CN112851612B - 一种从牛蒡叶中提取的具有降低胆固醇活性化合物及其制备方法与应用 - Google Patents
一种从牛蒡叶中提取的具有降低胆固醇活性化合物及其制备方法与应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明涉及从牛蒡叶中提取的具有降低胆固醇活性化合物及其制备方法与应用,可有效解决从牛蒡叶中提取降脂活性的新化合物,并实现新化合物在制备降脂药物中的应用问题,牛蒡叶加水煮沸提取,浓缩,上AB‑8柱,依次用水、30%乙醇、70%乙醇洗脱,收集70%乙醇洗脱液,减压回收溶剂,浸膏加水分散,正丁醇萃取,减压回收溶剂,进行硅胶柱层析,二氯甲烷/甲醇梯度洗脱,减压回收溶剂,二次硅胶柱层析,以石油醚‑乙酸乙酯梯度洗脱,收集100:70洗脱液,减压回收溶剂,进行MCI柱层析,甲醇水溶液梯度洗脱,收集40%甲醇洗脱液,减压回收溶剂,YMC‑Pack ODS‑A柱进行反向半制备,得具有降低胆固醇活性化合物。本发明制备方法易操作,导向性强,分离速度快,产品纯度高。
Description
技术领域
本发明涉及医药,特别是一种从牛蒡叶中提取的具有降低胆固醇活性化合物及其制备方法与应用。
背景技术
牛蒡叶为菊科植物牛蒡Arctiumlappa的干燥基生叶,在全国分布广泛,有着悠久的食用及药用历史,牛蒡叶在历代本草中均有食疗的记载,用于预防中风、手足不遂。多部本草著作记载了牛蒡叶的食疗经验。如:唐《箧中方》首次记载牛蒡叶可食用,《圣惠方》记载:“牛蒡叶一斤,酥一两,煮三五沸,漉出,作羹,食用。治中风,手足不遂”;牛蒡叶用于治疗中风,有百余个经典处方。民间仍有用牛蒡叶泡茶饮用以防治高血脂的习惯。
高胆固醇血症不仅是冠心病、脑卒中、糖尿病并发症、代谢综合症等人类重大疾病的主要危险因素,与高血压病、糖尿病、脂肪肝、肥胖及衰老等亦密切相关,已成为人类健康的最大威胁。目前,他汀类、烟酸类、贝特类药物和胆酸螯合剂是目前临床上治疗高脂血症的常用药物。他汀类药物降脂疗效确切,但存在肝毒性,横纹肌溶解和骨骼肌损伤等副作用。中药具有多靶点、整体协同等作用特点,在血脂异常等代谢疾病的治疗上具有独特优势,但面世产品较少,仅血脂康、脂必泰等。
深入开展确有降脂作用的中药及其部位、化学成分的研究,促进调血脂中药新产品的研发迫在眉睫。牛蒡叶悠久的药食两用历史及民间用法为其调节血脂作用提供了依托,有望成为新的用于调节血脂的新资源,但从中获得用于调节血脂的安全、有效的化合物,并用于制备调节血脂异常的药物至今未见有公开报导。
发明内容
针对上述情况,为克服现有技术之缺陷,本发明之目的就是提供一种从牛蒡叶中提取的具有降低胆固醇活性化合物及其制备方法与应用,可有效解决从具有悠久食疗历史牛蒡叶中提取降脂活性的新化合物,并实现新化合物在制备降脂药物中的应用问题。
本发明解决的技术方案是,一种从牛蒡叶中提取的具有降低胆固醇活性化合物,其结构式为:
其制备方法是,包括以下步骤:
(1)将干燥的牛蒡叶15kg,粉碎,加水浸没煮沸提取1~3次,每次提取1~4h,合并提取液,浓缩至相当于生药0.1~2g/mL的浓缩液;
(2)将浓缩液上样于AB-8柱,内径15~30cm,高90~170cm,依次用水120~500L、质量浓度30%乙醇200~600L、70%乙醇360~900L以1~5BV/h的流速进行梯度洗脱,收集70%乙醇洗脱液,减压回收溶剂,得浸膏(500~1500g);
(3)浸膏加水0.5~3L分散,用正丁醇0.5~2L、0.5~1L、0.25~0.5L、0.25~0.5L萃取4次,合并正丁醇萃取液,减压回收溶剂,得组分Fr.A(40~65g);组分Fr.A进行硅胶柱层析,内径3~6cm,高8~30cm,分别以体积比二氯甲烷/甲醇100:2、3~15L,100:3、3~15L洗脱,分别收集100:2、100:3梯度洗脱液,合并洗脱液,减压回收溶剂,得组分Fr.A-1(15~25g);
(4)组分Fr.A-1进行二次硅胶柱层析,内径2~5cm,高10~45cm,以体积比石油醚-乙酸乙酯100:10、2~7L,100:30、2~7L,100:50、3~9L,100:70、5~15L梯度洗脱,收集100:70洗脱液,减压回收溶剂,得组分Fr.A-1-4(2.5~4.5g);
