CN112920148B - 一种从牛蒡叶中提取的具有抗炎活性的新化合物nby-16及其制备方法与应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及从牛蒡叶中提取的具有抗炎活性的新化合物NBY‑16及其制备方法与应用，可有效解决从具有悠久食疗历史牛蒡叶中制备抗炎活性的新化合物，并实现新化合物在制备抗炎药物中的应用问题，方法是，牛蒡叶粉末用30%乙醇回流提取，回收乙醇，浓缩，进行MCI柱层析，依次用水、35%乙醇、75%乙醇洗脱，收集75%乙醇洗脱液，减压回收溶剂，进行硅胶柱层析，以二氯甲烷/甲醇100:3洗脱，减压回收溶剂，进行MCI柱层析，以甲醇/水梯度洗脱，收集15%甲醇洗脱液，再进行Toyopearl HW‑40C柱层析，甲醇洗脱，以InertSustain C18色谱柱进行反向半制备，得从牛蒡叶中提取的具有抗炎活性的新化合物NBY‑16，本发明原料丰富，制备方法易操作，导向性强，分离速度快，效率高，产品纯度高。
Description
技术领域
本发明涉及医药领域，特别是一种从牛蒡叶中提取的具有抗炎活性的新化合物NBY-16及其制备方法与应用。
背景技术
牛蒡叶为菊科植物牛蒡Arctiumlappa的干燥基生叶，在全国分布广泛，有着悠久的食用及药用历史，牛蒡叶用于治疗疮痈肿毒，有几十个经典处方，如《证治准绳·疡医》竹木刺伤肌肉不出：“牛蒡叶(恶实叶是六七月收者)上一味，风干为散，每用量疮口大小，干掺贴之，不得犯别药，如经暑月，蝇虫下蛆，在疮上或因肌肉合生成有小窍子者，即用杏仁研成膏，手拈作条子，入在窍内，其蛆虫自出。”基于牛蒡叶的药用价值，能否从中制备用于抑制炎症的安全、有效的化合物，并用于制备抗炎的药物至今未见有公开报导。
发明内容
针对上述情况，为克服现有技术及缺陷，本发明之目的就是提供一种从牛蒡叶中提取的具有抗炎活性的新化合物NBY-16及其制备方法与应用，可有效解决从具有悠久食疗历史牛蒡叶中制备抗炎活性的新化合物，并实现新化合物在制备抗炎药物中的应用问题。
本发明解决的技术方案是，一种从牛蒡叶中提取的具有抗炎活性的新化合物NBY-16，(1S,3aR,5R,5aS,9aR,9bR)-3a,4,5,5a,6,7,9a,9b-octahydro-5-hydroxy-8-(hydroxymethyl)-1-(methoxymethyl)-5-methyl-1-methylenenaphtho[2,1-b]furan-2(1H)-one)，化合物分子结构式为：
其制备方法是，包括以下步骤：
(1)牛蒡叶粉末20kg，用质量浓度为30％乙醇回流提取1～3次，每次用量为牛蒡叶重量的4～6倍，每次提取1～4h，合并提取液，回收乙醇，浓缩至相当于含生药0.1～0.7g/mL的浓缩液(4～15L)；
(2)将浓溶液进行MCI柱层析，内径14～30cm，高80～180cm，依次用水200～600L和质量浓度35％乙醇300～800L、质量浓度75％乙醇350～1000L，以1～4BV/h的流速进行梯度洗脱，收集75％乙醇洗脱液，减压回收溶剂，得组分Fr.A(600～1500g)；
(3)组分Fr.A进行硅胶柱层析，内径3～7cm，高15～40cm，以体积比二氯甲烷/甲醇100:3的洗脱液10～40L洗脱，收集100:3洗脱液，减压回收溶剂，得组分Fr.A-1(15～40g)；
(4)组分Fr.A-1进行MCI柱层析，内径1～4cm，高10～60cm，分别以体积比甲醇/水为10％、1～6L，15％、3～15L进行梯度洗脱，收集15％甲醇洗脱液，减压回收溶剂，得组分Fr.A-1-2(5～10g)；
(5)组分Fr.A-1-2进行Toyopearl HW-40C柱层析，内径1～3cm，高10～170cm，甲醇流速1mL/min洗脱20-30min，收集洗脱液，减压回收溶剂，得组分Fr.A-1-2-3(500～2000mg)；
(6)组分Fr.A-1-2-3以InertSustain C18色谱柱进行反向半制备，液相为体积比CH3CN︰H2O＝15︰85，时间为30min，流速＝3.0mL/min，UV 200-220nm，tR＝20.5min，得从牛蒡叶中提取的具有抗炎活性的新化合物NBY-16(150～300mg)。
该新化合物NBY-16具有抗炎活性，可有效用于制备抗炎药物，实现在制备抗炎药物中的应用(新用途)；
本发明原料丰富，制备方法易操作，导向性强，分离速度快，效率高，产品纯度高，可有效用于制备抗炎的药物，开拓了牛蒡叶的新用途和药用价值，经济和社会效益巨大。
附图说明
图1为本发明化合物NBY-16的分子结构式图；
图2为本发明化合物NBY-16的HMBC及H-H COSY相关图；
图3为本发明化合物NBY-16的NOESY相关图；
图4为本发明化合物NBY-16的1H-NMR谱图；
图5为本发明化合物NBY-16的13C-NMR谱图；
图6为本发明化合物NBY-16的HSQC谱图；
图7为本发明化合物NBY-16的HMBC谱图；
图8为本发明化合物NBY-16的红外光谱图；
图9为本发明化合物NBY-16的紫外光谱图；
图10为本发明化合物NBY-16的质谱图；
图11为本发明化合物NBY-16的工艺流程图；
具体实施方式
以下结合具体情况对本发明的具体实施方式作详细说明。
本发明在具体实施中，可由以下实施例给出。
实施例1
本发明一种从牛蒡叶中提取的具有抗炎活性的新化合物NBY-16的制备方法，包括以下步骤：
(1)牛蒡叶粉末20kg，用质量浓度为30％乙醇回流提取2次，每次用量为牛蒡叶重量的5倍，每次提取1.5h，合并提取液，回收乙醇，浓缩至相当于含生药0.2g/mL的浓缩液(12L)；
(2)将浓溶液进行MCI柱层析，内径15cm，高170cm，依次用水(200L)和质量浓度35％乙醇(400L)、质量浓度75％乙醇(600L)以1.5BV/h的流速进行梯度洗脱，收集75％乙醇洗脱液，减压回收溶剂，得组分Fr.A(800g)；
(3)组分Fr.A进行硅胶柱层析，内径3.5cm，高35cm，以体积比二氯甲烷/甲醇100:3的洗脱液(10L)洗脱，收集100:3洗脱液，减压回收溶剂，得组分Fr.A-1(20g)；
(4)组分Fr.A-1进行MCI柱层析，内径2cm，高50cm，分别以体积比甲醇/水为10％2L，15％(5L)进行梯度洗脱，收集15％甲醇洗脱液，减压回收溶剂，得组分Fr.A-1-2(6g)；
(5)组分Fr.A-1-2进行Toyopearl HW-40C柱层析，内径1.5cm，高150cm，并以甲醇1mL/min洗脱20-30min，收集洗脱液，减压回收溶剂，得组分Fr.A-1-2-3(700mg)；
(6)组分Fr.A-1-2-3以InertSustain C18色谱柱进行反向半制备，液相为体积比CH3CN︰H2O＝15︰85，时间为30min，流速＝3.0mL/min，UV 200-220nm，tR＝20.5min，得从牛蒡叶中提取的具有抗炎活性的新化合物NBY-16(150～300mg)。
实施例2
本发明一种从牛蒡叶中提取的具有抗炎活性的新化合物NBY-16的制备方法，包括以下步骤：
(1)牛蒡叶粉末20kg，用质量浓度为30％乙醇回流提取3次，每次用量为牛蒡叶重量的4.5倍，每次提取3h，合并提取液，回收乙醇，浓缩至相当于含生药0.6g/mL的浓缩液(8L)；
(2)将浓溶液进行MCI柱层析，内径25cm，高130cm，依次用水(500L)和质量浓度35％乙醇(700L)、质量浓度75％乙醇(900L)以3BV/h的流速进行梯度洗脱，收集75％乙醇洗脱液，减压回收溶剂，得组分Fr.A(1400g)；
(3)组分Fr.A进行硅胶柱层析，内径6cm，高20cm，以体积比二氯甲烷/甲醇100:3的洗脱液(35L)洗脱，收集100:3洗脱液，减压回收溶剂，得组分Fr.A-1(35g)；
