1～5:1，最优选为1～3:1。搅拌速度为500～2000rpm，优选500～1500rpm。
(5)外水相W2的制备：将3g的亲水性乳化剂(本实施例中为乳清分离蛋白)加入到97g的去离子水中，搅拌2h使其充分溶解，后放入4℃冰箱过夜以充分水合，得到3wt％乳清分离蛋白溶液，即为外水相W2。
亲水性乳化剂包括但不限于小分子乳化剂、多糖乳化剂、多肽乳化剂、蛋白质乳化剂、聚合物和复合物中的至少一种，优选为吐温80、果胶、羟丙基甲基纤维素、乳清分离蛋白、乳清浓缩蛋白、酪蛋白、β乳球蛋白纤维、中的至少一种。外水相W2中，乳化剂的质量百分比优选地是至少为0.1wt％，更优选为1～10wt％。
(6)W1/O/W2型双重乳液制剂的制备：将初乳W1/O与外水相W2按质量比为1:2的比例混合，利用高能乳化法(本实施例中为10000～18000rpm的转速剪切2～5min)进行乳化，得到双重乳液W1/O/W2，-20～4℃低温保存，即可得到益生菌制剂。
外水相W2与初乳W1/O的质量比至多是99％，优选为1～50:1，更优选为1～20:1，最优选为2～4:1。
2、性能检测：
以原始菌液、悬浮于无菌水中的植物乳杆菌为W1分别利用低速搅拌和搅拌加剪切制备的W1/O/W2双重乳液、悬浮于10wt％海藻糖溶液中的植物乳杆菌为W1仅利用搅拌制备的W1/O/W2双重乳液为对照组，包埋在实施例1双重乳液W1/O/W2中的植物乳杆菌为实验组，考察乳液制备条件和保护剂的添加对W1/O/W2双重乳液中植物乳杆菌活菌数的影响。对照组和实验组在-18℃冷冻十二个小时之前，然后再于4℃下贮藏至完全融化之后分别均取等量适量样品，采用稀释涂布平板法测定其活菌数。
本发明制备的乳液如图1所示，CLSM图检测如图2所示(灰色为油相，用尼罗红染料染色，激发波长为483nm；黑色部分为未被染色的水相)，分析结果如图3所示，图中结果说明，对于冻融前的植物乳杆菌而言，搅拌制备的乳液活菌数合理减少，剪切制备的乳液在冻融前的活菌数近似等于或者高于搅拌。因此认为，剪切只是使得乳液液滴更小，相同量的乳液中，涂布到固体培养基的液滴数更多，活菌数更多，进一步说明本发明的制备条件对益生菌的存活率没有影响。
冻融后，植物乳杆菌活菌数均有明显降低：原始菌液在冻融前后的活菌数分别为4.30×1012cfu/mL和4.26×109cfu/mL，存活率为0.10％；利用剪切制备的乳液中，未添加保护剂的样品在冻融前后的活菌数分别为3.05×1011cfu/mL和5.10×1010cfu/mL，存活率为16.73％；而添加了保护剂的样品在冻融前后的活菌数分别为2.91×1011cfu/mL和1.79×1011cfu/mL，存活率为61.51％。这些数据表明W1/O/W2双重乳液结构和海藻糖对植物乳杆菌有一定的保护作用，特别是本发明本实施例中制备的产品，冻融后活菌数明显显著高于其他组，说明本发明的益生菌制剂能够减少益生菌的失活，使其在后续应用中更好地发挥其生理活性作用。
实施例2双重乳液益生菌制剂制备
1、制备方法主要包括以下步骤：
(1)菌悬液的制备：将益生菌植物乳杆菌用MRS肉汤培养基进行活化，在30℃恒温培养箱培养14h后，将菌液离心分离，得到菌体。
(2)内水相W1的制备：配制10wt％保护剂(本实施例中为海藻糖)溶液作为益生菌保护剂，在121℃下灭菌15min，冷却至室温后，将菌体与保护剂混合后，涡旋使其均匀分散形成内水相W1。
(3)乳化剂的制备：取3g聚甘油蓖麻醇酸酯(PGPR)和3g卵磷脂混合，于50℃下，以500rpm磁力搅拌15～30min，得到油溶性乳化剂和两亲性乳化剂的复合物。
(4)脂质相O的制备：向94g油(本实施例中为大豆油)中加入6g乳化剂复合物(本实施例中为油溶性乳化剂聚甘油蓖麻醇酸酯(PGPR)和两亲性乳化剂卵磷脂的复合物)，以500rpm磁力搅拌5～45min，得到6wt％乳化剂复合物，即为脂质相O。
(5)初乳W1/O的制备：将内水相W1边搅拌边滴入脂质相O中，内水相W1与脂质相O的质量比为1:3，搅拌速度1000rpm；滴加速度为10～100mL/min，后继续搅拌2～5min，利用高能乳化法(本实施例中为10000～18000rpm的转速剪切8～15min)进行乳化，得到初乳W1/O。
(6)外水相W2的制备：将3g的亲水性乳化剂(本实施例中为乳清分离蛋白)加入到97g的去离子水中，搅拌2h使其充分溶解，后放入4℃冰箱过夜以充分水合，得到3wt％乳清分离蛋白溶液，即为外水相W2。
(7)W1/O/W2型双重乳液制剂的制备：将初乳W1/O与外水相W2按质量比为1:2的比例混合，利用高能乳化法(本实施例中为10000～18000rpm的转速剪切2～5min)进行乳化，得到双重乳液W1/O/W2，-20～4℃低温保存，即可得到益生菌制剂。
2、性能检测：
以原始菌液、未添加保护剂制备的W1/O/W2双重乳液为对照组，包埋在实施例2双重乳液W1/O/W2中的植物乳杆菌为实验组，考察保护剂的添加对W1/O/W2双重乳液中植物乳杆菌活菌数的影响。对照组和实验组分别在在-18℃冷冻之前和-18℃冷冻十二个小时，并于4℃下贮藏至完全融化之后分别均取等量适量样品，采用稀释涂布平板法测定其活菌数。
分析结果如图4所示，从图中可以看出，植物乳杆菌在冻融后活菌数降低，不同样品中的活菌数降低程度不同，原始乳液在冻融前后的活菌数分别为4.30×1012cfu/mL和4.26×109cfu/mL，存活率为0.10％；无保护剂的产品在冻融前后的活菌数分别为5.05×1011cfu/mL和1.20×1011cfu/mL，存活率为23.77％；本实施例中制备的产品在冻融前后的活菌数分别为5.91×1011cfu/mL和4.90×1011cfu/mL，存活率为82.91％。这证明了W1/O/W2双重乳液结构和保护剂的添加对植物乳杆菌的保护作用，也说明本发明的益生菌制剂能够减少益生菌的失活，使其在后续应用中更好地发挥其生理活性作用。
实施例3双重乳液益生菌制剂制备
1、制备方法主要包括以下步骤：
(1)菌悬液的制备：将益生菌植物乳杆菌用MRS肉汤培养基进行活化，在30℃恒温培养箱培养14h后，将菌液离心分离，得到菌体。
(2)内水相W1的制备：配制10wt％保护剂(本实施例中为海藻糖)溶液作为益生菌保护剂，在121℃下灭菌15min，冷却至室温后，将菌体与保护剂混合后，涡旋使其均匀分散形成内水相W1。
(3)乳化剂的制备：取3g聚甘油蓖麻醇酸酯(PGPR)和3g吐温80混合，于50℃下，以500rpm磁力搅拌15～30min，得到油溶性乳化剂和亲水性乳化剂的复合物。
(4)脂质相O的制备：向94g油(本实施例中为大豆油)中加入6g乳化剂复合物(本实施例中为油溶性乳化剂聚甘油蓖麻醇酸酯(PGPR)和亲水性吐温80的复合物)，以500rpm磁力搅拌5～45min，得到6wt％乳化剂复合物，即为脂质相O。
(5)初乳W1/O的制备：将内水相W1边搅拌边滴入脂质相O中，内水相W1与脂质相O的质量比为1:3，搅拌速度1000rpm；滴加速度为10～100mL/min，后继续搅拌2～5min，利用高能乳化法(本实施例中为10000～18000rpm的转速剪切8～15min)进行乳化，得到初乳W1/O。
(6)外水相W2的制备：将3g的亲水性乳化剂(本实施例中为乳清分离蛋白)加入到97g的去离子水中，搅拌2h使其充分溶解，后放入4℃冰箱过夜以充分水合，得到3wt％乳清分离蛋白溶液，即为外水相W2。
(7)W1/O/W2型双重乳液制剂的制备：将初乳W1/O与外水相W2按质量比为1:2的比例混合，利用高能乳化法(本实施例中为10000～18000rpm的转速剪切2～5min)进行乳化，得到双重乳液W1/O/W2，-20～4℃低温保存，即可得到益生菌制剂。
2、性能检测：
以原始菌液、未添加保护剂制备的W1/O/W2双重乳液为对照组，包埋在实施例3双重乳液W1/O/W2中的植物乳杆菌为实验组，考察保护剂的添加对W1/O/W2双重乳液中植物乳杆菌活菌数的影响。对照组和实验组分别在在-18℃冷冻之前和-18℃冷冻十二个小时，并于4℃下贮藏至完全融化之后分别均取等量适量样品，采用稀释涂布平板法测定其活菌数。
分析结果如图5所示，从图中可以看出，植物乳杆菌在冻融后活菌数降低，不同样品中的活菌数降低程度不同，原始乳液在冻融前后的活菌数分别为4.30×1012cfu/mL和4.26×109cfu/mL，存活率为0.10％；无保护剂的产品在冻融前后的活菌数分别为3.43×1011cfu/mL和5.69×1010cfu/mL，存活率为16.58％；本实施例中制备的产品在冻融前后的活菌数分别为4.26×1011cfu/mL和2.33×1011cfu/mL，存活率为54.65％。这证明了W1/O/W2双重乳液结构和保护剂的添加对植物乳杆菌的保护作用，也说明本发明的益生菌制剂能够在一定程度减少益生菌的失活，使其在后续应用中更好地发挥其生理活性作用。
