CN110656125A - 一种耐干旱玉米的遗传转化方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种耐干旱玉米的遗传转化方法，包括如下步骤：S1.耐干旱基因或耐干旱诱导基因的选择与培养；S2.测量成熟玉米种子的生理吸胀曲线，吸胀阶段用含有S1中的耐干旱基因或耐干旱诱导基因的菌液浸泡；S3.筛选出S2中玉米种子不发生损伤的最大吸胀种子；S4.对S3中筛选出的玉米种子用发根农杆菌震荡侵染19.5‑20小时至种子发芽；S5.选取发了芽的苗子，清除其上发根农杆菌，并对该苗子用酒精消毒后，转入培养基进行培养，同时在高温光照下培养5‑7d，获得耐干旱玉米植株；S6.对S5中获得植株进行分子检测。采用本发明能产出高产率的耐干旱玉米，且玉米抗旱效果好。

Description

一种耐干旱玉米的遗传转化方法
技术领域
本发明涉及生物遗传转化领域，具体是一种耐干旱玉米的遗传转化方法。
背景技术
玉米的生长需要水分的供应，干旱条件下，细胞液泡会发生质壁分离，最终导致植物死亡，同时，作物体内养分的运输需要水分协助运输，缺水会导致运输量减少，从而减低养分的有效性。而玉米减产会影响收成乃至影响人们的生活，故需要研发出一种耐干旱玉米，提高其耐旱性，即使在干旱的季节也能将玉米的产量维持在一个正常水准。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种耐干旱玉米的遗传转化方法，以至少达到得到含有目的基因的耐干旱玉米。
本发明的目的是通过以下技术方案来实现的：一种耐干旱玉米的遗传转化方法，包括如下步骤：S1. 耐干旱基因或耐干旱诱导基因的选择与培养；S2. 测量成熟玉米种子的生理吸胀曲线，吸胀阶段用含有S1中的耐干旱基因或耐干旱诱导基因的菌液浸泡；S3.筛选出S2中玉米种子不发生损伤的最大吸胀种子；S4.对S3中筛选出的玉米种子用发根农杆菌震荡侵染19.5-20小时至种子发芽；S5.选取发了芽的苗子，清除其上发根农杆菌，并对该苗子用酒精消毒后，转入培养基进行培养，同时在高温光照下培养5-7d，获得耐干旱玉米植株；S6.对S5中获得植株进行分子检测。
优选的，所述S1中，所述耐干旱诱导基因选择ZmBTF3b，所述干旱诱导表达基因ZmBTF3b编码蛋白含有169个氨基酸,具有新生多肽复合体保守结构域。
优选的，所述S2中，成熟玉米种子生理吸胀曲线的测量方法为取7份等量的成熟玉米种子，每隔4.5小时取一份浸泡到水中，分别浸泡0、4.5、9、13.5、18、22.5、27小时，记录玉米种子不发生损伤的吸胀停滞点为18-24小时，玉米种子吸胀的时间段为0-24小时。
优选的，所述S2中，吸胀阶段的菌液浸泡需要震荡，同时，S2步骤在25℃无光照条件下进行。
优选的，所述S3中筛选出的种子未发芽。
优选的，所述S4步骤在共培养基里进行，且S4步骤在25℃无光照条件下进行。
优选的，所述共培养基为在MS培养基中加入琼脂，且共培养基的pH为5.6-5.8。
优选的，所述MS培养基内添加有100mg/L的氯化钠。
优选的，所述S5步骤在温度为32-40℃的光照条件下进行。
本发明的有益效果是：采用本发明能产出高产率的耐干旱玉米，且玉米抗旱效果好。
具体实施方式
下面结合实施例进一步详细描述本发明的技术方案，但本发明的保护范围不局限于以下所述。
实施例
一种耐干旱玉米的遗传转化方法，包括如下步骤：
S1. 耐干旱基因或耐干旱诱导基因的选择与培养；所述耐干旱诱导基因选择ZmBTF3b，所述干旱诱导表达基因ZmBTF3b编码蛋白含有169个氨基酸,具有新生多肽复合体保守结构域。
S2. 测量成熟玉米种子的生理吸胀曲线，吸胀阶段用含有S1中的耐干旱基因或耐干旱诱导基因的菌液浸泡；成熟玉米种子生理吸胀曲线的测量方法为取7份等量的成熟玉米种子，每隔4.5小时取一份浸泡到水中，分别浸泡0、4.5、9、13.5、18、22.5、27小时，记录玉米种子不发生损伤的吸胀停滞点为18-24小时，玉米种子吸胀的时间段为0-24小时。吸胀的玉米种子利于后期侵染。吸胀阶段的菌液浸泡需要震荡，同时，S2步骤在25℃无光照条件下进行。
S3.筛选出S2中玉米种子不发生损伤的最大吸胀种子；其中筛选出的种子未发芽。
S4.对S3中筛选出的玉米种子用发根农杆菌震荡侵染19.5-20小时至种子发芽；S4步骤在共培养基里进行，且共培养基的pH为5.6-5.8且S4步骤在25℃无光照条件下进行。所述共培养基为在MS培养基中加入琼脂，且其内添加有100mg/L的氯化钠。
S5.选取发了芽的苗子，清除其上发根农杆菌，并对该苗子用酒精消毒后，转入培养基进行培养，同时在高温光照下培养5-7d，获得耐干旱玉米植株；S5步骤在温度为32-40℃的光照条件下进行。
S6.对S5中获得植株进行分子检测。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当理解本发明并非局限于本文所披露的形式，不应看作是对其他实施例的排除，而可用于各种其他组合、修改和环境，并能够在本文所述构想范围内，通过上述教导或相关领域的技术或知识进行改动。而本领域人员所进行的改动和变化不脱离本发明的精神和范围，则都应在本发明所附权利要求的保护范围内。