(5)组分Fr.A-1-4进行MCI柱层析,内径1~3cm,高10~60cm,并以质量浓度10%、20%、40%甲醇水溶液梯度洗脱,用量分别为1~4L、2~8L、3~15L,收集40%甲醇洗脱液,减压回收溶剂,得组分Fr.A-1-4-3(300~550mg);
(6)组分Fr.A-1-4-3以YMC-Pack ODS-A柱进行反向半制备,洗脱液以体积比CH3CN︰H2O=15︰85,洗脱30分钟,流速3.0mL/min,UV200~220nm,tR=26min,收集洗脱液,减压回收溶剂,得具有降低胆固醇活性化合物(10~30mg(3aR,5R,9bR)-3a,4,5,9b-tetrahydro-5-hydroxy-8-(hydroxymethyl)-5-methyl-1-methylenenaphtho[2,1-b]furan-2(1H)-one)。
本发明经鉴定,是一个从牛蒡叶中提取的具有降脂活性的新化合物,命名为从牛蒡叶中提取的具有降低胆固醇活性新化合物NBY-14,具有降低胆固醇活性,制备方法易操作,导向性强,分离速度快,产品纯度高,该化合物可有效用于制备降脂的药物,开拓了牛蒡叶的新用途和药用价值,经济和社会效益巨大。
附图说明
图1为本发明化合物NBY-14的分子结构式;
图2为本发明化合物NBY-14的主要HMBC及H-H COSY相关图;
图3为本发明化合物NBY-14的NOESY相关图;
图4为本发明化合物NBY-14的1H-NMR谱图;
图5为本发明化合物NBY-14的13C-NMR谱图;
图6为本发明化合物NBY-14的HSQC谱图;
图7为本发明化合物NBY-14的HMBC谱图;
图8为本发明化合物NBY-14的红外光谱图;
图9为本发明化合物NBY-14的紫外光谱图;
图10为本发明化合物NBY-14的质谱图;
图11为本发明化合物NBY-14的工艺流程图。
具体实施方式
以下结合具体情况对本发明的具体实施方式作详细说明。
本发明在具体实施中,可由以下实施例给出。
实施例1
本发明一种从牛蒡叶中提取的具有降低胆固醇活性化合物的制备方法,包括以下步骤:
(1)将干燥的牛蒡叶15kg,粉碎,加水浸没煮沸提取2次,每次提取2.5h,合并提取液,浓缩至相当于生药0.15g/mL的浓缩液;
(2)将浓缩液上样于AB-8柱,内径15cm,高150cm,依次用水200L、质量浓度30%乙醇300L、70%乙醇400L以1BV/h的流速进行梯度洗脱,收集70%乙醇洗脱液,减压回收溶剂,得浸膏(600g);
(3)浸膏加水1L分散,用正丁醇1L、1L、0.5L、0.5L萃取4次,合并正丁醇萃取液,减压回收溶剂,得组分Fr.A(50g);组分Fr.A进行硅胶柱层析,内径3cm,高25cm,分别以体积比二氯甲烷/甲醇100:2、5L,100:3、6L洗脱,分别收集100:2、100:3梯度洗脱液,合并洗脱液,减压回收溶剂,得组分Fr.A-1(17g);
(4)组分Fr.A-1进行二次硅胶柱层析,内径2cm,高43cm,以体积比石油醚-乙酸乙酯100:10、2L,100:30、3L,100:50、3.5L,100:70、5L梯度洗脱,收集100:70洗脱液,减压回收溶剂,得组分Fr.A-1-4(3g);
(5)组分Fr.A-1-4进行MCI柱层析,内径1.5cm,高55cm,并以质量浓度10%、20%、40%甲醇水溶液梯度洗脱,用量分别为1.5L、3L、5L,收集40%甲醇洗脱液,减压回收溶剂,得组分Fr.A-1-4-3(350mg);
(6)组分Fr.A-1-4-3以YMC-Pack ODS-A柱进行反向半制备,洗脱液以体积比CH3CN︰H2O=15︰85,洗脱30分钟,流速3.0mL/min,UV200~220nm,tR=26min,收集洗脱液,减压回收溶剂,得具有降低胆固醇活性化合物(15mg)。
实施例2
本发明一种从牛蒡叶中提取的具有降低胆固醇活性化合物的制备方法,包括以下步骤:
(1)将干燥的牛蒡叶15kg,粉碎,加水浸没煮沸提取2次,每次提取2h,合并提取液,浓缩至相当于生药0.3g/mL的浓缩液;
(2)将浓缩液上样于AB-8柱,内径20cm,高120cm,依次用水300L、质量浓度30%乙醇450L、70%乙醇600L以2BV/h的流速进行梯度洗脱,收集70%乙醇洗脱液,减压回收溶剂,得浸膏(800g);
(3)浸膏加水1.5L分散,用正丁醇1.5L、1L、0.5L、0.5L萃取4次,合并正丁醇萃取液,减压回收溶剂,得组分Fr.A(50g);组分Fr.A进行硅胶柱层析,内径6cm,高10cm,分别以体积比二氯甲烷/甲醇100:2、7L,100:3、10L洗脱,分别收集100:2、100:3梯度洗脱液,合并洗脱液,减压回收溶剂,得组分Fr.A-1(20g);
(4)组分Fr.A-1进行二次硅胶柱层析,内径3cm,高30cm,以体积比石油醚-乙酸乙酯100:10、3L,100:30、4L,100:50、5L,100:70、8L梯度洗脱,收集100:70洗脱液,减压回收溶剂,得组分Fr.A-1-4(3.5g);
(5)组分Fr.A-1-4进行MCI柱层析,内径3cm,高20cm,并以质量浓度10%、20%、40%甲醇水溶液梯度洗脱,用量分别为2L、4L、7L,收集40%甲醇洗脱液,减压回收溶剂,得组分Fr.A-1-4-3(450mg);
(6)组分Fr.A-1-4-3以YMC-Pack ODS-A柱进行反向半制备,洗脱液以体积比CH3CN︰H2O=15︰85,洗脱30分钟,流速3.0mL/min,UV200~220nm,tR=26min,收集洗脱液,减压回收溶剂,得具有降低胆固醇活性化合物(20mg)。
实施例3
本发明一种从牛蒡叶中提取的具有降低胆固醇活性化合物的制备方法,包括以下步骤:
(1)将干燥的牛蒡叶15kg,粉碎,加水浸没煮沸提取3次,每次提取1.5h,合并提取液,浓缩至相当于生药0.4g/mL的浓缩液;
(2)将浓缩液上样于AB-8柱,内径25cm,高100cm,依次用水400L、质量浓度30%乙醇600L、70%乙醇800L以3BV/h的流速进行梯度洗脱,收集70%乙醇洗脱液,减压回收溶剂,得浸膏(1100g);
(3)浸膏加水2L分散,用正丁醇2L、1L、0.5L、0.5L萃取4次,合并正丁醇萃取液,减压回收溶剂,得组分Fr.A(58g);组分Fr.A进行硅胶柱层析,内径4cm,高25cm,分别以体积比二氯甲烷/甲醇100:2、10L,100:3、13L洗脱,分别收集100:2、100:3梯度洗脱液,合并洗脱液,减压回收溶剂,得组分Fr.A-1(23g);
(4)组分Fr.A-1进行二次硅胶柱层析,内径4cm,高20cm,以体积比石油醚-乙酸乙酯100:10、5L,100:30、5L,100:50、7L,100:70、12L梯度洗脱,收集100:70洗脱液,减压回收溶剂,得组分Fr.A-1-4(4g);
(5)组分Fr.A-1-4进行MCI柱层析,内径3cm,高20cm,并以质量浓度10%、20%、40%甲醇水溶液梯度洗脱,用量分别为2L、4L、7L,收集40%甲醇洗脱液,减压回收溶剂,得组分Fr.A-1-4-3(550mg);
(6)组分Fr.A-1-4-3以YMC-Pack ODS-A柱进行反向半制备,洗脱液以体积比CH3CN︰H2O=15︰85,洗脱30分钟,流速3.0mL/min,UV200~220nm,tR=26min,收集洗脱液,减压回收溶剂,得具有降低胆固醇活性化合物(25mg)。
实施例4
本发明一种从牛蒡叶中提取的具有降低胆固醇活性化合物的制备方法,包括以下步骤:
(1)将干燥的牛蒡叶15kg,粉碎,加水浸没煮沸提取3次,每次提取24h,合并提取液,浓缩至相当于生药0.4g/mL的浓缩液;
(2)将浓缩液上样于AB-8柱,内径25cm,高100cm,依次用水400L、质量浓度30%乙醇600L、70%乙醇800L以4BV/h的流速进行梯度洗脱,收集70%乙醇洗脱液,减压回收溶剂,得浸膏(1100g);
(3)浸膏加水2L分散,用正丁醇2L、1L、0.5L、0.5L萃取4次,合并正丁醇萃取液,减压回收溶剂,得组分Fr.A(58g);组分Fr.A进行硅胶柱层析,内径4cm,高25cm,分别以体积比二氯甲烷/甲醇100:2、10L,100:3、13L洗脱,分别收集100:2、100:3梯度洗脱液,合并洗脱液,减压回收溶剂,得组分Fr.A-1(23g);
