CN112888696B - 外核苷酸酶抑制剂及其使用方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及新颖杂环化合物及其药物制剂。本发明还涉及使用本发明的新颖杂环化合物治疗或预防癌症的方法。

Description

外核苷酸酶抑制剂及其使用方法
相关申请
本申请要求2018年6月21日提交的美国临时申请第62/688,225号和2019年4月1日提交的美国临时申请第62/827,505号的权益，所述临时申请各自通过引用整体并入本文中。
背景技术
CD73，也称为5'-核苷酸酶(5'-NT)或外-5'-核苷酸酶(外5'NT酶)，是膜结合细胞表面酶，其主要作用是催化细胞外核苷酸(例如AMP)转化成其相应核苷(例如腺苷)。CD73存在于大部分组织中并且在淋巴细胞、内皮细胞和上皮细胞上表达。它也在许多肿瘤细胞系中广泛表达，并且在癌性组织中显著上调(Antonioli等人,Nat.Rev.Cancer,13：842-857,2013)。
与CD39(外ATP酶)合作，CD73从ATP/AMP产生腺苷，腺苷通常从受损或发炎细胞释放到细胞外环境中。由CD73产生的细胞外腺苷与靶细胞上的G蛋白偶联受体相互作用。这种信号传导的重要下游效应是经由多种途径增加的免疫抑制。举例来说，CD73是T淋巴细胞上的共同信号传导分子。在正常情况下，细胞外腺苷水平促进自限性免疫反应，所述自限性免疫反应预防过度发炎和组织损伤。对于肿瘤来说，CD73异常增加的优点在于由此增加的CD73催化腺苷水平导致抗肿瘤免疫系统反应受到抑制。
即使CD73在癌症免疫抑制中起作用，但更高程度的CD73表达与肿瘤进展的多个阶段(包括肿瘤血管形成、侵袭性和癌转移)相关，并且乳腺癌患者的存活时间更短。这些观测结果中的一些由CD73作为淋巴细胞结合于内皮所需的粘附分子的非酶依赖性功能引起。
总体而言，CD73已成为开发作为单剂或与其他癌症疗法组合的新型癌症疗法的重要靶标。实际上，CD73单克隆抗体与针对其他化学疗法靶标的抗体组合增强了动物癌症模型中的反应和存活率(Allard等人,Clin.Cancer Res.,19:5626-35,2013)。
许多当前癌症治疗和化学治疗剂无法成功治疗所有患者或所治疗患者的所有症状，并且这些疗法中的多种引起不良副作用。因为某些癌症对多种化学治疗剂产生耐药性，所以需要替代癌症疗法。因此，需要用于治疗癌症和其他疾病的额外化合物和方法。
发明内容
本文公开了式(I)化合物：
或其药学上可接受的盐和/或前药，其中
Y是
Het是杂环基或杂芳基；
R1a选自H、卤基、羟基、氰基、叠氮基、氨基、C1-6烷基、羟基C1-6烷基、氨基-C1-6烷基、-O-C(O)-O-C1-6烷基、C1-6酰氧基、C1-6烷氧基、C2-6烯基和C2-6炔基；
R1b选自H、卤基、C1-6烷基、羟基-C1-6烷基、氨基-C1-6烷基、C2-6烯基和C2-6炔基；
R2a选自卤基、羟基、氰基、叠氮基、氨基、C1-6烷基、羟基-C1-6烷基、氨基-C1-6烷基、C1-6酰氧基、-O-C(O)-O-C1-6烷基、C1-6烷氧基、C2-6烯基和C2-6炔基；
R2b选自卤基、C1-6烷基、C2-6烯基和C2-6炔基，优选被取代或未被取代的C2炔基，最优选未被取代的C2炔基；
R3选自H和烷基；
R4选自H、烷基、CN、芳基、杂芳基、-C(O)OR9、-C(O)NR11R12、-S(O)2R10、-P(O)(OR11)(OR12)和-P(O)(OR11)(NR13R14)；
R5选自H、氰基、烷基、环烷基烷基、杂环基烷基、芳烷基、杂芳烷基和-C(O)OR9；
R6选自-C(O)OR9、-C(O)NR16R17和-P(O)(OR11)(OR12)；
R9独立地选自H、烷基、环烷基、环烷基烷基、杂环基、杂环基烷基、芳基、芳烷基、杂芳基和杂芳烷基；
R10独立地选自烷基、烯基、炔基、氨基、环烷基、环烷基烷基、杂环基、杂环基烷基、芳基、芳烷基、杂芳基和杂芳烷基；并且
每个R11和R12独立地选自H、烷基、环烷基、环烷基烷基、杂环基、杂环基烷基、芳基、芳烷基、杂芳基、杂芳烷基；或
R11和R12与其所连接的氮原子一起形成5元至7元杂环基；
R13是H或烷基；
R14是烷基或芳烷基；
每个R15独立地选自羟基、烷氧基、酰氧基和NR13R14；
每个R16和R17独立地选自H、羟基、烷基、环烷基、环烷基烷基、杂环基、杂环基烷基、芳基、芳烷基、杂芳基、杂芳烷基；或
R16和R17与其所连接的氮原子一起形成5元至7元杂环基。
在式I的某些优选的实施方案中，所包括的化合物符合条款a)和b)；或a)和c)；
其中：
a)化合物不为
b)如果R4和R6各为-C(O)OH并且R5是在苯环上被杂环基或杂芳基取代基取代的苯甲基，则所述苯环取代基选自未被取代或被取代的吡咯烷基、哌嗪酮基、哌啶酮基、四氢嘧啶酮基、吡啶酮基和吡啶基；以及
c)如果R4是-C(O)OH或四唑基，R6是-C(O)OH，并且R5是在苯环上被第二苯环取代的苯甲基，则所述苯甲基苯环或所述第二苯环被-C(O)OR9取代，其中R9是H或烷基。
在一些实施方案中，Y是在其他实施方案中，Y是
在某些优选的实施方案中：
a)化合物不为 并且
b)R2b选自卤基、C2-6烷基、C2-6烯基和C2-6炔基，优选被取代或未被取代的C2炔基，最优选未被取代的C2炔基；和以下中的任一者：
c)R5是在苯环上被选自以下的取代基取代的苯甲基：未被取代或被取代的哌啶酮基、四氢嘧啶酮基、吡啶酮基和吡啶基，或
d)R5是在苯环上被第二苯环取代的苯甲基，所述第二苯环被-C(O)OR9取代，其中R9是H或烷基。
在某些实施方案中，本发明提供一种适用于治疗或预防受试者的癌症的药物组合物，所述药物组合物包含有效量的任一本文所描述的化合物(例如本发明化合物，诸如式(I)化合物，或其药学上可接受的盐)和一种或多种药学上可接受的赋形剂。在某些实施方案中，药物制剂可用于治疗或预防如本文所描述的疾患或疾病。
本文公开了得益于CD73抑制的疾病和疾患的治疗方法，所述治疗方法包括向有需要的受试者施用有效量的如本文所公开的化合物(例如本文所公开的式(I)化合物或其任一实施方案)。在某些实施方案中，人类受试者需要这种治疗。这些疾病包括(但不限于)癌症，例如肺癌、肾癌、皮肤癌、乳腺癌和卵巢癌。可使用本文所描述的方法治疗的其他疾病和疾患包括(但不限于)神经、神经退行性和CNS病症和疾病，例如抑郁症和帕金森病(Parkinson's disease)、脑和心脏缺血性疾病、睡眠障碍、纤维化、免疫和炎症性病症。
本文提供式(I)化合物与单克隆抗体和其他化学治疗剂的组合疗法，所述组合疗法可增强治疗益处，超过单独辅助疗法的能力。
附图说明
图1A描绘在来自用化合物9处理的小鼠的EG7肿瘤中，CD8+细胞占CD45+细胞的百分比增加。
图1B描绘当CD8+细胞由抗CD8抗体耗尽时使用化合物9逆转功效。
图2A描绘使用CD73抑制剂化合物9对CD8+T细胞的AMP介导抑制的逆转，包括CD8+T细胞增殖的EC50＝11.6nM。
图2B描绘CD8+T细胞活化的EC50＝9.6nM。
图2C描绘IFN-γ产生的EC50＝4.5nM。
图2D描绘颗粒酶B产生的EC50＝5.6nM。
图3A描绘化合物9对某些细胞系的增殖的作用，包括EG7细胞(一种小鼠T细胞淋巴瘤细胞系)的可比细胞存活％。
图3B描绘A375细胞(一种人类黑素瘤细胞系)的可比细胞存活％。
图3C描绘人类CD8+T细胞的可比分裂细胞％。
图4A描绘所评估的化合物9针对CD73和表达CD73的SK-MEL-28细胞的效力。
图4B描绘人类重组CD73的IC50＝0.17nM。
图4C描绘人类血浆CD73的IC50＝0.38nM。
图4D描绘人类CD73细胞表面测定的IC50＝0.21nM。
图5A描绘小鼠血浆中化合物9的水平。
图5B描绘小鼠血浆中CD73的抑制。
图6A描绘化合物9针对EG7肿瘤的功效。
图6B描绘化合物9针对CT26肿瘤的功效。
图7A描绘使用单剂化合物9和与抗PD-L1抗体的组合疗法对肿瘤体积的缩减。
图7B至图7E显示每次给药的这种测量结果的个别复制。图7B是媒介物。图7C是抗PD-L1抗体。图7D是化合物9。图7E是化合物9+抗PD-L1。
图8A描绘使用单剂化合物9和与奥沙利铂(oxaliplatin)的组合疗法对肿瘤体积的缩减。
图8B至图8E显示每次给药的这种测量结果的个别复制。图8B是媒介物。图8C是奥沙利铂。图8D是化合物9。图8E是化合物9+奥沙利铂。
图9A描绘使用单剂化合物9和与多柔比星(doxorubicin)的组合疗法对肿瘤体积的缩减。
图9B至图9E显示每次给药的这种测量结果的个别复制。图9B是媒介物。图9C是多柔比星。图9D是化合物9。图9E是化合物9+多柔比星。
图10A描绘化合物9对头颈部鳞状细胞癌(HNSCC)血清中CD73活性的亚纳摩尔抑制。
图10B描绘化合物9对卵巢癌血清中CD73活性的亚纳摩尔抑制。
图10C描绘化合物9对三阴性乳腺癌(TNBC)血清中CD73活性的亚纳摩尔抑制。
图10D描绘化合物9对食道癌血清中CD73活性的亚纳摩尔抑制。
图11描绘肿瘤组织和正常组织中CD73的归一化mRNA表达水平。
图12A描绘EG7肿瘤模型中使用单剂化合物9和与多西他赛(docetaxel)的组合疗法对肿瘤体积的缩减。
图12B至图12E描绘肿瘤体积的缩减的个别复制。
图12B显示媒介物。图12C是化合物9。图12D是多西他赛。图12E是化合物9+多西他赛。
图13A描绘化合物9减缓已形成EG7肿瘤的生长。
图13B至图13D描绘肿瘤生长的减缓的个别复制。
图13B是媒介物。图13C是在第1天开始给药的化合物9。图13D是在第6天开始的化合物9。
具体实施方式
定义
除非另外定义，否则本文使用的所有技术和科学术语都具有本公开所属领域的技术人员通常理解的含义。以下参考文献为本领域技术人员提供本公开中所用术语中的许多术语的一般定义：Singleton等人,Dictionary of Microbiology and Molecular Biology(第2版1994)；The Cambridge Dictionary of Science and Technology(Walker编,1988)；The Glossary of Genetics,第5版,R.Rieger等人(编),Springer Verlag(1991)；以及Hale和Marham,The Harper Collins Dictionary of Biology(1991)。除非另外规定，否则如本文所用的以下术语具有下文归属于所述术语的含义。
在一些实施方案中，化学结构用相应化学名称公开。在存在冲突的情况下，以化学结构为准决定含义，而非名称。
在本公开中，“包含”、“含有”和“具有”等可具有美国专利法中归属于所述术语的含义并且可意指“包括”等；“基本上由……组成”或“基本上组成”也具有美国专利法中归属于其的含义并且所述术语是开放性的，允许存在超过所述的内容，只要所述内容的基本或新颖特征不会因存在超过所述的内容而有实质性改变即可，但所述术语不包括现有技术实施方案。
除非明确陈述或从上下文显而易见，否则如本文所用的术语“或”应理解为包括性的。除非明确陈述或从上下文显而易见，否则如本文所用的术语“一”和“所述”应理解是单数或复数。
术语“酰基”是本领域中公认的并且是指由通式烃基C(O)-、优选烷基C(O)-表示的基团。
术语“酰胺基”是本领域中公认的并且是指被酰基取代的氨基，并且可例如由式烃基C(O)NH-表示。
术语“酰氧基”是本领域中公认的并且是指由通式烃基C(O)O-、优选烷基C(O)O-表示的基团。
术语“烷氧基”是指与氧连接的烷基，优选低级烷基。代表性烷氧基包括甲氧基、乙氧基、丙氧基、叔丁氧基等。
术语“烷氧基烷基”是指被烷氧基取代的烷基并且可由通式烷基-O-烷基表示。
如本文所用，术语“烯基”是指含有至少一个双键的脂族基团并且旨在包括“未被取代的烯基”和“被取代的烯基”，后者是指具有置换烯基的一个或多个碳上的氢的取代基的烯基部分。这样的取代基可存在于一个或多个包括或不包括于一个或多个双键中的碳上。此外，这样的取代基包括如下文所论述的关于烷基所涵盖的所有取代基，除非稳定性不允许。举例来说，涵盖烯基被一个或多个烷基、碳环基、芳基、杂环基或杂芳基取代。
“烷基”或“烷烃”是完全饱和的直链或支链的非芳族烃。通常，除非另外定义，否则直链或支链的烷基具有1至约20个碳原子，优选1至约10个碳原子。直链和支链的烷基的实例包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、己基、戊基和辛基。C1-C6直链或支链烷基也称为“低级烷基”。
此外，如整个本说明书、实施例和权利要求书所用的术语“烷基”(或“低级烷基”)意在包括“未被取代的烷基”和“被取代的烷基”两者，后者是指具有置换烃主链的一个或多个碳上的氢的取代基的烷基部分。如果未另外规定，则这样的取代基可包括例如卤素、羟基、羰基(例如羧基、烷氧羰基、甲酰基或酰基)、硫羰基(例如硫酯、硫乙酸酯或硫甲酸酯)、烷氧基、磷酰基、磷酸酯基、膦酸酯基、亚膦酸酯基、氨基、酰胺基、脒、亚胺、氰基、硝基、叠氮基、硫氢基、烷硫基、硫酸酯基、磺酸酯基、胺磺酰基、磺酰胺基、磺酰基、杂环基、芳烷基或者芳族或杂芳族部分。本领域技术人员应理解，烃链上被取代的部分本身在适当时可被取代。举例来说，被取代烷基的取代基可包括氨基、叠氮基、亚氨基、酰胺基、磷酰基(包括膦酸酯基和亚膦酸酯基)、磺酰基(包括硫酸酯基、磺酰胺基、胺磺酰基和磺酸酯基)和甲硅烷基的被取代和未被取代的形式，以及醚、烷硫基、羰基(包括酮、醛、羧酸酯和酯)、-CF3、-CN等。下文描述示例性取代的烷基。环烷基可进一步被烷基、烯基、烷氧基、烷硫基、氨基烷基、被羰基取代的烷基、-CF3、-CN等取代。
术语“Cx-y”在与例如酰基、酰氧基、烷基、烯基、炔基或烷氧基的化学部分结合使用时意在包括链中含有x至y个碳的基团。举例来说，术语“Cx-y烷基”是指链中含有x至y个碳的被取代或未被取代的饱和烃基，包括直链烷基和支链烷基，包括卤烷基，例如三氟甲基和2,2,2-三氟乙基等。C0烷基在基团位于末端位置时是指氢，位于内部时是指键。术语“C2-y烯基”和“C2-y炔基”是指被取代或未被取代的不饱和脂族基团，其长度和可能的取代与上文所描述的烷基类似，但分别含有至少一个双键或三键。
如本文所用，术语“烷氨基”是指被至少一个烷基取代的氨基。
如本文所用，术语“烷硫基”是指被烷基取代的硫醇基并且可由通式烷基S-表示。
如本文所用，术语“炔基”是指含有至少一个三键的脂族基团并且意在包括“未被取代的炔基”和“被取代的炔基”两者，后者是指具有置换炔基的一个或多个碳上的氢的取代基的炔基部分。这样的取代基可存在于一个或多个包括或不包括于一个或多个三键中的碳上。此外，这样的取代基包括如上文所论述的关于烷基所涵盖的所有取代基，除非稳定性不允许。举例来说，涵盖炔基被一个或多个烷基、碳环基、芳基、杂环基或杂芳基取代。
如本文所用，术语“酰胺”是指基团
其中每个R30独立地表示氢或烃基，或者两个R30与其所连接的N原子一起完成环结构中具有4至8个原子的杂环。
术语“胺”和“氨基”是本领域中公认的并且是指未被取代和被取代的胺及其盐，例如可由下式表示的部分
其中每个R31独立地表示氢或烃基，或者两个R31与其所连接的N原子一起完成环结构中具有4至8个原子的杂环。如本文所用，术语“氨基烷基”是指被氨基取代的烷基。
如本文所用，术语“芳烷基”是指被芳基取代的烷基。
如本文所用，术语“芳基”包括被取代或未被取代的单环芳族基团，其中环的每个原子是碳。优选地，所述环是5元至7元环、更优选6元环。术语“芳基”还包括具有两个或更多个环的多环体系，其中两个或更多个碳为两个邻接环所共用，其中至少一个环是芳族环，例如其他环可为环烷基、环烯基、环炔基、芳基、杂芳基和/或杂环基。芳基包括苯、萘、菲、酚、苯胺等。
术语“氨基甲酸酯基”是本领域中公认的并且是指基团
其中R32和R33独立地表示氢或烃基，例如烷基，或者R32和R33与其间的原子一起完成环结构中具有4至8个原子的杂环。
如本文所用，术语“碳环”是指饱和或不饱和环，其中环的每个原子是碳。术语碳环包括芳族碳环与非芳族碳环两者。非芳族碳环包括：环烷烃环，其中所有碳原子都是饱和的；和环烯烃环，其含有至少一个双键。
术语“碳环”包括5-7元单环和8-12元双环。双环碳环的每个环可选自饱和、不饱和和芳族环。碳环包括双环分子，其中两个环之间共用一个、两个或三个或更多个原子。术语“稠合碳环”是指双环碳环，其中每个环与另一环共用两个相邻原子。稠合碳环的每个环可选自饱和、不饱和和芳族环。在一个示例性实施方案中，芳族环(例如苯基)可与饱和或不饱和环(例如环己烷、环戊烷或环己烯)稠合。饱和、不饱和和芳族双环的任何组合在价态容许时包括于碳环的定义中。示例性“碳环”包括环戊烷、环己烷、双环[2.2.1]庚烷、1,5-环辛二烯、1,2,3,4-四氢萘、双环[4.2.0]辛-3-烯、萘和金刚烷。示例性稠合碳环包括十氢萘、萘、1,2,3,4-四氢萘、双环[4.2.0]辛烷、4,5,6,7-四氢-1H-茚和双环[4.1.0]庚-3-烯。“碳环”可在能够带有氢原子的任何一个或多个位置处被取代。
“环烷基”是完全饱和的环烃。“环烷基”包括单环和双环。除非另外定义，否则通常，单环环烷基具有3至约10个碳原子，更通常3至8个碳原子。双环环烷基的第二个环可选自饱和、不饱和和芳族环。环烷基包括双环分子，其中两个环之间共用一个、两个或三个或更多个原子。术语“稠合环烷基”是指双环环烷基，其中每个环与另一环共用两个相邻原子。稠合双环环烷基的第二个环可选自饱和、不饱和和芳族环。“环烯基”是含有一个或多个双键的环烃。
如本文所用，术语“碳环基烷基”是指被碳环基团取代的烷基。
术语“碳酸酯基”是本领域中公认的并且是指基团-OCO2-R34，其中R34表示烃基。
如本文所用，术语“羧基”是指由式-CO2H表示的基团。
如本文所用，术语“酯”是指基团-C(O)OR35，其中R35表示烃基。
如本文所用，术语“醚”是指烃基通过氧连接于另一个烃基。因此，烃基的醚取代基可为烃基-O-。醚可为对称或不对称的。醚的实例包括(但不限于)杂环-O-杂环和芳基-O-杂环。醚包括“烷氧基烷基”，其可由通式烷基-O-烷基表示。
如本文所用，术语“卤基”和“卤素”意指卤素并且包括氯、氟、溴和碘。
如本文所用，术语“杂芳烷基(hetaralkyl/heteroaralkyl)”是指被杂芳基取代的烷基。
如本文所用，术语“杂烷基”是指具有碳原子和至少一个杂原子的饱和或不饱和链，其中不存在相邻的两个杂原子。
术语“杂芳基(heteroaryl/hetaryl)”包括被取代或未被取代的芳族单环结构，优选5元至7元环，更优选5元至6元环，其环结构包括至少一个杂原子，优选一个至四个杂原子，更优选一个或两个杂原子。术语“杂芳基”还包括具有两个或更多个环的多环体系，其中两个或更多个碳为两个邻接环所共用，其中环中的至少一者是杂芳族环，例如，其他环可为环烷基、环烯基、环炔基、芳基、杂芳基和/或杂环基。杂芳基包括例如吡咯、呋喃、噻吩、咪唑、噁唑、噻唑、吡唑、吡啶、吡嗪、哒嗪和嘧啶等。
如本文所用，术语“杂原子”意指除碳或氢以外的任何元素的原子。优选的杂原子是氮、氧和硫。
术语“杂环基”和“杂环”是指被取代或未被取代的非芳族环结构，优选3元至10元环，更优选3元至7元环，其环结构包括至少一个杂原子，优选一个至四个杂原子，更优选一个或两个杂原子。术语“杂环基”和“杂环”还包括具有两个或更多个环的多环体系，其中两个或更多个碳为两个邻接环所共用，其中至少一个环是杂环，例如其他环可为环烷基、环烯基、环炔基、芳基、杂芳基和/或杂环基。杂环基包括例如哌啶、哌嗪、吡咯烷、吗啉、内酯、内酰胺等。
如本文所用，术语“杂环基烷基”是指被杂环基团取代的烷基。
如本文所用，术语“烃基”是指经由碳原子键合的基团，所述基团不具有＝O或＝S取代基并且通常具有至少一个碳-氢键和主要是碳的主链，但可任选地包括杂原子。因此，出于本申请的目的，认为如甲基、乙氧基乙基、2-吡啶基和三氟甲基的基团是烃基，但例如乙酰基(其在连接的碳上具有＝O取代基)和乙氧基(通过氧而非碳连接)的取代基不是烃基。烃基包括(但不限于)芳基、杂芳基、碳环、杂环基、烷基、烯基、炔基及其组合。
如本文所用，术语“羟烷基”是指被羟基取代的烷基。
术语“低级”在与例如酰基、酰氧基、烷基、烯基、炔基或烷氧基的化学部分结合使用时，意在包括取代基中存在十个或更少个、优选六个或更少个非氢原子的基团。“低级烷基”例如是指含有十个或更少个、优选六个或更少个碳原子的烷基。在某些实施方案中，本文所定义的酰基、酰氧基、烷基、烯基、炔基或烷氧基取代基分别是低级酰基、低级酰氧基、低级烷基、低级烯基、低级炔基或低级烷氧基，不论其是单独出现还是与其他取代基组合出现，例如在羟烷基和芳烷基的叙述中(在这种情况下，例如，在计数烷基取代基中的碳原子时不计数芳基内的原子)。
术语“多环基”和“多环”是指两个或更多个环(例如环烷基、环烯基、环炔基、芳基、杂芳基和/或杂环基)，其中两个或更多个原子为两个邻接环所共用，例如所述环是“稠环”。多环的每个环可被取代或未被取代。在某些实施方案中，多环的每个环在环中含有3至10个、优选5至7个原子。
术语“甲硅烷基”是指连接有三个烃基部分的硅部分。
术语“被取代”是指部分具有置换主链的一个或多个碳上的氢的取代基。应理解，“取代”或“被取代”包括隐含条件：这种取代是根据被取代原子和取代基的容许价态，并且取代产生稳定化合物，例如其不会自发地例如通过重排、环化、消除等进行转化。如本文所用，术语“被取代”预期包括有机化合物的所有容许取代基。在一个宽泛方面，可容许的取代基包括有机化合物的非环状和环状、支链和无支链、碳环和杂环、芳族和非芳族取代基。对于适当的有机化合物，可容许的取代基可以是一个或多个并且相同或不同。出于本发明的目的，例如氮的杂原子可具有氢取代基和/或本文所描述的满足杂原子价态的有机化合物的任何可容许取代基。取代基可包括本文中所描述的任何取代基，例如卤素、羟基、羰基(例如，羧基、烷氧羰基、甲酰基或酰基)、硫羰基(例如，硫酯、硫乙酸酯或硫甲酸酯)、烷氧基、磷酰基、磷酸酯基、膦酸酯基、亚膦酸酯基、氨基、酰胺基、脒基、亚胺、氰基、硝基、叠氮基、硫氢基、烷硫基、硫酸酯基、磺酸酯基、胺磺酰基、磺酰胺基、磺酰基、杂环基、芳烷基或者芳族或杂芳族部分。本领域技术人员应理解，取代基本身在适当时可被取代。除非明确陈述为“未被取代”，否则在本文中提及化学部分应理解为包括被取代的变化形式。举例来说，提及“芳基”基团或部分隐含地包括被取代和未被取代的变化形式两者。
术语“硫酸酯基”是本领域中公认的并且是指基团-OSO3H或其药学上可接受的盐。
术语“磺酰胺”是本领域中公认的并且是指由以下通式表示的基团
其中R36和R37独立地表示氢或烃基，例如烷基，或者R36和R37与其间的原子一起完成环结构中具有4至8个原子的杂环。
术语“亚砜”是本领域中公认的并且是指基团-S(O)-R38，其中R38表示烃基。
术语“磺酸酯基”是本领域中公认的并且是指基团SO3H或其药学上可接受的盐。
术语“砜”是本领域中公认的并且是指基团-S(O)2-R39，其中R39表示烃基。
如本文所用，术语“硫烷基”是指被硫醇基团取代的烷基。
如本文所用，术语“硫酯”是指基团-C(O)SR40或-SC(O)R40，其中R10表示烃基。
如本文所用，术语“硫醚”等同于醚，其中氧被硫置换。
术语“脲”是本领域中公认的并且可由以下通式表示
其中R41和R42独立地表示氢或烃基，例如烷基，或者任一存在的R41与R42和其间的原子一起完成环结构中具有4至8个原子的杂环。
术语“保护基团”是指当连接至分子中的反应性官能团时遮蔽、降低或预防所述官能团的反应性的原子基团。通常，在合成过程期间可按需要选择性去除保护基团。保护基团的实例可见于Greene和Wuts,Protective Groups in Organic Chemistry,第3版,1999,John Wiley&Sons；NY和Harrison等人,Compendium of Synthetic Organic Methods,第1-8卷,1971-1996,John Wiley&Sons,NY。代表性氮保护基团包括(但不限于)甲酰基、乙酰基、三氟乙酰基、苯甲基、苯甲氧羰基(“CBZ”)、叔丁氧羰基(“Boc”)、三甲基甲硅烷基(“TMS”)、2-三甲基甲硅烷基-乙磺酰基(“TES”)、三苯甲基以及被取代的三苯甲基、烯丙氧基羰基、9-芴基甲氧羰基(“FMOC”)、硝基-藜芦基氧基羰基(“NVOC”)等。代表性羟基保护基团包括(但不限于)羟基被酰基化(酯化)或烷基化的基团，例如苯甲基和三苯甲基醚，以及烷基醚、四氢吡喃基醚、三烷基甲硅烷基醚(例如TMS或TIPS基团)、二醇醚如乙二醇和丙二醇衍生物以及烯丙基醚。
在某些实施方案中，本发明化合物可为外消旋的。在某些实施方案中，本发明化合物可增浓一种对映异构体。举例来说，本发明化合物可具有大于约30％ee、约40％ee、约50％ee、约60％ee、约70％ee、约80％ee、约90％ee或甚至约95％或更大ee。在某些实施方案中，本发明化合物可具有超过一个立构中心。在某些这样的实施方案中，本发明化合物可增浓一种或多种非对映异构体。举例来说，本发明化合物可具有大于约30％de、约40％de、约50％de、约60％de、约70％de、约80％de、约90％de或甚至约95％或更大de。
在某些实施方案中，治疗性制剂可增浓以主要提供化合物(例如式(I))的一种对映异构体。对映异构性增浓混合物可包含例如至少约60摩尔％或更优选至少约75摩尔％、约90摩尔％、约95摩尔％或甚至约99摩尔％的一种对映异构体。在某些实施方案中，增浓一种对映异构体的化合物基本上不含其他对映异构体，其中基本上不含意指所讨论的物质与例如组合物或化合物混合物中的其他对映异构体的量相比少于约10％或少于约5％或少于约4％或少于约3％或少于约2％或少于约1％。举例来说，如果组合物或化合物混合物含有约98克第一对映异构体与约2克第二对映异构体，则将其称为含有约98摩尔％第一对映异构体和仅约2％第二对映异构体。
在某些实施方案中，治疗性制剂可增浓以主要提供化合物(例如式(I))的一种非对映异构体。非对映异构性增浓混合物可包含例如至少约60摩尔％或更优选至少约75摩尔％、约90摩尔％、约95摩尔％或甚至约99摩尔％的一种非对映异构体。
术语预期施用的“受试者”包括(但不限于)人类(即，任何年龄组的男性或女性，例如小儿受试者(例如婴儿、儿童、青少年)或成年受试者(例如年轻人、中年人或老年人))和/或其他灵长类动物(例如食蟹猕猴、恒河猴)；哺乳动物，包括商业上相关的哺乳动物，例如牛、猪、马、绵羊、山羊、猫和/或狗；和/或鸟类，包括商业上相关的鸟类，例如鸡、鸭、鹅、鹌鹑和/或火鸡。优选的受试者是人类。
如本文所用，“预防”病症或疾患的治疗剂是指在统计样本中，相对于未治疗的对照样本降低病症或疾患在所治疗样本中的发生率，或者相对于未治疗的对照样本延迟病症或疾患的一种或多种症状的发作或降低病症或疾患的一种或多种症状的严重程度的化合物。
术语“治疗”包括预防性和/或治疗性治疗。术语“预防性或治疗性”治疗是本领域中公认的并且包括向受试者施用一种或多种所公开的组合物。如果在临床表现不良疾患(例如，受试者的疾病或其他不良状况)之前施用，则治疗是预防性的(即，其保护受试者免于患上不良疾患)，而如果在表现不良疾患之后施用，则治疗是治疗性的(即，其旨在减轻、改善或稳定现有不良疾患或其副作用)。
术语“前药”旨在涵盖在生理条件下转化成本发明的治疗活性剂(例如式(I)化合物)的化合物。制备前药的通用方法在于包括一个或多个在生理条件下水解产生所需分子的所选部分。在其他实施方案中，前药通过受试者的酶活性转化。举例来说，酯或碳酸酯(例如，醇或羧酸的酯或碳酸酯)是本发明的优选前药。在某些实施方案中，上文表示的制剂中式(I)化合物中的一些或全部可替换为相应合适前药，例如其中母体化合物中的羟基呈现为酯或碳酸酯或羧酸。
如本文所用，术语“有效量”是指足以实现所需生物学效果的量。如本文所用，“治疗有效量”是指足以实现所需治疗效果的量。举例来说，治疗有效量可指足以改善癌症的至少一种征象或症状的量。
对治疗方法的“反应”可尤其包括负性症状的减少或改善、疾病或其症状的进展减慢、有益症状或临床结果增加、副作用减轻、疾病稳定、疾病部分或完全医治。
在一些实施方案中，本发明提供一种式(I)化合物：
或其药学上可接受的盐和/或前药，其中
Y是
Het是杂环基或杂芳基；
R1a选自H、卤基、羟基、氰基、叠氮基、氨基、C1-6烷基、羟基C1-6烷基、氨基-C1-6烷基、-O-C(O)-O-C1-6烷基、C1-6酰氧基、C1-6烷氧基、C2-6烯基和C2-6炔基；
R1b选自H、卤基、C1-6烷基、羟基-C1-6烷基、氨基-C1-6烷基、C2-6烯基和C2-6炔基；
R2a选自卤基、羟基、氰基、叠氮基、氨基、C1-6烷基、羟基-C1-6烷基、氨基-C1-6烷基、C1-6酰氧基、-O-C(O)-O-C1-6烷基、C1-6烷氧基、C2-6烯基和C2-6炔基；
R2b选自卤基、C1-6烷基、C2-6烯基和C2-6炔基，优选被取代或未被取代的C2炔基，最优选未被取代的C2炔基；
R3选自H和烷基；
R4选自H、烷基、CN、芳基、杂芳基、-C(O)OR9、-C(O)NR11R12、-S(O)2R10、-P(O)(OR11)(OR12)和-P(O)(OR11)(NR13R14)；
R5选自H、氰基、烷基、环烷基烷基、杂环基烷基、芳烷基、杂芳烷基和-C(O)OR9；
R6选自-C(O)OR9、-C(O)NR16R17和-P(O)(OR11)(OR12)；
R9独立地选自H、烷基、环烷基、环烷基烷基、杂环基、杂环基烷基、芳基、芳烷基、杂芳基和杂芳烷基；
R10独立地选自烷基、烯基、炔基、氨基、环烷基、环烷基烷基、杂环基、杂环基烷基、芳基、芳烷基、杂芳基和杂芳烷基；并且
每个R11和R12独立地选自H、烷基、环烷基、环烷基烷基、杂环基、杂环基烷基、芳基、芳烷基、杂芳基、杂芳烷基；或
R11和R12与其所连接的氮原子一起形成5元至7元杂环基；
R13是H或烷基；
R14是烷基或芳烷基；
每个R15独立地选自羟基、烷氧基、酰氧基和NR13R14；
每个R16和R17独立地选自H、羟基、烷基、环烷基、环烷基烷基、杂环基、杂环基烷基、芳基、芳烷基、杂芳基、杂芳烷基；或
R16和R17与其所连接的氮原子一起形成5元至7元杂环基。
在式I的某些优选的实施方案中，所包括化合物符合条款a)和b)；或a)和c)；
其中：
a)化合物不为/>
b)如果R4和R6各为-C(O)OH并且R5是在苯环上被杂环基或杂芳基取代基取代的苯甲基，则所述苯环取代基选自未被取代或被取代的吡咯烷基、哌嗪酮基、哌啶酮基、四氢嘧啶酮基、吡啶酮基和吡啶基；并且
c)如果R4是-C(O)OH或四唑基，R6是-C(O)OH，并且R5是在苯环上被第二苯环取代的苯甲基，则所述苯甲基苯环或所述第二苯环被-C(O)OR9取代，其中R9是H或烷基。
在一些实施方案中，本发明提供一种式(II)化合物：
或其药学上可接受的盐和/或前药，其中
Het是杂环基或杂芳基；
R1a选自H、卤基、羟基、氰基、叠氮基、氨基、C1-6烷基、羟基C1-6烷基、氨基-C1-6烷基、-O-C(O)-O-C1-6烷基、C1-6酰氧基、C1-6烷氧基、C2-6烯基和C2-6炔基；
R1b选自H、卤基、C1-6烷基、羟基-C1-6烷基、氨基-C1-6烷基、C2-6烯基和C2-6炔基；
R2a选自卤基、羟基、氰基、叠氮基、氨基、C1-6烷基、羟基-C1-6烷基、氨基-C1-6烷基、C1-6酰氧基、-O-C(O)-O-C1-6烷基、C1-6烷氧基、C2-6烯基和C2-6炔基；
R2b选自H、卤基、C1-6烷基、C2-6烯基和C2-6炔基；
R3选自H和烷基；
R4选自烷基、芳基、杂芳基、-C(O)OR9、-C(O)NR11R12、-S(O)2R10、-P(O)(OR11)(OR12)和-P(O)(OR11)(NR13R14)；
R5选自H、氰基、烷基、环烷基烷基、杂环基烷基、芳烷基、杂芳烷基和-C(O)OR9；
R6选自-C(O)OR9、-C(O)NR11R12和-P(O)(OR11)(OR12)；
R9独立地选自H、烷基、烯基、炔基、环烷基、环烷基烷基、杂环基、杂环基烷基、芳基、芳烷基、杂芳基和杂芳烷基；
R10独立地选自烷基、烯基、炔基、氨基、环烷基、环烷基烷基、杂环基、杂环基烷基、芳基、芳烷基、杂芳基和杂芳烷基；并且
每个R11和R12独立地选自H、烷基、环烷基、环烷基烷基、杂环基、杂环基烷基、芳基、芳烷基、杂芳基、杂芳烷基；或
R11和R12与其所连接的氮原子一起形成5元至7元杂环基；
R13是H或烷基；并且
R14是烷基或芳烷基；
其条件为a)、b)和c)；或a)、b)和d)；
a)化合物不为/> 并且
b)R2b选自卤基、C2-6烷基、C2-6烯基和C2-6炔基，优选被取代或未被取代的C2炔基，最优选未被取代的C2炔基；
c)如果R4和R6各为-C(O)OH并且R5是在苯环上被杂环基或杂芳基取代基取代的苯甲基，则所述苯环取代基选自未被取代或被取代的哌啶酮基、四氢嘧啶酮基、吡啶酮基和吡啶基；并且
d)如果R4是-C(O)OH或四唑基，R6是-C(O)OH，并且R5是在苯环上被第二苯环取代的苯甲基，则所述苯甲基苯环或所述第二苯环被-C(O)OR9取代，其中R9是H或烷基。
在某些优选的实施方案中：
a)化合物不为 并且/>
b)R2b选自卤基、C2-6烷基、C2-6烯基和C2-6炔基，优选被取代或未被取代的C2炔基，最优选未被取代的C2炔基；和以下中的任一者：
c)R5是在苯环上被选自以下的取代基取代的苯甲基：未被取代或被取代的哌啶酮基、四氢嘧啶酮基、吡啶酮基和吡啶基，或
d)R5是在苯环上被第二苯环取代的苯甲基，所述第二苯环被-C(O)OR9取代，其中R9是H或烷基。
以下段落描述式I或II化合物的各种实施方案，其可以符合如上文所定义的化学式的任何组合进行组合。
在某些实施方案中，R1a是H或羟基。在某些实施方案中，R1b是H或羟基。在其他实施方案中，R1a是羟基并且R1b是H。
在一些实施方案中，R2a是羟基或C1-6烷基。在某些实施方案中，R2b是C2-6烷基、C2-6烯基或C2-6炔基，优选被取代或未被取代的C2炔基，例如乙炔基。在某些优选的实施方案中，R2a是Me并且R2b是乙炔基。在一些实施方案中，R2a是羟基并且R2b是乙基或乙烯基。在其他优选的实施方案中，R2a是羟基并且R2b是乙炔基。在一些实施方案中，R2b是丙炔基、丁炔基、或未被取代或被取代的/>
在某些优选的实施方案中，R3是H。
在某些实施方案中，式(I)化合物具有以下结构：
在某些实施方案中，式(II)化合物具有以下结构：
在某些这样的实施方案中，R1a呈α-构型。举例来说，式(I)化合物可具有结构(IA)：
/>
此外，式(II)化合物可具有结构(IIAa)：
在替代实施方案中，R1a呈β-构型。在一些这样的实施方案中，式(I)化合物具有结构(IB)：
在一些这样的实施方案中，式(II)化合物具有结构(IIBa)：
在例如如上文所描述的式(I)化合物的其他实施方案中，R2a呈α-构型。举例来说，式(I)化合物可具有结构(IC)：
在其他优选的实施方案中，式(II)化合物具有结构(IICa)：
在替代实施方案中，R2a呈β-构型。在一些这样的实施方案中，式(I)化合物具有结构(ID)：
在其他优选的实施方案中，式(II)化合物具有结构(IIDa)：
在某些优选的实施方案中，式(I)化合物具有结构(IE)：
在其他优选的实施方案中，式(II)化合物具有结构(IIEa)：
/>
在特别优选的这些实施方案中，R1a是羟基并且R2a是羟基，并且R2b选自甲基、乙基、乙烯基和乙炔基，最优选乙炔基。在式(IE)化合物的最优选的实施方案中，R1a是羟基，R2a是羟基，并且R2b是乙炔基。在式(IIEa)化合物的一些优选的实施方案中，R1a是羟基，R2a是羟基，并且R2b是乙炔基。
在某些实施方案中，Y是
在某些实施方案中，R4选自-C(O)OR9、-C(O)NR11R12、-S(O)2R10和-P(O)(OR11)(OR12)。在一些实施方案中，R4是-C(O)OR9并且R9是H或烷基。在其他实施方案中，R4是-C(O)NR11R12。在某些实施方案中，每个R11和R12独立地选自H和烷基；或者R11和R12与其所连接的氮原子一起形成5元至7元杂环基。在其他实施方案中，R4是-S(O)2R10并且R10是烷基或芳基。
在一些实施方案中，R6是-C(O)OR9，并且R9是H或烷基，例如H或C1-6烷基。在其他实施方案中，R6是-C(O)NR11R12。在某些这样的实施方案中，每个R11和R12独立地选自H和烷基；或者R11和R12与其所连接的氮原子一起形成5元至7元杂环基。
在某些优选的实施方案中，R4和R6各为-C(O)OH，最优选其中R5是例如如下文更详细地论述的苯甲基。
在某些实施方案中，R5选自H、烷基、芳烷基和杂芳烷基。在某些这样的实施方案中，R5处的每个烷基、芳烷基和杂芳烷基未被取代或被一个或多个选自以下的取代基取代：卤基、烷基、烷氧基、羰基、氨基、酰胺基、环烷基、杂环基和杂芳基。在其他实施方案中，R5处的烷基、芳烷基和杂芳烷基上的取代基选自卤基、卤烷基、烷氧基、羰基、芳基、杂环基和杂芳基。在某些实施方案中，R5是例如在芳环上被5元至7元杂环基或5元至7元杂芳基取代的芳烷基。在某些特定实施方案中，R5选自H、甲基、乙基、-CH2-乙炔基和-CH2-乙烯基。在其他实施方案中，R5选自苯甲基、-CH2-吡啶基、-CH2-哒嗪基、-CH2-噁唑基、-CH2-噻吩基、-CH2-呋喃基、-CH2-噻唑基和-CH2-苯并噻唑基，优选苯甲基和-CH2-噻吩基。
在某些优选的实施方案中，R5是在苯环上(例如在对位)被杂环基或杂芳基取代基取代的苯甲基，优选地其中所述苯环取代基选自被取代的哌啶酮基、四氢嘧啶酮基、吡啶酮基和吡啶基。在一些实施方案中，苯环取代基是哌嗪酮基。在某些这样的实施方案中，哌啶酮基、四氢嘧啶酮基、吡啶酮基或吡啶基被烷基、羟烷基或烷氧基烷基中的一者或多者取代。
在某些实施方案中，R5是在芳环或杂芳环上具有对位取代基的芳烷基或杂芳烷基，所述对位取代基选自杂环基、杂芳基和芳基；并且
R2b是甲基、乙基或C2-6炔基。
在某些优选的实施方案中，R5是在苯环上(例如在4位)被以下各者取代的苯甲基：
在某些优选的实施方案中，R5是在苯环上(例如在4位)被以下各者取代的苯甲基：/>
在一些实施方案中，
表示/>/>
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在一些实施方案中，
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在一些实施方案中，Y是在某些实施方案中，每个R15是羟基。
在某些实施方案中，Het选自6元至10元芳基、5元至8元杂环基、5元至8元单环杂芳基或5元至10元双环杂芳基，并且可以是未被取代的或被一个或多个选自以下的取代基取代：卤基、烷基、卤烷基、烷氧基、羰基、氨基、酰胺基、烷硫基、烷氧羰基、环烷基、芳基、杂环基和杂芳基。在一些实施方案中，Het取代基选自卤基、卤烷基、氨基和杂环基。在某些实施方案中，Het是优选地经由杂环基环或杂芳环的氮原子连接至核心环的含氮杂环基或杂芳基。在一些实施方案中，Het是在其他实施方案中，Het是
在其他实施方案中，Het是
其中
Z是CH或N；
Ra选自H、卤基、羟基、烷基、噻吩基、-NR7R8、芳烷基、芳基和杂芳基，优选选自H、Cl、-NR7R8和苯基；
Rb选自卤基、烷基、卤烷基、羟烷基、烷硫基、酰胺基、羰基、酰胺基和杂芳基；
R7选自H、羟基、烷基、芳烷基、杂芳烷基、环烷基和杂环基；并且
R8是H或烷基；或
R7和R8与其所连接的氮原子一起形成4元至7元杂环基环。
在一些实施方案中，Het是
在某些实施方案中，Z是CH。在其他实施方案中，Z是N。
在某些实施方案中，Ra选自H、卤基、烷基、噻吩基、-NR7R8、芳基和杂芳基，优选选自H、Cl、-NR7R8和苯基。在一些实施方案中，Ra是-NR7R8。
在某些实施方案中，Rb选自卤基、烷基、羟烷基、卤烷基、酰胺基、羰基、酰胺基和杂芳基。在一些实施方案中，Rb选自Cl、-CF3、羰基和-CONH2。
在一些实施方案中，Het是
在一些实施方案中，R7选自H、烷基、芳烷基、杂芳烷基、环烷基和杂环基。在某些实施方案中，R7是烷基或环烷基，例如其中所述烷基或环烷基未被取代或被一个或多个选自以下的取代基取代：羟基、烷氧基、芳基、氨基和环烷基。在其他实施方案中，R7是芳烷基或杂芳烷基，例如其中所述芳烷基或杂芳烷基未被取代或被卤基或烷基取代。
在一些实施方案中，R8选自H、甲基和乙基。
在其他实施方案中，R7和R8与其所连接的氮原子一起形成杂环基环，其例如选自氮杂环丁烷基、吗啉基、吡咯烷基和氮杂环庚烷基。
使用方法
本文提供抑制细胞中的CD73的方法，所述方法包括使细胞与本发明化合物，例如式(I)化合物或其药学上可接受的盐接触。在某些实施方案中，细胞接触发生在有需要的受试者中，从而治疗由腺苷介导的疾病或病症。
此外，本文公开由腺苷介导的疾病或病症的治疗方法，所述方法包括施用本发明化合物，例如式(I)化合物或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，本文公开治疗癌症的方法，所述方法包括施用本发明化合物，例如式(I)化合物或其药学上可接受的盐。
腺苷作用于多种免疫细胞以诱导免疫抑制，并且增强腺苷水平的外核苷酸酶的免疫抑制作用也与寄生虫、真菌、细菌和病毒对哺乳动物细胞的感染增强相关。除免疫抑制作用以外，腺苷在调节心血管系统(作为血管扩张剂和心脏减压剂)、中枢神经系统(CNS)(诱导镇静、抗焦虑和抗癫痫作用)、呼吸系统(诱导支气管收缩)、肾脏(具有双相作用；低浓度下诱导血管收缩和在高剂量下诱导血管扩张)、脂肪细胞(抑制脂肪分解)和血小板(作为抗聚集剂)方面也具有作用。此外，腺苷也促进多种组织中的纤维化(产生过量基质)。因此，改良的靶向CD73的治疗将提供用于治疗除癌症以外的各种疾患，包括脑和心脏缺血性疾病，纤维化，免疫和炎症性病症(例如炎症性肠动力障碍)，神经、神经退行性和CNS病症和疾病(例如抑郁症、帕金森病)和睡眠障碍。
在一些实施方案中，由腺苷介导的疾病或病症选自脑缺血疾病、癌症、心脏缺血疾病、抑郁症、纤维化、免疫病症、发炎病症(例如炎症性肠动力障碍)、神经病症或疾病、神经退行性病症或疾病(例如帕金森病)、CNS病症和疾病以及睡眠障碍。
本文所描述的方法可用于治疗各种癌症，包括膀胱癌、骨癌、脑癌(包括神经胶母细胞瘤)、乳腺癌、心脏癌、宫颈癌、结肠癌、结肠直肠癌、食道癌、纤维肉瘤、胃癌、胃肠癌、头颈癌、卡波西氏肉瘤(Kaposi's sarcoma)、肾癌(包括肾细胞腺癌)、白血病、肝癌、肺癌(包括非小细胞肺癌、小细胞肺癌和粘液表皮样肺部癌瘤)、淋巴瘤、黑素瘤、骨髓瘤、卵巢癌(包括卵巢腺癌)、胰腺癌、阴茎癌、前列腺癌、睾丸生殖细胞癌、胸腺瘤和胸腺癌瘤。
在一些实施方案中，受试者具有选自乳腺癌、脑癌、结肠癌、纤维肉瘤、肾癌、肺癌、黑素瘤、卵巢癌和前列腺癌的癌症。在某些实施方案中，受试者具有选自乳腺癌、结肠癌、纤维肉瘤、黑素瘤、卵巢癌和前列腺癌的癌症。在其他实施方案中，受试者具有选自脑癌、乳腺癌、肾癌、肺癌、黑素瘤和卵巢癌的癌症。在一些实施方案中，受试者具有头颈部鳞状细胞癌、卵巢癌、乳腺癌或食道癌。在其他实施方案中，受试者具有胰腺癌、食道癌、胃癌、头颈癌、结肠癌、肺癌或肾癌。在其他实施方案中，受试者具有乳腺癌。在一些实施方案中，乳腺癌是乳房腺癌。在某些实施方案中，乳腺癌是三阴性乳腺癌。
在某些实施方案中，用于治疗或预防癌症的方法可通过一种或多种反应来证实，所述一种或多种反应例如增加的细胞凋亡、肿瘤生长的抑制、肿瘤转移的减少、肿瘤转移的抑制、微血管密度的降低、减少的新血管生成、肿瘤迁移的抑制、肿瘤消退和增加的受试者存活期。
在某些实施方案中，由腺苷介导的疾病或病症是由CD73活性介导的疾病或病症。在一些实施方案中，例如式(I)化合物的本发明化合物可用作CD73抑制剂。
在一些实施方案中，本文所描述的方法使用CD73抑制剂治疗或预防心血管疾病。编码CD73的突变基因导致下肢动脉和小关节囊的大面积钙化，引起心血管疾病的风险增加(Hilaire等人,N.Engl.J.Med.,364(5):432-442,2011)。
在一些实施方案中，本文所公开的方法使用CD73抑制剂治疗或预防癌症。CD73小干扰RNA和抗CD73单克隆抗体显示在治疗或预防癌症方面的显著作用(Antonioli等人,Nat.Rev.Cancer,13:842-857,2013)。CD73表达与癌细胞迁移、侵袭和粘附于细胞外基质(ECM)的能力之间存在紧密相关性(Antonioli 2013；Antonioli等人,Trends Cancer,2(2):95-109,2016)。
在一些实施方案中，通过CD73抑制剂治疗或预防癌症可通过一种或多种选自活化、克隆增殖和肿瘤特异性T细胞归巢的反应证实(Antonioli 2016)。在其他实施方案中，本文所公开的方法增加效应T淋巴细胞(例如溶胞效应T淋巴细胞)的数目。
组合治疗
在一些实施方案中，治疗或预防癌症的方法可包括联合一种或多种其他化学治疗剂施用CD39抑制剂。在一个实施方案中，CD73抑制剂是本发明化合物，例如式(I)化合物。其他化学治疗剂可包括CD73特异性单克隆抗体，其由于增加总体免疫系统活性(较低T调节功能和较高T效应功能等)而增强其他抗体和疗法的作用(Antonioli 2016)。
在某些实施方案中，治疗或预防癌症的方法可包括联合一种或多种其他化学治疗剂施用本发明化合物。
可与本发明化合物联合施用的化学治疗剂包括：1-氨基-4-苯氨基-9,10-二氧代-9,10-二氢蒽-2-磺酸酯(酸性蓝25)、1-氨基-4-[4-羟苯基-氨基]-9,10-二氧代-9,10-二氢蒽-2-磺酸酯、1-氨基-4-[4-氨基苯氨基]-9,10-二氧代-9,10-二氢蒽-2-磺酸酯、1-氨基-4-[1-萘氨基]-9,10-二氧代-9,10-二氢蒽-2-磺酸酯、1-氨基-4-[4-氟-2-羧基苯氨基]-9,10-二氧代-9,10-二氢蒽-2-磺酸酯、1-氨基-4-[2-蒽氨基]-9,10-二氧代-9,10-二氢蒽-2-磺酸酯、ABT-263、阿法替尼二顺丁烯二酸酯(afatinib dimaleate)、阿西替尼(axitinib)、胺鲁米特(aminoglutethimide)、安吖啶(amsacrine)、阿那曲唑(anastrozole)、APCP、天冬酰胺酶(asparaginase)、AZD5363、卡介苗(Bacillus Calmette-Guérin vaccine；bcg)、比卡鲁胺(bicalutamide)、博莱霉素(bleomycin)、硼替佐米(bortezomib)、β-亚甲基-ADP(AOPCP)、布舍瑞林(buserelin)、白消安(busulfan)、卡巴他赛(cabazitaxel)、卡博替尼(cabozantinib)、喜树碱(campothecin)、卡培他滨(capecitabine)、卡铂(carboplatin)、卡非佐米(carfilzomib)、卡莫司汀(carmustine)、色瑞替尼(ceritinib)、苯丁酸氮芥(chlorambucil)、氯喹(chloroquine)、顺铂(cisplatin)、克拉屈滨(cladribine)、氯屈膦酸盐(clodronate)、考比替尼(cobimetinib)、秋水仙碱(colchicine)、克卓替尼(crizotinib)、环磷酰胺(cyclophosphamide)、环丙孕酮(cyproterone)、阿糖胞苷(cytarabine)、达卡巴嗪(dacarbazine)、放线菌素D(dactinomycin)、道诺霉素(daunorubicin)、脱甲氧基绿胶霉素(demethoxyviridin)、地塞米松(dexamethasone)、二氯乙酸盐(dichloroacetate)、双烯雌酚(dienestrol)、己烯雌酚(diethylstilbestrol)、多西他赛(docetaxel)、多柔比星、表柔比星(epirubicin)、艾瑞布林(eribulin)、埃罗替尼(erlotinib)、雌二醇(estradiol)、雌氮芥(estramustine)、依托泊苷(etoposide)、依维莫司(everolimus)、依西美坦(exemestane)、非格司亭(filgrastim)、氟达拉滨(fludarabine)、氟氢可的松(fludrocortisone)、氟尿嘧啶(fluorouracil)、氟甲睾酮(fluoxymesterone)、氟他胺(flutamide)、吉非替尼(gefitinib)、吉西他滨(gemcitabine)、金雀异黄素(genistein)、戈舍瑞林(goserelin)、GSK1120212、羟基脲、伊达比星(idarubicin)、异环磷酰胺(ifosfamide)、伊马替尼(imatinib)、干扰素、伊立替康(irinotecan)、伊沙匹隆(ixabepilone)、来那度胺(lenalidomide)、来曲唑(letrozole)、甲酰四氢叶酸(leucovorin)、亮丙立德(leuprolide)、左旋咪唑(levamisole)、洛莫司汀(lomustine)、氯尼达明(lonidamine)、甲氮芥(mechlorethamine)、甲羟孕酮(medroxyprogesterone)、甲地孕酮(megestrol)、美法仑(melphalan)、巯基嘌呤(mercaptopurine)、美司钠(mesna)、二甲双胍(metformin)、甲氨蝶呤(methotrexate)、米替福新(miltefosine)、丝裂霉素(mitomycin)、米托坦(mitotane)、米托蒽醌(mitoxantrone)、MK-2206、突变霉素(mutamycin)、N-(4-胺磺酰基苯基硫胺甲酰基)特戊酰胺、NF279、NF449、尼鲁胺(nilutamide)、诺考达唑(nocodazole)、奥曲肽(octreotide)、奥拉帕尼(olaparib)、奥沙利铂(oxaliplatin)、太平洋紫杉醇(paclitaxel)、帕米膦酸盐(pamidronate)、帕唑帕尼(pazopanib)、培美曲塞(pemexetred)、喷司他汀(pentostatin)、哌立福新(perifosine)、PF-04691502、普卡霉素(plicamycin)、泊利度胺(pomalidomide)、卟吩姆(porfimer)、PPADS、丙卡巴肼(procarbazine)、槲皮素(quercetin)、雷替曲塞(raltitrexed)、雷莫芦单抗(ramucirumab)、活性蓝2、利妥昔单抗(rituximab)、罗洛茶碱(rolofylline)、罗米地辛(romidepsin)、芦卡帕尼(rucaparib)、司美替尼(selumetinib)、西罗莫司(sirolimus)、2,4-二硝基苯磺酸钠、索拉非尼(sorafenib)、链脲霉素(streptozocin)、舒尼替尼(sunitinib)、苏拉明(suramin)、他拉唑帕尼(talazoparib)、他莫昔芬(tamoxifen)、替莫唑胺(temozolomide)、替西罗莫司(temsirolimus)、替尼泊苷(teniposide)、睾固酮(testosterone)、沙立度胺(thalidomide)、硫鸟嘌呤(thioguanine)、噻替派(thiotepa)、二氯二茂钛、托那茶碱(tonapofylline)、拓扑替康(topotecan)、曲美替尼(trametinib)、曲妥珠单抗(trastuzumab)、维A酸(tretinoin)、维利帕尼(veliparib)、长春碱(vinblastine)、长春新碱(vincristine)、长春地辛(vindesine)、长春瑞宾(vinorelbine)和伏立诺他vorinostat)(SAHA)。在其他实施方案中，可与本发明化合物联合施用的化学治疗剂包括：ABT-263、地塞米松、5-氟尿嘧啶、PF-04691502、罗米地辛和伏立诺他(SAHA)。在其他实施方案中，可与本发明化合物联合施用的化学治疗剂包括：1-氨基-4-苯氨基-9,10-二氧代-9,10-二氢蒽-2-磺酸酯(酸性蓝25)、1-氨基-4-[4-羟苯基-氨基]-9,10-二氧代-9,10-二氢蒽-2-磺酸酯、1-氨基-4-[4-氨基苯氨基]-9,10-二氧代-9,10-二氢蒽-2-磺酸酯、1-氨基-4-[1-萘氨基]-9,10-二氧代-9,10-二氢蒽-2-磺酸酯、1-氨基-4-[4-氟-2-羧基苯氨基]-9,10-二氧代-9,10-二氢蒽-2-磺酸酯、1-氨基-4-[2-蒽氨基]-9,10-二氧代-9,10-二氢蒽-2-磺酸酯、APCP、β-亚甲基-ADP(AOPCP)、卡培他滨、克拉屈滨、阿糖胞苷、氟达拉滨、多柔比星、吉西他滨、N-(4-胺磺酰基苯基硫胺甲酰基)特戊酰胺、NF279、NF449、PPADS、槲皮素、活性蓝2、罗洛茶碱、2,4-二硝基苯磺酸钠、苏拉明和托那茶碱。
已研发许多组合疗法用于治疗癌症。在某些实施方案中，本发明化合物(例如式(I)化合物)可与组合疗法联合施用。本发明化合物可联合施用的组合疗法的实例包括于表1中。
表1：用于治疗癌症的示例性组合疗法
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在一些实施方案中，可与例如式(I)化合物的本发明化合物联合施用的化学治疗剂包括CD39抑制剂。CD39或外核苷三磷酸酯二磷酸水解酶1(E-NTPD酶1或ENTPD1)是催化细胞外三磷酸腺苷(ATP)和/或ADP(二磷酸腺苷)转化成单磷酸腺苷(AMP)的膜结合酶。在一个实施方案中，CD39抑制剂是多金属氧酸盐-1(POM-1)。
在其他实施方案中，可与例如式(I)化合物的本发明化合物联合施用的化学治疗剂包括已知的CD73抑制剂。在一些实施方案中，CD73抑制剂是蒽醌衍生物(Baqi等人,J.Med.Chem.,53(5):2076-2086,2010，通过引用并入本文中)。在其他实施方案中，CD73抑制剂是磺酸衍生物(Raza等人,Med.Chem.,8:1133-1139,2012，通过引用并入本文中)。在其他实施方案中，CD73抑制剂选自1-氨基-4-苯氨基-9,10-二氧代-9,10-二氢蒽-2-磺酸酯(酸性蓝25)、1-氨基-4-[4-羟苯基-氨基]-9,10-二氧代-9,10-二氢蒽-2-磺酸酯、1-氨基-4-[4-氨基苯氨基]-9,10-二氧代-9,10-二氢蒽-2-磺酸酯、1-氨基-4-[1-萘氨基]-9,10-二氧代-9,10-二氢蒽-2-磺酸酯、1-氨基-4-[4-氟-2-羧基苯氨基]-9,10-二氧代-9,10-二氢蒽-2-磺酸酯、1-氨基-4-[2-蒽氨基]-9,10-二氧代-9,10-二氢蒽-2-磺酸酯、2,4-二硝基苯磺酸钠、N-(4-胺磺酰基苯基硫胺甲酰基)特戊酰胺、APCP、β-亚甲基-ADP(AOPCP)、PPADS、NF279、NF449、槲皮素、活性蓝2和苏拉明(Baqi 2010；Raza 2012)。
在某些实施方案中，例如式(I)化合物的本发明化合物与第二CD73抑制剂或CD39抑制剂的组合在治疗癌症和由腺苷介导的其他疾病或病症方面可具有协同效应。不希望受任何理论束缚，可观测到这种协同性是因为CD39和CD73通常针对不同细胞类型。低氧肿瘤微环境也诱导更高水平的CD39和CD73。
在一些实施方案中，可与例如式(I)化合物的本发明化合物联合施用的化学治疗剂包括腺苷受体抑制剂。在其他实施方案中，腺苷受体抑制剂选自罗洛茶碱、托那茶碱、ATL-444、伊曲茶碱(istradefylline)、MSX-3、普雷迪南(preladenant)、SCH-58,261、SCH-412,348、SCH-442,416、ST-1535、VER-6623、VER-6947、VER-7835、韦帕迪南(vipadenant)和ZM-241,385。在一些实施方案中，腺苷受体抑制剂靶向A2A受体，因为这种亚型主要表达于大部分免疫细胞中。
在其他实施方案中，可与例如式(I)化合物的本发明化合物联合施用的化学治疗剂包括基于核苷的药物。在某些实施方案中，基于核苷的药物选自吉西他滨、卡培他滨、阿糖胞苷、氟达拉滨和克拉屈滨。
在其他实施方案中，组合疗法包含例如式(I)化合物的本发明化合物与蒽环霉素联合施用。在其他实施方案中，组合疗法包含例如式(I)化合物的本发明化合物与多柔比星联合施用。已证实与抗CD73抗体和多柔比星组合治疗具有显著的化学治疗作用(Young等人,Cancer Discov.,4(8):1-10,2014，通过引用并入本文中)。
在某些实施方案中，组合疗法包含例如式(I)化合物的本发明化合物与A2A受体抑制剂和蒽环霉素联合施用。在一些实施方案中，蒽环霉素是多柔比星。已证实与抗CD73抗体、A2A受体抑制剂和多柔比星组合治疗可增加化学治疗作用(Antonioli 2013)。
在某些实施方案中，本发明的联合疗法包含与其他类型的化学治疗剂，例如肿瘤免疫剂联合施用。癌细胞常常具有可由免疫系统识别的特定细胞表面抗原。因此，例如单克隆抗体的肿瘤免疫剂可选择性地结合于癌细胞抗原并且实现细胞死亡。其他肿瘤免疫剂可抑制肿瘤介导的对天然免疫反应的抑制或者活化免疫反应，因此促进免疫系统对肿瘤的识别。示例性抗体肿瘤免疫剂包括(但不限于)阿巴伏单抗(abagovomab)、阿达木单抗(adecatumumab)、阿托珠单抗(afutuzumab)、阿仑单抗(alemtuzumab)、麻安莫单抗(anatumomab mafenatox)、阿泊珠单抗(apolizumab)、博纳吐单抗(blinatumomab)、BMS-936559、卡妥索单抗(catumaxomab)、德瓦鲁单抗(durvalumab)、艾帕斯塔(epacadostat)、依帕珠单抗(epratuzumab)、吲哚莫德(indoximod)、奥英妥珠单抗(inotuzumabozogamicin)、伊特鲁单抗(intelumumab)、伊匹单抗(ipilimumab)、伊沙妥昔单抗(isatuximab)、拉立珠单抗(lambrolizumab)、MED14736、MPDL3280A、纳武单抗(nivolumab)、奥比珠单抗(obinutuzumab)、奥卡拉珠单抗(ocaratuzumab)、奥伐木单抗(ofatumumab)、奥拉他单抗(olatatumab)、派立珠单抗(pembrolizumab)、皮立珠单抗(pidilizumab)、利妥昔单抗(rituximab)、替西单抗(ticilimumab)、萨马里珠单抗(samalizumab)和曲美单抗(tremelimumab)。在一些实施方案中，抗体肿瘤免疫剂选自抗CD73单克隆抗体(mAb)、抗CD39 mAb、抗PD-1mAb和抗CTLA4 mAb。因此，在一些实施方案中，本发明的方法包含一种或多种肿瘤免疫剂例如上述剂的联合施用。
在一些实施方案中，组合疗法包含例如式(I)化合物的本发明化合物与抗PD-1疗法和抗CTLA4疗法联合施用。与抗CD73单克隆抗体(mAb)、抗PD-1mAb和抗CTLA4 mAb组合治疗显示显著化学治疗作用(Young 2014；Antonioli 2013)。
在一些实施方案中，组合疗法包含例如式(I)化合物的本发明化合物与抗PD-1疗法的联合施用。在某些实施方案中，组合疗法包含例如式(I)化合物的本发明化合物与奥沙利铂的联合施用。在其他实施方案中，组合疗法包含例如式(I)化合物的本发明化合物与多柔比星的联合施用。
在某些实施方案中，本发明化合物可与癌症治疗的非化学方法联合施用。在某些实施方案中，本发明化合物可与放射线疗法联合施用。在某些实施方案中，本发明化合物可与手术、热消融法、聚焦超声波疗法、低温疗法或这些的任何组合联合施用。
在某些实施方案中，本发明化合物可与一种或多种其他本发明化合物联合施用。此外，这类组合可与其他治疗剂、例如适合于治疗癌症、免疫疾病或神经疾病的其他剂、例如上文所鉴定的剂联合施用。在某些实施方案中，联合施用一种或多种额外化学治疗剂与本发明化合物提供协同效应。在某些实施方案中，联合施用一种或多种额外化学治疗剂提供累加效应。
药物组合物
在某些实施方案中，本发明提供一种适合用于人类患者的药物制剂，其包含上文所示化合物中的任一者(例如本发明化合物，例如式(I)化合物)和一种或多种药学上可接受的赋形剂。在某些实施方案中，药物制剂可用于治疗或预防如本文所描述的疾患或疾病。所公开的化合物中的任一者可用于制造用以治疗本文所公开的任何疾病或疾患的药物。
本发明的组合物和方法可用于治疗有需要的受试者。在某些实施方案中，受试者是哺乳动物，例如人类，或非人类哺乳动物。当向例如人类的受试者施用时，组合物或化合物优选地呈包含例如本发明化合物和药学上可接受的载体的药物组合物形式施用。药学上可接受的载体是本领域中众所周知的，并且包括例如水溶液(例如水或生理学缓冲盐水)，或其他溶剂或媒介物，例如二醇、丙三醇、油(例如橄榄油)或可注射有机酯。在一个优选的实施方案中，当这样的药物组合物用于人类施用、特别是用于侵入性施用途径(即避开经由上皮屏障传输或扩散的途径，例如注射或植入)时，水溶液不含热原质，或基本上不含热原质。可选择赋形剂例如以实现剂的延迟释放或选择性靶向一种或多种细胞、组织或器官。药物组合物可为单位剂型，例如片剂、胶囊(包括分散型胶囊和明胶胶囊)、颗粒剂、用于重新配制的冻干物、散剂、溶液、糖浆、栓剂、注射剂等。组合物也可存在于透皮递送系统(例如，皮肤贴剂)中。组合物也可存在于适合于表面施用的溶液(例如滴眼剂)中。
药学上可接受的载体可含有生理学上可接受的剂，其用于例如稳定化合物如本发明化合物、提高其溶解性或增加其吸收。这样的生理学上可接受的剂包括例如碳水化合物，例如葡萄糖、蔗糖或葡聚糖；抗氧化剂，例如抗坏血酸或谷胱甘肽；螯合剂；低分子量蛋白质；或其他稳定剂或赋形剂。药学上可接受的载体(包括生理学上可接受的剂)的选择例如取决于组合物的施用途径。制剂或药物组合物可以是自乳化药物递送系统或自微乳化药物递送系统。药物组合物(制剂)也可以是脂质体或其他聚合物基质，其中可并入例如本发明化合物。脂质体(例如，其包含磷脂或其他脂质)是生理学上可接受的并且可代谢的无毒载体，其可相对简单地制备和施用。
短语“药学上可接受”在本文中用于指在合理医学判断的范围内适合与受试者的组织接触使用而无过度毒性、刺激、过敏反应或其他问题或并发症，与合理的益处/风险比相匹配的那些化合物、物质、组合物和/或剂型。
如本文所用，短语“药学上可接受的载体”意指药学上可接受的物质、组合物或媒介物，例如液体或固体填充剂、稀释剂、赋形剂、溶剂或囊封物质。每个载体必须是“可接受的”，意味着与制剂的其他成分相容并且对受试者无害。可充当药学上可接受的载体的物质的一些实例包括：(1)糖，例如乳糖、葡萄糖和蔗糖；(2)淀粉，例如玉米淀粉和马铃薯淀粉；(3)纤维素及其衍生物，例如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素和乙酸纤维素；(4)粉末状黄蓍胶；(5)麦芽；(6)明胶；(7)滑石；(8)赋形剂，例如可可脂和栓剂蜡；(9)油，例如花生油、棉籽油、红花油、芝麻油、橄榄油、玉米油和大豆油；(10)二醇，例如丙二醇；(11)多元醇，例如丙三醇、山梨糖醇、甘露糖醇和聚乙二醇；(12)酯，例如油酸乙酯和月桂酸乙酯；(13)琼脂；(14)缓冲剂，例如氢氧化镁和氢氧化铝；(15)海藻酸；(16)无热原质水；(17)等渗盐水；(18)林格氏溶液(Ringer's solution)；(19)乙醇；(20)磷酸盐缓冲溶液；以及(21)药物制剂中所采用的其他无毒相容性物质。
可通过多种施用途径中的任一种向受试者施用药物组合物(制剂)，所述施用途径包括例如经口(例如水性或非水性溶液或悬浮液形式的大剂量药液、片剂、胶囊(包括分散型胶囊和明胶胶囊)、大丸剂、散剂、颗粒剂、用于施用于舌头的糊剂)；经由口腔粘膜吸收(例如舌下)；经肛门、经直肠或经阴道(例如呈子宫托(pessary)、乳膏或泡沫形式)；经肠胃外(包括例如以无菌溶液或混悬液形式进行肌肉内、静脉内、皮下或鞘内施用)；经鼻；腹膜内；皮下；透皮(例如呈施用于皮肤的贴剂形式)；和经表面(例如呈施用于皮肤的乳膏、软膏或喷雾形式或呈滴眼剂形式)。化合物也可被配制用于吸入。在某些实施方案中，化合物可简单地溶解或悬浮在无菌水中。适当施用途径和适合于其的组合物的细节可见于例如美国专利第6,110,973号、第5,763,493号、第5,731,000号、第5,541,231号、第5,427,798号、第5,358,970号和第4,172,896号以及其中所引用的专利中。
制剂可能适宜以单位剂型呈现并且可通过药剂学技术中众所周知的任何方法制备。可与载体物质组合以产生单一剂型的活性成分的量将根据所治疗的受试者、特定施用模式而变化。可与载体物质组合以制备单一剂型的活性成分的量一般将是产生治疗作用的化合物的量。通常，以百分比计，该量将在约1％至约99％，优选约5％至约70％，最优选约10％至约30％的活性成分的范围内。
制备这些制剂或组合物的方法包括使活性化合物(例如本发明化合物)与载体和任选地一种或多种辅助成分结合的步骤。一般来说，通过使本发明化合物与液体载体或细粉状固体载体或二者均匀且紧密地结合并且必要时接着使产物成形来制备制剂。
适合于经口施用的本发明制剂可呈胶囊(包括分散型胶囊和明胶胶囊)、扁囊剂、丸剂、片剂、糖锭(使用调味基质，通常是蔗糖和阿拉伯胶或黄蓍胶)、冻干物、散剂、颗粒剂的形式，或者呈水性或非水性液体中的溶液或混悬液的形式，或者呈水包油或油包水液体乳液的形式，或者呈酏剂或糖浆的形式，或者呈锭剂(使用惰性基质，例如明胶和丙三醇，或蔗糖和阿拉伯胶)的形式和/或呈漱口剂等形式，其各含有预定量的本发明化合物作为活性成分。组合物或化合物也可呈大丸剂、药糖剂或糊剂的形式施用。
为制备用于经口施用的固体剂型(胶囊(包括分散型胶囊和明胶胶囊)、片剂、丸剂、糖衣药丸、散剂、颗粒剂等)，将活性成分与一种或多种药学上可接受的载体(例如柠檬酸钠或磷酸氢钙)，和/或以下中任一者混合：(1)填充剂或增量剂，例如淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露糖醇和/或硅酸；(2)粘合剂，例如羧甲基纤维素、海藻酸盐、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖和/或阿拉伯胶；(3)保湿剂，例如丙三醇；(4)崩解剂，例如琼脂-琼脂、碳酸钙、马铃薯或木薯淀粉、海藻酸、某些硅酸盐和碳酸钠；(5)溶液阻滞剂，例如石蜡；(6)吸收加速剂，例如季铵化合物；(7)润湿剂，例如鲸蜡醇和丙三醇单硬脂酸酯；(8)吸附剂，例如高岭土和膨润土；(9)润滑剂，例如滑石、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、月桂基硫酸钠及其混合物；(10)复合剂，例如改性和未改性的环糊精；和(11)着色剂。在胶囊(包括分散型胶囊和明胶胶囊)、片剂和丸剂的情况下，药物组合物也可包含缓冲剂。也可使用例如乳糖(lactose/milk sugar)以及高分子量聚乙二醇等的赋形剂将类似类型的固体组合物用作软填充和硬填充明胶胶囊中的填充剂。
片剂可通过任选地与一种或多种辅助成分一起压缩或模制来制备。可使用粘合剂(例如明胶或羟丙基甲基纤维素)、润滑剂、惰性稀释剂、防腐剂、崩解剂(例如羟基乙酸淀粉钠或交联羧甲基纤维素钠)、表面活性剂或分散剂来制备压缩片剂。模制片剂可通过使利用惰性液体稀释剂润湿的粉末状化合物的混合物在合适的机器中模制来制备。
药物组合物的片剂和其他固体剂型(例如糖衣药丸、胶囊(包括分散型胶囊和明胶胶囊)、丸剂和颗粒剂)可任选地刻痕或制成具有包衣和外壳(例如肠溶衣和药物配制技术中众所周知的其他包衣)。它们也可使用例如不同比例的羟丙基甲基纤维素以提供所需释放特征、其他聚合物基质、脂质体和/或微球体来配制，以便提供其中的活性成分的缓慢或控制释放。它们可通过例如经由细菌截留过滤器过滤，或通过并入呈临用前可溶解于无菌水或一些其他无菌可注射介质中的无菌固体组合物形式的灭菌剂来灭菌。这些组合物还可任选地含有遮光剂并且可为任选地以延迟方式仅仅或优先在胃肠道某一部分中释放活性成分的组合物。可使用的包埋组合物的实例包括聚合物质和蜡。活性成分也可在适当时与上述赋形剂中的一种或多种一起呈微囊封形式。
适用于经口施用的液体剂型包括药学上可接受的乳液、用于重新配制的冻干物、微乳液、溶液、悬浮液、糖浆和酏剂。除活性成分以外，液体剂型可含有：本领域中常用的惰性稀释剂，例如水或其他溶剂；环糊精及其衍生物；增溶剂和乳化剂，例如乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苯甲醇、苯甲酸苯甲酯、丙二醇、1,3-丁二醇、油(特别是，棉籽油、花生油、玉米油、胚芽油、橄榄油、蓖麻油和芝麻油)、丙三醇、四氢糠醇、聚乙二醇和脱水山梨糖醇的脂肪酸酯；及其混合物。
除惰性稀释剂以外，口服组合物也可包括佐剂，例如润湿剂、乳化剂和悬浮剂、甜味剂、调味剂、着色剂、芳香剂和防腐剂。
除活性化合物以外，混悬液还可含有悬浮剂，例如乙氧基化异硬脂醇、聚氧乙烯山梨糖醇和脱水山梨糖醇酯、微晶纤维素、偏氢氧化铝、膨润土、琼脂和黄蓍胶以及其混合物。
用于经直肠、阴道或尿道施用的药物组合物的制剂可呈现为栓剂形式，其可通过将一种或多种活性化合物与一种或多种包含例如可可脂、聚乙二醇、栓剂蜡或水杨酸酯的合适无刺激性赋形剂或载体混合来制备，并且其在室温下为固体，但在体温下为液体，并且因此将在直肠或阴道腔中熔融并释放活性化合物。
用于施用至口腔的药物组合物的制剂可呈现为漱口剂或口腔喷雾或口腔软膏形式。
可替代地或另外，组合物可配制成经由导管、支架、导线或其他管腔内装置递送。经由这类装置递送可尤其适用于递送至膀胱、尿道、尿管、直肠或肠。
适于阴道施用的制剂也包括含有例如本领域中已知为适当的载体的子宫托、棉塞、乳膏、凝胶、糊剂、泡沫或喷雾制剂。
用于表面或透皮施用的剂型包括散剂、喷雾剂、软膏、糊剂、乳膏、洗剂、凝胶、溶液、贴剂和吸入剂。活性化合物可在无菌条件下与药学上可接受的载体和可能需要的任何防腐剂、缓冲剂或推进剂混合。
除活性化合物以外，软膏、糊剂、乳膏和凝胶还可含有赋形剂，例如动物和植物脂肪、油、蜡、石蜡、淀粉、黄蓍胶、纤维素衍生物、聚乙二醇、硅酮、膨润土、硅酸、滑石和氧化锌或其混合物。
除活性化合物以外，粉末和喷雾剂可含有赋形剂，例如乳糖、滑石、硅酸、氢氧化铝、硅酸钙和聚酰胺粉末或这些物质的混合物。喷雾剂可另外含有习用推进剂，例如氯氟烃和挥发性未取代的烃，例如丁烷和丙烷。
透皮贴剂具有提供本发明化合物向身体的受控递送的额外优势。这类剂型可通过将活性化合物溶解或分散在适当介质中来制备。也可使用吸收增强剂来增加化合物通过皮肤的流量。这种流量的速率可通过提供速率控制膜或使化合物分散在聚合物基质或凝胶中来控制。
眼用制剂、眼膏、散剂、溶液等也涵盖在本发明的范围内。示例性眼用制剂描述于美国公开第2005/0080056号、第2005/0059744号、第2005/0031697号和第2005/004074号以及美国专利第6,583,124号中，所述公开和专利的内容通过引用并入本文中。视需要，液体眼用制剂具有类似于泪液、水性液或玻璃液的特性或与这类液体相容。优选的施用途径是局部施用(例如表面施用，例如滴眼剂，或经由植入物施用)。
如本文所用，短语“肠胃外施用”和“经肠胃外施用”意指除肠内和表面施用以外，通常通过注射进行的施用模式，并且包括(但不限于)静脉内、肌肉内、动脉内、鞘内、囊内、眶内、心内、皮内、腹膜内、经气管、皮下、表皮下、关节内、囊下、蛛膜下、脊柱内和胸骨内注射和输注。
适合于肠胃外施用的药物组合物包含一种或多种活性化合物以及一种或多种药学上可接受的无菌等渗水性或非水性溶液、分散液、悬浮液或乳液，或者可在即将使用之前重新配制成无菌可注射溶液或分散液的无菌粉末，其可含有抗氧化剂、缓冲剂、抑菌剂、使制剂与预期接受者的血液等渗的溶质或悬浮剂或增稠剂。
可用于本发明的药物组合物中的合适水性和非水性载体的实例包括水、乙醇、多元醇(例如丙三醇、丙二醇、聚乙二醇等)及其合适混合物、植物油(例如橄榄油)和可注射有机酯(例如油酸乙酯)。适当流动性可例如通过使用包衣物质(例如卵磷脂)、在分散液的情况下通过维持所需粒度和通过使用界面活性剂来维持。
这些组合物也可含有佐剂，例如防腐剂、润湿剂、乳化剂和分散剂。可通过包括各种抗细菌剂和抗真菌剂，例如对羟基苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚山梨酸等来确保预防微生物作用。也可能需要在组合物中包括等渗剂如糖、氯化钠等。另外，可注射药物形式的延长吸收可通过包括延迟吸收的剂(例如单硬脂酸铝和明胶)来实现。
在一些情况下，为延长药物的作用，需要减缓从皮下或肌肉内注射的药物的吸收。这可通过使用水溶性差的结晶或非晶形物质的液体悬浮液来实现。药物的吸收速率则取决于其溶解速率，而溶解速率又可取决于晶体尺寸和结晶形式。或者，肠胃外施用的药物形式的延迟吸收是通过将药物溶解或悬浮在油性媒介物中来实现。
可注射储槽形式是通过以例如聚丙交酯-聚乙交酯的可生物降解聚合物形成目标化合物的微囊封基质而制备。根据药物与聚合物的比率和所用特定聚合物的性质而定，可控制药物释放的速率。其他可生物降解聚合物的实例包括聚(原酸酯)和聚(酸酐)。可注射储槽制剂也通过将药物截留于与身体组织相容的脂质体或微乳液中来制备。
为供本发明方法使用，活性化合物可原样或以含有例如0.1％至99.5％(更优选地0.5％至90％)的活性成分与药学上可接受的载体组合的药物组合物的形式施用。
还可通过可再装填或可生物降解装置提供引入方法。近年来已开发了各种缓释聚合物装置并对于药物(包括蛋白质生物药品)的受控递送进行了体内测试。包括可生物降解和不可降解聚合物的多种生物相容性聚合物(包括水凝胶)可用于形成在特定目标位点持续释放化合物的植入物。
药物组合物中活性成分的实际剂量水平可变化以获得有效实现针对特定患者、组合物和施用模式的所需治疗反应而对患者无毒性的活性成分量。
所选剂量水平将取决于多种因素，所述因素包括：所采用的特定化合物或化合物的组合或其酯、盐或酰胺的活性；施用途径；施用时间；所采用的特定化合物的排泄速率；治疗持续时间；与所采用的特定化合物组合使用的其他药物、化合物和/或物质；所治疗受试者的年龄、性别、体重、疾患、一般健康状况和先前病史；以及医学技术中众所周知的类似因素。
具有本领域的普通技术的医师或兽医可容易地确定和规定所需药物组合物的治疗有效量。举例来说，医师或兽医可以低于实现期望治疗作用所需的水平开始药物组合物或化合物给药，并且逐渐增加剂量直至实现所需效果。“治疗有效量”意指足以引起所需治疗作用的化合物浓度。通常理解，化合物的有效量将根据受试者的体重、性别、年龄和病史而变化。影响有效量的其他因素可包括(但不限于)受试者疾患的严重程度、所治疗的病症、化合物的稳定性和视需要与本发明化合物一起施用的另一类型的治疗剂。可通过多次施用药剂来递送较大总剂量。确定功效和剂量的方法是本领域技术人员已知的(Isselbacher等人,(1996)Harrison's Principles of Internal Medicine第13版,1814-1882，通过引用并入本文中)。
一般来说，本发明的组合物和方法中所使用的活性化合物的合适日剂量将是有效产生治疗作用的最低剂量的化合物量。这种有效剂量通常将取决于上文所描述的因素。
视需要，活性化合物的有效日剂量可任选地以单位剂型作为全天以适当时间间隔分开施用的一个、两个、三个、四个、五个、六个或更多个子剂量施用。在本发明的某些实施方案中，活性化合物可每天施用两次或三次。在优选的实施方案中，将每天一次施用活性化合物。
在某些实施方案中，给药遵循3+3设计。传统的3+3设计不需要将超出针对细胞毒性药物的毒性随剂量增加的经典假设的剂量-毒性曲线建模。这种基于规则的设计用三个患者的群组进行；第一群组以起始剂量治疗，基于从动物毒理学资料外推，认为起始剂量是安全的；并且后续群组以提前固定的递增剂量治疗。在一些实施方案中，式(I)化合物的三种剂量在经口约100mg至约1000mg，例如约200mg至约800mg，例如约400mg至约700mg，例如约100mg至约400mg，例如约500mg至约1000mg，并且进一步例如约500mg至约600mg的范围内。当不与食物一起服用时，给药可以是一天三次，或当与食物一起服用时，一天两次。在某些实施方案中，式(I)化合物的三种剂量在约400mg至约800mg，例如约400mg至约700mg，例如约500mg至约800mg，并且进一步例如约500mg至约600mg的范围内，一天两次。在某些优选的实施方案中，大于约600mg的剂量是一天给药两次。
如果群组中三个患者均未经历剂量限制性毒性，则另外三个患者将以下一更高剂量水平治疗。然而，如果前三个患者之一经历剂量限制性毒性，则另三个患者将以相同剂量水平治疗。剂量递增继续，直到三至六个患者的群组之中的至少两个患者经历剂量限制性毒性(即≥约33％患者在所述剂量水平下具有剂量限制性毒性)。II期试验的建议剂量常规地定义为仅低于该毒性剂量水平的剂量水平。
在某些实施方案中，给药时间表可以是通过IV，约40mg/m2至约100mg/m2，例如约50mg/m2至约80mg/m2，并且进一步例如约70mg/m2至约90mg/m2，持续4周周期中的3周。
在某些实施方案中，本发明化合物可单独施用或与另一类型的治疗剂联合施用。如本文所用，短语“联合施用”是指使得在先前施用的治疗化合物在体内仍然有效的同时施用第二化合物(例如两种化合物在受试者中同时有效，可包括两种化合物的协同效应)的两种或更多种不同治疗化合物的任何施用形式。举例来说，不同治疗化合物可呈同一制剂施用或呈分开的制剂同时或依序施用。在某些实施方案中，不同治疗化合物彼此可在一小时、12小时、24小时、36小时、48小时、72小时或一周内施用。因此，接受这类治疗的受试者可受益于不同治疗化合物的组合效应。
在某些实施方案中，本发明化合物与一种或多种额外治疗剂(例如一种或多种额外化学治疗剂)的联合施用的功效相对于本发明化合物(例如式I或Ia化合物)或一种或多种额外治疗剂的各单独施用有所提高。在某些这样的实施方案中，联合施用提供累加效应，其中累加效应是指单独施用本发明化合物和一种或多种额外治疗剂的各效应的总和。
本发明包括本发明化合物的药学上可接受的盐用于本发明的组合物和方法中的用途。在某些实施方案中，本发明涵盖的盐包括(但不限于)烷基、二烷基、三烷基或四烷基铵盐。在某些实施方案中，本发明涵盖的盐包括(但不限于)L-精胺酸、苯乙苄胺(benenthamine)、苄星(benzathine)、甜菜碱、氢氧化钙、胆碱、丹醇、二乙醇胺、二乙胺、2-(二乙氨基)乙醇、乙醇胺、乙二胺、N-甲基葡糖胺、海卓胺(hydrabamine)、1H-咪唑、锂、L-赖氨酸、镁、4-(2-羟乙基)吗啉、哌嗪、钾、1-(2-羟乙基)吡咯烷、钠、三乙醇胺、缓血酸胺和锌盐。在某些实施方案中，本发明涵盖的盐包括(但不限于)Na、Ca、K、Mg、Zn或其他金属盐。
药学上可接受的酸加成盐也可呈例如与水、甲醇、乙醇、二甲基甲酰胺等的各种溶剂化物的形式存在。也可制备这类溶剂化物的混合物。这类溶剂化物的来源可来自结晶的溶剂，其是制备或结晶的溶剂中所固有的或外加于这类溶剂中的。
润湿剂、乳化剂和润滑剂(例如月桂基硫酸钠和硬脂酸镁)以及着色剂、脱模剂、包衣剂、甜味剂、调味剂和芳香剂、防腐剂和抗氧化剂也可存在于组合物中。
药学上可接受的抗氧化剂的实例包括：(1)水溶性抗氧化剂，例如抗坏血酸、半胱胺酸盐酸盐、硫酸氢钠、偏亚硫酸氢钠、亚硫酸钠等；(2)油溶性抗氧化剂，例如抗坏血酸棕榈酸酯、丁基化羟基苯甲醚(BHA)、丁基化羟基甲苯(BHT)、卵磷脂、没食子酸丙酯、α-生育酚等；以及(3)金属螯合剂，例如柠檬酸、乙二胺四乙酸(EDTA)、山梨糖醇、酒石酸、磷酸等。
现已大体描述本发明，本发明将参考以下实施例更容易地理解，所述实施例仅为了说明本发明的某些方面和实施方案的目的而包括，并且不旨在限制本发明。
一般合成程序
如以下一般合成部分中所用的化合物编号1-129仅仅是指在该部分中的一般结构并且不适用于在本申请中别处所公开的化合物。本文公开的化合物可通过以下反应方案中所描绘的方法制备。
用于制备这些化合物的原料和试剂可从例如Aldrich Chemical Co.、Bachem等供货商购得，或者可通过本领域中众所周知的方法制备。所述方案仅仅说明可合成本文公开的化合物的一些方法，并且可对这些方案进行许多修改并向本公开所提及的POSITA提出所述修改。原料以及反应的中间体和最终产物视需要可使用常规技术分离和纯化，所述技术包括但不限于过滤、蒸馏、结晶、色谱法等，并且可使用常规方式表征，所述方式包括物理常数和频谱数据。
除非另外规定，否则本文所描述的反应在大气压下在约-78℃至约150℃的温度范围内进行。
通用方案
具有以下结构的式(I)化合物：
其中Z、Ru、Rv、Rw、Rx、R5和R9类似于变量Z、Ra、Rb、Rw、R5、R9并且Rx是如发明内容中所定义的-CH2P(O)(OR15)2或-OP(O)(OH)CH2P(O)(OR15)2，可如方案1中所说明和描述来合成：
方案1
由市售二醇A-1经由用例如TBDPS、TBDMS、Ac和Bz的合适基团选择性保护伯醇和接着氧化A-2中的仲醇(其中R”是H、烷基、TMS或杂环)来制备酮A-3。将相应乙炔基亲核试剂A-4例如格林纳试剂(Grignard reagent)或Li试剂立体选择性添加至酮A-3，得到炔丙醇A-5。使用稀释的酸水溶液，例如TFA、HCl、H2SO4、HClO4、PPTS、CSA或其他路易斯酸(Lewis acid)实现脱除缩丙酮化物保护基团。在例如吡啶和催化性4-DMAP的碱存在下用例如Ac2O、乙酰氯和BzCl的试剂使三醇A-6酰化，得到三酯，例如三乙酸酯A-7。在条件(N,O-双(三甲基甲硅烷基)-乙酰胺和TMSOTf)或(TfOH和DBU)下在溶剂(MeCN、二氯乙烷或甲苯)中进行供体A-7与受体A-8(例如2-氯腺嘌呤、6-氨基-2-氯腺嘌呤、2,6-二氯腺嘌呤、5,7-二氯-1H-咪唑并[4,5-b]吡啶、5-氯-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶、尿嘧啶、胸腺嘧啶、胞嘧啶或鸟嘌呤)之间进行糖基化，得到核苷产物A-9。在Ru是NH2的情况下，其在TEA和催化性4-DMAP存在下用Boc2O保护而呈N(Boc)2。除去A-9中的保护基团，在P是TBDMS或TBDPS基团的情况下用TBAF处理，得到伯醇A-10，然后在例如Rh2(OAc)4或Cu(OAc)2的催化剂存在下与重氮试剂A-11进行插入反应，从而得到A-12。在例如Cs2CO3、K2CO3、LiHMDS、DBU或NaH的碱存在下用例如烷基卤化物、三氟甲磺酸酯、甲苯磺酸酯或甲磺酸酯的亲电试剂A-13烷基化，得到A-14。最后通过例如LiOH、NaOH和KOH的碱的水溶液除去A-14中的酯基，得到呈式(Ia)的A-15。
或者，可通过在方案1的步骤3使用相应烷基或乙烯基锂和格林纳试剂使中间体A-5中3'位的炔基被烷基或乙烯基取代。
方案2
式(Ia)中的化合物也可根据方案2制备。可通过含例如TBAF或HF的试剂的THF选择性除去前体B-1中的合适保护基团，例如P为甲硅烷基(TBDPS或TBDMS)，同时保留例如Ac、Bz和MOM基团的P1保护基团。可使所得伯醇B-2在例如Rh2(OAc)4的金属催化剂存在下与重氮试剂A-11在例如苯、甲苯、DCM和二氯乙烷的溶剂中反应，得到中间体B-3。在例如K2CO3、Cs2CO3、LiHMDS、NaH和DBU的碱存在下用例如卤化物、三氟甲磺酸酯、甲苯磺酸酯或甲磺酸酯的亲电试剂A-13使B-3烷基化，得到中间体B-4。通过例如TFA、HCl、H2SO4或HClO4水溶液的酸处理在例如DCM、丙酮、THF或二噁烷的溶剂中除去B-4中的缩丙酮化物保护基团，得到二醇B-5。用例如Ac2O或乙酰氯的试剂在吡啶、TEA或DIPEA和催化性4-DMAP存在下使B-5酰化，得到呈糖基化供体形式的三乙酸酯B-6(针对P1＝OAc)。在例如[N,O-双(三甲基甲硅烷基)-乙酰胺和TMSOTf]或(TfOH和DBU)的条件影响下在溶剂(MeCN、二氯乙烷或DME)中使这种中间体B-6与糖基化受体杂环B-7，例如2-氯腺嘌呤、6-氨基-2-氯腺嘌呤、2,6-二氯腺嘌呤、5,7-二氯-1H-咪唑并[4,5-b]吡啶、5-氯-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶、尿嘧啶、胸腺嘧啶、胞嘧啶和鸟嘌呤反应，得到核苷中间体B-8。最后用LiOH、NaOH和KOH水溶液在例如THF、二噁烷、MeOH或EtOH的溶剂中处理来除去B-8中的酯保护基团，得到式(Ia)的所需最终产物。
方案3
式(Ia)中的化合物也可根据方案3制备。根据方案1制备的2,6-二氯腺嘌呤C-1可继续用于若干合成转化。前体1中的6-氯基团在例如DMF、THF、二噁烷、醇或NMP的溶剂中被例如胺、醇盐或硫醇盐的亲核试剂Ru-H(C-2)选择性亲核置换，得到中间体C-3。前体C-1也可与例如硼酸(C-4)、硼酸酯、锡试剂(C-5)或锌试剂(C-6)的相应试剂分别进行偶联反应，例如Suzuki、Stille或Negishi反应，得到中间体C-7。中间体C-3和C-7两者用LiOH、NaOH、KOH、NaOMe、NaOEt或KOEt水溶液在例如THF、二噁烷、MeOH或EtOH的溶剂中处理，得到式(Ia)的所需最终产物。
方案4
式(Ia)中的化合物也可根据方案4经由C-1制备。在这种方法中，用2,6-二氯嘌呤、TMSOTf和N,O-双(三甲基甲硅烷基)乙酰胺经由Vorbrüggen反应处理A-7，得到经保护的核苷D-2。从5'-羟基选择性除去叔丁基二苯基甲硅烷基部分，得到醇D-3。与所需被取代的酰基重氮试剂D-4偶联，得到被取代的核苷D-5。多种重氮试剂可用于该反应。一些实例包括其中Rw是CO2R9、SOR9、SO2R9、P(O)(OR9)2和CN并且R9如发明内容中所定义的那些实例。如果需要烷基取代基R5，则其可使用于如THF或DMF的极性非质子溶剂中的烷基化反应适宜地引入以得到关键中间体C-1，在所述反应中，使用例如R5-X(X＝卤离子、OTf、OMs或OTs)的亲核试剂与如碳酸铯的碱。可通过在例如EtOH、THF或二噁烷的溶剂中用多种胺D-6置换6位的氯来将例如胺的取代基添加至嘌呤碱，得到中间体D-7。最后通过使用利用例如氢氧化锂的碱的水解对D-7进行脱保护，得到式(1)的结构的目标化合物。
方案5
式(Ia)中的化合物也可根据方案5制备。使用例如4-碘苯甲基卤化物(Br、Cl或I)或相应OTf、OMs或OTs的亲电试剂E-1与例如K2CO3、Cs2CO3、NaH或LiHMDS的碱在如DMF或THF的溶剂中使来自上文方案2的前体B-3烷基化，产生中间体E-2，其可与本文所说明的各种硼酸，例如(2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)硼酸(E-3)偶联。使用各种烷基卤化物(A-13)在例如K2CO3、Cs2CO3、NaH或LiHMDS的碱存在下在如DMF和THF的溶剂中使所得吡啶酮产物E-4烷基化，得到E-5。通过在例如DCM、丙酮、二噁烷或THF的溶剂中用TFA、HCl、H2SO4或AcOH水溶液处理来去除E-5中的缩丙酮化物保护基团，得到二醇E-6，使用Ac2O或乙酰氯与催化量的4-DMAP和例如吡啶、TEA或DIPEA的碱在如DCM的溶剂中使所述二醇乙酰化，得到呈糖基化供体形式的端基差向异构混合物E-7。中间体E-7可与杂环受体2,6-二氯腺嘌呤(D-1)或从用合适的胺(D-7)置换D-1中的6-氯基团而形成的N-取代的6-氨基-2-氯腺嘌呤(E-9)反应。两种糖基化可在例如[(N,O-双(三甲基甲硅烷基)-乙酰胺和TMSOTf]或(TfOH和DBU)的活化条件下在溶剂(MeCN、二氯乙烷或甲苯)中在供体E-7与受体D-1或E-9之间进行，以分别提供相应核苷产物E-8或E-10。核苷E-8经由用各种胺(D-7)进行亲核置换而转化成E-10。最后，经由用LiOH、NaOH和KOH水溶液在例如THF、二噁烷、MeOH或EtOH的溶剂中处理而将其所有酯基脱保护而从E-10产生式(Ia)的所需化合物。
方案6
式(Ia)中的化合物也可根据方案6制备。在例如K2CO3、Cs2CO3、LiHMDS或NaH的碱存在下在如DMF或THF的合适溶剂中用具有各种烷基侧链(R5)的苯甲基卤化物F-4和前体B-3烷基化，产生中间体F-5。经由通过如前述方案所描述的脱保护(含TFA水溶液的DCM)和酰化(含Ac2O或乙酰氯的吡啶)从F-5进行两步转化来形成三乙酸酯F-7。F-7与例如2,6-二氯腺嘌呤(D-1)的各种受体之间在活化条件[(N,O-双(三甲基甲硅烷基)-乙酰胺和TMSOTf]或(TfOH和DBU)下在溶剂(MeCN、二氯乙烷或甲苯)中的糖基化提供核苷F-8，其在例如吡啶、TEA或DIPEA的碱存在下在如二噁烷、DMF或THF的适当溶剂中通过各种胺(F-9)转化成氨基类似物F-10。最后，通过在例如THF、二噁烷、MeOH或EtOH的溶剂中用LiOH、NaOH和KOH水溶液处理从F-10获得式(1)的所需分子。或者，也可直接从供体F-7与例如N-取代的6-氨基-2-氯腺嘌呤(F-11)的其他受体之间的糖基化产生中间体F-10。
经由五步转化从4-(((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-甲基)苯胺(F-1)制备所需苯甲基卤化物F-4。首先与异氰酸3-氯丙酯反应并接着在例如NaH、NaOH或LiHMDS的碱的影响下在如DMF或THF的溶剂中环化而从苯胺F-1形成环状脲环，产生F-2。然后通过用TBAF去除TBDMS基团而由中间体F-2产生F-3，并且通过在例如DCM或THF的溶剂中用CBr4和PPh3将伯醇转化成溴化物来继续产生最终产物。
或者，关键中间体F-5也根据方案7从前体B-3制备。在例如K2CO3或Cs2CO3的碱存在下在DMF中用例如4-硝基苯甲基溴化物的卤化物使前体B-3烷基化，得到硝基中间体，其然后用Fe于NH4Cl水溶液中还原成苯胺。在例如TEA的碱存在下在THF中用异氰酸3-氯丙酯从苯胺进行环状脲形成，并接着用例如NaH或LiHMDS的碱处理进行分子内环闭合。用例如A-13的亲电试剂实现N-烷基侧链的引入，得到关键中间体F-5。
方案7
式(Ib)可根据方案8制备。其中Rw是芳基或杂芳基的所需重氮试剂G-2可在例如Et3N和DBU的碱存在下在MeCN或二噁烷中用例如4-乙酰胺基苯磺酰基叠氮化物的合适磺酰基叠氮试剂从酯G-1来制备。经由通过例如Rh2(OAc)4的Rh或Cu催化剂在例如甲苯、DCM或二氯乙烷的溶剂中催化的插入反应使重氮试剂G-2与来自方案1的醇A-9偶联，得到产物G-3。在例如Cs2CO3、K2CO3、LiHMDS、DBU或NaH的碱存在下用例如烷基卤化物、三氟甲磺酸酯、甲苯磺酸酯或甲磺酸酯的亲电试剂A-13使G-3烷基化，得到G-4。最后通过例如LiOH、NaOH和KOH的碱的水溶液除去G-4中的酯基，得到式(Ib)的所需产物。
方案8
式(Ib)的化合物也可根据方案9制备。伯醇B-2可在例如Rh2(OAc)4的金属催化剂存在下在例如苯、甲苯、DCM或二氯乙烷的溶剂中与来自方案8的重氮试剂G-2反应，得到中间体H-1。在例如K2CO3、Cs2CO3、LiHMDS、NaH或DBU的碱存在下用例如卤化物、三氟甲磺酸酯、甲苯磺酸酯或甲磺酸酯的亲电试剂A-13使H-1烷基化，得到中间体H-2。通过在例如DCM、丙酮、THF或二噁烷的溶剂中用例如TFA、HCl、H2SO4、HClO4或CSA水溶液进行酸处理来除去H-2中的缩丙酮化物保护基团，得到二醇H-3。在吡啶、TEA或DIPEA和催化性4-DMAP存在下用例如Ac2O或乙酰氯的试剂使H-3酰化，得到呈糖基化供体形式的三乙酸酯H-4。在例如[N,O-双(三甲基甲硅烷基)-乙酰胺和TMSOTf]或(TfOH和DBU)的条件下在溶剂(MeCN、二氯乙烷或DME)中使该中间体H-4与糖基化受体杂环B-7如2-氯腺嘌呤、6-氨基-2-氯腺嘌呤、2,6-二氯腺嘌呤、5,7-二氯-1H-咪唑并[4,5-b]吡啶、5-氯-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶、尿嘧啶、胸腺嘧啶、胞嘧啶和鸟嘌呤反应，得到核苷中间体H-5。最后在例如THF、二噁烷、MeOH或EtOH的溶剂中用LiOH、NaOH和KOH水溶液处理来除去H-5中的酯保护基团，得到式(Ib)的所需最终产物。
方案9
式(Ic)中的化合物也可根据方案10制备。直接通过例如Ac2O和催化量的H2SO4的乙酰化试剂在AcOH中处理，或经由包括首先用TFA或其他酸的水溶液在DCM中处理而将缩丙酮化物基团脱保护并接着用例如Ac2O或乙酰氯的试剂使所得二醇I-3乙酰化的2步工艺，将其中R1是甲基(根据由Franchetti,P.等人,J.Med.Chem.2005,48,4983-4989报道的程序制备)或其他烷基、乙炔基(根据Hulpia,F.等人,Bioorg.Med.Chem.Lett.2016,26,1970-1972的程序制备)或其他炔基和乙烯基的叔醇I-2转化成I-4。在例如[N,O-双(三甲基甲硅烷基)-乙酰胺和TMSOTf]或(TfOH和DBU)的条件下在溶剂(MeCN、二氯乙烷或DME)中用例如描述于方案2中的杂环B-7(其中Ru是H、Cl、NH2、N-烷基)，例如2-氯腺嘌呤、6-氨基-2-氯腺嘌呤、2,6-二氯腺嘌呤、5,7-二氯-1H-咪唑并[4,5-b]吡啶、5-氯-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶、尿嘧啶、胸腺嘧啶、胞嘧啶和鸟嘌呤的杂芳族糖基受体使I-4糖基化，得到核苷中间体I-5。用例如TBAF的氟化物来源在THF中除去I-5中的甲硅烷基保护基团，得到伯醇I-6，其用LiOH或NaOH水溶液在例如THF、MeOH或EtOH的溶剂中进一步转化成三醇I-7。最后，用亚甲基双(膦酰二氯)和磷酸三甲酯、接着用碳酸三乙铵处理I-7，得到式(Ic)的所需最终产物。
方案10
式(Ic)中的化合物可根据方案11制备。在例如THF、DMF、二噁烷或NMP的溶剂中在例如TEA、DIPEA、NaH和Cs2CO3的碱存在下用例如三氟甲烷磺酸(二乙氧基磷酰基)甲酯或二乙基(碘甲基)膦酸酯的亲电试剂J-1使伯醇I-6(其中Ru＝Cl)烷基化，得到中间体J-2。经由在例如二噁烷、THF或DMF的溶剂中在例如TEA或DIPEA的碱存在下用其中R7和R8是H或烷基的R7R8NH(J-3)亲核置换J-2中的氯基，以在J-4中安装氨基。需要两步脱保护程序(TMSBr和LiOH或NaOH水溶液)来将J-4转化成式(Ic)的所需产物。
方案11
本领域技术人员将认识到，如以下实施例所示，原料和反应条件可变化，反应的顺序可改变，并且存在用于产生本发明所涵盖的化合物的额外步骤。在一些情况下，可能需要保护某些反应官能团来实现某些上述转化。一般来说，对这类保护基团的需求以及连接和除去这类基团所需的条件对于有经验的有机化学家将是显而易见的。本申请中所提及的包括专利在内的所有文章和参考文献的公开内容通过引用并入本文中。
本发明化合物的制备通过以下实施例进一步加以说明，所述实施例不应理解为将本发明的范围或精神限制于其中所描述的特定程序和化合物。
合成实施例
实施例1
合成2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氨基-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-苯甲基丙二酸
步骤1：
在15℃下在N2气氛下向(3aR,5R,6aS)-5-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-2,2-二甲基二氢呋喃并[2,3-d][1,3]间二氧杂环戊烯-6(3aH)-酮(10g，23.44mmol，1当量)于THF(100mL)中的混合物中添加乙炔基溴化镁(0.5M，328.19mL，7当量)。搅拌混合物16小时，然后添加另外的乙炔基溴化镁(0.5M，125mL，3当量)。再搅拌混合物3小时，然后用饱和NH4Cl水溶液(250mL)稀释并用EtOAc(3×250mL)萃取。将合并的有机层用盐水(250mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩至干燥。通过快速硅胶柱色谱法(石油醚:EtOAc＝1:0至4:1)纯化粗产物，得到呈黄色固体形式的(3aR,5R,6R,6aR)-5-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-6-乙炔基-2,2-二甲基-四氢呋喃并[2,3-d][1,3]间二氧杂环戊烯-6-醇(19.47g，92％产率)。
步骤2：
在0℃下向(3aR,5R,6R,6aR)-5-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-6-乙炔基-2,2-二甲基四氢呋喃并[2,3-d][1,3]间二氧杂环戊烯-6-醇(9.47g，20.92mmol，1当量)于DCM(100mL)中的溶液中添加H2O(10mL)和TFA(100mL)。在25℃下搅拌混合物1小时，然后用饱和NaHCO3水溶液淬灭至pH 7并且然后用DCM(2×300mL)萃取。将合并的有机层用盐水(200mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩至干燥。通过快速硅胶柱色谱法(石油醚:EtOAc＝1:0至0:1)纯化粗产物，得到呈黄色胶状物形式的(3R,4S,5R)-5-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-4-乙炔基四氢-呋喃-2,3,4-三醇(5.17g，60％产率)。
步骤3：
在15℃下向(3R,4S,5R)-5-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-4-乙炔基四氢呋喃-2,3,4-三醇(5.17g，12.53mmol，1当量)于吡啶(50mL)中的溶液中添加4-DMAP(4.59g，37.60mmol，3当量)和Ac2O(11.74mL，125.32mmol，10当量)。在15℃下搅拌混合物16小时，然后将H2O(500mL)添加至混合物。用EtOAc(3×200mL)萃取反应混合物。将合并的有机层用盐水(200mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩至干燥。通过快速硅胶柱色谱法(石油醚:EtOAc＝1:0至1:1)纯化粗产物，得到呈黄色胶状物形式的(3R,4R,5R)-三乙酸5-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-4-乙炔基四氢呋喃-2,3,4-三基酯(7.19g，79％产率)。
步骤4：
在0℃下向(3R,4R,5R)-三乙酸5-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-4-乙炔基四氢呋喃-2,3,4-三基酯(6.89g，12.79mmol，1当量)于MeCN(5mL)中的溶液中添加2-氯腺嘌呤(2.39g，14.07mmol，1.1当量)、DBU(5.78mL，38.37mmol，3当量)和TMSOTf(11.56mL，63.96mmol，5当量)。将混合物在0℃下搅拌0.5小时，并且然后在65℃下搅拌1小时，然后用饱和NaHCO3水溶液(500mL)稀释。用EtOAc(2×350mL)萃取水相。将合并的有机层用盐水(350mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩至干燥。通过快速硅胶柱色谱法(石油醚:EtOAc＝1:0至0:1)纯化粗产物，得到呈黄色固体形式的(2R,3R,4R,5R)-二乙酸5-(6-氨基-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-2-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-3-乙炔基四氢呋喃-3,4-二基酯(4.52g，44％产率)。
步骤5：
在20℃下向(2R,3R,4R,5R)-二乙酸5-(6-氨基-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-2-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-3-乙炔基四氢呋喃-3,4-二基酯(4.5g，6.94mmol，1当量)于DMF(50mL)中的溶液中添加TEA(4.83mL，34.71mmol，5当量)、4-DMAP(254mg，2.08mmol，0.3当量)和Boc2O(7.58g，34.71mmol，5当量)。在20℃下搅拌混合物1小时，然后将H2O(250mL)添加至混合物。用EtOAc(3×230mL)萃取反应混合物。将合并的有机层用盐水(250mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。通过快速硅胶柱色谱法(石油醚:EtOAc＝1:0至1:1)纯化粗产物，得到呈黄色泡沫形式的(2R,3R,4R,5R)-二乙酸5-(6-(双(叔丁氧基羰基)氨基)-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-2-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-3-乙炔基四氢呋喃-3,4-二基酯(3.26g，46％产率)。
步骤6：
在0℃下向(2R,3R,4R,5R)-二乙酸5-(6-(双(叔丁氧基羰基)氨基)-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-2-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-3-乙炔基四氢呋喃-3,4-二基酯(3.24g，3.82mmol，1当量)于THF(35mL)中的溶液中添加TBAF(1M，5.73mL，1.5当量)。在0℃下搅拌反应混合物1小时，然后用H2O(150mL)稀释。用EtOAc(3×130mL)萃取反应混合物。将合并的有机层用盐水(150mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。通过快速硅胶柱色谱法(石油醚:EtOAc＝1:0至1:2)纯化粗产物，得到呈黄色泡沫形式的(2R,3R,4R,5R)-二乙酸5-(6-N,N'-(双(叔丁氧基羰基)氨基)-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-2-(羟甲基)四氢呋喃-3,4-二基酯(1.51g，54％产率)。
步骤7：
在20℃下在N2气氛下向(2R,3R,4R,5R)-二乙酸5-(6-N,N'-(双(叔丁氧基羰基)氨基)-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-2-(羟甲基)四氢呋喃-3,4-二基酯(1.48g，2.43mmol，1当量)于甲苯(10mL)中的溶液中添加含Rh2(OAc)4(214mg，485.24umol，0.2当量)和重氮丙二酸二乙酯(903mg，4.85mmol，2当量)的甲苯(3mL)。在95℃下搅拌混合物2小时，得到绿色悬浮液，然后将其冷却至室温并浓缩至干燥。通过快速硅胶柱色谱法(石油醚:EtOAc＝1:0至3:1)纯化粗产物，得到呈黄色泡沫形式的2-(((2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(6-N,N'-(双(叔丁氧基羰基)氨基)-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基四氢呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸二乙酯(517mg，20％产率)。
步骤8：
在25℃下向2-(((2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(6-N,N'-(双(叔丁氧基羰基)氨基)-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基四氢呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸二乙酯(497.00mg，647.00umol，1当量)于DMF(5mL)中的溶液中添加K2CO3(178.84mg，1.29mmol，2当量)。搅拌反应混合物30min并接着添加苯甲基溴(221.32mg，1.29mmol，153.69uL，2当量)。在25℃下搅拌混合物15.5小时，然后将另外的K2CO3(100mg)和BnBr(100uL)添加至混合物中。在25℃下搅拌所得混合物24小时，然后将H2O(50mL)添加至反应物。用EtOAc(2×50mL)萃取反应混合物。将合并的有机层用盐水(50mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。通过快速硅胶柱色谱法(石油醚:EtOAc＝1:0至3:1)纯化粗产物，得到呈黄色泡沫形式的2-苯甲基-2-(((2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(6-(双(叔丁氧基羰基)氨基)-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-丙二酸二乙酯(266mg，37％产率)。
步骤9：
在0℃下向2-苯甲基-2-(((2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(6-(双(叔丁氧基羰基)氨基)-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-丙二酸二乙酯(266mg，309.92umol，1当量)于DCM(3mL)中的溶液中添加TFA(0.45mL)。在25℃下搅拌混合物16小时，然后用饱和NaHCO3水溶液处理至pH 7。用DCM(2×50mL)萃取反应混合物。将合并的有机层用盐水(50mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩，得到呈黄色泡沫形式的粗制2-苯甲基-2-(((2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(6-氨基-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基四氢呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸二乙酯(195mg)。
步骤10：
将粗制2-苯甲基-2-(((2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(6-氨基-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基四氢呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸二乙酯(195mg，296.33umol，1当量)于饱和NH3的MeOH溶液(3mL)中的混合物在10℃下搅拌16小时，然后将其直接浓缩至干燥。通过制备型TLC(EtOAc)纯化粗产物，得到呈黄色泡沫形式的2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氨基-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-苯甲基丙二酸二乙酯(91.7mg，49％产率)。
步骤11：
在10℃下向2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氨基-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-苯甲基丙二酸二乙酯(81mg，141.12umol，1当量)于EtOH(2mL)中的溶液中添加含LiOH.H2O(30mg，705.60umol，5当量)的H2O(0.2mL)。在50℃下搅拌混合物4小时，然后将其浓缩至干燥。将残余物溶解于H2O(50ml)中并用EtOAc(2×50mL)萃取。弃去有机层，并用1N HCl水溶液将水相酸化至pH为约2.5。用EtOAc(3×50mL)萃取水相。将合并的有机层用盐水(50mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩，得到呈白色固体形式的标题化合物(55.4mg，74％产率)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 8.39(s,1H),7.79(br s,2H),7.20(br d,J＝7.03Hz,2H),7.01-7.12(m,3H),5.82(d,J＝7.53Hz,1H),4.87(d,J＝7.78Hz,1H),4.16(dd,J＝5.27,2.51Hz,1H),3.99-4.07(m,2H),3.83(br d,J＝8.03Hz,1H),3.56(s,1H),3.25(dd,J＝6.78Hz,2H)；LC/MS[M+H]＝518.0。
实施例2
合成2-(((2S,3R,4R,5R)-5-(6-氨基-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-4-羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-苯甲基丙二酸
步骤1：
在0℃下向(2R,3R,4R,5R)-二乙酸5-(6-(双(叔丁氧基羰基)氨基)-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-2-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-3-乙炔基四氢呋喃-3,4-二基酯(5g，5.89mmol，1当量)中的溶液中添加2M NH3的MeOH溶液(50mL)。在25℃下搅拌反应混合物16小时，然后将其浓缩。通过快速硅胶柱色谱法(0-50％EtOAc/石油醚)纯化粗物质，得到呈黄色泡沫形式的(9-((2R,3R,4S,5R)-5-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-4-乙炔基-3,4-二羟基-四氢呋喃-2-基)-2-氯-9H-嘌呤-6-基)氨基甲酸叔丁酯(3.78g，90％产率)。
步骤2：
在0℃下在N2气氛下向(9-((2R,3R,4S,5R)-5-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)-甲基)-4-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)-2-氯-9H-嘌呤-6-基)氨基甲酸叔丁酯(3.78g，5.29mmol，1当量)于DCM(40mL)中的溶液中添加4-DMAP(258.63mg，2.12mmol，0.4当量)和TCDI(4.72g，26.46mmol，5当量)。在25℃下搅拌反应混合物16小时，然后将其浓缩。通过快速硅胶柱色谱法(0-33％EtOAc/石油醚)纯化粗物质，得到呈黄色泡沫形式的(9-((3aR,4R,6R,6aR)-6-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-6a-乙炔基-2-硫酮基四氢呋喃并[3,4-d][1,3]间二氧杂环戊烯-4-基)-2-氯-9H-嘌呤-6-基)氨基甲酸叔丁酯(1.4g，37％产率)。
步骤3：
在20-25℃下向(9-((3aR,4R,6R,6aR)-6-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)-甲基)-6a-乙炔基-2-硫酮基四氢呋喃并[3,4-d][1,3]间二氧杂环戊烯-4-基)-2-氯-9H-嘌呤-6-基)氨基甲酸叔丁酯(500mg，707.93umol，1当量)于甲苯(5mL)中的溶液中添加AIBN(11.62mg，70.79umol，0.1当量)。然后将反应混合物加热至60℃，并接着添加(n-Bu)3SnH(561.96uL，2.12mmol，3当量)。在60℃下搅拌反应混合物1.5小时，然后将其浓缩。通过快速硅胶柱色谱法(0-33％EtOAc/石油醚)纯化粗物质，得到呈白色泡沫形式的(9-((2R,3R,4R,5S)-5-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-4-乙炔基-3-羟基四氢-呋喃-2-基)-2-氯-9H-嘌呤-6-基)氨基甲酸叔丁酯(220mg，47％产率)。
步骤4：
在0℃下向(9-((2R,3R,4R,5S)-5-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)-甲基)-4-乙炔基-3-羟基四氢呋喃-2-基)-2-氯-9H-嘌呤-6-基)氨基甲酸叔丁酯(220mg，339.39umol，1当量)于DCM(1.4mL)中的溶液中添加TFA(0.7mL，9.45mmol，28当量)。在25℃下搅拌反应混合物1小时，然后用饱和NaHCO3水溶液(15mL)稀释并用DCM(3×5mL)萃取。将合并的有机层用盐水(10mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩，得到呈黄色泡沫形式的粗制(2R,3R,4R,5S)-2-(6-氨基-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-5-((((叔丁基二苯基-甲硅烷基))氧基)甲基)-4-乙炔基四氢呋喃-3-醇(260mg)。
步骤5：
在0℃下向(2R,3R,4R,5S)-2-(6-氨基-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-5-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-4-乙炔基四氢呋喃-3-醇(260mg，474.36umol，1当量，粗物质)于DMF(2.5mL)中的溶液中添加Boc2O(931.75mg，4.27mmol，9当量)、TEA(660.25uL，4.74mmol，10当量)和4-DMAP(5.80mg，47.44umol，0.1当量)。在25℃下搅拌反应混合物1.5小时，然后用H2O(20mL)稀释并用EtOAc(3×5mL)萃取。将合并的有机层用盐水(10mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩，得到呈橙色胶状物形式的粗制(2R,3R,4S,5S)-碳酸2-(6-(N,N'-双((叔丁氧基羰基)氨基)-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-5-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-4-乙炔基四氢呋喃-3-基酯叔丁酯(560mg)。
步骤6：
在0℃下向粗制(2R,3R,4S,5S)-碳酸2-(6-(N,N'-双((叔丁氧基羰基)氨基)-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-5-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-4-乙炔基四氢呋喃-3-基酯叔丁酯(560mg，660.02umol，1当量，粗制)于THF(6mL)中的溶液中添加含TBAF的THF(1M，1mL，1.52当量)。在0℃下搅拌反应混合物1小时。将反应混合物用H2O(10mL)稀释并用EtOAc(3×5mL)萃取。将合并的有机层用盐水(10mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。通过制备型TLC(石油醚:EtOAc＝2:1)纯化粗物质，得到呈黄色泡沫形式的(2R,3R,4S,5S)-碳酸2-(6-(N,N'-双((叔丁氧基羰基)氨基)-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-4-乙炔基-5-(羟甲基)四氢呋喃-3-基酯叔丁酯(93mg，经3个步骤为45％产率)。
步骤7：
在25℃下在N2气氛下向(2R,3R,4S,5S)-碳酸2-(6-(N,N'-双((叔丁氧基羰基)氨基)-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-4-乙炔基-5-(羟甲基)四氢呋喃-3-基酯叔丁酯(93mg，152.45umol，1当量)于甲苯(1mL)中的溶液中添加Rh2(OAc)4(6.74mg，15.24umol，0.1当量)。将反应混合物加热至90℃，并接着添加含2-重氮丙二酸二乙酯(85.14mg，457.34umol，3当量)的甲苯(1mL)。在90℃下搅拌反应混合物3小时，然后将其浓缩。通过硅胶快速柱色谱法纯化粗残余物，得到呈胶状物形式的2-(((2S,3S,4R,5R)-5-(6-(N,N'-双((叔丁氧基羰基)氨基)-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-4-((叔丁氧基羰基)氧基)-3-乙炔基四氢-呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸二乙酯(180mg)。
步骤8：
在20-25℃下向粗制2-(((2S,3S,4R,5R)-5-(6-(N,N'-双((叔丁氧基羰基)氨基)-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-4-((叔丁氧基羰基)氧基)-3-乙炔基四氢-呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸二乙酯(117.11mg，152.45umol，1当量)于DMF(3mL)中的溶液中添加K2CO3(421.39mg，3.05mmol，20当量)。搅拌反应混合物0.5小时并接着添加苯甲基溴(271.61uL，2.29mmol，15当量)。然后再搅拌反应物16小时，然后用H2O(20mL)稀释并用EtOAc(3×10mL)萃取。将合并的有机层用盐水(15mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。通过快速硅胶柱色谱法(石油醚:EtOAc＝1:0至2:1梯度)纯化粗物质，得到呈灰白色胶状物形式的2-(((2S,3S,4R,5R)-5-(6-(N,N'-双((叔丁氧基羰基)氨基)-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-4-((叔丁氧基羰基)氧基)-3-乙炔基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-苯甲基丙二酸二乙酯(90mg)。
步骤9：
在0℃下向2-(((2S,3S,4R,5R)-5-(6-(N,N'-双((叔丁氧基羰基)-氨基)-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-4-((叔丁氧基羰基)氧基)-3-乙炔基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-苯甲基丙二酸二乙酯(90mg，104.86umol，1当量)于DCM(0.6mL)中的溶液中添加TFA(0.3mL，4.05mmol，39当量)。在25℃下搅拌反应混合物1小时，然后用饱和NaHCO3水溶液(5mL)稀释并用DCM(3×3mL)萃取。将合并的有机层用盐水(5mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。通过制备型TLC(石油醚:EtOAc＝1:1)纯化粗残余物，得到呈黄色胶状物形式的2-(((2S,3R,4R,5R)-5-(6-氨基-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-4-羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-苯甲基丙二酸二乙酯(19mg，经3个步骤为13％产率)。
步骤10：
在25℃下向2-(((2S,3R,4R,5R)-5-(6-氨基-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-4-羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-苯甲基丙二酸二乙酯(19mg，34.05umol，1当量)于THF(0.2mL)中的溶液中添加含LiOH·H2O(7.14mg，170.26umol，5当量)的H2O(70uL)。搅拌反应混合物5.5小时，然后用H2O(5mL)稀释，并且然后用1N HCl水溶液酸化至pH 2-3。用EtOAc(3×5mL)萃取混合物。将合并的有机层用盐水(15mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将粗残余物溶解于H2O(3mL)和MeCN(2mL)的混合物中，并且然后冻干，得到呈白色固体形式的标题化合物。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δppm 8.30(s,1H)7.27(br d,J＝5.27Hz,2H)7.17-7.24(m,1H)7.15(br d,J＝6.78Hz,2H)5.87-5.96(m,1H)4.94(br s,1H)4.68(br s,1H)3.96-4.11(m,2H)3.34-3.40(m,2H)2.57(d,J＝2.51Hz,1H)2.32(s,1H)；LC/MS[M+H]＝502.0。
实施例3
合成2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氨基-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3,4-二羟基-3-(丙-1-炔-1-基)四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-苯甲基丙二酸
步骤1：
在20℃下在N2气氛下向(3aR,5R,6aS)-5-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-2,2-二甲基-二氢呋喃并[2,3-d][1,3]间二氧杂环戊烯-6(3aH)-酮(10g，23.44mmol，1当量)于THF(100mL)中的溶液中添加(丙-1-炔基)溴化镁(0.5M，93.77mL，2当量)。在40℃下搅拌混合物2小时，然后用饱和NH4Cl水溶液(250mL)稀释。用EtOAc(3×200mL)萃取水相。将合并的有机层用盐水(200mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩，得到呈黄色胶状物形式的粗制(3aR,5R,6R,6aR)-5-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-2,2-二甲基-6-(丙-1-炔-1-基)四氢呋喃并[2,3-d][1,3]间二氧杂环戊烯-6-醇(11.81g)。
步骤2：
在20℃下向粗制(3aR,5R,6R,6aR)-5-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)-甲基)-2,2-二甲基-6-(丙-1-炔-1-基)四氢呋喃并[2,3-d][1,3]间二氧杂环戊烯-6-醇(12.2g，26.14mmol，1当量)于吡啶(120mL)中的溶液中添加4-DMAP(3.51g，28.76mmol，1.1当量)和Ac2O(4.90mL，52.29mmol，2当量)。在20℃下搅拌混合物16小时，然后用H2O(200mL)稀释并用EtOAc(3×100mL)萃取。将合并的有机层用盐水(250mL)洗涤，经Na2SO4干燥并过滤。浓缩滤液，得到呈黄色胶状物形式的粗制(3aR,5R,6R,6aR)-乙酸5-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-2,2-二甲基-6-(丙-1-炔-1-基)四氢呋喃并[2,3-d][1,3]间二氧杂环戊烯-6-基酯(15g)。
步骤3：
在0℃下在N2气氛下向粗制(3aR,5R,6R,6aR)-乙酸5-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)-甲基)-2,2-二甲基-6-(丙-1-炔-1-基)四氢呋喃并[2,3-d][1,3]间二氧杂环戊烯-6-基酯(15g，29.49mmol，1当量)于THF(300mL)中的溶液中添加TBAF(1M，44.23mL，1.5当量)和AcOH(1.26mL，22.12mmol，0.75当量)的混合物。在20℃下搅拌混合物7小时，然后用饱和NH4Cl水溶液(300mL)稀释并用EtOAc(3×200mL)萃取。将合并的有机层用盐水(300mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。通过快速硅胶柱色谱法(石油醚:EtOAc＝1:0至1:1)纯化粗产物，得到呈白色固体形式的(3aR,5R,6R,6aR)-乙酸5-(羟甲基)-2,2-二甲基-6-(丙-1-炔-1-基)四氢呋喃并[2,3-d][1,3]间二氧杂环戊烯-6-基酯(5.78g，72.5％产率)。
步骤4：
在15℃下在N2气氛下向(3aR,5R,6R,6aR)-乙酸5-(羟甲基)-2,2-二甲基-6-(丙-1-炔-1-基)四氢呋喃并[2,3-d][1,3]间二氧杂环戊烯-6-基酯(5.78g，21.39mmol，1当量)于二氯乙烷(60mL)中的溶液中添加Rh2(OAc)4(945.21mg，2.14mmol，0.1当量)和重氮丙二酸二乙酯(7.96g，42.77mmol，2当量)。在40℃下搅拌混合物7小时，然后将其浓缩至干燥。通过快速硅胶柱色谱法(0-25％EtOAc/石油醚)纯化粗产物，得到呈黄色胶状物形式的2-(((3aR,5R,6R,6aR)-6-乙酰氧基-2,2-二甲基-6-(丙-1-炔-1-基)四氢呋喃并[2,3-d][1,3]-间二氧杂环戊烯-5-基)甲氧基)丙二酸二乙酯。
步骤5：
在20℃下向2-(((3aR,5R,6R,6aR)-6-乙酰氧基-2,2-二甲基-6-(丙-1-炔-1-基)四氢呋喃并[2,3-d][1,3]间二氧杂环戊烯-5-基)甲氧基)丙二酸二乙酯(7.28g，16.99mmol，1当量)于DMF(70mL)中的溶液中添加Cs2CO3(11.07g，33.98mmol，2当量)和BnBr(3.03mL，25.49mmol，1.5当量)。在20℃下搅拌混合物2小时，然后用H2O(300mL)稀释并用EtOAc(3×100mL)萃取。将合并的有机层用盐水(200mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。通过快速硅胶柱色谱法(石油醚:EtOAc＝1:0至3:1)纯化粗产物，得到呈黄色胶状物形式的2-(((3aR,5R,6R,6aR)-6-乙酰氧基-2,2-二甲基-6-(丙-1-炔-1-基)四氢呋喃并[2,3-d][1,3]间二氧杂环戊烯-5-基)甲氧基)-2-苯甲基丙二酸二乙酯(7.67g，87％产率)。
步骤6：
在20℃下向2-(((3aR,5R,6R,6aR)-6-乙酰氧基-2,2-二甲基-6-(丙-1-炔-1-基)四氢呋喃并[2,3-d][1,3]间二氧杂环戊烯-5-基)甲氧基)-2-苯甲基丙二酸二乙酯(7.67g，14.79mmol，1当量)于TFA(80mL)中的溶液中添加H2O(6.97mL，387.05mmol，26当量)。在20℃下搅拌混合物8小时，然后用饱和NaHCO3水溶液淬灭至pH 7并用EtOAc(3×100mL)分配。将合并的有机层用盐水(200mL)洗涤，经Na2SO4干燥并过滤。将滤液浓缩至干燥，得到呈黄色胶状物形式的粗制2-苯甲基-2-(((2R,3S,4R)-3,4,5-三羟基-3-(丙-1-炔-1-基)四氢呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸二乙酯(5.95g)。
步骤7：
在20℃下向粗制2-苯甲基-2-(((2R,3S,4R)-3,4,5-三羟基-3-(丙-1-炔-1-基)四氢呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸二乙酯(5.95g，13.63mmol，1当量)于吡啶(60mL)中的溶液中添加4-DMAP(5.00g，40.90mmol，3当量)和Ac2O(6.38mL，68.16mmol，5当量)。在20℃下搅拌混合物16小时，然后用H2O(300mL)稀释并用EtOAc(3×150mL)萃取。将合并的有机层用盐水(300mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。通过快速硅胶柱色谱法(石油醚:EtOAc＝1:0至3:1)纯化粗产物，得到呈黄色胶状物形式的2-苯甲基-2-(((2R,3R,4R)-3,4,5-三乙酰氧基-3-(丙-1-炔-1-基)四氢呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸二乙酯(5.76g，66％产率)。
步骤8：
在20℃下向2-苯甲基-2-(((2R,3R,4R)-3,4,5-三乙酰氧基-3-(丙-1-炔-1-基)四氢呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸二乙酯(1g，1.78mmol，1当量)于MeCN(10mL)中的溶液中添加N,O-双(三甲基甲硅烷基)乙酰胺(BSA)(1.32mL，5.33mmol，3当量)和2-氯-腺嘌呤(301.43mg，1.78mmol，1当量)。在65℃下搅拌混合物30分钟，然后将其冷却至0℃并接着滴加TMSOTf(642uL，3.56mmol，2当量)。将混合物在0℃下搅拌10分钟并且然后在65℃下搅拌2小时，然后用饱和NaHCO3水溶液(100mL)淬灭并用EtOAc(2×60mL)萃取。将合并的有机层用盐水(100mL)洗涤并经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。通过快速硅胶柱色谱法(0-33％EtOAc/石油醚)纯化粗产物，得到呈黄色泡沫形式的2-苯甲基-2-(((2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(6-氨基-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-(丙-1-炔-1-基)四氢呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸二乙酯(218mg，18％产率)。
步骤9：
在20℃下向2-苯甲基-2-(((2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(6-氨基-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-(丙-1-炔-1-基)四氢呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸二乙酯(218mg，324.37umol，1当量)于THF(2mL)中的溶液中添加含LiOH·H2O(136.12mg，3.24mmol，10当量)的H2O(2mL)。将混合物在45℃下加热2小时，然后用H2O(10mL)稀释并用EtOAc(10mL)萃取。弃去有机层，并用2N HCl水溶液将水相酸化至pH 2-3。然后用EtOAc(3×20mL)萃取水相。将合并的有机层用盐水(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。通过制备型HPLC纯化粗产物，得到呈白色固体形式的标题化合物(39.8mg，23％产率)。
1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δppm 12.70-14.12(m,2H),8.37(s,1H),7.80(br s,2H),7.19(br d,J＝7.03Hz,2H),7.00-7.11(m,3H),5.88-6.03(m,2H),5.81(d,J＝7.53Hz,1H),4.78(br s,1H),4.12(dd,J＝4.52,3.01Hz,1H),3.95(br dd,J＝9.91,4.89Hz,1H),3.82(br d,J＝8.53Hz,1H),3.25(s,2H),1.81(s,3H)；LC/MS[M+H]＝532.0。
实施例4
合成2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氨基-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-(环丙基乙炔基)-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-苯甲基丙二酸
步骤1：
在-78℃下在N2气氛下向乙炔基环丙烷(4.96g，75.02mmol，6.22mL，2当量)于THF(80mL)中的溶液中滴加n-BuLi(2.5M，30.01mL，2当量)。在-78℃下搅拌溶液0.5小时，并接着滴加(3aR,5R,6aS)-5-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-2,2-二甲基二氢呋喃并[2,3-d][1,3]-间二氧杂环戊烯-6(3aH)-酮(16.0g，37.51mmol，1当量)于THF(60mL)中的溶液。然后，使溶液升温至20℃并搅拌1小时，然后将其冷却至0℃并用水(120mL)淬灭。用EtOAc(2×120mL)萃取混合物。将合并的有机层用盐水(200mL)洗涤，并通过Na2SO4干燥，过滤并浓缩。通过Combi-flash硅胶(0-15％乙酸乙酯/石油醚)纯化粗物质，得到呈糖浆形式的(3aR,5R,6R,6aR)-5-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)-甲基)-6-(环丙基乙炔基)-2,2-二甲基四氢呋喃并[2,3-d][1,3]间二氧杂环戊烯-6-醇(15.8g，86％产率)。
步骤2：
在20℃下向(3aR,5R,6R,6aR)-5-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-6-(环丙基乙炔基)-2,2-二甲基四氢呋喃并[2,3-d][1,3]间二氧杂环戊烯-6-醇(15.8g，32.07mmol，1当量)于吡啶(160mL)中的溶液中添加4-DMAP(4.70g，38.48mmol，1.2当量)和Ac2O(9.01mL，96.21mmol，3当量)。搅拌溶液3小时，然后用水(200mL)稀释并用乙酸乙酯(2×200mL)萃取。将合并的有机层用盐水(400mL)洗涤，通过Na2SO4干燥，过滤并浓缩。通过Combi-flash硅胶(0-15％乙酸乙酯/石油醚)纯化粗残余物，得到呈透明糖浆形式的(3aR,5R,6R,6aR)-乙酸5-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-6-(环丙基乙炔基)-2,2-二甲基四氢呋喃并[2,3-d][1,3]间二氧杂环戊烯-6-基酯(14.7g，86％产率)。
步骤3：
在0℃下向(3aR,5R,6R,6aR)-乙酸5-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-6-(环丙基乙炔基)-2,2-二甲基四氢呋喃并[2,3-d][1,3]间二氧杂环戊烯-6-基酯(14.7g，27.49mmol，1当量)于THF(150mL)中的溶液中添加TBAF(1M，41.24mL，1.5当量)和AcOH(1.18mL，20.62mmol，0.75当量)的溶液。在20℃下搅拌溶液16小时，然后用水(300mL)稀释并用乙酸乙酯(2×200mL)萃取。将合并的有机层用水(400mL)、盐水(400mL)洗涤，通过Na2SO4干燥，过滤并浓缩。通过Combi-flash硅胶(20-60％乙酸乙酯/石油醚)纯化粗物质，得到呈白色固体形式的(3aR,5R,6R,6aR)-乙酸6-(环丙基乙炔基)-5-(羟甲基)-2,2-二甲基四氢呋喃并[2,3-d][1,3]间二氧杂环戊烯-6-基酯(8.15g，100％产率)。
步骤4：
在20℃下在N2气氛下向(3aR,5R,6R,6aR)-乙酸6-(环丙基乙炔基)-5-(羟甲基)-2,2-二甲基四氢呋喃并[2,3-d][1,3]间二氧杂环戊烯-6-基酯(8.15g，27.50mmol，1当量)于二氯乙烷(80mL)中的溶液中添加Rh2(OAc)4(1.00g，2.26mmol，0.08当量)和重氮丙二酸二乙酯(10.24g，55.01mmol，2当量)于二氯乙烷(20mL)中的溶液。搅拌绿色溶液16小时，然后将其浓缩。通过Combi-flash硅胶(15-50％乙酸乙酯/石油醚)纯化粗物质，得到呈黄色油形式的2-(((3aR,5R,6R,6aR)-6-乙酰氧基-6-(环丙基乙炔基)-2,2-二甲基-四氢呋喃并[2,3-d][1,3]间二氧杂环戊烯-5-基)甲氧基)丙二酸二乙酯(9.52g，76％产率)。
步骤5：
在20℃下向2-(((3aR,5R,6R,6aR)-6-乙酰氧基-6-(环丙基乙炔基)-2,2-二甲基四氢呋喃并[2,3-d][1,3]间二氧杂环戊烯-5-基)甲氧基)丙二酸二乙酯(4.50g，9.90mmol，1当量)于DMF(50mL)中的溶液中添加Cs2CO3(9.68g，29.71mmol，3当量)和苯甲基溴(1.76mL，14.85mmol，1.5当量)。搅拌悬浮液16小时，然后用水(80mL)稀释并用乙酸乙酯(3×80mL)萃取。将合并的有机层用水(200mL)、盐水(200mL)洗涤，通过Na2SO4干燥，过滤并浓缩。通过Combi-flash硅胶(15-50％乙酸乙酯/石油醚)纯化粗物质，得到呈无色糖浆形式的2-(((3aR,5R,6R,6aR)-6-乙酰氧基-6-(环丙基乙炔基)-2,2-二甲基四氢呋喃并[2,3-d][1,3]间二氧杂环戊烯-5-基)甲氧基)-2-苯甲基-丙二酸二乙酯(4.10g，76％产率)。
步骤6：
在0℃下向2-(((3aR,5R,6R,6aR)-6-乙酰氧基-6-(环丙基乙炔基)-2,2-二甲基四氢呋喃并[2,3-d][1,3]间二氧杂环戊烯-5-基)甲氧基)-2-苯甲基丙二酸二乙酯(4.10g，7.53mmol，1当量)于DCM(50mL)中的溶液中添加H2O(10mL)和TFA(50mL)。在20℃下搅拌溶液2小时，然后用饱和NaHCO3水溶液(80mL)淬灭至pH为约7。用DCM(100mL)萃取反应混合物。将有机层用盐水(10mL)洗涤，通过Na2SO4干燥，过滤并浓缩，得到呈黄色胶状物形式的2-(((2R,3S,4R)-3-乙酰氧基-3-(环丙基乙炔基)-4,5-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-苯甲基丙二酸二乙酯(3.80g)。
步骤7：
在20℃下向粗制2-(((2R,3S,4R)-3-乙酰氧基-3-(环丙基-乙炔基)-4,5-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-苯甲基丙二酸二乙酯(3.80g，7.53mmol，1当量)于吡啶(40mL)中的溶液中添加4-DMAP(2.76g，22.60mmol，3当量)和Ac2O(5.64mL，60.25mmol，8当量)。搅拌溶液16小时，然后用水(80mL)稀释并用乙酸乙酯(2×80mL)萃取。将合并的有机层用水(150mL)、盐水(150mL)洗涤，通过Na2SO4干燥，过滤并浓缩。通过Combi-flash硅胶(10-50％乙酸乙酯/石油醚)纯化粗物质，得到呈黄色胶状物形式的2-苯甲基-2-(((2R,3R,4R)-3,4,5-三乙酰氧基-3-(环丙基乙炔基)-四氢-呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸二乙酯(2.91g，66％产率)。
步骤8：
在25℃下向2-苯甲基-2-(((2R,3R,4R)-3,4,5-三乙酰氧基-3-(环丙基乙炔基)四氢呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸二乙酯(980mg，1.66mmol，1当量)于MeCN(24mL)中的溶液中添加2-氯腺嘌呤(338.80mg，2.00mmol，1.2当量)和BSA(987.71uL，4.00mmol，2.4当量)。在65℃下搅拌悬浮液0.5小时，此时其变得透明。将所得溶液冷却至0℃，并接着滴加TMSOTf(444.06mg，2.00mmol，361.03uL，1.2当量)。在40℃下搅拌反应混合物4小时，然后使其冷却至室温。将反应混合物用水(20mL)稀释并用乙酸乙酯(3×20mL)萃取。将合并的有机层用盐水(50mL)洗涤，通过Na2SO4干燥，过滤并浓缩。通过Combi-flash硅胶(30-80％乙酸乙酯/石油醚)纯化粗物质，得到呈黄色胶状物形式的2-苯甲基-2-(((2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(6-氨基-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-(环丙基乙炔基)四氢呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸二乙酯(270mg，23％产率)。
步骤9：
向2-苯甲基-2-(((2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(6-氨基-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-(环丙基乙炔基)四氢呋喃-2-基)-甲氧基)丙二酸二乙酯(270mg，386.75umol，1当量)于THF(8mL)中的溶液中添加LiOH水溶液(1M，5.80mL，15当量)。在20℃下搅拌混合物16小时，然后用1N HCl处理以将pH调节至5。浓缩混合物。通过制备型HPLC纯化粗残余物，得到呈白色固体形式的标题化合物(23mg，11％产率)。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δppm 8.04(s,1H)7.14-7.27(m,2H)7.01-7.08(m,3H)5.92(d,J＝6.63Hz,1H)4.70-4.83(m,1H)4.24(t,J＝3.50Hz,1H)4.02(t,J＝3.31Hz,2H)3.31-3.45(m,2H)1.25-1.33(m,1H)0.72-0.79(m,2H)0.63-0.71(m,2H)；LC/MS[M+H]＝559.0。
实施例5
合成2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氨基-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-((2-氯吡啶-4-基)甲基)丙二酸
通过用2-氯-4-(氯甲基)吡啶代替BnBr而如上文实施例1中所描述进行，得到呈白色固体形式的标题化合物。
1H NMR(CD3OD,400MHz)δppm 8.40(s,1H),8.00(d,J＝5.13Hz,1H),7.36(s,1H),7.23(d,J＝5.13Hz,1H),6.01(d,J＝7.63Hz,1H),5.08(d,J＝7.63Hz,1H),4.39(dd,J＝4.88,2.75Hz,1H),4.16(dd,J＝10.07,5.19Hz,1H),4.05(dd,J＝10.01,2.63Hz,1H),3.47(s,2H),3.05(s,1H)；LC/MS[M+H]＝553.1。
实施例6
合成2-苯甲基-2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(2,4-二氧代-3,4-二氢嘧啶-1(2H)-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸
步骤1：
在0℃下向(3aR,5R,6R,6aR)-乙酸5-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-6-乙炔基-2,2-二甲基四氢呋喃并[2,3-d][1,3]间二氧杂环戊烯-6-基酯(27.4g，55.39mmol，1当量)于THF(250mL)中的混合物中添加含AcOH(2.38mL，41.54mmol，0.75当量)的TBAF(1M，83.09mL，1.5当量)。在15℃下搅拌混合物15小时，然后将其分配于水(800mL)与EtOAc(300mL)之间。用EtOAc(3×200mL)进一步萃取水相。将合并的有机层用盐水(300mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩，得到残余物。通过SiO2柱色谱法(11-33％EtOAc/石油醚)纯化残余物，得到呈淡黄色固体形式的(3aR,5R,6R,6aR)-乙酸6-乙炔基-5-(羟甲基)-2,2-二甲基四氢呋喃并-[2,3-d][1,3]间二氧杂环戊烯-6-基酯(15.2g，91％产率)。
步骤2：
在0℃下向(3aR,5R,6R,6aR)-乙酸6-乙炔基-5-(羟甲基)-2,2-二甲基四氢呋喃并[2,3-d][1,3]间二氧杂环戊烯-6-基酯(15.2g，59.32mmol，1当量)于二氯乙烷(150mL)中的混合物中添加含Rh2(OAc)4(1.31g，2.97mmol，0.05当量)和重氮丙二酸二乙酯(13.25g，71.18mmol，1.2当量)的二氯乙烷(30mL)。在15℃下在N2气氛下搅拌混合物15小时，然后添加另外量的含重氮丙二酸二乙酯(6g)的二氯乙烷(15mL)。在15℃下再搅拌混合物2小时，然后将其减压浓缩。通过硅胶柱色谱法(11-33％EtOAc/石油醚)纯化残余物，得到呈白色固体形式的2-(((3aR,5R,6R,6aR)-6-乙酰氧基-6-乙炔基-2,2-二甲基四氢呋喃并-[2,3-d][1,3]间二氧杂环戊烯-5-基)甲氧基)丙二酸二乙酯(15g，61％产率)。
步骤3：
在25℃下向2-(((3aR,5R,6R,6aR)-6-乙酰氧基-6-乙炔基-2,2-二甲基四氢呋喃并[2,3-d][1,3]间二氧杂环戊烯-5-基)甲氧基)丙二酸二乙酯(14g，33.78mmol，1当量)于DMF(140mL)中的混合物中添加Cs2CO3(22.01g，67.57mmol，2当量)和BnBr(6.02mL，50.68mmol，1.5当量)。在25℃下搅拌混合物3小时，然后过滤，并用EtOAc(50mL)洗涤滤饼。用水(400mL)稀释滤液，并用EtOAc(3×150mL)萃取。将合并的有机层用盐水(200mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。通过快速硅胶柱色谱法(0-33％EtOAc/石油醚)纯化残余物，得到呈无色油形式的2-(((3aR,5R,6R,6aR)-6-乙酰氧基-6-乙炔基-2,2-二甲基四氢呋喃并[2,3-d][1,3]间二氧杂环戊烯-5-基)甲氧基)-2-苯甲基丙二酸二乙酯(13.3g，78％产率)。
步骤4：
向2-(((3aR,5R,6R,6aR)-6-乙酰氧基-6-乙炔基-2,2-二甲基四氢呋喃并[2,3-d][1,3]间二氧杂环戊烯-5-基)甲氧基)-2-苯甲基丙二酸二乙酯(13.20g，26.16mmol，1当量)于DCM(100mL)和H2O(20mL，1.11mol，42当量)中的混合物中添加TFA(100mL，1.35mol，52当量)。在15℃下搅拌混合物12小时，然后添加水(200mL)。用DCM(2×100mL)萃取水相。将合并的有机萃取物用饱和NaHCO3水溶液(2×100mL)、盐水(100mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。通过快速柱色谱法(SiO2，石油醚:乙酸乙酯＝10:1至1:3)纯化残余物，得到呈无色油形式的2-苯甲基-2-(((2R,3S,4R)-3-乙炔基-3,4,5-三羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸二乙酯(7.8g，71％产率)。
步骤5：
在15℃下向2-苯甲基-2-(((2R,3S,4R)-3-乙炔基-3,4,5-三羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸二乙酯(7.8g，18.46mmol，1当量)于吡啶(70mL)中的混合物中添加4-DMAP(6.77g，55.39mmol，3当量)和Ac2O(17.29mL，184.65mmol，10当量)。搅拌混合物15小时，然后添加水(400mL)。用EtOAc(3×200mL)萃取混合物。将合并的有机层用1N HCl水溶液(2×200mL)、饱和NaHCO3水溶液(300mL)、盐水(300mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。通过快速硅胶柱色谱法(石油醚:乙酸乙酯＝1:0至2:1)纯化残余物，得到所需产物(7g)。将该产物用EtOH(10mL)湿磨并过滤，得到呈白色固体形式的2-苯甲基-2-(((2R,3R,4R)-3,4,5-三乙酰氧基-3-乙炔基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-丙二酸二乙酯(3.79g，37％产率)。减压浓缩滤液，得到略微不纯的额外产物(3g)。
步骤6：
在25℃下向2-苯甲基-2-(((2R,3R,4R)-3,4,5-三乙酰氧基-3-乙炔基四氢呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸二乙酯(116mg，0.21mmol，1.0当量)于MeCN(3mL)中的溶液中添加尿嘧啶(28mg，0.25mmol，1.2当量)并接着添加N,O-双(三甲基甲硅烷基)-乙酰胺(BSA)(124uL，0.51mmol，2.4当量)。在65℃下加热所得悬浮液30分钟，此时其变得透明。将反应混合物冷却至0℃，并接着滴加TMSOTf(46uL，0.25mmol，1.2当量)。使反应混合物升温并在65℃下加热3小时，此时所有原料耗尽。将反应物用冷的饱和NaHCO3溶液(3mL)淬灭并用EtOAc(15mL)稀释。将有机层分离，用H2O(2×10mL)、盐水洗涤，干燥(MgSO4)，过滤并浓缩。通过快速硅胶柱色谱法(0-75％EtOAc/己烷)纯化粗残余物，得到产物2-苯甲基-2-(((2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(2,4-二氧代-3,4-二氢-嘧啶-1(2H)-基)-3-乙炔基-四氢呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸二乙酯(104mg，82％产率)。
步骤7：
向2-苯甲基-2-(((2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(2,4-二氧代-3,4-二氢嘧啶-1(2H)-基)-3-乙炔基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-丙二酸二乙酯(100mg，0.166umol，1当量)于THF(1mL)和MeOH(2mL)的混合物中的溶液中添加LiOH水溶液(1M，3mL)。在40℃下搅拌混合物24小时，然后减压除去有机挥发物。将残余物用水(2mL)稀释并用1N HCl处理以将pH调节至4。用EtOAc(3×10mL)萃取混合物。将合并的有机层用盐水洗涤，干燥(MgSO4)，过滤并浓缩，得到呈白色固体形式的标题化合物(67mg)。
1H NMR(CD3OD,300MHz)δ8.09(bs,1H),7.86(d,J＝8Hz,1H),7.33-7.16(m,5H),6.01(d,J＝7Hz,1H),5.07(d,J＝8Hz,1H),4.45(d,J＝7Hz,1H),4.22(bs,1H),4.11-3.94(m,2H),3.55-3.31(m,2H),2.95(s,1H),；LC/MS[M+H]＝461.0。
实施例7
合成2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氨基-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-(吡啶-4-基甲基)丙二酸
步骤1：
在20℃下向2-(((3aR,5R,6R,6aR)-6-乙酰氧基-6-乙炔基-2,2-二甲基四氢呋喃并[2,3-d][1,3]间二氧杂环戊烯-5-基)甲氧基)丙二酸二乙酯(1.2g，2.90mmol，1当量)于DMF(20mL)中的混合物中添加Cs2CO3(6.60g，20.27mmol，7当量)和4-(氯甲基)吡啶盐酸盐(1.90g，11.58mmol，4当量)。搅拌混合物2小时，然后过滤，并用EtOAc(20mL)洗涤滤饼。用水(60mL)稀释滤液，并用EtOAc(3×50mL)萃取。将合并的萃取物用水(2×50mL)、饱和NH4Cl水溶液(50mL)、盐水(50mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。通过SiO2柱色谱法(14-33％EtOAc/石油醚)纯化残余物，得到呈黄色油形式的2-(((3aR,5R,6R,6aR)-6-乙酰氧基-6-乙炔基-2,2-二甲基四氢呋喃并[2,3-d][1,3]-间二氧杂环戊烯-5-基)甲氧基)-2-(吡啶-4-基甲基)丙二酸二乙酯(900mg，61％产率)。
步骤2：
向2-(((3aR,5R,6R,6aR)-6-乙酰氧基-6-乙炔基-2,2-二甲基四氢呋喃并[2,3-d][1,3]间二氧杂环戊烯-5-基)甲氧基)-2-(吡啶-4-基甲基)-丙二酸二乙酯(900mg，1.78mmol，1当量)于DCM(5mL)和H2O(1mL，55.51mmol，31.18当量)中的混合物中添加TFA(5mL，67.53mmol，37.93当量)。在20℃下搅拌混合物12小时，然后减压浓缩。使粗残余物与DCM(3×10mL)减压共沸，得到呈棕色油形式的粗制2-(((2R,3S,4R)-3-乙炔基-3,4,5-三羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-(吡啶-4-基甲基)丙二酸二乙酯(1.1g)。
步骤3：
在20℃下向粗制2-(((2R,3S,4R)-3-乙炔基-3,4,5-三羟基-四氢-呋喃-2-基)甲氧基)-2-(吡啶-4-基甲基)丙二酸二乙酯(1.1g，2.60mmol，1当量)于吡啶(8mL)中的混合物中添加4-DMAP(952.17mg，7.79mmol，3当量)和Ac2O(2.43mL，25.98mmol，10当量)。搅拌混合物12小时，然后将其分配于水(30mL)与EtOAc(20mL)之间。用EtOAc(2×20mL)进一步萃取水相。将合并的萃取物用水(20mL)、0.5N HCl水溶液(2×10mL)和盐水(20mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。通过SiO2快速柱色谱法(25-50％EtOAc/石油醚)纯化残余物，得到呈棕色糖浆形式的2-(吡啶-4-基甲基)-2-(((2R,3R,4R)-3,4,5-三乙酰氧基-3-乙炔基-四氢呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸二乙酯(640mg，45％产率)。
步骤4：
在25℃下在N2气氛下向2-(吡啶-4-基甲基)-2-(((2R,3R,4R)-3,4,5-三乙酰氧基-3-乙炔基四氢呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸二乙酯(40mg，72.79umol，1当量)和2-氯-腺嘌呤(13.58mg，80.07umol，1.1当量)于MeCN(1.5mL)中的混合物中添加BSA(44.98uL，181.98umol，2.5当量)。在65℃下搅拌混合物0.5小时，然后将其冷却至0℃，并接着滴加TMSOTf(26.31uL，145.58umol，2当量)。将混合物在0℃下搅拌0.5小时并且然后在65℃下搅拌2小时。将反应混合物冷却至室温并用饱和NaHCO3水溶液(6mL)淬灭。用EtOAc(3×8mL)萃取混合物。将合并的有机层用盐水(5mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。通过制备型TLC(EtOAc)纯化残余物，得到以黄色胶状物形式获得的2-(((2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(6-氨基-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-(吡啶-4-基甲基)-丙二酸二乙酯(13mg，26％产率)。
步骤5：
向2-(((2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(6-氨基-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-(吡啶-4-基甲基)-丙二酸二乙酯(50mg，75.87umol，1当量)于THF(1mL)中的混合物中添加1N LiOH水溶液(1mL)。在50℃下搅拌混合物1小时，然后将其冷却至室温并用2N HCl水溶液将pH调节为6至7。减压浓缩混合物，并且通过制备型反相HPLC纯化残余物，得到呈白色固体形式的标题化合物(34mg)。
1H NMR(CD3OD,300MHz)δ8.50(bs,1H),8.32(d,J＝4Hz,2H),7.50(d,J＝5Hz,2H),6.01(d,J＝7Hz,1H),4.80(d,J＝6Hz,1H),4.38(q,J＝3Hz,1H),4.10-3.95(m,2H),3.45(bs,2H),3.06(s,1H)；LC/MS[M+H]＝519.0。
实施例8
合成2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氨基-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-(呋喃-3-基甲基)丙二酸
步骤1：
在0℃下在N2气氛下向PPh3(4.28g，16.31mmol，1.6当量)和CBr4(4.06g，12.23mmol，1.2当量)于DCM(20mL)中的混合物中滴加含呋喃-3-基甲醇(1g，10.19mmol，1当量)的DCM(5mL)。在20℃下搅拌混合物2小时，然后用饱和NaHCO3水溶液(30mL)淬灭并且然后用EtOAc(2×15mL)萃取。将合并的有机层用盐水(30mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩，得到呈黄色胶状物形式的粗制3-(溴甲基)呋喃(2.9g)，其不经进一步纯化即直接用于下一步骤中。
步骤2：
在20℃下向2-(((3aR,5R,6R,6aR)-6-乙酰氧基-6-乙炔基-2,2-二甲基四氢呋喃并[2,3-d][1,3]间二氧杂环戊烯-5-基)甲氧基)丙二酸二乙酯(1g，2.41mmol，1当量)于DMF(5mL)中的溶液中添加含Cs2CO3(2.36g，7.24mmol，3当量)和粗制3-(溴甲基)呋喃(2.9g)的DMF(6mL)。搅拌混合物2小时，然后将其分配于水(30mL)与EtOAc(30mL)之间。用EtOAc(3×15mL)萃取水相。将合并的有机萃取物用水(20mL)、饱和NH4Cl水溶液(2×20mL)、盐水(20mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。通过SiO2柱色谱法(10-25％EtOAc/石油醚)纯化残余物，得到呈淡黄色油形式的2-(((3aR,5R,6R,6aR)-6-乙酰氧基-6-乙炔基-2,2-二甲基四氢呋喃并[2,3-d][1,3]间二氧杂环戊烯-5-基)甲氧基)-2-(呋喃-3-基甲基)丙二酸二乙酯(375mg，31％产率)。
步骤3：
向2-(((3aR,5R,6R,6aR)-6-乙酰氧基-6-乙炔基-2,2-二甲基四氢呋喃并[2,3-d][1,3]间二氧杂环戊烯-5-基)甲氧基)-2-(呋喃-3-基甲基)-丙二酸二乙酯(375mg，758.36umol，1当量)于DCM(2mL)和H2O(0.4mL，22.20mmol，29当量)中的混合物中添加TFA(2mL，27.01mmol，36当量)。在20℃下搅拌混合物12小时，然后将其减压浓缩，得到呈油形式的粗制2-(((2R,3S,4R)-3-乙炔基-3,4,5-三羟基-四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-(呋喃-3-基甲基)丙二酸二乙酯(420mg)，其不经进一步纯化即用于下一步骤中。
步骤4：
在20℃下向粗制2-(((2R,3S,4R)-3-乙炔基-3,4,5-三羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-(呋喃-3-基甲基)丙二酸二乙酯(420mg，1.02mmol，1当量)于吡啶(4mL)中的混合物中添加Ac2O(954uL，10.18mmol，10当量)和4-DMAP(373mg，3.06mmol，3当量)。搅拌混合物12小时，然后将其分配于水(15mL)与EtOAc(10mL)之间。用EtOAc(2×20mL)萃取水相。将合并的有机萃取物用水(10mL)、0.5N HCl水溶液(2×5mL)、盐水(10mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩。通过制备型TLC(石油醚:EtOAc＝3:1)纯化残余物，得到呈黄色油形式的2-(呋喃-3-基甲基)-2-(((2R,3R,4R)-3,4,5-三乙酰氧基-3-乙炔基四氢呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸二乙酯(95mg，17％产率)。
步骤5：
在25℃下在N2气氛下向2-(呋喃-3-基甲基)-2-(((2R,3R,4R)-3,4,5-三乙酰氧基-3-乙炔基四氢呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸二乙酯(50mg，92.85umol，1当量)和2-氯-腺嘌呤(17.32mg，102.14umol，1.1当量)于MeCN(1.2mL)中的混合物中添加BSA(57.38uL，232.13umol，2.5当量)。在65℃下搅拌混合物0.5小时，然后将其冷却至0℃，并接着滴加TMSOTf(33.56uL，185.70umol，2当量)。将混合物在0℃下搅拌0.5小时，并且然后在65℃下搅拌2小时，然后将其冷却至室温并用饱和NaHCO3水溶液(2mL)淬灭。用EtOAc(3×2mL)萃取混合物。将合并的有机层用盐水(2mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。通过制备型TLC(石油醚:EtOAc＝1:1)纯化残余物，得到呈黄色胶状物形式的2-(((2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(6-氨基-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-(呋喃-3-基甲基)丙二酸二乙酯(17mg，29％产率)。
步骤6：
向2-(((2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(6-氨基-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-(呋喃-3-基甲基)-丙二酸二乙酯(33mg，50.92umol，1当量)于THF(1mL)中的混合物中添加1N LiOH水溶液(1mL)。在20℃下搅拌混合物3小时，然后用EtOAc(2mL)萃取。弃去有机层。用2N HCl水溶液将水相调节至pH 2至3，然后用EtOAc(4×5mL)萃取。将合并的有机萃取物用盐水(3mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。将残余物溶解于MeCN(1mL)和H2O(1mL)的混合物中，并且然后通过冻干干燥，得到呈白色固体形式的标题化合物(10.0mg，37％产率)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 8.48(s,1H)7.81(br s,2H)7.35(s,2H)6.29(s,1H)6.22(br s,1H)6.02(br d,J＝6.50Hz,1H)5.83(d,J＝7.50Hz,1H)4.75-4.90(m,1H)4.16(dd,J＝4.75,2.75Hz,1H)3.92(br dd,J＝10.07,5.07Hz,1H)3.77(br d,J＝8.00Hz,1H)3.48(s,1H)3.08(s,2H)；LC/MS[M+H]＝507.9。
实施例9
合成2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氨基-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-(4-(2-氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲基)丙二酸
步骤1：
在25℃下向2-(((2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(6-N,N'-(双(叔丁氧基羰基)氨基)-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基四氢呋喃-2-基)甲氧基-)丙二酸二乙酯(7.26g，4.92mmol，1当量)于DMF(80mL)中的溶液中添加K2CO3(13.60g，98.40mmol，20当量)。搅拌反应混合物0.5小时并接着添加1-(溴甲基)-4-硝基-苯(15.94g，73.80mmol，15当量)。搅拌反应混合物24小时，然后用H2O(300mL)稀释并用EtOAc(3×60mL)萃取。将合并的有机层用盐水(100mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。通过快速硅胶柱色谱法(石油醚:EtOAc＝10:1至2:1)纯化粗残余物，得到以棕色胶状物形式获得的2-(((2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(6-((叔丁氧基羰基)氨基)-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-(4-硝基苯甲基)丙二酸二乙酯(2.36g)。
步骤2：
在0℃下向2-(((2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(6-((叔丁氧基羰基)-氨基)-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-(4-硝基苯甲基)-丙二酸二乙酯(2.26g，2.81mmol，1当量)于EtOH(23mL)中的溶液中添加含Fe(786mg，14.07mmol，5当量)和NH4Cl(151mg，2.81mmol，1当量)的H2O(8.5mL)。在50℃下搅拌反应混合物4小时，然后将其过滤，并且浓缩滤液。通过快速硅胶柱色谱法(石油醚:EtOAc＝1:0至1:1)纯化粗残余物，得到呈黄色泡沫形式的2-(4-氨基苯甲基)-2-(((2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(6-((叔丁氧基羰基)-氨基)-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-丙二酸二乙酯(280mg)。
步骤3：
在0℃下向2-(4-氨基苯甲基)-2-(((2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(6-((叔丁氧基羰基)氨基)-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基四氢呋喃-2-基)-甲氧基)丙二酸二乙酯(280mg，362.14umol，1当量)于DCM(3mL)中的溶液中添加1-氯-3-异氰酸酯基丙烷(86.59mg，724.28umol，2当量)。在25℃下搅拌反应混合物16小时，然后将其浓缩。通过制备型TLC(石油醚:EtOAc＝1:0至1:1)纯化粗残余物，得到呈泡沫形式的2-(4-(3-(3-氯丙基)脲基)-苯甲基)-2-(((2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(6-((叔丁氧基羰基)氨基)-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基四氢呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸二乙酯(120mg，33％产率)。
步骤4：
在0℃下向2-(4-(3-(3-氯丙基)脲基)苯甲基)-2-(((2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(6-((叔丁氧基羰基)氨基)-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基四氢呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸二乙酯(120mg，134.42umol，1当量)于THF(1.2mL)中的溶液中添加NaH(11mg，268.84umol，60％于矿物油中，2当量)。在25℃下搅拌反应混合物2小时，然后在0℃下用H2O(0.2mL)淬灭。然后在25℃下搅拌反应混合物16小时。用1N HCl水溶液将反应混合物酸化至约pH 3至4，并且然后用EtOAc(3×5mL)萃取。将合并的有机层用盐水(15mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩，得到呈白色固体形式的粗制2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(6-((叔丁氧基羰基)氨基)-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-(4-(2-氧代-四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲基)丙二酸(77mg，73％产率)。
