CN112941087B - 玉米ZmBES1/BZR1-2基因在提高植物耐旱性中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了玉米ZmBES1/BZR1‑2基因在提高植物耐旱性中的应用，从玉米幼苗叶片中分离获得ZmBES1/BZR1‑2基因，构建35S‑ZmBES1/BZR1‑2‑eGFP载体，通过农杆菌介导法将前述载体转化入植物，该基因在植物中过表达，转基因后的植物抗旱性提升，证实玉米ZmBES1/BZR1‑2基因在改善植物耐旱性中的作用。
Description
技术领域
本发明涉及玉米ZmBES1/BZR1-2基因在提高植物耐旱性中的应用，属于基因工程领域。
背景技术
近年来，针对人们不合理耕种及其工业的进一步发展，中国土壤干旱程度进一步加深，而干旱是影响玉米产量的重要因素，选育具有耐旱性状的植株有利于农业生产、增产和经济发展。
耐旱性是一个复杂的数量性状，植物受到干旱胁迫，感知逆境信号，并启动相关耐旱基因做出一系列调控直至表现出耐旱性。利用现代分子生物学技术，近二十年年来对玉米抗旱研究获得众多重要的研究进展。专利CN201910026520.2玉米抗旱基因ZmDSR的克隆及其应用中，公开了玉米抗旱基因ZmDSR提高玉米品种耐干旱胁迫能力的应用，用引物ZmDSR-Cloning扩增ZmDSR基因，构建ZmDSR的过量表达载体，对拟南芥进行遗传转化。该基因在拟南芥植株中的过量表达，可以显著提高植株的耐旱性。专利CN201910274035.7 玉米抗旱相关基因ZmDi19-7及其应用中，公开基因ZmDi19-7的序列及其在植物抗旱调控机制中的主要作用。在刘松涛等人发表的《玉米ERD基因的表达模式及ZmERD6基因的抗旱性分析》中筛选出5个ZmERD基因，利用旱胁迫实验发现GRMZM2G109201， GRMZM2G181206和GRMZM2G12864基因属于组成型表达，GRMZM2G134192基因属于特异型表达，只在花药中高表达。属于ERD6亚家族的GRMZM2G109201基因在旱敏感型(B73) 和抗旱型(郑58)自交系中均表达，且郑58中表达量显著高于B73；随着旱胁迫时间的延长， GRMZM2G109201基因在B73中表达量差异不显著，但在郑58中表达量升高幅度达到显著水平，亚细胞定位显示，GRMZM2G109201基因编码的ZmERD6蛋白定位于质膜，推测 GRMZM2G109201基因参与旱胁迫，且被正向诱导。
随着越来越多的玉米抗旱基因的发现，这都为玉米抗旱提供理论基础，但是在现有的抗旱研究中针对玉米ZmBES1/BZR1-2基因功能性分析尚未报道，也没有利用该基因改善作物耐旱性的方法。
发明内容
本发明克服了上述现有技术的不足，提供玉米ZmBES1/BZR1-2基因在提高植物耐旱性中的应用，本发明在玉米幼苗叶片中分离获得ZmBES1/BZR1-2基因，通过该基因在植物中的过表达，验证玉米ZmBES1/BZR1-2基因在改善植物耐旱性中的作用。
玉米ZmBES1/BZR1-2基因在提高植物耐旱性中的应用。
进一步的，上述应用中所述的ZmBES1/BZR1-2基因的序列如SEQ ID NO.1所示。
进一步的，上述玉米ZmBES1/BZR1-2基因在提高植物耐旱性中的应用的应用方法，包括如下步骤：
在玉米幼苗叶片中分离获得ZmBES1/BZR1-2基因，设计ZmBES1/BZR1-2基因的扩增引物，通过PCR方法扩增玉米ZmBES1/BZR1-2基因的cDNA序列，然后利用ZmBES1/BZR1-2 的cDNA序列构建35S-ZmBES1/BZR1-2-eGFP载体，利用农杆菌介导法将前述载体转化入植物，提高ZmBES1/BZR1-2基因的表达，得到ZmBES1/BZR1-2基因过表达的植株。
进一步的，上述应用方法中所述的35S-ZmBES1/BZR1-2-eGFP载体序列如SEQ IDNO.2 所示。
一种培育抗旱植物的方法：上调植物中ZmBES1/BZR1-2基因的表达，以获得抗旱的植株。
有益效果：
本发明在玉米中发现ZmBES1/BZR1-2基因，分离克隆该基因，并首次在拟南芥中过量表达了ZmBES1/BZR1-2基因，明确了玉米ZmBES1/BZR1-2基因可提高植物的耐旱性，为培育抗干旱、抗盐转基因植物提供了新思路。对农作物抗旱育种及生产应用具有重要的指导意义，具有广阔的应用前景。
附图说明
图1在1/2MS培养基上获得阳性苗。
图2阳性苗基因组水平检测目的基因插入。
图3反转录PCR(RT-PCR)检测目的基因表达。
图4 1/2MS培养基上各株系根长及丙二醛含量。
图5胁迫培养基上各株系根长及丙二醛含量。
图6干旱处理后表型。
具体实施方式
为了使本技术领域人员更好地理解本申请中的技术方案，下面结合实施例对本发明作进一步说明，所描述的实施例仅是本申请一部分实施例，而不是全部，本发明不受下述实施例的限制。
实施例
1.基因克隆及载体构建
