CN112834630A - 一种快速测定玉米芯水解液中组分含量的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种快速测定玉米芯水解液中组分含量的方法，利用HPLC分析对玉米芯水解液待测样品中葡萄糖、木糖、阿拉伯糖、乙酸和糠醛共五种组分同时进行含量测定和分析，实现一次性完成玉米芯水解液中的组分分析，各物质峰型尖锐，分离效果显著；在15min内完成分析，分析时间短；所使用的设备较常见，流动相配制简单，方法容易实现，检测成本相对较低。通过标准溶液外标法进行计算，得到玉米芯水解液中各组分的含量。该方法得出的标准曲线的线性关系良好，精密度和准确度高，测定结果可靠，检测效率高，可批量操作。

Description

一种快速测定玉米芯水解液中组分含量的方法
技术领域
本发明属于玉米芯水解液组分测定技术领域，特别涉及一种快速测定玉米芯水解液中组分含量的方法。
背景技术
玉米芯中富含半纤维素和纤维素，其经过酸或者酶水解后可以得到木糖、葡萄糖、阿拉伯糖等糖类物质以及糠醛、乙酸等水解副产物。在水解过程中，需要跟踪水解液的组分变化情况，目前普遍使用的检测分析方法是高效液相色谱法和气相色谱法。
糖类物质分析常用高效液相色谱法，检测器以示差折光检测器和蒸发光散射检测器为主，如国家标准GB/T23532-2009《木糖》、国家标准GB5009.8-2016《食品安全国家标准食品中果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、乳糖的测定》、公布号CN102914603B专利《一种同时分离检测十三种糖和糖醇的高效液相色谱蒸发光散射检测法》等。
糠醛类化合物检测中常用的是高效液相色谱-紫外检测，如公开号CN108254471A专利《低聚木糖中5-羟甲基糠醛和糠醛含量的检测方法》、公开号CN108318601A专利《一种糠醛和5-羟甲基糠醛的液相色谱检测方法》、公开号CN109580820A专利《一种乳制品中糠醛类化合物的快速检测方法》等。乙酸类化合物检测，常用的是气相色谱法，如公布号CN104655773B专利《一种测定生物质预处理液中乙酸含量的方法》等。
综上可知，目前糖类检测和糠醛、乙酸等物质检测的色谱条件并不相同，暂不能实现同时进行糖类和抑制物的检测分析，所以使用现有的检测方法进行玉米芯水解液中组分的定量分析耗时较长。
发明内容
本发明所要解决的技术问题在于，针对现有方法无法同时定量检测玉米芯水解液中糖类和抑制物组分的问题，提供一种快速测定玉米芯水解液中组分含量的方法，简单易行、快速、方便、稳定，可以同时进行单糖与单糖间，以及单糖与乙酸、糠醛间分离与浓度检测。
本发明是这样实现的，提供一种快速测定玉米芯水解液中组分含量的方法，包括如下步骤：
步骤一、选取玉米芯水解液待测样品用滤膜过滤后装入待测瓶中；
步骤二、对待测瓶中的玉米芯水解液待测样品进行色谱分析，得到待测样品的色谱图，其中，色谱分析时的条件是：HPX-87H色谱柱，柱温55℃~65℃；0.003mol/L~0.007mol/L硫酸溶液作为流动相，进样量20μL，流速0.6mL/min；示差折光检测器，检测器温度35℃~40℃；
步骤三、对步骤二的色谱图进行分析，分别得到待测样品中葡萄糖、木糖、阿拉伯糖、乙酸和糠醛共五种组分的峰面积，再根据事先得到的该五种组分的标准样品的峰面积与其浓度的标准曲线，从而计算出玉米芯水解液待测样品中该五种组分的浓度，其中，该五种组分的标准样品的峰面积与其浓度的标准曲线也是采用与步骤二相同的色谱分析条件测定的。