步骤5：
在0℃下向粗制2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(6-((叔丁氧基羰基)氨基)-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-(4-(2-氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲基)丙二酸(76mg，106.13umol，1当量)于DCM(0.5mL)中的溶液中添加TFA(0.25mL，3.38mmol，32当量)。在25℃下搅拌反应混合物2小时，然后将其浓缩。使用饱和NaHCO3水溶液(5mL)将残余物再溶解并用EtOAc(3×5mL)萃取。将合并的有机层用盐水(15mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩。通过制备型反相HPLC纯化粗残余物，得到呈白色固体形式的标题化合物(8.6mg，12％产率)。
1H NMR(CD3OD,300MHz)δ8.28(s,1H),7.11(d,J＝8.52Hz,2H),7.02(d,J＝8.52Hz,2H),5.99(d,J＝7.44Hz,1H),4.79(d,J＝7.41Hz,1H),4.29(t,J＝2.76Hz,1H),4.01-3.91(m,2H),3.54-3.41(m,4H),3.36-3.32(m,2H),3.05(s,1H),2.03-1.94(m,2H)；LC/MS[M+H]＝616.2。
实施例10
合成2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氨基-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-(4-(2-氧代哌啶-1-基)苯甲基)丙二酸
步骤1：
在25℃下向粗制2-(4-氨基苯甲基)-2-(((2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(6-((叔丁氧基羰基)氨基)-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基四氢呋喃-2-基)-甲氧基)丙二酸二乙酯(140mg，160umol，1当量)于DCM(2mL)中的溶液中添加TEA(107mg，1.06mmol，147uL，6.59当量)并接着添加5-氯戊酰氯(24.9uL，192umol，1.2当量)。搅拌混合物1小时，然后将其分配于DCM(20mL)与H2O(20mL)之间。将有机相用H2O(10mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。通过制备型TLC(石油醚:EtOAc＝1:1)纯化残余物，得到呈黄色胶状物形式的2-(4-(5-氯戊酰胺基)-苯甲基)-2-(((2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(6-((叔丁氧基羰基)氨基)-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基四氢呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸二乙酯(130mg，69％产率)。
步骤2：
在25℃下向2-(4-(5-氯戊酰胺基)-苯甲基)-2-(((2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(6-((叔丁氧基羰基)氨基)-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基四氢-呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸二乙酯(104mg，105umol，1当量)于THF(2mL)中的溶液中添加(25.2mg，630umol，60％于矿物油中，6当量)。搅拌混合物4小时，然后用H2O(1mL)淬灭。在20℃下搅拌反应混合物14小时，然后将其分配于EtOAc(10mL)与水(20mL)之间。用2N HCl水溶液将水相酸化至pH5-6，然后将其分配于EtOAc(20mL)与盐水(10mL)之间，经无水Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩，得到呈无色胶状物形式的粗制2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(6-((叔丁氧基羰基)氨基)-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-(4-(2-氧代哌啶-1-基)苯甲基)丙二酸(58mg)。
步骤3：
向粗制2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(6-((叔丁氧基羰基)氨基)-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-(4-(2-氧代哌啶-1-基)苯甲基)丙二酸(58mg，81umol，1当量)于DCM(500uL)中的混合物中添加TFA(400uL，5.40mmol，67当量)。在20℃下搅拌混合物2小时，然后用2N LiOH水溶液(500uL)淬灭。将混合物分配于EtOAc(10mL)与水(10mL)之间。用2M HCl水溶液将水相调节至pH 5-6。将水相分配于EtOAc(2×20mL)与盐水(5mL)之间，经无水Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。通过制备型HPLC纯化粗产物并且冻干，得到呈白色固体形式的标题化合物(6.9mg，14％产率)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 8.32(s,1H)7.33(d,J＝8.53Hz,2H)6.98(d,J＝8.28Hz,2H)5.98(d,J＝7.53Hz,1H)4.79(m,1H)4.28(t,J＝2.76Hz,1H)4.04(br s,2H)3.39-3.54(m,4H)3.05(s,1H)2.43(m,2H)1.88(br t,J＝2.89Hz,4H)；LC/MS[M+H]＝615.3。
实施例11
合成2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氨基-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-(4-(1-(甲氧基甲基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)苯甲基)丙二酸
步骤1：
在25℃下向3-溴吡啶-2(1H)-酮(2.25g，12.93mmol，1当量)于丙酮(40mL)中的溶液中添加K2CO3(4.47g，32.33mmol，2.5当量)。搅拌悬浮液0.5小时，并接着滴加MOM-Cl(2.79mL，36.76mmol，2.84当量)。在25℃下搅拌混合物15小时，然后用水(40mL)稀释并用乙酸乙酯(2×30mL)萃取。将合并的有机层用盐水(50mL)洗涤，通过Na2SO4干燥，过滤并浓缩。通过Combi-flash硅胶(20-60％乙酸乙酯/石油醚)纯化粗残余物，得到呈透明油形式的3-溴-1-(甲氧基-甲基)-吡啶-2(1H)-酮(1.22g，43％产率)。
步骤2：
向3-溴-1-(甲氧基甲基)吡啶-2(1H)-酮(1.38g，6.33mmol，1当量)和(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)苯基)甲醇(1.06g，6.96mmol，1.1当量)于二噁烷(12mL)中的溶液中添加K2CO3(2.62g，18.99mmol，3当量)、Pd(dppf)Cl2(463mg，632.89umol，0.1当量)和H2O(4mL)。用N2使混合物脱气10分钟，然后在N2气氛下于80℃下将其加热16小时。将反应物用水(10mL)稀释并用乙酸乙酯(3×10mL)萃取。将合并的有机层用盐水(25mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。通过Combi-flash硅胶(50-100％乙酸乙酯/石油醚)纯化粗残余物，得到呈黄色胶状物形式的3-(4-(羟甲基)苯基)-1-(甲氧基甲基)吡啶-2(1H)-酮(1.30g，84％产率)。
步骤3：
在-25℃下向PPh3(8.34g，31.80mmol，6当量)于DCM(50mL)中的溶液中添加CBr4(10.55g，31.80mmol，6当量)。在-25℃下搅拌黄色悬浮液1小时，并接着滴加3-(4-(羟甲基)苯基)-1-(甲氧基甲基)-吡啶-2(1H)-酮(1.30g，5.30mmol，1当量)于DCM(10mL)中的溶液。在-25℃下搅拌黄色悬浮液0.5小时，然后用MTBE(180mL)稀释。滤出沉淀物，并且浓缩滤液，得到呈黄色胶状物形式的粗物质(2.8g)。通过Combi-flash硅胶(30-100％乙酸乙酯/石油醚)纯化粗残余物，得到呈白色固体形式的3-(4-(溴甲基)苯基)-1-(甲氧基甲基)-吡啶-2(1H)-酮(760mg，46％产率)。
步骤4：
在20℃下向2-(((2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(6-N,N'-(双(叔丁氧基羰基)氨基)-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基四氢呋喃-2-基)-甲氧基)-丙二酸二乙酯(100mg，130.18umol，1当量)于DMF(1.5mL)中的溶液中添加K2CO3(53.97mg，390.54umol，3当量)。搅拌悬浮液0.5小时，并接着添加3-(4-(溴甲基)苯基)-1-(甲氧基甲基)吡啶-2(1H)-酮(44.13mg，143.20umol，1.1当量)。在20℃下搅拌悬浮液16小时，然后用水(2mL)稀释并用乙酸乙酯(3×2mL)萃取。合并的有机层通过Na2SO4干燥，过滤并浓缩。通过制备型TLC(石油醚:乙酸乙酯＝1:1)纯化粗残余物，得到呈透明糖浆形式的2-(((2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(6-(N,N'-双(叔丁氧基羰基)氨基)-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基四氢-呋喃-2-基)甲氧基)-2-(4-(1-(甲氧基甲基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)苯甲基)-丙二酸二乙酯(71mg，55％产率)。
步骤5：
在0℃下向2-(((2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(6-(N,N'-双(叔丁氧基羰基)氨基)-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基四氢呋喃-2-基)-甲氧基)-2-(4-(1-(甲氧基甲基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)苯甲基)-丙二酸二乙酯(68mg，68.31umol，1当量)于DCM(1.7mL)中的溶液中添加TFA(0.3mL，4.05mmol，59当量)。在20℃下搅拌混合物2小时，然后用饱和NaHCO3水溶液淬灭以将pH调节至9。用乙酸乙酯(3×8mL)萃取混合物。浓缩合并的有机层，得到呈黄色胶状物形式的粗物质(98mg)。通过制备型TLC(乙酸乙酯)纯化粗残余物，得到呈无色糖浆形式的2-(((2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(6-氨基-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基四氢呋喃-2-基)-甲氧基)-2-(4-(1-(甲氧基甲基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)苯甲基)-丙二酸二乙酯(21mg，38％产率)。
步骤6：
向2-(((2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(6-氨基-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-(4-(1-(甲氧基-甲基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)苯甲基)丙二酸二乙酯(20mg，25.15umol，1当量)于THF(1mL)中的溶液中添加1M LiOH水溶液(503uL，20当量)。在18℃下搅拌混合物22小时，然后用1N HCl水溶液将其酸化至pH2并浓缩。通过制备型HPLC纯化粗残余物，并通过冻干干燥洗脱份，得到呈白色固体形式的标题化合物(2.1mg，13％产率)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 8.45(br s,1H),7.81(br s,2H),7.67(dd,J＝6.75,1.75Hz,1H),7.51(br d,J＝6.75Hz,1H),7.36(br d,J＝6.88Hz,2H),7.20(br d,J＝7.50Hz,2H),6.33(t,J＝6.75Hz,1H),6.20(br s,1H),6.01(br d,J＝6.88Hz,1H),5.82(d,J＝7.50Hz,1H),5.28(s,2H),4.65-4.89(m,1H),4.06-4.23(m,1H)3.88-4.06(m,1H),3.67-3.86(m,1H),3.40-3.52(m,3H),3.18-3.30(m,2H)；LC/MS[M+H]＝655.1。
实施例12
合成2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氨基-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-(4-(2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)苯甲基)丙二酸
步骤1：
在20℃下向2-(((2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(6-N,N'-(双(叔丁氧基羰基)氨基)-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基四氢呋喃-2-基)-甲氧基)-丙二酸二乙酯(12.59g，16.39mmol，1当量)和1-(溴甲基)-4-碘-苯(48.67g，163.90mmol，10当量)于DMF(120mL)中的溶液中添加K2CO3(33.98g，245.85mmol，15当量)。搅拌溶液16小时，然后用水(200mL)稀释并用乙酸乙酯(3×200mL)萃取。将合并的有机层用水(400mL)、盐水(400mL)洗涤，通过Na2SO4干燥，过滤并浓缩。通过Combi-flash硅胶(15-40％乙酸乙酯/石油醚)纯化粗残余物，得到呈黄色固体形式的2-(((2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(6-N,N'-(双(叔丁氧基羰基)-氨基)-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-(4-碘苯甲基)-丙二酸二乙酯(2.94g，18％产率)。
步骤2：
向2-(((2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(6-N,N'-(双(叔丁氧基羰基)氨基)-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基四氢呋喃-2-基)-甲氧基)-2-(4-碘苯甲基)丙二酸二乙酯(1.10g，1.12mmol，1当量)和(2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)硼酸(310.53mg，2.24mmol，2当量)于二噁烷(12mL)中的溶液中添加K2CO3(463.41mg，3.35mmol，3当量)、Pd(dppf)Cl2(81.78mg，111.77umol，0.1当量)和H2O(4mL)。用N2使混合物脱气10分钟，并且然后在N2气氛下在80℃下搅拌1小时。将暗色混合物用水(10mL)稀释并用乙酸乙酯(3×10mL)萃取。将合并的有机层用盐水(30mL)洗涤，通过Na2SO4干燥，过滤并浓缩。通过Combi-flash硅胶(40-100％乙酸乙酯/石油醚)纯化粗残余物，得到呈黄色胶状物形式的2-(((2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(6-N,N'-(双(叔丁氧基羰基)氨基)-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基四氢呋喃-2-基)-甲氧基)-2-(4-(2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)苯甲基)丙二酸二乙酯(220mg，21％产率)。
步骤3：
向2-(((2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(6-N,N'-(双(叔丁氧基羰基)氨基)-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基四氢呋喃-2-基)-甲氧基)-2-(4-(2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)苯甲基)丙二酸二乙酯(180mg，189.20umol，1当量)于DCM(2.4mL)中的溶液中添加TFA(0.6mL，8.10mmol，43当量)。在20℃下搅拌黄色溶液2.5小时，然后用饱和NaHCO3水溶液(5mL)淬灭并用乙酸乙酯(3×4mL)萃取。浓缩合并的有机层，得到呈黄色胶状物形式的粗物质(108mg)。通过制备型TLC(乙酸乙酯)纯化粗残余物，得到呈黄色固体形式的2-(((2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(6-氨基-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-(4-(2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)苯甲基)-丙二酸二乙酯(23mg，16％产率)。
步骤4：
向2-(((2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(6-氨基-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-(4-(2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)苯甲基)丙二酸二乙酯(23mg，30.62umol，1当量)于THF(2.5mL)中的溶液中添加1M LiOH水溶液(0.6mL，20当量)。在20℃下搅拌反应混合物4小时，然后用1N HCl水溶液将其酸化至pH 6并浓缩，得到呈黄色胶状物形式的粗物质(32mg)。通过制备型HPLC(柱：YMC-Triart Prep C18 150×40mm×7um；流动相：[水(0.225％FA)-CAN]；B％：15％-35％，10min)纯化粗残余物。通过冻干使产物干燥，得到呈白色固体形式的标题化合物(2.1mg，11％产率)。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δppm 8.24(s,1H),7.46(dd,J＝6.88,1.63Hz,1H),7.28-7.34(m,5H),6.39(t,J＝6.75Hz,1H),5.96(d,J＝7.38Hz,1H),4.77-4.84(m,1H),4.29(t,J＝2.88Hz,1H),4.03(d,J＝2.75Hz,2H),3.38-3.51(m,2H),3.04(s,1H)；LC/MS[M+H]＝611.0。
实施例13
合成2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氨基-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-((2-羧基-[1,1'-联苯]-4-基)甲基)丙二酸
步骤1：
向2-(((2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(6-N,N'-(双(叔丁氧基羰基)氨基)-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-丙二酸二乙酯(99.87mg，130.01umol，1当量)于DMF(0.5mL)中的混合物中添加K2CO3(53.90mg，390.03umol，3当量)。在40℃下搅拌混合物0.5小时，并接着添加4-(溴甲基)-[1,1'-联苯]-2-甲酸甲酯(79.35mg，260.02umol，2当量)，其根据由D.Stoermer等人(J.of Med.Chem.2012,55,5922-5932)报道的程序制备。在40℃下搅拌混合物15.5小时，然后用水(4mL)稀释并用EtOAc(3×5mL)萃取。将合并的有机层用水(2×5mL)和盐水(5mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩。通过制备型TLC(石油醚:EtOAc＝1:1)纯化粗残余物，得到呈无色糖浆形式的2-(((2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(6-N,N'-(双(叔丁氧基羰基)-氨基)-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-((2-(甲氧基-羰基)-[1,1'-联苯]-4-基)甲基)丙二酸二乙酯(70mg，53％产率)。
步骤2：
向2-(((2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(6-N,N'-(双(叔丁氧基羰基)氨基)-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-((2-(甲氧羰基)-[1,1'-联苯]-4-基)甲基)丙二酸二乙酯(70mg，70.53umol，1当量)于DCM(2mL)中的溶液中添加TFA(0.5mL，6.75mmol，96当量)。在20℃下搅拌混合物2小时，然后将其用饱和NaHCO3水溶液淬灭至pH 7至8并用EtOAc(3×10mL)萃取。将合并的有机层用水(2×8mL)和盐水(8mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩。通过制备型TLC(石油醚:EtOAc＝1:1)纯化粗残余物，得到呈无色糖浆形式的2-(((2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(6-氨基-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基四氢-呋喃-2-基)-甲氧基)-2-((2-(甲氧羰基)-[1,1'-联苯]-4-基)甲基)丙二酸二乙酯(40mg，71％产率)。
步骤3：
向2-(((2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(6-氨基-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-((2-(甲氧基-羰基)-[1,1'-联苯]-4-基)甲基)丙二酸二乙酯(30mg，37.87umol，1当量)于THF(1mL)中的溶液中添加1M LiOH水溶液(568uL，15当量)。在25℃下搅拌混合物20小时，然后用水(1mL)稀释并用EtOAc(3×2mL)萃取。弃去有机层。用2N HCl水溶液将水相的pH值调节至2，以产生沉淀物。通过过滤收集沉淀物，得到作为第一批收获物的所需产物(28mg)。用EtOAc(4×2mL)进一步萃取水相。合并的有机层经无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩，得到呈白色固体形式的第二批收获物(10mg)。合并这两批收获物并通过制备型HPLC纯化，并将洗脱份冻干，得到呈白色固体形式的标题化合物(8.0mg，33％产率)。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δppm 8.21(s,1H),7.66(s,1H),7.46(br d,J＝7.6Hz,1H),7.24-7.32(m,3H),7.12(dd,J＝7.1,2.3Hz,2H),7.07(d,J＝7.9Hz,1H),5.99(d,J＝7.4Hz,1H),4.84(br s,1H),4.33(br s,1H),4.02-4.16(m,2H),3.43-3.60(m,2H),3.03(s,1H)；LC/MS[M+H]＝638.2。
实施例14
合成2-苯甲基-2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(2-氯-6-苯基-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸
步骤1：
在20℃下在N2气氛下向2,6-二氯腺嘌呤(0.8g，4.23mmol，1当量)于H2O(10mL)和MeCN(5mL)中的溶液中添加苯基硼酸(464.49mg，3.81mmol，0.9当量)、Cs2CO3(3.45g，10.58mmol，2.5当量)、Pd(OAc)2(47.51mg，211.64umol，0.05当量)和3-双(3-磺酸根基苯基)磷烷基苯磺酸三钠(601.50mg，1.06mmol，0.25当量)。在110℃下搅拌混合物2小时，然后使其冷却并用H2O(50mL)稀释。用EtOAc(5×50mL)萃取反应混合物。将合并的有机层用盐水(50mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。用石油醚(9mL)和EtOAc(3mL)的混合物湿磨粗产物，得到呈黄色固体形式的2-氯-6-苯基-9H-嘌呤(140mg，14％产率)。
步骤2：
在15℃下向2-氯-6-苯基-9H-嘌呤(321.05mg，585.30umol，1当量)于MeCN(0.5mL)中的溶液中添加2-苯甲基-2-(((2R,3R,4R)-3,4,5-三乙酰氧基-3-乙炔基四氢呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸二乙酯(135mg，585.30umol，1当量)和BSA(347uL，1.40mmol，2.4当量)。在65℃下搅拌混合物30分钟，此时其变得透明。将混合物冷却至0℃，并接着滴加TMSOTf(126.91uL，702.35mmol，1.2当量)。将混合物在0℃下搅拌10分钟，并且然后在65℃下搅拌3小时，然后将其冷却并用饱和NaHCO3水溶液(40mL)淬灭。用EtOAc(2×30mL)萃取反应混合物。将合并的有机层用盐水(40mL)洗涤并经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。首先通过快速硅胶柱色谱法(石油:EtOAc＝1:0至1:1)并且然后通过制备型TLC(石油:EtOAc＝1:1)纯化粗产物，得到呈黄色胶状物形式的2-苯甲基-2-(((2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(2-氯-6-苯基-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基四氢呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸二乙酯(135mg)。
步骤3：
在20℃下向2-苯甲基-2-(((2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(2-氯-6-苯基-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基四氢呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸二乙酯(135mg，187.73umol，1当量)于THF(2mL)中的溶液中添加含LiOH·H2O(78.77mg，1.88mmol，10当量)的H2O(0.2mL)。在45℃下搅拌混合物2小时，然后用H2O(10mL)并用EtOAc(2mL)稀释。弃去有机层，并用2N HCl水溶液将水相酸化至pH 2至3。然后用EtOAc(3×20mL)萃取水相。将合并的有机层用盐水(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。通过制备型HPLC纯化粗产物，得到呈白色固体形式的标题化合物(27.6mg，24％产率)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 9.23(s,1H),8.75-8.81(m,2H),7.61-7.68(m,3H),7.07-7.22(m,5H),6.03(d,J＝6.53Hz,1H),4.62(d,J＝6.53Hz,1H),4.20(dd,J＝6.90,2.64Hz,1H),3.72(br dd,J＝9.91,7.15Hz,2H),3.55(s,1H),3.03(br d,J＝1.51Hz,2H)；LC/MS[M+H]＝579.1。
实施例15
合成2-烯丙基-2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氨基-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸
步骤1：
向2-(((3aR,5R,6R,6aR)-6-乙酰氧基-6-乙炔基-2,2-二甲基四氢呋喃并[2,3-d][1,3]间二氧杂环戊烯-5-基)甲氧基)丙二酸二乙酯(600mg，1.45mmol，1当量)于DMF(1mL)中的溶液中添加烯丙基溴(263mg，2.17mmol，1.5当量)和Cs2CO3(943mg，2.90mmol，2当量)。在20℃下搅拌混合物2小时，然后用水(15mL)稀释并用EtOAc(4×10mL)萃取。将合并的有机相用水(10mL)、盐水(10mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩，得到呈无色胶状物形式的粗制2-(((3aR,5R,6R,6aR)-6-乙酰氧基-6-乙炔基-2,2-二甲基四氢-呋喃并[2,3-d][1,3]-间二氧杂环戊烯-5-基)甲氧基)-2-烯丙基丙二酸二乙酯(685mg)。
步骤2：
向粗制2-(((3aR,5R,6R,6aR)-6-乙酰氧基-6-乙炔基-2,2-二甲基四氢呋喃并[2,3-d][1,3]间二氧杂环戊烯-5-基)甲氧基)-2-烯丙基丙二酸二乙酯(685mg，1.51mmol，1当量)于DCM(5mL)中的溶液中添加TFA(5mL，67.53mmol，45当量)和H2O(1mL，55.51mmol，37当量)。在20℃下搅拌混合物16小时，然后用水(15mL)稀释并用固体NaHCO3将pH调节至7至8。用DCM和MeOH的混合物(4×12mL；10:1/v:v)萃取反应混合物。将合并的萃取物用饱和NaHCO3水溶液(8mL)、盐水(8mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩，得到呈黄色胶状物形式的粗制2-(((2R,3S,4R)-3-乙酰氧基-3-乙炔基-4,5-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-烯丙基丙二酸二乙酯(580mg)。
步骤3：
向粗制2-(((2R,3S,4R)-3-乙酰氧基-3-乙炔基-4,5-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-烯丙基丙二酸二乙酯(580mg，1.40mmol，1当量)于吡啶(5mL)中的溶液中添加Ac2O(1.31mL，14.00mmol，10当量)和4-DMAP(513mg，4.20mmol，3当量)。在20℃下搅拌混合物15小时，然后用水(15mL)稀释并用EtOAc(3×10mL)萃取。将合并的萃取物用0.5N HCl水溶液(2×8mL)、NaHCO3(2×8mL)、盐水(8mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。通过硅胶柱色谱法(石油醚:EtOAc＝5:1至2:1)纯化粗产物，得到呈无色胶状物形式的产物(420mg，60％产率)。
步骤4：
在25℃下在N2气氛下向2-烯丙基-2-(((2R,3R,4R)-3,4,5-三乙酰氧基-3-乙炔基四氢呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸二乙酯(360mg，722.20umol，1当量)和2-氯-9H-嘌呤-6-胺(135mg，794.42umol，1.1当量)于MeCN(5mL)中的混合物中添加BSA(446.28uL，1.81mmol，2.5当量)。在65℃下搅拌混合物0.5小时。将反应混合物冷却至0℃，并接着滴加含TMSOTf(261.00uL，1.44mmol，2当量)的MeCN(1mL)。在65℃下搅拌混合物3小时，然后使其冷却并用饱和NaHCO3水溶液(15mL)淬灭。然后将混合物用EtOAc(4×10mL)萃取，用饱和盐水(8mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩。通过Combi-flash硅胶(20-40％EtOAc/石油醚)纯化粗产物，得到呈无色胶状物形式的2-烯丙基-2-(((2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(6-氨基-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基四氢呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸二乙酯(190mg)。
步骤5：
向2-烯丙基-2-(((2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(6-氨基-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基四氢呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸二乙酯(100mg，164.47umol，1当量)于THF(0.5mL)中的溶液中添加LiOH·H2O(6.90mg，164.47umol，1当量)。在50℃下搅拌混合物1小时，然后用水(6mL)稀释并用EtOAc(3×4mL)萃取。弃去有机层。用2N HCl水溶液将水相的pH值调节至2。然后用EtOAc(4×6mL)萃取水相。将合并的有机相用盐水(6mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩，得到固体。将固体溶解于MeCN(1mL)和水(1mL)的混合物中，并且然后直接冻干，得到呈白色固体形式的标题化合物(65.2mg，83％产率)。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δppm 8.83(s,1H)6.05(d,J＝7.5Hz,1H)5.84(br dd,J＝17.2,10.2Hz,1H)5.15(dd,J＝17.2,1.6Hz,1H)4.99-5.05(m,2H)4.27(t,J＝2.5Hz,1H)4.00(dd,J＝10.2,2.6Hz,1H)3.79(dd,J＝10.3,2.8Hz,1H)3.06(s,1H)2.88(d,J＝7.3Hz,2H)；LC/MS[M+H]＝467.9。
实施例16
合成2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氨基-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-乙基丙二酸
如上文实施例15中所描述但用EtBr代替烯丙基溴进行，得到呈白色固体形式的标题化合物。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 8.53-8.83(m,1H)7.81(br s,2H)5.91-6.40(m,2H)5.83(d,J＝7.88Hz,1H)4.91(d,J＝7.75Hz,1H)4.14(t,J＝2.88Hz,1H)3.75(dd,J＝10.26,3.25Hz,1H)3.56(s,1H)3.47-3.51(m,1H)1.93-2.04(m,2H)0.76(t,J＝7.38Hz,3H)；LC/MS[M+H]＝455.9。
实施例17
合成2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氨基-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-甲基丙二酸
如上文实施例15中所描述但用溴甲烷代替烯丙基溴进行，得到呈白色固体形式的标题化合物。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 13.38(br s,2H)8.69(s,1H)7.82(br s,2H)6.17(br s,1H)5.98(br d,J＝7.25Hz,1H)5.82(d,J＝7.63Hz,1H)4.85(br t,J＝6.94Hz,1H)4.15(t,J＝2.75Hz,1H)3.83(dd,J＝10.13,3.25Hz,1H)3.53-3.65(m,2H)1.52(s,3H)；LC/MS[M+H]＝441.8。
实施例18
合成2-苯甲基-2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(2-氯-6-(噻吩-2-基)-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸
步骤1：
在20℃下在N2气氛下向2-氯腺嘌呤(800mg，4.23mmol，1当量)于MeCN(5mL)和H2O(10mL)中的混合物中添加4,4,5,5-四甲基-2-(噻吩-2-基)-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷(800.37mg，3.81mmol，0.9当量)、Pd(OAc)2(47.51mg，211.64umol，0.05当量)、Cs2CO3(3.45g，10.58mmol，2.5当量)和三苯基膦-3,3'-3"-三磺酸三钠盐(601.50mg，1.06mmol，0.25当量)。在110℃搅拌混合物3小时，然后使其冷却并分配于EtOAc(3×20mL)与H2O(10mL)之间。将合并的有机相用H2O(2×10mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。将粗产物用(石油醚:EtOAc＝3:1)湿磨并使其静置14小时。通过抽滤收集沉淀物并干燥，得到呈黄色固体形式的2-氯-6-(噻吩-2-基)-9H-嘌呤(190mg，19％产率)。
步骤2：
在0℃下向2-氯-6-(噻吩-2-基)-9H-嘌呤(140mg，591.51umol，1当量)和2-苯甲基-2-(((2R,3R,4R)-3,4,5-三乙酰氧基-3-乙炔基四氢呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸二乙酯(324.47mg，591.51umol，1当量)于MeCN(3mL)中的混合物中添加DBU(267uL，1.77mmol，3当量)。在0℃下搅拌混合物10分钟，并接着滴加TMSOTf(481uL，2.66mmol，4.5当量)。将混合物在0℃下搅拌30分钟，并且然后在65℃下在N2气氛下搅拌14小时。使反应混合物冷却并分配于EtOAc(3×20mL)与饱和NaHCO3水溶液(2×10mL)之间。将合并的有机相用盐水(2×20mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。通过制备型TLC(石油醚:EtOAc＝2:1)纯化粗产物，得到呈白色固体形式的2-苯甲基-2-(((2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(2-氯-6-(噻吩-2-基)-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-丙二酸二乙酯(150mg，31％产率)。
步骤3：
向2-苯甲基-2-(((2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(2-氯-6-(噻吩-2-基)-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基四氢呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸二乙酯(150mg，206.85umol，1当量)于THF(2mL)中的混合物中添加LiOH·H2O(2M，2mL，19.34当量)。在25℃下搅拌混合物2小时，然后将其分配于EtOAc(10mL)与水(10mL)之间。用2M HCl水溶液将水相调节至pH约2。将水相分配于EtOAc(40mL)与盐水(20mL)之间，经无水Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。通过制备型HPLC(柱：YMC-Triart Prep C18 150×40mm×7um；流动相：[水(0.225％FA)-ACN]；B％：43％-63％，10min)纯化粗产物并冻干，得到呈白色固体形式的标题化合物(31.6mg，26％产率)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 8.87(s,1H)8.60(dd,J＝3.76,1.25Hz,1H)8.02(dd,J＝5.02,1.00Hz,1H)7.36(dd,J＝4.89,3.89Hz,1H)7.16-7.28(m,2H)6.93-7.10(m,3H)6.31(br s,1H)6.11(br d,J＝6.02Hz,1H)5.99(d,J＝7.53Hz,1H)4.88-4.97(m,1H)4.23(dd,J＝4.27,2.76Hz,1H)3.99(br dd,J＝10.42,4.39Hz,1H)3.84(br d,J＝8.53Hz,1H)3.56(s,1H)3.26(s,2H)；LC/MS[M+H]＝585.0。
实施例19
合成2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氨基-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-(4-(2-氧代-1-丙基-1,2-二氢吡啶-3-基)苯甲基)丙二酸
步骤1：
向3-溴吡啶-2(1H)-酮(3g，17.24mmol，1当量)于丙酮(100mL)中的溶液中添加K2CO3(11.91g，86.21mmol，5当量)。在20℃下搅拌悬浮液0.5小时，并接着添加1-溴丙烷(4.71mL，51.73mmol，3当量)和KI(859mg，5.17mmol，0.3当量)。在20℃下搅拌混合物16小时。将额外量的1-溴丙烷(1.0g)添加至反应混合物，并且在20℃下进一步搅拌混合物3小时。将反应物用水(50mL)稀释并用EtOAc(3×40mL)萃取。将合并的有机层用盐水(100mL)洗涤并经无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩。通过Combi-Flash(硅胶，20-60％EtOAc/石油醚)纯化残余物，得到呈透明油形式的3-溴-1-丙基吡啶-2(1H)-酮(1.23g，33％产率)。
步骤2：
向3-溴-1-丙基吡啶-2(1H)-酮(1.79g，8.28mmol，1当量)和(4-(羟甲基)苯基)硼酸(1.38g，9.11mmol，1.1当量)于二噁烷(18mL)中的溶液中添加K2CO3(3.43g，24.84mmol，3当量)、Pd(dppf)Cl2(606mg，828.00umol，0.1当量)和H2O(6mL)。用N2使混合物脱气10分钟，并且然后在N2气氛下在80℃下搅拌16小时。使反应混合物冷却并过滤。浓缩滤液。通过Combi Flash(硅胶，30-50％EtOAc/石油醚)纯化残余物，得到呈棕色固体的3-(4-(羟甲基)苯基)-1-丙基吡啶-2(1H)-酮(1.84g，91％产率)。
步骤3：
在-25℃下向PPh3(1.94g，7.40mmol，6当量)于DCM(15mL)中的溶液中添加CBr4(2.45g，7.40mmol，6当量)。在-25℃下搅拌黄色溶液1小时，并接着滴加含3-(4-(羟甲基)苯基)-1-丙基吡啶-2(1H)-酮(300mg，1.23mmol，1当量)的DCM(3mL)。在-25℃下搅拌黄色悬浮液0.5小时以产生黄色悬浮液。用MTBE(50mL)稀释反应混合物以产生更多沉淀物。滤出沉淀物，并且浓缩滤液。通过CombiFlash(硅胶柱，10-100％EtOAc/石油醚)纯化残余物，得到呈透明油形式的3-(4-(溴甲基)苯基)-1-丙基吡啶-2(1H)-酮(243mg，64％产率)。
步骤4：
向2-(((2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(6-N,N'-(双(叔丁氧基羰基)氨基)-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-丙二酸二乙酯(554mg，721.20umol，1当量)于DMF(5mL)中的溶液中添加K2CO3(299.03mg，2.16mmol，3当量)。在20℃下搅拌混合物0.5小时，并接着添加3-(4-(溴甲基)苯基)-1-丙基吡啶-2(1H)-酮(242.91mg，793.32umol，1.1当量)。在20℃下搅拌混合物16小时，然后用水(30mL)稀释并通过EtOAc(4×20mL)萃取。将合并的有机层用水(100mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩。通过Combi Flash(硅胶，20-30％EtOAc/石油醚)纯化残余物，得到呈无色胶状物形式的2-(((2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(6-N,N'-(双(叔丁氧基羰基)氨基)-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-(4-(2-氧代-1-丙基-1,2-二氢吡啶-3-基)苯甲基)-丙二酸二乙酯(209mg)。
步骤5：
在0℃下向2-(((2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(6-N,N'-(双(叔丁氧基羰基)氨基)-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-(4-(2-氧代-1-丙基-1,2-二氢吡啶-3-基)苯甲基)丙二酸二乙酯(209mg，210.38umol，1当量)于DCM(2mL)中的溶液中添加TFA(0.7mL，9.45mmol，44.94当量)。在20℃下搅拌溶液2小时，然后通过饱和NaHCO3水溶液(5mL)淬灭并用EtOAc(4×10mL)萃取。合并的有机层经无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩。通过Combi Flash(硅胶，30-70％EtOAc/石油醚)纯化残余物，得到呈白色固体形式的2-(((2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(6-氨基-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-(4-(2-氧代-1-丙基-1,2-二氢-吡啶-3-基)苯甲基)丙二酸二乙酯(91mg，55％产率)。
步骤6：
向2-(((2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(6-氨基-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-(4-(2-氧代-1-丙基-1,2-二氢-吡啶-3-基)苯甲基)丙二酸二乙基酯(91mg，114.72umol，1当量)于THF(1mL)中的溶液中添加1N LiOH水溶液(1mL)。在20℃下搅拌混合物2.5小时，然后用水(5mL)稀释，并用EtOAc(2×10mL)洗涤所得溶液。弃去有机萃取物。用2N HCl水溶液将水层酸化至pH 2并且然后用EtOAc(4×8mL)萃取。合并的有机层经无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将残余物溶解于MeOH(5mL)和水(20mL)的混合物中并通过冻干干燥，得到呈白色固体形式的标题化合物(51mg，67％产率)。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δppm 8.08(s,1H),7.53(dd,J＝6.80,2.0Hz,1H),7.28-7.39(m,5H),6.34(t,J＝6.9Hz,1H),5.96(d,J＝7.6Hz,1H),4.77(d,J＝7.6Hz,1H),4.28(s,1H),4.07-4.15(m,1H),4.01(dd,J＝10.3,2.8Hz,1H),3.92(t,J＝7.4Hz,2H),3.39-3.58(m,2H),3.06(s,1H),1.65-1.80(m,2H),0.94(t,J＝7.4Hz,3H)；LC/MS[M+H]＝653.1。
实施例20
合成2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氨基-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-(4-(1-乙基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)苯甲基)丙二酸
如上文实施例19中所描述但用溴乙烷代替溴丙烷进行，得到呈白色固体形式的标题化合物。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δppm 8.15(s,1H),7.53(dd,J＝6.6,1.3Hz,1H),7.25-7.38(m,5H),6.32(t,J＝6.9Hz,1H),5.96(d,J＝7.6Hz,1H),4.78(d,J＝7.5Hz,1H),4.30(s,1H),4.09-4.15(m,1H),3.95-4.04(m,3H),3.39-3.58(m,2H),3.06(s,1H),1.28-1.32(m,3H)；LC/MS[M+H]＝639.1。
实施例21
合成2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氨基-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-(4-(1-(2-羟乙基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)苯甲基)丙二酸
步骤1：
在20℃下向3-溴吡啶-2(1H)-酮(3g，17.24mmol，1当量)于丙酮(100mL)中的混合物中添加KI(859mg，5.17mmol，0.3当量)、K2CO3(5.96g，43.10mmol，2.5当量)和2-溴乙醇(4.90mL，68.97mmol，4当量)。搅拌混合物4小时，然后过滤，并用EtOAc(100mL)洗涤滤饼。减压浓缩滤液，得到残余物。通过快速硅胶柱色谱法(石油醚:EtOAc＝5:1至0:1)纯化残余物，得到呈黄色胶状物形式的3-溴-1-(2-)吡啶-2(1H)-酮(2.2g，59％产率)。
步骤2：
在20℃下向3-溴-1-(2-羟乙基)吡啶-2(1H)-酮(2.2g，10.09mmol，1当量)于DMF(15mL)中的混合物中添加咪唑(1.72g，25.22mmol，2.5当量)和TBDPSCl(5.18mL，20.18mmol，2当量)。搅拌混合物2小时，然后用H2O(60mL)稀释并用EtOAc(3×30mL)萃取。将合并的萃取物用饱和NH4Cl水溶液(2×30mL)、盐水(30mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。通过快速硅胶柱色谱法(石油醚:EtOAc＝1:0至6:1)纯化残余物，得到呈淡黄色油形式的3-溴-1-(2-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)乙基)-吡啶-2(1H)-酮(3.75g，79％产率)。
步骤3至8：
如上文实施例19中所描述但用3-溴-1-(2-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)乙基)-吡啶-2(1H)-酮代替3-(4-(溴甲基)-苯基)-1-丙基吡啶-2(1H)-酮来进行，得到呈白色固体形式的标题化合物。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δppm 8.33(s,1H),7.50-7.57(m,1H),7.41-7.47(m,1H),7.39(d,J＝8.13Hz,2H),7.29(br d,J＝8.13Hz,2H),6.35(t,J＝6.88Hz,1H),5.98(d,J＝7.13Hz,1H),4.71(d,J＝7.00Hz,1H),4.30(br s,1H),3.93-4.16(m,4H),3.83(m,2H),3.36-3.50(m,2H),3.05(s,1H)；LC/MS[M+H]＝655.1。
实施例22
合成2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氨基-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-(4-(2-甲氧基吡啶-3-基)苯甲基)丙二酸
步骤1：
在25℃向2-(((2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(6-N,N'-(双(叔丁氧基羰基)氨基)-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基四氢呋喃-2-基)-甲氧基)-2-(4-碘苯甲基)丙二酸二乙酯(900mg，914.47umol，1当量)和(2-甲氧基-3-吡啶基)硼酸(168mg，1.10mmol，1.2当量)于二噁烷(9mL)中的溶液中添加K2CO3(379mg，2.74mmol，3当量)、Pd(dppf)Cl2(67mg，91.45umol，0.1当量)和H2O(3mL)。用N2使混合物脱气片刻，并且然后加热至80℃，保持16小时，然后用水(10mL)稀释并用乙酸乙酯(2×10mL)萃取。合并的有机层经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。通过Combi-flash(硅胶，10-50％EtOAc/石油醚)纯化粗产物，得到呈黄色胶状物形式的2-(((2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(6-N,N'-(双(叔丁氧基羰基)氨基)-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基四氢-呋喃-2-基)-甲氧基)-2-(4-(2-甲氧基吡啶-3-基)苯甲基)丙二酸二乙酯(117mg，13％产率)。
步骤2：
向2-(((2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(6-N,N'-(双(叔丁氧基羰基)氨基)-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基四氢呋喃-2-基)-甲氧基)-2-(4-(2-甲氧基吡啶-3-基)苯甲基)丙二酸二乙酯(90mg，93.23umol，1当量)于DCM(3mL)中的溶液中添加TFA(0.4mL，5.40mmol，58当量)。在20℃下搅拌溶液2小时，然后用饱和NaHCO3水溶液(4mL)淬灭并用EtOAc(3×4mL)萃取。浓缩合并的有机层，得到呈黄色胶状物形式的粗制2-(((2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(6-氨基-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-(4-(2-甲氧基吡啶-3-基)苯甲基)-丙二酸二乙酯(42mg)。
步骤3：
向粗制2-(((2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(6-氨基-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-(4-(2-甲氧基-吡啶-3-基)苯甲基)丙二酸二乙酯(42mg，54.89umol，1当量)于THF(2.5mL)中的溶液中添加1M LiOH水溶液(0.8mL，15当量)。在20℃下搅拌反应混合物4小时，然后用1N HCl水溶液将其酸化至pH 6并浓缩。通过制备型HPLC纯化粗产物，并且通过冻干将洗脱份干燥，得到呈白色固体形式的标题化合物(6mg，17％产率)。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δppm 8.10(s,1H),8.01(dd,J＝4.94,1.69Hz,1H),7.48(dd,J＝7.25,1.63Hz,1H),7.24-7.35(m,4H),6.93(dd,J＝7.32,5.07Hz,1H),5.97(d,J＝7.50Hz,1H),4.89-4.96(m,1H),4.29(br s,1H),4.05(br d,J＝5.00Hz,2H),3.76(s,3H),3.51(br d,J＝14.76Hz,1H),3.42(br d,J＝14.51Hz,1H),3.01(s,1H)；LC/MS[M+H]＝625.1。
实施例23
合成2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氨基-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-(3-(三氟甲氧基)苯甲基)丙二酸
如上文实施例1中所描述但用1-(溴甲基)-4-(三氟甲氧基)苯代替苯甲基溴进行，得到呈白色固体形式的标题化合物。
1H NMR(CD3OD,300MHz)δ8.43(s,1H),7.09-7.25(m,3H),6.95-6.98(d,J＝8.1Hz,1H),6.01-6.04(d,J＝7.32Hz,1H),5.00-5.03(d,J＝7.41Hz,1H),4.35-4.37(t,J＝3.33Hz,1H),4.05-4.15(m,2H),3.38-3.53(q,J＝15Hz,2H),2.99(s,1H)；LC/MS[M+H]＝602.0。
实施例24
合成2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氨基-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-(噻吩-3-基甲基)丙二酸
如上文实施例1中所描述但用3-(溴甲基)噻吩代替苯甲基溴进行，得到呈白色固体形式的标题化合物。
1H NMR(CD3OD,300MHz)δ8.39(s,1H),7.09-7.17(m,2H),6.98-7.00(d,J＝5.04.0Hz,1H),6.01-6.04(d,J＝7.47Hz,1H),5.00-5.02(d,J＝7.29Hz,1H),4.32-4.34(t,J＝2.76Hz,1H),4.01-4.11(m,2H),3.41-3.54(q,J＝15Hz,J＝9.03Hz,2H),2.98(s,1H)；LC/MS[M+H]＝524.0。
实施例25
合成2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氨基-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-(丙-2-炔-1-基)丙二酸
如上文实施例1中所描述但用炔丙基溴代替苯甲基溴进行，得到呈白色固体形式的标题化合物。
1H NMR(CD3OD,300MHz)δ8.96(s,1H),6.07-6.09(d,J＝7.53Hz,1H),5.01-5.04(d,J＝7.53Hz,1H),4.29-4.30(m,1H),3.92-4.05(m,2H),3.01-3.15(m,2H),2.99(s,1H),2.28-2.30(t,J＝2.58Hz,1H)；LC/MS[M+H]＝467。
实施例26
合成2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氨基-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸
步骤1：
在0℃下在氩气气氛下向2-(((2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(6-N,N'-(双(叔丁氧基羰基)氨基)-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基四氢呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸二乙酯(200mg，0.26mmol)于CH2Cl2(1mL)中的溶液中添加TFA(0.5mL)。搅拌混合物5分钟并且使其升温并搅拌1小时。将额外量的TFA(0.4mL)添加至反应混合物，并且将其进一步搅拌1.5小时，然后将其浓缩。使残余物与DCM(5×5mL)减压共沸，得到粗制2-(((2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(6-氨基-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基四氢-呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸二乙酯，其不经进一步纯化即用于下一步骤中。
步骤2：
向来自前一步骤的粗制2-(((2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(6-氨基-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基四氢呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸二乙酯(0.26mmol)于MeOH(8.5mL)和水(1.5mL)中的混合物中的溶液中添加粉末状单水合氢氧化锂(86mg，2.08mmol)。搅拌所得混合物16小时，然后减压除去有机挥发物。用另外的水(11mL)稀释残余物并用EtOAc(12mL)萃取。弃去有机层。用1N HCl水溶液将水相酸化至pH为约2.5并用EtOAc(3×12mL)萃取。将合并的有机层干燥(Na2SO4)，过滤并浓缩，得到呈淡棕色固体形式的标题化合物(45.5mg)。
1H NMR(CD3OD,300MHz):δ8.94(s,1H),6.08(d,J＝7.52Hz,1H),5.05(d,J＝7.52Hz,1H),4.65(s,1H),4.29(t,J＝2.40Hz,1H),4.06(dd,J＝10.7,2.5Hz,1H),3.93(dd,J＝10.64,2.50Hz,1H),3.12(s,1H)；LC/MS[M+H]＝428。
实施例27
合成2-(((2R,3S,4R,5R)-3-((1H-吡唑-3-基)乙炔基)-5-(6-氨基-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸
步骤1：
在氩气气氛下向3-碘-1H-吡唑(407mg，2.1mmol)、PdCl2(PPh3)2(82mg，0.12mmol)、CuI(22mg，0.12mmol)和Et3N(10mL)于THF(10mL)中的混合物中添加2-(((2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(6-N,N'-(双(叔丁氧基羰基)-氨基)-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基四氢呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸二乙酯(1g，1.2mmol)。在60℃下搅拌所得混合物过夜，然后使其冷却至室温，并且减压除去有机挥发物。通过快速硅胶柱色谱法(60-100％EtOAc/己烷)纯化所得粗残余物，得到呈固体形式的2-(((2R,3R,4R,5R)-3-((1H-吡唑-3-基)乙炔基)-3,4-二乙酰氧基-5-(6-N,N'-(双(叔丁氧基羰基)氨基)-2-氯-9H-嘌呤-9-基)四氢呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸二乙酯。
步骤2：
向2-(((2R,3R,4R,5R)-3-((1H-吡唑-3-基)乙炔基)-3,4-二乙酰氧基-5-(6-N,N'-(双(叔丁氧基羰基)氨基)-2-氯-9H-嘌呤-9-基)四氢呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸二乙酯(100mg，0.12mmol)于DCM(3mL)中的溶液中添加TFA(1mL)。在25℃下搅拌所得混合物4小时，然后浓缩，得到粗制2-(((2R,3R,4R,5R)-3-((1H-吡唑-3-基)乙炔基)-3,4-二乙酰氧基-5-(6-氨基-2-氯-9H-嘌呤-9-基)四氢呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸二乙酯，其不经进一步纯化即用于下一步骤中。
步骤3：
向粗制2-(((2R,3R,4R,5R)-3-((1H-吡唑-3-基)乙炔基)-3,4-二乙酰氧基-5-(6-氨基-2-氯-9H-嘌呤-9-基)四氢呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸二乙酯于THF(5mL)和H2O(2mL)的混合物中的溶液中添加LiOH·H2O(50mg，1.2mmol)。在25℃下搅拌所得混合物24小时，然后将其冷却至0℃并用1N HCl水溶液酸化至pH 6.5。浓缩反应混合物。将粗残余物通过制备型反相HPLC纯化并通过冻干干燥，得到呈白色固体形式的标题化合物。
1H NMR(CD3OD,300MHz)δ8.96(s,1H),7.56-7.76(m,1H),6.50-6.57(m,1H),6.12-6.14(d,J＝7.14Hz,1H),5.13-5.15(d,J＝6.78Hz,1H),4.63-4.70(m,1H),4.38(s,1H),3.99-4.13(m,2H)；LC/MS[M+H]＝495。
实施例28和29
合成2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氨基-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-((1-苯甲基-1H-吡唑-3-基)乙炔基)-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸和
2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氨基-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-((1-苯甲基-1H-吡唑-5-基)乙炔基)-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸
步骤1：
在0℃下在氩气气氛下向2-(((2R,3R,4R,5R)-3-((1H-吡唑-3-基)乙炔基)-3,4-二乙酰氧基-5-(6-N,N'-(双(叔丁氧基羰基)氨基)-2-氯-9H-嘌呤-9-基)四氢呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸二乙酯(100mg，0.12mmol)于无水DMF(2mL)中的溶液中添加烘箱干燥的Cs2CO3(78mg，0.24毫摩尔)。在室温下搅拌混合物20分钟，接着添加苯甲基溴(29ul，0.24毫摩尔)。在室温下搅拌所得混合物2小时，然后用EtOAc(15mL)和H2O(5mL)稀释。将有机层分离，用H2O(20mL)、盐水洗涤，经Na2SO4干燥并浓缩。通过快速硅胶柱色谱法(0-50％EtOAc/己烷)纯化粗残余物，得到2-(((2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-3-((1-苯甲基-1H-吡唑-3-基)乙炔基)-5-(6-N,N'-(双(叔丁氧基羰基)氨基)-2-氯-9H-嘌呤-9-基)四氢呋喃-2-基)甲氧基)-丙二酸二乙酯和2-(((2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-3-((1-苯甲基-1H-吡唑-5-基)乙炔基)-5-(6-N,N'-(双(叔丁氧基羰基)氨基)-2-氯-9H-嘌呤-9-基)四氢呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸二乙酯。
步骤2至3：
如上文实施例27中所描述但用2-(((2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-3-((1-苯甲基-1H-吡唑-3-基)乙炔基)-5-(6-N,N'-(双(叔丁氧基羰基)氨基)-2-氯-9H-嘌呤-9-基)四氢呋喃-2-基)甲氧基)-丙二酸二乙酯代替2-(((2R,3R,4R,5R)-3-((1H-吡唑-3-基)乙炔基)-3,4-二乙酰氧基-5-(6-N,N'-(双(叔丁氧基羰基)氨基)-2-氯-9H-嘌呤-9-基)四氢呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸二乙酯来进行，得到呈白色固体形式的标题化合物(实施例28)。
1H NMR(CD3OD,300MHz)δ8.95(s,1H),7.685(s,1H),7.22-7.38(m,5H),6.50(s,1H),6.10-6.13(d,J＝7.05Hz,1H),5.35(s,2H),5.16-5.18(d,J＝7.35Hz,1H),4.68-4.76(m,1H),4.38(s,1H),3.96-4.16(dd,J＝9.84Hz,J＝17Hz,2H)；LC/MS[M+H]＝585。
步骤4至5：
如上文实施例27中所描述但用2-(((2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-3-((1-苯甲基-1H-吡唑-5-基)乙炔基)-5-(6-N,N'-(双(叔丁氧基羰基)氨基)-2-氯-9H-嘌呤-9-基)四氢呋喃-2-基)甲氧基)-丙二酸二乙酯代替2-(((2R,3R,4R,5R)-3-((1H-吡唑-3-基)乙炔基)-3,4-二乙酰氧基-5-(6-N,N'-(双(叔丁氧基羰基)氨基)-2-氯-9H-嘌呤-9-基)四氢呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸二乙酯来进行，得到呈白色固体形式的标题化合物(实施例29)。
1H NMR(CD3OD,300MHz)δ8.88(s,1H),7.53(s,1H),7.23-7.35(m,5H),6.59(s,1H),6.10-6.13(d,J＝6.09Hz,1H),5.46(s,2H),5.15-5.17(d,J＝6.9Hz,1H),4.35-4.41(m,2H),3.71-4.01(dd,J＝10.71,J＝33,2H)；LC/MS[M+H]＝585。
实施例30和31
合成2-苯甲基-2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(5-氯-7-(异丙氨基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-3-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸
和
2-苯甲基-2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(2-氯-6-(二甲氨基)-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸
步骤1：
在25℃下向2-苯甲基-2-(((2R,3R,4R)-3,4,5-三乙酰氧基-3-乙炔基四氢呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸二乙酯(500mg，0.91mmol)于MeCN(6mL)中的溶液中添加5,7-二氯-1H-咪唑并[4,5-b]吡啶(223mg，1.18mmol)并接着添加N,O-双(三甲基甲硅烷基)乙酰胺(BSA)(535uL，2.19mmol)。在85℃下加热所得悬浮液15分钟，此时其变得透明。使反应混合物冷却至室温，接着滴加TMSOTf(262mg，1.18mmol)。然后使反应混合物在85℃下回流3小时，此时所有原料耗尽。将反应物用冷的饱和NaHCO3溶液淬灭并用EtOAc(15mL)稀释。将有机层分离，用H2O(20mL)、盐水洗涤，经Na2SO4干燥并浓缩。通过快速硅胶柱色谱法(0-50％EtOAc/己烷)纯化粗残余物，得到呈泡沫形式的2-苯甲基-2-(((2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(5,7-二氯-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-3-基)-3-乙炔基-四氢呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸二乙酯。
步骤2：
向含有含2-苯甲基-2-(((2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(5,7-二氯-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-3-基)-3-乙炔基四氢呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸二乙酯(80mg，0.12mmol)的无水DMF(1mL)的密封管中添加异丙胺(0.5mL，5.9mmol)和Et3N(1mL，7.1mmol)。在75℃下加热反应混合物72小时，然后使其冷却并用EtOAc(15mL)和H2O(5mL)稀释。将有机层分离，用H2O(20mL)、盐水洗涤，经Na2SO4干燥并浓缩。通过快速硅胶柱色谱法(0-50％EtOAc/己烷)纯化残余物，得到呈泡沫形式的2-苯甲基-2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(5-氯-7-(异丙氨基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-3-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸二乙酯和2-苯甲基-2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(5-氯-7-(二甲氨基)-3H-咪唑并[4,5-b]-吡啶-3-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸二乙酯。
步骤3：
向2-苯甲基-2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(5-氯-7-(异丙氨基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-3-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-丙二酸二乙酯(10mg，0.016mmol)于THF(3mL)和H2O(1mL)的混合物中的溶液中添加LiOH·H2O(10mg，0.24mmol)。在25℃下搅拌所得混合物24小时，然后将其冷却至0℃并用1N HCl水溶液酸化至pH 6.5。将粗残余物通过制备型反相HPLC纯化并通过冻干干燥，得到呈白色固体形式的2-苯甲基-2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(5-氯-7-(异丙氨基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-3-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸。
1H NMR(CD3OD,300MHz)δ8.25(s,1H),7.25-7.28(m,2H),7.05(m,3H),6.43(s,1H),6.06-6.08(d,J＝7.17Hz,1H),4.95-4.98(d,J＝7.05Hz,1H),4.32(s,1H),4.05-4.11(m,2H),3.89-3.93(m,1H),3.31-3.39(m,2H),2.99(s,1H),1.30-1.33(m,6H)；LC/MS[M+H]＝560。
步骤4：
向2-苯甲基-2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(5-氯-7-(二甲基-氨基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-3-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-丙二酸二乙酯(21mg，0.035mmol)于THF(3mL)和H2O(1mL)的混合物中的溶液中添加LiOH·H2O(30mg，0.71mmol)。在25℃下搅拌所得混合物24小时，然后将其冷却至0℃并用1N HCl水溶液酸化至pH6.5。浓缩反应混合物。将粗残余物通过制备型反相HPLC纯化并通过冻干干燥，得到呈白色固体形式的标题化合物。
1H NMR(CD3OD,300MHz)δ8.68(s,1H),7.21-7.24(m,2H),6.99-7.03(m,3H),6.49(s,1H),6.15-6.17(d,J＝7.08Hz,1H),4.99-5.02(d,J＝7.17Hz,1H),4.35-4.37(t,J＝3.12Hz,1H),4.07-4.08(m,2H),3.36-3.50(m,8H),2.99(s,1H)；LC/MS[M+H]＝546。
实施例32
合成2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(2-氯-6-((2-羟乙基)氨基)-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-(噻吩-3-基甲基)丙二酸
步骤1至3：
如上文实施例15中所描述但用3-(溴甲基)噻吩代替烯丙基溴来进行，得到呈固体形式的2-(噻吩-3-基甲基)-2-(((2R,3R,4R)-3,4,5-三乙酰氧基-3-乙炔基四氢呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸二乙酯。
步骤4：
在25℃下向5,7-二氯-1H-咪唑并[4,5-b]吡啶(238mg，1.26mmol)于MeCN(6mL)中的溶液中添加N,O-双(三甲基甲硅烷基)乙酰胺(BSA)(571uL，2.34mmol)。在85℃下加热所得悬浮液15分钟，此时其变得透明。使反应混合物冷却至室温，接着滴加2-(噻吩-3-基甲基)-2-(((2R,3R,4R)-3,4,5-三乙酰氧基-3-乙炔基四氢呋喃-2-基)-甲氧基)丙二酸二乙酯(540mg，0.97mmol)和TMSOTf(228ul，1.26mmol)。然后使反应混合物在85℃下回流2.5小时，此时所有原料耗尽。将反应物用冷的饱和NaHCO3溶液淬灭并用EtOAc(15mL)稀释。将有机层分离，用H2O(20mL)、盐水洗涤，经Na2SO4干燥并浓缩。通过快速硅胶柱色谱法(0-50％EtOAc/己烷)纯化粗残余物，得到呈泡沫形式的2-(((2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(2,6-二氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-(噻吩-3-基甲基)丙二酸二乙酯。
步骤5：
向2-(((2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(2,6-二氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-(噻吩-3-基甲基)丙二酸二乙酯(100mg，0.146mmol)于1,4-二噁烷(2mL)中的溶液中添加TEA(20uL，0.146mmol)，接着添加乙醇胺(13ul，0.219毫摩尔)。在25℃下搅拌所得混合物2小时，然后用EtOAc(15mL)和H2O(5mL)稀释。将有机层分离，用H2O(20mL)、盐水洗涤，经Na2SO4干燥并浓缩，得到粗制2-(((2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(2-氯-6-((2-羟乙基)氨基)-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-(噻吩-3-基甲基)丙二酸二乙酯，其不经进一步纯化即用于下一步骤中。
步骤6：
向粗制2-(((2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(2-氯-6-((2-羟乙基)氨基)-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-(噻吩-3-基甲基)丙二酸二乙酯于THF(4mL)和H2O(1mL)的混合物中的溶液中添加LiOH·H2O(80mg，1.91mmol)。在25℃下搅拌所得混合物24小时，然后将其冷却至0℃并用1N HCl水溶液酸化至pH 6.5。浓缩反应混合物。将粗残余物通过制备型反相HPLC纯化并通过冻干干燥，得到呈白色固体形式的标题化合物。
1H NMR(CD3OD,300MHz)δ8.32(s,1H),7.09-7.16(m,2H),6.97-6.99(m,1H),6.00-6.03(d,J＝7.41Hz,1H),4.99-5.02(d,J＝7.38Hz,1H),4.32-4.34(t,J＝3.03Hz,1H),4.00-4.11(m,2H),3.65-3.79(m,4H),3.40-3.53(q,J＝15.42Hz,J＝5.79Hz,2H),2.98(s,1H)；LC/MS[M+H]＝568.0。
实施例33
合成2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(2-氯-6-(异丙氨基)-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-(噻吩-3-基甲基)丙二酸
如上文实施例32中所描述但用i-PrNH2代替乙醇胺进行，得到呈白色固体形式的标题化合物。
1H NMR(CD3OD,300MHz)δ8.28(s,1H),7.08-7.16(m,2H),6.97-6.99(m,1H),5.99-6.02(d,J＝7.38Hz,1H),5.00-5.02(d,J＝7.35Hz,1H),4.31-4.43(m,2H),4.00-4.12(m,2H),3.40-3.53(q,J＝15.63Hz,J＝5.4Hz,2H),2.98(s,1H),1.27-1.32(m,6H)；LC/MS[M+H]＝566.0。
实施例34
合成2-苯甲基-2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(2-氯-6-((3-羟丙基)氨基)-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸
步骤1：
经由注射器向2,6-二氯-9H-嘌呤(690mg，3.65mmol)于无水CH3CN(15mL)中的溶液中添加N,O-双(三甲基甲硅烷基)乙酰胺(0.28mL，1.12mmol)。在氩气气氛下将混合物加热至95℃，保持5分钟，并且然后冷却至环境温度。向此混合物中添加2-苯甲基-2-(((2R,3R,4R)-3,4,5-三乙酰氧基-3-乙炔基四氢呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸二乙酯(2g，3.65mmol)，并接着添加TMSOTf(0.09mL，0.494mmol)。在95℃下加热所得混合物2.5小时，然后将其冷却至环境温度并用水(60mL)和EtOAc(60mL)稀释。用等体积的饱和NaHCO3溶液和盐水依次洗涤有机相。用EtOAc(2×30mL)进一步萃取水相。将合并的有机相干燥(MgSO4)，过滤并浓缩。通过快速硅胶柱色谱法(5-60％EtOAc/己烷)纯化粗残余物，得到呈灰白色固体形式的2-苯甲基-2-(((2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(2,6-二氯-9H-嘌呤-9-基)四氢呋喃-2-基)-甲氧基)丙二酸二乙酯(1.61g)。
步骤2：
向2-苯甲基-2-(((2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(2,6-二氯-9H-嘌呤-9-基)四氢呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸二乙酯(102mg，0.15mmol)于无水二噁烷(1mL)中的溶液中添加三乙胺(0.02mL，0.15mmol)和3-氨基丙醇(16mg，0.212mmol)。搅拌所得混合物1.5小时，然后用水(15mL)和DCM(15mL)稀释，并且收集有机相。用盐水(15mL)洗涤有机层。用EtOAc(2×10mL)进一步萃取水相。合并的有机层经MgSO4干燥，过滤并浓缩，得到呈透明粘稠油形式的粗制2-苯甲基-2-(((2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(2-氯-6-((3-羟丙基)氨基)-9H-嘌呤-9-基)四氢呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸二乙酯。
步骤3：
向粗制2-苯甲基-2-(((2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(2-氯-6-((3-羟丙基)氨基)-9H-嘌呤-9-基)四氢呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸二乙酯(0.15mmol)于H2O(0.2mL)、MeOH(1mL)和THF(0.28mL)中的溶液中添加粉末状LiOH单水合物(43mg，1.05mmol)。将混合物搅拌4小时，并且然后声波处理30分钟。添加另外的LiOH单水合物(7mg)并且继续声波处理1小时，然后减压除去有机挥发物，并用水(10mL)和EtOAc(10mL)稀释残余物。在0℃下冷却混合物并用1N HCl水溶液酸化至pH为约3。收集有机相并用EtOAc(2×10mL)进一步萃取水相。合并的EtOAc相经MgSO4干燥，过滤并浓缩。通过制备型反相HPLC纯化粗残余物，得到呈灰白色固体形式的标题化合物。
1H NMR(CD3OD,300MHz)δ8.19(bs,1H),7.21-7.3(m,2H),7.00-7.10(m,3H),6.00(d,J＝7.36Hz,1H),4.98(d,J＝7.36Hz,1H),4.33(t,J＝3.18Hz,1H),4.02-4.15(m,2H),3.68(t,J＝6.18Hz,2H),3.59-3.72(m,2H),3.47(d,J＝14.95Hz,1H),3.38(d,J＝14.95Hz,1H),2.99(s,1H),1.84-1.95(m,2H)；LC/MS[M+H]＝576.0。
实施例35
合成2-苯甲基-2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(2-氯-6-(((R)-2-羟丙基)氨基)-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸
如上文实施例34中所描述但用(R)-1-氨基丙-2-醇代替丙醇胺并接着用LiOH酯水解来进行，得到呈白色固体形式的标题化合物。
1H NMR(CD3OD,300MHz)δ8.19(bs,1H),7.22-7.30(m,2H),7.02-7.10(m,3H),6.01(d,J＝7.38Hz,1H),4.98(d,J＝7.38Hz,1H),4.33(t,J＝3.17Hz,1H),3.99-4.13(m,3H),3.58-3.69(m,1H),3.43(qt,J＝14.64Hz,2H),3.41-3.55(m,1H),2.99(s,1H),1.24(d,J＝6.30Hz,3H)；LC/MS[M+H]＝576.0。
实施例36
合成2-苯甲基-2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(2-氯-6-(((S)-2-羟丙基)氨基)-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸
如上文实施例34中所描述但用(S)-1-氨基丙-2-醇代替丙醇胺并接着用LiOH酯水解来进行，得到呈白色固体形式的标题化合物。
1H NMR(CD3OD,300MHz)δ8.19(bs,1H),7.23-7.29(m,2H),7.03-7.10(m,3H),6.00(d,J＝7.35Hz,1H),4.96(d,J＝7.35Hz,1H),4.32(t,J＝3.30Hz,1H),3.98-4.13(m,3H),3.59-3.68(m,1H),3.35-3.55(m,3H),2.99(s,1H),1.25(d,J＝6.30Hz,3H)；LC/MS[M+H]＝576.0。
实施例37
合成2-苯甲基-2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(6-(双(2-羟乙基)氨基)-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸
如上文实施例34中所描述但用二乙醇胺代替丙醇胺并接着用LiOH酯水解来进行，得到呈白色固体形式的标题化合物。
1H NMR(CD3OD,300MHz)δ8.16(s,1H),7.22-7.29(m,2H),6.99-7.09(m,3H),6.02(d,J＝7.33Hz,1H),4.97(d,J＝7.33Hz,1H),4.00-4.37(m,2H),4.29-4.34(m,2H),4.03-4.13(m,3H),3.84-3.91(m,4H),3.46(d,J＝14.92Hz,1H),3.37(d,J＝14.92Hz,1H),2.98(s,1H)；LC/MS[M+H]＝606.0。
实施例38
合成2-苯甲基-2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(2-氯-6-((2-甲氧基乙基)氨基)-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸
如上文实施例34中所描述但用2-甲氧基乙胺代替丙醇胺并接着用LiOH酯水解来进行，得到呈白色固体形式的标题化合物。
1H NMR(CD3OD,300MHz)δ8.17(bs,1H),7.22-7.30(m,2H),7.01-7.09(m,3H),6.01(d,J＝7.33Hz,1H),4.98(d,J＝7.33Hz,1H),4.33(t,J＝3.20Hz,1H),4.03-4.13(m,2H),3.69-3.79(m,2H),3.62(t,J＝5.13Hz,2H),3.47(d,J＝14.89Hz,1H),3.40(s,3H),3.38(d,J＝14.89Hz,1H),2.99(s,1H)；LC/MS[M+H]＝576.0。
实施例39
合成2-苯甲基-2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(2-氯-6-((2-甲氧基乙基)-(甲基)氨基)-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸
如上文实施例34中所描述但用(2-甲氧基乙基)甲胺代替丙醇胺并接着用LiOH酯水解来进行，得到呈白色固体形式的标题化合物。
1H NMR(CD3OD,300MHz)δ8.18(bs,1H),7.22-7.29(m,2H),6.99-7.09(m,3H),6.02(d,J＝7.21Hz,1H),4.98(d,J＝7.21Hz,1H),4.32(t,J＝3.41Hz,1H),4.03-4.14(m,2H),3.68(t,J＝5.42Hz,2H),3.34-3.49(m,7H),3.36(s,3H),2.99(s,1H)；LC/MS[M+H]＝590.0。
实施例40
合成2-苯甲基-2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(2-氯-6-(((1-羟基环丁基)-甲基)氨基)-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸
如上文实施例34中所描述但用1-(氨基甲基)环丁醇代替丙醇胺并接着用LiOH酯水解来进行，得到呈白色固体形式的标题化合物。
1H NMR(CD3OD,300MHz)δ8.18(bs,1H),7.23-7.29(m,2H),7.01-7.09(m,3H),6.01(d,J＝7.36Hz,1H),4.98(d,J＝7.36Hz,1H),4.32(t,J＝3.21Hz,1H),4.03-4.11(m,2H),3.73-3.79(m,2H),3.36-3.50(m,2H),2.99(s,1H),2.03-2.21(m,4H),1.59-1.85(m,2H)；LC/MS[M+H]＝602.0。
实施例41
合成2-苯甲基-2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(2-氯-6-(3-羟基氮杂环丁烷-1-基)-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸
如上文实施例34中所描述但用氮杂环丁烷-3-醇代替丙醇胺并接着用LiOH酯水解来进行，得到呈白色固体形式的标题化合物。
1H NMR(CD3OD,300MHz)δ8.29(bs,1H),7.21-7.29(m,2H),6.99-7.11(m,3H),6.01(d,J＝7.33Hz,1H),5.01(d,J＝7.33Hz,1H),4.57-4.82(m,3H),4.33(t,J＝3.39Hz,1H),4.14-4.27(m,2H),4.07(qd,J＝4.04,2.92Hz,2H),3.30-3.50(m,2H),2.98(s,1H)；LC/MS[M+H]＝574.0。
实施例42
合成2-苯甲基-2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(2-氯-6-(2-(羟甲基)氮杂环丁烷-1-基)-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸
如上文实施例34中所描述但用氮杂环丁烷-2-基甲醇代替丙醇胺并接着用LiOH酯水解来进行，得到呈白色固体形式的标题化合物。
1H NMR(CD3OD,300MHz)δ8.17-8.29(m,1H),7.22-7.28(m,2H),7.01-7.12(m,3H),5.98-6.03(m,1H),4.98(d,J＝7.30Hz,1H),4.27-4.45(m,3H),4.00-4.13(m,3H),3.83-3.92(m,1H),3.33-3.50(m,3H),2.99(s,0.5H),2.97(s,0.5H),2.49-2.63(m,1H),2.31-2.64(m,1H)；LC/MS[M+H]＝588.0。
实施例43
合成2-苯甲基-2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(2-氯-6-((1-(羟甲基)-环丙基)氨基)-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸
如上文实施例34中所描述但用(1-氨基环丙基)甲醇代替丙醇胺并接着用LiOH酯水解来进行，得到呈白色固体形式的标题化合物。
1H NMR(CD3OD,300MHz)δ8.18(s,1H),7.22-7.32(m,2H),7.02-7.11(m,3H),6.01(d,J＝7.36Hz,1H),4.96(d,J＝7.36Hz,1H),4.32(t,J＝3.24Hz,1H),4.02-4.14(m,2H),3.76(bs,2H),3.46(d,J＝15.04Hz,1H),3.38(d,J＝15.04Hz,1H),2.99(s,1H),0.88-1.03(m,4H)；LC/MS[M+H]＝588.0。
实施例44
合成2-苯甲基-2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(2-氯-6-(((1-羟基环丙基)-甲基)氨基)-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸
如上文实施例34中所描述但用1-(氨基甲基)环丙醇代替丙醇胺并接着用LiOH酯水解来进行，得到呈白色固体形式的标题化合物。
1H NMR(CD3OD,300MHz)δ8.18(s,1H),7.08-7.25(m,5H),5.98-6.02(d,J＝7Hz,1H),4.93-4.97(m,2H),4.30(bs,1H),3.98-4.10(m,2H),3.71(bs,2H),3.39-3.51(m,2H),3.00-3.13(s 1H),0.71-0.80(m,4H)；LC/MS[M+H]＝588.2。
实施例45
合成2-苯甲基-2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(2-氯-6-((环丁基甲基)氨基)-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸
如上文实施例34中所描述但用环丁基甲胺代替丙醇胺并接着用LiOH酯水解来进行，得到呈白色固体形式的标题化合物。
1H NMR(CD3OD,300MHz)δ8.19(s,1H),7.24-7.27(m,2H),7.05-7.07(m,3H),5.98-6.01(d,J＝8Hz,1H),4.93-4.95(d,J＝7Hz,1Hz),4.31-4.33(bs,1H),4.01-4.10(m,2H),3.58(s,2H),3.39-3.48(m,2H),3.00(s,1H),2.66-2.71(m,1H),2.12-2.15(m,2H)1.84-1.97(m,4H)；LC/MS[M+H]＝586.2。
实施例46
合成2-苯甲基-2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(2-氯-6-(3-(羟甲基)氮杂环丁烷-1-基)-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸
如上文实施例34中所描述但用氮杂环丁烷-3-基甲醇代替丙醇胺并接着用LiOH酯水解来进行，得到呈白色固体形式的标题化合物。
1H NMR(CD3OD,300MHz)δ8.09(s,1H),7.05-7.25(m,5H),6.00-6.02(d,J＝7Hz,1H),4.93-4.97(m,1H),4.33(bs,1H),3.96-4.11(m,2H),3.78(bs,2H),3.36-3.40(m,6H),2.99(bs,2H)；LC/MS[M+H]＝588.2。
实施例47
合成2-苯甲基-2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(2-氯-6-(3-羟基-3-甲基氮杂环丁烷-1-基)-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸
如上文实施例34中所描述但用3-甲基氮杂环丁烷-3-醇代替丙醇胺并接着用LiOH酯水解来进行，得到呈白色固体形式的标题化合物。
1H NMR(CD3OD,300MHz)δ8.30(s,1H),7.08-7.25(m,5H),6.00-6.03(d,J＝7Hz,1H),4.98-5.01(m,1H),4.33(bs,4H),4.01-4.09(m,2H),3.73(bs,1H),3.35-3.47(m,2H),2.98(s,1H),1.57(s,3H)；LC/MS[M+H]＝588.2。
实施例48
合成2-苯甲基-2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(2-氯-6-((3-羟基环丁基)-(甲基)氨基)-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸
如上文实施例34中所描述但用3-(甲氨基)环丁醇代替丙醇胺并接着用LiOH酯水解来进行，得到呈白色固体形式的标题化合物。
1H NMR(CD3OD,300MHz)δ8.26(s,1H),6.96-7.28(m,5H),6.02-6.04(d,J＝7Hz,1H),5.27(bs,1H),4.98-5.02(m,1H),4.33(bs,2H),3.95-4.15(m,3H),3.36-3.51(m,4H),2.99(s,1H),2.67-2.69(m,2H),2.22-2.25(m,2H)；LC/MS[M+H]＝602.2。
实施例49和50
合成2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氨基-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-3-乙氧基-3-氧代-2-(3-(三氟甲基)-苯甲基)丙酸
和
2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氨基-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-(3-(三氟甲基)苯甲基)丙二酸
如上文实施例8中所描述但用(3-三氟-甲基)苯代替呋喃来进行，通过制备型反相HPLC纯化得到呈白色固体形式的两种标题化合物。
2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氨基-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-3-乙氧基-3-氧代-2-(3-(三氟甲基)-苯甲基)丙酸：1H NMR(CD3OD,300MHz)δ8.33(bs,1H),7.51-7.54(d,J＝8Hz,2H),7.38-7.40(d,J＝6Hz,1H),7.21-7.26(t,J＝7Hz,1H),6.00-6.04(m,1H),4.98-5.02(dt,J＝4.7,52Hz,1H),4.36(bs,1H),4.02-4.22(m,4H),3.45-3.58(m,2H),3.02-3.12(d,J＝29Hz,1H),1.18-1.24(m,3H)；LC/MS[M+H]＝614.2。
2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氨基-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-(3-(三氟甲基)苯甲基)丙二酸：1H NMR(CD3OD,300MHz)δ8.30(s,1H),7.52-7.54(d,J＝9Hz,2H),7.37-7.39(d,J＝7Hz,1H),7.23-7.25(t,J＝7Hz,1H),6.01-6.03(d,J＝7Hz,1H),4.97-5.00(d,J＝7Hz,1H),4.37(bs,1H),4.12-4.14(m,2H),3.44-3.57(m,2H),3.01(s,1H)；LC/MS[M+H]＝586.2。
实施例51
合成2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氨基-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-(3-氯苯甲基)丙二酸
如上文实施例8中所描述但用3-氯-苯代替呋喃来进行，通过制备型反相HPLC纯化得到呈白色固体形式的标题化合物。
1H NMR(CD3OD,300MHz)δ8.42(s,1H),7.27(bs,1H),7.14-7.15(d,J＝6Hz,1H),7.02-7.06(m,2H),6.02-6.05(d,J＝8Hz,1H),5.03-5.06(d,J＝7Hz,1H),4.35-4.39(m,2H),3.39-3.49(m,2H),3.01(s,1H),2.48-2.54(t,J＝8Hz,1H)2.22-2.32(m,1H)；LC/MS[M+H]＝552.1。
实施例52
合成2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氨基-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-(3-甲氧基苯甲基)丙二酸
如上文实施例8中所描述但3-甲氧基-苯代替呋喃来进行，通过制备型反相HPLC纯化得到呈白色固体形式的标题化合物。
1H NMR(CD3OD,300MHz)δ8.40(s,1H),6.96-7.02(t,J＝8Hz,1H),6.82(bs,2H),6.59-6.62(m,1H),6.02-6.04(d,J＝7Hz,1H),5.01-5.04(d,J＝8Hz,1H),4.35-4.39(m,2H),3.54(s,3H),3.45-3.50(m,1H),2.97(s,1H),2.48-2.54(t,J＝8Hz,1H)2.22-2.32(m,1H)；LC/MS[M+H]＝548.1。
实施例53
合成2-([1,1'-联苯]-4-基甲基)-2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氨基-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸
如上文实施例8中所描述但用3-联苯代替呋喃来进行，通过制备型反相HPLC纯化得到呈白色固体形式的标题化合物。
1H NMR(CD3OD,300MHz)δ8.23(s,1H),7.28-7.43(m,9H),5.99-6.02(d,J＝7Hz,1H),4.96-4.98(d,J＝7Hz,1H),4.35(s,1H),4.08-4.15(m,2H),3.41-3.57(m,2H),3.04(s,1H)：LC/MS[M+H]＝594.2。
实施例54
合成2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氨基-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-((2'-羧基-[1,1'-联苯]-4-基)甲基)丙二酸
如上文实施例8中所描述但用3-甲基[1,1'-联苯]-2-甲酸酯代替呋喃来进行，通过制备型反相HPLC纯化得到呈白色固体形式的标题化合物。
1H NMR(CD3OD,300MHz)δ8.27(s,1H),7.71-7.73(d,J＝7Hz,1H),7.29-7.48(m,4H),7.14-7.16(d,J＝8Hz,1H),7.08-7.10(d,J＝8Hz,2H),5.99-6.01(d,J＝8Hz,1H),4.88-4.91(m,1H),4.30(bs,1H),4.03-4.12(m,2H),3.39-3.57(m,2H),2.99(s,1H)；LC/MS[M+H]＝638.2。
实施例55
合成2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氨基-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸
将2-(((2R,3R,4S,5R)-5-(N6,N6-双-Boc-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-((叔丁氧基羰基)氧基)-4-氟四氢呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸二乙酯(100mg，0.13mmol)溶解于EtOAc(2mL)中。用氩气吹扫溶液三次，并接着小心添加钯/碳(20mg，10重量％)。用氩气吹扫所得浆料三次，并且然后置于H2下(1个大气压，于气球中)。将反应物保持在环境温度下70小时。经由硅藻土过滤悬浮液，用EtOAc(3×2mL)洗涤。将滤液浓缩成油状物，然后将其溶解于DCM(1mL)中并接着添加TFA(100μL)。保持所得溶液过夜，然后将其浓缩。将浅黄色油状残余物溶解于THF(1mL)中并且在0℃下冷却。向此反应混合物中添加4M NaOH(100μL)，并且经14小时使反应物升温至环境温度，然后将其浓缩。通过制备型反相HPLC纯化粗残余物，得到呈白色固体形式的标题化合物。
1H NMR(CD3OD,300MHz)δ8.90(s,1H),6.09-6.11(d,J＝7Hz,1H),4.69-4.72(d,J＝8Hz,1H),4.64(bs,1H),4.19(s,1H),3.83(bs,3H),1.88-1.95(m,3H),1.06-1.11(t,J＝7Hz,3H)；LC/MS[M+H]＝432.2。
实施例56
合成2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氨基-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-苯甲基丙二酸
步骤1：
将2-苯甲基-2-(((2R,3R,4R)-3,4,5-三乙酰氧基-3-乙炔基四氢-呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸二乙酯(1.0mmol，549mg)和钯/碳(100mg，10重量％)于EtOH(5mL)和EtOAc(5mL)中的混合物在H2气氛下搅拌24小时，然后经硅藻土过滤，用EtOAc(3×5mL)冲洗。将滤液浓缩并经由快速硅胶柱色谱法纯化，得到2-苯甲基-2-(((2R,3R,4R)-3,4,5-三乙酰氧基-3-乙基四氢呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸二乙酯。
步骤2至3：
如上文实施例7中所描述但用2-苯甲基-2-(((2R,3R,4R)-3,4,5-三乙酰氧基-3-乙基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-丙二酸二乙酯代替2-(吡啶-4-基甲基)-2-(((2R,3R,4R)-3,4,5-三乙酰氧基-3-乙炔基四氢呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸二乙酯并接着酯水解来进行，经由制备型反相HPLC纯化得到呈白色固体形式的标题化合物。
1H NMR(CD3OD,300MHz)δ8.46(s,1H),7.18-7.20(m,2H),7.04-7.09(m,3H),6.01-6.04(d,J＝8Hz,1H),4.63-4.66(d,J＝8Hz,1H),4.21(bs,1H),3.76-3.96(m,2H),3.39-3.52(m,2H),1.76-1.83(m,2H),0.98-1.03(t,J＝7Hz,3H)；LC/MS[M+H]＝522.2
实施例57
合成2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氨基-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3,4-二羟基-3-乙烯基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-苯甲基丙二酸
步骤1：
将2-苯甲基-2-(((2R,3R,4R)-3,4,5-三乙酰氧基-3-乙炔基四氢呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸二乙酯(525mg，0.96mmol)和林德拉催化剂(Lindlar catalyst)(105mg，5重量％)于EtOH(5mL)和EtOAc(5mL)中的混合物在H2气氛下搅拌24小时，然后将其经硅藻土过滤，用EtOAc(3×5mL)冲洗。将滤液浓缩并经由快速硅胶柱色谱法纯化，得到2-苯甲基-2-(((2R,3R,4R)-3,4,5-三乙酰氧基-3-乙烯基四氢呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸二乙酯。
步骤2至3：
如上文实施例7中所描述但用2-苯甲基-2-(((2R,3R,4R)-3,4,5-三乙酰氧基-3-乙烯基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-丙二酸二乙酯代替2-(吡啶-4-基甲基)-2-(((2R,3R,4R)-3,4,5-三乙酰氧基-3-乙炔基四氢呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸二乙酯并接着酯水解来进行，经由制备型反相HPLC纯化得到呈白色固体形式的标题化合物。
1H NMR(CD3OD,300MHz)δ8.44(s,1H),7.21-7.22(m,2H),7.06-7.11(m,3H),6.14-6.23(m,1H),6.08-6.10(d,J＝8Hz,1H),5.55-5.61(m,1H),5.25-5.29(m,1H),4.81(s,1H),4.14(bs,1H),3.91-3.94(m,1H),3.62-3.65(d,J＝9Hz,1H),3.50-3.55(d,J＝15Hz,1H),3.39(s,1H)；LC/MS[M+H]＝520.1。
实施例58
合成2-苯甲基-2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(5-氯-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-3-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸
步骤1：
向2-苯甲基-2-(((2R,3R,4R)-3,4,5-三乙酰氧基-3-乙炔基四氢呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸二乙酯(175mg，0.319mmol)的端基差向异构混合物于无水二氯乙烷(3.5mL)中的溶液中添加5-氯-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶(65mg，0.422mmol)，并接着经由注射器添加N,O-双(三甲基甲硅烷基)乙酰胺(BSA)(0.28mL，1.12mmol)。在氩气气氛下在95℃下加热混合物1小时，然后将其冷却至环境温度，并接着经由注射器添加TMSOTf(0.09mL，0.494mmol)。在95℃下加热所得混合物5小时，然后使其冷却并用水(30mL)稀释并用EtOAc(30mL)萃取。用等体积的饱和NaHCO3溶液和盐水依次洗涤有机相。用EtOAc(2×30mL)进一步萃取水相。将合并的有机相干燥(MgSO4)，过滤并浓缩。通过制备型TLC(55％EtOAc/己烷)纯化粗残余物，得到呈粘稠油形式的较小极性的2-苯甲基-2-(((2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(5-氯-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-3-基)-3-((三甲基-甲硅烷基)乙炔基)四氢呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸二乙酯(44mg)和呈粘稠油形式的所需2-苯甲基-2-(((2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(5-氯-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-3-基)-3-乙炔基四氢呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸二乙酯(22mg)。
步骤2：
向2-苯甲基-2-(((2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(5-氯-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-3-基)-3-乙炔基四氢呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸二乙酯(22mg，0.034mmol)于THF(0.6mL)中的溶液中添加1N LiOH水溶液(0.24mL)。结合定期声波处理和搅拌经2天的时段施加另外的1N LiOH水溶液(0.58mL)。将反应混合物浓缩并用水(10mL)和EtOAc(10mL)稀释。使反应混合物在0℃下冷却并用1N HCl水溶液酸化至pH为约3。分离各层并用EtOAc(2×10mL)进一步萃取水层。合并的有机层经MgSO4干燥，过滤并浓缩。通过制备型反相HPLC纯化粗残余物，得到呈灰白色固体形式的标题化合物。
1H NMR(CD3OD,300MHz):δ8.63(bs,1H),8.01(d,J＝8.14Hz,1H),7.34(d,J＝8.14Hz,1H),7.29-7.23(m,2H),7.07-6.99(m,3H),6.21(d,J＝7.33Hz,1H),5.04(d,J＝7.33Hz,1H),4.34(t,J＝3.02Hz,1H),4.14-4.03(m,2H),3.48(d,J＝12.53Hz,1H),3.37(d,J＝12.53Hz,1H),2.99(s,1H)；LC/MS[M+H]＝502.0。
实施例59
合成2-苯甲基-2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(6-(苯甲基氨基)-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸
步骤1：
将氢化钠(60％，矿物质分散液；1.91g，47.7mmol)于无水THF(150mL)中的悬浮液冷却至0℃并且历经15分钟用(3aR,5R,6R,6aR)-5-(((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)甲基)-6-乙炔基-2,2-二甲基四氢-呋喃并[2,3-d][1,3]间二氧杂环戊烯-6-醇(10g，30.4mmoL)于THF(50mL)中的第二溶液处理。在0℃下搅拌15分钟后，将混合物升温至室温并且再搅拌1.5小时。然后使混合物冷却回到0℃并滴加MOMCl(6.81mL，80.7mmoL，2.6当量)处理。一旦添加完成，即移除冷却浴，并在室温下继续搅拌2小时。通过缓慢添加饱和氯化铵水溶液(50mL)淬灭反应物，用水洗涤并用乙酸乙酯(100mL)萃取。有机相经硫酸钠干燥，过滤并浓缩。经由硅胶色谱法(30％乙酸乙酯/己烷)纯化粗产物，得到呈白色固体形式的叔丁基-(((3aR,5R,6R,6aR)-6-乙炔基-6-(甲氧基-甲氧基)-2,2-二甲基四氢呋喃并[2,3-d][1,3]间二氧杂环戊烯-5-基)甲氧基)二甲基硅烷(9.95g，88％产率)。
步骤2：
将上述醇(9.8g，26.3mmoL)于无水THF(100mL)中的溶液冷却至0℃，并且历经15分钟用1N氟化四丁铵的THF溶液(37mL，36.8mmoL，1.4当量)处理。添加完成后，将反应物升温至室温并搅拌3小时。当反应完成(3小时)时，浓缩挥发物，得到粘稠残余油状物，将其溶解于二氯甲烷(5mL)中，直接装载至硅胶柱(约300cc)上并且经由用己烷至50％乙酸乙酯/己烷洗脱的硅胶色谱法来纯化，得到呈白色固体形式的((3aR,5R,6R,6aR)-6-乙炔基-6-(甲氧基甲氧基)-2,2-二甲基四氢呋喃并[2,3-d][1,3]-间二氧杂环戊烯-5-基)甲醇(6.18g，91％产率)。
步骤3：
将上述醇(175mg，0.678mmoL)于无水苯(8mL)和2-重氮丙二酸1-乙酯3-(丙-1-烯-1-基)酯(188mg，0.949mmol)中的溶液用乙酸铑(II)(5.8mg，0.013mmoL，0.02当量)处理并升温至60℃至65℃，保持2小时。一旦完成，就将溶液浓缩，溶解于二氯甲烷(1.5mL)中，并且直接装载至硅胶柱(约100cc)上并经由用(0-50％乙酸乙酯/己烷)洗脱的硅胶色谱法来纯化，得到呈浅黄色油形式的2-(((3aR,5R,6R,6aR)-6-乙炔基-6-(甲氧基甲氧基)-2,2-二甲基四氢呋喃并[2,3-d][1,3]-间二氧杂环戊烯-5-基)甲氧基)丙二酸1-乙酯3-丙-1-烯-1-基酯(252mg，87％)(异构体混合物)。
步骤4：
在氮气下，将来自前一步骤的丙二酸酯(250mg，0.583mmol)和苯甲基溴(0.42mL，3.5mmol，6当量)于无水DMF(8mL)中的溶液用碳酸铯(760mg，2.33mmol)处理并且在室温下搅拌4小时。一旦完成，将反应物经硅藻土垫过滤，用水洗涤并用乙酸乙酯萃取。合并的有机层经硫酸钠干燥，过滤并浓缩。将残余油状物溶解于二氯甲烷(2mL)中，装载至用30％乙酸乙酯/己烷洗脱的硅胶柱(约100cc)上，得到呈浅黄色油形式的2-苯甲基-2-(((3aR,5R,6R,6aR)-6-乙炔基-6-(甲氧基甲氧基)-2,2-二甲基四氢呋喃并[2,3-d][1,3]间二氧杂环戊烯-5-基)甲氧基)丙二酸1-乙酯3-丙-1-烯-1-基酯(261mg，86％)(异构体混合物)。
步骤5：
在氮气下，将来自上一步骤的缩丙酮化物(500mg，0.964mmol)于乙酸(3.9mL)中的水冷(14℃至17℃)溶液用乙酸酐(0.965mL，10.3mmoL，10.7当量)和浓硫酸(410uL，0.326mmoL，0.34当量)处理。将所得溶液搅拌4小时，用水稀释并用乙酸乙酯萃取。将合并的有机溶液用碳酸氢钠(水溶液，饱和；100mL)洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤，并且真空浓缩。将残余油状物溶解于二氯甲烷(2mL)中，并且在用己烷至50％乙酸乙酯/己烷洗脱的Biotage快速色谱系统上纯化。2-苯甲基-2-(((2R,3R,4R)-3,4,5-三乙酰氧基-3-乙炔基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-丙二酸1-乙酯3-丙-1-烯-1-基酯(420mg，8％)的非对映异构混合物(经由硅胶色谱法可分离的端基差向异构体，40G硅胶柱)以透明油形式分离。
步骤6：
将2,6-二氯腺嘌呤(143mg，0.76mmol，1.01当量)和N,O-双(三甲基甲硅烷基)乙酰胺(0.24mL，0.97mmol，1.29当量)于无水乙腈(5mL)中的悬浮液用2-苯甲基-2-(((2R,3R,4R)-3,4,5-三乙酰氧基-3-乙炔基四氢呋喃-2-基)-甲氧基)丙二酸1-乙酯3-((E)-丙-1-烯-1-基)酯(143mg，0.75mmol)于无水乙腈(15mL)中的第二溶液处理，接着滴加三氟甲烷磺酸三甲基甲硅烷酯(0.18mL，1.0mmol，1.33当量)。添加完成后，使反应物升温至50℃，保持18小时，然后冷却至室温。(反应物开始是浅黄色，4小时后变成透明的琥珀色)。一旦完成，就添加饱和碳酸氢钠水溶液，并且搅拌混合物10分钟。然后用乙酸乙酯(3×30mL)萃取粗产物，并且将合并的有机层干燥(Na2SO4)，过滤并浓缩。将残余物溶解于二氯甲烷中，并且在用己烷至50％乙酸乙酯/己烷洗脱的Biotage快速色谱系统上纯化，得到呈白色固体形式的2-苯甲基-2-(((2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(2,6-二氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基四氢呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸1-乙酯3-丙-1-烯-1-基酯(作为异构体混合物)(400mg，77％产率)。
步骤7：
将2-苯甲基-2-(((2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(2,6-二氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-丙二酸1-乙酯3-丙-1-烯-1-基酯(80mg，0.116mmoL)于无水二噁烷(2mL)中的溶液冷却至0℃，并用DIPEA(30μL，0.174mmoL，1.5当量)和苯甲胺(13μL，0.116mmoL，1当量)处理。一旦添加完成，就将溶液升温至室温并继续搅拌过夜(18H)。将混合物用乙酸乙酯(50mL)稀释并用水(20mL)洗涤。将有机层干燥(Na2SO4)，过滤并浓缩。经由用50％乙酸乙酯/己烷洗脱的Biotage快速色谱法来纯化粗产物，得到呈白色固体形式的2-苯甲基-2-(((2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(6-(苯甲基氨基)-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基四氢呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸1-乙酯3-丙-1-烯-1-基酯(作为异构体混合物，约1:1)(75mg，85％产率)。
步骤8：
将来自上一步骤的2-苯甲基-2-(((2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(6-(苯甲基氨基)-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基四氢呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸1-乙酯3-丙-1-烯-1-基酯(70mg，0.092mmol)于THF(1mL)中的溶液用LiOH溶液(31mg，1.35mmoL，15当量；于1mL水中)处理并搅拌过夜。将所得溶液用2N HCl酸化至pH 3，并且将所得悬浮液搅拌10分钟，然后过滤，用冷水洗涤并干燥。标题化合物以白色固体(50mg，89％产率)形式分离。
1H NMR(400MHz,CDCl3/CD3OD＝5:1)δ7.98(s.1H),7.25-6.84(m,10H),5.85(d,J＝6.4Hz,1H),4.63(s,2H),4.54(d,J＝6.4Hz,1H),4.17(t,J＝3.2Hz,1H),3.88(qd,J＝10.3,3.3Hz,2H),3.36-3.16(m,2H),2.49(s,1H)。HPLC:9.97min,97.0％。ESI-MS(m/z):[M]+C29H26ClN5O8计算值,608.15；实验值608.1。
实施例60
合成2-苯甲基-2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(2-氯-6-((四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸
除在步骤7中使用四氢-2H-吡喃-4-胺代替苯甲胺外，以类似于实施例59中所阐述的方式制备标题化合物。
1H NMR(400MHz,CDCl3/CD3OD＝5:1)δ8.09(s,1H),7.18-7.12(m,2H),7.01(dd,J＝12.1,7.2Hz,3H),5.90(d,J＝6.3Hz,1H),4.57(d,J＝6.3Hz,1H),4.25(t,J＝3.1Hz,2H),4.00-3.89(m,4H),3.51(td,J＝11.6,2.2Hz,2H),3.42-3.330(m,2H),2.52(s,1H),1.94(d,J＝13.0Hz,2H),1.57(td,J＝11.2,3.5Hz,2H)。ESI-MS(m/z):[M]+C27H28ClN5O9计算值,602.16；实验值602.5。
实施例61
合成2-苯甲基-2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(2-氯-6-((2-(二乙氨基)乙基)-氨基)-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-丙二酸
除在步骤7中使用N1,N1-二乙基乙烷-1,2-二胺代替苯甲胺外，以类似于实施例59中所阐述的方式制备标题化合物。
1H NMR(400MHz,DMSO-δ6):9.01(s,1H),8.75(s,1H),8.49(s,1H),7.23-7.03(m,5H),6.16(s,1H),5.96(d,J＝7.0Hz,1H),5.84(d,J＝6.9Hz,1H),4.59(t,J＝7.1Hz,1H),4.13(dd,J＝6.7,2.7Hz,1H),3.83-3.55(m,4H),3.53(s,1H),3.30-3.15(m,6H),3.06-2.97(m,2H),1.26-1.12(m,6H)。ESI-MS(m/z):[M]+C28H33ClN6O8计算值,617.20；实验值617.5。
实施例62
合成2-苯甲基-2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(2-氯-6-(((R)-1-苯乙基)氨基)-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸
除在步骤7中使用(R)-1-苯基乙-1-胺代替苯甲胺外，以类似于实施例59中所阐述的方式制备标题化合物。
1H NMR(400MHz,CDCl3/CD3OD＝5:1)δ8.25(s,1H),7.44-7.27(m,4H),7.23-6.94(m,6H),5.91(dd,J＝6.2,1.7Hz,1H),5.46(d,J＝8.0Hz,1H),4.58(d,J＝6.2Hz,1H),4.25(t,J＝2.4Hz,1H),3.98-3.83(m,2H),3.32(dd,J＝6.3,1.7Hz,2H),2.48(d,J＝1.7Hz,1H),1.59(dd,J＝6.9,1.7Hz,3H)。ESI-MS(m/z):[M]+C30H28ClN5O8计算值,622.16；实验值622.1。
实施例63
合成2-苯甲基-2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(2-氯-6-(((S)-1-苯乙基)氨基)-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸
除在步骤7中使用(S)-1-苯基乙-1-胺代替苯甲胺外，以类似于实施例59中所阐述的方式制备标题化合物。
1H NMR(400MHz,CDCl3/CD3OD＝5:1)δ8.11(s,1H),7.40-7.28(m,4H),7.23-6.93(m,6H),5.90(d,J＝5.8Hz,1H),5.45(s,1H),4.52(d,J＝5.8Hz,1H),4.35-4.22(m,1H),3.99(t,J＝2.4Hz,2H),3.42-3.25(m,2H),2.50(s,1H),1.58(d,J＝6.9Hz,3H)。ESI-MS(m/z):[M]+C30H28ClN5O8计算值,622.16；实验值622.2。
实施例64
合成2-苯甲基-2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(2-氯-6-((四氢呋喃-3-基)-氨基)-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-丙二酸
除在步骤7中使用四氢呋喃-3-胺代替苯甲胺外，以类似于实施例59中所阐述的方式制备标题化合物。
1H NMR(400MHz,CDCl3/CD3OD＝5:1)δ8.10(s,1H),7.19-6.92(m,5H),5.90(d,J＝6.3Hz,1H),4.72(s,1H),4.58(d,J＝6.3Hz,1H)4.25(t,J＝3.1Hz,1H),3.94(tp,J＝7.0,4.0,3.3Hz,3H),3.70(dt,J＝9.4,3.6Hz,2H),3.43-3.24(m,2H),2.52(s,1H),2.29(dq,J＝13.2,7.6Hz,1H),1.93(s,1H)。ESI-MS(m/z):[M]+C26H26ClN5O9计算值,588.14；实验值588.3。
实施例65
合成2-苯甲基-2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(2-氯-6-((S)-3-羟基吡咯烷-1-基)-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸
除在步骤7中使用(S)-吡咯烷-3-醇代替苯甲胺外，以类似于实施例59中所阐述的方式制备标题化合物。
1H NMR(400MHz,CDCl3/CD3OD＝5:1)δ8.10(s,1H),7.22-6.92(m,5H),5.92(d,J＝5.4Hz,1H),4.55-4.48(m,2H),4.29(t,J＝3.7Hz,1H),4.25-3.85(m,4H),3.80-3.65(m,2H),3.35-3.24(m,2H),2.51(s,1H),2.08-1.98(m,2H)。ESI-MS(m/z):[M]+C26H26ClN5O9计算值,588.14；实验值588.2。
实施例66
合成2-苯甲基-2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(2-氯-6-(乙基(甲基)氨基)-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸
除在步骤7中使用N-甲基乙胺代替苯甲胺外，以类似于实施例59中所阐述的方式制备标题化合物。
1H NMR(400MHz,CDCl3/CD3OD＝5:1)δ8.05(s,1H),7.24-7.02(m,5H),5.92(d,J＝4.8Hz,1H),4.46(dd,J＝4.8,1.3Hz,1H),4.32(dd,J＝4.9,3.2Hz,1H),4.05(dd,J＝8.5,4.0Hz,2H),3.44-3.30(m,2H),3.10-2.85(m,7H),2.53(s,1H),1.22(t,J＝7.1Hz,3H)。ESI-MS(m/z):[M]+C25H26ClN5O8计算值,560.15；实验值560.5。
实施例67
合成2-苯甲基-2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(2-氯-6-((2-氟苯甲基)氨基)-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸
除在步骤7中使用(2-氟苯基)甲胺代替苯甲胺外，以类似于实施例59中所阐述的方式制备标题化合物。
1H NMR(400MHz,CDCl3/CD3OD＝5:1)δ8.29(s,1H),7.47-7.36(m,1H),7.26-6.94(m,8H),5.94(d,J＝6.2Hz,1H),4.82-4.76(m,2H),4.60(d,J＝6.2Hz,1H),4.35-4.23(m,1H),3.98-3.84(m,2H),3.44-3.30(m,2H),2.46(s,1H)。ESI-MS(m/z):[M]+C29H25ClFN5O8计算值,626.14；实验值626.7。
实施例68
合成2-苯甲基-2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(2-氯-6-((4-氟苯甲基)氨基)-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸
除在步骤7中使用(4-氟苯基)甲胺代替苯甲胺外，以类似于实施例59中所阐述的方式制备标题化合物。
1H NMR(400MHz,CDCl3/CD3OD＝5:1)δ8.49(s,1H),7.37(dd,J＝8.4,5.3Hz,2H),7.24-6.89(m,7H),5.97(d,J＝6.3Hz,1H),4.72(s,2H),4.63(d,J＝6.3Hz,1H),4.7-4.28(m,1H),4.06-3.87(m,2H),3.46-3.26(m,2H),2.54(s,1H)。ESI-MS(m/z):[M]+C29H25ClFN5O8计算值,626.14；实验值626.4。
实施例69
合成2-苯甲基-2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(2-氯-6-(((R)-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基)-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-丙二酸
除在步骤7中使用(R)-2,3-二氢-1H-茚-1-胺代替苯甲胺外，以类似于实施例59中所阐述的方式制备标题化合物。
1H NMR(400MHz,CDCl3/CD3OD＝5:1)δ8.30(s,1H),7.29-6.97(m,9H),5.95(d,J＝6.2Hz,1H),5.81(t,J＝7.1Hz,1H),4.59(d,J＝6.3Hz,1H),4.25(d,J＝3.1Hz,1H),3.94-3.73(m,2H),3.40-3.31(m,2H),3.07(ddd,J＝14.0,8.7,4.8Hz,1H),2.89(dt,J＝15.8,7.7Hz,1H),2.69-2.58(m,1H),2.45(s,1H),2.00(dd,J＝13.6,7.1Hz,1H)。ESI-MS(m/z):[M]+C31H28ClN5O8计算值,634.16；实验值634.8。
实施例70
合成2-苯甲基-2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(2-氯-6-(苯乙基氨基)-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸
除在步骤7中使用2-苯基乙-1-胺代替苯甲胺外，以类似于实施例59中所阐述的方式制备标题化合物。
1H NMR(400MHz,CDCl3/CD3OD＝5:1)δ8.14(s,1H),7.26-6.91(m,10H),5.91(d,J＝6.2Hz,1H),4.57(d,J＝6.2Hz,1H),4.27(t,J＝3.2Hz,1H),3.96(t,J＝4.0Hz,2H),3.78(m,2H),3.45-3.29(m,2H),2.93(t,J＝7.3Hz,2H),2.52(s,1H)。ESI-MS(m/z):[M]+C30H28ClN5O8计算值,622.16；实验值622.5。
实施例71
合成2-苯甲基-2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(2-氯-6-(甲氨基)-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸
/>
除在步骤7中使用甲胺代替苯甲胺外，以类似于实施例59中所阐述的方式制备标题化合物。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.18(s,1H),7.29-7.20(m,2H),7.04(dd,J＝5.1,1.9Hz,3H),5.99(d,J＝7.4Hz,1H),4.99(d,J＝7Hz,1H),4.30(t,J＝3.3Hz,1H),4.11-4.01(m,2H),3.49-3.34(m,2H),3.06(s,3H),2.98(s,1H)。ESI-MS(m/z):[M]+C23H22ClN5O8计算值,532.12；实验值532.1。
实施例72
合成2-苯甲基-2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(2-氯-6-(((S)-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基)-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-丙二酸
除在步骤7中使用(S)-2,3-二氢-1H-茚-1-胺代替苯甲胺外，以类似于实施例59中所阐述的方式制备标题化合物。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.14(s,1H),7.41-7.13(m,6H),7.04(t,J＝3.5Hz,3H),6.01(d,J＝7.4Hz,1H),5.88-5.76(m,1H),4.99(d,J＝7.4Hz,1H),4.32(t,J＝3.3Hz,1H),4.06(dd,J＝5.5,3.3Hz,2H),3.53-3.34(m,2H),3.13-3.05(m,1H),3.00(s,1H),2.99-2.87(m,1H),2.67(dd,J＝12.5,4.2Hz,1H),2.02(dd,J＝12.8,7.7Hz,1H)。ESI-MS(m/z):[M]+C31H28ClN5O8计算值,634.16；实验值634.5。
实施例73
合成2-苯甲基-2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(2-氯-6-(乙氨基)-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸
除在步骤7中使用乙胺代替苯甲胺外，以类似于实施例59中所阐述的方式制备标题化合物。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.16(s,1H),7.40-7.19(m,2H),7.04(dd,J＝5.1,1.9Hz,3H),5.98(d,J＝7.4Hz,1H),4.97(d,J＝7.4Hz,1H),4.30(T,J＝3.3Hz,1H),4.14-3.98(m,2H),3.57(d,J＝7.8Hz,2H),3.49-3.33(m,2H),2.98(s,1H),1.28(t,J＝7.2Hz,3H)。ESI-MS(m/z):[M]+C24H24ClN5O8计算值,546.13；实验值546.1。
实施例74
合成2-苯甲基-2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(6-((S)-仲丁基氨基)-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸
除在步骤7中使用(S)-丁-2-胺代替苯甲胺外，以类似于实施例59中所阐述的方式制备标题化合物。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.13(s,1H),7.32-7.15(m,2H),7.14-6.98(m,3H),5.98(d,J＝7.4Hz,1H),4.97(d,J＝7.4Hz,1H),4.31(t,J＝3.2Hz,1H),4.24(s,1H),4.14-3.97(m,2H),3.53-3.33(m,2H),2.99(s,1H),1.63(q,J＝7.2Hz,2H),1.27(d,J＝6.5Hz,3H),0.97(t,J＝7.4Hz,3H)。ESI-MS(m/z):[M]+C26H28ClN5O8计算值,574.16；实验值574.1。
实施例75
合成2-苯甲基-2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(2-氯-6-((环丙基甲基)-(甲基)氨基)-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸
除在步骤7中使用1-环丙基-N-甲基甲胺代替苯甲胺外，以类似于实施例59中所阐述的方式制备标题化合物。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.15(s,1H),7.36-7.18(m,2H),7.03(dd,J＝5.2,2.0Hz,3H),6.00(d,J＝7.3Hz,1H),4.97(d,J＝7.3Hz,1H),4.30(dd,J＝4.1,2.8Hz,1H),4.07(qd,J＝10.2,3.5Hz,2H),3.52-3.31(m,7H),2.98(s,1H),1.20-1.12(m,1H),0.54(dd,J＝8.2,1.8Hz,2H),0.45-0.30(m,2H)。ESI-MS(m/z):[M]+C27H28ClN5O8计算值,586.16；实验值586.9
实施例76
合成2-苯甲基-2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(6-((羧甲基)氨基)-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸
除在步骤7中使用2-氨基-N,N-二甲基乙酰胺代替苯甲胺外，以类似于实施例59中所阐述的方式制备标题化合物。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.21(s,1H),7.38-7.14(m,2H),7.12-6.98(m,3H),6.11(d,J＝7.4Hz,1H),4.96(d,J＝7.3Hz,1H),4.30(q,J＝4.7,4.0Hz,2H),4.09-4.02(m,2H),3.54-3.33(m,2H),2.97(s,1H)。ESI-MS(m/z):[M]-C24H22ClN5O10计算值,574.11；实验值574.1。
实施例77
合成2-苯甲基-2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(2-氯-6-((2-氯苯甲基)氨基)-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸
除在步骤7中使用(2-氯苯基)-甲胺代替苯甲胺外，以类似于实施例59中所阐述的方式制备标题化合物。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.17(s,1H),7.43(m,2H),7.28(m,3H),7.22(m,1H),7.00(m,3H),5.99(d,J＝7.4Hz,1H),4.98(d,J＝7.4Hz,1H),4.82(m,2H),4.30(s,1H),4.05(s,2H),3.42(m,2H),2.98(s,1H)。LC-MS:m/z＝597(M-CO2H)；m/z＝292(M-核糖片段)。
实施例78
合成2-苯甲基-2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(2-氯-6-((吡啶-4-基甲基)氨基)-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸
除在步骤7中使用吡啶-4-基甲胺代替苯甲胺外，以类似于实施例59中所阐述的方式制备标题化合物。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ9.08(bs,1H),8.73(d,J＝5.7Hz,2H),8.51(s,1H),7.68(d,J＝5.6Hz,2H),7.22(m,2H),7.06(m,3H),5.82(d,J＝7.7Hz,1H),4.93(d,J＝6.9Hz,1H),4.87(d,J＝7.6Hz,1H),4.20(m,1H),4.03(m,2H),3.86(m,2H),3.62(s,1H),3.27(m,2H)。HPLC:室温＝5.74min,97.7％。LC-MS:m/z＝610(M+)；m/z＝261(M-核糖片段)。
实施例79
合成2-苯甲基-2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(2-氯-6-吗啉基-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸
除在步骤7中使用吗啉代替苯甲胺外，以类似于实施例59中所阐述的方式制备标题化合物。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.20(s,1H),7.22(m,2H),7.01(m,3H),6.00(d,J＝7.6Hz,1H),4.99(d,J＝7.6Hz,1H),4.30(m,1H),4.22(m,4H),4.04(m,2H),3.78(m,4H),3.47(m,2H),2.99(s,1H)。HPLC:8.16min,98.2％。LC-MS:m/z＝588(M+),544(M-CO2H),m/z＝240(M-核糖片段)。
实施例80
合成2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(6-(氮杂环庚烷-1-基)-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-苯甲基丙二酸
除在步骤7中使用氮杂环庚烷代替苯甲胺外，以类似于实施例59中所阐述的方式制备标题化合物。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.16(s,1H),7.22(m,2H),7.00(m,3H),5.99(d,J＝7.6Hz,1H),4.98(d,J＝7.6Hz,1H),4.29(m,3H),4.07(m,2H),3.85(m,2H),3.40(m,2H),2.97(s,1H),1.85(m,4H),1.59(m,4H)。HPLC:9.67min,98.1％。LC-MS:m/z＝600(M+),m/z＝556(M-CO2H),m/z＝252(M-核糖片段)。
实施例81
合成2-苯甲基-2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(2-氯-6-(环丁基(甲基)氨基)-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸
除在步骤7中使用N-甲基环丁胺代替苯甲胺外，以类似于实施例59中所阐述的方式制备标题化合物。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.21(s,1H),7.21(dd,J＝7.0,2.6Hz,2H),6.99(m,3H),5.99(d,J＝7.3Hz,1H),5.74(br s,1H),4.96(d,J＝7.2Hz,1H),4.28(dd,J＝4.1,2.8Hz,1H),4.06(dd,J＝10.2,4.2Hz,1H),4.01(dd,J＝10.2,2.9Hz,1H),3.45-3.31(m,5H),2.96(s,1H),2.35(q,J＝10.0Hz,2H),2.23(m,2H),1.87-1.63(m,2H)；HPLC:9.45min,98.9％。LC-MS:m/z＝587(M+H),543(M-CO2H),m/z＝238(M-核糖片段)。
实施例82
合成2-苯甲基-2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(2-氯-6-(异丙基(甲基)氨基)-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸
除在步骤7中使用N-甲基丙-2-胺代替苯甲胺外，以类似于实施例59中所阐述的方式制备标题化合物。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.17(s,1H),7.21(dd,J＝7.3,2.2Hz,2H),7.03-6.94(m,3H),5.98(d,J＝7.3Hz,1H),4.97(d,J＝7.3Hz,1H),4.28(dd,J＝4.0,2.8Hz,1H),4.04(qd,J＝10.2,3.5Hz,2H),3.45-3.31(m,6H),2.96(s,1H),1.25(d,J＝6.8Hz,6H)；HPLC:9.08min,99.9％。LC-MS:m/z＝575(M+H),531(M-CO2H),m/z＝226(M-核糖片段)。
实施例83
合成2-苯甲基-2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(2-氯-6-(环丙氨基)-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸
除在步骤7中使用环丙胺代替苯甲胺外，以类似于实施例59中所阐述的方式制备标题化合物。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.14(s,1H),7.23(dd,J＝6.7,2.8Hz,2H),7.01(m,3H),5.97(d,J＝7.4Hz,1H),4.95(d,J＝7.4Hz,1H),4.28(t,J＝3.3Hz,1H),4.10-3.97(m,2H),3.49-3.30(m,2H),2.99(m,1H),2.96(s,1H),0.92-0.78(m,2H),0.66-0.54(m,2H)；HPLC:7.83min,99.1％。LC-MS:m/z＝559(M+H)。
实施例84
合成2-苯甲基-2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(2-氯-6-((吡啶-3-基甲基)氨基)-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸
除在步骤7中使用吡啶-3-基甲胺代替苯甲胺外，以类似于实施例59中所阐述的方式制备标题化合物。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.87(s,1H),8.70(d,J＝5.6Hz,1H),8.56(d,J＝8.1Hz,1H),8.22(s,1H),7.97(dd,J＝8.1,5.7Hz,1H),7.21(dd,J＝6.5,3.0Hz,2H),7.07-6.90(m,3H),5.97(d,J＝7.4Hz,1H),4.96(d,J＝7.4Hz,1H),4.92(m,2H),4.29(t,J＝3.4Hz,1H),4.04(qd,J＝10.2,3.4Hz,2H),3.38(m,2H),2.97(s,1H)；HPLC:5.82min,99.9％。LC-MS:m/z＝261(M-核糖片段)。
实施例85
合成2-苯甲基-2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(2-氯-6-((3-氟苯甲基)氨基)-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸
除在步骤7中使用(3-氟苯基)甲胺代替苯甲胺外，以类似于实施例59中所阐述的方式制备标题化合物。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.19(s,1H),7.32(td,J＝8.0,5.9Hz,1H),7.24-7.16(m,3H),7.12(dd,J＝9.8,2.3Hz,1H),7.06-6.78(m,4H),5.98(d,J＝7.3Hz,1H),4.94(d,J＝7.3Hz,1H),4.74(m,2H),4.29(t,J＝3.3Hz,1H),4.03(qd,J＝10.3,3.5Hz,2H),3.47-3.26(m,2H),2.97(s,1H)；HPLC:9.04min,99.5％。LC-MS:m/z＝627(M+H),583(M-CO2H),m/z＝278(M-核糖片段)。
实施例86
合成2-苯甲基-2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(2-氯-6-((3-氯苯甲基)氨基)-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸
除在步骤7中使用(3-氯苯基)甲胺代替苯甲胺外，以类似于实施例59中所阐述的方式制备标题化合物。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.18(s,1H),7.40(s,1H),7.34-7.05(m,5H),6.98(m,3H),5.97(d,J＝7.4Hz,1H),4.95(d,J＝7.4Hz,1H),4.72(m,2H),4.29(t,J＝3.3Hz,1H),4.09-3.87(m,2H),3.46-3.31(m,2H),2.97(s,1H)；HPLC:9.45min,98.3％。LC-MS:m/z＝643(M+H),598(M-CO2H),m/z＝294(M-核糖片段)。
实施例87
合成2-苯甲基-2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(2-氯-6-((4-氯苯甲基)氨基)-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸
除在步骤7中使用(4-氯苯基)甲胺代替苯甲胺外，以类似于实施例59中所阐述的方式制备标题化合物。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.17(s,1H),7.36(d,J＝8.6Hz,2H),7.31(d,J＝8.5Hz,1H),7.21(dd,J＝6.8,2.8Hz,2H),7.02-6.96(m,3H),5.97(d,J＝7.3Hz,1H),4.94(d,J＝7.3Hz,1H),4.71(m,2H),4.29(t,J＝3.3Hz,1H),4.03(qd,J＝10.2,3.4Hz,2H),3.46-3.30(m,2H),2.96(s,1H)；HPLC:9.50min,98.7％。LC-MS:m/z＝643(M+H),598(M-CO2H),m/z＝294(M-核糖片段)。
实施例88
合成2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(6-(氮杂环丁烷-1-基)-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-苯甲基丙二酸
除在步骤7中使用氮杂环丁烷代替苯甲胺外，以类似于实施例59中所阐述的方式制备标题化合物。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.25(s,1H),7.24-7.08(m,2H),7.10-6.85(m,3H),5.97(d,J＝7.4Hz,1H),4.98(d,J＝7.3Hz,1H),4.43(m,4H),4.29(dd,J＝4.1,2.8Hz,1H),4.07(dd,J＝10.2,4.2Hz,1H),4.00(dd,J＝10.2,2.9Hz,1H),3.42(d,J＝15.0Hz,1H),3.34(d,J＝12.3Hz,2H),2.95(s,1H),2.51(q,J＝7.7Hz,2H)；HPLC:7.58min,99.5％。LC-MS:m/z＝558(M+H),554(M-CO2H),m/z＝210(M-核糖片段)。
实施例89
合成2-苯甲基-2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(2-氯-6-(二甲氨基)-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸
除在步骤7中使用二甲胺代替苯甲胺外，以类似于实施例59中所阐述的方式制备标题化合物。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.17(s,1H),7.22(dd,J＝7.5,2.0Hz,2H),7.05-6.89(m,3H),5.98(d,J＝7.2Hz,1H),4.96(d,J＝7.3Hz,1H),4.28(dd,J＝4.0,2.9Hz,1H),4.04(qd,J＝10.2,3.5Hz,2H),3.55-3.31(m,8H),2.95(s,1H)；HPLC:8.16min,99.9％。LC-MS:m/z＝546(M+H),502(M-CO2H),m/z＝198(M-核糖片段)。
实施例90
合成2-苯甲基-2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(2-氯-6-(吡咯烷-1-基)-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸
除在步骤7中使用吡咯烷代替苯甲胺外，以类似于实施例59中所阐述的方式制备标题化合物。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.21(s,1H),7.21(dd,J＝7.3,2.3Hz,2H),7.03-6.76(m,3H),5.98(d,J＝7.3Hz,1H),4.98(d,J＝7.3Hz,1H),4.29(dd,J＝4.2,2.8Hz,1H),4.15-3.86(m,4H),3.66(m,2H),3.41(d,J＝15.0Hz,1H),3.34(d,J＝15.0Hz,1H),2.95(s,1H),2.02(m,4H)；HPLC:8.42min,95.6％。LC-MS:m/z＝573(M+H),529(M-CO2H),m/z＝224(M-核糖片段)。
实施例91
合成2-苯甲基-2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(2-氯-6-(环戊氨基)-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸
除在步骤7中使用环戊胺代替苯甲胺外，以类似于实施例59中所阐述的方式制备标题化合物。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.09(s,1H),7.23(dd,J＝6.7,2.9Hz,2H),7.01(m,3H),5.96(d,J＝7.4Hz,1H),4.94(d,J＝7.4Hz,1H),4.47(m,1H),4.28(t,J＝3.3Hz,1H),4.04(m,2H),3.43(d,J＝14.9Hz,1H),3.34(d,J＝14.9Hz,1H),2.96(s,1H),2.19-1.98(m,2H),1.78(m,2H),1.72-1.64(m,2H),1.62-1.52(m,2H)；HPLC:9.06min,98.9％。LC-MS:m/z＝587(M+H),543(M-CO2H),m/z＝238(M-核糖片段)。
实施例92
合成2-苯甲基-2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(2-氯-6-((环丙基甲基)氨基)-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸
除在步骤7中使用环丙基甲胺代替苯甲胺外，以类似于实施例59中所阐述的方式制备标题化合物。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.14(s,1H),7.18(d,J＝6.9Hz,2H),7.12-6.68(m,3H),5.92(d,J＝6.1Hz,1H),4.58(d,J＝6.1Hz,1H),4.28(t,J＝3.2Hz,1H),3.98(qd,J＝10.3,3.2Hz,2H),3.50-3.04(m,4H),2.55(s,1H),1.08(m,1H),0.52(m,2H),0.26(m,2H)；HPLC:8.52min,97.7％。LC-MS:m/z＝572(M+H),528(M-CO2H),m/z＝224(M-核糖片段)。
实施例93
合成2-苯甲基-2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(2-氯-6-(异丙氨基)-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸
除在步骤7中使用丙-2-胺代替苯甲胺外，以类似于实施例59中所阐述的方式制备标题化合物。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.05(s,1H),7.23-7.12(m,2H),7.09-6.78(m,3H),5.91(d,J＝6.2Hz,1H),4.59(d,J＝6.2Hz,1H),4.37(m,1H),4.28(m,1H),3.42(d,J＝14.8Hz,1H),3.35-3.22(m,3H),2.56(s,1H),1.24(d,J＝6.5Hz,6H)；HPLC:8.39min,98.9％。LC-MS:m/z＝560(M+H),516(M-CO2H),m/z＝212(M-核糖片段)。
实施例94
合成2-苯甲基-2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(2-氯-6-((2-羟基-2-甲基丙基)氨基)-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸
除在步骤7中使用1-氨基-2-甲基丙-2-醇代替苯甲胺外，以类似于实施例59中所阐述的方式制备标题化合物。
1H-NMR(400MHz,CD3OD)δ8.16(s,1H)7.24-7.22(m,2H)7.03-7.01(m,3H)5.97(d,J＝7.4Hz,1H)4.95(d,J＝7.4Hz,1H)4.28(t,J＝3.2Hz,1H)4.05-4.03(m,2H)3.72-3.69(m,2H)3.48-3.31(m,2H)2.97(s,1H)1.24(s,6H)。ESI-MS(m/z):[M]-C26H28ClN5O9计算值589.98；实验值588.4。
实施例95
合成2-苯甲基-2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(2-氯-6-(((S)-1-羟基丙-2-基)氨基)-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸
除在步骤7中使用(S)-2-氨基丙-1-醇代替苯甲胺外，以类似于实施例59中所阐述的方式制备标题化合物。
1H-NMR(400MHz,CD3OD)δ8.18(s,1H)7.24-7.22(m,2H)7.03-7.01(m,3H)5.97(d,J＝7.4Hz,1H)4.93(d,J＝7.4Hz,1H)4.42-4.35(m,1H)4.32-4.26(m,1H)4.04(d,J＝3.2Hz,2H)3.62-3.60(m,2H)3.48-3.32(m,2H)2.96(s,1H)1.29(d,J＝6.7Hz,3H)。ESI-MS(m/z):[M]-C25H26ClN5O9计算值575.96；实验值574.2。
实施例96
合成2-苯甲基-2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(2-氯-6-(二乙氨基)-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸
除在步骤7中使用二乙胺代替苯甲胺外，以类似于实施例59中所阐述的方式制备标题化合物。
1H-NMR(400MHz,CD3OD)δ8.15(s,1H)7.23-7.20(m,2H)7.00-6.98(m,3H)5.98(d,J＝7.3Hz,1H)4.97(d,J＝7.3Hz,1H)4.29(m,1H)4.15-3.83(m,6H)3.43-3.33(m,2H)2.96(s,1H)1.24(t,J＝7.0Hz,6H)。ESI-MS(m/z):[M]-C26H28ClN589计算值573.98；实验值572.3。
实施例97
