CN106053369A - 一种医用交联透明质酸钠凝胶中游离透明质酸钠含量的检测方法 - Google Patents

一种医用交联透明质酸钠凝胶中游离透明质酸钠含量的检测方法 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一种医用交联透明质酸钠凝胶中游离透明质酸钠含量的检测方法，包括如下内容：(1)称取一定量样品，加适量PBS溶液溶解混匀，将该溶液通过滤膜过滤，并用适量PBS冲洗西林瓶，取滤液，进行葡萄糖醛酸含量测定。(2)制备葡萄糖醛酸标准液系列。(3)向标准液系列与样品管中分别加入0.025mol/L四硼酸钠硫酸溶液5mL，混合均匀，在沸水浴中加热10分钟，冷却至室温，再向各管中加入咔唑乙醇溶液0.2ml，混合均匀后沸水浴中加热15分钟，冷却至室温，用分光光度计测定530nm处各标准管和样品管的吸光度。(4)根据样品管的吸光度从标准曲线上查得样品管葡萄糖醛酸含量，然后根据计算公式计算得出游离透明质酸钠的含量。利用本发明的方法检测游离透明质酸钠含量，实验结果稳定可靠，重现性好。

Description

一种医用交联透明质酸钠凝胶中游离透明质酸钠含量的检测 方法
技术领域
本发明涉及化学检验领域和药物分析领域技术，特别是一种医用交联透明质酸钠凝胶中游离透明质酸钠含量的检测方法。
背景技术
现有行业标准YY/T 0962-2014中游离透明质酸钠含量的测定是用离心的方法，但是离心以后，游离的透明质酸钠和交联的透明质酸钠不能很好的分离，取样的时候容易把交联部分的透明质酸钠取到，导致检测结果不准确，而用滤膜过滤的方法可以很好地进行分离，结果更准确可靠，误差小，重现性好。
发明内容
本发明所要解决的技术问题在于针对现有的行业标准YY/T 0962-2014中游离透明质酸钠含量的测定方法所存在的不足而提供一种医用交联透明质酸钠凝胶中游离透明质酸钠含量的检测方法，该检测方法简单易行，测定的结果更准确。
本发明所要解决的技术问题可以通过以下技术方案来实现：
一种医用交联透明质酸钠凝胶中游离透明质酸钠含量的检测方法，包括如下步骤：
(1)样品的配制步骤
称取一定量样品，加适量PBS溶液，涡旋溶解混匀，用0.45-20μm的滤膜过滤，并用适量PBS溶液冲洗西林瓶，取滤液进行葡萄糖醛酸的测定；
(2)葡萄糖醛酸标准液系列的配制步骤
葡萄糖醛酸(GA)标准溶液：精确称取10mg葡萄糖醛酸于100mL容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，在4℃下贮存。按下表制备葡萄糖醛酸标准系列。
试管号 0 1 2 3 4 5
GA标准溶液，mL 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0
蒸馏水，mL 1.0 0.8 0.6 0.4 0.2 0
GA含量，μg/mL 0 20 40 60 80 100
(3)测定步骤：
向步骤(2)制备的葡萄糖醛酸标准液系列与样品管中分别加入0.025mol/L四硼酸钠硫酸溶液5mL，混合均匀，在沸水浴中加热10分钟，冷却至室温，再向各管中加入咔唑乙醇溶液0.2ml，混合均匀后沸水浴中加热15分钟，冷却至室温，用分光光度计测定530nm处各标准管和样品管的吸光度，用标准管绘制吸光度－浓度曲线，根据样品管的吸光度从标准曲线上查得样品管葡萄糖醛酸含量，从而计算得出游离透明质酸钠的含量。
在本发明的一个优选实施例中，所述步骤(1)用的滤膜的孔径是3-5μm。
本发明是在现有的行业标准YY/T 0962-2014上改进了分析方法，实验结果更准确、可靠，误差小、重现性好。
具体实施方式：
通过下面给出的本发明的具体实施例可以进一步清楚地了解本发明，但它不是对本发明的限定。
实施例1
实验方法与过程：
(1)样品的配制步骤
取交联透明质酸钠凝胶0.5g于西林瓶中，加5mL PBS振荡均匀，将该溶液通过滤膜(孔径5μm)过滤，并用5mLPBS进行冲洗西林瓶，取滤液1mL，进行葡萄糖醛酸含量测定。
(2)葡萄糖醛酸标准液系列的配制步骤
葡萄糖醛酸(GA)标准溶液：精确称取10mg葡萄糖醛酸于100mL容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，在4℃下贮存。按下表1制备葡萄糖醛酸标准系列。
表1
试管号 0 1 2 3 4 5
GA标准溶液，mL 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0
蒸馏水，mL 1.0 0.8 0.6 0.4 0.2 0
GA含量，μg/mL 0 20 40 60 80 100
(3)测定步骤：
向步骤(2)制备的葡萄糖醛酸标准液系列与样品管中分别加入0.025mol/L四硼酸钠硫酸溶液5mL，混合均匀，在沸水浴中加热10分钟，冷却至室温，再向各管中加入咔唑乙醇溶液0.2ml，混合均匀后沸水浴中加热15分钟，冷却至室温，用分光光度计测定530nm处各标准管和样品管的吸光度。用标准管绘制吸光度－浓度曲线，根据样品管的吸光度从标准曲线上查得样品管葡萄糖醛酸含量，从而计算得出游离透明质酸钠的含量。
(4)实验结果
实验结果见表2
表2
实施例2
实验方法与过程：
(1)样品的配制步骤
取交联透明质酸钠凝胶0.5g于西林瓶中，加5mL PBS振荡均匀，将该溶液通过滤膜(孔径3μm)过滤，并用5mLPBS进行冲洗西林瓶，取滤液1mL，进行葡萄糖醛酸含量测定。
(2)葡萄糖醛酸标准液系列的配制步骤
葡萄糖醛酸(GA)标准溶液：精确称取10mg葡萄糖醛酸于100mL容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，在4℃下贮存。按下表3制备葡萄糖醛酸标准系列。
表3
试管号 0 1 2 3 4 5
GA标准溶液，mL 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0
蒸馏水，mL 1.0 0.8 0.6 0.4 0.2 0
GA含量，μg/mL 0 20 40 60 80 100
(3)测定步骤：
向步骤(2)制备的葡萄糖醛酸标准液系列与样品管中分别加入0.025mol/L四硼酸钠硫酸溶液5mL，混合均匀，在沸水浴中加热10分钟，冷却至室温，再向各管中加入咔唑乙醇溶液0.2ml，混合均匀后沸水浴中加热15分钟，冷却至室温，用分光光度计测定530nm处各标准管和样品管的吸光度。用标准管绘制吸光度－浓度曲线，根据样品管的吸光度从标准曲线上查得样品管葡萄糖醛酸含量，从而计算得出游离透明质酸钠的含量。