进一步地，在步骤二中，在进行色谱分析前，需要对待测瓶中的玉米芯水解液待测样品事先进行比例稀释，因此，在步骤三中，根据事先得到的该五种组分的标准样品的峰面积与其浓度的标准曲线而计算出玉米芯水解液待测样品中该五种组分的浓度后，还需要乘以相应的稀释比例。
进一步地，在步骤二进行色谱分析前，事先按照稀释比例为5对待测瓶中的玉米芯水解液待测样品进行稀释。
与现有技术相比，本发明的快速测定玉米芯水解液中组分含量的方法具有以下特点：
1. 该方法能有效分离玉米芯水解液中各组分，达到同时对玉米芯水解液中糖类和抑制物组分进行检测分析的目的。
2. 该方法的测试结果精密度和准确度高，测定结果可靠，检测效率高，可批量操作。
3. 该方法能够在15min内完成玉米芯水解液中各组分的定量分析，分析时间短；所使用的设备较常见，流动相配制简单，方法容易实现，检测成本相对较低。
附图说明
图1为利用本发明的色谱条件测定的混合单糖包含葡萄糖、木糖、阿拉伯糖标准样品的HPLC检测色谱图；
图2为利用本发明的色谱条件测定的乙酸标准样品的HPLC检测色谱图；
图3为利用本发明的色谱条件测定的糠醛标准样品的HPLC检测色谱图；
图4为利用本发明的色谱条件测定的玉米芯水解液稀释后待测样品中各组分的HPLC检测色谱图。
具体实施方式
为了使本发明所要解决的技术问题、技术方案及有益效果更加清楚明白，以下结合附图及实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
本发明一种快速测定玉米芯水解液中组分含量的方法的较佳实施例，包括如下步骤：
步骤一、选取玉米芯水解液待测样品用滤膜过滤后装入待测瓶中。
步骤二、对待测瓶中的玉米芯水解液待测样品进行色谱分析，得到待测样品的色谱图，其中，色谱分析时的条件是：HPX-87H色谱柱（300mm x 7.8mm），柱温55℃~65℃；0.003mol/L~0.007mol/L硫酸溶液作为流动相，进样量20μL，流速0.6mL/min；示差折光检测器，检测器温度35℃~40℃。
步骤三、对步骤二的色谱图进行分析，分别得到待测样品中葡萄糖、木糖、阿拉伯糖、乙酸和糠醛共五种组分的峰面积，再根据事先得到的该葡萄糖、木糖、阿拉伯糖、乙酸和糠醛共五种组分的标准样品的峰面积与其浓度的标准曲线，从而计算出玉米芯水解液待测样品中该五种组分的浓度，其中，该五种组分的标准样品的峰面积与其浓度的标准曲线也是采用与步骤二相同的色谱分析条件测定的。
本发明方法实现一次性完成玉米芯水解液待测样品中的组分分析，各组分峰型尖锐，分离效果显著；在15min内完成分析，分析时间短；所使用的设备较常见，流动相配制简单，方法容易实现，检测成本相对较低。通过标准溶液外标法进行计算，得到玉米芯水解液中各组分的含量。该方法得出的标准曲线的线性关系良好，精密度和准确度高，测定结果可靠，检测效率高，可批量操作。
首先对本发明方法的测试结果的精密度和准确度进行说明。
（1）标样配制
用分析天平分别称取0g、0.02g、0.2g、0.4g、0.6g、0.8g的木糖标准样品、阿拉伯糖标准样品置于烧杯中，加超纯水溶解，转移至洗净并烘干的20mL容量瓶中，加水定容至刻度，静置待测。
用分析天平分别称取0g、0.02g、0.1g、0.2g、0.3g、0.4g的葡萄糖标准样品置于烧杯中，加超纯水溶解，转移至洗净并烘干的20mL容量瓶中，加水定容至刻度，静置待测。
用分析天平分别称取0g、0.0002g、0.0008g、0.002g、0.004g、0.008g、0.01g、0.02g的乙酸标准样品、糠醛标准样品置于烧杯中，加超纯水溶解，转移至洗净并烘干的20mL容量瓶中，加水定容至刻度，静置待测。