Claims (9)

1.一种耐干旱玉米的遗传转化方法，其特征在于：
包括如下步骤：S1. 耐干旱基因或耐干旱诱导基因的选择与培养；S2. 测量成熟玉米种子的生理吸胀曲线，吸胀阶段用含有S1中的耐干旱基因或耐干旱诱导基因的菌液浸泡；S3.筛选出S2中玉米种子不发生损伤的最大吸胀种子；S4.对S3中筛选出的玉米种子用发根农杆菌震荡侵染19.5-20小时至种子发芽；S5.选取发了芽的苗子，清除其上发根农杆菌，并对该苗子用酒精消毒后，转入培养基进行培养，同时在高温光照下培养5-7d，获得耐干旱玉米植株；S6.对S5中获得植株进行分子检测。
2.根据权利要求1所述的一种耐干旱玉米的遗传转化方法，其特征在于：所述S1中，所述耐干旱诱导基因选择ZmBTF3b，所述干旱诱导表达基因ZmBTF3b编码蛋白含有169个氨基酸,具有新生多肽复合体保守结构域。
3.根据权利要求1所述的一种耐干旱玉米的遗传转化方法，其特征在于：所述S2中，成熟玉米种子生理吸胀曲线的测量方法为取7份等量的成熟玉米种子，每隔4.5小时取一份浸泡到水中，分别浸泡0、4.5、9、13.5、18、22.5、27小时，记录玉米种子不发生损伤的吸胀停滞点为18-24小时，玉米种子吸胀的时间段为0-24小时。
4.根据权利要求1或3所述的一种耐干旱玉米的遗传转化方法，其特征在于：所述S2中，吸胀阶段的菌液浸泡需要震荡，同时，S2步骤在25℃无光照条件下进行。
5.根据权利要求1所述的一种耐干旱玉米的遗传转化方法，其特征在于：所述S3中筛选出的种子未发芽。
6.根据权利要求1所述的一种耐干旱玉米的遗传转化方法，其特征在于：所述S4步骤在共培养基里进行，且S4步骤在25℃无光照条件下进行。
7.根据权利要求6所述的一种耐干旱玉米的遗传转化方法，其特征在于：所述共培养基为在MS培养基中加入琼脂，且共培养基的pH为5.6-5.8。
8.根据权利要求7所述的一种耐干旱玉米的遗传转化方法，其特征在于：所述MS培养基内添加有100mg/L的氯化钠。
9.根据权利要求1所述的一种耐干旱玉米的遗传转化方法，其特征在于：所述S5步骤在温度为32-40℃的光照条件下进行。
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