(4)实验结果
实验结果见表4
表4
实施例3
实验方法与过程：
(1)样品的配制步骤
取交联透明质酸钠凝胶1.25g于西林瓶中，加15mL PBS振荡均匀，将该溶液通过滤膜(孔径5μm)过滤，并用10mLPBS进行冲洗西林瓶，取滤液1mL，进行葡萄糖醛酸含量测定。
(2)葡萄糖醛酸标准液系列的配制步骤
葡萄糖醛酸(GA)标准溶液：精确称取10mg葡萄糖醛酸于100mL容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，在4℃下贮存。按下表5制备葡萄糖醛酸标准系列。
表5
试管号 0 1 2 3 4 5
GA标准溶液，mL 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0
蒸馏水，mL 1.0 0.8 0.6 0.4 0.2 0
GA含量，μg/mL 0 20 40 60 80 100
(3)测定步骤：
向步骤(2)制备的葡萄糖醛酸标准液系列与样品管中分别加入0.025mol/L四硼酸钠硫酸溶液5mL，混合均匀，在沸水浴中加热10分钟，冷却至室温，再向各管中加入咔唑乙醇溶液0.2ml，混合均匀后沸水浴中加热15分钟，冷却至室温，用分光光度计测定530nm处各标准管和样品管的吸光度。用标准管绘制吸光度－浓度曲线，根据样品管的吸光度从标准曲线上查得样品管葡萄糖醛酸含量，从而计算得出游离透明质酸钠的含量。
(4)实验结果
实验结果见表6
表6
实施例4
(1)样品的配制步骤
取交联透明质酸钠凝胶0.1g于离心管中，加水至5.0g，震荡均匀，将离心管置于离心机中，15000r/min，离心15分钟，去1ml上清液进行葡萄糖醛酸含量测定。
(2)葡萄糖醛酸标准液系列的配制步骤
葡萄糖醛酸(GA)标准溶液：精确称取0.1g葡萄糖醛酸对照品于100mL容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，作为贮备液。精密量取贮备液5.0ml，置100ml容量瓶中，加水制成每1ml中含有50μg的溶液，摇匀，在4℃下贮存，有效期6个月。按下表7制备葡萄糖醛酸标准系列。
表7
试管号 0 1 2 3 4 5
GA标准溶液，mL 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0
蒸馏水，mL 1.0 0.8 0.6 0.4 0.2 0
GA含量，μg/mL 0 10 20 30 40 50
(3)测定步骤
向步骤(2)制备的葡萄糖醛酸标准液系列与样品管中分别加入0.025mol/L四硼酸钠硫酸溶液5mL，混合均匀，在沸水浴中加热10分钟，冷却至室温，再向各管中加入咔唑乙醇溶液0.2ml，混合均匀后沸水浴中加热15分钟，冷却至室温，用分光光度计测定530nm处各标准管和样品管的吸光度。用标准管绘制吸光度－浓度曲线，根据样品管的吸光度从标准曲线上查得样品管葡萄糖醛酸含量，从而计算得出游离透明质酸钠的含量。
(4)实验结果
实验结果见表8
表8
实施例5
(1)样品的配制步骤
取交联透明质酸钠凝胶0.1g于离心管中，加水至5.0g，震荡均匀，将离心管置于离心机中，15000r/min，离心25分钟，去1ml上清液进行葡萄糖醛酸含量测定。
(2)葡萄糖醛酸标准液系列的配制步骤
葡萄糖醛酸(GA)标准溶液：精确称取0.1g葡萄糖醛酸对照品于100mL容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，作为贮备液。精密量取贮备液5.0ml，置100ml容量瓶中，加水制成每1ml中含有50μg的溶液，摇匀，在4℃下贮存，有效期6个月。按下表9制备葡萄糖醛酸标准系列。
表9
试管号 0 1 2 3 4 5
GA标准溶液，mL 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0
蒸馏水，mL 1.0 0.8 0.6 0.4 0.2 0
GA含量，μg/mL 0 10 20 30 40 50
(3)测定步骤
向步骤(2)制备的葡萄糖醛酸标准液系列与样品管中分别加入0.025mol/L四硼酸钠硫酸溶液5mL，混合均匀，在沸水浴中加热10分钟，冷却至室温，再向各管中加入咔唑乙醇溶液0.2ml，混合均匀后沸水浴中加热15分钟，冷却至室温，用分光光度计测定530nm处各标准管和样品管的吸光度。用标准管绘制吸光度－浓度曲线，根据样品管的吸光度从标准曲线上查得样品管葡萄糖醛酸含量，从而计算得出游离透明质酸钠的含量。
(4)实验结果
实验结果见表10
表10
实施例6
(1)样品的配制步骤
取交联透明质酸钠凝胶0.1g于离心管中，加水至5.0g，震荡均匀，将离心管置于离心机中，10000r/min，离心15分钟，去1ml上清液进行葡萄糖醛酸含量测定。
(2)葡萄糖醛酸标准液系列的配制步骤
葡萄糖醛酸(GA)标准溶液：精确称取0.1g葡萄糖醛酸对照品于100mL容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，作为贮备液。精密量取贮备液5.0ml，置100ml容量瓶中，加水制成每1ml中含有50μg的溶液，摇匀，在4℃下贮存，有效期6个月。按下表11制备葡萄糖醛酸标准系列。
表11
试管号 0 1 2 3 4 5
GA标准溶液，mL 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0
蒸馏水，mL 1.0 0.8 0.6 0.4 0.2 0
GA含量，μg/mL 0 10 20 30 40 50
(3)测定步骤
向步骤(2)制备的葡萄糖醛酸标准液系列与样品管中分别加入0.025mol/L四硼酸钠硫酸溶液5mL，混合均匀，在沸水浴中加热10分钟，冷却至室温，再向各管中加入咔唑乙醇溶液0.2ml，混合均匀后沸水浴中加热15分钟，冷却至室温，用分光光度计测定530nm处各标准管和样品管的吸光度。用标准管绘制吸光度－浓度曲线，根据样品管的吸光度从标准曲线上查得样品管葡萄糖醛酸含量，从而计算得出游离透明质酸钠的含量。
(4)实验结果
实验结果见表12
表12
将以上实施例结果数据汇总结果如下：
由上表可得出结论，实施例1、实施例2和实施例3中采用的过滤的方法得出的游离透明质酸钠的含量明显低于实施例4、实施例5和实施例6；采用过滤的方法处理样品得出的结果的相对平均偏差也小于用离心的方法处理样品得出的结果，因此，用过滤的方法处理样品，结果更可靠，重现性更好。

