CN114057679B - 从牛蒡叶中分离得到4个新的倍半萜内酯类化合物及其制备方法与应用 - Google Patents
从牛蒡叶中分离得到4个新的倍半萜内酯类化合物及其制备方法与应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN114057679B CN114057679B CN202111512783.8A CN202111512783A CN114057679B CN 114057679 B CN114057679 B CN 114057679B CN 202111512783 A CN202111512783 A CN 202111512783A CN 114057679 B CN114057679 B CN 114057679B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- under reduced
- reduced pressure
- silica gel
- eluent
- component
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 235000003130 Arctium lappa Nutrition 0.000 title claims abstract description 52
- 235000008078 Arctium minus Nutrition 0.000 title claims abstract description 51
- 229930009674 sesquiterpene lactone Natural products 0.000 title claims abstract description 32
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 27
- HATRDXDCPOXQJX-UHFFFAOYSA-N Thapsigargin Natural products CCCCCCCC(=O)OC1C(OC(O)C(=C/C)C)C(=C2C3OC(=O)C(C)(O)C3(O)C(CC(C)(OC(=O)C)C12)OC(=O)CCC)C HATRDXDCPOXQJX-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 19
- -1 sesquiterpene lactone compounds Chemical class 0.000 title claims abstract description 15
- 240000005528 Arctium lappa Species 0.000 title description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims abstract description 83
- 241000208843 Arctium Species 0.000 claims abstract description 50
- 229940126214 compound 3 Drugs 0.000 claims abstract description 41
- 229940125782 compound 2 Drugs 0.000 claims abstract description 40
- 229940125904 compound 1 Drugs 0.000 claims abstract description 36
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 36
- 201000001320 Atherosclerosis Diseases 0.000 claims abstract description 24
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims abstract description 22
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 15
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims abstract description 14
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 100
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 84
- 239000003480 eluent Substances 0.000 claims description 63
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 60
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims description 60
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 57
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 42
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 38
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 claims description 38
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 claims description 38
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 34
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 claims description 32
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 30
- 238000011068 loading method Methods 0.000 claims description 30
- 239000003208 petroleum Substances 0.000 claims description 30
- 238000010828 elution Methods 0.000 claims description 27
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 22
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 claims description 21
- 239000002024 ethyl acetate extract Substances 0.000 claims description 20
- 239000000284 extract Substances 0.000 claims description 20
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 20
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 claims description 20
- 238000010898 silica gel chromatography Methods 0.000 claims description 20
- 150000002107 sesquiterpene lactone derivatives Chemical class 0.000 claims description 18
- 238000002386 leaching Methods 0.000 claims description 16
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 16
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 claims description 10
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 claims description 10
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims description 10
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 claims description 9
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims description 8
- AICOOMRHRUFYCM-ZRRPKQBOSA-N oxazine, 1 Chemical compound C([C@@H]1[C@H](C(C[C@]2(C)[C@@H]([C@H](C)N(C)C)[C@H](O)C[C@]21C)=O)CC1=CC2)C[C@H]1[C@@]1(C)[C@H]2N=C(C(C)C)OC1 AICOOMRHRUFYCM-ZRRPKQBOSA-N 0.000 claims description 4
- 238000002791 soaking Methods 0.000 claims description 4
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims 4
- 239000002075 main ingredient Substances 0.000 claims 1
- GBMDVOWEEQVZKZ-UHFFFAOYSA-N methanol;hydrate Chemical compound O.OC GBMDVOWEEQVZKZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 230000000879 anti-atherosclerotic effect Effects 0.000 abstract description 14
- 238000000926 separation method Methods 0.000 abstract description 4
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 abstract description 2
- 230000000378 dietary effect Effects 0.000 abstract description 2
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 abstract description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 16