合成2-苯甲基-2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(2-氯-6-((2-羟乙基)氨基)-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸
除在步骤7中使用2-氨基乙-1-醇代替苯甲胺外，以类似于实施例59中所阐述的方式制备标题化合物。
1H-NMR(400MHz,CD3OD)δ8.20(s,1H)7.24-7.22(m,2H)7.04-7.02(m,3H)5.97(d,J＝7.4Hz,1H)4.91(d,J＝7.3Hz,1H)4.29(t,J＝3.4Hz,1H))4.06-3.98(m,2H)3.76-3.73(m,2H)3.66-3.63(m,2H)3.43-3.33(m,2H)2.96(s,1H)。ESI-MS(m/z):[M]-C24H24ClN5O9计算值561.93；实验值560.2。
实施例98
合成2-苯甲基-2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(2-氯-6-(((R)-1-羟基丙-2-基)氨基)-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸
除在步骤7中使用(R)-2-氨基丙-1-醇代替苯甲胺外，以类似于实施例59中所阐述的方式制备标题化合物。
1H-NMR(400MHz,CD3OD)δ8.12(s,1H)7.24-7.22(m,2H)7.03-7.01(m,3H)5.96(d,J＝7.4Hz,1H)4.95(d,J＝7.4Hz,1H)4.42-4.32(m,1H)4.28(t,J＝3.3Hz,1H)4.08-4.00(m,2H)3.66-3.58(m,2H)3.45-3.33(m,2H)2.97(s,1H)1.27(d,J＝6.7Hz,3H)。ESI-MS(m/z):[M]-C25H26ClN5O9计算值575.96；实验值574.2
实施例99
合成2-苯甲基-2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(2-氯-6-(环丙基(2-羟乙基)氨基)-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸
除在步骤7中使用2-(环丙氨基)乙-1-醇代替苯甲胺外，以类似于实施例59中所阐述的方式制备标题化合物。
1H-NMR(400MHz,CD3OD)δ8.23(s,1H)7.24-7.22(m,2H)7.04-7.01(m,3H)6.02(d,J＝7.4Hz,1H)4.96(d,J＝7.3Hz,1H)4.30-4.28(m,1H)4.10-4.04(m,4H)3.78(t,J＝5.9Hz,2H)3.44-3.32(m,2H)3.23-3.19(m,1H)2.96(s,1H)1.01-0.97(m,2H)0.78-0.74(m,2H)。
实施例100
合成2-苯甲基-2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(2-氯-6-((R)-3-羟基吡咯烷-1-基)-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸
除在步骤7中使用(R)-吡咯烷-3-醇代替苯甲胺外，以类似于实施例59中所阐述的方式制备标题化合物。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.24(s,1H),7.23(d,J＝7.2Hz,2H),7.06-6.96(m,3H),6.01(d,J＝7.3Hz,1H),5.01(s,1H),4.56(d,J＝26.1Hz,1H),4.33-4.31(m,1H),4.20(d,J＝12.5Hz,1H),4.10-4.00(m,3H),3.78(m,2H),3.50-3.35(m,2H),2.97(s,1H),2.14-2.05(m,2H)。
实施例101
合成2-苯甲基-2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(2-氯-6-((S)-3-(羟甲基)-吡咯烷-1-基)-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸
除在步骤7中使用(S)-吡咯烷-3-基甲醇代替苯甲胺外，以类似于实施例59中所阐述的方式制备标题化合物。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.37(s,1H),8.34(s,1H),7.15(m,2H),7.01(m,3H),6.16(br s,1H),5.96(br s,1H),5.81(d,J＝7.5Hz,1H),4.82(d,J＝7.4Hz,1H),4.18-4.08(m,1H),3.94(m,2H),3.71(m,2H),3.50(m,2H),3.20(s,4H),3.13(s,1H),2.33(m,1H),2.04(m,1H),1.98-1.89(m,1H),1.77(m,1H),1.65(m,1H)；HPLC:7.22min,97.7％。
实施例102
合成2-苯甲基-2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(2-氯-6-((R)-3-(羟甲基)-吡咯烷-1-基)-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸
除在步骤7中使用(R)-吡咯烷-3-基甲醇代替苯甲胺外，以类似于实施例59中所阐述的方式制备标题化合物。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.37(s,1H),8.34(s,1H),7.21-7.11(m,2H),7.01(m,3H),6.16(br s,1H),5.96(br s,1H),5.81(d,J＝7.5Hz,1H),4.82(d,J＝7.5Hz,1H),4.44(m,1H),4.25-4.07(m,3H),3.95(m,2H),3.87-3.64(m,3H),3.51(m,2H),3.20(s,1H),2.37-2.27(m,1H),2.04(m,1H),1.98-1.86(m,1H),1.76(m,1H),1.66(m,1H)；HPLC:Rt＝7.20min,97.0％。
实施例103
合成2-苯甲基-2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(2-氯-6-((R)-2-(羟甲基)-吡咯烷-1-基)-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸
除在步骤7中使用(R)-吡咯烷-2-基甲醇代替苯甲胺外，以类似于实施例59中所阐述的方式制备标题化合物。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.21(s,1H),7.28-7.16(m,2H),7.08-6.87(m,3H),5.99(d,J＝7.3Hz,1H),4.97(d,J＝7.3Hz,1H),4.41(m,1H),4.28(m,1H),4.12-3.93(m,4H),3.72(m,2H),3.42(d,J＝15.0Hz,1H),3.33(d,J＝15.0Hz,2H),2.96(s,1H),2.05(m,4H)；HPLC:7.73min,98.2％；ESI-MS:m/z＝254(M-核糖片段)。
实施例104
合成2-苯甲基-2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(2-氯-6-((S)-2-(羟甲基)-吡咯烷-1-基)-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸
除在步骤7中使用(S)-吡咯烷-2-基甲醇代替苯甲胺外，以类似于实施例59中所阐述的方式制备标题化合物。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.22(s,1H),7.22(m,2H),7.07-6.88(m,3H),5.99(d,J＝7.3Hz,1H),4.98(d,J＝7.3Hz,1H),4.44(m,1H),4.29(dd,J＝4.0,2.9Hz,1H),4.07(m,2H),4.05(qd,J＝10.2,3.5Hz,2H),3.77(dd,J＝11.0,4.2Hz,1H),3.66(dd,J＝11.1,6.5Hz,1H),3.42(d,J＝15.1Hz,1H),3.33(d,J＝15.1Hz,1H),2.95(s,1H),2.07(m,4H)；HPLC:7.77min,99.3％；ESI-MS:m/z＝642(M+ACN)。
实施例105
合成2-苯甲基-2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(2-氯-6-(环丙基(甲基)氨基)-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸
除在步骤7中使用N-甲基环丙胺代替苯甲胺外，以类似于实施例59中所阐述的方式制备标题化合物。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.36(s,1H),7.26-7.12(m,2H),7.02(m,3H),6.03(d,J＝7.3Hz,1H),4.97(d,J＝7.3Hz,1H),4.30(dd,J＝3.9,2.8Hz,1H),4.19-3.97(m,2H),3.57-3.29(m,5H),3.21(m,1H),2.96(s,1H),1.05-0.85(m,2H),0.83-0.62(m,2H)；HPLC:Rt＝8.41min,98.6％；ESI-MS:m/z＝224(M-核糖片段)。
实施例106
合成2-苯甲基-2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(2-氯-6-((环丙基甲基)氨基)-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-3-(甲氨基)-3-氧代丙酸
步骤1：
在氮气下将[(3aR,5R,6R,6aR)-6-乙炔基-6-(甲氧基甲氧基)-2,2-二甲基-四氢-2H-呋喃并[2,3-d][1,3]间二氧杂环戊烯-5-基]甲醇(480mg，1.87mmol)和2-重氮-2-(甲基胺甲酰基)乙酸甲酯(440mg，2.8mmol，根据文献：European Journal of OrganicChemistry,2014(24),5302-5311制备)于无水苯(20mL)中的搅拌溶液用四乙酸铑(16mg，0.04mmol)处理并加热至60℃，持续4小时。将所得混合物冷却至室温并浓缩。将所得油状物溶解于二氯甲烷中，装载至用10-100％乙酸乙酯/己烷洗脱的硅胶柱上，得到呈非对映异构体对的2-{[(3aR,5R,6R,6aR)-6-乙炔基-6-(甲氧基甲氧基)-2,2-二甲基-四氢-2H-呋喃并[2,3-d][1,3]间二氧杂环戊烯-5-基]甲氧基}-2-(甲基胺甲酰基)乙酸甲酯(455mg，63％产率)。
步骤2：
将2-{[(3aR,5R,6R,6aR)-6-乙炔基-6-(甲氧基甲氧基)-2,2-二甲基-四氢-2H-呋喃并[2,3-d][1,3]间二氧杂环戊烯-5-基]甲氧基}-2-(甲基胺甲酰基)乙酸甲酯(450mg，116mmol)和苯甲基溴(0.97mL，8.13mmol)于无水DMF(4mL)中的溶液用碳酸铯(757mg，2.32mmol)处理。在室温下搅拌反应混合物过夜。将反应物用水(10mL)淬灭，用二乙醚(70mL)稀释并用饱和氯化钠水溶液(50mL)洗涤两次。有机层经NaSO4干燥并浓缩，得到黄色油状物。通过硅胶柱并用10-70％乙酸乙酯/己烷洗脱来纯化残余物，得到呈透明油形式的非对映异构混合物2-苯甲基-2-(((3aR,5R,6R,6aR)-6-乙炔基-6-(甲氧基-甲氧基)-2,2-二甲基四氢呋喃并[2,3-d][1,3]间二氧杂环戊烯-5-基)甲氧基)-3-(甲氨基)-3-氧代丙酸甲酯(500mg，90％产率)。
步骤3：
在氮气下，将2-苯甲基-2-(((3aR,5R,6R,6aR)-6-乙炔基-6-(甲氧基甲氧基)-2,2-二甲基四氢呋喃并[2,3-d][1,3]-间二氧杂环戊烯-5-基)甲氧基)-3-(甲氨基)-3-氧代丙酸甲酯(500mg，1.05mmol)于乙酸(4mL)中的冰冷搅拌溶液用乙酸酐(1mL，11.15mmol)和浓硫酸(0.02，0.35mmol)处理。使反应溶液缓慢升温至室温。4小时后，将反应物用水稀释并用乙酸乙酯(各80mL)萃取。将有机溶液用饱和碳酸氢钠(100mL)洗涤，经Na2SO4干燥并浓缩。将残余油状物溶解于二氯甲烷中并通过快速色谱法纯化，得到呈端基差向异构体/非对映异构混合物形式的(3R,4R,5R)-三乙酸5-(((2-苯甲基-1-甲氧基-3-(甲氨基)-1,3-二氧代丙-2-基)氧基)甲基)-4-乙炔基四氢呋喃-2,3,4-三基酯。
步骤4：
将2-6-二氯腺嘌呤(48mg，0.25mmol)和N,O-双(三甲基甲硅烷基)-乙酰胺(0.08mL，0.32mmol)于无水乙腈(7mL)中的悬浮液用(3R,4R,5R)-三乙酸5-(((2-苯甲基-1-甲氧基-3-(甲氨基)-1,3-二氧代丙-2-基)氧基)甲基)-4-乙炔基四氢呋喃-2,3,4-三基酯(130mg，0.25mmol)于无水乙腈(10mL)中的第二溶液处理，接着滴加三氟-甲烷磺酸三甲基甲硅烷酯(0.06mL，0.33mmol)。一旦添加完成，就将反应物加热至50℃，保持18小时，冷却至室温并用饱和碳酸氢钠溶液(80mL)淬灭。搅拌5分钟后，将溶液用乙酸乙酯(3×80mL)萃取，经Na2SO4干燥并浓缩。将残余物溶解于二氯甲烷中并通过快速色谱法纯化，得到呈泡沫固体形式的(2R,3R,4R,5R)-二乙酸2-(((2-苯甲基-1-甲氧基-3-(甲氨基)-1,3-二氧代丙-2-基)氧基)甲基)-5-(2,6-二氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基四氢呋喃-3,4-二基酯(135mg，83％产率)(非对映异构体对)。
步骤5：
在氮气下，将(2R,3R,4R,5R)-二乙酸2-(((2-苯甲基-1-甲氧基-3-(甲氨基)-1,3-二氧代丙-2-基)氧基)甲基)-5-(2,6-二氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-四氢呋喃-3,4-二基酯(70mg，0.11mmol)于二噁烷(2mL)中的溶液冷却至0℃并用二异丙基乙胺(0.03mL，0.16mmol)和环丙胺(0.01mL，0.13mmol)处理，并且在搅拌下升温至室温过夜。将反应混合物用乙酸乙酯(80mL)稀释，用水(50mL)和饱和氯化钠水溶液(50mL)洗涤。有机层经Na2SO4干燥，然后过滤并浓缩。将残余物溶解于二氯甲烷中并通过快速柱色谱法纯化，得到呈灰白色固体形式的(2R,3R,4R,5R)-二乙酸2-(((2-苯甲基-1-甲氧基-3-(甲氨基)-1,3-二氧代丙-2-基)氧基)甲基)-5-(2-氯-6-((环丙基甲基)氨基)-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基四氢呋喃-3,4-二基酯(70mg，95％产率)(非对映异构体对)。
步骤6：
将(2R,3R,4R,5R)-二乙酸2-(((2-苯甲基-1-甲氧基-3-(甲氨基)-1,3-二氧代-丙-2-基)氧基)甲基)-5-(2-氯-6-((环丙基甲基)氨基)-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基四氢呋喃-3,4-二基酯(70mg，0.10mmol)于THF(1mL)中的溶液用含LiOH(24mg，1.02mmol)的水(1mL)处理并在室温下搅拌过夜。使用冷的2N HCl将反应物pH调节至4至5。沉淀后，将悬浮液再搅拌10分钟。收集固体，用冷水洗涤并干燥，得到呈灰白色固体形式的2-苯甲基-2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(2-氯-6-((环丙基甲基)氨基)-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢-呋喃-2-基)甲氧基)-3-(甲氨基)-3-氧代丙酸(45mg，75％产率)(非对映异构体对)。
1H NMR(400MHz,CDCl3/CD3OD＝5:1)δ8.01(s,0.45H),7.48(s,0.55H),7.22-7.03(m,5H),5.86(dd,J＝4.7,3.0Hz,1H),4.43(dd,J＝8.5,4.6Hz,1H),4.31-4.06(m,2H),3.84-3.72(m,1H),3.45-3.21(m,4H),2.62(d,J＝40.9Hz,1H),2.46(d,J＝8.1Hz,3H),1.05(dq,J＝8.0,3.7Hz,1H),0.51(ddd,J＝8.1,4.0,1.6Hz,2H),0.31-0.18(m,2H)。ESI-MS(m/z):[M]+C27H29ClN6O7计算值,585.18；实验值585.9。
实施例107
合成2-苯甲基-2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(6-(苯甲基氨基)-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-3-(甲氨基)-3-氧代丙酸
除在步骤5中使用苯甲胺代替环丙胺外，以类似于实施例106中所阐述的方式制备标题化合物。
1H NMR(400MHz,CDCl3/CD3OD＝5:1)δ8.03(s,0.46H),7.52(d,J＝2.7Hz,0.54H),7.42-7.04(m,10H),5.89(t,J＝4.3Hz,1H),4.73(m,2H),4.44(dd,J＝6.0,4.5Hz,1H),4.33-4.15(m,2H),3.79(dd,J＝10.6,4.5Hz,1H),3.45-3.27(m,2H),2.62(d,J＝36.6Hz,1H),2.48(d,J＝13.2Hz,3H)。ESI-MS(m/z):[M]+C30H29ClN6O7计算值,621.18；实验值621.4。
实施例108
合成2-苯甲基-2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(2-氯-6-((2-氯苯甲基)氨基)-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-3-乙氧基-3-氧代丙酸
除在步骤8中仅使用5当量的氢氧化锂外，以类似于实施例59中所阐述的方式制备标题化合物。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.16(s,1H),7.42(m,2H),7.26(m,2H),7.21(m,2H),6.99(m,3H),5.97(d,J＝7.6Hz,1H),4.96(d,J＝7.6Hz,1H),4.82(m,2H),4.28(m,1H),4.03(m,2H),3.75(m,2H),3.38(m,2H),3.22(m,2H),2.97(s,1H)1.29(t,J＝7.6Hz,3H)。HPLC:9.43min,96.2％。LC-MS:m/z＝642,597(M-CO2H)；m/z＝292(M-核糖片段)。
实施例109
合成2-苯甲基-2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(2-氯-6-((吡啶-4-基甲基)氨基)-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-3-乙氧基-3-
氧代丙酸
除在步骤8中仅使用5当量的氢氧化锂外，以类似于实施例59中所阐述的方式制备标题化合物。化合物以非对映异构体的约2:1混合物形式分离。
主要异构体的1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ8.73(d,J＝5.9Hz,2H),8.15(s,0.61H),7.98(d,J＝5.9Hz,2H),7.23(m,2H),7.06(m,3H),6.00(m,1H),5.00(m,2H),4.10(m,4H),3.39(m,2H),3.12(s,0.80H),1.17(m,3H)。次要异构体的1H NMR(DMSO-d6):δ8.73(d,J＝5.9Hz,2H),8.31(s,0.32H),7.98(d,J＝5.9Hz,2H),7.23(m,2H),7.06(m,3H),6.00(m,1H),5.00(m,2H),4.10(m,4H),3.39(m,2H),3.01(s,0.41H),1.17(m,3H)。HPLC:6.25min,94.8％。LC-MS:m/z＝638(M+),594(M-CO2H),m/z＝259(M-核糖片段)。
实施例110
合成2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(2-氯-6-(异丙氨基)-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-((5-甲基异噁唑-3-基)甲基)丙二酸
除在步骤4中使用3-(溴甲基)-5-甲基异噁唑代替苯甲基溴并且在步骤7中使用丙-2-胺代替苯甲胺外，以类似于实施例59中所阐述的方式制备标题化合物。
1H-NMR(400MHz,CD3OD)δ8.46(s,1H)5.99(d,J＝7.6Hz,1H)5.95(s,1H)5.07(d,J＝7.6Hz,1H)4.41-4.38(m,1H)4.31-4.29(m,1H)4.07-4.05(m,1H)3.99-3.88(m,1H)3.50-3.38(m,2H)2.95(s,1H)2.05(s,3H)1.27(d,J＝6.5Hz,6H)。ESI-MS(m/z):[M]+C23H25ClN6O9计算值564.93；实验值566.1
实施例111
合成2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(2-氯-6-((4-氟苯甲基)氨基)-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-((5-甲基异噁唑-3-基)
甲基)丙二酸
除在步骤4中使用3-(溴甲基)-5-甲基异噁唑代替苯甲基溴并且在步骤7中使用(4-氟苯基)甲胺代替苯甲胺外，以类似于实施例59中所阐述的方式制备标题化合物。
1H-NMR(400MHz,CD3OD)δ8.62-8.58(br s,1H)7.41-7.38(m,2H)7.07-7.01(m,2H)6.01(d,J＝7.4Hz,1H)5.96(s,1H)5.09(d,J＝7.3Hz,1H)4.82-4.71(m,2H)4.31-4.29(m,1H)4.06(dd,J＝10.0,3.8Hz,1H)3.97(dd,J＝10.1,3.1Hz,1H)3.44-3.32(m,2H)3.18(s,3H)2.96(s,1H)。
实施例112
合成2-(苯并[d]噻唑-2-基甲基)-2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(2-氯-6-((4-氟苯甲基)氨基)-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸
除在步骤4中使用2-(溴甲基)苯并[d]噻唑代替苯甲基溴并且在步骤7中使用(4-氟苯基)甲胺代替苯甲胺外，以类似于实施例59中所阐述的方式制备标题化合物。
1H-NMR(400MHz,CD3OD)δ8.57-8.54(br s,1H)7.74-7.70(m,2H)7.45-7.41(m,2H)7.23-7.20(m,1H)7.12-7.16(m,1H)7.09-7.04(m,2H)5.94(d,J＝7.3Hz,1H)5.15(d,J＝7.1Hz,1H)4.77-4.72(m,2H)4.35-4.32(m,1H)4.20(dd,J＝10.1,2.7Hz,1H)4.11(dd,J＝10.1,3.1Hz,1H)3.99-3.86(m,2H)2.77(s,1H)。
实施例113
合成2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氨基-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-3-氧代-3-(吡咯烷-1-基)丙酸
除在步骤3中使用2-重氮-3-氧代-3-(吡咯烷-1-基)丙酸乙酯代替2-重氮丙二酸1-乙酯3-(丙-1-烯-1-基)酯并且在步骤7中使用氨代替苯甲胺外，以与实施例59类似的方式制备标题化合物。产物以非对映异构体的55/45混合物形式分离。
主要非对映异构体1H-NMR(400MHz,CD3OD)d 8.80(s,1H)5.99(d,J＝7.4Hz,1H)5.05(d,J＝7.4Hz,1H)4.88(s,1H)4.28-4.26(m,1H)4.13(dd,J＝10.7,2.5Hz,1H)4.00(dd,J＝10.7,3.9Hz,1H)3.66-3.39(m,4H)3.17(s,1H)1.89-1.79(m,4H)。次要非对映异构体1H-NMR(400MHz,CD3OD)δ8.89(s,1H)6.03(d,J＝7.4Hz,1H)5.05(d,J＝7.4Hz,1H)4.86(s,1H)4.28-4.26(m,1H)3.90-3.86(m,2H)3.66-3.39(m,4H)3.16(s,1H)1.89-1.79(m,4H)。ESI-MS(m/z):[M]-C19H21ClN6O7计算值480.86；实验值479.1
实施例114
合成2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(2-氯-6-(环戊氨基)-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-3-氧代-3-(吡咯烷-1-基)丙酸
除在步骤3中使用2-重氮-3-氧代-3-(吡咯烷-1-基)丙酸乙酯代替2-重氮丙二酸1-乙酯3-(丙-1-烯-1-基)酯并且在步骤7中使用环戊胺代替苯甲胺外，以与实施例59类似的方式制备标题化合物。产物以非对映异构体的55/45混合物形式分离。
主要非对映异构体。1H NMR(400MHz,CD3OD)d 8.72(s,1H)5.96(d,J＝7.4Hz,1H)5.04(d,J＝7.4Hz,1H)4.87(s,1H)4.52-4.48(m,1H)4.28-4.25(m,1H)4.14(d,J＝10.5Hz,1H)4.01(dd,J＝10.6,5.2Hz,1H)3.60-3.36(m,4H)3.17(s,1H)2.10-2.04(m,2H)1.84-1.77(m,6H)1.69-1.58(m,4H)次要非对映异构体1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.64(s,1H)6.00(d,J＝7.4Hz,1H)5.01(d,J＝7.4Hz,1H)4.85(s,1H)4.52-4.48(m,1H)4.28-4.25(m,1H)3.92-3.86(m,2H)3.60-3.36(m,4H)3.16(s,1H)2.10-2.04(m,2H)1.84-1.77(m,6H)1.69-1.58(m,4H)(.ESI-MS(m/z):[M]-C24H29ClN6O7计算值548.98；实验值547.3。
实施例115
合成3-氨基-2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(2-氯-6-(环戊氨基)-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-3-氧代丙酸
步骤1：
在氮气下，制备2,6-二氯腺嘌呤(2.91g，15.4mmoL，1.01当量)和N,O-双(三甲基甲硅烷基)乙酰胺(4.87mL，19.6mmoL，1.29当量)于无水乙腈(90mL)中的悬浮液。接下来，添加(2R,3R,4R,5R)-乙酸2,4-双(乙酰氧基)-5-{[(叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基]甲基}-4-乙炔基氧杂环戊-3-基酯(8.2g，15.22mmoL)于无水乙腈(10mL)中的溶液，接着滴加三氟甲烷磺酸三甲基甲硅烷酯(3.67mL，20.3mmoL，1.33当量)。将反应物升温至50℃，保持18小时，然后冷却至室温。(反应物开始是浅黄色，4小时后变成透明的琥珀色)。添加饱和碳酸氢钠水溶液(10mL)，并且搅拌混合物十分钟。用乙酸乙酯(3×100mL)萃取所得混合物，并且将合并的有机层干燥(Na2SO4)，过滤，并浓缩。将残余物溶解于二氯甲烷/乙酸乙酯(约3mL，1:1)中，装载至硅胶柱(约300cc)上，并用0-30％乙酸乙酯/己烷洗脱，得到呈白色固体形式的(2R,3R,4R,5R)-二乙酸2-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-5-(2,6-二氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基四氢呋喃-3,4-二基酯(8.2g，81％)。
步骤2：
将(2R,3R,4R,5R)-二乙酸2-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-5-(2,6-二氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基四氢呋喃-3,4-二基酯(1.6g，2.4mmoL)于无水THF(25mL)中的溶液冷却至0℃，并用乙酸(0.192mL，3.36mmoL，1.4当量)、氟化四丁铵于THF(3.36mL，3.36mmoL，1.4当量)中的1N溶液处理。添加完成后，在搅拌下将反应物升温至室温，保持3小时。将反应混合物浓缩，经由快速柱色谱法(0至50％乙酸乙酯/己烷)纯化，得到呈白色泡沫形式的(2R,3R,4R,5R)-二乙酸5-(2,6-二氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-2-(羟甲基)四氢呋喃-3,4-二基酯(0.88g，86％)。
步骤3：
在氮气下，将((2R,3R,4R,5R)-二乙酸5-(2,6-二氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-2-(羟甲基)四氢呋喃-3,4-二基酯(172mg，0.40mmol)和3-(胺氧基)-2-重氮-3-氧代丙酸乙酯(160mg，1.02mmoL，2.5当量)于无水甲苯(3mL)中的溶液用乙酸铑(II)二聚体(5mg，0.011mmoL，2.8mol％)处理并且升温至80℃，保持5小时。将反应物浓缩，并经由快速柱色谱法(25-75％乙酸乙酯/二氯甲烷)纯化，得到呈无色玻璃形式的(2R,3R,4R,5R)-二乙酸2-(((1-氨基-3-乙氧基-1,3-二氧代丙-2-基)氧基)甲基)-5-(2,6-二氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基四氢呋喃-3,4-二基酯(101mg，45％于非对映异构体的约85:15混合物中)。
步骤4：
在氮气下，将(2R,3R,4R,5R)-二乙酸2-(((1-氨基-3-乙氧基-1,3-二氧代-丙-2-基)氧基)甲基)-5-(2,6-二氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基四氢呋喃-3,4-二基酯(157mg，0.28mmol)于二噁烷(2.5mL)中的溶液用二异丙基乙基-胺(0.100mL，0.61mmoL，2.2当量)和环戊胺(0.065mL，0.066mmoL，2.33当量)处理。在室温下搅拌18小时后，将混合物用乙酸乙酯(20mL)稀释，用水(10mL)洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤并浓缩，得到粗制(2R,3R,4R,5R)-二乙酸2-(((1-氨基-3-乙氧基-1,3-二氧代丙-2-基)氧基)甲基)-5-(2-氯-6-(环戊氨基)-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基四氢呋喃-3,4-二基酯。
步骤5：
将来自前一步骤的所得残余物在室温下于氢氧化铵和乙醇(1:1/v:v，10mL)中搅拌过夜。将混合物浓缩，溶解于THF(2.5mL)中并用溶解于水(2.5mL)中的氢氧化锂(23mg，0.96mmoL，3.4当量)处理。在偶尔稍微加热的情况下在室温下搅拌混合物约3小时，然后用1N HCl中和至pH为约6，并真空浓缩。将粗产物溶解于水中并通过反相HPLC纯化，并通过冻干干燥，得到呈体积大的白色固体形式的标题化合物(52mg，3个步骤为37％)。
主要异构体的1H NMR(400MHz,D2O):δ8.30(s,1H),5.81(m,1H),4.88(d,J＝6.6Hz,1H),4.80(d,J＝6.8Hz,1H),4.24(m,2H),4.20(bs,1H),3.83(m,2H),3.01(s,1H),1.85(m,2H),1.49(m,6H)。次要异构体的1H NMR(400MHz,D2O):δ8.39(s,1H),5.81(m,1H),4.88(d,J＝6.6Hz,1H),4.80(d,J＝6.8Hz,1H),4.24(m,2H),4.20(bs,1H),3.83(m,2H),2.99(s,1H),1.85(m,2H),1.49(m,6H)。HPLC:Rt＝7.08min,93.0％。C20H23ClN6O7的ESI-MS计算值494.13，实验值493.2(M-)；C10H11ClN5的ESI-MS计算值236.07，实验值236.0(M-核糖片段)。
实施例116
合成2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(2-氯-6-(环戊氨基)-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)丙二酰胺
在实施例115的合成中以来自步骤5的第二产物的形式制备标题化合物。其以体积大的白色固体(8.5mg，6％)形式分离。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):8.57(s,0.5H),8.31(s,1H),7.73(s,1H),7.38(m,1.5H),7.21(m,1.5H),7.05(m,0.5H),6.87(m,0.5H),6.20(m,1H),6.02(d,J＝7.0Hz,1H),5.79(d,J＝7.8Hz,1H),5.02(s,1H),4.73(s,1H),4.39(m,1H),4.18(m,1H),3.79(m,1H),3.68(s,1H),1.85(m,2H),1.49(m,6H)。HPLC:Rt＝6.64min,97.1％。C20H24ClN7O6的ESI-MS计算值493.15，实验值492.3(M-)；C10H11ClN5的ESI-MS计算值236.1，实验值236.1(M-核糖片段)。
实施例117
合成2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(2-氯-6-(甲氨基)-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸
除在步骤7中使用甲胺代替苯甲胺并且去除步骤4外，以类似于实施例59中所阐述的方式制备标题化合物。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.88(s,1H),6.05(d,J＝7.6Hz,1H),5.03(d,J＝7.6Hz,1H),4.62(s,1H),4.26(m,1H),4.04(m,1H),3.90(m,1H),3.11(s,1H),3.07(s,3H)。HPLC:Rt＝5.92min,97.9％。C16H16ClN5O8的ESI-MS计算值441.07，实验值442.5(M+)；C6H5ClN5的ESI-MS计算值182.02，实验值184.2(M-核糖片段)。
实施例118
合成2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(6-(苯甲基氨基)-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸
除去除步骤4外，以类似于实施例59中所阐述的方式制备标题化合物。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.87(s,1H),7.39(m,2H),7.33(m,2H),7.26(m,1H),6.06(d,J＝7.6Hz,1H),5.02(d,J＝7.6Hz,1H),4.76(m,2H),4.62(s,1H),4.26(s,1H),4.03(m,1H),3.90(m,1H),3.10(s,1H)。HPLC:Rt＝7.83min,98.2％。C22H20ClN5O8的ESI-MS计算值517.10实验值516.7(M-)；C12H9ClN5的ESI-MS计算值258.05，实验值258(M-核糖片段)。
实施例119
合成2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(2-氯-6-吗啉基-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-(苯磺酰基)乙酸
除在步骤3中使用2-重氮-2-(苯磺酰基)乙酸乙酯代替2-重氮丙二酸1-乙酯3-(丙-1-烯-1-基)酯，在步骤7中使用吗啉代替苯甲胺并且去除步骤4外，以与实施例59类似的方式制备标题化合物。
主要异构体的1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ8.40(s,1H),7.83(m,2H),7.66(m,2H),7.53(m,1H),5.83(m,1H),5.50(d,J＝7.8Hz,1H),4.80(d,J＝7.8Hz,1H),4.16(m,4H),3.98(m,1H),3.76(m,4H),3.63(s,1H)。次要异构体的1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ8.41(s,1H),7.83(m,2H),7.66(m,2H),7.53(m,1H),5.83(m,1H),5.50(d,J＝7.8Hz,1H),4.66(d,J＝7.8Hz,1H),4.16(m,4H),3.98(m,1H),3.76(m,4H),3.61(s,1H)。HPLC:Rt＝7.83(次要),8.18min(主要),99.6％(40:60)。C26H26ClN5O9的ESI-MS计算值587.14，实验值588(M+)；C24H24ClN5O9S的ESI-MS计算值593.10，实验值592(M-)；C23H23ClN5O7S的ESI-MS计算值548.10，实验值548(M-CO2H)；C9H9ClN5O的ESI-MS计算值238.05，实验值240(M-核糖片段)。
实施例120
合成2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(2-氯-6-(环戊氨基)-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-(甲磺酰基)乙酸
除在步骤3中使用2-重氮-2-(甲磺酰基)乙酸乙酯代替2-重氮丙二酸1-乙酯3-(丙-1-烯-1-基)酯，在步骤7中使用环戊胺代替苯甲胺并且去除步骤4外，以与实施例59类似的方式制备标题化合物。
主要异构体的1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ8.47(s,1H),5.85(m,1H),5.36(m,1H),5.01(m,1H),4.86(d,J＝8.0Hz,1H),4.42(m,2H),4.33(m,1H),4.25(m,2H),4.14(m,1H),4.00(m,1H),3.37(s,1H),3.05(s,3H),1.97(m,2H),1.72(m,2H),1.57(m,4H)。次要异构体的1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ8.39(s,1H),5.83(m,1H),5.36(m,1H),4.68(d,J＝8.0Hz,1H),4.42(m,2H),4.33(m,1H),4.25(m,2H),4.14(m,1H),4.00(m,1H),3.37(s,1H),3.05(s,3H),1.97(m,2H),1.72(m,2H),1.57(m,4H)。HPLC:Rt＝8.02min,98.4％。C20H24ClN5O8S的ESI-MS计算值529.10，实验值530(M+)；C10H11ClN5的ESI-MS计算值236.07，实验值238(M-核糖片段)。
实施例121和122
合成2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氨基-2-胺甲酰基-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-苯甲基-3-乙氧基-3-氧代丙酸和
2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氨基-2-胺甲酰基-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-苯甲基丙二酸
步骤1：
向2-苯甲基-2-(((2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(6-(N,N'-双(叔丁氧基羰基)氨基)-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基四氢呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸二乙酯(1.00g，1.17mmol，1当量)于DMSO(10mL)和H2O(2mL)中的溶液中添加1,4-二氮杂双环[2.2.2]辛烷(128uL，1.17mmol，1当量)和NaCN(114.20mg，2.33mmol，2当量)。在60℃下搅拌溶液3小时，然后用水(15mL)稀释并用乙酸乙酯(3×15mL)萃取。将合并的有机层用水(50mL)、盐水(50mL)洗涤，经Na2SO4干燥，并过滤并浓缩。通过Combi-flash(硅胶，30-70％EtOAc/石油醚)纯化粗残余物，得到呈黄色胶状物形式的2-苯甲基-2-(((2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(6-(N,N'-双(叔丁氧基羰基)-氨基)-2-氰基-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基四氢呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸二乙酯(312mg，40％产率)。
步骤2：
在0℃下向2-苯甲基-2-(((2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(6-(N,N'-双(叔丁氧基羰基)氨基)-2-氰基-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基四氢呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸二乙酯(50mg，75.23umol，1当量)于DCM(1.7mL)中的溶液中添加TFA(0.3mL)。在20℃下搅拌溶液1小时，然后用饱和NaHCO3水溶液稀释以将pH调节至9。用乙酸乙酯(3×3mL)萃取混合物。浓缩有机层，得到呈黄色胶状物形式的粗制2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氨基-2-氰基-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-苯甲基丙二酸二乙酯(45mg)。
步骤3：
向粗制2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氨基-2-氰基-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-苯甲基-丙二酸二乙酯(65mg，115.14umol，1当量)于MeCN(2mL)中的溶液中添加3,4,6,7,8,9-六氢-2H-嘧啶并[1,2-a]-嘧啶(TBD)(1M水溶液，461uL，4当量)。在20℃下搅拌反应混合物18小时，然后将其浓缩。通过制备型HPLC纯化粗残余物，并通过冻干干燥洗脱份，得到呈白色固体形式的2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氨基-2-胺甲酰基-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-苯甲基-3-乙氧基-3-氧代丙酸(实施例121)(4.1mg，5％产率)和呈白色固体形式的2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氨基-2-胺甲酰基-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-苯甲基丙二酸(实施例122)(2.2mg，3％产率)。
实施例121：1H NMR(400MHz,CD3OD)δppm 8.19～8.39(m,1H)7.26(br d,J＝5.88Hz,2H)7.03-7.12(m,3H)6.20(dd,J＝9.69,7.19Hz,1H)4.91-4.97(m,1H)4.29(br s,1H)3.98-4.24(m,4H)3.41-3.53(m,1H)3.31-3.40(m,1H)2.97-3.08(m,1H)1.18(q,J＝7.25Hz,3H)；LC/MS[M+H]＝555.1。
实施例122：1H NMR(400MHz,CD3OD)δppm 8.504(s,1H)7.16-7.28(m,2H)7.07(brs,3H)6.20(d,J＝5.88Hz,1H)4.92-4.99(m,1H)4.37(br s,1H)3.97(br d,J＝3.63Hz,2H)3.32-3.48(m,2H)3.01(s,1H)；LC/MS[M+H]＝527.0。
实施例123
合成(1-(((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氨基-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-甲氧基-2-氧代乙基)膦酸
步骤1：
使(2R,3R,4R,5R)-二乙酸5-(6-(N,N'-双(叔丁氧基羰基)氨基)-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-2-(羟甲基)四氢呋喃-3,4-二基酯(565mg，0.926mmol，1.0当量)和2-重氮-2-(二甲氧基磷酰基)乙酸甲酯(247mg，1.20mmol，1.3当量)与甲苯共沸两次，并且将所得油状物再溶解于甲苯(5.7mL)中。在环境温度下在氩气气氛下搅拌反应溶液，并且装配有夹套的回流冷凝器。添加乙酸铑(II)(0.185mmol，82mg，0.2当量)，并且在75℃下加热反应物9小时，然后将其冷却至室温。浓缩反应混合物，并且通过快速硅胶柱色谱法纯化所得油状物，得到(2R,3R,4R,5R)-二乙酸5-(6-(N,N'-双(叔丁氧基羰基)乙酰胺基)-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-2-((1-(二甲氧基磷酰基)-2-甲氧基-2-氧代乙氧基)甲基)-3-乙炔基四氢呋喃-3,4-二基酯。
步骤2至3：
根据关于实施例121中的步骤4所描述的程序对来自前一步骤的产物进行脱保护。使用KOEt代替NaOH水溶液，产生羧酸。标题化合物从制备型反相HPLC以白色固体形式分离。
1H NMR(CD3OD,300MHz)δ8.08(s,1H),6.06(bs,1H),5.06-5.08(d,J＝5Hz,1H),4,28(s,1H),3.90-4.10(m,2H),3.79(s,3H),3.98(bs,2H),3.13(s,1H)；LC/MS[M+H]＝478.2。
实施例124
合成(1-(((2R,3S,4R,5R)-5-(2-氯-6-吗啉基-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-乙氧基-2-氧代乙基)膦酸
除在步骤3中使用2-重氮-2-(二乙氧基磷酰基)乙酸乙酯代替2-重氮丙二酸酯，在步骤7中使用吗啉代替苯甲胺并且去除步骤4外，以类似于实施例59中所阐述的方式制备(1-(((2R,3S,4R,5R)-5-(2-氯-6-吗啉基-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-乙氧基-2-氧代乙基)膦酸。化合物以非对映异构体的1:1混合物形式分离。
主要异构体的1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ8.59(s,1H),5.90(m,1H)5.00(d,J＝7.0Hz,1H),4.25(m,2H),4.05(m,4H),3.99(m,1H),3.83(m,1H),3.75(m,4H),3.01(s,1H)1.05(t,J＝7.1Hz,3H)。次要异构体的1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ8.48(s,1H),5.88(m,1H),4.94(d,J＝6.9Hz,1H),4.25(m,2H),4.05(m,4H),3.99(m,1H),3.83(m,1H),3.75(m,4H),3.01(s,1H),0.99(t,J＝7.1Hz,3H)。HPLC:次要异构体＝6.63min；主要异构体＝6.65min,98.6％。LC-MS:m/z＝562(M+)；m/z＝240(M-核糖片段)。
实施例125
合成2-苯甲基-2-(((2R,3S,4R,5R)-3-乙炔基-3,4-二羟基-5-(5-(三氟甲基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-3-基)四氢呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸
如上文实施例15中所描述但用5-(三氟甲基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶代替6-氨基-2-氯腺嘌呤来进行，得到呈白色固体形式的标题化合物。
1H NMR(CD3OD,300MHz)δ8.82(bs,1H),8.23(d,J＝8Hz,1H),7.78(d,J＝8Hz,1H),7.29-7.26(m,2H),7.03-7.00(m,3H),6.32(d,J＝7Hz,1H),5.10(d,J＝7Hz,1H),4.37-4.36(m,1H),4.08(d,J＝3Hz,2H),3.42(dd,J＝15,28Hz,2H),2.98(s,1H)；LC/MS[M+H]＝535.2。
实施例126
合成2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氨基-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-(噻唑-4-基甲基)丙二酸
如上文实施例15中所描述但用4-(氯甲基)噻唑代替烯丙基溴来进行，得到呈白色固体形式的标题化合物。
1H NMR(CD3OD,300MHz)δ8.76(bs,1H),8.57(bs,1H),7.36(bs,1H),6.00(d,J＝7Hz,1H),5.00-4.95(m,1H),4.35(bs,1H),4.08-4.04(m,2H),3.66-3.64(m,2H),2.98(s,1H)；LC/MS[M+H]＝524.9。
实施例127
合成2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(2-乙酰基-6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-苯甲基丙二酸
步骤1：
向6-氨基-2-氯腺嘌呤(3.0g，17.69mmol，1当量)于DCM(60mL)中的悬浮液中添加4-DMAP(2.16g，17.69mmol，1当量)、TEA(21.48g，212.30mmol，29.55mL，12当量)和(Boc)2O(30.89g，141.53mmol，8当量)。在20℃下搅拌悬浮液18小时，然后用饱和NH4Cl水溶液(100mL)稀释并用乙酸乙酯(2×100mL)萃取。将合并的有机层用盐水(200mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。通过Combi-flash(硅胶，0-20％EtOAc/石油醚)纯化粗残余物，得到呈黄色胶状物形式的6-(N,N'-双(叔丁氧基羰基)氨基)-2-氯-9H-嘌呤-9-甲酸叔丁酯(904mg，11％产率)。
步骤2：
在N2气氛下向6-(N,N'-双(叔丁氧基羰基)氨基)-2-氯-9H-嘌呤-9-甲酸叔丁酯(900mg，1.92mmol，1当量)于DMF(12mL)中的溶液中添加Pd(PPh3)2Cl2(134.43mg，191.52umol，0.1当量)和三丁基(1-乙氧基乙烯基)锡烷(832uL，2.46mmol，1.29当量)。在95℃下搅拌悬浮液3小时，然后用饱和KF水溶液(8mL)稀释并在20℃下搅拌1小时。用乙酸乙酯(2×8mL)萃取混合物。将合并的有机层用水(20mL)、盐水(15mL)洗涤，通过Na2SO4干燥，过滤并浓缩。通过Combi-flash(硅胶，30-70％EtOAc/石油醚)纯化粗残余物，得到呈白色固体形式的N-(叔丁氧基羰基)氨基-(2-(1-乙氧基乙烯基)-9H-嘌呤-6-基)氨基甲酸叔丁酯(256mg，33％产率)。
步骤3：
向来自上一步骤的产物(60mg，109.38umol，1当量)和2-苯甲基-2-(((2R,3R,4R)-3,4,5-三乙酰氧基-3-乙炔基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-丙二酸二乙酯(53.22mg，131.26umol，1.2当量)于MeCN(1mL)中的溶液中添加BSA(65uL，262.52umol，2.4当量)。在65℃下搅拌溶液0.5小时，然后将其冷却至25℃并接着添加TMSOTf(24uL，131.26umol，1.2当量)。在65℃下搅拌所得溶液1小时，然后用饱和NaHCO3水溶液(5mL)稀释并用EtOAc(2×5mL)萃取。浓缩合并的有机层。通过制备型TLC(EtOAc)纯化粗残余物，得到呈无色胶状物形式的2-苯甲基-2-(((2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(6-氨基-2-(1-乙氧基乙烯基)-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基四氢呋喃-2-基)-甲氧基)丙二酸二乙酯(42mg，55％产率)。
步骤4：
向2-苯甲基-2-(((2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(6-氨基-2-(1-乙氧基乙烯基)-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-丙二酸二乙酯(40mg，57.66umol，1当量)于THF(1.5mL)中的溶液中添加1M HCl水溶液(0.5mL，8.67当量)。在20℃下搅拌混合物21小时，然后用饱和NaHCO3水溶液(5mL)稀释，并用乙酸乙酯(3×5mL)萃取混合物。合并的有机层经Na2SO4干燥，过滤并浓缩，得到呈淡黄色胶状物形式的粗制2-苯甲基-2-(((2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(2-乙酰基-6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基四氢-呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸二乙酯(40mg)。
步骤5：
向粗制2-苯甲基-2-(((2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(2-乙酰基-6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基四氢呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸二乙酯(30mg，45.07umol，1当量)于THF(4mL)中的溶液中添加1M LiOH水溶液(901uL，20当量)。在20℃下搅拌混合物6小时，然后用1N HCl水溶液将其酸化至pH 6并浓缩。通过制备型HPLC纯化粗残余物，并通过冻干干燥洗脱份，得到呈白色固体形式的标题化合物(1.4mg，6％产率)。
1H NMR(CD3OD,300MHz)δ8.43(bs,1H),7.14-6.98(m,5H),6.06(d,J＝6.4Hz,1H),4.89(d,J＝6.8Hz,1H),4.26(m,1H),3.94-3.91(m,2H),3.30-3.21(m,2H),2.91(s,1H),2.61(s,3H)；LC/MS[M+H]＝526.0。
实施例128
合成2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氨基-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-(噻吩-2-基甲基)丙二酸
如上文实施例15中所描述但用2-(溴甲基)噻吩代替烯丙基溴来进行，得到呈白色固体形式的标题化合物。
1H NMR(CD3OD,300MHz)δ8.37(bs,1H),7.10(d,J＝5Hz,1H),6.93-6.72(m,2H),6.00(d,J＝7.2Hz,1H),4.98(d,J＝7.6Hz,1H),4.23(bs,1H),4.06(bs,2H),3.62-3.58(m,2H),2.94(s,1H)；LC/MS[M+H]＝523.9。
实施例129
合成2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(2-氯-6-(环戊氨基)-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-(苯磺酰基)乙酸
除在步骤3中使用2-重氮-2-(苯磺酰基)乙酸乙酯代替2-重氮丙二酸1-乙酯3-(丙-1-烯-1-基)酯，在步骤7中使用环戊胺代替苯甲胺并且去除步骤4外，以与实施例59类似的方式制备标题化合物。
LC/MS[M+H]＝592.0。
实施例130
合成2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(2-氯-6-(甲氨基)-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-(4-(1-乙基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)苯甲基)丙二酸
如上文实施例20中所描述但用2-(((2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(6-((叔丁氧基羰基)(甲基)氨基)-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-四氢呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸二乙酯代替2-(((2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(6-N,N'-(双(叔丁氧基羰基)氨基)-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基四氢呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸二乙酯来进行，得到呈白色固体形式的标题化合物。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δppm 8.04(s,1H),7.58(dd,J＝6.7,1.9Hz,1H),7.27-7.38(m,5H),6.35(t,J＝6.9Hz,1H),5.95(d,J＝7.8Hz,1H),4.77(d,J＝7.8Hz,1H),4.28(t,J＝2.6Hz,1H),3.96-4.13(m,4H),3.38-3.57(m,2H),3.05(s,1H,)2.99(m,3H),1.32(t,J＝7.3Hz,3H)；LC/MS[M+H]＝653.1。
实施例131
合成2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氯-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-1-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-(4-(2-氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲基)丙二酸
步骤1：
向维持在25℃下的(4-氨基苯基)甲醇(27.65g，224.44mmol，1当量)于无水DCM(100mL)和无水THF(50mL)中的混合物中的溶液中滴加1-氯-3-异氰酸酯基丙烷(26.83g，224.44mmol，1当量)。反应混合物变得略微放热，并且随着在15分钟内形成沉淀物而变为黄色。搅拌混合物1.5小时，然后添加己烷(50mL)。再搅拌混合物15分钟，然后通过过滤收集固体产物，用DCM和己烷的混合物(5:1＝v:v)冲洗。干燥后，得到呈淡黄色固体形式的1-(3-氯丙基)-3-(4-(羟甲基)苯基)脲(38.45g)。
步骤2：
在25℃下向1-(3-氯丙基)-3-(4-(羟甲基)苯基)脲(30.00g，123.6mmol，1.0当量)于THF(300mL)中的溶液中滴加1M t-BuOK于THF(247.2mL，247.2mmol，2.0当量)中的溶液，同时用机械搅拌器剧烈搅拌。在25℃下搅拌所得非均匀混合物6小时，然后将其冷却至0℃并用2N HCl水溶液酸化至pH 5-6。然后减压除去有机挥发物。将粗固体溶解于MeOH(75mL)中并浓缩。在轻微加热下用7％MeOH/DCM溶液(220mL)冲洗所得固体混合物，并且滤出固体。再次用7％MeOH/DCM(150mL)冲洗固体并过滤。浓缩合并的冲洗液，得到呈微黄色固体形式的所需粗制1-(4-(羟甲基)苯基)四氢嘧啶-2(1H)-酮(27.68g)。
步骤3：
在25℃下在N2气氛下向粗制1-(4-(羟甲基)苯基)四氢嘧啶-2(1H)-酮(15.00g，72.74mmol，1当量)于DCM(250mL)中的悬浮液中添加亚硫酰氯溶液(10.61mL，145.48mmol，2当量)。在25℃下搅拌混合物8小时，然后用EtOAc(250mL)稀释并搅拌30分钟。通过过滤收集固体，用EtOAc冲洗并干燥，得到粗制1-(4-(氯-甲基)苯基)四氢嘧啶-2(1H)-酮(15.00g)。
步骤4：
在20℃下向2-(((3aR,5R,6R,6aR)-6-乙酰氧基-2,2-二甲基-6-(丙-1-炔-1-基)四氢呋喃并[2,3-d][1,3]间二氧杂环戊烯-5-基)甲氧基)丙二酸二乙酯(7.04g，16.99mmol，1当量)于DMF(70mL)中的溶液中添加Cs2CO3(11.07g，33.98mmol，2当量)和粗制1-(4-(氯-甲基)苯基)四氢嘧啶-2(1H)-酮(5.09g，25.49mmol，1.5当量)。在20℃下搅拌混合物5小时，然后用H2O(300mL)稀释并用EtOAc(3×100mL)萃取。将合并的有机层用盐水(200mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。通过快速硅胶柱色谱法(10-40％丙酮/DCM)纯化粗产物，得到呈固体形式的2-(((3aR,5R,6R,6aR)-6-乙酰氧基-6-乙炔基-2,2-二甲基四氢呋喃并[2,3-d][1,3]间二氧杂环戊烯-5-基)甲氧基)-2-(4-(2-氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲基)丙二酸二乙酯(9.62g，94％产率)。
步骤5：
在0℃下向2-(((3aR,5R,6R,6aR)-6-乙酰氧基-6-乙炔基-2,2-二甲基-四氢呋喃并[2,3-d][1,3]间二氧杂环戊烯-5-基)甲氧基)-2-(4-(2-氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲基)丙二酸二乙酯(17.31g，28.72mmol，1当量)于DCM(90mL)中的溶液中添加H2O(18mL)和TFA(90mL，1.22mol，42当量)。在20-25℃下搅拌反应混合物16小时，然后减压浓缩。使残余物与DCM(2×50mL)减压共沸，得到粗产物2-(((2R,3S,4R)-3-乙酰氧基-3-乙炔基-4,5-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-(4-(2-氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲基)丙二酸二乙酯，其不经进一步纯化即用于下一步骤中。
步骤6：
在0℃下向粗制2-(((2R,3S,4R)-3-乙酰氧基-3-乙炔基-4,5-二羟基-四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-(4-(2-氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲基)丙二酸二乙酯(17.23g，粗制)于DCM(170mL)中的溶液中添加4-DMAP(374mg，3.06mmol，0.1当量)、Ac2O(17.21mL，183.77mmol，6当量)和吡啶(19.78mL，245.02mmol，8当量)。在20-25℃下搅拌反应混合物16小时，然后减压浓缩。将残余物再溶解于EtOAc(200mL)中，用1N HCl水溶液(150mL)、10％Cu2SO4水溶液(150mL)、饱和NaHCO3水溶液(150mL)和盐水(150mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩，得到呈泡沫形式的粗制2-(4-(2-氧代四氢-嘧啶-1(2H)-基)苯甲基)-2-(((2R,3R,4R)-3,4,5-三乙酰氧基-3-乙炔基四氢呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸二乙酯(19.24g)，其不经进一步纯化即进行下一步骤。
步骤7：
在0℃下向粗制2-(4-(2-氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲基)-2-(((2R,3R,4R)-3,4,5-三乙酰氧基-3-乙炔基四氢呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸二乙酯(450mg，0.70mmol，1当量)和6-氯-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶(128mg，0.77mmol，1.1当量)于MeCN(4mL)中的悬浮液中添加DBU(315uL，2.09mmol，3.0当量)。在0℃下搅拌溶液5分钟并接着滴加TMSOTf(566uL，3.13mmol，4.5当量)于MeCN(2mL)中的溶液。将溶液在0℃下搅拌0.5小时，并且然后在70℃下搅拌16小时，然后使其冷却至25℃并用饱和NaHCO3水溶液将pH调节至9。用乙酸乙酯(2×40mL)萃取混合物。合并的有机层用Na2SO4干燥，过滤并浓缩。通过Combi-flash硅胶(0-10％MeOH/DCM)纯化粗残余物，得到呈黄色胶状物形式的2-(((2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(6-氯-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-1-基)-3-乙炔基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-(4-(2-氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲基)-丙二酸二乙酯(255mg，49％产率)。
步骤8：
向2-(((2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(6-氯-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-1-基)-3-乙炔基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-(4-(2-氧代四氢-嘧啶-1(2H)-基)苯甲基)丙二酸二乙酯(296mg，392umol，1当量)于THF(6mL)中的溶液中添加LiOH水溶液(2M，1.96mL，10当量)。在50℃下搅拌溶液2小时，然后减压除去有机挥发物。向水层添加1N HCl以将pH调节至5-6。浓缩混合物，得到粗产物，通过制备型HPLC(柱：YMC-Actus Triart C18150×30mm×5um；流动相：[水(0.225％FA)-ACN]；B％：25％-45％，10min)纯化粗产物。通过冻干分离产物，得到呈白色固体形式的2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氯-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-1-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-(4-(2-氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲基)丙二酸(32mg)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 8.27(d,J＝8.28Hz,1H),7.31(d,J＝8.28Hz,1H),6.97(d,J＝8.53Hz,2H),6.81(d,J＝8.53Hz,2H),6.49(s,1H),6.20(s,1H),6.13(d,J＝7.53Hz,1H),5.97(s,1H),4.98(d,J＝7.53Hz,1H),4.13(dd,J＝8.41,2.64Hz,1H),3.93-3.99(m,1H),3.84-3.91(m,1H),3.64(s,1H),3.42-3.52(t,J＝5.60Hz,2H),3.17-3.23(m,2H),3.05-3.16(m,2H),2.45(s,3H),1.90(m,2H)；LC/MS[M+H]＝614.3。
实施例132
合成2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(2-氯-6-氧代-1H-嘌呤-9(6H)-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-(4-(2-氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲基)丙二酸
步骤1：
在25℃下向2,6-二氯-9H-嘌呤(379.97mg，2.01mmol)于MeCN(5mL)中的溶液中添加BSA(956uL，3.87mmol)。在65℃下搅拌反应混合物0.5小时并且然后冷却至25℃。在25℃下向此混合物中添加含2-(4-(2-氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲基)-2-(((2R,3R,4R)-3,4,5-三乙酰氧基-3-乙炔基四氢呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸二乙酯(1g)的MeCN(5mL)和TMSOTf(419uL，2.32mmol)，并且再在65℃下搅拌5小时。使反应混合物冷却至25℃，然后用饱和NaHCO3水溶液(10mL)淬灭并用EtOAc(3×5mL)萃取。合并的有机层用盐水(10mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩。通过快速硅胶柱色谱法(0-10％MeOH/DCM)纯化粗残余物，得到呈泡沫形式的2-(((2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(2,6-二氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-(4-(2-氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲基)丙二酸二乙酯(365mg)。
步骤2：
在25℃下向2-(((2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(2,6-二氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-(4-(2-氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲基)丙二酸二乙酯(180mg)于THF(2mL)中的溶液中添加含LiOH·H2O(97.39mg，2.32mmol，10当量)的H2O(1mL)。在40℃下搅拌反应混合物2小时，然后减压除去有机挥发物。用1N HCl水溶液将水相酸化至pH 5-6并减压浓缩。通过制备型HPLC(柱：YMC-Actus Triart C18 150×30mm×5um；流动相：[水(0.225％FA)-ACN]；B％：13％-33％，10min)纯化粗残余物并通过冻干干燥，得到呈白色固体形式的2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(2-氯-6-氧代-1H-嘌呤-9(6H)-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基-四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-(4-(2-氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲基)丙二酸(15mg)。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δppm 8.62(s,1H),7.24(d,J＝8.31Hz,2H),7.03(d,J＝8.31Hz,2H),6.32(d,J＝6.48Hz,1H),4.61(d,J＝6.48Hz,1H),4.28-4.34(m,1H),3.92-4.04(m,2H),3.55-3.66(m,2H),3.33-3.40(m,4H),3.02(s,1H),1.99-2.06(m,2H)；LC/MS[M+H]＝617.2。
实施例133
合成2-(((2R,3S,4R,5R)-3-乙炔基-3,4-二羟基-5-(5-甲基-2,4-二氧代-3,4-二氢嘧啶-1(2H)-基)四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-(4-(2-氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲基)丙二酸
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步骤1：
向5-甲基嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(100mg，792.94umol，1当量)于MeCN(2mL)中的混合物中添加BSA(490uL，1.98mmol，2.5当量)。在85℃下搅拌混合物0.5小时。将混合物冷却至0℃并接着滴加2-(4-(2-氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲基)-2-(((2R,3R,4R)-3,4,5-三乙酰氧基-3-乙炔基四氢呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸二乙酯(385mg)于MeCN(2mL)和TMSOTf(430uL，2.38mmol，3.0当量)中的溶液。在65℃下在N2气氛下搅拌混合物5小时，然后使其冷却至25℃并用饱和NaHCO3水溶液(10mL)淬灭。用EtOAc(3×5mL)萃取混合物。将有机层合并，经Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩。通过硅胶柱色谱法(0-5％MeOH/DCM)纯化粗化合物，得到呈固体形式的2-(((2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-3-乙炔基-5-(5-甲基-2,4-二氧代-3,4-二氢嘧啶-1(2H)-基)四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-(4-(2-氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲基)丙二酸二乙酯(208mg，37％产率)。
步骤2：
在20-25℃下向2-(((2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-3-乙炔基-5-(5-甲基-2,4-二氧代-3,4-二氢嘧啶-1(2H)-基)四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-(4-(2-氧代四氢-嘧啶-1(2H)-基)苯甲基)丙二酸二乙酯(200mg，280.62umol，1当量)于THF(2mL)中的溶液中添加含LiOH·H2O(58.88mg，1.40mmol，5当量)的H2O(1mL)。在40℃下搅拌反应混合物1小时，然后减压除去有机挥发物。用1N HCl水溶液将水相酸化至pH为5-6并减压浓缩。通过制备型HPLC(柱：YMC-Actus Triart C18150×30mm×5um；流动相：[水(0.225％FA)-ACN]；B％：13％-33％，10min)纯化粗残余物，并接着冻干，得到呈白色固体形式的2-(((2R,3S,4R,5R)-3-乙炔基-3,4-二羟基-5-(5-甲基-2,4-二氧代-3,4-二氢嘧啶-1(2H)-基)四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-(4-(2-氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲基)丙二酸(49mg)。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δppm 7.83(d,J＝0.75Hz,1H),7.33(d,J＝8.28Hz,2H),7.11(d,J＝8.28Hz,2H),6.06(d,J＝7.78Hz,1H),4.44(d,J＝7.78Hz,1H),4.16(t,J＝2.26Hz,1H),3.92-4.05(m,2H),3.47-3.65(m,3H),3.33-3.41(m,3H),2.98(s,1H),2.04(m,2H),1.62(s,3H)；LC/MS[M+H]＝573.1。
实施例134
合成2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(2,4-二氧代-3,4-二氢嘧啶-1(2H)-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-(4-(2-氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲基)丙二酸
如上文实施例133中所描述但用尿嘧啶代替胸腺嘧啶来进行，得到呈白色固体形式的标题化合物。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δppm 7.91(d,J＝8.0Hz,1H),7.31(d,J＝8.4Hz,2H),7.15(d,J＝8.4Hz,2H),6.01(d,J＝7.5Hz,1H),5.20(d,J＝8.0Hz,1H),4.36(d,J＝7.5Hz,1H),4.17(t,J＝2.4Hz,1H),3.99(dd,J＝18.8,2.5Hz,2H),3.55-3.66(m,2H),3.44-3.52(m,1H),3.33-3.38(m,3H),3.01(s,1H),1.99-2.10(m,2H)；LC/MS[M+H]＝559.1。
实施例135
合成2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(4-氨基-2-氧代嘧啶-1(2H)-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-(4-(2-氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲基)丙二酸
如上文实施例133中所描述但用胞嘧啶代替胸腺嘧啶来进行，得到呈白色固体形式的标题化合物。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 7.92-8.05(m,1H),7.76-7.92(br s,1H),7.45-7.62(s,1H),7.03-7.19(m,4H),6.55(s,1H),5.91-5.99(m,1H),5.87(d,J＝6.80Hz,1H),5.80(d,J＝6.00Hz,1H),5.57(d,J＝7.20Hz,1H),4.13(t,J＝6.80Hz,1H),4.02-4.08(m,1H),3.68-3.82(m,2H),3.50-3.57(m,2H),3.22(s,1H),3.19-3.22(m,3H),1.82-1.99(m,2H)；LC/MS[M+H]＝558.3。
实施例136
合成2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(2-氯-6-((环丙基甲基)氨基)-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-(4-(2-氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲基)丙二酸
如上文实施例133中所描述但用2-氯-N-(环丙基甲基)-9H-嘌呤-6-胺代替胸腺嘧啶进行，得到呈白色固体形式的标题化合物。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δppm 8.22(s,1H),7.28(br d,J＝8.03Hz,2H),7.03(d,J＝8.28Hz,2H),5.97(d,J＝7.28Hz,1H),4.72-4.77(m,1H),4.28(s,1H),3.95-4.05(m,2H),3.34-3.52(m,8H),3.05(s,1H),1.92-2.02(m,2H),1.11-1.20(m,1H),0.51-0.59(m,2H),0.34(q,J＝4.85Hz,2H)；LC/MS[M+H]＝670.1。
实施例137
合成2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(2-氯-6-(甲氨基)-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-(4-(3-(2-羟乙基)-2-氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲基)丙二酸
步骤1：
在0℃下向化合物1-(3-氯丙基)-3-(4-(羟甲基)苯基)脲(5g，20.60mmol，1当量)于THF(100mL)中的溶液中添加NaH(9.89g，247.22mmol，60％于矿物油中，12当量)。在25℃下搅拌反应混合物1.5小时，然后向其中添加TBDPSCl(6.80g，24.72mmol，1.2当量)并再搅拌另外1.5小时。然后向反应混合物中添加烯丙基溴(9.97g，82.41mmol，4当量)并且再搅拌16小时。向反应混合物中添加H2O(50mL)并用EtOAc(3×100mL)萃取所得混合物。将合并的有机层用盐水(100mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。粗残余物通过硅胶柱色谱法纯化并用EtOAc/石油醚(0-30％)洗脱，得到呈油形式的1-烯丙基-3-(4-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)苯基)四氢嘧啶-2(1H)-酮(6g，60％产率)。
步骤2：
在-78℃下向化合物1-烯丙基-3-(4-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-苯基)四氢嘧啶-2(1H)-酮(6g，12.38mmol，1当量)于MeOH(60mL)的DCM(30mL)的混合物中的溶液中引入臭氧(15psi)，直至溶液的蓝色保持20分钟为止。通过使氮气鼓泡10分钟来除去过量臭氧。向此反应混合物中添加NaBH4(937mg，24.76mmol，2当量)，并且使混合物达到0℃并在25℃下搅拌15小时。将混合物倒入1N HC1水溶液(50mL)中并用EtOAc(2×100mL)萃取。将合并的有机层用水(100mL)和盐水(100mL)洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤并浓缩，得到呈油形式的粗制1-(4-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)苯基)-3-(2-羟乙基)四氢嘧啶-2(1H)-酮(6.6g)，其直接用于下一步骤中。
步骤3：
在25℃下向粗制1-(4-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)苯基)-3-(2-羟乙基)四氢嘧啶-2(1H)-酮(12.38mmol，1当量)于DCM(40mL)和吡啶(3.00mL，37.14mmol，3当量)中的溶液中添加Ac2O(2.32mL，24.76mmol，2当量)和4-DMAP(151mg，1.24mmol，0.1当量)。搅拌混合物2小时，然后用H2O(60mL)淬灭。用EtOAc(3×50mL)萃取混合物。将合并的有机层用水(2×30mL)、盐水(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩，得到粗制乙酸2-(3-(4-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)-氧基)甲基)苯基)-2-氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)乙酯，其直接用于下一步骤中。
步骤4：
在0℃下向粗制乙酸2-(3-(4-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)苯基)-2-氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)乙酯(6.57g，12.38mmol，1当量)于THF(40mL)中的溶液中添加1MTBAF于THF(18.57mL，1.5当量)中的溶液。在25℃下搅拌混合物1小时，然后添加H2O(100mL)。用EtOAc(4×100mL)萃取反应混合物。将合并的有机层用盐水(50mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。用CH2Cl2(4×100mL)进一步萃取水相。将合并的有机层用盐水(50mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩，得到更多产物。合并两批粗产物并且进一步经硅胶柱色谱法(40-100％EtOAc/石油醚)纯化，得到呈白色固体形式的乙酸2-(3-(4-(羟甲基)苯基)-2-氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)乙酯(3.14g)。
步骤5：
在0℃下向乙酸2-(3-(4-(羟甲基)苯基)-2-氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)乙酯(1.28g，4.38mmol，1当量)和DMF(3.37uL，43.79umol，0.01当量)于DCM(25mL)中的混合物中添加SOCl2(5mL，68.92mmol，15.74当量)。在50℃下搅拌混合物2小时，然后浓缩，得到粗制乙酸2-(3-(4-(氯甲基)苯基)-2-氧代-四氢嘧啶-1(2H)-基)乙酯(1.51g)，其不经进一步纯化即用于下一步骤中。
步骤6：
向粗制乙酸2-(3-(4-(氯甲基)苯基)-2-氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)乙酯(1.51g，4.38mmol，1当量)和2-(((3aR,5R,6R,6aR)-6-乙酰氧基-2,2-二甲基-6-(丙-1-炔-1-基)四氢呋喃并[2,3-d][1,3]间二氧杂环戊烯-5-基)甲氧基)-丙二酸二乙酯(1.91g，4.60mmol，1.05当量)于DMF(8mL)中的溶液中添加Cs2CO3(4.28g，13.14mmol，3当量)。在25℃下搅拌混合物16小时，然后用H2O(40mL)稀释并用EtOAc(3×30mL)萃取。用饱和NH4Cl水溶液(2×15mL)、水(2×15mL)、盐水(15mL)洗涤合并的有机层，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。通过硅胶柱色谱法(25-70％EtOAc/石油醚)纯化残余物，得到呈黄色胶状物形式的2-(((3aR,5R,6R,6aR)-6-乙酰氧基-6-乙炔基-2,2-二甲基四氢呋喃并[2,3-d][1,3]间二氧杂环戊烯-5-基)甲氧基)-2-(4-(3-(2-乙酰氧基-乙基)-2-氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲基)丙二酸二乙酯(2.20g，68％产率)。
步骤7：
向2-(((3aR,5R,6R,6aR)-6-乙酰氧基-6-乙炔基-2,2-二甲基-四氢呋喃并[2,3-d][1,3]间二氧杂环戊烯-5-基)甲氧基)-2-(4-(3-(2-乙酰氧基乙基)-2-氧代四氢-嘧啶-1(2H)-基)苯甲基)丙二酸二乙酯(2.20g，3.19mmol，1当量)于DCM(7.5mL)中的溶液中添加TFA(7.5mL，101.30mmol，32当量)和H2O(1.5mL)。在25℃下搅拌混合物16小时，然后其用水(20mL)稀释，然后用NaHCO3固体将混合物的pH调节至7-8。然后用CH2Cl2(4×20mL)萃取混合物。然后将有机相用盐水(10mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩，得到呈黄色胶状物形式的粗制2-(((2R,3S,4R)-3-乙酰氧基-3-乙炔基-4,5-二羟基-四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-(4-(3-(2-乙酰氧基乙基)-2-氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲基)丙二酸二乙酯(2.1g)。
向上文粗产物(2.1g，3.19mmol，1当量)于DCM(15mL)中的溶液中添加Ac2O(1.79mL，19.14mmol，6当量)、吡啶(2.06mL，25.52mmol，8当量)和4-DMAP(38.97mg，319.00umol，0.1当量)。在25℃下搅拌混合物2小时，然后用EtOAc(100mL)稀释，依序用1NHCl水溶液(2×30mL)洗涤。用水(20mL)、饱和NaHCO3水溶液(2×20mL)、水(20mL)和盐水(10mL)洗涤有机层。有机层经MgSO4干燥并浓缩，得到呈黄色泡沫形式的粗制2-(4-(3-(2-乙酰氧基乙基)-2-氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲基)-2-(((2R,3R,4R)-3,4,5-三乙酰氧基-3-乙炔基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-丙二酸二乙酯(2.3g)。
步骤8：
向2-氯-N-甲基-9H-嘌呤-6-胺(151.59mg，825.68umol，1.1当量)于MeCN(3mL)中的溶液中添加BSA(408.19uL，1.65mmol，2.2当量)。在65℃下搅拌混合物0.5小时，然后将其冷却至0℃并接着添加含2-(4-(3-(2-乙酰氧基乙基)-2-氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲基)-2-(((2R,3R,4R)-3,4,5-三乙酰氧基-3-乙炔基四氢呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸二乙酯(550mg，粗制)的MeCN(3mL)和TMSOTf(406.91uL，2.25mmol，3当量)。在65℃下搅拌混合物3小时，然后使其冷却至25℃并用饱和NaHCO3水溶液(20mL)淬灭。用EtOAc(4×20mL)萃取反应混合物。将合并的有机层用水(10mL)、盐水(10mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将粗残余物首先通过硅胶快速柱色谱法(30-70％EtOAc/石油醚)纯化并且然后通过制备型TLC(7％MeOH/DCM)进一步纯化，得到呈泡沫形式的2-(4-(3-(2-乙酰氧基乙基)-2-氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲基)-2-(((2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(2-氯-6-(甲氨基)-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基四氢呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸二乙酯(180mg，22％产率)。
步骤9：
向2-(4-(3-(2-乙酰氧基乙基)-2-氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲基)-2-(((2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(2-氯-6-(甲氨基)-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基四氢呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸二乙酯(180mg，210.21umol，1当量)于THF(1mL)中的溶液中添加饱和LiOH水溶液(1.5mL)。在50℃下搅拌混合物2小时，然后减压除去有机挥发物。用6N HCl水溶液将混合物的pH调节为2至3并且然后浓缩。通过制备型HPLC(柱：YMC-Actus ODS-AQ 150×30 5u；流动相：[水(0.225％FA)-ACN]；B％：15％-35％，15min)纯化粗残余物，得到呈白色固体形式的2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(2-氯-6-(甲氨基)-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-(4-(3-(2-羟乙基)-2-氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲基)丙二酸(71.8mg，50％产率)。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δppm 8.14(s,1H),7.27(d,J＝8.0Hz,2H),6.98(d,J＝8.0Hz,2H),5.96(d,J＝7.5Hz,1H),4.76(d,J＝7.4Hz,1H),4.26(br s,1H),4.04(s,2H),3.66(t,J＝5.6Hz,2H),3.36-3.55(m,8H),3.05(m,4H),1.96-2.04(m,2H)；LC/MS[M+H]＝674.1。
实施例138
合成2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(2-氯-6-((环丙基甲基)氨基)-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-(4-(3-(2-羟乙基)-2-氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲基)丙二酸
如上文实施例137中所描述但用2-氯-N-(环丙基甲基)-9H-嘌呤-6-胺代替2-氯-N-甲基-9H-嘌呤-6-胺进行，得到呈白色固体形式的标题化合物。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δppm 8.09(s,1H),7.28(d,J＝8.3Hz,2H),7.01(d,J＝8.3Hz,2H),5.96(d,J＝7.5Hz,1H),4.74(d,J＝7.3Hz,1H),4.26(t,J＝2.8Hz,1H),4.04(d,J＝2.3Hz,2H),3.62-3.69(m,2H),3.45-3.54(m,4H),3.34-3.42(m,6H),3.06(s,1H)1.97-2.05(m,2H),1.09-1.21(m,1H),0.52-0.61(m,2H),0.34(q,J＝4.8Hz,2H)；LC/MS[M+H]＝714.1
实施例139
合成2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(2-氯-6-(异丙氨基)-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-(4-(3-(2-羟乙基)-2-氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲基)丙二酸
如上文实施例137中所描述但用2-氯-N-异丙基-9H-嘌呤-6-胺代替2-氯-N-甲基-9H-嘌呤-6-胺进行，得到呈白色固体形式的标题化合物。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δppm 8.08(s,1H),7.29(d,J＝8.3Hz,2H),7.02(d,J＝8.3Hz,2H),5.95(d,J＝7.5Hz,1H),4.73(d,J＝7.5Hz,1H),4.39(br s,1H),4.26(t,J＝2.5Hz,1H),4.04(d,J＝2.0Hz,2H),3.66(t,J＝5.8Hz,2H),3.37-3.52(m,9H),1.97-2.04(m,2H),1.30(d,J＝6.3Hz,6H)；LC/MS[M+H]＝702.1。
实施例140
合成2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(2-氯-6-(异丙氨基)-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-(4-(2-氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲基)丙二酸
如上文实施例133中所描述但用2-氯-N-异丙基-9H-嘌呤-6-胺代替胸腺嘧啶进行，得到呈白色固体形式的标题化合物。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δppm 8.16(s,1H)7.32(d,J＝8.44Hz,2H)7.08(br d,J＝8.31Hz,2H)5.99(d,J＝7.46Hz,1H)4.81(d,J＝7.46Hz,1H)4.41(br s,1H)4.26-4.31(m,1H)3.97-4.12(m,2H)3.40-3.57(m,4H),3.33-3.37(m,2H),3.03(s,1H),1.99(m,2H),1.31(m,6H)；LC/MS[M+H]＝658.3。
实施例141
合成2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(2-氯-6-(甲氨基)-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-(4-(2-氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲基)丙二酸
如上文实施例133中所描述但用2-氯-N-甲基-9H-嘌呤-6-胺代替胸腺嘧啶进行，得到呈白色固体形式的标题化合物。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δppm 8.20(s,1H),7.27(d,J＝8.13Hz,2H),7.00(d,J＝8.00Hz,2H),5.97(d,J＝7.38Hz,1H),4.80(d,J＝7.38Hz,1H),4.27(s,1H),4.04(m,2H),3.37-3.50(m,4H),3.31(d,J＝1.13Hz,3H),3.06(s,2H)3.04(s,1H),1.90-2.00(m,2H)；LC/MS[M+H]＝630.2。
实施例142
合成2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氨基-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-(噻唑-2-基甲基)丙二酸
如上文实施例15中所描述但用2-(溴甲基)噻唑代替烯丙基溴来进行，得到呈白色固体形式的标题化合物。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δppm 8.56(s,1H),7.56(d,J＝3.4Hz,1H),7.33(d,J＝3.4Hz,1H),6.00(d,J＝5.6Hz,1H),4.68-4.73(m,1H),4.38(dd,J＝6.3,3.4Hz,1H),3.98-4.07(m,2H),3.85(s,2H),3.00(s,1H)；LC/MS[M+H]＝524.9。
实施例143
合成2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氨基-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-(噻唑-5-基甲基)丙二酸
如上文实施例15中所描述但用5-(氯甲基)噻唑代替烯丙基溴来进行，得到呈白色固体形式的标题化合物。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δppm 8.75(s,1H),8.47(s,1H),7.72(s,1H),6.03(d,J＝7.3Hz,1H),4.97(d,J＝7.3Hz,1H),4.36(dd,J＝4.3,3.0Hz,1H),4.12-4.18(m,1H),4.04-4.10(m,1H),3.63-3.79(m,2H),3.00(s,1H)；LC/MS[M+H]＝524.9。
实施例144
合成2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氨基-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-(4-(吡咯烷-1-基)苯甲基)丙二酸
步骤1：
向2-(((3aR,5R,6R,6aR)-6-乙酰氧基-6-乙炔基-2,2-二甲基四氢呋喃并[2,3-d][1,3]间二氧杂环戊烯-5-基)甲氧基)丙二酸二乙酯(10.0g，24.13mmol，1当量)于DMF(100mL)中的溶液中添加Cs2CO3(23.59g，72.39mmol，3当量)和1-(溴甲基)-4-碘-苯(10.75g，36.20mmol，1.5当量)。在20℃下搅拌悬浮液1小时，然后用水(200mL)稀释。用EtOAc(4×50mL)萃取所得混合物。将合并的有机层用水(2×200mL)、盐水(200mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩。通过硅胶快速柱色谱法(5-20％EtOAc/石油醚)纯化粗残余物，得到呈白色固体形式的2-(((3aR,5R,6R,6aR)-6-乙酰氧基-6-乙炔基-2,2-二甲基四氢呋喃并[2,3-d][1,3]-间二氧杂环戊烯-5-基)甲氧基)-2-(4-碘苯甲基)丙二酸二乙酯(11.83g，74％产率)。
步骤2：
向2-(((3aR,5R,6R,6aR)-6-乙酰氧基-6-乙炔基-2,2-二甲基四氢呋喃并[2,3-d][1,3]间二氧杂环戊烯-5-基)甲氧基)-2-(4-碘苯甲基)丙二酸二乙酯(2.00g，3.17mmol，1当量)于DMA(22mL)中的溶液中添加K2CO3(1.32g，9.52mmol，3当量)、CuI(120.84mg，634.50umol，0.2当量)和脯氨酸(438.30mg，3.81mmol，1.2当量)。在80℃下在N2气氛下搅拌绿色悬浮液16小时，然后使其冷却并倒入水(40mL)和2N LiOH水溶液(1mL)中。用乙酸乙酯(2×30mL)萃取混合物。用1N HCl水溶液将所得水层酸化至pH 5，并且然后用乙酸乙酯(2×40mL)萃取。将合并的有机层用水(80mL)、盐水(80mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩，得到呈黄色胶状物形式的粗制(S)-1-(4-(2-(((3aR,5R,6R,6aR)-6-乙酰氧基-6-乙炔基-2,2-二甲基四氢呋喃并[2,3-d][1,3]间二氧杂环戊烯-5-基)甲氧基)-3-乙氧基-2-(乙氧羰基)-3-氧代丙基)苯基)吡咯烷-2-羧酸(390mg)。
步骤3：
向粗制(S)-1-(4-(2-(((3aR,5R,6R,6aR)-6-乙酰氧基-6-乙炔基-2,2-二甲基四氢呋喃并[2,3-d][1,3]间二氧杂环戊烯-5-基)甲氧基)-3-乙氧基-2-(乙氧羰基)-3-氧代丙基)苯基)吡咯烷-2-羧酸(420mg，680.01umol，1当量)于DMF(5mL)中的溶液中添加K2CO3(282mg，2.04mmol，3当量)和EtI(81.58uL，1.02mmol，1.5当量)。在20℃下搅拌混合物0.5小时，然后用水(10mL)稀释并用乙酸乙酯(2×10mL)萃取。将合并的有机层用水(20mL)、盐水(20mL)洗涤，经Na2SO4干燥，并且过滤并浓缩，得到呈黄色泡沫形式的粗制2-(((3aR,5R,6R,6aR)-6-乙酰氧基-6-乙炔基-2,2-二甲基四氢呋喃并[2,3-d][1,3]间二氧杂环戊烯-5-基)甲氧基)-2-(4-((S)-2-(乙氧羰基)吡咯烷-1-基)苯甲基)丙二酸二乙酯(330mg)。
步骤4：
在0℃下向粗制2-(((3aR,5R,6R,6aR)-6-乙酰氧基-6-乙炔基-2,2-二甲基四氢呋喃并[2,3-d][1,3]间二氧杂环戊烯-5-基)甲氧基)-2-(4-((S)-2-(乙氧羰基)吡咯烷-1-基)苯甲基)丙二酸二乙酯(330mg，粗制)于DCM(4mL)中的溶液中添加H2O(0.8mL)和TFA(4mL)。在20℃下搅拌溶液4.5小时，然后用饱和NaHCO3水溶液淬灭以将pH调节至9。用乙酸乙酯(2×8mL)萃取混合物。将合并的有机层用盐水(20mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩，得到呈黄色泡沫形式的粗制2-(((2R,3S,4R)-3-乙酰氧基-3-乙炔基-4,5-二羟基-四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-(4-((S)-2-(乙氧羰基)吡咯烷-1-基)苯甲基)丙二酸二乙酯(285mg)。
步骤5：
向粗制2-(((2R,3S,4R)-3-乙酰氧基-3-乙炔基-4,5-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-(4-((S)-2-(乙氧羰基)吡咯烷-1-基)苯甲基)丙二酸二乙酯(285mg)于吡啶(4mL)中的溶液中添加4-DMAP(172mg，1.41mmol，3当量)和Ac2O(352.60uL，3.76mmol，8当量)。在20℃下搅拌溶液16小时，然后用水(10mL)稀释并用乙酸乙酯(3×10mL)萃取。将合并的有机层用盐水(20mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。通过硅胶快速柱色谱法(20-50％乙酸乙酯/石油醚)纯化粗残余物，得到呈黄色胶状物形式的2-(4-((S)-2-(乙氧羰基)吡咯烷-1-基)苯甲基)-2-(((2R,3R,4R)-3,4,5-三乙酰氧基-3-乙炔基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-丙二酸二乙酯(220mg，四个步骤为51％产率)。
步骤6：
向2-(4-((S)-2-(乙氧羰基)吡咯烷-1-基)苯甲基)-2-(((2R,3R,4R)-3,4,5-三乙酰氧基-3-乙炔基四氢呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸二乙酯(50mg，72.50umol，1当量)和6-氯嘌呤(15mg，86.99umol，1.2当量)于MeCN(1mL)中的悬浮液中添加BSA(44.80uL，181.24umol，2.5当量)。在65℃下搅拌悬浮液0.5小时，然后将其冷却至0℃并接着添加TMSOTf(32.75uL，181.24umol，2.5当量)。在65℃下搅拌混合物1小时，然后将其倒入饱和NaHCO3水溶液(3mL)中。用乙酸乙酯(3×3mL)萃取反应混合物。浓缩合并的有机层。通过制备型TLC(石油醚:EtOAc＝2:1)纯化粗残余物，得到呈黄色胶状物形式的2-(((2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(6-氨基-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-(4-((S)-2-(乙氧基-羰基)吡咯烷-1-基)苯甲基)丙二酸二乙酯(33mg，57％产率)。
步骤7：
向2-(((2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(6-氨基-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-(4-((S)-2-(乙氧羰基)吡咯烷-1-基)苯甲基)丙二酸二乙酯(28mg，35.03umol，1当量)于THF(2mL)中的溶液中添加1M LiOH水溶液(701uL，20当量)。在20℃下搅拌混合物4.5小时，然后减压除去有机挥发物。用1N HCl水溶液将水层酸化至pH6，然后将其浓缩。粗残余物通过制备型HPLC(柱：YMC-Triart Prep C18 150×40mm×7um；流动相：[水(0.225％FA)-ACN]；B％：15％-35％，10min)纯化并通过冻干干燥，得到呈白色固体形式的2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氨基-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-(4-(吡咯烷-1-基)苯甲基)丙二酸(2.6mg)。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δppm 8.21(s,1H),7.05(d,J＝8.53Hz,2H),6.26(d,J＝8.53Hz,2H),5.98(d,J＝7.53Hz,1H),4.92-5.02(m,1H),4.29-4.33(m,1H),4.09(dd,J＝10.16,2.38Hz,1H),3.97(dd,J＝10.04,3.01Hz,1H),3.38(d,J＝14.56Hz,1H),3.23(d,J＝14.56Hz,1H),3.02-3.09(m,4H),3.00(s,1H),1.89-1.97(m,4H)；LC/MS[M+H]＝587.1。
实施例145
合成2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氨基-2-(乙硫基)-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-苯甲基丙二酸
步骤1：
向2-苯甲基-2-(((2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(6-(双(叔丁氧基羰基)氨基)-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-丙二酸二乙酯(300mg，349.53umol，1当量)于DMF(3mL)中的混合物中添加NaSEt(88.20mg，1.05mmol，3当量)。在20℃下搅拌混合物20小时，然后将其分配于水(15mL)与EtOAc(15mL)之间。用EtOAc(2×10mL)萃取水相。将合并的有机层用盐水(10mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，并且过滤并减压浓缩，得到呈油形式的粗制2-苯甲基-2-(((2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(6-氨基-2-(乙硫基)-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-四氢呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸二乙酯(310mg)，其不经进一步纯化即用于下一步骤。
步骤2：
向粗制2-苯甲基-2-(((2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(6-氨基-2-(乙硫基)-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基四氢呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸二乙酯(310mg)于DCM(3mL)中的混合物中添加TFA(1.5mL，20.26mmol)。在20℃下搅拌混合物2小时，然后用饱和NaHCO3水溶液中和至pH 7-8。用EtOAc(3×20mL)萃取反应混合物。将合并的萃取物用盐水(15mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩，得到呈泡沫形式的粗制2-苯甲基-2-(((2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(6-氨基-2-(乙硫基)-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基四氢呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸二乙酯。
步骤3：
向粗制2-苯甲基-2-(((2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(6-氨基-2-(乙硫基)-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基四氢呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸二乙酯(280mg，粗产物)于THF(3mL)中的混合物中添加饱和LiOH水溶液(3mL)。在55℃下搅拌混合物1小时，然后将其冷却至室温。用EtOAc(3×8mL)萃取反应混合物。用2M HCl水溶液将水相调节至pH2-3，然后用EtOAc(4×10mL)萃取，经无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩。粗产物通过制备型HPLC(柱：YMC-Triart Prep C18150×40mm×7um；流动相：[水(0.225％FA)-ACN]；B％：23％-43％，11min)纯化并通过冻干干燥，得到呈白色粉末形式的2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氨基-2-(乙硫基)-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-苯甲基丙二酸(4.4mg)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 12.59-14.32(m,2H),8.30(s,1H),7.33(s,2H),7.00-7.21(m,5H),6.15(s,1H),6.00(d,J＝6.78Hz,1H),5.82(d,J＝7.53Hz,1H),5.01(s,1H),4.14(dd,J＝6.40,2.64Hz,1H),3.99(d,J＝13.05Hz,1H),3.83(s,1H),3.58(s,1H),3.17-3.18(m,2H),2.99-3.13(m,2H),1.31(t,J＝7.28Hz,3H)；LC/MS[M+H]＝544.0。
实施例146
合成2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氨基-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-(4-(1-(2-甲氧基乙基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)苯甲基)丙二酸
如上文实施例11中所描述但用1-氯-2-甲氧基乙烷代替氯(甲氧基)-甲烷进行，得到呈白色固体形式的标题化合物。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 8.41(s,1H),7.80(s,2H),7.60(dd,J＝6.78,2.01Hz,1H),7.46(dd,J＝7.03,2.01Hz,1H),7.35(d,J＝8.28Hz,2H),7.21(d,J＝8.28Hz,2H),7.19-7.24(m,1H),6.26-6.31(m,1H),5.82(d,J＝7.78Hz,1H,)4.86(d,J＝7.78Hz,1H),4.17(d,J＝1.76Hz,1H),4.10(t,J＝5.14Hz,2H),4.02(dd,J＝10.29,4.77Hz,1H),3.78-3.85(m,1H),3.54-3.64(m,3H),3.29(d,J＝2.01Hz,2H),3.24(s,3H)；LC/MS[M+H]＝669.0。
实施例147
合成2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(2-氯-6-(甲氨基)-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-(4-(2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)苯甲基)丙二酸
步骤1：
在0℃下向2-(((3aR,5R,6R,6aR)-6-乙酰氧基-6-乙炔基-2,2-二甲基四氢呋喃并[2,3-d][1,3]间二氧杂环戊烯-5-基)甲氧基)-2-(4-碘苯甲基)丙二酸二乙酯(2.0g，3.17mmol，1当量)于DCM(15mL)中的溶液中添加H2O(3mL)和TFA(15mL)。在25℃下搅拌溶液16小时，然后用饱和NaHCO3水溶液(150mL)淬灭。用乙酸乙酯(2×100mL)萃取混合物。将合并的有机层用盐水(200mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩，得到呈黄色泡沫形式的粗制2-(((2R,3S,4R)-3-乙炔基-3,4,5-三羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-(4-碘苯甲基)丙二酸二乙酯(1.74g)。
步骤2：
向2-(((2R,3S,4R)-3-乙炔基-3,4,5-三羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-(4-碘苯甲基)丙二酸二乙酯(1.74g，3.17mmol，1当量)于吡啶(20mL)中的溶液中添加4-DMAP(1.16g，9.52mmol，3当量)和Ac2O(2.38mL，25.39mmol，8当量)。在25℃下搅拌溶液3小时，然后用水(60mL)稀释并用乙酸乙酯(2×60mL)萃取。将合并的有机层用水(100mL)、盐水(100mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。通过硅胶快速柱色谱法(10-50％乙酸乙酯/石油醚)纯化粗残余物，得到呈黄色泡沫形式的2-(4-碘苯甲基)-2-(((2R,3R,4R)-3,4,5-三乙酰氧基-3-乙炔基-四氢呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸二乙酯(1.85g，两个步骤为86％产率)。
步骤3：
向2-(4-碘苯甲基)-2-(((2R,3R,4R)-3,4,5-三乙酰氧基-3-乙炔基-四氢呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸二乙酯(1.00g，1.48mmol，1当量)于MeCN(12mL)中的溶液中添加2-氯-N-甲基-9H-嘌呤-6-胺(327mg，1.78mmol，1.2当量)和BSA(916uL，3.71mmol，2.5当量)。在65℃下搅拌悬浮液0.5小时，然后将其冷却至0℃并接着添加TMSOTf(804uL，4.45mmol，3当量)。在65℃下搅拌所得混合物1.5小时，然后用饱和NaHCO3水溶液(10mL)稀释并用乙酸乙酯(2×10mL)萃取。将合并的有机层用盐水(25mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。通过硅胶快速柱色谱法(10-50％乙酸乙酯/石油醚)纯化粗残余物，得到呈黄色固体形式的2-(((2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(2-氯-6-(甲氨基)-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-(4-碘苯甲基)丙二酸二乙酯(595mg，50％产率)。
步骤4：
向2-(((2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(2-氯-6-(甲基-氨基)-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-(4-碘苯甲基)丙二酸二乙酯(592mg，741.88umol，1当量)于DCM(8mL)中的溶液中添加4-DMAP(18mg，148.38umol，0.2当量)、TEA(413uL，2.97mmol，4当量)和(Boc)2O(324mg，1.48mmol，2当量)。在20℃下搅拌溶液2小时，然后用饱和NH4Cl水溶液(20mL)稀释并用乙酸乙酯(2×20mL)萃取。将合并的有机层用盐水(40mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。通过硅胶快速柱色谱法(15-50％乙酸乙酯/石油醚)纯化粗物质，得到呈泡沫形式的2-(((2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(6-((叔丁氧基羰基)(甲基)氨基)-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-(4-碘苯甲基)丙二酸二乙酯(560mg，84％产率)。
步骤5：
向2-(((2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(6-((叔丁氧基羰基)-(甲基)氨基)-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-(4-碘苯甲基)丙二酸二乙酯(660mg，734.89umol，1当量)和(2-羟基吡啶-3-基)硼酸(204.18mg，1.47mmol，2当量)于二噁烷(6mL)和H2O(2mL)中的混合物中添加Pd(dppf)Cl2(53.77mg，73.49umol，0.1当量)和K2CO3(304.70mg，2.20mmol，3当量)。用N2气体使黄色混合物脱气10分钟，然后在70℃下搅拌混合物2.5小时。用水(5mL)稀释混合物并用乙酸乙酯(3×5mL)萃取。合并的有机层经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。通过硅胶快速柱色谱法(50-100％乙酸乙酯/石油醚)纯化粗物质，得到呈泡沫形式的2-(((2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(6-((叔丁氧基羰基)(甲基)氨基)-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-(4-(2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)苯甲基)丙二酸二乙酯(146mg)。
步骤6：
向2-(((2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(6-((叔丁氧基羰基)-(甲基)氨基)-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-(4-(2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)苯甲基)丙二酸二乙酯(145mg，167.58umol，1当量)于DCM(6mL)中的溶液中添加TFA(1.5mL，20.26mmol，121当量)。在25℃下搅拌溶液1小时，然后用饱和NaHCO3水溶液中和。用乙酸乙酯(3×12mL)萃取混合物。将合并的有机层用盐水(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。通过制备型TLC(乙酸乙酯)纯化粗物质，得到呈固体形式的2-(((2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(2-氯-6-(甲氨基)-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-(4-(2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)苯甲基)丙二酸二乙酯(110mg)。
步骤7：
向2-(((2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(2-氯-6-(甲基-氨基)-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-(4-(2-氧代-1,2-二氢-吡啶-3-基)苯甲基)丙二酸二乙酯(105mg，137.23umol，1当量)于THF(4.5mL)中的溶液中添加LiOH水溶液(1M，1.5mL，11当量)。在25℃下搅拌混合物4小时，然后减压除去有机挥发物。用1N HCl水溶液将水层酸化至pH 6并浓缩。粗残余物通过制备型HPLC(柱：YMC-Triart Prep C18 150×40mm×7um；流动相：[水(0.225％FA)-ACN]；B％：20％-40％，10min)纯化并通过冻干干燥，得到呈白色固体形式的2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(2-氯-6-(甲氨基)-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)-甲氧基)-2-(4-(2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)苯甲基)丙二酸(6.6mg)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 8.44(s,1H),8.23(d,J＝3.75Hz,1H),7.48(d,J＝6.63Hz,1H),7.39(d,J＝7.00Hz,2H),7.34(d,J＝5.63Hz,1H),7.13-7.22(m,2H),6.15-6.29(m,2H),6.00(d,J＝6.75Hz,1H),5.82(d,J＝7.38Hz,1H),4.71-4.89(m,1H),4.16(dd,J＝4.94,2.56Hz,1H),3.86-4.05(m,1H),3.53-3.83(m,1H),3.51(s,1H),3.48-3.30(m,5H，在水峰下重叠),2.90(d,J＝4.38Hz,3H)；LC/MS[M+H]＝624.9。
实施例148
合成2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(2-氯-6-(甲氨基)-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-(4-(3-甲基-2-氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲基)丙二酸
步骤1：
在0℃下向1-(4-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)苯基)四氢-嘧啶-2(1H)-酮(7.33g，16.48mmol，1当量)于DMF中的溶液中添加NaH(725mg，60％于矿物油中，18.13mmol，1.1当量)。搅拌混合物15分钟并接着添加CH3I(4.10mL，65.92mmol，4当量)。经16小时从0℃至25℃搅拌反应混合物，然后用H2O(100mL)稀释并用EtOAc(3×50mL)萃取。将合并的有机层用盐水(100mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。通过硅胶快速柱色谱法(0-50％EtOAc/石油醚)纯化粗物质，得到呈无色胶状物形式的1-(4-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)-甲基)苯基)-3-甲基四氢嘧啶-2(1H)-酮(3.68g，48％产率)。
步骤2：
在0℃下向1-(4-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)苯基)-3-甲基四氢嘧啶-2(1H)-酮(3.68g，8.02mmol，1当量)于THF(35mL)中的溶液中添加含TBAF的THF(1.5M，10.70mL，2当量)。在25℃下搅拌反应混合物1.5小时，然后用H2O(20mL)稀释并用EtOAc(3×50mL)萃取。将合并的有机层用盐水(50mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。通过硅胶快速柱色谱法(0-5％MeOH/DCM)纯化粗物质，得到呈黄色固体形式的1-(4-(羟甲基)苯基)-3-甲基四氢嘧啶-2(1H)-酮(1.06g，60％产率)。
步骤3：
在20-25℃下向1-(4-(羟甲基)苯基)-3-甲基四氢嘧啶-2(1H)-酮(1.06g，4.81mmol，1当量)于DCM(10mL)和DMF(0.1mL)中的溶液中添加SOCl2(698uL，9.62mmol，2当量)。搅拌反应混合物0.5小时，并且添加额外量的SOCl2(419uL，5.77mmol，1.2当量)。在40℃下搅拌所得混合物1小时，然后将其浓缩。使残余物与DCM(3×10mL)减压共沸，得到粗制1-(4-(氯甲基)苯基)-3-甲基四氢嘧啶-2(1H)-酮，其不经进一步纯化即用于下一步骤中。
步骤4：
在25℃下向2-(((3aR,5R,6R,6aR)-6-乙酰氧基-6-乙炔基-2,2-二甲基四氢呋喃并[2,3-d][1,3]间二氧杂环戊烯-5-基)甲氧基)丙二酸二乙酯(1.78g，4.30mmol，1当量)于DMF(20mL)中的溶液中添加Cs2CO3(4.21g，12.91mmol，3当量)。搅拌反应混合物0.5小时，并接着添加粗制1-(4-(氯甲基)苯基)-3-甲基四氢-嘧啶-2(1H)-酮(1.13g)。在25℃下搅拌反应混合物16小时，然后用H2O(50mL)稀释并用EtOAc(3×20mL)萃取。将合并的有机层用盐水(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。通过硅胶柱色谱法(0-10％MeOH/DCM)纯化粗产物，得到呈棕色泡沫形式的2-(((3aR,5R,6R,6aR)-6-乙酰氧基-6-乙炔基-2,2-二甲基-四氢呋喃并[2,3-d][1,3]间二氧杂环戊烯-5-基)甲氧基)-2-(4-(3-甲基-2-氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲基)丙二酸二乙酯(2.63g，78％产率)。
步骤5：
在0℃下向2-(((3aR,5R,6R,6aR)-6-乙酰氧基-6-乙炔基-2,2-二甲基四氢呋喃并[2,3-d][1,3]间二氧杂环戊烯-5-基)甲氧基)-2-(4-(3-甲基-2-氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲基)丙二酸二乙酯(2.62g，4.25mmol，1当量)于DCM(25mL)中的溶液中添加TFA(25mL，337.65mmol，79当量)和H2O(2.5mL，138.77mmol，33当量)。在20-25℃下搅拌反应混合物16小时，然后减压浓缩。使残余物与DCM(3×20mL)减压共沸，得到呈糖浆形式的粗制2-(((2R,3S,4R)-3-乙酰氧基-3-乙炔基-4,5-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-(4-(3-甲基-2-氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲基)丙二酸二乙酯(2.57g)，其不经进一步纯化即用于下一步骤中。
步骤6：
在20-25℃下向粗制2-(((2R,3S,4R)-3-乙酰氧基-3-乙炔基-4,5-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-(4-(3-甲基-2-氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲基)-丙二酸二乙酯(2.57g)于DCM(25mL)中的溶液中添加Ac2O(2.39mL，25.50mmol，6当量)、4-DMAP(51.92mg，425.00umol，0.1当量)和吡啶(2.74mL，34.00mmol，8当量)。在25℃下搅拌反应混合物16小时，然后减压浓缩。将残余物再溶解于EtOAc(50mL)中，用1N HCl水溶液(40mL)、10％Cu2SO4水溶液(40mL)、饱和NaHCO3水溶液(40mL)和盐水(40mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩，得到粗制2-(4-(3-甲基-2-氧代四氢-嘧啶-1(2H)-基)苯甲基)-2-(((2R,3R,4R)-3,4,5-三乙酰氧基-3-乙炔基四氢呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸二乙酯(2.62g，两个步骤为53％产率)，其不经进一步纯化即用于下一步骤中。
步骤7：
在20-25℃下在N2气氛下向2-氯-N-甲基-9H-嘌呤-6-胺(181mg，983.86umol，1.3当量)于MeCN(2.5mL)中的溶液中添加BSA(468uL，1.89mmol，2.5当量)。在65℃下搅拌反应混合物0.5小时，然后将其冷却至25℃。向此混合物中添加含粗制2-(4-(3-甲基-2-氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲基)-2-(((2R,3R,4R)-3,4,5-三乙酰氧基-3-乙炔基四氢呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸二乙酯(500mg，756.81umol，1当量)的MeCN(2.5mL)和TMSOTf(205uL，1.14mmol，1.5当量)并在65℃下搅拌5小时，然后用饱和NaHCO3水溶液(10mL)淬灭。然后用EtOAc(3×10mL)萃取混合物。将合并的有机层用盐水(20mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩。通过硅胶柱快速柱色谱法(0-10％MeOH/DCM)纯化粗物质，得到呈泡沫形式的2-(((2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(2-氯-6-(甲氨基)-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-(4-(3-甲基-2-氧代四氢-嘧啶-1(2H)-基)苯甲基)丙二酸二乙酯(530mg，60％产率)。
步骤8：
在25℃下向2-(((2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(2-氯-6-(甲基-氨基)-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-(4-(3-甲基-2-氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲基)丙二酸二乙酯(540mg，688.59umol，1当量)于THF(6mL)中的溶液中添加含LiOH.H2O(288.96mg，6.89mmol，10当量)的H2O(3mL)。在40℃下搅拌反应混合物2小时，然后减压除去有机挥发物。用1N HCl水溶液将水相酸化至pH 2-3并且然后浓缩。粗物质通过制备型HPLC(柱：YMC-Actus Triart C18 150×30mm×5um；流动相：[水(0.225％FA)-ACN]；B％：23％-43％，10min)纯化并通过冻干干燥，得到呈白色固体形式的2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(2-氯-6-(甲氨基)-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-(4-(3-甲基-2-氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲基)丙二酸(77.6mg，17％产率)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 13.00-13.93(s,2H),8.37(s,1H),8.23(d,J＝5.01Hz,1H),7.11(d,J＝8.31Hz,2H),6.90(d,J＝8.19Hz,2H),6.15(s,1H),5.98(s,1H),5.81(d,J＝7.58Hz,1H),4.82(s,1H),4.15(dd,J＝4.34,3.00Hz,1H),3.96(m,1H),3.78(m,1H),3.53(s,1H),3.43-3.52(m,2H),3.23(m,2H),3.20-3.10(m,4H，与溶剂水峰重叠),2.91(m,2H),2.81(s,3H),1.95(m,2H)；LC/MS[M+H]＝644.1。
实施例149
合成2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氨基-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-(4-(3-甲基-2-氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲基)丙二酸
如上文实施例148中所描述但用2-氯-9H-嘌呤-6-胺代替2-氯-N-甲基-9H-嘌呤-6-胺进行，得到呈白色固体形式的标题化合物。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δppm 8.21(s,1H),7.26(m,J＝8.28Hz,2H),6.96(m,J＝8.28Hz,2H),5.97(d,J＝7.53Hz,1H),4.70-4.83(m,1H),4.27(t,J＝2.76Hz,1H),3.99-4.07(m,2H),3.32-3.52(m,6H),3.05(s,1H),2.87(s,3H),2.00(quin,J＝5.83Hz,2H)；LC/MS[M+H]＝630.2。
实施例150
合成2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(2-氯-6-((环丙基甲基)氨基)-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-(4-(3-甲基-2-氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲基)丙二酸
如上文实施例148中所描述但用2-氯-N-(环丙基甲基)-9H-嘌呤-6-胺代替2-氯-N-甲基-9H-嘌呤-6-胺来进行，得到呈白色固体形式的标题化合物。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δppm 8.12(s,1H),7.27(d,J＝8.28Hz,2H),7.00(d,J＝7.68Hz,2H),5.96(d,J＝7.53Hz,1H),4.70(d,J＝7.53Hz,1H),4.26(t,J＝2.89Hz,1H),4.03(br s,2H),3.33-3.54(m,8H),3.05(s,1H),2.88(s,3H),1.97-2.04(m,2H),1.11-1.20(m,1H),0.53-0.59(m,2H),0.34(m,2H)；LC/MS[M+H]＝684.3。
实施例151
合成2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(2-氯-6-(异丙氨基)-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-(4-(3-甲基-2-氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲基)丙二酸
如上文实施例148中所描述但用2-氯-N-异丙基-9H-嘌呤-6-胺代替2-氯-N-甲基-9H-嘌呤-6-胺来进行，得到呈白色固体形式的标题化合物。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δppm 8.08(s,1H),7.28(d,J＝8.28Hz,2H),7.00(d,J＝8.53Hz,2H),5.95(d,J＝7.53Hz,1H),4.66-4.80(m,1H),4.32-4.48(m,1H),4.25(t,J＝2.89Hz,1H),4.00-4.08(m,2H),3.34-3.53(m,6H),3.05(s,1H),2.88(s,3H),1.94-2.06(m,2H),1.24-1.35(m,6H)；LC/MS[M+H]＝672.1。
实施例152
合成2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氨基-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-(4-(2-氧代-3-丙基四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲基)丙二酸
如上文实施例148中所描述但用1-溴丙烷和2-氯-9H-嘌呤-6-胺代替MeI和2-氯-N-甲基-9H-嘌呤-6-胺来进行，得到呈白色固体形式的标题化合物。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δppm 8.15(s,1H),7.28(d,J＝8.4Hz,2H),6.99(d,J＝8.4Hz,2H),5.97(d,J＝7.5Hz,1H),4.75(d,J＝7.6Hz,1H),4.27(s,1H),3.99-4.11(m,2H),3.46-3.54(m,2H),3.35-3.44(m,4H),3.16-3.27(m,2H),3.05(s,1H),1.97-2.03(m,2H),1.50-1.58(m,2H),0.88(t,J＝7.4Hz,3H)；LC/MS[M+H]＝658.1。
实施例153
合成2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(2-氯-6-(异丙氨基)-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-(4-(1-(2-羟乙基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)苯甲基)丙二酸
步骤1：
在20℃下向2-(((3aR,5R,6R,6aR)-6-乙酰氧基-6-乙炔基-2,2-二甲基四氢呋喃并[2,3-d][1,3]间二氧杂环戊烯-5-基)甲氧基)丙二酸二乙酯(4.13g，9.97mmol，1当量)于DCM(40mL)中的溶液中添加TFA(40mL，540.24mmol，54当量)和H2O(4mL，222.03mmol，22当量)。在20℃下搅拌混合物15小时，然后通过饱和NaHCO3水溶液(200mL)淬灭并用EtOAc(5×50mL)萃取。将合并的有机层用盐水(200mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩，得到呈淡黄色糖浆形式的粗制2-(((2R,3S,4R)-3-乙酰氧基-3-乙炔基-4,5-二羟基四氢呋喃-2-基)-甲氧基)丙二酸二乙酯(4.14g)，其直接用于下一步骤中。
向上文粗产物(4.14g，12.46mmol，1当量)于吡啶(40mL)中的溶液中添加Ac2O(9.33mL，99.67mmol，8当量)和4-DMAP(3.81mg，31.15mmol，2.5当量)。在20℃下搅拌混合物16小时，然后用水(150mL)淬灭，并用EtOAc(4×50mL)萃取所得溶液。将合并的有机层用0.5N HCl水溶液(120mL)和水(2×100mL)、盐水(100mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩。通过硅胶快速柱色谱法(30-50％EtOAc/石油醚)纯化粗残余物，得到呈糖浆形式的2-(((2R,3R,4R)-3,4,5-三乙酰氧基-3-乙炔基四氢呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸二乙酯(2.60g)。
步骤2：
向2-(((2R,3R,4R)-3,4,5-三乙酰氧基-3-乙炔基四氢呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸二乙酯(1.2g，2.62mmol，1当量)和2-氯-N-异丙基-9H-嘌呤-6-胺(665mg，3.14mmol，1.2当量)于MeCN(15mL)中的溶液中添加BSA(1.62mL，6.54mmol，2.5当量)。在65℃下搅拌悬浮液0.5小时，然后将其冷却至0℃。向此溶液中添加TMSOTf(1.45g，6.54mmol，1.18mL，2.5当量)。然后在65℃下搅拌混合物2.5小时，然后通过饱和NaHCO3水溶液(50mL)淬灭，并用EtOAc(4×30mL)萃取所得溶液。合并的有机层经无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩。通过硅胶快速柱色谱法(30-50％EtOAc/石油醚)纯化残余物，得到2-(((2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(2-氯-6-(异丙氨基)-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基四氢呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸二乙酯(814mg，51％产率)。
步骤3：
向2-(((2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(2-氯-6-(异丙基-氨基)-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基四氢呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸二乙酯(120mg，197umol，1当量)于DMF(1mL)中的溶液中添加K2CO3(81.56mg，590.15umol，3当量)和3-(4-(溴-甲基)苯基)-1-(2-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)乙基)吡啶-2(1H)-酮(161mg，295umol，1.5当量)。在20℃下搅拌混合物1.5小时，然后用水(10mL)稀释并用EtOAc(4×5mL)萃取。将合并的有机层用水(2×30mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩。通过硅胶快速柱色谱法(30-60％EtOAc/石油醚)纯化残余物，得到呈无色油形式的2-(4-(1-(2-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)乙基)-2-氧代-1,2-二氢-吡啶-3-基)苯甲基)-2-(((2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(2-氯-6-(异丙基-氨基)-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基四氢呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸二乙酯(154mg)。
步骤4：
在0℃下向2-(4-(1-(2-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)乙基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)苯甲基)-2-(((2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(2-氯-6-(异丙基-氨基)-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基四氢呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸二乙酯(150mg，139umol，1当量)于THF(1mL)中的溶液中添加TBAF(1M，209uL，1.5当量)和AcOH(5.98uL，104.59umol，0.75当量)。在20℃下搅拌混合物16小时，然后用水(5mL)稀释，并用EtOAc(3×5mL)萃取所得溶液。合并的有机层经无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩。通过制备型TLC(石油醚:EtOAc＝1:4)纯化残余物，得到呈白色固体形式的2-(((2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(2-氯-6-(异丙氨基)-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-(4-(1-(2-羟乙基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)苯甲基)丙二酸二乙酯(51mg，32％产率)。
步骤5：
向2-(((2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(2-氯-6-(异丙基-氨基)-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-(4-(1-(2-羟乙基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)苯甲基)丙二酸二乙酯(50mg，60umol，1当量)于THF(0.5mL)中的溶液中添加饱和LiOH水溶液(2.51mg，60umol，0.5mL，1当量)。在20℃下搅拌混合物2.5小时，然后减压除去有机挥发物。使用2N HCl水溶液将所得水溶液酸化至pH 2并浓缩。通过制备型HPLC(柱：YMC-Triart Prep C18 150×40mm×7um；流动相：[水(0.225％FA)-ACN]；B％：28％-48％，10min)进一步纯化残余物，得到呈白色固体形式的2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(2-氯-6-(异丙氨基)-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基-四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-(4-(1-(2-羟乙基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)苯甲基)丙二酸(10.8mg，26％产率)。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δppm 8.08(s,1H),7.55(dd,J＝6.7,1.9Hz,1H),7.21-7.42(m,5H),6.34(t,J＝6.8Hz,1H),5.95(d,J＝7.3Hz,1H),4.74(d,J＝7.3Hz,1H),4.24-4.39(m,2H),4.00-4.14(m,4H),3.76-3.87(m,2H),3.40-3.54(m,2H),3.06(s,1H),1.24(dd,J＝6.4,2.9Hz,6H)；LC/MS[M+H]＝697.0。
实施例154和155
合成2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氨基-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-(4-(4-甲基-2-氧代哌嗪-1-基)苯甲基)丙二酸
和
2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氨基-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-(4-((2-((羧甲基)(甲基)氨基)乙基)氨基)苯甲基)丙二酸
步骤1：
向3-氧代哌嗪-1-甲酸叔丁酯(8.7g，43.45mmol，1.2当量)和(4-碘苯基)甲醇(8.5g，36.32mmol，1当量)于DMF(10mL)和二噁烷(90mL)中的混合物中添加CuI(1.03g，5.43mmol，0.15当量)、2-(羟甲基)-2-甲基-丙烷-1,3-二醇(653mg，5.43mmol，0.15当量)和Cs2CO3(35.39g，108.62mmol，3当量)。在110℃下在N2气氛下搅拌混合物14小时，然后将其冷却。滤出无机固体并且真空浓缩滤液。将残余物用水(50mL)稀释并用乙酸乙酯(3×50mL)萃取。将合并的有机层用盐水(50mL)洗涤，通过Na2SO4干燥，过滤并浓缩。通过快速硅胶色谱法(0-10％EtOAc/石油醚)纯化粗残余物，得到呈白色固体形式的4-(4-(羟甲基)苯基)-3-氧代哌嗪-1-甲酸叔丁酯(6.1g，55％产率)。
步骤2：
在0℃下向4-(4-(羟甲基)苯基)-3-氧代哌嗪-1-甲酸叔丁酯(2g，6.53mmol，1当量)于DCM(10mL)中的溶液中添加TFA(5.00mL，67.53mmol，10.34当量)。在25℃下搅拌混合物3小时，然后将其浓缩。将残余物用水(20mL)稀释并用DCM和MeOH的混合物(50:1＝v:v，2×20mL)萃取。浓缩合并的有机层，得到呈无色油形式的粗制1-(4-(羟甲基)苯基)哌嗪-2-酮(2.45g)。
步骤3：
向粗制1-(4-(羟甲基)苯基)哌嗪-2-酮(2.45g，11.88mmol，1当量)于MeOH(15mL)中的溶液中添加HCHO(720uL，26.12mmol，2.2当量)、AcOH(5mL，87.42mmol，7.4当量)。在25℃下在N2气氛下搅拌混合物15小时，然后添加NaBH3CN(2.05g，32.65mmol，2.75当量)，并且搅拌所得混合物2小时。真空浓缩反应混合物。通过硅胶快速柱色谱法(10-40％MeOH/EtOAc)纯化残余物，得到呈无色油形式的1-(4-(羟甲基)苯基)-4-甲基哌嗪-2-酮(1.23g)。
步骤4：
向1-(4-(羟甲基)苯基)-4-甲基哌嗪-2-酮(1.23g，5.58mmol，1当量)于DCM(2mL)中的溶液中添加DMF(0.2mL)和SOCl2(810uL，11.17mmol，2当量)。在25℃下搅拌混合物30分钟，得到白色悬浮液，然后减压浓缩，得到呈白色固体形式的粗制1-(4-(氯甲基)苯基)-4-甲基-哌嗪-2-酮(1.27g，95％产率)，其直接用于下一步骤中。
步骤5：
向2-(((3aR,5R,6R,6aR)-6-乙酰氧基-6-乙炔基-2,2-二甲基四氢呋喃并[2,3-d][1,3]间二氧杂环戊烯-5-基)甲氧基)丙二酸二乙酯(1.4g，3.38mmol，1当量)于DMF(15mL)中的溶液中添加Cs2CO3(3.30g，10.14mmol，3当量)和粗制1-(4-(氯甲基)-苯基)-4-甲基哌嗪-2-酮(1.21g，5.07mmol，1.5当量)。在25℃下搅拌混合物1小时，然后过滤，并且浓缩滤液。通过硅胶快速柱色谱法(0-50％MeOH/EtOAc)纯化粗残余物，得到2-(((3aR,5R,6R,6aR)-6-乙酰氧基-6-乙炔基-2,2-二甲基四氢呋喃并[2,3-d][1,3]间二氧杂环戊烯-5-基)甲氧基)-2-(4-(4-甲基-2-氧代哌嗪-1-基)苯甲基)丙二酸二乙酯(1.02g)。
步骤6：
向2-(((3aR,5R,6R,6aR)-6-乙酰氧基-6-乙炔基-2,2-二甲基四氢呋喃并[2,3-d][1,3]间二氧杂环戊烯-5-基)甲氧基)-2-(4-(4-甲基-2-氧代哌嗪-1-基)苯甲基)-丙二酸二乙酯(1.02g，1.65mmol，1当量)于DCM(5mL)和水(1mL，55.51mmol，34当量)中的溶液中添加TFA(4.99mL，67.36mmol，41当量)。在25℃下搅拌混合物20小时，然后浓缩，得到呈油形式的粗制2-(((2R,3S,4R)-3-乙炔基-3,4,5-三羟基-四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-(4-(4-甲基-2-氧代哌嗪-1-基)苯甲基)丙二酸二乙酯(1.13g)。
向2-[[(2R,3S,4R)-3-乙炔基-3,4,5-三羟基-四氢呋喃-2-基]甲氧基]-2-[[4-(4-甲基-2-氧代-哌嗪-1-基)苯基]甲基]丙二酸二乙酯(1.13g，2.11mmol，1当量)于DCM(10mL)中的溶液中添加4-DMAP(25.78mg，211.00umol，0.1当量)、吡啶(1.07mL，13.2mmol，6.3当量)和Ac2O(927uL，9.9mmol，4.7当量)。在25℃下搅拌混合物16小时，然后将其浓缩。用EtOAc(20mL)和1N HCl水溶液(10mL)稀释残余物。将有机层分离并用EtOAc(4×20mL)萃取水层。将合并的有机层用水(50mL)、盐水(50mL)洗涤并经无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩，得到呈糖浆形式的粗制2-(4-(4-甲基-2-氧代哌嗪-1-基)苯甲基)-2-(((2R,3R,4R)-3,4,5-三乙酰氧基-3-乙炔基四氢呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸二乙酯(674mg)。
步骤7：
向2-氯-9H-嘌呤-6-胺(76mg，450.46umol，1.2当量)于二氯乙烷(3mL)中的溶液中添加BSA(204uL，825.84umol，2.2当量)。在65℃下搅拌混合物0.5小时，然后将其冷却至0℃，并且添加含粗制2-(4-(4-甲基-2-氧代哌嗪-1-基)苯甲基)-2-(((2R,3R,4R)-3,4,5-三乙酰氧基-3-乙炔基四氢呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸二乙酯(248mg，375.38umol，1当量)的二氯乙烷(1mL)和TMSOTf(102uL，563.07umol，1.5当量)。在65℃下在N2气氛下搅拌混合物2小时，然后用饱和NaHCO3水溶液(15mL)淬灭并用EtOAc(4×20mL)萃取。合并的有机层经无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩。通过硅胶快速柱色谱法(0-30％MeOH/EtOAc)纯化残余物，得到呈白色固体形式的2-(((2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(6-氨基-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-(4-(4-甲基-2-氧代-哌嗪-1-基)苯甲基)丙二酸二乙酯(62mg)。
步骤8：
向2-(((2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(6-氨基-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-(4-(4-甲基-2-氧代哌嗪-1-基)苯甲基)丙二酸二乙酯(171mg，222.02umol，1当量)于THF(2mL)中的溶液中添加LiOH水溶液(5.32mg，222.02umol，2mL，1当量)。在25℃下搅拌混合物2.5小时，然后用2N HCl水溶液将其酸化至pH 2-3。减压浓缩混合物。通过制备型HPLC进一步纯化粗残余物，得到呈灰白色固体形式的2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氨基-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基-四氢-呋喃-2-基)甲氧基)-2-(4-(4-甲基-2-氧代哌嗪-1-基)苯甲基)-丙二酸(3.3mg)和呈白色固体形式的2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氨基-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-(4-((2-((羧甲基)(甲基)氨基)乙基)-氨基)苯甲基)丙二酸(3.7mg)。
2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氨基-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢-呋喃-2-基)甲氧基)-2-(4-(4-甲基-2-氧代哌嗪-1-基)苯甲基)丙二酸：1H NMR(400MHz,CD3OD)δppm 8.35(s,1H),7.35(d,J＝8.3Hz,2H),6.97(d,J＝8.5Hz,2H),5.95(d,J＝5.5Hz,1H),4.70-4.79(m,1H),4.33(dd,J＝9.0,3.3Hz,1H),3.96-4.14(m,2H),3.54-3.66(m,2H),3.49(s,2H),3.35(s,1H),3.21(s,2H),2.83(t,J＝5.4Hz,2H),2.32-2.48(m,3H),1.89(s,3H)；LC/MS[M+H]＝630.2。
2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氨基-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢-呋喃-2-基)甲氧基)-2-(4-((2-((羧甲基)(甲基)氨基)乙基)氨基)苯甲基)丙二酸：1HNMR(400MHz,CD3OD)δppm 8.56(s,1H),7.03(d,J＝8.5Hz,2H),6.49(d,J＝8.3Hz,2H),6.01(d,J＝6.0Hz,1H),4.70(d,J＝6.0Hz,1H),4.34(br d,J＝4.3Hz,1H),3.94(dd,J＝9.7,6.9Hz,1H),3.83(dd,J＝9.9,2.4Hz,1H),3.59(s,2H),3.34-3.42(m,2H),3.22-3.27(m,2H),3.20(s,2H),3.04(s,1H),2.83(s,3H)；LC/MS[M+H]＝649.3。
实施例156
合成2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(5-氯-7-((2,4-二甲氧基苯甲基)氨基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-3-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-(4-(2-氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲基)丙二酸
步骤1：
向5,7-二氯-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶(317mg，1.69mmol，1当量)于MeCN(6mL)中的混合物中添加BSA(1.04mL，4.22mmol，2.5当量)。在65℃下在N2气氛下搅拌混合物0.5小时，然后将其冷却至0℃。向混合物中添加2-(4-(2-氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲基)-2-(((2R,3R,4R)-3,4,5-三乙酰氧基-3-乙炔基四氢呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸二乙酯(1.20g，1.85mmol，1.1当量)和TMSOTf(913.99uL，5.06mmol，3当量)。在65℃下在N2气氛下搅拌混合物6小时，然后用NaHCO3(15mL)淬灭。用EtOAc(3×15mL)萃取反应混合物。将经合并的有机层用盐水(2×5mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。通过硅胶快速柱色谱法(0-100％EtOAc/石油醚)纯化粗残余物，得到呈泡沫形式的2-(((2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(5,7-二氯-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-3-基)-3-乙炔基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-(4-(2-氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲基)丙二酸二乙酯(752mg)。
步骤2：
将2-(((2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(5,7-二氯-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-3-基)-3-乙炔基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-(4-(2-氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲基)丙二酸二乙酯(752mg，970.82umol，1当量)和2,4-二甲氧基苯甲基胺(292uL，1.94mmol，2当量)和DIEA(507uL，2.91mmol，3当量)的混合物溶解于微波管中的NMP(4mL)中。在微波反应器中在130℃下照射密封管2小时，然后用H2O(10mL)稀释并用EtOAc(3×15mL)萃取。将合并的有机层用盐水(10mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。通过硅胶快速柱色谱法(0-100％EtOAc/石油)纯化粗残余物，得到呈泡沫形式的2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(5-氯-7-((2,4-二甲氧基苯甲基)氨基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-3-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-(4-(2-氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲基)丙二酸二乙酯(249mg，26％产率)。
步骤3：
向2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(5-氯-7-((2,4-二甲氧基苯甲基)-氨基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-3-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)-甲氧基)-2-(4-(2-氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲基)丙二酸二乙酯(239mg，291.01umol，1当量)于THF(4mL)和H2O(3mL)中的混合物中添加LiOH(69.69mg，2.91mmol，10当量)。在25℃下搅拌混合物20小时，然后用2N HCl水溶液将其酸化至pH 6-7并减压浓缩。粗残余物通过制备型HPLC(柱：PhenomenexGemini-NX 150×30mm×5um；流动相：[水(0.1％TFA)-ACN]；B％：25％-65％，10min)纯化并通过冻干干燥，得到呈白色固体形式的2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(5-氯-7-((2,4-二甲氧基苯甲基)氨基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-3-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-(4-(2-氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲基)丙二酸(9.5mg)。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δppm 8.23(s,1H),7.27(d,J＝8.44Hz,2H),7.21(d,J＝8.31Hz,1H),7.00(d,J＝8.44Hz,2H),6.58(d,J＝2.32Hz,1H),6.46-6.51(m,2H),6.04(d,J＝7.34Hz,1H),4.73(d,J＝7.34Hz,1H),4.43(s,2H),4.27(t,J＝3.06Hz,1H),4.01(d,J＝2.93Hz,2H),3.87(s,3H),3.78(s,3H),3.37-3.47(m,2H),3.31-3.37(m,2H),3.22(t,J＝5.87Hz,2H),3.03(s,1H),1.78-1.85(m,2H)；LC/MS[M+H]＝765.1。
实施例157
合成2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(7-氨基-5-氯-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-3-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-(4-(2-氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲基)丙二酸
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向2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(5-氯-7-((2,4-二甲氧基苯甲基)氨基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-3-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-(4-(2-氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲基)丙二酸(160mg，209.11umol，1当量)于DCM(3mL)中的混合物中添加TFA(1mL，13.51mmol，64.59当量)。在25℃下搅拌混合物2小时，然后将其浓缩。残余物通过制备型HPLC(柱：YMC-Actus Triart C18 150×30mm×5um；流动相：[水(0.225％FA)-ACN]；B％：20％-40％，10min)纯化并通过冻干干燥，得到呈白色固体形式的2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(7-氨基-5-氯-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-3-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)-甲氧基)-2-(4-(2-氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲基)丙二酸(5.4mg)。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δppm 8.34(s,1H),7.28(d,J＝8.31Hz,2H),7.02(d,J＝8.44Hz,2H),6.49(s,1H),6.07(d,J＝7.21Hz,1H),4.78(d,J＝7.21Hz,1H),4.30(t,J＝3.18Hz,1H),3.93-4.08(m,2H),3.45-3.54(m,2H),3.35-3.49(m,4H),3.04(s,1H),1.94-2.00(m,2H)；LC/MS[M+H]＝615.1。
实施例158
合成2-((1H-吡唑-5-基)甲基)-2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氨基-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸
如上文实施例1中所描述但用5-(溴甲基)-1H-吡唑-1-甲酸叔丁酯代替苯甲基溴来进行，得到呈白色固体形式的标题化合物。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δppm 8.46(s,1H),7.32(s,1H),6.17(s,1H),6.02(d,J＝7.13Hz,1H),4.83(s,1H),4.34(s,1H),3.98-4.11(m,2H),3.43-3.54(m,2H),2.95(s,1H)；LC/MS[M+H]＝508.1。
实施例159
合成2-苯甲基-2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(2-氯-6-(1-甲苯磺酰基-1H-吡唑-4-基)-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸
步骤1：
在N2气氛下向2-苯甲基-2-(((2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(2,6-二氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基四氢呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸二乙酯(1.3g，1.92mmol，1当量)和4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)-1-甲苯磺酰基-1H-吡唑(669mg，1.92mmol，1当量)于二噁烷(10mL)和H2O(3mL)中的混合物中添加Pd(PPh3)4(222mg，192umol，0.1当量)和Cs2CO3(1.88g，5.76mmol，3当量)。在100℃下搅拌混合物3小时，然后过滤，并且减压浓缩滤液。通过快速硅胶柱色谱法(0-50％EtOAc/石油醚)纯化粗残余物，得到呈泡沫形式的2-苯甲基-2-(((2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(2-氯-6-(1-甲苯磺酰基-1H-吡唑-4-基)-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基四氢呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸二乙酯(170mg)。
步骤2：
向2-苯甲基-2-(((2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(2-氯-6-(1-甲苯磺酰基-1H-吡唑-4-基)-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基四氢呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸二乙酯(50mg，58umol，1当量)于THF(1mL)中的溶液中添加1M LiOH水溶液(1mL，18当量)。在25℃下搅拌混合物14小时，然后用EtOAc(10mL)和水(10mL)稀释。将水相用2M HCl水溶液调节至pH 2-3，并用EtOAc(2×40mL)萃取，经无水Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。通过制备型HPLC(柱：YMC-Triart Prep C18 150×40mm×7um；流动相：[水(0.225％FA)-AC]；B％：40％-60％，10min)纯化粗残余物，得到呈白色固体形式的2-苯甲基-2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(2-氯-6-(1-甲苯磺酰基-1H-吡唑-4-基)-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸(2.0mg)。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δppm 8.98(s,1H),8.69(s,2H)7.47(d,J＝8.25Hz,2H),7.30(d,J＝6.88Hz,2H),7.07-7.19(m,4H),6.92(d,J＝8.00Hz,2H),6.24(d,J＝7.63Hz,1H),5.85(d,J＝7.63Hz,1H),4.35(t,J＝2.56Hz,1H),4.03-4.09(m,1H),3.90(d,J＝10.63Hz,1H),3.40-3.50(m,1H),2.92(s,1H),2.05(s,3H)；LC/MS[M+H]＝723.2。
实施例160
合成2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(2-氯-6-(甲氨基)-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-(4-(2-氧代-1-丙基-1,2-二氢吡啶-3-基)苯甲基)丙二酸
如上文实施例19中所描述但用2-(((2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(6-((叔丁氧基羰基)(甲基)氨基)-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-四氢呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸二乙酯代替2-(((2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(6-N,N'-(双(叔丁氧基羰基)氨基)-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基四氢呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸二乙酯来进行，得到呈白色固体形式的标题化合物。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 8.44(s,1H),8.25(d,J＝4.3Hz,1H),7.68(dd,J＝6.7,1.8Hz,1H),7.29-7.51(m,3H),7.18(d,J＝7.5Hz,2H),6.28(t,J＝6.8Hz,1H),6.21(s,1H),6.01(d,J＝6.8Hz,1H),5.83(d,J＝7.3Hz,1H),4.82(s,1H),4.17(dd,J＝5.1,2.6Hz,1H),3.96(s,1H),3.89(t,J＝7.3Hz,2H),3.79(s,1H),3.58(s,1H),3.25(s,1H),2.90(d,J＝4.5Hz,3H),1.67(sxt,J＝7.3Hz,2H),0.88(t,J＝7.4Hz,3H)；LC/MS[M+H]＝667.1。
实施例161
合成2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氨基-2-(1-羟乙基)-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-苯甲基丙二酸
步骤1：
在0℃向2-苯甲基-2-(((2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(2-乙酰基-6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基四氢呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸二乙酯(48mg，72.11umol，1当量)于MeOH(2mL)中的溶液中添加NaBH4(4.09mg，108.17umol，1.5当量)。在0℃下搅拌溶液1小时。将另外的NaBH4(4.1mg)添加至反应混合物，并且将其在0℃下搅拌0.5小时，然后用水(6mL)稀释并用乙酸乙酯(3×6mL)萃取。合并的有机层经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。通过制备型TLC(乙酸乙酯)纯化粗残余物，得到呈糖浆形式的2-苯甲基-2-(((2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(6-氨基-2-(1-羟乙基)-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基四氢呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸二乙酯(20mg)。
步骤2：
向2-苯甲基-2-(((2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(6-氨基-2-(1-羟乙基)-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基四氢呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸二乙酯(16mg，23.96umol，1当量)于THF(2mL)中的溶液中添加1M LiOH水溶液(0.5mL，21当量)。在20℃下搅拌混合物3小时，然后用1N HCl水溶液将其酸化至pH 5。用乙酸乙酯(5×3mL)萃取混合物。浓缩合并的有机层。粗残余物通过制备型HPLC(柱：YMC-Triart Prep C18 150×40mm×7um；流动相：[水(0.225％FA)-ACN]；B％：13％-33％，10min)纯化并通过冻干干燥，得到呈白色固体形式的2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氨基-2-(1-羟乙基)-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-苯甲基丙二酸(4.0mg)。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δppm 8.49(d,J＝8.88Hz,1H),7.18-7.25(m,2H),7.07-7.14(m,3H),6.09(dd,J＝9.82,6.94Hz,1H),4.76-4.84(m,2H),4.29-4.36(m,1H),3.89-4.03(m,2H),3.32-3.45(m,1H),3.24-3.28(m,1H),3.02(d,J＝10.13Hz,1H),1.52(d,J＝6.50Hz,3H)；LC/MS[M+H]＝528.1。
实施例162
合成2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氨基-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-(4-(1-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)苯甲基)丙二酸
如上文实施例19中所描述但用3-(4-(溴甲基)苯基)-1-甲基吡啶-2(1H)-酮代替3-(4-(溴甲基)-苯基)-1-丙基吡啶-2(1H)-酮来进行，得到呈白色固体形式的标题化合物。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δppm 8.12(s,1H),7.55-7.53(m,1H),7.38-7.28(m,5H),6.33(t,J＝6.8Hz,1H),5.94(d,J＝7.6Hz,1H),4.75(d,J＝7.6Hz,1H),4.27-4.26(m,1H),4.09-4.01(m,2H),3.55(s,3H),3.53-3.44(m,2H),3.05(s,1H)；LC/MS[M+H]＝625.0。
实施例163
合成2-苯甲基-2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(6-(3-羧丙基)-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸
步骤1：
在0℃下在N2气氛下向2,6-二氯-9-(四氢-2H-吡喃-2-基)-9H-嘌呤(4.00g，14.65mmol，1当量)和Pd(Ph3P)4(1.69g，1.46mmol，0.1当量)于THF(30mL)中的溶液中滴加0.5M溴化(4-乙氧基-4-氧代丁基)锌(II)(73.23mL，36.61mmol，2.5当量)。经16小时从0℃至25℃搅拌混合物，然后将其冷却至0℃并用0.5N HCl水溶液淬灭。用EtOAc(3×100mL)萃取反应混合物。将合并的有机萃取物用H2O(100mL)、盐水(50mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。通过硅胶快速柱色谱法(10-75％EtOAc/石油醚)纯化粗残余物，得到4-(2-氯-9-(四氢-2H-吡喃-2-基)-9H-嘌呤-6-基)丁酸乙酯(2.83g)。
步骤2：
向4-(2-氯-9-(四氢-2H-吡喃-2-基)-9H-嘌呤-6-基)丁酸乙酯(1.50g，4.25mmol)于DCM(15mL)中的溶液中添加TFA(10mL)。在25℃下搅拌混合物7小时，然后减压浓缩。将残余物再溶解于H2O(50mL)中并用饱和NaHCO3水溶液中和至pH 7。用EtOAc(3×75mL)萃取所得混合物。将合并的有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩，得到4-(2-氯-9H-嘌呤-6-基)丁酸乙酯(1.05g)。
步骤3至4：
如上文实施例5中所描述但用4-(2-氯-9H-嘌呤-6-基)丁酸乙酯代替尿嘧啶来进行，得到呈白色固体形式的标题化合物。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δppm 8.74(s,1H),7.27-7.24(m,2H),7.09-7.08(m,3H),6.09(d,J＝7.6Hz,1H),5.05(d,J＝7.6Hz,1H),4.31-4.14(m,1H),4.10-4.06(m,2H),3.18-3.16(m,3H),2.41(t,J＝7.2Hz,2H),2.17-2.15(m,2H),1.22(t,J＝7.6Hz,2H)；LC/MS[M+H]＝589.1。
实施例164和165
合成(R)-2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氨基-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-3-乙氧基-3-氧代-2-(4-(2-氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲基)丙酸
和
(S)-2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氨基-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-3-乙氧基-3-氧代-2-(4-(2-氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲基)丙酸
步骤1：
在25℃下向2-氯-9H-嘌呤-6-胺(1.04g，6.15mmol，1.7当量)于MeCN(10mL)中的悬浮液中添加N,O-双(三甲基甲硅烷基)乙酰胺(BSA)(3.1mL，0.0127mol，3.5当量)。在85℃下加热所得悬浮液30分钟，此时其变得透明。使反应混合物冷却至25℃，接着滴加2-(4-(2-氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲基)-2-(((2R,3R,4R)-3,4,5-三乙酰氧基-3-乙炔基四氢呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸二乙酯(2.34g，0.0036mol，1.0当量)于MeCN(10mL)和MSOTf(1.12mL，0.00615mol，1.7当量)中的溶液。然后在70℃至80℃下加热反应混合物过夜，此时消耗所有原料。使反应物冷却至25℃，然后将其用MeCN(100mL)稀释并用饱和NaHCO3水溶液(150mL)淬灭。通过过滤除去不溶物质。将滤液的有机层分离，用H2O(50mL)、盐水(50mL)洗涤，经Na2SO4干燥并浓缩。通过快速硅胶柱色谱法(0-5％MeOH/CH2Cl2)纯化粗残余物，得到呈白色固体形式的2-(((2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(6-氨基-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-(4-(2-氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲基)丙二酸二乙酯(1.1g，40％产率)。
步骤2：
在0℃下向2-(((2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(6-氨基-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-(4-(2-氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲基)丙二酸二乙酯(400mg，0.53mmol，1当量)于THF(4mL)和H2O(4mL)中的溶液中添加LiOH单水合物(89mg，2.12mmol，4当量)。在室温下搅拌所得混合物过夜，然后减压除去有机挥发物。将混合物冷却至0℃并用1N HCl水溶液酸化至pH 6并减压浓缩。通过制备型反相HPLC纯化粗残余物，得到呈白色固体形式的一对非对映异构体：(R)-2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氨基-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢-呋喃-2-基)甲氧基)-3-乙氧基-3-氧代-2-(4-(2-氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲基)-丙酸和(S)-2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氨基-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-3-乙氧基-3-氧代-2-(4-(2-氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲基)丙酸，任意指定其立体构型。另外，实施例9也以白色固体形式分离。
(R)-2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氨基-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-3-乙氧基-3-氧代-2-(4-(2-氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲基)丙酸：1H NMR(300MHz,CD3OD)δ8.32(s,1H),7.28(d,J＝8.1Hz,2H),7.01(d,J＝8.1Hz,2H),6.00(d,J＝7.5Hz,1H),4.84(d,J＝7.5,1H),4.28-4.06(m,3H),3.99-3.95(m,2H),3.52-3.35(m,6H),3.08(s,1H),2.02-1.97(m,2H),1.21(t,J＝7.1,3H)；LC/MS[M+H]＝644.05。
(S)-2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氨基-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-3-乙氧基-3-氧代-2-(4-(2-氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲基)丙酸：1H NMR(300MHz,CD3OD)δ8.08(s,1H),7.26-7.29(d,J＝6.8Hz,2H),7.03-7.01(d,J＝7.23Hz,2H),5.96-5.99(d,J＝7.14Hz,1H),4.75-4.77(d,J＝7.5,1H),4.02-4.24(m,5H),3.32-3.66(m,6H),3.15(s,1H),1.95-2.19(m,2H),1.22-1.27(m,3H)；LC/MS[M+H]＝644.05。
实施例166和167
合成(R)-2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氨基-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-3-(4-(2-氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯基)丙酸
和
(S)-2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氨基-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-3-(4-(2-氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯基)丙酸
将来自处理的实施例9的粗产物在真空烘箱中在60℃下干燥2天，然后通过制备型HPLC纯化，得到一对非对映异构体：(R)-2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氨基-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-3-(4-(2-氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯基)-丙酸和(S)-2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氨基-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-3-(4-(2-氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯基)-丙酸，任意指定其立体构型。均分离白色固体。
(R)-2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氨基-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-3-(4-(2-氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯基)丙酸：1H NMR(300MHz,CD3OD)δ8.38(s,1H),7.22(d,J＝8.3Hz,2H),7.04(d,J＝8.3Hz,2H),5.92(d,J＝7.3Hz,1H),4.36-4.32(m,1H),4.30(d,J＝7.3Hz,1H),4.17(t,J＝2.3Hz,1H),4.07-4.03(m,1H),3.80-3.75(m,1H),3.54-3.49(m,2H),3.33-3.31(m,2H),3.25-3.19(m,1H),3.12(s,1H),3.09-3.02(m,1H),2.02-1.97(m,2H)；LC/MS[M+H]＝572.0。
(S)-2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氨基-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-3-(4-(2-氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯基)丙酸：1H NMR(300MHz,CD3OD)δ8.47(s,1H),7.26(d,J＝8.2Hz,2H),7.15(d,J＝8.3Hz,2H),5.97(d,J＝7.0Hz,1H),4.97(d,J＝7.0Hz,1H),4.31(t,J＝6.4Hz,1H),4.20(t,J＝3.4Hz,1H),3.91(d,J＝3.4Hz,1H),3.65(t,J＝6.0Hz,2H),3.39-3.33(m,2H),3.23-3.17(m,2H),3.08(s,1H),3.06-3.01(m,1H),2.10-1.95(m,2H)；LC/MS[M+H]＝572.0。
实施例168
合成2-苯甲基-2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(2-氯-6-(羟氨基)-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸
步骤1：
向2-苯甲基-2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(5-氯-7-(羟氨基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-3-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-丙二酸二乙酯(98mg，0.144mmol)于二噁烷(2mL)中的溶液中添加羟胺(0.1mL，1.6mmol，16M)和Et3N(35uL，0.16mmol)的水溶液。搅拌反应混合物2.5小时，并且然后用EtOAc(15mL)和H2O(5mL)稀释。将有机层分离，用H2O(20mL)、盐水(20mL)洗涤，经Na2SO4干燥并浓缩，得到呈灰白色固体形式的粗制2-苯甲基-2-(((2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(2-氯-6-(羟氨基)-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-丙二酸二乙酯(88mg)，其不经进一步纯化即用于下一步骤中。
步骤2：
向粗制2-苯甲基-2-(((2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(2-氯-6-(羟氨基)-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基四氢呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸二乙酯(88mg，0.14mmol)于THF(0.2mL)、MeOH(0.62mL)和H2O(0.15mL)的混合物中的溶液中添加LiOH·H2O(31mg，0.75mmol)。在25℃下搅拌所得混合物5.5小时，然后减压除去有机挥发物。将水层冷却至0℃并用1N HCl水溶液酸化至pH 6.5，然后将其浓缩。通过制备型反相HPLC纯化粗残余物，得到呈微红固体形式的2-苯甲基-2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(5-氯-7-(羟氨基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-3-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)丙二酸(17mg)。
1H NMR(CD3OD,300MHz)δ8.25(s,1H),7.25-7.28(m,2H),7.05(m,3H),6.43(s,1H),6.06-6.08(d,J＝7.17Hz,1H),4.95-4.98(d,J＝7.05Hz,1H),4.32(s,1H),4.05-4.11(m,2H),3.89-3.93(m,1H),3.31-3.39(m,2H),2.99(s,1H),1.30-1.33(m,6H)；LC/MS[M+H]＝533.1。
实施例169
合成2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(2-氯-6-(异丙氨基)-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-(噻唑-4-基)-3-(噻吩-3-基)丙酸
步骤1：
在0℃下向2-(噻唑-4-基)乙酸乙酯(2g，11.7毫摩尔)于CH3CN(15mL)中的溶液中添加含DBU(2.62ml，17.6毫摩尔)和4-乙酰胺基苯磺酰基叠氮化物(3.4g，14.1毫摩尔)的CH3CN(10mL)。在室温下搅拌反应混合物1.5小时，然后将其减压浓缩至干燥。通过硅胶柱色谱法(0-40％EtOAc/己烷)纯化所得粗物质，得到2-重氮-2-(噻唑-4-基)乙酸乙酯(2.0g)。
步骤2：
在0℃下向(3aR,5R,6R,6aR)-乙酸6-乙炔基-5-(羟甲基)-2,2-二甲基四氢呋喃并[2,3-d][1,3]间二氧杂环戊烯-6-基酯(7g，27.32mmol，1当量)于DCE(15mL)中的混合物中滴加含Rh(OAc)2(603.69mg，2.73mmol，0.1当量)和2-重氮-2-(噻唑-4-基)乙酸乙酯(6.46g，32.78mmol，1.2当量)的DCE(15mL)。在25℃下在N2气氛下搅拌混合物14小时，然后过滤不溶物质，并且减压浓缩滤液。通过快速硅胶柱色谱法(0-50％EtOAc/石油醚)纯化粗残余物，得到呈油形式的2-(((3aR,5R,6R,6aR)-6-乙酰氧基-6-乙炔基-2,2-二甲基四氢呋喃并[2,3-d][1,3]间二氧杂环戊烯-5-基)甲氧基)-2-(噻唑-4-基)乙酸乙酯(10.81g，93％产率)。
步骤3：
向2-(((3aR,5R,6R,6aR)-6-乙酰氧基-6-乙炔基-2,2-二甲基四氢呋喃并[2,3-d][1,3]间二氧杂环戊烯-5-基)甲氧基)-2-(噻唑-4-基)乙酸乙酯(2.69g，6.33mmol，1当量)于DMF(5mL)中的混合物中添加Cs2CO3(6.18g，18.98mmol，3当量)。在25℃下在N2气氛下搅拌混合物0.5小时，然后添加3-(溴甲基)噻吩(2.8g，15.81mmol，2.5当量)。在25℃下搅拌所得混合物14小时，然后过滤不溶物质，并且将滤液用H2O(15mL)稀释并用EtOAc(3×15mL)萃取。将合并的有机层用饱和NH4Cl水溶液(3×15mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。通过快速硅胶柱色谱法(0-50％EtOAc/石油)纯化粗残余物，得到呈油形式的2-(((3aR,5R,6R,6aR)-6-乙酰氧基-6-乙炔基-2,2-二甲基四氢呋喃并[2,3-d][1,3]间二氧杂环戊烯-5-基)甲氧基)-2-(噻唑-4-基)-3-(噻吩-3-基)丙酸乙酯(2.27g，69％产率)。
步骤4：
向2-(((3aR,5R,6R,6aR)-6-乙酰氧基-6-乙炔基-2,2-二甲基四氢呋喃并[2,3-d][1,3]间二氧杂环戊烯-5-基)甲氧基)-2-(噻唑-4-基)-3-(噻吩-3-基)丙酸乙酯(2.27g，4.35mmol，1当量)于DCM(5mL)和H2O(0.5mL)中的混合物中添加TFA(5mL，67.53mmol，15.5当量)。在15℃下在N2气氛下搅拌混合物14小时，然后用饱和NaHCO3水溶液(50mL)将其调节至pH 7-8并减压浓缩。将残余物用H2O(5mL)稀释并用EtOAc(4×15mL)萃取。将合并的有机层用盐水(10mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩，得到呈糖浆形式的粗制2-[[(2R,3S,4R)-3-乙酰氧基-3-乙炔基-4,5-二羟基-四氢呋喃-2-基]甲氧基]-2-噻唑-4-基-3-(3-噻吩基)丙酸乙酯(1.82g)。
在0℃下在N2气氛下向2-[[(2R,3S,4R)-3-乙酰氧基-3-乙炔基-4,5-二羟基-四氢-呋喃-2-基]甲氧基]-2-噻唑-4-基-3-(3-噻吩基)丙酸乙酯(1.82g，3.78mmol，1当量)于吡啶(8mL)中的溶液中添加4-DMAP(1.39g，11.34mmol，3当量)和Ac2O(2.83mL，30.24mmol，8当量)。在15℃下搅拌混合物15小时，然后用H2O(20mL)稀释并用EtOAc(3×15mL)萃取。将合并的有机层用10％CuSO4溶液(2×15mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩，得到呈糖浆形式的粗制(3R,4R,5R)-三乙酸5-(((1-乙氧基-1-氧代-2-(噻唑-4-基)-3-(噻吩-3-基)丙-2-基)氧基)甲基)-4-乙炔基四氢呋喃-2,3,4-三基酯(2.42g)。
步骤5：
向2-氯-N-异丙基-9H-嘌呤-6-胺(606.20mg，2.86mmol，1当量)于DCE(20mL)中的混合物中添加BSA(1.77mL，7.16mmol，2.5当量)。在85℃下在N2气氛下搅拌混合物0.5小时，然后使其冷却至0℃，并接着添加粗制(3R,4R,5R)-三乙酸5-(((1-乙氧基-1-氧代-2-(噻唑-4-基)-3-(噻吩-3-基)-丙-2-基)氧基)甲基)-4-乙炔基四氢呋喃-2,3,4-三基酯(1.62g，2.86mmol，1当量)和TMSOTf(1.55mL，8.59mmol，3当量)。在65℃下于N2下搅拌所得混合物14小时，然后用饱和NaHCO3水溶液(20mL)淬灭。将反应混合物用H2O(10mL)稀释并用DCM(3×20mL)萃取。将合并的有机层用盐水(3×15mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。通过快速硅胶柱色谱法(0-50％EtOAc/石油醚)纯化粗残余物，得到呈糖浆形式的(2R,3R,4R,5R)-二乙酸5-(2-氯-6-(异丙氨基)-9H-嘌呤-9-基)-2-(((1-乙氧基-1-氧代-2-(噻唑-4-基)-3-(噻吩-3-基)丙-2-基)氧基)甲基)-3-乙炔基四氢呋喃-3,4-二基酯(402mg，粗制)。
步骤6：
向(2R,3R,4R,5R)-二乙酸5-(2-氯-6-(异丙氨基)-9H-嘌呤-9-基)-2-(((1-乙氧基-1-氧代-2-(噻唑-4-基)-3-(噻吩-3-基)丙-2-基)氧基)甲基)-3-乙炔基四氢呋喃-3,4-二基酯(384mg，粗制)于THF(2mL)和H2O(1mL)中的混合物中添加LiOH(128mg，5.35mmol)。在50℃下搅拌混合物6小时，然后用H2O(40mL)稀释并用EtOAc(10mL)萃取。用2N HCl水溶液将水相酸化至pH 2-3直至pH为约2-3为止，并且然后减压浓缩。粗残余物通过制备型HPLC(柱：YMC-Actus Triart C18 150×30mm×5um；流动相：[水(0.225％FA)-ACN]；B％：40％-60％，10min)纯化并通过冻干干燥，得到呈白色固体形式的2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(2-氯-6-(异丙氨基)-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-(噻唑-4-基)-3-(噻吩-3-基)丙酸的非对映异构混合物(大约1:1)(17.5mg)。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δppm 8.92-9.01(m,1H),8.04-8.28(m,1H),7.60-7.71(m,1H),7.10-7.15(m,1H),6.98-7.06(m,1H),6.77-6.94(m,1H),5.90-6.02(m,1H),4.91-5.06(m,2H),4.40(br s,1H),4.19-4.32(m,1H),3.89-3.99(m,1H),3.65-3.87(m,3H),2.89-3.02(m,1H),1.25-1.35(m,6H)；LC/MS[M+H]＝605.2。
实施例170和171
合成(S)-2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(2-氯-6-(异丙氨基)-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-3-苯基-2-(噻唑-4-基)丙酸
和
(R)-2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(2-氯-6-(异丙氨基)-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-3-苯基-2-(噻唑-4-基)丙酸
如上文实施例169中所描述但用苯甲基溴代替3-(溴甲基)噻吩来进行，得到一对非对映异构产物，任意指定其立体构型。将两种产物通过制备型HPLC纯化并以白色固体形式分离。
(S)-2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(2-氯-6-(异丙氨基)-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-3-苯基-2-(噻唑-4-基)丙酸：1H NMR(CD3OD,300MHz)δ8.99(s,1H),7.91(s,1H),7.70(s,1H),7.07-7.23(m,5H),5.91-5.94(d,J＝6.9Hz,1H),4.87-4.90(d,J＝7.0Hz,1H),4.21-4.45(m,2H),3.59-3.94(m,4H),3.02(s,1H),1.29-1.31(d,J＝6.48Hz,6H)；LC/MS[M+H]＝599.0。
(R)-2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(2-氯-6-(异丙氨基)-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-3-苯基-2-(噻唑-4-基)丙酸：1H NMR(CD3OD,300MHz)δ8.97-8.98(d,J＝1.83Hz,1H),8.07(s,1H),7.573-7.579(d,J＝1.86Hz,1H),6.94-7.09(m,5H),5.97-5.99(d,J＝7.17Hz,1H),4.98-5.00(d,J＝7.23Hz,1H),4.40-4.42(m,1H),4.27-4.29(t,J＝3.84Hz,1H),3.93-3.97(m,2H),3.59-3.81(q,J＝14.31,37.47Hz,2H),2.95(s,1H),1.29-1.33(d,J＝6.39Hz,6H)；LC/MS[M+H]＝599.0。
实施例172和173
合成(S)-2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(2-氯-6-((环丙基甲基)氨基)-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-3-苯基-2-(噻唑-4-基)丙酸
和
(R)-2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(2-氯-6-((环丙基甲基)氨基)-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-3-苯基-2-(噻唑-4-基)丙酸
如上文实施例170和171中所描述但用2-氯-N-(环丙基甲基)-9H-嘌呤-6-胺代替2-氯-N-异丙基-9H-嘌呤-6-胺来进行，得到一对非对映异构产物，任意指定其立体构型。将两种产物通过制备型HPLC纯化并以白色固体形式分离。
(S)-2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(2-氯-6-((环丙基甲基)氨基)-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-3-苯基-2-(噻唑-4-基)丙酸：
1H NMR(CD3OD,300MHz)δ8.99-8.99(d,J＝1.95Hz,1H),7.93(s,1H),7.69-7.70(d,J＝1.86Hz,1H),7.03-7.23(m,5H),5.92-5.94(d,J＝6.96Hz,1H),4.87-4.89(d,J＝7.11Hz,1H),4.19-4.22(m,1H),3.59-3.94(m,4H),3.42-3.43(m,2H),3.02(s,1H),1.12-1.22(m,1H),0.54-0.61(m,2H),0.32-0.37(m,2H)；LC/MS[M+H]＝611.0。
(R)-2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(2-氯-6-((环丙基甲基)氨基)-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-3-苯基-2-(噻唑-4-基)丙酸：
1H NMR(CD3OD,300MHz)δ8.96-8.97(d,J＝1.89Hz,1H),8.07(s,1H),7.55-7.56(d,J＝2.07Hz,1H),6.94-7.11(m,5H),5.97-5.99(d,J＝7.17Hz,1H),4.98-5.00(d,J＝7.29Hz,1H),4.27-4.29(t,J＝3.66Hz,1H),3.94-3.95(m,2H),3.59-3.80(q,J＝14.64,32.46Hz,2H),3.39-3.50(m,2H),2.96(s,1H),1.13-1.23(m,1H),0.55-0.62(m,2H),0.32-0.38(m,2H)；LC/MS[M+H]＝611.0。
实施例174
合成2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(2-氯-6-(异丙氨基)-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-(噻唑-4-基)-3-(4-(三氟甲氧基)苯基)丙酸
如上文实施例169中所描述但用1-(溴甲基)-4-(三氟甲氧基)苯代替3-(溴甲基)噻吩来进行，得到作为非对映异构体的混合物(大约1:1)的标题化合物并以白色固体形式分离。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δppm 8.95-9.02(m,1H),8.05-8.27(m,1H),7.59-7.74(m,1H),7.15-7.32(m,2H),6.78-6.98(m,2H),5.89-6.00(m,1H),4.92-5.10(m,1H),4.32-4.46(m,1H),4.22-4.32(m,1H),3.76-3.98(m,2H),3.57-3.71(m,2H),2.98-3.04(m,1H),1.26-1.32(m,6H)；LC/MS[M+H]＝682.8。
实施例175
合成2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氨基-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-3-(4-(2-氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯基)-2-(噻唑-4-基)丙酸
步骤1：
将1-(溴甲基)-4-硝基苯(7.62g，35.26mmol，3当量)和NaI(352.31mg，2.35mmol，0.2当量)于DMF(50mL)中的混合物在15℃下搅拌30分钟。然后在15℃下将此混合物添加至2-(((3aR,5R,6R,6aR)-6-乙酰氧基-6-乙炔基-2,2-二甲基四氢呋喃并[2,3-d][1,3]间二氧杂环戊烯-5-基)甲氧基)-2-(噻唑-4-基)乙酸乙酯(5g，11.75mmol，1当量)和Cs2CO3(19.15g，58.76mmol，5当量)于DMF(50mL)中的溶液中并搅拌30分钟。搅拌所得混合物8小时，然后用水(200mL)淬灭。用EtOAc(4×30mL)萃取混合物。将合并的有机层用水(3×100mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩。通过硅胶快速柱色谱法(0-40％EtOAc/石油醚)纯化残余物，得到呈糖浆形式的2-(((3aR,5R,6R,6aR)-6-乙酰氧基-6-乙炔基-2,2-二甲基-四氢呋喃并[2,3-d][1,3]间二氧杂环戊烯-5-基)甲氧基)-3-(4-硝基苯基)-2-(噻唑-4-基)丙酸乙酯(4.89g)。
步骤2：
向2-(((3aR,5R,6R,6aR)-6-乙酰氧基-6-乙炔基-2,2-二甲基四氢呋喃并[2,3-d][1,3]间二氧杂环戊烯-5-基)甲氧基)-3-(4-硝基苯基)-2-(噻唑-4-基)丙酸乙酯(4.89g，不纯)于DCM(25mL)和H2O(2.5mL)中的溶液中添加TFA(25mL，337.65mmol)。在30℃下搅拌混合物23小时，然后用水(100mL)稀释，并用DCM(6×30mL)萃取所得混合物。将合并的有机层用饱和NaHCO3水溶液(2×100mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩，得到呈棕色油形式的粗制2-(((2R,3S,4R)-3-乙炔基-3,4,5-三羟基四氢-呋喃-2-基)甲氧基)-3-(4-硝基苯基)-2-(噻唑-4-基)丙酸乙酯(4.56g)。
向粗制2-(((2R,3S,4R)-3-乙炔基-3,4,5-三羟基四氢-呋喃-2-基)甲氧基)-3-(4-硝基苯基)-2-(噻唑-4-基)丙酸乙酯(4.56g)于DCM(50mL)中的溶液中滴加4-DMAP(232.86mg，1.91mmol)、吡啶(6.15mL，76.24mmol)和Ac2O(8.93mL，95.30mmol)。在15℃下搅拌混合物19小时，然后用水(100mL)淬灭，并用DCM(4×30mL)萃取所得混合物。将合并的有机层用水(3×100mL)洗涤，并且经无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩。通过硅胶快速柱色谱法(10-55％EtOAc/石油醚)纯化粗残余物，得到呈黄色油形式的(3R,4R,5R)-三乙酸5-(((1-乙氧基-3-(4-硝基苯基)-1-氧代-2-(噻唑-4-基)丙-2-基)氧基)甲基)-4-乙炔基四氢呋喃-2,3,4-三基酯(1.02g)。
步骤3：
向2,6-二氯-9H-嘌呤(382.64mg，2.02mmol)于MeCN(5mL)中的溶液中添加BSA(1.04mL，4.22mmol)。在65℃下搅拌悬浮液0.5小时，此时其变得透明。将所得溶液冷却至0℃，并接着添加(3R,4R,5R)-三乙酸5-(((1-乙氧基-3-(4-硝基苯基)-1-氧代-2-(噻唑-4-基)丙-2-基)氧基)甲基)-4-乙炔基四氢呋喃-2,3,4-三基酯(1.02g)于MeCN(5mL)和TMSOTf(4.22mmol，762.15uL)中的溶液。然后在65℃下搅拌混合物1小时，然后用饱和NaHCO3水溶液(40mL)淬灭，并用EtOAc(4×20mL)萃取所得混合物。合并的有机层经无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩，得到呈黄色固体形式的粗制(2R,3R,4R,5R)-二乙酸5-(2,6-二氯-9H-嘌呤-9-基)-2-(((1-乙氧基-3-(4-硝基苯基)-1-氧代-2-(噻唑-4-基)丙-2-基)氧基)甲基)-3-乙炔基四氢呋喃-3,4-二基酯(1.71g)。
步骤4：
向密封试管中的粗制(2R,3R,4R,5R)-二乙酸5-(2,6-二氯-9H-嘌呤-9-基)-2-(((1-乙氧基-3-(4-硝基苯基)-1-氧代-2-(噻唑-4-基)丙-2-基)氧基)甲基)-3-乙炔基四氢呋喃-3,4-二基酯(1.0g)于MeOH(20mL)中的溶液中添加NH4.OH(28.04mmol，4.00mL，27％浓度)。将混合物密封并在100℃下搅拌1.5小时，然后使其冷却并用水(20mL)稀释，并用EtOAc(3×10mL)萃取所得混合物。合并的有机层经无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩，得到呈黄色固体形式的粗制2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氨基-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-3-(4-硝基苯基)-2-(噻唑-4-基)丙酸乙酯(752mg)。
步骤5：
在0℃下向粗制2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氨基-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-3-(4-硝基苯基)-2-(噻唑-4-基)-丙酸乙酯(752mg)、4-DMAP(58.33mg，477.44umol)和Et3N(7.16mmol，996.81uL)于DMF(8mL)中的溶液中添加Boc2O(1.04g，4.77mmol)。在20℃下搅拌混合物2小时，然后用水(40mL)稀释，并用EtOAc(4×20mL)萃取所得混合物。合并的有机层经无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩，得到呈棕色固体形式的粗制2-(((2R,3R,4R,5R)-5-(6-(双(叔丁氧基羰基)氨基)-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-4-((叔丁氧基羰基)氧基)-3-乙炔基-3-羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-3-(4-硝基苯基)-2-(噻唑-4-基)丙酸乙酯(911mg)。
步骤6：
向粗制2-(((2R,3R,4R,5R)-5-(6-(双(叔丁氧基羰基)-氨基)-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-4-((叔丁氧基羰基)氧基)-3-乙炔基-3-羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-3-(4-硝基苯基)-2-(噻唑-4-基)丙酸乙酯(711mg)于EtOH(7mL)中的溶液中添加饱和NH4Cl水溶液(764.21umol，7mL)和铁(426.77mg，7.64mmol)。在50℃下搅拌混合物2小时，然后经由硅藻土垫过滤，并且浓缩滤液。然后将粗残余物溶解于水(20mL)中，并用EtOAc(3×15mL)萃取所得混合物。合并的有机层经无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩，得到呈棕色固体形式的粗制3-(4-氨基-苯基)-2-(((2R,3R,4R,5R)-5-(6-(双(叔丁氧基羰基)氨基)-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-4-((叔丁氧基羰基)氧基)-3-乙炔基-3-羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-(噻唑-4-基)丙酸乙酯(552mg)。
步骤7：
向粗制3-(4-氨基苯基)-2-(((2R,3R,4R,5R)-5-(6-(双(叔丁氧基羰基)氨基)-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-4-((叔丁氧基羰基)氧基)-3-乙炔基-3-羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-(噻唑-4-基)丙酸乙酯(552mg)于DCM(5mL)中的溶液中添加1-氯-3-异氰酸酯基-丙烷(109.94mg，919.60umol)。在15℃下搅拌混合物16小时，然后减压浓缩。通过硅胶快速柱色谱法(20-100％EtOAc/石油醚)纯化粗残余物，得到呈灰白色固体形式的2-(((2R,3R,4R,5R)-5-(6-(双(叔丁氧基羰基)氨基)-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-4-((叔丁氧基羰基)氧基)-3-乙炔基-3-羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-3-(4-(3-(3-氯丙基)脲基)苯基)-2-(噻唑-4-基)丙酸乙酯(283mg)。
步骤8：
向2-(((2R,3R,4R,5R)-5-(6-(双(叔丁氧基羰基)氨基)-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-4-((叔丁氧基羰基)氧基)-3-乙炔基-3-羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-3-(4-(3-(3-氯丙基)脲基)苯基)-2-(噻唑-4-基)丙酸乙酯(283mg，277.47umol，1当量)于THF(3mL)中的溶液中添加NaH(55.49mg，1.39mmol，60％于矿物油中，5当量)。在15℃下搅拌混合物5小时，然后用H2O(1.5mL)淬灭。向此混合物中添加NaOH(166.48mg，4.16mmol，15当量)，并且在40℃下搅拌所得混合物48小时，然后减压除去有机挥发物。将水层用2N HCl水溶液(1mL)酸化并减压浓缩，得到呈黄色固体形式的粗制2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(6-((叔丁氧基羰基)氨基)-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-3-(4-(2-氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯基)-2-(噻唑-4-基)丙酸(238mg)。
步骤9：
向粗制2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(6-((叔丁氧基羰基)氨基)-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-3-(4-(2-氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯基)-2-(噻唑-4-基)丙酸(238mg)于DCM(2mL)中的混合物中添加TFA(9.45mmol，0.7mL)。在15℃下搅拌混合物2小时，然后减压浓缩。通过制备型HPLC([水(0.225％FA)-ACN]；B％：20％-40％，10min)纯化粗残余物，得到呈白色固体形式的2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氨基-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-3-(4-(2-氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯基)-2-(噻唑-4-基)丙酸的非对映异构混合物(大约1:1)(22.9mg)。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δppm 9.01(m,1H),7.98-8.32(m,1H),7.59-7.83(m,1H),6.91-7.34(m,4H),5.88-6.07(m,1H),4.72-4.96(m,1H),4.13-4.32(m,1H),3.60-4.00(m,4H),3.43-3.56(m,2H),3.35-3.42(m,2H),2.96-3.14(m,1H),1.89-2.08(m,2H)；LC/MS[M+H]＝655.3。
实施例176
合成2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(2-氯-6-(异丙氨基)-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-3-(4-(2-氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯基)-2-(噻唑-4-基)丙酸
步骤1：
向粗制(2R,3R,4R,5R)-二乙酸5-(2,6-二氯-9H-嘌呤-9-基)-2-(((1-乙氧基-3-(4-硝基苯基)-1-氧代-2-(噻唑-4-基)丙-2-基)氧基)甲基)-3-乙炔基四氢呋喃-3,4-二基酯(1.17g)于MeCN(10mL)中的溶液中添加丙-2-胺(1.0mL，11.64mmol)和DIEA(0.9mL)。在15℃下搅拌混合物16小时，然后用水(30mL)稀释，并用EtOAc(4×20mL)萃取所得混合物。合并的有机层经无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩，得到呈黄色固体形式的粗制(2R,3R,4R,5R)-二乙酸5-(2-氯-6-(异丙氨基)-9H-嘌呤-9-基)-2-(((1-乙氧基-3-(4-硝基苯基)-1-氧代-2-(噻唑-4-基)丙-2-基)氧基)甲基)-3-乙炔基四氢呋喃-3,4-二基酯(1.16g)。
步骤2：
向粗制(2R,3R,4R,5R)-二乙酸5-(2-氯-6-(异丙氨基)-9H-嘌呤-9-基)-2-(((1-乙氧基-3-(4-硝基苯基)-1-氧代-2-(噻唑-4-基)丙-2-基)氧基)甲基)-3-乙炔基四氢呋喃-3,4-二基酯(1.16g)于EtOH(5mL)中的溶液中添加Fe粉末(856.75mg，15.34mmol)和饱和NH4Cl水溶液(1.53mmol，5mL)。在50℃下搅拌混合物2小时，然后经由硅藻土垫过滤并浓缩滤液，得到呈黄色固体形式的粗制(2R,3R,4R,5R)-二乙酸2-(((3-(4-氨基苯基)-1-乙氧基-1-氧代-2-(噻唑-4-基)丙-2-基)氧基)甲基)-5-(2-氯-6-(异丙氨基)-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基四氢呋喃-3,4-二基酯(1.05g)。
步骤3：
向粗制(2R,3R,4R,5R)-二乙酸2-(((3-(4-氨基苯基)-1-乙氧基-1-氧代-2-(噻唑-4-基)丙-2-基)氧基)甲基)-5-(2-氯-6-(异丙氨基)-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基四氢呋喃-3,4-二基酯(1.05g)于DCM(10mL)中的溶液中添加1-氯-3-异氰酸酯基-丙烷(172.85mg，1.45mmol)。在15℃下搅拌混合物16小时，然后用水(20mL)淬灭，并用DCM(3×10mL)萃取所得混合物。合并的有机层经无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩，得到呈黄色固体形式的粗制2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(2-氯-6-(异丙氨基)-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-3-(4-(3-(3-氯丙基)-脲基)苯基)-2-(噻唑-4-基)丙酸乙酯(1.33g)。
步骤4：
向粗制2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(2-氯-6-(异丙氨基)-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-3-(4-(3-(3-氯丙基)-脲基)苯基)-2-(噻唑-4-基)丙酸乙酯(1.23g)于THF(12mL)中的溶液中添加NaH(290.84mg，7.27mmol，60％于矿物油中)。在15℃下搅拌混合物5小时，然后用H2O(6mL)淬灭并接着添加NaOH(290.85mg，7.27mmol)。将混合物在15℃下搅拌16小时，并且然后在40℃下搅拌8小时。将另外的NaOH(600mg)添加至混合物，并且在40℃下搅拌混合物4小时，然后用水(20mL)淬灭。用EtOAc(15mL)萃取所得溶液。用2N HCl水溶液(15mL)酸化水层，产生沉淀物。固体通过过滤收集并通过制备型HPLC(柱：YMC-Actus Triart C18 150×30mm×5um；流动相：[水(0.225％FA)-ACN]；B％：30％-50％，10min)纯化，得到呈白色固体形式的2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(2-氯-6-(异丙基-氨基)-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-3-(4-(2-氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯基)-2-(噻唑-4-基)丙酸的非对映异构混合物(大约1:1)(245mg)。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δppm 8.99(d,J＝1.6Hz,1H),7.88-8.18(m,1H),7.53-7.79(m,1H),7.30(d,J＝8.3Hz,1H),7.03-7.13(m,2H),6.95(d,J＝8.4Hz,1H),5.83-6.03(m,1H),4.63-4.74(m,1H),4.33-4.43(m,1H),4.09-4.29(m,1H),3.72-4.01(m,3H),3.59-3.70(m,1H),3.41-3.53(m,2H),3.33-3.38(m,2H),2.91-3.14(m,1H),1.83-2.05(m,2H),1.25-1.35(m,6H)；LC/MS[M+H]＝697.4。
实施例177
合成2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氯-4-(异丙氨基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-3-苯基-2-(噻唑-4-基)丙酸
步骤1：
在0℃下在N2气氛下向4,6-二氯-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶(620mg，1.11mmol，1当量)和(3R,4R,5R)-三乙酸5-(((1-乙氧基-1-氧代-3-苯基-2-(噻唑-4-基)丙-2-基)氧基)甲基)-4-乙炔基四氢呋喃-2,3,4-三基酯(230.35mg，1.22mmol，1.1当量)于MeCN(6.5mL)中的溶液中添加DBU(501uL，3.32mmol，3当量)。在0℃下搅拌混合物5分钟，并接着滴加TMSOTf(900.93uL，4.99mmol，4.5当量)。将混合物在0℃下搅拌30分钟并且然后在65℃下搅拌16小时，然后用饱和NaHCO3水溶液(10mL)淬灭并用EtOAc(3×6mL)萃取。合并的有机相经无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩。通过硅胶快速柱色谱法(10-40％EtOAc/石油醚)纯化粗残余物，得到呈泡沫形式的(2R,3R,4R,5R)-二乙酸5-(4,6-二氯-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-2-(((1-乙氧基-1-氧代-3-苯基-2-(噻唑-4-基)丙-2-基)氧基)甲基)-3-乙炔基四氢呋喃-3,4-二基酯(220mg)。
步骤2：
向含(2R,3R,4R,5R)-二乙酸5-(4,6-二氯-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-2-(((1-乙氧基-1-氧代-3-苯基-2-(噻唑-4-基)丙-2-基)氧基)甲基)-3-乙炔基四氢呋喃-3,4-二基酯(260mg，377.61umol，1当量)的EtOH(2mL)中添加丙-2-胺(64.89uL，755.23umol，2当量)和DIEA(131.55uL，755.23umol，2当量)。在15℃下搅拌混合物4小时，然后将其用EtOAc(30mL)稀释，用水(8mL)、盐水(8mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩。通过制备型TLC(EtOAc:石油醚＝2:1)纯化粗残余物，得到呈泡沫形式的(2R,3R,4R,5R)-二乙酸5-(6-氯-4-(异丙氨基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-2-(((1-乙氧基-1-氧代-3-苯基-2-(噻唑-4-基)丙-2-基)氧基)甲基)-3-乙炔基四氢呋喃-3,4-二基酯(70mg)。
步骤3：
向(2R,3R,4R,5R)-二乙酸5-(6-氯-4-(异丙氨基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-2-(((1-乙氧基-1-氧代-3-苯基-2-(噻唑-4-基)丙-2-基)氧基)甲基)-3-乙炔基四氢呋喃-3,4-二基酯(70mg，98.43umol，1当量)于THF(1mL)中的溶液中添加LiOH·H2O(4.13mg)。在50℃下搅拌混合物14小时，然后浓缩至干燥。粗残余物通过制备型HPLC(柱：YMC-Actus Triart C18 150×30mm×5um；流动相：[水(0.225％FA)-ACN]；B％：43％-63％，10min)纯化并通过冻干干燥，得到呈白色固体形式的2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氯-4-(异丙氨基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢-呋喃-2-基)甲氧基)-3-苯基-2-(噻唑-4-基)丙酸的非对映异构混合物(大约1:1)(15.7mg)。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δppm 8.76-9.10(m,1H),7.93-8.08(m,1H),7.40-7.65(m,1H),6.89-7.08(m,4H),6.80-6.88(m,1H),6.11-6.20(m,1H),5.14-5.28(m,1H),4.38-4.50(m,1H),4.29-4.37(m,1H),3.93-4.11(m,1H),3.78-3.86(m,1H),3.47-3.63(m,2H),2.97-3.09(m,1H),1.25-1.31(m,6H)；LC/MS[M+H]＝598.7。
实施例178
合成2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(4-氨基-6-氯-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-3-苯基-2-(噻唑-4-基)丙酸
步骤1：
向(2R,3R,4R,5R)-二乙酸5-(4,6-二氯-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-2-(((1-乙氧基-1-氧代-3-苯基-2-(噻唑-4-基)丙-2-基)氧基)甲基)-3-乙炔基四氢-呋喃-3,4-二基酯(100mg，145.24umol，1当量)于THF(1mL)中的溶液中添加NH4OH(199.76uL，1.45mmol，10当量)。在15℃下搅拌混合物14小时，然后浓缩至干燥，得到呈白色固体形式的粗制(2R,3R,4R,5R)-二乙酸5-(4-氨基-6-氯-1H-吡唑并-[3,4-d]嘧啶-1-基)-2-(((1-乙氧基-1-氧代-3-苯基-2-(噻唑-4-基)丙-2-基)氧基)-甲基)-3-乙炔基四氢呋喃-3,4-二基酯(120mg)。
步骤2：
向粗制(2R,3R,4R,5R)-二乙酸5-(4-氨基-6-氯-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-2-(((1-乙氧基-1-氧代-3-苯基-2-(噻唑-4-基)丙-2-基)氧基)甲基)-3-乙炔基四氢呋喃-3,4-二基酯(145.24umol，1当量)于THF(4mL)和H2O(2mL)中的溶液中添加LiOH·H2O(60.94mg，1.45mmol，10当量)。在50℃下搅拌混合物16小时，然后浓缩至干燥。粗残余物通过制备型HPLC(柱：YMC-Actus Triart C18 150×30mm×5um；流动相：[水(0.225％FA)-ACN]；B％：28％-48％，10min)纯化并通过冻干干燥，得到呈白色固体形式的2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(4-氨基-6-氯-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-3-苯基-2-(噻唑-4-基)-丙酸的非对映异构混合物(大约1:1)(32.8mg)。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δppm 8.87-9.01(m,1H),7.91-8.06(m,1H),7.47-7.67(m,1H),7.01-7.06(m,2H),6.93-7.00(m,2H),6.84-6.90(m,1H),6.12-6.20(m,1H),5.14-5.27(m,1H),4.26-4.33(m,1H),3.76-4.03(m,2H),3.48-3.70(m,2H),2.96-3.05(m,1H)；LC/MS[M+H]＝557.0。
实施例179
合成2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氨基-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-(噻唑-4-基)乙酸
步骤1：
在氩气气氛下向(2R,3R,4R,5R)-二乙酸5-((6-N,N'-双(叔丁氧基羰基)氨基)-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-2-(羟甲基)四氢呋喃-3,4-二基酯(2g，3.28mmol)于甲苯(10mL)中的溶液中添加2-重氮-2-(噻唑-4-基)乙酸乙酯(841mg，4.26mmol)和Rh2(OAc)4(145mg，0.328mmol)。在70℃下搅拌所得混合物2小时，然后使其冷却至室温。减压除去有机挥发物。通过硅胶柱色谱法(0-40％EtOAc/己烷)纯化所得粗产物，得到呈糖浆形式的(2R,3R,4R,5R)-二乙酸5-(6-(双(叔丁氧基羰基)氨基)-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-2-((2-乙氧基-2-氧代-1-(噻唑-4-基)乙氧基)甲基)-3-乙炔基四氢呋喃-3,4-二基酯(1.78g)。
步骤2：
在25℃下向(2R,3R,4R,5R)-二乙酸5-(6-(双(叔丁氧基羰基)氨基)-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-2-((2-乙氧基-2-氧代-1-(噻唑-4-基)乙氧基)甲基)-3-乙炔基四氢呋喃-3,4-二基酯(310mg)于DCM(3mL)中的溶液中添加TFA(2mL)。搅拌混合物2小时，然后减压浓缩，得到粗制(2R,3R,4R,5R)-二乙酸5-(6-氨基-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-2-((2-乙氧基-2-氧代-1-(噻唑-4-基)乙氧基)甲基)-3-乙炔基四氢呋喃-3,4-二基酯。
在0℃下向粗制(2R,3R,4R,5R)-二乙酸5-(6-氨基-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-2-((2-乙氧基-2-氧代-1-(噻唑-4-基)乙氧基)甲基)-3-乙炔基四氢呋喃-3,4-二基酯于THF(1mL)和H2O(1mL)中的溶液中添加LiOH单水合物(100mg)。在25℃下搅拌所得混合物过夜，然后减压除去有机挥发物。将混合物冷却至0℃，然后用1N HCl水溶液将其酸化至pH为约6并减压浓缩。通过制备型反相HPLC纯化粗残余物，得到呈白色固体形式的2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氨基-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢-呋喃-2-基)甲氧基)-2-(噻唑-4-基)乙酸的非对映异构混合物(大约1:1)。
1H NMR(CD3OD,300MHz)δ8.84-9.00(m,2H),7.67-7.68(m,1H),6.02-6.06(m,1H),5.28-5.32(d,J＝12.27Hz,1.5H),5.14-5.16(d,J＝7.56Hz,0.5H),4.24-4.28(m,1H),3.69-4.09(m,2H),3.16(s,0.5H),2.95(s,0.5H)；LC/MS[M+H]＝467.0。
实施例180和181
合成(S)-2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氨基-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-3-苯基-2-(噻唑-4-基)丙酸
和
(R)-2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氨基-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-3-苯基-2-(噻唑-4-基)丙酸
如上文实施例169中所描述但用苯甲基溴和2-氯腺嘌呤代替3-(溴甲基)噻吩和2-氯-N-异丙基-9嘌呤-6-胺来进行，得到一对非对映异构产物，任意指定其立体构型。将两种产物通过制备型HPLC纯化并以白色固体形式分离。
(S)-2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氨基-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-3-苯基-2-(噻唑-4-基)丙酸：1H NMR(CD3OD,300MHz)δ8.95-8.96(d,J＝2.01Hz,1H),8.34(s,1H),7.54-7.55(d,J＝2.01Hz,1H),6.97-7.12(m,5H),5.97-5.99(d,J＝6.99Hz,1H),4.97-4.99(d,J＝7.08Hz,1H),4.27-4.29(t,J＝4.23,3.18Hz,1H),3.88-3.99(m,2H),3.62-3.79(q,J＝14.82,39.24Hz,2H),2.97(s,1H)；LC/MS[M+H]＝557.0。
(R)-2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氨基-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-3-苯基-2-(噻唑-4-基)丙酸：1H NMR(CD3OD,300MHz)δ8.95-8.96(m,1H),7.99(s,1H),7.70-7.71(d,J＝1.98Hz,1H),7.05-7.25(m,5H),5.92-5.94(d,J＝7.02Hz,1H),4.85-4.87(d,J＝7.29Hz,1H),4.20-4.22(q,J＝2.64Hz,1H),3.58-3.90(m,4H),3.02(s,1H)；LC/MS[M+H]＝557.0。
实施例182
合成3-(2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氨基-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-羧基-2-(噻唑-4-基)乙基)苯甲酸
/>
如上文实施例179中所描述但用3-(溴甲基)苯甲酸甲酯代替BnBr来进行，得到作为非对映异构体的混合物(大约1:1)的标题化合物并以白色固体形式分离。
1H NMR(CD3OD,300MHz)δ8.99-9.01(m,1H),8.33(s,0.5H),8.14(s,0.5H),7.66-7.88(m,3H),7.45-7.48(d,J＝7.29Hz,0.5H),7.36-7.39(d,J＝7.86Hz,0.5H),7.17-7.22(t,J＝7.56Hz,0.5H),7.00-7.05(d,J＝7.47Hz,0.5H),5.99-6.01(d,J＝7.29Hz,0.5H),5.93-5.95(d,J＝6.87Hz,0.5H),5.00-5.03(d,J＝7.38Hz,0.5H),4.90-4.95(d,J＝6.80Hz,0.5H),4.23-4.31(m,1H),3.80-4.01(m,2H),3.63-3.69(m,2H),3.01(s,0.5H),2.92(s,0.5H)；LC/MS[M+H]＝601.0。
实施例183
合成2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氨基-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-(噻唑-4-基)-3-(3-(三氟甲氧基)苯基)丙酸
如上文实施例179中所描述但用1-(溴甲基)-3-(三氟甲氧基)苯代替BnBr来进行，得到作为非对映异构体的混合物(大约1:1)的标题化合物并以白色固体形式分离。
