CN105572062A - 一种测定交联透明质酸钠凝胶体外酶解率的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开的一种交联透明质酸钠凝胶体外酶解率的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：1)称取适量交联透明质酸钠凝胶，置于西林瓶中；2)称取适量透明质酸酶，置于容量瓶内，配成浓度为2～10U/ml的透明质酸酶溶液；3)向步骤1)的西林瓶内加入模拟组织液2～5ml和步骤2)制备的透明质酸酶溶液1～3ml；4)西林瓶密封后，震荡混匀，放入37℃恒温水浴中；5)若干小时后，将西林瓶取出，放入沸水浴中灭活10min；6)冷却后，滤去剩余的凝胶颗粒得滤液；7)对步骤6)放入滤液进行糖醛酸含量检测，计算交联透明质酸钠凝胶体外酶解率。本发明的交联透明质酸钠凝胶体外酶解率的检测方法操作简单，成本低。
Description
技术领域
本发明涉及交联透明质酸钠检测技术领域，尤指一种交联透明质酸钠凝胶体外酶解率的检测方法。
背景技术
式(1)中高纯度透明质酸钠交联衍生物为无色透明胶状液体，其分子长链在溶液中相互交联形成卷曲盘绕的三维亲水矩阵网络构型，允许营养，氧气，激素等自由通行，从而维护组织正常的生理功能。交联的透明质酸最终大都被机体降解并吸收利用，但是它降解的速度要远比未交联的透明质酸缓慢得多。
交联透明质酸钠的降解周期与交联程度有关，交联程度越高，抵抗酶降解能力就越强，故降解周期越长。
如何用体外的试验方法来间接估计和比较交联透明质酸钠产品在体内的留存时间是开发交联透明质酸钠产品的研究重点。
目前，国际上还没有一种成熟的方法来检测交联透明质酸钠的体外酶解特性。
发明内容
本发明所解决的技术问题在于为了克服上述所提到的困难，提供一种操作简单的交联透明质酸钠凝胶体外酶解率的检测方法。
本发明所解决的技术问题可以通过以下技术方案来实现：
一种交联透明质酸钠凝胶体外酶解率的检测方法，包括以下步骤：
1)称取适量交联透明质酸钠凝胶，置于西林瓶中；
2)称取适量透明质酸酶，置于容量瓶内，配成浓度为2～10U/ml的透明质酸酶溶液；
3)向步骤1)的西林瓶内加入模拟组织液2～5ml和步骤2)制备的透明质酸酶溶液1～3ml；
4)西林瓶密封后，震荡混匀，放入37℃恒温水浴中；
5)若干小时后，将西林瓶取出，放入沸水浴中灭活10min；
6)冷却后，滤去剩余的凝胶颗粒得滤液；
7)对步骤6)放入滤液进行糖醛酸含量检测，计算交联透明质酸钠凝胶体外酶解率。
本发明的交联透明质酸钠凝胶体外酶解率的检测方法操作简单，成本低。
具体实施方式
通过下面给出的本发明的具体实施例可以进一步清楚地了解本发明，但它们不是对本发明的限定。
实施例1
取0.50g交联透明质酸钠凝胶，用模拟组织液稀释至4mg/ml，加入1mL5U/mL透明质酸酶溶液，震荡混匀，置37℃恒温水浴，在1h、6h、16h、24h取出，沸水浴进行酶灭活，0.45μm膜过滤，咔唑法测葡萄糖醛酸含量，计算体外酶解率。结果见表1。
表1
实施例2
取0.50g交联透明质酸钠凝胶，用模拟组织液稀释至4mg/ml，加入1mL10U/mL透明质酸酶溶液，震荡混匀，置37℃恒温水浴，在1h、6h取出，沸水浴进行酶灭活，0.45μm膜过滤，咔唑法测葡萄糖醛酸含量，计算体外酶解率，结果见表2。
表2
实施例3
取0.20g交联透明质酸钠凝胶，用模拟组织液稀释至4mg/ml，加入1mL2U/mL透明质酸酶溶液，震荡混匀，置37℃恒温水浴，在1h、6h、24h取出，沸水浴进行酶灭活，0.45μm膜过滤，咔唑法测葡萄糖醛酸含量，计算体外酶解率。结果见表3。
表3
实施例4
取0.20g交联透明质酸钠凝胶，用模拟组织液稀释至4mg/ml，加入1mL10U/mL透明质酸酶溶液，震荡混匀，置37℃恒温水浴，在1h、4h、6h、8h取出，沸水浴进行酶灭活，0.45μm膜过滤，咔唑法测葡萄糖醛酸含量，计算体外酶解率。结果见表4。
表4
实施例5：
取0.20g交联透明质酸钠凝胶，用模拟组织液稀释至4mg/ml，加入1mL8U/mL透明质酸酶溶液，震荡混匀，置37℃恒温水浴，在1h、6h、24h取出，沸水浴进行酶灭活，0.45μm膜过滤，咔唑法测葡萄糖醛酸含量，计算体外酶解率。结果见表5。
表5
Claims (1)
1.一种交联透明质酸钠凝胶体外酶解率的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)称取适量交联透明质酸钠凝胶，置于西林瓶中；
2)称取适量透明质酸酶，置于容量瓶内，配成浓度为2～10U/ml的透明质酸酶溶液；
3)向步骤1)的西林瓶内加入模拟组织液2～5ml和步骤2)制备的透明质酸酶溶液1～3ml；
4)西林瓶密封后，震荡混匀，放入37℃恒温水浴中；
5)若干小时后，将西林瓶取出，放入沸水浴中灭活10min；
6)冷却后，滤去剩余的凝胶颗粒得滤液；
7)对步骤6)放入滤液进行糖醛酸含量检测，计算交联透明质酸钠凝胶体外酶解率。
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| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| CB02 | Change of applicant information |
Address after: Hangzhou City, Zhejiang province 310000 Xihu District three Town Road No. 206 building 3 three isolation layer and a layer of room 105 Applicant after: ZHEJIANG JINGJIA MEDICAL TECHNOLOGY Co.,Ltd. Address before: Hangzhou City, Zhejiang province 310000 Xihu District Xiyuan eight road No. 2 Building 2, the first layer and the second layer Applicant before: Hangzhou Gallop Biological Products Co.,Ltd. |
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| COR | Change of bibliographic data | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20160511 |
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| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |