CN112703188A - 用钙蛋白酶抑制剂治疗肝纤维化的方法 - Google Patents

用钙蛋白酶抑制剂治疗肝纤维化的方法 Download PDF

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普拉巴·易卜拉欣
玛丽亚·富恩特斯
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Abstract

本文公开了通过将钙蛋白酶抑制剂施用给有需要的受试者来治疗肝纤维化的方法。

Description

用钙蛋白酶抑制剂治疗肝纤维化的方法
技术领域
本申请涉及药物化学，生物化学和医学领域。更具体地，本发明涉及钙蛋白酶抑制剂及其作为治疗剂的用途。
背景技术
纤维增生性疾病是导致实质发病率和死亡率的器官损伤的主要诱因。肝纤维化是急性或慢性肝损伤的结果。它可能是对代谢、病毒或毒性刺激的反应。钙蛋白酶抑制可能对多种肝纤维化疾病有益。
原发性硬化性胆管炎(PSC)是一种罕见的慢性进行性疾病，其特征是炎症以及随后的肝内和肝外胆管破坏。随着时间的流逝，患者会发展为肝纤维化和肝硬化，最终可能导致肝衰竭。PSC还与大肠癌、肝胆癌和胆囊癌的发病率升高相关(Kumar et al.，2016，ClinMed Insights Gastroenterol.9：25-29)。流行病学研究表明，在美国，可能有多达50,000个个体患有PSC(Ali et al.，2015.Intractable Rare Dis Res.4(1)：1-6)，尽管由于难以正确诊断无症状患者，普遍认为患病率被低估(Eksteen，2014.Br Med Bull.110(1)：89-98)。疾病管理主要需要对症治疗(例如，瘙痒和疲劳)，但是没有FDA批准的治疗PSC的药物，也没有任何疗法能够持续减缓疾病的进展。有效延缓疾病进展的抗纤维化剂对患有PSC的个体将具有巨大的益处。
原发性胆汁性胆管炎(PBC；以前被称为原发性胆汁性肝硬化)是一种自身免疫性疾病，其特征是小叶间胆管逐渐被破坏。虽然病因不明，但胆管降解会导致有毒胆汁酸积聚，最终导致纤维化、肝硬化，最终导致肝衰竭。PBC比例失调地折磨着女性(性别比例约为10∶1)，诊断通常在40至60岁之间，此时患者无症状(Selmi et al.2004.J ClinGastroenterol.38：264-271)。疾病的进展变化很大且难以预测，不过早期疾病不经治疗可能在4至6年内发展为肝硬化(Washington 2007，Modern Pathol.20：S15-S30)。流行病学因地理位置而异，经常被引用的Mayo研究估计美国患病率为40例PBC患者/100K，相当于美国患病率为120-130K(Kim et al.2000.Gastroenterol.119：1631-1636)。熊去氧胆酸(UDCA)是一种通用药物，是PBC的标准一线治疗药物，可导致约50％的患者稳定病情。由InterceptPharmaceuticals开发的奥贝胆酸(Obeticholic acid，OCA)——胆汁酸FXR激动剂——于2016年在美国获批，用于对UDCA反应不足或不耐受的患者。虽然OCA有效改善了其中许多患者的肝脏组织学，但是其使用会增加LDL水平和瘙痒(Neuschwander-Tetri等人2015，Lancet.385：956-65)，为未来产品的开发留下了机会。
肝硬化是肝纤维化的晚期，其特征是弥散性结节再生、肝结构塌陷和实质性肝血管系统结构畸变。功能结构的丧失直接导致门静脉高压的增加，门静脉高压本身是多种并发症的主要驱动因素，包括腹水、肝性脑病和静脉曲张形成(Tsochatzis et al.2014，Lancet.383：1749-1761；Goldberg and Chopra，2017，UpToDate Cirrhosis in adults：Overview of complications，general management，and prognosis)。一旦患者出现重大并发症，则被视为代偿失调，此后，许多患者唯一的治疗方法是肝移植。除NASH、PBC和PSC外，还有许多肝硬化原因，包括酒精性肝病、α-1抗胰蛋白酶缺乏症、自身免疫性肝炎、腹腔疾病、慢性病毒性肝炎、血色素沉着症、特发性门静脉纤维化和Wilson病(Goldberg andChopra，2016，UpToDate Cirrhosis in adults：Etiologies，clinical manifestations，and diagnosis)。目前尚缺乏针对肝硬化患者的有效治疗方法，但是存在延缓病情发展和逆转肝变性/纤维化的机会。在已经移除了肝脏疾病的驱动因素以及在驱动因素保持活跃的两种患者中均可采用这种方法。第一组包括表现出持续病毒学应答的病毒患者(HCV、HBV)或保持戒酒的酒精性肝炎患者。从理论上讲，由于没有持续的损伤，这些患者在治疗期后表现出最佳的肝纤维化。对于具有持续活跃驱动肝变性的病因的患者，他们将受益于可延缓疾病进展、并发症发展、向代偿失调过渡和末期肝衰竭的治疗。
据估计，在美国和欧洲，多达三分之一的人口患有非酒精性脂肪肝疾病(NAFLD)，其特征是脂肪变性或肝脏中脂肪过多积聚(Wree et al.2013.Nat.Rev.Gastroenterol.Hepatol.10：627-636；Blachier et al.2012.J.Hepatol.58：593-608)。由于不完全了解的原因，这些人中有许多后来发展为肝炎或脂肪性肝炎。这种病况称为非酒精性脂肪性肝炎，即NASH，约占NAFLD患者的10％至20％，在美国约有10-20百万个人(Schattenburg etal.20l1.Curr Opin Lipidol.22：479-488)。患有慢性肝炎的个体通常会发展为肝纤维化，并最终具有肝硬化、肝细胞癌和肝衰竭的风险。根据目前的预测，到2020年，NASH有望成为肝脏移植的主要原因。(Wree，2013年)。不幸的是，没有预防或治疗肝纤维化的疗法。
发明内容
本文公开了一种治疗选自以下的疾病或病症的方法：原发性硬化性胆管炎、原发性胆汁性胆管炎、非酒精性脂肪肝病、非酒精性脂肪性肝炎和肝硬化；所述方法包括将一种或多种钙蛋白酶抑制剂作为单一药剂或与其他药剂组合施用给需要其的受试者。用于组合的剂的实例包括但不限于VAP-1抑制剂、ASBT抑制剂、双重CCR2/5拮抗剂、抗胆汁性胆汁酸、FXR激动剂、FGFR1c/4激动剂、CCL24抑制剂、奥贝胆酸、elafibranor、cenicriviroc、selonsertib、烟酸受体激动剂、SGLT2抑制剂和FGF21模拟物。
在一些实施方案中，肝硬化可以是由选自以下的一种或多种病症引起的：酒精性肝病、α-1抗胰蛋白酶缺乏症、自身免疫性肝炎、乳糜泻、慢性病毒性肝炎、血色素沉着症、特发性门脉纤维化和威尔逊疾病(Wilson disease)。
在一些实施方案中，钙蛋白酶抑制剂可以是本文所述的化合物。在一些实施方案中，钙蛋白酶抑制剂可以是式I、II、III、IV、V、VI、VII、VIII或IX中的任何一种的化合物。在一些实施方案中，钙蛋白酶抑制剂是表1a、1b、2、3或4中列出的化合物。
附图说明
图1显示了用天狼猩红(PSR)染色并用偏光显微镜观察的小鼠肝脏切片。
图2总结了天狼猩红染色的肝脏切片的纤维化评分。
图3显示了在正常人类肝脏和患病人类肝脏(NASH、肝硬化、脂肪肝疾病)中CAPN1的免疫组织化学评估。
图4显示了在正常人类肝脏和患病人类肝脏(PSC和PBC)中CAPN1的免疫组织化学评估。
图5显示了在正常人类肝脏和患病人类肝脏(NASH、肝硬化、脂肪肝疾病)中CAPN2的免疫组织化学评估。
图6显示了在正常人类肝脏和患病人类肝脏(PSC和PBC)中CAPN2的免疫组织化学评估。
图7显示了在正常人类肝脏和患病人类肝脏(NASH、肝硬化、脂肪肝疾病)中CAPN9的免疫组织化学评估。
图8显示了在正常人类肝脏和患病人类肝脏(PSC和PBC)中CAPN9的免疫组织化学评估。
图9A显示了苏木精和曙红(H&E)染色的和天狼星红染色的肝脏，喂食了胆碱缺乏性氨基酸高脂肪饮食(CDAHFD)，图9B-9E分别显示了CDAHFD大鼠中平滑肌肌动蛋白(SMA)、胶原蛋白(Col1a1)、钙蛋白酶1和钙蛋白酶2的表达。
图10A-10C分别显示了在CDAFHD大鼠中每天一次施用化合物405对体重、肝脏/体重之比和脾与体重之比的作用。
图11A-1E显示了在CDAFHD大鼠中每天一次施用化合物405对丙氨酸转移酶(ALT)水平(图11A)、碱性磷酸酶(ALP)水平(图11B)、天冬氨酸转氨酶(AST)水平(图11C)、总胆红素水平(图11D)和总白蛋白水平(图11E)的影响。
图12A-12C分别显示了在CDAFHD大鼠中每天两次施用化合物405对体重、肝脏/体重之比和脾与体重之比的作用。
图13A-13E显示了在CDAFHD大鼠中每天一次施用化合物405对ALT水平(图13A)、ALP水平(图13B)、AST水平(图13C)、总胆红素水平(图13D)和总白蛋白水平(图13E)的影响。
图14A显示了来自CDAHFD大鼠的H&E染色、天狼星红染色和α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)染色的肝脏，这些CDAHFD大鼠用200mg/kg和60mg/kg的化合物405每天处理一次。图14B-14E分别显示了CDAHFD大鼠中的胶原蛋白比例区域(CPA％)、羟脯氨酸水平、α-SMA水平和脂肪变性百分比，这些CDAHFD大鼠用200mg/kg和60mg/kg的化合物405每天处理一次。
图15A显示了来自CDAHFD大鼠的H&E染色、天狼星红染色和α-SMA染色的肝脏，这些CDAHFD大鼠用100mg/kg和30mg/kg的化合物405每天处理两次。图15B-15E分别显示了CDAHFD大鼠中的胶原蛋白CPA％、羟脯氨酸水平、α-SMA水平和脂肪变性百分比，这些CDAHFD大鼠用100mg/kg和30mg/kg的化合物405每天处理两次。
图16A-16F显示了CDAHFD大鼠中原纤维化基因表达水平，这些CDAHFD大鼠用200mg/kg和60mg/kg的化合物405每天处理一次。
图17A-17F显示了CDAHFD大鼠中原纤维化基因表达水平，这些CDAHFD大鼠用100mg/kg和30mg/kg的化合物405每天处理两次。
具体实施方式
定义
除非另外定义，否则本文使用的所有技术和科学术语具有与本公开所属领域的普通技术人员通常理解的含义相同的含义。所有专利、申请、公开申请和其他公开均通过引用整体并入。当本文中术语存在多个定义时，除非另有说明，否则以本节中的定义为准。
如本文所用，“受试者”是指人或非人哺乳动物例如狗、猫、小鼠、大鼠、牛、绵羊、猪、山羊、非人灵长类动物或鸟类例如鸡以及任意其他脊椎动物或无脊椎动物。
术语“哺乳动物”以其通常的生物学意义使用。因此，它具体包括但不限于灵长类动物，包括猿类(黑猩猩、猿、猴)和人类、牛、马、绵羊、山羊、猪、兔、狗、猫、大鼠和小鼠，但也包括许多其他种类。
如本文所用，“有效量”或“治疗有效量”是指有效缓解(至一定程度)疾病或病况的一种或多种症状，或降低疾病或病况的一种或多种症状的发作的可能性(包括治愈疾病或病况)的治疗剂的量。“治愈”意指疾病或病况的症状被消除；然而，即使在治愈后，也可能存在某些长期或永久的影响(例如大量组织损伤)。
如本文所用，“治疗”是指为了预防和/或治疗目的而施用药物组合物。术语“预防性治疗”是指对尚未表现出疾病或病况的症状，但对特定疾病或病况易感或有患病风险的受试者进行治疗，由此该治疗降低患者发展疾病或病况的可能性。术语“治疗性治疗”是指对已经患有疾病或病症的受试者进行治疗，并且可以包括抑制疾病或病症或阻止其发展，或改善或减轻疾病或病症的原因。
如本文所用，术语“前药”是指在体内转化为母体药物的药剂。前药通常是有用的，因为在某些情况下，它们可能比母体药物更容易施用。例如，它们可以通过口服施用而生物利用，而母体药物则不能。与母体药物相比，前药在药物组合物中还可以具有提高的溶解度。前药的一个实例(但不限于此)是作为酯(“前药”)施用以促进跨细胞膜传递(其中水溶性对移动性是有害的)的化合物，但随后该化合物在进入细胞后代谢水解成羧酸(活性物质)，在细胞中水溶性是有益的。前药的另一个实例可以是与酸基团键合的短肽(聚氨基酸)，其中肽被代谢以使活性部分显现。用于选择和制备合适的前药衍生物的常规方法在例如，《前药设计》(编辑H.Bundgaard，Elsevier，1985)中描述，其全部内容通过引用并入本文。
如本文所用，术语“前药酯”是指通过添加任何几种在生理条件下水解的酯形成基团而形成的本文公开的化合物的衍生物。前药酯基团的实例包括新戊酰氧基甲基(pivoyloxymethyl)、乙酰氧基甲基、邻苯二甲酰基、茚满基和甲氧基甲基，以及本领域已知的其它这种基团，包括(5-R-2-氧代-1，3-二氧杂环戊烯-4-基)甲基((5-R-2-oxo-1，3-dioxolen-4-yl)methyl)基团。前药酯基团的其他实例可见于例如T.Higuchi和V.Stella，″Pro-drugs as Novel Delivery Systems″，Vol.14，A.C.S.Symposium Series，AmericanChemical Society(1975)；和″Bioreversible Carriers in Drug Design：Theory andApplication″，E.B.Roche编辑，Pergamon Press：New York，14-21(1987)(提供可用作含有羧基基团的化合物的前药的酯的实例)。上述每篇参考文献都通过引用整体并入本文。
本文公开的化合物的“代谢物”包括在将化合物引入生物环境中时产生的活性物质。
“溶剂化物”是指通过溶剂和本文所述的化合物、其代谢物或盐的相互作用而形成的化合物。合适的溶剂化物是药学上可接受的溶剂化物，包括水合物。
术语“药学上可接受的盐”是指保留了在生物学上或其他方面不适合用于药物的化合物的生物有效性和性质的盐。在许多情况下，由于存在氨基和/或羧基基团或与其类似的基团，本文的化合物能够形成酸和/或碱盐。可以用无机酸和有机酸形成药学上可接受的酸加成盐。可以衍生盐的无机酸包括例如盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等。可以衍生盐的有机酸包括例如乙酸、丙酸、乙醇酸、丙酮酸、草酸、马来酸、丙二酸、琥珀酸、富马酸、酒石酸、柠檬酸、苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、甲磺酸、乙磺酸、对甲苯磺酸、水杨酸等。可以用无机碱和有机碱形成药学上可接受的碱加成盐。可以衍生盐的无机碱包括例如钠、钾、锂、铵、钙、镁、铁、锌、铜、锰、铝等；特别优选的是铵盐、钾盐、钠盐、钙盐和镁盐。可以衍生盐的有机碱包括例如伯胺、仲胺和叔胺、取代的胺包括天然存在的取代的胺、环胺、碱性离子交换树脂等，特别是例如异丙胺、三甲胺、二乙胺、三乙胺、三丙胺和乙醇胺。许多这种盐是本领域已知的，如1987年9月11日公开的Johnston等人的WO 87/05297(通过引用整体并入本文)中所述。
如本文所用，“Ca至Cb”或“Ca-b”，其中“a”和“b”是整数，指特定基团中的碳原子数。也就是说，该基团可含有“a”至“b”(包括“a”和“b”)个碳原子。因此，例如，“C1-C4烷基”或“C1-4烷基”基团是指具有1至4个碳的所有烷基基团，即CH3-、CH3CH2-、CH3CH2CH2-、(CH3)2CH-、CH3CH2CH2CH2-、CH3CH2CH(CH3)-和(CH3)3C-。
如本文所用，术语“卤素”或“卤代”是指元素周期表第7列的放射稳定性原子中的任意一种，例如氟、氯、溴或碘，其中氟和氯是优选的。
如本文所用，“烷基”是指完全饱和的(即，不含双键或三键)直链或支链烃链。烷基可具有1至20个碳原子(无论何时在本文中出现，数值范围如“1至20”是指给定范围内的每个整数；例如，“1至20个碳原子”意指烷基基团可以由1个碳原子、2个碳原子、3个碳原子等组成，直至并包括20个碳原子，但本发明的定义也涵盖其中没有指定数值范围的术语“烷基”的出现)。烷基基团也可以是具有1至9个碳原子的中等大小的烷基。烷基也可以是具有1至4个碳原子的低级烷基。该化合物的烷基基团可以被指定为“C1-4烷基”或类似的名称。仅举例来说，“C1-4烷基”表示在烷基链中存在1至4个碳原子，即烷基链选自由以下组成的组：甲基、乙基、丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基和叔丁基。典型的烷基包括但不限于甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基、戊基、己基等。
如本文所用，“卤代烷基”是指在链中具有1至12个碳原子的、一个或多个氢被卤素取代的直链或支链烷基基团。卤代烷基基团的实例包括但不限于-CF3、-CHF2、-CH2F、-CH2CF3、CH2CHF2、-CH2CH2F、-CH2CH2Cl、-CH2CF2CF3以及根据本领域普通技术和本文提供的教导的其他基团，将其认为等同于前述实例中的任意一个。
如本文所用，“烷氧基”是指式-OR，其中R是如上定义的烷基，例如“C1-9烷氧基”，包括但不限于甲氧基、乙氧基、正丙氧基、1-甲基乙氧基(异丙氧基)、正丁氧基、异丁氧基、仲丁氧基和叔丁氧基等。
如本文所用，“聚乙二醇”是指式
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其中n是大于1的整数，并且R是氢或烷基。重复单元数“n”可以通过参考多个成员来指示。因此，例如，“2元至5元聚乙二醇”是指n是选自2至5的整数。在一些实施方案中，R选自甲氧基、乙氧基、正丙氧基、1-甲基乙氧基(异丙氧基)、正丁氧基、异丁氧基、仲丁氧基和叔丁氧基。
如本文所用，“杂烷基”是指在链骨架中含有一个或多个杂原子(即除碳以外的元素，包括但不限于氮、氧和硫)的直链或支链烃链。杂烷基基团可具有1至20个碳原子，但本发明的定义也涵盖其中未指定数值范围的术语“杂烷基”的出现。杂烷基基团也可以是具有1至9个碳原子的中等大小的杂烷基。杂烷基基团也可以是具有1至4个碳原子的低级杂烷基。在各种实施方案中，杂烷基可具有1至4个杂原子、1至3个杂原子、1或2个杂原子或1个杂原子。化合物的杂烷基基团可以被指定为“C1-4杂烷基”或类似的名称。杂烷基基团可含有一个或多个杂原子。仅举例来说，“C1-4杂烷基”表示在杂烷基链中存在1至4个碳原子并且在链的骨架中另外存在一个或多个杂原子。
术语“芳族”是指具有共轭π电子系统的环或环系统，并且包括碳环芳族(例如苯基)和杂环芳族基团(例如吡啶)。该术语包括单环或稠环多环(即，共享相邻原子对的环)基团，条件是整个环系统是芳族的。
如本文所用，“芳基”是指在环骨架中仅含有碳的芳环或环系统(即，共享两个相邻碳原子的两个或多个稠环)。当芳基是环系统时，该系统中的每个环都是芳族的。芳基基团可具有6至18个碳原子，但本发明的定义也涵盖其中没有指定数值范围的术语“芳基”的出现。在一些实施方案中，芳基基团具有6至10个碳原子。芳基基团可以被指定为“C6-10芳基”、“C6或C10芳基”或类似的名称。芳基基团的实例包括但不限于苯基、萘基、甘菊环基(azulenyl)和蒽基。
如本文所用，“芳氧基”和“芳硫基”是指RO-和RS-，其中R是如上定义的芳基，例如“C6-10芳氧基”或“C6-10芳硫基”等，包括但不限于苯氧基。
“芳烷基”或“芳基烷基”是通过亚烷基基团作为取代基连接的芳基，例如“C7-14芳烷基”等，包括但不限于苄基、2-苯乙基、3-苯丙基和萘基烷基。在某些情况下，亚烷基基团是低级亚烷基基团(即C1-4亚烷基基团)。
如本文所用，“杂芳基”是指在环骨架中含有一个或多个杂原子(即除碳以外的元素，包括但不限于氮、氧和硫)的芳族环或环系统(即，共享两个相邻原子的两个或多个稠合环)。当杂芳基是环系统时，该系统中的每个环都是芳族的。杂芳基基团可具有5至18个环成员(即，构成环骨架的原子数，包括碳原子和杂原子)，但本发明的定义也涵盖其中未指定数值范围的术语“杂芳基”的出现。在一些实施方案中，杂芳基基团具有5至10个环成员或5至7个环成员。杂芳基基团可以被指定为“5至7元杂芳基”、“5至10元杂芳基”或类似的名称。在各种实施方案中，杂芳基含有1至4个杂原子、1至3个杂原子、1至2个杂原子或1个杂原子。例如，在各种实施方案中，杂芳基含有1至4个氮原子、1至3个氮原子、1至2个氮原子、2个氮原子和1个硫原子或氧原子、1个氮原子和1个硫原子或氧原子或1个硫原子或氧原子。杂芳基环的实例包括但不限于呋喃基、噻吩基、酞嗪基、吡咯基、噁唑基、噻唑基、咪唑基、吡唑基、异噁唑基、异噻唑基、三唑基、噻二唑基、吡啶基、哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基、三嗪基、喹啉基、异喹啉基、苯并咪唑基、苯并噁唑基、苯并噻唑基、吲哚基、异吲哚基和苯并噻吩基。
“杂芳烷基”或“杂芳基烷基”是通过亚烷基基团作为取代基连接的杂芳基基团。实例包括但不限于2-噻吩基甲基、3-噻吩基甲基、呋喃基甲基、噻吩基乙基、吡咯基烷基、吡啶基烷基、异噁唑基烷基(isoxazollylalkyl)和咪唑基烷基。在某些情况下，亚烷基基团是低级亚烷基基团(即C1-4亚烷基基团)。
如本文所用，“碳环基”是指在环系统骨架中仅含有碳原子的非芳族环状环或环系统。当碳环基是环系统时，两个或多个环可以以稠合、桥接或螺连接的方式连接在一起。碳环基可具有任意饱和度，条件是环系统中的至少一个环不是芳族的。因此，碳环基包括环烷基、环烯基和环炔基。碳环基基团可具有3至20个碳原子，但本发明的定义也涵盖其中没有指定数值范围的术语“碳环基”的出现。碳环基基团还可以是具有3至10个碳原子的中等大小的碳环基。碳环基基团也可以是具有3至6个碳原子的碳环基。碳环基基团可以被指定为“C3-6碳环基”或类似的名称。碳环基环的实例包括但不限于环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环己烯基、2，3-二氢-茚、双环[2.2.2]辛基、金刚烷基和螺[4.4]壬基。
“(碳环基)烷基”是通过亚烷基基团作为取代基连接的碳环基，例如“C4-10(碳环基)烷基”等，包括但不限于环丙基甲基、环丁基甲基、环丙基乙基、环丙基丁基、环丁基乙基、环丙基异丙基、环戊基甲基、环戊基乙基、环己基甲基、环己基乙基、环庚基甲基等。在某些情况下，亚烷基基团是低级亚烷基基团。
如本文所用，“环烷基”是指完全饱和的碳环基环或环系统。实例包括环丙基、环丁基、环戊基和环己基。
如本文所用，“环烯基”是指具有至少一个双键的碳环基环或环系统，其中环系统中没有环是芳族的。一个实例是环己烯基。
如本文所用，“杂环基”是指在环骨架中含有至少一个杂原子的非芳族环状环或环系统。杂环基可以以稠合、桥接或螺连接的方式连接在一起。杂环基可具有任意饱和度，条件是环系统中的至少一个环不是芳族的。(多个)杂原子可以存在于环系统中的非芳族环或芳族环中。杂环基基团可具有3至20个环成员(即，构成环骨架的原子数，包括碳原子和杂原子)，但本发明的定义也涵盖其中没有指定数值范围的术语“杂环基”的出现。杂环基基团也可以是具有3至10个环成员的中等大小的杂环基。杂环基基团也可以是具有3至6个环成员的杂环基。杂环基可以被指定为“3-6元杂环基”或类似的名称。
在各种实施方案中，杂环基含有1至4个杂原子、1至3个杂原子、1至2个杂原子或1个杂原子。例如，在各种实施方案中，杂环基含有1至4个氮原子、1至3个氮原子、1至2个氮原子、2个氮原子和1个硫原子或氧原子、1个氮原子和1个硫原子或氧原子、或1硫原子或氧原子。在优选的六元单环杂环基中，(多个)杂原子选自O、N或S中的一个至三个，在优选的五元单环杂环基中，(多个)杂原子选自从O、N或S选择的一个或两个杂原子。杂环基环的实例包括但不限于，氮杂基、吖啶基、咔唑基、噌啉基、二氧杂环戊烷基、咪唑啉基、咪唑烷基、吗啉基、环氧乙烷基、氧杂环庚烷基、硫杂环庚烷基、哌啶基、哌嗪基、二氧代哌嗪基、吡咯烷基、吡咯烷酮基(pyrrolidonyl)、吡咯烷酮基(pyrrolidionyl)、4-哌啶基、吡唑啉基、吡唑烷基、1，3-二氧杂环己烯基(dioxinyl)、1，3-二噁烷基、1，4-二氧杂环己烯基(dioxinyl)、1，4-二噁烷基、1，3-氧硫杂环己烷基(1，3-oxathianyl)、1，4-氧硫杂环己烯基(1，4-oxathiinyl)、1，4-氧硫杂环己烷基、2H-1，2-噁嗪基、三噁烷基、六氢-1，3，5-三嗪基、1，3-二氧杂环戊烯基(1，3-dioxolyl)、1，3-二氧杂环戊烷基(1，3-dioxolanyl)、1，3-二硫杂环戊烯基(1，3-dithiolyl)、1，3-二硫杂环戊烷基(1，3-dithiolanyl)、异噁唑啉基、异噁唑烷基、噁唑啉基、噁唑烷基、噁唑烷酮基、噻唑啉基、噻唑烷基、1，3-氧硫杂环戊烷基、二氢吲哚基、异吲哚啉基、四氢呋喃基、四氢吡喃基、四氢噻吩基、四氢噻喃基、四氢-1，4-噻嗪基、硫代吗啉基、二氢苯并呋喃基、苯并咪唑烷基和四氢喹啉。
“(杂环基)烷基”是通过亚烷基基团作为取代基连接的杂环基基团。实例包括但不限于咪唑啉基甲基和吲哚基乙基。
如本文所用，“酰基”是指-C(＝O)R，其中R是如本文所定义的氢、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-7碳环基、芳基、5-10元杂芳基和5-10元杂环基。非限制性实例包括甲酰基、乙酰基、丙酰基、苯甲酰基和丙烯酰基。
“O-羧基”基团是指“-OC(＝O)R”基团，其中R选自如本文所定义的氢、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-7碳环基、芳基、5-10元杂芳基和5-10元杂环基。
“C-羧基”基团是指“-C(＝O)OR”基团，其中R选自如本文所定义的氢、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-7碳环基、芳基、5-10元杂芳基和5-10元杂环基。非限制性实例包括羧基(即-C(＝O)OH)。
“氰基”基团是指“-CN”基团。
“氰酰基”基团是指“-OCN”基团。
“异氰酰基”基团是指“-NCO”基团。
“硫氰酰基”基团是指“-SCN”基团。
“异硫氰酰基”基团是指“-NCS”基团。
“亚磺酰基”基团是指“-S(＝O)R”基团，其中R选自如本文所定义的氢、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-7碳环基、C6-10芳基、5-10元杂芳基和5-10元杂环基。
“磺酰基”基团是指“-SO2R”基团，其中R选自如本文所定义的氢、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-7碳环基、C6-10芳基、5-10元杂芳基和5-10元杂环基。
“S-磺酰氨基”基团是指“-SO2NRARB”基团，其中RA和RB各自独立地选自如本文所定义的氢、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-7碳环基、C6-10芳基、5-10元杂芳基和5-10元杂环基。
“N-磺酰氨基”基团是指“-N(RA)SO2RB”基团，其中RA和RB各自独立地选自如本文所定义的氢、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-7碳环基、C6-10芳基、5-10元杂芳基和5-10元杂环基。
“O-氨基甲酰基”基团是指“-OC(＝O)NRARB”基团，其中RA和RB各自独立地选自如本文所定义的氢、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-7碳环基、C6-10芳基、5-10元杂芳基和5-10元杂环基。
“N-氨基甲酰基”基团是指“-N(RA)OC(＝O)RB”基团，其中RA和RB各自独立地选自如本文所定义的氢、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-7碳环基、C6-10芳基、5-10元杂芳基和5-10元杂环基。
“O-硫代氨基甲酰基”基团是指“-OC(＝S)NRARB”基团，其中RA和RB各自独立地选自如本文所定义的氢、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-7碳环基、C6-10芳基、5-10元杂芳基和5-10元杂环基。
“N-硫代氨基甲酰基”基团是指“-N(RA)OC(＝S)RB”基团，其中RA和RB各自独立地选自如本文所定义的氢、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-7碳环基、C6-10芳基、5-10元杂芳基和5-10元杂环基。
“C-酰氨基”基团是指“-C(＝O)NRARB”基团，其中RA和RB各自独立地选自如本文所定义的氢、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-7碳环基、C6-10芳基、5-10元杂芳基和5-10元杂环基。
“N-酰氨基”基团是指“-N(RA)C(＝O)RB”基团，其中RA和RB各自独立地选自如本文所定义的氢、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-7碳环基、C6-10芳基、5-10元杂芳基和5-10元杂环基。
“氨基”基团是指“-NRARB”基团，其中RA和RB各自独立地选自如本文所定义的氢、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-7碳环基、C6-10芳基、5-10元杂芳基和5-10元杂环基。
“氨基烷基”基团是指通过亚烷基基团连接的氨基基团。
“烷氧基烷基”基团是指通过亚烷基基团连接的烷氧基基团，例如“C2-8烷氧基烷基”等。
如本文所用，“天然氨基酸侧链”是指天然存在的氨基酸的侧链取代基。天然存在的氨基酸具有与α-碳连接的取代基。天然存在的氨基酸包括精氨酸、赖氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、组氨酸、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、半胱氨酸、蛋氨酸、色氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、缬氨酸、脯氨酸和甘氨酸。
如本文所用，“非天然氨基酸侧链”是指非天然存在的氨基酸的侧链取代基。非天然氨基酸包括β-氨基酸(β3和β2)、同源氨基酸、脯氨酸和丙酮酸衍生物、3-取代的丙氨酸衍生物、甘氨酸衍生物、环取代的苯丙氨酸和酪氨酸衍生物、线性核心氨基酸和N-甲基氨基酸。示例性的非天然氨基酸可从Sigma-Aldridge获得，列于“非天然氨基酸和衍生物”下。还参见Travis S.Young和Peter G.Schultz，“Beyond the Canonical 20 Amino Acids：Expanding the Genetic Lexicon，”J.Biol.Chem.2010285：11039-11044，其全部内容通过引用并入本文。
如本文所用，取代的基团衍生自未取代的母体基团，其中已经存在一个或多个氢原子替换为另一个原子或基团。除非另有说明，否则当基团被认为是“取代的”时，意指该基团被一个或多个独立地选自以下的取代基取代：C1-C6烷基、C1-C6烯基、C1-C6炔基、C1-C6杂烷基、C3-C7碳环基(任选地被卤素、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6卤代烷基和C1-C6卤代烷氧基取代)、C3-C7-碳环基-C1-C6-烷基(任选地被卤素、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6卤代烷基和C1-C6卤代烷氧基取代)、5-10元杂环基(任选地被卤素、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6卤代烷基和C1-C6卤代烷氧基取代)、5-10元杂环基-C1-C6-烷基(任选地被卤素、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6卤代烷基和C1-C6卤代烷氧基取代)、芳基(任选地被卤素、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6卤代烷基和C1-C6卤代烷氧基取代)、芳基(C1-C6)烷基(任选地被卤素、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6卤代烷基和C1-C6卤代烷氧基取代)、5-10元杂芳基(任选地被卤素、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6卤代烷基和C1-C6卤代烷氧基取代)、5-10元杂芳基(C1-C6)烷基(任选地被卤素、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6卤代烷基和C1-C6卤代烷氧基取代)、卤素、氰基、羟基、C1-C6烷氧基、C1-C6烷氧基(C1-C6)烷基(即醚)、芳氧基、硫氢基(巯基)、卤代(C1-C6)烷基(例如-CF3)、卤代(C1-C6)烷氧基(例如-OCF3)、C1-C6烷硫基、芳硫基、氨基、氨基(C1-C6)烷基、硝基、O-氨基甲酰基、N-氨基甲酰基、O-硫代氨基甲酰基、N-硫代氨基甲酰基、C-酰氨基、N-酰氨基、S-磺酰氨基、N-磺酰氨基、C-羧基、O-羧基、酰基、氰酰基、异氰酰基、硫酰基、异硫酰基、亚磺酰基、磺酰基和氧基(＝O)。无论何处将基团描述为“任选取代的”，该基团可以被上述取代基取代。
在一些实施方案中，(多个)取代的基团被一个或多个取代基取代，所述取代基各自独立地选自C1-C4烷基、氨基、羟基和卤素。
应理解，取决于上下文，某些基团命名规则可包括单-基团或二-基团。例如，当取代基需要与分子其余部分的两个连接点时，应理解取代基是二-基团。例如，被鉴定为需要两个连接点的烷基的取代基包括二-基团，例如-CH2-、-CH2CH2-、-CH2CH(CH3)CH2-等。其他自由基命名规则清楚地表明该基团是二-基团，例如“亚烷基”或“亚烯基”。
当两个R基团被称为“与它们所连接的原子一起”形成环(例如，碳环基、杂环基、芳基或杂芳基环)时，意指该原子和两个R基团的集合单元是所述环。当单独采用时，环不受每个R基团的定义的限制。例如，当存在以下子结构：
Figure BDA0002953643150000161
并且R1和R2被定义为选自由氢和烷基组成的组，或R1和R2与它们所连接的氮一起形成杂环基时，意指R1和R2可选自氢或烷基，或者，子结构具有以下结构：
Figure BDA0002953643150000171
其中环A是含有所示氮的杂环基环。
类似地，当两个“相邻”R基团被称为“与它们所连接的原子一起”形成环时，意指该原子、中间键和两个R基团的集合单元是所述环。例如，当存在以下子结构：
Figure BDA0002953643150000172
并且R1和R2被定义为选自由氢和烷基组成的组，或R1和R2与它们所连接的原子一起形成芳基或碳环基时，意指R1和R2可选自氢或烷基，或者，子结构具有以下结构：
Figure BDA0002953643150000173
其中A是芳基环或含有所示双键的碳环基。
无论何处将取代基描述为二-基团(即，具有与分子其余部分的两个连接点)，应理解，除非另有说明，否则取代基可以以任意方向构型连接。因此，例如，被描述为-AE-或
Figure BDA0002953643150000174
的取代基包括被定向以使A连接在分子的最左侧连接点的取代基，以及A连接在分子的最右侧连接点的情况。
如本文所用，子结构：
Figure BDA0002953643150000181
意指A8原子可以在环或环系统A1内的任意环原子位置。子结构：
Figure BDA0002953643150000182
意指A8原子位于紧邻(即α)由*表示的连接点的环原子位置。
如本文所用，化学基团的“等排体(isostere)”是表现出相同或相似性质的其他化学基团。例如，四唑是羧酸的等排体，因为它模仿羧酸的性质，即使它们都具有非常不同的分子式。四唑是羧酸的许多可能的等排替代物之一。预期的其他羧酸等排体包括-SO3H、-SO2HNR、-PO2(R)2、-PO3(R)2、-CONHNHSO2R、-COHNSO2R和-CONRCN，其中R选自如本文所定义的氢、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-7碳环基、C6-10芳基、5-10元杂芳基和3-10元杂环基。此外，羧酸等排体可包括处于任意化学稳定氧化态的5-7元碳环或杂环(含有CH2、O、S或N的任意组合)，其中所述环结构的任意原子任选地在一个或多个位置被取代。以下结构是预期的碳环和杂环等排体的非限制性实例。所述环结构的原子可以在一个或多个位置任选地被如上所定义的R取代。
Figure BDA0002953643150000183
还预期当将化学取代基加入到羧酸等排体中时，该化合物保留羧酸等排体的性质。预期当羧酸等排体任选地被一个或多个选自如上定义的R的部分取代时，那么对取代和取代位置进行选择使得它不消除该化合物的羧酸等排性质。类似地，还预期在碳环或杂环羧酸等排体上放置一个或多个R取代基不是在一个或多个维持化合物的羧酸等排性质或化合物的羧酸等排性质不可或缺的原子上的取代，如果这样的取代基会破坏化合物的羧酸等排性质的话。
还考虑了在本说明书中未具体举例说明的其他羧酸等排体。
术语“试剂”或“测试剂”包括任意物质、分子、元素、化合物、实体或其组合。它包括但不限于例如蛋白质、多肽、肽或模拟物、有机小分子、多糖、多核苷酸等。它可以是天然产物、合成化合物或化学化合物或两种以上的物质的组合。除非另有说明，否则术语“试剂”、“物质”和“化合物”在本文中可互换使用。
本文使用的术语“类似物”是指在结构上类似于参照分子的分子，但已经通过用替代取代基取代参照分子的特定取代基而以靶向和受控方式对其进行了修饰。与参照分子相比，本领域技术人员可以预期类似物表现出相同、相似或改善的效用。为了找到具有改善特征(例如对靶分子的结合亲和力更高)的已知化合物的变体而进行的类似物的合成和筛选是药物化学中众所周知的方法。
治疗方法
在一些实施方案中，本文公开的化合物是钙蛋白酶抑制剂。在一些实施方案中，这些化合物可以有效地充当CAPN1、CAPN2和/或CAPN9抑制剂。一些实施方案提供了药物组合物，其包含一种或多种本文公开的化合物和药学上可接受赋形剂。
一些实施方案提供了用有效量的一种或多种本文公开的化合物来治疗肝纤维化的方法。
一些实施方案提供了用有效量的一种或多种本文公开的化合物来治疗原发性硬化性胆管炎的方法。一些实施方案提供了用有效量的一种或多种本文公开的化合物来治疗原发性胆源性胆管炎的方法。一些实施方案提供了用有效量的一种或多种本文公开的化合物来治疗非酒精性脂肪肝病的方法。一些实施方案提供了用有效量的一种或多种本文公开的化合物来治疗非酒精性脂肪性肝炎的方法。
一些实施方案提供了用有效量的一种或多种本文公开的化合物来治疗肝硬化的方法。在一些实施方案中，肝硬化是由选自以下的一种或多种病症引起的：酒精性肝病、α-1抗胰蛋白酶缺乏症、自身免疫性肝炎、乳糜泻、慢性病毒性肝炎、血色素沉着症、特发性门脉纤维化和威尔逊疾病(Wilson disease)。
在一些实施方案中，受试者是哺乳动物。在一些具体的实施方案中，受试者是人。
另外的实施方案包括向有此需要的受试者施用化合物的组合。组合可包括本文所述的化合物、组合物、药物组合物和另外的药物。
一些实施方案包括与另外的药物共同施用本文所述的化合物、组合物和/或药物组合物。“共同施用”是指可以在患者的血流中同时发现两种或更多种药剂，而不管它们实际上何时或如何施用。在一个实施方案中，该药剂同时施用。在一个这样的实施方案中，组合施用是通过将药剂合并在单一剂型中来完成的。在另一个实施方案中，相继施用药剂。在一个实施方案中，药剂通过相同途径例如口服施用。在另一个实施方案中，药剂通过不同途径施用，例如一种口服施用和另一种i.v.施用。
一些实施方案包括本文所述的化合物、组合物和/或药物组合物与另外的药剂的组合，另外的药剂例如抗炎药包括糖皮质激素、镇痛药(例如布洛芬)、阿司匹林和调节Th2-免疫应答的药剂、免疫抑制剂包括甲氨蝶呤、霉酚酸酯、环磷酰胺、环孢菌素、沙利度胺(thalidomide)、泊马度胺(pomalidomide)、来氟米特(leflunomide)、羟氯喹、硫唑嘌呤、可溶性牛软骨、血管扩张剂包括内皮素受体拮抗剂、前列环素类似物、硝苯地平(nifedipine)和西地那非(sildenafil)、IL-6受体拮抗剂、选择性和非选择性酪氨酸激酶抑制剂、Wnt通路调节剂、PPAR激活剂、半胱天冬酶-3抑制剂、LPA受体拮抗剂、B细胞耗竭剂、CCR2拮抗剂、吡非尼酮(pirfenidone)、大麻素受体激动剂、ROCK抑制剂、miRNA靶向剂、toll样受体拮抗剂、CTGF靶向剂、NADPH氧化酶抑制剂、类胰蛋白酶抑制剂、TGFD抑制剂、松弛素受体激动剂和自体脂肪来源的再生细胞。
在一些实施方案中，本文描述的钙蛋白酶抑制剂可以与选自以下的一种或多种另外的剂组合施用：VAP-1抑制剂、ASBT抑制剂、双重CCR2/5拮抗剂、抗胆汁性胆汁酸、FXR激动剂、FGFR1c/4激动剂、间充质干细胞(MSC)细胞疗法、CCL24抑制剂和CCL11抑制剂。在一些实施方案中，钙蛋白酶抑制剂可以在治疗原发性硬化性胆管炎(PSC)的方法中与一种或多种另外的上述剂组合使用，所述方法包括将钙蛋白酶抑制剂与一种或多种另外的上述剂组合施用给需要其的受试者。
在本文提供的一些实施方案中，本文描述的钙蛋白酶抑制剂可以与选自以下的一种或多种另外的剂组合施用：奥贝胆酸、elafibranor、cenicriviroc、selonsertib、烟酸受体激动剂、SGLT2抑制剂、VAP-1抑制剂、FGF21模拟物、腺甙A3受体激动剂、mTOT调节剂、FXR激动剂、半乳糖凝集素-3抑制剂、ABCA1激活剂、SCD1抑制剂、ACC抑制剂、I型NKT-细胞抑制剂、pan-PPAR激动剂、DGAT2抑制剂、PPARα激动剂、甲状腺激素R-b激动剂、5-LO/LT抑制剂、盐皮质激素受体拮抗剂、FGF19模拟物、半胱天冬酶抑制剂、GLP-1R激动剂、SIRT1/AMP激动剂、ACC抑制剂、己酮糖激酶抑制剂、GLP-1R激动剂、ASBT抑制剂、DGAT2/CYP2E1抑制剂、TLR4拮抗剂、甲状腺激素R-b激动剂、IFN-γ受体拮抗剂、CB1拮抗剂、FGF21配体、P2Y13受体激动剂、CCL24抑制剂、MCH受体-1拮抗剂、aPPARα、δ激动剂、DPP-4抑制剂、aLXR拮抗剂、GLP1R激动剂、嗜酸性粒细胞趋化因子-1(eotaxin-1)抑制剂、β-klotho/FGFR1c激动剂、LOXL2抑制剂、AMPK激活剂、miR-103/107抑制剂、炎性小体抑制剂、CD3拮抗剂和组织蛋白酶B抑制剂。在一些实施方案中，钙蛋白酶抑制剂可以在治疗非酒精性脂肪性肝炎(NASH)的方法中与一种或多种另外的上述剂组合使用，所述方法包括将钙蛋白酶抑制剂与一种或多种另外的上述剂组合施用给需要其的受试者。
施用和药物组合物
化合物以治疗有效剂量施用。虽然人体剂量水平尚未针对本文所述化合物进行优化，但通常，每日剂量可为约0.25mg/kg至约120mg/kg或更高体重，约0.5mg/kg或更低至约70mg/kg，约1.0mg/kg至约50mg/kg体重，或约1.5mg/kg至约10mg/kg体重。因此，对于向70kg的人施用，剂量范围为约17mg/天至约8000mg/天，约35mg/天或更低至约7000mg/天或更高，约70mg/天至约6000mg/天，约100mg/天至约5000mg/天，或约200mg至约3000mg/天。当然，施用的活性化合物的量取决于受治疗者和所治疗的疾病状态、痛苦的严重程度、施用方式和时间表以及处方医师的判断。
本文公开的化合物或其药学上可接受的盐的施用可以通过用于具有类似用途的药剂的任意可接受的施用方式，包括但不限于口服、皮下、静脉内、鼻内、局部、透皮、腹膜内、肌肉内、肺内、阴道、直肠或眼内。口服和肠胃外施用通常用于治疗优选实施方案的受试者的适应症。
可以将如上所述有用的化合物配制成用于治疗这些病况的药物组合物。使用标准药物制剂技术，例如Remington的The Science and Practice of Pharmacy，第21版本，Lippincott Williams&Wilkins(2005)(通过引用整体并入本文)中公开的那些技术。因此，一些实施方案包括药物组合物，其包括：(a)安全且治疗有效量的本文所述化合物(包括其对映异构体、非对映异构体、互变异构体、多晶型物和溶剂化物)，或其药学上可接受的盐；和(b)药学上可接受的载体、稀释剂、赋形剂或其组合。
除了如上所述有用的所选化合物之外，一些实施方案还包括含有药学上可接受的载体的组合物。术语“药学上可接受的载体”或“药学上可接受的赋形剂”包括任意和所有溶剂、分散介质、包衣、抗细菌和抗真菌剂、等渗和吸收延迟剂等。这些介质和试剂用于药物活性物质的用途是本领域熟知的。除非任何常规介质或试剂与活性成分均不相容，否则考虑其在治疗组合物中的用途。另外，可以包括例如本领域常用的各种佐剂。例如，在Gilman等人(编辑)(1990)；Goodman和Gilman的The Pharmacological Basis of Therapeutics，第8版，Pergamon Press(其全部内容通过引用并入本文)中描述了在药物组合物中包含各种组分的考虑因素。
可用作药学上可接受的载体或其组分的物质的一些实例是糖，例如乳糖、葡萄糖和蔗糖；淀粉，如玉米淀粉和马铃薯淀粉；纤维素及其衍生物，如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素和甲基纤维素；粉末黄蓍草；麦芽；明胶；滑石；固体润滑剂，如硬脂酸和硬脂酸镁；硫酸钙；植物油，如花生油、棉籽油、芝麻油、橄榄油、玉米油和可可油；多元醇，如丙二醇、甘油、山梨糖醇、甘露醇和聚乙二醇；海藻酸；乳化剂，如TWEENS；润湿剂，如十二烷基硫酸钠；着色剂；调味剂；压片剂、稳定剂；抗氧化剂；防腐剂；无热原水；等渗盐水；和磷酸盐缓冲溶液。
与主题化合物联合使用的药学上可接受的载体的选择基本上由化合物的施用方式决定。
本文所述的组合物优选以单位剂型提供。如本文所用，“单位剂型”是含有一定量的化合物的组合物，其适于根据良好的医学实践以单一剂量施用给动物，优选哺乳动物受试者。然而，单一剂型或单位剂型的制备并不意味着每天或每疗程施用一次该剂型。预期此类剂型每天施用一次、两次、三次或更多次，并且可以在一段时间内(例如，约30分钟至约2-6小时)作为输注施用，或作为连续输注施用，并且可以在一个疗程中施用不止一次，尽管没有特别排除单次施用。技术人员将认识到该制剂没有特别考虑整个疗程，并且这些决定留给治疗领域而非制剂领域的技术人员。
如上所述有用的组合物可以是多种合适形式中的任意一种，用于多种施用途径，例如口服、鼻腔、直肠、局部(包括透皮)、眼、脑内、颅内、鞘内、动脉内、静脉内、肌肉内或其他肠道外施用途径。技术人员将理解，口服和鼻腔组合物包含通过吸入施用的组合物，并使用可用的方法制备。根据所需的特定施用途径，可以使用本领域熟知的多种药学上可接受的载体。药学上可接受的载体包括，例如，固体或液体填充剂、稀释剂、助溶剂、表面活性剂和包封物质。可以包括基本上不干扰化合物的抑制活性的任选的药学活性物质。与化合物一起使用的载体的量足以提供每单位剂量化合物施用的物质的实际量。用于制备可用于本文所述方法的剂型的技术和组合物描述于以下参考文献中，所有文献均通过引用并入本文：Modern Pharmaceutics，第4版，第9章和第10章(Banker&Rhodes，编辑，2002)；Lieberman等人，Pharmaceutical Dosage Forms：Tablets(1989)；和Ansel，Introductionto Pharmaceutical Dosage Forms第8版(2004)。
可以使用多种口服剂型，包括片剂、胶囊、颗粒和散装粉末等固体形式。片剂可以是压片、片剂研磨剂、肠溶衣、糖衣、薄膜包衣或多重压片，其含有合适的粘合剂、润滑剂、稀释剂、崩解剂、着色剂、调味剂、流动诱导剂和熔化剂。液体口服剂型包括水溶液、乳液、悬浮液、由非泡腾颗粒重构的溶液和/或悬浮液、以及由泡腾颗粒重构的泡腾制剂，其含有合适的溶剂、防腐剂、乳化剂、悬浮剂、稀释剂、甜味剂、熔化剂、着色剂和调味剂。
适于制备用于口服施用的单位剂型的药学上可接受的载体是本领域熟知的。片剂通常包含常规的药学上相容的佐剂作为惰性稀释剂，例如碳酸钙、碳酸钠、甘露醇、乳糖和纤维素；粘合剂，如淀粉、明胶和蔗糖；崩解剂，如淀粉、海藻酸和交联羧甲基纤维素；润滑剂，如硬脂酸镁、硬脂酸和滑石粉。诸如二氧化硅的助流剂可用于改善粉末混合物的流动特性。可以添加着色剂，例如FD&C染料，用于外观。甜味剂和调味剂，例如阿斯巴甜、糖精、薄荷醇、薄荷和水果调味剂，是可咀嚼片剂的有用佐剂。胶囊通常包含一种或多种上文公开的固体稀释剂。载体组分的选择取决于并不重要的次要考虑因素如味道、成本和货架稳定性，并且可以由本领域技术人员容易地制造。
口服组合物还包括液体溶液、乳液、悬浮液等。适用于制备此类组合物的药学上可接受的载体是本领域熟知的。用于糖浆、酏剂、乳液和悬浮液的载体的典型组分包括乙醇、甘油、丙二醇、聚乙二醇、液体蔗糖、山梨糖醇和水。对于悬浮液，典型的悬浮剂包括甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、AVICEL RC-591、黄蓍胶和海藻酸钠；典型的润湿剂包括卵磷脂和聚山梨醇酯80；和典型的防腐剂包括对羟基苯甲酸甲酯和苯甲酸钠。口服液体组合物还可含有一种或多种组分，例如上面公开的甜味剂、调味剂和着色剂。
此类组合物还可以通过常规方法包衣，通常使用pH或时间依赖性包衣，使得主题化合物在胃肠道中在期望的局部施用附近释放，或在不同时间释放以使所期望的作用延长。此类剂型通常包括但不限于醋酸邻苯二甲酸纤维素、邻苯二甲酸聚乙酸乙烯酯、邻苯二甲酸羟丙基甲基纤维素、乙基纤维素、Eudragit包衣、蜡和虫胶中的一种或多种。
本文所述的组合物可任选地包含其他药物活性物质。
用于实现主题化合物的全身递送的其他组合物包括舌下、口腔和鼻腔剂型。此类组合物通常包含一种或多种可溶性填充物质，例如蔗糖、山梨糖醇和甘露醇；和粘合剂，如阿拉伯胶、微晶纤维素、羧甲基纤维素和羟丙基甲基纤维素。还可包括上文公开的助流剂、润滑剂、甜味剂、着色剂、抗氧化剂和调味剂。
配制用于局部眼科使用的液体组合物，使其可以向眼睛局部施用。应尽可能地使舒适度最大化，但是有时制剂考虑因素(例如药物稳定性)可能迫使低于最佳舒适度。在不能使舒适度最大化的情况下，应该配制液体使得液体对于患者的局部眼科使用是可耐受的。另外，眼科上可接受的液体应该包装成一次性使用或者含有防腐剂以防止多次使用间的污染。
对于眼科应用，通常使用生理盐水溶液作为主要溶媒来制备溶液或药物。眼科溶液应优选用适当的缓冲系统保持在舒适的pH值。制剂还可含有常规的药学上可接受的防腐剂、稳定剂和表面活性剂。
可用于本文公开的药物组合物的防腐剂包括但不限于苯扎氯铵、PHMB、氯丁醇、硫柳汞、苯基汞、乙酸盐和硝酸苯汞。有用的表面活性剂是例如吐温80。类似地，多种有用的溶媒可用于本文公开的眼用制剂中。这些溶媒包括但不限于聚乙烯醇、聚维酮、羟丙基甲基纤维素、泊洛沙姆、羧甲基纤维素、羟乙基纤维素和纯净水。
可以根据需要或方便添加张力调节剂。它们包括但不限于盐特别是氯化钠、氯化钾、甘露醇和甘油，或任意其它合适的眼科上可接受的张力调节剂。
可以使用多种缓冲剂和手段来调节pH，只要所得制剂是眼科上可接受的即可。对于许多组合物，pH将在4和9之间。因此，缓冲剂包括乙酸盐缓冲剂、柠檬酸盐缓冲剂、磷酸盐缓冲剂和硼酸盐缓冲剂。根据需要，可以使用酸或碱来调节这些制剂的pH。
以类似的方式，眼科上可接受的抗氧化剂包括但不限于偏亚硫酸氢钠、硫代硫酸钠、乙酰半胱氨酸、丁基化羟基苯甲醚和丁基化羟基甲苯。
可以包括在眼科制剂中的其他赋形剂组分是螯合剂。有用的螯合剂是依地酸二钠，但也可以使用其它螯合剂替代依地酸二钠或与其结合使用。
对于局部使用，使用含有本文公开的化合物的乳膏、软膏、凝胶、溶液或悬浮液等。局部制剂通常可以包含药物载体、共溶剂、乳化剂、渗透增强剂、防腐剂体系和润肤剂。
对于静脉内施用，可以将本文所述的化合物和组合物溶解或分散在药学上可接受的稀释剂中，例如盐水或右旋糖溶液。可包含合适的赋形剂以达到所需的pH，包括但不限于NaOH、碳酸钠、乙酸钠、HCl和柠檬酸。在各种实施方案中，最终组合物的pH范围为2至8，或优选4至7。抗氧化剂赋形剂可包括亚硫酸氢钠、丙酮亚硫酸氢钠、甲醛钠、次硫酸盐(sulfoxylate)、硫脲和EDTA。在最终静脉内组合物中可见的合适赋形剂的其他非限制性实例可包括磷酸钠或磷酸钾、柠檬酸、酒石酸、明胶和碳水化合物如右旋糖、甘露糖醇和葡聚糖。其他可接受的赋形剂描述于Powell等人，Compendium of Excipients for ParenteralFormulations，PDA J Pharm Sci and Tech 1998，52 238-311和Nema et al.，Excipientsand Their Role in Approved Injectable Products：Current Usage and FutureDirections，PDA JPharm Sci and Tech 2011，65 287-332(均通过引用整体并入本文)。还可以包括抗微生物剂以获得抑制细菌或抑制真菌的溶液，包括但不限于硝酸苯汞、硫柳汞、苄索氯铵、苯扎氯铵、苯酚、甲酚和氯丁醇。
用于静脉内施用的组合物可以以一种或多种固体的形式提供给护理人员，在施用前不久用合适的稀释剂如无菌水、盐水或右旋糖使该固体在水中重构。在其他实施方案中，组合物以溶液形式提供，准备肠胃外施用。在其他实施方案中，组合物以溶液提供，该溶液在施用前进一步被稀释。在包括施用本文所述化合物和另一种药剂的组合的实施方案中，该组合可以作为混合物提供给护理人员，或者护理人员可以在施用前将这两种药剂混合，或者这两种药剂可以分开施用。
本文所述活性化合物的实际剂量取决于具体化合物和待治疗的病况；适当剂量的选择完全在技术人员的知识范围内。
如果需要，本文所述的化合物和组合物可以存在于包装或分配器装置中，其含有一个或多个含有活性成分的单位剂型。这种包装或装置可以例如包括金属或塑料箔如泡罩包装或玻璃以及橡胶塞如小瓶。包装或分配器装置可附有施用说明。将本文所述的化合物和组合物配制在相容性药物载体中，也可以制备、置于合适的容器中，并标记用于治疗指定的病况。
制剂中化合物的量可以在本领域技术人员使用的全部范围内变化。通常，以重量百分比(wt％)为基础，基于总制剂，制剂将包含约0.0199.99wt％的本技术的化合物，余量为一种或多种合适的药物赋形剂。优选地，化合物的存在水平为约180wt％。代表性的药物制剂描述如下。
制剂实施例
以下是含有式I化合物的代表性药物制剂。
制剂实施例1——片剂制剂
使以下成分紧密混合并压制成单刻痕片剂。
Figure BDA0002953643150000281
制剂实施例2——胶囊制剂
使以下成分紧密混合并装入硬壳明胶胶囊中。
Figure BDA0002953643150000282
制剂实施例3——悬浮液制剂
将以下成分混合以形成用于口服施用的悬浮液。
Figure BDA0002953643150000283
Figure BDA0002953643150000291
制剂实施例4——可注射制剂
将以下成分混合以形成可注射制剂。
Figure BDA0002953643150000292
制剂实施例5——栓剂制剂
通过将本技术的化合物与
Figure BDA0002953643150000293
H 15(饱和植物脂肪酸的甘油三酯；RichesNelson公司，纽约)混合来制备总重2.5g的栓剂，其具有以下组成：
Figure BDA0002953643150000294
化合物
在一些实施方案中，钙蛋白酶抑制剂可以选自具有式I的结构的化合物：
Figure BDA0002953643150000295
或其药学上可接受的盐，其中：
A1选自由以下组成的组：任选取代的5-10元杂环基、任选取代的5元、8元或9元杂芳基、和任选取代的C3-10碳环基，条件是所述5-10元杂环基不被氧代取代；
A2选自由以下组成的组：任选取代的3-10元杂环基、任选取代的C6-10芳基、任选取代的5-10元杂芳基和任选取代的C3-10碳环基、-CR2-、-S-、-S(＝O)-、-SO2-、-O-、-C(＝S)-、-C(＝O)-、-NR-、-CH＝CH-、-C≡C-、-OC(O)NH-、-NHC(O)NH-、-NHC(O)O-、-NHC(O)-、-NHC(S)NH-、-NHC(S)O-、-NHC(S)-和单键；
A4选自由以下组成的组：任选取代的C6-10芳基、任选取代的5-10元杂芳基、任选取代的3-10元杂环基、任选取代的C3-10碳环基、任选取代的C1-4烷基、-(CR2)n-S-(CR2)n-、-(CR2)n-S(＝O)-(CR2)n-、-(CR2)n-SO2-(CR2)n-、-(CR2)n-O-(CR2)n-、-(CR2)n-C(＝S)-(CR2)n-、-(CR2)n-C(＝O)-(CR2)n-、-(CR2)n-NR-(CR2)n-、-(CR2)n-CH＝CH-(CR2)n-、-(CR2)n-OC(O)NH-(CR2)n-、-(CR2)n-NHC(O)NH-(CR2)n-、-(CR2)n-NHC(O)O-(CR2)n-、-(CR2)n-NHC(O)-(CR2)n-、-(CR2)n-NHC(S)NH-(CR2)n-、-(CR2)n-NHC(S)O-(CR2)n-、-(CR2)n-NHC(S)-(CR2)n-和单键；
当A2和A4是单键时，A3直接连接至A8；
A3选自由以下组成的组：任选取代的C6-10芳基、任选取代的5-10元杂芳基、任选取代的3-10元杂环基和任选取代的C3-10碳环基，或者如果A2选自任选取代的3-10元杂环基、任选取代的C6-10芳基、任选取代的5-10元杂芳基和任选取代的C3-10碳环基，那么A3选自由以下组成的组：氢、任选取代的C6-10芳基、任选取代的5-10元杂芳基、任选取代的3-10元杂环基、任选取代的C3-10碳环基、-C≡CH和任选取代的2元至5元聚乙二醇；
A5选自由以下组成的组：任选取代的3-10元杂环基、任选取代的C6-10芳基、任选取代的5-10元杂芳基、任选取代的C3-10碳环基、任选取代的C1-8烷基、-S-、-S(＝O)-、-SO2-、-O-、-C(＝S)-、-C(＝O)-、-NR-、-CH＝CH-、-OC(O)NH-、-NHC(O)NH-、-NHC(O)O-、-NHC(O)-、-NHC(S)NH-、-NHC(S)O-、-NHC(S)-和单键；
A6选自由以下组成的组：任选取代的C6-10芳基、任选取代的5-10元杂芳基、任选取代的3-10元杂环基和任选取代的C3-10碳环基、任选取代的C1-8烷基、任选取代的C2-8烯基、任选取代的-O-C1-6烷基、任选取代的-O C2-6烯基、-OSO2CF3和任意天然或非天然氨基酸侧链；
A7选自由以下组成的组：任选取代的C6-10芳基、任选取代的5-10元杂芳基、任选取代的3-10元杂环基、任选取代的C3-10碳环基、任选取代的C1-8烷基、-S-、S(＝O)-、-SO2-、-O-、-C(＝S)-、-C(＝O)-、-NR-、-CH＝CH-、-OC(O)NH-、-NHC(O)NH-、-NHC(O)O-、-NHC(O)-、-NHC(S)NH-、-NHC(S)O-、-NHC(S)-和单键；
当A5和A7是单键时，A6直接连接至R8所连接的碳上；
A8是A1的环成员，并且选自由C、CH和N组成的组；
R8选自由以下组成的组：-COR1、-CN、-CH＝CHSO2R和-CH2NO2；
R1选自由以下组成的组：H、-OH、C1-4卤代烷基、-COOH、-CH2NO2、-C(＝O)NOR、-NH2、-CONR2R3、-CH(CH3)＝CH2、-CH(CF3)NR2R3、-C(F)＝CHCH2CH3、
Figure BDA0002953643150000311
Figure BDA0002953643150000312
R14是卤素；
每个R、R2和R3独立地选自-H、任选取代的
C1-4烷基、任选取代的C1-8烷氧基烷基、任选取代的2元至5元聚乙二醇、任选取代的C3-7碳环基、任选取代的5-10元杂环基、任选取代的C6-10芳基和任选取代的5-10元杂芳基；并且
R6独立地选自-H和任选取代的C1-4烷基。
在一些实施方案中，钙蛋白酶抑制剂可以选自具有式II的结构的化合物：
Figure BDA0002953643150000321
或其药学上可接受的盐，其中：
A1选自由以下组成的组：任选取代的5-10元杂环基，条件是所述6-10元杂环基不被氧代取代；任选取代的5元、8元或9元杂芳基；和任选取代的C3-10碳环基；
A2选自由以下组成的组：任选取代的3-10元杂环基、任选取代的C6-10芳基、任选取代的5-10元杂芳基、任选取代的C3-10碳环基、-CR2-、-S-、-S(＝O)-、-SO2-、-O-、-C(＝S)-、-C(＝O)-、-NR-、-CH＝CH-、-C≡C-、-OC(O)NH-、-NHC(O)NH-、-NHC(O)O-、-NHC(O)-、-NHC(S)NH-、-NHC(S)O-、-NHC(S)-和单键；
A4选自由以下组成的组：任选取代的C6-10芳基、任选取代的5-10元杂芳基、任选取代的3-10元杂环基、任选取代的C3-10碳环基、任选取代的C1-4烷基、-(CR2)n-S-(CR2)n-、-(CR2)n-S(＝O)-(CR2)n-、-(CR2)n-SO2-(CR2)n-、-(CR2)n-O-(CR2)n-、-(CR2)n-C(＝S)-(CR2)n-、-(CR2)n-C(＝O)-(CR2)n-、-(CR2)n-NR-(CR2)n-、-(CR2)n-CH＝CH-(CR2)n-、-(CR2)n-OC(O)NH-(CR2)n-、-(CR2)n-NHC(O)NH-(CR2)n-、-(CR2)n-NHC(O)O-(CR2)n-、-(CR2)n-NHC(O)-(CR2)n-、-(CR2)n-NHC(S)NH-(CR2)n-、-(CR2)n-NHC(S)O-(CR2)n-、-(CR2)n-NHC(S)-(CR2)n-和单键；
当A2和A4是单键时，A3直接连接至A8；
A3选自由以下组成的组：任选取代的C6-10芳基、任选取代的5-10元杂芳基、任选取代的3-10元杂环基和任选取代的C3-10碳环基，或者如果A2选自任选取代的3-10元杂环基、任选取代的C6-10芳基、任选取代的5-10元杂芳基和任选取代的C3-10碳环基，那么A3选自由以下组成的组：氢、任选取代的C6-10芳基、任选取代的5-10元杂芳基、任选取代的3-10元杂环基、任选取代的C3-10碳环基、-C≡CH和任选取代的2至5元聚乙二醇；
G是任选取代的C3至C7碳环基或任选取代的4元至7元杂环基；
A8是A1的环成员，并且选自由以下组成的组：C和N；
R8选自由以下组成的组：-COR1、-CN、-CH＝CHSO2R、-CH2NO2；
R1选自由以下组成的组：H、-OH、C1-4卤代烷基、-COOH、-CH2NO2、-C(＝O)NOR、-NH2、-CONR2R3、-CH(CH3)＝CH2、-CH(CF3)NR2R3、-C(F)＝CHCH2CH3、
Figure BDA0002953643150000331
Figure BDA0002953643150000332
R14是卤素；并且
每个R、R2和R3独立地选自-H、任选取代的C1-4烷基、任选取代的C1-8烷氧基烷基、任选取代的2元至5元聚乙二醇、任选取代的C3-7碳环基、任选取代的5-10元杂环基、任选取代的C6-10芳基、任选取代的C6-10芳基(C1-C6)烷基和任选取代的5-10元杂芳基；R6独立地选自-H和任选取代的C1-4烷基；并且每个n独立地选择为0至3的整数。
在一些实施方案中，钙蛋白酶抑制剂可以是具有式III的结构的化合物：
Figure BDA0002953643150000341
或其药学上可接受的盐，其中：
P2是任选取代的环状部分，其具有一定的大小和构型，使得在所述化合物与钙蛋白酶9结合时，P2的至少一个原子与至少一个钙蛋白酶9 P2口袋部分形成非极性相互作用并且在所述至少一个钙蛋白酶9 P2口袋部分的
Figure BDA0002953643150000342
或更近之内，所述至少一个钙蛋白酶9P2口袋部分选自由Gly190、Phe233、Gly253、His254和Ala255组成的组；
L1是键或由1至25个原子组成的部分，所述原子选自由碳、氧、氮、氢和硫组成的组；
P3是由L1定位的任选取代的环状部分，并且其具有一定的大小和构型，使得在所述化合物与钙蛋白酶9结合时，P3的至少一个原子与至少一个钙蛋白酶9 P3口袋部分形成非极性相互作用并在所述至少一个钙蛋白酶9 P3口袋部分的
Figure BDA0002953643150000345
Figure BDA0002953643150000346
或更近之内，所述至少一个钙蛋白酶9 P3口袋部分选自由Gly189、Gly190、Ser191、Thr236和Gly253组成的组；
R10是氧代并且由P2定位，使得当所述化合物与钙蛋白酶9结合时，R10与钙蛋白酶9Gly190酰胺形成极性相互作用并在所述钙蛋白酶9 Gly190酰胺的
Figure BDA0002953643150000343
或更近之内；
R11是氮，并且由与其键合的碳定位，使得当所述化合物与钙蛋白酶9结合时，R11与钙蛋白酶9 Gly253羰基形成极性相互作用并在所述钙蛋白酶9 Gly253羰基的
Figure BDA0002953643150000351
或更近之内；
L2是键或由1至25个原子组成的部分，所述原子选自由碳、氧、氮、氢和硫组成的组；
P1是由L2定位的部分，并且其具有一定的大小和构型，使得在所述化合物与钙蛋白酶9结合时，P1的至少一个原子与至少一个钙蛋白酶9 P1口袋部分形成非极性相互作用并在所述至少一个钙蛋白酶9 P1口袋部分的
Figure BDA0002953643150000352
或更近之内，所述至少一个钙蛋白酶9 P1口袋部分选自由Gly95、Lys188、Gly189和Ser242组成的组；
R9是由与其连接的碳定位的部分，使得在所述化合物与钙蛋白酶9结合时，R9的至少一个原子与至少一个钙蛋白酶9部分形成极性相互作用并在所述至少一个钙蛋白酶9部分的
Figure BDA0002953643150000353
或更近之内，所述至少一个钙蛋白酶9部分选自由Gln91、Cys97和His254组成的组；并且
R6选自-H和任选取代的C1-4烷基。
在一些实施方案中，钙蛋白酶抑制剂可以选自由以下组成的组：下表1a和1b中所列的化合物或其药学上可接受的盐。
表1a
Figure BDA0002953643150000361
Figure BDA0002953643150000371
Figure BDA0002953643150000381
Figure BDA0002953643150000391
Figure BDA0002953643150000401
Figure BDA0002953643150000411
Figure BDA0002953643150000421
Figure BDA0002953643150000431
Figure BDA0002953643150000441
Figure BDA0002953643150000451
Figure BDA0002953643150000461
Figure BDA0002953643150000471
Figure BDA0002953643150000481
Figure BDA0002953643150000491
Figure BDA0002953643150000501
Figure BDA0002953643150000511
Figure BDA0002953643150000521
Figure BDA0002953643150000531
Figure BDA0002953643150000541
Figure BDA0002953643150000551
Figure BDA0002953643150000561
Figure BDA0002953643150000571
Figure BDA0002953643150000581
Figure BDA0002953643150000591
Figure BDA0002953643150000601
Figure BDA0002953643150000611
Figure BDA0002953643150000621
Figure BDA0002953643150000631
Figure BDA0002953643150000641
Figure BDA0002953643150000651
Figure BDA0002953643150000661
Figure BDA0002953643150000671
Figure BDA0002953643150000681
Figure BDA0002953643150000691
Figure BDA0002953643150000701
表1b
Figure BDA0002953643150000711
Figure BDA0002953643150000721
Figure BDA0002953643150000731
Figure BDA0002953643150000741
Figure BDA0002953643150000751
Figure BDA0002953643150000761
Figure BDA0002953643150000771
Figure BDA0002953643150000781
Figure BDA0002953643150000791
Figure BDA0002953643150000801
Figure BDA0002953643150000811
Figure BDA0002953643150000821
Figure BDA0002953643150000831
Figure BDA0002953643150000841
Figure BDA0002953643150000851
Figure BDA0002953643150000861
Figure BDA0002953643150000871
Figure BDA0002953643150000881
Figure BDA0002953643150000891
Figure BDA0002953643150000901
Figure BDA0002953643150000911
Figure BDA0002953643150000921
Figure BDA0002953643150000931
Figure BDA0002953643150000941
Figure BDA0002953643150000951
Figure BDA0002953643150000961
Figure BDA0002953643150000971
Figure BDA0002953643150000981
Figure BDA0002953643150000991
Figure BDA0002953643150001001
Figure BDA0002953643150001011
Figure BDA0002953643150001021
Figure BDA0002953643150001031
Figure BDA0002953643150001041
Figure BDA0002953643150001051
Figure BDA0002953643150001061
Figure BDA0002953643150001071
Figure BDA0002953643150001081
Figure BDA0002953643150001091
Figure BDA0002953643150001101
Figure BDA0002953643150001111
Figure BDA0002953643150001121
Figure BDA0002953643150001131
Figure BDA0002953643150001141
Figure BDA0002953643150001151
Figure BDA0002953643150001161
Figure BDA0002953643150001171
Figure BDA0002953643150001181
Figure BDA0002953643150001191
Figure BDA0002953643150001201
Figure BDA0002953643150001211
Figure BDA0002953643150001221
Figure BDA0002953643150001231
Figure BDA0002953643150001241
Figure BDA0002953643150001251
Figure BDA0002953643150001261
Figure BDA0002953643150001271
Figure BDA0002953643150001281
Figure BDA0002953643150001291
Figure BDA0002953643150001301
Figure BDA0002953643150001311
Figure BDA0002953643150001321
Figure BDA0002953643150001331
Figure BDA0002953643150001341
Figure BDA0002953643150001351
Figure BDA0002953643150001361
Figure BDA0002953643150001371
Figure BDA0002953643150001381
Figure BDA0002953643150001391
Figure BDA0002953643150001401
Figure BDA0002953643150001411
Figure BDA0002953643150001421
Figure BDA0002953643150001431
Figure BDA0002953643150001441
Figure BDA0002953643150001451
Figure BDA0002953643150001461
Figure BDA0002953643150001471
Figure BDA0002953643150001481
Figure BDA0002953643150001491
Figure BDA0002953643150001501
Figure BDA0002953643150001511
Figure BDA0002953643150001521
Figure BDA0002953643150001531
Figure BDA0002953643150001541
Figure BDA0002953643150001551
Figure BDA0002953643150001561
Figure BDA0002953643150001571
Figure BDA0002953643150001581
Figure BDA0002953643150001591
Figure BDA0002953643150001601
Figure BDA0002953643150001611
Figure BDA0002953643150001621
Figure BDA0002953643150001631
式I-III和/或表1a和1b的化合物可以根据国际公开号WO 2018/064119(其全部内容通过引用并入本文)中描述的方法制备。
在本文提供的一些实施方案中，钙蛋白酶抑制剂可以是具有式IV的结构的化合物：
Figure BDA0002953643150001641
或其药学上可接受的盐，其中：
A1选自由以下组成的组：取代的C6-10芳基、任选取代的9-14元杂芳基、任选取代的9-14元杂环基和任选取代的9-14元碳环基，
其中当A1为取代的C6-10芳基时；所述芳基被一个或多个选自以下的部分取代：Cl、F、Br、Ph、乙炔基、环丙基、CN、羟基、苯基、任选地被卤素取代的C1-4烷基和任选地被卤素取代的C1-C6烷氧基；
A5选自由以下组成的组：任选取代的3-10元杂环基、任选取代的C6-10芳基、任选取代的5-10元杂芳基、任选取代的C3-10碳环基、任选取代的C1-8烷基、-S-、-S(＝O)-、-SO2-、-O-、-C(＝S)-、-C(＝O)-、-NR-、-CH＝CH-、-OC(O)NH-、-NHC(O)NH-、-NHC(O)O-、-NHC(O)-、-NHC(S)NH-、-NHC(S)O-、-NHC(S)-和单键；
A6选自由以下组成的组：任选取代的C6-10芳基、任选取代的5-10元杂芳基、任选取代的3-10元杂环基、任选取代的C3-10碳环基、任选取代的C1-8烷基、任选取代的-O-C1-6烷基、任选取代的-OC2-6烯基和任意天然或非天然氨基酸侧链；
A7选自由以下组成的组：任选取代的C6-10芳基、任选取代的5-10元杂芳基、任选取代的3-10元杂环基、任选取代的C3-10碳环基、任选取代的C1-8烷基、-S-、S(＝O)-、-SO2-、-O-、-C(＝S)-、-C(＝O)-、-NR-、-CH＝CH-、-OC(O)NH-、-NHC(O)NH-、-NHC(O)O-、-NHC(O)-、-NHC(S)NH-、-NHC(S)o-、-NHC(S)-和单键；
当A5和A7是单键时，A6直接连接至R8所连接的碳上；
R8选自由以下组成的组：-COR1、-CN、-CH＝CHSO2R、-CH2NO2；
R1选自由以下组成的组：H、-OH、C1-4卤代烷基、-COOH、-CH2NO2、-C(＝O)NOR、-NH2、-CONR2R3、-CH(CH3)＝CH2、-CH(CF3)NR2R3、-C(F)＝CHCH2CH3、
Figure BDA0002953643150001651
Figure BDA0002953643150001652
Figure BDA0002953643150001653
并且
每个R、R2和R3独立地选自：-H、任选地被一个或多个R13取代的C1-4烷基、任选取代的C3-7碳环基、任选取代的5-10元杂环基、任选取代的C6-10芳基和任选取代的5-10元杂芳基；并且
R6独立地选自-H和任选取代的C1-4烷基；并且
R13独立地选自：C1-C6烷基、C1-C6烯基、C1-C6炔基、C1-C6杂烷基、C3-C7碳环基(任选地被卤素、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6卤代烷基和C1-C6卤代烷氧基取代)、C3-C7-碳环基-C1-C6-烷基(任选地被卤素、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6卤代烷基和C1-C6卤代烷氧基取代)、5-10元杂环基(任选地被卤素、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6卤代烷基和C1-C6卤代烷氧基取代)、5-10元杂环基-C1-C6-烷基(任选地被卤素、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6卤代烷基和C1-C6卤代烷氧基取代)、芳基(任选地被卤素、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6卤代烷基和C1-C6卤代烷氧基取代)、芳基(C1-C6)烷基(任选地被卤素、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6卤代烷基和、C1-C6卤代烷氧基取代)、5-10元杂芳基(任选地被卤素、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6卤代烷基和C1-C6卤代烷氧基取代)、5-10元杂芳基(C1-C6)烷基(任选地被卤素、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6卤代烷基和C1-C6卤代烷氧基取代)、卤素、氰基、羟基、C1-C6烷氧基、C1-C6烷氧基(C1-C6)烷基(即醚)、芳氧基、硫氢基(巯基)、卤代(C1-C6)烷基(例如-CF3)、卤代(C1-C6)烷氧基(例如-OCF3)、C1-C6烷硫基、芳硫基、氨基、氨基(C1-C6)烷基、硝基、O-氨基甲酰基、N-氨基甲酰基、O-硫代氨基甲酰基、N-硫代氨基甲酰基、C-酰氨基、N-酰氨基、S-磺酰氨基、C-羧基、O-羧基、酰基、氰酰基、异氰酰基、硫酰基、异硫酰基、亚磺酰基、磺酰基和氧基(＝O)。
在一些实施方案中，钙蛋白酶抑制剂可以选自由以下组成的组：下表2中所列的化合物或其药学上可接受的盐。
表2
Figure BDA0002953643150001661
Figure BDA0002953643150001671
Figure BDA0002953643150001681
Figure BDA0002953643150001691
Figure BDA0002953643150001692
或其药学上可接受的盐。
式IV和/或表2的化合物可以根据本文提供的实施例中描述的方法制备。
在一些实施方案中，钙蛋白酶抑制剂可以是具有式V的结构的化合物：
Figure BDA0002953643150001693
或其药学上可接受的盐，其中：
A1选自由以下组成的组：任选取代的5-10元杂环基；任选取代的5元、8元或9元杂芳基；和任选取代的C3-10碳环基；
A2选自由以下组成的组：任选取代的3-10元杂环基、任选取代的C6-10芳基、任选取代的5-10元杂芳基、任选取代的C3-10碳环基、-CR2-、-S-、-S(＝O)-、-SO2-、-O-、-C(＝S)-、-C(＝O)-、-NR-、-CH＝CH-、-C≡C-、-OC(O)NH-、-NHC(o)NH-、-NHC(O)o-、-NHC(O)-、-NHC(S)NH-、-NHC(S)O-、-NHC(S)-和单键；
A4选自由以下组成的组：任选取代的C6-10芳基、任选取代的5-10元杂芳基、任选取代的3-10元杂环基、任选取代的C3-10碳环基、任选取代的C1-4烷基、-(CR2)n-S-(CR2)n-、-(CR2)n-S(＝O)-(CR2)n-、-(CR2)n-So2-(CR2)n-、-(CR2)n-O-(CR2)n-、-(CR2)n-C(＝S)-(CR2)n-、-(CR2)n-C(＝O)-(CR2)n-、-(CR2)n-NR-(CR2)n-、-(CR2)n-CH＝CH-(CR2)n-、-(CR2)n-OC(O)NH-(CR2)n-、-(CR2)n-NHC(O)NH-(CR2)n-、-(CR2)n-NHC(O)O-(CR2)n-、-(CR2)n-NHC(O)-(CR2)n-、-(CR2)n-NHC(S)NH-(CR2)n-、-(CR2)n-NHC(S)O-(CR2)n-、-(CR2)n-NHC(S)-(CR2)n-和单键；
当A2和A4是单键时，A3直接连接至A8；
A3选自由以下组成的组：任选取代的C6-10芳基、任选取代的5-10元杂芳基、任选取代的3-10元杂环基和任选取代的C3-10碳环基，或者如果A2选自任选取代的3-10元杂环基、任选取代的C6-10芳基、任选取代的5-10元杂芳基和任选取代的C3-10碳环基，那么A3选自由以下组成的组：氢、任选取代的C6-10芳基、任选取代的5-10元杂芳基、任选取代的3-10元杂环基、任选取代的C3-10碳环基、-C≡CH和任选取代的2至5元聚乙二醇；
A5选自由以下组成的组：任选取代的3-10元杂环基、任选取代的C6-10芳基、任选取代的5-10元杂芳基、任选取代的C3-10碳环基、任选取代的C1-8烷基、-S-、-S(＝O)-、-SO2-、-O-、-C(S)-、-C(＝O)-、-NR-、-CH＝CH-、-OC(O)NH-、-NHC(O)NH-、-NHC(O)O-、-NHC(O)-、-NHC(S)NH-、-NHC(S)O-、-NHC(S)-和单键；
A6选自由以下组成的组：任选取代的C6-10芳基、任选取代的5-10元杂芳基、任选取代的3-10元杂环基、任选取代的C3-10碳环基、任选取代的C1-8烷基、任选取代的C2-8烯基、任选取代的-O-C1-6烷基、任选取代的-O C2-6烯基、-OSO2CF3和任意天然或非天然氨基酸侧链；
A7选自由以下组成的组：任选取代的C6-10芳基、任选取代的5-10元杂芳基、任选取代的3-10元杂环基、任选取代的C3-10碳环基、任选取代的C1-8烷基、-S-、S(＝O)-、-SO2-、-O-、-C(＝S)-、-C(＝O)-、-NR-、-CH＝CH-、-OC(O)NH-、-NHC(O)NH-、-NHC(O)o-、-NHC(O)-、-NHC(S)NH-、-NHC(S)O-、-NHC(S)-和单键；
当A5和A7是单键时，A6直接连接至R8所连接的碳上；
A8是A1的环成员，并且选自由以下组成的组：C和N；
R独立地选自-H、卤素、任选取代的C1-4烷基、任选取代的C1-8烷氧基烷基、任选取代的2至5元聚乙二醇、任选取代的C3-7碳环基、任选取代的5-10元杂环基、任选取代的C6-10芳基、任选取代的C6-10芳基(C1-C6)烷基和任选取代的5-10元杂芳基；
R2独立地选自-H、任选取代的C1-4烷基、任选取代的C1-8烷氧基烷基、任选取代的2至5元聚乙二醇、任选取代的C3-7碳环基、任选取代的5-10元杂环基、任选取代的C6-10芳基和任选取代的C6-10芳基(C1-C6)烷基；
R6独立地选自-H和任选取代的C1-4烷基；并且
每个n独立地选择为0至3的整数。
在一些实施方案中，钙蛋白酶抑制剂可以是具有式VI的结构的化合物：
Figure BDA0002953643150001711
或其药学上可接受的盐，其中：
A5选自由以下组成的组：任选取代的3-10元杂环基、任选取代的C6-10芳基、任选取代的5-10元杂芳基、任选取代的C3-10碳环基、任选取代的C1-8烷基、-S-、-S(＝O)-、-SO2-、-O-、-C(＝S)-、-C(＝O)-、-NR-、-CH＝CH-、-OC(O)NH-、-NHC(O)NH-、-NHC(O)O-、-NHC(O)-、-NHC(S)NH-、-NHC(S)O-、-NHC(S)-和单键；
A6选自由以下组成的组：任选取代的C6-10芳基、任选取代的5-10元杂芳基、任选取代的3-10元杂环基、任选取代的C3-10碳环基、任选取代的C1-8烷基、任选取代的C2-8烯基、任选取代的-O-C1-6烷基、任选取代的-O C2-6烯基、-OSO2CF3和任意天然或非天然氨基酸侧链；
A7选自由以下组成的组：任选取代的C6-10芳基、任选取代的5-10元杂芳基、任选取代的3-10元杂环基、任选取代的C3-10碳环基、任选取代的C1-8烷基、-S-、S(＝O)-、-SO2-、-O-、-C(＝S)-、-C(＝O)-、-NR-、-CH＝CH-、-OC(O)NH-、-NHC(O)NH-、-NHC(O)O-、-NHC(O)-、-NHC(S)NH-、-NHC(S)O-、-NHC(S)-和单键；
当A5和A7是单键时，A6直接连接至R6所连接的碳上；
Y选自由以下组成的组：NR5和S；
X和Z各自独立地选自由以下组成的组：C(R4)和N；
J选自由以下组成的组：O和S；
每个R4独立地选自由以下组成的组：-H、C1-4烷基、C1-4卤代烷基、C3-7碳环基(任选地被卤素、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6卤代烷基和C1-C6卤代烷氧基取代)、卤素、羟基和C1-C6烷氧基；并且
R5选自由以下组成的组：-H、C1-4烷基、C1-4卤代烷基和C3-7碳环基(任选地被卤素、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6卤代烷基和C1-C6卤代烷氧基取代)；
R1选自由以下组成的组：H、-OH、-COOR2、C1-4卤代烷基、-COOH、-CH2NO2、-C(＝O)NOR、-NH2、-CONR2R3、-CH(CH3)＝CH2、-CH(CF3)NR2R3、-C(F)＝CHCH2CH3、
Figure BDA0002953643150001721
Figure BDA0002953643150001722
R14是卤素；
每个R、R2和R3独立地选自-H、任选取代的C1-4烷基、任选取代的C1-8烷氧基烷基、任选取代的2至5元聚乙二醇、任选取代的C3-7碳环基、任选取代的5-10元杂环基、任选取代的C6-10芳基、任选取代的C6-10芳基(C1-C6)烷基和任选取代的5-10元杂芳基；
R6独立地选自-H和任选取代的C1-4烷基；并且
每个n独立地选择为0至3的整数；并且其中化合物不选自由以下组成的组：
Figure BDA0002953643150001731
Figure BDA0002953643150001732
在一些实施方案中，钙蛋白酶抑制剂可以是具有式VII的结构的化合物，
Figure BDA0002953643150001733
或其药学上可接受的盐，其中：
A5选自由以下组成的组：任选取代的3-10元杂环基、任选取代的C6-10芳基、任选取代的5-10元杂芳基、任选取代的C3-10碳环基、任选取代的C1-8烷基、-S-、-S(＝O)-、-SO2-、-O-、-C(＝S)-、-C(＝O)-、-NR-、-CH＝CH-、-OC(O)NH-、-NHC(O)NH-、-NHC(O)O-、-NHC(O)-、-NHC(S)NH-、-NHC(S)O-、-NHC(S)-和单键；
A6选自由以下组成的组：任选取代的C6-10芳基、任选取代的5-10元杂芳基、任选取代的3-10元杂环基、任选取代的C3-10碳环基、任选取代的C1-8烷基、任选取代的C2-8烯基、任选取代的-O-C1-6烷基、任选取代的-O C2-6烯基、-OSO2CF3和任意天然或非天然氨基酸侧链；
A7选自由以下组成的组：任选取代的C6-10芳基、任选取代的5-10元杂芳基、任选取代的3-10元杂环基、任选取代的C3-10碳环基、任选取代的C1-8烷基、-S-、S(＝O)-、-SO2-、-O-、-C(＝S)-、-C(＝O)-、-NR-、-CH＝CH-、-OC(O)NH-、-NHC(O)NH-、-NHC(O)O-、-NHC(O)-、-NHC(S)NH-、-NHC(S)O-、-NHC(S)-和单键；
当A5和A7是单键时，A6直接连接至R6所连接的碳上；
Y选自由以下组成的组：NR5和S；
X和z各自独立地选自由以下组成的组：C(R4)和N；
J选自由以下组成的组：O和S；
每个R4独立地选自由以下组成的组：-H、C1-4烷基、C1-4卤代烷基、C3-7碳环基(任选地被卤素、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6卤代烷基和C1-C6卤代烷氧基取代)、卤素、羟基和C1-C6烷氧基；并且
R5选自由以下组成的组：-H、C1-4烷基、C1-4卤代烷基和C3-7碳环基(任选地被卤素、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6卤代烷基和C1-C6卤代烷氧基取代)；
R1选自由以下组成的组：H、-OH、-COOR2、C1-4卤代烷基、-COOH、-CH2NO2、-C(＝O)NOR、-NH2、-CONR2R3、-CH(CH3)＝CH2、-CH(CF3)NR2R3、-C(F)＝CHCH2CH3、
Figure BDA0002953643150001741
Figure BDA0002953643150001742
Figure BDA0002953643150001751
R14是卤素；
每个R、R2和R3独立地选自-H、任选取代的C1-4烷基、任选取代的C1-8烷氧基烷基、任选取代的2至5元聚乙二醇、任选取代的C3-7碳环基、任选取代的5-10元杂环基、任选取代的C6-10芳基、任选取代的C6-10芳基(C1-C6)烷基和任选取代的5-10元杂芳基；
R6独立地选自-H和任选取代的C1-4烷基；并且
每个n独立地选择为0至3的整数；并且其中化合物不选自由以下组成的组：
Figure BDA0002953643150001752
Figure BDA0002953643150001753
在一些实施方案中，钙蛋白酶抑制剂可以是具有式VIII的结构的化合物：
Figure BDA0002953643150001754
或其药学上可接受的盐，其中：
A5选自由以下组成的组：任选取代的3-10元杂环基、任选取代的C6-10芳基、任选取代的5-10元杂芳基、任选取代的C3-10碳环基、任选取代的C1-8烷基、S-、-S(＝O)-、-SO2-、-O-、-C(＝S)-、-C(＝O)-、-NR-、-CH＝CH-、-OC(O)NH-、-NHC(O)NH-、-NHC(O)O-、-NHC(O)-、-NHC(S)NH-、-NHC(S)O-、-NHC(S)-和单键；
A6选自由以下组成的组：任选取代的C6-10芳基、任选取代的5-10元杂芳基、任选取代的3-10元杂环基、任选取代的C3-10碳环基、任选取代的C1-8烷基、任选取代的C2-8烯基、任选取代的-O-C1-6烷基、任选取代的-O C2-6烯基、-OSO2CF3和任意天然或非天然氨基酸侧链；
A7选自由以下组成的组：任选取代的C6-10芳基、任选取代的5-10元杂芳基、任选取代的3-10元杂环基、任选取代的C3-10碳环基、任选取代的C1-8烷基、-S-、S(＝O)-、-SO2-、-O-、-C(＝S)-、-C(＝O)-、-NR-、-CH＝CH-、-OC(O)NH-、-NHC(O)NH-、-NHC(O)O-、-NHC(O)-、-NHC(S)NH-、-NHC(S)O-、-NHC(S)-和单键；
当A5和A7是单键时，A6直接连接至R6所连接的碳上；
Y选自由以下组成的组：NR5、O、S和SO2；
X和Z各自独立地选自由以下组成的组：C(R4)和N；
J选自由以下组成的组：O和S；
每个R4独立地选自由以下组成的组：-H、C1-4烷基、C1-4卤代烷基、C3-7碳环基(任选地被卤素、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6卤代烷基和C1-C6卤代烷氧基取代)、卤素、羟基和C1-C6烷氧基；并且
R5选自由以下组成的组：-H、C1-4烷基、C1-4卤代烷基和C3-7碳环基(任选地被卤素、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6卤代烷基和C1-C6卤代烷氧基取代)；
R1选自由以下组成的组：H、-OH、-COOR2、C1-4卤代烷基、-COOH、-CH2NO2、-C(＝O)NOR、-NH2、-CONR2R3、-CH(CH3)＝CH2、-CH(CF3)NR2R3、-C(F)＝CHCH2CH3、
Figure BDA0002953643150001771
Figure BDA0002953643150001772
R14是卤素；
每个R、R2和R3独立地选自-H、任选取代的C1-4烷基、任选取代的C1-8烷氧基烷基、任选取代的2至5元聚乙二醇、任选取代的C3-7碳环基、任选取代的5-10元杂环基、任选取代的C6-10芳基、任选取代的C6-10芳基(C1-C6)烷基和任选取代的5-10元杂芳基；
R6独立地选自-H和任选取代的C1-4烷基；并且
每个n独立地选择为0至3的整数。
在一些实施方案中，钙蛋白酶抑制剂可以是具有式IX的结构的化合物：
Figure BDA0002953643150001773
或其药学上可接受的盐，其中：
A5选自由以下组成的组：任选取代的3-10元杂环基、任选取代的C6-10芳基、任选取代的5-10元杂芳基、任选取代的C3-10碳环基、任选取代的C1-8烷基、-S-、-S(＝O)-、-SO2-、-O-、-C(＝S)-、-C(＝O)-、-NR-、-CH＝CH-、-OC(O)NH-、-NHC(O)NH-、-NHC(O)O-、-NHC(O)-、-NHC(S)NH-、-NHC(S)O-、-NHC(S)-和单键；
A6选自由以下组成的组：任选取代的C6-10芳基、任选取代的5-10元杂芳基、任选取代的3-10元杂环基、任选取代的C3-10碳环基、任选取代的C1-8烷基、任选取代的C2-8烯基、任选取代的-O-C1-6烷基、任选取代的-O C2-6烯基、-OSO2CF3和任意天然或非天然氨基酸侧链；
A7选自由以下组成的组：任选取代的C6-10芳基、任选取代的5-10元杂芳基、任选取代的3-10元杂环基、任选取代的C3-10碳环基、任选取代的C1-8烷基、-S-、S(＝O)-、-SO2-、-O-、-C(＝S)-、-C(＝O)-、-NR-、-CH＝CH-、-OC(O)NH-、-NHC(O)NH-、-NHC(O)O-、-NHC(O)-、-NHC(S)NH-、-NHC(S)O-、-NHC(S)-和单键；
当A5和A7是单键时，A6直接连接至R6所连接的碳上；
Y选自由以下组成的组：NR5、O、S和SO2；
X和Z各自独立地选自由以下组成的组：C(R4)和N；
J选自由以下组成的组：O和S；
每个R4独立地选自由以下组成的组：-H、C1-4烷基、C1-4卤代烷基、C3-7碳环基(任选地被卤素、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6卤代烷基和C1-C6卤代烷氧基取代)、卤素、羟基和C1-C6烷氧基；并且
R5选自由以下组成的组：-H、C1-4烷基、C1-4卤代烷基和C3-7碳环基(任选地被卤素、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6卤代烷基和C1-C6卤代烷氧基取代)；
R1选自由以下组成的组：H、-OH、-COOR2、C1-4卤代烷基、-COOH、-CH2NO2、-C(＝O)NOR、-NH2、-CONR2R3、-CH(CH3)＝CH2、-CH(CF3)NR2R3、-C(F)＝CHCH2CH3、
Figure BDA0002953643150001781
Figure BDA0002953643150001782
Figure BDA0002953643150001791
R14是卤素；
每个R、R2和R3独立地选自-H、任选取代的C1-4烷基、任选取代的C1-8烷氧基烷基、任选取代的2至5元聚乙二醇、任选取代的C3-7碳环基、任选取代的5-10元杂环基、任选取代的C6-10芳基、任选取代的C6-10芳基(C1-C6)烷基和任选取代的5-10元杂芳基；
R6独立地选自-H和任选取代的C1-4烷基；并且
每个n独立地选择为0至3的整数。
在一些实施方案中，钙蛋白酶抑制剂可以选自由以下组成的组：下表4中所列的化合物或其药学上可接受的盐。