(4)组分Fr.A-1进行二次硅胶柱层析,内径4cm,高20cm,以体积比石油醚-乙酸乙酯100:10、5L,100:30、5L,100:50、7L,100:70、12L梯度洗脱,收集100:70洗脱液,减压回收溶剂,得组分Fr.A-1-4(4g);
(5)组分Fr.A-1-4进行MCI柱层析,内径3cm,高20cm,并以质量浓度10%、20%、40%甲醇水溶液梯度洗脱,用量分别为2L、7L、7L,收集40%甲醇洗脱液,减压回收溶剂,得组分Fr.A-1-4-3(550mg);
(6)组分Fr.A-1-4-3以YMC-Pack ODS-A柱进行反向半制备,洗脱液以体积比CH3CN︰H2O=15︰85,洗脱30分钟,流速3.0mL/min,UV200~220nm,tR=26min,收集洗脱液,减压回收溶剂,得具有降低胆固醇活性化合物(25mg)。
要指出的是,上述实施例仅是用于说明本发明的具体实施方式,以对该从牛蒡叶中提取具有降血脂活性的化合物及其提取方法进行的详细描述,是说明性的,而不是用于限定本发明的保护范围,凡是在不脱离本发明总体构思下的变化和修改,均应属本发明的保护范围之内。
上述实施例1-4所述方法制备所得化合物经测定为相同化合物,命名为从牛蒡叶中提取的具有降低胆固醇活性新化合物NBY-14,鉴定为从牛蒡叶中提取的一个新化合物,化合物NBY-14
((3aR,5R,9bR)-3a,4,5,9b-tetrahydro-5-hydroxy-8-(hydroxymethyl)-5-methyl-1-methylenenaphtho[2,1-b]furan-2(1H)-one)、分子结构式见图1所示,经实验具有降血脂作用,有关具体测定和实验资料如下:
一、结构鉴定
采用的仪器与材料:
Shimadzu double-beam 210A紫外光谱仪(Shimadzu,Kyoto,日本);
LTQ orbitrap高分辨质谱仪(Thermo Fisher Scientific,Bremen,德国);
核磁共振仪:Bruker AVANCEⅢ500-NMR spectrometer(Bruker,Billerica,German),TMS为内标;
Thermo Fisher Scientific U3000型高效液相色谱仪;
半制备液相(赛谱锐思科技有限公司);BT25S精密天平(德国赛多利斯公司有限公司)。
柱色谱硅胶(100-200,200-300目)(青岛海洋化工有限公司);Sephadex LH-20(天津市光复精细化工研究所);MCI(日本三棱公司);YMC-Pack ODS-A半制备柱(S-5μm,12nm,250*10mmL.D.)(日本YMC公司);AB-8大孔吸附树脂(天津波鸿树脂科技有限公司)。
氘代试剂:DMSO-d6、CD3OD和CDCl3(Cambridge Isotope Laboratories,USA)色谱级甲醇(MeOH)和乙腈(MeCN)均购于美国TEDIA天地试剂公司,石油醚、甲醇、二氯甲烷、乙酸乙酯等试剂均为分析纯(天津富宇精细化工有限公司)。
DMEM高糖培养基(以色列BI公司,批号:0024419);
胎牛血清(以色列BI公司,批号:02-411-9);
脂多糖(lipopolysaccharide,LPS,美国Sigma-Aldrich公司,批号:L2994,加生理盐水配置储存液);
OX-LDL(上海源叶生物科技有限公司,批号:S24897);
BCA蛋白定量试剂盒(武汉博士德生物公司,批号:AR1110);
RIPA裂解液(武汉博士德生物公司,批号:AR0102);
生物安全柜(美国赛默飞公司,型号1384-A2);
二氧化碳培养箱(美国赛默飞公司,型号3111);
酶标仪(美国赛默飞公司,型号MULTISKAN FC)。