- 208000006011 Stroke Diseases 0.000 description 11
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 10
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 9
- 238000001644 13C nuclear magnetic resonance spectroscopy Methods 0.000 description 8
- 238000005160 1H NMR spectroscopy Methods 0.000 description 8
- 206010008190 Cerebrovascular accident Diseases 0.000 description 7
- 229920000742 Cotton Polymers 0.000 description 7
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 7
- 238000002329 infrared spectrum Methods 0.000 description 7
- 238000000990 heteronuclear single quantum coherence spectrum Methods 0.000 description 6
- 238000005100 correlation spectroscopy Methods 0.000 description 5
- 238000003919 heteronuclear multiple bond coherence Methods 0.000 description 5
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 5
- RHDGNLCLDBVESU-UHFFFAOYSA-N but-3-en-4-olide Chemical compound O=C1CC=CO1 RHDGNLCLDBVESU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000001460 carbon-13 nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 description 4
- 238000002212 electronic circular dichroism spectrum Methods 0.000 description 4
- 238000001052 heteronuclear multiple bond coherence spectrum Methods 0.000 description 4
- 238000002114 high-resolution electrospray ionisation mass spectrometry Methods 0.000 description 4
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 4
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 4
- 238000001819 mass spectrum Methods 0.000 description 4
- 125000001434 methanylylidene group Chemical group [H]C#[*] 0.000 description 4
- 125000000325 methylidene group Chemical group [H]C([H])=* 0.000 description 4
- 238000000425 proton nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 description 4
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 4
- 238000002211 ultraviolet spectrum Methods 0.000 description 4
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 3
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 3
- 150000001336 alkenes Chemical group 0.000 description 3
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 3
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 3
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 3
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 3
- VILAVOFMIJHSJA-UHFFFAOYSA-N dicarbon monoxide Chemical compound [C]=C=O VILAVOFMIJHSJA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 3
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 3
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 3
- 238000000465 moulding Methods 0.000 description 3
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 3
- 235000014347 soups Nutrition 0.000 description 3
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 2
- 241000700157 Rattus norvegicus Species 0.000 description 2
- 210000001367 artery Anatomy 0.000 description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 2
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 2
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 2
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 2
- 241000208838 Asteraceae Species 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical group [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004215 Carbon black (E152) Substances 0.000 description 1
- 208000024172 Cardiovascular disease Diseases 0.000 description 1
- 229930040373 Paraformaldehyde Natural products 0.000 description 1
- 206010033799 Paralysis Diseases 0.000 description 1
- KNAHARQHSZJURB-UHFFFAOYSA-N Propylthiouracile Chemical compound CCCC1=CC(=O)NC(=S)N1 KNAHARQHSZJURB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 244000184734 Pyrus japonica Species 0.000 description 1
- RYMZZMVNJRMUDD-UHFFFAOYSA-N SJ000286063 Natural products C12C(OC(=O)C(C)(C)CC)CC(C)C=C2C=CC(C)C1CCC1CC(O)CC(=O)O1 RYMZZMVNJRMUDD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000233932 Sparganium Species 0.000 description 1
- 244000269722 Thea sinensis Species 0.000 description 1
- ABRVLXLNVJHDRQ-UHFFFAOYSA-N [2-pyridin-3-yl-6-(trifluoromethyl)pyridin-4-yl]methanamine Chemical compound FC(C1=CC(=CC(=N1)C=1C=NC=CC=1)CN)(F)F ABRVLXLNVJHDRQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000000683 abdominal cavity Anatomy 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- 230000003044 adaptive effect Effects 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 210000000709 aorta Anatomy 0.000 description 1
- 210000000702 aorta abdominal Anatomy 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 1
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 208000026106 cerebrovascular disease Diseases 0.000 description 1
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 1
- 230000001112 coagulating effect Effects 0.000 description 1
- 238000005345 coagulation Methods 0.000 description 1
- 230000015271 coagulation Effects 0.000 description 1
- 230000001276 controlling effect Effects 0.000 description 1
- 230000002596 correlated effect Effects 0.000 description 1
