CN112697561A - 一种测定电纺丝膜材料中透明质酸钠含量的样品前处理方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种用于电纺丝膜材料中透明质酸钠含量测定的样品前处理方法，为：以水为浸提介质，超声浸提含透明质酸钠的电纺丝膜材料，收集浸提液，对浸提液进行透明质酸钠含量测定，即可。本发明提供了一种简便、快速、高效地将透明质酸钠等亲水性物质从电纺丝的聚合物上浸提下来再进行测定的样品前处理方法；该浸提条件下的透明质酸钠回收率较高，浸提效果较好。
Description
技术领域
本发明涉及一种测定电纺丝膜材料中透明质酸钠含量的样品前处理方法，特别是涉及电纺技术制备的各种聚合物材料引入的活性成分，如透明质酸钠的检测，针对电纺丝膜材料中透明质酸钠含量的测定建立了快速、简便有效的样品前处理方法，以便准确的测定出电纺丝膜材料中透明质酸钠含量。
背景技术
透明质酸(HyaluronicAcid，HA)是一种可用于皮肤保湿、润滑、修复的化妆品原料，又称玻尿酸，是一种酸性黏多糖，广泛存在于脊椎动物组织细胞间质中，其结构是由β－D－葡糖醛酸和β－D－N－乙酰氨基葡糖组成的双糖单位反复交替连接而成，分子量范围可由几千至几百万道尔顿。HA是在1934年由美国科学家Meyer等从牛眼玻璃体中首次分离得到，因其具有良好的润滑性、保湿性和黏弹性，并具有极佳的生物相容性及保水性，一直是生物医药材料领域研究的热点。通常应用其钠盐形式，即透明质酸钠(Sodiumhyaluronate，SH)。
电纺已经成为一种重要的生物材料加工技术，随着技术的发展，电纺丝材料由原来的单组分构成到现在的多组分构成，材料的结构也获得多样性，为它们在再生医学中的应用创造了条件。通过材料成分、结构的调控，使它在引导组织再生领域有着很好的应用潜力。通过在电纺丝膜材料中引入透明质酸钠，能够加速膜的血液湿润性，便于创面贴附和促进引导组织再生。
目前针对电纺丝膜材料上的透明质酸钠的含量测定无明确的样品前处理方法，因此，我们希望可以建立一种用于电纺丝膜材料中透明质酸钠含量测定的样品前处理方法。
发明内容
本发明的目的在于提供一种用于电纺丝膜材料中透明质酸钠含量测定的样品前处理方法。本发明建立一种快速、简便有效的样品前处理方法，以便准确地测定出电纺丝膜材料中透明质酸钠的含量。这对于该类产品的研究开发，质量控制乃至临床应用都具有重要意义。
本发明所提供的用于电纺丝膜材料中透明质酸钠含量测定的样品前处理方法，为：以水为浸提介质，超声浸提含透明质酸钠的电纺丝膜材料，收集浸提液，对浸提液进行透明质酸钠含量测定，即可。
上述方法中，所述浸提的浸提比例可为：1cm2～6cm2电纺丝膜材料采用1ml水进行浸提；
所述超声波频率可为25KHz～130KHz；
所述超声浸提的时间可为5min～20min；
所述超声浸提在室温下进行。
超声水浸提在电纺丝膜材料中透明质酸钠含量测定的样品前处理中的应用也属于本发明的保护范围。
所述应用中，所述浸提的浸提比例可为：1cm2～6cm2电纺丝膜材料采用1ml水进行浸提；
所述超声波频率可为25KHz～130KHz；
所述超声浸提的时间可为5min～20min；
所述超声浸提在室温下进行。
由于电纺丝膜为疏水性材料，透明质酸钠为亲水性物质，因此本发明通过以水为浸提介质，研究几种不同的浸提方式、浸提时间、浸提比例，筛选出一种快速、简便有效的样品前处理方法，既能大量溶解透明质酸钠以便后续检测，又不会破坏电纺丝膜材料性质；然后再根据相应的检测方法来对浸提液中的透明质酸钠含量进行定量。
本发明提供了一种简便、快速、高效地将透明质酸钠等亲水性物质从电纺丝的聚合物上浸提下来再进行测定的样品前处理方法；该浸提条件下的透明质酸钠回收率较高，浸提效果较好。
本发明具有以下效果：
该样品前处理方法的建立有利于电纺丝膜材料产品中水溶性天然高分子材料的质量控制，有利于产品的研究开发和临床应用，具有较高的应用价值；
该方法有如下优点：
(1)操作简便，不需要复杂的仪器，取材方便；
(2)用水浸提安全无毒，且能够较完全的将透明质酸钠洗脱下来，且通过合适的提取工艺和工艺参数(比如浸提比例、温度和时间)避免其他干扰物质的引入，提高了实验结果的准确性；
(3)结果较客观可靠，准确度高。
附图说明
图1为本发明实施例1中透明质酸钠检测中D-葡萄糖醛酸(GA)标准曲线。
图2为本发明实施例2中透明质酸钠检测中D-葡萄糖醛酸(GA)标准曲线。
图3为本发明实施例3中透明质酸钠检测中D-葡萄糖醛酸(GA)标准曲线。
图4为本发明对比例1中透明质酸钠检测中D-葡萄糖醛酸(GA)标准曲线。
图5为本发明对比例2中透明质酸钠检测中D-葡萄糖醛酸(GA)标准曲线。
具体实施方式
下面通过具体实施例对本发明进行说明，但本发明并不局限于此。
下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法；下述实施例中所用的试剂、材料等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
实施例1
1、浸提方式的初步筛选
取电纺丝膜(含透明质酸钠)4cm×3cm，平均分为四份，每份为1cm×3cm，按照浸提比例6cm2/ml(按照表面积算)，每份加纯化水1ml，分别按如下4种方式处理：
(1)用涡旋混合仪混合2min，将浸提液全部取出至①号离心管；
(2)置摇床中37℃振摇2小时后，将浸提液全部取出至②号离心管；
(3)置摇床中37℃振摇4小时后，将浸提液全部取出至③号离心管；
(4)置摇床中37℃振摇6小时后，将浸提液全部取出至④号离心管；
根据YY/T 1571-2017《组织工程医疗器械产品透明质酸钠》中的方法对浸提液进行透明质酸钠含量测定。测定结果显示，检测含量超出标曲范围，所以检测结果的定量值不准确，但可以将检测结果的趋势作参考，发现膜产品加水后在涡旋混合仪上处理2min即可被浸提下来大量透明质酸钠，相比较摇床6小时的长时间处理，涡旋浸提效率更高。故排除摇床的浸提方式，考虑通过旋涡混合仪进一步确定膜产品浸提方法。实验结果见图1和表1。
表1
实施例2
浸提方式、浸提比例的研究：
取18片电纺丝膜(不含透明质酸钠)2cm×3cm，每片加20μl透明质酸钠溶液(51.1mg/ml)，冷冻干燥后待用。分别按如下4种方式处理：
表2
试管1：从①取0.1ml，加水0.4ml(稀释5倍)；
试管2：从②取0.25ml，加水0.25ml(稀释2倍)；
试管3：从③取0.5ml；
试管4：从④取0.1ml，加水0.4ml(稀释5倍)；
试管5：从⑤取0.25ml，加水0.25ml(稀释2倍)；
试管6：从⑥取0.5ml；
根据YY/T 1571-2017《组织工程医疗器械产品透明质酸钠》中的方法对浸提液进行透明质酸钠含量测定。测定结果显示，超声处理比涡旋效果更好更稳定，将超声处理确定为浸提方式；浸提比例在1cm2/ml～6cm2/ml、超声5min时回收率均大于90％，满足100％±10％，可见浸提比例为1cm2/ml～6cm2/ml均可。实验结果见图2和表3。
表3
实施例3
浸提时间的研究：
取9片电纺丝膜(不含透明质酸钠)3cm×4cm，每片加40μl透明质酸钠溶液(51.1mg/ml)，冷冻干燥后待用。分别按如下4种方式处理：
表4
试管1：从①取0.1ml，加水0.4ml(稀释5倍)；
试管2：从②取0.25ml，加水0.25ml(稀释2倍)；
试管3：从③取0.5ml；
根据YY/T 1571-2017《组织工程医疗器械产品透明质酸钠》中的方法对浸提液进行透明质酸钠含量测定。测定结果显示，浸提比例在1cm2/ml～6cm2/ml、超声20min时回收率满足100％±10％，可见浸提比例为1cm2/ml～6cm2/ml、超声处理5min～20min均可。实验结果见图3和表5。
表5
实施例4
电纺膜中透明质酸钠含量检测：
取9片电纺丝膜(不含透明质酸钠)2cm×2.5cm，每片加20μl透明质酸钠溶液(40mg/ml)，按照3片一组，分为组1、组2、组3；另取9片电纺丝膜(不含透明质酸钠)2cm×2.5cm，每片加16μl透明质酸钠溶液(40mg/ml)，按照3片一组，分为组4、组5、组6。组1～组6的样品经冷冻干燥后待用。其中组1～组3每组按照浸提比例1cm2/ml，加纯化水30ml，超声5min(超声波频率40KHz)，每组分别取0.5ml浸提液检测；组4～组6每组按照浸提比例6cm2/ml，加纯化水5ml，超声20min(超声波频率40KHz)，每组分别取0.5ml浸提液检测。根据YY/T1571-2017《组织工程医疗器械产品透明质酸钠》中的方法对浸提液进行透明质酸钠含量测定。实验结果见表6。
表6
上述实施例中透明质酸钠：重均分子量为10-100万
上述实施例中电纺丝膜(含透明质酸钠)的制备方法方法参考中国专利“一种抗菌性阳离子改性的可吸收硬脑脊膜修复材料及其制备方法与应用”(专利号CN106668954A)，具体制备方法如下：
先将配制好的静电纺丝溶液装入静电纺丝液供给装置；通过流量泵调控电纺丝液的供给流量为0.1-20毫升/小时，具体可为1毫升/小时；调节高压发生端同收集装置之间的距离为3厘米-30厘米，具体可为15厘米；通过高压发生器给静电纺丝过程提供高压，可在0.1-40千伏(具体可为15千伏)之间调控；将转速为100-1000转/分(具体可为100转/分)、直径为2-20厘米(具体可为8厘米)的滚筒与接地端相连，作为静电纺丝过程的收集基板；在旋转滚筒上收集获得电纺丝膜。将透明质酸钠溶液流延涂覆在电纺丝膜表面，得到表面涂覆有天然高分子溶液的电纺丝膜，冷冻干燥得到含有三维多孔高分子层的复合膜。
空白电纺丝膜(不含透明质酸钠)的制备方法与上述电纺丝膜的制备方法的区别在于将上述在旋转滚筒上收集获得的电纺丝膜，不涂覆透明质酸钠溶液，直接冷冻干燥即可。
本发明所用的D-葡萄糖醛酸(GA)：生工生物工程(上海)股份有限公司，A600482-0005；四硼酸钠十水(Na2B4O7·10H2O)：生工生物工程(上海)股有限公司，A610480-0500；咔唑：国药集团化学试剂有限公司，80030280；超声波清洗机(超声波频率25KHz、40KHz、130KHz)；紫外分光光度计，UV-2450。
从实施例1中可以看出：通过对比摇床和涡旋这两种浸提方式，排除摇床的浸提方式，考虑通过旋涡混合仪进一步确定膜产品浸提方法。
从实施例2中可以看出：通过对比超声和涡旋这两种浸提方式，发现超声处理比涡旋效果更好更稳定，故排除涡旋方式，将超声处理确定为最佳浸提方式，且结合实施例3，发现样品前处理的浸提比例为1cm2/ml-6cm2/ml、超声5min-20min均可满足回收率100％±10％。
从实施例4中可以看出：含已知含量透明质酸钠的电纺膜的透明质酸钠平均回收率为101.72％，精密度为0.06％，说明该方法比较稳定，适用于作为常规方法来检测电纺丝膜材料中透明质酸钠含量。
超声处理的方式可简便高效的将透明质酸钠从电纺丝膜上浸提下来，且该方法对于常用的超声波清洗机频率来说，均可满足要求，极大地提高了实验的时效性和准确性，对于电纺膜上透明质酸钠等水溶性活性成分的含量及临床使用具有指导意义。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
对比例1
浸提时间的研究：
取12片电纺丝膜(不含透明质酸钠)2cm×2.5cm，每片加20μl透明质酸钠溶液(40mg/ml)，冷冻干燥后待用。分别按如下四种方式处理，在其他条件不变情况下，用40KHz超声波频率考察浸提时间大于20min(以40min为研究对象)和浸提时间小于5min(以1min为研究对象)的透明质酸钠回收率：
表7
试管1：从①取0.1ml，加水0.4ml(稀释5倍)；
试管2：从②取0.5ml；
试管3：从③取0.1ml，加水0.4ml(稀释5倍)；
试管4：从④取0.5ml；
根据YY/T 1571-2017《组织工程医疗器械产品透明质酸钠》中的方法对浸提液进行透明质酸钠含量测定。测定结果显示，当浸提比例在1cm2/ml～6cm2/ml、超声40min和1min时，透明质酸钠的回收率降低，考虑是由于浸提时间过短使浸提不充分、浸提时间过长使电纺膜被破坏产生其他干扰成分。所以从检测准确性及检测时间周期方面，建议浸提时间在5min～20min为宜。实验结果见图4和表8。
表8
对比例2
浸提比例的研究：
取12片电纺丝膜(不含透明质酸钠)2cm×2.5cm，每片加20μl透明质酸钠溶液(40mg/ml)，冷冻干燥后待用。分别按如下四种方式处理，在其他条件不变情况下，用40KHz超声波频率考察浸提比例大于6cm2/ml(以8cm2/ml为研究对象)和浸提比例小于1cm2/ml(以0.5cm2/ml为研究对象)的透明质酸钠回收率：
表9
试管1：从①取0.1ml，加水0.4ml(稀释5倍)；
试管2：从②取0.5ml；
试管3：从③取0.1ml，加水0.4ml(稀释5倍)；
试管4：从④取0.5ml；
根据YY/T 1571-2017《组织工程医疗器械产品透明质酸钠》中的方法对浸提液进行透明质酸钠含量测定。测定结果显示，当浸提时间在5min～20min、浸提比例为8cm2/ml时，透明质酸钠的回收率低于90％，由于浸提比例增大后，意味着更少的水来浸提更大面积的样品，会出现部分电纺膜样品未完全浸没于水中，所以影响到浸提的完全性，且由于浸提介质减少而使浸提浓度升高，已超出该方法中的标曲浓度上限，定量不准确；当浸提时间在5min～20min、浸提比例为0.5cm2/ml时，透明质酸钠的回收率虽处于90％以上，认为浸提较完全，但因使用的浸提介质水的体积增多，一方面造成不必要的浪费，另一方面由于水的体积增加而使浸提浓度降低，接近该方法中的标曲浓度下限，建议检测浓度位于标曲中间浓度为宜，这样结果定量会更准确。所以结合该方法中的标曲浓度范围、节约用水的角度，建议浸提比例在1cm2/ml～6cm2/ml为宜。实验结果见图5和表10。
表10
Claims (8)
1.一种用于电纺丝膜材料中透明质酸钠含量测定的样品前处理方法，为：以水为浸提介质，超声浸提含透明质酸钠的电纺丝膜材料，收集浸提液，对浸提液进行透明质酸钠含量测定，即可。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述浸提的浸提比例为：1cm2～6cm2电纺丝膜材料采用1ml水进行浸提。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述超声浸提的超声波频率为25KHz～130KHz。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的方法，其特征在于：所述超声浸提的时间为5min～20min；
所述超声浸提在室温下进行。
5.超声水浸提在电纺丝膜材料中透明质酸钠含量测定的样品前处理中的应用。
6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于：所述浸提的浸提比例为：1cm2～6cm2电纺丝膜材料采用1ml水进行浸提。
7.根据权利要求5所述的应用，其特征在于：所述超声浸提的超声波频率为25KHz～130KHz。
8.根据权利要求5所述的应用，其特征在于：所述超声浸提的时间为5min～20min；
所述超声浸提在室温下进行。
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Citations (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103776783A (zh) * | 2014-02-20 | 2014-05-07 | 中国环境科学研究院 | 大气中阳离子表面有机活性物质浓度的测量方法 |
| EP2818185A1 (en) * | 2013-06-25 | 2014-12-31 | Fresenius Medical Care Deutschland GmbH | Low pollutant dialysis solution |
| CN106053369A (zh) * | 2016-07-13 | 2016-10-26 | 浙江景嘉医疗科技有限公司 | 一种医用交联透明质酸钠凝胶中游离透明质酸钠含量的检测方法 |
| CN108303307A (zh) * | 2017-12-25 | 2018-07-20 | 陕西佰傲再生医学有限公司 | 一种定量检测皮肤制剂中透明质酸含量的方法 |
| CN108982620A (zh) * | 2018-08-14 | 2018-12-11 | 云南省烟草质量监督检测站 | 一种快速测定烟草中苯霜灵残留含量的方法 |
| CN109085266A (zh) * | 2018-08-08 | 2018-12-25 | 保琦蓓 | 一种纺织品中喹啉的测定方法 |
| WO2019137163A1 (zh) * | 2018-08-29 | 2019-07-18 | 广州海关技术中心 | 一种消费品化学成分检测分析用超声波萃取仪的超声萃取性能核查装置及方法 |
-
2020
- 2020-12-08 CN CN202011443233.0A patent/CN112697561A/zh active Pending
Patent Citations (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP2818185A1 (en) * | 2013-06-25 | 2014-12-31 | Fresenius Medical Care Deutschland GmbH | Low pollutant dialysis solution |
| CN103776783A (zh) * | 2014-02-20 | 2014-05-07 | 中国环境科学研究院 | 大气中阳离子表面有机活性物质浓度的测量方法 |
| CN106053369A (zh) * | 2016-07-13 | 2016-10-26 | 浙江景嘉医疗科技有限公司 | 一种医用交联透明质酸钠凝胶中游离透明质酸钠含量的检测方法 |
| CN108303307A (zh) * | 2017-12-25 | 2018-07-20 | 陕西佰傲再生医学有限公司 | 一种定量检测皮肤制剂中透明质酸含量的方法 |
| CN109085266A (zh) * | 2018-08-08 | 2018-12-25 | 保琦蓓 | 一种纺织品中喹啉的测定方法 |
| CN108982620A (zh) * | 2018-08-14 | 2018-12-11 | 云南省烟草质量监督检测站 | 一种快速测定烟草中苯霜灵残留含量的方法 |
| WO2019137163A1 (zh) * | 2018-08-29 | 2019-07-18 | 广州海关技术中心 | 一种消费品化学成分检测分析用超声波萃取仪的超声萃取性能核查装置及方法 |
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