CN112812085A - 一对从酒茱萸提取的化合物a、b及其制备方法与应用 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及从酒茱萸提取的化合物A、B及其制备方法与应用，可有效解决从酒茱萸中制备新的化合物A、B，并实现在制备抗炎药物中的应用问题，酒茱萸加水煮沸提取，提取液减压浓缩，上D101大孔吸附树脂柱，依次用水、30%乙醇洗脱，收集30%乙醇部位洗脱液，减压浓缩，得浸膏Fr.30%EtOH，经硅胶柱色谱分离，二氯甲烷‑甲醇梯度洗脱，收集100︰5的洗脱液，减压浓缩，得浸膏Fr.30%EtOH‑4，经ODS柱色谱分离，用甲醇‑水进行减压梯度洗脱，收集30︰70的洗脱液，减压浓缩，得浸膏Fr.30%EtOH‑4‑3；再经Sephadex LH‑20柱色谱分离，用甲醇洗脱，减压回收溶剂，重结晶，得化合物A、化合物B。本发明易操作，导向性强，产品纯度高，该化合物可有效用于制备抗炎的药物，开拓了酒茱萸的新用途和药用价值。

Description

一对从酒茱萸提取的化合物A、B及其制备方法与应用
技术领域
本发明涉及医药，特别是一对从酒茱萸提取的化合物A、B及其制备方法与应用。
背景技术
山茱萸为山茱萸科(Cornaceae)植物山茱萸(Cornus officinalis Sieb.etZucc.)的干燥成熟果肉。在我国药用历史已有两千余年，始载于《神农本草经》，“味酸平，主心下邪气，寒热，温中，逐寒湿痹，去三虫，久服轻身，”具有补益肝肾，涩精固脱等功效，2018年被我国列为药食同源的中药。河南、陕西和浙江是山茱萸的三大主产地，其中河南产山茱萸占总产量的60％以上，其年产量4000余吨，年需求量在5000～6000余吨。临床调节以及经典名方中，山茱萸常以其炮制品酒茱萸入药，如六味地黄丸、金匮肾气丸等。
类风湿性关节炎是一种以关节滑膜组织炎症所致关节滑膜细胞增殖、炎性细胞浸润和为主要病理改变特征的自身免疫性疾病。其致残率较高，约为发病率的35％。类风湿关节炎具体发病机制至今尚未完全明了。现代研究认为机体的免疫功能紊乱是引发类风湿关节炎的重要因素。目前没有治疗类风湿性关节炎的有效药物，因此，从传统具有补益作用、免疫调节作的中医药中发现高效低度的治疗类风湿性关节炎的有效药物成为研究的热点。
近年来有山茱萸治疗类风湿性关节炎的报道，研究表明酒山茱萸提取物具有抗炎和免疫调节作用。但其物质基础尚不清晰，未见单体化的相关报道。现代中医临床多认为，酒茱萸较山茱萸可增强温补肝肾，降低酸性作用等。遵循古人的入药习惯，同时结合对酒茱萸的前期研究，希望从酒茱萸中获得结构新颖、抗炎活性强的新化合物，有效应用于类风湿性关节炎的治疗，但至今未见有公开报导。
发明内容
针对上述情况，为克服现有技术之缺陷，本发明之目的就是提供一对从酒茱萸提取的化合物A、B及其制备方法与应用，可有效解决从酒茱萸中制备新的化合物A、B，并实现在制备抗炎药物中的应用问题。
本发明解决的技术方案是，一对从酒茱萸提取的化合物A、化合物B，是CornusgallatesA(化合物1)和CornusgallatesB(化合物2)，化合物结构式为：
Figure BDA0002892589490000011
Figure BDA0002892589490000021
其制备方法包括以下步骤：
(1)取干燥的酒茱萸5kg，每次加水30～100L，100℃煮沸提取2～6次，每次提取2～4h，合并提取液，减压浓缩至相当于含生药0.1g/mL～2g/mL的浓缩液；
(2)将浓缩液上样于径高比1︰4～12的D101大孔吸附树脂柱，依次用水10～25L、体积浓度30％乙醇30～50L进行梯度洗脱，流速为2～6mL/min，收集30％乙醇部位洗脱液，减压浓缩，得到50℃相对密度1.2～1.4的浸膏Fr.30％EtOH；