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 206010013781 dry mouth Diseases 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 230000002526 effect on cardiovascular system Effects 0.000 description 1
- 210000002969 egg yolk Anatomy 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 238000013401 experimental design Methods 0.000 description 1
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 description 1
- 235000019634 flavors Nutrition 0.000 description 1
- 238000005187 foaming Methods 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 1
- 238000007490 hematoxylin and eosin (H&E) staining Methods 0.000 description 1
- 229930195733 hydrocarbon Natural products 0.000 description 1
- 150000002430 hydrocarbons Chemical class 0.000 description 1
- 125000004029 hydroxymethyl group Chemical group [H]OC([H])([H])* 0.000 description 1
- 230000008595 infiltration Effects 0.000 description 1
- 238000001764 infiltration Methods 0.000 description 1
- 210000004969 inflammatory cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 230000002427 irreversible effect Effects 0.000 description 1
- 230000000302 ischemic effect Effects 0.000 description 1
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 229920002866 paraformaldehyde Polymers 0.000 description 1
- 231100000915 pathological change Toxicity 0.000 description 1
- 230000036285 pathological change Effects 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 230000003285 pharmacodynamic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 229960002662 propylthiouracil Drugs 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 229930004725 sesquiterpene Natural products 0.000 description 1
- 150000004354 sesquiterpene derivatives Chemical class 0.000 description 1
- RYMZZMVNJRMUDD-HGQWONQESA-N simvastatin Chemical group C([C@H]1[C@@H](C)C=CC2=C[C@H](C)C[C@@H]([C@H]12)OC(=O)C(C)(C)CC)C[C@@H]1C[C@@H](O)CC(=O)O1 RYMZZMVNJRMUDD-HGQWONQESA-N 0.000 description 1
- 229960002855 simvastatin Drugs 0.000 description 1
- NRHMKIHPTBHXPF-TUJRSCDTSA-M sodium cholate Chemical compound [Na+].C([C@H]1C[C@H]2O)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC([O-])=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 NRHMKIHPTBHXPF-TUJRSCDTSA-M 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D307/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom
- C07D307/77—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom ortho- or peri-condensed with carbocyclic rings or ring systems
- C07D307/92—Naphthofurans; Hydrogenated naphthofurans
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
- A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
- A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
- A61K36/28—Asteraceae or Compositae (Aster or Sunflower family), e.g. chamomile, feverfew, yarrow or echinacea
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
- A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Public Health (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Cardiology (AREA)
- Alternative & Traditional Medicine (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Heart & Thoracic Surgery (AREA)
- Vascular Medicine (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Botany (AREA)
- Medical Informatics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
Abstract
本发明涉及从牛蒡叶中分离得到4个新的倍半萜内酯类化合物及其制备方法与应用，可有效解决从具有悠久食疗历史，有效防治中风的牛蒡叶中制备新化合物，并实现新化合物在防治动脉粥样硬化的应用问题，一种从牛蒡叶中分离得到4个新的倍半萜内酯类化合物，分别为新的化合物Compound 1、Compound 2、Compound 3、Compound 4，以4个化合物按质量比混合在一起为主要成分制备的药物，可有效用于制备抗动脉粥样硬化药物，实现4个化合物的混合物在制备防治动脉粥样硬化药物中的应用；本发明制备方法易操作，导向性强，分离速度快，效率高，产品纯度高，可有效用于制备抗动脉粥样硬化药物，开拓了牛蒡叶的新用途和药用价值，经济和社会效益巨大。
Description
技术领域
本发明涉及医药领域，特别是从牛蒡叶中提取的新的具有治疗动脉粥样硬化作用的一种从牛蒡叶中分离得到4个倍半萜内酯化合物及其制备方法与应用。
背景技术
牛蒡叶为菊科植物牛蒡Arctiumlappa的干燥基生叶。牛蒡叶在我国有悠久的食用和药用历史，关于牛蒡叶的记录有二十多本。其中《太平圣惠方》记载，牛蒡叶羹：“治中风，心烦口干，手足不遂及皮肤热疮：牛蒡叶(肥嫩者)一斤，酥一两。以汤煮牛蒡叶三五沸，漉出，于五味中重煮作羹，入酥食之”；《普济方》中记载了牛蒡叶有治疗中风的作用。中风又称卒中，在世界范围内的发病率和死亡率均居首位。动脉粥样硬化是导致脑卒中的主要因素。动脉粥样硬化多发生于大中型动脉，曾被认为是一种不可逆的进化性疾病，是多种缺血性心脑血管疾病的生理、病理基础。本草考证牛蒡叶可以治疗中风，现代用牛蒡叶泡茶饮预防中风，牛蒡叶是否具有抗动脉粥样硬化，通过干预动脉粥样硬化进展起到治疗中风的作用，迄今为止未见有公开报导。
发明内容
针对上述情况，为克服现有技术之缺陷，本发明之目的就是提供一种从牛蒡叶中分离得到4个倍半萜内酯类化合物及其制备方法与应用，可有效解决从具有悠久食疗历史，有效防治中风的牛蒡叶中制备新化合物，并实现新化合物在防治动脉粥样硬化的应用问题。
本发明解决的技术方案是，一种从牛蒡叶中分离得到4个倍半萜内酯化合物，分别为新的化合物Compound 1、Compound 2、Compound 3、Compound 4，分子结构式分别为：
其制备方法是：
(1)将干燥的牛蒡叶10～30kg，粉碎，加质量浓度70％乙醇，常温冷浸提取，溶剂用量为牛蒡叶重量体积的8～15倍，重量体积是指固体以kg计，液体以L计，冷浸时间为7～14天，过滤，滤液减压浓缩至相当于生药0.2～1.5g/mL的浓缩液(4～7.5L)；
(2)将上述浓缩液静置过夜8～12h，过滤，分别得滤液和沉淀，将滤液进行S-8柱层析，S-8柱内径15～30cm，高130～250cm，依次用蒸馏水、质量浓度30％乙醇、70％乙醇梯度洗脱，用量分别为95～700L、100～1000L、130～1400L，收集70％乙醇洗脱液；将沉淀加水分散，用等体积的石油醚萃取3次，弃去石油醚层，将水层合并至70％乙醇洗脱液，减压回收溶剂，得稠浸膏(380～1370g)；
(3)将步骤(2)稠浸膏加2～5L水分散，分别用乙酸乙酯2～5L、2～5L、1～2.5L、0.5～1.25L萃取4次，合并乙酸乙酯萃取液，减压回收溶剂，得乙酸乙酯萃取物Fr.C(47～190g)；干法上样，进行硅胶柱层析，硅胶柱内径6～10cm、高18～30cm，依次用体积比二氯甲烷/甲醇为100:1、100:4梯度洗脱，每个梯度洗脱液用量为2.5～9.6L、3.5～19.2L，收集100:4洗脱液，减压回收溶剂，得组分Fr.C-2(12.03～38.2g)；
(4)将组分Fr.C-2干法上样，进行硅胶柱层析，硅胶柱内径4～6cm、高21～32cm，依次用体积比的石油醚/乙酸乙酯100:0、100:1、100:4梯度洗脱，每个梯度洗脱液用量分别为0.8～4.5L、1.5～4.5L、2.4～7L，收集100:4洗脱液，减压回收溶剂，得组分Fr.C-2-3(5.2～22.6g)；