将上述五种标准样品用0.22μm微孔滤膜过滤后，依次装入2.5mL棕色试剂瓶中，准备待测。
（2）HPLC分析检测
分析条件：HPX-87H色谱柱（300mm x 7.8mm），柱温60℃；0.005mol/L硫酸溶液作为流动相，进样量20μL，流速0.6mL/min；示差折光检测器，检测器温度40℃。分别得到葡萄糖、木糖、阿拉伯糖、乙酸和糠醛共五种组分标准品的色谱图，见图1~图3所示。
①标准曲线：将得到的色谱图进行处理，以各组分标准品溶液浓度（g/L）为横坐标，色谱图中各组分的峰面积为纵坐标，分别绘制出葡萄糖、木糖、阿拉伯糖、乙酸和糠醛的标准曲线，见下表1。
表1 各组分标准样品的标准曲线
标准样品 标准曲线 相关系数/R<sup>2</sup>
葡萄糖 y=286816x-17611 1
木糖 y=253906x+157210 0.9961
阿拉伯糖 y=271740x+100347 0.9984
乙酸 y=134041x+92.099 1
糠醛 y=298409x-7042.4 0.9997
从上表1的标准曲线的相关系数可知，相关系数的数据均大于0.9961，因此，在各标品标准曲线中，标准品溶液浓度与其对应的组分的峰面积呈显著的正相关性，而且线性度很好。
②精密度试验：根据每次实验记录的各标准样品溶液的保留时间与峰面积，记录各组分的保留时间与峰面积的CV%，结果见下表2。
表2 各标准样品的精密度实验数据
标准样品 保留时间 CV% 峰面积 CV%
葡萄糖 0.15 0.09
木糖 0.20 0.75
阿拉伯糖 0.80 0.77
乙酸 0.15 0.08
糠醛 0.16 0.11
从上表2可以看出，各标准样品组分保留时间与峰面积变异系数（CV%）均小于0.80，因此，各个标准品的出峰保留时间和峰面积稳定，重复性好，可以实现五种物质的分离与检测，本发明方法的测定结果精密度高。
③准确度试验：为检测本发明方法的准确性，向玉米芯水解液待测样品中分别加入一定量的标准样品，并用上述方法进行液相色谱分析，测定峰面积，计算回收率。取50mL玉米芯水解液待测样品分为A、B两组，A组加入50mL超纯水，在步骤（2）的色谱条件下进行分析，根据得到的各标准曲线图计算标准样品中各物质含量；B组分别加入50mL稀释为1g/L的葡萄糖、木糖、阿拉伯糖、乙酸、糠醛标准样品，充分混合后，在步骤（2）的色谱条件下进行分析，根据得到的各标准曲线图计算标准样品中各组分的含量。根据上述实验数据计算回收率，结果见下表3。
表3 各标准样品的准确度实验数据
标准样品 浓度（g/L） 加入量（g/L） 测得量（g/L） 回收率（%） RSD（%）
葡萄糖 0.18 0.5 0.71 104.4 2.2
木糖 2.4 0.5 2.78 95.9 0.8
阿拉伯糖 0.23 0.5 0.69 94.5 0.7
乙酸 0.27 0.5 0.7 90.9 1.2
糠醛 0.13 0.5 0.61 96.8 0.5
从上表3可以看出，各组分的回收率（RSD%）在90.9%~104.4%之间，各个组分在待测样品体系中稳定性好，可以准确测定出样品溶液中的组分浓度。
其次通过以下实施例进一步说明本发明的方法。
实施例1
本发明第一种快速测定玉米芯水解液中组分含量的方法的较佳实施例，包括如下步骤：
1）、玉米芯水解液的制备：
首先将玉米芯原料用粉碎机进行粉碎，然后利用分子筛筛选得到35目~80目粒径大小的玉米芯颗粒，于105℃下烘干3h后取出，放入棕色细口玻璃瓶中密封保存。
用电子分析天平称取2.00g（绝干质量）玉米芯颗粒置于蓝盖水解瓶中，加入一定质量的超纯水（将固液比控制在一定范围内，1：5~1：15）和1.0%（wt%）的稀硫酸溶液，再将该水解瓶置于旋涡混合器上进行料液的快速均匀混合，然后转移至立式压力蒸汽灭菌器中，升温至121℃温度下水解60min后取出冷却。最后将酸水解液进行真空抽滤，收集滤液即玉米芯水解液于具塞三角瓶中。
2）、稀释玉米芯水解液：
将1）中得到的玉米芯水解液先稀释5倍，再用0.22μm微孔滤膜过滤后，依次装入2.5mL棕色试剂瓶中，作为稀释后待测样品溶液，待测。
3）、记录色谱图：
采用高效液相色谱HPLC分析检测2）中制备好的稀释后待测样品溶液，分析条件如下：采用Bio-Rad Aminex HPX-87H色谱柱（300mm x 7.8mm），柱温60℃；0.005mol/L硫酸溶液作为流动相，进样量20μL，流速0.6mL/min；示差折光检测器，检测器温度40℃，记录稀释后待测样品溶液的色谱图，如图4所示。
4）、色谱分析：
根据3）得到的稀释后待测样品溶液色谱图（如图4）中各组分的峰面积大小进行定量分析。
色谱图得到稀释后待测样品溶液中各组分的峰面积大小，分别是葡萄糖为124968.768，木糖为1606000.229，阿拉伯糖为158924.100，糠醛为1144.907，乙酸为92908.568，代入表1中各个标准曲线公式中进行计算，计算得出稀释后玉米芯水解液中各组分的浓度分别为葡萄糖0.441g/L，木糖5.706g/L，阿拉伯糖0.579g/L，糠醛0.0009g/L和乙酸0.692g/L。
将上述计算得到的浓度结果分别再乘以稀释倍数5得到稀释前玉米芯水解液中各组分的浓度，分别为葡萄糖2.205g/L，木糖28.53g/L，阿拉伯糖2.895g/L，糠醛0.0045g/L和乙酸3.46g/L。
综上，玉米芯水解液待测样品中各组分HPLC分析检测结果如下表：
Figure 548641DEST_PATH_IMAGE002
从上述数据结果来看，本发明方法可用于同时对玉米芯水解液中糖类和抑制物组分的含量进行定量分析。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (3)

1.一种快速测定玉米芯水解液中组分含量的方法，其特征在于，包括如下步骤：
步骤一、选取玉米芯水解液待测样品用滤膜过滤后装入待测瓶中；
步骤二、对待测瓶中的玉米芯水解液待测样品进行色谱分析，得到待测样品的色谱图，其中，色谱分析时的条件是：HPX-87H色谱柱，柱温55℃~65℃；0.003mol/L~0.007mol/L硫酸溶液作为流动相，进样量20μL，流速0.6mL/min；示差折光检测器，检测器温度35℃~40℃；
步骤三、对步骤二的色谱图进行分析，分别得到待测样品中葡萄糖、木糖、阿拉伯糖、乙酸和糠醛共五种组分的峰面积，再根据事先得到的该五种组分的标准样品的峰面积与其浓度的标准曲线，从而计算出玉米芯水解液待测样品中该五种组分的浓度，其中，该五种组分的标准样品的峰面积与其浓度的标准曲线也是采用与步骤二相同的色谱分析条件测定的。
2.如权利要求1所述的快速测定玉米芯水解液中组分含量的方法，其特征在于，在步骤二中，在进行色谱分析前，需要对待测瓶中的玉米芯水解液待测样品事先进行比例稀释，因此，在步骤三中，根据事先得到的该五种组分的标准样品的峰面积与其浓度的标准曲线而计算出玉米芯水解液待测样品中该五种组分的浓度后，还需要乘以相应的稀释比例。
3.如权利要求2所述的快速测定玉米芯水解液中组分含量的方法，其特征在于，在步骤二进行色谱分析前，事先按照稀释比例为5对待测瓶中的玉米芯水解液待测样品进行稀释。
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