1H NMR(CD3OD,300MHz)δ8.97-9.00(m,1H),8.41(s,0.5H),8.26(s,0.5H),7.68-7.69(d,J＝1.92Hz,0.5H),7.62-7.63(d,J＝1.83Hz,0.5H),6.88-7.21(m,4H),6.00-6.02(d,J＝7.14Hz,0.5H),5.94-5.96(d,J＝6.78Hz,0.5H),5.04-5.07(d,J＝7.44Hz,0.5H),4.91-4.94(d,J＝6.87Hz,0.5H),4.28-4.33(m,1H),3.62-3.96(m,4H),2.98(s,0.5H),2.96(s,0.5H)；LC/MS[M+H]＝641.0。
实施例184
合成2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氨基-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-(噻唑-4-基)戊-4-炔酸
如上文实施例179中所描述但用炔丙基溴代替BnBr来进行，得到作为非对映异构体的混合物(大约1:1)的标题化合物并以白色固体形式分离。
1H NMR(CD3OD,300MHz)δ8.95(s,1H),8.79-8.83(d,J＝13.95Hz,1H),7.73(s,1H),6.04-6.06(d,J＝7.05Hz,1H),4.97-5.05(dd,J＝7.29,17.91Hz,1H),4.24-4.30(m,1H),3.69-3.94(m,2H),3.34-3.38(m,2H),3.04(s,0.5H),2.93(s,0.5H),2.22-2.30(dt,J＝1.74,19.62Hz,1H)；LC/MS[M+H]＝505.0。
实施例185和186
合成(S)-2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氨基-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-N-羟基-2-(噻唑-4-基)乙酰胺
和
(S)-2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氨基-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-N-羟基-2-(噻唑-4-基)乙酰胺
向(2R,3R,4R,5R)-二乙酸5-(6-氨基-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-2-((2-乙氧基-2-氧代-1-(噻唑-4-基)乙氧基)甲基)-3-乙炔基四氢呋喃-3,4-二基酯(2g，3.45毫摩尔)于MeOH(20mL)中的溶液中添加含50％NH2OH的H2O(30mL)。在40℃下搅拌反应混合物1小时，然后减压浓缩。通过制备型反相HPLC纯化粗残余物，得到一对非对映异构标题产物，任意指定其立体构型。两种产物都以白色固体形式分离。
(S)-2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氨基-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-N-羟基-2-(噻唑-4-基)乙酰胺：1H NMR(CD3OD,300MHz)δ9.02-9.03(d,J＝1.77Hz,1H),8.45(s,1H),7.68-7.69(d,J＝1.8Hz,1H),5.98-6.01(d,J＝6.96Hz,1H),4.92-4.95(d,J＝6.93Hz,1H),4.29-4.32(q,J＝2.82,2.28Hz,1H),3.91-4.10(m,2H),3.18(s,1H)；LC/MS[M+H]＝482.0。
(R)-2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氨基-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-N-羟基-2-(噻唑-4-基)乙酰胺：1H NMR(CD3OD,300MHz)δ8.97(s,1H),8.46(s,1H),7.68(s,1H),5.97-6.00(d,J＝6.96Hz,1H),4.88-4.90(d,J＝6.93Hz,1H),4.33-4.35(m,1H),3.96-4.08(m,2H),3.12(s,1H)；LC/MS[M+H]＝482.0。
实施例187和188
合成(S)-2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(2-氯-6-(甲氨基)-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-3-苯基-2-(噻唑-4-基)丙酸
和
(R)-2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(2-氯-6-(甲氨基)-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-3-苯基-2-(噻唑-4-基)丙酸
如上文实施例170和171中所描述但用2-氯-N-甲基-9H-嘌呤-6-胺代替2-氯-N-异丙基-9H-嘌呤-6-胺来进行，得到作为一对非对映异构体(大约1:1)的标题化合物并以白色固体形式分离。
(S)-2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(2-氯-6-(甲氨基)-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基-四氢呋喃-2-基)甲氧基)-3-苯基-2-(噻唑-4-基)丙酸：1H NMR(CD3OD,300MHz)δ8.99(s,1H),7.97(s,1H),7.69(s,1H),7.08-7.22(m,5H),5.93-5.95(d,J＝6.9Hz,1H),4.96-4.98(d,J＝6.0Hz,1H),3.59-4.22(m,5H),3.01-3.06(m,4H)；LC/MS[M+H]＝571.0。
(R)-2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(2-氯-6-(甲氨基)-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-3-苯基-2-(噻唑-4-基)丙酸：1H NMR(CD3OD,300MHz)δ8.97-8.98(d,J＝1.83Hz,1H),8.15(s,1H),7.58-7.59(d,J＝1.77Hz,1H),6.94-7.09(m,5H),5.98-6.00(d,J＝7.17Hz,1H),4.98-5.01(d,J＝7.26Hz,1H),4.27-4.29(t,J＝3.48Hz,1H),3.93(m,2H),3.58-3.80(q,J＝14.46,38.7Hz,2H),3.07(s,3H),2.94(s,1H)；LC/MS[M+H]＝571.0。
实施例189和190
合成(S)-2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氨基-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-氰基-3-苯基丙酸
和
(R)-2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氨基-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-氰基-3-苯基丙酸
步骤1：
向(2R,3R,4R,5R)-二乙酸5-(6-N,N'-(双(叔丁氧基羰基)氨基)-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-2-(羟甲基)四氢呋喃-3,4-二基酯(510mg，0.836mmol)于甲苯(5mL)中的溶液中添加2-氰基-2-重氮乙酸乙酯(134mg，0.961mmol)。真空浓缩混合物。将混合物溶解于无水甲苯(2mL)中并接着在氩气气氛下添加Rh2(OAc)4(8mg，17umol)。在80℃下搅拌并加热物质30分钟，然后在80℃下经60分钟添加另外的2-氰基-2-重氮乙酸乙酯(254mg，1.82mmol)。在80℃下进一步加热反应物80分钟，然后将其冷却至室温并浓缩。通过CombiFlash硅胶色谱法(5-65％EtOAc/己烷)纯化粗产物，得到呈灰白色泡沫形式的(2R,3R,4R,5R)-二乙酸5-(6-N,N'-(双(叔丁氧基羰基)氨基)-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-2-((1-氰基-2-乙氧基-2-氧代乙氧基)甲基)-3-乙炔基四氢呋喃-3,4-二基酯(230mg，38％产率)的非对映异构混合物。
步骤2：
向烘箱干燥的烧瓶中装入((2R,3R,4R,5R)-二乙酸5-(6-N,N'-(双(叔丁氧基羰基)氨基)-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-2-((1-氰基-2-乙氧基-2-氧代乙氧基)甲基)-3-乙炔基四氢呋喃-3,4-二基酯(230mg，0.319mmol)并溶解于无水DMF(4mL)中。向此混合物中添加Cs2CO3(208mg，0.639mmol)并接着添加苯甲基溴(109mg，0.639mmol)。在25℃下搅拌混合物30分钟，然后用冷的饱和NH4Cl水溶液(40mL)稀释并用EtOAc(40mL)萃取。用EtOAc(2×40mL)萃取水相。合并的有机层经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。通过CombiFlash硅胶柱色谱法(10-70％EtOAc/己烷)纯化粗产物，得到呈灰白色固体形式的作为一对非对映异构体的(2R,3R,4R,5R)-二乙酸5-(6-N,N'-(双(叔丁氧基羰基)氨基)-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-2-(((2-氰基-1-乙氧基-1-氧代-3-苯基丙-2-基)氧基)甲基)-3-乙炔基四氢-呋喃-3,4-二基酯(215mg，83％产率)。
步骤3：
将(2R,3R,4R,5R)-二乙酸5-(6-N,N'-(双(叔丁氧基羰基)氨基)-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-2-(((2-氰基-1-乙氧基-1-氧代-3-苯基丙-2-基)氧基)甲基)-3-乙炔基四氢呋喃-3,4-二基酯(215mg，0.265mmol)于TFA(1mL)在DCM(1mL)中的溶液中的溶液搅拌2小时，然后减压浓缩。使残余物与DCM(8×8mL)减压共沸。将残余物溶解于MeOH于H2O中的混合物(2.2mL，5:1＝v:v)中，并接着添加LiOH·H2O(77mg，1.86mmol，7当量)和THF(0.5mL)。在环境温度下搅拌混合物40分钟，然后浓缩至干燥。将残余物溶解于H2O(15mL)中。用EtOAc(2×10mL)萃取水相。用1N HCl水溶液将水相酸化至pH 2.5。用EtOAc(3×50mL)萃取水相。将合并的有机层用盐水(50mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。通过制备型反相HPLC纯化粗残余物，得到作为一对非对映异构体的标题化合物：(S)-2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氨基-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-氰基-3-苯基丙酸(33.7mg，26％产率)和(R)-2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氨基-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-氰基-3-苯基丙酸(30mg，23％产率)，任意指定其立体构型。两者都以灰白色固体形式分离。
(S)-2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氨基-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-氰基-3-苯基丙酸：1H NMR(CD3OD,300MHz)δ8.32(bs,1H),7.20-7.36(m,5H),6.02(d,J＝7.00Hz,1H),4.68(d,J＝7.02Hz,1H),4.33-4.37(m,1H),4.18(dd,J＝9.91,3.96Hz,1H),3.99(dd,J＝9.94,2.19Hz,1H),3.41(bs,2H),3.03(s,1H)；LC/MS[M+H]＝499.1。
(R)-2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氨基-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-氰基-3-苯基丙酸：1H NMR(CD3OD,300MHz)δ8.04(bs,1H),7.21-7.39(m,5H),5.99(d,J＝6.90Hz,1H),4.79(d,J＝6.93Hz,1H),4.31-4.36(m,1H),4.19(dd,J＝10.07,4.34Hz,1H),4.12(dd,J＝10.10,3.30Hz,1H),3.38-3.44(m,2H),3.09(s,1H)；LC/MS[M+H]＝499.1。
实施例191和192
合成(S)-2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氨基-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-3-苯基-2-(1H-四唑-5-基)丙酸
和
(R)-2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氨基-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-3-苯基-2-(1H-四唑-5-基)丙酸
步骤1：
在25℃下在氩气气氛下向1H-四唑-5-乙酸乙酯(3g，19.21mmol)于DMF(40mL)中的溶液中添加2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基甲基氯(4.1mL，23.05mmol)和粉末状碳酸钾(5.31g，38.42mmol)。搅拌反应混合物过夜，然后用盐水(70mL)和EtOAc(70mL)稀释。用EtOAc(2×70mL)萃取水相。将合并的有机层用盐水(70mL)和水(70mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥并浓缩。通过硅胶柱色谱法(15-48％EtOAc/己烷)纯化残余物，得到呈淡黄色油形式的2-(2-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-2H-四唑-5-基)乙酸乙酯(2.379g)。
步骤2：
在氩气气氛下向2-(2-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-2H-四唑-5-基)乙酸乙酯(2.379g，8.31mmol)于无水乙腈(25mL)中的溶液中添加DBU(1.87mL，12.47mmol)。经5分钟以3等份向此混合物中添加4-乙酰胺基苯磺酰基叠氮化物(2.395g，9.96mmol)。搅拌反应混合物3.5小时，减压除去有机挥发物。通过硅胶柱色谱法(20％EtOAc/己烷)纯化残余物，得到呈油形式的2-重氮-2-(2-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-2H-四唑-5-基)乙酸乙酯(2.316g)。
步骤3：
在20℃下在N2气氛下向(2R,3R,4R,5R)-二乙酸5-(6-(双(叔丁氧基羰基)氨基)-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-2-(羟甲基)四氢呋喃-3,4-二基酯(2g，3.28mmol)于甲苯(8mL)中的溶液中添加Rh2(OAc)4(29mg，0.066mmol，0.066当量)和2-重氮-2-(2-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)-甲基)-2H-四唑-5-基)乙酸乙酯(1.08g，3.44mmol，1.05当量)。在75℃下搅拌混合物1小时，然后经80分钟添加另外的2-重氮-2-(2-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-2H-四唑-5-基)乙酸乙酯(720mg)。将反应混合物冷却至环境温度并浓缩。通过Combi-Flash硅胶柱(5-80％EtOAc/己烷)纯化粗物质，得到呈胶状物形式的(2R,3R,4R,5R)-二乙酸5-(6-(双(叔丁氧基羰基)氨基)-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-2-((2-乙氧基-2-氧代-1-(2-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-2H-四唑-5-基)乙氧基)甲基)-3-乙炔基四氢呋喃-3,4-二基酯的非对映异构混合物(1.608g)。
步骤4：
(2R,3R,4R,5R)-二乙酸5-(6-(双(叔丁氧基羰基)氨基)-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-2-((2-乙氧基-2-氧代-1-(2-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-2H-四唑-5-基)乙氧基)甲基)-3-乙炔基四氢呋喃-3,4-二基酯(1.555g，1.739mmol)于无水甲苯(10mL)中的溶液。减压浓缩混合物。将残余物溶解于无水DMF(10mL)中并接着添加苯甲基溴(1.189g，6.96mmol)和经干燥的Cs2CO3(1.133g，3.478mmol)。在25℃下搅拌混合物5.5小时，然后用饱和NH4Cl水溶液(60mL)稀释。用EtOAc(3×60mL)萃取水相。将合并的有机层用盐水(60mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。通过快速硅胶柱色谱法(5-65％EtOAc/己烷)纯化粗产物，得到呈泡沫形式的(2R,3R,4R,5R)-二乙酸5-(6-(双(叔丁氧基羰基)氨基)-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-2-(((1-乙氧基-1-氧代-3-苯基-2-(2-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-2H-四唑-5-基)丙-2-基)氧基)甲基)-3-乙炔基四氢呋喃-3,4-二基酯的非对映异构混合物(1.041g)。
步骤5：
向(2R,3R,4R,5R)-二乙酸5-(6-(双(叔丁氧基羰基)氨基)-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-2-(((1-乙氧基-1-氧代-3-苯基-2-(2-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-2H-四唑-5-基)丙-2-基)氧基)甲基)-3-乙炔基四氢呋喃-3,4-二基酯(1.041g，1.057mmol)于MeOH和H2O的混合物(12mL，6:1＝v:v)中的溶液中添加粉末状LiOH·H2O(349mg，8.5mmol)。在23℃下搅拌混合物16小时，然后浓缩至干燥。将残余物溶解于H2O(40mL)中并用EtOAc(40mL)萃取。用1N HCl水溶液将水相酸化至pH2.5并用EtOAc(3×40mL)萃取。将合并的有机层用盐水(40mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩，得到呈油形式的2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(6-((叔丁氧基羰基)氨基)-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-3-苯基-2-(2-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-2H-四唑-5-基)丙酸的非对映异构混合物(784mg)。
步骤6：
在0℃下在氩气气氛下向2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(6-((叔丁氧基羰基)氨基)-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-3-苯基-2-(2-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-2H-四唑-5-基)丙酸(138mg，0.179mmol)于DCM(0.9mL)中的溶液中添加TFA(0.9mL)。在0℃下搅拌混合物5小时并且然后搅拌至环境温度，保持15分钟，然后减压除去有机挥发物。使残余物与DCM(3×15mL)减压共沸。通过制备型反相HPLC纯化粗残余物，得到作为一对非对映异构体的两种标题产物：来自第一洗脱份的(S)-2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氨基-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-3-苯基-2-(1H-四唑-5-基)丙酸和来自后一洗脱份的(R)-2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氨基-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-3-苯基-2-(1H-四唑-5-基)丙酸。两者都以灰白色固体形式分离。
(S)-2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氨基-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-3-苯基-2-(1H-四唑-5-基)丙酸：1H NMR(CD3OD,300MHz)；δ8.37(s,1H),7.11-7.23(m,5H),5.96(d,J＝6.57Hz,1H),4.81(d,J＝6.57Hz,1H),4.25-4.30(m,1H),4.01(dd,J＝10.19,2.29Hz,1H),3.78(d,J＝13.90Hz,1H),3.67(d,J＝13.90Hz 1H),3.72-3.79(m,1H),3.06(s,1H)；LC/MS[M+H]＝542.2。
(R)-2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氨基-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-3-苯基-2-(1H-四唑-5-基)丙酸：1H NMR(CD3OD,300MHz)；δ8.37(s,1H),6.92-7.11(m,5H),6.01(d,J＝7.11Hz,1H),5.06(d,J＝7.11Hz,1H),4.35-4.39(m,1H),4.11(dd,J＝10.06,2.52Hz,1H),4.01(dd,J＝10.06,5.49Hz,1H),3.80(d,J＝14.75Hz1H),3.67(d,J＝14.75Hz 1H),2.96(s,1H)；LC/MS[M+H]＝542.2。
实施例193和194
合成(S)-2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氨基-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-(2-苯基噻唑-4-基)乙酸
和
(R)-2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氨基-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-(2-苯基噻唑-4-基)乙酸
如实施例179中所描述但用通过由Lefebvre,Quentin等人,(ChemicalCommunications 2014,50,6617-6619)描述的程序制备的(2-苯基噻唑-4-基)重氮乙酸乙酯代替2-重氮-2-(噻唑-4-基)乙酸乙酯来进行，得到作为一对非对映异构体(大约1:1)的标题化合物。任意指定立体构型。两者都以灰白色固体形式分离。
(S)-2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氨基-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-(2-苯基噻唑-4-基)乙酸：1H NMR(CD3OD,300MHz)；δ9.03(bs,1H),7.91-7.97(m,2H),7.60(s,1H),7.39-7.45(m,3H),6.06(d,J＝7.45Hz,1H),5.28(s,1H),4.92(d,J＝7.45Hz,1H),4.29-4.33(m,1H),4.12(dd,J＝10.45,2.51Hz,1H),4.01(dd,J＝10.46,2.56Hz,1H),2.92(s,1H)；LC/MS[M+H]＝543.1。
(R)-2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氨基-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-(2-苯基噻唑-4-基)乙酸：1H NMR(CD3OD,300MHz)；δ9.15(s,1H),7.90-7.96(m,2H),7.61(s,1H),7.38-7.44(m,3H),6.09(d,J＝7.48Hz,1H),5.23(d,J＝7.48Hz,1H),5.30(s,1H),4.26-4.29(m,1H),3.93(dd,J＝10.67,2.18Hz,1H),3.76(dd,J＝10.64,2.48Hz,1H),3.17(s,1H)；LC/MS[M+H]＝543.2。
实施例195
合成4-((((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氨基-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(羧基)甲基)噻唑-2-甲酸
步骤1：
向微波小瓶中装入含硫代草胺酸乙酯(1.91g，14.36mmol)和4-溴乙酰乙酸乙酯(3g，14.36mmol)的无水甲苯(27mL)。在微波反应器中在90℃下照射混合物1小时。将反应混合物冷却至环境温度，并且倾析溶剂并接着浓缩。通过CombiFlash硅胶色谱法(2-56％EtOAc/己烷)纯化粗残余物，得到呈浓稠油形式的4-(2-乙氧基-2-氧代乙基)噻唑-2-甲酸乙酯(890mg，26％产率)。
步骤2：
在氩气气氛下向4-(2-乙氧基-2-氧代乙基)噻唑-2-甲酸乙酯(890mg，3.66mmol)于无水乙腈(12mL)中的溶液中添加DBU(0.82mL，5.49mmol)和4-乙酰胺基苯磺酰基叠氮化物(1.055g，4.39mmol)。搅拌反应混合物1.5小时，然后减压浓缩。通过硅胶柱色谱法(20％EtOAc/己烷)纯化残余物，得到呈微黄色固体形式的4-(1-重氮-2-乙氧基-2-氧代乙基)噻唑-2-甲酸乙酯(894mg，90％产率)。
步骤3：
如实施例179中所描述但用4-(1-重氮-2-乙氧基-2-氧代乙基)噻唑-2-甲酸乙酯代替2-重氮-2-(噻唑-4-基)乙酸乙酯来进行，得到作为对映异构体的混合物(大约1:1)的标题化合物并以灰白色固体形式分离。
异构体1：1H NMR(CD3OD,300MHz):δ8.93(s,1H),7.91(s,1H),6.06(d,J＝7.42Hz,1H),5.39(s,1H),5.13(d,J＝7.42Hz,1H),4.24-4.31(m,1H),4.03-4.09(m,1H),3.75-3.83(m,1H),2.95(s,1H)；LC/MS[M+H]＝511.1。
异构体2：1H NMR(CD3OD,300MHz):δ8.87(s,1H),7.93(s,1H),6.04(d,J＝7.42Hz,1H),5.33(s,1H),4.91(d,J＝7.45Hz,1H),4.24-4.31(m,1H),3.92-4.01(m,2H),3.19(s,1H)；LC/MS[M+H]＝511.1。
实施例196
合成4-(1-(((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氨基-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-1-羧基-2-苯乙基)噻唑-2-甲酸
如上文实施例179中所描述但用(2R,3R,4R,5R)-二乙酸5-(6-N,N'-(双(叔丁氧基羰基)氨基))-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-2-((2-乙氧基-1-(2-(乙氧羰基)噻唑-4-基)-2-氧代乙氧基)甲基)-3-乙炔基四氢呋喃-3,4-二基酯代替(2R,3R,4R,5R)-二乙酸5-(6-N,N'-(双(叔丁氧基羰基)氨基)-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-2-(羟基-甲基)四氢呋喃-3,4-二基酯，得到作为非对映异构体的混合物(大约1:1)的标题化合物并以灰白色固体形式分离。
异构体1：1H NMR(CD3OD,300MHz):δ8.17(bs,1H),7.81(s,1H),6.92-7.25(m,5H),5.95(d,J＝7.02Hz,1H),4.89(d,J＝7.02Hz,1H),4.29-4.34(m,1H),3.59-4.05(m,4H),3.01(s,1H)；LC/MS[M+H]＝601.1。
异构体2：1H NMR(CD3OD,300MHz):δ8.05(bs,1H),7.90(s,1H),6.92-7.25(m,5H),6.00(d,J＝7.41Hz,1H),5.04(d,J＝7.42Hz,1H),4.21-4.26(m,1H),3.59-4.05(m,4H),3.06(s,1H)；LC/MS[M+H]＝601.1。
实施例197
合成2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氨基-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-(4-(2-氨基吡啶-3-基)苯甲基)丙二酸
如上文实施例22中所描述但用3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)吡啶-2-胺代替(2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)硼酸进行，得到呈白色固体形式的标题化合物。
1H NMR(CD3OD,300MHz)δ8.43(s,1H),7.85-7.87(dd,J＝1.5,6.42Hz,1H),7.65-7.68(dd,J＝1.53,7.38Hz,1H),7.37-7.40(d,J＝8.13Hz,2H),7.09-7.12(d,J＝8.07Hz,2H),6.88-6.93(t,J＝6.9Hz,1H),5.99-6.01(d,J＝6.72Hz,1H),4.77-4.79(d,J＝7.0,1H),4.37-4.40(m,1H),3.98-4.12(m,2H),3.34-3.42(m,2H),3.09(s,1H)；LC/MS[M+H]＝610.1。
实施例198和199
合成(S)-3-([1,1'-联苯]-4-基)-2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氨基-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3,4-二羟基-3-甲基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-(噻唑-4-基)丙酸
和
(R)-3-([1,1'-联苯]-4-基)-2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氨基-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3,4-二羟基-3-甲基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-(噻唑-4-基)丙酸
如上文实施例1中所描述但用(2R,3R,4R,5R)-二乙酸5-(6-(N,N'-双(叔丁氧基羰基)氨基)-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-2-(羟基甲基)-3-甲基四氢呋喃-3,4-二基酯和2-重氮-2-(噻唑-4-基)乙酸甲酯代替(2R,3R,4R,5R)-二乙酸5-(6-(双(叔丁氧基羰基)氨基)-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-2-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)-甲基)-3-乙炔基四氢呋喃-3,4-二基酯和2-重氮丙二酸二乙酯来进行，得到一对非对映异构标题产物(大约1:1)，任意指定其立体构型。两种产物通过制备型HPLC纯化并以白色固体形式分离。
(S)-3-([1,1'-联苯]-4-基)-2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氨基-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3,4-二羟基-3-甲基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-(噻唑-4-基)丙酸：1H NMR(CD3OD,300MHz)δ9.04(s,1H),8.42(s,1H),7.74(s,1H),7.21-7.45(m,9H),6.00-6.03(d,J＝8Hz,1H),4.67-4.70(d,J＝7Hz,1H),4.13(s,1H),3.88-3.85(m,2H),3.62-3.66(d,J＝14Hz,1H),3.44-3.47(d,J＝11Hz,1H),1.37(s,3H)；LC/MS[M+H]＝623.2。
(R)-3-([1,1'-联苯]-4-基)-2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氨基-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3,4-二羟基-3-甲基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-(噻唑-4-基)丙酸：1H NMR(CD3OD,300MHz)δ9.04(s,1H),8.21(s,1H),7.27-7.69(m,10H),5.93-5.95(d,J＝7Hz,1H),4.52-4.55(d,J＝8Hz,1H),4.04(s,1H),3.79-3.85(m,3H),1.36(s,3H)；LC/MS[M+H]＝623.2。
实施例200
合成4'-(2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氨基-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3,4-二羟基-3-甲基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-羧基-2-(噻唑-4-基)乙基)-[1,1'-联苯]-2-甲酸
如上文实施例179中所描述但用(2R,3R,4R,5R)-二乙酸5-(6-(N,N'-双(叔丁氧基羰基)氨基)-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-2-((2-甲氧基-2-氧代-1-(噻唑-4-基)乙氧基)甲基)-3-甲基四氢呋喃-3,4-二基酯和4-(溴甲基)-1,1'-联苯代替(2R,3R,4R,5R)-二乙酸5-((6-N,N'-双(叔丁氧基羰基)氨基)-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-2-(羟基-甲基)四氢呋喃-3,4-二基酯和BnBr来进行，得到作为非对映异构体的混合物(大约1:1)的标题化合物并以灰白色固体形式分离。
LC/MS[M+H]＝667.2。
实施例201
合成4'-(2-(((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氨基-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3,4-二羟基-3-甲基四氢呋喃-2-基)甲氧基)-2-羧基-2-(1H-四唑-5-基)乙基)-[1,1'-联苯]-2-甲酸
步骤1：
在25℃下在氩气气氛下向2-(1H-四唑-5-基)乙酸乙酯(500mg，3.24mmol)和(三甲基甲硅烷基)乙氧基甲基氯(0.69mL，3.89mmol)于无水DMF(7mL)中的溶液中添加粉末状碳酸钾(896mg，6.48mmol)。搅拌反应混合物过夜，然后用H2O(30mL)稀释并用EtOAc(3×30mL)萃取。将合并的有机层用盐水(30mL)和水(30mL)洗涤，并且然后经无水Na2SO4干燥并浓缩。通过CombiFlash硅胶柱色谱法(8-58％EtOAc/己烷)纯化残余物，得到呈油形式的2-(2-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-2H-四唑-5-基)乙酸乙酯(200mg)。
步骤2至6：
如上文实施例1中所描述但用2-(2-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-2H-四唑-5-基)乙酸乙酯代替2-(噻唑-4-基)乙酸甲酯来进行，得到一对非对映异构标题产物(大约1:1)，任意指定其立体构型。两种产物通过制备型HPLC纯化并以灰白色固体形式分离。
1H NMR(CD3OD,300MHz)：异构体1：δ8.50(s,1H),7.73-7.79(m,2H),7.31-7.56(m,3H),7.01-7.24(m,4H),6.04(d,J＝7.87Hz,1H),4.64(d,J＝7.88Hz,1H),4.10-4.14(m,1H),3.46-4.00(m,4H),1.35(s,3H)；异构体2：δ8.31(s,1H),7.73-7.79(m,2H),7.31-7.56(m,3H),7.01-7.24(m,4H),5.99(d,J＝7.75Hz,1H),4.48(d,J＝7.72Hz,1H),4.19-4.23(m,1H),3.46-4.00(m,4H),1.42(s,3H)；LC/MS[M+H]＝652.2。
实施例202
合成(((((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氨基-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(羟基)磷酰基)甲基)膦酸
步骤1：
向(2R,3R,4R,5R)-二乙酸5-(6-(双(叔丁氧基羰基)氨基)-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-2-(羟甲基)四氢呋喃-3,4-二基酯(329mg，0.539mmol)于i-PrOH(1.6mL)、MeOH(1.1mL)和H2O(0.8mL)中的溶液中添加粉末状LiOH(111mg，2.69mmol)。搅拌混合物30分钟，然后减压除去有机挥发物，并用H2O(12mL)稀释残余物。用1N HCl水溶液将水层的pH调节至约3并用EtOAc(3×12mL)萃取。合并的有机层经MgSO4干燥，过滤并浓缩，得到(2-氯-9-((2R,3R,4S,5R)-4-乙炔基-3,4-二羟基-5-(羟甲基)四氢-呋喃-2-基)-9H-嘌呤-6-基)氨基甲酸叔丁酯，其不经进一步纯化即直接用于下一步骤中。
步骤2：
将(2-氯-9-((2R,3R,4S,5R)-4-乙炔基-3,4-二羟基-5-(羟甲基)-四氢呋喃-2-基)-9H-嘌呤-6-基)氨基甲酸叔丁酯(0.539mmol)溶解于DCM(1mL)和TFA(0.5mL)的混合物中。搅拌反应混合物3小时，然后将其浓缩。将残余物溶解于DCM(10mL)中并再次浓缩(重复5个循环)。在真空烘箱中进一步干燥残余物18小时，得到呈灰白色固体形式的粗制(2R,3S,4R,5R)-5-(6-氨基-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-2-(羟甲基)四氢呋喃-3,4-二醇。
步骤3：
在氩气气氛下向经烘箱干燥的烧瓶中装入粗制(2R,3S,4R,5R)-5-(6-氨基-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-2-(羟甲基)四氢呋喃-3,4-二醇和无水磷酸三甲酯(2.5mL)。在0℃下冷却混合物并且接着经10分钟滴加亚甲基双(膦酰二氯)(673mg，2.7mmol)于无水磷酸三甲酯(1.1mL)中的溶液。在0℃下搅拌反应混合物3小时，然后滴加碳酸三乙铵(1M，1.9mL)的溶液。在0℃下搅拌混合物15分钟，并且然后在环境温度下搅拌2小时。通过制备型反相HPLC纯化粗混合物，得到不纯产物。通过反相HLPC进一步纯化这种不纯产物两次，得到呈浅棕色固体形式的所需(((((2R,3S,4R,5R)-5-(6-氨基-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(羟基)磷酰基)甲基)-膦酸(34mg)。
1H NMR(CD3OD,300MHz):δ8.75(bs,1H),6.07(br,1H),4.86(bs,1H),4.31-4.61(m,3H),3.20(s,1H),2.54(br,1H)；LC/MS[M+H]＝484.0。
实施例203
合成(((((2R,3S,4R,5R)-5-(6-(苯甲基氨基)-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(羟基)磷酰基)甲基)膦酸
步骤1：
在氮气下，将(3aR,5R,6R,6aR)-5-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)-氧基)甲基)-6-乙炔基-2,2-二甲基四氢呋喃并[2,3-d][1,3]间二氧杂环戊烯-6-醇(14.48g，32mmoL)(使用描述于Hulpia,F.等人,Bioorg.Med.Chem.Lett.2016,26,1970-1972中的方法制备)于乙酸(130mL)中的溶液冷却至14℃至17℃并用乙酸酐(32.01mL，341mmoL，10.7当量)和浓硫酸(576uL，10.8mmoL，0.34当量)处理。搅拌2.5小时后，将混合物用乙酸乙酯(各200mL)稀释并用水洗涤。用乙酸乙酯(25mL)萃取水相，并且将合并的有机溶液用碳酸氢钠(饱和水溶液，200mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。通过硅胶柱快速柱色谱法(0-3％乙酸乙酯/二氯甲烷)纯化残余油状物，得到作为端基差向异构体混合物的(3R,4R,5R)-三乙酸5-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-4-乙炔基四氢呋喃-2,3,4-三基酯并以良好产率以白色固体(9.5g，55％)形式分离。
步骤2：
在氮气下，在室温下搅拌含2,6-二氯腺嘌呤(2.91g，15.4mmoL，1.01当量)和N,O-双(三甲基甲硅烷基)乙酰胺(4.87mL，19.6mmoL，1.29当量)的无水乙腈(90mL)。接下来，添加(2R,3R,4R,5R)-乙酸2,4-双(乙酰氧基)-5-{[(叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基]甲基}-4-乙炔基氧杂环戊-3-基酯(8.2g，15.22mmoL)于无水乙腈(10mL)中的溶液，接着滴加三氟甲烷磺酸三甲基甲硅烷酯(3.67mL，20.3mmoL，1.33当量)。将反应物升温至50℃，保持18小时，然后冷却至室温。添加饱和碳酸氢钠水溶液(10mL)，并且搅拌混合物十分钟。用乙酸乙酯(3×100mL)萃取所得混合物，并且将合并的有机层干燥(Na2SO4)，过滤，并浓缩。通过硅胶柱快速柱色谱法(0-30％乙酸乙酯/己烷)纯化残余物，得到呈白色固体形式的(2R,3R,4R,5R)-二乙酸2-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-5-(2,6-二氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基四氢呋喃-3,4-二基酯(8.2g，81％)。
步骤3：
将(2R,3R,4R,5R)-二乙酸2-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-5-(2,6-二氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基四氢呋喃-3,4-二基酯(1.6g，2.4mmoL)于无水THF(25mL)中的溶液冷却至0℃并用乙酸(0.192mL，3.36mmoL)和含氟化四丁铵的THF(1N，3.36mL，3.36mmoL)处理。添加完成后，将反应物升温至室温并继续搅拌3小时。浓缩反应混合物。经由硅胶快速柱色谱法(0-50％乙酸乙酯/己烷)纯化粗残余物，得到呈白色泡沫形式的(2R,3R,4R,5R)-二乙酸5-(2,6-二氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-2-(羟甲基)四氢呋喃-3,4-二基酯(0.88g，86％)。
步骤4：
将(2R,3R,4R,5R)-二乙酸5-(2,6-二氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-2-(羟基-甲基)四氢呋喃-3,4-二基酯(100mg，0.233mmoL)于磷酸三甲酯(4mL)中的溶液冷却至0℃并用亚甲基双(膦酰二氯)(116mg，0.467mmoL，2当量)于磷酸三甲酯(4mL)中的第二溶液处理。添加完成后，继续搅拌2小时，然后移除冷却浴并继续搅拌18小时。在剧烈搅拌下缓慢添加碳酸氢铵(0.7M TEAB水溶液，pH 8.5)，直至不再观测到气体逸出为止。一旦淬灭，就添加NaHCO3(饱和水溶液；5mL)并且在室温下搅拌混合物1小时。将反应混合物用二氯甲烷洗涤，用2N HCl酸化至pH为约1并用乙酸乙酯(10×50mL)萃取。合并的有机层经硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩。使残余油状物与甲苯(3×10mL)共沸，得到呈灰白色固体形式的(((((2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(2,6-二氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(羟基)磷酰基)-甲基)膦酸，其不经进一步纯化即用于下一步骤中。
步骤5：
将来自步骤4的(((((2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(2,6-二氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(羟基)磷酰基)甲基)膦酸(约90mg)溶解于无水二噁烷(8mL)中，冷却至0℃，然后用二异丙基乙胺(0.085mL，0.513mmoL，2.2当量)和苯甲胺(0.036mL，0.33mmoL，1.4当量)处理。添加完成后，将反应物在室温下搅拌18小时并浓缩，得到(((((2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(6-(苯甲基氨基)-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(羟基)-磷酰基)甲基)膦酸。粗产物不经进一步纯化即直接用于后续水解中。
将来自步骤5的粗产物溶解于1:1MeOH/THF(2mL)中并用LiOH(84mg，3.5mmoL，15当量)的水溶液(1mL)处理。添加完成后，将反应物在室温下搅拌18小时，然后用2N HCl酸化至pH值为约1并浓缩。将所得反应混合物在含0.1％TFA的1:1乙腈/水(4mL)中稀释并经由反相HPLC纯化，在冻干后得到呈白色固体形式的(((((2R,3S,4R,5R)-5-(6-(苯甲基氨基)-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(羟基)磷酰基)甲基)膦酸(9.2mg，7％)。
1H NMR(D2O)δ8.63(s,1H),7.41(m,5H),6.07(d,J＝6.9Hz,1H),4.96(d,J＝7.0Hz,1H),4.46(s,1H),4.37(d,J＝12.0Hz,1H),4.25(d,J＝11.5Hz,1H),3.21(s,1H),2.38(t,J＝20.0Hz,2H)。HPLC:Rt＝17.2min,97.9％。C21H24ClN5O9P2的ESI-MS计算值587.07，实验值586.8(M-)；C12H9ClN5的ESI-MS计算值258.05，实验值258.4(M-核糖片段)。
实施例204
合成((((2R,3S,4R,5R)-5-(6-(苯甲基氨基)-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)甲基)膦酸
步骤1：
向经火焰干燥的圆底烧瓶中装入羟甲基膦酸二乙酯(780mg，4.64mmol)并且将含三乙胺(0.838mL，6.031mmoL，1.3当量)的无水二氯甲烷(20mL)冷却至-78℃并逐滴用三氟甲烷磺酸酐(0.847mL，5.10mmoL，1.3当量)处理。在反应物升温至0℃时搅拌反应物10分钟。30分钟后，将反应混合物倒入乙醚(预冷却至0℃)中并过滤结晶沉淀物。然后依序用水(1×100mL)、1M HCl(1×100mL)和饱和氯化钠水溶液(1×125mL)洗涤。将有机层干燥(MgSO4)，过滤，并浓缩，得到以黄色油状物获得的粗制三氟甲烷磺酸(二乙氧基磷酰基)甲酯，将其溶解于无水THF中，并且该溶液不经进一步纯化即直接用于下一步骤中。
步骤2：
将(2R,3R,4R,5R)-二乙酸5-(2,6-二氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-2-(羟基-甲基)四氢呋喃-3,4-二基酯(350mg，0.815mmoL)和三氟甲烷磺酸(二乙氧基磷酰基)-甲酯(294mg，0.978mmoL，1.2当量)于THF(20mL)中的溶液冷却至-78℃并逐滴用LiHMDS(1M于THF中；0.980mL，0.978mmoL，1.2当量)处理。搅拌1.5小时后，将反应物用固体NH4Cl淬灭，用水稀释并用乙酸乙酯萃取。将有机层干燥(MgSO4)，过滤并浓缩。通过硅胶快速柱色谱法(0-100％乙酸乙酯/己烷)纯化，得到呈浅黄色油形式的(2R,3R,4R,5R)-二乙酸5-(2,6-二氯-9H-嘌呤-9-基)-2-(((二乙氧基-磷酰基)甲氧基)甲基)-3-乙炔基四氢呋喃-3,4-二基酯(140mg，30％)。
步骤3：
将(2R,3R,4R,5R)-二乙酸5-(2,6-二氯-9H-嘌呤-9-基)-2-(((二乙氧基磷酰基)甲氧基)甲基)-3-乙炔基四氢呋喃-3,4-二基酯(85mg，0.147mmoL)和二异丙基乙胺(40μL，0.235mmoL，1.6当量)于无水二噁烷(8mL)中的溶液冷却至0℃并用苯甲胺(19μL，0.176mmoL，1.2当量)处理。添加完成后，使反应物升温至室温并搅拌18小时。将混合物用水稀释并用乙酸乙酯萃取。将有机层干燥(Na2SO4)，过滤，并浓缩，得到呈白色固体形式的粗制(2R,3R,4R,5R)-二乙酸5-(6-(苯甲基氨基)-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-2-(((二乙氧基磷酰基)甲氧基)甲基)-3-乙炔基四氢呋喃-3,4-二基酯(93mg，96％)，其不经进一步纯化即直接用于后续步骤中。
步骤4：
将来自前一步骤的粗产物溶解于无水乙腈(10mL)中并逐滴用溴三甲基硅烷(0.24mL，1.8mmoL，12当量)处理。添加完成后，将溶液在室温下搅拌22小时并用水(5mL)淬灭。再搅拌2-3分钟后，用乙酸乙酯(4×100mL)萃取溶液。将有机层干燥(Na2SO4)，过滤，并浓缩，得到呈灰白色固体形式的((((2R,3S,4R,5R)-5-(6-(苯甲基氨基)-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)甲基)膦酸。将此粗固体在0℃下溶解于无水EtOH中并且一次性用KOEt(51mg，0.61mmoL，4当量)处理。在室温下搅拌反应物20分钟，然后用AcOH(0.52mL，0.91mmoL，6当量)酸化并再搅拌10分钟。粗产物经由反相HPLC纯化并通过冻干干燥，得到呈白色固体形式的((((2R,3S,4R,5R)-5-(6-(苯甲基氨基)-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)甲基)膦酸(6mg，7％)。
1H NMR(D2O)δ8.41(s,1H),7.19(m,5H),5.84(d,J＝7.2Hz,1H),4.82(d,J＝7.1Hz,1H),4.21(m,1H),4.19(m,2H),3.79(d,J＝3.8Hz,2H),3.57(m,2H),2.98(s,1H)。HPLC:Rt＝7.19min,97.5％。C20H21ClN5O7P的ESI-MS计算值509.09，实验值509(M+)；C11H8ClN6的ESI-MS计算值258.05，实验值259(M-核糖片段)。
实施例205
合成(((((2R,3S,4R,5R)-5-(6-(苯甲基氨基)-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-3,4-二羟基-3-甲基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(羟基)磷酰基)甲基)膦酸
步骤1：
在氮气下逐滴用含3M甲基氯化镁的THF(5.9mL，1.4当量)处理(3aR,5R,6aS)-5-((((叔丁基二苯基-甲硅烷基))氧基)甲基)-2,2-二甲基二氢呋喃并[2,3-d][1,3]间二氧杂环戊烯-6(5H)-酮(6g，14.1mmoL)于无水THF(100mL)中的冰冷溶液。添加完成后，移除冷却浴，并继续搅拌1小时。将混合物冷却至0℃并用饱和氯化铵水溶液(10mL)淬灭，用乙酸乙酯(100mL)稀释并用水(80mL)洗涤。用乙酸乙酯(1×50mL)再萃取水层并且合并的有机层经硫酸钠干燥，过滤并浓缩。通过二氧化硅快速柱色谱法(0-30％乙酸乙酯/己烷)纯化残余油状物，得到呈浅色粘稠油形式的(3aR,5R,6R,6aR)-5-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-2,2,6-三甲基四氢呋喃并[2,3-d][1,3]间二氧杂环戊烯-6-醇(4.2g，67％)。
步骤2：
在氮气下，将(3aR,5R,6aS)-5-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)-甲基)-2,2-二甲基二氢呋喃并[2,3-d][1,3]间二氧杂环戊烯-6(5H)-酮(2.25g，5.08mmoL)于二氯甲烷(35mL)和水(3.5mL)中的溶液冷却至0℃并用三氟乙酸(15mL)处理。2.5小时后，添加饱和NaHCO3水溶液，直至溶液的pH为约8为止，并用二氯甲烷(2×150mL)萃取混合物。合并的有机层经硫酸钠干燥，过滤并浓缩。使粗油状物与甲苯(3×5mL)共沸，用二氯甲烷(45mL)稀释，用吡啶(12mL)、乙酸酐(4.77mL，50.83mmoL)和催化性4-DMAP(142mg，1.17mmoL)处理。搅拌18小时后，将反应物用乙酸乙酯(各200mL)稀释并且依序用饱和NH4Cl水溶液(3×100mL)、0.5N HCl(2×100mL)和饱和氯化钠水溶液(1×120mL)洗涤。合并的有机层经硫酸钠干燥，过滤并浓缩。通过硅胶快速柱色谱法(0-30％乙酸乙酯/己烷)纯化残余油状物，得到呈无色固体形式的(3R,4R,5R)-三乙酸5-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-4-甲基四氢呋喃-2,3,4-三基酯(2.1g，78％)。
步骤3至6：
如上文实施例203中所描述但用(3aR,5R,6aS)-5-((((叔丁基二苯基-甲硅烷基))氧基)甲基)-2,2-二甲基二氢呋喃并[2,3-d][1,3]间二氧杂环戊烯-6(5H)-酮代替(3aR,5R,6R,6aR)-5-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)-氧基)甲基)-6-乙炔基-2,2-二甲基四氢呋喃并[2,3-d][1,3]-间二氧杂环戊烯-6-醇来进行，得到呈白色固体形式的标题化合物(8mg，3％)。
1H NMR(D2O:DMSO-d6,6:1)8.46(bs,1H),7.23(m,5H),5.84(d,J＝6.9Hz,1H),4.45(d,J＝7.0Hz,1H),4.12(s,1H),3.95(m,3H),3.54(m,1H),2.18(bs,2H),1.31(s,3H)。C19H24ClN5O9P2的ESI-MS计算值563.1，实验值562.1(M-)。
实施例206
测定1：体外抑制CD73酶
为测量可溶性CD73酶活性，从R&D Systems目录号5795-EN-010获得重组CD73。将测试化合物的连续稀释液与重组CD73和AMP在反应缓冲液(25mM Tris HCl pH 7.5、5mMMgCl2、50mM NaCl、0.25mM DTT、0.005％Triton X-100)中一起温育。最终反应体积为25μL并且重组CD73和AMP的最终浓度分别为0.5nM和50μM。使反应在室温下进行30分钟，然后添加100μL孔雀绿(Malachite Green)(Cell Signaling Technology，目录号12776)。在室温下5分钟后，在微孔板分光光度计上测定630nm下的吸光度。使用磷酸盐标准曲线确定无机磷酸盐的浓度。
测定2：体外抑制CD73酶
为测量可溶性CD73酶活性，从R&D Systems目录号5795-EN-010获得重组CD73。将测试化合物的连续稀释液与重组CD73和AMP在反应缓冲液(25mM Tris HCl pH 7.5、5mMMgCl2、50mM NaCl、0.25mM DTT、0.005％Triton X-100)中一起温育。最终反应体积为25μL并且重组CD73和AMP的最终浓度分别为0.05nM和50μM。使反应在37℃下进行1小时，然后添加100μL孔雀绿(Cell Signaling Technology，目录号12776)。在室温下5分钟后，在微孔板分光光度计上测定630nm下的吸光度。使用磷酸盐标准曲线确定无机磷酸盐的浓度。
两种测定的IC50数据在下表2中给出。ND指示未测定。
表2
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实施例207
使用CD73抑制剂激活肿瘤导向的免疫反应
将EG7细胞皮下植入C57BL/6小鼠中。化合物9(50mg/kg)或媒介物在植入后第一天开始每天两次经口施用(每组N＝10)。在第14天切除肿瘤并通过流式细胞术分析。化合物9如图1A中所示增加CD8+细胞占CD45+细胞的百分比(*指示p<0.05)。将EG7细胞皮下植入C57BL/6小鼠中。在第-1天、第0天、第5天和第10天向抗CD8抗体腹膜内给药。在第1天开始，每天两次经口给与化合物9(50mg/kg)或媒介物。图1B显示CD8+ T细胞的耗尽逆转功效(****指示相对于化合物9+抗CD8，p<0.0001)。单独的化合物9显示化合物9的组合相比于抗CD8抗体的肿瘤体积缩减得更多。
实施例208
使用CD73抑制剂逆转AMP介导的CD8+T细胞抑制
人类CD8+T细胞用CellTrace CFSE标记，并且然后与腺苷脱氨酶抑制剂和化合物9或媒介物一起预温育20分钟。添加20μM AMP以供评估T细胞增殖和CD25表达。添加10μM AMP以供评估细胞因子产生。用α-CD3、α-CD28和hIL2活化T细胞。4天后，通过流式细胞术评估增殖和CD25表达，并且通过ELISA测量上清液中的细胞因子水平。使用四参数剂量-反应曲线方程式确定EC50。图2A描绘CD8+T细胞增殖的EC50＝11.6nM。图2B描绘CD8+T细胞活化的EC50＝9.6nM。图2C描绘IFNy产生的EC50＝4.5nM。图2D描绘颗粒酶B产生的EC50＝5.6nM。
实施例209
CD73抑制剂的选择性
本发明化合物对CD73具有选择性并且不展现增殖作用。使用化合物9，使用表达人类CD39和Kinase-Glo的K562细胞评估细胞表面CD39的活性。使用孔雀绿测定评估重组人类ENTPD2和ENTPD3的活性。酶CD39、ENTPD2和ENTPD3各自都显示>10,000nM的IC50。在Eurofins安全性筛检面板(Eurofins Safety Screen Panel)和Eurofins Express多样性激酶分析面板(Eurofins Express Diversity Kinase Profile Panel)中筛检化合物9。在安全性面板中，1/87靶标在10μM化合物9下抑制>50％。PDE3酶抑制为59％。在激酶面板中，45个靶标中无一者抑制>50％。
此外，化合物9未显示针对三个细胞系的抗增殖作用。3天后使用CellTiter-Glo测量用100μM化合物9处理的EG7和A375细胞的存活率。在使用CellTrace CFSE细胞增殖试剂盒，用100μM化合物9处理4天后，通过流式细胞术测量人类CD8+T细胞的增殖。图3A显示EG7细胞(一种小鼠T细胞淋巴瘤细胞系)的可比细胞存活％。图3B显示A375细胞(一种人类黑素瘤细胞系)的可比细胞存活％。图3C显示人类CD8+T细胞的可比分裂细胞％。
实施例210
CD73抑制
使用孔雀绿测定评估化合物9针对重组CD73和表达CD73的SK-MEL-28细胞的效力。使用LC/MS测量血浆中CD73的抑制，以评估15N5-AMP至15N5-ADO的转化率。图4A指示来自人类与小鼠来源的CD73细胞的纳摩尔抑制。图4B描绘人类重组CD73细胞的IC50＝0.17nM。图4C描绘人类血浆CD73细胞的IC50＝0.38nM。使用LC/MS测量血浆中CD73的抑制，以评估15N5-AMP至15N5-ADO的转化率。图4D描绘人类CD73细胞表面的IC50＝0.21nM。
实施例211
CD73抑制剂口服给药药效学
向小鼠经口施用单一剂量化合物9(50mg/kg)并在指定时间点收集血浆。通过LC/MS测量化合物9含量。如图5A中所示，小鼠血浆中的IC50为1nM。给药后2小时从小鼠收集血浆并且外加15N5-AMP和TNAP抑制剂。通过LC/MS测量15N5-ADO水平。图5B描绘小鼠血浆CD73细胞的92％抑制。
实施例212
经口给药的CD73抑制剂的单剂功效
本发明化合物显示强效抗肿瘤效果，证明在小鼠模型中缩减肿瘤体积。在一个模型中，将EG7细胞皮下植入C57BL/6小鼠中。化合物9或媒介物在植入后第一天开始每天两次经口施用(每组N＝10)。图6A描绘肿瘤体积随着化合物9的剂量增加而进一步减小。在另一个模型中，将EG7细胞皮下植入C57BL/6小鼠中。化合物9在植入后第一天开始每天两次(100mg/kg)经口施用(每组N＝10)。媒介物在植入后第一天开始每天两次经口施用(N＝20)，直至植入后第五天，此时小鼠根据肿瘤体积随机分成两组。化合物9(100mg/kg)或媒介物在植入后第六天开始每天两次向N＝10经口施用。图13A描绘通过向携带已形成肿瘤的小鼠施用化合物9而减小肿瘤体积。图13B至图13D显示每次给药的这种测量结果的个别复制。图13B为媒介物。图13C为在第1天开始给与化合物9。图13D为在第6天开始的化合物9。在另一个模型中，将CT26细胞皮下植入Balb/c小鼠中。100mg/kg化合物9或媒介物在植入后第一天开始每天两次经口施用(每组N＝10)。图6B描绘与媒介物相比肿瘤体积的缩减。****指示相对于媒介物，p<0.0001；NS指示不显著(双因素ANOVA)。
实施例213
CD73抑制剂与免疫肿瘤学和化学治疗剂组合的功效
对于每个实验，将EG7细胞皮下植入C57BL/6小鼠中。在研究第3天、第5天、第7天、第9天、第11天、第13天向抗PD-L1抗体(5mg/kg)腹膜内给药。化合物9(100mg/kg)或媒介物在植入后一天开始每天两次经口施用。图7A描绘用单剂和组合疗法缩减肿瘤体积。**指示p<0.01；****指示p<0.0001(双因素ANOVA)。图7B至图7E显示每次给药的这种测量结果的个别复制。图7B为媒介物，图7C为抗PD-L1抗体，图7D为化合物9，并且图7E为化合物9+抗PD-L1。
在研究第7天和第14天腹膜内给与奥沙利铂6mg/kg。化合物9(100mg/kg)或媒介物在植入后第一天开始每天两次经口施用。图8A描绘用单剂和组合疗法缩减肿瘤体积。****指示p<0.0001(双因素ANOVA)。图8B至图8E显示每次给药的这种测量结果的个别复制。图8B为媒介物，图8C为奥沙利铂，图8D为化合物9，并且图8E为化合物9+奥沙利铂。
在研究第7天和第14天静脉内给与多柔比星2.5mg/kg。化合物9(50mg/kg)或媒介物在植入后一天开始每天两次经口施用。图9A描绘用单剂和组合疗法缩减肿瘤体积。*指示p<0.05；***指示p<0.001(双因素ANOVA)。图9B至图9E显示每次给药的这种测量结果的个别复制。图9B为媒介物，图9C为多柔比星，图9D为化合物9，并且图9E为化合物9+多柔比星。
在研究第5天、第12天和第19天腹膜内给与多西他赛5mg/kg。化合物9(100mg/kg)或媒介物在植入后一天开始每天两次经口施用。图12A描绘用单剂和组合疗法缩减肿瘤体积。*指示p<0.05；****指示p<0.0001(双因素ANOVA)。图12B至图10E显示每次给药的这种测量结果的个别复制。图12B为媒介物，图12C为多西他赛，图12D为化合物9，并且图12E为化合物9+多西他赛。
实施例214
CD73抑制剂在多种肿瘤中的功效
血清购自Discovery Life Sciences。将来自头颈部鳞状细胞癌(HNSCC)、卵巢癌、三阴性乳腺癌和食道癌患者的血清在TNAP抑制剂存在下与化合物9的连续稀释液一起温育。通过LC/MS测量15N5-AMP至15N5-ADO的转化。图10A描绘HNSCC血清的亚纳摩尔抑制。图10B描绘卵巢癌血清的亚纳摩尔抑制。图10C描绘TNBC血清的亚纳摩尔抑制。图10D描绘食道癌血清的亚纳摩尔抑制。
实施例215
CD73在多种人类肿瘤中的表达
图11描绘肿瘤组织和正常组织中CD73的归一化mRNA表达水平。使用UCSC Xena平台从TCGA(肿瘤)或GTEX(正常)数据库获得CD73(NT5E)的表达水平并使用未配对t检验分析。对于胰腺、食道、胃、头颈部、结肠、肺和肾脏透明细胞肿瘤，如通过Log2(归一化计数+1)所测量，CD73表达大于媒介物。
通过引用并入
本文提及的所有出版物和专利均通过引用整体并入本文，就好像每个单独的出版物或专利均被明确地和单独地指出通过引用并入一样。在发生冲突的情况下，以本申请(包括本文中的任何定义)为准。
等同物
尽管已论述了本发明的具体实施方案，但以上说明书是说明性而非限制性的。在审阅本说明书和所附权利要求书后，本发明的许多变更对本领域技术人员将变得显而易见。本发明的全部范围应通过参考权利要求书、其等同物的全部范围、和说明书以及这些变更来确定。

Claims (82)

1.一种式(I)化合物：
或其药学上可接受的盐，其中
Y是
Het选自
其中，Z是CH或N；
Ra选自H、卤基、羟基、烷基、噻吩基、-NR7R8、芳烷基、芳基和杂芳基；
Rb选自卤基、烷基、卤烷基、羟烷基、烷硫基、酰胺基、羰基、酰胺基和杂芳基；
R7选自H、羟基、烷基、芳烷基、杂芳烷基、环烷基和杂环基；并且
R8是H或烷基；或
R7和R8与其所连接的氮原子一起形成4元至7元杂环基环；
R1a是羟基；
R1b是H；
R2a是羟基；
R2b是C2-6炔基；
R3选自H和烷基；
R4选自H、烷基、芳基、杂芳基、-C(O)OR9、-C(O)NR11R12、-S(O)2R10、-P(O)(OR11)(OR12)和-P(O)(OR11)(NR13R14)；
R5选自芳烷基和杂芳烷基，其中所述芳烷基和杂芳烷基未被取代或被一个或多个选自以下的取代基取代：卤基、卤烷基、烷基、烷氧基、羰基、氨基、芳基、杂环基和杂芳基；
R6选自-C(O)OR9、-C(O)NR16R17和-P(O)(OR11)(OR12)；
R9独立地选自H、烷基、环烷基、环烷基烷基、杂环基、杂环基烷基、芳基、芳烷基、杂芳基和杂芳烷基；
R10独立地选自烷基、烯基、炔基、氨基、环烷基、环烷基烷基、杂环基、杂环基烷基、芳基、芳烷基、杂芳基和杂芳烷基；并且
每个R11和R12独立地选自H、烷基、环烷基、环烷基烷基、杂环基、杂环基烷基、芳基、芳烷基、杂芳基、杂芳烷基；或
R11和R12与其所连接的氮原子一起形成5元至7元杂环基；
R13在每次出现时独立地为H或烷基；
R14在每次出现时独立地为烷基或芳烷基；
每个R16和R17独立地选自H、羟基、烷基、环烷基、环烷基烷基、杂环基、杂环基烷基、芳基、芳烷基、杂芳基、杂芳烷基；或
R16和R17与其所连接的氮原子一起形成5元至7元杂环基，
其中，所述化合物不为
其中，
所述烷基为被取代的或未被取代的具有1至约20个碳原子的完全饱和的直链或支链的非芳族烃；
所述烯基为被取代的或未被取代的具有2至约20个碳原子的含有至少一个双键的脂族基团；
所述炔基为被取代的或未被取代的具有2至约20个碳原子的含有至少一个三键的脂族基团；
所述环烷基为被取代的或未被取代的单环或双环的完全饱和的环烃，其中单环环烷基具有3至10个碳原子，双环环烷基的两个环之间共用一个、两个或三个或更多个原子；
所述杂环基为被取代的或未被取代的单环或多环3元至10元非芳族环，其环结构包括至少一个杂原子，在所述多环杂环基中两个或更多个碳为两个邻接环所共用，其中至少一个环是杂环；
所述芳基为被取代的或未被取代的5元至7元单环芳族基团，或具有两个或更多个环的多环体系，在所述多环体系中两个或更多个碳为两个邻接环所共用，其中至少一个环是芳族环；
所述杂芳基为被取代的或未被取代的5元至7元芳族单环结构，其环结构包括至少一个杂原子，或具有两个或更多个环的多环体系，在所述多环体系中两个或更多个碳为两个邻接环所共用，其中环中的至少一者是杂芳族环；
所述芳烷基为被芳基取代的烷基；
所述杂芳烷基为被杂芳基取代的烷基，
其中，当所述烷基、所述烯基、所述炔基、所述环烷基、所述杂环基、所述芳基或所述杂芳基被取代时，取代基选自烷基、羟烷基、烷氧基烷基、卤素、羟基、羰基、硫羰基、烷氧基、磷酰基、磷酸酯基、膦酸酯基、亚膦酸酯基、氨基、酰胺基、脒基、亚胺、氰基、硝基、叠氮基、硫氢基、烷硫基、硫酸酯基、磺酸酯基、胺磺酰基、磺酰胺基、磺酰基、杂环基、芳烷基或者芳族或杂芳族部分。
2.如权利要求1所述的化合物，其中Ra选自H、Cl、-NR7R8和苯基。
3.如权利要求1所述的化合物，其中R2b是被取代或未被取代的C2炔基。
4.如权利要求1所述的化合物，其中R2b是未被取代的C2炔基。
5.如权利要求1所述的化合物，其中：
如果R4和R6各为-C(O)OH并且R5是在苯环上被杂环基或杂芳基取代基取代的苯甲基，则所述杂环基或杂芳基取代基选自未被取代或被取代的吡咯烷基、哌嗪酮基、哌啶酮基、四氢嘧啶酮基、吡啶酮基和吡啶基；并且
如果R4是-C(O)OH或四唑基，R6是-C(O)OH，并且R5是在苯环上被第二苯环取代的苯甲基，则所述苯甲基苯环或所述第二苯环被-C(O)OR9取代，其中R9是H或烷基。
6.如权利要求1或2所述的化合物，所述化合物具有以下结构：
7.如权利要求6所述的化合物，其中所述式(I)化合物具有结构(IA)：
8.如权利要求1所述的化合物，其中R1a呈β-构型。
9.如权利要求8所述的化合物，其中所述式(I)化合物具有结构(IB)：
10.如权利要求1所述的化合物，其中R2a呈α-构型。
11.如权利要求10所述的化合物，其中所述式(I)化合物具有结构(IC)：
12.如权利要求1所述的化合物，其中R2a呈β-构型。
13.如权利要求12所述的化合物，其中所述式(I)化合物具有结构(ID)：
14.如权利要求6所述的化合物，其中所述式(I)化合物具有结构(IE)：
15.如权利要求1所述的化合物，其中R5是在芳环或杂芳环上具有对位取代基的芳烷基或杂芳烷基，所述对位取代基选自杂环基、杂芳基和芳基。
16.如权利要求1所述的化合物，其中R5是在苯环上被杂环基或杂芳基取代基取代的苯甲基。
17.如权利要求1所述的化合物，其中R5是在苯环的对位被杂环基或杂芳基取代基取代的苯甲基。
18.如权利要求16或17所述的化合物，其中所述苯环取代基选自被取代的哌啶酮基、哌嗪酮基、四氢嘧啶酮基、吡啶酮基和吡啶基。
19.如权利要求18所述的化合物，其中所述哌啶酮基、四氢嘧啶酮基、吡啶酮基或吡啶基被烷基、羟烷基或烷氧基烷基中的一者或多者取代。
20.如权利要求1所述的化合物，其中R5是在苯环上被
取代的苯甲基。
21.如权利要求20所述的化合物，其中R5是在苯环的4位被
取代的苯甲基。
22.如权利要求1所述的化合物，其中
表示/>
/>
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23.如权利要求1所述的化合物，其中Het是
24.如权利要求23所述的化合物，其中Ra选自H、卤基、烷基、噻吩基、-NR7R8、芳基和杂芳基。
25.如权利要求24所述的化合物，其中Ra选自H、Cl、-NR7R8和苯基。
26.如权利要求23所述的化合物，其中Rb选自卤基、烷基、羟烷基、卤烷基、酰胺基、羰基、酰胺基和杂芳基。
27.如权利要求1所述的化合物，其中R7选自H、烷基、芳烷基、杂芳烷基、环烷基和杂环基。
28.一种式(II)化合物：
或其药学上可接受的盐，其中
Het选自
其中，Z是CH或N；
Ra选自H、卤基、羟基、烷基、噻吩基、-NR7R8、芳烷基、芳基和杂芳基；
Rb选自卤基、烷基、卤烷基、羟烷基、烷硫基、酰胺基、羰基、酰胺基和杂芳基；
R7选自H、羟基、烷基、芳烷基、杂芳烷基、环烷基和杂环基；并且
R8是H或烷基；或
R7和R8与其所连接的氮原子一起形成4元至7元杂环基环；
R1a是羟基；
R1b是H；
R2a是羟基；
R2b是C2-6炔基；
R3选自H和烷基；
R4选自烷基、芳基、杂芳基、-C(O)OR9、-C(O)NR11R12、-S(O)2R10、-P(O)(OR11)(OR12)和-P(O)(OR11)(NR13R14)；
R5选自芳烷基和杂芳烷基，其中所述芳烷基和所述杂芳烷基未被取代或被一个或多个选自以下的取代基取代：卤基、卤烷基、烷基、烷氧基、羰基、氨基、芳基、杂环基和杂芳基；
R6选自-C(O)OR9、-C(O)NR11R12和-P(O)(OR11)(OR12)；
R9独立地选自H、烷基、烯基、炔基、环烷基、环烷基烷基、杂环基、杂环基烷基、芳基、芳烷基、杂芳基和杂芳烷基；
R10独立地选自烷基、烯基、炔基、氨基、环烷基、环烷基烷基、杂环基、杂环基烷基、芳基、芳烷基、杂芳基和杂芳烷基；并且
每个R11和R12独立地选自H、烷基、环烷基、环烷基烷基、杂环基、杂环基烷基、芳基、芳烷基、杂芳基、杂芳烷基；或
R11和R12与其所连接的氮原子一起形成5元至7元杂环基；
R13是H或烷基；并且
R14是烷基或芳烷基；
其条件为a)和c)；或a)和d)；
a)所述化合物不为
并且
c)如果R4和R6各为-C(O)OH并且R5是在苯环上被杂环基或杂芳基取代基取代的苯甲基，则所述苯环取代基选自未被取代或被取代的哌啶酮基、四氢嘧啶酮基、吡啶酮基和吡啶基；并且
d)如果R4是-C(O)OH或四唑基，R6是-C(O)OH，并且R5是在苯环上被第二苯环取代的苯甲基，则所述苯甲基苯环或所述第二苯环被-C(O)OR9取代，其中R9是H或烷基；
其中，
所述烷基为被取代的或未被取代的具有1至约20个碳原子的完全饱和的直链或支链的非芳族烃；
所述烯基为被取代的或未被取代的具有2至约20个碳原子的含有至少一个双键的脂族基团；
所述炔基为被取代的或未被取代的具有2至约20个碳原子的含有至少一个三键的脂族基团；
所述环烷基为被取代的或未被取代的单环或双环的完全饱和的环烃，其中单环环烷基具有3至10个碳原子，双环环烷基的两个环之间共用一个、两个或三个或更多个原子；
所述杂环基为被取代的或未被取代的单环或多环3元至10元非芳族环，其环结构包括至少一个杂原子，在所述多环杂环基中两个或更多个碳为两个邻接环所共用，其中至少一个环是杂环；
所述芳基为被取代的或未被取代的5元至7元单环芳族基团，或具有两个或更多个环的多环体系，在所述多环体系中两个或更多个碳为两个邻接环所共用，其中至少一个环是芳族环；
所述杂芳基为被取代的或未被取代的5元至7元芳族单环结构，其环结构包括至少一个杂原子，或具有两个或更多个环的多环体系，在所述多环体系中两个或更多个碳为两个邻接环所共用，其中环中的至少一者是杂芳族环；
所述芳烷基为被芳基取代的烷基；
所述杂芳烷基为被杂芳基取代的烷基，
其中，当所述烷基、所述烯基、所述炔基、所述环烷基、所述杂环基、所述芳基或所述杂芳基被取代时，取代基选自烷基、羟烷基、烷氧基烷基、卤素、羟基、羰基、硫羰基、烷氧基、磷酰基、磷酸酯基、膦酸酯基、亚膦酸酯基、氨基、酰胺基、脒基、亚胺、氰基、硝基、叠氮基、硫氢基、烷硫基、硫酸酯基、磺酸酯基、胺磺酰基、磺酰胺基、磺酰基、杂环基、芳烷基或者芳族或杂芳族部分。
29.如权利要求28所述的化合物，其中Ra选自H、Cl、-NR7R8和苯基。
30.如权利要求1或28所述的化合物，其中R2a是羟基并且R2b是乙炔基。
31.如权利要求1或28所述的化合物，其中R2b是丙炔基、丁炔基、或未被取代或被取代的/>
32.如权利要求28所述的化合物，其中所述式II化合物具有以下结构：
33.如权利要求28所述的化合物，其中R1a呈α-构型。
34.如权利要求33所述的化合物，其中所述式(II)化合物具有结构(IIAa)：
35.如权利要求28所述的化合物，其中R1a呈β-构型。
36.如权利要求35所述的化合物，其中所述式(II)化合物具有结构(IIB)：
37.如权利要求28所述的化合物，其中R2a呈α-构型。
38.如权利要求37所述的化合物，其中所述式(II)化合物具有结构(IICa)：
39.如权利要求28所述的化合物，其中R2a呈β-构型。
40.如权利要求39所述的化合物，其中所述式(II)化合物具有结构(IIDa)：
41.如权利要求32所述的化合物，其中所述式(II)化合物具有结构(IIEa)：
42.如权利要求1或28所述的化合物，其中R3是H。
43.如权利要求1或28所述的化合物，其中R4选自-C(O)OR9、-C(O)NR11R12、-S(O)2R10和-P(O)(OR11)(OR12)。
44.如权利要求43所述的化合物，其中R4是-C(O)OR9并且R9是H或烷基。
45.如权利要求43所述的化合物，其中R4是-C(O)NR11R12。
46.如权利要求45所述的化合物，其中每个R11和R12独立地选自H和烷基；或者R11和R12与其所连接的氮原子一起形成5元至7元杂环基。
47.如权利要求43所述的化合物，其中R4是-S(O)2R10并且R10是烷基或芳基。
48.如权利要求28所述的化合物，其中R5是在芳环上被5元至7元杂环基或5元至7元杂芳基取代的芳烷基。
49.如权利要求48所述的化合物，其中R5是在芳环的对位被5元至7元杂环基或5元至7元杂芳基取代的芳烷基。
50.如权利要求28所述的化合物，其中R5选自苯甲基、-CH2-吡啶基、-CH2-哒嗪基、-CH2-噁唑基、-CH2-噻吩基、-CH2-呋喃基、-CH2-噻唑基和-CH2-苯并噻唑基。
51.如权利要求50所述的化合物，其中R5选自苯甲基和-CH2-噻吩基。
52.如权利要求28所述的化合物，其中R5是在苯环上被杂环基或杂芳基取代基取代的苯甲基。
53.如权利要求52所述的化合物，其中所述苯环取代基选自被取代的哌啶酮基、四氢嘧啶酮基、吡啶酮基和吡啶基。
54.如权利要求53所述的化合物，其中所述哌啶酮基、四氢嘧啶酮基、吡啶酮基或吡啶基被烷基、羟烷基或烷氧基烷基中的一者或多者取代。
55.如权利要求52至54中任一项所述的化合物，其中R5是在苯环上被 取代的苯甲基。
56.如权利要求55所述的化合物，其中R5是在苯环的4位被
取代的苯甲基。
57.如权利要求1或28所述的化合物，其中R6是-C(O)OR9并且R9是H或烷基。
58.如权利要求1所述的化合物，其中R6是-C(O)NR16R17。
59.如权利要求1或28所述的化合物，其中R4和R6各自是-C(O)OH。
60.如权利要求1或28所述的化合物，其中R5是苯甲基。
61.如权利要求28所述的化合物，其中
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62.如权利要求1或28所述的化合物，其中R9是H或C1-6烷基。
63.如权利要求1或28所述的化合物，其中Het是
64.如权利要求1或28所述的化合物，其中Het是
其中
Z是CH或N；
Ra选自H、卤基、烷基、噻吩基、-NR7R8、芳基和杂芳基；
Rb选自卤基、烷基、卤烷基、酰胺基、羰基、酰胺基和杂芳基；
R7选自H、烷基、芳烷基、杂芳烷基、环烷基和杂环基；并且
R8是H或烷基；或
R7和R8与其所连接的氮原子一起形成4元至7元杂环基环。
65.如权利要求64所述的化合物，其中Ra选自H、Cl、-NR7R8和苯基。
66.如权利要求64所述的化合物，其中Z是CH。
67.如权利要求64所述的化合物，其中Z是N。
68.如权利要求64所述的化合物，其中Ra是-NR7R8。
69.如权利要求64所述的化合物，其中Rb选自Cl、-CF3、羰基和-CONH2。
70.如权利要求64所述的化合物，其中，Het是
71.如权利要求64所述的化合物，其中R7是烷基或环烷基，其中所述烷基或环烷基未被取代或被一个或多个选自以下的取代基取代：羟基、烷氧基、芳基、氨基和环烷基。
72.如权利要求67所述的化合物，其中R7是芳烷基或杂芳烷基，其中所述芳烷基或杂芳烷基未被取代或被卤基或烷基取代。
73.如权利要求67所述的化合物，其中R8选自H、甲基和乙基。
74.如权利要求67所述的化合物，其中R7和R8与其所连接的氮原子一起形成选自以下的杂环基环：氮杂环丁烷基、吗啉基、吡咯烷基和氮杂环庚烷基。
75.一种化合物，所述化合物选自：
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或其药学上可接受的盐。
76.一种药物组合物，所述药物组合物包含如权利要求1-75中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐和一种或多种药学上可接受的赋形剂。
77.根据权利要求1-75中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于抑制细胞中的CD73的药物中的用途。
78.如权利要求1-75中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗疾病或病症的药物中的用途，所述疾病或病症选自癌症，脑和心脏缺血性疾病，纤维化，免疫和炎症性病症，炎症性肠动力障碍，神经、神经退行性和CNS病症和疾病，抑郁症，帕金森病和睡眠障碍。
79.如权利要求78所述的用途，其中所述癌症选自膀胱癌、骨癌、脑癌、乳腺癌、心脏癌、宫颈癌、结肠癌、结肠直肠癌、食道癌、纤维肉瘤、胃癌、胃肠癌、头颈癌、卡波西氏肉瘤、肾癌、白血病、肝癌、肺癌、淋巴瘤、黑素瘤、骨髓瘤、卵巢癌、胰腺癌、阴茎癌、前列腺癌、睾丸生殖细胞癌、胸腺瘤和胸腺癌瘤。
80.如权利要求78所述的用途，其中所述癌症选自乳腺癌、脑癌、结肠癌、纤维肉瘤、肾癌、肺癌、黑素瘤、卵巢癌和前列腺癌。
81.如权利要求78所述的用途，其中所述癌症是乳腺癌。
82.如权利要求78-81中任一项所述的用途，所述方法还包括联合施用一种或多种额外化学治疗剂，其中所述一种或多种额外化学治疗剂选自多西他赛、多柔比星或奥沙利铂。
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