(5)将组分Fr.C-2-3湿法上样，进行MCI柱层析，MCI柱内径1.2～3cm、高45～60cm，依次用体积浓度10％、30％、50％甲醇水溶液梯度洗脱，每个梯度洗脱液用量分别为0.3～2.4L、0.4～3.6L、0.75～3.6L，收集50％洗脱液，减压回收溶剂，得组分Fr.C-2-3-3(1.5～5.4g)；
(6)将组分Fr.C-2-3-3以YML C18色谱柱进行反向半制备，流动相为体积比CH3CN︰H2O＝22︰75，时间为110min，流速3.0mL/min，UV200-220nm，保留时间为tR＝28min、tR＝66min、tR＝74min、tR＝97min，分别得到4个倍半萜内酯类新化合物Compound 1(10～30.4mg)、Compound 2(11.2～32.2mg)、Compound 3(60.4～183.1mg)及Compound 4(13.5～33.8mg)。
分离得到的4个新化合物Compound 1、Compound 2、Compound 3、Compound 4，以上述4个化合物按质量比混合在一起为主要成分制备的药物，可有效用于制备抗动脉粥样硬化药物，实现4个化合物的混合物在制备防治动脉粥样硬化药物中的应用(新用途)；
本发明制备方法易操作，导向性强，分离速度快，效率高，产品纯度高，可有效用于制备抗动脉粥样硬化药物，开拓了牛蒡叶的新用途和药用价值，经济和社会效益巨大。
附图说明
图1为本发明化合物Compound 1、Compound 2、Compound 3、Compound 4的分子结构式图；
图2为本发明化合物Compound 1、Compound 2、Compound 3、Compound 4的HMBC及H-H COSY相关图；
图3为本发明化合物Compound 1、Compound 2、Compound 3、Compound 4的NOESY相关图；
图4为本发明化合物Compound 1的1H-NMR谱图；
图5为本发明化合物Compound 1的13C-NMR谱图；
图6为本发明化合物Compound 1的HSQC谱图；
图7为本发明化合物Compound 1的HMBC谱图；
图8为本发明化合物Compound 1的红外光谱图；
图9为本发明化合物Compound 1的紫外光谱图；
图10为本发明化合物Compound 1的质谱图；
图11为本发明化合物Compound 2的1H-NMR谱图；
图12为本发明化合物Compound 2的13C-NMR谱图；
图13为本发明化合物Compound 2的HSQC谱图；
图14为本发明化合物Compound 2的HMBC谱图；
图15为本发明化合物Compound 2的红外光谱图；
图16为本发明化合物Compound 2的紫外光谱图；
图17为本发明化合物Compound 2的质谱图；
图18为本发明化合物Compound 3的1H-NMR谱图；
图19为本发明化合物Compound 3的13C-NMR谱图；
图20为本发明化合物Compound 3的HSQC谱图；
图21为本发明化合物Compound 3的HMBC谱图；
图22为本发明化合物Compound 3的红外光谱图；
图23为本发明化合物Compound 3的紫外光谱图；
图24为本发明化合物Compound 3的质谱图；
图25为本发明化合物Compound 4的1H-NMR谱图；
图26为本发明化合物Compound 4的13C-NMR谱图；
图27为本发明化合物Compound 4的HSQC谱图；
图28为本发明化合物Compound 4的HMBC谱图；
图29为本发明化合物Compound 4的红外光谱图；
图30为本发明化合物Compound 4的紫外光谱图；
图31为本发明化合物Compound 4的质谱图；
图32为本发明化合物Compound 1、Compound 2、Compound 3、Compound 4的制备工艺流程图。
具体实施方式
以下结合实施例和具体情况对本发明的具体实施方式作详细说明。
本发明在具体实施中，可由以下实施例给出。
实施例1
本发明一种从牛蒡叶中分离得到4个倍半萜内酯化合物，分别为：
化合物Compound 1(3aR,5R,5aR,9aR,9bR)-3a,4,5,5a,6,7,9a,9b-octahydro-5,5a-dihydroxy-8-(hydroxymethyl)-5-methyl-1-methylenenaphtho[2,1-b]furan-2(1H)-one；
化合物Compound 2(3aR,5aR,9aS,9bR)-3a,4,5,5a,6,7,9a,9b-octahydro-8-(hydroxymethyl)-1,5-dimethylenenaphtho[2,1-b]furan-2(1H)-one；
化合物Compound 3(3aR,5aR,9aS,9bR)-3a,5a,6,7,9a,9b-hexahydro-8-(hydroxymethyl)-5-methyl-1-methylenenaphtho[2,1-b]furan-2(1H)-one；
化合物Compound 4(3aS,9aS,9bS)-3a,4,6,7,9a,9b-hexahydro-8-(hydroxymethyl)-5-methyl-1-methylenenaphtho[2,1-b]furan-2(1H)-one；
分子结构式分别为：
其制备方法是：
(1)将干燥的牛蒡叶10kg，粉碎，加质量浓度70％乙醇，常温冷浸提取，溶剂用量为牛蒡叶重量体积的8倍，重量体积是指固体以kg计，液体以L计，冷浸时间为7天，过滤，滤液减压浓缩至相当于生药0.2g/mL的浓缩液(7.5L)；
(2)将上述浓缩液静置过夜8h，过滤，分别得滤液和沉淀，将滤液进行S-8柱层析，S-8柱内径15cm，高180cm，依次用蒸馏水、质量浓度30％乙醇、70％乙醇梯度洗脱，用量分别为95L、100L、130L，收集70％乙醇洗脱液；将沉淀加水分散，用等体积的石油醚萃取3次，弃去石油醚层，将水层合并至70％乙醇洗脱液，减压回收溶剂，得稠浸膏(380g)；
(3)将步骤(2)稠浸膏加2L水分散，分别用乙酸乙酯2L、2L、1L、0.5L萃取4次，合并乙酸乙酯萃取液，减压回收溶剂，得乙酸乙酯萃取物Fr.C(47g)；干法上样，进行硅胶柱层析，硅胶柱内径6cm、高18cm，依次用体积比二氯甲烷/甲醇为100:1、100:4梯度洗脱，每个梯度洗脱液用量为2.5L、3.5L，收集100:4洗脱液，减压回收溶剂，得组分Fr.C-2(12.03g)；
(4)将组分Fr.C-2干法上样，进行硅胶柱层析，硅胶柱内径4cm、高21cm，依次用体积比的石油醚/乙酸乙酯100:0、100:2、100:4梯度洗脱，每个梯度洗脱液用量分别为0.8L、1.5L、2.4L，收集100:4洗脱液，减压回收溶剂，得组分Fr.C-2-3(5.2g)；
(5)将组分Fr.C-2-3湿法上样，进行MCI柱层析，MCI柱内径1.2cm、高45cm，依次用体积浓度10％、30％、50％甲醇水溶液梯度洗脱，每个梯度洗脱液用量分别为0.3L、0.4L、0.75L，收集50％洗脱液，减压回收溶剂，得组分Fr.C-2-3-3(1.5g)；
(6)将组分Fr.C-2-3-3以YML C18色谱柱进行反向半制备，流动相为体积比CH3CN︰H2O＝22︰75，时间为110min，流速3.0mL/min，UV200-220nm，保留时间为tR＝28min、tR＝66min、tR＝74min、tR＝97min，分别得到4个倍半萜内酯类新化合物Compound 1(10mg，纯度98.01％)、Compound 2(11.2mg，纯度98.27％)、Compound 3(60.4mg，纯度99.02％)及Compound 4(13.5mg，纯度97.57％)。
实施例2
本发明一种从牛蒡叶中分离得到4个倍半萜内酯类化合物的制备方法是：
(1)将干燥的牛蒡叶16kg，粉碎，加质量浓度70％乙醇，常温冷浸提取，溶剂用量为牛蒡叶重量体积的10倍，重量体积是指固体以kg计，液体以L计，冷浸时间为10天，过滤，滤液减压浓缩至相当于生药0.5g/mL的浓缩液(6L)；
(2)将上述浓缩液静置过夜10h，过滤，分别得滤液和沉淀，将滤液进行S-8柱层析，S-8柱内径20cm，高130cm，依次用蒸馏水、质量浓度30％乙醇、70％乙醇梯度洗脱，用量分别为160L、240L、240L，收集70％乙醇洗脱液；将沉淀加水分散，用等体积的石油醚萃取3次，弃去石油醚层，将水层合并至70％乙醇洗脱液，减压回收溶剂，得稠浸膏(706g)；
(3)将步骤(2)稠浸膏加3L水分散，分别用乙酸乙酯3L、3L、1.5L、0.75L萃取4次，合并乙酸乙酯萃取液，减压回收溶剂，得乙酸乙酯萃取物Fr.C(95g)；干法上样，进行硅胶柱层析，硅胶柱内径6cm、高25cm，依次用体积比二氯甲烷/甲醇为100:1、100:4梯度洗脱，每个梯度洗脱液用量为4L、6L，收集100:4洗脱液，减压回收溶剂，得组分Fr.C-2(21.3g)；
(4)将组分Fr.C-2干法上样，进行硅胶柱层析，硅胶柱内径4cm、高32cm，依次用体积比的石油醚/乙酸乙酯100:0、100:2、100:4梯度洗脱，每个梯度洗脱液用量分别为0.8L、1.6L、3.2L，收集100:4洗脱液，减压回收溶剂，得组分Fr.C-2-3(9.4g)；
(5)将组分Fr.C-2-3湿法上样，进行MCI柱层析，MCI柱内径1.5cm、高60cm，依次用体积浓度10％、30％、50％甲醇水溶液梯度洗脱，每个梯度洗脱液用量分别为0.4L、0.7L、1.0L，收集50％洗脱液，减压回收溶剂，得组分Fr.C-2-3-3(3.0g)；
(6)将组分Fr.C-2-3-3以YML C18色谱柱进行反向半制备，流动相为体积比CH3CN︰H2O＝22︰75，时间为110min，流速3.0mL/min，UV200-220nm，保留时间为tR＝28min、tR＝66min、tR＝74min、tR＝97min，分别得到4个倍半萜内酯类新化合物Compound 1(17.3mg，纯度98.07％)、Compound 2(20.4mg，纯度98.18％)、Compound 3(103.2mg，纯度99.31％)及Compound 4(22.5mg，纯度98.08％)。
实施例3
本发明一种从牛蒡叶中分离得到4个倍半萜内酯类化合物的制备方法是：
(1)将干燥的牛蒡叶20kg，粉碎，加质量浓度70％乙醇，常温冷浸提取，溶剂用量为牛蒡叶重量体积的12倍，重量体积是指固体以kg计，液体以L计，冷浸时间为14天，过滤，滤液减压浓缩至相当于生药0.8g/mL的浓缩液(4.8L)；
(2)将上述浓缩液静置过夜12h，过滤，分别得滤液和沉淀，将滤液进行S-8柱层析，S-8柱内径25cm，高200cm，依次用蒸馏水、质量浓度30％乙醇、70％乙醇梯度洗脱，用量分别为400L、800L、700L，收集70％乙醇洗脱液；将沉淀加水分散，用等体积的石油醚萃取3次，弃去石油醚层，将水层合并至70％乙醇洗脱液，减压回收溶剂，得稠浸膏(910g)；
(3)将步骤(2)稠浸膏加4L水分散，分别用乙酸乙酯4L、4L、2L、1L萃取4次，合并乙酸乙酯萃取液，减压回收溶剂，得乙酸乙酯萃取物Fr.C(125g)；干法上样，进行硅胶柱层析，硅胶柱内径8cm、高24cm，依次用体积比二氯甲烷/甲醇为100:1、100:4梯度洗脱，每个梯度洗脱液用量为7.5L、12L，收集100:4洗脱液，减压回收溶剂，得组分Fr.C-2(27.5g)；
(4)将组分Fr.C-2干法上样，进行硅胶柱层析，硅胶柱内径6cm、高25cm，依次用体积比的石油醚/乙酸乙酯100:0、100:2、100:4梯度洗脱，每个梯度洗脱液用量分别为4.5L、4.5L、7L，收集100:4洗脱液，减压回收溶剂，得组分Fr.C-2-3(13.1g)；
(5)将组分Fr.C-2-3湿法上样，进行MCI柱层析，MCI柱内径2cm、高48cm，依次用体积浓度10％、30％、50％甲醇水溶液梯度洗脱，每个梯度洗脱液用量分别为1L、1.5L、1.8L，收集50％洗脱液，减压回收溶剂，得组分Fr.C-2-3-3(4.3g)；
(6)将组分Fr.C-2-3-3以YML C18色谱柱进行反向半制备，流动相为体积比CH3CN︰H2O＝22︰75，时间为110min，流速3.0mL/min，UV200-220nm，保留时间为tR＝28min、tR＝66min、tR＝74min、tR＝97min，分别得到4个倍半萜内酯类新化合物Compound 1(25.8mg，纯度97.83％)、Compound 2(26.4mg，纯度98.31％)、Compound 3(146.7mg，纯度99.26％)及Compound 4(28.3mg，纯度97.58％)。
实施例4
本发明一种从牛蒡叶中分离得到4个倍半萜内酯类化合物的制备方法是：
(1)将干燥的牛蒡叶30kg，粉碎，加质量浓度70％乙醇，常温冷浸提取，溶剂用量为牛蒡叶重量体积的15倍，重量体积是指固体以kg计，液体以L计，冷浸时间为12天，过滤，滤液减压浓缩至相当于生药1.5g/mL的浓缩液(4L)；
(2)将上述浓缩液静置过夜10h，过滤，分别得滤液和沉淀，将滤液进行S-8柱层析，S-8柱内径30cm，高250cm，依次用蒸馏水、质量浓度30％乙醇、70％乙醇梯度洗脱，用量分别为700L、1000L、1400L，收集70％乙醇洗脱液；将沉淀加水分散，用等体积的石油醚萃取3次，弃去石油醚层，将水层合并至70％乙醇洗脱液，减压回收溶剂，得稠浸膏(1370g)；
(3)将步骤(2)稠浸膏加5L水分散，分别用乙酸乙酯5L、5L、2.5L、1.25L萃取4次，合并乙酸乙酯萃取液，减压回收溶剂，得乙酸乙酯萃取物Fr.C(190g)；干法上样，进行硅胶柱层析，硅胶柱内径10cm、高30cm，依次用体积比二氯甲烷/甲醇为100:1、100:4梯度洗脱，每个梯度洗脱液用量为9.6L、19.2L，收集100:4洗脱液，减压回收溶剂，得组分Fr.C-2(38.2g)；
(4)将组分Fr.C-2干法上样，进行硅胶柱层析，硅胶柱内径6cm、高21cm，依次用体积比的石油醚/乙酸乙酯100:0、100:2、100:4梯度洗脱，每个梯度洗脱液用量分别为2.4L、4.2L、3.6L，收集100:4洗脱液，减压回收溶剂，得组分Fr.C-2-3(22.6g)；
(5)将组分Fr.C-2-3湿法上样，进行MCI柱层析，MCI柱内径3cm、高57cm，依次用体积浓度10％、30％、50％甲醇水溶液梯度洗脱，每个梯度洗脱液用量分别为2.4L、3.6L、3.6L，收集50％洗脱液，减压回收溶剂，得组分Fr.C-2-3-3(5.4g)；
(6)将组分Fr.C-2-3-3以YML C18色谱柱进行反向半制备，流动相为体积比CH3CN︰H2O＝22︰75，时间为110min，流速3.0mL/min，UV200-220nm，保留时间为tR＝28min、tR＝66min、tR＝74min、tR＝97min，分别得到4个倍半萜内酯类新化合物Compound 1(30.4mg，纯度98.01％)、Compound 2(32.2mg，纯度98.23％)、Compound 3(183.1mg，纯度99.16％)及Compound 4(33.8mg，纯度98.12％)。
上述4个倍半萜内酯类新化合物Compound 1、Compound 2、Compound 3及Compound4以质量比12:13:65:13混合在一起作为主要成分在制备抗动脉粥样硬化药物中的应用，所述的4个倍半萜内酯类新化合物Compound 1、Compound 2、Compound 3及Compound 4以质量比12:13:65:13的混合物占所制备药物质量的60％以上。
要指出的是，上述实施例仅是用于说明本发明的具体实施方式，以对该从牛蒡叶中提取具有抗动脉粥样硬化作用的化合物及其提取方法进行的详细描述，是说明性的，而不是用于限定本发明的保护范围，凡是在不脱离本发明总体构思下的变化和修改，均应属本发明的保护范围之内。
上述所得化合物经测定，为4个从牛蒡叶中提取的新化合物，4个化合物分别是：
Compound
1(3aR,5R,5aR,9aR,9bR)-3a,4,5,5a,6,7,9a,9b-octahydro-5,5a-dihydroxy-8-(hydroxymethyl)-5-methy l-1-methylenenaphtho[2,1-b]furan-2(1H)-one；
Compound
2(3aR,5aR,9aS,9bR)-3a,4,5,5a,6,7,9a,9b-octahydro-8-(hydroxymethyl)-1,5-dimethylenenaphtho[2,1-b]furan-2(1H)-one；
Compound
3(3aR,5aR,9aS,9bR)-3a,5a,6,7,9a,9b-hexahydro-8-(hydroxymethyl)-5-methyl-1-methylenenaphtho[2,1-b]furan-2(1H)-one；
Compound
4(3aS,9aS,9bS)-3a,4,6,7,9a,9b-hexahydro-8-(hydroxymethyl)-5-methyl-1-methylenenaphtho[2,1-b]furan-2(1H)-one；
4个化合物经活性实验，具有抗动脉粥样硬化的功能，实现4个化合物的混合物在制备防治动脉粥样硬化药物中的应用，有效用于制备防治动脉粥样硬化的药物，通过干预动脉粥样硬化的进展，起到治疗中风的作用，并经鉴定和实验，取得了非常好的有益技术效果，有关资料如下：
一、结构鉴定
1、仪器
Shimadzu double-beam 210A紫外光谱仪(Shimadzu,Kyoto,日本)；
LTQ orbitrap高分辨质谱仪(Thermo Fisher Scientific,Bremen,德国)；
核磁共振仪：Bruker AVANCEⅢ500-NMR spectrometer(Bruker,Billerica,German)，TMS为内标；
Thermo Fisher Scientific U3000型高效液相色谱仪；
半制备液相(赛谱锐思科技有限公司)；BT25S精密天平(德国赛多利斯公司有限公司)。
柱色谱硅胶(100-200，200-300目)(青岛海洋化工有限公司)；Toyopearl HW-40C(北京英莱克科技发展有限公司)；MCI(日本三棱公司)；InertSustain C18色谱柱(14mm*150mm*5um)(日本YMC公司)。
2、结构鉴定
采用上述仪器对实施例1-4中提出的化合物Compound 1、Compound 2、Compound3、Compound 4分别进行鉴定：
Compound 1为浅黄色油状物，-4.149(c＝0.028g/100ml,CH3OH)。HR-ESI-MS质谱分析显示存在[M-OH]+准分子离子峰m/z 263.12799，推测分子式为C15H20O5，不饱和度为6。红外光谱在3505、2940、1762和1633cm-1处显示吸收带，提示羟基、酯羰基和烯烃官能团的存在。Compound 1(图4和5)的1H-NMR(CD3OD,500MHz)和13C-NMR(CD3OD,125MHz)数据显示一个甲基信号[δH 1.36(s,5-CH3)；δC 20.1(5-CH3)]，四个亚甲基信号[δH 1.54(m,H2-6),2.14(m,H2-7),1.93(dd,J＝3.0,15.5Hz,H-4α),2.43(dd,J＝3.0,15.5Hz,H-4β),4.01(brs,8-CH2OH)；δC 25.7(C-6),23.7(C-7),37.0(C-4),66.4(8-CH2OH)]，三个次甲基信号[δH 2.34(m,H-9a),3.45(m,H-9b),5.07(m,H-3a)；δC 42.6(C-9a),41.2(C-9b),79.9(C-3a)]，一个三取代双键信号[δH 5.67(s,H-9)；δC 142.6(C-8),121.0(C-9)]，一个1,1-二取代双键信号[δH 5.73(d,J＝2.3Hz,1-CH2),6.26(d,J＝2.6Hz,1-CH2)；δC 137.2(C-1),126.2(1-CH2)]，两个sp3杂化季碳信号δC 60.0(C-5),63.1(C-5a)，一个酯羰基碳信号δC172.1(C-2)，结合以上碳谱氢谱数据，确定该化合物为杜松烷性倍半萜。HMBC谱显示从H2-6与C-7/C-8/C-5/C-5a相关，H2-7与C-9/C-5a相关，H-9与C-7/C-9a相关，H-9b与C-5a/C-1相关，H-3a与C-9a/C-5/C-2相关，H2-4与C-9b/C-5/C-5a/5-CH3相关，1-CH2与C-9b/C-2相关，5-CH3与C-4/C-5/C-6相关，8-CH2OH与C-7/C-9相关(图14)。H-H COSY谱显示了H2-6与H-7/H-5a相关，H-9a与H-9/H-9b相关，H-3a与H-9b/H-4相关。因此，确定结构Compound 1平面结构如图1所示。Compound 1的相对构型NOESY谱确定，NOESY谱中H-9a与H-9b、H-3a相关，确定H-9a、H-9b、H-3a位于平面的同侧。同时，NOESY谱中不存在5-CH3与H-9a、H-9b或H-3a的相关，这表明5-CH3在另一侧。C-5a的绝对构型是不确定的。计算理论ECD与实测ECD拟合对比，确定Compound 1的绝对构型。Compound 1的ECD光谱在228nm处显示出正Cotton效应，并在266nm处显示负Cotton效应，与实测结果一致。因此，Compound 1的绝对构型是3aR、5R、5aR、9aR、9bR、。
表1 1H-NMR and 13C-NMR date for compound 1inMEOD(J in Hz)
| NO. | H(δ) | C(δ) |
| 1 | 137.2 | |
| 2 | 172.1 | |
| 3a | 5.07(1H,m) | 79.9 |
| 4 | 1.93(1H,dd,J＝3.0,15.5),2.43(1H,dd,J＝3.0,15.5) | 37.0 |
| 5 | 60.0 | |
| 5a | 63.1 | |
| 6 | 1.54(2H,m) | 25.7 |
| 7 | 2.14(2H,m) | 23.7 |
| 8 | 142.6 | |
| 9 | 5.67(1H,s) | 121.0 |
| 9a | 2.34(1H,s) | 42.6 |
| 9b | 3.45(1H,m) | 41.2 |
| 1-CH2＝ | 5.73(1H,d,J＝2.3),6.26(1H,d,J＝2.6) | 126.2 |
| 5-CH3 | 1.36(3H,s) | 20.1 |
| 8-CH2OH | 4.01(2H,brs) | 66.4 |
Compound 2为淡黄色油状物，21.456(c＝0.025g/100ml,CH3OH)。HR-ESI-MS质谱分析显示存在[M-OH]+准分子离子峰m/z 229.1227，不饱和度为7，推测分子式为C15H18O3。Compound 2(图4和5)的1H-NMR(CD3OD,500MHz)、13C-NMR(CD3OD,125MHz)以及HSQC谱显示该化合物存在四个亚甲基[δH 1.49(m,H-6α),1.95(m,H-6β)),2.08(m,H2-7),2.49(dd,J＝3.9,13.9Hz,H-4α),2.73(dd,J＝4.4,13.9Hz,H-4α),4.00(brt,J＝14.5Hz，8-CH2OH)；δC 26.7(C-6)、25.4(C-7)、38.1(C-4)、66.9(8-CH2OH)]，四个次甲基[δH 2.91(m,H-9a),3.35(m,H-9b),4.95(m,H-3a),2.63(m,H-5a)；δC 37.3(C-9a),41.5(C-9b),79.3(C-3a),39.5(C-5a)]，一个三取代双键[δH 5.71(brs,H-9)；δC 141.8(C-8),123.1(C-9)]，两个1,1-二取代双键[δH 5.77(d,J＝2.6Hz,1-CH2),6.13(d,J＝3.2Hz,1-CH2),4.96(m,5-CH2)；δC 139.2(C-1),124.8(1-CH2),145.8(C-5),113.1(5-CH2)]，一个酯羰基碳δC173.1(C-1)。HMBC谱显示H2-6与C-7/C-8/C-9a/C-5/C-5a相关，8-CH2OH与C-7/C-8/C-9a，H-9b与C-9a/C-3a/C-4/C-5a/C-2相关，H-3a与C-9b/C-4/C-5/C-2/C-1相关，H2-4与C-3a/C-5/C-5a/5-CH2相关，1-CH2与C-9b/C-2/C-1相关。H-H COSY谱显示H-6与H-7/H-5a相关、H-9a与H-9/H-9b/H-5a相关、H-3a与H-9b/H-4相关。因此，确定结构Compound 2平面结构如图1所示。NOESY谱中H-9a与H-9b、H-3a、H-5a相关，表明H-9a、H-9b、H-3a和H-5a位于该化合物的同侧，因此确定Compound 2的相对构型。计算理论ECD与实测ECD拟合对比，确定Compound 1的绝对构型。Compound 2的ECD光谱在229nm处显示出正Cotton效应，在272nm处显示负Cotton效应，计算Compound 2理论ECD曲线，计算曲线与实测曲线趋势相符。因此，Compound 2的绝对构型被指定为3aR、5aR、9aS、9bR。
表2 1H-NMR and 13C-NMR date for compound 2inMEOD(J in Hz)
Compound 3为浅黄色油状物，22.471(c＝0.145g/100ml,CH3OH)。HR-ESI-MS质谱分析显示存在[M+Na]+准分子离子峰m/z 269.11542，不饱和度为7，推测其分子式为C15H18O3。红外光谱在3567、1756和1683cm-1处显示吸收带，提示羟基、酯羰基和烯烃官能团的存在。Compound 3(图11和12)的1H-NMR(CD3OD,500MHz)、13C-NMR(CD3OD,125MHz)和HSQC谱显示存在一个甲基信号[δH 1.83(s,5-CH3)；δC 21.9(5-CH3)]，三个亚甲基信号[δH 1.56(m,H-6α),1.89(m,H-6β),2.10(m,H2-7),3.98(d,J＝13.2Hz,8-CH2OH),4.01(d,J＝13.2Hz,8-CH2OH)；δC 25.7(C-6),26.6(C-7),66.8(8-CH2OH)]，四个次甲基信号[δH 2.81(m,H-9a),3.43(m,H-9b),5.09(m,H-3a),2.24(m,H-5a)；δC 36.9(C-9a),39.9(C-9b),77.6(C-3a),39.5(C-5a)],两个三取代双键信号[δH 5.76(s,H-9),5.54(m,H-4)；δC 141.4(C-8),123.3(C-9),120.5(C-4),144.6(C-5)]，一个1,1-二取代双键[δH 5.98(d,J＝2.6Hz,1-CH2),6.19(d,J＝3.3Hz,1-CH2)；δC 140.3(C-1),125.2(1-CH2)]，一个酯羰基碳δC 173.0(C-2)。HMBC谱显示H-6与C-8/C-5相关，H2-7与C-6/C-8/C-9/C-5a相关，H-9与C-9a相关，H-9b与C-9/C-3a/C-4/C-5a/C-2相关，1-CH2与C-9b/C-2相关，5-CH3与C-4/C-5/C-5a相关，8-CH2OH与C-7/C-9相关。H-H COSY谱显示H2-6与H-7/H-5a相关，H-9a与H-9b/H-5a相关，H-3a与H-9b/H-4相关。因此，确定结构Compound 3平面结构如图1所示。Compound 3的相对构型是由NOESY谱确定的，在NOESY谱中H-9b与H-9a、H-3a相关，H-9a与H-3a、H-5a相关性，表明H-9b、H-9a、H-3a、H-5a位于该化合物的同侧，因此，确定Compound 3的平面构型。计算理论ECD确定Compound3的绝对构型，Compound 3(3aR、5aR、9aS、9bR)的计算ECD光谱在222nm处显示出正Cotton效应，与实测数据一致。因此，Compound 3的绝对构型是3aR、5aR、9aS、9bR。
表3 1H-NMR and 13C-NMR date for compound 3inMEOD(J in Hz)
Compound 4为浅黄色油状物，14.396(c＝0.190g/100ml,CH3OH)。HR-ESI-MS质谱分析显示存在[M+Na]+准分子离子峰m/z 269.11551，不饱和度为7，推测分子式为C15H18O3。红外光谱在3396、2942、1757和1683cm-1处显示吸收带，提示羟基、酯羰基和烯烃官能团的存在。Compound 4(图18和19)的1H-NMR(CD3OD,500MHz)和13C-NMR(CD3OD,125MHz)显示了一个甲基信号[δH1.73(s,5-CH3)；δC 19.2(5-CH3)]，四个亚甲基信号[δH 2.22(m,H-6α),2.31(m,H-6β),1.91(m,H-7α),1.96(m,H-7β),2.39(m,H-4α),2.46(dd,J＝2.2,15.5Hz,H-4β),4.06(brs,8-CH2OH)；δC 25.6(C-6),25.2(C-7),36.5(C-4),66.4(8-CH2OH)]，三个次甲基信号[δH 2.90(m,H-9a),3.38(m,H-9b),5.10(m,H-3a)；δC 39.3(C-9a),43.1(C-9b),80.2(C-3a)]，一个三取代的双键信号[δH 5.73(m,H-9)；δC 143.1(C-8),121.6(C-9)],一个1,1-二取代双键信号[δH 5.69(d,J＝2.0Hz,1-CH2),6.06(d,J＝2.6Hz,1-CH2)；δC 138.0(C-1),124.7(1-CH2)]，一个四取代双键[δC 125.4(C-5),132.1(C-5a)],一个酯羰基碳δC173.2(C-2)。HMBC谱显示了H2-6与C-7/C-8/C-5相关，H2-7与C-6/C-9/C-5a/8-CH2OH相关，H-9与C-7/C-9a/C-9b/C-5a相关，H-9b与C-4/C-5a/C-2相关，H-3a与C-9a/C-5/C-1相关，1-CH2与C-9b/C-2相关，5-CH3与C-4/C-5a相关，8-CH2OH与C-7/C-9相关。H-H COSY谱显示H2-6与H-7相关，H-9a与H-9/H-9b相关，H-3a与H-9b/H-4相关。分析以上数据确定Compound 4的平面结构如图1所示。Compound 4的相对构型是由NOESY谱确定的。NOESY谱中H-9a与H-9b/H-3a相关，表明它们位于化合物的同侧。Compound 4的绝对构型通过计算理论ECD与实测ECD对比确定。Compound 4(3aS,9bS,9aS)的ECD光谱在219nm处显示出正Cotton效应，在264nm处显示出负Cotton效应，与实测结果完美匹配。因此，确定Compound 4的绝对构型为3aS、9aS、9bS。
表4 1H-NMR and 13C-NMR date for compound 4inMEOD(J in Hz)
根据上述鉴定结果，分别命名为Compound 1、Compound 2、Compound 3、Compound4，分子结构式分别为：
二、药效学实验(化合物Compound 1、Compound 2、Compound 3、Compound 4质量比为12:13:65:13为例)
以上述制备的化合物Compound 1、Compound 2、Compound 3、Compound 4的混合物为主要组成(4个化合物的含量比大于60％)混合物的质量比为12:13:65:13，可有效用于制备抗动脉粥样硬化药物，实现在制备防治动脉粥样硬化(AS)药物中的应用，并经鉴定和实验得到了充分证明，效果非常好，有关实验资料如下：
实验动物
无特定病原体的雄性Wistar大鼠(190±20g)60只，将动物保持在22±1℃的环境温度范围，12小时光照/黑暗循环和50％-60％相对湿度，在实验期间自由饮食和饮水，动物实验设计征得河南中医药大学实验动物伦理委员会同意。大鼠购自济南朋悦实验动物繁育有限公司，许可证号：SYXK(鲁)20190003，实验单位许可证编号SCXK(豫)2020-0004，质量检测单位：山东省实验动物中心。
实验试剂
本实验所用到的试剂，见表5(Table5)。
表5实验试剂
仪器设备
本实验所用仪器设备，见表6(Table 6)。
表6仪器设备
/>
实验方法
以上述4个化合物为主要组成(质量比大于60％)，制备一种可有效用于制备抗动脉粥样硬化药物，通过干预动脉粥样硬化进展起到治疗中风的作用，实现在制备防治动脉粥样硬化(AS)药物中的有效应用，有关具体测定和实验资料如下：
分组、造模及给药
60只无特定病原体的雄性Wistar大鼠(190±20g)，适应性喂养1周后，将大鼠随机分为6组：对照组、模型组、给药组低剂量组50mg/kg、给药组高剂量组100mg/kg、辛伐他汀组(5mg/kg)、依泽替米贝组(5mg/kg)，每组10只，边造模边给药。造模方法为腹腔注射VD3联合高脂饲料喂养，具体方法如下：开始给药前，除正常组外其他组每只大鼠腹腔注射60万IU/kg的VD3，造模后第2、4、6、8、10周分别注射10万IU/kg的VD3，同时高脂饲料喂养12周(高脂饲料组成：高脂饲料配方由2.5％胆固醇、0.5％胆酸钠、10％猪油、0.2％丙基硫氧嘧啶、10％蛋黄粉、76.8％普通饲料组成。)
标本采集
连续给药12周，实验结束，取材前一晚禁食不禁水12h用10％水合氯醛麻醉，采用腹主动脉取血，血液标本室温放置1-2h，自然凝血，待凝血完全后，3000r/min离心15min，分离血清，于-80℃冰箱保存，用于生化指标测定。迅速剥离肝脏、主动脉，冷生理盐水冲洗干净，滤纸吸干水后称重主动脉组织分别取一部分放入多聚甲醛固定，其余置于液氮速冻，最后放于-80℃超低温冰箱保存待测。
大鼠主动脉HE染色结果
主动脉HE的染色结果显示，正常组大鼠主动脉内膜表面光滑，细胞排列整齐，各层组织结构未有明显异常，模型组大鼠主动脉内膜下细胞排列紊乱，大量胞质呈空泡状，且主动脉内膜隆起纤维斑块层，表现为炎细胞浸润、泡沫化严重各给药组大鼠主动脉的病变程度较模型组均明显减轻，与正常组相比，##P<0.01；与模型组相比，*P<0.05，**P<0.01，表明本发明提取的化合物的混合物具有抗动脉粥样硬化的功效活性。
本发明是以牛蒡子叶作原料，采用独特的制备方法，从中分离制备出4个化合物Compound 1、Compound 2、Compound 3、Compound 4，并以4个化合物Compound 1、Compound2、Compound 3、Compound 4混合在一起，作为主要组成制备了一种治疗动脉粥样硬化的药物。经鉴定和实验结果证明，本发明给出的4个化合物分别是Compound 1、Compound 2、Compound 3、Compound 4以质量比12:13:65:13混合在一起，具有抗动脉粥样硬化之功能，可有效用于制备抗动脉粥样硬化的药物，实现化合物混合物在制备防治动脉粥样硬化药物中的应用，而且原料丰富，制备方法易操作，导向性强，分离速度快，效率高，产品纯度高97％以上，可有效用于制备抗动脉粥样硬化药物，开拓了牛蒡叶的新用途和药用价值，经济和社会效益巨大。
Claims (8)
1.一种从牛蒡叶中分离得到的4个倍半萜内酯类化合物，分别为化合物Compound1、Compound2、Compound3、Compound4，分子结构式分别为：
2.权利要求1所述的4个倍半萜内酯类化合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)将干燥的牛蒡叶10～30kg，粉碎，加质量浓度70％乙醇，常温冷浸提取，溶剂用量为牛蒡叶重量体积的8～15倍，重量体积是指固体以kg计，液体以L计，冷浸时间为7～14天，过滤，滤液减压浓缩至相当于生药0.2～1.5g/mL的浓缩液；
(2)将上述浓缩液静置过夜8～12h，过滤，分别得滤液和沉淀，将滤液进行S-8柱层析，S-8柱内径15～30cm，高130～250cm，依次用蒸馏水、质量浓度30％乙醇、70％乙醇梯度洗脱，用量分别为95～700L、100～1000L、130～1400L，收集70％乙醇洗脱液；将沉淀加水分散，用等体积的石油醚萃取3次，弃去石油醚层，将水层合并至70％乙醇洗脱液，减压回收溶剂，得稠浸膏；
(3)将步骤(2)的稠浸膏加2～5L水分散，分别用乙酸乙酯2～5L、2～5L、1～2.5L、0.5～1.25L萃取4次，合并乙酸乙酯萃取液，减压回收溶剂，得乙酸乙酯萃取物Fr.C；干法上样，进行硅胶柱层析，硅胶柱内径6～10cm、高18～30cm，依次用体积比二氯甲烷/甲醇为100:1、100:4梯度洗脱，每个梯度洗脱液用量为2.5～9.6L、3.5～19.2L，收集100:4洗脱液，减压回收溶剂，得组分Fr.C-2；
(4)将组分Fr.C-2干法上样，进行硅胶柱层析，硅胶柱内径4～6cm、高21～32cm，依次用体积比的石油醚/乙酸乙酯100:0、100:2、100:4梯度洗脱，每个梯度洗脱液用量分别为0.8～4.5L、1.5～4.5L、2.4～7L，收集100:4洗脱液，减压回收溶剂，得组分Fr.C-2-3；
(5)将组分Fr.C-2-3湿法上样，进行MCI柱层析，MCI柱内径1.2～3cm、高45～60cm，依次用体积浓度10％、30％、50％甲醇水溶液梯度洗脱，每个梯度洗脱液用量分别为0.3～2.4L、0.4～3.6L、0.75～3.6L，收集50％洗脱液，减压回收溶剂，得组分Fr.C-2-3-3；
(6)将组分Fr.C-2-3-3以YML C18色谱柱进行反向半制备，流动相为体积比CH3CN︰H2O＝22︰75，时间为110min，流速3.0mL/min，UV200-220nm，保留时间为tR＝28min、tR＝66min、tR＝74min、tR＝97min，分别得到4个倍半萜内酯类化合物Compound 1、Compound2、Compound3及Compound 4。
3.根据权利要求2所述的4个倍半萜内酯类化合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)将干燥的牛蒡叶10kg，粉碎，加质量浓度70％乙醇，常温冷浸提取，溶剂用量为牛蒡叶重量体积的8倍，重量体积是指固体以kg计，液体以L计，冷浸时间为7天，过滤，滤液减压浓缩至相当于生药0.2g/mL的浓缩液；
(2)将上述浓缩液静置过夜8h，过滤，分别得滤液和沉淀，将滤液进行S-8柱层析，S-8柱内径15cm，高180cm，依次用蒸馏水、质量浓度30％乙醇、70％乙醇梯度洗脱，用量分别为95L、100L、130L，收集70％乙醇洗脱液；将沉淀加水分散，用等体积的石油醚萃取3次，弃去石油醚层，将水层合并至70％乙醇洗脱液，减压回收溶剂，得稠浸膏380g；
(3)将步骤(2)的稠浸膏加2L水分散，分别用乙酸乙酯2L、2L、1L、0.5L萃取4次，合并乙酸乙酯萃取液，减压回收溶剂，得乙酸乙酯萃取物Fr.C 47g；干法上样，进行硅胶柱层析，硅胶柱内径6cm、高18cm，依次用体积比二氯甲烷/甲醇为100:1、100:4梯度洗脱，每个梯度洗脱液用量为2.5L、3.5L，收集100:4洗脱液，减压回收溶剂，得组分Fr.C-2 12.03g；
(4)将组分Fr.C-2干法上样，进行硅胶柱层析，硅胶柱内径4cm、高21cm，依次用体积比的石油醚/乙酸乙酯100:0、100:2、100:4梯度洗脱，每个梯度洗脱液用量分别为0.8L、1.5L、2.4L，收集100:4洗脱液，减压回收溶剂，得组分Fr.C-2-3 5.2g；
(5)将组分Fr.C-2-3湿法上样，进行MCI柱层析，MCI柱内径1.2cm、高45cm，依次用体积浓度10％、30％、50％甲醇水溶液梯度洗脱，每个梯度洗脱液用量分别为0.3L、0.4L、0.75L，收集50％洗脱液，减压回收溶剂，得组分Fr.C-2-3-3 1.5g；
(6)将组分Fr.C-2-3-3以YML C18色谱柱进行反向半制备，流动相为体积比CH3CN︰H2O＝22︰75，时间为110min，流速3.0mL/min，UV200-220nm，保留时间为tR＝28min、tR＝66min、tR＝74min、tR＝97min，分别得到4个倍半萜内酯类化合物Compound 1 10mg、纯度98.01％，Compound 2 11.2mg、纯度98.27％，Compound 3 60.4mg、纯度99.02％及Compound413.5mg、纯度97.57％。
4.根据权利要求2所述的4个倍半萜内酯类化合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)将干燥的牛蒡叶16kg，粉碎，加质量浓度70％乙醇，常温冷浸提取，溶剂用量为牛蒡叶重量体积的10倍，重量体积是指固体以kg计，液体以L计，冷浸时间为10天，过滤，滤液减压浓缩至相当于生药0.5g/mL的浓缩液；
(2)将上述浓缩液静置过夜10h，过滤，分别得滤液和沉淀，将滤液进行S-8柱层析，S-8柱内径20cm，高130cm，依次用蒸馏水、质量浓度30％乙醇、70％乙醇梯度洗脱，用量分别为160L、240L、240L，收集70％乙醇洗脱液；将沉淀加水分散，用等体积的石油醚萃取3次，弃去石油醚层，将水层合并至70％乙醇洗脱液，减压回收溶剂，得稠浸膏706g；
(3)将步骤(2)的稠浸膏加3L水分散，分别用乙酸乙酯3L、3L、1.5L、0.75L萃取4次，合并乙酸乙酯萃取液，减压回收溶剂，得乙酸乙酯萃取物Fr.C 95g；干法上样，进行硅胶柱层析，硅胶柱内径6cm、高25cm，依次用体积比二氯甲烷/甲醇为100:1、100:4梯度洗脱，每个梯度洗脱液用量为4L、6L，收集100:4洗脱液，减压回收溶剂，得组分Fr.C-2 21.3g；
(4)将组分Fr.C-2干法上样，进行硅胶柱层析，硅胶柱内径4cm、高32cm，依次用体积比的石油醚/乙酸乙酯100:0、100:2、100:4梯度洗脱，每个梯度洗脱液用量分别为0.8L、1.6L、3.2L，收集100:4洗脱液，减压回收溶剂，得组分Fr.C-2-3 9.4g；
(5)将组分Fr.C-2-3湿法上样，进行MCI柱层析，MCI柱内径1.5cm、高60cm，依次用体积浓度10％、30％、50％甲醇水溶液梯度洗脱，每个梯度洗脱液用量分别为0.4L、0.7L、1.0L，收集50％洗脱液，减压回收溶剂，得组分Fr.C-2-3-3 3.0g；
(6)将组分Fr.C-2-3-3以YML C18色谱柱进行反向半制备，流动相为体积比CH3CN︰H2O＝22︰75，时间为110min，流速3.0mL/min，UV200-220nm，保留时间为tR＝28min、tR＝66min、tR＝74min、tR＝97min，分别得到4个倍半萜内酯类化合物Compound 1 17.3mg、纯度98.07％，Compound 2 20.4mg、纯度98.18％，Compound 3 103.2mg、纯度99.31％及Compound 422.5mg、纯度98.08％。
5.根据权利要求2所述的4个倍半萜内酯类化合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)将干燥的牛蒡叶20kg，粉碎，加质量浓度70％乙醇，常温冷浸提取，溶剂用量为牛蒡叶重量体积的12倍，重量体积是指固体以kg计，液体以L计，冷浸时间为14天，过滤，滤液减压浓缩至相当于生药0.8g/mL的浓缩液；
(2)将上述浓缩液静置过夜12h，过滤，分别得滤液和沉淀，将滤液进行S-8柱层析，S-8柱内径25cm，高200cm，依次用蒸馏水、质量浓度30％乙醇、70％乙醇梯度洗脱，用量分别为400L、800L、700L，收集70％乙醇洗脱液；将沉淀加水分散，用等体积的石油醚萃取3次，弃去石油醚层，将水层合并至70％乙醇洗脱液，减压回收溶剂，得稠浸膏910g；
(3)将步骤(2)的稠浸膏加4L水分散，分别用乙酸乙酯4L、4L、2L、1L萃取4次，合并乙酸乙酯萃取液，减压回收溶剂，得乙酸乙酯萃取物Fr.C 125g；干法上样，进行硅胶柱层析，硅胶柱内径8cm、高24cm，依次用体积比二氯甲烷/甲醇为100:1、100:4梯度洗脱，每个梯度洗脱液用量为7.5L、12L，收集100:4洗脱液，减压回收溶剂，得组分Fr.C-2 27.5g；
(4)将组分Fr.C-2干法上样，进行硅胶柱层析，硅胶柱内径6cm、高25cm，依次用体积比的石油醚/乙酸乙酯100:0、100:2、100:4梯度洗脱，每个梯度洗脱液用量分别为4.5L、4.5L、7L，收集100:4洗脱液，减压回收溶剂，得组分Fr.C-2-3 13.1g；
(5)将组分Fr.C-2-3湿法上样，进行MCI柱层析，MCI柱内径2cm、高48cm，依次用体积浓度10％、30％、50％甲醇水溶液梯度洗脱，每个梯度洗脱液用量分别为1L、1.5L、1.8L，收集50％洗脱液，减压回收溶剂，得组分Fr.C-2-3-3 4.3g；
(6)将组分Fr.C-2-3-3以YML C18色谱柱进行反向半制备，流动相为体积比CH3CN︰H2O＝22︰75，时间为110min，流速3.0mL/min，UV200-220nm，保留时间为tR＝28min、tR＝66min、tR＝74min、tR＝97min，分别得到4个倍半萜内酯类化合物Compound 1 25.8mg、纯度97.83％，Compound 2 26.4mg、纯度98.31％，Compound 3 146.7mg、纯度99.26％及Compound 428.3mg、纯度97.58％。
6.根据权利要求2所述的4个倍半萜内酯类化合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)将干燥的牛蒡叶30kg，粉碎，加质量浓度70％乙醇，常温冷浸提取，溶剂用量为牛蒡叶重量体积的15倍，重量体积是指固体以kg计，液体以L计，冷浸时间为12天，过滤，滤液减压浓缩至相当于生药1.5g/mL的浓缩液；
