CN112760330B

CN112760330B - ScRy1基因在抗马铃薯Y病毒植物育种中的应用

Info

Publication number: CN112760330B
Application number: CN202110282852.4A
Authority: CN
Inventors: 蔡兴奎; 李歌歌; 王昱文; 邵晶晶; 陈成
Original assignee: Huazhong Agricultural University
Current assignee: Huazhong Agricultural University
Priority date: 2021-03-16
Filing date: 2021-03-16
Publication date: 2022-12-27
Anticipated expiration: 2041-03-16
Also published as: CN112760330A

Abstract

本发明公开了ScRy1基因在抗马铃薯Y病毒植物育种中的应用，涉及分子生物学及植物基因工程技术领域，所述ScRy1基因编码的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示，发明人经过遗传分析，发现了PVY极端抗性基因ScRy1控制的性状为显性单基因遗传，将该ScRy1基因应用于植物育种，扩宽了可利用的基因资源，为培育高产、优质、高抗优良品种提供的崭新的育种途径。

Description

ScRy1基因在抗马铃薯Y病毒植物育种中的应用

技术领域

本发明涉及分子生物学及植物基因工程技术领域，具体而言，涉及ScRy1基因在抗马铃薯Y病毒植物育种中的应用。

背景技术

马铃薯(Solanum tuberosum L.)，因其适应性强，产量高，是仅次于水稻、小麦和玉米的第四大粮食作物。

在马铃薯生产的过程中发生的病毒浸染会引起种薯退化，同时病毒浸染也是限制马铃薯产业发展的瓶颈。具体地，病毒侵染会引起马铃薯植物矮化、叶片皱缩和花叶，严重影响其产量，最高减产可达80％以上。

马铃薯Y病毒(Potato Virus Y，PVY)是造成马铃薯严重经济损失的病毒之一，其侵染马铃薯后严重影响其产量和品质，主要通过蚜传危害马铃薯。通常可以通过化学防治的方法如喷施灭蚜剂来防治该病毒，但是据报道，即使采用最高效的灭蚜剂连续作用15min左右，也只能杀死90％。无法应用于生产实践。

鉴于PVY带来的危害，对其进行防治是势在必行的，特提出本发明。

发明内容

本发明的目的在于提供ScRy1基因在抗马铃薯Y病毒植物育种中的应用。

本发明是这样实现的：

第一方面，本发明实施例提供了ScRy1基因在抗马铃薯Y病毒植物育种中的应用，所述ScRy1基因编码的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。

第二方面，本发明实施例提供了一种抗马铃薯Y病毒植物的鉴定方法，其包括对目标植物中与ScRy1基因紧密连锁的分子标记进行检测。

第三方面，本发明实施例提供了一种分离的核酸，其编码的氨基酸序列如SEQ IDNo.1所示。

第四方面，本发明实施例还提供了一种重组载体，其包括如前述实施例所述的分离的核酸。

第五方面，本发明实施例提供了一种试剂盒，其包括：引物对1～9中的至少一对；引物对1～9的核酸序列依次如SEQ ID No.4～21所示。

本发明具有以下有益效果：

本发明实施例提供了ScRy1基因在抗马铃薯Y病毒植物育种中的应用，所述ScRy1基因编码的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示，发明人经过遗传分析，发现了PVY极端抗性基因ScRy1控制的性状为显性单基因遗传，将该ScRy1基因应用于植物育种，扩宽了可利用的基因资源，为培育高产、优质、高抗优良品种提供的崭新的育种途径。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本发明的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。

图1为实施例1中转基因马铃薯阳性检测PCR扩增图；

图2为实施例1中接种1个月后转基因株系表型的示意图；

图3为实施例2中利用基因标记G64-17-2检测其它资源材料扩增结果，其中，泳道1Trans 2K Plus DNA Marker；泳道2阳性对照；泳道3-14检测样品；泳道15阴性对照。

具体实施方式

为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。

本发明实施例提供了ScRy1基因在抗马铃薯Y病毒植物育种中的应用，所述ScRy1基因编码的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。

发明人经一系列创造性研究，发现了一种新的ScRy1基因，通过本领域的常规方式(转基因植物的制备)，使ScRy1基因在植物中稳定表达，可以使感病植株(如马铃薯或烟草)对多种不同PVY菌株均具有抗性。本发明将该ScRy1基因应用于植物育种，扩宽了可利用的基因资源，为培育高产、优质、高抗优良品种提供的崭新的育种途径。

优选地，所述ScRy1基因的核酸序列如SEQ ID No.2或3所示。如SEQ ID No.2所示序列为ScRy1基因的gDNA序列，包含4167个碱基，如SEQ ID No.3所示序列为ScRy1基因的cDNA序列，包含3387个碱基。

本文中的“cDNA”是指在体外经过逆转录后与RNA互补的DNA链。本文中的“gDNA”是指基因原有的DNA。

优选地，所述植物包括马铃薯和烟草中的任意一种。

优选地，所述育种包括：将含有所述ScRy1基因的重组表达载体导入目标植物的基因组中，筛选并培育抗马铃薯Y病毒的品种。

优选地，所述筛选包括：对目标植物中与ScRy1基因紧密连锁的分子标记进行检测。

本文中的“分子标记”可辅助育种，具体是指利用分子标记与控制目标形状基因紧密连锁的特征，通过检测分子标记，对目标形状进行分子水平的选择，不受环境影响，加快育种进程。

分子标记有多种形式，主要可分为三大类，第一类是以分子杂交为基础的DNA标记技术，主要是限制性片段长度多态性标记(RFLP标记)；第二类是以聚合酶链式反应(PCR反应)为基础的各种DNA指纹技术。第三类是一些新型的分子标记，如单核苷酸多态性SNP。在本发明的一些实施例中，不对分子标记做具体限制，只要通过分子标记的检测方法确认目标植物是否有稳定插入ScRy1基因以达到辅助育种的目的的技术方案则属于本申请的保护范围。

优选地，所述检测为PCR检测，将分子标记的引物对对目的植物的基因组进行扩增，若获得特定扩增片段大小的扩增产物，则认为目标植物中插入有目标基因。检测所述分子标记的引物对选自引物对1～9中的至少一对，所述引物对1～9的核酸序列依次如SEQ IDNo.4～21(表1)所示(1-5对为左侧连锁标记，6-8为基因标记，9为右侧连锁标记，优先选择基因标记进行检测，或者左侧和右侧标记联合使用，增加选择的可靠性)。

本文中“引物对1～9”均包括上游引物和下游引物，因此，引物对1的序列具体如SEQ ID No.4～5所示，引物对2的序列具体如SEQ ID No.6～7所示，引物对3的序列具体如SEQ ID No.8～9所示，引物对4的序列具体如SEQ ID No.10～11所示，引物对5的序列具体如SEQ ID No.12～13所示，引物对6的序列具体如SEQ ID No.14～15所示，引物对7的序列具体如SEQ ID No.16～17所示，引物对8的序列具体如SEQ ID No.18～19所示，引物对9的序列具体如SEQ ID No.20～21所示。

本发明还提供了一种抗马铃薯Y病毒植物的鉴定方法，其包括对目标植物中与ScRy1基因紧密连锁的分子标记进行检测。

优选地，所述检测为PCR检测，检测所述分子标记引物对选自引物对1～9中的至少一对，引物对1～9的核酸序列依次如SEQ ID No.4～21所示。

本发明还提供了一种分离的核酸，其编码的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。

优选地，所述核酸的序列如SEQ ID No.2或3所示。

本发明还提供了一种重组载体，其包括上述实施例所述的分离的核酸。所述重组载体选自克隆载体或表达载体。

此外，本发明实施例还提供了一种试剂盒，其包括：引物对1～9中的至少一对；引物对1～9的核酸序列依次如SEQ ID No.4～21所示。

优选地，所述试剂盒还包括：如前述任意实施例所述的分离的核酸或含有所述分离的核酸的重组载体。

在一些实施例中，所述试剂盒还包括用于PCR检测的试剂。

以下结合实施例对本发明的特征和性能作进一步的详细描述。

实施例1

本发明提供了一种用于马铃薯抗病毒育种的ScRy1基因，该基因编码的蛋白序列如SEQ ID No.1所示。具体如下：MNTQGESSSSSNLCYDVFLSFRGEDTRKNFIDHLYFRLCQVGVNTFIDDEELRKGDVISNKLDKAIEQSRIAIVVFSKNYASSSWCLDELVKILDCKERLNQVVLPIFYDVDPSQVRRQTGSFGEALSKHKERLVGAERMEKWKAALTEAANLSGWDLRNIADGHESKFIESVIKQVLQEVNQTPLDVAHYPIGLDSPIKHIEVLLQSGYEHEVRMIGICGIGGIGKTTLAKAIYNRIFQQFDGSCFLSDIRSKTEESGLIKLQEKLLYQILKTKEFEVDSVAEGVNLIKARLGSQKVLIVLDDVDHRSQLESLTRERSWFGLGSVIIITTRDEHLLYGLTTSEIYQAKLLNDKEAQQLFSCHAFNCFSPPQEYVKLAQDIIKYSGGLPLALVTLGSHLQGRSVEEWRYEFKKLKAIPHGDIQKILKISFDGLDANTQSVFLDIAFAFHGCDEDEVTKTLNACGFYSESAISTLVQRNLVQRNRPRLVMHDLVQEMGREIVRMESQDPGKRSRLFNPQEVIDVLQGNKGSKKVKILVVERQALKGVKLSTKAFQKMINLKILKIDDLHISGDFELLSKELRWLSWKRCPLKCIPSNFPSEKLVFLNMKGSNIQEFGLNLQYCRSLKELNLSDCKRLRKTPNFNGSRSLKTLCLENCSSLKEIHPSIGNLDRLIHLQLNGCEKITDLPSSICQLKSLEDLYINDCSSLQTLPVDIGDMQSLRYLNARETGIKELPGSVEMLGNLRNLEMGGQYLETKRRFSQTRVRPIVSLSKFISVLRLPYCGFSEVDVPRDIGSLSNLHHLDLSGNSFLYLPFDFSKLPLLSYLFLNDCENLQTLPSISNLEYLEILELRNCKKLVKITGFDNLPSIKMIDMINCTSLQNPFIEGFFSAQALSISSRKHSVYELLLQIYLESNEIPDWCSNKVTAPSICLTMPTVHNNNFLGMVLWFVCRLCDVHEHKHFIVTVAHIKRSGLPWIWYFDRSDSHEVSCVYYFSSANDTPFEGLNIKGGEQITVEDRTGRDVVKKIGIHLLYSDQHGNVTSLPGVVDHSYTPSYPQRLSAGHINSNNDNISNEILQVRSVSVDINKQSSENVLCTIENLFHRNRQWTWIYQMMTMPLKCLFGKCFSGE。

ScRy1基因的gDNA序列如SEQ ID No.2所示：atgaatactcaaggagaatcatcttcttcttccaacttatgttatgatgtgtttctcagtttcagaggtgaagatactcgcaaaaacttcattgatcatctttatttccgattatgtcaagtcggagttaatactttcatagatgatgaggaattgagaaagggagacgtcatatcaaacaaacttgacaaagcaattgaacaatctagaattgccattgttgttttctcgaaaaattatgcttcgtctagttggtgtcttgatgaacttgtcaaaattctcgattgcaaagagaggttaaatcaggtagttttgcctattttctatgatgttgatccttctcaagtgcgaaggcaaactggatcctttggcgaagctttgtcaaaacacaaggaacgattagttggagctgaaagaatggaaaagtggaaagctgcacttactgaagcagcaaatttatctggatgggatttgagaaatattgctgatgggtaagacttcttaattcaactattaaattttgaatttaagcgcttgcctaagcttataagttggttaattatggaacattgtaaagttttttaatattttttaaatttcgtatcaaatcaaactgtgtcgattgggacaaggaataatctccattctataaactctgttatcttttggctattggcttttattttgttcatcaaatattttaaaatacttaagtatttattgttgcaaaaactgtaggcatgaatcaaagtttattgagagtgttataaaacaagttctgcaagaggttaaccagacacctctagatgttgctcattacccaattggattagattctcctatcaaacatatagaggtgttactgcaaagtggatatgagcatgaagttcgcatgattggtatatgtggcattggtggaattggaaaaacaactttggcaaaagctatctataatcgaatatttcaacagtttgatggtagttgcttcctttctgacattagatcaaaaactgaagaatcgggtctaatcaagcttcaagagaaactactttatcaaatcctcaaaactaaggaatttgaagttgatagtgttgctgaaggtgttaatctcatcaaagcaagacttgggtctcagaaggttctaattgttcttgatgacgtggatcatagaagccaattagaatccttaacaagagaaagaagttggtttggcttaggtagtgtaataattattacaacccgagatgaacatttgctatatgggcttacaacaagtgagatataccaggccaaacttttaaatgacaaggaagcccaacaacttttttcttgtcatgcttttaactgtttttctccaccacaagaatatgttaaactggcacaagacataataaaatattcaggtgggctaccattagctcttgtgacattggggtcacatttgcaagggagatccgttgaagaatggagatacgagttcaaaaaactaaaagcaattcctcatggtgatattcaaaagattctcaagataagttttgatggacttgacgccaatactcagagtgttttccttgatatcgcatttgccttccatggttgtgatgaggatgaagttaccaaaacattaaatgcgtgtggtttttattctgaaagtgcaatttcaaccttagtacaaaggaacttggtccaaaggaataggcctcgtttggtgatgcatgatctagtgcaggaaatgggaagagaaatcgttcgcatggaatctcaagaccctggaaaacggagtagattgttcaaccctcaagaagtcattgatgttctacaaggaaataaagtcagtaaatttcattatctttatcttggttatacttcttcttcctttttttcatttatattgatttacatttgcttataatttatgcatttgtgcttaaatcttctccggctagtaagtatctctagaagtttgaaccattctgtacttgaaatgaacatttactgaagtctaaacactcaaactatcaaagacaaaattatcaaataaatatcctttagttggatataatgtgtagatttatttttattggtagataatttattctctttgtttgacctttaatttgtataaagcattaatttctctttcttaatttgtcatacttaaacatggtcttatagtaattttatttttactaaatttcagggttctaaaaaagtaaaaatattggtggtagaacgacaagcattaaagggtgtgaagctaagcaccaaagcatttcagaaaatgataaatcttaagattcttaaaattgacgacttacatattagtggagattttgagctattgtccaaggagctcagatggctgtcttggaaaagatgccctttaaaatgtataccgtcaaattttccatctgagaaacttgtatttctgaatatgaaagggagcaatatccaagaatttggtttgaatttgcaggtccgttactcaattctgcaattttatgtgtaatatttaagagaaagaaaatcttaattgaaacaatattttgtttacttcttagtattgtagaagtttgaaggagctgaatctctctgattgcaagcgcctcagaaaaactccaaacttcaacggttcacgaagtctcaagactttgtgtcttgagaattgctcaagtcttaaggagatccatccatcaataggaaatttggacagactaattcatcttcaactgaatggttgcgaaaagattacggatcttccgagcagcatatgccagctaaaatcccttgaagacttgtacattaatgactgctcatctttacaaacactgccagttgacattggagatatgcaaagcctaagatatcttaatgcacgtgaaacaggtataaaagaattgcctggatctgttgaaatgctaggaaatcttagaaatttggaaatgggaggtcaatacttagagaccaaaaggaggttttctcaaacaagagtacgccccatagtgtccttgtcaaaatttatttcggttttacgccttccatattgtggtttctcggaggttgatgttcctagggatattgggagtttatccaacttacatcatttagatttgagcggcaacagtttcctctatctaccctttgatttttccaagttaccgttgttgagctacttgtttttgaatgattgtgagaaccttcaaacactcccgtcaatatcaaatttagagtaccttgaaattcttgaacttcggaattgcaaaaaactggtcaagattacagggtttgacaacctccctagtataaagatgatcgacatgattaattgtacttcactgcagaatccattcattgaaggcttctttagtgcccaggctctatcaatttcatctagaaaacattcagtgtatgaggttagtccctctctctgatctctctcgtatcacattaataattaatgatctaattgtgtcttatttgtctctgatgaagctgttattacaaatttatctcgaaagcaatgagattccagattggtgcagcaataaagtaacagctccatctatctgtttgactatgcccacagtacataataacaacttcttaggaatggttctctggtttgtttgccgcctttgcgatgtacatgagcataaacacttcattgttactgttgcccatataaagcgttcaggtttaccgtggatttggtattttgatagatctgacagtcacgaagtatcatgtgtatattacttctcttccgcaaatgatacaccttttgaaggcctgaacatcaaaggcggggaacagataacagtagaggatcgcactggcagagacgttgtaaagaagatagggatccatctgttatactcggaccaacatggtaatgttacatctttgccgggagttgtggatcattcttatactccctcctacccacaaagactttcagcagggcatatcaactcaaacaacgacaacatatccaatgaaatcctacaagtgaggtccgtatcagtggatatcaacaagcaaagttctgagaatgttttatgtaccatagaaaatctgttccatagaaataggcaatggacctggatctaccaaatgatgacaatgcctctaaaatgtctttttggaaaatgtttctccggagaataa。

ScRy1基因的cDNA序列如SEQ ID No.3所示：atgaatactcaaggagaatcatcttcttcttccaacttatgttatgatgtgtttctcagtttcagaggtgaagatactcgcaaaaacttcattgatcatctttatttccgattatgtcaagtcggagttaatactttcatagatgatgaggaattgagaaagggagacgtcatatcaaacaaacttgacaaagcaattgaacaatctagaattgccattgttgttttctcgaaaaattatgcttcgtctagttggtgtcttgatgaacttgtcaaaattctcgattgcaaagagaggttaaatcaggtagttttgcctattttctatgatgttgatccttctcaagtgcgaaggcaaactggatcctttggcgaagctttgtcaaaacacaaggaacgattagttggagctgaaagaatggaaaagtggaaagctgcacttactgaagcagcaaatttatctggatgggatttgagaaatattgctgatgggcatgaatcaaagtttattgagagtgttataaaacaagttctgcaagaggttaaccagacacctctagatgttgctcattacccaattggattagattctcctatcaaacatatagaggtgttactgcaaagtggatatgagcatgaagttcgcatgattggtatatgtggcattggtggaattggaaaaacaactttggcaaaagctatctataatcgaatatttcaacagtttgatggtagttgcttcctttctgacattagatcaaaaactgaagaatcgggtctaatcaagcttcaagagaaactactttatcaaatcctcaaaactaaggaatttgaagttgatagtgttgctgaaggtgttaatctcatcaaagcaagacttgggtctcagaaggttctaattgttcttgatgacgtggatcatagaagccaattagaatccttaacaagagaaagaagttggtttggcttaggtagtgtaataattattacaacccgagatgaacatttgctatatgggcttacaacaagtgagatataccaggccaaacttttaaatgacaaggaagcccaacaacttttttcttgtcatgcttttaactgtttttctccaccacaagaatatgttaaactggcacaagacataataaaatattcaggtgggctaccattagctcttgtgacattggggtcacatttgcaagggagatccgttgaagaatggagatacgagttcaaaaaactaaaagcaattcctcatggtgatattcaaaagattctcaagataagttttgatggacttgacgccaatactcagagtgttttccttgatatcgcatttgccttccatggttgtgatgaggatgaagttaccaaaacattaaatgcgtgtggtttttattctgaaagtgcaatttcaaccttagtacaaaggaacttggtccaaaggaataggcctcgtttggtgatgcatgatctagtgcaggaaatgggaagagaaatcgttcgcatggaatctcaagaccctggaaaacggagtagattgttcaaccctcaagaagtcattgatgttctacaaggaaataaaggttctaaaaaagtaaaaatattggtggtagaacgacaagcattaaagggtgtgaagctaagcaccaaagcatttcagaaaatgataaatcttaagattcttaaaattgacgacttacatattagtggagattttgagctattgtccaaggagctcagatggctgtcttggaaaagatgccctttaaaatgtataccgtcaaattttccatctgagaaacttgtatttctgaatatgaaagggagcaatatccaagaatttggtttgaatttgcagtattgtagaagtttgaaggagctgaatctctctgattgcaagcgcctcagaaaaactccaaacttcaacggttcacgaagtctcaagactttgtgtcttgagaattgctcaagtcttaaggagatccatccatcaataggaaatttggacagactaattcatcttcaactgaatggttgcgaaaagattacggatcttccgagcagcatatgccagctaaaatcccttgaagacttgtacattaatgactgctcatctttacaaacactgccagttgacattggagatatgcaaagcctaagatatcttaatgcacgtgaaacaggtataaaagaattgcctggatctgttgaaatgctaggaaatcttagaaatttggaaatgggaggtcaatacttagagaccaaaaggaggttttctcaaacaagagtacgccccatagtgtccttgtcaaaatttatttcggttttacgccttccatattgtggtttctcggaggttgatgttcctagggatattgggagtttatccaacttacatcatttagatttgagcggcaacagtttcctctatctaccctttgatttttccaagttaccgttgttgagctacttgtttttgaatgattgtgagaaccttcaaacactcccgtcaatatcaaatttagagtaccttgaaattcttgaacttcggaattgcaaaaaactggtcaagattacagggtttgacaacctccctagtataaagatgatcgacatgattaattgtacttcactgcagaatccattcattgaaggcttctttagtgcccaggctctatcaatttcatctagaaaacattcagtgtatgagctgttattacaaatttatctcgaaagcaatgagattccagattggtgcagcaataaagtaacagctccatctatctgtttgactatgcccacagtacataataacaacttcttaggaatggttctctggtttgtttgccgcctttgcgatgtacatgagcataaacacttcattgttactgttgcccatataaagcgttcaggtttaccgtggatttggtattttgatagatctgacagtcacgaagtatcatgtgtatattacttctcttccgcaaatgatacaccttttgaaggcctgaacatcaaaggcggggaacagataacagtagaggatcgcactggcagagacgttgtaaagaagatagggatccatctgttatactcggaccaacatggtaatgttacatctttgccgggagttgtggatcattcttatactccctcctacccacaaagactttcagcagggcatatcaactcaaacaacgacaacatatccaatgaaatcctacaagtgaggtccgtatcagtggatatcaacaagcaaagttctgagaatgttttatgtaccatagaaaatctgttccatagaaataggcaatggacctggatctaccaaatgatgacaatgcctctaaaatgtctttttggaaaatgtttctccggagaataa。

1、ScRy1基因的精细定位。

为克隆ScRy1基因，以马铃薯野生种S.chacoense为母本，与感病野生种S.berthaultii杂交，构建F1初定位群体。表型鉴定显示抗病株系与感病株系个数符合1:1的基因分离比，证明该抗性由显性单基因控制。

利用SNPs芯片技术分析抗感亲本及其后代单株的SNPs位点信息，有5个SNP标记与该基因紧密连锁，均位于基因左侧，从而将基因定位于马铃薯9号染色体末端2M范围内。以DM1-3为参考基因组，利用引物设计软件在定位区段内设计了320多对随机引物和60余对SSR引物，利用初定位群体进行鉴定，又筛选到13对标记与ScRy1基因紧密连锁。利用左翼标记M1、M8和右翼标记M2、M11筛选精细定位群体，从3800余份单株中筛选到17个重组子，结合重组子表型将目标基因精细定位于M5和M8之间约113.16kb的范围。

进一步地，利用抗病亲本S.chacoense构建10倍基因组覆盖率的BAC文库，利用左翼标记M7、M8及右翼标记M5、M10、M11，从BAC文库中筛选到13个阳性BAC克隆，挑选其中3个能够覆盖精细定位区段的BAC克隆71-24H、74-24B和64E14进行三代测序，结果显示精细定位区段的物理距离169.57kb，比参考基因组DM1-3大了56kb，而目的基因正在参考基因组的gap中。进一步利用BAC序列开发新标记，得到9对紧密连锁标记：M71-20、M71-21-1、M71-28-3、M64-16、M64-17、MG64-15、MG64-17、MG64-17-1和MG64-17-2，结合重组子表现将目的基因精细定位于M71-28-3与M64-17之间约26.1kb范围内。进行基因功能预测与注释发现，有4个可能的基因，1号为编码氧化还原酶基因，2号和3号为TIR-NBS-LRR类抗病基因，4号没有预测到典型结构域的基因。

2、ScRy1基因的克隆及功能鉴定：

本实施例设计了加PBI121载体接头的引物3F-AGAACACGGGGGACTCTAGAATGAATACTCAAGGAGAATCATCTTC，3R-GATCGGGGAAATTCGAGCTCTTATTCTCCGGAGAAACATTTTC。以抗病亲本S.chacoense的gDNA为模板，采用高保真Phanta Super-Fidelity DNA Polymerase酶扩增基因全长序列，将回收产物同源重组到超量表达载体PBI121载体上(载体构建步骤参考SE无缝克隆和组装试剂盒说明书)，转化大肠杆菌DH5α并筛选阳性克隆。将阳性克隆的质粒电转到农杆菌GV3101中，通过农杆菌介导的遗传转化体系将候选基因导入二倍体感病材料AC142和感病烟草中，进行功能验证。转基因植株接种PVY^O、PVY^NO、PVY^N三种不同菌株的结果表明，3号基因为目的基因ScRy1。

3、遗传转化的主要步骤以及培养基如下：

遗传转化受体为感病马铃薯AC142和感病烟草。将含有遗传转化载体的农杆菌接种于20-25mL加50mg/L卡那霉素和50mg/L利福平的YEB培养基中，于28℃、240r/min摇床上培养20-24h，取1mL培养物至50mL加50mg/L卡那霉素YEB培养基中于28℃、240r/min摇床上培养OD600至0.5左右。4800r/min离心6min，其沉淀用20mL MS液体培养基(蔗糖浓度3％)重新悬浮。

将组培生长12w-14w、直径约为0.5cm的试管薯切成1-2mm的薄片或2w-3w烟草叶片切成0.5cm²，在上述农杆菌菌液中浸泡约5-10min。转移至无菌滤纸以吸干表面菌液，转入共培养培养基(MS基本培养基+3％蔗糖(w/v)+0.2mg/L IAA+0.2mg/L GA3+0.5mg/L 6-BA+2mg/L ZT)中，置于24-26℃暗培箱中暗培养2d。转移到附加75mg/L卡那霉素和400mg/L头孢霉素的芽分化培养基上，置于光照强度2000lx、光周期16h光照/8h黑暗、温度23±1℃的条件下培养。

一周后将薯片侧芽剪掉以避免营养消耗而不利于抗性芽分化。21-28d后，从试管薯薄片中央或烟草叶片上长出抗性芽，当抗性芽长达1cm-2cm时，将其切下转入附加50mg/L卡那霉素和200mg/L头孢霉素的MS培养基上生根筛选培养，进而获得完整植株。

获得的转基因株系用PBI-F+R引物(PBI-F：GACGTAAGGGATGACGCACA；PBI-R：TGTAAAACGACGGCCAGTGA)进行检测，马铃薯和烟草各获得了3株以上的转基因植株(图1)。对转基因株系分别接种PVYO-FL、PVYN:O和PVYNTN，一个月后观察表型并用ELISA检测样品在405nm波长下的吸光值。用样品吸光值减去阴性对照的吸光值所得差值即为测定样品的吸光值，若吸光值小于0.1该样品为抗病，反之则为感病。

经ELISA检测，3号基因ScRy1的转基因马铃薯和烟草均表现为抗病(图2)，而其他候选基因(1、2、4号基因)的转基因植株均表现为感病。

实施例2

ScRy1基因连锁标记在马铃薯育种中的应用。

在ScRy1基因上设计了3对标记、基因左翼设计了5对和右翼设计了1对连锁标记(见表1)，对具有野生种S.chacoense血缘的其他12个种进行PCR扩增，若扩增出相应大小的基因片段，则代表待测植株存在ScRy1基因，即存在PVY极端抗性。利用基因标记G64-17-2检测其它资源材料扩增结果见图3。

结果表明，8个具有ScRy1基因的种均具有抗性，其他4个不具有ScRy1基因的种均为感病。

表1与ScRy1基因紧密连锁的标记引物信息

本发明提供的基因标记仅凭大小即可判断；标记的检测可以只检测其中任意一个，优先选择基因标记6-8号引物对，或者左侧和右侧联合使用，增加准确性；本发明公布的标记为目标基因标记，或与目标基因紧密连锁，较以往发表的标记，为遗传距离最近的标记。

检测PVY极端抗性的方法如下，其包括：提取待测样本的马铃薯基因组DNA，利用表1中引物对1～9对马铃薯基因组DNA进行扩增，扩增产物在聚丙烯酰胺凝胶电泳后，若所述马铃薯基因组DNA能扩增出与某所用引物对对应连锁标记片段相同大小的标记，则说明所述待测样本存在PVY极端抗性基因ScRy1。

具体地，利用所述引物进行扩增时的反应程序为：

利用引物对进行扩增时的反应体系为：DNA模板(50ng/μL)1μL，上下游引物(10μM)各1μL，2×Vazyme Taq Master Mix 12.5μL,ddH₂O 9.5μL。

以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

序列表

<110> 华中农业大学

<120> ScRy1基因在抗马铃薯Y病毒植物育种中的应用

<160> 21

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 2

<211> 1128

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 2

Met Asn Thr Gln Gly Glu Ser Ser Ser Ser Ser Asn Leu Cys Tyr Asp

1 5 10 15

Val Phe Leu Ser Phe Arg Gly Glu Asp Thr Arg Lys Asn Phe Ile Asp

20 25 30

His Leu Tyr Phe Arg Leu Cys Gln Val Gly Val Asn Thr Phe Ile Asp

35 40 45

Asp Glu Glu Leu Arg Lys Gly Asp Val Ile Ser Asn Lys Leu Asp Lys

50 55 60

Ala Ile Glu Gln Ser Arg Ile Ala Ile Val Val Phe Ser Lys Asn Tyr

65 70 75 80

Ala Ser Ser Ser Trp Cys Leu Asp Glu Leu Val Lys Ile Leu Asp Cys

85 90 95

Lys Glu Arg Leu Asn Gln Val Val Leu Pro Ile Phe Tyr Asp Val Asp

100 105 110

Pro Ser Gln Val Arg Arg Gln Thr Gly Ser Phe Gly Glu Ala Leu Ser

115 120 125

Lys His Lys Glu Arg Leu Val Gly Ala Glu Arg Met Glu Lys Trp Lys

130 135 140

Ala Ala Leu Thr Glu Ala Ala Asn Leu Ser Gly Trp Asp Leu Arg Asn

145 150 155 160

Ile Ala Asp Gly His Glu Ser Lys Phe Ile Glu Ser Val Ile Lys Gln

165 170 175

Val Leu Gln Glu Val Asn Gln Thr Pro Leu Asp Val Ala His Tyr Pro

180 185 190

Ile Gly Leu Asp Ser Pro Ile Lys His Ile Glu Val Leu Leu Gln Ser

195 200 205

Gly Tyr Glu His Glu Val Arg Met Ile Gly Ile Cys Gly Ile Gly Gly

210 215 220

Ile Gly Lys Thr Thr Leu Ala Lys Ala Ile Tyr Asn Arg Ile Phe Gln

225 230 235 240

Gln Phe Asp Gly Ser Cys Phe Leu Ser Asp Ile Arg Ser Lys Thr Glu

245 250 255

Glu Ser Gly Leu Ile Lys Leu Gln Glu Lys Leu Leu Tyr Gln Ile Leu

260 265 270

Lys Thr Lys Glu Phe Glu Val Asp Ser Val Ala Glu Gly Val Asn Leu

275 280 285

Ile Lys Ala Arg Leu Gly Ser Gln Lys Val Leu Ile Val Leu Asp Asp

290 295 300

Val Asp His Arg Ser Gln Leu Glu Ser Leu Thr Arg Glu Arg Ser Trp

305 310 315 320

Phe Gly Leu Gly Ser Val Ile Ile Ile Thr Thr Arg Asp Glu His Leu

325 330 335

Leu Tyr Gly Leu Thr Thr Ser Glu Ile Tyr Gln Ala Lys Leu Leu Asn

340 345 350

Asp Lys Glu Ala Gln Gln Leu Phe Ser Cys His Ala Phe Asn Cys Phe

355 360 365

Ser Pro Pro Gln Glu Tyr Val Lys Leu Ala Gln Asp Ile Ile Lys Tyr

370 375 380

Ser Gly Gly Leu Pro Leu Ala Leu Val Thr Leu Gly Ser His Leu Gln

385 390 395 400

Gly Arg Ser Val Glu Glu Trp Arg Tyr Glu Phe Lys Lys Leu Lys Ala

405 410 415

Ile Pro His Gly Asp Ile Gln Lys Ile Leu Lys Ile Ser Phe Asp Gly

420 425 430

Leu Asp Ala Asn Thr Gln Ser Val Phe Leu Asp Ile Ala Phe Ala Phe

435 440 445

His Gly Cys Asp Glu Asp Glu Val Thr Lys Thr Leu Asn Ala Cys Gly

450 455 460

Phe Tyr Ser Glu Ser Ala Ile Ser Thr Leu Val Gln Arg Asn Leu Val

465 470 475 480

Gln Arg Asn Arg Pro Arg Leu Val Met His Asp Leu Val Gln Glu Met

485 490 495

Gly Arg Glu Ile Val Arg Met Glu Ser Gln Asp Pro Gly Lys Arg Ser

500 505 510

Arg Leu Phe Asn Pro Gln Glu Val Ile Asp Val Leu Gln Gly Asn Lys

515 520 525

Gly Ser Lys Lys Val Lys Ile Leu Val Val Glu Arg Gln Ala Leu Lys

530 535 540

Gly Val Lys Leu Ser Thr Lys Ala Phe Gln Lys Met Ile Asn Leu Lys

545 550 555 560

Ile Leu Lys Ile Asp Asp Leu His Ile Ser Gly Asp Phe Glu Leu Leu

565 570 575

Ser Lys Glu Leu Arg Trp Leu Ser Trp Lys Arg Cys Pro Leu Lys Cys

580 585 590

Ile Pro Ser Asn Phe Pro Ser Glu Lys Leu Val Phe Leu Asn Met Lys

595 600 605

Gly Ser Asn Ile Gln Glu Phe Gly Leu Asn Leu Gln Tyr Cys Arg Ser

610 615 620

Leu Lys Glu Leu Asn Leu Ser Asp Cys Lys Arg Leu Arg Lys Thr Pro

625 630 635 640

Asn Phe Asn Gly Ser Arg Ser Leu Lys Thr Leu Cys Leu Glu Asn Cys

645 650 655

Ser Ser Leu Lys Glu Ile His Pro Ser Ile Gly Asn Leu Asp Arg Leu

660 665 670

Ile His Leu Gln Leu Asn Gly Cys Glu Lys Ile Thr Asp Leu Pro Ser

675 680 685

Ser Ile Cys Gln Leu Lys Ser Leu Glu Asp Leu Tyr Ile Asn Asp Cys

690 695 700

Ser Ser Leu Gln Thr Leu Pro Val Asp Ile Gly Asp Met Gln Ser Leu

705 710 715 720

Arg Tyr Leu Asn Ala Arg Glu Thr Gly Ile Lys Glu Leu Pro Gly Ser

725 730 735

Val Glu Met Leu Gly Asn Leu Arg Asn Leu Glu Met Gly Gly Gln Tyr

740 745 750

Leu Glu Thr Lys Arg Arg Phe Ser Gln Thr Arg Val Arg Pro Ile Val

755 760 765

Ser Leu Ser Lys Phe Ile Ser Val Leu Arg Leu Pro Tyr Cys Gly Phe

770 775 780

Ser Glu Val Asp Val Pro Arg Asp Ile Gly Ser Leu Ser Asn Leu His

785 790 795 800

His Leu Asp Leu Ser Gly Asn Ser Phe Leu Tyr Leu Pro Phe Asp Phe

805 810 815

Ser Lys Leu Pro Leu Leu Ser Tyr Leu Phe Leu Asn Asp Cys Glu Asn

820 825 830

Leu Gln Thr Leu Pro Ser Ile Ser Asn Leu Glu Tyr Leu Glu Ile Leu

835 840 845

Glu Leu Arg Asn Cys Lys Lys Leu Val Lys Ile Thr Gly Phe Asp Asn

850 855 860

Leu Pro Ser Ile Lys Met Ile Asp Met Ile Asn Cys Thr Ser Leu Gln

865 870 875 880

Asn Pro Phe Ile Glu Gly Phe Phe Ser Ala Gln Ala Leu Ser Ile Ser

885 890 895

Ser Arg Lys His Ser Val Tyr Glu Leu Leu Leu Gln Ile Tyr Leu Glu

900 905 910

Ser Asn Glu Ile Pro Asp Trp Cys Ser Asn Lys Val Thr Ala Pro Ser

915 920 925

Ile Cys Leu Thr Met Pro Thr Val His Asn Asn Asn Phe Leu Gly Met

930 935 940

Val Leu Trp Phe Val Cys Arg Leu Cys Asp Val His Glu His Lys His

945 950 955 960

Phe Ile Val Thr Val Ala His Ile Lys Arg Ser Gly Leu Pro Trp Ile

965 970 975

Trp Tyr Phe Asp Arg Ser Asp Ser His Glu Val Ser Cys Val Tyr Tyr

980 985 990

Phe Ser Ser Ala Asn Asp Thr Pro Phe Glu Gly Leu Asn Ile Lys Gly

995 1000 1005

Gly Glu Gln Ile Thr Val Glu Asp Arg Thr Gly Arg Asp Val Val Lys

1010 1015 1020

Lys Ile Gly Ile His Leu Leu Tyr Ser Asp Gln His Gly Asn Val Thr

1025 1030 1035 1040

Ser Leu Pro Gly Val Val Asp His Ser Tyr Thr Pro Ser Tyr Pro Gln

1045 1050 1055

Arg Leu Ser Ala Gly His Ile Asn Ser Asn Asn Asp Asn Ile Ser Asn

1060 1065 1070

Glu Ile Leu Gln Val Arg Ser Val Ser Val Asp Ile Asn Lys Gln Ser

1075 1080 1085

Ser Glu Asn Val Leu Cys Thr Ile Glu Asn Leu Phe His Arg Asn Arg

1090 1095 1100

Gln Trp Thr Trp Ile Tyr Gln Met Met Thr Met Pro Leu Lys Cys Leu

1105 1110 1115 1120

Phe Gly Lys Cys Phe Ser Gly Glu

1125

<210> 2

<211> 4167

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 2

atgaatactc aaggagaatc atcttcttct tccaacttat gttatgatgt gtttctcagt 60

ttcagaggtg aagatactcg caaaaacttc attgatcatc tttatttccg attatgtcaa 120

gtcggagtta atactttcat agatgatgag gaattgagaa agggagacgt catatcaaac 180

aaacttgaca aagcaattga acaatctaga attgccattg ttgttttctc gaaaaattat 240

gcttcgtcta gttggtgtct tgatgaactt gtcaaaattc tcgattgcaa agagaggtta 300

aatcaggtag ttttgcctat tttctatgat gttgatcctt ctcaagtgcg aaggcaaact 360

ggatcctttg gcgaagcttt gtcaaaacac aaggaacgat tagttggagc tgaaagaatg 420

gaaaagtgga aagctgcact tactgaagca gcaaatttat ctggatggga tttgagaaat 480

attgctgatg ggtaagactt cttaattcaa ctattaaatt ttgaatttaa gcgcttgcct 540

aagcttataa gttggttaat tatggaacat tgtaaagttt tttaatattt tttaaatttc 600

gtatcaaatc aaactgtgtc gattgggaca aggaataatc tccattctat aaactctgtt 660

atcttttggc tattggcttt tattttgttc atcaaatatt ttaaaatact taagtattta 720

ttgttgcaaa aactgtaggc atgaatcaaa gtttattgag agtgttataa aacaagttct 780

gcaagaggtt aaccagacac ctctagatgt tgctcattac ccaattggat tagattctcc 840

tatcaaacat atagaggtgt tactgcaaag tggatatgag catgaagttc gcatgattgg 900

tatatgtggc attggtggaa ttggaaaaac aactttggca aaagctatct ataatcgaat 960

atttcaacag tttgatggta gttgcttcct ttctgacatt agatcaaaaa ctgaagaatc 1020

gggtctaatc aagcttcaag agaaactact ttatcaaatc ctcaaaacta aggaatttga 1080

agttgatagt gttgctgaag gtgttaatct catcaaagca agacttgggt ctcagaaggt 1140

tctaattgtt cttgatgacg tggatcatag aagccaatta gaatccttaa caagagaaag 1200

aagttggttt ggcttaggta gtgtaataat tattacaacc cgagatgaac atttgctata 1260

tgggcttaca acaagtgaga tataccaggc caaactttta aatgacaagg aagcccaaca 1320

acttttttct tgtcatgctt ttaactgttt ttctccacca caagaatatg ttaaactggc 1380

acaagacata ataaaatatt caggtgggct accattagct cttgtgacat tggggtcaca 1440

tttgcaaggg agatccgttg aagaatggag atacgagttc aaaaaactaa aagcaattcc 1500

tcatggtgat attcaaaaga ttctcaagat aagttttgat ggacttgacg ccaatactca 1560

gagtgttttc cttgatatcg catttgcctt ccatggttgt gatgaggatg aagttaccaa 1620

aacattaaat gcgtgtggtt tttattctga aagtgcaatt tcaaccttag tacaaaggaa 1680

cttggtccaa aggaataggc ctcgtttggt gatgcatgat ctagtgcagg aaatgggaag 1740

agaaatcgtt cgcatggaat ctcaagaccc tggaaaacgg agtagattgt tcaaccctca 1800

agaagtcatt gatgttctac aaggaaataa agtcagtaaa tttcattatc tttatcttgg 1860

ttatacttct tcttcctttt tttcatttat attgatttac atttgcttat aatttatgca 1920

tttgtgctta aatcttctcc ggctagtaag tatctctaga agtttgaacc attctgtact 1980

tgaaatgaac atttactgaa gtctaaacac tcaaactatc aaagacaaaa ttatcaaata 2040

aatatccttt agttggatat aatgtgtaga tttattttta ttggtagata atttattctc 2100

tttgtttgac ctttaatttg tataaagcat taatttctct ttcttaattt gtcatactta 2160

aacatggtct tatagtaatt ttatttttac taaatttcag ggttctaaaa aagtaaaaat 2220

attggtggta gaacgacaag cattaaaggg tgtgaagcta agcaccaaag catttcagaa 2280

aatgataaat cttaagattc ttaaaattga cgacttacat attagtggag attttgagct 2340

attgtccaag gagctcagat ggctgtcttg gaaaagatgc cctttaaaat gtataccgtc 2400

aaattttcca tctgagaaac ttgtatttct gaatatgaaa gggagcaata tccaagaatt 2460

tggtttgaat ttgcaggtcc gttactcaat tctgcaattt tatgtgtaat atttaagaga 2520

aagaaaatct taattgaaac aatattttgt ttacttctta gtattgtaga agtttgaagg 2580

agctgaatct ctctgattgc aagcgcctca gaaaaactcc aaacttcaac ggttcacgaa 2640

gtctcaagac tttgtgtctt gagaattgct caagtcttaa ggagatccat ccatcaatag 2700

gaaatttgga cagactaatt catcttcaac tgaatggttg cgaaaagatt acggatcttc 2760

cgagcagcat atgccagcta aaatcccttg aagacttgta cattaatgac tgctcatctt 2820

tacaaacact gccagttgac attggagata tgcaaagcct aagatatctt aatgcacgtg 2880

aaacaggtat aaaagaattg cctggatctg ttgaaatgct aggaaatctt agaaatttgg 2940

aaatgggagg tcaatactta gagaccaaaa ggaggttttc tcaaacaaga gtacgcccca 3000

tagtgtcctt gtcaaaattt atttcggttt tacgccttcc atattgtggt ttctcggagg 3060

ttgatgttcc tagggatatt gggagtttat ccaacttaca tcatttagat ttgagcggca 3120

acagtttcct ctatctaccc tttgattttt ccaagttacc gttgttgagc tacttgtttt 3180

tgaatgattg tgagaacctt caaacactcc cgtcaatatc aaatttagag taccttgaaa 3240

ttcttgaact tcggaattgc aaaaaactgg tcaagattac agggtttgac aacctcccta 3300

gtataaagat gatcgacatg attaattgta cttcactgca gaatccattc attgaaggct 3360

tctttagtgc ccaggctcta tcaatttcat ctagaaaaca ttcagtgtat gaggttagtc 3420

cctctctctg atctctctcg tatcacatta ataattaatg atctaattgt gtcttatttg 3480

tctctgatga agctgttatt acaaatttat ctcgaaagca atgagattcc agattggtgc 3540

agcaataaag taacagctcc atctatctgt ttgactatgc ccacagtaca taataacaac 3600

ttcttaggaa tggttctctg gtttgtttgc cgcctttgcg atgtacatga gcataaacac 3660

ttcattgtta ctgttgccca tataaagcgt tcaggtttac cgtggatttg gtattttgat 3720

agatctgaca gtcacgaagt atcatgtgta tattacttct cttccgcaaa tgatacacct 3780

tttgaaggcc tgaacatcaa aggcggggaa cagataacag tagaggatcg cactggcaga 3840

gacgttgtaa agaagatagg gatccatctg ttatactcgg accaacatgg taatgttaca 3900

tctttgccgg gagttgtgga tcattcttat actccctcct acccacaaag actttcagca 3960

gggcatatca actcaaacaa cgacaacata tccaatgaaa tcctacaagt gaggtccgta 4020

tcagtggata tcaacaagca aagttctgag aatgttttat gtaccataga aaatctgttc 4080

catagaaata ggcaatggac ctggatctac caaatgatga caatgcctct aaaatgtctt 4140

tttggaaaat gtttctccgg agaataa 4167

<210> 3

<211> 3387

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 3

atgaatactc aaggagaatc atcttcttct tccaacttat gttatgatgt gtttctcagt 60

ttcagaggtg aagatactcg caaaaacttc attgatcatc tttatttccg attatgtcaa 120

gtcggagtta atactttcat agatgatgag gaattgagaa agggagacgt catatcaaac 180

aaacttgaca aagcaattga acaatctaga attgccattg ttgttttctc gaaaaattat 240

gcttcgtcta gttggtgtct tgatgaactt gtcaaaattc tcgattgcaa agagaggtta 300

aatcaggtag ttttgcctat tttctatgat gttgatcctt ctcaagtgcg aaggcaaact 360

ggatcctttg gcgaagcttt gtcaaaacac aaggaacgat tagttggagc tgaaagaatg 420

gaaaagtgga aagctgcact tactgaagca gcaaatttat ctggatggga tttgagaaat 480

attgctgatg ggcatgaatc aaagtttatt gagagtgtta taaaacaagt tctgcaagag 540

gttaaccaga cacctctaga tgttgctcat tacccaattg gattagattc tcctatcaaa 600

catatagagg tgttactgca aagtggatat gagcatgaag ttcgcatgat tggtatatgt 660

ggcattggtg gaattggaaa aacaactttg gcaaaagcta tctataatcg aatatttcaa 720

cagtttgatg gtagttgctt cctttctgac attagatcaa aaactgaaga atcgggtcta 780

atcaagcttc aagagaaact actttatcaa atcctcaaaa ctaaggaatt tgaagttgat 840

agtgttgctg aaggtgttaa tctcatcaaa gcaagacttg ggtctcagaa ggttctaatt 900

gttcttgatg acgtggatca tagaagccaa ttagaatcct taacaagaga aagaagttgg 960

tttggcttag gtagtgtaat aattattaca acccgagatg aacatttgct atatgggctt 1020

acaacaagtg agatatacca ggccaaactt ttaaatgaca aggaagccca acaacttttt 1080

tcttgtcatg cttttaactg tttttctcca ccacaagaat atgttaaact ggcacaagac 1140

ataataaaat attcaggtgg gctaccatta gctcttgtga cattggggtc acatttgcaa 1200

gggagatccg ttgaagaatg gagatacgag ttcaaaaaac taaaagcaat tcctcatggt 1260

gatattcaaa agattctcaa gataagtttt gatggacttg acgccaatac tcagagtgtt 1320

ttccttgata tcgcatttgc cttccatggt tgtgatgagg atgaagttac caaaacatta 1380

aatgcgtgtg gtttttattc tgaaagtgca atttcaacct tagtacaaag gaacttggtc 1440

caaaggaata ggcctcgttt ggtgatgcat gatctagtgc aggaaatggg aagagaaatc 1500

gttcgcatgg aatctcaaga ccctggaaaa cggagtagat tgttcaaccc tcaagaagtc 1560

attgatgttc tacaaggaaa taaaggttct aaaaaagtaa aaatattggt ggtagaacga 1620

caagcattaa agggtgtgaa gctaagcacc aaagcatttc agaaaatgat aaatcttaag 1680

attcttaaaa ttgacgactt acatattagt ggagattttg agctattgtc caaggagctc 1740

agatggctgt cttggaaaag atgcccttta aaatgtatac cgtcaaattt tccatctgag 1800

aaacttgtat ttctgaatat gaaagggagc aatatccaag aatttggttt gaatttgcag 1860

tattgtagaa gtttgaagga gctgaatctc tctgattgca agcgcctcag aaaaactcca 1920