取五叶期玉米幼苗叶片，液氮速冻研磨，使用总RNA提取试剂盒Trizol(TaKaRa)并按照其说明书提取总RNA。用PrimeScriptTM RT regeant Kit试剂盒(Takara公司)，以总RNA为模板进行cDNA的合成。
用NCBI网站Primeblast设计ZmBES1/BZR1-2基因的扩增引物，根据双子叶植物表达载体pCAMBIA2300-35S-eGFP多克隆位点，在其上游引物入BamH I酶切位点(序列如SEQID NO.3)，下游引物引入Spe I位点(序列如SEQ ID NO.4)，具体序列如表1：
表1双构建子叶植物表达载体引物设计
按表2所示反应体系加样，进行扩增。温度循环程序为：94℃3min；98℃10s，最适退火温度10s，72℃20s，30个循环；72℃5min；4℃保持。
表2 PCR扩增反应体系
对PCR产物进行回收。将回收产物，pCAMBIA2300质粒进行双酶切，按表3反应体系进行加样。将酶切体系混匀，置于30℃水浴锅中，酶切6～8h，酶切产物加入上样缓冲液后，直接电泳，回收酶切产物，按表4进行酶切片段连接。
表3双酶切加样体系
表4连接反应体系
连接产物转化大肠杆菌，并进行菌落PCR检测。提取重组质粒经限制性内切酶双酶切鉴定之后，组质粒菌液送测序公司进行DNA的序列测序鉴定，经测序正确的质粒将于下一步拟南芥转化。
2.拟南芥转化及阳性鉴定
为探索玉米ZmBES1/BZR1-2的功能，我们用农杆菌介导的花絮浸染法将 35S-ZmBES1/BZR1-2-eGFP载体转化拟南芥突变体bes1-D。
2.1花序浸染法转化
(1)取含有重组质粒的农杆菌，在含有卡那霉素(Kana)和利福平(Rif)的YEP平板上划线，28℃培养2～3d。
(2)挑取农杆菌单菌落接种在3mL含Kana和Rif的YEP液体培养基中，28℃，200r/min，振荡过夜培养。
(3)在100mL液体YEP培养基中(含Kana和Rif)，接种1mL过夜培养的起始农杆菌菌液，28℃振荡培养至菌液OD600值为1.2～1.5。
(4)4℃5000r/min离心10min收集细胞，用5％蔗糖溶液悬浮菌体并调OD600值至0.8～ 1.0，按0.01％～0.02％的比例加入表面活性剂silwetL-77。
(5)用拟南芥专用营养土盆栽培养拟南芥突变体bes1-D(SALK-CS65988)，开花后修剪已形成果荚和已经开放的花，用上述浸染液浸泡花序1.5～2.0min，黑暗培养10h。
(6)在适宜的条件下培养3～4周，收集种子，进行下一步筛选处理。
2.2抗性培养基筛选
(1)将收获的浸染后种子，分装至1.5mL的离心管，用500μL的70％酒精浸泡30s。
(2)吸掉酒精后，用500μL的5％次氯酸钠浸泡5～10min，期间不断摇晃离心管以至种子与次氯酸钠充分接触。
(3)用灭菌水清洗种子4～6次，待种子沉下后，弃上层ddH2O；200μL的0.1％琼脂水悬浮种子。
(4)将种子点播至含40ng/ml的Kana的1/2MS培养基中培养。两周后正常生长的是阳性苗。
(5)重复上述步骤，直至收获T3代纯合的阳性苗。
2.3基因组PCR鉴定
(1)取植物新鲜组织100mg，加入液氮充分碾磨。加入400μL缓冲液FP1和6μL的RNase A(10mg/mL)，漩涡振荡1min，室温放置10min。
(2)加入130μL缓冲液FP2，充分混匀，涡旋振荡1min，12000r/min(13400×g)离心5min，将上清转移至新的离心管中。
(3)可选步骤：将上清液再次12000r/min(13400×g)离心5min，将上清转移至新的离心管中。
(4)向上清液中加入0.7倍体积的异丙醇，充分混匀，此时会出现絮状基因组DNA。12000 r/min(13400×g)离心2min，弃上清，保留沉淀。
(5)加入600μL 70％乙醇，涡旋振荡5s，12000r/min(13400×g)离心2min，弃上清。
(6)重复步骤(6)。
(7)开盖倒置，室温5～10min，彻底晾干残余的乙醇。
(8)加入适量洗脱缓冲液TE，65℃水浴10～60min溶解DNA，期间颠倒混匀数次助溶，最终得到DNA溶液。
(9)使用PCR引物如表5所示，2-F序列如SEQ ID NO.5，2-R序列如SEQ ID NO.6，以提取的基因组DNA为模板进行PCR检测，程序为94℃，3min；94℃30s，最适退火温度 30s，72℃30s，35个循环；72℃5min；4℃保存。
表5转基因拟南芥基因组检测引物
(10)收获转化的拟南芥T2代种子消毒后，播种于含有卡那霉素的1/2MS固体培养基上， 7～8d后，全部为绿色健壮的植株既纯合转化体，而非纯和转化体则表现为3:1的分离(正常生长和黄化死亡植株所成的比例)。鉴定为纯合的T2代种子用作进一步分析。
2.4反转录PCR(RT-PCR)检测目的基因表达
总RNA提取及反转录
(1)RNA提取中使用的塑料制品均要用RNase固相清除剂浸泡过夜，经高温高压灭菌30 min，烘干备用；非塑料制品180℃烘烤6h后放-70℃备用。
(2)使用Trizol方法提取总RNA。叶片迅速剪碎后，放入经液氮预冷的研钵中，速加液氮并立即快速研磨两次。