表4
Figure BDA0002953643150001792
Figure BDA0002953643150001801
Figure BDA0002953643150001811
Figure BDA0002953643150001821
Figure BDA0002953643150001831
Figure BDA0002953643150001841
Figure BDA0002953643150001851
Figure BDA0002953643150001861
式V-IX和/或表4的化合物可以根据本文提供的实施例中描述的方法制备。
在一些实施方案中，本文提供了治疗选自以下的疾病或病症的方法：原发性硬化性胆管炎、原发性胆汁性胆管炎、非酒精性脂肪肝病、非酒精性脂肪性肝炎和肝硬化；所述方法包括向有此需要的受试者施用一种或多种钙蛋白酶抑制剂。
在一些实施方案中，肝硬化是由选自以下的一种或多种病症引起的：酒精性肝病、α-1抗胰蛋白酶缺乏症、自身免疫性肝炎、乳糜泻、慢性病毒性肝炎、血色素沉着症、特发性门脉纤维化和威尔逊疾病(Wilson disease)。
在一些实施方案中，所述一种或多种钙蛋白酶抑制剂可以是本文公开的化合物。在一些实施方案中，所述一种或多种钙蛋白酶抑制剂可以是式I、II、III、IV、V、VI、VII、VIII或IX中的任何一种的化合物。在一些实施方案中，钙蛋白酶抑制剂可以是式I的化合物。在一些实施方案中，钙蛋白酶抑制剂可以是式II的化合物。在一些实施方案中，钙蛋白酶抑制剂可以是式III的化合物。在一些实施方案中，钙蛋白酶抑制剂可以是式IV的化合物。在一些实施方案中，钙蛋白酶抑制剂可以是式V的化合物。在一些实施方案中，钙蛋白酶抑制剂可以是式VI的化合物。在一些实施方案中，钙蛋白酶抑制剂可以是式VII的化合物。在一些实施方案中，钙蛋白酶抑制剂可以是式VIII的化合物。在一些实施方案中，钙蛋白酶抑制剂可以是式IX的化合物。
在一些实施方案中，钙蛋白酶抑制剂可以是表1a、1b、2、3和4中任一个所列的化合物。在一些实施方案中，钙蛋白酶抑制剂可以是表1a或1b中列出的化合物。在一些实施方案中，钙蛋白酶抑制剂可以是表2中列出的化合物。在一些实施方案中，钙蛋白酶抑制剂可以是表3中列出的化合物。在一些实施方案中，钙蛋白酶抑制剂可以是表4中列出的化合物。
在一些实施方案中，钙蛋白酶抑制剂可以选自由以下组成的组：
Figure BDA0002953643150001871
Figure BDA0002953643150001881
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，钙蛋白酶抑制剂可以选自由以下组成的组：
Figure BDA0002953643150001882
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，钙蛋白酶抑制剂可以选自由以下组成的组：
Figure BDA0002953643150001891
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述一种或多种钙蛋白酶抑制剂可以与选自以下的一种或多种另外的剂组合施用：VAP-1抑制剂、ASBT抑制剂、双重CCR2/5拮抗剂、抗胆汁性胆汁酸、FXR激动剂、FGFR1c/4激动剂、间充质干细胞(MSC)细胞疗法、CCL24抑制剂和CCL11抑制剂。在一些实施方案中，一种或多种钙蛋白酶抑制剂和一种或多种另外的前述剂可用于治疗受试者的原发性硬化性胆管炎。
在一些实施方案中，钙蛋白酶抑制剂可以与选自以下的一种或多种另外的剂组合施用：奥贝胆酸、elafibranor、cenicriviroc、selonsertib、烟酸受体激动剂、SGLT2抑制剂、VAP-1抑制剂、FGF21模拟物、腺甙A3受体激动剂、mTOT调节剂、FXR激动剂、半乳糖凝集素-3抑制剂、ABCA1激活剂、SCD1抑制剂、ACC抑制剂、I型NKT-细胞抑制剂、pan-PPAR激动剂、DGAT2抑制剂、PPARα激动剂、甲状腺激素R-b激动剂、5-LO/LT抑制剂、盐皮质激素受体拮抗剂、FGF19模拟物、半胱天冬酶抑制剂、GLP-1R激动剂、SIRT1/AMP激动剂、ACC抑制剂、己酮糖激酶抑制剂、GLP-1R激动剂、ASBT抑制剂、DGAT2/CYP2E1抑制剂、TLR4拮抗剂、甲状腺激素R-b激动剂、IFN-γ受体拮抗剂、CB1拮抗剂、FGF21配体、P2Y13受体激动剂、CCL24抑制剂、MCH受体-1拮抗剂、aPPARα、δ激动剂、DPP-4抑制剂、aLXR拮抗剂、GLP1R激动剂、嗜酸性粒细胞趋化因子-1抑制剂、β-klotho/FGFR1c激动剂、LOXL2抑制剂、AMPK激活剂、miR-103/107抑制剂、炎性小体抑制剂、CD3拮抗剂和组织蛋白酶B抑制剂。在一些实施方案中，一种或多种钙蛋白酶抑制剂和一种或多种另外的前述剂可用于治疗受试者的非酒精性脂肪性肝炎(NASH)。
出于说明目的，包括以下示例。当然，不应将这些示例理解为具体限制本公开的范围。在权利要求范围内的这些实施例的变化在本领域技术人员的知识范围内，并且被认为落入本文所述和要求保护的本发明的范围内。读者将认识到，具备本公开内容的技术人员和本领域技术人员能够在没有详尽实施例的情况下制备和使用本文公开的主题。以下实施例将进一步描述本发明，并且仅用于说明的目的，不应视为限制。
实施例
对于本领域技术人员显而易见的是，制备前体的方法和与本文要求保护的化合物相关的官能团通常在文献中描述。在这些反应中，还可以使用本领域普通技术人员已知的变体，但这些变体没有更详细地提及。被给予文献和本公开内容的本领域技术人员可以很好地制备任意化合物。
应该认识到，有机化学领域的技术人员可以在没有进一步指导的情况下容易地进行操作，也就是说，进行这些操作完全在本领域技术人员的范围和实践范围内。这些包括将羰基化合物还原成它们相应的醇、氧化、酰化、(亲电和亲核)芳族取代、醚化、酯化和皂化等。这些操作在标准文件中有讨论，例如March Advanced Organic Chemistry(Wiley)，Carey and Sundberg，Advanced Organic Chemistry(通过引用整体并入本文)等。除非另有说明，否则本发明的所有中间体化合物无需进一步纯化即可使用。
本领域技术人员将容易理解，当在分子中掩蔽或保护其他官能团时，某些反应能够最佳地进行，从而避免任何不希望的副反应和/或增加反应的收率。本领域技术人员通常利用保护基团来实现这种收率增加或避免不希望的反应。这些反应可在文献中找到，并且也在本领域技术人员的范围内。许多这些操作的实例可以在例如T.Greene和P.WutsProtecting Groups in Organic Synthesis，第4版，John Wiley&Sons(2007)中找到，其通过引用整体并入本文。
提供了以下实施例方案用于指导读者，并且代表制备本文示例的化合物的优选方法。这些方法不是限制性的，并且显然可以采用其他途径来制备这些化合物。这些方法具体包括基于固相的化学，包括组合化学。本领域技术人员完全具备通过文献和本公开内容给出的那些方法制备这些化合物的方法。下面描述的合成方案中使用的化合物编号仅适用于那些特定方案，并且不应将其解释为本申请其他部分中的相同编号或与之混淆。
本文使用的商标仅是示例，并且反映了在本发明时使用的示例性材料。技术人员将认识到，预期在批次、制造过程等中存在变化。因此，实施例和其中使用的商标是非限制性的，并且它们不旨在限制，而仅仅是本领域技术人员如何选择执行本发明的一个或多个实施方案的示例。
以下缩写具有指示的含义：
DCM＝二氯甲烷
DIEA＝N，N-二异丙基乙胺
DIPEA＝N，N-二异丙基乙胺
DMF＝N，N-二甲基甲酰胺
DMP＝戴斯-马丁试剂(DessMartinPeriodinane)
DNs＝二硝基磺酰基
ESBL＝超广谱β-内酰胺酶
EtOAc＝乙酸乙酯
EA＝乙酸乙酯
FCC＝快速柱色谱
FDPP五氟苯基二苯基次膦酸酯
HATU＝2-(7-氮杂-1H-苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲六氟磷酸盐
MeCN＝乙腈
NMR＝核磁共振
PE＝石油醚
Prep＝制备型
Py＝吡啶
Sat.＝饱和水溶液
TBDMSCl＝叔丁基二甲基甲硅烷基氯
TBS＝叔丁基二甲基甲硅烷基
TFA＝三氟乙酸
THF＝四氢呋喃
TLC＝薄层色谱
提供以下实施例方案用于指导读者，并共同代表制备本文所涵盖的化合物的实例方法。此外，根据以下反应方案和实施例，本领域普通技术人员将容易明白制备本文所述化合物的其他方法。除非另有说明，否则所有变体如上所定义。
实施例部分I、II和III具有独立编号的实施例和化合物编号。在实施例部分I、II和III的任何部分中提及的化合物编号或实施例编号是指该特定部分的化合物和实施例。
实施例部分I
实施例1
(S)-N-(4-氨基-3，4-二氧杂-1-苯基丁-2-基)-2，6-二氯苯甲酰胺(1)
Figure BDA0002953643150001931
向化合物2，6-二氯苯甲酸(300mg，1.57mmol)和化合物1A(366.1mg，1.59mmol)的DMF(8mL)溶液中加入HBTU(714.8mg，1.88mmol)。将混合物在25℃下搅拌0.1小时，然后加入DIEA(204.9mg，1.59mmol)。将所得混合物在25℃下搅拌1小时。反应混合物用EtOAc(100mL)稀释，依次用1NHC1(20mL)、饱和NaHCO3(50mLx2)、水(50mL)和盐水(50mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩，得到粉红色固体，将其通过与DCM(1mL)和PE(10mL)的混合物一起研磨而纯化，得到化合物1B(380mg，产率：65.91％)，为浅粉红色固体。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.67-8.32(m，1H)，7.42-7.25(m，6H)，7.23-7.09(m，4H)，5.78-5.71(m，1H)，4.64-4.40(m，1H)，4.14-4.07(m，0.7H)，3.79-3.75(m，0.4H)，2.88-2.76(m，1H)，2.65-2.57(m，1H)。
在N2下，向化合物1B(100mg，272.3μmol)在DCM(15mL)和DMSO(1mL)中的混合物中一次性加入DMP(808.5mg，1.91mmol)，然后将混合物在25℃下搅拌1小时。将混合物用饱和NaHCO3(15mL)和饱和Na2S2O3(15mL)淬灭。将混合物搅拌0.5小时，用二氯甲烷(50mL)稀释。将有机层用水(20mL×2)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩，得到白色固体，将其通过与2-异丙氧基丙烷(5mL)研磨而纯化，得到化合物1(60mg，收率：60.33％)，为白色固体。1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.20(d，J＝7.6Hz，1H)，8.17(s，1H)，7.89(s，1H)，7.47-7.39(m，3H)，7.33-7.27(m，4H)，7.25-7.19(m，1H)，5.58-5.50(m，1H)，3.24-3.17(m，1H)，2.84-2.74(m，1H).MS(ESI)m/z(M+1)+364.9。
实施例2
(S)-2，6-二氯-N-(4-(环丙基氨基)-3，4-二氧杂-1-苯基丁-2-基)苯甲酰胺(2)
Figure BDA0002953643150001941
按照实施例1的方法，使用相应的中间体2A和2，6-二氯苯甲酸制备化合物2。1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.23(d，J＝7.6Hz，1H)，8.89(d，J＝5.2Hz，1H)，7.45-7.36(m，3H)，7.31-7.25(m，4H)，7.22-7.18(m，1H)，5.53-5.42(m，1H)，3.22-3.15(m，1H)，2.81-2.74(m，2H)，0.69-0.58(m，4H).MS(ESI)m/z(M+1)+405.1。
实施例3
(S)-N-(4-氨基-3，4-二氧杂-1-苯基丁-2-基)-2，4，6-三氟苯甲酰胺(3)
Figure BDA0002953643150001951
按照实施例1的方法，使用相应的中间体1A和2，4，6-三氟苯甲酸制备化合物3。1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.19(d，J＝7.5Hz，1H)，8.14(s，1H)，7.86(s，1H)，7.30-7.19(m，7H)，5.41-5.34(m，1H)，3.17(dd，J＝3.4，14.0Hz，1H)，2.75(dd，J＝10.0，14.0Hz，1H).MS(ESI)m/z(M+H)+351.1。
实施例4
(S)-N-(4-氨基-3，4-二氧杂-1-苯基丁-2-基)-4-氟苯甲酰胺(4)
Figure BDA0002953643150001952
按照实施例1的方法，使用相应的中间体1A和4-氟苯甲酸制备化合物4。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.89(br d，J＝7.0Hz，1H)，8.09(br s，1H)，7.90-7.78(m，3H)，7.35-7.18(m，7H)，5.35(br s，1H)，3.21(br d，J＝11.5Hz，1H)，2.96-2.85(m，1H).MS(ESI)m/z(M+H)+315.1。
实施例5
N-(4-氨基-3，4-二氧杂-1-苯基丁-2-基)-9H-氧杂蒽-9-甲酰胺(5)
Figure BDA0002953643150001961
化合物5A(250mg，1.11mmol)和化合物1A(305.9mg，1.33mmol，HCl)在DMF(3mL)中的混合物中添加HBTU(502.9mg，1.33mmol)0.1h，然后添加DIEA(571.3mg，4.42mmol)，将混合物在N2气氛下于25℃搅拌1小时。通过制备型HPLC(碱性条件)纯化残余物，得到化合物5B(210mg)，为白色固体。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.56-8.26(m，1H)，7.64-7.55(m，1H)，7.41-7.26(m，9H)，7.07(br d，J＝9.8Hz，2H)，6.89-6.75(m，1H)，6.69-6.39(m，1H)，6.12-5.90(m，1H)，5.05-4.91(m，1H)4.35-4.18(m，1H)，3.95-3.82(m，1H)，2.92(m，1H)，2.78-2.63(m，2H).MS(ESI)m/z(M+H)+403.2。
将化合物5B(110mg，273.33μmol)在DMSO(4mL)和DCM(6mL)中的混合物脱气并用N2吹扫3次，然后在0℃下添加DMP(347.8mg，819.99μmol)，将混合物在N2气氛下于0℃搅拌3小时。将混合物用饱和NaHCO3(80mL)和饱和Na2S2O3(80mL)淬灭。将混合物搅拌0.5小时。有机层用饱和NaHCO3(100mLx2)、水(100mLx2)和盐水(100mL)洗涤。合并的有机层经Na2SO4干燥，过滤，并将滤液减压浓缩，得到残余物。通过从2-异丙氧基丙烷(10mL)中重结晶来纯化残余物。得到化合物5(80mg，185.58umol)，为白色固体。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.98-8.91(m，1H)，8.11(s，1H)，7.84(s，1H)，7.33-7.27(m，2H)，7.27-7.17(m，5H)，7.27-7.17(m，1H)，7.09-7.02(m，3H)，6.95-6.90(m，1H)，6.86-6.82(m，1H)，5.20-5.13(m，1H)，5.00(s，1H)，3.24-3.17(m，1H)，2.82-2.74(m，1H).MS(ESI)m/z(M+H)+401.0。
实施例6
N-(4-氨基-3，4-二氧杂-1-苯基丁-2-基)-10H-吩噁嗪-10-甲酰胺(6)
Figure BDA0002953643150001971
向10H-吩恶嗪(1g，5.46mmol)在DCM(8mL)和H2O(4mL)中的混合物中加入NaOH(327.5mg，8.19mmol)和TBAI(403.2mg，1.09mmol)，然后向混合物中加入4-硝基苯基碳酰氯(1.32g，6.55mmol)，在25℃下搅拌0.5小时。向混合物中加入H2O(50mL)，然后用CH2Cl2(30mL×3)萃取，合并的有机层经无水Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物。通过柱色谱(SiO2，石油醚∶乙酸乙酯＝1/0至1∶1)纯化残余物，得到化合物6A(380mg，收率：19.98％)，为黄色固体。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.42-8.28(m，2H)，8.12(d，J＝9.2Hz，2H)，7.81-7.63(m，3H)，7.33-7.20(m，3H)，6.94(d，J＝9.2Hz，2H)。
向化合物6A(380mg，1.09mmol)的DMF(5mL)溶液中加入Et3N(331.2mg，3.27mmol)，然后加入化合物1A(302mg，1.31mmol，HCl)，并将混合物在55℃下搅拌12小时。通过制备型HPLC(碱性条件)纯化，得到化合物6B(50mg，收率：11.28％)，为灰色固体。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.37-7.27(m，4H)，7.21(d，J＝7.2Hz，1H)，7.16-7.09(m，2H)，7.07-7.02(m，2H)，7.00-6.84(m，5H)，6.28-5.93(m，1H)，5.72-5.39(m，2H)，4.35-4.14(m，2H)，3.46-3.16(m，1H)，3.11-2.99(m，1H).MS(ESI)m/z(M+H)+404.1。
在0℃和N2下，向化合物6B(50mg，123.9μmol)在DCM(10mL)和DMSO(1mL)中的混合物中一次性加入DMP(368mg，867.6μmol)，然后在N2气氛下将混合物在25℃下搅拌20小时。将混合物用饱和NaHCO3(15mL)和饱和Na2S2O3(15mL)淬灭，搅拌20分钟，然后用二氯甲烷(100mL)稀释。将混合物搅拌20分钟并用水(20mL x 2))洗涤。将合并的有机层用Na2SO4干燥并减压浓缩，得到粗产物，将其通过用DCM(1mL)和PE(10mL)的混合物研磨而纯化，得到化合物6(12.3mg，产率：24.19％)，为黄色固体。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.30-7.24(m，5H)，7.15-6.93(m，8H)，6.71(br s，1H)，5.74(d，J＝6.0Hz，1H)，5.47-5.38(m，2H)，3.39-3.29(m，1H)，3.00-2.94(m，1H).MS(ESI)m/z(M+H)+366.1。
实施例7
N-(4-氨基-3，4-二氧杂-1-苯基丁-2-基)二苯并[B，E][1，4]二噁英-1-甲酰胺(7)
Figure BDA0002953643150001991
在N2下，向邻苯二酚(100mg，908umol)和2，3-二氟苄腈(126mg，908umol)在DMF(2.7mL)和甲苯(900uL)中的混合物中一次性加入K2CO3(377mg，2.7mmol)。在N2下将混合物在130℃下搅拌12小时。将反应混合物浓缩，以去除甲苯。将残余物倒入水(20mL)中并搅拌10分钟。过滤悬浮液，并用水(3mL)洗涤滤饼，得到化合物7A(140mg，产率：73.7％)，为黄色固体。产物无需进一步纯化即可用于下一步。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.17(dd，J＝1.4，7.8Hz，1H)，7.05(dd，J＝1.5，8.2Hz，1H)，7.01-6.93(m，4H)，6.90-6.85(m，1H)。
向化合物7A(140mg，669μmol)在乙二醇(3mL)和H2O(1mL)中的混合物中加入KOH(188mg，3.4mmol)。将混合物在130℃下搅拌12小时。加入水(20mL)。用HCl水溶液(1M)将混合物调节至pH约5。过滤悬浮液，并用水(3mL)洗涤滤饼，得到化合物7B(130mg，产率：85.1％)，为白色固体。产物无需进一步纯化即可用于下一步。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ13.12(br s，1H)，7.33(d，J＝7.7Hz，1H)，7.13(d，J＝7.1Hz，1H)，7.05-6.92(m，5H)。
向化合物7B(120mg，526umol)、化合物1A(133mg，578umol)和HBTU(239mg，631umol)在DMF(3mL)中的混合物中加入DIPEA(272mg，2.10mmol)，将混合物在15℃下搅拌0.5小时。过滤固体，用甲醇(5mL×3)洗涤，得到化合物7C(130mg，收率：61.1％)，为白色固体。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.15(br dd，J＝8.9，17.7Hz，1H)，7.45-7.34(m，2H)，7.34-7.24(m，4H)，7.23-7.09(m，3H)，7.08-6.95(m，5H)，6.17-5.85(m，1H)，4.67-4.53(m，1H)，4.13-3.90(m，1H)，3.00-2.74(m，2H)。
将化合物7C(60mg，148μmol)和DMP(252mg，593umol)在DCM(15mL)、DMSO(2mL)中的混合物在15℃下搅拌1小时。将混合物用DCM(20mL)稀释，用饱和NaHCO3(20mL)、饱和Na2S2O3(20mL)淬灭，并搅拌20min，用DCM(20mL×4)萃取混合物，将合并的有机相用水(20mL)、盐水(20mL)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将残余物在异丙醚(10mL)中搅拌30min，将固体过滤并干燥，得到化合物7(35.3mg，产率：59.1％)，为白色固体。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.61(br d，J＝7.3Hz，1H)，8.17(br s，1H)，7.91(br s，1H)，7.37-7.21(m，5H)，7.16-7.07(m，2H)，7.07-6.97(m，4H)，6.78-6.72(m，1H)，5.52-5.43(m，1H)，3.26(br dd，J＝4.1，14.0Hz，1H)，3.00(br dd，J＝9.2，14.0Hz，1H).MS(ESI)m/z(M+H)+403.1。
实施例8
N-(4-氨基-3，4-二氧杂-1-苯基丁-2-基)-9H-咔唑-9-甲酰胺(8)
Figure BDA0002953643150002001
按照实施例6的方法，使用中间体1A和9H-咔唑制备化合物8。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.83(d，J＝7.6Hz，1H)，8.29(s，1H)，8.16(d，J＝7.6Hz，1H)，7.99(s，1H)，7.61(d，J＝8.4Hz，1H)，7.48-7.26(m，10H)，5.57-5.44(m，1H)，3.39(s，1H)，3.01-2.83(m，1H).MS(ESI)m/z(M+1)+386.1。
实施例9
N-(4-氨基-3，4-二氧杂-1-苯基丁-2-基)二苯并[B，D]呋喃-4-甲酰胺(9)
Figure BDA0002953643150002011
将二苯并[b，d]呋喃(5.00g，29.73mmol)溶于THF(25mL)，并在搅拌下冷却至-78℃，在搅拌下滴加t-BuLi(12.0ml，62.50mmol的2.50M己烷溶液)，得到橙黄色沉淀。添加完成后，使混合物升温至室温，并搅拌3小时。然后将橙棕色溶液冷却至-78℃，并倒在覆盖有无水MTBE的过量CO2上。使所得白色沉淀物在室温下静置1h。将产物萃取到2M NaOH中，并将所得水相用浓HCl重新酸化，然后萃取到乙酸乙酯中。然后将有机相用硫酸钠干燥，过滤，并将溶剂减压蒸发，得到化合物9A(1.30g，20.61％产率)，为白色固体。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ13.32(br s，1H)，8.42(d，J＝7.2Hz，1H)，8.22(d，J＝7.6Hz，1H)，8.04(d，J＝7.2Hz，1H)，7.81(d，J＝8.4Hz，1H)，7.60-7.54(m，1H)，7.53-7.49(m，1H)，7.47-7.44(m，1H).MS(ESI)m/z(M+1)+213.0。
在25℃，在N2下，向化合物9A(200mg，942.51umol)和化合物1A(261mg，1.13mmol，HCl)在DCM(4mL)中的混合物中一次性加入HBTU(536mg，1.41mmol)。将混合物在25℃下搅拌0.1小时，然后加入DIEA(365mg，2.83mmol，494uL)。将所得混合物在25℃下搅拌3小时。将混合物通过制备型HPLC(碱性条件)纯化，得到化合物9B(160mg，43.39％收率)，为白色固体。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.32-8.27(m，1H)，8.22-8.18(m，1H)，8.15-7.89(m，1H)，7.91-7.79(m，2H)，7.61-7.57(m，1H)，7.50-7.43(m，4H)，7.35-7.18(m，6H)，6.26-5.97(m，1H)，4.68-4.57(m，1H)，4.18-4.16(m，1H)，3.93-3.92(m，1H).MS(ESI)m/z(M+1)+389.1。
在N2气氛下，向化合物9B(150mg，386.18umol)在DMSO(4mL)和CH2Cl2(4mL)中的溶液中加入DMP(491mg，1.16mmol)，将混合物在0℃下搅拌1.5小时。将混合物用饱和NaHCO3(20mL)和饱和Na2S2O3(20mL)淬灭。将混合物搅拌0.5小时，用二氯甲烷(100mL)稀释。有机层用NaHCO3(30mL×3)、水(20mL×3)和盐水(30mL×3)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤，并将滤液减压浓缩，得到残余物。通过在异丙醚(12mL)中研磨来纯化产物，得到化合物9(30mg，20.10％产率)，为白色固体。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.19-8.17(m，2H)，8.08(d，J＝6.8Hz，1H)，7.97(d，J＝7.6Hz，1H)，7.52(s，2H)，7.47-7.40(m，2H)，7.34(s，5H)，6.85(s，1H)，5.83(s，1H)，5.61(s，1H)，3.54-3.52(m，1H)，3.20-3.40(m，1H).MS(ESI)m/z(M+1)+387.0。
实施例10
N-(4-氨基-3，4-二氧杂-1-苯基丁-2-基)-9H-芴-9-甲酰胺(10)
Figure BDA0002953643150002021
按照实施例6的方法，使用中间体1A和9H-芴-9-羧酸制备化合物10。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.81-7.76(m，2H)，7.61-7.50(m，2H)，7.48-7.41(m，2H)，7.37-7.30(m，2H)，7.18-7.04(m，3H)，6.72-6.60(m，3H)，5.72(br s，1H)，5.46-5.29(m，2H)，4.76(s，1H)，3.24-3.14(m，1H)，2.99-2.90(m，1H).MS(ESI)m/z(M+H)+385.1。
实施例11
N-(4-氨基-3，4-二氧杂-1-苯基丁-2-基)-9-甲基-9H-咔唑-4-甲酰胺(11)
Figure BDA0002953643150002031
向1H-吲哚-4-羧酸甲酯(2g，11.4mmol)和2，5-二甲氧基四氢呋喃(1.96g，14.9mmol)在MeOH(50mL)中的混合物中加入TsOH·H2O(1.09g，5.71mmol)。将反应混合物在65℃下搅拌16小时。将反应混合物浓缩。通过硅胶柱色谱(石油醚∶乙酸乙酯＝20∶1～5∶1)纯化粗产物，得到化合物11A(220mg，收率：4.28％)，为黄色固体。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.78(d，J＝8.2Hz，1H)，8.19(br s，1H)，7.80(d，J＝7.6Hz，1H)，7.55(d，J＝8.1Hz，1H)，7.42-7.36(m，2H)，7.23-7.15(m，2H)，4.00(s，3H)。
在0℃下，向化合物11A(200mg，888μmol)的DMF(2mL)溶液中加入NaH(53.3mg，1.33mmol，60％)。将反应混合物在0℃下搅拌0.5小时。然后向反应混合物中加入MeI(252mg，1.78mmol)。在搅拌下将反应混合物加热至15℃，保持16小时。将饱和NH4Cl(10mL)加入到反应混合物中。用EtOAc(10mL×2)萃取产物。将合并的有机层浓缩，并通过制备型TLC纯化(PE∶EA＝5∶1，Rf＝0.6)，得到化合物11B(150mg，产率：70.6％)，为黄色固体。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ8.90(d，J＝8.2Hz，1H)，7.89(dd，J＝0.9，7.5Hz，1H)，7.64(d，J＝7.5Hz，1H)，7.58-7.51(m，2H)，7.46(d，J＝8.3Hz，1H)，7.33-7.29(m，1H)，4.10(s，3H)，3.92(s，3H)。
向化合物11B(150mg，627μmol)在MeOH(5mL)和H2O(1.00mL)中的溶液中加入NaOH(50.2mg，1.25mmol)。将反应混合物在50℃下搅拌16小时。逐滴加入1M HCl直至pH～6。蒸发溶剂，得到化合物11C(140mg，粗品)，为白色固体。粗产物不经纯化用于下一步。
向化合物11C(140mg，622μmol)和中间体1A(143mg，622umol，HCl盐)在DMF(2mL)中的混合物中添加HBTU(354mg，932umol)和DIEA(241mg，1.86mmol)。将反应混合物在15℃下搅拌16小时。将反应混合物过滤。将粗产物通过制备型HPLC(FA)纯化，得到化合物11D(160mg，收率：64.1％)，为白色固体。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.27(d，J＝9.0Hz，1H)，7.97-7.86(m，1H)，7.67(dd，J＝5.3，7.8Hz，1H)，7.55(d，J＝8.2Hz，1H)，7.51-7.14(m，10H)，7.05(q，J＝7.7Hz，1H)，7.09-7.00(m，1H)，5.91-5.77(m，1H)，4.83-4.67(m，1H)，4.22-3.99(m，1H)，3.88(d，J＝2.4Hz，3H)，3.07-2.77(m，2H)。
向化合物11D(140mg，349umol)的DCM(20mL)溶液中加入DMP(592mg，1.39mmol)。然后将反应混合物在15℃下搅拌16小时。将混合物用DCM(20mL)稀释，通过在15℃下添加饱和NaHCO3(30mL)和饱和Na2S2O3(30mL)淬灭，然后搅拌混合物直至溶液澄清，并用DCM(30mL x2)萃取。将合并的有机层用H2O(20mL)和盐水(20mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩，得到残余物。通过在异丙醚溶剂(10mL)中研磨来纯化残余物。将混合物过滤并干燥，得到化合物11(84.2mg，产率：60.5％)，为白色固体。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.26(d，J＝7.9Hz，1H)，7.46-7.30(m，4H)，7.21-7.07(m，7H)，6.74(br s，1H)，6.54(br d，J＝7.0Hz，1H)，5.80(dt，J＝5.2，7.2Hz，1H)，5.46(br s，1H)，3.79(s，3H)，3.51(dd，J＝5.1，14.2Hz，1H)，3.23(dd，J＝7.6，14.2Hz，1H).MS(ESI)m/z(M+H)+400.1。
实施例12
N-(4-氨基-3，4-二氧杂-1-苯基丁-2-基)-9-甲基-9H-咔唑-1-甲酰胺(12)
Figure BDA0002953643150002051
在0℃下，向2-氨基苯甲酸甲酯(10g，66.15mmol)的HCl(100mL)溶液中滴加NaNO2(4.66g，67.48mmol)的H2O(100mL)溶液。将混合物在0℃下搅拌0.5h。然后加入SnCl2·2H2O(29.85g，132.31mmol)的HCl(50mL)溶液。将混合物在25℃下搅拌2h。将固体过滤，用H2O(200mL)洗涤，收集并真空干燥，得到化合物12A(7.8g，收率：56.56％)，为白色固体。
将化合物12A(2g，9.87mmol)的AcOH(20mL)溶液加热至80℃。然后将环己酮(970mg，9.87mmol)滴加到溶液中。然后将溶液加热至100℃并搅拌2h。将反应冷却至室温，并加入H2O(20mL)。过滤固体，收集并真空干燥，得到化合物12B(1.3g，收率：49.69％)，为紫色固体。MS(ESI)m/z(M+H)+229.9。
向化合物12B(1.3g，5.67mmol)在甲苯(40mL)中的溶液中一次性加入DDQ(1.54g，6.80mmol)。将混合物在100℃下搅拌12h。滤出固体。收集滤液并浓缩。残余物通过柱纯化(PE∶EA＝5∶1)，得到化合物12C(360mg，收率：28.19％)，为淡黄色固体。1H NMR(CDCl3，400MHz)：δ9.92(br.s，1H)，8.29-8.22(m，1H)，8.13-8.05(m，2H)，7.59-7.44(m，2H)，7.30-7.20(m，2H)，4.03(s，3H)。
向化合物12C(360mg，1.60mmol)在DMF(5mL)中的溶液中分批加入NaH(320mg，7.99mmol，60％纯度)，然后加入CH3I(0.2mL，3.20mmol)。将混合物在25℃下搅拌12h。将混合物用1N HCl淬灭直至pH～4，用H2O(30mL)稀释，用EtOAc(20mL×3)萃取。收集有机物，用盐水(20mL)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并浓缩，得到化合物12D(380mg，粗品)，为黄色油状物，其无需进一步纯化即可直接用于下一步。MS(ESI)m/z(M+H)+239.8。
向化合物12D(380mg，1.59mmol)在THF(3mL)、MeOH(3mL)和H2O(3mL)中的溶液中加入LiOH.H2O(335mg，7.94mmol)。将混合物在25℃下搅拌48h。将混合物用1N HCl酸化至pH～4，用H2O(20mL)稀释，用EtOAc(15mL×2)萃取。收集有机物，用盐水(20mL)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并浓缩。残余物通过SFC(柱：AD(250mm×30mm，5μm)；流动相：[0.1％NH3H2O/EtOH])(RT：6.114min)纯化。收集纯级分并浓缩。将残留物溶于H2O(10mL)中，用1N HCl酸化至pH～4。用EtOAc(15mL x 2)萃取混合物。收集有机物，用盐水(20mL)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并浓缩，得到化合物12E(310mg，收率：86.66％)，为白色固体。1H NMR(CDCl3，400MHz)：δ8.36-8.29(m，1H)，8.14-8.06(m，2H)，7.55-7.45(m，2H)，7.34-7.22(m，2H)，4.02(s，3H)。
向化合物12E(310mg，1.38mmol)和中间体1A(477mg，2.06mmol)在DMF(10mL)中的溶液中添加DIEA(0.6mL，3.44mmol)、HOBt(56mg，412.89μmol)和EDCI(396mg，2.06mmol)。将混合物在25℃下搅拌48h。真空除去溶剂。将残余物溶于EtOAc(40mL)中，用1N HCl(40mL)洗涤。收集有机物，用饱和NaHCO3(40mL)、盐水(40mL)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将残余物通过制备型HPLC(中性)纯化，得到化合物12F(320mg，收率：57.40％)，为白色固体。MS(ESI)m/z(M+H)+401.9。
向化合物12F(150mg，373.64μmol)在DCM(20mL)和DMSO(3mL)中的溶液中加入DESS-MARTIN PERIODINANE(476mg，1.12mmol)。将混合物在25℃下搅拌2h。将反应物用DCM(30mL)稀释，用10％Na2S2O3水溶液和饱和NaHCO3(v/v＝1/1)(60mL)的溶液淬灭。过滤固体，收集，用H2O(10mL)洗涤。过滤固体，收集并真空干燥，得到化合物12(28mg，收率：18.05％)，为白色固体。MS(ESI)m/z(M+H)+400.1.1H NMR(DMSO-d6，400MHz)：δ9.16(d，J＝8.0Hz，1H)，8.26-8.22(m，1H)，8.20(br.s，1H)，8.15(d，J＝7.6Hz，1H)，7.91(br.s，1H)，7.57-7.52(m，1H)，7.49-7.43(m，1H)，7.38-7.30(m，4H)，7.28-7.16(m，4H)，5.55-5.48(m，1H)，3.49(s，3H)，3.30-3.24(m，1H)，2.87-2.78(m，1H)。
实施例13
N-(4-氨基-3，4-二氧杂-1-苯基丁-2-基)-2-氯-1-萘甲酰胺(13)
Figure BDA0002953643150002071
将DMF(1.67g，22.85mmol，1.76mL)冷却至0℃，逐滴加入POCl3(2.5mL，26.74mmol)。将混合物在0℃下搅拌0.5h。然后加入DCM(10mL)。将混合物在15℃下搅拌2h。然后加入3，4-二氢萘-2(1H)-1(1g，6.84mmol)的DCM(5mL)溶液。将混合物在15℃下搅拌12h。反应用DCM(20mL)稀释，小心地用H2O(30mL)淬灭。收集有机物，用饱和NaHCO3(30mL)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并浓缩。残余物通过柱纯化(PE∶EA＝10∶1)，得到化合物13A(940mg，收率：71.33％)，为黄色油状物。1H NMR(CDCl3，400MHz)：δ10.47(s，1H)，8.04-7.99(m，1H)，7.25-7.05(m，3H)，2.92-2.84(m，4H)。
将化合物13A(500mg，2.60mmol)和DDQ(590mg，2.60mmol)在甲苯(20mL)中的溶液在90℃下搅拌12h。然后加入另外的DDQ(590mg，2.60mmol)。将混合物在90℃下搅拌48h。滤出固体。收集滤液并浓缩。残余物通过柱纯化(PE∶EA＝10∶1)，得到化合物13B(380mg，收率：57.60％)，为白色固体。1H NMR(CDCl3，400MHz)：δ10.91(s，1H)，9.16-9.13(m，1H)，8.02-7.55(m，1H)，7.67-7.63(m，1H)，7.70-7.62(m，1H)，7.60-7.55(m，1H)，7.55-7.45(m，1H)。
在0℃下，向化合物13B(380mg，1.99mmol)和DMSO(0.19mL，2.41mmol)在CH3CN(10mL)和H2O(0.3mL)中的溶液中滴加H2SO4(0.06mL，1.10mmol)。添加后，添加NaClO2(270mg，2.99mmol)在H2O(1.7mL)中的溶液。将混合物在0℃下搅拌2h。将混合物用H2O(10mL)洗涤，用EtOAc(15mL×2)萃取。收集有机物，用Na2SO4干燥，过滤并浓缩。粗产物通过SFC(0.1％NH3H2O EtOH)纯化(RT：2.304min)。收集主峰并浓缩。将残余物溶于H2O(10mL)中，用1N HCl酸化至pH～4，用EtOAc(15mL×2)萃取。收集有机物，用Na2SO4干燥，过滤并浓缩，得到化合物13C(270mg，收率：65.55％)，为淡黄色固体。1H NMR(CDCl3，400MHz)：δ8.05-7.96(m，1H)，7.95-7.80(m，2H)，7.68-7.45(m，3H)。
向化合物13C(260mg，1.26mmol)和中间体1A(436mg，1.89mmol)在DMF(10mL)中的溶液中添加DIEA(0.55mL，3.15mmol)、HOBt(52mg，377.50μmol)和EDCI(362mg，1.89mmol)。将混合物在25℃下搅拌12h。真空除去溶剂。将残余物溶于EtOAc(30mL)中，用1N HCl(30mL)洗涤。收集有机物，用饱和NaHCO3(30mL)、盐水(30mL)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将残余物通过制备型HPLC纯化，得到化合物13D(160mg，收率：31.42％)，为白色固体。MS(ESI)m/z(M+Na)+404.9。
向化合物13D(160mg，417.93μmol)在DCM(20mL)和DMSO(3mL)中的溶液中加入DMP(532mg，1.25mmol)。将混合物在25℃下搅拌40min。将混合物用DCM(20mL)稀释，用10％Na2S2O3水溶液和饱和NaHCO3(v/v＝1/1)(80mL)的溶液淬灭。收集有机物，用H2O(40mL×5)洗涤，收集并浓缩。将残余物用CH3CN(8mL)洗涤。过滤固体，收集并真空干燥，得到化合物13(65mg，收率：38.84％)，为白色固体。MS(ESI)m/z(M+H)+381.1.1H NMR(DMSO-d6，400MHz)：δ9.30(d，J＝7.6Hz，1H)，8.33(br.s，1H)，8.09-7.97(m，3H)，7.70-7.30(m，9H)，5.77-5.68(m，1H)，3.38-3.30(m，1H)，2.89-2.77(m，1H)。
实施例14
化合物14-36的一般合成
合成方案A：
Figure BDA0002953643150002091
向酸A-2(1当量)在DMF中的混合物中加入HBTU(1.5当量)，然后加入TEA(3当量)。将反应混合物在20℃下搅拌5分钟，并加入中间体1A(1当量)。将反应混合物搅拌3h，用水稀释，并过滤。粗产物与EtOAc搅拌30分钟，过滤，得到化合物A-3，为类白色固体。
向化合物A-2(1当量)在DCM和DMSO中的溶液中加入DMP(2当量)。将反应混合物在20℃下搅拌2小时。将反应混合物用DCM(10mL)稀释，在20℃下用饱和NaHCO3和10％Na2S2O3水溶液淬灭，搅拌30分钟，并用DCM(10mL×2)萃取。将合并的有机层用H2O(10mL)、盐水(10mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物。使用EtOAc/己烷，将粗产物通过快速色谱纯化，得到所需产物A-1。
合成方案B：
Figure BDA0002953643150002101
在0℃下，向酰氯B-2(1当量)在DMF中的混合物中加入HOBt(1当量)，然后加入TEA(3当量)。将反应混合物在0℃下搅拌5分钟，并加入中间体1A(1当量)。将反应混合物搅拌3h，用水稀释，并过滤。粗产物与EtOAc搅拌30分钟，过滤，得到化合物A-3，为类白色固体。
向化合物A-3(1当量)在DCM和DMSO中的溶液中加入DMP(2当量)。将反应混合物在20℃下搅拌2小时。将反应混合物用DCM(10mL)稀释，在20℃下用饱和NaHCO3和10％Na2S2O3水溶液淬灭，搅拌30分钟，并用DCM(10mL×2)萃取。将合并的有机层用H2O(10mL)、盐水(10mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物。使用EtOAc/己烷，将粗产物通过快速色谱纯化，得到所需产物A-1。
(S)-N-(4-氨基-3，4-二氧杂-1-苯基丁-2-基)-2-溴-6-氯苯甲酰胺(14)
Figure BDA0002953643150002111
化合物14：1H NMR(400MHz，DMSO)：δ9.17(d，1H)，8.15(s，1H)，7.87(s，1H)，7.58(d，1H)，7.47(d，1H)，7.33-7.18(m，6H)，5.52(m，1H)，3.18(dd，1H)，2.79(dd，1H)ppm.MS(ESI)m/z(M+H)+410.9。
(S)-N-(4-氨基-3，4-二氧杂-1-苯基丁-2-基)-2，6-二氟苯甲酰胺(15)
Figure BDA0002953643150002112
化合物15：1H NMR(400MHz，DMSO)：δ9.2(d，0.6H)，8.25(d，0.4H)，8.15(s，0.6H)，7.87(s，0.6H)，7.55-7.35(m，1.4H)，7.3-7.1(m，7.4H)，5.41(m，0.6H)，4.47(m，0.4H)，3.18(dd，0.6H)，3.04(dd，0.4H)，2.78(dd，0.6H)，2.59(dd，0.4H)，ppm.MS(ESI)m/z(M+H)+332.3。
(S)-N-(4-氨基-3，4-二氧杂-1-苯基丁-2-基)-2-氟-6-(三氟甲基)苯甲酰胺(16)
Figure BDA0002953643150002113
化合物16：1H NMR(400MHz，DMSO)：δ9.26(d，0.4H)，8.37(d，0.6H)，8.16(s，0.4H)，7.87(s，0.4H)，7.7-7.1(m，9.2H)，5.52(m，0.4H)，4.55(m，0.6H)，3.2-3.05(m，1H)，2.78(dd，0.4H)，2.89(dd，0.6H)，ppm.MS(ESI)m/z(M+H)+383.3。
(S)-N-(4-氨基-3，4-二氧杂-1-苯基丁-2-基)-5-氯-2-甲氧基苯甲酰胺(17)
Figure BDA0002953643150002121
化合物17：MS(ESI)m/z(M+H)+357。
(S)-N-(4-氨基-3，4-二氧杂-1-苯基丁-2-基)-2，6-二甲氧基苯甲酰胺(18)
Figure BDA0002953643150002122
化合物18：1H NMR(400MHz，DMSO)：δ8.46(d，0.2H)，8.04(s，0.2H)，7.93(d，0.8H)，7.79(s，0.2H)，7.4-7.1(m，7.6H)，6.65-6.58(m，2H)，5.34(m，0.2H)，4.32(m，0.8H)，3.63(s，6H)，3.08(dd，0.2H)，2.96(dd，0.8H)，2.89(dd，0.2H)，2.68(dd，0.8H)，ppm.MS(ESI)m/z(M+H)+357。
(S)-N-(4-氨基-3，4-二氧杂-1-苯基丁-2-基)-2-氯-6-(三氟甲基)苯甲酰胺(19)
Figure BDA0002953643150002123
化合物19：1H NMR(400MHz，DMSO)：δ9.2(d，1H)，8.2-7.8(m，4H)，7.2-7(m，6H)，5.58(m，1H)，3.16(dd，1H)，2.78(dd，1H)ppm.MS(ESI)m/z(M+H)+399.4。
(S)-N-(4-氨基-3，4-二氧杂-1-苯基丁-2-基)-2，6-BIS(三氟甲基)苯甲酰胺(20)
Figure BDA0002953643150002131
化合物20：1H NMR(400MHz，DMSO)：δ9.25(d，1H)，8.15(s，1H)，7.87(s，1H)，7.78(d，1H)，7.71(d，1H)，7.6(t，1H)，7.3-7.2(m，5H)，5.63(m，1H)，3.1(dd，1H)，2.81(dd，1H)ppm.MS(ESI)m/z(M+H)+433.1。
(S)-N-(4-氨基-3，4-二氧杂-1-苯基丁-2-基)-3-氯-[1，1′-BI苯基]-2-甲酰胺(21)
Figure BDA0002953643150002132
化合物21：1H NMR(400MHz，DMSO)：δ9.06(d，1H)，8.05(s，1H)，7.8(s，1H)，7.5-7.1(m，13H)，5.34(m，1H)，2.98(dd，1H)，2.65(dd，1H)ppm.MS(ESI)m/z(M+H)+406.9。
(S)-N-(4-氨基-3，4-二氧杂-1-苯基丁-2-基)-2，5-二氯苯甲酰胺(22)
Figure BDA0002953643150002133
化合物22：1H NMR(400MHz，DMSO)：δ8.99(d，1H)，8.08(s，1H)，7.82(s，1H)，7.45(m，2H)，7.3-7.1(m，6H)，5.28(m，1H)，3.16(dd，1H)，2.75(dd，1H)ppm.MS(ESI)m/z(M+H)+364.9。
(S)-N-(4-氨基-3，4-二氧杂-1-苯基丁-2-基)-[1，1′-BI苯基]-4-甲酰胺(23)
Figure BDA0002953643150002141
化合物23：1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ7.6-8.1(m，7H)，7-7.6(m，8H)，5.3(m，1H)，3.3(d，2H)，3.0(m，1H)ppm.MS(ESI)m/z(M+H)+373。
N-(4-氨基-3，4-二氧杂-1-苯基丁-2-基)苯并[d][1，3]二氧杂-5-甲酰胺(24)
Figure BDA0002953643150002142
化合物24：1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ7.05-7.35(m，7H)，6.75-6.85(m，1H)，6.0(m，1H)，3.3(d，2H)，2.95-3.0(m，1H)ppm.MS(ESI)m/z(M+H)+341。
N-(4-氨基-3，4-二氧杂-1-苯基丁-2-基)-3-氟苯甲酰胺(25)
Figure BDA0002953643150002143
化合物25：1H NMR(400MHz，DMSO)：δ8.9(d，1H)，8.05(s，1H)，7.78(s，1H)，7.58(d，1H)，7.51(d，1H)，7.46(d，1H)，7.33(t，1H)，7.3-7.1(m，5H)，5.3(m，1H)，3.15(dd，1H)，2.84(dd，1H)ppm.MS(ESI)m/z(M+H)+314.9。
N-(4-氨基-3，4-二氧杂-1-苯基丁-2-基)-2，3-二甲基苯甲酰胺(26)
Figure BDA0002953643150002151
化合物26：1H NMR(400MHz，DMSO)：δ8.68(d，1H)，8.12(s，1H)，7.85(s，1H)，7.34-6.9(m，8H)，5.33(m，1H)，3.16(dd，1H)，2.78(dd，1H)，2.21(s，3H)，2.02(s，3H)ppm.MS(ESI)m/z(M+H)+325.1。
(S)-N-(4-氨基-3，4-二氧杂-1-苯基丁-2-基)-2-氟-6-碘代苯甲酰胺(27)
Figure BDA0002953643150002152
化合物27：1H NMR(400MHz，DMSO)：δ9.11(d，1H)，8.09(s，1H)，7.81(s，1H)，7.6(d，1H)，7.3-7.1(m，7H)，5.44(m，1H)，3.1(dd，1H)，2.74(dd，1H)ppm.MS(ESI)m/z(M+H)+441。
(S)-N-(4-氨基-3，4-二氧杂-1-苯基丁-2-基)-4-氟苯甲酰胺(28)
Figure BDA0002953643150002153
化合物28：1H NMR(400MHz，DMSO)：δ8.89(d，1H)，8.09(s，1H)，7.9-7.7(m，3H)，7.4-7.1(m，7H)，5.34(m，1H)，3.2(dd，1H)，2.9(dd，1H)ppm.MS(ESI)m/z(M+H)+315。
(S)-N-(4-氨基-3，4-二氧杂-1-苯基丁-2-基)-2-氯-6-氟-3-甲氧基苯甲酰胺(29)
Figure BDA0002953643150002161
化合物29：1H NMR(400MHz，DMSO)：δ9.19(d，1H)，8.17(s，1H)，7.88(s，1H)，7.3-7.1(m，7H)，5.46(m，1H)，3.83(s，3H)，3.18(dd，1H)，2.76(dd，1H)ppm.MS(ESI)m/z(M+H)+379.4。
(S)-N-(4-氨基-3，4-二氧杂-1-苯基丁-2-基)-2-氯-6-氟-3-甲基苯甲酰胺(30)
Figure BDA0002953643150002162
化合物30：1H NMR(400MHz，DMSO)：δ9.18(d，1H)，8.17(s，1H)，7.88(s，1H)，7.45-7.1(m，7H)，5.47(m，1H)，3.83(s，3H)，3.18(dd，1H)，2.76(dd，1H)，2.27(s，3H)ppm.MS(ESI)m/z(M+H)+363.4。
(S)-N-(4-氨基-3，4-二氧杂-1-苯基丁-2-基)-6-氯-2-氟-3-甲基苯甲酰胺(31)
Figure BDA0002953643150002163
化合物31：1H NMR(400MHz，DMSO)：δ9.18(d，1H)，8.15(s，1H)，7.88(s，1H)，7.45-7.1(m，7H)，5.46(m，1H)，3.83(s，3H)，3.18(dd，1H)，2.76(dd，1H)，2.2(s，3H)ppm.MS(ESI)m/z(M+H)+363.2。
(S)-N-(4-氨基-3，4-二氧杂-1-苯基丁-2-基)-3-氯-2-氟-6-(三氟甲基)苯甲酰胺(32)
Figure BDA0002953643150002171
化合物32：1H NMR(400MHz，DMSO)：δ9.35(d，1H)，8.19(s，1H)，7.91(s，1H)，7.87(d，1H)，7.64(d，1H)，7.45-7.1(m，5H)，5.52(m，1H)，3.19(dd，1H)，2.77(dd，1H)ppm.MS(ESI)m/z(M+H)+417.3。
(S)-N-(4-氨基-3，4-二氧杂-1-苯基丁-2-基)-2，4-二氯-5-氟苯甲酰胺(33)
Figure BDA0002953643150002172
化合物33：1H NMR(400MHz，DMSO)：δ9.05(d，1H)，8.14(s，1H)，7.88(s，1H)，7.87(d，1H)，7.35-7.2(m，6H)，5.36(m，1H)，3.83(s，3H)，3.21(dd，1H)，2.81(dd，1H)ppm.MS(ESI)m/z(M+H)+382.7。
(S)-N-(4-氨基-3，4-二氧杂-1-苯基丁-2-基)-5-溴-2-氯苯甲酰胺(34)
Figure BDA0002953643150002173
化合物34：1H NMR(400MHz，DMSO)：δ9.05(d，1H)，8.14(s，1H)，7.88(s，1H)，7.64(dd，1H)，7.43(d，1H)，7.34-7.2(m，5H)，5.33(m，1H)，3.83(s，3H)，3.22(dd，1H)，2.8(dd，1H)ppm.MS(ESI)m/z(M+H)+409.2。
(S)-N-(4-氨基-3，4-二氧杂-1-苯基丁-2-基)-5-溴-2-甲氧基苯甲酰胺(35)
Figure BDA0002953643150002181
化合物35：MS(ESI)m/z(M+H)+405。
(S)-N-(4-氨基-3，4-二氧杂-1-苯基丁-2-基)-2-溴苯甲酰胺(36)
Figure BDA0002953643150002182
化合物36：1H NMR(400MHz，DMSO)：δ8.93(d，1H)，8.13(s，1H)，7.87(s，1H)，7.61(d，1H)，7.41(t，1H)，7.4-7.1(m，7H)，5.36(m，1H)，3.19(dd，1H)，2.81(dd，1H)ppm.MS(ESI)m/z(M+H)+374.9。
实施例15
化合物37-48
5-氯-2-甲氧基-N-(1-氧代-3-苯基丙烷-2-基)苯甲酰胺(37)
Figure BDA0002953643150002183
在20℃，在N2下，向5-氯-2-甲氧基苯甲酸(300mg，1.61mmol)和2-氨基-3-苯基丙-1-醇盐酸盐(362mg，1.93mmol，HCl)在DMF(15mL)中的混合物中一次性加入HBTU(732mg，1.93mmol)。将混合物在20℃下搅拌0.1h。然后向混合物中添加DIPEA(1.04g，8.04mmol，1.4mL)，并在20℃下搅拌0.5h。将混合物在0℃下用H2O(50mL)稀释，并在0℃下搅拌0.5h，形成沉淀，收集固体并真空干燥，得到化合物37A(450mg，收率：86.82％)，为黄色固体。1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.11(d，J＝8.4Hz，1H)，7.60(d，J＝2.6Hz，1H)，7.50(dd，J＝2.6，8.8Hz，1H)，7.31-7.24(m，4H)，7.21-7.14(m，2H)，4.12(d，J＝4.9Hz，1H)，3.85(s，3H)，3.06-2.86(m，2H)，2.69-2.69(m，1H)，2.84-2.68(m，1H).MS(ESI)m/z(M+H)+320.0。
在20℃和N2下，向化合物37A(150mg，469.07μmol)在DMSO(2mL)和DCM(20mL)中的混合物中一次性加入DMP(597mg，1.41mmol)。将混合物在20℃下搅拌0.5h。将反应混合物用DCM(20mL)、饱和NaHCO3(水溶液30mL)和Na2S2O3(水溶液10％，30mL)稀释，然后搅拌15分钟。分层。将有机层用水(150mL x 2)和盐水(150mL)洗涤，经Na2SO4干燥，并减压浓缩，得到残余物。将残余物用EA(5mL)和PE(25mL)研磨，形成沉淀，收集固体并真空干燥，得到化合物37(75mg，收率：49.96％)，为黄色固体。1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.61(s，1H)，8.55(d，J＝6.8Hz，1H)，7.65(d，J＝2.9Hz，1H)，7.54(dd，J＝2.8，8.9Hz，1H)，7.33-7.16(m，6H)，4.59(dd，J＝5.1，6.9，9.0Hz，1H)，3.81(s，3H)，3.22(dd，J＝4.9，13.9Hz，1H)，3.02(dd，J＝9.0，14.1Hz，1H).MS(ESI)m/z(M+H)+317.9。
3-氯-2-氟-N-(1-氧代-3-苯基丙烷-2-基)-6-(三氟甲基)苯甲酰胺(38)
Figure BDA0002953643150002191
按照化合物37的方法，使用相应的中间体2-氨基-3-苯基丙烷-1-醇盐酸盐和3-氯-2-氟-6-(三氟甲基)苯甲酸制备化合物38。得到化合物38(90mg，收率58.0％)，为淡黄色固体。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ9.58(s，1H)，9.38(br d，J＝7.5Hz，1H)，7.92-7.88(m，1H)，7.67(d，J＝8.5Hz，1H)，7.33-7.27(m，4H)，7.24-7.20(m，1H)，4.65(ddd，J＝4.6，7.4，9.8Hz，1H)，3.25(dd，J＝4.4，14.4Hz，1H)，2.83(dd，J＝9.9，14.4Hz，1H).MS(ESI)m/z(M+H)+374.0。
2-氟-N-(1-氧代-3-苯基丙烷-2-基)-6-(三氟甲基)苯甲酰胺(39)
Figure BDA0002953643150002201
按照化合物37的方法，使用相应的中间体2-氨基-3-苯基丙烷-1-醇盐酸盐和2-氟-6-(三氟甲基)苯甲酸制备化合物39。得到化合物39(100mg，收率33.2％)，为淡黄色固体。1H NMR(400MHz，CD3CN)δ9.63(s，1H)，7.67-7.55(m，2H)，7.45(t，J＝8.7Hz，1H)，7.34-7.21(m，5H)，4.71(ddd，J＝5.3，7.4，8.7Hz，1H)，3.28(dd，J＝5.1，14.4Hz，1H)，2.99(dd，J＝8.7，14.4Hz，1H).MS(ESI)m/z(M+H)+340.0。
2，6-二氟-N-(1-氧代-3-苯基丙烷-2-基)苯甲酰胺(40)
Figure BDA0002953643150002202
按照化合物37的方法，使用相应的中间体2-氨基-3-苯基丙烷-1-醇盐酸盐和2，6-二氟苯甲酸制备化合物40。得到化合物40(100mg，收率48.79％)，为白色固体。1H NMR(400MHz，CD3CN)δ9.74-9.55(m，1H)，7.46(tt，J＝6.6，8.5Hz，1H)，7.35-7.22(m，5H)，7.09-6.95(m，1H)，4.69(ddd，J＝4.9，7.5，9.0Hz，1H)，3.31(dd，J＝4.9，14.3Hz，1H)，2.99(dd，J＝9.0，14.3Hz，1H).MS(ESI)m/z(M+H)+289.9。
2-溴-6-氯-N-(1-氧代-3-苯基丙烷-2-基)苯甲酰胺(41)
Figure BDA0002953643150002211
按照化合物37的方法，使用相应的中间体2-氨基-3-苯基丙烷-1-醇盐酸盐和2-溴-6-氯苯甲酸制备化合物41。得到化合物41(30mg，收率15.9％)，为白色固体。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.69(s，1H)，9.06(br s，1H)，7.61(d，J＝8.0Hz，1H)，7.54-7.38(m，1H)，7.38-7.19(m，6H)，4.72-4.54(m，1H)，3.26(dd，J＝4.5，14.1Hz，1H)，2.93(br dd，J＝9.4，14.7Hz，1H).MS(ESI)m/z(M+H)+367.0。
2-氯-6-氟-3-甲基-N-(1-氧代-3-苯基丙烷-2-基)苯甲酰胺(42)
Figure BDA0002953643150002212
按照化合物37的方法，使用相应的中间体2-氨基-3-苯基丙烷-1-醇盐酸盐和2-氯-6-氟-3-甲基苯甲酸制备化合物42。得到化合物42(80.6mg，收率24.13％)，为无色油状物。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.61(s，1H)，9.24(d，J＝7.5Hz，1H)，7.43(ddd，J＝0.7，6.2，8.6Hz，1H)，7.29(d，J＝4.6Hz，4H)，7.24-7.16(m，2H)，4.55(ddd，J＝4.4，7.5，10.1Hz，1H)，3.25(dd，J＝4.3，14.2Hz，1H)，2.85(dd，J＝10.1，14.3Hz，1H)，2.30(s，3H).MS(ESI)m/z(M+H)+320.1。
2-氯-6-氟-3-甲氧基-N-(1-氧代-3-苯基丙烷-2-基)苯甲酰胺(43)
Figure BDA0002953643150002221
按照化合物37的方法，使用相应的中间体2-氨基-3-苯基丙烷-1-醇盐酸盐和2-氯-6-氟-3-甲氧基苯甲酸制备化合物43。得到化合物43(125mg，收率38.19％)，为淡黄色固体。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.61(s，1H)，9.25(d，J＝7.5Hz，1H)，7.29(d，J＝4.6Hz，4H)，7.27-7.19(m，3H)，4.54(ddd，J＝4.3，7.4，10.1Hz，1H)，3.84(s，3H)，3.25(dd，J＝4.4，14.3Hz，1H)，2.84(dd，J＝10.1，14.3Hz，1H).MS(ESI)m/z(M+H)+336.1。
2-氯-N-(1-氧代-3-苯基丙烷-2-基)-1-萘甲酰胺(44)
Figure BDA0002953643150002222
按照化合物37的方法，使用相应的中间体2-氨基-3-苯基丙烷-1-醇盐酸盐和2-氯-1-萘甲酸制备化合物44。得到化合物44(65mg，收率41.70％)，为白色固体。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.77(s，1H)，9.19(d，J＝7.9Hz，1H)，8.07-7.90(m，2H)，7.59-7.52(m，2H)，7.46(br t，J＝7.4Hz，1H)，7.38-7.26(m，6H)，4.88(ddd，J＝3.9，7.6，11.1Hz，1H)，3.40-3.36(m，1H)，2.82(dd，J＝11.2，14.3Hz，1H).MS(ESI)m/z(M+H)+338.1。
2，6-二氯-N-(1-氧代-3-苯基丙烷-2-基)苯甲酰胺(45)
Figure BDA0002953643150002231
按照化合物37的方法，使用相应的中间体2-氨基-3-苯基丙烷-1-醇盐酸盐和2，6-二氯苯甲酸制备化合物45。得到化合物45(150mg，收率45.47％)，为无色油状物。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.66(s，1H)，9.05(br d，J＝6.3Hz，1H)，7.50-7.37(m，3H)，7.34-7.18(m，5H)，4.61(dt，J＝4.9，8.5Hz，1H)，3.26(dd，J＝4.8，14.6Hz，1H)，2.91(dd，J＝9.7，14.4Hz，1H).MS(ESI)m/z(M+H)+322.0。
N-(1-氧代-3-苯基丙烷-2-基)二苯并[B，D]呋喃-4-甲酰胺(46)
Figure BDA0002953643150002232
按照化合物37的方法，使用相应的中间体2-氨基-3-苯基丙烷-1-醇盐酸盐和二苯并[b，d]呋喃-4-羧酸(7B)制备化合物46。得到化合物46(90mg，收率28.10％)，为白色固体。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.71(s，1H)，8.73(d，J＝7.1Hz，1H)，8.34(dd，J＝1.3，7.7Hz，1H)，8.25-8.17(m，1H)，7.85(dd，J＝1.3，7.7Hz，1H)，7.71(d，J＝8.2Hz，1H)，7.60(ddd，J＝1.3，7.3，8.4Hz，1H)，7.53-7.44(m，2H)，7.41-7.37(m，2H)，7.35-7.29(m，2H)，7.27-7.19(m，1H)，4.70(ddd，J＝4.7，7.2，9.5Hz，1H)，3.33-3.29(m，1H)，3.10(dd，J＝9.4，14.0Hz，1H).MS(ESI)m/z(M+H)+344.1。
9-甲基-N-(1-氧代-3-苯基丙烷-2-基)-9H-咔唑-4-甲酰胺(47)
Figure BDA0002953643150002241
按照化合物37的方法，使用相应的中间体2-氨基-3-苯基丙烷-1-醇盐酸盐和9-甲基-9H-咔唑-4-羧酸(11C)制备化合物47。得到化合物47(55mg，收率43.0％)，为淡黄色固体。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.84(s，1H)，8.14(d，J＝8.1Hz，1H)，7.65(d，J＝7.7Hz，1H)，7.56-7.47(m，3H)，7.39-7.23(m，7H)，7.16(ddd，J＝2.1，5.9，8.1Hz，1H)，4.83(ddd，J＝4.8，7.7，9.9Hz，1H)，3.90(s，3H)，3.46(dd，J＝4.8，14.2Hz，1H)，3.08(dd，J＝9.9，14.2Hz，1H).MS(ESI)m/z(M+H)+357.1。
9-甲基-N-(1-氧代-3-苯基丙烷-2-基)-9H-咔唑-4-甲酰胺(48)
Figure BDA0002953643150002242
按照化合物37的方法，使用相应的中间体2-氨基-3-苯基丙烷-1-醇盐酸盐和二苯并[b，e][1，4]二噁英-1-羧酸(7B)制备化合物48。得到化合物48(110mg，收率35.1％)，为白色固体1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.62(s，1H)，8.61(br，d，J＝7.1Hz，1H)，7.27(d，J＝4.4Hz，4H)，7.20(br，dd，J＝4.3，8.5Hz，1H)，7.12(br，d，J＝7.7Hz，1H)，7.09-7.04(m，1H)，7.02-6.94(m，4H)，6.74-6.69(m，1H)，4.64-4.56(m，1H)，3.27-3.19(m，1H)，2.97(dd，J＝9.6，14.0Hz，1H).MS(ESI)m/z(M+H)+360.1。
实施例部分II
实施例1-化合物1、12、14、18、22、28、54、94、99、100、101和102
N-(4-氨基-3，4-二氧代-1-苯基丁烷-2-基)-1-甲基-3-(喹啉-7-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺(1)
Figure BDA0002953643150002251
在N2气氛下，向3-碘-1-甲基-1H-吡唑-4-羧酸乙酯(0.5g，1.79mmol)和7-喹啉基硼酸(463mg，2.68mmol)在二噁烷(15mL)和H2O(1mL)的溶液中添加K2CO3(494mg，3.57mmol)，然后添加Pd(dppf)Gl2(261mg，357.06μmol)，将混合物在N2气氛下于80℃搅拌17h。将反应混合物浓缩以除去溶剂，然后用EA(30mL)稀释并过滤，用EA(30mL×2)洗涤，浓缩滤液，得到残余物。将残余物通过快速硅胶色谱法纯化；(
Figure BDA0002953643150002252
4g
Figure BDA0002953643150002253
Silica FlashColumn，0～70％乙酸乙酯/石油醚梯度洗脱液@20mL/min)。获得化合物1A(0.48g，收率：91.4％)，为黄色油状物。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.94(dd，J＝1.8，4.2Hz，1H)，8.56-8.49(m，1H)，8.18(d，J＝8.6Hz，1H)，8.04-7.94(m，2H)，7.85(d，J＝8.4Hz，1H)，7.44-7.37(m，1H)，4.26(q，J＝7.1Hz，2H)，4.01(s，3H)，1.30-1.24(m，3H).MS(ESI)m/z(M+H)+282.2。
向化合物1A(0.48g，1.71mmol)在MeOH(10mL)中的溶液中添加NaOH(341mg，8.53mmol)在H2O(2mL)中的溶液，将混合物在50℃搅拌18h。将反应混合物浓缩以除去MeOH，用水(10mL)稀释，用EA(20mL)萃取，将水相用1N HCl酸化至pH～3，形成沉淀，将固体过滤并冻干。获得化合物1B(0.22g，收率：50.9％)，为黄色固体，其无需进一步纯化即可用于下一步。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.10(dd，J＝1.4，4.7Hz，1H)，8.77(d，J＝7.9Hz，1H)，8.65(s，1H)，8.42(s，1H)，8.23-8.11(m，2H)，7.81(dd，J＝4.6，8.4Hz，1H)，3.97(s，3H).MS(ESI)m/z(M+H)+254.2。
向化合物1B(210mg，829.20μmol)、中间体1D(230mg，997.01μmol，HCl)在DMF(6mL)中的混合物中添加DIEA(4.13mmol，720μL)，然后添加HBTU(377mg，994.09μmol)。将混合物在25℃下搅拌1.5h。将反应混合物加入H2O(40mL，0℃)中，形成一定量的黄色沉淀，然后在0℃下搅拌15分钟。将固体用H2O(10mL×2)洗涤并冻干。将残余物在DCM(3mL)和PE(20mL)中研磨，然后过滤。得到化合物1C(190mg，收率：50.8％)，为黄色固体。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.90(s，1H)，8.39-8.30(m，2H)，8.19-8.07(m，1H)，7.95-7.83(m，2H)，7.81-7.72(m，1H)，7.56-7.46(m，1H)，7.41-7.11(m，7H)，5.92-5.74(m，1H)，4.58-4.41(m，1H)，4.12-4.03(m，1H)，3.93(s，3H)，3.85(br d，J＝4.3Hz，1H)，3.19-2.74(m，2H).MS(ESI)m/z(M+H)+430.2。
向化合物1C(0.19g，442.41 umol)在DMSO(10mL)和DCM(60mL)中的溶液中加入DMP(751mg，1.77mmol)，将混合物在25℃下搅拌1.5h。将反应混合物用DCM(20mL)稀释，然后用饱和Na2S2O3(60mL)和饱和NaHCO3(60mL)淬灭，用DCM(50mL×2)萃取，将有机层用水(100mLx 2)和盐水(100mLx2)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩，得到残留物。将残余物在CH3CN(3mL)和异丙醚(3mL)中研磨，然后过滤并冻干。获得化合物1(30mg，收率：15.5％)，为浅黄色固体。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.89(br s，1H)，8.42-8.26(m，2H)，8.12(br s，1H)，8.00-7.43(m，5H)，7.33-6.76(m，6H)，5.43-4.51(m，1H)，3.94(s，3H)，3.21(d，J＝14.1Hz，1H)，2.96-2.84(m，1H).MS(ESI)m/z(M+H)+428.1。
N-(4-氨基-3，4-二氧代-1-苯基丁烷-2-基)-3-(2，3-二甲氧基苯基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺(12)
如实施例1中所述，分别使用相应的硼酸或硼酸酯分别制备化合物12、14、18、22、28、54、94、99、100、101和102。获得化合物12(88mg，收率：66.5％)，为浅黄色固体：1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.15(s，1H)，8.02(s，1H)，7.83-7.73(m，2H)，7.30-7.11(m，5H)，7.09-6.98(m，2H)，6.72(dd，J＝1.5，7.3Hz，1H)，5.42-5.15(m，1H)，3.88(s，3H)，3.81(s，3H)，3.42(s，3H)，3.10(dd，J＝3.5，14.1Hz，1H)，2.74(dd，J＝9.5，13.6Hz，1H).MS(ESI)m/z(M+H)+437.2。
N-(4-氨基-3，4-二氧代-1-苯基丁烷-2-基)-1-甲基-3-(喹啉-8-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺(14)
获得化合物14(90mg，收率：53.7％)，为白色固体：1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.64(dd，J＝1.9，4.1Hz，1H)，8.36(dd，J＝1.8，8.4Hz，1H)，8.16(s，1H)，7.99(dd，J＝1.5，8.2Hz，1H)，7.89(s，1H)，7.82(d，J＝7.5Hz，1H)，7.69(s，1H)，7.65-7.55(m，2H)，7.47(dd，J＝4.1，8.3Hz，1H)，7.19-7.11(m，3H)，6.92(dd，J＝2.0，7.3Hz，2H)，5.13-5.05(m，1H)，3.94-3.85(m，3H)，2.94(dd，J＝4.0，13.9Hz，1H)，2.59-2.50(m，1H).MS(ESI)m/z(M+H)+428.2。
N-(4-氨基-3，4-二氧代-1-苯基丁烷-2-基)-1-(二氟甲基)-3-(喹啉-8-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺(18)
获得化合物18(80mg，收率：54.7％)，为白色固体：1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.67-8.60(m，1H)，8.56(dd，J＝1.8，4.2Hz，1H)，8.42(d，J＝7.5Hz，1H)，8.38-8.33(m，1H)，8.03(dd，J＝1.3，8.4Hz，1H)，7.95-7.77(m，2H)，7.76-7.69(m，2H)，7.65-7.59(m，1H)，7.46(dd，J＝4.2，8.4Hz，1H)，7.26-7.16(m，3H)，7.10(d，J＝6.8Hz，2H)，5.22-5.05(m，1H)，3.02(dd，J＝3.6，14.0Hz，1H)，2.64(dd，J＝9.7，13.9Hz，1H).MS(ESI)m/z(M+H)+464.1。
N-(4-氨基-3，4-二氧代-1-苯基丁烷-2-基)-1-(二氟甲基)-3-(异喹啉-8-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺(22)
获得化合物22(90mg，收率：53.1％)，为白色固体：1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.14-9.06(m，1H)，8.81(s，1H)，8.51(d，J＝5.5Hz，1H)，8.29(br s，1H)，8.09-7.79(m，3H)，7.76(t，J＝7.8Hz，1H)，7.70(d，J＝9.0Hz，1H)，7.57(d，J＝7.0Hz，1H)，7.51(br s，1H)，7.25-7.12(m，5H)，5.36-5.07(m，1H)，3.16(d，J＝4.5Hz，1H)，2.83(dd，J＝9.2，13.9Hz，1H).MS(ESI)m/z(M+H)+464.1。
N-(4-氨基-3，4-二氧代-1-苯基丁烷-2-基)-1-甲基-3-(2-甲基呋喃-3-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺(28)
获得化合物28(170mg，收率：85.5％)，为白色固体：1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.12-7.99(m，3H)，7.77(s，1H)，7.40(d，J＝2.0Hz，1H)，7.29-7.15(m，5H)，6.48(d，J＝1.8Hz，1H)，5.38-5.13(m，1H)，3.83(s，3H)，3.12(dd，J＝3.9，13.8Hz，1H)，2.79(dd，J＝9.7，13.9Hz，1H)，2.19(s，3H).MS(ESI)m/z(M+H)+381.1。
N-(4-氨基-3，4-二氧代-1-苯基丁烷-2-基)-3-(异喹啉-8-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺(54)
获得化合物54(15mg，收率：14.5％)，为白色固体：1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.17-9.03(m，1H)，8.44(d，J＝6.0Hz，1H)，8.35(d，J＝7.5Hz，1H)，7.94-7.92(m，1H)，7.82(d，J＝5.7Hz，1H)，7.82-7.79(m，1H)，7.74-7.61(m，2H)，7.46-7.28(m，2H)，7.26-6.97(m，6H)，5.16-5.11(m，0.5H)，4.47-4.31(m，0.5H)，3.99-3.92(m，3H)，3.19-2.70(m，2H).MS(ESI)m/z(M+H)+428.1。
N-(4-氨基-3，4-二氧代-1-苯基丁烷-2-基)-2-(二氟甲基)-4-(1H-吲唑-7-基)噁唑-5-甲酰胺(94)
使中间体衍生物7-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二噁硼烷-2-基)-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吲唑和1-(二氟甲基)-3-碘-1H-吡唑-4-羧酸乙酯经受如化合物12所述的条件，得到化合物94。获得化合物94(63mg，收率：40.9％)，为浅黄色固体：1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ12.94(br s，1H)，8.91(d，J＝7.5Hz，1H)，8.63(s，1H)，8.19-8.12(m，2H)，8.01-7.84(m，2H)，7.81(d，J＝7.8Hz，1H)，7.75(d，J＝7.3Hz，1H)，7.31(d，J＝4.3Hz，4H)，7.26-7.22(m，1H)，7.10(t，J＝7.7Hz，1H)，5.42-5.34(m，1H)，3.21(dd，J＝3.9，13.9Hz，1H)，2.85(dd，J＝9.9，13.9Hz，1H).MS(ESI)m/z(M+H)+＝453.1。
N-(4-氨基-3，4-二氧代-1-苯基丁烷-2-基)-1-甲基-3-(2-甲基-2H-吲唑-7-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺(99)
使中间体衍生物(2-甲基-2H-吲唑-7-基)硼酸和3-碘-1-甲基-1H-吡唑-4-羧酸乙酯经受如化合物12所述的条件，得到化合物99。获得化合物99(70mg，收率：23.4％)，为白色固体：1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.41(s，1H)，8.15(s，1H)，8.00(s，1H)，7.93(d，J＝7.6Hz，1H)，7.80-7.74(m，2H)，7.18-7.05(m，5H)，6.82-6.78(m，2H)，5.25-5.18(m，1H)，4.09(s，3H)，3.92-3.87(m，3H)，3.01-2.95(m，1H)，2.47-2.41(m，1H).MS(ESI)m/z(M+H)+431.1。
N-(4-氨基-3，4-二氧代-1-苯基丁烷-2-基)-3-(1-异丙基-1H-吲唑-4-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺(100)
使中间体衍生物1-异丙基-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二噁硼烷-2-基)-1H-吲唑和1-(二氟甲基)-3-碘-1H-吡唑-4-羧酸乙酯经受如化合物12所述的条件，得到化合物100。获得化合物100(60mg，收率：48.41％)，为白色固体。MS(ESI)m/z(M+H)+＝459.2.1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.31(d，J＝7.2Hz，1H)，8.09-8.05(m，2H)，8.04(br.s，1H)，7.79(br.s，1H)，7.60(d，J＝7.2Hz，1H)，7.30-7.14(m，7H)，5.31-5.20(m，1H)，5.03-4.91(m，1H)，3.92(s，3H)，3.16-3.04(m，1H)，2.83-2.71(m，1H)，1.45(d，J＝6.4Hz，6H)。
N-(4-氨基-3，4-二氧杂-1-苯基丁-2-基)-3-(苯并[B]噻吩-7-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺(101)
获得化合物101(50mg，收率：11.58％)，为白色固体：1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.96(s，1H)，7.92(dd，J＝1.1，7.9Hz，1H)，7.62(d，J＝5.5Hz，1H)，7.51-7.47(m，2H)，7.44-7.38(m，1H)，7.23-7.19(m，3H)，7.00(dd，J＝2.9，6.7Hz，2H)，6.97-6.92(m，1H)，6.58(brd，J＝6.8Hz，1H)，6.20(br s，1H)，5.37(ddd，J＝4.8，7.0，8.5Hz，1H)，3.99-3.93(m，3H)，3.17(dd，J＝4.9，13.9Hz，1H)，2.81(dd，J＝8.7，13.9Hz，1H).MS(ESI)m/z(M+H)+＝433.1。
N-(4-氨基-3，4-二氧杂-1-苯基丁-2-基)-3-(苯并[B]噻吩-4-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺(102)
获得化合物102(100mg，收率：71.0％)，为白色固体：1H NMR(DMSO-d6，400MHz)：δ8.19(s，1H)，8.15(d，J＝7.5Hz，1H)，8.02(s，1H)，8.00-7.94(m，1H)，7.79(s，1H)，7.67(d，J＝5.5Hz，1H)，7.37-7.15(m，8H)，5.31-5.14(m，1H)，3.95(s，3H)，3.11(dd，J＝3.8，13.8Hz，1H)，2.77(dd，J＝9.7，13.9Hz，1H).MS(ESI)m/z(M+H)+433.1。
实施例2-化合物4、10、13、25、37、49和63
N-(4-氨基-3，4-二氧代-1-苯基丁烷-2-基)-1-(二氟甲基)-3-(异喹啉-1-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺(3)
Figure BDA0002953643150002301
向3-碘-1H-吡唑-4-羧酸乙酯(20g，75.18mmol)在DMF(100mL)中的溶液中添加2-氯-2，2-二氟乙酸钠(22.92g，150.36mmol)和Cs2CO3(48.99g，150.36mmol)。将混合物在100℃下搅拌16h。将反应混合物浓缩，残余物用H2O(200mL)稀释，并用EtOAc(100mL×3)萃取。将合并的有机层用盐水(200mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩，得到残余物。将残余物通过快速硅胶色谱法纯化(
Figure BDA0002953643150002302
X g
Figure BDA0002953643150002303
Silica Flash Column，0％～10％～0％乙酸乙酯/石油醚梯度洗脱液)。得到化合物4A(9.1g，收率：38.30％)，为白色固体。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ8.47-7.95(m，1H)，7.44-6.95(m，1H)，4.53-4.17(m，2H)，1.54-1.17(m，3H)。
在N2气氛下，向化合物4A(500mg，1.58mmol)、1-溴异喹啉(329mg，1.58mmol)、CsF(480mg，3.16mmol)和B2pin2(603mg，2.37mmol)在甲苯(8mL)和MeOH(8mL)中的溶液中一次性添加Pd(OAc)2(35.52mg，158.21μmol)和P(1-金刚烷基)2Bu(57mg，158.98μmol)。将混合物在N2气氛下在80℃下搅拌16小时。将反应混合物过滤并浓缩，残余物用H2O(10mL)稀释，并用EA(10mL×3)萃取。有机层经Na2SO4干燥，过滤并浓缩，得到残余物。残余物通过快速硅胶色谱法纯化(PE∶EA＝5∶1至2∶1)。得到化合物4B(80mg，收率：12.1％)，为黄色固体。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.64(d，J＝5.7Hz，1H)，8.54(s，1H)，7.90(d，J＝8.2Hz，1H)，7.83-7.75(m，2H)，7.74-7.68(m，1H)，7.55(ddd，J＝1.1，7.0，8.4Hz，1H)，7.48-7.29(m，1H)，4.01(q，J＝7.1Hz，2H)，0.86(t，J＝7.2Hz，3H).MS(ESI)m/z(M+H)+317.9。
向化合物4B(80mg，252.14μmol)在MeOH(10mL)和H2O(3mL)中的溶液中加入NaOH(40mg，1.00mmol)。将混合物在50℃下搅拌16小时。将反应混合物浓缩，用水(10mL)稀释，用MTBE(10mL)萃取，然后将水相用2N HCl酸化至pH～2-3，并冻干。然后将残余物在溶液(DCM∶MeOH＝10∶1)中搅拌，过滤并浓缩，得到残余物。得到化合物4C(39mg，收率：53.5％)，为棕色固体。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.91(s，1H)，8.51(d，J＝5.7Hz，1H)，8.01(t，J＝8.5Hz，2H)，7.98-7.85(m，2H)，7.81-7.72(m，1H)，7.62(t，J＝7.7Hz，1H)。
向化合物4C(64mg，221.27μmol)和中间体1D(56mg，242.75μmol，HC1)在DMF(10mL)中的溶液中加入HBTU(101mg，266.32μmol)，然后加入DIEA(114mg，882.06μmol，153.64μL)，并在25℃搅拌2小时。将反应混合物用水(40mL)稀释，用EA(30mL×3)萃取，将有机层浓缩，得到残余物。将残余物在PE∶EA(10∶1，20mL)中研磨，并通过过滤收集。得到化合物4D(80mg，收率：76.8％)，为淡黄色固体。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.71-9.27(m，1H)，8.84-8.54(m，2H)，8.41-7.57(m，6H)，7.30(br s，1H)，7.16-6.62(m，6H)，6.17-5.76(m，1H)，4.52-4.23(m，1H)，3.93-3.75(m，1H)，2.85-2.67(m，2H).MS(ESI)m/z(M+H)+466.1。
向化合物4D(80mg，171.88μmol)在DMSO(10mL)和DCM(50mL)中的溶液中添加DMP(292mg，688.45μmol)。将混合物在25℃下搅拌3小时。将反应混合物用DCM(20mL)稀释，用饱和NaHCO3(25mL)和饱和Na2S2O3(25mL)淬灭，将混合物搅拌10分钟。有机层用水(40mL×2)、盐水(40mL×2)洗涤，经Na2SO4干燥，然后过滤并浓缩，得到残余物。残余物通过快速硅胶色谱法纯化(PE∶EA＝1∶1至0∶1)。得到化合物4(25mg，收率：29.9％)，为淡黄色固体。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.81(d，J＝7.3Hz，1H)，8.88(s，1H)，8.37(d，J＝5.5Hz，1H)，8.28(d，J＝9.0Hz，1H)，8.14-7.97(m，3H)，7.92(d，J＝6.0Hz，1H)，7.83(br d，J＝5.3Hz，2H)，7.72-7.66(m，1H)，7.06-6.92(m，5H)，5.46-5.36(m，1H)，3.15(br dd，J＝4.5，14.0Hz，1H)，2.88(dd，J＝8.7，14.0Hz，1H).MS(ESI)m/z(M+H)+464.1。
N-(4-氨基-3，4-二氧代-1-苯基丁烷-2-基)-3-(异喹啉-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺(10)
如实施例2中所述，分别使用相应的羧酸制备化合物10、13、25、37、49和63。使用3-碘-1-甲基-1H-吡唑-4-羧酸乙酯获得化合物10(55mg，收率：61.2％)，为淡黄色固体：1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ10.21(d，J＝7.3Hz，1H)，8.61(d，J＝8.2Hz，1H)，8.37(s，1H)，8.32(d，J＝6.0Hz，1H)，8.12-8.02(m，2H)，7.90-7.80(m，3H)，7.69(t，J＝7.8Hz，1H)，7.05-6.88(m，5H)，5.47(d，J＝4.9Hz，1H)，4.01(s，3H)，3.17(dd，J＝4.7，13.8Hz，1H)，2.91(dd，J＝7.3，14.3Hz，1H).MS(ESI)m/z(M+H)+428.2。
N-(4-氨基-3，4-二氧代-1-苯基丁烷-2-基)-1-甲基-3-(喹喔啉-2-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺(13)
使用3-碘-1-甲基-1H-吡唑-4-羧酸乙酯获得化合物13(20mg，收率：76.2％)，为白色固体：1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.18(d，J＝8.2Hz，1H)，9.60(s，1H)，8.46(s，1H)，8.19(s，1H)，8.12(d，J＝8.2Hz，1H)，7.92-7.84(m，2H)，7.77(dt，J＝1.3，7.7Hz，1H)，7.65(d，J＝8.4Hz，1H)，7.01-6.93(m，4H)，6.90-6.79(m，1H)，5.79-5.74(m，1H)，4.03(s，3H)，3.29-3.18(m，2H).MS(ESI)m/z(M+H)+429.1。
N-(4-氨基-3，4-二氧代-1-苯基丁烷-2-基)-1-(二氟甲基)-3-(喹喔啉-2-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺(25)
获得化合物25(20mg，收率：52.2％)，为白色固体：1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ10.80(d，J＝8.2Hz，1H)，9.51(s，1H)，8.92(s，1H)，8.23-7.82(m，5H)，7.78(dt，J＝1.3，7.6Hz，1H)，7.71-7.65(m，1H)，7.01-6.89(m，4H)，6.88-6.82(m，1H)，5.77-5.67(m，1H)，3.24-3.12(m，2H).MS(ESI)m/z(M+H)+465.1。
N-(4-氨基-3，4-二氧杂-1-苯基丁-2-基)-3-(6，7-二甲氧基喹啉-4-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺(37)
获得化合物37(15mg，收率：47.2％)，为浅黄色固体：1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.62(d，J＝4.5Hz，1H)，8.35-8.23(m，1H)，7.71(br d，J＝6.8Hz，1H)，7.65(br s，1H)，7.49(br s，1H)，7.41(s，1H)，7.26-7.17(m，5H)，7.10(d，J＝6.8Hz，2H)，5.27-5.18(m，1H)，3.99(s，3H)，3.96(s，3H)，3.72(s，3H)，3.16-3.21(m，1H)，2.75-2.81(m，1H).MS(ESI)m/z(M+H)+488.2。
N-(4-氨基-3，4-二氧杂-1-苯基丁-2-基)-1-甲基-3-(喹唑啉-4-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺(49)
使用3-碘-1-甲基-1H-吡唑-4-羧酸乙酯获得化合物49(62mg，收率：61.3％)，为白色固体：1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ10.10(d，J＝7.5Hz，1H)，8.97(s，1H)，8.66(d，J＝8.4Hz，1H)，8.44(s，1H)，8.11(s，1H)，8.06(d，J＝3.5Hz，2H)，7.84(s，1H)，7.80-7.72(m，1H)，7.01(s，5H)，5.61-5.35(m，1H)，4.03(s，3H)，3.18(dd，J＝5.0，14.2Hz，1H)，2.99(dd，J＝7.6，14.0Hz，1H).MS(ESI)m/z(M+H)+429.1。
N-(4-氨基-3，4-二氧代-1-苯基丁烷-2-基)-1-(二氟甲基)-3-(喹唑啉-4-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺(63)
获得化合物63(28mg，收率：73.3％)，为浅黄色固体：1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.51(d，J＝7.5Hz，1H)，9.11(s，1H)，8.92(s，1H)，8.23(d，J＝8.6Hz，1H)，8.18-7.99(m，4H)，7.90-7.80(m，1H)，7.79-7.71(m，1H)，7.14-7.03(m，5H)，5.36(dt，J＝4.6，7.9Hz，1H)，3.14(dd，J＝4.2，13.9Hz，1H)，2.89(dd，J＝8.5，14.0Hz，1H).MS(ESI)m/z(M+H)+465.1。
实施例3
N-(4-氨基-3，4-二氧代-1-苯基丁烷-2-基)-1-甲基-3-(哌嗪-1-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺盐酸盐(2)
Figure BDA0002953643150002341
在N2气氛下，向3-碘-1-甲基-1H-吡唑-4-羧酸乙酯(0.5g，1.79mmol)和哌嗪-1-羧酸叔丁酯(665mg，3.57mmol)在二噁烷(20mL)中的溶液中加入S-Phos(147mg，357.06μmol)和Cs2CO3(1.16g，3.57mmol)，然后添加Pd(OAc)2(40mg，178.53μmol)。将反应在100℃下搅拌17h。将反应混合物过滤，用EA(30mL×2)洗涤，浓缩滤液，得到残余物。将残余物通过快速硅胶色谱法纯化；(
Figure BDA0002953643150002342
4g
Figure BDA0002953643150002343
Silica Flash Column，0～10％乙酸乙酯/石油醚梯度洗脱液@20mL/min)。获得化合物2A(0.15g，收率：22.8％)，为浅黄色油状物。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.75(s，1H)，4.24(q，J＝7.1Hz，2H)，3.76(s，3H)，3.61-3.54(m，4H)，3.30-3.20(m，4H)，1.47(s，9H)，1.32(t，J＝7.1Hz，3H).MS(ESI)m/z(M+H)+339.1。
如实施例1所示，将化合物2A转化为化合物2D。获得化合物2D(0.10g，收率：72.2％)，为黄色固体。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.30-7.84(m，4H)，7.30-7.17(m，3H)，7.07(d，J＝7.1Hz，2H)，5.57-5.44(m，1H)，3.76-3.67(m，3H)，3.28-3.08(m，6H)，2.86-2.70(m，4H)，1.43-1.38(m，9H).MS(ESI)m/z(M+H)+485.3。
向化合物2D(100mg，206.38μmol)在EtOAc(2mL)中的溶液中加入HCl/EtOAc(4M，4mL)，将混合物在25℃下搅拌4h。将反应混合物浓缩，得到残余物。将残余物在CH3CN(10mL×2)中研磨，然后浓缩，得到残余物。获得化合物2(75mg，收率：94.3％)，为黄色固体。1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.35(br s，2H)，8.17-8.06(m，2H)，7.87(br s，1H)，7.32-7.12(m，5H)，5.53-5.29(m，1H)，3.74(s，3H)，3.28-2.86(m，10H).MS(ESI)m/z(M+H)+385.2。
实施例4-化合物6-7
N-(4-氨基-3，4-二氧代-1-苯基丁烷-2-基)-3-(苯并[D]噻唑-7-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺(7)
Figure BDA0002953643150002351
向7-溴苯并[d]噻唑(900mg，4.2mmol)在二噁烷(20mL)中的溶液中加入KOAc(843mg，8.5mmol)、4，4，4′，4′，5，5，5′，5′-八甲基-2，2′-双(1，3，2-二噁硼烷)(1.07g，4.2mmol)、Pd(dppf)Cl2(307mg，420μmol)。然后将混合物在N2气氛下在90℃下搅拌12h。将反应冷却至室温，并将反应过滤。将滤液减压浓缩，除去溶剂。向残余物中添加H2O(20mL)，将混合物用EA(20mL×3)萃取。将合并的有机层用盐水(20mL)洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩，得到化合物6A(1.0g，粗品)，为黑色油状物，其直接用于下一步。
使用实施例1中所述的方法，将化合物6A转化为化合物6。获得化合物6(50mg，收率：33％)，为白色固体。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)：δ9.36(s，1H)，8.60(d，J＝7.3Hz，1H)，8.14(s，1H)，8.10(s，1H)，8.03(d，J＝8.0Hz，1H)，7.83(s，1H)，7.78(d，J＝7.5Hz，1H)，7.48(t，J＝7.8Hz，1H)，7.33-7.27(m，4H)，7.26-7.20(m，1H)，5.41-5.22(m，1H)，3.97(s，3H)，3.18(dd，J＝3.8，14.1Hz，1H)，2.83(dd，J＝10.2，13.9Hz，1H).MS(ESI)m/z(M+H)+434.1。
N-(4-氨基-3，4-二氧代-1-苯基丁烷-2-基)-3-(苯并[D]噻唑-7-基)-1-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-甲酰胺(7)
使用实施例1中所述的方法，将化合物6A和4A转化为化合物7。获得化合物7(60mg，收率：51.6％)，为黄色固体。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)：δ9.41(s，1H)，8.99(d，J＝7.5Hz，1H)，8.59(s，1H)，8.17-8.09(m，2H)，8.02-7.83(m，2H)，7.73(d，J＝7.5Hz，1H)，7.53(t，J＝8.0Hz，1H)，7.30(s，4H)，7.24(br s，1H)，5.42-5.32(m，1H)，3.21(br dd，J＝3.3，13.9Hz，1H)，2.82(dd，J＝10.1，13.5Hz，1H).MS(ESI)m/z(M+H)+470.1。
实施例5-化合物32、62、69和61
Figure BDA0002953643150002371
将K2CO3(5.26g，38.06mmol)加入到4-溴-1H-吲唑(5g，25.38mmol)在DMF(50mL)中的混合物中。30分钟后，加入MeI(18.2g，128.22mmol，8.0mL)，并将混合物在25℃下搅拌3h。将混合物用H2O(150mL)和EA(50mL)处理。分离有机层，并用EA(50mL x 2)萃取水层。将合并的有机层用盐水(50mL×2)洗涤，经MgSO4干燥，过滤并浓缩。将残余物通过硅胶快速柱色谱法(PE/EA＝10/1至5/1)纯化，得到一对异构体。
得到异构体1(化合物32A，Rf＝0.54，PE/EA＝5/1)：4-溴-1-甲基-吲唑(3.2g，59.8％收率)，为白色固体。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)：δ7.98(d，J＝0.9Hz，1H)，7.67-7.65(m，1H)，7.35-7.27(m，2H)，4.04(s，3H)。
得到异构体2(化合物32B，Rf＝0.24，PE/EA＝5/1)：4-溴-2-甲基-吲唑(1.3g，24.3％收率)，为无色粘性油。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)：δ8.37(s，1H)，7.60-7.57(m，1H)，7.26-7.21(m，1H)，7.13(dd，J＝7.3，8.6Hz，1H)，4.16(s，3H)。
将KOAc(1.12g，11.37mmol)添加至化合物32A(1.2g，5.69mmol)和4，4，4′，4′，5，5，5′，5′-八甲基-2，2′-双(1，3，2-二噁硼烷)(2.17g，8.53mmol)在DMF(25mL)中的混合物中，然后添加Pd(dppf)Cl2.CH2Cl2(232mg，284.09μmol)。然后将氮气鼓泡通过混合物。将混合物加热至85℃并搅拌12h。将混合物用EA(75mL)和盐水(100mL)处理。将混合物通过硅藻土过滤。将滤液转移到分液漏斗中。分离有机层，经MgSO4干燥，过滤并浓缩。残余物通过硅胶柱色谱法纯化(石油醚/乙酸乙酯＝10/1至5/1)，得到化合物32C(1.5g，87.9％收率)，为无色粘性油状物。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)：δ8.15(d，J＝0.8Hz，1H)，7.79(d，J＝8.5Hz，1H)，7.54-7.50(m，1H)，7.41(dd，J＝6.8，8.5Hz，1H)，4.06(s，3H)，1.35(s，12H)。
将KOAc(1.2g，12.3mmol)添加至化合物32B(1.3g，6.2mmol)和4，4，4′，4′，5，5，5′，5′-八甲基-2，2′-双(1，3，2-二噁硼烷)(2.4g，9.3mmol)在DMF(20mL)中的混合物中。将氮气鼓泡通过混合物。然后加入Pd(dppf)Cl2.CH2Cl2(253mg，309.8μmol)。将混合物在氮气气氛下在85℃搅拌12h。将混合物用EA(50mL)和盐水(50mL)稀释。将混合物通过硅藻土过滤。将滤液转移到分液漏斗中。分离有机层，并用EA(15mL x 2)萃取水层。合并的有机层用盐水(35mL)洗涤，经MgSO4干燥，过滤并浓缩。残余物通过硅胶快速柱色谱法纯化(PE/EA＝5/1至2/1)，得到化合物32D(1.5g，收率94.4％)，为白色固体。MS(ESI)m/z (M+H)+259.2。
Figure BDA0002953643150002381
N-(4-氨基-3，4-二氧代-1-苯基丁烷-2-基)-1-甲基-3-(1-甲基-1H-吲唑-4-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺(32)
使用实施例1中所述的方法，将化合物32C和3-碘-1-甲基-1H-吡唑-4-羧酸乙酯转化为化合物32。获得化合物32(60mg，收率：60.0％)，为浅黄色固体。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)：δ8.38(br d，J＝7.3Hz，1H)，8.09(br d，J＝9.5Hz，3H)，7.82(br s，1H)，7.61-7.53(m，1H)，7.35-7.19(m，7H)，5.38-5.25(m，1H)，4.05(s，3H)，3.96(s，3H)，3.15(br dd，J＝3.4，13.7Hz，1H)，2.81(br dd，J＝10.2，13.4Hz，1H).MS(ESI)m/z(M+H)+431.1。
N-(4-氨基-3，4-二氧代-1-苯基丁烷-2-基)-1-(二氟甲基)-3-(1-甲基-1H-吲唑-4-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺(62)
使用实施例1中所述的方法，将化合物32C和中间体4A转化为化合物62。获得化合物62(96mg，收率：48.9％)，为白色固体。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)：δ8.52(s，1H)，8.46(d，J＝9.8Hz，1H)，8.18-7.70(m，3H)，7.69-7.51(m，2H)，7.42-7.33(m，2H)，7.31-7.19(m，5H)，5.45-5.28(m，1H)，4.11-4.04(m，3H)，3.21(dd，J＝4.4，14.2Hz，1H)，2.89(dd，J＝9.4，14.2Hz，1H).MS(ESI)m/z(M+H)+467.1。
Figure BDA0002953643150002391
N-(4-氨基-3，4-二氧代-1-苯基丁烷-2-基)-1-甲基-3-(2-甲基-2H-吲唑-4-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺(69)
使用实施例1中所述的方法，将化合物32D和3-碘-1-甲基-1H-吡唑-4-羧酸乙酯转化为化合物69。获得化合物69(230mg，收率：69.7％)，为白色固体。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.39(d，J＝7.3Hz，1H)，8.36(s，1H)，8.10(s，1H)，8.06(s，1H)，7.85(s，1H)，7.53(d，J＝8.8Hz，1H)，7.32-7.22(m，6H)，7.15(dd，J＝7.2，8.4Hz，1H)，5.33-5.28(m，1H)，4.17(s，3H)，3.95(s，3H)，3.16(dd，J＝3.9，13.9Hz，1H)，2.81(dd，J＝9.9，13.9Hz，1H).MS(ESI)m/z(M+H)+431.1。
N-(4-氨基-3，4-二氧杂-1-苯基丁-2-基)-1-(二氟甲基)-3-(2-甲基-2H-吲唑-4-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺(61)
使用实施例1中所述的方法，将化合物32D和中间体4A转化为化合物61。获得化合物61(250mg，收率：85.9％)，为浅黄色固体。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.91(d，J＝7.5Hz，1H)，8.50(s，1H)，8.38(s，1H)，8.17-8.11(m，1H)，7.98-7.82(m，2H)，7.62(d，J＝8.5Hz，1H)，7.34-7.22(m，6H)，7.19(dd，J＝7.2，8.4Hz，1H)，5.40-5.32(m，1H)，4.21-4.09(m，3H)，3.25-3.17(m，1H)，2.88-2.78(m，1H).MS(ESI)m/z(M+H)+＝467.2。
实施例6-化合物33-34、77
Figure BDA0002953643150002401
将K2CO3(3.51g，25.38mmol)加入到7-溴-1H-吲唑(5g，25.38mmol)在DMF(50mL)中的混合物中。30分钟后，加入MeI(18.05g，7.92mL，127.17mmol)，并将混合物在25℃下搅拌3h。用过滤器除去不溶物。将滤液真空浓缩。将残余物用H2O(50mL)和EA(50mL)处理。分离有机层，用盐水(15mL×2)洗涤，经MgSO4干燥，过滤并浓缩。残余物通过硅胶色谱法纯化(PE/EA＝10/1至3/1)，得到一对异构体。
得到异构体1(化合物33A，Rf＝0.54，PE/EA＝5/1)：7-溴-1-甲基-1H-吲唑(2.85g，53.2％收率)，为无色油状物，其静置后变为白色固体。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)：δ8.09(s，1H)，7.74(dd，J＝0.9，7.9Hz，1H)，7.56(dd，J＝0.8，7.4Hz，1H)，7.02-6.97(m，1H)，4.28(s，3H)。
得到异构体2(化合物33B，Rf＝0.18，PE/EA＝5/1)：7-溴-2-甲基-2H-吲唑(1.85g，34.5％收率)，为白色固体。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)：δ8.47(s，1H)，7.69(dd，J＝0.7，8.4Hz，1H)，7.49-7.44(m，1H)，6.91(dd，J＝7.3，8.2Hz，1H)，4.17(s，3H)。
将KOAc(1.35g，13.74mmol)添加至化合物33A(1.45g，6.87mmol)和4，4，4′，4′，5，5，5′，5′-八甲基-2，2′-双(1，3，2-二噁硼烷)(2.62g，10.31mmol)在DMF(25mL)中的混合物中。向混合物中通入氮气，并加入Pd(dppf)Cl2.CH2Cl2(280mg，342.87μmol)。然后将混合物加热至85℃并搅拌12h。将混合物用EA(75mL)和盐水(100mL)处理。将混合物通过硅藻土过滤。将滤液转移到分液漏斗中。分离有机层，经MgSO4干燥，过滤并浓缩。残余物通过硅胶柱色谱法纯化(石油醚/乙酸乙酯＝10/1至5/1)，得到化合物33C(1.7g，90.1％收率)，为白色固体。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)：δ7.99(s，1H)，7.89(dd，J＝1.0，7.0Hz，1H)，7.82(dd，J＝1.3，8.0Hz，1H)，7.13(dd，J＝7.0，8.0Hz，1H)，4.31(s，3H)，1.41(s，12H).MS(ESI)m/z(M+H)+259.2。
N-(4-氨基-3，4-二氧代-1-苯基丁烷-2-基)-1-甲基-3-(1-甲基-1H-吲唑-7-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺(33)
使用实施例1中所述的方法，将化合物33C和3-碘-1-甲基-1H-吡唑-4-羧酸乙酯转化为化合物33。获得化合物33(70mg，收率：43.6％)，为浅黄色固体。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)：δ8.37(s，1H)，8.06(s，1H)，8.02(s，1H)，7.93(d，J＝7.8Hz，1H)，7.82-7.70(m，2H)，7.26-7.17(m，3H)，7.13-7.06(m，4H)，5.26-5.17(m，1H)，3.95(s，3H)，3.46(s，3H)，3.10(br dd，J＝3.4，13.9Hz，1H)，2.69(br dd，J＝9.8，13.8Hz，1H).MS(ESI)m/z(M+H)+431.2。
N-(4-氨基-3，4-二氧杂-1-苯基丁-2-基)-1-(二氟甲基)-3-(1-甲基-1H-吲唑-7-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺(34)
使用实施例1中所述的方法，将化合物33C和中间体4A转化为化合物34。获得化合物34(30mg，收率：27.0％)，为白色固体。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.81(s，1H)，8.10-8.00(m，2H)，7.92-7.43(m，4H)，7.22-7.07(m，7H)，5.30-5.22(m，1H)，3.52(s，3H)，3.15(d，J＝10.0Hz，1H)，2.79(dd，J＝9.4，13.9Hz，1H).MS(ESI)m/z(M+H)+467.2)，4.21-4.09(m，3H)，3.25-3.17(m，1H)，2.88-2.78(m，1H).MS(ESI)m/z(M+H)+＝467.2。
N-(4-氨基-3，4-二氧代-1-苯基丁烷-2-基)-1-(二氟甲基)-3-(2-甲基-2H-吲唑-7-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺(77)
使用实施例1中所述的方法，将2-甲基-7-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二噁硼烷-2-基)-2H-吲唑(使用与33C相同的方法由中间体33B制备)和中间体4A转化为化合物77。获得化合物77(30mg，收率：42.6％)，为白色固体。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.59(s，1H)，8.40-8.35(m，2H)，8.05-7.88(m，2H)，7.77-7.73(m，2H)，7.22-7.11(m，4H)，7.08-7.02(m，1H)，7.00-6.95(m，2H)，5.25-5.18(m，1H)，4.03(s，3H)，3.06-2.99(m，1H)，2.61-2.53(m，1H).MS(ESI)m/z(M+H)+467.2。
实施例7-化合物17、31、51、70、24、26和55
Figure BDA0002953643150002421
向3-碘-1-甲基-1H-吡唑-4-羧酸乙酯(1g，3.57mmol)在MeOH(15mL)中的溶液中添加NaOH(714mg，17.85mmol)在H2O(2mL)中的溶液，将混合物在50℃搅拌1h。将反应混合物浓缩以除去MeOH，然后用水(30mL)稀释，用1N HCl酸化至pH～3，形成沉淀，将固体过滤并真空干燥。残余物无需进一步纯化即可用于下一步。获得化合物17A(850mg，收率：94.5％)，为白色固体。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ12.45(s，1H)，8.31-8.08(m，1H)，3.96-3.76(m，3H)。
向化合物17A(0.85g，3.37mmol)和中间体1D(856mg，3.71mmol，HCl)在DMF(20mL)中的溶液中加入HBTU(1.53g，4.05mmol)和DIEA(13.49mmol，2.35mL)，将混合物在25℃下搅拌1h。将反应混合物在0℃下用水(50mL)稀释，形成沉淀，并将固体过滤并真空干燥。残余物无需进一步纯化即可用于下一步。获得化合物17B(1.2g，收率：83.0％)，为白色固体。1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.13(s，1H)，7.62(d，J＝9.0Hz，1H)，7.33(s，2H)，7.29-7.17(m，4H)，7.16-7.09(m，1H)，5.87(d，J＝6.0Hz，1H)，4.56-4.36(m，1H)，4.01(dd，J＝3.3，5.7Hz，1H)，3.84(s，3H)，2.89-2.62(m，2H).MS(ESI)m/z(M+H)+429.0。
向化合物17B(1.2g，2.80mmol)和(3-甲氧基羰基苯基)硼酸(756mg，4.20mmol)在二噁烷(30mL)和H2O(3mL)中的溶液中添加K2CO3(775mg，5.60mmol)，然后添加Pd(dppf)Cl2(205mg，280.23μmol)，将混合物在N2气氛下于80℃搅拌18h。将反应混合物浓缩以除去溶剂，用EA(50mL)稀释，过滤并用EA(20mL×2)洗涤，滤液用水(50mL×2)洗涤，然后经Na2SO4干燥，过滤并浓缩，得到残留物。将残余物通过快速硅胶色谱法纯化(
Figure BDA0002953643150002431
12g
Figure BDA0002953643150002432
Silica Flash Column，0～100％乙酸乙酯/石油醚梯度至EA∶MeOH＝10∶1洗脱液@30mL/min)。获得化合物17C(0.4g，收率：32.7％)，为黄色固体。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.29(t，J＝1.7Hz，1H)，8.07(s，1H)，7.90-7.80(m，2H)，7.77-7.74(m，1H)，7.46-7.39(m，1H)，7.34-7.11(m，7H)，5.82(d，J＝5.7Hz，1H)，4.58-4.40(m，1H)，4.02(dd，J＝3.5，5.7Hz，1H)，3.89(s，3H)，3.85(s，3H)，2.87-2.66(m，2H)。
向化合物17C(120mg，274.94μmol)在MeOH(3mL)中的溶液中加入CH3NH2(549.88μmol，8mL)，然后将混合物在45℃搅拌40h。将反应混合物浓缩以除去溶剂，用DCM(20mL)稀释并过滤，收集固体。残余物通过制备型HPLC纯化(柱：YMC-Actus Triart C18 100*30mm*5um；流动相[水(0.05％HCl)-ACN]；B％：10％-66％，8.5min)。获得化合物17D(60mg，收率：49.8％)，为白色固体。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.43(br d，J＝4.6Hz，1H)，8.08(d，J＝18.1Hz，2H)，7.75(dd，J＝8.6，11.0Hz，2H)，7.58(d，J＝7.7Hz，1H)，7.41-7.11(m，8H)，4.47(br s，1H)，4.02(d，J＝3.7Hz，1H)，3.89(s，3H)，2.82-2.65(m，5H).MS(ESI)m/z(M+H)+436.1。
向化合物17D(60mg，137.78μmol)在DMSO(3mL)和DCM(50mL)中的溶液中加入DMP(234mg，551.12μmol)，将混合物在25℃搅拌1h。将反应混合物用DCM(20mL)稀释，并通过添加Na2S2O3(饱和的，30mL)和NaHCO3(饱和的，30mL)淬灭，将混合物用DCM(30mL×2)萃取。将合并的有机层用H2O(50mL)洗涤，然后用盐水(50mL×2)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩，得到残余物。将残余物在CH3CN中研磨，过滤并将固体真空干燥。获得化合物17(15mg，收率：22.8％)，为白色固体。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.48-8.35(m，2H)，8.15-8.07(m，2H)，8.04(s，1H)，7.80(s，1H)，7.74(td，J＝1.5，7.8Hz，1H)，7.64(td，J＝1.4，8.0Hz，1H)，7.36(t，J＝7.8Hz，1H)，7.32-7.17(m，5H)，5.30-5.24(m，1H)，3.91(s，3H)，3.15(dd，J＝4.0，13.9Hz，1H)，2.89-2.74(m，4H).MS(ESI)m/z(M+H)+434.2。
N-(4-氨基-3，4-二氧代-1-苯基丁烷-2-基)-3-(苯并[D]噁唑-7-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺(31)
使用实施例1中所述的方法，将7-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二噁硼烷-2-基)苯并[d]噁唑(使用与33C相同的方法由7-溴苯并[d]噁唑制备)和中间体17B转化为化合物31。获得化合物31(60mg，收率：60.2％)，为白色固体。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.61(s，1H)，8.44(d，J＝7.6Hz，1H)，8.21(s，1H)，8.03(s，1H)，7.80-7.74(m，2H)，7.47-7.43(m，1H)，7.39-7.20(m，6H)，5.26-5.19(m，1H)，3.96(s，3H)，3.17-3.10(m，1H)，2.86-2.79(m，1H).MS(ESI)m/z(M+H)+418.1。
N-(4-氨基-3，4-二氧代-1-苯基丁烷-2-基)-3-(苯并[D]噻唑-4-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺(51)
使用实施例1中所述的方法，将化合物苯并[d]噻唑-4-基硼酸(使用与33C相同的方法由4-溴苯并[d]噻唑制备)和中间体17B转化为化合物51。获得化合物51(75mg，收率：69.6％)，为浅黄色固体。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)：δ9.19(s，1H)，8.22-8.12(m，2H)，7.99-7.90(m，2H)，7.73(s，1H)，7.51-7.42(m，2H)，7.27-7.15(m，3H)，7.13-7.06(m，2H)，5.22-5.06(m，1H)，3.92(s，3H)，3.11-2.94(m，1H)，2.80-2.63(m，1H).MS(ESI)m/z(M+H)+434.1。
Figure BDA0002953643150002451
N-(4-氨基-3，4-二氧代-1-苯基丁烷-2-基)-3-(苯并[D]噻唑-4-基)-1-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-甲酰胺(70)
使用实施例1中所述的方法，将化合物苯并[d]噻唑-4-基硼酸(使用与33C相同的方法由4-溴苯并[d]噻唑制备)和中间体70A(使用与17B相同的方法由4A制备)转化为化合物70。获得化合物70(50mg，收率：48.5％)，为浅黄色固体。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)：δ9.14(s，1H)，8.61(s，1H)，8.52(d，J＝7.3Hz，1H)，8.20-8.16(m，1H)，8.11-7.87(m，2H)，7.79-7.69(m，1H)，7.50-7.44(m，2H)，7.27-7.13(m，5H)，5.16-5.07(m，1H)，3.04(dd，J＝3.7，13.9Hz，1H)，2.72(dd，J＝9.7，13.9Hz，1H).MS(ESI)m/z(M+H)+470.1。
N-(4-氨基-3，4-二氧代-1-苯基丁烷-2-基)-1-(二氟甲基)-3-(2，5-二甲基呋喃-3-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺(24)
使用实施例1中所述的方法，将化合物2-(2，5-二甲基呋喃-3-基)-4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二噁硼烷和中间体70A(使用与17B相同的方法由4A制备)转化为化合物24。获得化合物24(140mg，收率：79.8％)，为浅黄色固体。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.67-8.56(m，1H)，8.49(s，1H)，8.11(s，1H)，8.04-7.67(m，2H)，7.35-7.16(m，5H)，6.09(s，1H)，5.35-5.29(m，1H)，3.18(dd，J＝4.0，14.1Hz，1H)，2.81(dd，J＝9.9，13.9Hz，1H)，2.20(d，J＝12.1Hz，6H).MS(ESI)m/z(M+H)+431.1。
N-(4-氨基-3，4-二氧代-1-苯基丁烷-2-基)-1-(二氟甲基)-3-(2-甲基呋喃-3-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺(26)
使用实施例1中所述的方法，将化合物4，4，5，5-四甲基-2-(2-甲基呋喃-3-基)-1，3，2-二噁硼烷和中间体70A(使用与17B相同的方法由4A制备)转化为化合物26。获得化合物26(128mg，收率：95.87％)，为浅黄色固体。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.63(d，J＝7.3Hz，1H)，8.50(s，1H)，8.11-7.67(m，3H)，7.44(d，J＝1.8Hz，1H)，7.30-7.22(m，4H)，7.22-7.15(m，1H)，6.49(d，J＝1.8Hz，1H)，5.37-5.23(m，1H)，3.16(dd，J＝3.6，14.0Hz，1H)，2.79(brdd，J＝10.1，13.9Hz，1H)，2.25(s，3H).MS(ESI)m/z(M+H)+417.1。
N-(4-氨基-3，4-二氧代-1-苯基丁烷-2-基)-3-(2，5-二甲基呋喃-3-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺(55)
使用实施例1中所述的方法，将化合物2-(2，5-二甲基呋喃-3-基)-4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二噁硼烷和中间体17B转化为化合物55。获得化合物55(22mg，收率：26.5％)，为白色固体。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.09-8.03(m，2H)，8.01(d，J＝7.3Hz，1H)，7.81(s，1H)，7.32-7.25(m，2H)，7.25-7.17(m，3H)，6.13-6.02(s，1H)，5.28(m，1H)，3.84(s，3H)，3.15(dd，J＝4.0，13.9Hz，1H)，2.82(dd，J＝9.7，13.9Hz，1H)，2.23-2.12(m，6H).MS(ESI)m/z(M+H)+395.2。
实施例8-化合物68和71
Figure BDA0002953643150002461
合并三(三氟甲磺酸钇)(249mg，0.5mmol)和原甲酸三乙酯(15mL，93.1mmol)。向该混合物中加入2-氨基-3-溴苯酚(1.8g，9.31mmol)在DMSO(20mL)和吡啶(1.5mL，18.6mmol)中的溶液。将反应混合物在加热块中于60℃搅拌18h。向混合物中加入H2O(200mL)，并用EA(50mL)萃取。将有机相用盐水(20mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩。产物通过FCC纯化(0-50％EA/PE)，得到化合物68A(1g，收率51.7％)，为红色固体。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.96(s，1H)，7.90(d，J＝8.2Hz，1H)，7.73(d，J＝7.6Hz，1H)，7.53-7.44(m，1H).MS(ESI)m/z(M+H)+198.0。
N-(4-氨基-3，4-二氧代-1-苯基丁烷-2-基)-3-(苯并[d]噁唑-4-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺(68)
使用实施例1中所述的方法，将化合物4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二噁硼烷-2-基)苯并[d]噁唑(68B)(使用与33C相同的方法由68A制备)和中间体17B转化为化合物68。获得化合物68(10mg，收率：6.7％)，为白色固体。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.52(s，1H)，8.15(s，1H)，7.73(dd，J＝1.6，7.7Hz，1H)，7.69-7.46(m，3H)，7.45-7.37(m，2H)，7.25-7.15(m，3H)，7.08(d，J＝6.3Hz，2H)，5.26-5.21(m，1H)，3.94(s，3H)，3.22-3.10(m，1H)，2.83(dd，J＝8.5，14.1Hz，1H).MS(ESI)m/z(M+H)+418.1。
N-(4-氨基-3，4-二氧代-1-苯基丁烷-2-基)-3-(苯并[d]噁唑-4-基)-1-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-甲酰胺(71)
使用实施例1中所述的方法，将化合物68B和中间体70A(使用与17B相同的方法由4A制备)转化为化合物71。获得化合物71(124mg，收率：77.99％)，为浅黄色固体。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.65(s，1H)，8.55(s，1H)，8.19(s，1H)，8.10-7.88(m，2H)，7.79(dd，J＝2.9，6.4Hz，1H)，7.75-7.64(m，1H)，7.53-7.44(m，2H)，7.30-7.14(m，5H)，5.30-5.21(m，1H)，3.17-3.12(m，1H)，2.87(dd，J＝8.9，14.2Hz，1H).MS(ESI)m/z(M+H)+454.1。
实施例9-化合物35和50
Figure BDA0002953643150002481
将TEA(1.5mL，10.64mmol)添加至2-氨基-3-溴苯酚(1g，5.32mmol)和CDI(1.72g，10.64mmol)的THF(20mL)混合物中。将混合物在60℃下搅拌18小时。将反应混合物蒸发，并用二氯甲烷(60mL)稀释。有机层用1M盐酸(2×30mL)和水(30mL)洗涤。有机层经硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩。得到化合物35A(1.1g，收率96.64％)，为红色固体，将其直接用于下一步。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ12.19(br s，1H)，7.37-7.29(m，2H)，7.08-7.01(m，1H)。
N-(4-氨基-3，4-二氧代-1-苯基丁烷-2-基)-1-甲基-3-(2-氧代-2，3-二氢苯并[d]噁唑-4-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺(35)
使用实施例1中所述的方法，将化合物4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二噁硼烷-2-基)苯并[d]噁唑-2(3H)-酮(35B)(使用与33C相同的方法由35A制备)和中间体17B转化为化合物35。获得化合物35(18mg，收率：29.62％)，为黄色固体。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.47(br s，1H)，7.88(s，1H)，7.55(d，J＝8.3Hz，1H)，7.36-7.21(m，5H)，7.18(d，J＝8.0Hz，1H)，7.06(br t，J＝8.2Hz，2H)，6.96(br d，J＝6.8Hz，1H)，6.25(br s，1H)，5.49-5.40(m，1H)，4.01-3.93(m，3H)，3.30(dd，J＝4.8，14.1Hz，1H)，2.93(dd，J＝9.0，14.1Hz，1H).MS(ESI)m/z(M+H)+434.2。
N-(4-氨基-3，4-二氧代-1-苯基丁烷-2-基)-1-(二氟甲基)-3-(2-氧代-2，3-二氢苯并[d]噁唑-4-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺(50)
使用实施例1中所述的方法，将化合物35B和中间体70A(使用与17B相同的方法由4A制备)转化为化合物50。获得化合物50(20mg，收率：22.8％)，为白色固体。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.27(s，1H)，8.46(s，1H)，8.12-7.90(m，1H)，7.83-7.58(m，2H)，7.23-6.59(m，9H)，5.24(s，1H)，2.99-2.97(m，1H)，2.70-2.60(m，1H).MS(ESI)m/z(M+H)+470.1。
实施例10-化合物16
Figure BDA0002953643150002491
N-(4-氨基-3，4-二氧代-1-苯基丁烷-2-基)-3-(1H-吲唑-4-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺(16)
使用实施例1中所述的方法，将化合物4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二噁硼烷-2-基)-1H-吲唑(16A)(使用与33C相同的方法由4-溴-1H-吲唑制备)和3-碘-1-甲基-1H-吡唑-4-羧酸乙酯转化为化合物16。获得化合物16(60mg，收率：77.4％)，为白色固体。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)：δ13.05(br s，1H)，8.34(d，J＝7.3Hz，1H)，8.13-8.08(m，2H)，8.06(s，1H)，7.81(s，1H)，7.52-7.45(m，1H)，7.32-7.19(m，7H)，5.34-5.24(m，1H)，3.95(s，3H)，3.14(dd，J＝3.8，14.1Hz，1H)，2.80(dd，J＝9.9，13.9Hz，1H).MS(ESI)m/z(M+H)+417.1。
实施例11-化合物39
Figure BDA0002953643150002501
N-(4-氨基-3，4-二氧代-1-苯基丁烷-2-基)-3-(1H-吲唑-7-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺(39)
在0℃下，向7-溴-1H-吲唑(1g，5.1mmol)在THF(15mL)中的混合物中添加NaH(406mg，10.2mmol，纯度60％)。将混合物在0℃下搅拌1h，然后加入SEM-Cl(1.35mL，7.62mmol)。添加后，使反应温度缓慢升至室温(22℃)，并将混合物在22℃搅拌15h。通过添加饱和NH4Cl(30mL)将混合物淬灭。然后将混合物用EA(3×25mL)萃取。合并的有机层用盐水(20mL)洗涤，用无水MgSO4干燥，过滤并浓缩。残余物通过硅胶柱色谱法纯化(石油醚/乙酸乙酯＝1/0至8/1)，得到化合物39A(1.1g，收率66.2％)，为黄色油状物。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.26(s，1H)，7.85(dd，J＝0.9，7.9Hz，1H)，7.70(dd，J＝0.9，7.5Hz，1H)，7.13(t，J＝7.7Hz，1H)，5.99(s，2H)，3.52(t，J＝7.8Hz，2H)，0.78(t，J＝7.8Hz，2H)，-0.13(s，9H)。
使用实施例1中所述的方法，将化合物7-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二噁硼烷-2-基)-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吲唑(39B)(使用与33C相同的方法由39A制备)和3-碘-1-甲基-1H-吡唑-4-羧酸乙酯转化为化合物39F。获得化合物39F(203mg，收率：70.49％)，为黄色固体。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.31(s，1H)，8.19-8.16(m，1H)，7.86-7.80(m，1H)，7.71-7.50(m，2H)，7.25-7.13(m，6H)，7.01(d，J＝7.3Hz，2H)，5.31(s，2H)，5.28-5.19(m，1H)，3.94(s，3H)，2.74(dd，J＝8.5，14.1Hz，1H)，0.90-0.83(m，3H)，0.57(t，J＝8.0Hz，2H)，-0.14(s，9H)。
将HCl/EtOAc(4M，4mL)加入到化合物39F(160mg，0.3mmol)的混合物中。将混合物在30℃下搅拌3h。将混合物过滤，并将滤饼真空浓缩。得到化合物39(66mg，54.1％收率)，为白色固体。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ12.74(s，1H)，8.44(d，J＝7.5Hz，1H)，8.11-8.04(m，3H)，7.81-7.73(m，2H)，7.68(d，J＝7.5Hz，1H)，7.28-7.22(m，4H)，7.21-7.16(m，1H)，7.02(t，J＝7.6Hz，1H)，5.33-5.26(m，1H)，3.97(s，3H)，3.14(dd，J＝3.9，14.0Hz，1H)，2.85-2.75(m，1H).MS(ESI)m/z(M+H)+＝417.1。
实施例12-化合物9、47和48
Figure BDA0002953643150002511
向3-碘-1-甲基-1H-吡唑-4-羧酸乙酯(4g，14.28mmol)和1H-苯并[d]咪唑(2g，16.93mmol)在DMF(40mL)中的溶液中添加Cs2CO3(9.31g，28.57mmol)、1H-苯并三唑(340mg，2.86mmol)和CuI(272mg，1.43mmol)。将混合物在N2下在110℃下搅拌48h。将混合物用H2O(100mL)稀释，用EtOAc(150mL)洗涤。收集水相，用1N HCl调节至pH～4，用EtOAc(300mL)洗涤。收集水相并真空浓缩。将残余物用MeOH(40mL)研磨。滤出固体。收集滤液并浓缩。将残余物通过制备型HPLC(HCl)纯化，得到化合物9A(380mg，收率：10.74％)，为白色固体。MS(ESI)m/z(M+H)+242.9。
N-(4-氨基-3，4-二氧代-1-苯基丁烷-2-基)-3-(1H-苯并[d]咪唑-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺(9)
使用实施例1中所述的方法，将化合物49A和中间体1D转化为化合物9。获得化合物9(70mg，收率：46.85％)，为白色固体。MS(ESI)m/z(M+H)+417.1.1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.61(d，J＝7.6Hz，1H)，8.39(s，1H)，8.32(s，1H)，8.02(br.s，1H)，7.77(br.s，1H)，7.71-7.65(m，1H)，7.50-7.43(m，1H)，7.30-7.16(m，7H)，5.29-5.20(m，1H)，4.00-3.91(m，3H)，3.18-3.09(m，1H)，2.85-2.75(m，1H)。
Figure BDA0002953643150002521
将4-氟苯-l，2-二胺(1g，7.93mmol)和HCOOH(10mL)的混合物在90℃下搅拌2h。用5N NaOH将溶液的pH调节至约7。用EtOAc(50mL x 3)萃取混合物。收集有机物，用Na2SO4干燥，过滤并浓缩，得到化合物47A(1g，粗品)，为棕色固体，其无需进一步纯化即可直接用于下一步。
使3-碘-1-甲基-1H-吡唑-4-羧酸乙酯和中间体47A经历与中间体9A相同的反应条件，该反应产生产物47B和48A。产物通过制备型HPLC(HCl)纯化，得到400mg褐色固体混合物，将其通过SFC(柱：AD(250mm*30mm，5um)；流动相：[0.1％NH3H2O MEOH]；B％：25％-25％，min)再次纯化，得到化合物47B(100mg，收率：2.61％)，为白色固体；化合物48A(100mg，收率：2.61％)，为白色固体，将其通过SFC再次纯化，得到48A(90mg)。MS(ESI)m/z(M+H)+260.9。
Figure BDA0002953643150002531
N-(4-氨基-3，4-二氧代-1-苯基丁烷-2-基)-3-(6-氟-1H-苯并[d]咪唑-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺(47)
使用实施例1中所述的方法，将化合物47B和中间体1D转化为化合物47。获得化合物47(50mg，收率：48.0％)，为白色固体。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.42(s，1H)，8.36(s，1H)，8.33-8.27(m，1H)，7.72(br s，1H)，7.58-7.44(m，3H)，7.32-7.17(m，5H)，7.16-7.07(m，1H)，5.34-5.26(m，1H)，3.97(s，3H)，3.24-3.17(m，1H)，2.95-2.85(m，1H).MS(ESI)m/z(M+H)+435.2。
N-(4-氨基-3，4-二氧代-1-苯基丁烷-2-基)-3-(5-氟-1H-苯并[d]咪唑-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺(48)
使用实施例1中所述的方法，将化合物48A和中间体1D转化为化合物48。获得化合物48(40mg，收率：28.2％)，为白色固体。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.46-8.21(m，3H)，7.80-7.41(m，3H)，7.38-7.04(m，7H)，5.31(br.s，1H)，4.04-3.90(m，3H)，3.27-3.16(m，1H)，2.95-2.83(m，1H).MS(ESI)m/z(M+H)+435.2。
实施例13-化合物20和21
Figure BDA0002953643150002541
向2-(呋喃-3-基)-4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二噁硼烷(1g，5.15mmol)在DMF(15mL)中的溶液中加入NCS(723mg，5.41mmol)。将混合物在25℃下搅拌4h。所得溶液用10％Na2S2O3水溶液(50mL)处理，并用MTBE(50mL×3)萃取。将合并的有机相用盐水(100mL)洗涤，并经Na2SO4干燥。减压除去溶剂后，将残余物通过快速硅胶色谱法纯化；(
Figure BDA0002953643150002542
12g
Figure BDA0002953643150002543
二氧化硅快速柱，0～10％乙酸乙酯/石油醚梯度洗脱液@25mL/min)。得到化合物20A(0.37g，收率：31.4％)，为无色油状物。得到化合物20B(0.13g，收率：11.0％)，为无色油状物。化合物20A和化合物20B的混合物。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.92(s，1H)，7.34(d，J＝2.0Hz，1H)，6.78(d，J＝2.0Hz，1H)，4.23(q，J＝7.1Hz，2H)，3.93(s，3H)，1.27(t，J＝7.2Hz，3H).MS(ESI)m/z(M+H)+254.9。
在N2下，向化合物70A(400mg，861.69μmol)和化合物20A(216mg，945.38μmol)和化合物20B(80mg，350.14μmol)在二噁烷(20mL)和H2O(2mL)中的溶液中添加Pd(dppf)Cl2(70mg，95.67μmol)和K2CO3(300mg，2.17mmol)，并将混合物在N2气氛下于90℃搅拌16h。将反应混合物浓缩并将残余物用EA(30mL)和H2O(40mL)稀释，过滤，将滤液用EA(20mL×2)萃取，然后将有机相用Na2SO4干燥，过滤并浓缩，得到残余物。残余物通过制备型TLC纯化(SiO2，PE∶EA＝1∶2.5)。然后将残余物通过制备型HPLC纯化(HCl条件：柱：YMC-Actus Triart C18100*30mm*5um；流动相：[水(0.05％HCl)-ACN]；B％：30％-60％，10min)。得到化合物20C(120mg，收率：31.6％)，为白色固体。得到化合物21A(45mg，收率：11.8％)，为白色固体。
化合物20C：1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.61(s，0.3H)，8.54(s，0.7H)，8.21-7.71(m，2H)，7.69-7.62(m，1H)，7.31(d，J＝8.4Hz，1H)，7.25-7.09(m，6H)，6.65-6.57(m，1H)，5.86(d，J＝5.7Hz，0.7H)，5.75(d，J＝5.7Hz，0.3H)，4.50-4.36(m，1H)，4.03-3.96(m，0.7H)，3.87-3.83(m，0.3H)，2.91-2.69(m，2H).MS(ESI)m/z(M+H)+439.0。
化合物21A：1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.65(s，0.2H)，8.62(s，0.8H)，8.23-7.69(m，3H)，7.32(d，J＝7.7Hz，1H)，7.26-7.08(m，6H)，6.71-6.66(m，1H)，5.86(d，J＝5.7Hz，0.8H)，5.74(d，J＝6.0Hz，0.2H)，4.54-4.41(m，1H)，4.01(dd，J＝3.5，5.7Hz，0.8H)，3.88(d，J＝5.3Hz，0.2H)，2.92-2.67(m，2H).MS(ESI)m/z(M+H)+439.0。
Figure BDA0002953643150002551
N-(4-氨基-3，4-二氧代-1-苯基丁烷-2-基)-3-(2-氯呋喃-3-基)-1-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-甲酰胺(20)
使用实施例1中所述的方法，将化合物20C转化为化合物20。获得化合物20(90mg，收率：70.6％)，为白色固体。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.73(d，J＝7.5Hz，1H)，8.58(s，1H)，8.13-7.71(m，3H)，7.67(d，J＝2.2Hz，1H)，7.30-7.22(m，4H)，7.21-7.14(m，1H)，6.66(d，J＝2.2Hz，1H)，5.38-5.21(m，1H)，3.15(dd，J＝3.7，13.9Hz，1H)，2.77(dd，J＝10.0，13.8Hz，1H).MS(ESI)m/z(M+H)+437.0。
Figure BDA0002953643150002552
N-(4-氨基-3，4-二氧代-1-苯基丁烷-2-基)-3-(5-氯呋喃-3-基)-1-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-甲酰胺(21)
使用实施例1中所述的方法，将化合物21A转化为化合物20。获得化合物21(30mg，收率：65.7％)，为白色固体。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.81(d，J＝7.5Hz，1H)，8.62(s，1H)，8.16(d，J＝0.9Hz，1H)，8.10(s，1H)，8.03-7.71(m，2H)，7.26(d，J＝4.2Hz，4H)，7.20-7.16(m，1H)，6.74(d，J＝0.9Hz，1H)，5.36-5.23(m，1H)，3.17(dd，J＝3.9，14.0Hz，1H)，2.80(dd，J＝10.3，14.0Hz，1H).MS(ESI)m/z(M+H)+437.1。
实施例14-化合物36
Figure BDA0002953643150002561
向2-(呋喃-3-基)-4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二噁硼烷(1g，5.10mmol)在DMF(15mL)中的溶液中加入NCS(1.50g，11.21mmol)。将混合物在100℃下搅拌2小时。所得溶液用10％Na2S2O3水溶液(50mL)处理，并用MTBE(50mL×3)萃取。将合并的有机相用盐水(100mL)洗涤，并经Na2SO4干燥。减压除去溶剂后，将残余物通过快速硅胶色谱法纯化；(
Figure BDA0002953643150002562
12g
Figure BDA0002953643150002563
二氧化硅快速柱，0～10％乙酸乙酯/石油醚梯度洗脱液@20mL/min)。得到化合物36A(0.5g，收率：37.0％)，为黄色油状物。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ6.45-6.23(m，1H)，1.31(s，12H)。
N-(4-氨基-3，4-二氧代-1-苯基丁烷-2-基)-3-(2，5-二氯呋喃-3-基)-1-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-甲酰胺(36)
使用实施例1中所述的方法，将化合物36A和中间体70A(使用与17B相同的方法由4A制备)转化为化合物36。获得化合物36(100mg，收率：71.7％)，为白色固体。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.78(d，J＝7.5Hz，1H)，8.65(s，1H)，8.16-7.72(m，3H)，7.32-7.22(m，4H)，7.21-7.12(m，1H)，6.67(s，1H)，5.47-5.19(m，1H)，3.15(dd，J＝3.6，13.8Hz，1H)，2.76(dd，J＝10.1，13.9Hz，1H).MS(ESI)m/z(M+H)+471.0。
实施例15-化合物19和15
Figure BDA0002953643150002571
在氮气下，向2-(呋喃-3-基)-4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二噁硼烷(500mg，1.79mmol)和3-呋喃基硼酸(250mg，2.23mmol)在二噁烷(20mL)和水(1mL)中的溶液中加入K2CO3(620mg，4.49mmol)和Pd(dppf)Cl2(131mg，179.03μmol)。将混合物在N2下在80℃下搅拌16h。将反应混合物浓缩，残余物用EA(30mL)和H2O(30mL)稀释，过滤。用EA(20mL)萃取滤液，然后将有机相用Na2SO4干燥，过滤并浓缩，得到残余物。将残余物通过快速硅胶色谱法纯化；(
Figure BDA0002953643150002572
24g
Figure BDA0002953643150002573
二氧化硅快速柱，0～30％乙酸乙酯/石油醚梯度洗脱液@30mL/min)。得到化合物19A(350mg，收率：88.8％)，为淡黄色油状物。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.39(s，1H)，7.91(s，1H)，7.44(t，J＝1.6Hz，1H)，6.95(d，J＝1.3Hz，1H)，4.30(q，J＝7.0Hz，2H)，3.92(s，3H)，1.35(t，J＝7.2Hz，3H).MS(ESI)m/z(M+H)+221.0。
向化合物19A(100mg，454.08μmol)的DMF(3mL)溶液中加入NCS(68mg，509.24μmol)。将混合物在25℃下搅拌2小时。将反应用H2O(20mL)稀释，用EA(20mL×2)萃取，有机相经Na2SO4干燥，过滤并浓缩，得到残余物。残余物通过制备型TLC纯化(SiO2，PE∶EA＝2∶1)。得到化合物19B(70mg，收率：60.5％)，为白色固体。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.92(s，1H)，7.34(d，J＝2.0Hz，1H)，6.78(d，J＝2.0Hz，1H)，4.23(q，J＝7.1Hz，2H)，3.93(s，3H)，1.27(t，J＝7.2Hz，3H).MS(ESI)m/z(M+H)+254.9。
N-(4-氨基-3，4-二氧代-1-苯基丁烷-2-基)-3-(2-氯呋喃-3-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺(19)
使用实施例1中所述的方法，将化合物19B转化为化合物19。获得化合物19(40mg，收率：35.0％)，为白色固体。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.32(d，J＝7.5Hz，1H)，8.14(s，1H)，8.06(s，1H)，7.80(s，1H)，7.64(d，J＝2.0Hz，1H)，7.32-7.24(m，4H)，7.23-7.19(m，1H)，6.66(d，J＝2.0Hz，1H)，5.33-5.25(m，1H)，3.89(s，3H)，3.15(dd，J＝3.9，13.9Hz，1H)，2.82(dd，J＝9.9，13.9Hz，1H).MS(ESI)m/z(M+H)+401.1。
N-(4-氨基-3，4-二氧代-1-苯基丁烷-2-基)-3-(2，5-二氯呋喃-3-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺(15)
Figure BDA0002953643150002581
Figure BDA0002953643150002591
向化合物19A(50mg，227.04μmol)的DMF(2mL)溶液中加入NCS(68mg，509.24μmol)。将混合物在100℃下搅拌1.5h。将反应用H2O(20mL)稀释，用EA(20mL×2)萃取，有机相经Na2SO4干燥，过滤并浓缩，得到残余物。残余物通过制备型TLC纯化(SiO2，PE∶EA＝2∶1)。得到化合物15A(40mg，收率60.9％)，为白色固体。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.93(s，1H)，6.63(s，1H)，4.34-4.18(m，2H)，3.95(s，3H)，1.31(t，J＝7.2Hz，3H).MS(ESI)m/z(M+H)+289.0。
使用实施例1中所述的方法，将化合物15A转化为化合物15。获得化合物15(35mg，收率：47.2％)，为白色固体。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.40(d，J＝7.5Hz，1H)，8.15(s，1H)，8.05(s，1H)，7.77(s，1H)，7.29-7.21(m，4H)，7.20-7.15(m，1H)，6.63(s，1H)，5.35-5.19(m，1H)，3.86(s，3H)，3.12(dd，J＝3.7，13.9Hz，1H)，2.78(dd，J＝10.1，13.9Hz，1H).MS(ESI)m/z(M+H)+435.0。
实施例16-化合物23、3、46、52和79
Figure BDA0002953643150002592
N-(4-氨基-3，4-二氧代-1-苯基丁烷-2-基)-4-(2，5-二甲基呋喃-3-基)-1，2，5-噻二唑-3-甲酰胺(23)
使用实施例1中所述的方法，将化合物4-溴-1，2，5-噻二唑-3-羧酸甲酯和2-(2，5-二甲基呋喃-3-基)-4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二噁硼烷转化为化合物23。获得化合物23(110mg，收率：65.02％)，为白色固体。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.34(d，J＝7.9Hz，1H)，8.21(s，1H)，7.93(s，1H)，7.37-7.18(m，5H)，5.94(s，1H)，5.61-5.41(m，1H)，3.23(dd，J＝3.5，14.1Hz，1H)，2.85(dd，J＝10.0，14.0Hz，1H)，2.37(s，3H)，2.18(s，3H).MS(ESI)m/z(M+H)+399.1。
N-(4-氨基-3，4-二氧代-1-苯基丁烷-2-基)-4-(4-氟苯基)-1，2，5-噻二唑-3-甲酰胺(3)
使用实施例1中所述的方法，将化合物4-溴-1，2，5-噻二唑-3-羧酸甲酯和(4-氟苯基)硼酸转化为化合物3。获得化合物3(235mg，收率：68.1％)，为白色固体。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.43(d，J＝7.7Hz，1H)，8.26-8.12(m，1H)，7.93(s，1H)，7.67-7.56(m，2H)，7.34-7.16(m，7H)，5.56-5.38(m，1H)，3.24(dd，J＝3.6，14.0Hz，1H)，2.86(dd，J＝10.3，14.0Hz，1H).MS(ESI)m/z(M+H)+399.1。
N-(4-氨基-3，4-二氧代-1-苯基丁烷-2-基)-4-(2-甲基呋喃-3-基)-1，2，5-噻二唑-3-甲酰胺(46)
使用实施例1中所述的方法，将化合物4-氯-1，2，5-噻二唑-3-羧酸乙酯和4，4，5，5-四甲基-2-(2-甲基呋喃-3-基)-1，3，2-二噁硼烷转化为化合物46。获得化合物46(45mg，收率：42.84％)，为浅黄色固体。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.34(d，J＝7.7Hz，1H)，8.20(s，1H)，7.92(s，1H)，7.46(d，J＝2.0Hz，1H)，7.32-7.25(m，4H)，7.22(qd，J＝4.1，8.7Hz，1H)，6.35(d，J＝2.0Hz，1H)，5.60-5.43(m，1H)，3.22(dd，J＝3.5，13.9Hz，1H)，2.85(dd，J＝10.1，14.1Hz，1H)，2.40(s，3H).MS(ESI)m/z(M+H)+385.1。
Figure BDA0002953643150002601
向4-氯-1，2，5-噻二唑-3-羧酸乙酯(3.0g，15.57mmol)在二噁烷(50mL)和H2O(5mL)中的溶液中添加Cs2CO3(15.2g，46.72mmol)和3-呋喃基硼酸(2.1g，18.69mmol)，将混合物脱气并用N2吹扫3次，然后添加Pd(P(t-Bu)3)2(796mg，1.56mmol)。将混合物在N2下在80℃下搅拌12小时，冷却至室温并浓缩，残余物用H2O(100mL)稀释并用EA(100mL×3)萃取。将获得的有机相合并，用盐水(50mL×3)洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤，浓缩滤液，得到残余物，将其通过硅胶柱色谱法纯化(PE∶EA＝1∶0至10∶1)得到化合物52A(2g，收率57.3％)，为无色油状物。1H NMR(CDCl3，400MHz)δ8.44(s，1H)，7.51(d，J＝1.6Hz，1H)，7.03(d，J＝1.6Hz，1H)，4.50(q，J＝6.8Hz，2H)，1.49(t，J＝6.8Hz，3H)。
向化合物52A(1.5g，6.69mmol)的DMF(20mL)溶液中加入NCS(1.0g，7.49mmol)。将混合物在25℃下搅拌16小时。将反应用H2O(60mL)稀释，并用EA(20mL×3)萃取，将合并的有机相用Na2S2O3(10％水溶液，20mL)和盐水(20mL×3)洗涤并浓缩，得到残留物。残余物通过硅胶柱色谱法纯化(PE∶EA＝1∶0至10∶1)，得到纯化合物52B(330mg，收率：19.5％)，为无色油状物，混合物由化合物52A和化合物52C组成(500mg)。将由化合物52A和化合物52C组成的混合物通过制备型TLC纯化(PE∶EA＝100∶1，5次)，得到化合物52C(135mg，收率：7.8％)，为白色固体。化合物52B：1H NMR(CDCl3，400MHz)δ7.43(d，J＝1.6Hz，1H)，6.85(d，J＝1.6Hz，1H)，4.60(q，J＝7.2Hz，2H)，1.42(t，J＝7.2Hz，3H).化合物52C：1H NMR(CDCl3，400MHz)δ8.35(s，1H)，6.85(s，1H)，4.50(q，J＝7.2Hz，2H)，1.48(t，J＝7.2Hz，3H)。
Figure BDA0002953643150002611
N-(4-氨基-3，4-二氧代-1-苯基丁烷-2-基)-4-(5-氯呋喃-3-基)-1，2，5-噻二唑-3-甲酰胺(52)
使用实施例1中所述的方法，将化合物4-(5-氯呋喃-3-基)-1，2，5-噻二唑-3-羧酸乙酯(52C)转化为化合物52。获得化合物52(60mg，收率：62.8％)，为白色固体。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.37(d，J＝7.7Hz，1H)，8.22(s，1H)，8.06(d，J＝1.1Hz，1H)，7.93(s，1H)，7.32-7.18(m，5H)，6.81(d，J＝1.1Hz，1H)，5.57-5.49(m，1H)，3.25(dd，J＝3.9，14.0Hz，1H)，2.89(dd，J＝10.3，14.0Hz，1H).MS(ESI)m/z(M+H)+405.0。
Figure BDA0002953643150002621
N-(4-氨基-3，4-二氧代-1-苯基丁烷-2-基)-4-(2-氯呋喃-3-基)-1，2，5-噻二唑-3-甲酰胺(79)
使用实施例1中所述的方法，将化合物4-(2-氯呋喃-3-基)-1，2，5-噻二唑-3-羧酸乙酯(52B)转化为化合物79。获得化合物52(50mg，收率：52.3％)，为浅黄色固体。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.37(d，J＝7.7Hz，1H)，8.20(s，1H)，7.92(s，1H)，7.73(d，J＝2.2Hz，1H)，7.32-7.17(m，5H)，6.59(d，J＝2.2Hz，1H)，5.56-5.47(m，1H)，3.29-3.18(m，1H)，2.88(dd，J＝10.0，14.0Hz，1H).MS(ESI)m/z(M+H)+405.0。
实施例17-化合物85-86、57和82
Figure BDA0002953643150002622
N-(1-(噁唑-2-基)-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基)-4-苯基-1，2，5-噻二唑-3-甲酰胺(85)
在0℃下在N2气氛下，向LiAlH4(406.2mg，10.70mmol)在THF(20mL)中的混合物中逐滴加入(1-(甲氧基(甲基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯(3g，9.73mmol)在THF(20mL)中的溶液。添加后，将混合物在0℃下搅拌1h。向反应混合物中滴加EtOAc(6mL)，保持温度低于5℃，之后加入HCl(1M，10mL)。在分液漏斗中分离反应混合物，水层用EtOAc(30mL×2)萃取，合并的有机相用HCl(1M，30mL×3)、饱和NaHCO3(30mL)和盐水(30mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥。过滤，将滤液浓缩，得到化合物85A(2.3g，收率：94.8％)，为白色固体。该产物直接用于下一步。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.52(s，1H)，7.40-7.10(m，6H)，4.15-4.00(m，1H)，3.13-3.05(m，1H)，2.75-2.65(m，1H)，1.31(s，9H)。
在氮气下用BH3.THF(1M，2.41mL)处理噁唑(166.2mg，2.41mmol)在THF(20mL)中的溶液，并将混合物在5-15℃下搅拌30分钟，然后冷却到-70℃。逐滴加入由正丁基锂(2.5M的环己烷溶液，1mL)组成的溶液，并将混合物在-70℃下搅拌30分钟。加入化合物85A(300mg，1.20mmol)的THF(10mL)溶液，搅拌混合物，使其升温至室温(5-15℃)，同时反应进行至完全(24小时后)。然后将混合物冷却至-78℃，通过缓慢加入5％乙酸(13.8mL)的乙醇来淬灭，使其升温至环境温度(5-15℃)并搅拌18小时。减压除去溶剂，残余物用H2O(15mL)稀释，并用EtOAc(20mL×3)萃取。合并有机相，用盐水(30mL)洗涤并浓缩，得到残余物。残余物通过硅胶柱色谱法纯化(PE∶EA＝1∶0至0∶1)，得到化合物85B(170mg，收率：24.4％)，为无色油状物。MS(ESI)m/z(M-Boc)+218.9。
将化合物85B(170mg，533.97μmol)在EtOAc(5mL)中的混合物与HCl/EtOAc(4M，10mL)混合，并在室温(5-15℃)下搅拌1h。减压除去溶剂，得到化合物85C(150mg，粗品，HCl)，为白色固体。该产物直接用于下一步。
将4-苯基-1，2，5-噻二唑-3-羧酸(121.4mg，588.9μmol)、化合物85C(150mg，588.90μmol，HCl)、DIEA(0.3mL，1.77mmol)和HBTU(245.67mg，647.79μmol)在DMF(10mL)中的混合物在5-15℃下搅拌3h。将反应用H2O(30mL)稀释，用EtOAc(30mL×3)萃取。合并有机相，并用HCl(1M，30mL)、饱和NaHCO3水溶液(30mL)、盐水(30mLx2)洗涤，并且浓缩得到残余物。将残余物通过制备型HPLC(HCl系统)纯化，得到化合物85D(50mg，收率：20.8％)，为白色固体。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.02-8.83(d，J＝7.7Hz，1H)，8.07(s，1H)，7.52-7.16(m，12H)，4.88-4.74(m，1H)，4.64-4.49(m，1H)，3.20-2.77(m，2H).MS(ESI)m/z(M+H)+407.0。
向化合物85D(50mg，123.01μmol)在DCM(20mL)中的混合物中，添加DMP(156.5mg，369.04μmol)，并在室温(5-15℃)下搅拌。1.5小时后，添加DMP(100mg)，并将反应在30℃下搅拌过夜(16h)。将反应用DCM(20mL)稀释，用饱和Na2S2O3水溶液(30mL)淬灭并分离。有机相用饱和NaHCO3水溶液(20mL)和盐水(20mLx3)洗涤，经无水Na2SO4干燥。过滤并将滤液浓缩。得到化合物85(40mg，收率：62.3％)，为淡黄色固体。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.68(d，J＝7.6Hz，1H)，8.50(s，1H)，7.66(s，1H)，7.58-7.52(m，2H)，7.49-7.42(m，1H)，7.41-7.22(m，7H)，5.74-5.66(m，1H)，3.41-3.36(m，1H)，3.06-2.95(m，1H).MS(ESI)m/z(M+H)+405.1.1HNMR(400MHz，CDCl3)δ7.88(s，1H)，7.73-7.66(m，3H)，7.47-7.38(m，4H)，7.32-7.22(m，3H)，7.19-7.13(m，2H)，5.99(dt，J＝5.3，7.8Hz，1H)，3.52(dd，J＝5.1，13.9Hz，1H)，3.26(dd，J＝7.5，14.1Hz，1H)。
N-(1-(苯并[d]噁唑-2-基)-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基)-4-苯基-1，2，5-噻二唑-3-甲酰胺(86)
Figure BDA0002953643150002641
在-10℃下，向1，3-苯并噁唑(573.4mg，4.81mmol)在THF(20mL)中的溶液中添加i-PrMgCl(2.0M，1.60mL)，将反应混合物在-10℃下搅拌1小时。以在THF(20mL)中的溶液的形式加入化合物85A(400mg，1.60mmol)，并将反应混合物在-10℃下搅拌2h，然后在5-15℃下搅拌12h。将反应浓缩，并将残余物用EtOAc(60mL)稀释，用盐水(30mL×2)洗涤，浓缩，得到残余物。将残余物用EtOAc(100mL)稀释，并用盐水(30mL×3)洗涤，浓缩，得到粗产物。粗产物通过硅胶柱色谱法纯化(PE∶EA＝1∶0至5∶1)，得到化合物86A(270mg，收率：45％)，为黄色油状物。1H NMR(400MHz，CDC13)δ7.77-7.63(m，1H)，7.52(dt，J＝2.6，6.7Hz，1H)，7.41-7.30(m，4H)，7.26-7.13(m，3H)，5.11-4.88(m，2H)，4.53-4.19(m，2H)，3.08(br.d，J＝7.6Hz，1H)，3.00-2.83(m，1H)，1.43-1.27(m，9H).MS(ESI)m/z(M+Na+)391.0。
使用关于化合物85所述的方法，将化合物86A转化为化合物86。获得化合物86(180mg，收率：78.53％)，为白色固体。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.78(d，J＝7.3Hz，1H)，8.04(d，J＝8.1Hz，1H)，7.94(d，J＝8.3Hz，1H)，7.68(t，J＝7.5Hz，1H)，7.60-7.52(m，3H)，7.46-7.40(m，1H)，7.40-7.28(m，6H)，7.27-7.21(m，1H)，5.89-5.79(m，1H)，3.49(dd，J＝3.8，14.1Hz，1H)，3.07(dd，J＝9.9，14.1Hz，1H).MS(ESI)m/z(M+H)+455.0。
N-(1-(噁唑-2-基氨基)-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基)-4-苯基-1，2，5-噻二唑-3-甲酰胺(57)
Figure BDA0002953643150002651
使用关于化合物85所述的条件，将化合物(叔丁氧基羰基)苯基丙氨酸和噁唑-2-胺偶联，得到中间体57A，将其转化为化合物57。获得化合物57(35mg，收率：11.2％)，为白色固体。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.72(br.s，1H)，9.47(br.d，J＝7.7Hz，1H)，7.93(s，1H)，7.51(d，J＝7.3Hz，2H)，7.46-7.36(m，3H)，7.36-7.22(m，5H)，7.15(s，1H)，5.00-4.80(m，1H)，3.25-3.10(m，1H)，3.05-2.93(m，1H).MS(ESI)m/z(M+H)+420.2。
N-(1-氰基-2-苯基乙基)-4-苯基-1，2，5-噻二唑-3-甲酰胺(82)
Figure BDA0002953643150002661
向2-苯基乙醛(3g，24.97mmol，1.95mL)在MeOH(70mL)中的搅拌溶液中添加NH3的MeOH(30mL)和Ti(i-PrO)4(10.64g，37.45mmol，11.05mL)溶液，并将所得溶液在15℃下搅拌2h。然后向反应混合物中加入TMSCN(4.46g，44.94mmol，5.62mL)，然后将反应混合物在15℃下搅拌16h。用水(150mL)淬灭反应混合物，并将所得白色沉淀过滤。将滤液减压浓缩，用乙酸乙酯(50mL×3)萃取，有机相用盐水(100mL)洗涤。有机层经Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。得到化合物82A(2g，收率：54.8％)，为黄色油状物，其无需进一步纯化即可用于下一步。1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.36-7.20(m，5H)，4.03-3.85(m，1H)，3.00-2.80(m，2H)，2.38(brs，2H)
使用关于化合物85所述的条件，将化合物82A与4-苯基-1，2，5-噻二唑-3-羧酸偶联，得到化合物82。获得化合物82(130mg，收率：40.1％)，为白色固体。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.88(br d，J＝7.8Hz，1H)，7.61-7.46(m，3H)，7.45-7.39(m，2H)，7.38-7.20(m，5H)，5.25(q，J＝7.8Hz，1H)，3.30-3.07(m，2H)。
实施例18-化合物41、40、38、67、40、65、42、64、74和72
Figure BDA0002953643150002671
向(1-氰基-1-羟基-3-苯基丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯(27g，97.7mmol)在二噁烷(150mL)中的混合物中加入HCl(6N，360mL)。将混合物在100℃下搅拌12h。使水解反应冷却至室温，然后真空浓缩至120mL。将水相用NaOH(固体)碱化直至pH～11-12。碱化的水相无需纯化即可用于下一步。
向碱化的化合物41A(97.7mmol)在H2O(120mL)中的混合物中加入二噁烷(60mL)和(Boc)2O(45mL，195.9mmol)，将其在25℃下搅拌12h，同时用NaOH(2M)将pH维持在10和11之间。将混合物减压浓缩以去除二噁烷。碱化至pH～12-13后，水相用EA(80mLx2)洗涤，并用6NHCl酸化至pH～2-3，然后用EA(50mLx3)萃取。将合并的有机相用盐水(50mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩，得到化合物41B(29.5g，粗品)，为浅红色粘性液体，其无需纯化即可用于下一步。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)：δ7.32-7.14(m，6H)，6.73-6.35(m，1H)，4.00-3.83(m，2H)，2.87-2.75(m，1H)，2.74-2.66(m，1H)，1.32-1.24(m，9H)。
向化合物41B(11g，37.3mmol)在DMF(80mL)中的混合物中加入K2CO3(10.3g，74.5mmol)，然后加入MeI(4.9mL，78.9mmol)。将混合物在25℃下搅拌2小时。将混合物过滤。将滤液减压浓缩，然后用H2O(200mL)稀释，并用EA(50mL×3)萃取。合并的有机相用盐水(50mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩，得到化合物41C(8.56g，74.2％收率)，为浅黄色固体，其无需纯化即可用于下一步。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)：δ7.33-7.11(m，5H)，6.84-5.99(m，1H)，5.91-5.34(m，1H)，4.03-3.80(m，2H)，3.64-3.52(m，3H)，2.86-2.75(m，1H)，2.71-2.59(m，1H)，1.33-1.15(m，9H).MS(ESI)m/z(M+Na)+332.1，(M-Boc+H)+210.1。
向化合物41C(4g，12.9mmol)在EtOAc(10mL)中的混合物中加入HCl/EtOAc(4M，40mL)。将混合物在25℃下搅拌3h。将混合物真空浓缩。将残余物用EA(20mL)研磨。收集固体并真空干燥，得到化合物41D(2.68g，84.3％收率，HCl)，为白色固体。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)：δ8.27(s，3H)，7.41-7.17(m，5H)，6.71-6.34(m，1H)，4.53-3.93(m，1H)，3.77-3.60(m，1H)，3.59(s，2H)，3.27(s，1H)，3.11-2.82(m，2H)。
3-(1-环丙基-3-苯基-1H-吡唑-4-甲酰胺基)-2-氧代-4-苯基丁酸甲酯(41)和3-(1-环丙基-3-苯基-1H-吡唑-4-甲酰胺基)-2-氧代-4-苯基丁酸(60)
Figure BDA0002953643150002681
向1-环丙基-3-苯基-1H-吡唑-4-羧酸(0.3g，1.3mmol)和中间体41D(387.5mg，1.6mmol，HCl)在DMF(10mL)中的混合物中加入HBTU(500mg，1.3mmol)和DIEA(750μL，4.31mmol)。将混合物在25℃下搅拌1h。将混合物浓缩，然后用H2O(100mL)稀释，并用EA(30mL×3)萃取。合并的有机相用1N HCl(30mL)、饱和NaHCO3(30mL)、盐水(30mL×3)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩，得到化合物41E(O.55g，99.7％收率)，为白色固体，其无需纯化即可用于下一步。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)：δ8.10-7.99(m，1H)，7.96-7.67(m，1H)，7.57-7.45(m，2H)，7.33-7.13(m，8H)，5.96-5.55(m，1H)，4.52-4.33(m，1H)，4.16-4.07(m，1H)，3.83-3.73(m，1H)，3.63-3.51(m，3H)，2.97-2.68(m，2H)，1.14-0.96(m，4H).MS(ESI)m/z(M+H)+420.1。
向化合物41E(0.54g，1.3mmol)在DCM(50mL)中的混合物中添加DMP(1.6g，3.9mmol)。将混合物在25℃下搅拌50min。将反应用DCM(20mL)稀释，并用40mL饱和Na2S2O3溶液和40mL饱和NaHCO3溶液淬灭，并搅拌5分钟。反应淬灭后，将反应混合物倒入分液漏斗中并分离。分离的水相用DCM(30mL×2)萃取。合并的有机相用盐水(30mL×2)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩，得到化合物41(0.51g，收率93.6％)，为浅黄色固体，其无需纯化即可用于下一步。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)：δ.8.61(d，J＝6.8Hz，1H)，8.11(s，1H)，7.59-7.48(m，2H)，7.36-7.19(m，8H)，5.11-4.96(m，1H)，3.87-3.78(m，1H)，3.75(s，3H)，3.24-3.13(m，1H)，2.97-2.84(m，1H)，1.12-0.98(m，4H).MS(ESI)m/z(M+H)+418.2。
向化合物41(0.15g，359.3μmol)在AcOH(2mL)中的混合物中一次性加入HCl(12M，2mL)。将混合物在40℃下搅拌1h。将混合物用H2O(50mL)稀释，并用EA(30mL×3)萃取。将合并的有机相用盐水(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩。将残余物通过制备型HPLC(HCl条件)纯化，得到化合物60(40mg，收率27.6％)，为浅黄色固体。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)：δ.8.52(d，J＝7.3Hz，1H)，8.11(s，1H)，7.60-7.50(m，2H)，7.36-7.18(m，8H)，5.08-4.97(m，1H)，3.88-3.74(m，1H)，3.24-3.12(m，1H)，2.95-2.81(m，1H)，1.14-0.96(m，4H).MS(ESI)m/z(M+H)+404.1。
2-氧代-4-苯基-3-(4-苯基-1，2，5-噻二唑-3-甲酰胺基)丁酸甲酯(38)和2-氧代-4-苯基-3-(4-苯基-1，2，5-噻二唑-3-甲酰胺基)丁酸(67)
Figure BDA0002953643150002691
使用与化合物41相同的方法，由4-苯基-1，2，5-噻二唑-3-羧酸和中间体41D制备化合物38。得到化合物38(0.440g，收率：88.4％)，为白色固体，其无需纯化即可用于下一步。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ9.27(br d，J＝6.0Hz，1H)，7.64(br d，J＝7.0Hz，2H)，7.51-7.38(m，3H)，7.31-7.21(m，5H)，5.32(ddd，J＝5.0，7.5，9.1Hz，1H)，3.81(s，3H)，3.28(dd，J＝4.9，14.2Hz，1H)，3.03-2.98(m，1H).MS(ESI)m/z(M+H)+396.1。
使用与化合物60相同的方法，由化合物38制备化合物67。得到化合物67(0.123g，收率82.89％)，为白色固体。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)：δ7.84(br d，J＝6.5Hz，1H)，7.63-7.59(m，2H)，7.53-7.42(m，3H)，7.35-7.24(m，5H)，5.40(ddd，J＝4.8，7.8，9.0Hz，1H)，3.38(dd，J＝4.8，14.1Hz，1H)，3.04(dd，J＝9.0，14.1Hz，1H).MS(ESI)m/z(M+H)+382.1。
3-(3-(2-氟苯基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺基)-2-氧代-4-苯基丁酸甲酯(40)和3-(3-(2-氟苯基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺基)-2-氧代-4-苯基丁酸(65)
Figure BDA0002953643150002701
使用与化合物41相同的方法，由3-(2-氟苯基)-1-甲基-1H-吡唑-4-羧酸和中间体41D制备化合物40。得到化合物40(0.520g，收率：87.1％)，为黄色固体，其无需纯化即可用于下一步。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)：δ8.12(br.s.，2H)，7.44-7.33(m，2H)，7.31-7.25(m，2H)，7.22-7.10(m，5H)，5.00(br d，J＝6.5Hz，1H)，3.91(s，3H)，3.75(s，3H)，3.17(dd，J＝5.3，14.1Hz，1H)，2.94(br.dd，J＝8.9，13.9Hz，1H).MS(ESI)m/z(M+H)+410.1。
使用与化合物60相同的方法，由化合物40制备化合物65。得到化合物65(60mg，收率40.5％)，为白色固体。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)：δ14.10(s，1H)，8.44(d，J＝7.0Hz，1H)，8.17(s，1H)，7.42-7.26(m，4H)，7.25-7.20(m，3H)，7.19-7.12(m，2H)，4.95(ddd，J＝4.8，6.8，9.5Hz，1H)，3.91(s，3H)，3.15(dd，J＝4.6，13.9Hz，1H)，2.87(dd，J＝9.7，13.9Hz，1H).MS(ESI)m/z(M+H)+396.2。
3-(4-(2-氟苯基)-2-甲基噁唑-5-甲酰胺基)-2-氧代-4-苯基丁酸甲酯(42)和3-(4-(2-氟苯基)-2-甲基噁唑-5-甲酰胺基)-2-氧代-4-苯基丁酸(64)
Figure BDA0002953643150002711
使用与化合物41相同的方法，由4-(2-氟苯基)-2-甲基噁唑-5-羧酸和中间体41D制备化合物42。得到化合物42(0.290g，收率：67.0％)，为淡黄色固体，其无需纯化即可用于下一步。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)：δ.9.10(d，J＝7.1Hz，1H)，7.51-7.38(m，2H)，7.34-7.17(m，7H)，5.19-5.05(m，1H)，3.81-3.54(m，3H)，3.24-3.15(m，1H)，3.03-2.92(m，1H)，2.59-2.52(m，3H).MS(ESI)m/z(M+H)+411.1。
使用与化合物60相同的方法，由化合物42制备化合物64。得到化合物64(40mg，收率50.4％)，为白色固体。1H NMR(CD3CN-d3，400MHz)：δ7.54-7.39(m，2H)，7.37-7.11(m，8H)，5.31-5.16(m，1H)，3.29(dd，J＝5.0，14.1Hz，1H)，3.00(dd，J＝8.8，14.1Hz，1H)，2.50(s，3H).MS(ESI)m/z(M+H)+397.2。
甲基-3-(3-(3-氟苯基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺基)-2-氧代-4-苯基丁酸酯(74)和3-(3-(3-氟苯基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺基)-2-氧代-4-苯基丁酸(72)
Figure BDA0002953643150002721
使用与化合物41相同的方法，由4-(2-氟苯基)-2-甲基噁唑-5-羧酸和中间体41D制备化合物74。得到化合物74(0.150g，收率75.3％)，为淡黄色固体，1H NMR(DMSO-d6，400MHz)：δ8.73(d，J＝6.8Hz，1H)，8.06(s，1H)，7.45-7.29(m，4H)，7.28-7.20(m，4H)，7.14(dt，J＝2.1，8.4Hz，1H)，5.06(ddd，J＝5.0，6.8，9.4Hz，1H)，3.91(s，3H)，3.76(s，3H)，3.20(dd，J＝4.9，13.9Hz，1H)，2.91(dd，J＝9.5，13.7Hz，1H).MS(ESI)m/z(M+H)+410.1。
使用与化合物60相同的方法，由化合物74制备化合物72。得到化合物72(50mg，收率64.7％)，为白色固体。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)：δ8.66(br d，J＝7.3Hz，1H)，8.07(s，1H)，7.44(br d，J＝8.0Hz，2H)，7.38-7.19(m，6H)，7.18-7.10(m，1H)，5.13-4.99(m，1H)，3.90(s，3H)，3.24-3.15(m，1H)，2.89(dd，J＝9.8，14.1Hz，1H).MS(ESI)m/z(M+H)+396.2。
实施例19-化合物58、75、76、73、78、81、84、88、90、91、92、98和105
Figure BDA0002953643150002731
N-(4-氨基-3，4-二氧代-1-苯基丁烷-2-基)-2-甲基-4-(萘-1-基)噁唑-5-甲酰胺(58)
(烧瓶A)向1-萘甲酸(25g，145.2mmol)在CH3CN(40mL)中的混合物中加入CDI(28.3g，174.2mmol)，将混合物在25℃搅拌2h。(烧瓶B)向丙二酸单乙酯钾盐(32.3g，191.7mmol)在CH3CN(200mL)中的混合物中分批加入MgCl2(15.2，64.0mmol)和TEA(44.8g，435.6mmol)。将混合物在50℃下搅拌2小时。将烧瓶A中的溶液转移至烧瓶B中的浆料中，并将混合物在70℃下搅拌12h。将反应混合物用HCl(3N，600mL)淬灭，并将溶液减压浓缩以除去溶剂。将所得浓缩物用MTBE(150mL×3)萃取。将有机层用H2O(150mL×3)、饱和NaHCO3(150mL×3)和饱和NaCl(150mL)洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩，得到化合物58A(18g，收率为46.9％)，为无色油状物，将其直接用于下一步。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.59(d，J＝8.4Hz，1H)，8.19-8.15(m，2H)，8.03(d，J＝7.7Hz，1H)，7.68-7.58(m，3H)，4.31(s，2H)，4.09(q，J＝7.1Hz，2H)，1.11(t，J＝7.2Hz，3H).MS(ESI)m/z(M+H)+243.1。
向化合物58A(18g，74.3mmol，1当量)在EtOH(150mL)中的混合物中一次性加入NH4OAc(45.8g，594.4mmol)。将混合物在90℃搅拌24h。除去溶剂，并减压浓缩。向混合物中加入EA(100ml)和H2O(50mL)，分离有机层。将水层用EA(50mL×2)萃取，合并的有机层用水(100mL×2)、饱和NaHCO3(100mL×2)、盐水(100mL×2)洗涤。然后经无水Na2SO4干燥，过滤，在减压下浓缩。粗产物通过柱色谱法(SiO2，石油醚/乙酸乙酯＝20/1至5/1)纯化，得到化合物58B(16g，81.2％收率)，为无色油。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.21(br.s，1H)，8.13-8.06(m，1H)，8.02-7.95(m，2H)，7.61-7.42(m，5H)，4.51(s，1H)，4.08(q，J＝7.1Hz，2H)，1.21(t，J＝7.1Hz，3H).MS(ESI)m/z(M+H)+242.0。
向化合物58B(3g，12.4mmol)在甲苯(20mL)中的搅拌溶液中加入吡啶(10mL，124.3mmol)，并将混合物反应冷却至0℃。逐滴加入乙酰氯(6.7mL，93.3mmol)，并将混合物在0℃在氮气氛下搅拌6h。通过LCMS监测到了化合物58B，因此向反应混合物中加入额外的乙酰氯(20mL，279.8mmol)，并将混合物在氮气气氛下于0℃搅拌12h。将反应用盐水(30ml)淬灭，用EA(50ml×3)萃取，经Na2SO4干燥，并真空蒸发溶剂。粗产物通过柱色谱法(SiO2，PE/EA＝＝20/1至5/1)纯化，得到化合物58C(2.5g，66.4％收率)，为白色固体。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ10.89(s，1H)，7.99-7.87(m，3H)，7.58-7.36(m，4H)，5.22-5.14(m，1H)，4.20(q，J＝7.1Hz，2H)，2.01(s，3H)，1.26(t，J＝7.2Hz，3H).MS(ESI)m/z(M+H)+284.1。
向化合物58C(0.5g，1.8mmol)在2，2，2-三氟乙醇(15mL)中的搅拌溶液中加入[双(三氟乙酰氧基)碘]苯(986.6mg，2.3mmol)。将混合物在25℃下搅拌30分钟。将反应用饱和NaHCO3水溶液(20ml)淬灭，并将混合物用EtOAc(20ml)稀释，并用EtOAc(20ml×2)萃取。有机层用水(15mL×2)、盐水(15mL)洗涤，经Na2SO4干燥，然后过滤并真空浓缩。粗产物通过柱色谱法(SiO2，石油醚/乙酸乙酯＝20/1至5/1)纯化，得到化合物58D(380mg，74.2％收率)，为淡黄色固体。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.02(dd，J＝7.8，14.6Hz，2H)，7.83(d，J＝8.3Hz，1H)，7.65-7.48(m，4H)，4.09(q，J＝7.0Hz，2H)，2.62(s，3H)，0.98(t，J＝7.0Hz，3H).MS(ESI)m/z(M+H)+282.0。
水解化合物58D，得到中间体58E，使用与实施例1中所述相同的方法，使其与中间体1D反应，得到化合物58。得到化合物58(0.140g，收率64.8％)，为黄色固体，1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.63(d，J＝7.5Hz，1H)，8.06(s，1H)，7.97(br d，J＝7.8Hz，2H)，7.86-7.76(m，2H)，7.58-7.42(m，4H)，7.32-7.18(m，5H)，5.37-5.27(m，1H)，3.15(br dd，J＝3.4，13.9Hz，1H)，2.94(br dd，J＝9.8，13.8Hz，1H)，2.61(s，3H).MS(ESI)m/z(M+H)+428.1。
N-(4-氨基-3，4-二氧代-1-苯基丁烷-2-基)-4-(2-氟-3-甲氧基苯基)-2-甲基噁唑-5-甲酰胺(75)
使用与化合物58所述相同的方法，由2-氟-3-甲氧基苯甲酸制备化合物75，得到化合物75。得到化合物75(0.160g，收率53.6％)，为黄色固体，1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.71(d，J＝7.6Hz，1H)，8.03(s，1H)，7.78(s，1H)，7.30-7.05(m，7H)，6.97-6.89(m，1H)，5.37-5.27(m，1H)，3.80(s，3H)，3.13(dd，J＝3.9，13.9Hz，1H)，2.93(dd，J＝9.8，14.2Hz，1H)，2.51(s，3H).MS(ESI)m/z(M+H)+426.1。
N-(4-氨基-3，4-二氧代-1-苯基丁烷-2-基)-4-(2，6-二氟苯基)-2-甲基噁唑-5-甲酰胺(76)
使用与化合物58所述相同的方法，由2，6-二氟苯甲酸制备化合物76，得到化合物76。得到化合物76(0.153g，收率53.8％)，为黄色固体，1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.88(d，J＝7.3Hz，1H)，8.07(s，1H)，7.82(s，1H)，7.58-7.46(m，1H)，7.35-7.07(m，7H)，5.39-5.28(m，1H)，3.16(dd，J＝3.5，14.1Hz，1H)，2.96(dd，J＝10.0，14.2Hz，1H)，2.57(s，3H).MS(ESI)m/z(M+H)+414.1。
N-(4-氨基-1-(4-氟苯基)-3，4-二氧代丁烷-2-基)-4-(2-氟苯基)-2-甲基噁唑-5-甲酰胺(73)
Figure BDA0002953643150002761
使用与实施例1所述相同的方法，由4-(2-氟苯基)-2-甲基噁唑-5-羧酸和中间体73A制备化合物73，得到化合物73。得到化合物73(0.160g，收率73.08％)，为白色固体，1HNMR(DMSO-d6，400MHz)：δ8.80(d，J＝7.3Hz，1H)，8.05(s，1H)，7.81(s，1H)，7.45(q，J＝7.3Hz，2H)，7.33-7.25(m，2H)，7.24-7.17(m，2H)，7.11(t，J＝8.8Hz，2H)，5.32(s，1H)，3.15(dd，J＝3.4，13.9Hz，1H)，3.02-2.87(m，1H)，2.55(s，3H).MS(ESI)m/z(M+H)+414.1。
N-(4-氨基-3，4-二氧代-1-苯基丁烷-2-基)-4-(2，5-二甲基呋喃-3-基)-2-甲基噁唑-5-甲酰胺(78)
Figure BDA0002953643150002762
使用与化合物58所述相同的方法，由4-(2，5-二甲基呋喃-3-基)-2-甲基噁唑-5-羧酸和中间体1D制备化合物78，得到化合物78。得到化合物78(65mg，收率40.9％)，为白色固体，1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.60(d，J＝7.3Hz，1H)，8.14-8.04(m，1H)，7.81(s，1H)，7.29-7.23(m，4H)，7.20-7.15(m，1H)，6.57(s，1H)，5.39-5.34(m，1H)，3.16(dd，J＝3.8，13.8Hz，1H)，2.95(dd，J＝9.8，13.9Hz，1H)，2.46(s，3H)，2.36(s，3H)，2.19-2.12(m，3H).MS(ESI)m/z(M+H)+396.1。
N-(4-氨基-3，4-二氧代-1-苯基丁烷-2-基)-4-(2，5-二氯呋喃-3-基)-2-甲基噁唑-5-甲酰胺(81)
Figure BDA0002953643150002771
使用与化合物58D所述相同的方法，由呋喃-3-羧酸制备化合物81A，得到81A。得到化合物81A(1.28g，收率64.2％)，为白色固体，1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.37(s，1H)，7.48(s，1H)，7.13-7.07(m，1H)，4.43(q，J＝7.3Hz，2H)，2.55(s，3H)，1.43(t，J＝7.1Hz，3H).MS(ESI)m/z(M+H)+221.9。
向化合物81A(300mg，1.36mmol)的DMF(3mL)溶液中加入NCS(580mg，4.34mmol)。将混合物在100℃下搅拌6小时。将反应用H2O(30mL)稀释，用EA(20mL×3)萃取，有机相经Na2SO4干燥，过滤并浓缩，得到残余物。残余物通过快速硅胶色谱法纯化(PE∶EA＝10∶1至5∶1)。得到化合物81B(80mg，收率：20.3％)，为白色固体。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ6.85(s，1H)，4.40(q，J＝7.2Hz，2H)，2.58(s，3H)，1.39(br t，J＝7.1Hz，3H)。
水解化合物81B，得到中间体酸，使用与实施例1中所述相同的方法，使其与中间体1D反应，得到化合物81。得到化合物81(68mg，收率88.3％)，为淡黄色固体，1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.93(d，J＝7.6Hz，1H)，8.10(s，1H)，7.83(s，1H)，7.27-7.24(m，4H)，7.19-7.15(m，1H)，7.00(s，1H)，5.42-5.31(m，1H)，3.22-3.13(m，1H)，2.96-2.89(m，1H)，2.50(s，3H).MS(ESI)m/z(M+H)+436.0。
N-(4-氨基-3，4-二氧代-1-苯基丁烷-2-基)-2-甲基-4-(2-甲基呋喃-3-基)噁唑-5-甲酰胺(84)
Figure BDA0002953643150002781
使用与化合物58所述相同的方法，由2-甲基呋喃-3-羧酸经由中间体84A和84B制备化合物84，得到化合物84。得到化合物84(60mg，收率37.52％)，为白色固体。MS(ESI)m/z(M+1)+382.1.1H NMR(DMSO-d6，400MHz)：δ8.65(d，J＝7.2Hz，1H)，8.08(br.s，1H)，7.81(br.s，1H)，7.45(d，J＝2.0Hz，1H)，7.30-7.21(m，4H)，7.21-7.13(m，1H)，6.94(d，J＝2.0Hz，1H)，5.45-5.32(m，1H)，3.21-3.09(m，1H)，3.01-2.88(m，1H)，2.48(s，3H)，2.39(s，3H)。
N-(4-氨基-3，4-二氧杂-1-苯基丁-2-基)-4-(苯并[b]噻吩-4-基)-2-甲基噁唑-5-甲酰胺(88)
Figure BDA0002953643150002782
使用与化合物58所述相同的方法，由苯并[b]噻吩-4-羧酸经由中间体88A和88B制备化合物88，得到化合物88。得到化合物88(110mg，收率92.6％)，为黄色固体。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.73(d，J＝7.3Hz，1H)，8.07-7.98(m，2H)，7.80(s，1H)，7.71(d，J＝5.6Hz，1H)，7.52-7.47(m，1H)，7.37(d，J＝5.4Hz，1H)，7.32(d，J＝7.8Hz，1H)，7.30-7.16(m，5H)，5.38-5.28(m，1H)，3.14(dd，J＝3.5，13.8Hz，1H)，2.92(dd，J＝9.9，14.1Hz，1H)，2.56(s，3H).MS(ESI)m/z(M+H)+＝434.1。
N-(4-氨基-3，4-二氧代-1-苯基丁烷-2-基)-4-(2-氯呋喃-3-基)-2-甲基噁唑-5-甲酰胺(90)
Figure BDA0002953643150002791
向化合物90A(400mg，1.81mmol)的DMF(3mL)溶液中加入NCS(266mg，1.99mmol)。将混合物在15℃下搅拌16h。然后将混合物在25℃下搅拌16h。将反应用H2O(40mL)稀释，用EA(30mL×2)萃取，有机相经Na2SO4干燥，过滤并浓缩，得到残余物。残余物通过快速硅胶色谱法纯化(PE∶EA＝10∶1至4∶1)。得到化合物90B(300mg，收率：64.9％)，为白色固体。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.37(d，J＝2.0Hz，1H)，6.98(d，J＝2.2Hz，1H)，4.46-4.34(m，2H)，2.62-2.53(m，3H)，1.46-1.33(m，3H)。
水解化合物90B，得到中间体酸，使用与实施例1中所述相同的方法，使其与中间体1D反应，得到化合物90。得到化合物90(90mg，收率51.8％)，为白色固体，1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.86(d，J＝7.6Hz，1H)，8.12(s，1H)，7.85(s，1H)，7.73-7.68(m，1H)，7.32-7.26(m，4H)，7.25-7.17(m，1H)，7.07-6.99(m，1H)，5.43-5.38(m，1H)，3.19(dd，J＝3.8，14.1Hz，1H)，2.97(dd，J＝10.0，13.9Hz，1H)，2.53(s，3H).MS(ESI)m/z(M+H)+402.1。
N-(4-氨基-3，4-二氧杂-1-苯基丁-2-基)-4-(苯并[B]噻吩-7-基)-2-甲基噁唑-5-甲酰胺(91)
Figure BDA0002953643150002801
使用与化合物58所述相同的方法，由苯并[b]噻吩-7-羧酸经由中间体91A和91B制备化合物91，得到化合物91。得到化合物91(15mg，收率49.6％)，为白色固体。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.90(d，J＝7.5Hz，1H)，8.12(s，1H)，8.02(d，J＝7.3Hz，1H)，7.93-7.85(m，2H)，7.75(d，J＝5.8Hz，1H)，7.48(d，J＝5.8Hz，1H)，7.39(d，J＝7.8Hz，1H)，7.31-7.28(m，3H)，7.25-7.16(m，2H)，5.45-5.41(m，1H)，3.20(dd，J＝3.9，13.9Hz，1H)，2.98(dd，J＝9.8，13.8Hz，1H)，2.62(s，3H).MS(ESI)m/z(M+H)+434.1。
N-(4-氨基-3，4-二氧代-1-苯基丁烷-2-基)-4-(5-氯呋喃-3-基)-2-甲基噁唑-5-甲酰胺(92)
Figure BDA0002953643150002802
向化合物90A(400mg，1.81mmol)的DMF(3mL)溶液中加入NCS(266mg，1.99mmol)。将混合物在15℃下搅拌16h。然后将混合物在25℃下搅拌16h。将反应用H2O(40mL)稀释，用EA(30mL×2)萃取，有机相经Na2SO4干燥，过滤并浓缩，得到残余物。残余物通过快速硅胶色谱法纯化(PE∶EA＝10∶1至4∶1)。得到化合物92B(55mg，收率：11.9％)，为白色固体。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.22(s，1H)，6.93(d，J＝1.0Hz，1H)，4.46-4.40(m，2H)，2.54(s，3H)，1.42(t，J＝7.1Hz，3H)。
水解化合物92B，得到中间体酸，使用与实施例1中所述相同的方法，使其与中间体1D反应，得到化合物92。得到化合物92(45mg，收率61.3％)，为白色固体，1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.90(d，J＝7.6Hz，1H)，8.33(d，J＝1.0Hz，1H)，8.15(s，1H)，7.87(s，1H)，7.34-7.27(m，4H)，7.24-7.16(m，1H)，7.02(d，J＝1.0Hz，1H)，5.45-5.41(m，1H)，3.21(dd，J＝3.9，13.9Hz，1H)，3.00(dd，J＝9.9，14.1Hz，1H)，2.53(s，3H).MS(ESI)m/z(M+H)+402.1。
N-(4-氨基-3，4-二氧代-1-苯基丁烷-2-基)-4-(5-氯-2-甲基呋喃-3-基)-2-甲基噁唑-5-甲酰胺(98)
Figure BDA0002953643150002811
向化合物98A(100mg，0.42mmol)的DMF(5mL)溶液中加入NCS(57mg，0.42mmol)。将混合物在20℃下搅拌12h。将混合物用H2O(20mL)洗涤，用EtOAc(15mL×2)萃取。收集有机物并浓缩。残余物通过柱纯化(PE∶EA＝10∶1)，得到化合物2(60mg，收率：52.34％)，为无色固体。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)：δ6.94(s，1h)，4.34-4.27(m，2H)，2.53(s，3H)，2.50(s，3H)，1.31-1.27(m，3H)。
水解化合物98B，得到中间体酸，使用与实施例1中所述相同的方法，使其与中间体1D反应，得到化合物98。得到化合物98(80mg，收率40.15％)，为淡黄色固体，MS(ESI)m/z(M+1)+416.1.1H NMR(DMSO-d6，400MHz)：δ8.77(d，J＝7.6Hz，1H)，8.09(br.s，1H)，7.82(br.s，1H)，7.29-7.22(m，4H)，7.20-7.13(m，1H)，6.89(s，1H)，5.41-5.32(m，1H)，3.20-3.12(m，1H)，3.00-2.89(m，1H)，2.49(s，3H)，2.41(s，3H)。
2-(5-(乙氧基羰基)-2-甲基噁唑-4-基)-N，N，N-三甲基苯甲铵(105)
Figure BDA0002953643150002821
使2-硝基苯甲酸经历化合物58所述的条件，得到化合物105A。得到化合物105A(480mg，60.4％收率)，为黄色油状物。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.14-8.09(m，1H)，7.87-7.80(m，1H)，7.78-7.70(m，2H)，4.21-4.13(m，2H)，2.58(s，3H)，1.17-1.11(m，3H)。
向化合物105A(200mg，724.00μmol)在EtOH(20mL)中的溶液中添加Pd/C(45mg，72.40μmol，10％纯度)和NH3.H2O(2.17mmol，270μL，30％纯度)。将混合物在H2气球(15psi)下在25℃下搅拌1小时。将混合物过滤并浓缩。残余物通过柱色谱法纯化(SiO2，石油醚/乙酸乙酯＝2/1至0/1)。得到化合物105B(75mg，42.1％收率)，为黄色固体。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.58-7.48(m，1H)，7.22-7.16(m，1H)，6.79-6.72(m，2H)，4.67(br s，2H)，4.37-4.30(m，2H)，2.58(s，3H)，1.34-1.28(m，3H)。
向化合物105B(120mg，487.29μmol)和MeI(2.77g，19.49mmol，1.21mL)的丙酮(3mL)溶液中加入K2CO3(300mg，2.17mmol)。将混合物在40℃搅拌48h，并加入MeI(2.77g，19.49mmol，1.21mL)。将混合物在40℃下搅拌48h。过滤反应，浓缩滤液。残余物通过制备型TLC纯化(SiO2，DCM∶EA＝1∶1)。得到化合物105(40mg，27.2％收率)，为黄色固体。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.10(d，J＝8.3Hz，1H)，7.76(t，J＝7.5Hz，1H)，7.64(t，J＝7.4Hz，1H)，7.48(d，J＝7.3Hz，1H)，4.13(q，J＝7.2Hz，2H)，3.74-3.47(m，9H)，2.61(s，3H)，1.06(t，J＝7.0Hz，3H).MS(ESI)m/z(M+H)+433.1。
实施例20-化合物80、83、87、89、95、96和97
Figure BDA0002953643150002831
N-(4-氨基-1-(2-氟苯基)-3，4-二氧代丁烷-2-基)-4-(2-氟苯基)-2-甲基噁唑-5-甲酰胺(80)
向2-氨基-3-(2-氟苯基)丙酸(5.77g，31.50mmol)在二噁烷(45mL)中的溶液中加入NaOH(1.95g，48.82mmol)的H2O(12mL)溶液和Boc2O(8.66g，39.69mmol，9.12mL)的二噁烷(15mL)溶液。将混合物在25℃下搅拌20h。将反应物减压浓缩并向混合物中加入H2O(60mL)。将水层用HCl(0.5M)处理，直到pH～3，并用EA(50mL×3)萃取反应。合并的有机层用H2O(50mL)和盐水(50mL)洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤，浓缩，得到残余物。得到化合物80A(8.58g，收率：96.2％)，为黄色固体，其无需进一步纯化即可用于下一步。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ12.66(br s，1H)，7.35-7.22(m，2H)，7.17-7.07(m，3H)，4.19-4.07(m，1H)，3.13(br dd，J＝4.9，13.9Hz，1H)，2.81(br dd，J＝10.5，13.7Hz，1H)，1.30(s，9H)。
向化合物80A(8.58g，30.29mmol)和N-甲氧基甲胺(4.14g，42.41mmol，HCl)、HOBt(4.50g，33.32mmol)在CHCl3(100mL)中的混合物中逐滴加入NMM(12.25g，121.16mmol，13.32mL)。然后向混合物中加入EDCI(8.13g，42.41mmol)，并将混合物在25℃下搅拌18h。减压浓缩反应物。向混合物中加入H2O(100mL)和EA(100mL)，分离有机层。用EA(60mL×2)萃取水层。合并的有机层用HCl(0.5M，100mL)、饱和NaHCO3(100mL)洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤，减压浓缩，得到残余物。得到化合物80B(9.26g，收率：91.7％)，为黄色固体，其无需进一步纯化即可用于下一步。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.38-7.19(m，2H)，7.17-6.99(m，3H)，4.66(br s，1H)，3.67(br s，3H)，3.13-3.02(m，3H)，2.95(br dd，J＝4.5，13.6Hz，1H)，2.76-2.61(m，1H)，1.27(s，9H).MS(ESI)m/z(M+Na)+348.9。
在0℃和N2气氛下，向LiAlH4(1.18g，31.21mmol)在THF(50mL)中的溶液中滴加化合物80B(9.26g，28.37mmol)在THF(100mL)中的溶液。添加后，将混合物在0℃下搅拌2h。在0℃下，向反应混合物中加入EA(100mL)和HCl(1M，100mL)。分离有机层，并用EA(100mL x 2)萃取水层。合并的有机层用HCl(1M，100mL)、H2O(100mL)、盐水(100mL)洗涤。将合并的有机层经无水Na2SO4干燥，过滤，减压浓缩，得到残余物。得到化合物80C(5.65g，收率：74.5％)，为黄色油状物，其无需进一步纯化即可用于下一步。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.50(s，1H)，7.37(br d，J＝7.3Hz，1H)，7.31-7.22(m，2H)，7.16-7.08(m，2H)，4.03(q，J＝6.8Hz，1H)，3.13(br dd，J＝4.6，13.9Hz，1H)，2.74(br dd，J＝10.1，13.6Hz，1H)，1.32(s，9H)。
在0℃下，向化合物80C(2g，7.48mmol)和CsF(568mg，3.74mmol)在MeOH(50mL)中的溶液中滴加三甲基甲硅烷基甲腈(890.76mg，8.98mmol，1.12mL)。将混合物温热至20℃并搅拌5h。将反应混合物浓缩，然后用H2O(30mL)稀释，用EA(30mL×3)萃取，合并的有机层经Na2SO4干燥，过滤并浓缩，得到残余物。得到化合物80D(2.62g，粗品)，为黄色油状物，其无需进一步纯化即可用于下一步。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.23(br d，J＝7.6Hz，2H)，7.15-7.03(m，3H)，4.63-4.28(m，1H)，3.93-3.75(m，1H)，3.12-2.93(m，1H)，2.78-2.58(m，1H)，1.25(s，4.5H)，1.22(s，4.5H)。
向化合物80D(530mg，1.80mmol)在DMSO(10mL)中的溶液中滴加K2CO3(498mg，3.60mmol)和H2O2(3.06g，27.01mmol，2.60mL，30％纯度)。将混合物在20℃下搅拌3h。将反应用饱和Na2S2O3(20mL)淬灭，并用H2O(30mL)稀释。混合物用EA(40mL×3)萃取，合并的有机层用H2O(40mL)、盐水(40mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤，浓缩，得到残余物。得到化合物80E(507mg，收率：90.1％)，为淡黄色固体，其无需进一步纯化即可用于下一步。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.34-7.16(m，4H)，7.14-7.04(m，2H)，6.52-6.04(m，1H)，5.69(dd，J＝6.0，12.6Hz，1H)，4.04(br d，J＝8.8Hz，1H)，3.94-3.74(m，1H)，2.90-2.61(m，2H)，1.24(s，9H)。
向化合物80E(1.39g，4.45mmol)的EtOAc(15mL)溶液中加入HCl/EtOAc(4M，15mL)。将混合物在25℃下搅拌2小时。过滤沉淀物，并将滤饼用EA(20mL)洗涤。将固体减压干燥。得到化合物80F(933mg，收率：84.3％，HCl)，为淡黄色固体。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.17-7.90(m，3H)，7.55-7.43(m，2H)，7.43-7.23(m，2H)，7.21-7.07(m，2H)，6.74-6.36(m，1H)，4.23-3.77(m，1H)，3.72-3.53(m，1H)，2.92(br d，J＝7.1Hz，1H)，2.82(br d，J＝7.1Hz，1H)。
使用与中间体58E和1D相同的条件，将化合物80F和4-(2-氟苯基)-2-甲基噁唑-5-羧酸偶联，然后使用实施例1中所述的步骤得到化合物80。得到化合物80(95mg，收率60.7％)，为白色固体，1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.77(d，J＝7.3Hz，1H)，8.01(s，1H)，7.75(s，1H)，7.50-7.38(m，2H)，7.32-7.17(m，4H)，7.16-7.06(m，2H)，5.39-5.29(m，1H)，3.22(br dd，J＝4.8，14.3Hz，1H)，3.01(dd，J＝9.0，13.9Hz，1H)，2.53(s，3H).MS(ESI)m/z(M+H)+414.1。
Figure BDA0002953643150002861
N-(4-氨基-1-(2-氯苯基)-3，4-二氧代丁烷-2-基)-4-(2-氟苯基)-2-甲基噁唑-5-甲酰胺(83)
将化合物2-氨基-3-(2-氯苯基)丙酸转化为中间体83F，然后使用与化合物80相同的条件，使其与4-(2-氟苯基)-2-甲基噁唑-5-羧酸偶联，然后进一步使用实施例1中所述的方法，得到化合物83。得到化合物83(120mg，收率36％)，为白色固体，1H NMR(DMSO-d6，400MHz)：δ8.89(d，J＝7.6Hz，1H)，8.03(s，1H)，7.75(s，1H)，7.50-7.39(m，3H)，7.38-7.30(m，1H)，7.29-7.17(m，4H)，5.46-5.33(m，1H)，3.33-3.26(m，1H)，3.08(dd，J＝9.8，14.2Hz，1H)，2.54(s，3H).MS(ESI)m/z(M+H)+430.1。
Figure BDA0002953643150002862
N-(4-氨基-1-(3-氟苯基)-3，4-二氧代丁烷-2-基)-4-(2-氟苯基)-2-甲基噁唑-5-甲酰胺(87)
将化合物2-氨基-3-(3-氟苯基)丙酸转化为中间体87F，然后使用与化合物80相同的条件，使其与4-(2-氟苯基)-2-甲基噁唑-5-羧酸偶联，然后进一步使用实施例1中所述的方法，得到化合物87。得到化合物87(160mg，收率55％)，为淡黄色固体，1H NMR(DMSO-d6，400MHz)：δ8.87(d，J＝7.5Hz，1H)，8.07(s，1H)，7.83(s，1H)，7.50-7.40(m，2H)，7.38-7.30(m，1H)，7.25-7.17(m，2H)，7.13-7.01(m，3H)，5.42-5.27(m，1H)，3.19(dd，J＝3.8，14.1Hz，1H)，2.98(dd，J＝9.9，13.9Hz，1H)，2.55(s，3H).MS(ESI)m/z(M+H)+414.1。
Figure BDA0002953643150002871
N-(4-氨基-1-(3-氯苯基)-3，4-二氧代丁烷-2-基)-4-(2-氟苯基)-2-甲基噁唑-5-甲酰胺(89)
将化合物2-氨基-3-(3-氯苯基)丙酸转化为中间体89F，然后使用与化合物80相同的条件，使其与4-(2-氟苯基)-2-甲基噁唑-5-羧酸偶联，然后进一步使用实施例1中所述的方法，得到化合物89。得到化合物89(70mg，收率31.5％)，为白色固体。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.89(d，J＝7.6Hz，1H)，8.09(s，1H)，7.84(s，1H)，7.44(q，J＝7.3Hz，2H)，7.35-7.25(m，3H)，7.25-7.16(m，3H)，5.37-5.26(m，1H)，3.17(dd，J＝3.7，13.9Hz，1H)，2.95(dd，J＝10.0，13.9Hz，1H)，2.55(s，3H).MS(ESI)m/z(M+H)+430.1。
Figure BDA0002953643150002872
N-(4-氨基-3，4-二氧代-1-(4-(三氟甲基)苯基)丁烷-2-基)-3-(2-氟苯基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺(95)
将化合物2-氨基-3-(4-(三氟甲基)苯基)丙酸转化为中间体95F，然后使用与化合物80相同的条件，使其与3-(2-氟苯基)-1-甲基-1H-吡唑-4-羧酸偶联，然后进一步使用实施例1中所述的方法，得到化合物95。得到化合物96(70mg，收率55.13％)，为淡黄色固体。1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.92(s，1H)，7.61(d，J＝8.0Hz，2H)，7.47-7.37(m，2H)，7.34(d，J＝8.0Hz，2H)，7.25-7.18(m，1H)，7.16-7.09(m，1H)，6.96(br s，1H)，6.69(br d，J＝6.8Hz，1H)，6.22(br s，1H)，5.40-5.32(m，1H)，3.91(s，3H)，3.31(dd，J＝4.6，14.2Hz，1H)，2.97(dd，J＝8.9，13.9Hz，1H).MS(ESI)m/z(M+H)+＝463.1。
Figure BDA0002953643150002881
N-(4-氨基-1-(4-氯苯基)-3，4-二氧代丁烷-2-基)-4-(2-氟苯基)-2-甲基噁唑-5-甲酰胺(96)
将化合物2-氨基-3-(4-氯苯基)丙酸转化为中间体96F，然后使用与化合物80相同的条件，使其与4-(2-氟苯基)-2-甲基噁唑-5-羧酸偶联，然后进一步使用实施例1中所述的方法，得到化合物96。得到化合物96(120mg，收率77％)，为白色固体。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)：δ8.86(d，J＝7.6Hz，1H)，8.09(s，1H)，7.84(s，1H)，7.48-7.41(m，2H)，7.38-7.33(m，2H)，7.31-7.26(m，2H)，7.24-7.18(m，2H)，5.37-5.26(m，1H)，3.16(dd，J＝3.7，14.2Hz，1H)，2.94(dd，J＝10.0，13.9Hz，1H)，2.56(s，3H).MS(ESI)m/z(M+H)+430.1。
Figure BDA0002953643150002882
N-(4-氨基-1-(4-氯苯基)-3，4-二氧代丁烷-2-基)-3-(2-氟苯基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺(97)
使用与化合物80相同的条件，将化合物3-氨基-4-(4-氯苯基)-2-羟基丁酰胺与3-(2-氟苯基)-1-甲基-1H-吡唑-4-羧酸偶联，然后进一步使用实施例1中所述的方法，得到化合物97。得到化合物97(120mg，收率65.3％)，为白色固体。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)：δ8.28(d，J＝7.3Hz，1H)，8.18(s，1H)，8.01(s，1H)，7.78(s，1H)，7.41-7.30(m，4H)，7.28-7.24(m，2H)，7.19-7.09(m，2H)，5.29-5.11(m，1H)，3.91(s，3H)，3.11(dd，J＝3.7，13.9Hz，1H)，2.80(dd，J＝10.1，13.8Hz，1H).MS(ESI)m/z(M+H)+429.1。
实施例21-化合物5和8
Figure BDA0002953643150002891
N-(4-氨基-3，4-二氧杂-1-苯基丁-2-基)-5-(苯并[d][1，3]二氧杂-4-基)异噁唑-4-甲酰胺(5)
烧瓶1：向苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-4-羧酸(2g，12.04mmol)的CH3CN(15mL)溶液中加入CDI(2.19g，13.48mmol)。将混合物在25℃下搅拌4h。
烧瓶2：在15分钟内，向丙二酸单乙酯钾盐(2.70g，15.89mmol)在CH3CN(25mL)中的溶液中分批添加MgCl2(1.15g，12.04mmol)。将混合物在25℃下搅拌0.5h，然后加入TEA(3.65g，36.12mmol)，并将浆液搅拌0.5h。将烧瓶1中的溶液转移到烧瓶2中的浆液中。将混合物在25℃下搅拌18小时。将反应混合物用3N HCl(40mL)淬灭，并将溶液减压浓缩。将所得物用MTBE(50mL×2)萃取。将有机层用H2O(50mL)、饱和NaHCO3(50mL)、饱和NaCl(50mL)洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩，得到化合物5A(2.1g，73.9％收率)，为黄色油状物，其无需纯化即可用于下一步。
将化合物5A(1.1g，4.66mmol)和DMFDMA(2.47mL，18.63mmol)在DMF(15mL)中的混合物在80℃下搅拌3h。将混合物真空浓缩，得到化合物5B(1.2g，88.5％收率)，为棕色油，其无需纯化即可用于下一步。
向化合物5B(1.20g，4.12mmol)和盐酸羟胺(573mg，8.24mmol)在MeOH(7mL)和MTBE(7mL)中的混合物中添加NaOAc(676mg，8.24mmol)。将混合物在25℃下搅拌17h。向混合物中添加饱和NH4Cl(20mL)，并用MTBE(20mL×2)萃取。将合并的有机相用盐水(10mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并在真空下浓缩。产物通过FCC(0-10％EA/PE)纯化，得到化合物5C(444mg，41.3％收率)，为白色固体。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.07(s，1H)，7.29(d，J＝8.0Hz，1H)，7.17(d，J＝7.8Hz，1H)，7.03-6.97(m，1H)，6.13(s，2H)，4.24(q，J＝7.1Hz，2H)，1.21(t，J＝7.2Hz，3H)。
向化合物5C(244mg，0.93mmol)在AcOH(5mL)中的混合物中加入HCl(12M，5mL)。将混合物在118℃搅拌4.5h。将混合物在真空下浓缩。向混合物中添加H2O(50mL)，将混合物用DCM(50mL)萃取。有机相用盐水(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩，得到化合物5D(185mg，收率84.9％)，为黄色固体，其无需纯化即可用于下一步。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.96(s，1H)，7.28(d，J＝7.7Hz，1H)，7.11(dd，J＝1.0，7.8Hz，1H)，6.96(t，J＝7.9Hz，1H)，6.14-6.06(m，2H)。
使用与中间体58E和1D相同的条件，将化合物5D和中间体1D偶联，然后使用实施例1中所述的步骤得到化合物5。得到化合物5(40mg，收率20.8％)，为淡黄色固体。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.88(br d，J＝7.3Hz，1H)，8.81(s，1H)，8.08(br s，1H)，7.82(br s，1H)，7.30-7.17(m，5H)，7.07(br dd，J＝7.7，15.7Hz，2H)，6.92-6.86(m，1H)，6.03-5.86(m，2H)，5.31(br s，1H)，3.15(br dd，J＝3.4，13.6Hz，1H)，2.81(br dd，J＝10.3，13.8Hz，1H).MS(ESI)m/z(M+H)+408.1。
Figure BDA0002953643150002901
N-(4-氨基-3，4-二氧杂-1-苯基丁-2-基)-5-(2，2-二氟苯并[D][1，3]二氧杂环戊烯-4-基)异噁唑-4-甲酰胺(8)
使用关于化合物5所述的方法，将化合物2，2-二氟苯并[d][1，3]二噁唑-4-羧酸转化为中间体8D，然后使用化合物58中所述的方法，将中间体8D与中间体1D偶联，得到化合物8。得到化合物8(60mg，收率54％)，为白色固体。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)：δ.9.06(d，J＝7.5Hz，1H)，8.97(s，1H)，8.10(s，1H)，7.85(s，1H)，7.65-7.47(m，2H)，7.36-7.14(m，6H)，5.38(s，1H)，3.24-3.07(m，1H)，2.89-2.75(m，1H).MS(ESI)m/z(M+H)+444.1。
实施例22-化合物11、27、30、29、45和59
Figure BDA0002953643150002911
向2-氯喹唑啉(1g，6.08mmol)和K2CO3(1.00g，7.24mmol)的混合物中加入NH2NH2.H2O(5mL，85％纯度)。将混合物在100℃下搅拌0.5小时。将反应混合物冰冷却，并通过过滤收集所得粗晶体。用冷水洗涤晶体，风干得到残余物。将残余物在PE(20mL)中研磨，并通过过滤收集。得到化合物11A(490mg，收率：50.4％)，为黄色固体。
向化合物11A(490mg，3.06mmol)和2，4-二氧戊酸乙酯(484mg，3.06mmol)的溶液中加入HOAc(5mL)。将混合物在100℃下搅拌16h。将混合物浓缩，用EA(25mL)稀释并过滤。有机层用NaHCO3(25mL)、盐水(25mL×3)洗涤，经Na2SO4干燥，然后过滤并浓缩，得到残余物。残余物通过制备型TLC纯化(PE∶EA＝1∶1)。得到化合物11B(180mg，收率：18.1％)，为黄色油状物。得到化合物11C(110mg，收率：11.3％)，为黄色油状物。
化合物11B：1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.69(s，1H)，8.23(d，J＝8.4Hz，1H)，8.12-8.03(m，1H)，8.00-7.93(m，1H)，7.78(dt，J＝1.0，7.6Hz，1H)，6.85(s，1H)，4.21-4.09(m，2H)，2.28(s，3H)，1.03(t，J＝7.2Hz，3H).MS(ESI)m/z(M+H)+282.9。
化合物11C：1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.79(d，J＝0.7Hz，1H)，8.29(d，J＝8.2Hz，1H)，8.16-8.05(m，2H)，7.83(ddd，J＝1.5，6.4，8.1Hz，1H)，6.83(d，J＝0.9Hz，1H)，4.32(q，J＝7.1Hz，2H)，2.68(d，J＝0.9Hz，3H)，1.32(t，J＝7.2Hz，3H).MS(ESI)m/z(M+H)+282.9。
N-(4-氨基-3，4-二氧代-1-苯基丁烷-2-基)-3-甲基-1-(喹唑啉-2-基)-1H-吡唑-5-甲酰胺(11)
Figure BDA0002953643150002921
使化合物11B经历如实施例19中所述的用于将中间体58D转化为化合物58的程序，得到化合物11。得到化合物11(45mg，收率41.4％)，为淡黄色固体，1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.51(s，1H)，9.11(d，J＝7.7Hz，1H)，8.19(d，J＝8.2Hz，1H)，8.09-7.98(m，2H)，7.88-7.79(m，2H)，7.75(t，J＝7.6Hz，1H)，7.28-7.16(m，5H)，6.58(s，1H)，5.43-5.15(m，1H)，3.13(dd，J＝3.1，14.1Hz，1H)，2.83(dd，J＝9.9，13.9Hz，1H)，2.28(s，3H).MS(ESI)m/z(M+H)+429.1。
N-(4-氨基-3，4-二氧代-1-苯基丁烷-2-基)-5-甲基-1-(喹唑啉-2-基)-1H-吡唑-3-甲酰胺(27)
Figure BDA0002953643150002922
使化合物11C经历如实施例19中所述的用于将中间体58D转化为化合物58的程序，得到化合物27。得到化合物27(28mg，收率77.1％)，为淡黄色固体，1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.76(s，1H)，8.48(d，J＝7.5Hz，1H)，8.26(d，J＝8.2Hz，1H)，8.15-7.98(m，3H)，7.89-7.73(m，2H)，7.27-7.19(m，4H)，7.19-7.11(m，1H)，6.68(s，1H)，5.56-5.29(m，1H)，3.24-3.00(m，2H)，2.64(s，3H).MS(ESI)m/z(M+H)+429.2。
N-(4-氨基-3，4-二氧代-1-苯基丁烷-2-基)-3-甲基-1-(5-苯基嘧啶-2-基)-1H-吡唑-5-甲酰胺(30)
Figure BDA0002953643150002931
使用关于化合物11所述的方法，由2-氯-5-苯基嘧啶制备化合物30B。然后，使化合物30B经历如实施例19中所述的用于将中间体58D转化为化合物58的程序，得到化合物30。得到化合物30(130mg，收率82.9％)，为白色固体，1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.07(d，J＝7.2Hz，1H)，9.01(s，2H)，8.06(s，1H)，7.84-7.79(m，3H)，7.58-7.44(m，3H)，7.28-7.21(m，4H)，7.15-7.10(m，1H)，6.58(s，1H)，5.29-5.21(m，1H)，3.18-3.10(m，1H)，2.88-2.78(m，1H)，2.26(s，3H).MS(ESI)m/z(M+H)+455.1。
N-(4-氨基-3，4-二氧代-1-苯基丁烷-2-基)-5-甲基-1-(5-苯基嘧啶-2-基)-1H-吡唑-3-甲酰胺(29)
Figure BDA0002953643150002932
使用关于化合物11所述的方法，由2-氯-5-苯基嘧啶制备化合物30C。然后，使化合物30C经历如实施例19中所述的用于将中间体58D转化为化合物58的程序，得到化合物29。得到化合物29(50mg，收率33.8％)，为白色固体，1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.25(s，2H)，8.12(br s，1H)，7.90-7.47(m，7H)，7.33-7.15(m，5H)，6.69(s，1H)，5.56-5.42(m，1H)，3.35-3.12(m，2H)，2.65(s，3H).MS(ESI)m/z(M+H)+455.2。
N-(4-氨基-3，4-二氧代-1-苯基丁烷-2-基)-3-甲基-1-(4-苯基嘧啶-2-基)-1H-吡唑-5-甲酰胺(45)
Figure BDA0002953643150002941
使用关于化合物11所述的方法，由2-氯-4-苯基嘧啶制备化合物45B。然后，使化合物45B经历如实施例19中所述的用于将中间体58D转化为化合物58的程序，得到化合物45。得到化合物45(110mg，收率73.5％)，为白色固体，1H NMR(DMSO-d6，400MHz)：δ9.06(d，J＝7.3Hz，1H)，8.78(d，J＝5.3Hz，1H)，8.12-8.05(m，3H)，8.00(d，J＝5.3Hz，1H)，7.83(s，1H)，7.58-7.46(m，3H)，7.25-7.13(m，5H)，6.55(s，1H)，5.44-5.36(m，1H)，3.11(dd，J＝3.9，14.0Hz，1H)，2.76(dd，J＝9.9，13.9Hz，1H)，2.28(s，3H).MS(ESI)m/z(M+H)+455.2。
N-(4-氨基-3，4-二氧代-1-苯基丁烷-2-基)-5-甲基-1-(4-苯基嘧啶-2-基)-1H-吡唑-3-甲酰胺(59)
Figure BDA0002953643150002942
使用关于化合物11所述的方法，由2-氯-4-苯基嘧啶制备化合物45C。然后，使化合物45C经历如实施例19中所述的用于将中间体58D转化为化合物58的程序，得到化合物59。得到化合物59(25mg，收率11.9％)，为黄色固体，1H NMR(DMSO-d6，400MHz)：δ8.99(d，J＝5.3Hz，1H)，8.29-8.25(m，2H)，8.10(br d，J＝5.3Hz，2H)，7.82(br s，1H)，7.65-7.58(m，4H)，7.31-7.24(m，4H)，7.23-7.17(m，1H)，6.72-6.68(m，1H)，5.49(dt，J＝4.9，8.1Hz，1H)，3.29(dd，J＝4.9，14.2Hz，1H)，3.16(br d，J＝5.5Hz，1H)，2.71-2.69(m，3H).MS(ESI)m/z(M+H)+455.1。
实施例23-化合物43-44
4-(4-((7，9-二氧杂-6，10-二氧杂螺[4.5]癸烷-8-基亚基)-λ3-碘代烷基)苯基)-1，2，5-噻二唑-3-羧酸甲酯(43)
Figure BDA0002953643150002951
在N2气氛下，向4-溴-1，2，5-噻二唑-3-羧酸甲酯(2g，8.97mmol)和(4-氨基苯基)硼酸(1.60g，11.66mmol)在二噁烷(25mL)和H2O(2mL)中的溶液中添加K2CO3(3.72g，26.90mmol)、Pd(dppf)Cl2(656mg，896.67μmol)，将混合物在N2气氛下于80℃搅拌18h。将反应混合物浓缩以除去溶剂，然后用EA(50mL)稀释并过滤；浓缩有机层，得到残余物。将残余物通过快速硅胶色谱法纯化；(
Figure BDA0002953643150002952
12g
Figure BDA0002953643150002953
二氧化硅快速柱，0～30％乙酸乙酯/石油醚梯度洗脱液@30mL/min)。获得化合物43A(1.3g，收率：61.6％)，为浅黄色固体。1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.47-7.33(m，2H)，6.65-6.56(m，2H)，5.64(s，2H)，3.94-3.85(m，3H).MS(ESI)m/z(M+H)+236.1。
在0℃下，向TsOH·H2O(2.63g，13.81mmol)在H2O(20mL)中的溶液中加入化合物43A(1.3g，5.53mmol)在CH3CN(30mL)中的悬浮液，将混合物搅拌30分钟，然后在0℃下向该混合物中滴加NaNO2(572mg，8.29mmol)的H2O(10mL)溶液和KI(1.38g，8.29mmol)的H2O(10mL)溶液。添加后，将混合物在25℃下搅拌16h。通过在0℃下添加饱和Na2SO3(～20mL)来淬灭混合物。将混合物真空浓缩以除去CH3CN。将反应过滤，将滤饼真空干燥。将残余物通过快速硅胶色谱法纯化；(
Figure BDA0002953643150002961
12g
Figure BDA0002953643150002962
二氧化硅快速柱，0～10％乙酸乙酯/石油醚梯度洗脱液@30mL/min)。获得化合物43B(1.4g，收率：73.2％)，为白色固体。1H NMR(400MHz，CDC13)δ7.90-7.77(m，2H)，7.52-7.37(m，2H)，4.02-3.92(s，3H)。
向化合物43B(900mg，2.60mmol)在AcOH(15mL)中的溶液中加入过硼酸钠四水合物(4g，26.00mmol)，将混合物在50℃下搅拌10h。将反应混合物用DCM(50mL)稀释，过滤，将滤液用水(100mL)稀释，并用DCM(40mL×2)萃取三次。合并的有机萃取物用Na2SO4干燥，过滤并浓缩，得到残余物。将残余物在DCM∶PE(1∶15)(20mL×3)中研磨。过滤并获得饼。获得化合物43C(590mg，收率：48.9％)，为浅黄色固体。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.26-8.15(m，2H)，7.89-7.84(m，2H)，4.05-3.98(m，3H)，2.10-2.00(m，6H)。
向化合物43C(590mg，1.27mmol)在EtOH(20mL)中的溶液中加入Na2CO3(539mg，5.08mmol)在H2O(10mL)中的溶液，然后加入6，10-二氧杂螺[4.5]癸烷-7，9-二酮(281mg，1.65mmol)，将混合物在20℃搅拌1h。然后将反应混合物用水稀释(80mL)，并用DCM(50mLx3)萃取。合并的有机萃取物用无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩，得到残余物。将残余物通过快速硅胶色谱法纯化；(
Figure BDA0002953643150002963
4g
Figure BDA0002953643150002964
二氧化硅快速柱，0～100％乙酸乙酯/石油醚梯度洗脱液@20mL/min)。将产物(一部分甲酯变成了乙酯)溶于MeOH(20mL)中，然后添加Na2CO3(100mg)的H2O(2mL)溶液，将混合物在20℃搅拌4h。然后将反应混合物用水稀释(50mL)，并用DCM(30mLx3)萃取。将合并的有机层用无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩，得到所需产物。获得化合物43(130mg，收率：19.9％)，为浅黄色固体。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.02-7.92(m，2H)，7.86-7.75(m，2H)，4.04-3.90(m，3H)，2.24-2.15(m，4H)，1.85-1.78(m，4H).MS(ESI)m/z(M+Na)+537.0。
3-(4-((7，9-二氧杂-6，10-二氧杂螺[4.5]癸烷-8-基亚基)-λ3-碘代烷基)苯基)-1-甲基-1H-吡唑-4-羧酸乙酯(44)
Figure BDA0002953643150002971
使用关于化合物43所述的方法，将化合物3-碘-1-甲基-1H-吡唑-4-羧酸乙酯转化为化合物44。得到化合物44(120mg，收率57.5％)，为淡黄色固体，1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.98(s，1H)，7.91(s，4H)，4.25(q，J＝7.1Hz，2H)，3.97(s，3H)，2.16(t，J＝7.4Hz，4H)，1.82-1.77(m，4H)，1.29(t，J＝7.2Hz，3H).MS(ESI)m/z(M+Na)+546.9。
实施例24-化合物56和66
乙基-4-(4-((7，9-二氧杂-6，10-二氧杂螺[4.5]癸烷-8-基亚基)-λ3-碘代烷基)苯基)-2-甲基噁唑-5-羧酸酯(56)
Figure BDA0002953643150002972
(烧瓶A)向4-碘苯甲酸(25g，100.80mmol)的CH3CN(300mL)溶液中加入CDI(18.5g，114.09mmol)，将混合物在20℃搅拌2h。同时，在烧瓶B中向3-乙氧基-3-氧代-丙酸钾(22.30g，131.04mmol)的CH3CN(300mL)溶液中添加MgCl2(10.6g，111.33mmol)和TEA(301.75mmol，42mL)，将混合物在20℃下搅拌2h。然后将烧瓶A的溶液转移至烧瓶B中，将混合物在20℃下搅拌18h。反应混合物用H2O(200mL)稀释，用HCl(4M)调节至pH～4，用EA(300mLx3)萃取，合并有机层，并用NaHCO3(aq)(500mL)、盐水(500mL)洗涤。然后将有机相用无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到残余物。获得化合物56A(31.5g，收率：98.2％)，为黄色油状物，其无需进一步纯化即可用于下一步。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.91-7.73(m，2H)，7.70-7.42(m，2H)，4.30-4.15(m，2H)，3.97-3.89(m，2H)，1.30-1.19(m，3H)。
向化合物56A(31.5g，99.02mmol)在EtOH(300mL)中的溶液中添加NH4OAc(20g，259.46mmol)，然后将混合物在85℃搅拌18h。将反应混合物浓缩以除去溶剂，然后用水(150mL)稀释并用EA(100mL×3)萃取，有机层用饱和NaHCO3(100mL×2)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩，得到残余物。将残余物通过快速硅胶色谱法纯化；(
Figure BDA0002953643150002981
220g
Figure BDA0002953643150002982
二氧化硅快速柱，0～10％乙酸乙酯/石油醚梯度洗脱液@100mL/min)。获得化合物56B(26g，收率：71.5％)，为浅黄色固体。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.86-7.75(m，2H)，7.44-7.34(m，2H)，4.77(s，1H)，4.05(q，J＝7.1Hz，2H)，1.19(t，J＝7.2Hz，3H).MS(ESI)m/z(M+H)+317.9。
在0℃下，向化合物56B(2g，6.31mmol)的DCE(20mL)溶液中分批加入PhI(OAc)2(2.44g，7.57mmol)，然后将混合物在20℃下搅拌1小时。将混合物冷却至0℃，用饱和NaHCO3(80mL)洗涤，水相用DCM(30mL)萃取，收集有机层，用H2O(50mL)洗涤，然后经Na2SO4干燥，过滤并浓缩，得到残余物。将残余物通过快速硅胶色谱法纯化(
Figure BDA0002953643150002983
20g
Figure BDA0002953643150002984
二氧化硅快速柱，0～10％乙酸乙酯/石油醚梯度洗脱液@30mL/min)。获得化合物56C(220mg，收率：8.2％)，为浅黄色油状物。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.84-7.80(m，2H)，7.16-7.12(m，2H)，4.13-4.06(m，2H)，1.88(s，3H)，1.19-1.15(m，3H).MS(ESI)m/z(M+H)+376.0。
将化合物56C(220mg，586.42μmol)在AcOH(2mL)和DCE(1mL)中的溶液在90℃搅拌lh。真空除去溶剂。将残余物溶于EtOAc(30mL)，用饱和NaHCO3(30mL)洗涤。收集有机物，并浓缩，得到残余物。残余物通过制备型TLC纯化(PE∶EA＝5∶1)。获得化合物56D(110mg，收率：52.5％)，为浅黄色固体。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.86-7.72(m，4H)，4.39(q，J＝7.1Hz，2H)，2.57(s，3H)，1.38(t，J＝7.2Hz，3H)
向化合物56D(0.4g，1.12mmol)的CHCl3(8mL)溶液中加入m-CPBA(314mg，1.46mmol，80％纯度)，将混合物在20℃搅拌18h。将混合物浓缩以除去大部分溶剂，得到残余物。将残余物溶于EtOH(15mL)，并向反应中加入Na2CO3(475mg，4.48mmol)的H2O(10mL)溶液，然后快速加入6，10-二氧杂螺[4.5]癸烷-7，9-二酮(248mg，1.46mmol)。然后将反应混合物在20℃下搅拌2h。将残余物用水(100mL)稀释，并用EA(50mL×2)萃取。将合并的有机萃取物用盐水(100mL)洗涤，并用无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩，得到残余物。将残余物通过快速硅胶色谱法纯化；(
Figure BDA0002953643150002991
12g
Figure BDA0002953643150002992
二氧化硅快速柱，0～100％乙酸乙酯/石油醚梯度洗脱液@30mL/min)。得到化合物56(190mg，收率：30.7％)，为白色固体。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.25-8.09(m，2H)，7.97-7.85(m，2H)，4.40(q，J＝7.1Hz，2H)，2.59(s，3H)，2.21-2.12(m，4H)，1.84-1.75(m，4H)，1.39(t，J＝7.2Hz，3H).MS(ESI)m/z(M+Na)+548.1。
乙基-4-(2-((7，9-二氧杂-6，10-二氧杂螺[4.5]癸烷-8-基亚基)-λ3-碘代烷基)苯基)-2-甲基噁唑-5-羧酸酯(66)
Figure BDA0002953643150003001
使用与合成中间体58D所述的相同步骤，将化合物2-碘苯甲酸转化为中间体66D。此外，使用与化合物56所述的相同条件，用6，10-二氧杂螺[4.5]癸烷-7，9-二酮处理中间体66D，得到最终化合物66。得到化合物66(90mg，收率15.3％)，为白色固体，1H NMR(CDCl3，400MHz)：δ8.77(dd，J＝1.8，7.8Hz，1H)，7.67(dd，J＝1.1，8.2Hz，1H)，7.61-7.55(m，1H)，7.54-7.48(m，1H)，4.46(q，J＝7.1Hz，2H)，2.66(s，3H)，2.29-2.21(m，4H)，1.85(td，J＝3.9，7.1Hz，4H)，1.43(t，J＝7.2Hz，3H).MS(ESI)m/z(M+H)+548.0。
实施例25-化合物103
N-(4-氨基-3，4-二氧代-1-苯基丁烷-2-基)-3-(1-异丙基-2-氧代-2，3-二氢-1H-苯并[D]咪唑-4-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺(103)
Figure BDA0002953643150003011
将1-溴-3-氟-2-硝基苯(4.5g，20.45mmol)和异丙胺(1.21g，20.45mmol)的EtOH(20mL)溶液在50℃下搅拌48小时。真空除去溶剂。残余物通过柱纯化(PE∶EA＝10∶1)，得到化合物103A(5g，收率：94.34％)，为棕色油状物。
向化合物103A(5g，19.30mmol)的AcOH(60mL)溶液中添加Fe(5.39g，96.49mmol)。将混合物在60℃下搅拌1h。真空除去溶剂。将残余物用饱和NaHCO3(200mL)洗涤，用EtOAc(100mL×2)萃取。收集有机物，用盐水(200mL)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并浓缩，得到化合物103B(4.4g，粗品)，为棕色油状物，其无需进一步纯化即可直接用于下一步。
向化合物103B(4.4g，19.20mmol)在THF(60mL)中的溶液中加入TEA(5.4mL，38.41mmol)、CDI(6.23g，38.41mmol)。将混合物在20℃下搅拌12h。将混合物用H2O(50mL)洗涤，用EtOAc(50mL×2)萃取。收集有机物并浓缩。残余物通过柱纯化(PE∶EA＝2∶1)，得到化合物103C(2.5g，收率：51.03％)，为棕色固体。
向化合物103C(400mg，1.57mmol)和4，4，4′，4′，5，5，5′，5′-八甲基-2，2′-双(1，3，2-二噁硼烷)(B2Pin2)(398mg，1.57mmol)在二噁烷(10mL)中的溶液中加入Pd(dppf)Cl2(115mg，156.79μmol)、KOAc(462mg，4.70mmol)。将混合物在N2下在90℃下搅拌12h。将溶液过滤。收集滤液并浓缩。残余物通过柱纯化(PE∶EA＝2∶1)，得到化合物103D(398mg，收率：84.00％)，为淡棕色固体。
使用实施例1中所述的方法，将化合物103D和中间体103E转化为化合物103。获得化合物103(70mg，收率：64.6％)，为白色固体。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)：δ9.96(br s，1H)，8.07(s，1H)，7.92-7.46(m，3H)，7.35-7.11(m，8H)，6.97-6.92(m，1H)，5.37-5.31(m，1H)，4.65-4.57(m，1H)，3.94(s，3H)，3.21-3.16(m，1H)，2.90-2.84(m，1H)，1.49(d，J＝7.2Hz，6H).MS(ESI)m/z(M+H)+475.2。
实施例26-化合物93和104
N-(1-氧代-3-苯基-1-(1H-四唑-5-基)丙烷-2-基)-4-苯基-1，2，5-噻二唑-3-甲酰胺(93)
Figure BDA0002953643150003021
向(1-氰基-1-羟基-3-苯基丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯(1g，3.62mmol)在DCM(15mL)中的溶液中添加吡啶(6.19mmol，0.5mL)，然后逐滴加入乙酰氯(5.61mmol，0.4mL)，将混合物在10℃下搅拌20h。反应混合物用DCM(20mL)和水(50mL)稀释，水相用DCM(20mL×2)萃取，有机层用1N HCl(30mL)、饱和NaHCO3(30mL)和盐水(50mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩，得到残余物。获得化合物93A(1g，收率：86.7％)，为浅黄色油状物，其无需进一步纯化即可用于下一步。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.36-7.27(m，3H)，7.22-7.16(m，2H)，5.42-5.33(m，1H)，4.70(d，J＝8.5Hz，1H)，4.32(br s，1H)，3.10-2.83(m，2H)，2.16(s，3H)，1.40(s，9H).MS(ESI)m/z(M+Na)+341.1。
向化合物93A(500mg，1.57mmol)、Et3N·HCl(432mg，3.14mmol)在甲苯(15mL)中的混合物中加入NaN3(250mg，3.85mmol)，将混合物在110℃下搅拌18小时。将反应混合物用甲苯(20mL)稀释并用水(50mL×3)萃取，合并的水层用浓HCl酸化至pH～2，并用EA(30mL×2)萃取，有机层用盐水(50mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩，得到残余物。将残余物在EA(2mL)和PE(20mL)中研磨两次，过滤并真空干燥。获得化合物93B(500mg，收率：74.4％)，为浅黄色固体。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.33-7.16(m，6H)，7.02(d，J＝9.0Hz，1H)，6.01-5.89(m，1H)，4.23-4.16(m，1H)，2.86-2.64(m，2H)，2.21-2.10(m，3H)，1.26-1.18(m，9H).MS(ESI)m/z(M+H)+362.2。
向化合物93B(400mg，1.11mmol)在MeOH(15mL)中的溶液中加入K2CO3(610mg，4.41mmol)在H2O(3mL)中的溶液，将混合物在15℃下搅拌4h。将反应混合物浓缩以除去MeOH，用水(20mL)稀释，用EA(20mL)萃取，将水层用浓HCl酸化至pH～2，用EA(20mL×2)萃取，将有机层经Na2SO4干燥，过滤并浓缩，得到残余物。得到化合物93C(420mg，粗品)，为淡黄色固体，其无需进一步纯化即可用于下一步。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.30-7.16(m，6H)，6.56(d，J＝9.0Hz，1H)，6.37(br d，J＝4.0Hz，1H)，5.02(t，J＝4.5Hz，1H)，3.99-3.92(m，1H)，2.98-2.57(m，2H)，1.24(s，9H).MS(ESI)m/z(M+Na)+342.2。
向化合物93C(420mg，1.32mmol)的EA(3mL)溶液中加入HCl/EtOAc(4M，3mL)，将混合物在15℃下搅拌2h。将反应混合物浓缩，得到残余物。将残余物在EA(3mL)和PE(20mL)中研磨，过滤并真空干燥。获得化合物93D(300mg，收率：89.2％，HCl)，为浅黄色固体。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.26(br s，3H)，7.39-7.12(m，6H)，5.03(t，J＝4.5Hz，1H)，3.82(s，1H)，3.08-2.91(m，2H).MS(ESI)m/z(M+Na)+276.2
使用实施例17中所述的方法，将化合物93D和4-苯基-1，2，5-噻二唑-3-羧酸转化为化合物93。获得化合物93(15mg，收率：37.7％)，为白色固体。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.33(br dd，J＝7.3，16.8Hz，1H)，7.66-7.56(m，2H)，7.49-7.42(m，1H)，7.42-7.34(m，2H)，7.33-7.06(m，5H)，5.74-5.67(m，1H)，3.16-3.10(m，2H).MS(ESI)m/z(M+H)+406.1。
N-(1-氧代-3-苯基-1-(1H-1，2，4-三唑-3-基)丙烷-2-基)-4-苯基-1，2，5-噻二唑-3-甲酰胺(104)
Figure BDA0002953643150003041
在0℃下，向(1-氰基-1-羟基-3-苯基丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯(500mg，1.81mmol)在DMF(5mL)中的溶液中加入咪唑(246mg，3.62mmol)和TBDMSiCl(2.90mmol，0.35mL)。将混合物在25℃下搅拌12h。将混合物用EA(200mL)稀释，用盐水(200mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。残余物通过柱色谱法纯化(SiO2，石油醚/乙酸乙酯＝10/1至1/1)。得到化合物104A(2.9g)，为无色油状物。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.36-7.14(m，6H)，4.75-4.61(m，1H)，4.10-3.97(m，1H)，3.20-2.70(m，2H)，1.38(s，9H)，1.00-0.83(m，9H)，0.26-0.08(m，6H)。
在0℃下，向化合物104A(450mg，1.15mmol)和K2CO3(318mg，2.30mmol)在DMSO(10mL)中的溶液中添加H2O2(23.04mmol，2.21mL，30％纯度)，将混合物在15℃下搅拌20h。将反应混合物在冰水上用饱和Na2S2O3(20mL)缓慢淬灭，用水(30mL)稀释，用EtOAc(30mL×3)萃取，有机层用盐水(30mL×2)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩，得到残余物。得到化合物104B(400mg，粗品)，为无色油状物，其无需进一步纯化即可用于下一步。
将化合物104B(400mg，978.94μmol)在1，1-二甲氧基-N，N-二甲基-甲胺(75.28mmol，10mL)中的溶液在30℃下搅拌1h。将反应混合物在冰水上用水(50mL)稀释，用EA(20mL×3)萃取，将有机层用盐水(30mL×2)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩，得到残余物。得到化合物104C(420mg，粗品)，为淡黄色油状物，其无需进一步纯化即可用于下一步。
向化合物104C(410mg，884.22μmol)在CH3COOH(5mL)中的溶液中加入NH2NH2.H2O(884.22μmol，0.43mL)，将混合物在85℃下搅拌1.5h。将反应混合物在冰水上用水(60mL)稀释，用EA(30mL×3)萃取，将有机层用盐水(80mL×2)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩，得到残余物。得到化合物104D(400mg，粗品)，为淡黄色油状物，其无需进一步纯化即可用于下一步。MS(ESI)m/z(M+H)+433.3。
向化合物104D(400mg，924.58μmol)的EA(3mL)溶液中加入HCl/EtOAc(4M，4.62mL)，将混合物在15℃下搅拌2h。将反应混合物浓缩，得到残余物。得到化合物104E(350mg，粗品，HCl)，为黄色固体，其无需进一步纯化即可用于下一步。MS(ESI)m/z(M+H)+333.2。
使用实施例17中的肽偶联条件，将化合物104E和4-苯基-1，2，5-噻二唑-3-羧酸偶联，然后使用TBAF脱保护，然后使用实施例17的方法氧化，得到化合物104。获得化合物104(40mg，收率：53.5％)，为白色固体。1H NMR(400MHz，CD3CN)δ8.45(s，1H)，7.83(d，J＝7.1Hz，1H)，7.66-7.55(m，2H)，7.49-7.36(m，3H)，7.34-7.16(m，6H)，5.92-5.87(m，1H)，3.45(dd，J＝4.6，14.2Hz，1H)，3.12(dd，J＝8.6，13.9Hz，1H).MS(ESI)m/z(M+H)+405.1。
实施例部分III
实施例A
钙蛋白酶抑制剂在肝纤维化模型中的功效
CCL4模型
进行这项研究以评估本文公开的钙蛋白酶化合物对雄性BALB/c小鼠中四氯化碳(CCl4)诱导的肝纤维化的影响。通过每周两次连续四周施用CCl4诱导小鼠肝纤维化。在开始CCl4注射后第14天，以治疗性治疗模式用本文公开的化合物治疗施用了CCl4的动物，并持续进行直至研究终止。在最后一次CCl4施用后96小时，即在CCl4施用后第32天，终止研究。与溶媒相比，本文所述的化合物在纤维化得分方面有所改善，对肝酶、肝重量或体重没有影响。
诱导肝纤维化
四氯化碳(CCl4)购自Sigma(目录号319961)。为了诱导肝纤维化，通过腹膜内(ip)注射以1mL/kg体重的剂量向小鼠施用CCl4(1∶1，CCl4∶矿物油)。在每一CCl4施用日，在施用CCl4之前对动物称重，并根据每只动物的体重调整剂量体积。每周两次给动物施用CCl4∶矿物油，即，每个星期一和星期四，持续四个星期，在早晨治疗后两个小时进行。在第一次CCl4注射后的第28天接受最后一次CCl4注射。
放血
在研究开始前的第4天，以及在CCl4施用后的第13天(治疗开始前的一天)，通过下颌下途径给动物放血。制备血浆并将其保存在-20℃直至分析。在施用CCl4后第32天研究终止后，通过心脏穿刺给动物放血。制备血清并将其储存在-20℃下，直到运送到合同公司进行肝酶检测。
化合物的施用
将治疗化合物制备于甲基纤维素中用于口服管饲施用。在一个实例中，可以施用以下式II-a的化合物：
Figure BDA0002953643150003071
每周制备溶媒(5％甲基纤维素)。治疗化合物每周在Aragen制备一次，并在黑暗中室温保存。每天经口服在上午和下午总共服用100微升的每种化合物。在首次施用CCl4后的第14天，动物接受治疗，并持续到研究终止。接受最后一次治疗后的2到4个小时内采集动物。
采集
在最后一次CCl4施用后约96小时，即在CCL4施用后第32天，对所有存活的动物进行人道安乐死。将肝脏的中叶固定在10％NBF中以进行组织学检查，将剩余的肝叶称重并速冻到两个不同的试管中。
组织学分析
在偏光下检查天狼猩红(PSR)染色的载玻片。将切片中出现双折射视为纤维化，并根据以下主观评分进行评分：0＝正常门脉区域上方无纤维化；1＝小叶间细链中纤维化极小增加；2＝小叶间细链中纤维化轻度增加，在坏死/矿化区域有一些胶原双折射；3＝小叶间细链中纤维化适度增加，在坏死/矿化区域中有轻度双折射；4＝小叶之间或坏死/矿化区域中纤维化明显增加；5＝纤维化严重增加。使用非配对t检验(GraphPad Prism软件)进行统计分析。
临床观察和体重
使用化合物405作为测试化合物，以30mg/kg BID或100mg/kg BID施用，按照上述程序进行。在每次施用CCl4之前测量体重。根据个体体重调整CCl4剂量。在研究的第一周，所有施用CCl4的小鼠均表现出体重减轻，然后在研究的后期倾向于体重逐渐增加。与用盐水处理的对照动物相比，施用CCl4的动物显示出肝脏重量的显著增加。与不施用CCl4的对照小鼠(1.45+/-0.03g)相比，在用溶媒处理的动物中记录的平均肝脏重量为2.24+/-0.06g(p＜0.0001)。
纤维化
将肝脏切片用PSR染色，并在偏光下观察到在CCl4处理的小鼠中显示出胶原蛋白的积累和交联，证实了化合物405诱导的纤维化(图1)。用化合物405处理显示胶原纤维的长度和厚度减少。使用方法部分中描述的标度分析切片。图2总结了每组的分数。当给CCl4处理的小鼠给予化合物405时，观察到纤维化分数在统计学上显著降低。
每天两次以100mg/kg的剂量治疗性地给予化合物405显著减少了该模型的纤维化。结果表明，化合物405在肝纤维化中具有抗纤维化作用。数据表明，钙蛋白酶抑制剂可以单独地或联合地在不同形式的肝纤维化中产生有益作用。在像NASH这样其中抗纤维化药物与抗炎药或调节代谢成分的药物联合使用可带来最大的收益的疾病中，可以特别考虑使用联合疗法。
实施例B
正常和病变人类肝脏中CAPN1、CAPN2和CAPN9的表达
对正常和病变人类肝脏进行CAPN1、CAPN2和CAPN9的免疫组织化学(IHC)评估。包括的疾病有脂肪肝、NASH、肝硬化、PBC和PSC。
方法
使用针对CAPN1的单克隆抗体(Invitrogen/Thermo，克隆MA3-940)检测CAPN1，CAPN2使用(Biorbyt 305855，clone 1381CT669.7.66.71)，CAPN9(Abnova H00010753-MO2，clone 3A6)。所有试验均通过试验大量但有限的对照蛋白(胃肠粘膜中的细胞角蛋白)进行控制，每个切片的IHC分析均通过非免疫IgG和“无一抗”阴性对照进行控制。完成了三项试验，在每种情况下，试验对照都给出了粘膜上皮细胞中细胞角蛋白的预期模式。非免疫对照产生的非特异性免疫反应性水平可忽略不计，这不会干扰对特定CAPN-免疫反应性的解释。
为了评估抗体特异性，使用含有亲代细胞系或表达重组人CAPN2或CAPN9的细胞系的切片来测试CAPN1、CAPN2和CAPN9抗体。在测试条件下，CAPN1抗体不会染色任何细胞系。CAPN2和CAPN9抗体仅标记了恰当的预期细胞系。
免疫组织化学
除非另有说明，否则所有切片的厚度均为4μm，所有孵育均在环境温度下进行。在PT Link自动抗原回收系统中，使用pH6(CAPN1和CAPN2)或pH9(CAPN9)Flex Plus 3合1抗原回收缓冲液在97℃下使用自动加热和冷却用20分钟的时间将切片脱蜡、抗原回收并再水化。抗原回收后，将载玻片置于Flex缓冲液(50mM Tris.HCl，300mM NaCl，0.1％Tween-20，pH 7.6)中，冷却。然后将载玻片装入Dako Autostainer Plus中。然后将切片与Flex PlusPeroxidase Blocking试剂一起孵育，用Flex缓冲液冲洗，然后与Protein Block试剂(DAKO，目录号X0909)一起孵育，通过喷气将该试剂去除。然后将切片与在DAKO抗体稀释液(DAKO，目录号K8006)中稀释的一抗、同种型和浓度匹配的非免疫IgG或单独的抗体稀释液(无一抗)一起孵育。与相应的一抗孵育后，将切片在Flex缓冲液中冲洗两次，与Flex Plus-HRP二抗孵育，在Flex缓冲液中冲洗两次，然后与二氨基联苯胺(DAB)底物孵育。通过用蒸馏水冲洗载玻片来终止生色反应。生色后，将切片从Dako Autostainer Plus上取下，用苏木精复染，在一系列递增的乙醇(90-99％)中脱水，更换三次二甲苯使其透明，然后在DePeX上盖片。囊括了在结肠中展示出泛细胞角蛋白(PCK)表达的试验对照，以验证抗小鼠DakoEnVision Flex plus-HRP和生色试剂的有效性。还囊括了“无一抗”对照。使用AperioScanScope AT Turbo分析染色切片，并捕获合适的数字图像。
结果
与被诊断为正常的组织相比，病变肝脏中CAPN1、2和9的表达和分布显著增加。这在具有纤维化或变性变化的组织(NASH、肝硬化、PBC、PSC)中尤为明显。一些被诊断为正常的具有免疫反应性的切片通常具有病变区域，这些区域显示出CAPN1染色增加(具有脂肪变化或坏死和炎症的区域)。在正常和病变组织中最广泛的细胞类型中观察到了CAPN1，而CAPN2和9则主要在胆管上皮中被强烈上调。
CAPN1
与正常组织相比，病变组织中的CAPN1反应性增加。CAPN1反应性很广泛，包括胆管上皮细胞、库普弗细胞、巨噬细胞和肝细胞(图3)。在胆管上皮细胞和库普弗细胞中观察到了最强的染色。在NASH和肝硬化中发现免疫反应性明显增加，而脂肪肝样品显示出较低的免疫反应性。在病变部位，肝细胞和内皮细胞染色倾向于最强。在一些被诊断为正常的组织中，脂肪变化最小的区域(图3，底部中间)以及坏死和炎症区域(图3，右下方)显示出CAPN1肝细胞染色增加。
与正常组织相比，PBC和PSC组织中的CAPN1反应性增加。在PBC和PSC样品中，与PSC相比，PBC样品中的CAPN1总体染色通常更高(图4)。在PSC中，观察到胆管上皮强烈染色。在患有强烈炎症的受试者中，免疫反应性几乎无处不在。
CAPN2
尽管无论疾病状况如何，在胆管上皮细胞中均发生CAPN2反应性，但与正常组织相比，病变组织中的CAPN2免疫反应性有所提高(图5)。在具有炎症的病变肝脏中，炎症细胞(主要是巨噬细胞)和内皮细胞的CAPN2阳性程度不同。与纤维化带相邻的肝细胞为CAPN2阳性，朝向结节或肺叶中心逐渐丧失。
与正常组织相比，在PBC和PSC样品中，CAPN2反应性增加。CAPN2阳性胆管上皮的强度各不相同，PBC和PSC之间无明显差异(图6)。在具有炎症的病变肝脏中，炎症细胞(主要是巨噬细胞)和内皮细胞的CAPN2阳性程度不同。在一些受试者中，肝细胞CAPN2阳性且差异很大。具有最大炎症的受试者倾向于具有最强烈的染色。
CAPN9
无论疾病状况如何，在胆管上皮细胞中均发生强CAPN9反应性(图7)。然而，与正常组织相比，在PBC和PSC组织中观察到CAPN9反应性增加。病变肝脏通常包括胆管增生，这会增加总体CAPN9阳性细胞分布。与健康肝脏相比，病变肝脏中的肝细胞具有轻度增加的CAPN9反应性。在被诊断为正常的肝脏中，一些脂肪变化(脂肪变性)的区域具有增加的肝细胞CAPN9反应性。在同种型对照中观察到许多切片具有轻微的固有肝细胞色素。
与正常组织相比，在PBC和PSC样品中，CAPN9反应性增加。胆管上皮细胞显示出强CAPN9反应性(图8)。PBC和PSC之间几乎没有区别。病变肝脏通常包括胆管增生，这会增加总体CAPN9阳性细胞分布。在退化的肝细胞中，CAPN9反应性最强。
实施例C
NASH动物模型
非酒精性脂肪性肝炎(NASH)的大鼠胆碱缺乏性氨基酸高脂肪饮食(CDAHFD)模型重现了人类疾病的关键特征。使用该模型来检查化合物405(在表1a中显示)在CDAHFD大鼠模型中的抗纤维化作用。
随机分配雄性Wistar大鼠(Charles River实验室)接受以下治疗：第1组(n＝8)作为健康对照，正常食物喂养12周；第2组(n＝8)作为疾病对照，喂食CDAHFD，并在CDAHFD后在第5周开始接受每日一次(QD)的溶媒甲基纤维素(MC)口服管饲处理；第3组(n＝8)作为疾病对照，喂食CDAHFD，并在CDAHFD后在第5周开始接受每日两次(BID)的溶媒甲基纤维素(MC)口服管饲处理；第4组(n＝8)喂食CDAHFD，并在CDAHFD后在第5周开始接受QD化合物405(200mg/kg)口服管饲处理；第5组(n＝8)喂食CDAHFD，并在CDAHFD后在第5周开始接受BID化合物405(100mg/kg)口服管饲处理；第6组(n＝8)喂食CDAHFD，并在CDAHFD后在第5周开始接受QD化合物405(60mg/kg)口服管饲处理；第7组(n＝8)喂食CDAHFD，并在CDAHFD后在第5周开始接受BID化合物405(30mg/kg)口服管饲处理。在研究结束时(12周)，收集肝组织和血清进行进一步分析。将一部分肝脏用于组织学分析，并将每只动物的多余肝脏在液氮上速冻并储存在-80℃。收集血清以测量ALT。
喂食CDAHFD的大鼠在CDAHFD饮食5周后出现肝纤维化(F3)，到12周时发展为肝硬化(F4)(图9A)。在该模型中，随着纤维化的进展，喂食CDAHFD的大鼠中α-SMA和胶原1a1的表达随时间逐渐增加(图9B和9C)。喂食CDAHFD的大鼠中肝脏中钙蛋白酶2的表达增加(与NC相比，NC 1.00±0.14，2周4.34±1.38**p＜0.001，6周3.50±0.90*p＜0.05，12周，3.67±0.32*p＜0.05)，而钙蛋白酶1的表达在此研究过程中没有变化(图9D和9E)。通过qPCR在大鼠肝脏中没有检测到钙蛋白酶9的表达。
与正常食物喂养的大鼠相比，用CDAHFD喂养的大鼠的体重降低。相对于溶媒(甲基纤维素)对照大鼠，用化合物405(200mg/kg和60mg/kg)进行QD处理没有改变CDAHFD大鼠的体重。与正常食物相比，用CDAHFD喂养的大鼠肝脏重量和脾脏重量(占总重量的百分比)显著更高(图10A-10C)。与正常食物相比，在所有用CDAHFD喂养的大鼠中，包括ALT、AST和ALP在内的血液转氨酶(U/L)水平均显著增加，但是血清分析表明，与溶媒治疗组(MCQD)相比，化合物405并未改变血液转氨酶的水平。与正常食物大鼠相比，所有CDAHFD大鼠的白蛋白水平均降低，但是，化合物405并未改变所有用CDAHFD喂养的大鼠的白蛋白水平(图11A-11E)。总胆红素没有明显变化。
在BID研究中，化合物405(100mg/kg和30mg/kg)治疗对CDAHFD大鼠的体重和脾脏重量(占总重量的百分比)没有影响。但是，用化合物405治疗后肝脏重量(占总重量的百分比)增加(MC BID 0.059±0.002％vs.100mg/kg BID 0.066±0.008％以及30mg/kg BID0.066±0.003％*p＜0.05)(图12A-12C)。与正常食物(NC)相比，在CDAHFD喂养的大鼠中，包括丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)和ALP(碱性磷酸酶)在内的血液转氨酶(U/L)水平均升高。但是与溶媒治疗组(MCBID)相比，化合物405并未改变包括ALT、AST和ALP在内的血液转氨酶(U/L)水平。尽管与正常食物(NC)相比，CDAHFD大鼠中白蛋白水平降低，但化合物405并未改变CDAHFD喂养的大鼠中白蛋白水平(图13A-13E)。总胆红素没有明显变化。
代表性的组织学样本显示，CDAHFD大鼠在第12周出现桥接纤维化(图14)。使用了多种胶原蛋白定量方法来比较治疗组之间肝纤维化的差异。通过胶原比例面积(CPA)测量，与CDAHFD大鼠中的MC QD相比，化合物405 200mg/kg QD显著降低了胶原沉积(11.28±3.50％vs.6.08±1.69％，**p＜0.05)(图14A和14B)。羟脯氨酸分析也观察到类似的发现。化合物405 200mg/kg QD治疗显著降低了羟脯氨酸((MC QD 731.3±165.9nmol/Lvs.200mg/kg QD 495.1±113.9nmol/L*p＜0.05)(图14C)。通过CPA和羟脯氨酸测定，化合物405 60mg/kg QD并未显著降低纤维化。但是，与MC治疗的CDAHFD大鼠相比，化合物405200和60mg/kg QD治疗后，SMA(Acta2)蛋白表达均显著降低(MCQD 5.82±0.67vs.200mg/kg1.7±0.58％**p＜0.01以及60mg/kg 2.40±1.16％**p＜0.01)(图14A和14D)。脂肪变性的组织学分析表明，化合物405治疗QD没有改变CDAHFD大鼠的肝脏脂肪含量(图14A和14E)。
在BID研究中，存在相同的趋势，即化合物405 100mg/kg BID减少CDAHFD喂养的大鼠中胶原沉积，并显著降低羟脯氨酸(MC BID 706.9±173.5nmol/L vs.100mg/kg BID458.2±146nmol/L*p＜0.05)(图15C)。此外，化合物405 100mg/kg BID显著降低了CDAHFD大鼠肝脏中的SMA(Acta2)蛋白表达(MC BID 7.08±1.36％vs.100mg/kg BID 2.01±1.14％，**p＜0.01)(图15A和15D)。脂肪变性的组织学分析表明，化合物405的BID处理没有改变CDAHFD大鼠的肝脏脂肪含量(图15A和15E)。
mRNA表达分析表明，化合物405 200mg/kg或60mg/kg QD并未显著降低促纤维化或炎性基因的表达。(图16A-16F)。相比之下，化合物405 30mg/kg BID降低了SMA的表达(MCBID 73.65±37.51 vs.30mg/kg 11.46±2.02**p＜0.01)，化合物405 100和30mg/kg BID均降低了Col1a1(MC BID 106.6±59.97 vs.100mg/kg 35.76±33.84**p＜0.01以及30mg/kg 13.37±2.53**p＜0.01)、CTGF(MC BID 42.89±32.82 vs.100mg/kg 3.84±2.24*p＜0.05以及30mg/kg 3.55±1.35**p＜0.01)和IL-6(MC BID 54.89±47.23 vs.100mg/kg15.81±9.01**p＜0.01以及30mg/kg 2.80±1.35**p＜0.01)的表达(图17A-17D)。化合物405的BID处理没有改变钙蛋白酶1和钙蛋白酶2的表达(图17E和17F)。
实施例D
PSC动物模型
据信可以模拟PSC方面的模型是mdr2-/-小鼠模型，因为该模型表现出独特的胆汁纤维化。在该模型中，在PSC中上调CAPN1、2和9的细胞，即胆管上皮细胞，似乎是导致纤维化发展的原因。
在纤维化易感性BALB/c背景的Mdr2-/-小鼠中测试了治疗化合物，这些小鼠自发地发展出加速的胆汁纤维化和早发性门脉高压(Ikenaga，N.et al(2015)A new Mdr2-/-mouse model of sclerosing cholangitis with rapid fibrosis progression，early-onset portal hypertension and liver cancer.Am J.Pathology 185(2)，325-34)。这些小鼠从4周龄开始发展出纤维化病变和导管反应，在12周时继续增加胶原蛋白沉积和肝硬化的早期迹象。
在6周龄时给Mdr2-/-小鼠给药6周，并在第12周评估纤维化的发展。研究结束时的评估包括羟脯氨酸作为整体纤维化的量度、组织学分析和促纤维化基因(包括TGFβ、促胶原蛋白、α平滑肌肌动蛋白)的基因表达。

Claims (25)

1.一种治疗选自以下的疾病或病症的方法：原发性硬化性胆管炎、原发性胆汁性胆管炎、非酒精性脂肪肝病、非酒精性脂肪性肝炎和肝硬化；所述方法包括向有此需要的受试者施用一种或多种钙蛋白酶抑制剂，其中所述钙蛋白酶抑制剂是式I的化合物：
Figure FDA0002953643140000011
或其药学上可接受的盐，其中：
A1选自由以下组成的组：任选取代的5-10元杂环基、任选取代的5元、8元或9元杂芳基、和任选取代的C3-10碳环基，条件是所述5-10元杂环基不被氧代取代；
A2选自由以下组成的组：任选取代的3-10元杂环基、任选取代的C6-10芳基、任选取代的5-10元杂芳基和任选取代的C3-10碳环基、-CR2-、-S-、-S(＝O)-、-SO2-、-O-、-C(＝S)-、-C(＝O)-、-NR-、-CH＝CH-、-C≡C-、-OC(O)NH-、-NHC(O)NH-、-NHC(O)O-、-NHC(O)-、-NHC(S)NH-、-NHC(S)O-、-NHC(S)-和单键；
A4选自由以下组成的组：任选取代的C6-10芳基、任选取代的5-10元杂芳基、任选取代的3-10元杂环基、任选取代的C3-10碳环基、任选取代的C1-4烷基、-(CR2)n-S-(CR2)n-、-(CR2)n-S(＝O)-(CR2)n-、-(CR2)n-SO2-(CR2)n-、-(CR2)n-O-(CR2)n-、-(CR2)n-C(＝S)-(CR2)n-、-(CR2)n-C(＝O)-(CR2)n-、-(CR2)n-NR-(CR2)n-、-(CR2)n-CH＝CH-(CR2)n-、-(CR2)n-OC(O)NH-(CR2)n-、-(CR2)n-NHC(O)NH-(CR2)n-、-(CR2)n-NHC(O)O-(CR2)n-、-(CR2)n-NHC(O)-(CR2)n-、-(CR2)n-NHC(S)NH-(CR2)n-、-(CR2)n-NHC(S)O-(CR2)n-、-(CR2)n-NHC(S)-(CR2)n-和单键；
当A2和A4是单键时，A3直接连接至A8；
A3选自由以下组成的组：任选取代的C6-10芳基、任选取代的5-10元杂芳基、任选取代的3-10元杂环基和任选取代的C3-10碳环基，或者如果A2选自任选取代的3-10元杂环基、任选取代的C6-10芳基、任选取代的5-10元杂芳基和任选取代的C3-10碳环基，那么A3选自由以下组成的组：氢、任选取代的C6-10芳基、任选取代的5-10元杂芳基、任选取代的3-10元杂环基、任选取代的C3-10碳环基、-C≡CH和任选取代的2元至5元聚乙二醇；
A5选自由以下组成的组：任选取代的3-10元杂环基、任选取代的C6-10芳基、任选取代的5-10元杂芳基、任选取代的C3-10碳环基、任选取代的C1-8烷基、-S-、-S(＝O)-、-SO2-、-O-、-C(＝S)-、-C(＝O)-、-NR-、-CH＝CH-、-OC(O)NH-、-NHC(O)NH-、-NHC(O)O-、-NHC(O)-、-NHC(S)NH-、-NHC(S)O-、-NHC(S)-和单键；
A6选自由以下组成的组：任选取代的C6-10芳基、任选取代的5-10元杂芳基、任选取代的3-10元杂环基和任选取代的C3-10碳环基、任选取代的C1-8烷基、任选取代的C2-8烯基、任选取代的-O-C1-6烷基、任选取代的-O C2-6烯基、-OSO2CF3和任意天然或非天然氨基酸侧链；
A7选自由以下组成的组：任选取代的C6-10芳基、任选取代的5-10元杂芳基、任选取代的3-10元杂环基、任选取代的C3-10碳环基、任选取代的C1-8烷基、-S-、S(＝O)-、-SO2-、-O-、-C(＝S)-、-C(＝O)-、-NR-、-CH＝CH-、-OC(O)NH-、-NHC(O)NH-、-NHC(O)O-、-NHC(O)-、-NHC(S)NH-、-NHC(S)O-、-NHC(S)-和单键；
当A5和A7是单键时，A6直接连接至R8所连接的碳上；
A8是A1的环成员，并且选自由C、CH和N组成的组；
R8选自由以下组成的组：-COR1、-CN、-CH＝CHSO2R和-CH2NO2；
R1选自由以下组成的组：H、-OH、C1-4卤代烷基、-COOH、-CH2NO2、-C(＝O)NOR、-NH2、-CONR2R3、-CH(CH3)＝CH2、-CH(CF3)NR2R3、-C(F)＝CHCH2CH3、
Figure FDA0002953643140000031
Figure FDA0002953643140000032
R14是卤素；
每个R、R2和R3独立地选自-H、任选取代的C1-4烷基、任选取代的C1-8烷氧基烷基、任选取代的2元至5元聚乙二醇、任选取代的C3-7碳环基、任选取代的5-10元杂环基、任选取代的C6-10芳基和任选取代的5-10元杂芳基；并且
R6独立地选自-H和任选取代的C1-4烷基。
2.根据权利要求1所述的方法，其中A1是任选取代的5-10元杂环基，条件是所述5-10元杂环基不被氧代取代。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其中A1是任选取代的呋喃基、任选取代的噻吩基、任选取代的酞嗪基、任选取代的吡咯基、任选取代的噁唑基、任选取代的噻唑基、任选取代的咪唑基、任选取代的吡唑基、任选取代的异噁唑基、任选取代的异噻唑基、任选取代的三唑基、任选取代的噻二唑基、任选取代的吡啶基、任选取代的哒嗪基、任选取代的嘧啶基、任选取代的吡嗪基、任选取代的三嗪基、任选取代的喹啉基、任选取代的异喹啉基、任选取代的苯并咪唑基、任选取代的苯并噁唑基、任选取代的苯并噻唑基、任选取代的吲哚基、任选取代的异吲哚基或任选取代的苯并噻吩基。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其中A1是任选取代的噁唑基、任选取代的噻唑基、任选取代的咪唑基、任选取代的吡唑基或任选取代的异噁唑基。
5.根据权利要求1所述的方法，其中A1是任选取代的5、8或9元杂芳基。
6.根据权利要求1至5中任一项所述的方法，其中A2是单键。
7.根据权利要求1至5中任一项所述的方法，其中A4是单键。
8.根据权利要求1至7中任一项所述的方法，其中A3选自：任选取代的C6-10芳基、任选取代的5-10元杂芳基、任选取代的3-10元杂环基和任选取代的C3-10碳环基。
9.根据权利要求8所述的方法，其中A3是任选取代的C6-10芳基。
10.根据权利要求9所述的方法，其中A3是任选取代的苯基。
11.根据权利要求8所述的方法，其中A3是任选取代的5-10元杂芳基。
12.根据权利要求1至11中任一项所述的方法，其中A5是任选取代的C1-8烷基。
13.根据权利要求1至12中任一项所述的方法，其中A7是单键。
14.根据权利要求1至13中任一项所述的方法，其中A6选自由以下组成的组：任选取代的C6-10芳基、任选取代的5-10元杂芳基、任选取代的3-10元杂环基和任选取代的C3-10碳环基。
15.根据权利要求14所述的方法，其中A6是任选取代的C6-10芳基。
16.根据权利要求15所述的方法，其中A6是任选取代的苯基。
17.根据权利要求14所述的方法，其中A6是任选取代的5-10元杂芳基。
18.根据权利要求1至17中任一项所述的方法，其中R8是-COR1，并且R1选自由以下组成的组：-COOH、-C(＝O)NOR或-CONR2R3。
19.根据权利要求18所述的方法，其中每个R、R2和R3独立地选自-H、任选取代的C1-4烷基。
20.根据权利要求1至19中任一项所述的方法，其中R6独立地选自-H和任选取代的C1-4烷基。
21.一种治疗选自以下的疾病或病症的方法：原发性硬化性胆管炎、原发性胆汁性胆管炎、非酒精性脂肪肝病、非酒精性脂肪性肝炎和肝硬化；所述方法包括向有此需要的受试者施用一种或多种钙蛋白酶抑制剂，其中所述钙蛋白酶抑制剂选自由以下组成的组：
Figure FDA0002953643140000051
Figure FDA0002953643140000061
或其药学上可接受的盐。
22.根据权利要求1至21中任一项所述的方法，其中所述疾病或病症是非酒精性脂肪性肝炎。
23.根据权利要求1至21中任一项所述的方法，其中肝硬化是由选自以下的一种或多种病症引起的：酒精性肝病、α-1抗胰蛋白酶缺乏症、自身免疫性肝炎、乳糜泻、慢性病毒性肝炎、血色素沉着症、特发性门脉纤维化和威尔逊疾病。
24.根据权利要求1至23中任一项所述的方法，其中，所述钙蛋白酶抑制剂与选自以下的一种或多种另外的剂组合施用：VAP-1抑制剂、ASBT抑制剂、双重CCR2/5拮抗剂、抗胆汁性胆汁酸、FXR激动剂、FGFR1c/4激动剂、间充质干细胞(MSC)细胞疗法、CCL24抑制剂和CCL11抑制剂；并且其中所述疾病或病症是原发性硬化性胆管炎。
25.根据权利要求1至23中任一项所述的方法，其中，所述钙蛋白酶抑制剂与选自以下的一种或多种另外的剂组合施用：奥贝胆酸、elafibranor、cenicriviroc、selonsertib、烟酸受体激动剂、SGLT2抑制剂、VAP-1抑制剂、FGF21模拟物、腺甙A3受体激动剂、mTOT调节剂、FXR激动剂、半乳糖凝集素-3抑制剂、ABCA1激活剂、SCD1抑制剂、ACC抑制剂、I型NK T-细胞抑制剂、pan-PPAR激动剂、DGAT2抑制剂、PPARα激动剂、甲状腺激素R-b激动剂、5-LO/LT抑制剂、盐皮质激素受体拮抗剂、FGF19模拟物、半胱天冬酶抑制剂、GLP-1R激动剂、SIRT1/AMP激动剂、ACC抑制剂、已酮糖激酶抑制剂、GLP-1R激动剂、ASBT抑制剂、DGAT2/CYP2E1抑制剂、TLR4拮抗剂、甲状腺激素R-b激动剂、IFN-γ受体拮抗剂、CB1拮抗剂、FGF21配体、P2Y13受体激动剂、CCL24抑制剂、MCH受体-1拮抗剂、aPPARα、δ激动剂、DPP-4抑制剂、aLXR拮抗剂、GLP1R激动剂、嗜酸性粒细胞趋化因子-1抑制剂、β-klotho/FGFR1c激动剂、LOXL2抑制剂、AMPK激活剂、miR-103/107抑制剂、炎性小体抑制剂、CD3拮抗剂和组织蛋白酶B抑制剂；并且其中所述疾病或病症是非酒精性脂肪性肝炎(NASH)。
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