经鉴定,化合物NBY-14为淡黄色油状物,[α]2D5-113.338(c=0.06g/100ml,CH3OH);通过对HR-EI-MS[M+Na]+计算得m/z=283.09479,分子式为C15H16O4,不饱和度为8。紫外光谱显示(CH3OH)λmax(logε):202(1.550),216(1.104)nm;红外光谱显示羰基和双键(3383,1748,1657cm-1)的特征吸收信号。1H-NMR(CD3OD,500MHz)和13C-NMR(CD3OD,125MHz)显示了一个甲基信号[δH 1.47(3H,s,H3-11);δC 30.8(C-11)],两个亚甲基[δH 2.10(1H,dd,J=6.6,14.1Hz,H-4a),2.20(1H,dd,J=4.9,14.1Hz,H-4b),4.64(2H,s,H-12);δC 42.8(C-4),64.7(C-12)],两个次甲基[δH 4.46(1H,m,H-9b),5.22(1H,m,H-3a);δC 43.3(C-9b),76.5(C-3a)],一个三取代苯环信号[δH 7.63(1H,d,J=7.8Hz,H-6),7.31(1H,d,J=7.8Hz,H-7),7.36(1H,s,H-9);δC 126.5(C-6),127.2(C-7),142.7(C-8),128.6(C-9),134.1(C-9a),142.1(C-5a)],一个1,1-二取代双键[δH 5.81(1H,d,J=2.6Hz,H-10a),6.23(1H,d,J=2.6Hz,H-10b);δC 140.6(C-1),123.8(C-10)],一个sp3季碳δC69.9(C-5),一个酯羰基碳δC 172.1(C-2)。通过HMBC和H-H COSY谱确定了化合物NBY-14的结构(图2)。HMBC谱显示H-6与C-8/C-9a,H-9与C-5a/C-7/C-9b,H-7与C-5a,H-9b与C-3a/C-4/C-9/C-9a,H-10与C-9b/C-1/C-2,H-11与C-4/C-5/C-5a,H-12与C-8/C-9的相关性。H-H COSY谱显示了H-6与H-7、H-3a与H-4/H-9b的相关性。用NOESY谱确定了化合物NBY-14的相对构型(图3)。H-9b和H-3有NOE相关信号,表明它们在同一界面。然而,这些数据并不表明H3-11和H-3a或H-9b的相关性,这表明H3-11在另一面。通过计算理论ECD,确定化合物NBY-14的绝对构型,ECD光谱在210nm处显示负的cotton效应,在223nm处显示正的Cotton效应。计算曲线与实验曲线吻合较好,表明化合物NBY-14的绝对构型为3aR,5R,9bR。
1H-NMR and 13C-NMR date for compound 14in MeOD(J in Hz)
二、活性实验
1.1细胞培养
将RAW264.7细胞培养于DMEM完全培养基(含10%新生牛血清和90%DMEM不完全培养液)中,置37℃、含5%CO2培养箱内培养。选择对数生长期细胞用于实验。小鼠单核巨噬细胞(RAW264.7)由河南中医药大学细胞成像实验室培养。
1.2 MTT法检测RAW264.7细胞活力
取对数生长期的RAW264.7细胞,用完全培养基配成1×105个/mL的细胞悬浮液,接种于96孔板中,每孔加入100μl的细胞悬液,置37℃、含5%CO2培养箱内培养。24h后,弃去孔内上清液,分别加入100μl浓度为160、80、40、20、10、0mM,化合物NBY-14的完全培养基即给药组和空白组,每组设置3个复孔,置37℃、含5%CO2培养箱内培养。24h后,每孔加入MTT10μl,继续培养3h,弃去上清液,每孔加入100μl DMSO,在要床上振摇10min后,紫色结晶充分溶解,用酶标仪在490nm处测定各孔OD值。并计算细胞存活率,细胞存活率=(A测/A空)×100%。
表1化合物NBY-14对RAW264.7细胞活性的影响
注:与空白比较*p<0.01,**p<0.001。
牛蒡叶化学成分不同浓度对RAW264.7细胞活力的影响,如表1化合物NBY-14浓度为5μM浓度为100mg/ml的时候,细胞存活率低于100%,其他浓度下细胞存活率大于100%。我们选择化合物NBY-14在对细胞的给药浓度为1.25、2.5μM的时候,用于对细胞下一步实验研究。
1.3降脂实验
将RAW264.7细胞用DMEM培养基培养在12孔细胞培养板中,37℃条件下培养12h。然后将细胞分组:空白对照组、OX-LDL组(50μg/mL)、阳性药组(辛伐他汀3μM)、不同浓度药物组(化合物NBY-14),用OX-LDL造模24h,弃去培养基,换新培养基,药物干预24h后收集细胞,用总胆固醇试剂盒,在酶标仪510nm下进行检测,通过测定OD值,计算胆固醇的含量。
表2化合物NBY-14TC测定结果
阳性药:辛伐他汀与模型组相比,*P<0.05,**P<0.001
化合物NBY-14不同浓度对OX-LDL造成的脂质堆积模型RAW264.7细胞中TC的影响,如表2,结果显示与阳性药相比牛蒡叶化学成分不同浓度均可降低由OX-LDL引起的脂质堆积致胆固醇含量升高,与阳性药辛伐他汀比较为显著,且有剂量依赖性。
体内实验:
以上述化合物制备了一种降低胆固醇的药物,进行斑马鱼实验
1.斑马鱼的饲养:所有野生型casper系成年斑马鱼在北京爱生公司斑马鱼养殖系统中养殖,水温28℃,pH值=7.0。每日喂养两次,日光灯照射14h,黑暗环境10h。其余饲养和繁殖条件参照Zebrafish Book。
2.高胆固醇饲料的配制:将普通斑马鱼幼鱼饲料浸没于溶解有一定量胆固醇的无水乙醚,充分搅拌至乙醚完全挥发,制备成含4%(w/w)的高胆固醇饲料;
3分组与干预:将75只大小均一的健康成年斑马鱼随机分为普通饲料组(NC组),高胆固醇饲料组(HC组),给药组的低、高剂量组(高胆固醇饲料分别加入质量比0.4%、0.2%的药物),每缸15条鱼。各组斑马鱼每天定时定量投喂饲料3次,每次每条鱼投料15mg,且喂食前关闭循环水,喂食过程观察并记录各组鱼食物摄取情况。
4.指标检测
野生型casper系成年斑马鱼连续喂养28天,空腹24h后,将斑马鱼麻醉,从背部剪开主动脉并吸取血液,离心,取血清,同一处理组每15条鱼的血清混合作为一个样本,分别取出三分之一的血清按照试剂盒操作说明测定血清中总胆固醇(TCH)的、HLD、LDL的含量,测定方法按照试剂盒说明进行操作。
表3制备的药物对斑马鱼血浆脂质水平的影响
与正常组比较*p<0.05,**p<0.01;与高胆固醇组比较#p<0.05,##p<0.01。
本发明化合物NBY-14作为具有显著的降低胆固醇的作用,有效用于制备高胆固醇血症的药物中的应用。
综上所述,本发明是从牛蒡叶中提取的具有降低胆固醇活性的新化合物NBY-14,原料丰富,制备方法易操作,导向性强,分离速度快,效率高,产品纯度高,该化合物可有效用于制备降低胆固醇的药物,开拓了牛蒡叶的新用途和药用价值,经济和社会效益巨大。
Claims (8)
1.一种从牛蒡叶中提取的具有降低胆固醇活性化合物,该化合物结构式为:
2.权利要求1所述的从牛蒡叶中提取的具有降低胆固醇活性化合物的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:
(1)将干燥的牛蒡叶15kg,粉碎,加水浸没煮沸提取1~3次,每次提取1~4h,合并提取液,浓缩至相当于生药0.1~2g/mL的浓缩液;
(2)将浓缩液上样于AB-8柱,内径15~30cm,高90~170cm,依次用水120~500L、质量浓度30%乙醇200~600L、70%乙醇360~900L以1~5BV/h的流速进行梯度洗脱,收集70%乙醇洗脱液,减压回收溶剂,得浸膏500-1500g;
(3)浸膏加水0.5~3L分散,用正丁醇0.5~2L、0.5~1L、0.25~0.5L、0.25~0.5L萃取4次,合并正丁醇萃取液,减压回收溶剂,得组分Fr.A40~65g;组分Fr.A进行硅胶柱层析,内径3~6cm,高8~30cm,分别以体积比二氯甲烷/甲醇100:2、3~15L,100:3、3~15L洗脱,分别收集100:2、100:3梯度洗脱液,合并洗脱液,减压回收溶剂,得组分Fr.A-1 15~25g;
(4)组分Fr.A-1进行二次硅胶柱层析,内径2~5cm,高10~45cm,以体积比石油醚-乙酸乙酯100:10、2~7L,100:30、2~7L,100:50、3~9L,100:70、5~15L梯度洗脱,收集100:70洗脱液,减压回收溶剂,得组分Fr.A-1-4 2.5~4.5g;
(5)组分Fr.A-1-4进行MCI柱层析,内径1~3cm,高10~60cm,并以质量浓度10%、20%、40%甲醇水溶液梯度洗脱,用量分别为1~4L、2~8L、3~15L,收集40%甲醇洗脱液,减压回收溶剂,得组分Fr.A-1-4-3 300~550mg;
(6)组分Fr.A-1-4-3以YMC-Pack ODS-A柱进行反向半制备,洗脱液以体积比CH3CN︰H2O=15︰85,洗脱30分钟,流速3.0mL/min,UV200~220nm,tR=26min,收集洗脱液,减压回收溶剂,得具有降低胆固醇活性化合物10~30mg。
3.根据权利要求2所述的从牛蒡叶中提取的具有降低胆固醇活性化合物的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:
(1)将干燥的牛蒡叶15kg,粉碎,加水浸没煮沸提取2次,每次提取2.5h,合并提取液,浓缩至相当于生药0.15g/mL的浓缩液;
(2)将浓缩液上样于AB-8柱,内径15cm,高150cm,依次用水200L、质量浓度30%乙醇300L、70%乙醇400L以1BV/h的流速进行梯度洗脱,收集70%乙醇洗脱液,减压回收溶剂,得浸膏600g;
(3)浸膏加水1L分散,用正丁醇1L、1L、0.5L、0.5L萃取4次,合并正丁醇萃取液,减压回收溶剂,得组分Fr.A50g;组分Fr.A进行硅胶柱层析,内径3cm,高25cm,分别以体积比二氯甲烷/甲醇100:2、5L,100:3、6L洗脱,分别收集100:2、100:3梯度洗脱液,合并洗脱液,减压回收溶剂,得组分Fr.A-1 17g;
(4)组分Fr.A-1进行二次硅胶柱层析,内径2cm,高43cm,以体积比石油醚-乙酸乙酯100:10、2L,100:30、3L,100:50、3.5L,100:70、5L梯度洗脱,收集100:70洗脱液,减压回收溶剂,得组分Fr.A-1-4 3g;
(5)组分Fr.A-1-4进行MCI柱层析,内径1.5cm,高55cm,并以质量浓度10%、20%、40%甲醇水溶液梯度洗脱,用量分别为1.5L、3L、5L,收集40%甲醇洗脱液,减压回收溶剂,得组分Fr.A-1-4-3 350mg;
(6)组分Fr.A-1-4-3以YMC-Pack ODS-A柱进行反向半制备,洗脱液以体积比CH3CN︰H2O=15︰85,洗脱30分钟,流速3.0mL/min,UV200~220nm,tR=26min,收集洗脱液,减压回收溶剂,得具有降低胆固醇活性化合物15mg。
4.根据权利要求2所述的从牛蒡叶中提取的具有降低胆固醇活性化合物的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:
(1)将干燥的牛蒡叶15kg,粉碎,加水浸没煮沸提取2次,每次提取2h,合并提取液,浓缩至相当于生药0.3g/mL的浓缩液;
(2)将浓缩液上样于AB-8柱,内径20cm,高120cm,依次用水300L、质量浓度30%乙醇450L、70%乙醇600L以2BV/h的流速进行梯度洗脱,收集70%乙醇洗脱液,减压回收溶剂,得浸膏800g;
(3)浸膏加水1.5L分散,用正丁醇1.5L、1L、0.5L、0.5L萃取4次,合并正丁醇萃取液,减压回收溶剂,得组分Fr.A50g;组分Fr.A进行硅胶柱层析,内径6cm,高10cm,分别以体积比二氯甲烷/甲醇100:2、7L,100:3、10L洗脱,分别收集100:2、100:3梯度洗脱液,合并洗脱液,减压回收溶剂,得组分Fr.A-1 20g;
(4)组分Fr.A-1进行二次硅胶柱层析,内径3cm,高30cm,以体积比石油醚-乙酸乙酯100:10、3L,100:30、4L,100:50、5L,100:70、8L梯度洗脱,收集100:70洗脱液,减压回收溶剂,得组分Fr.A-1-4 3.5g;
(5)组分Fr.A-1-4进行MCI柱层析,内径3cm,高20cm,并以质量浓度10%、20%、40%甲醇水溶液梯度洗脱,用量分别为2L、4L、7L,收集40%甲醇洗脱液,减压回收溶剂,得组分Fr.A-1-4-3 450mg;
(6)组分Fr.A-1-4-3以YMC-Pack ODS-A柱进行反向半制备,洗脱液以体积比CH3CN︰H2O=15︰85,洗脱30分钟,流速3.0mL/min,UV200~220nm,tR=26min,收集洗脱液,减压回收溶剂,得具有降低胆固醇活性化合物20mg。
5.根据权利要求2所述的从牛蒡叶中提取的具有降低胆固醇活性化合物的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:
(1)将干燥的牛蒡叶15kg,粉碎,加水浸没煮沸提取3次,每次提取1.5h,合并提取液,浓缩至相当于生药0.4g/mL的浓缩液;
(2)将浓缩液上样于AB-8柱,内径25cm,高100cm,依次用水400L、质量浓度30%乙醇600L、70%乙醇800L以3BV/h的流速进行梯度洗脱,收集70%乙醇洗脱液,减压回收溶剂,得浸膏1100g;
(3)浸膏加水2L分散,用正丁醇2L、1L、0.5L、0.5L萃取4次,合并正丁醇萃取液,减压回收溶剂,得组分Fr.A58g;组分Fr.A进行硅胶柱层析,内径4cm,高25cm,分别以体积比二氯甲烷/甲醇100:2、10L,100:3、13L洗脱,分别收集100:2、100:3梯度洗脱液,合并洗脱液,减压回收溶剂,得组分Fr.A-1 23g;
(4)组分Fr.A-1进行二次硅胶柱层析,内径4cm,高20cm,以体积比石油醚-乙酸乙酯100:10、5L,100:30、5L,100:50、7L,100:70、12L梯度洗脱,收集100:70洗脱液,减压回收溶剂,得组分Fr.A-1-4 4g;
(5)组分Fr.A-1-4进行MCI柱层析,内径3cm,高20cm,并以质量浓度10%、20%、40%甲醇水溶液梯度洗脱,用量分别为2L、4L、7L,收集40%甲醇洗脱液,减压回收溶剂,得组分Fr.A-1-4-3 550mg;
(6)组分Fr.A-1-4-3以YMC-Pack ODS-A柱进行反向半制备,洗脱液以体积比CH3CN︰H2O=15︰85,洗脱30分钟,流速3.0mL/min,UV200~220nm,tR=26min,收集洗脱液,减压回收溶剂,得具有降低胆固醇活性化合物25mg。
6.根据权利要求2所述的从牛蒡叶中提取的具有降低胆固醇活性化合物的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:
(1)将干燥的牛蒡叶15kg,粉碎,加水浸没煮沸提取3次,每次提取24h,合并提取液,浓缩至相当于生药0.4g/mL的浓缩液;
(2)将浓缩液上样于AB-8柱,内径25cm,高100cm,依次用水400L、质量浓度30%乙醇600L、70%乙醇800L以4BV/h的流速进行梯度洗脱,收集70%乙醇洗脱液,减压回收溶剂,得浸膏1100g;
(3)浸膏加水2L分散,用正丁醇2L、1L、0.5L、0.5L萃取4次,合并正丁醇萃取液,减压回收溶剂,得组分Fr.A58g;组分Fr.A进行硅胶柱层析,内径4cm,高25cm,分别以体积比二氯甲烷/甲醇100:2、10L,100:3、13L洗脱,分别收集100:2、100:3梯度洗脱液,合并洗脱液,减压回收溶剂,得组分Fr.A-1 23g;
(4)组分Fr.A-1进行二次硅胶柱层析,内径4cm,高20cm,以体积比石油醚-乙酸乙酯100:10、5L,100:30、5L,100:50、7L,100:70、12L梯度洗脱,收集100:70洗脱液,减压回收溶剂,得组分Fr.A-1-4 4g;
(5)组分Fr.A-1-4进行MCI柱层析,内径3cm,高20cm,并以质量浓度10%、20%、40%甲醇水溶液梯度洗脱,用量分别为2L、7L、7L,收集40%甲醇洗脱液,减压回收溶剂,得组分Fr.A-1-4-3 550mg;
(6)组分Fr.A-1-4-3以YMC-Pack ODS-A柱进行反向半制备,洗脱液以体积比CH3CN︰H2O=15︰85,洗脱30分钟,流速3.0mL/min,UV200~220nm,tR=26min,收集洗脱液,减压回收溶剂,得具有降低胆固醇活性化合物25mg。
7.权利要求1所述的从牛蒡叶中提取的具有降低胆固醇活性化合物在制备降低胆固醇药物中的应用。
8.权利要求1所述的从牛蒡叶中提取的具有降低胆固醇活性化合物在制备治疗高胆固醇血症药物中的应用。
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CN106674311A (zh) * | 2016-12-27 | 2017-05-17 | 西安交通大学 | 一种苯并呋喃苷类化合物及其制备方法和应用 |
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