(3)在1.5mL离心管内按每100mg加入1mL Trizol的比例，加入后剧烈振荡混匀，室温静置5min，4℃12000r/min离心5min，无菌工作台中转移400μL上清至新的1.5mL离心管中。并加入400μL氯仿，振荡混匀，静置5min，4℃12000r/min离心15min。
(4)无菌工作台中再次转移400μL上清至新的离心管中。管中加入等体积400μL的异丙醇后，室温下静置10min后，4℃12000r/min离心10min。
(5)小心倒掉或枪吸管中液体，加入1mL 75％乙醇洗涤沉淀，4℃12000r/min离心5min，75％乙醇洗涤两次。充分弃上清后保留沉淀，台子中放置几分钟使RNA彻底干燥。干燥后加适量RNase-Free水溶解RNA。
(6)取溶解的RNA样品，用NanoVue Plus核酸蛋白测定仪测定总RNA的浓度，检测其纯度，并用2％的琼脂糖凝胶快速检测其质量。
(7)用DNase I处理总RNA以除去其中可能存在少量的基因组DNA，反应程序为：42℃ 2min，4℃保持，按表6反应体系加样。
表6DNase消化基因组DNA反应体系
(8)用PrimeScriptTM RT Regeant Kit试剂盒(Takara，大连)，以总RNA为模板进行cDNA 的合成，20μL反应体系如表7。反应条件为37℃15min，85℃5s，4℃保持。
表7反转录反应体系
(9)设计RT-PCR引物如表8，以cDNA为模板，按反应体系加样，进行RT-RCR反应，温度循环程序为94℃3min；98℃10s；最适退火温度10s；72℃20s；35个循环；72℃5 min；4℃保持。PCR产物用2％琼脂糖凝胶电泳分析。D2-F序列如SEQ ID NO.7，D2-R序列如SEQ ID NO.8
表8RT-PCR引物设计
经过卡那霉素筛选及PCR检测，挑选纯合转基因株系OE1和OE2用于后续研究。
3.纯和株系耐旱性分析
3.1模拟干旱处理
将纯合的转基因拟南芥株系OE1、OE2和突变体bes1-D以及野生型(WT)用5％次氯酸钠溶液消毒后，播种于含有100mM/L甘露醇的1/2MS培养基(胁迫培养基)上，观察根长变化。并测定根长和丙二醛含量。
丙二醛含量测定
(1)细菌或细胞样品的制备：收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照每400万细菌或细胞加入1mL提取液，超声波破碎细菌或细胞(功率20％，超声3s，间隔10s，重复30次)；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
(2)组织样品的制备：称取约0.1g组织，加入1mL提取液进行冰浴匀浆；8000g 4℃离心 10min，取
上清，置冰上待测。
(3)可见分光光度计/酶标仪预热30min以上，蒸馏水调零。
(4)按下表9步骤加样：
表9丙二醛测定加样体系
混合液在100℃水浴中保温30min后(盖紧，防止水分散失)，置于冰浴中冷却，10000g，常温，离心10min。吸取200uL上清液于微量玻璃比色皿或96孔板中，测定各样品在450nm、 532nm和600nm处的吸光度。
(5)MDA含量计算：MDA含量(nmol/g鲜重)＝(6.45×(A532-A600)-0.56×A450) ×V总÷(W×V样本÷V提取)＝5×(6.45×(A532-A600)-0.56×A450)÷W
3.2干旱处理
将OE1、OE2和突变体bes1-D以及野生型(WT)播种在营养土和蛭石比例为3:1的土壤中，放置于培养室培养，20天后停止浇水直至干旱，观察各株系的表型。
4结果分析
4.1转基因拟南芥鉴定
将浸染后的拟南芥种子消毒后播种于含有40ng/mL的1/2MS培养基上，正常生长的为阳性苗如所示。之后对转基因拟南芥进行基因组DNA检测，确认目的基因转入突变体bes1-D 中(图1)。RT-PCR检测表明目的基因在突变体bes1-D中表达(图2)。
4.2转化ZmBES1/BZR1-2基因在提高转基因株系耐旱性
在正常条件下，突变体bes1-D，OE1、OE2根长、丙二醛含量差异不显著。在含有100mM/L 甘露醇的1/2MS培养基上，转基因株系OE1、OE2根长显著增加，丙二醛含量显著低于突变体bes1-D，表明过表达株系OE1、OE2耐旱性增强。
将转基因株系和对照株系幼苗移栽至土壤，于培养室生长，20天后不再浇水直至干旱3 周后，观察表型。干旱处理后，突变体bes1-D严重萎蔫干枯，表现出对干旱更敏感，而转基因株系和野生型WT长势一致，表现出耐旱性显著增强。以上研究结果证实，转化ZmBES1/BZR1-2基因的过表达株系OE1、OE2耐旱性增强，表明转化ZmBES1/BZR1-2基因可以提高转基因植物的耐旱性。
SEQUENCE LISTING
<110> 四川农业大学
<120> 玉米ZmBES1/BZR1-2基因在提高植物耐旱性中的应用
<130> 2021
<160> 8
<170> PatentIn version 3.3