实施例4双重乳液益生菌制剂制备
1、制备方法主要包括以下步骤：
(1)菌悬液的制备：将益生菌植物乳杆菌用MRS肉汤培养基进行活化，在30℃恒温培养箱培养14h后，将菌液离心分离，得到菌体。
(2)内水相W1的制备：配制10wt％保护剂(本实施例中为海藻糖)溶液作为益生菌保护剂，在121℃下灭菌15min，冷却至室温后，将菌体与保护剂混合后，涡旋使其均匀分散形成内水相W1。
(3)乳化剂的制备：取3g卵磷脂和3g吐温80混合，于50℃下，以500rpm磁力搅拌15～30min，得到两亲性乳化剂和亲水性乳化剂的复合物。
(4)脂质相O的制备：向94g油(本实施例中为大豆油)中加入6g乳化剂复合物(本实施例中为两亲性乳化剂卵磷脂和亲水性乳化剂吐温80的复合物)，以500rpm磁力搅拌5～45min，得到6wt％乳化剂复合物，即为脂质相O。
(5)初乳W1/O的制备：将内水相W1边搅拌边滴入脂质相O中，内水相W1与脂质相O的质量比为1:3，搅拌速度1000rpm；滴加速度为10～100mL/min，后继续搅拌2～5min，利用高能乳化法(本实施例中为10000～18000rpm的转速剪切8～15min)进行乳化，得到初乳W1/O。
(6)外水相W2的制备：将3g的亲水性乳化剂(本实施例中为乳清分离蛋白)加入到97g的去离子水中，搅拌2h使其充分溶解，后放入4℃冰箱过夜以充分水合，得到3wt％乳清分离蛋白溶液，即为外水相W2。
(7)W1/O/W2型双重乳液制剂的制备：将初乳W1/O与外水相W2按质量比为1:2的比例混合，利用高能乳化法(本实施例中为10000～18000rpm的转速剪切2～5min)进行乳化，得到双重乳液W1/O/W2，-20～4℃低温保存，即可得到益生菌制剂。
2、性能检测：
以原始菌液、未添加保护剂制备的W1/O/W2双重乳液为对照组，包埋在实施例4双重乳液W1/O/W2中的植物乳杆菌为实验组，考察保护剂的添加对W1/O/W2双重乳液中植物乳杆菌活菌数的影响。对照组和实验组在-18℃冷冻十二个小时之前，然后再于4℃下贮藏至完全融化之后分别均取等量适量样品，采用稀释涂布平板法测定其活菌数。
分析结果如图6所示，从图中可以看出，植物乳杆菌在冻融后活菌数降低，不同样品中的活菌数降低程度不同，原始乳液在冻融前后的活菌数分别为4.30×1012cfu/mL和4.26×109cfu/mL，存活率为0.10％；无保护剂的产品在冻融前后的活菌数分别为3.39×1011cfu/mL和9.56×109cfu/mL，存活率为2.82％；本实施例中制备的产品在冻融前后的活菌数分别为4.02×1011cfu/mL和3.40×1010cfu/mL，存活率为8.47％。这证明了W1/O/W2双重乳液结构和保护剂的添加对植物乳杆菌的保护作用，也说明本发明的益生菌制剂能够在一定程度减少益生菌的失活，使其在后续应用中更好地发挥其生理活性作用。
实施例5双重乳液益生菌制剂制备
1、制备方法主要包括以下步骤：
(1)菌悬液的制备：将益生菌植物乳杆菌用MRS肉汤培养基进行活化，在30℃恒温培养箱培养14h后，将菌液离心分离，得到菌体。
(2)内水相W1的制备：配制10wt％保护剂(本实施例中为海藻糖)溶液作为益生菌保护剂，在121℃下灭菌15min，冷却至室温后，将菌体与保护剂混合后，涡旋使其均匀分散形成内水相W1。
(3)脂质相O的制备：向94g油(本实施例中为大豆油)中加入6g乳化剂(本实施例中为亲水性乳化剂吐温80)，以500rpm磁力搅拌5～45min，得到6wt％吐温80，即为脂质相O。
(4)初乳W1/O的制备：将内水相W1边搅拌边滴入脂质相O中，内水相W1与脂质相O的质量比为1:3，搅拌速度1000rpm；滴加速度为10～100mL/min，后继续搅拌2～5min，利用高能乳化法(本实施例中为10000～18000rpm的转速剪切8～15min)进行乳化，得到初乳W1/O。
(5)外水相W2的制备：将3g的亲水性乳化剂(本实施例中为乳清分离蛋白)加入到97g的去离子水中，搅拌2h使其充分溶解，后放入4℃冰箱过夜以充分水合，得到3wt％乳清分离蛋白溶液，即为外水相W2。
(6)W1/O/W2型双重乳液制剂的制备：将初乳W1/O与外水相W2按质量比为1:2的比例混合，利用高能乳化法(本实施例中为10000～18000rpm的转速剪切2～5min)进行乳化，得到双重乳液W1/O/W2，-20～4℃低温保存，即可得到益生菌制剂。
2、性能检测：
以原始菌液、未添加保护剂制备的W1/O/W2双重乳液为对照组，包埋在实施例5双重乳液W1/O/W2中的植物乳杆菌为实验组，考察保护剂的添加对W1/O/W2双重乳液中植物乳杆菌活菌数的影响。对照组和实验组分别在在-18℃冷冻之前和-18℃冷冻十二个小时，并于4℃下贮藏至完全融化之后分别均取等量适量样品，采用稀释涂布平板法测定其活菌数。
分析结果如图7所示，从图中可以看出，植物乳杆菌在冻融后活菌数降低，原始乳液在冻融前后的活菌数分别为4.30×1012cfu/mL和4.26×109cfu/mL，存活率为0.10％；无保护剂的产品在冻融前后的活菌数分别为2.89×1011cfu/mL和1.42×109cfu/mL，存活率为0.49％；本实施例中制备的产品在冻融前后的活菌数分别为3.45×1011cfu/mL和5.21×109cfu/mL，存活率为1.51％，这表明本实例制备的产品对植物乳杆菌保护作用相对较弱。
实施例6双重乳液益生菌制剂制备
1、制备方法主要包括以下步骤：
(1)菌悬液的制备：将益生菌植物乳杆菌用MRS肉汤培养基进行活化，在30℃恒温培养箱培养14h后，将菌液离心分离，得到菌体。
(2)内水相W1的制备：配制10wt％保护剂(本实施例中为海藻糖)溶液作为益生菌保护剂，在121℃下灭菌15min，冷却至室温后，将菌体与保护剂混合后，涡旋使其均匀分散形成内水相W1。
(3)脂质相O的制备：向94g油(本实施例中为大豆油)中加入6g乳化剂(本实施例中为两亲性乳化剂卵磷脂)，以500rpm磁力搅拌5～45min，得到6wt％卵磷脂，即为脂质相O。
(4)初乳W1/O的制备：将内水相W1边搅拌边滴入脂质相O中，内水相W1与脂质相O的质量比为1:3，搅拌速度1000rpm；滴加速度为10～100mL/min，后继续搅拌2～5min，利用高能乳化法(本实施例中为10000～18000rpm的转速剪切8～15min)进行乳化，得到初乳W1/O。
(5)外水相W2的制备：将3g的亲水性乳化剂(本实施例中为乳清分离蛋白)加入到97g的去离子水中，搅拌2h使其充分溶解，后放入4℃冰箱过夜以充分水合，得到3wt％乳清分离蛋白溶液，即为外水相W2。
(6)W1/O/W2型双重乳液制剂的制备：将初乳W1/O与外水相W2按质量比为1:2的比例混合，利用高能乳化法(本实施例中为10000～18000rpm的转速剪切2～5min)进行乳化，得到双重乳液W1/O/W2，-20～4℃低温保存，即可得到益生菌制剂。
2、性能检测：
以原始菌液、未添加保护剂制备的W1/O/W2双重乳液为对照组，包埋在实施例6双重乳液W1/O/W2中的植物乳杆菌为实验组，考察保护剂的添加对W1/O/W2双重乳液中植物乳杆菌活菌数的影响。对照组和实验组在-18℃冷冻十二个小时之前，然后再于4℃下贮藏至完全融化之后分别均取等量适量样品，采用稀释涂布平板法测定其活菌数。
分析结果如图8所示，从图中可以看出，植物乳杆菌在冻融后活菌数降低，原始乳液在冻融前后的活菌数分别为4.30×1012cfu/mL和4.26×109cfu/mL，存活率为0.10％；无保护剂的产品在冻融前后的活菌数分别为2.24×1011cfu/mL和7.59×109cfu/mL，存活率为3.39％；本实施例中制备的产品在冻融前后的活菌数分别为2.96×1011cfu/mL和3.58×1010cfu/mL，存活率为12.10％，本实例制备的产品对植物乳杆菌保护作用相对较弱。
实施例7双重乳液益生菌制剂制备
1、制备方法主要包括以下步骤：
(1)菌悬液的制备：将益生菌植物乳杆菌用MRS肉汤培养基进行活化，在30℃恒温培养箱培养14h后，将菌液离心分离，得到菌体。
(2)内水相W1的制备：配制0.1wt％保护剂(本实施例中为海藻糖)溶液作为益生菌保护剂，在121℃下灭菌15min，冷却至室温后，将菌体与保护剂混合后，涡旋使其均匀分散形成内水相W1。
(3)脂质相O的制备：向94g油(本实施例中为大豆油)中加入6g乳化剂(本实施例中为聚甘油蓖麻醇酸酯(PGPR))，以500rpm磁力搅拌5～45min，得到6wt％聚甘油蓖麻醇酸酯，即为脂质相O。
(4)初乳W1/O的制备：将内水相W1边搅拌边滴入脂质相O中，内水相W1与脂质相O的质量比为1:3，搅拌速度1000rpm；滴加速度为10～100mL/min，后继续搅拌2～5min，利用高能乳化法(本实施例中为10000～18000rpm的转速剪切8～15min)进行乳化，得到初乳W1/O。
(5)外水相W2的制备：将3g的亲水性乳化剂(本实施例中为乳清分离蛋白)加入到97g的去离子水中，搅拌2h使其充分溶解，后放入4℃冰箱过夜以充分水合，得到3wt％乳清分离蛋白溶液，即为外水相W2。
(6)W1/O/W2型双重乳液制剂的制备：将初乳W1/O与外水相W2按质量比为1:2的比例混合，利用高能乳化法(本实施例中为10000～18000rpm的转速剪切2～5min)进行乳化，得到双重乳液W1/O/W2，-20～4℃低温保存，即可得到益生菌制剂。
2、性能检测：
以原始菌液、未添加保护剂制备的W1/O/W2双重乳液为对照组，包埋在实施例7双重乳液W1/O/W2中的植物乳杆菌为实验组，考察保护剂的添加对W1/O/W2双重乳液中植物乳杆菌活菌数的影响。对照组和实验组分别在在-18℃冷冻之前和-18℃冷冻十二个小时，并于4℃下贮藏至完全融化之后分别均取等量适量样品，采用稀释涂布平板法测定其活菌数。
分析结果如图9所示，从图中可以看出，植物乳杆菌在冻融后活菌数降低，不同样品中的活菌数降低程度不同，原始乳液在冻融前后的活菌数分别为4.30×1012cfu/mL和4.26×109cfu/mL，存活率为0.10％；无保护剂的产品在冻融前后的活菌数分别为3.65×1011cfu/mL和7.99×109cfu/mL，存活率为2.19％；本实施例中制备的产品在冻融前后的活菌数分别3.84×1011cfu/mL和3.07×1010cfu/mL，存活率为8.00％。这证明W1/O/W2双重乳液结构和保护剂的添加对植物乳杆菌有保护作用，也说明本发明的益生菌制剂能够一定程度上减少益生菌的失活，使其在后续应用中更好地发挥其生理活性作用。
实施例8双重乳液益生菌制剂制备
1、制备方法主要包括以下步骤：
(1)菌悬液的制备：将益生菌植物乳杆菌用MRS肉汤培养基进行活化，在30℃恒温培养箱培养14h后，将菌液离心分离，得到菌体。
(2)内水相W1的制备：配制10wt％保护剂(本实施例中为海藻糖)溶液作为益生菌保护剂，在121℃下灭菌15min，冷却至室温后，将菌体与保护剂混合后，涡旋使其均匀分散形成内水相W1。
(3)脂质相O的制备：向99.9g油(本实施例中为大豆油)中加入0.1g乳化剂(本实施例中为聚甘油蓖麻醇酸酯(PGPR))，以500rpm磁力搅拌5～45min，得到0.1wt％聚甘油蓖麻醇酸酯，即为脂质相O。
(4)初乳W1/O的制备：将内水相W1边搅拌边滴入脂质相O中，内水相W1与脂质相O的质量比为1:3，搅拌速度1000rpm；滴加速度为10～100mL/min，后继续搅拌2～5min，利用高能乳化法(本实施例中为10000～18000rpm的转速剪切8～15min)进行乳化，得到初乳W1/O。
(5)外水相W2的制备：将3g的亲水性乳化剂(本实施例中为乳清分离蛋白)加入到97g的去离子水中，搅拌2h使其充分溶解，后放入4℃冰箱过夜以充分水合，得到3wt％乳清分离蛋白溶液，即为外水相W2。
(6)W1/O/W2型双重乳液制剂的制备：将初乳W1/O与外水相W2按质量比为1:2的比例混合，利用高能乳化法(本实施例中为10000～18000rpm的转速剪切2～5min)进行乳化，得到双重乳液W1/O/W2，-20～4℃低温保存，即可得到益生菌制剂。
2、性能检测：
以原始菌液、未添加保护剂制备的W1/O/W2双重乳液为对照组，包埋在实施例8双重乳液W1/O/W2中的植物乳杆菌为实验组，考察保护剂的添加对W1/O/W2双重乳液中植物乳杆菌活菌数的影响。对照组和实验组分别在在-18℃冷冻之前和-18℃冷冻十二个小时，并于4℃下贮藏至完全融化之后分别均取等量适量样品，采用稀释涂布平板法测定其活菌数。
分析结果如图10所示，从图中可以看出，植物乳杆菌在冻融后活菌数降低，不同样品中的活菌数降低程度不同，原始乳液在冻融前后的活菌数分别为4.30×1012cfu/mL和4.26×109cfu/mL，存活率为0.10％；无保护剂的产品在冻融前后的活菌数分别为2.49×1010cfu/mL和3.83×108cfu/mL，存活率为1.54％；本实施例中制备的产品在冻融前后的活菌数分别为7.87×1010cfu/mL和4.41×109cfu/mL，存活率为5.56％。这证明了W1/O/W2双重乳液结构和保护剂的添加对植物乳杆菌的保护作用，也说明本发明的益生菌制剂能够在一定程度上减少益生菌的失活，使其在后续应用中更好地发挥其生理活性作用。
实施例9双重乳液益生菌制剂制备
1、制备方法主要包括以下步骤：
(1)菌悬液的制备：将益生菌植物乳杆菌用MRS肉汤培养基进行活化，在30℃恒温培养箱培养14h后，将菌液离心分离，得到菌体。
(2)内水相W1的制备：配制10wt％保护剂(本实施例中为海藻糖)溶液作为益生菌保护剂，在121℃下灭菌15min，冷却至室温后，将菌体与保护剂混合后，涡旋使其均匀分散形成内水相W1。
(3)脂质相O的制备：向94g油(本实施例中为大豆油)中加入6g乳化剂(本实施例中为聚甘油蓖麻醇酸酯(PGPR))，以500rpm磁力搅拌5～45min，得到6wt％聚甘油蓖麻醇酸酯，即为脂质相O。
(4)初乳W1/O的制备：将内水相W1边搅拌边滴入脂质相O中，内水相W1与脂质相O的质量比为1:3，搅拌速度1000rpm；滴加速度为10～100mL/min，后继续搅拌2～5min，利用高能乳化法(本实施例中为10000～18000rpm的转速剪切8～15min)进行乳化，得到初乳W1/O。
(5)外水相W2的制备：将3g的亲水性乳化剂(本实施例中为β乳球蛋白纤维)加入到97g的去离子水中，搅拌2h使其充分溶解，后放入4℃冰箱过夜以充分水合，得到3wt％β乳球蛋白纤维溶液，即为外水相W2。
(6)W1/O/W2型双重乳液制剂的制备：将初乳W1/O与外水相W2按质量比为1:2的比例混合，利用高能乳化法(本实施例中为10000～18000rpm的转速剪切2～5min)进行乳化，得到双重乳液W1/O/W2，-20～4℃低温保存，即可得到益生菌制剂。
2、性能检测：
以原始菌液、未添加保护剂制备的W1/O/W2双重乳液为对照组，包埋在实施例9双重乳液W1/O/W2中的植物乳杆菌为实验组，考察保护剂的添加对W1/O/W2双重乳液中植物乳杆菌活菌数的影响。对照组和实验组分别在在-18℃冷冻之前和-18℃冷冻十二个小时，并于4℃下贮藏至完全融化之后分别均取等量适量样品，采用稀释涂布平板法测定其活菌数。
分析结果如图11所示，从图中可以看出，植物乳杆菌在冻融后活菌数降低，不同样品中的活菌数降低程度不同，原始乳液在冻融前后的活菌数分别为4.30×1012cfu/mL和4.26×109cfu/mL，存活率为0.10％；无保护剂的产品在冻融前后的活菌数分别为3.11×1011cfu/mL和4.85×1010cfu/mL，存活率为15.61％；本实施例中制备的产品在冻融前后的活菌数分别3.28×1011cfu/mL和5.02×1010cfu/mL，存活率为57.60％。这证明了W1/O/W2双重乳液结构和保护剂的添加对植物乳杆菌的保护作用，也说明本发明的益生菌制剂能够减少益生菌的失活，使其在后续应用中更好地发挥其生理活性作用。
实施例10双重乳液益生菌制剂制备
1、制备方法主要包括以下步骤：
(1)菌悬液的制备：将益生菌植物乳杆菌用MRS肉汤培养基进行活化，在30℃恒温培养箱培养14h后，将菌液离心分离，得到菌体。
(2)内水相W1的制备：配制10wt％保护剂(本实施例中为海藻糖)溶液作为益生菌保护剂，在121℃下灭菌15min，冷却至室温后，将菌体与保护剂混合后，涡旋使其均匀分散形成内水相W1。
(3)脂质相O的制备：向94g油(本实施例中为大豆油)中加入6g乳化剂(本实施例中为聚甘油蓖麻醇酸酯(PGPR))，以500rpm磁力搅拌5～45min，得到6wt％聚甘油蓖麻醇酸酯，即为脂质相O。
(4)初乳W1/O的制备：将5g内水相W1边搅拌边滴入100g脂质相O中，搅拌速度1000rpm；滴加速度为10～100mL/min，后继续搅拌2～5min，利用高能乳化法(本实施例中为10000～18000rpm的转速剪切8～15min)进行乳化，得到初乳W1/O。
(5)外水相W2的制备：将3g的亲水性乳化剂(本实施例中为乳清分离蛋白)加入到97g的去离子水中，搅拌2h使其充分溶解，后放入4℃冰箱过夜以充分水合，得到3wt％乳清分离蛋白溶液，即为外水相W2。
(6)W1/O/W2型双重乳液制剂的制备：将初乳W1/O与外水相W2按质量比为1:2的比例混合，利用高能乳化法(本实施例中为10000～18000rpm的转速剪切2～5min)进行乳化，得到双重乳液W1/O/W2，-20～4℃低温保存，即可得到益生菌制剂。
2、性能检测：
以原始菌液、未添加保护剂制备的W1/O/W2双重乳液为对照组，包埋在实施例9双重乳液W1/O/W2中的植物乳杆菌为实验组，考察保护剂的添加对W1/O/W2双重乳液中植物乳杆菌活菌数的影响。对照组和实验组分别在在-18℃冷冻之前和-18℃冷冻十二个小时，并于4℃下贮藏至完全融化之后分别均取等量适量样品，采用稀释涂布平板法测定其活菌数。
分析结果如图12所示，从图中可以看出，植物乳杆菌在冻融后活菌数降低，不同样品中的活菌数降低程度不同，原始乳液在冻融前后的活菌数分别为4.30×1012cfu/mL和4.26×109cfu/mL，存活率为0.10％；无保护剂的产品在冻融前后的活菌数分别为4.72×1010cfu/mL和7.23×109cfu/mL，存活率为15.32％；本实施例中制备的产品在冻融前后的活菌数分别9.1×1010cfu/mL和5.18×1010cfu/mL，存活率为56.94％。这证明了W1/O/W2双重乳液结构和保护剂的添加对植物乳杆菌的保护作用，也说明本发明的益生菌制剂能够减少益生菌的失活，使其在后续应用中更好地发挥其生理活性作用。
实施例11双重乳液益生菌制剂制备
1、制备方法主要包括以下步骤：
(1)菌悬液的制备：将益生菌植物乳杆菌用MRS肉汤培养基进行活化，在30℃恒温培养箱培养14h后，将菌液离心分离，得到菌体。
(2)内水相W1的制备：配制10wt％保护剂(本实施例中为海藻糖)溶液作为益生菌保护剂，在121℃下灭菌15min，冷却至室温后，将菌体与保护剂混合后，涡旋使其均匀分散形成内水相W1。
(3)脂质相O的制备：向94g油(本实施例中为大豆油)中加入6g乳化剂(本实施例中为聚甘油蓖麻醇酸酯(PGPR))，以500rpm磁力搅拌5～45min，得到6wt％聚甘油蓖麻醇酸酯，即为脂质相O。
(4)初乳W1/O的制备：将内水相W1边搅拌边滴入脂质相O中，内水相W1与脂质相O的质量比为1:3，内水相W1与脂质相O的体积比为1:3，搅拌速度1000rpm；滴加速度为10～100mL/min，后继续搅拌2～5min，利用高能乳化法(本实施例中为10000～18000rpm的转速剪切8～15min)进行乳化，得到初乳W1/O。
(5)外水相W2的制备：将0.1g的亲水性乳化剂(本实施例中为乳清分离蛋白)加入到99.9g的去离子水中，搅拌2h使其充分溶解，后放入4℃冰箱过夜以充分水合，得到0.1wt％乳清分离蛋白溶液，即为外水相W2。
(6)W1/O/W2型双重乳液制剂的制备：将初乳W1/O与外水相W2按质量比为1:2的比例混合，利用高能乳化法(本实施例中为10000～18000rpm的转速剪切2～5min)进行乳化，得到双重乳液W1/O/W2，-20～4℃低温保存，即可得到益生菌制剂。
2、性能检测：
以原始菌液、未添加保护剂制备的W1/O/W2双重乳液为对照组，包埋在实施例10双重乳液W1/O/W2中的植物乳杆菌为实验组，考察保护剂的添加对W1/O/W2双重乳液中植物乳杆菌活菌数的影响。对照组和实验组分别在在-18℃冷冻之前和-18℃冷冻十二个小时，并于4℃下贮藏至完全融化之后分别均取等量适量样品，采用稀释涂布平板法测定其活菌数。
分析结果如图13所示，从图中可以看出，植物乳杆菌在冻融后活菌数降低，不同样品中的活菌数降低程度不同，原始乳液在冻融前后的活菌数分别为4.30×1012cfu/mL和4.26×109cfu/mL，存活率为0.10％；无保护剂的产品在冻融前后的活菌数分别为1.76×1010cfu/mL和4.31×108cfu/mL，存活率为2.45％；本实施例中制备的产品在冻融前后的活菌数分别3.11×1010cfu/mL和2.76×109cfu/mL，存活率为8.89％。这证明了W1/O/W2双重乳液结构和保护剂的添加对植物乳杆菌的保护作用，也说明本发明的益生菌制剂能够减少益生菌的失活，使其在后续应用中更好地发挥其生理活性作用。
实施例12双重乳液益生菌制剂制备
1、制备方法主要包括以下步骤：
(1)菌悬液的制备：将益生菌植物乳杆菌用MRS肉汤培养基进行活化，在30℃恒温培养箱培养14h后，将菌液离心分离，得到菌体。
(2)内水相W1的制备：配制10wt％保护剂(本实施例中为海藻糖)溶液作为益生菌保护剂，在121℃下灭菌15min，冷却至室温后，将菌体与保护剂混合后，涡旋使其均匀分散形成内水相W1。
(3)脂质相O的制备：向94g油(本实施例中为大豆油)中加入6g乳化剂(本实施例中为聚甘油蓖麻醇酸酯(PGPR))，以500rpm磁力搅拌5～45min，得到6wt％聚甘油蓖麻醇酸酯，即为脂质相O。
(4)初乳W1/O的制备：将内水相W1边搅拌边滴入脂质相O中，内水相W1与脂质相O的质量比为1:3，搅拌速度1000rpm；滴加速度为10～100mL/min，后继续搅拌2～5min，利用高能乳化法(本实施例中为10000～18000rpm的转速剪切8～15min)进行乳化，得到初乳W1/O。
(5)外水相W2的制备：将3g的亲水性乳化剂(本实施例中为乳清分离蛋白)加入到97g的去离子水中，搅拌2h使其充分溶解，后放入4℃冰箱过夜以充分水合，得到3wt％乳清分离蛋白溶液，即为外水相W2。
(6)W1/O/W2型双重乳液制剂的制备：将初乳W1/O与外水相W2按质量比为1:99的比例混合，利用高能乳化法(本实施例中为10000～18000rpm的转速剪切2～5min)进行乳化，得到双重乳液W1/O/W2，-20～4℃低温保存，即可得到益生菌制剂。
2、性能检测：
以原始菌液、未添加保护剂制备的W1/O/W2双重乳液为对照组，包埋在实施例11双重乳液W1/O/W2中的植物乳杆菌为实验组，考察保护剂的添加对W1/O/W2双重乳液中植物乳杆菌活菌数的影响。对照组和实验组分别在在-18℃冷冻之前和-18℃冷冻十二个小时，并于4℃下贮藏至完全融化之后分别均取等量适量样品，采用稀释涂布平板法测定其活菌数。
分析结果如图14所示，从图中可以看出，植物乳杆菌在冻融后活菌数降低，不同样品中的活菌数降低程度不同。原始乳液在冻融前后的活菌数分别为4.30×1012cfu/mL和4.26×109cfu/mL，存活率为0.10％；无保护剂的产品在冻融前后的活菌数分别为6.78×109cfu/mL和9.58×108cfu/mL，存活率为14.13％；本实施例中制备的产品在冻融前后的活菌数分别8.95×109cfu/mL和4.78×109cfu/mL，存活率为53.41％。这证明了W1/O/W2双重乳液结构和保护剂的添加对植物乳杆菌的保护作用，也说明本发明的益生菌制剂能够减少益生菌的失活，使其在后续应用中更好地发挥其生理活性作用。
实施例13双重乳液益生菌制剂制备
1、制备方法主要包括以下步骤：
(1)菌悬液的制备：将益生菌植物乳杆菌用MRS肉汤培养基进行活化，在30℃恒温培养箱培养14h后，将菌液离心分离，得到菌体。
(2)内水相W1的制备：配制10wt％保护剂(本实施例中为海藻糖)溶液作为益生菌保护剂，在121℃下灭菌15min，冷却至室温后，将菌体与保护剂混合后，涡旋使其均匀分散形成内水相W1。
(3)乳化剂的制备：取3g聚甘油蓖麻醇酸酯(PGPR)和3g卵磷脂混合，于50℃下，以500rpm磁力搅拌15～30min，得到油溶性乳化剂和两亲性乳化剂的复合物。
(4)脂质相O的制备：向94g油(本实施例中为椰子油)中加入6g乳化剂复合物(本实施例中为油溶性乳化剂聚甘油蓖麻醇酸酯(PGPR)和两亲性乳化剂卵磷脂的复合物)，以500rpm磁力搅拌5～45min，得到6wt％乳化剂复合物，即为脂质相O。
(5)初乳W1/O的制备：将内水相W1边搅拌边滴入脂质相O中，内水相W1与脂质相O的质量比为1:3，搅拌速度1000rpm；滴加速度为10～100mL/min，后继续搅拌2～5min，利用高能乳化法(本实施例中为10000～18000rpm的转速剪切8～15min)进行乳化，得到初乳W1/O。
(6)外水相W2的制备：将3g的亲水性乳化剂(本实施例中为乳清分离蛋白)加入到97g的去离子水中，搅拌2h使其充分溶解，后放入4℃冰箱过夜以充分水合，得到3wt％乳清分离蛋白溶液，即为外水相W2。
(7)W1/O/W2型双重乳液制剂的制备：将初乳W1/O与外水相W2按质量比为1:2的比例混合，利用高能乳化法(本实施例中为10000～18000rpm的转速剪切2～5min)进行乳化，得到双重乳液W1/O/W2，-20～4℃低温保存，即可得到益生菌制剂。
2、性能检测：
以原始菌液、未添加保护剂制备的W1/O/W2双重乳液为对照组，包埋在实施例12双重乳液W1/O/W2中的植物乳杆菌为实验组，考察保护剂的添加对W1/O/W2双重乳液中植物乳杆菌活菌数的影响。对照组和实验组分别在在-18℃冷冻之前和-18℃冷冻十二个小时，并于4℃下贮藏至完全融化之后分别均取等量适量样品，采用稀释涂布平板法测定其活菌数。
分析结果如图15所示，从图中可以看出，植物乳杆菌在冻融后活菌数降低，不同样品中的活菌数降低程度不同，原始乳液在冻融前后的活菌数分别为4.30×1012cfu/mL和4.26×109cfu/mL，存活率为0.10％；无保护剂的产品在冻融前后的活菌数分别为4.85×1011cfu/mL和8.41×1010cfu/mL，存活率为17.33％；本实施例中制备的产品在冻融前后的活菌数分别5.26×1011cfu/mL和3.18×1011cfu/mL，存活率为60.46％。这证明了W1/O/W2双重乳液结构和保护剂的添加对植物乳杆菌的保护作用，也说明本发明的益生菌制剂能够减少益生菌的失活，使其在后续应用中更好地发挥其生理活性作用。
实施例14双重乳液益生菌制剂制备
1、制备方法主要包括以下步骤：
(1)菌悬液的制备：将益生菌植物乳杆菌用MRS肉汤培养基进行活化，在30℃恒温培养箱培养14h后，将菌液离心分离，得到菌体。
(2)内水相W1的制备：配制10wt％保护剂(本实施例中为海藻糖)溶液作为益生菌保护剂，在121℃下灭菌15min，冷却至室温后，将菌体与保护剂混合后，涡旋使其均匀分散形成内水相W1。
(3)脂质相O的制备：向94g油(本实施例中为大豆油)中加入6g乳化剂(本实施例中为聚甘油蓖麻醇酸酯(PGPR))，以500rpm磁力搅拌5～45min，得到6wt％聚甘油蓖麻醇酸酯，即为脂质相O。
(4)初乳W1/O的制备：将内水相W1边搅拌边滴入脂质相O中，内水相W1与脂质相O的质量比为1:3，搅拌速度1000rpm；滴加速度为10～100mL/min，后继续搅拌2～5min，利用膜乳化法进行乳化，得到初乳W1/O。
(5)外水相W2的制备：将3g的亲水性乳化剂(本实施例中为乳清分离蛋白)加入到97g的去离子水中，搅拌2h使其充分溶解，后放入4℃冰箱过夜以充分水合，得到3wt％乳清分离蛋白溶液，即为外水相W2。
(6)W1/O/W2型双重乳液制剂的制备：将初乳W1/O与外水相W2按质量比为1:2的比例混合，利用膜乳化法进行乳化，得到双重乳液W1/O/W2，-20～4℃低温保存，即可得到益生菌制剂。
2、性能检测：
以原始菌液、未添加保护剂制备的W1/O/W2双重乳液为对照组，包埋在实施例13双重乳液W1/O/W2中的植物乳杆菌为实验组，考察保护剂的添加对W1/O/W2双重乳液中植物乳杆菌活菌数的影响。对照组和实验组分别在在-18℃冷冻之前和-18℃冷冻十二个小时，并于4℃下贮藏至完全融化之后分别均取等量适量样品，采用稀释涂布平板法测定其活菌数。
分析结果如图16所示，从图中可以看出植物乳杆菌在冻融后活菌数降低，不同样品中的活菌数降低程度不同，原始乳液在冻融前后的活菌数分别为4.30×1012cfu/mL和4.26×109cfu/mL，存活率为0.10％；无保护剂的产品在冻融前后的活菌数分别为7.44×1010cfu/mL和1.61×1010cfu/mL，存活率为21.69％；本实施例中制备的产品的活菌数在冻融前后的活菌数分别为8.24×1010cfu/mL和6.52×1010cfu/ML，存活率为79.15％。这证明了W1/O/W2双重乳液结构和保护剂对植物乳杆菌的保护作用，也说明本发明的益生菌制剂能够减少益生菌的失活，使其在后续应用中更好地发挥其生理活性作用。
实施例15双重乳液益生菌制剂制备
(1)菌悬液的制备：将益生菌嗜热乳杆菌用MRS肉汤培养基进行活化，在37℃恒温培养箱培养12～18h后，将菌液离心分离，得到菌体。
(2)内水相W1的制备：配制5wt％蔗糖、0.5％NaCl、0.01wt％谷氨酸钠、5wt％甘油、0.2wt％聚乙二醇1000、0.01wt％生物碱、和20wt％脱脂乳粉混合溶液，在121℃下灭菌15min，冷却至室温后，将菌体悬浮于该混合溶液中，得到内水相W1。
(3)脂质相O的制备：向大豆油中加入聚甘油蓖麻醇酸酯，以500rpm磁力搅拌10～20min，得到6wt％聚甘油蓖麻醇酸酯，即为脂质相O。
(4)初乳W1/O的制备：将内水相W1边搅拌边滴入脂质相O中，内水相W1与脂质相O的质量比为1:3，搅拌速度为1000rpm，滴加速度为10～50mL/min，以高压均质法制备初乳W1/O。
(5)外水相W2的制备：将3g乳清分离蛋白和0.17g果胶加入到96.83g去离子水中，搅拌2～3h使其充分溶解，后放入4℃冰箱过夜以充分水合，得到外水相W2。
(6)W1/O/W2型双重乳液制剂的制备：将初乳W1/O与外水相W2按质量比为1:2的比例混合，以高压均质法制备双重乳液W1/O/W2，-20～4℃低温保存，即可得到益生菌制剂。
2、性能检测：
以原始菌液、未添加保护剂制备的W1/O/W2双重乳液为对照组，包埋在实施例14双重乳液W1/O/W2中的嗜热乳杆菌为实验组，考察保护剂的添加对W1/O/W2双重乳液中嗜热乳杆菌活菌数的影响。对照组和实验组分别在在-18℃冷冻之前和-18℃冷冻十二个小时，并于4℃下贮藏至完全融化之后分别均取等量适量样品，采用稀释涂布平板法测定其活菌数。
分析结果如图17所示，从图中可以看出，嗜热乳杆菌在冻融后活菌数均出现一定的降低，原始菌液中的活菌数由6.36×1012cfu/mL降至8.43×108cfu/mL，存活率为0.01％；未添加保护剂的样品冻融前后的活菌数分别为4.79×1011cfu/mL和1.11×1011cfu/mL，存活率为23.10％；本实施例中制备的产品的活菌数在冻融前后的活菌数为8.52×1011cfu/mL和6.87×1011cfu/mL，存活率为80.59％。这说明W1/O/W2双重乳液结构和复合保护剂(蔗糖、甘油和脱脂乳粉)对嗜热乳杆菌的保护效果较好，也说明本发明的益生菌制剂能够减少益生菌的失活，使其在后续应用中更好地发挥其生理活性作用。
实施例16双重乳液益生菌制剂在冰淇淋中的应用
1、益生菌冰淇淋的制备方法，包括以下步骤：
(1)原料混合：称取10～15wt％的全脂奶粉、8～12wt％的白砂糖、8～15wt％的奶油、0.3～0.6wt％的复合稳定剂和水混合均匀。
(2)杀菌、均质：90℃巴氏杀菌20min，然后降温至60℃左右进行均质，均质压力为20.0MPa。
(3)冷却与老化：均质后迅速将物料冷却至2～4℃，加入1～15wt％实施例2中制备好的双重乳液包埋的益生菌制剂，并不断搅拌，使脂肪、蛋白质和稳定剂充分膨胀和结合，老化时间为4～8h。
(4)凝冻：将老化成熟后的冰淇淋浆料加入凝冻机中膨化，通过凝冻搅打过程，将空气混入到冰淇淋浆料中，制成体积膨胀的软冰淇淋。
(5)硬化：将软冰淇淋装入模具中，放入-20～-25℃的冰箱中速冻，硬化12h，即可得到硬冰淇淋。
(6)贮藏：将硬化后得到的冰淇淋放置于冷库中进行保存。
2、质量检测
以未添加保护剂的W1/O/W2双重乳液制备的冰淇淋为对照组，添加了保护剂的W1/O/W2双重乳液制备的冰淇淋为实验组。隔一段时间从冷库中取出适量对照组和实验组样品，室温融化后利用稀释涂布平板法进行分离计数，计算其活菌数，考察保护剂的添加以及贮藏时间对冰淇淋中植物乳杆菌活菌数的影响。
结果如图18示，由图可见，未加入保护剂的冰淇淋中，植物乳杆菌的活性随着时间的推移明显损失，且活性损失速度呈现先快后慢的规律；而加入了保护剂的冰淇淋在刚制备完成时能释放出的活菌数为2.21×108cfu/mL，在14天前出现轻微的活性损失，此后活性损失速度明显降低，在60天时仍能释放出9.73×106cfu/mL的活植物乳杆菌，存活率还高达4.40％；而未加入保护剂的冰淇淋在刚制备完成时能释放出的活菌数为3.40×108cfu/mL，60天后能释放出的活菌数仅有136.3cfu/mL。这说明保护剂的加入能够对植物乳杆菌长期贮藏时的活性产生明显的保护作用，使其在冰淇淋中存活更久，大大延长其在货架期内的存活率。
实施例17双重乳液益生菌制剂在饮料中的应用
1、益生菌饮料的制备方法，包括以下步骤：
(1)原料选择与处理：选用健康、新鲜的糖料蔗蔗茎，将甘蔗洗净后削皮、榨汁经无菌纱布过滤后装罐。
(2)稳定剂的配制：称取10～15wt％的全脂奶粉、8～12wt％的白砂糖、8～15wt％的奶油、0.3～0.6wt％的复合稳定剂和水混合均匀。
(3)原料混合：将稳定剂加入到甘蔗汁中，充分混匀。
(4)杀菌、均质：90℃巴氏杀菌20min，然后降温至60℃左右进行均质，均质压力为20.0MPa。
(5)冷却与老化：均质后迅速将物料冷却至2～4℃，加入1～15wt％实施例2中制备好的双重乳液包埋的益生菌制剂，并不断搅拌，使之与甘蔗汁、稳定剂充分膨胀和结合。所有操作均在无菌条件下进行。
(6)贮藏：料液进行无菌罐装，放置于4℃冷库中进行保存。
2、质量检测
以未添加保护剂的W1/O/W2双重乳液制备的饮料为对照组，添加了保护剂的W1/O/W2双重乳液制备的饮料为实验组。隔一段时间从冷库中取出适量对照组和实验组样品，利用稀释涂布平板法进行分离计数，计算其活菌数，考察保护剂的添加以及贮藏时间对饮料中植物乳杆菌活菌数的影响。
结果如图19所示，由图可见，未加入保护剂的饮料中，植物乳杆菌的活性随着时间的推移明显损失，加入了保护剂的饮料在刚制备完成时能释放出的活菌数为5.38×108cfu/mL，在60天时仍能释放出1.99×106cfu/mL的活植物乳杆菌，存活率较高，达到0.37％；而未加入保护剂的饮料在刚制备完成时能释放出的活菌数为5.44×108cfu/mL，60天后能释放出的活菌数仅有401cfu/mL。这说明保护剂的加入能够对植物乳杆菌长期贮藏时的活性产生明显的保护作用，使其在饮料中存活更久，大大延长其在货架期内的存活率。
实施例18双重乳液益生菌制剂在动物保健产品中的应用
(1)葡萄糖溶液制备：将葡萄糖溶解在0.6wt％的生理盐水中，配制成为15wt％的葡萄糖溶液，并将其分为1:3的两份。
(2)维生素水乳溶液的制备：将5×106IU维生素A、1.5×106IU维生素D3和0.5×104IU维生素E混合均匀，将0.6×103mg酪氨酸加入其中，混合均匀后向其中加入8wt％卵磷脂和10wt％山梨醇，在55℃下剪切分散25min，转速为10000rpm，冷却后将该乳化液加入至较少的一份葡萄糖溶液中，搅拌均匀，得到维生素水乳溶液。
(3)维生素/氨基酸混合溶液：将2.4×103IU维生素B1、1.8×103IU维生素B6、5×103IU维生素B12、0.6×104mg烟酰胺和9mg生物素加入另一份葡萄糖溶液中，50℃搅拌使其完全溶解，冷却后向其中加入1.4×103mg赖氨酸、0.6×103mg蛋氨酸、1.2×103mg天冬氨酸、0.6×103mg组氨酸、2.3×103mg甘氨酸、0.8×103mg亮氨酸和0.7×103mg异亮氨酸，搅拌至完全溶解，得到维生素/氨基酸混合溶液。
(4)动物保健产品的制备：将维生素水乳溶液边搅拌边加入至维生素/氨基酸混合溶液中，同时保持其温度为20℃，后向其中加入3.8wt％实施例2制备的益生菌制剂，混合均匀，放入4℃冰箱保存，即可得到动物保健产品。
2、质量检测
以未添加保护剂的W1/O/W2双重乳液制备的动物保健产品为对照组，添加了保护剂的W1/O/W2双重乳液制备的动物保健产品为实验组。隔一段时间从冷库中取出适量对照组和实验组样品，利用稀释涂布平板法进行分离计数，计算其活菌数，考察保护剂的添加以及贮藏时间对动物保健产品中植物乳杆菌活菌数的影响。
结果如20所示，由图可见，未加入保护剂的饮料中，植物乳杆菌的活性随着时间的推移明显损失，加入了保护剂的动物保健产品在刚制备完成时能释放出的活菌数为7.11×108cfu/mL，在60天时仍能释放出8.79×105cfu/mL的活植物乳杆菌，存活率还较高，达到0.12％；而未加入保护剂的动物保健产品在刚制备完成时能释放出的活菌数为7.43×108cfu/mL，60天后能释放出的活菌数仅有92cfu/mL。这说明保护剂的加入能够对植物乳杆菌长期贮藏时的活性产生明显的保护作用，使其在饮料中存活更久，大大延长其在货架期内的存活率。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种基于W1/O/W2型双重乳液结构的益生菌制剂，所述双重乳液包含脂质相O和水相W2，所述脂质相O分布在所述水相W2内部，其中所述脂质相O含有多个水滴W1，W1为包含益生菌菌体的溶液或益生菌菌体与益生菌保护剂的混合溶液，其中所述水滴通过乳化剂在所述脂质相O内部稳定化。
2.一种基于W1/O/W2型双重乳液结构的益生菌制剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1：将含有益生菌菌体或益生菌菌体与益生菌保护剂的混合物溶液涡旋处理，使其均匀分散形成内水相W1；
S2：将脂质相O与内水相W1初步混合，利用乳化剂稳定，经搅拌，低能乳化法或高能乳化法乳化，得到油包水型初乳W1/O，W1在所述脂质相O内部稳定化；
S3：以含有乳化剂的溶液为外水相W2，向所述初乳W1/O中加入外水相W2，经搅拌、低能乳化法或高能乳化法乳化，得到W1/O/W2型双重乳液，即可得到益生菌制剂。
3.根据权利要求2所述的一种基于W1/O/W2型双重乳液结构的益生菌制剂的制备方法，其特征在于：
步骤S1中内水相W1中含有益生菌菌体或益生菌菌体与益生菌保护剂混合物；
所述益生菌保护剂包括糖类、蛋白质、氨基酸盐、醇、无机盐、抗氧化剂、生物碱、聚合物和复合物中的至少一种；内水相中保护剂的浓度为0.01wt％以上；
所述益生菌保护剂包括甘油、脱脂乳粉、抗坏血酸、乳清分离蛋白、海藻糖、蔗糖、果糖、麦芽糖、乳糖、葡聚糖、明胶、蛋白胨、甲基纤维素、甜菜碱、谷氨酸钠、木糖醇、聚乙二醇1000、十二烷基磺酸钠中的至少一种。
4.根据权利要求2所述的一种基于W1/O/W2型双重乳液结构的益生菌制剂的制备方法，其特征在于：
步骤S2中所述低能乳化法为相转变法、自发乳化法、膜乳化法中的任一种；所述高能乳化法为高速剪切、高压均质乳化、微射流乳化中的任一种。
5.根据权利要求3所述的一种基于W1/O/W2型双重乳液结构的益生菌制剂的制备方法，其特征在于：
所述乳化剂的添加量至少为脂质相O质量的0.1％；相对于所述乳液的总重量，所述脂质相的量至多是90wt％；
所述乳化剂包括油溶性乳化剂、亲水性乳化剂和两亲性乳化剂中的至少一种；
所述油溶性乳化剂包括聚甘油蓖麻醇酸酯、司班20、司班60、司班65、司班80、司班85、乙二醇脂肪酸酯、丙二醇单硬脂酸酯、单硬脂酸甘油酯、玉米醇溶蛋白中的至少一种；所述亲水性乳化剂包括吐温80、果胶、羟丙基甲基纤维素、乳清分离蛋白、乳清浓缩蛋白、酪蛋白、β乳球蛋白纤维中的至少一种；所述两亲性乳化剂包括卵磷脂、蔗糖酯中的至少一种；
所述脂质相包括在环境温度下为液体的脂肪、固醇、类脂中的至少一种和为固体的脂肪、固醇、类脂中的至少一种；
所述液体脂肪包括改性的或未改性的植物油和动物油，包括棕榈油、鳄梨油、芥子油、亚麻籽油、葡萄油、花生油、椰子油、橄榄油、蓟油、葡萄籽油、芝麻油、大豆油、向日葵油、亚麻仁油、棉油、菜籽油、低芥酸菜籽油、玉米油、稻米油、红花油、木棉油、芝麻油、月见草油、鱼油和海产动物油中的至少一种；所述固体脂肪包括改性的或未改性的植物油和动物油，包括可可脂、牛油树脂、婆罗双树脂、鸡脂、牛脂、乳脂、猪油中的至少一种；所述固醇、类脂，包括改性的或未改性的蜂蜡、石蜡、葵花籽蜡、稻米蜡、小烛树蜡、棕榈蜡、谷甾醇中的至少一种。所述改性包括氢化、分馏和/或酯交换反应。
6.根据权利要求2所述的一种基于W1/O/W2型双重乳液结构的益生菌制剂的制备方法，其特征在于：所述低能乳化法包括相转变法、自发乳化法、膜乳化法；所述高能乳化法包括高速剪切、高压均质乳化、微射流乳化。
7.根据权利要求2所述的一种基于W1/O/W2型双重乳液结构的益生菌制剂的制备方法，其特征在于：外水相W2中，乳化剂的质量百分比至少为0.1wt％；外水相W2与初乳W1/O的体积比至多是99％；
所述乳化剂包括小分子乳化剂、多糖乳化剂、多肽乳化剂、蛋白质乳化剂、聚合物和复合物中的至少一种；
所述乳化剂包括吐温80、果胶、羟丙基甲基纤维素、乳清分离蛋白、乳清浓缩蛋白、酪蛋白、β乳球蛋白纤维中的至少一种；
8.一种基于W1/O/W2型双重乳液结构的益生菌制剂，其特征在于：利用权利要求1-7任一所述的制备方法制得。
9.如权利要求8所述的基于W1/O/W2型双重乳液结构的益生菌制剂在益生菌产品中的应用。
10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于：所述益生菌产品包括食品、饲料、动物保健产品、个人护理或药物产品。
CN202110490478.7A 2020-05-26 2021-05-06 一种基于w1/o/w2型双重乳液结构的益生菌制剂、制备方法及应用 Pending CN112970929A (zh)

Priority Applications (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
PCT/CN2021/094769 WO2021238752A1 (zh) 2020-05-26 2021-05-20 一种基于w 1/o/w 2型双重乳液结构的益生菌制剂、制备方法及应用
US17/994,162 US20230181658A1 (en) 2020-05-26 2023-02-13 Probiotic preparation based on w1/o/w2 type dual emulsion structure, and preparation method therefor and use thereof

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN2020104563858 2020-05-26
CN202010456385.8A CN111567669A (zh) 2020-05-26 2020-05-26 一种基于w1/o/w2型双重乳液结构的益生菌制剂、制备方法及应用

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN112970929A true CN112970929A (zh) 2021-06-18

Family

ID=72116574

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202010456385.8A Pending CN111567669A (zh) 2020-05-26 2020-05-26 一种基于w1/o/w2型双重乳液结构的益生菌制剂、制备方法及应用
CN202110490478.7A Pending CN112970929A (zh) 2020-05-26 2021-05-06 一种基于w1/o/w2型双重乳液结构的益生菌制剂、制备方法及应用

Family Applications Before (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202010456385.8A Pending CN111567669A (zh) 2020-05-26 2020-05-26 一种基于w1/o/w2型双重乳液结构的益生菌制剂、制备方法及应用

Country Status (3)

Country Link
US (1) US20230181658A1 (zh)
CN (2) CN111567669A (zh)
WO (1) WO2021238752A1 (zh)

Cited By (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111374181A (zh) * 2018-12-27 2020-07-07 内蒙古蒙牛乳业（集团）股份有限公司 一种乳制品及其制备工艺
CN113528419A (zh) * 2021-07-13 2021-10-22 镇江市天益生物科技有限公司 一种提高乳杆菌菌株活性的添加剂及其制备方法
CN113995720A (zh) * 2021-11-15 2022-02-01 郑州大学 一种乳剂包被型益生菌制剂及其制备方法与应用
CN114732779A (zh) * 2022-03-18 2022-07-12 广东丸美生物技术股份有限公司 一种美白保湿抑菌的外用组合物及其制备方法和应用
CN115011517A (zh) * 2022-06-13 2022-09-06 华中农业大学 一种乳剂及其制备方法和在益生菌制剂中的应用
CN115769897A (zh) * 2022-12-16 2023-03-10 江中药业股份有限公司 一种益生菌乳剂及其制备方法
CN115844016A (zh) * 2022-12-29 2023-03-28 西北农林科技大学 一种共包埋鱼油和益生菌的双重乳液及其制备方法与应用
CN116076738A (zh) * 2022-11-30 2023-05-09 大连工业大学 一种包埋肽锌螯合物的水包油包水双层乳液及其制备方法

Families Citing this family (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111567669A (zh) * 2020-05-26 2020-08-25 华中农业大学 一种基于w1/o/w2型双重乳液结构的益生菌制剂、制备方法及应用
CN112314714B (zh) * 2020-10-29 2022-12-16 华南农业大学 界面由固体脂稳定的皮克林双乳液及其制备和应用
CN112354384B (zh) * 2020-11-24 2022-04-15 江南大学 一种水溶性和脂溶性功能因子共包埋的g/o/w乳状液及其制备方法
CN112715948A (zh) * 2020-12-17 2021-04-30 新希望乳业股份有限公司 一种高活性益生菌晶球及其制备方法和应用
CN113826878A (zh) * 2021-09-17 2021-12-24 大连工业大学 一种一步制备双重乳液的方法及其应用
CN114223795B (zh) * 2021-12-21 2023-05-23 西南科技大学 一种仔猪用益生菌饲料的制备方法
CN114847484A (zh) * 2022-05-24 2022-08-05 浙江大学 一种负载益生菌的海藻酸盐微胶囊及其制备方法与应用
CN114916675A (zh) * 2022-05-30 2022-08-19 天津科技大学 一种提高益生菌存活率的水包油包水型复乳凝胶珠、制备方法和应用
CN115387128A (zh) * 2022-07-08 2022-11-25 杭州英诺克新材料有限公司 一种基于双相微胶囊的护肤保湿整理剂
CN115251343A (zh) * 2022-07-13 2022-11-01 江中药业股份有限公司 一种食源性动物肽掩味乳剂的制备方法
CN115399375B (zh) * 2022-09-01 2023-09-19 华中农业大学 一种低脂冷冻人造奶油及其制备方法
CN115969039A (zh) * 2022-12-15 2023-04-18 天津科技大学 一种基于w/g/w结构的益生菌微胶囊、制备方法和应用

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20030070799A (ko) * 2002-02-26 2003-09-02 주식회사 국순당 지방질, 다당류 및 단백질에 의하여 2중으로 미세캡슐화된유산균 제품의 제조방법
CN108853021A (zh) * 2018-08-08 2018-11-23 华南农业大学 一种基于双乳液结构的益生菌液态制剂及其制备方法
CN108902983A (zh) * 2018-06-29 2018-11-30 深圳职业技术学院 双乳化法-喷雾干燥生产复合益生菌双层微胶囊的技术方法
WO2019103902A1 (en) * 2017-11-27 2019-05-31 Microsoft Technology Licensing, Llc Software packages policies management in a securela booted enclave
CN111567669A (zh) * 2020-05-26 2020-08-25 华中农业大学 一种基于w1/o/w2型双重乳液结构的益生菌制剂、制备方法及应用

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108578349A (zh) * 2018-04-16 2018-09-28 琦雅日化(上海)有限公司 一种含六种益生菌的多重结构乳状液及其制备方法

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20030070799A (ko) * 2002-02-26 2003-09-02 주식회사 국순당 지방질, 다당류 및 단백질에 의하여 2중으로 미세캡슐화된유산균 제품의 제조방법
WO2019103902A1 (en) * 2017-11-27 2019-05-31 Microsoft Technology Licensing, Llc Software packages policies management in a securela booted enclave
CN108902983A (zh) * 2018-06-29 2018-11-30 深圳职业技术学院 双乳化法-喷雾干燥生产复合益生菌双层微胶囊的技术方法
CN108853021A (zh) * 2018-08-08 2018-11-23 华南农业大学 一种基于双乳液结构的益生菌液态制剂及其制备方法
CN111567669A (zh) * 2020-05-26 2020-08-25 华中农业大学 一种基于w1/o/w2型双重乳液结构的益生菌制剂、制备方法及应用

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
HANI EL KADRI，等: "Utilisation of water-in-oil-water (W1/O/W2) double emulsion in a set-type yogurt model for the delivery of probiotic Lactobacillus paracasei", 《FOOD RESEARCH INTERNATIONAL》 *

Cited By (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111374181A (zh) * 2018-12-27 2020-07-07 内蒙古蒙牛乳业（集团）股份有限公司 一种乳制品及其制备工艺
CN111374181B (zh) * 2018-12-27 2023-04-14 内蒙古蒙牛乳业（集团）股份有限公司 一种乳制品及其制备工艺
CN113528419A (zh) * 2021-07-13 2021-10-22 镇江市天益生物科技有限公司 一种提高乳杆菌菌株活性的添加剂及其制备方法
CN113995720A (zh) * 2021-11-15 2022-02-01 郑州大学 一种乳剂包被型益生菌制剂及其制备方法与应用
CN114732779A (zh) * 2022-03-18 2022-07-12 广东丸美生物技术股份有限公司 一种美白保湿抑菌的外用组合物及其制备方法和应用
CN115011517A (zh) * 2022-06-13 2022-09-06 华中农业大学 一种乳剂及其制备方法和在益生菌制剂中的应用
CN115011517B (zh) * 2022-06-13 2024-02-06 华中农业大学 一种乳剂及其制备方法和在益生菌制剂中的应用
CN116076738A (zh) * 2022-11-30 2023-05-09 大连工业大学 一种包埋肽锌螯合物的水包油包水双层乳液及其制备方法
CN115769897A (zh) * 2022-12-16 2023-03-10 江中药业股份有限公司 一种益生菌乳剂及其制备方法
CN115769897B (zh) * 2022-12-16 2023-10-27 江中药业股份有限公司 一种益生菌乳剂及其制备方法
CN115844016A (zh) * 2022-12-29 2023-03-28 西北农林科技大学 一种共包埋鱼油和益生菌的双重乳液及其制备方法与应用
CN115844016B (zh) * 2022-12-29 2024-02-09 西北农林科技大学 一种共包埋鱼油和益生菌的双重乳液及其制备方法与应用

Also Published As

Publication number Publication date
CN111567669A (zh) 2020-08-25
WO2021238752A1 (zh) 2021-12-02
US20230181658A1 (en) 2023-06-15

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN112970929A (zh) 一种基于w1/o/w2型双重乳液结构的益生菌制剂、制备方法及应用
Picot et al. Encapsulation of bifidobacteria in whey protein-based microcapsules and survival in simulated gastrointestinal conditions and in yoghurt
US9296987B2 (en) Multi-coated lactic acid bacteria and preparing method thereof
CN103261399B (zh) 抑制炎症的组合物
US20170296600A1 (en) Probiotic Stabilization
Kumherová et al. Influence of co-encapsulation of Bifidobacterium animalis subsp. lactis Bb12 with inulin and ascorbic acid on its viability
RU2470518C1 (ru) Молочный йогурт с пробиотическими культурами
RU2720983C2 (ru) Способы приготовления ферментированных продуктов, включающих бифидобактерии
CN104771416A (zh) 用于控制体重的罗伊氏乳杆菌gmnl-263组合物及其用途
Dong et al. The viability of encapsulated Lactobacillus plantarum during cupcake baking process, storage, and simulated gastric digestion
CN115011517B (zh) 一种乳剂及其制备方法和在益生菌制剂中的应用
JP4751143B2 (ja) 生菌剤
JP2791375B2 (ja) 乳酸菌発酵液の製造方法
US20220313744A1 (en) Methods for producing probiotics fortified avian eggs and egg products and formulations thereof
CN115137074A (zh) 婴幼儿用排便促进剂
JPH01228456A (ja) 生菌体カプセルの製造方法
Hati et al. Encapsulation of probiotics for enhancing the survival in gastrointestinal tract
JP2003334065A (ja) 乳酸菌を保護するための核酸複合体
RU2229251C2 (ru) Способ получения иммобилизованной композиции функционального пищевого пробиотического желированного продукта, иммобилизованная композиция и функциональный продукт ее содержащий
JP4121306B2 (ja) 生菌剤
AU2018285184A1 (en) Microbial cell-containing non-carbonated liquid food/drink, and method for improving dispersibility of precipitates or agglomerates of microbial cell powder in food/drink
US20220287965A1 (en) Oleogels and methods relating thereto
Sun et al. Influence of Lactobacillus E1 on the storage stability in emulsion immobilization
Hati et al. Microencapsulation of probiotic cultures for preparation of yoghurt
Karimpour et al. Certain probiotic properties of lactic acid bacteria from the Iranian dairy product “Richal”

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination