CN112851604A - 从酒茱萸提取具有降糖作用的化合物d及其制备方法与应用 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及从酒茱萸提取具有降糖作用的化合物D及其制备方法与应用，可有效解决从酒茱萸中提取新化合物，并实现新化合物在制备治疗糖尿病药物中的应用问题，酒茱萸加30%乙醇冷浸提取，提取液减压浓缩成稠浸膏，稠浸膏加水分散，乙酸乙酯萃取，减压浓缩萃取溶液，得浸膏Fr.ETOAC；经硅胶柱色谱，用二氯甲烷‑甲醇梯度洗脱，收集100:5洗脱液，减压浓缩，得浸膏Fr.ETOAC‑4，经ODS柱层析，用甲醇‑水梯度洗脱，收集20:80洗脱液，减压浓缩，得浸膏Fr.ETOAC‑4‑2，再经Sephadex LH‑20柱层析，甲醇洗脱，减压浓缩，得浸膏Fr.ETOAC‑4‑2‑2，用ODS‑C18柱在半制备HPLC上分离，乙腈‑水洗脱，收集25min的色谱峰，减压回收溶剂，得化合物D。本发明方法易操作，导向性强，产品纯度高，开拓了酒茱萸的新用途和药用价值。

Description

从酒茱萸提取具有降糖作用的化合物D及其制备方法与应用
技术领域
本发明涉及医药领域，特别是一种从酒茱萸提取具有降糖作用的化合物D及其制备方法与应用。
背景技术
恶性肿瘤、心脑血管疾病、糖尿病是严重威胁人类健康的三大慢病。截至2015年，中国糖尿病患者已超过1亿，居世界首位，预计到2040年，我国糖尿病患病人数将超过1.5亿。截至目前尚无根治性治疗方案。气阴两虚、肝肾不足是糖尿病肾病的主要病因，治疗以补肾益气、活血化瘀为主。近年来，从传统中药入手，获取具有良好降糖活性的单体化合物，一直是研究的热点。山茱萸(Cornus officin alis)为山茱萸科(Cornaceae)植物山茱萸(Cornus officinalis Sieb.et Zucc.)的干燥成熟果肉，始载于《神农本草经。在传统中药经典名方中，山茱萸常以其炮制品酒茱萸入药，如六味地黄丸、金匮肾气丸等。山茱萸作为我国传统药物常出现在中医降血糖的组方中，现代药理学研究表明，山茱萸具有多种生物活性，主要表现为免疫调节、降血糖、抗氧化、抗衰老、保护脑等，已报道的其降血糖活性部位主要是环烯醚萜类和三萜酸类。但其主要活性成分尚不清晰，酒茱萸降糖化学成分研究的研究鲜有报道，其降糖药效物质基础尚不明确。结合酒茱萸传统功效特点，通过对酒茱萸化学成分进行系统的研究，期望能够得到具有降糖作用的结构新颖的新化合物，但至今未见有公开报导。
发明内容
针对上述情况，为克服现有技术之缺陷，本发明之目的就是提供一种从酒茱萸提取具有降糖作用的化合物D及其制备方法与应用，可有效解决从酒茱萸中提取新化合物，并实现新化合物在制备治疗糖尿病药物中的应用问题。
本发明解决的技术方案是，一种从酒茱萸提取具有降糖作用的化合物D，该化合物(Cornusgallate D)结构式为：
Figure BDA0002892089210000011
其制备方法是，包括以下步骤：
(1)取干燥的酒茱萸10kg，加体积浓度为30％的乙醇溶液50～200L，4～6℃冷浸提取7～14天，过滤，得提取液，减压浓缩，得50℃相对密度1.2～1.4的稠浸膏(第一浸膏)；
(2)稠浸膏加水1～3L分散成悬浮液，用乙酸乙酯萃取3～8次，每次0.3L～3L，减压浓缩萃取溶液，得50℃相对密度1.2～1.4的浸膏Fr.ETOAC(第二浸膏)；
(3)浸膏Fr.ETOAC经过200～300目筛的硅胶柱色谱，r＝2～5cm，H＝5～10cm，用体积比100:0、100:2、100:5二氯甲烷-甲醇进行梯度洗脱(自然流速)，每个比例洗脱3～10个柱体积，收集100:5的洗脱液，减压浓缩，得50℃相对密度1.2～1.4的浸膏Fr.ETOAC-4(第三浸膏)；
(4)浸膏Fr.ETOAC-4经r＝2～3cm、H＝3～6cm的ODS柱层析，用体积比10:90、20:80的甲醇-水进行梯度洗脱(自然流速)，每个比例洗脱3～10个柱体积，收集20:80的洗脱液，减压浓缩，得50℃相对密度1.2～1.4的浸膏Fr.ETOAC-4-2(第四浸膏)；
(5)浸膏Fr.ETOAC-4-2经Sephadex LH-20柱层析，r＝1～3cm，H＝50～100cm，用甲醇800～1000mL洗脱，流速0.2～0.6mL/min，减压浓缩，得50℃相对密度1.2～1.4的浸膏Fr.ETOAC-4-2-2(第五浸膏)；
(6)浸膏Fr.ETOAC-4-2-2用ODS-C18柱在半制备HPLC上进一步分离，乙腈-水体积比14:86洗脱，流速3mL/min，收集25min的色谱峰，减压回收溶剂，得到化合物D。
本发明是从酒茱萸中提取的新化合物，其制备方法易操作，导向性强，产品纯度高，该化合物可有效用于制备治疗糖尿病的药物，开拓了酒茱萸的新用途和药用价值，经济和社会效益巨大。
附图说明
图1为本发明化合物1的分子结构式；
图2为本发明化合物1的主要HMBC相关；
图3为本发明化合物1的1H-NMR谱图；
图4为本发明化合物1的13C-NMR谱图；
图5为本发明化合物1的HSQC谱图；
图6为本发明化合物1的HMBC谱图；
图7为本发明化合物1的红外光谱图；
图8为本发明化合物1的紫外光谱图；
图9为本发明化合物1的质谱图；
图10为本发明化合物1的工艺流程图；
具体实施方式
以下结合具体情况对本发明的具体实施方式作详细说明。
本发明在具体实施中，可由以下实施例给出。
实施例1
本发明一种从酒茱萸提取具有降糖作用的化合物D的制备方法，包括以下步骤：
(1)取干燥的酒茱萸10kg，加体积浓度为30％的乙醇溶液120L，4～6℃冷浸提取9天，过滤，得提取液，减压浓缩，得50℃相对密度1.2～1.4的稠浸膏(1.5kg)；
(2)稠浸膏加水2.0L分散成悬浮液，用乙酸乙酯萃取6次，每次1L～2L，合并上述萃取液,减压浓缩，得50℃相对密度1.2～1.4的浸膏Fr.ETOAC(100g)；
(3)浸膏Fr.ETOAC经过200～300目筛的硅胶柱色谱，r＝3cm，H＝7cm，用体积比100:0、100:2、100:5二氯甲烷-甲醇进行梯度洗脱(自然流速)，每个比例洗脱6个柱体积，收集100:5的洗脱液，减压浓缩，得50℃相对密度1.2～1.4的浸膏Fr.ETOAC-4(7.7g)；
(4)浸膏Fr.ETOAC-4经r＝2～3cm、H＝4～5cm的ODS柱层析，用体积比10:90、20:80的甲醇-水进行梯度洗脱(自然流速)，每个比例洗脱6～8个柱体积，收集20:80的洗脱液，减压浓缩，得50℃相对密度1.2～1.4的浸膏Fr.ETOAC-4-2(1.0g)；
(5)浸膏Fr.ETOAC-4-2经Sephadex LH-20柱层析，r＝2cm，H＝80cm，用甲醇850～950mL洗脱，流速0.2～0.6mL/min，减压浓缩，得50℃相对密度1.2～1.4的浸膏Fr.ETOAC-4-2-2(0.3g)；
(6)浸膏Fr.ETOAC-4-2-2用ODS-C18柱在半制备HPLC上进一步分离，乙腈-水体积比14:86洗脱，流速3mL/min，收集25min的色谱峰，减压回收溶剂，得到化合物D(101mg)。
实施例2
本发明一种从酒茱萸提取具有降糖作用的化合物D的制备方法，包括以下步骤：
(1)取干燥的酒茱萸10kg，加体积浓度为30％的乙醇溶液100L，4℃冷浸提取12天，过滤，得提取液，减压浓缩，得50℃相对密度1.2的稠浸膏(1.1kg)；
(2)稠浸膏加水2L分散成悬浮液，用乙酸乙酯萃取4次，每次2.5L，减压浓缩萃取溶液，得50℃相对密度1.2的浸膏Fr.ETOAC(95g)；
(3)浸膏Fr.ETOAC经过300目筛的硅胶柱色谱，r＝2.5cm，H＝6cm，用体积比100:0、100:2、100:5二氯甲烷-甲醇进行梯度洗脱(自然流速)，每个比例洗脱8个柱体积，收集100:5的洗脱液，减压浓缩，得50℃相对密度1.2的浸膏Fr.ETOAC-4(6.1g)；
(4)浸膏Fr.ETOAC-4经r＝2.5cm、H＝10cm的ODS柱层析，用体积比10:90、20:80的甲醇-水进行梯度洗脱(自然流速)，每个比例洗脱8个柱体积，收集20:80的洗脱液，减压浓缩，得50℃相对密度1.2的浸膏Fr.ETOAC-4-2(0.8g)；
(5)浸膏Fr.ETOAC-4-2经Sephadex LH-20柱层析，r＝1cm，H＝60cm，用甲醇850mL洗脱，流速0.3mL/min，减压浓缩，得50℃相对密度1.2的浸膏Fr.ETOAC-4-2-2(205mg)；
(6)浸膏Fr.ETOAC-4-2-2用ODS-C18柱在半制备HPLC上进一步分离，乙腈-水体积比14:86洗脱，流速3mL/min，收集25min的色谱峰，减压回收溶剂，得到化合物D(80mg)。
实施例3
本发明一种从酒茱萸提取具有降糖作用的化合物D的制备方法，包括以下步骤：
(1)取干燥的酒茱萸10kg，加体积浓度为30％的乙醇溶液60L，6℃冷浸提取8天，过滤，得提取液，减压浓缩，得50℃相对密度1.3的稠浸膏(950g)；
(2)稠浸膏加水1L分散成悬浮液，用乙酸乙酯萃取6次，每次1L，减压浓缩萃取溶液，得50℃相对密度1.3的浸膏Fr.ETOAC(78g)；
(3)浸膏Fr.ETOAC经过200目筛的硅胶柱色谱，r＝4cm，H＝9cm，用体积比100:0、100:2、100:5二氯甲烷-甲醇进行梯度洗脱(自然流速)，每个比例洗脱4个柱体积，收集100:5的洗脱液，减压浓缩，得50℃相对密度1.4的浸膏Fr.ETOAC-4(5.9g)；
(4)浸膏Fr.ETOAC-4经r＝3cm、H＝6cm的ODS柱层析，用体积比10:90、20:80的甲醇-水进行梯度洗脱(自然流速)，每个比例洗脱4个柱体积，收集20:80的洗脱液，减压浓缩，得50℃相对密度1.4的浸膏Fr.ETOAC-4-2(0.7g)；
(5)浸膏Fr.ETOAC-4-2经Sephadex LH-20柱层析，r＝3cm，H＝90cm，用甲醇1000mL洗脱，流速0.5mL/min，减压浓缩，得50℃相对密度1.4的浸膏Fr.ETOAC-4-2-2(180mg)；
(6)浸膏Fr.ETOAC-4-2-2用ODS-C18柱在半制备HPLC上进一步分离，乙腈-水体积比14:86洗脱，流速3mL/min，收集25min的色谱峰，减压回收溶剂，得到化合物D(70mg)。
实施例4
本发明一种从酒茱萸提取具有降糖作用的化合物D的制备方法，包括以下步骤：
(1)取干燥的酒茱萸10kg，加体积浓度为30％的乙醇溶液80L，5℃冷浸提取10天，过滤，得提取液，减压浓缩，得50℃相对密度1.3的稠浸膏(1kg)；
(2)稠浸膏加水2L分散成悬浮液，用乙酸乙酯萃取4次，用量分别为2.5L、2.5L、2.5L、1.3L，减压浓缩萃取溶液，得50℃相对密度1.3的浸膏Fr.ETOAC(82g)；
(3)浸膏Fr.ETOAC经过200～300目筛的硅胶柱色谱，r＝5cm，H＝7cm，用体积比100:0、100:2、100:5二氯甲烷-甲醇进行梯度洗脱(自然流速)，每个比例洗脱7个柱体积，收集100:5的洗脱液，减压浓缩，得50℃相对密度1.3的浸膏Fr.ETOAC-4(6.3g)；
(4)浸膏Fr.ETOAC-4经r＝3cm、H＝4cm的ODS柱层析，用体积比10:90、20:80的甲醇-水进行梯度洗脱(自然流速)，每个比例洗脱7个柱体积，收集20:80的洗脱液，减压浓缩，得50℃相对密度1.3的浸膏Fr.ETOAC-4-2(770mg)；
(5)浸膏Fr.ETOAC-4-2经Sephadex LH-20柱层析，r＝1.3cm，H＝80cm，用甲醇900mL洗脱，流速0.4mL/min，减压浓缩，得50℃相对密度1.3的浸膏Fr.ETOAC-4-2-2(200mg)；
(6)浸膏Fr.ETOAC-4-2-2用ODS-C18柱在半制备HPLC上进一步分离，乙腈-水体积比14:86洗脱，流速3mL/min，收集25min的色谱峰，减压回收溶剂，得到化合物D(80mg)。
要指出的是，上述实施例仅是用于说明本发明的具体实施方式，以对该从酒茱萸中提取具有降糖活性的化合物及其提取方法进行的详细描述，是说明性的，而不是用于限定本发明的保护范围，凡是在不脱离本发明总体构思下的变化和修改，均应属本发明的保护范围之内。
上述所得化合物经测定，鉴定为从酒茱萸中提取的1个新化合物D：化合物D分子结构式见图1所示。对化合物D进行降糖活性实验研究，表明其具有降糖活性。有关具体测定和实验资料如下：
化合物D：黄色粉末，易溶于甲醇等有机溶剂，遇香草醛-浓硫酸加热显黑色。在HRESIMS中准分子离子峰[M+Na]+为331.0441(C14H12O8Na计算值为331.0430)，
Figure BDA0002892089210000052
Figure BDA0002892089210000053
甲醇)结合1H-NMR、13C-NMR谱确定分子式为C14H12O8不饱和度为9。
紫外光谱在201nm、218nm和280nm有最大吸收；红外光谱提示有羟基(3347cm-1)，羰基(1667cm-1)的存在。1H-NMR谱显示有两个烯烃次甲基，包括6.70(1H,d,J＝3.5Hz,H-4′)和7.52(1H,d,J＝3.7Hz,H-3′)；一个连氧次甲基δH 4.97(1H,t,J＝5.9,5.8Hz,H-7′)；两个芳环上的氢δH 6.92(2H,s,H-3，H-7)。13C-NMR谱显示有12个碳信号，其中两个羰基δC 165.6(C-1)和δC 178.2(C-6′)；一个连氧次甲基碳δC(64.8,C-7′)；一个连氧亚甲基碳δC(65.7,C-8′)；四个烯烃双键上的碳δC(109.8(C-4′)，δC 124.3(C-3′)，δC 151.8(C-2′)，δC 161.4(C-5′)；一组芳环上的碳δC 108.7(C-3)，δC 108.7(C-7)，δC 119.1(C-2)，δC 138.6(C-5)，δC145.5(C-4)，δC 145.5(C-6)。详细信息见表1。
表1.化合物D的1H-and 13C-NMR数据(500and 125MHzδin ppm，DMSO)
Figure BDA0002892089210000051
Figure BDA0002892089210000061
结合HMBC谱，可以看出H-3与C-1/C-2/C-5/C-6/C-7相关；H-7与C-1/C-2/C-5/C-6相关；H-3′与C-2′/C-3′/C-5′/C-6′相关；H-4′与C-2′/C-4′/C-5′/C-6′相关。结合1D和2DNMR确定了化合物D的平面结构。
化合物D的相对构型是由ECD谱确定的，ECD光谱在295nm处表现出正的科顿效应。计算曲线与实验曲线吻合良好，表明化合物D的绝对构型为7′R。
采用的仪器与材料：
Thermo EVO 300spectrometer紫外光谱仪(Thermo,Waltham,MA,美国)；
Bruker AV Ⅲ 500-NMR核磁共振仪(Bruker,Billerica,德国)；
Bruker maXis HD高分辨质谱仪(Bruker,德国)；
清博华LC 52型半制备高效液相色谱仪(QBH,中国)；
酶标仪(美国赛默飞公司，型号MULTISKAN FC)；
台式高速冷冻离心机(索福ST-21，美国产)；
AdventurerTM电子天平(奥豪斯国际贸易上海有限公司)；
ChromCore ODS-C18制备柱(10×250mm,5um；纳谱分析,中国)；
柱层析硅胶(100-200目,200-300目,青岛海洋化工有限公司)；
ODS-C18(日本YMC公司)；
MCI(日本YMC公司)
所用试剂均为分析纯或色谱纯；
氘代试剂：DMSO-d6(Cambridge Isotope Laboratories,USA)；
20190003链脲佐菌素，sigma公司；
葡萄糖，天津市科密欧科技有限公司
生理盐水，郑州化学药业有限公司，规格500mL/瓶；
柠檬酸(分析纯)，湖北省医药公司化玻；
羧甲基纤维素钠(CMC)，上海化学试剂公司分装厂生产
葡萄糖测定试剂盒，浙江东殴生物有限公司；
高密度脂蛋白测试盒：上海莼试生物技术有限公司；
低密度脂蛋白：上海博耀生物技术有限公司；
总胆固醇测试盒：南京建成生物工程研究所；
总甘油三酯试剂盒：南京建成生物工程研究所；
实验动物：大鼠，Wistar，雄性，体重：160～180g，济南朋悦实验动物繁育有限公司，许可证号：SYXK(鲁)
以化合物D制备一种治疗糖尿病的药物，进行了实验。
试验方法：Wistar雄性大鼠50只，体重160～180g，禁食12h后戊巴比妥钠25mg/kg麻醉后，舌下静脉注射链脲佐菌素60mg/kg，72h后尾部取血测血糖值，选取血糖值>11.1mmol/L并具有明显的多饮、多食、多尿症状者40只，按血糖值随机均分为5组，每组8只，分别灌大、小剂量给药组(150mg/kg、75mg/kg，灌胃体积均为1mL/100g)，二甲双胍片250mg/kg(25mg/mL，1mL/100g)，及同体积生理盐水，另设一组完全空白对照组。每天给药1次，连续给药30天，分别于给药的第10、20、30天测空腹血糖值，每次测血糖前观察尿量，于第30天，禁食12h，灌胃后2h，取血，分离血清。检测血清中指标：血糖(FBG)、甘油三酯(TG)、胆固醇(TC)、低密度脂蛋白(LDL-C)、高密度脂蛋白(HDL-C)水平。
表2制备的降糖药对链脲佐菌素致糖尿病大鼠血糖的影响
Figure BDA0002892089210000071
Figure BDA0002892089210000072
**：表示与模型组相比P<0.01*：表示与模型组相比P<0.05
从表2可以看出：与空白组比，模型组血糖水平显著高于空白组(P<0.01)，说明链脲佐菌素造糖尿病模型成功。与模型组比，二甲双胍可显著降低给药后第20、30天血糖值(P＜0.01)，对第10天血糖值无明显影响；大剂量降糖药可明显降低第10天血糖值(P＜0.05)，可显著降低第30天血糖值(P＜0.01)；小剂量降糖药可显著降低第20、30天血糖值，有降低第10天血糖值趋势。
表3制备的降糖药对链脲佐菌素致糖尿病大鼠模型脂代谢的影响
Figure BDA0002892089210000073
Figure BDA0002892089210000074
Figure BDA0002892089210000081
**：表示与模型组比P＜0.01*：表示与模型组比P＜0.05
从表3可以看出，与空白组比，链脲佐菌素造大鼠糖尿病模型组TG、TC、LDL-C水平显著高于空白组(P＜0.01)，HDL-C水平明显低于空白组(P＜0.05)，说明该模型存在脂类代谢紊乱。与模型组比，各给药组均能不同程度改善脂类代谢紊乱。大剂量降糖药能显著降低TC水平(P＜0.01)，明显降低LDL-C水平(P＜0.05)，能明显升高HDL-C水平(P＜0.05)；小剂量降糖药组能明显降低TC、LDL-C水平(P＜0.05)，有升高HDL-C水平的趋势(P＞0.05)；二甲双胍能显著降低TC、LDL-C水平(P＜0.01)，明显降低TG和升高HDL-C水平(P＜0.05)。
制备的治疗糖尿病的药物大、小剂量组均对糖尿病有显著的治疗作用。
本发明化合物D作为治疗糖尿病的先导化合物，有效用于制备治疗糖尿病的药物，具有广阔的开发前景，经济和社会效益巨大。

Claims (8)

1.一种从酒茱萸提取具有降糖作用的化合物D，化合物结构式为：
Figure FDA0002892089200000011
2.权利要求1所述的从酒茱萸提取具有降糖作用的化合物D制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)取干燥的酒茱萸10kg，加体积浓度为30％的乙醇溶液50～200L，4～6℃冷浸提取7～14天，过滤，得提取液，减压浓缩，得50℃相对密度1.2～1.4的稠浸膏；
(2)稠浸膏加水1～3L分散成悬浮液，用乙酸乙酯萃取3～8次，每次0.3L～3L，减压浓缩萃取溶液，得50℃相对密度1.2～1.4的浸膏Fr.ETOAC；
(3)浸膏Fr.ETOAC经过200～300目筛的硅胶柱色谱，r＝2～5cm，H＝5～10cm，用体积比100:0、100:2、100:5二氯甲烷-甲醇进行梯度洗脱，每个比例洗脱3～10个柱体积，收集100:5的洗脱液，减压浓缩，得50℃相对密度1.2～1.4的浸膏Fr.ETOAC-4；
(4)浸膏Fr.ETOAC-4经r＝2～3cm、H＝3～6cm的ODS柱层析，用体积比10:90、20:80的甲醇-水进行梯度洗脱，每个比例洗脱3～10个柱体积，收集20:80的洗脱液，减压浓缩，得50℃相对密度1.2～1.4的浸膏Fr.ETOAC-4-2；
(5)浸膏Fr.ETOAC-4-2经Sephadex LH-20柱层析，r＝1～3cm，H＝50～100cm，用甲醇800～1000mL洗脱，流速0.2～0.6mL/min，减压浓缩，得50℃相对密度1.2～1.4的浸膏Fr.ETOAC-4-2-2；
(6)浸膏Fr.ETOAC-4-2-2用ODS-C18柱在半制备HPLC上进一步分离，乙腈-水体积比14:86洗脱，流速3mL/min，收集25min的色谱峰，减压回收溶剂，得到化合物D。
3.根据权利要求2所述的所述的从酒茱萸提取具有降糖作用的化合物D制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)取干燥的酒茱萸10kg，加体积浓度为30％的乙醇溶液120L，4～6℃冷浸提取9天，过滤，得提取液，减压浓缩，得50℃相对密度1.2～1.4的稠浸膏；
(2)稠浸膏加水2.0L分散成悬浮液，用乙酸乙酯萃取6次，每次1L～2L，合并上述萃取液,减压浓缩，得50℃相对密度1.2～1.4的浸膏Fr.ETOAC；
(3)浸膏Fr.ETOAC经过200～300目筛的硅胶柱色谱，r＝3cm，H＝7cm，用体积比100:0、100:2、100:5二氯甲烷-甲醇进行梯度洗脱，每个比例洗脱6个柱体积，收集100:5的洗脱液，减压浓缩，得50℃相对密度1.2～1.4的浸膏Fr.ETOAC-4；
(4)浸膏Fr.ETOAC-4经r＝2～3cm、H＝4～5cm的ODS柱层析，用体积比10:90、20:80的甲醇-水进行梯度洗脱，每个比例洗脱6～8个柱体积，收集20:80的洗脱液，减压浓缩，得50℃相对密度1.2～1.4的浸膏Fr.ETOAC-4-2；
(5)浸膏Fr.ETOAC-4-2经Sephadex LH-20柱层析，r＝2cm，H＝80cm，用甲醇850～950mL洗脱，流速0.2～0.6mL/min，减压浓缩，得50℃相对密度1.2～1.4的浸膏Fr.ETOAC-4-2-2；
(6)浸膏Fr.ETOAC-4-2-2用ODS-C18柱在半制备HPLC上进一步分离，乙腈-水体积比14:86洗脱，流速3mL/min，收集25min的色谱峰，减压回收溶剂，得到化合物D。
4.根据权利要求2所述的所述的从酒茱萸提取具有降糖作用的化合物D制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)取干燥的酒茱萸10kg，加体积浓度为30％的乙醇溶液100L，4℃冷浸提取12天，过滤，得提取液，减压浓缩，得50℃相对密度1.2的稠浸膏；
(2)稠浸膏加水2L分散成悬浮液，用乙酸乙酯萃取4次，每次2.5L，减压浓缩萃取溶液，得50℃相对密度1.2的浸膏Fr.ETOAC；
(3)浸膏Fr.ETOAC经过300目筛的硅胶柱色谱，r＝2.5cm，H＝6cm，用体积比100:0、100:2、100:5二氯甲烷-甲醇进行梯度洗脱，每个比例洗脱8个柱体积，收集100:5的洗脱液，减压浓缩，得50℃相对密度1.2的浸膏Fr.ETOAC-4；
(4)浸膏Fr.ETOAC-4经r＝2.5cm、H＝10cm的ODS柱层析，用体积比10:90、20:80的甲醇-水进行梯度洗脱，每个比例洗脱8个柱体积，收集20:80的洗脱液，减压浓缩，得50℃相对密度1.2的浸膏Fr.ETOAC-4-2；
(5)浸膏Fr.ETOAC-4-2经Sephadex LH-20柱层析，r＝1cm，H＝60cm，用甲醇850mL洗脱，流速0.3mL/min，减压浓缩，得50℃相对密度1.2的浸膏Fr.ETOAC-4-2-2；
(6)浸膏Fr.ETOAC-4-2-2用ODS-C18柱在半制备HPLC上进一步分离，乙腈-水体积比14:86洗脱，流速3mL/min，收集25min的色谱峰，减压回收溶剂，得到化合物D。
5.根据权利要求2所述的所述的从酒茱萸提取具有降糖作用的化合物D制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)取干燥的酒茱萸10kg，加体积浓度为30％的乙醇溶液60L，6℃冷浸提取8天，过滤，得提取液，减压浓缩，得50℃相对密度1.3的稠浸膏；
(2)稠浸膏加水1L分散成悬浮液，用乙酸乙酯萃取6次，每次1L，减压浓缩萃取溶液，得50℃相对密度1.3的浸膏Fr.ETOAC；
(3)浸膏Fr.ETOAC经过200目筛的硅胶柱色谱，r＝4cm，H＝9cm，用体积比100:0、100:2、100:5二氯甲烷-甲醇进行梯度洗脱，每个比例洗脱4个柱体积，收集100:5的洗脱液，减压浓缩，得50℃相对密度1.4的浸膏Fr.ETOAC-4；
(4)浸膏Fr.ETOAC-4经r＝3cm、H＝6cm的ODS柱层析，用体积比10:90、20:80的甲醇-水进行梯度洗脱，每个比例洗脱4个柱体积，收集20:80的洗脱液，减压浓缩，得50℃相对密度1.4的浸膏Fr.ETOAC-4-2；
(5)浸膏Fr.ETOAC-4-2经Sephadex LH-20柱层析，r＝3cm，H＝90cm，用甲醇1000mL洗脱，流速0.5mL/min，减压浓缩，得50℃相对密度1.4的浸膏Fr.ETOAC-4-2-2；
(6)浸膏Fr.ETOAC-4-2-2用ODS-C18柱在半制备HPLC上进一步分离，乙腈-水体积比14:86洗脱，流速3mL/min，收集25min的色谱峰，减压回收溶剂，得到化合物D。
6.根据权利要求2所述的所述的从酒茱萸提取具有降糖作用的化合物D制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)取干燥的酒茱萸10kg，加体积浓度为30％的乙醇溶液80L，5℃冷浸提取10天，过滤，得提取液，减压浓缩，得50℃相对密度1.3的稠浸膏；
(2)稠浸膏加水2L分散成悬浮液，用乙酸乙酯萃取4次，用量分别为2.5L、2.5L、2.5L、1.3L，减压浓缩萃取溶液，得50℃相对密度1.3的浸膏Fr.ETOAC；
(3)浸膏Fr.ETOAC经过200～300目筛的硅胶柱色谱，r＝5cm，H＝7cm，用体积比100:0、100:2、100:5二氯甲烷-甲醇进行梯度洗脱，每个比例洗脱7个柱体积，收集100:5的洗脱液，减压浓缩，得50℃相对密度1.3的浸膏Fr.ETOAC-4；
(4)浸膏Fr.ETOAC-4经r＝3cm、H＝4cm的ODS柱层析，用体积比10:90、20:80的甲醇-水进行梯度洗脱，每个比例洗脱7个柱体积，收集20:80的洗脱液，减压浓缩，得50℃相对密度1.3的浸膏Fr.ETOAC-4-2；
(5)浸膏Fr.ETOAC-4-2经Sephadex LH-20柱层析，r＝1.3cm，H＝80cm，用甲醇900mL洗脱，流速0.4mL/min，减压浓缩，得50℃相对密度1.3的浸膏Fr.ETOAC-4-2-2；
(6)浸膏Fr.ETOAC-4-2-2用ODS-C18柱在半制备HPLC上进一步分离，乙腈-水体积比14:86洗脱，流速3mL/min，收集25min的色谱峰，减压回收溶剂，得到化合物D。
7.权利要求1所述的从酒茱萸提取具有降糖作用的化合物D在制备降糖药物中的应用。
8.权利要求1所述的从酒茱萸提取具有降糖作用的化合物D在制备治疗糖尿病药物中的应用。
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