<210> 1
<211> 420
<212> DNA
<213> 序列
<400> 1
atggcgagcg gcggcggcgg gggcctgggt gcggctggcg cgggaggccg gatgcccacg 60
tggagggagc gcgagaacaa caagcgccgg gagcgccgcc gccgcgcgat cgccgccaag 120
atcttcgccg gcctccgcgc gcacggcggc tacaagctgc ccaagcactg cgacaacaac 180
gaggtgctca aggcgctctg caacgaggcc ggctgggtcg tcgagcccga cggcaccacc 240
taccgccagc tagctggctc tagcttgcag ggtttttttt tctcctccat ttttttgatg 300
ggtgggtggg ttgggttggg tgtcgcacgt ggacgatgcg caaaagctaa ggagactgaa 360
aaatatttga tttgcagagt gagccttgca caagctgttg cttatgtggt ggttaactga 420
<210> 2
<211> 10627
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 2
atgccaacca cagggttccc ctcgggatca aagtactttg atccaacccc tccgctgcta 60
tagtgcagtc ggcttctgac gttcagtgca gccgtcttct gaaaacgaca tgtcgcacaa 120
gtcctaagtt acgcgacagg ctgccgccct gcccttttcc tggcgttttc ttgtcgcgtg 180
ttttagtcgc ataaagtaga atacttgcga ctagaaccgg agacattacg ccatgaacaa 240
gagcgccgcc gctggcctgc tgggctatgc ccgcgtcagc accgacgacc aggacttgac 300
caaccaacgg gccgaactgc acgcggccgg ctgcaccaag ctgttttccg agaagatcac 360
cggcaccagg cgcgaccgcc cggagctggc caggatgctt gaccacctac gccctggcga 420
cgttgtgaca gtgaccaggc tagaccgcct ggcccgcagc acccgcgacc tactggacat 480
tgccgagcgc atccaggagg ccggcgcggg cctgcgtagc ctggcagagc cgtgggccga 540
caccaccacg ccggccggcc gcatggtgtt gaccgtgttc gccggcattg ccgagttcga 600
gcgttcccta atcatcgacc gcacccggag cgggcgcgag gccgccaagg cccgaggcgt 660
gaagtttggc ccccgcccta ccctcacccc ggcacagatc gcgcacgccc gcgagctgat 720
cgaccaggaa ggccgcaccg tgaaagaggc ggctgcactg cttggcgtgc atcgctcgac 780
cctgtaccgc gcacttgagc gcagcgagga agtgacgccc accgaggcca ggcggcgcgg 840
tgccttccgt gaggacgcat tgaccgaggc cgacgccctg gcggccgccg agaatgaacg 900
ccaagaggaa caagcatgaa accgcaccag gacggccagg acgaaccgtt tttcattacc 960
gaagagatcg aggcggagat gatcgcggcc gggtacgtgt tcgagccgcc cgcgcacgtc 1020
tcaaccgtgc ggctgcatga aatcctggcc ggtttgtctg atgccaagct ggcggcctgg 1080
ccggccagct tggccgctga agaaaccgag cgccgccgtc taaaaaggtg atgtgtattt 1140
gagtaaaaca gcttgcgtca tgcggtcgct gcgtatatga tgcgatgagt aaataaacaa 1200
atacgcaagg ggaacgcatg aaggttatcg ctgtacttaa ccagaaaggc gggtcaggca 1260
agacgaccat cgcaacccat ctagcccgcg ccctgcaact cgccggggcc gatgttctgt 1320