Claims (2)

1.一种医用交联透明质酸钠凝胶中游离透明质酸钠含量的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)样品的配制步骤
称取一定量样品，加适量PBS溶液，涡旋溶解混匀，用0.45-20μm的滤膜过滤，并用适量PBS溶液冲洗西林瓶，取滤液进行葡萄糖醛酸的测定；
(2)葡萄糖醛酸标准液系列的配制步骤
葡萄糖醛酸(GA)标准溶液：精确称取10mg葡萄糖醛酸于100mL容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，在4℃下贮存。按下表制备葡萄糖醛酸标准系列。
试管号 0 1 2 3 4 5 GA标准溶液，mL 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 蒸馏水，mL 1.0 0.8 0.6 0.4 0.2 0 GA含量，μg/mL 0 20 40 60 80 100
(3)测定步骤：
向步骤(2)制备的葡萄糖醛酸标准液系列与样品管中分别加入0.025mol/L四硼酸钠硫酸溶液5mL，混合均匀，在沸水浴中加热10分钟，冷却至室温，再向各管中加入咔唑乙醇溶液0.2ml，混合均匀后沸水浴中加热15分钟，冷却至室温，用分光光度计测定530nm处各标准管和样品管的吸光度，用标准管绘制吸光度－浓度曲线，根据样品管的吸光度从标准曲线上查得样品管葡萄糖醛酸含量，从而计算得出游离透明质酸钠的含量。
2.如权利要求1所述的一种医用交联透明质酸钠凝胶中游离透明质酸钠含量的检测方法，其特征在于，所述步骤(1)用的滤膜的孔径是3-5μm。
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