(4)组分Fr.A-1进行MCI柱层析，内径4cm，高20cm，分别以体积比甲醇/水为10％(5L)，15％(12L)进行梯度洗脱，收集15％甲醇洗脱液，减压回收溶剂，得组分Fr.A-1-2(9g)；
(5)组分Fr.A-1-2进行Toyopearl HW-40C柱层析，内径3cm，高70cm，并以甲醇1mL/min洗脱20-30min，收集洗脱液，减压回收溶剂，得组分Fr.A-1-2-3(1500mg)；
(6)组分Fr.A-1-2-3以InertSustain C18色谱柱进行反向半制备，液相为体积比CH3CN︰H2O＝15︰85，时间为30min，流速＝3.0mL/min，UV 200-220nm，tR＝20.5min，得从牛蒡叶中提取的具有抗炎活性的新化合物NBY-16(150～300mg)。
实施例3
本发明一种从牛蒡叶中提取的具有抗炎活性的新化合物NBY-16的制备方法，包括以下步骤：
(1)牛蒡叶粉末20kg，用质量浓度为30％乙醇回流提取3次，每次用量为牛蒡叶重量6倍，每次提取2h，合并提取液，回收乙醇，浓缩至相当于含生药0.5g/mL的浓缩液(7L)；
(2)将浓溶液进行MCI柱层析，内径23cm，高100cm，依次用水(280L)和质量浓度35％乙醇(500L)、质量浓度75％乙醇(800L)以2.5BV/h的流速进行梯度洗脱，收集75％乙醇洗脱液，减压回收溶剂，得组分Fr.A(1200g)；
(3)组分Fr.A进行硅胶柱层析，内径5m，高25cm，以体积比二氯甲烷/甲醇100:3的洗脱液(27L)洗脱，收集100:3洗脱液，减压回收溶剂，得组分Fr.A-1(30g)；
(4)组分Fr.A-1进行MCI柱层析，内径3cm，高30cm，分别以体积比甲醇/水为10％(4L)，15％(10L)进行梯度洗脱，收集15％甲醇洗脱液，减压回收溶剂，得组分Fr.A-1-2(8g)；
(5)组分Fr.A-1-2进行Toyopearl HW-40C柱层析，内径2.5cm，高90cm，并以甲醇1mL/min洗脱20-30min，收集洗脱液，减压回收溶剂，得组分Fr.A-1-2-3(1200mg)；
(6)组分Fr.A-1-2-3以InertSustain C18色谱柱进行反向半制备，液相为体积比CH3CN︰H2O＝15︰85，时间为30min，流速＝3.0mL/min，UV 200-220nm，tR＝20.5min，得从牛蒡叶中提取的具有抗炎活性的新化合物NBY-16(150～300mg)。
实施例4
本发明一种从牛蒡叶中提取的具有抗炎活性的新化合物NBY-16的制备方法，包括以下步骤：
(1)牛蒡叶粉末20kg，用质量浓度为30％乙醇回流提取2次，每次用量为牛蒡叶重量的4倍，每次提取2h，合并提取液，回收乙醇，浓缩至相当于含生药0.3g/mL的浓缩液(10L)；
(2)将浓溶液进行MCI柱层析，内径18cm，高120cm，依次用水(240L)和质量浓度35％乙醇(450L)、质量浓度75％乙醇(700L)以2BV/h的流速进行梯度洗脱，收集75％乙醇洗脱液，减压回收溶剂，得组分Fr.A(1000g)；
(3)组分Fr.A进行硅胶柱层析，内径4m，高35cm，以体积比二氯甲烷/甲醇100:3的洗脱液(21L)洗脱，收集100:3洗脱液，减压回收溶剂，得组分Fr.A-1(25g)；
(4)组分Fr.A-1进行MCI柱层析，内径2.5cm，高40cm，分别以体积比甲醇/水为10％(3L)，15％(8L)进行梯度洗脱，收集15％甲醇洗脱液，减压回收溶剂，得组分Fr.A-1-2(7g)；
(5)组分Fr.A-1-2进行Toyopearl HW-40C柱层析，内径2cm，高120cm，并以甲醇1mL/min洗脱20-30min，收集洗脱液，减压回收溶剂，得组分Fr.A-1-2-3(900mg)；
(6)组分Fr.A-1-2-3以InertSustain C18色谱柱进行反向半制备，液相为体积比CH3CN︰H2O＝15︰85，时间为30min，流速＝3.0mL/min，UV 200-220nm，tR＝20.5min，得从牛蒡叶中提取的具有抗炎活性的新化合物NBY-16(150～300mg)。