tagtcgattc cgatccccag ggcagtgccc gcgattgggc ggccgtgcgg gaagatcaac 1380
cgctaaccgt tgtcggcatc gaccgcccga cgattgaccg cgacgtgaag gccatcggcc 1440
ggcgcgactt cgtagtgatc gacggagcgc cccaggcggc ggacttggct gtgtccgcga 1500
tcaaggcagc cgacttcgtg ctgattccgg tgcagccaag cccttacgac atatgggcca 1560
ccgccgacct ggtggagctg gttaagcagc gcattgaggt cacggatgga aggctacaag 1620
cggcctttgt cgtgtcgcgg gcgatcaaag gcacgcgcat cggcggtgag gttgccgagg 1680
cgctggccgg gtacgagctg cccattcttg agtcccgtat cacgcagcgc gtgagctacc 1740
caggcactgc cgccgccggc acaaccgttc ttgaatcaga acccgagggc gacgctgccc 1800
gcgaggtcca ggcgctggcc gctgaaatta aatcaaaact catttgagtt aatgaggtaa 1860
agagaaaatg agcaaaagca caaacacgct aagtgccggc cgtccgagcg cacgcagcag 1920
caaggctgca acgttggcca gcctggcaga cacgccagcc atgaagcggg tcaactttca 1980
gttgccggcg gaggatcaca ccaagctgaa gatgtacgcg gtacgccaag gcaagaccat 2040
taccgagctg ctatctgaat acatcgcgca gctaccagag taaatgagca aatgaataaa 2100
tgagtagatg aattttagcg gctaaaggag gcggcatgga aaatcaagaa caaccaggca 2160
ccgacgccgt ggaatgcccc atgtgtggag gaacgggcgg ttggccaggc gtaagcggct 2220
gggttgtctg ccggccctgc aatggcactg gaacccccaa gcccgaggaa tcggcgtgac 2280
ggtcgcaaac catccggccc ggtacaaatc ggcgcggcgc tgggtgatga cctggtggag 2340
aagttgaagg ccgcgcaggc cgcccagcgg caacgcatcg aggcagaagc acgccccggt 2400
gaatcgtggc aagcggccgc tgatcgaatc cgcaaagaat cccggcaacc gccggcagcc 2460
ggtgcgccgt cgattaggaa gccgcccaag ggcgacgagc aaccagattt tttcgttccg 2520
atgctctatg acgtgggcac ccgcgatagt cgcagcatca tggacgtggc cgttttccgt 2580
ctgtcgaagc gtgaccgacg agctggcgag gtgatccgct acgagcttcc agacgggcac 2640
gtagaggttt ccgcagggcc ggccggcatg gccagtgtgt gggattacga cctggtactg 2700
atggcggttt cccatctaac cgaatccatg aaccgatacc gggaagggaa gggagacaag 2760
cccggccgcg tgttccgtcc acacgttgcg gacgtactca agttctgccg gcgagccgat 2820
ggcggaaagc agaaagacga cctggtagaa acctgcattc ggttaaacac cacgcacgtt 2880
gccatgcagc gtacgaagaa ggccaagaac ggccgcctgg tgacggtatc cgagggtgaa 2940
gccttgatta gccgctacaa gatcgtaaag agcgaaaccg ggcggccgga gtacatcgag 3000
atcgagctag ctgattggat gtaccgcgag atcacagaag gcaagaaccc ggacgtgctg 3060
acggttcacc ccgattactt tttgatcgat cccggcatcg gccgttttct ctaccgcctg 3120