aacttcaacg gttcacgaag tctcaagact ttgtgtcttg agaattgctc aagtcttaag 1980

gagatccatc catcaatagg aaatttggac agactaattc atcttcaact gaatggttgc 2040

gaaaagatta cggatcttcc gagcagcata tgccagctaa aatcccttga agacttgtac 2100

attaatgact gctcatcttt acaaacactg ccagttgaca ttggagatat gcaaagccta 2160

agatatctta atgcacgtga aacaggtata aaagaattgc ctggatctgt tgaaatgcta 2220

ggaaatctta gaaatttgga aatgggaggt caatacttag agaccaaaag gaggttttct 2280

caaacaagag tacgccccat agtgtccttg tcaaaattta tttcggtttt acgccttcca 2340

tattgtggtt tctcggaggt tgatgttcct agggatattg ggagtttatc caacttacat 2400

catttagatt tgagcggcaa cagtttcctc tatctaccct ttgatttttc caagttaccg 2460

ttgttgagct acttgttttt gaatgattgt gagaaccttc aaacactccc gtcaatatca 2520

aatttagagt accttgaaat tcttgaactt cggaattgca aaaaactggt caagattaca 2580

gggtttgaca acctccctag tataaagatg atcgacatga ttaattgtac ttcactgcag 2640

aatccattca ttgaaggctt ctttagtgcc caggctctat caatttcatc tagaaaacat 2700

tcagtgtatg agctgttatt acaaatttat ctcgaaagca atgagattcc agattggtgc 2760

agcaataaag taacagctcc atctatctgt ttgactatgc ccacagtaca taataacaac 2820

ttcttaggaa tggttctctg gtttgtttgc cgcctttgcg atgtacatga gcataaacac 2880

ttcattgtta ctgttgccca tataaagcgt tcaggtttac cgtggatttg gtattttgat 2940

agatctgaca gtcacgaagt atcatgtgta tattacttct cttccgcaaa tgatacacct 3000

tttgaaggcc tgaacatcaa aggcggggaa cagataacag tagaggatcg cactggcaga 3060

gacgttgtaa agaagatagg gatccatctg ttatactcgg accaacatgg taatgttaca 3120

tctttgccgg gagttgtgga tcattcttat actccctcct acccacaaag actttcagca 3180

gggcatatca actcaaacaa cgacaacata tccaatgaaa tcctacaagt gaggtccgta 3240

tcagtggata tcaacaagca aagttctgag aatgttttat gtaccataga aaatctgttc 3300

catagaaata ggcaatggac ctggatctac caaatgatga caatgcctct aaaatgtctt 3360

tttggaaaat gtttctccgg agaataa 3387

<210> 4

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 4

gtaaccattg tctaagccga aag 23

<210> 5

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 5

taagctacca gaaccaaacc aac 23

<210> 6

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 6

ccctcggttt gtattattcc ttc 23

<210> 7

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 7

tccgccatgt gtgtatttgt gac 23

<210> 8

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 8

ggctgctcga tcacaatcac aac 23

<210> 9

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 9

cacgaccaaa ctgaaatccc cac 23

<210> 10

<211> 25

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 10

atggcaaagt taagaggtat atcag 25

<210> 11

<211> 24

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 11

ttatgtggca cactctgtta ctcc 24

<210> 12

<211> 24

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 12

aaacacacct tgaaattagt aagc 24

<210> 13

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 13

gaaggtttat ggtggtttcc gcg 23

<210> 14

<211> 26

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 14

taagtaagaa acctacttat tctccg 26

<210> 15

<211> 24

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 15

gtttgacaac ctccctagta taaa 24

<210> 16

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 16

acaacgtctc tgccagtgcg atc 23

<210> 17

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 17

accgttgttg agctacttgt t 21

<210> 18

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 18

ttattccttg tcccaatcga cac 23

<210> 19

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 19

tgggataaac atgcaacgca c 21

<210> 20

<211> 25

<212> DNA

<213> 人工序列

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<213> 人工序列

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Claims

1.ScRy1基因在抗马铃薯Y病毒植物育种中的应用，其特征在于，所述ScRy1基因编码的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示，所述植物为马铃薯。

2.根据权利要求1所述的ScRy1基因在抗马铃薯Y病毒植物育种中的应用，其特征在于，所述ScRy1基因的核酸序列如SEQ ID No.2或3所示。

3.根据权利要求1所述的ScRy1基因在抗马铃薯Y病毒植物育种中的应用，其特征在于，所述育种包括：将含有所述ScRy1基因的重组表达载体导入目标植物的基因组中，筛选并培育抗马铃薯Y病毒的品种。

4.根据权利要求3所述的ScRy1基因在抗马铃薯Y病毒植物育种中的应用，其特征在于，所述筛选包括：对目标植物中与ScRy1基因紧密连锁的分子标记进行检测。

5.根据权利要求4所述的ScRy1基因在抗马铃薯Y病毒植物育种中的应用，其特征在于，所述检测为PCR检测，检测所述分子标记的引物对选自引物对1~9中的至少一对；

所述引物对1~9的核酸序列依次如SEQ ID No.4~21所示。

6.一种抗马铃薯Y病毒植物的鉴定方法，其特征在于，其包括对目标植物中与权利要求1或2所述的ScRy1基因紧密连锁的分子标记进行检测，所述植物为马铃薯。

7.根据权利要求6所述的抗马铃薯Y病毒植物的鉴定方法，其特征在于，所述检测为PCR检测，检测所述分子标记的引物对选自引物对1~9中的至少一对，引物对1~9的核酸序列依次如SEQ ID No.4~21所示。

8.一种分离的核酸，其特征在于，其编码的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。

9.根据权利要求8所述的分离的核酸，其特征在于，所述核酸的序列如SEQ ID No.2或3所示。

10.一种重组载体，其特征在于，其包括如权利要求8或9所述的分离的核酸。

11.一种试剂盒，其特征在于，其包括：引物对1~9中的至少一对，所述引物对1~9的核酸序列依次如SEQ ID No.4~21所示。

12.根据权利要求11所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括：如权利要求8或9所述的分离的核酸或含有所述分离的核酸的重组载体。