(3)浸膏Fr.30％EtOH经200～300目硅胶柱色谱分离，r＝3～6cm，H＝10～20cm，用体积比100︰0、100︰2、100︰5二氯甲烷-甲醇进行梯度洗脱(自然流速)，每个比例洗脱3～10个柱体积，收集100︰5的洗脱液，减压浓缩，得到50℃相对密度1.2～1.4的浸膏Fr.30％EtOH-4；
(4)浸膏Fr.30％EtOH-4经ODS柱色谱分离，r＝2～5cm，H＝4～8cm，用体积浓度10︰90、20︰80、30︰70甲醇-水进行减压梯度洗脱，流速为10～50mL/min，每个比例洗脱3～10个柱体积(1个柱体积为170mL)，收集30︰70的洗脱液，减压浓缩，得到50℃相对密度1.2～1.4的浸膏Fr.30％EtOH-4-3；
(5)浸膏Fr.30％EtOH-4-3经Sephadex LH-20柱色谱分离，r＝1～2cm，H＝50～100cm，用甲醇1000mL洗脱，流速0.2～0.6mL/min，减压回收溶剂，重结晶，得一对化合物A、化合物B。
本发明化合物具有抗炎活性，可有效实现化合物A、B在制备治疗类风湿性关节炎药物中的应用。
本发明是一对从酒茱萸中提取的具有抗炎活性的新化合物，其制备方法易操作，导向性强，产品纯度高，该化合物可有效用于制备抗炎的药物，开拓了酒茱萸的新用途和药用价值，经济和社会效益巨大。
附图说明
图1为本发明化合物1、2的分子结构式；
图2为本发明化合物1、2的HMBC相关图；
图3为本发明化合物1、2的1H-NMR谱图；
图4为本发明化合物1、2的13C-NMR谱图；
图5为本发明化合物1、2的HSQC谱图；
图6为本发明化合物1、2的HMBC谱图；
图7为本发明化合物1、2的红外光谱图；
图8为本发明化合物1、2的紫外光谱图；
图9为本发明化合物1、2的质谱图；
图10为本发明化合物1、2的工艺流程图。
具体实施方式
以下结合具体情况和实施例对本发明的具体实施方式作详细说明。
本发明在具体实施中，可由以下实施例给出。
实施例1
本发明一对从酒茱萸提取的化合物A、化合物B，其结构式分别为：
Figure BDA0002892589490000031
其制备方法包括以下步骤：
(1)取干燥的酒茱萸5kg，每次加水40L，100℃煮沸提取3次，每次提取2.h，合并提取液，减压浓缩至相当于含生药1.1g/mL的浓缩液；
(2)将浓缩液上样于径高比1:10的D101大孔吸附树脂柱，依次用水36L、体积浓度30％乙醇(30％EtOH)36L进行梯度洗脱，流速为4mL/min，收集30％乙醇部位洗脱液，减压浓缩，得到50℃相对密度1.3的浸膏Fr.30％EtOH(第一浸膏，230g)；
(3)浸膏Fr.30％EtOH经200～300目硅胶柱色谱分离，r＝5cm，H＝20cm，用体积比100︰0、100︰2、100︰5二氯甲烷-甲醇进行梯度洗脱(自然流速)，每个比例洗脱6个柱体积，收集100︰5的洗脱液，减压浓缩，得到50℃相对密度1.35的浸膏Fr.30％EtOH-4(第二浸膏3.6g)；
(4)浸膏Fr.30％EtOH-4经ODS柱色谱分离，r＝3cm，H＝7cm，用体积浓度10︰90、20︰80、30︰70甲醇-水进行减压梯度洗脱，流速为30mL/min，每个比例洗脱6个柱体积，收集30︰70的洗脱液，减压浓缩，得到50℃相对密度1.25的浸膏Fr.30％EtOH-4-3(第三浸膏0.8g)；
(5)浸膏Fr.30％EtOH-4-3经Sephadex LH-20柱色谱分离，r＝11.5cm，H＝100cm，用甲醇1000mL洗脱，流速0.4mL/min，减压回收溶剂，甲醇中重结晶，得一对化合物A、化合物B(190mg，纯度96.5％)。
实施例2
本发明一对从酒茱萸提取的化合物A、化合物B的制备方法，包括以下步骤：
(1)取干燥的酒茱萸5kg，每次加水50L，100℃煮沸提取3次，每次提取3h，合并提取液，减压浓缩至相当于含生药1.2g/mL的浓缩液；