gcacgccgcg ccgcaggcaa ggcagaagcc agatggttgt tcaagacgat ctacgaacgc 3180
agtggcagcg ccggagagtt caagaagttc tgtttcaccg tgcgcaagct gatcgggtca 3240
aatgacctgc cggagtacga tttgaaggag gaggcggggc aggctggccc gatcctagtc 3300
atgcgctacc gcaacctgat cgagggcgaa gcatccgccg gttcctaatg tacggagcag 3360
atgctagggc aaattgccct agcaggggaa aaaggtcgaa aaggtctctt tcctgtggat 3420
agcacgtaca ttgggaaccc aaagccgtac attgggaacc ggaacccgta cattgggaac 3480
ccaaagccgt acattgggaa ccggtcacac atgtaagtga ctgatataaa agagaaaaaa 3540
ggcgattttt ccgcctaaaa ctctttaaaa cttattaaaa ctcttaaaac ccgcctggcc 3600
tgtgcataac tgtctggcca gcgcacagcc gaagagctgc aaaaagcgcc tacccttcgg 3660
tcgctgcgct ccctacgccc cgccgcttcg cgtcggccta tcgcggccgc tggccgctca 3720
aaaatggctg gcctacggcc aggcaatcta ccagggcgcg gacaagccgc gccgtcgcca 3780
ctcgaccgcc ggcgcccaca tcaaggcacc ctgcctcgcg cgtttcggtg atgacggtga 3840
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gagcagacaa gcccgtcagg gcgcgtcagc gggtgttggc gggtgtcggg gcgcagccat 3960
gacccagtca cgtagcgata gcggagtgta tactggctta actatgcggc atcagagcag 4020
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ctgcggcgag cggtatcagc tcactcaaag gcggtaatac ggttatccac agaatcaggg 4200
gataacgcag gaaagaacat gtgagcaaaa ggccagcaaa aggccaggaa ccgtaaaaag 4260
gccgcgttgc tggcgttttt ccataggctc cgcccccctg acgagcatca caaaaatcga 4320
cgctcaagtc agaggtggcg aaacccgaca ggactataaa gataccaggc gtttccccct 4380
ggaagctccc tcgtgcgctc tcctgttccg accctgccgc ttaccggata cctgtccgcc 4440
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tgcgccttat ccggtaacta tcgtcttgag tccaacccgg taagacacga cttatcgcca 4620
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tctcaagaag atcctttgat cttttctacg gggtctgacg ctcagtggaa cgaaaactca 4920
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atgttgctgt ctcccaggtc gccgtgggaa aagacaagtt cctcttcggg cttttccgtc 5220
tttaaaaaat catacagctc gcgcggatct ttaaatggag tgtcttcttc ccagttttcg 5280
caatccacat cggccagatc gttattcagt aagtaatcca attcggctaa gcggctgtct 5340
aagctattcg tatagggaca atccgatatg tcgatggagt gaaagagcct gatgcactcc 5400
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acgccatcgg cctcactcat gagcagattg ctccagccat catgccgttc aaagtgcagg 5520