要指出的是，上述实施例仅是用于说明本发明的具体实施方式，以对该从牛蒡叶中提取具有抗炎活性的化合物及其提取方法进行的详细描述，是说明性的，而不是用于限定本发明的保护范围，凡是在不脱离本发明总体构思下的变化和修改，均应属本发明的保护范围之内。
上述所得化合物经测定，为相同的结构的从牛蒡叶中提取的新化合物NBY-16(S,3aR,5R,5aS,9aR,9bR)-3a,4,5,5a,6,7,9a,9b-octahydro-5-hydroxy-8-(hydroxymethyl)-1-(methox ymethyl)-5-methyl-1-methylenenaphtho[2,1-b]furan-2(1H)-one)，分子结构式见图1所示，具有抗炎活性，可有效用于制备抗炎药物，实现在制备抗炎药物中的应用，并经鉴定和实验得到了充分证明，效果非常好，有关具体测定和实验资料如下：
1、仪器和材料
Shimadzu double-beam 210A紫外光谱仪(Shimadzu,Kyoto,日本)；
LTQ orbitrap高分辨质谱仪(Thermo Fisher Scientific,Bremen,德国)；
核磁共振仪：Bruker AVANCEⅢ500-NMR spectrometer(Bruker,Billerica,German)，TMS为内标；
Thermo Fisher Scientific U3000型高效液相色谱仪；
半制备液相(赛谱锐思科技有限公司)；BT25S精密天平(德国赛多利斯公司有限公司)。
柱色谱硅胶(100-200，200-300目)(青岛海洋化工有限公司)；Toyopearl HW-40C(北京英莱克科技发展有限公司)；MCI(日本三棱公司)；InertSustain C18色谱柱(14mm*150mm*5um)(日本YMC公司)。
氘代试剂：DMSO-d6、CD3OD和CDCl3(Cambridge Isotope Laboratories,USA)色谱级甲醇(MeOH)和乙腈(MeCN)均购于美国TEDIA天地试剂公司，石油醚、甲醇、二氯甲烷、乙酸乙酯等试剂均为分析纯(天津富宇精细化工有限公司)。
DMEM高糖培养基(以色列BI公司，批号：0024419)；
胎牛血清(以色列BI公司，批号：02-411-9)；
脂多糖(lipopolysaccharide，LPS，美国Sigma-Aldrich公司，批号：L2994，加生理盐水配置储存液)；
OX-LDL(上海源叶生物科技有限公司，批号：S24897)；
BCA蛋白定量试剂盒(武汉博士德生物公司，批号：AR1110)；
RIPA裂解液(武汉博士德生物公司，批号：AR0102)；
生物安全柜(美国赛默飞公司，型号1384-A2)；
二氧化碳培养箱(美国赛默飞公司，型号3111)；
酶标仪(美国赛默飞公司，型号MULTISKAN FC)；
小鼠单核巨噬细胞(RAW264.7)由河南中医药大学细胞成像实验室培养。
2、结构鉴定
经测定NBY-16淡黄色油状物，通过对HR-EI-MS[M+H]+计算得m/z＝297.17053，推测分子式为C16H24O5，不饱和度为5。紫外光谱显示(CH3OH)λmax(logε):201(0.688)nm。1H-NMR(CD3OD,500MHz)和13C-NMR(CD3OD,125MHz)谱与HSQC谱显示有一个甲氧基信号[δH3.31(3H,s,H-13)；δC59.3(C-13)]，一个甲基信号[δH1.27(3H,s,H3-11)；δC28.9(C-11)]，5个亚甲基信号[δH1.42(1H,m,H-6a),1.78(1H,brd,J＝12.2Hz,H-6b)，2.12(1H,m,H-7a)，2.17(1H,dd,J＝5.5,11.7Hz,H-7b)，1.51(1H,brt,J＝12.0Hz,H-4a)，1.99(1H,dd,J＝5.5,13.4Hz,H-4b)，3.71(1H,d,J＝9.7Hz,H-10a)，3.59(1H,dd,J＝9.7,1.9Hz,H-10b)，4.00(2H,brt,J＝14.2Hz,H-12)；δC23.3(C-6)，27.2(C-7)，37.8(C-4)，70.4(C-10)，66.9(C-12)]，一个三取代双键[δH5.75(1H,brs,H-9)；δC139.5(C-8)，124.6(C-9)]，5个次甲基[δH3.00(1H,m,H-9a)，3.02(1H,m,H-9b)，4.83(1H,m,H-3a)，1.62(1H,brd,J＝13.7Hz,H-5a)，2.74(1H,d,J＝12.0Hz,H-1)；δC32.8(C-9a)，37.0(C-9b)，78.3(C-3a)，45.6(C-5a)，45.5(C-1)]，1个季碳[δC73.5(C-5)]，1个酯羰基碳[δC 180.1(C-2)]。通过HMBC和H-H COSY谱确定了NBY-16的结构式。HMBC谱显示了H2-6与C-7/C-8/C-9b，H-9与C-7/C-9a/C-5a，H-9b与C-9a/C-3a/C-4，H-3a与C-9b/C-4/C-1，H-5a与C-4/C-5，H-1与C-9a/C-9b/C-2/C-10，H2-10与C-9b/C-2/C-10以及H2-12与C-7/C-8/C-9的相关性。H-H COSY显示H-6与H-7/H-5a，H-9a与H-5a，H-9b与H-9a/H-3a/H-1，H-3a与H-4之间存在相关性。对HMBC和H-H COSY相关性的分析得出了NBY-16的平面结构。在NOESY实验的基础上推导出了NBY-16的相对构型。从H-3a到H-9a和H-9b的NOESY相关性表明，H-3a，H-9a和H-9b在同一面上。然而，这些数据并不表明从H-1到H-9b或H-3a的相关性，NOESY谱显示从H-5a到H3-11的相关性，这表明H-1、H-5a和H3-11在另一面。NBY-16的ECD谱在200nm处表现为正的科顿效应，在227nm处表现为负的科顿效应，对NBY-16进行了理论ECD计算，计算曲线与实验曲线吻合较好。因此，NBY-16的绝对构型为1S,3aR,5R,5aS,9aR,9bR.
1H-NMR and 13C-NMR date for compound 16inMEOD(J in Hz)
| NO. | H(δ) | C(δ) |
| 1 | 2.74(1H,d,J＝12.1) | 45.5 |
| 2 | - | 180.1 |
| 3a | 4.83(1H,m) | 78.3 |
| 4 | 1.99(1H,dd,J＝13.4,5.5),1.51(1H,brt,J＝12.0) | 37.8 |
| 5 | - | 73.5 |
| 5a | 1.62(1H,br d,J＝13.7) | 45.6 |
| 6 | 1.42(1H,m),1.78(1H,brd,J＝12.2) | 23.3 |
| 7 | 2.12(1H,m),2.17(1H,dd,J＝17.6,5.5) | 27.2 |
| 8 | - | 139.5 |
| 9 | 5.75(1H,br s) | 124.6 |
| 9a | 3.0(1H,m) | 32.8 |
| 9b | 3.02(1H,m) | 37.0 |
| 10 | 3.71(1H,d,J＝9.7),3.59(1H,dd,J＝1.9,9.7) | 70.4 |
| 11 | 1.27(3H,s) | 28.9 |
| 12 | 4.0(2H,br t,J＝14.2) | 66.9 |
| 13 | 3.31(3H,m) | 59.3 |
鉴定命名为一种从牛蒡叶中提取的具有抗炎活性的新化合物NBY-16(S,3aR,5R,5aS,9aR,9bR)-3a,4,5,5a,6,7,9a,9b-octahydro-5-hydroxy-8-(hydroxymethyl)-1-(methoxymethyl)-5-methyl-1-methylenenaphtho[2,1-b]furan-2(1H)-one)，分子结构式为：
3、活性试验
3-1细胞培养
将RAW264.7细胞培养于DMEM完全培养基(含10％新生牛血清和90％DMEM不完全培养液)中，置37℃、含5％CO2培养箱内培养。选择对数生长期细胞用于实验。
3-2 MTT法检测RAW264.7细胞活力
取对数生长期的RAW264.7细胞，用完全培养基配成1×105个/mL的细胞悬浮液，接种于96孔板中，每孔加入100μl的细胞悬液，置37℃、含5％CO2培养箱内培养。24h后，弃去孔内上清液，分别加入100μl浓度为160、80、40、20、10、0mM，NBY-16的完全培养基；即给药组和空白组，每组设置3个复孔，置37℃、含5％CO2培养箱内培养。24h后，每孔加入MTT 10μl，继续培养3h，弃去上清液，每孔加入100μl DMSO，在要床上振摇10min后，紫色结晶充分溶解，用酶标仪在490nm处测定各孔OD值。并计算细胞存活率，细胞存活率＝(A测/A空)×100％。
表1 NBY-16对RAW264.7细胞活性的影响
注：与空白比较*p＜0.01，**p＜0.001。
结果分析：
牛蒡叶化学成分不同浓度对RAW264.7细胞活力的影响，如表1NBY-16所有浓度下细胞存活率均大于100％。我们选择NBY-16浓度为80、40、20μM的时候，用于对细胞下一步实验研究。
3-3 Griess法检测LPS诱导RAW264.7细胞产生NO水平
将处于对数生长期的细胞接种于24孔板(2×105个细胞/孔)，37℃、5％CO2环境的培养箱中培养12h后加入不同质量浓度的待测样品，温孵培养1h后加人1μg/mL LPS。同时设空白对照组(培养基)、模型(LPS+培养基)组、阳性药组(地塞米松+培养基)和药物作用组。继续温孵培养24h。每组重复3次独立实验。将上清液(100mL)与等体积格氏试剂混合，用酶联免疫检检测仪测定混合物在540nm处的OD值，计算NO抑制率，结果见表2。
表2 NBY-16对LPS诱导的RAW264.7细胞NO水平影响
注：阳性药(地塞米松)
结果分析：
由表2可知，模型组NO的释放量显著高于空白对照组(P<0.01)，表明造模成功。与模型组相比，各浓度处理均能显著降低NO的释放量(P<0.01)，且呈浓度依赖性。由表2可以看出，NBY-16能够较好地抑制炎症因子NO的生成。
实验表明该化合物作为具有显著的抗炎作用，有效用于制备抗炎的药物；
综上所述本发明是设计一种从牛蒡叶中提取的具有抗炎活性的新化合物NBY-16及其制备方法与应用，原料丰富，制备方法易操作，导向性强，产品纯度97％以上，该化合物具有抗炎活性，可有效用于制备抗炎的药物，开拓了牛蒡叶的新用途和商业价值，具有广阔的开发前景，经济和社会效益巨大。
Claims (7)
1.一种从牛蒡叶中提取的具有抗炎活性的化合物NBY-16，该化合物分子结构式为：
2.权利要求1所述的从牛蒡叶中提取的具有抗炎活性的化合物NBY-16的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)牛蒡叶粉末20kg，用质量浓度为30％乙醇回流提取1～3次，每次用量为牛蒡叶重量的4～6倍，每次提取1～4h，合并提取液，回收乙醇，浓缩至相当于含生药0.1～0.7g/mL的浓缩液4～15L；
(2)将浓缩液进行MCI柱层析，内径14～30cm，高80～180cm，依次用水200～600L和质量浓度35％乙醇300～800L、质量浓度75％乙醇350～1000L，以1～4BV/h的流速进行梯度洗脱，收集75％乙醇洗脱液，减压回收溶剂，得组分Fr.A600～1500g；
(3)组分Fr.A进行硅胶柱层析，内径3～7cm，高15～40cm，以体积比二氯甲烷/甲醇100:3的洗脱液10～40L洗脱，收集100:3洗脱液，减压回收溶剂，得组分Fr.A-1 15～40g；
(4)组分Fr.A-1进行MCI柱层析，内径1～4cm，高10～60cm，分别以体积比甲醇/水为10％、1～6L，15％、3～15L进行梯度洗脱，收集15％甲醇洗脱液，减压回收溶剂，得组分Fr.A-1-2 5～10g；
(5)组分Fr.A-1-2进行Toyopearl HW-40C柱层析，内径1～3cm，高10～170cm，甲醇流速1mL/min洗脱20-30min，收集洗脱液，减压回收溶剂，得组分Fr.A-1-2-3 500～2000mg；
(6)组分Fr.A-1-2-3以InertSustain C18色谱柱进行反向半制备，液相为体积比CH3CN︰H2O＝15︰85，时间为30min，流速＝3.0mL/min，UV200-220nm，tR＝20.5min，得从牛蒡叶中提取的具有抗炎活性的化合物NBY-16 150～300mg。
3.根据权利要求2所述的从牛蒡叶中提取的具有抗炎活性的化合物NBY-16的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)牛蒡叶粉末20kg，用质量浓度为30％乙醇回流提取2次，每次用量为牛蒡叶重量的5倍，每次提取1.5h，合并提取液，回收乙醇，浓缩至相当于含生药0.2g/mL的浓缩液12L；
(2)将浓缩液进行MCI柱层析，内径15cm，高170cm，依次用水200L和质量浓度35％乙醇400L、质量浓度75％乙醇600L以1.5BV/h的流速进行梯度洗脱，收集75％乙醇洗脱液，减压回收溶剂，得组分Fr.A800g；
(3)组分Fr.A进行硅胶柱层析，内径3.5cm，高35cm，以体积比二氯甲烷/甲醇100:3的洗脱液10L洗脱，收集100:3洗脱液，减压回收溶剂，得组分Fr.A-1 20g；
(4)组分Fr.A-1进行MCI柱层析，内径2cm，高50cm，分别以体积比甲醇/水为10％2L，15％5L进行梯度洗脱，收集15％甲醇洗脱液，减压回收溶剂，得组分Fr.A-1-2 6g；
(5)组分Fr.A-1-2进行Toyopearl HW-40C柱层析，内径1.5cm，高150cm，并以甲醇1mL/min洗脱20-30min，收集洗脱液，减压回收溶剂，得组分Fr.A-1-2-3 700mg；
(6)组分Fr.A-1-2-3以InertSustainC18色谱柱进行反向半制备，液相为体积比CH3CN︰H2O＝15︰85，时间为30min，流速＝3.0mL/min，UV200-220nm，tR＝20.5min，得从牛蒡叶中提取的具有抗炎活性的化合物NBY-16 150～300mg。
4.根据权利要求2所述的从牛蒡叶中提取的具有抗炎活性的化合物NBY-16的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)牛蒡叶粉末20kg，用质量浓度为30％乙醇回流提取3次，每次用量为牛蒡叶重量的4.5倍，每次提取3h，合并提取液，回收乙醇，浓缩至相当于含生药0.6g/mL的浓缩液8L；
(2)将浓缩液进行MCI柱层析，内径25cm，高130cm，依次用水500L和质量浓度35％乙醇700L、质量浓度75％乙醇900L以3BV/h的流速进行梯度洗脱，收集75％乙醇洗脱液，减压回收溶剂，得组分Fr.A1400g；
(3)组分Fr.A进行硅胶柱层析，内径6cm，高20cm，以体积比二氯甲烷/甲醇100:3的洗脱液35L洗脱，收集100:3洗脱液，减压回收溶剂，得组分Fr.A-1 35g；
(4)组分Fr.A-1进行MCI柱层析，内径4cm，高20cm，分别以体积比甲醇/水为10％5L，15％12L进行梯度洗脱，收集15％甲醇洗脱液，减压回收溶剂，得组分Fr.A-1-2 9g；
(5)组分Fr.A-1-2进行Toyopearl HW-40C柱层析，内径3cm，高70cm，并以甲醇1mL/min洗脱20-30min，收集洗脱液，减压回收溶剂，得组分Fr.A-1-2-3 1500mg；
(6)组分Fr.A-1-2-3以InertSustain C18色谱柱进行反向半制备，液相为体积比CH3CN︰H2O＝15︰85，时间为30min，流速＝3.0mL/min，UV200-220nm，tR＝20.5min，得从牛蒡叶中提取的具有抗炎活性的化合物NBY-16 150～300mg。
5.根据权利要求2所述的从牛蒡叶中提取的具有抗炎活性的化合物NBY-16的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)牛蒡叶粉末20kg，用质量浓度为30％乙醇回流提取3次，每次用量为牛蒡叶重量6倍，每次提取2h，合并提取液，回收乙醇，浓缩至相当于含生药0.5g/mL的浓缩液7L；
(2)将浓缩液进行MCI柱层析，内径23cm，高100cm，依次用水280L和质量浓度35％乙醇500L、质量浓度75％乙醇800L以2.5BV/h的流速进行梯度洗脱，收集75％乙醇洗脱液，减压回收溶剂，得组分Fr.A1200g；
(3)组分Fr.A进行硅胶柱层析，内径5m，高25cm，以体积比二氯甲烷/甲醇100:3的洗脱液27L洗脱，收集100:3洗脱液，减压回收溶剂，得组分Fr.A-1 30g；
(4)组分Fr.A-1进行MCI柱层析，内径3cm，高30cm，分别以体积比甲醇/水为10％4L，15％10L进行梯度洗脱，收集15％甲醇洗脱液，减压回收溶剂，得组分Fr.A-1-2 8g；
(5)组分Fr.A-1-2进行Toyopearl HW-40C柱层析，内径2.5cm，高90cm，并以甲醇1mL/min洗脱20-30min，收集洗脱液，减压回收溶剂，得组分Fr.A-1-2-3 1200mg；
(6)组分Fr.A-1-2-3以InertSustain C18色谱柱进行反向半制备，液相为体积比CH3CN︰H2O＝15︰85，时间为30min，流速＝3.0mL/min，UV200-220nm，tR＝20.5min，得从牛蒡叶中提取的具有抗炎活性的化合物NBY-16 150～300mg。
6.根据权利要求2所述的从牛蒡叶中提取的具有抗炎活性的化合物NBY-16的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)牛蒡叶粉末20kg，用质量浓度为30％乙醇回流提取2次，每次用量为牛蒡叶重量的4倍，每次提取2h，合并提取液，回收乙醇，浓缩至相当于含生药0.3g/mL的浓缩液10L；
(2)将浓缩液进行MCI柱层析，内径18cm，高120cm，依次用水240L和质量浓度35％乙醇450L、质量浓度75％乙醇700L以2BV/h的流速进行梯度洗脱，收集75％乙醇洗脱液，减压回收溶剂，得组分Fr.A1000g；
(3)组分Fr.A进行硅胶柱层析，内径4m，高35cm，以体积比二氯甲烷/甲醇100:3的洗脱液21L洗脱，收集100:3洗脱液，减压回收溶剂，得组分Fr.A-1 25g；
(4)组分Fr.A-1进行MCI柱层析，内径2.5cm，高40cm，分别以体积比甲醇/水为10％3L，15％8L进行梯度洗脱，收集15％甲醇洗脱液，减压回收溶剂，得组分Fr.A-1-2 7g；
(5)组分Fr.A-1-2进行ToyopearlHW-40C柱层析，内径2cm，高120cm，并以甲醇1mL/min洗脱20-30min，收集洗脱液，减压回收溶剂，得组分Fr.A-1-2-3 900mg；
(6)组分Fr.A-1-2-3以InertSustain C18色谱柱进行反向半制备，液相为体积比CH3CN︰H2O＝15︰85，时间为30min，流速＝3.0mL/min，UV200-220nm，tR＝20.5min，得从牛蒡叶中提取的具有抗炎活性的化合物NBY-16 150～300mg。
7.权利要求1所述的从牛蒡叶中提取的具有抗炎活性的化合物NBY-16在制备抗炎药物中的应用。
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