(2)将上述浓缩液静置过夜10h，过滤，分别得滤液和沉淀，将滤液进行S-8柱层析，S-8柱内径30cm，高250cm，依次用蒸馏水、质量浓度30％乙醇、70％乙醇梯度洗脱，用量分别为700L、1000L、1400L，收集70％乙醇洗脱液；将沉淀加水分散，用等体积的石油醚萃取3次，弃去石油醚层，将水层合并至70％乙醇洗脱液，减压回收溶剂，得稠浸膏1370g；
(3)将步骤(2)的稠浸膏加5L水分散，分别用乙酸乙酯5L、5L、2.5L、1.25L萃取4次，合并乙酸乙酯萃取液，减压回收溶剂，得乙酸乙酯萃取物Fr.C 190g；干法上样，进行硅胶柱层析，硅胶柱内径10cm、高30cm，依次用体积比二氯甲烷/甲醇为100:1、100:4梯度洗脱，每个梯度洗脱液用量为9.6L、19.2L，收集100:4洗脱液，减压回收溶剂，得组分Fr.C-238.2g；
(4)将组分Fr.C-2干法上样，进行硅胶柱层析，硅胶柱内径6cm、高21cm，依次用体积比的石油醚/乙酸乙酯100:0、100:2、100:4梯度洗脱，每个梯度洗脱液用量分别为2.4L、4.2L、3.6L，收集100:4洗脱液，减压回收溶剂，得组分Fr.C-2-3 22.6g；
(5)将组分Fr.C-2-3湿法上样，进行MCI柱层析，MCI柱内径3cm、高57cm，依次用体积浓度10％、30％、50％甲醇水溶液梯度洗脱，每个梯度洗脱液用量分别为2.4L、3.6L、3.6L，收集50％洗脱液，减压回收溶剂，得组分Fr.C-2-3-3 5.4g；
(6)将组分Fr.C-2-3-3以YML C18色谱柱进行反向半制备，流动相为体积比CH3CN︰H2O＝22︰75，时间为110min，流速3.0mL/min，UV200-220nm，保留时间为tR＝28min、tR＝66min、tR＝74min、tR＝97min，分别得到4个倍半萜内酯类化合物Compound 1 30.4mg、纯度98.01％，Compound 2 32.2mg、纯度98.23％，Compound 3 183.1mg、纯度99.16％及Compound 433.8mg、纯度98.12％。
7.权利要求1所述的4个倍半萜内酯类化合物Compound 1、Compound 2、Compound 3、Compound 4的混合物作主要成分在制备防治动脉粥样硬化药物中的应用。
8.根据权利要求7所述的4个倍半萜内酯类化合物Compound 1、Compound 2、Compound3、Compound 4的混合物在制备防治动脉粥样硬化药物中的应用，其特征在于，所述混合物中4个倍半萜内酯类化合物Compound 1、Compound 2、Compound 3及Compound 4的质量比为12:13:65:13，混合物占所制备药物质量的60％以上。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202111512783.8A CN114057679B (zh) | 2021-12-11 | 2021-12-11 | 从牛蒡叶中分离得到4个新的倍半萜内酯类化合物及其制备方法与应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202111512783.8A CN114057679B (zh) | 2021-12-11 | 2021-12-11 | 从牛蒡叶中分离得到4个新的倍半萜内酯类化合物及其制备方法与应用 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN114057679A CN114057679A (zh) | 2022-02-18 |
| CN114057679B true CN114057679B (zh) | 2023-12-01 |
Family
ID=80229173
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202111512783.8A Active CN114057679B (zh) | 2021-12-11 | 2021-12-11 | 从牛蒡叶中分离得到4个新的倍半萜内酯类化合物及其制备方法与应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN114057679B (zh) |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN112794832A (zh) * | 2021-01-30 | 2021-05-14 | 河南中医药大学 | 一个从牛蒡叶中提取的具有抗炎活性的化合物nby-10及其制备方法与应用 |
| CN112851612A (zh) * | 2021-01-30 | 2021-05-28 | 河南中医药大学 | 一种从牛蒡叶中提取的具有降低胆固醇活性化合物及其制备方法与应用 |
| CN112939737A (zh) * | 2021-01-30 | 2021-06-11 | 河南中医药大学 | 一个从牛蒡叶中提取的具有保护酒精性肝损伤的新化合物及其制备方法与应用 |
-
2021
- 2021-12-11 CN CN202111512783.8A patent/CN114057679B/zh active Active
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN112794832A (zh) * | 2021-01-30 | 2021-05-14 | 河南中医药大学 | 一个从牛蒡叶中提取的具有抗炎活性的化合物nby-10及其制备方法与应用 |
| CN112851612A (zh) * | 2021-01-30 | 2021-05-28 | 河南中医药大学 | 一种从牛蒡叶中提取的具有降低胆固醇活性化合物及其制备方法与应用 |
| CN112939737A (zh) * | 2021-01-30 | 2021-06-11 | 河南中医药大学 | 一个从牛蒡叶中提取的具有保护酒精性肝损伤的新化合物及其制备方法与应用 |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| Anti-trypanosomal cadinanes synthesized by transannular cyclization of the natural sesquiterpene lactone nobilin;Maria De Mieri et al;Bioorganic & Medicinal Chemistry;第23卷;1521-1529 * |
| Synthesis and primary cytotoxicity evaluation of arylmethylenenaphthofuranones derivatives;MORGANE LARDIC et al;Journal of Enzyme Inhibition and Medicinal Chemistry;第21卷(第3期);313-325 * |
| 牛蒡根水提物对高脂血症大鼠血脂和动脉粥样硬化程度的影响;陈志英 等;山东医药;第54卷(第14期);25-27 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN114057679A (zh) | 2022-02-18 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN109897077B (zh) | 马齿苋中化合物Oleraciamide E及其提取分离方法与应用 | |
| AU2017255362B2 (en) | Composition, crocins active site, and uses thereof | |
| RU2004136577A (ru) | Способ получения количества фенольной кислоты из даньшеня и ее применение | |
| CN102108090A (zh) | 一种二氢异香豆素葡萄糖苷化合物及其制备方法与应用 | |
| CN104800252B (zh) | 一种具有肿瘤抑制作用的精制多酚及其制备方法和应用 | |
| CN105902584A (zh) | 具有抗补体和降血糖活性的辣木叶黄酮及其制备方法与应用 | |
| CN114057679B (zh) | 从牛蒡叶中分离得到4个新的倍半萜内酯类化合物及其制备方法与应用 | |
| WO2012061984A1 (zh) | 制备芍药内酯苷和芍药苷的方法 | |
| CN105294726A (zh) | 一种新的黄烷酮类化合物及其制备方法和医药用途 | |
| JP5620629B2 (ja) | 垂盆草から得られる脂肪代謝改善剤、該脂肪代謝改善剤を含有する医薬又は食品、並びに垂盆草から得られる新規メガスチグマン及びフラボノイド化合物 | |
| CN111533772A (zh) | 环烯醚萜类化合物的制备方法、环烯醚萜类化合物及应用 | |
| CN114933617B (zh) | 二苯甲酮二聚体化合物的制备方法 | |
| CN112794832B (zh) | 一个从牛蒡叶中提取的具有抗炎活性的化合物nby-10及其制备方法与应用 | |
| CN112851612B (zh) | 一种从牛蒡叶中提取的具有降低胆固醇活性化合物及其制备方法与应用 | |
| CN112341355B (zh) | 一种绿原酸衍生物及其制备方法和应用 | |
| CN101619054A (zh) | 一个新的香豆素类活性成分及其制备方法与应用 | |
| CN103626812A (zh) | 天麻中一种新的巴利森苷类化合物及其用途 | |
| CN109761977B (zh) | 一种黄精生物碱c及其制备方法与应用 | |
| Ma et al. | Preparative separation of eight phenolic acids from Echinacea purpurea L. Moench using pH-zone-refining counter-current chromatography and evaluation of their immunomodulatory effects and synergistic potential | |
| CN109206392B (zh) | 一种香豆素类化合物及其制备方法与应用 | |
| RU2354396C1 (ru) | Способ получения экстракта из обезжиренных плодов расторопши пятнистой | |
| CN112920148B (zh) | 一种从牛蒡叶中提取的具有抗炎活性的新化合物nby-16及其制备方法与应用 | |
| RU2281112C2 (ru) | Способ получения лекарственного гепатотропного средства "артишока экстракта" на основе полифенолов | |
| CN116768706B (zh) | 咖啡果皮中降糖活性二萜成分及其制备方法与应用 | |
| CN109517023B (zh) | 一种三金制剂化学成分的分离纯化方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |