CN116076738A - 一种包埋肽锌螯合物的水包油包水双层乳液及其制备方法 - Google Patents
一种包埋肽锌螯合物的水包油包水双层乳液及其制备方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明提供一种包埋肽锌螯合物的水包油包水双层乳液及其制备方法，具体包括虾夷扇贝裙边肽锌螯合物0.1‑0.12％，浓度1％的氯化钠9.9‑11.88％，葵花籽油38‑45.6％，PGPR2‑2.4％，浓度1％的吐温80 40‑50％。本发明通过将虾夷扇贝裙边肽锌螯合物、葵花籽油和吐温80混合制成乳液，乳液在4℃下较为稳定，对肽锌螯合物产生了一定的保护作用，提高了肽锌螯合物的稳定性，对于新型锌补充剂的开发起到积极作用。
Description
技术领域
本发明涉及食品领域，更具体地说，涉及一种包埋肽锌螯合物的水包油包水双层乳液及其制备方法。
背景技术
肽锌螯合物作为一种新型锌补充剂形式有着巨大的潜力，它可以抑制锌与植酸的络合，增强锌的吸收，以其作为配体开发锌补充剂可以提高锌的生物利用度。然而肽锌螯合物的稳定性会受环境pH值的影响，酸性环境会导致多肽上具有锌螯合能力的残基质子化，导致锌离子解离降低锌的生物利用度。因此需要一种能够提高肽锌螯合物稳定性的方法。
双层乳液一种将乳液以细小液滴的形式存在于另一不相溶的液滴之中的包埋体系，在食品工业中具有广泛的应用前景，将肽锌螯合物应用于W/O/W乳液体系可以对其产生保护和控释等作用，但产生这些作用的先决条件是乳液的稳定性。
因此发明一种能够将肽锌螯合物成功包埋且较为稳定的水包油包水乳液成为当务之急。
发明内容
本发明提供了一种可以包埋肽锌螯合物的水包油包水双层乳液的制备方法，以此解决肽锌螯合物在胃肠道消化过程中容易被水解的问题。
为了实现上述问题，本发明第一个目的提出一种水包油包水双层乳液的制备方法，包括以下步骤：
①取肽锌螯合物按质量比1％溶于1％的氯化钠溶液中，得到肽锌螯合物溶液；
②将葵花籽油与PGPR(聚甘油蓖麻醇酯)按质量比95:5混合，得到油相；
③将所述肽锌螯合物溶液和所述油相按质量比2:8混合，搅拌得到油包水乳液；
④将所述油包水乳液与1％的吐温溶液按质量比1:1-1.5混合，搅拌得到包埋肽锌螯合物的水包油包水双层乳液。
在本发明一种实施方式中，步骤③中所述搅拌的转速为8000rpm。
在本发明一种实施方式中，步骤④中所述搅拌的转速为12000rpm。
在本发明一种实施方式中，所述肽锌螯合物的制备方法包括以下步骤：
S1、将虾夷扇贝裙边冷冻后再真空干燥，磨粉后得到扇贝裙边干粉；
S2、按料液比1:100加水，将pH调整为8.0-9.0；
S3、将S2中使用的所述扇贝裙边干粉与碱性蛋白酶按质量比100:6的比例添加碱性蛋白酶，在45-50℃下搅拌至完全水解；
S4、将S3中水解后的溶液加入无水乙醇，在4-6℃下恒温避光醇降至完全澄清透明；
S5、将S4中醇降后所得溶液去除沉淀和乙醇；
S6、冷冻后再真空干燥得到扇贝裙边酶解物；
S7、将扇贝裙边酶解物溶于去离子水中加入硫酸锌溶液，孵育后，冷冻后再真空干燥即得到肽锌螯合物。
在本发明一种实施方式中，步骤S4中加入乙醇后体系所含乙醇体积分数为80％。
在本发明一种实施方式中，步骤S5中使用蒸发浓缩法去除所述乙醇，温度45-50℃，真空度为1-20Pa。
在本发明一种实施方式中，步骤S7中扇贝裙边酶解物浓度为3mg/mL，硫酸锌溶液浓度为1mM，孵育温度为30℃，孵育时间为10min。
有益效果：
本发明使用两步乳化法将肽锌螯合物用葵花籽油和吐温80包埋制备成了水包油包水双层乳液，对肽锌螯合物产生了保护和控释等作用，增强了肽锌螯合物的肠道稳定性，并且赋予螯合物在肠道内的靶向释放作用，同时引入了油相，可以溶解与递送脂溶性营养物质，对复合营养剂的开发提供了新思路。而水包油包水乳液体系保持了肽锌螯合物原有的水溶性，易于人体吸收，这也更有利于液体食品和粉剂，如口服液、冲剂等的添加利用。
附图说明
图1是本发明实施例的肽锌螯合物的包封率，图中A和B分别为实施例1和2的样品组。
图2是本发明实施例的乳液贮藏15天的直观图，A和B分别为实施例1和2的样品组，左是第0天取样，右是第15天取样。
具体实施方式
实施例1
1、制备虾夷扇贝裙边肽锌螯合物：
S1：将新鲜虾夷扇贝裙边放入-30℃冰箱冷冻24h，取出后进行真空冷冻干燥(冷冻温度为-50℃，真空度为1Pa)，干燥后的虾夷扇贝裙边放入磨粉机中，得到虾夷扇贝裙边干粉；
S2：取10g的虾夷扇贝裙边干粉，按料液比1:100加入纯净水，使用0.2M的HCl和0.2M的NaOH，利用pH计进行读数将体系pH调整到8；
S3：取碱性蛋白酶(Novozyme 435，200000U/g，EC 3.1.1.3，来自南极假丝酵母)加入S2所得溶液中，其中虾夷扇贝裙边干粉：碱性蛋白酶＝100:6(所需酶活力为12000U/g)，将溶液置于磁力搅拌水浴锅中，50℃下酶解5小时至扇贝蛋白被完全水解；
S4：将酶解后的S3溶液取出后，向其中加入4L的无水乙醇进行醇降，控制加入无水乙醇后体系所含乙醇体积分数为80％，将溶液在4℃恒温避光醇降24h至溶液完全澄清透明；
S5：将S4醇降后所得溶液先经过滤将沉淀去除，后经蒸发浓缩将乙醇去除，控制蒸发浓缩的温度50℃，真空度为0.1M Pa；
S6：将S5经蒸发浓缩后的溶液置于-80℃冰箱冷冻2h，取出后进行真空冷冻干燥，真空度为1Pa，干燥后得到虾夷扇贝裙边酶解物干粉。
S7：将S6溶于去离子水中配置成3mg/mL的酶解物溶液，加入1mM的硫酸锌溶液，经30℃孵育10min后，冷冻后再真空干燥即得到肽锌螯合物干粉。
2、制备水包油包水双层乳液(以得到50g水包油包水双层乳液为例)
(1)溶液制备
①肽锌螯合物溶液：称取制备的肽锌螯合物干粉50mg，与4.95g的1％氯化钠溶液(w/w)混合。
②油相：量取葵花籽油19g，将其与1g的PGPR混合。
(2)乳液制备
③将S1、S2所得溶液混合(质量比1:4)，使用高速匀浆机，在8000rpm下搅拌5min得到油包水乳液。
④将S3与1％的吐温80(w/w)混合(质量比1:1)，使用高速匀浆机，在12000rpm下搅拌5min得到水包油包水双层乳液。
实施例2
1、制备虾夷扇贝裙边肽锌螯合物：
S1：将新鲜虾夷扇贝裙边放入-30℃冰箱冷冻24h，取出后进行真空冷冻干燥(冷冻温度为-50℃，真空度为1Pa)，干燥后的虾夷扇贝裙边放入磨粉机中，得到虾夷扇贝裙边干粉；
S2：取10g的虾夷扇贝裙边干粉，按料液比1:100加入纯净水，使用0.2M的HCl和0.2M的NaOH，利用pH计进行读数将体系pH调整到8；
S3：取碱性蛋白酶(Novozyme 435，200000U/g，EC 3.1.1.3，来自南极假丝酵母)加入S2所得溶液中，其中虾夷扇贝裙边干粉：碱性蛋白酶＝100:6(所需酶活力为12000U/g)，将溶液置于磁力搅拌水浴锅中，50℃下酶解5小时至扇贝蛋白被完全水解；
S4：将酶解后的S3溶液取出后，向其中加入4L的无水乙醇进行醇降，控制加入无水乙醇后体系所含乙醇体积分数为80％，将溶液在4℃恒温避光醇降24h至溶液完全澄清透明；
S5：将S4醇降后所得溶液先经过滤将沉淀去除，后经蒸发浓缩将乙醇去除，控制蒸发浓缩的温度50℃，真空度为0.1M Pa；
S6：将S5经蒸发浓缩后的溶液置于-80℃冰箱冷冻2h，取出后进行真空冷冻干燥，真空度为1Pa，干燥后得到虾夷扇贝裙边酶解物干粉。
S7：将S6溶于去离子水中配置成3mg/mL的酶解物溶液，加入1mM的硫酸锌溶液，经30℃孵育10min后，冷冻后再真空干燥即得到肽锌螯合物干粉。
2、制备水包油包水双层乳液(以得到50g水包油包水双层乳液为例)
(1)溶液制备
①肽锌螯合物溶液：称取制备的肽锌螯合物干粉60mg，与5.94g的1％氯化钠溶液(w/w)混合。
②油相：量取葵花籽油22.8g，将其与1.2g的PGPR混合。
(2)乳液制备
③将S1、S2所得溶液混合(质量比1:4)，使用高速匀浆机，在8000rpm下搅拌5min得到油包水乳液。
④将S3与1％的吐温80(w/w)混合(质量比1:1.5)，使用高速匀浆机，在12000rpm下搅拌5min得到水包油包水双层乳液。
将得到的水包油包水双层乳液进行4℃贮藏实验。
取实施例1和2中制备的乳液通过BCA法检测乳液的包封率。
乳液包封率的检测：在50mL离心管中用去离子水(6g)稀释乳液(6g)，轻轻摇晃均匀。使用离心机在10000rpm和4℃下将稀释的乳液离心90min。使用注射器吸取下层溶液，使用BCA蛋白浓度试剂盒检测溶液的蛋白浓度。
如附图1所示，为测量并计算得出的水包油包水乳液的包封率，图中A和B分别为实施例1和2的样品组，其中外部水相吐温80的质量比分别为50％和40％，包封率计算由下方公式得出：
包封率(％)＝(1-c剩余蛋白)/c添加蛋白×100％
取实施例1和2中制备的乳液在4℃避光条件下，分别在第0,15天取样，拍摄直观图。
如附图2所示，为拍摄的乳液直观图，图中A和B分别为实施例1和2的样品组，其中外部水相吐温80的质量比分别为50％和40％。
水包油包水乳液的包封率分别为97.06％和94.79％，对肽锌螯合物的包封效果较好。乳液制备当天乳液呈乳白色均一状态，经过15天的贮藏之后，乳液出现了分层现象，但分层比例较少，表明乳液较为稳定。
以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明披露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。
Claims (10)
1.一种水包油包水双层乳液的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
①、取肽锌螯合物溶于氯化钠溶液中，得到肽锌螯合物溶液；
②、将葵花籽油与PGPR按质量比，得到油相；
③、将所述肽锌螯合物溶液和所述油相混合，搅拌得到油包水乳液；
④、将所述油包水乳液与1％的吐温溶液按质量比1:1-1.5混合，搅拌得到包埋肽锌螯合物的水包油包水双层乳液。
2.根据权利要求1所述方法，其特征在于，步骤①中肽锌螯合物溶液中肽锌螯合物的质量浓度为1～2％。
3.根据权利要求1所述方法，其特征在于，步骤②中葵花籽油与PGPR的质量比为95～100:5。
4.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述肽锌螯合物溶液和油相质量比为1～2:8。
5.根据权利要求1所述方法，其特征在于，步骤③中所述搅拌的转速为8000～10000rpm。
6.根据权利要求1所述方法，其特征在于，步骤④中所述搅拌的转速为10000～12000rpm。
7.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述肽锌螯合物的制备方法包括以下步骤：
S1、将虾夷扇贝裙边冷冻后再真空干燥，磨粉后得到扇贝裙边干粉；
S2、按料液比1:100加水，将pH调整为8.0-9.0；
S3、将S2中使用的所述扇贝裙边干粉与碱性蛋白酶按质量比100:6的比例添加碱性蛋白酶，在45-50℃下搅拌至完全水解；
S4、将S3中水解后的溶液加入无水乙醇，在4-6℃下恒温避光醇降至完全澄清透明；
S5、将S4中醇降后所得溶液去除沉淀和乙醇；
S6、冷冻后再真空干燥得到扇贝裙边酶解物；
S7、将扇贝裙边酶解物溶于去离子水中加入硫酸锌溶液，孵育后，冷冻后再真空干燥即得到肽锌螯合物。
8.根据权利要求7所述方法，其特征在于，步骤S4中加入乙醇后体系所含乙醇体积分数为80％。
9.根据权利要求7所述方法，其特征在于，步骤S5中使用蒸发浓缩法去除所述乙醇，温度45-50℃，真空度为1-20Pa。
10.根据权利要求7所述方法，其特征在于，步骤S7中扇贝裙边酶解物浓度为3mg/mL，硫酸锌溶液浓度为1mM，孵育温度为30℃，孵育时间为10min。
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