acctttggaa caggcagctt tccttccagc catagcatca tgtccttttc ccgttccaca 5580
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ttttcgatca gttttttcaa ttccggtgat attctcattt tagccattta ttatttcctt 5760
cctcttttct acagtattta aagatacccc aagaagctaa ttataacaag acgaactcca 5820
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gagtggtgat tttgtgccga gctgccggtc ggggagctgt tggctggctg gtggcaggat 6180
atattgtggt gtaaacaaat tgacgcttag acaacttaat aacacattgc ggacgttttt 6240
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gtttcttata tgctcaacac atgagcgaaa ccctatagga accctaattc ccttatctgg 6420
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tcgatccgaa ccccagagtc ccgctcagaa gaactcgtca agaaggcgat agaaggcgat 6540
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acccagccgg ccacagtcga tgaatccaga aaagcggcca ttttccacca tgatattcgg 6720
caagcaggca tcgccatgtg tcacgacgag atcctcgccg tcgggcatgc gcgccttgag 6780
cctggcgaac agttcggctg gcgcgagccc ctgatgctct tcgtccagat catcctgatc 6840
gacaagaccg gcttccatcc gagtacgtgc tcgctcgatg cgatgtttcg cttggtggtc 6900
gaatgggcag gtagccggat caagcgtatg cagccgccgc attgcatcag ccatgatgga 6960
tactttctcg gcaggagcaa ggtgagatga caggagatcc tgccccggca cttcgcccaa 7020
tagcagccag tcccttcccg cttcagtgac aacgtcgagc acagctgcgc aaggaacgcc 7080
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cttccttttc tactgtcctt ttgatgaagt gacagatagc tgggcaatgg aatccgagga 7680
ggtttcccga tattaccctt tgttgaaaag tctcaatagc cctttggtct tctgagactg 7740
tatctttgat attcttggag tagacgagag tgtcgtgctc caccatgtta tcacatcaat 7800
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Claims (4)
1.玉米ZmBES1/BZR1-2基因在提高植物耐旱性中的应用，其特征在于，所述的ZmBES1/BZR1-2基因的序列如SEQ ID NO.1所示；所述的应用的方法为上调植物中ZmBES1/BZR1-2基因的表达。
2.如权利要求1所述的应用的应用方法，其特征在于，包括如下步骤：
设计ZmBES1/BZR1-2基因的扩增引物，通过PCR方法扩增玉米ZmBES1/BZR1-2基因的cDNA序列，然后利用ZmBES1/BZR1-2的cDNA序列构建35S-ZmBES1/BZR1-2-eGFP载体，利用农杆菌介导法将前述载体转化入植物，提高ZmBES1/BZR1-2基因的表达，得到ZmBES1/BZR1-2基因过表达的植株；所述的35S-ZmBES1/BZR1-2-eGFP载体的序列如SEQ ID NO.2所示。
3.如权利要求2所述的应用方法，其特征在于，所述的ZmBES1/BZR1-2基因的扩增引物的核苷酸序列如SEQ ID NOs .3-4所示。
4.一种培育抗旱植物的方法，其特征在于，上调植物中ZmBES1/BZR1-2基因的表达以获得抗旱的植株，所述的ZmBES1/BZR1-2基因的序列如SEQ ID NO.1所示。
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