(2)将浓缩液上样于径高比1︰6的D101大孔吸附树脂柱，依次用水18L、体积浓度30％乙醇48L进行梯度洗脱，流速为4mL/min，收集30％乙醇部位洗脱液，减压浓缩，得到50℃相对密度1.3的浸膏Fr.30％EtOH(第一浸膏250g)；
(3)浸膏Fr.30％EtOH经300目硅胶柱色谱分离，r＝4cm，H＝12cm，用体积比100︰0、100︰2、100︰5二氯甲烷-甲醇进行梯度洗脱(自然流速)，每个比例洗脱9个柱体积，收集100︰5的洗脱液，减压浓缩，得到50℃相对密度1.35的浸膏Fr.30％EtOH-4(第二浸膏4.0g)；
(4)浸膏Fr.30％EtOH-4经ODS柱色谱分离，r＝2.5cm，H＝5cm，用体积浓度10︰90、20︰80、30︰70甲醇-水进行减压梯度洗脱(自然流速)，每个比例洗脱9个柱体积，收集30︰70的洗脱液，减压浓缩，得到50℃相对密度1.2～1.4的浸膏Fr.30％EtOH-4-3(第三浸膏1.1g)；
(5)浸膏Fr.30％EtOH-4-3经Sephadex LH-20柱色谱分离，r＝1.8cm，H＝80cm，用甲醇1000mL洗脱，流速0.5mL/min，减压回收溶剂，重结晶，得一对化合物A、化合物B(205mg，纯度93.5％)。
实施例3
本发明一对从酒茱萸提取的化合物A、化合物B的制备方法，包括以下步骤：
(1)取干燥的酒茱萸5kg，每次加水80L，100℃煮沸提取5次，每次提取2.5h，合并提取液，减压浓缩至相当于含生药1.2g/mL的浓缩液；
(2)将浓缩液上样于径高比1︰4的D101大孔吸附树脂柱，依次用水12L、体积浓度30％乙醇33L进行梯度洗脱，流速为3mL/min，收集30％乙醇部位洗脱液，减压浓缩，得到50℃相对密度1.35的浸膏Fr.30％EtOH(第一浸膏280g)；
(3)浸膏Fr.30％EtOH经300目目硅胶柱色谱分离，r＝5cm，H＝18cm，用体积比100︰0、100︰2、100︰5二氯甲烷-甲醇进行梯度洗脱(自然流速)，每个比例洗脱8个柱体积，收集100︰5的洗脱液，减压浓缩，得到50℃相对密度1.23 4的浸膏Fr.30％EtOH-4(第二浸膏3.8g)；
(4)浸膏Fr.30％EtOH-4经ODS柱色谱分离，r＝5cm，H＝8cm，用体积浓度10︰90、20︰80、30︰70甲醇-水进行减压梯度洗脱(自然流速)，每个比例洗脱4个柱体积，收集30︰70的洗脱液，减压浓缩，得到50℃相对密度1.3的浸膏Fr.30％EtOH-4-3(第三浸膏1.0g)；
(5)浸膏Fr.30％EtOH-4-3经Sephadex LH-20柱色谱分离，r＝1.2cm，H＝60cm，用甲醇1000mL洗脱，流速0.3mL/min，减压回收溶剂，重结晶，得一对化合物A、化合物B(200mg，纯度91.5％)。
实施例4
本发明一对从酒茱萸提取的化合物A、化合物B的制备方法，包括以下步骤：
(1)取干燥的酒茱萸5kg，每次加水50L，100℃煮沸提取4次，每次提取2h，合并提取液，减压浓缩至相当于含生药0.5g/mL的浓缩液；
(2)将浓缩液上样于径高比1︰6的D101大孔吸附树脂柱，依次用水18L、体积浓度30％乙醇36L进行梯度洗脱，流速为5mL/min，收集30％乙醇部位洗脱液，减压浓缩，得到50℃相对密度1.3的浸膏Fr.30％EtOH(270g)；
(3)浸膏Fr.30％EtOH经200～300目目硅胶柱色谱分离，r＝5cm，H＝15cm，用体积比100︰0 1.2L、100︰2 3.0L、100︰5 4.5L二氯甲烷-甲醇进行梯度洗脱(自然流速)，收集100︰5的洗脱液，减压浓缩，得到50℃相对密度1.3的浸膏Fr.30％EtOH-4(4.0g)；
(4)浸膏Fr.30％EtOH-4经ODS柱色谱分离，r＝3cm，H＝6cm，用体积浓度10︰90、20︰80、30︰70甲醇-水进行减压梯度洗脱(自然流速)，每个比例洗脱6个柱体积，收集30︰70的洗脱液，减压浓缩，得到50℃相对密度1.3的浸膏Fr.30％EtOH-4-3(1g)；
(5)浸膏Fr.30％EtOH-4-3经Sephadex LH-20柱色谱分离，r＝1.3cm，H＝80cm，用甲醇1000mL洗脱，流速0.4mL/min，减压回收溶剂，重结晶，得一对化合物A、化合物B(200mg，纯度92.2％)。
要指出的是，上述实施例仅是用于说明本发明的具体实施方式，以对该从酒茱萸中提取具有抗炎活性的化合物及其提取方法进行的详细描述，是说明性的，而不是用于限定本发明的保护范围，凡是在不脱离本发明总体构思下的变化和修改，均应属本发明的保护范围之内。
本发明化合物具有抗炎活性，可有效实现化合物A、B在制备治疗类风湿性关节炎药物中的应用。
上述所得化合物经色谱测定，鉴定为从酒茱萸中提取的两个(一对)新化合物：化合物A、化合物B，分子结构式见图1所示，在室温和正常的光照条件下，化合物A、化合物B快速相互转换，表明它们是一对互变异构体。对化合物A、化合物B组成的混合物进行抗炎活性实验研究，表明其具有抗炎活性。有关具体测定和实验资料如下：
化合物A：淡黄色粉末，易溶于甲醇等有机溶剂，遇香草醛-浓硫酸加热显蓝色。在HRESIMS中准分子离子峰[M+Na]+为285.0354(C13H10O6Na计算值为285.0375)，旋光度[α]25 D＝–367.28(c＝0.019，正己烷/异丙醇(80︰20))，结合1H-NMR、13C-NMR谱确定分子式为C13H10O6不饱和度为9。
紫外光谱在223nm和279nm有最大吸收；红外光谱提示有羟基(3362cm-1)，羰基(1717,1616cm-1)的存在。1H-NMR谱显示有一个甲基δH2.24(3H,s,H-6′)；三个次甲基，包括两个烯烃双键的氢δH5.98(1H,d,J＝2.6Hz,H-4′)和δH6.22(1H,d,J＝2.8Hz,H-3′)，一个连氧次甲基氢δH6.34(1H,s,H-3)；一个芳环上的氢δH6.85(1H,s,H-7)。13C-NMR谱显示有13个碳信号，其中有一个甲基δC(13.2,C-6′)；一个羰基δC(173.2,C-1)；一个连氧次甲基碳δC(75.4,C-3)；四个烯烃双键上的碳δC107.3(C-4′)，δC112.2(C-3′)，δC148.4(C-2′)和δC154.5(C-5′)；一组芳环上的碳δC103.0(C-7)，δC117.5(C-8)，δC127.1(C-9)，δC141.3(C-5)，δC141.4(C-4)，δC149.0(C-6)。详细信息见表1。
结合HMBC谱，可以看出H-3与C-1/C-2′/C-3′/C-4/C-8/C-9相关；H-7与C-1/C-5/C-6/C-8/C-9相关，H-3′与C-2′/C-4′/C-5′相关；H-4′与C-2′/C-3′/C-5′/C-6′；H-6′与C-4′/C-5′相关。结合1D和2DNMR确定了化合物A的平面结构。
化合物A的相对构型是由ECD谱确定的。ECD光谱在225nm和275nm处表现出负的科顿效应，207nm处表现出正的科顿效应。计算曲线与实验曲线吻合良好，但有轻微的峰移，结合X射线单晶衍射，表明化合物A的绝对构型为3R。
化合物B：黄色粉末，柱型单晶(甲醇)，易溶于甲醇等有机溶剂，遇香草醛-浓硫酸加热显蓝色。在HRESIMS中准分子离子峰[M+Na]+为285.0354(C13H10O6Na计算值为285.0375),旋光度[α]2D5＝+236.20(c＝0.019，正己烷/异丙醇(80︰20))，结合1H-NMR、13C-NMR谱确定分子式为C13H10O6不饱和度为9。
平面结构的确定与化合物A相同。
化合物B的相对构型是由ECD谱确定的。ECD光谱在225nm和275nm处表现出正的科顿效应，207nm处表现出负的科顿效应。计算曲线与实验曲线吻合良好，但有轻微的峰移，结合X射线单晶衍射，表明化合物B的绝对构型为3S。
表1.化合物A、化合物B的1H-and 13C-NMR数据(500and 125MHzδin ppm，MeOD)
No. δ<sub>C</sub> δ<sub>H</sub>(J in Hz) Key HMBC
1 173.2
2
3 75.4 6.34(1H,s) 1,2′,3′,4,8,9
4 141.4
5 141.3
6 149.0
7 103.0 6.85(1H,s) 1,5,6,8,9
8 117.5
9 127.1
1′
2′ 148.4
3′ 112.2 6.22(1H,d,2.8) 2′,4′,5′
4′ 107.3 5.98(1H,d,2.6) 2′,3′,5′,6′
5′ 154.5
6′ 13.2 2.24(3H,s)
采用的仪器与材料：
Thermo EVO 300spectrometer紫外光谱仪(Thermo,Waltham,MA,美国)；
Bruker AVⅢ500-NMR核磁共振仪(Bruker,Billerica,德国)；
Bruker maXis HD高分辨质谱仪(Bruker,德国)；
清博华LC 52型半制备高效液相色谱仪(QBH,中国)；
H&E ODS-AQ制备柱(10×250mm,5um；H&E Co.,Ltd,中国)；
COSMOSIL CHiRAL 5C柱(10ID×250mm,Nacalai Tesque,Inc.,日本)；
柱层析硅胶(100-200目,200-300目,青岛海洋化工有限公司)；D101型大孔树脂(上海摩速科学器材有限公司)；葡聚糖凝胶Sephadex LH-20(瑞典pharmacia公司)；ODS-C18(日本YMC公司)；
所用试剂均为分析纯或色谱纯；
氘代试剂：MeOD(Cambridge Isotope Laboratories,USA)；
RAW264.7细胞株来源于中国科学院(上海)细胞库；
LPS从美国Sigma Aldrich购买；
DMEM培养液和胎牛血清和胎牛血清(FBS)购自美国Gibco公司；
3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)和二甲基亚砜(DMSO)购于美国Sigma-Aldrich公司；
二氧化碳培养箱(美国赛默飞公司，型号3111)；
酶标仪(美国赛默飞公司，型号MULTISKAN FC)；
台式高速冷冻离心机(索福ST-21，美国产)；
AdventurerTM电子天平(奥豪斯国际贸易上海有限公司)；
洁净工作台，北京昌平长城空气净化设备工程公司；
96孔板购于美国Corning公司；
体外抗炎实验：
采用MTT法测定脂多糖(LPS)诱导的AWM264.7细胞产生NO水平，评价化合物A、化合物B的抗炎活性。与模型组相比，化合物A、化合物B能显著降低NO的释放量(P<0.01)，且呈浓度依赖性，表明其具有抗炎活性。
化合物A、化合物B的抗炎实验方法：将RAW264.7细胞培养于DMEM完全培养基(含10％新生牛血清)中，置37℃、5％CO2培养箱内培养。选择对数生长期细胞用于实验。
取对数生长期的RAW264.7细胞，用完全培养基配成1×105个/mL的细胞悬浮液，接种于96孔板中，每孔加入100μL的细胞悬液，置37℃、5％CO2培养箱内培养。24h后，弃去孔内上清液，分别加入100μL浓度为100、50、25、12.5、6.25、0mM，化合物A、B的完全培养基；即给药组和空白组，每组设置3个复孔，置37℃，含5％CO2培养箱内培养。24小时后，每孔加入MTT10μL，继续培养3h，弃去上清液，每孔加入100μl DMSO，在摇床上振摇10min后，紫色结晶充分溶解，用酶标仪在490nm处测定各孔OD值。并计算细胞存活率，细胞存活率＝(A测/A空)×100％。公式中：A测为药物组OD值-空白组OD值：A空为对照组OD值-空白组OD值。每组重复3次独立实验。化合物A、B在浓度6.25-100μM时与空白组比较对RAW264.7细胞均无细胞毒活性，细胞活力均在100％以上。因此，选择25，50μM作为后续试验的浓度梯度。
将处于对数生长期的细胞接种于24孔板(2×105个细胞/孔)，37℃、5％CO2环境的培养箱中培养12h后加入不同质量浓度的待测样品(最终质量浓度分别为25、50μM)，温孵培养1h后加人1μg/mL LPS。同时设空白对照组(培养基)、模型(LPS+培养基)组、阳性药组(地塞米松+培养基)和药物作用组。继续温孵培养24h。每组重复3次独立实验。将上清液(100mL)与等体积格氏试剂混合，用酶联免疫检检测仪测定混合物在560nm处的OD值，计算NO抑制率，结果见表2。
表2化合物A、化合物B对LPS诱导的RAW264.7细胞NO水平影响
Figure BDA0002892589490000082
Figure BDA0002892589490000081
由表2可知，模型组NO的释放量显著高于空白对照组(P<0.01)，表明造模成功。与模型组相比，各浓度处理均能显著降低NO的释放量(P<0.01)，且呈浓度依赖性。由表2可以看出，化合物A、B能够较好地抑制炎症因子NO的生成，活性较地塞米松显著。
以化合物A、B(质量比1︰1)混合粉末为主要成分，制备了一种治疗关节炎的药物，进行了体内抗炎实验。
试验方法：30只wistar大鼠，雄性，体质量(160±20)g，动物由济南朋悦实验动物繁育有限公司提供，实验动物许可证号：SYXK(鲁)20190003。适应性喂养1周，随机分为5组，每组6只。模型组和各给药组于每只大鼠左后足趾内注射0.15mL的弗氏完全佐剂，致炎，对照组大鼠左后足趾内注射同体积的生理盐水。于造模当天给药。给药组分别灌服高、低剂量(20mg/kg、10mg/kg)制备的药物，灌胃体积均为0.2mL/10g，阳性对照组(白芍总苷胶囊)，阴性对照组(生理盐水)。对照组与模型组灌服等量生理盐水，连续给药25d。分别于造膜后第1、3、5、7、12、18、25天测量大鼠左后足趾同一位置的周长，作为肿胀度，分别测3次，取平均值。分别于造模后第1、3、5、7、11、18、25天测量各组大鼠体质量。
制备的治疗关节炎药物大、小剂量组均有显著的抗炎作用。对照组大鼠在整个实验过程中左后足趾各关节无红肿。模型组大鼠在造模后第3天出现左后足趾关节皮肤充血肿胀，在造模后第6天炎症反应最为明显，在造模后第13天关节肿胀达到高峰。各给药干预组大鼠均于造膜后第3天开始出现与模型组相同的关节症状，但程度与模型组相比较轻。实验结束时，与模型组大鼠足趾肿胀度(1.82±0.07)相比，大、小剂量组大鼠足趾肿胀度分别为1.68±0.08和1.74±0.06cm。从大鼠足趾肿胀度可以看出，制备的抗关节炎药物在20mg/kg和10mg/kg剂量下均可以显著抑制弗氏完全佐剂所致的大鼠关节炎症，具有很好的抗炎活性。
本发明化合物A、化合物B作为具有显著的抗炎作用，有效用于制备治疗类风湿性关节炎的药物中的应用，，开拓了酒茱萸的新用途和商业价值，有显著的经济和社会效益。具有广阔的开发前景，经济和社会效益巨大。

Claims (8)

1.一对从酒茱萸提取的化合物A、化合物B，化合物结构式为：
Figure FDA0002892589480000011
2.权利要求1所述的从酒茱萸提取的化合物A、化合物B的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)取干燥的酒茱萸5kg，每次加水30～100L，100℃煮沸提取2～6次，每次提取2～4h，合并提取液，减压浓缩至相当于含生药0.1g/mL～2g/mL的浓缩液；
(2)将浓缩液上样于径高比1︰4～12的D101大孔吸附树脂柱，依次用水10～25L、体积浓度30％乙醇30～50L进行梯度洗脱，流速为2～6mL/min，收集30％乙醇部位洗脱液，减压浓缩，得到50℃相对密度1.2～1.4的浸膏Fr.30％EtOH；
(3)浸膏Fr.30％EtOH经200～300目硅胶柱色谱分离，r＝3～6cm，H＝10～20cm，用体积比100︰0、100︰2、100︰5二氯甲烷-甲醇进行梯度洗脱，每个比例洗脱3～10个柱体积，收集100︰5的洗脱液，减压浓缩，得到50℃相对密度1.2～1.4的浸膏Fr.30％EtOH-4；
(4)浸膏Fr.30％EtOH-4经ODS柱色谱分离，r＝2～5cm，H＝4～8cm，用体积浓度10︰90、20︰80、30︰70甲醇-水进行减压梯度洗脱，流速为10～50mL/min，每个比例洗脱3～10个柱体积，收集30︰70的洗脱液，减压浓缩，得到50℃相对密度1.2～1.4的浸膏Fr.30％EtOH-4-3；
(5)浸膏Fr.30％EtOH-4-3经Sephadex LH-20柱色谱分离，r＝1～2cm，H＝50～100cm，用甲醇1000mL洗脱，流速0.2～0.6mL/min，减压回收溶剂，重结晶，得一对化合物A、化合物B。
3.根据权利要求2所述的从酒茱萸提取的化合物A、化合物B的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)取干燥的酒茱萸5kg，每次加水40L，100℃煮沸提取3次，每次提取2.h，合并提取液，减压浓缩至相当于含生药1.1g/mL的浓缩液；
(2)将浓缩液上样于径高比1:10的D101大孔吸附树脂柱，依次用水36L、体积浓度30％乙醇36L进行梯度洗脱，流速为4mL/min，收集30％乙醇部位洗脱液，减压浓缩，得到50℃相对密度1.3的浸膏Fr.30％EtOH；
(3)浸膏Fr.30％EtOH经200～300目硅胶柱色谱分离，r＝5cm，H＝20cm，用体积比100︰0、100︰2、100︰5二氯甲烷-甲醇进行梯度洗脱，每个比例洗脱6个柱体积，收集100︰5的洗脱液，减压浓缩，得到50℃相对密度1.35的浸膏Fr.30％EtOH-4；
(4)浸膏Fr.30％EtOH-4经ODS柱色谱分离，r＝3cm，H＝7cm，用体积浓度10︰90、20︰80、30︰70甲醇-水进行减压梯度洗脱，流速为30mL/min，每个比例洗脱6个柱体积，收集30︰70的洗脱液，减压浓缩，得到50℃相对密度1.25的浸膏Fr.30％EtOH-4-3；
(5)浸膏Fr.30％EtOH-4-3经Sephadex LH-20柱色谱分离，r＝11.5cm，H＝100cm，用甲醇1000mL洗脱，流速0.4mL/min，减压回收溶剂，甲醇中重结晶，得一对化合物A、化合物B。
4.根据权利要求2所述的从酒茱萸提取的化合物A、化合物B的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)取干燥的酒茱萸5kg，每次加水50L，100℃煮沸提取3次，每次提取3h，合并提取液，减压浓缩至相当于含生药1.2g/mL的浓缩液；
(2)将浓缩液上样于径高比1︰6的D101大孔吸附树脂柱，依次用水18L、体积浓度30％乙醇48L进行梯度洗脱，流速为4mL/min，收集30％乙醇部位洗脱液，减压浓缩，得到50℃相对密度1.3的浸膏Fr.30％EtOH；
(3)浸膏Fr.30％EtOH经300目硅胶柱色谱分离，r＝4cm，H＝12cm，用体积比100︰0、100︰2、100︰5二氯甲烷-甲醇进行梯度洗脱，每个比例洗脱9个柱体积，收集100︰5的洗脱液，减压浓缩，得到50℃相对密度1.35的浸膏Fr.30％EtOH-4；
(4)浸膏Fr.30％EtOH-4经ODS柱色谱分离，r＝2.5cm，H＝5cm，用体积浓度10︰90、20︰80、30︰70甲醇-水进行减压梯度洗脱，每个比例洗脱9个柱体积，收集30︰70的洗脱液，减压浓缩，得到50℃相对密度1.2～1.4的浸膏Fr.30％EtOH-4-3；
(5)浸膏Fr.30％EtOH-4-3经Sephadex LH-20柱色谱分离，r＝1.8cm，H＝80cm，用甲醇1000mL洗脱，流速0.5mL/min，减压回收溶剂，重结晶，得一对化合物A、化合物B。
5.根据权利要求2所述的从酒茱萸提取的化合物A、化合物B的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)取干燥的酒茱萸5kg，每次加水80L，100℃煮沸提取5次，每次提取2.5h，合并提取液，减压浓缩至相当于含生药1.2g/mL的浓缩液；
(2)将浓缩液上样于径高比1︰4的D101大孔吸附树脂柱，依次用水12L、体积浓度30％乙醇33L进行梯度洗脱，流速为3mL/min，收集30％乙醇部位洗脱液，减压浓缩，得到50℃相对密度1.35的浸膏Fr.30％EtOH；
(3)浸膏Fr.30％EtOH经300目目硅胶柱色谱分离，r＝5cm，H＝18cm，用体积比100︰0、100︰2、100︰5二氯甲烷-甲醇进行梯度洗脱，每个比例洗脱8个柱体积，收集100︰5的洗脱液，减压浓缩，得到50℃相对密度1.23 4的浸膏Fr.30％EtOH-4；
(4)浸膏Fr.30％EtOH-4经ODS柱色谱分离，r＝5cm，H＝8cm，用体积浓度10︰90、20︰80、30︰70甲醇-水进行减压梯度洗脱，每个比例洗脱4个柱体积，收集30︰70的洗脱液，减压浓缩，得到50℃相对密度1.3的浸膏Fr.30％EtOH-4-3；
(5)浸膏Fr.30％EtOH-4-3经Sephadex LH-20柱色谱分离，r＝1.2cm，H＝60cm，用甲醇1000mL洗脱，流速0.3mL/min，减压回收溶剂，重结晶，得一对化合物A、化合物B。
6.根据权利要求2所述的从酒茱萸提取的化合物A、化合物B的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)取干燥的酒茱萸5kg，每次加水50L，100℃煮沸提取4次，每次提取2h，合并提取液，减压浓缩至相当于含生药0.5g/mL的浓缩液；
(2)将浓缩液上样于径高比1︰6的D101大孔吸附树脂柱，依次用水18L、体积浓度30％乙醇36L进行梯度洗脱，流速为5mL/min，收集30％乙醇部位洗脱液，减压浓缩，得到50℃相对密度1.3的浸膏Fr.30％EtOH；
(3)浸膏Fr.30％EtOH经200～300目目硅胶柱色谱分离，r＝5cm，H＝15cm，用体积比100︰01.2L、100︰2 3.0L、100︰5 4.5L二氯甲烷-甲醇进行梯度洗脱，收集100︰5的洗脱液，减压浓缩，得到50℃相对密度1.3的浸膏Fr.30％EtOH-4；
(4)浸膏Fr.30％EtOH-4经ODS柱色谱分离，r＝3cm，H＝6cm，用体积浓度10︰90、20︰80、30︰70甲醇-水进行减压梯度洗脱，每个比例洗脱6个柱体积，收集30︰70的洗脱液，减压浓缩，得到50℃相对密度1.3的浸膏Fr.30％EtOH-4-3；
(5)浸膏Fr.30％EtOH-4-3经Sephadex LH-20柱色谱分离，r＝1.3cm，H＝80cm，用甲醇1000mL洗脱，流速0.4mL/min，减压回收溶剂，重结晶，得一对化合物A、化合物B。
7.权利要求1所述的一对从酒茱萸提取的化合物A、化合物B在制备抗炎药物中的应用。
8.权利要求1所述的一对从酒茱萸提取的化合物A、化合物B在制备治疗类风湿性关节炎药物中的应用。
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