CN101244290A - 一种用于组织填充的交联透明质酸微粒凝胶的制备方法 - Google Patents

一种用于组织填充的交联透明质酸微粒凝胶的制备方法 Download PDF

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CN101244290A CN 200710171444 CN200710171444A CN101244290A CN 101244290 A CN101244290 A CN 101244290A CN 200710171444 CN200710171444 CN 200710171444 CN 200710171444 A CN200710171444 A CN 200710171444A CN 101244290 A CN101244290 A CN 101244290A
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刘秀杰
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葛翠兰
顾其胜
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顾其胜;葛翠兰
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Abstract

本发明涉及一种组织填充用的交联透明质酸微粒凝胶的制备方法,由透明质酸和双环氧化物在一特定模具里经交联反应得到凝胶块后,进一步用酸溶液处理,经生理平衡液纯化、透析后,被机械设备挤碎成微粒凝胶。通过上述工艺制备得到交联透明质酸微粒凝胶具备下列特征,具有特殊物理性能:以频率0.05-10Hz下动态粘弹性表示,其储能模量(G’)为500-2000Pa,耗能模量(G”)为50-200Pa,相角(δ)小于20,复数粘度(η*)为10-3500Pa·s;稳定性好:高压高温处理不影响凝胶的性能,抗酶解能力强;具有可注射性:微粒大小在50-1000μm之间;生物相容性好:无细胞毒性;具有生物可降解性:可被透明质酸酶完全降解。本发明的凝胶适合用于组织填充及生物医疗等领域。

Description

一种用于组织填充的交联透明质酸微粒凝胶的制备方法技术领域本发明涉及一种用于组织填充的交联透明质酸微粒凝胶的制备方法,尤其涉 及一种水不溶性的交联透明质酸微粒凝胶的制备方法,该凝胶可通过注射针头植 入到软组织中,起填充除皱、填充凹陷和丰唇等作用,属于医学美容和生物医疗 技术领域。 背景技术透明质酸是由葡萄糖醛酸和乙酰氨基葡萄糖双糖相互结合构成的线性高分 子多糖,广泛存在于哺乳动物的结缔组织、鸡冠和链球菌的夹膜中。透明质酸属 于一种生理性物质,具有高度的粘弹性、良好的生物相容性和无免疫原性,不具 有种属特异性,当植入到人体内之后不引起异体排斥反应和过敏反应,所以在医 疗、美容行业得到了广泛应用。但是天然的外源性透明质酸的分子量水溶性高, 在体内很快被酶和自由基降解,在皮肤组织中的半衰期仅为12小时,这样就限 制了其在组织填充等方面的应用,因为这些应用需要透明质酸在体内有较长的保 留时间。通过对透明质酸分子进行改构,可以在保留透明质酸原有生物相容性的同 时,改变透明质酸的某些理化属性,并拓宽其临床应用效果。改构透明质酸的方法主要有:修饰和交联。交联透明质酸的原理是使用一种或多种组合的化学交联 剂,利用交联剂自身存在的基团与透明质酸上相关的一个或多个基团(羧基、羟 基和乙酰基)发生反应,使透明质酸分子之间交联在一起,而形成三维网络结构。 交联透明质酸具有水溶性低、稳定性好和粘弹性优良等优点。目前已经知道有多种制备交联透明质酸方法。例如,美国专利4, 582, 865公开了利用二乙烯基砜作 为交联剂制备透明质酸凝胶的方法;美国专利5, 356, 883公开了利用碳二亚胺与 透明质酸或其盐的羧基发生交联反应的方法;美国专利5, 827, 937公开了通过两 步交联反应得到交联多糖凝胶的方法;中国专利CN1342171A描述了多重交联的 透明质酸衍生物的生产方法;中国专利CN1590444描述了透明质酸经脱蛋白质处理后,用縮水甘油醚交联制得透明质酸凝胶的过程。但是,上述专利只叙述了交 联透明质酸凝胶块的制备过程,对凝胶中的杂质即未反应的交联剂的去除、制备 成可注射凝胶的工艺以及凝胶生物相容性等方面,未进行描述。 发明内容本发明的目的是提供一种能去除凝胶中杂质的用于组织填充的交联透明质 酸微粒凝胶的制备方法。为实现以上目的,本发明的技术方案是提供一种用于组织填充的交联透明质 酸微粒凝胶的制备方法,其特征在于,其歩骤为:第一歩.将分子量为50-300万道尔顿的透明质酸原料溶解于pHMO、浓度为 0. 05-4. 0M碱性溶液中,配制成5-20%透明质酸碱性溶液,加入交联剂, 交联剂与透明质酸原料重量比为15:1-1:5,在多孔模具容器中,经交联 反应,反应温度为25'C-5(TC,反应时间为2小时-12小时,得到交联透 明质酸凝胶块;第二步.将交联透明质酸凝胶块加入到浓度为0.01-2M、 pH值〈5的酸性溶液中, 酸性溶液的量与凝胶块重量比为1: 1-10: 1,室温放置2小时-24小时, 然后倒去盐酸溶液,用生理平衡液清洗、透析,在至少2天内,更换6 次以上生理平衡液,每次用于透析的生理平衡液量为凝胶体积的5-50倍, 得到透明质酸浓度为0. 5%-4. 0%凝胶块;第三歩.利用不锈钢挤压装置,利用2kg — 8kg的正压力将凝胶块通过孔径为 50 u m—2000 u m的多孔滤片挤出,将块状凝胶挤碎成高度粘弹性的微粒 凝胶。所述的透明质酸原料为细菌发酵来源的透明质酸盐干粉,可选自透明质酸 钠、透明质酸钾或透明质酸钙;所述的碱性溶液为NaOH、 KOH或者化20)3溶液; 所述的交联剂为双环氧化物;所述的双环氧化物为乙二醇二縮水甘油醚或丁二醇 二缩水甘油醚。所述的多孔模具容器的每孔容积为0.5rnl-10nd,各孔大小一致,形状相同, 其材质为玻璃、塑料、聚四氟乙烯或不锈钢。所述的多孔模具容器可选自细胞培 养用12孔板、24孔板或48孔板。本发明提供了一种交联透明质酸凝胶中未参加交联反应的杂质的去除方法, 即提供了一种在酸性溶液中洗涤这些块状凝胶的方法。所述的酸性溶液为盐酸、 硫酸、磷酸或醋酸溶液。其中所述的加入酸性溶液起进一歩交联反应,与"专利CN1342171A描述 了多重交联的透明质酸衍生物的生产方法"中描述多重交联的方法有所不同,该 专利中所述多重交联方法,每一交联歩骤均加入交联剂起反应。而本发明加入酸 性溶液,不用加入交联剂,且具有以下作用:促进未交联的交联剂与未交联的透 明质酸进一步发生交联反应,提高凝胶交联程度,改善凝胶的机械特性,增加凝 胶的稳定性;降低交联剂残留量;去除未反应的透明质酸;中和碱性溶液。更进 一步地,本发明中在酸性条件下,与透明质酸羧基发生交联反应的双环氧化物, 双环氧化物在酸性条件下,可与透明质酸的羧基发生交联反应生成含有酯键的交 联透明质酸,它是在碱性条件下与透明质酸羟基发生交联反应后的剩余的、残留 的交联剂,所以量少;因交联剂量少,故参与交联反应的透明质酸羧基也少,而 透明质酸羧基是对多聚糖保留聚阴离子特性起重要作用,即对保留透明质酸的生 物相容性起重要作用。交联透明质酸凝胶在生理平衡液中充分膨胀后,透明质酸浓度不会再随着透 析时间的延长而改变,也就是说,透明质酸浓度因交联多聚物在生理平衡液中达 到了平衡而恒定。本发明具有特殊物理性能,以频率0.05-10Hz下动态粘弹性表示,其储能模 量(G')为500-2000Pa,耗能模量(G")为50-200Pa,相角(S )小于20° , 也就是说,微粒凝胶体现为高度粘弹性特征;在频率0. 05-10Hz下,复数粘度(n 为10-3500Pa",在推杆的压力作用下该高粘度的微粒凝胶可以顺利地通过注 射针头。当透明质酸浓度增加时,溶液中分子数目增加,多糖聚合物分子链被迫互相 靠拢由此增加分子间的交互作用。共价交联是显著提高聚合物分子链交互作用以 形成凝胶的一个方法,这时凝胶将不会在外力的作用下轻易变形或改变形状。储 能(弹性)模量G'和耗能(粘性)模量G"分别表示当形变速率(测试频率) 改变时材料可以复原(弹性响应)或流动(粘性响应)的相对程度。这两个模量6己经被证明是聚合物溶液和凝胶结构的灵敏探测器。对于高粘弹性凝胶而言,在 测定范围内,G'总是大于G",而且它们的值对频率的依赖不明显。复数模量 G*,能够综合反映弹性组分G'和粘性组分G"两者之间的关系,即它们之间的 关系是:G' =G'cosS禾BG" =G*sinS,其中5是相角。S越大,物质越接近牛 顿流体;S越小,物质越接近虎克固体,结构就越稳定。其中所述的特殊物理性能,还指微粒凝胶具有假塑性,即剪切薄现象,在频 率0.05-10Hz范围下微粒凝胶的复数粘度(V)在10-3500Pa's之间。所谓假 塑性,或剪切薄现象,就是物质粘度随着剪切频率的增加而降低。物质的假塑性, 可使物质能够顺利地通过注射针头。本发明的稳定性好,指微粒凝胶经过高温高压作用后,凝胶物理性能未发生 明显改变,其储能模量、耗能模量、相角及粘度等指标未发生明显变化。微粒凝 胶耐受高温高压作用的性能非常重要,可为凝胶提供一种可行的灭菌方法。另外, 稳定性好还体现在,往lg凝胶中加入含有33U透明质酸酶的磷酸盐缓冲液中, 37。C作用48小时之后,使用咔唑分析法(Carbazole)测定透明质酸浓度,计算 交联透明质酸凝胶的酶降解率为10-70%。本发明的生物相容性好,指细胞毒性低于2级,符合国家对生物材料的安全 性要求。本发明的生物可降解性,指被体内固有的酶,如透明质酸酶、糖苷酶等降解。 本发明彻底除去交联透明质酸凝胶的透析液,使用压力装置借助机械压力将 凝胶挤压通过多孔滤片,即可获得可注射的交联透明质酸微粒凝胶,该凝胶经高 压蒸汽灭菌后,预灌装于一次性无菌注射器中,可顺利通过针头注射到体内,可 用于组织填充。制备得到的用于组织填充的可注射交联透明质酸微粒凝胶是这样植入体内 的,高温灭菌后,预灌装于有刻度的无菌一次性注射器中,通过G27或G30号针头,缓慢注入体内,根据凹陷、皱褶的深度决定注射量,从而达到修复凹陷、填 充除皱和丰唇等美容效果。本发明的优点是稳定性好,经过高温高压处理后,仍能保留其原本的高度粘 弹性,具有抵抗酶降解能力,抵抗酶降解能力对凝胶导入体内后,在体内组织中存留的时间长,同时具生物可降解性、具生物相容性。 附图说明图l透明质酸透明质素的结构;图2在碱性条件下,透明质酸与双环氧化合物的反应式; 图3在酸性条件下,透明质酸与双环氧化合物的反应式; 图4本发明实施例1制备得到的微粒凝胶的细胞毒性试验结果。具体实施方式以下结合附图和实施例对本发明作进一歩说明。实施例1将l.Og细菌发酵来源的透明质酸钠干粉(分子量为IOO万道尔顿),其结构 如图1所示,溶解于10ral的0.2M NaOH溶液中,搅拌,使其彻底溶解,配制成 10.0% "/v)透明质酸碱性溶液,反应式如图2所示,加入丁二醇二縮水甘油醚 1.3g,充分搅拌。倒入每孔容积约为2.9ml的细胞培养用24孔板中,置于35'C 恒温箱6小时,即形成大小一致、形状规则的交联透明质酸凝胶块。取出凝胶块, 加入到浓度为0. 1M的5(kl盐酸溶液中,室温放置14小时,反应式如图3所示, 然后倒去盐酸溶液,用生理平衡液清洗、透析,在随后的5天内,更换10次生 理平衡液,每次用于透析的生理平衡液为500ml。除去生理平衡液,将交联透明 质酸凝胶块装入挤压装置中,利用5kg的正压力将凝胶块通过孔径为400u m的 多孔滤片挤出,块状凝胶变成微粒凝胶。使用咔唑分析法测定凝胶中透明质酸浓 度,为2. 18%。 实施例2将1.0g细菌发酵来源的透明质酸钠千粉(分子量为IOO万道尔顿)溶解于 10ml的O. 5M NaOH溶液中,搅拌,使其彻底溶解,配制成10. 0% (w/v)透明质 酸碱性溶液,加入丁二醇二缩水甘油醚1.0g,充分搅拌。倒入每孔容积约为2.9tnl 的细胞培养用24孔板中,置于35T:恒温箱6小时,即形成大小一致、形状规则 的交联透明质酸凝胶块,取出凝胶块,加入到浓度为O. lM的50ml盐酸溶液中, 室温放置14小时。然后倒去盐酸溶液,用生理平衡液清洗、透析,在随后的5天 内,更换10次生理平衡液,每次用于透析的生理平衡液为500ml。除去生理平衡液,将交联透明质酸凝胶块装入挤压装置中,利用5kg的正压力将凝胶块通过 孔径为400ym的多孔滤片挤出,块状凝胶变成微粒凝胶。使用咔唑分析法测定 凝胶中透明质酸浓度,为2.02%。 实施例3将l.Og细菌发酵来源的透明质酸钠干粉(分子量为120万道尔顿)溶解于 10ml的0.2M NaOH溶液中,搅拌,使其彻底溶解,配制成10. 0% (w/v)透明质 酸碱性溶液,加入乙二醇二縮水甘油醚1.2g,充分搅拌。倒入每孔容积约为2. 9ml 的细胞培养用24孔板中,置于37'C恒温箱4小时,即形成大小一致、形状规则 的交联透明质酸凝胶块。取出凝胶块,加入浓度为O. lM的50ml盐酸溶液中,室 温放置16小时。然后倒去盐酸溶液,用生理平衡液清洗、透析,在随后的5天 内,更换10次生理平衡液,每次用于透析的生理平衡液为500ml。除去生理平 衡液,将交联透明质酸凝胶块装入挤压装置中,利用5kg的正压力将凝胶块通过 孔径为400um的多孔滤片挤出,块状凝胶变成微粒凝胶。使用咔唑分析法测定 凝胶中透明质酸浓度,为2. 15%。 实施例4将1.0g细菌发酵来源的透明质酸钠干粉(分子量为120万道尔顿)溶解于 10ml的0.5M NaOH溶液中,搅拌,使其彻底溶解,配制成10. 0% (w/v)透明质 酸碱性溶液,加入乙二醇二縮水甘油醚1.0g,充分搅拌。倒入每孔容积约为2.9ml 的细胞培养用24孔板中,置于37'C恒温箱4小时,即形成大小一致、形状规则 的交联透明质酸凝胶块。取出凝胶块,加入到浓度为O. 1M的50ml盐酸溶液中, 室温放置16小时。然后倒去盐酸溶液,用生理平衡液清洗、透析,在随后的5 天内,更换IO次生理平衡液,每次用于透析的生理平衡液为500ml。除去生理 平衡液,将交联透明质酸凝胶块装入挤压装置中,利用5kg的正压力将凝胶块通 过孔径为500ym的多孔滤片挤出,块状凝胶变成微粒凝胶。使用咔唑分析法测 定凝胶中透明质酸浓度,为1.93%。 实施例5将2.0g细菌发酵来源的透明质酸钠干粉(分子量为IOO万道尔顿)溶解于 20ml的0.5M Na2C03溶液中,搅拌,使其彻底溶解,配制成10. 0% (w/v)透明质酸碱性溶液,加入丁二醇二缩水甘油醚2.6g,充分搅拌。倒入每孔容积约为 3.0ml的细胞培养用24孔板中,置于37。C恒温箱6小时,即形成大小一致、形 状规则的交联透明质酸凝胶块。取出凝胶块,加入到浓度为0. 1M的100ml硫酸 溶液中,室温放置14小时。然后倒去硫酸溶液,用生理平衡液清洗、透析,在 随后的5天内,更换10次生理平衡液,每次用于透析的生理平衡液为1000ml。 除去生理平衡液,将交联透明质酸凝胶块装入挤压装置中,利用5kg的正压力将 凝胶块通过孔径为500yni的多孔滤片挤出,块状凝胶变成微粒凝胶。使用咔唑 分析法测定凝胶中透明质酸浓度,为2.23%。 实施例6将l.Og细菌发酵来源的透明质酸钠干粉(分子量为100万道尔顿)溶解于 10ml的0.5M K0H溶液中,搅拌,使其彻底溶解,配制成10.0% (w/v)透明质 酸碱性溶液,加入丁二醇二缩水甘油醚l.Og,充分搅拌。倒入每孔容积约为 1.7ml的细胞培养用48孔板中,置于37'C恒温箱4小时,即形成大小一致、形 状规则的交联透明质酸凝胶块。取出凝胶块,加入到浓度为0. 1M的50ml磷酸 溶液中,37'C放置6小时。然后倒去磷酸溶液,用生理平衡液清洗、透析,在 随后的5天内,更换10次生理平衡液,每次用于透析的生理平衡液为500ml。 除去生理平衡液,将交联透明质酸凝胶块装入挤压装置中,利用5kg的正压力 将凝胶块通过孔径为500ym的多孔滤片挤出,块状凝胶变成微粒凝胶。使用咔 唑分析法测定凝胶中透明质酸浓度,为1.98%。 实施例7将1.0g细菌发酵来源的透明质酸钠干粉(分子量为120万道尔顿)溶解于 10ml的0.5MK0H溶液中,搅拌,使其彻底溶解,配制成10. 0% (w/v)透明质酸 碱性溶液,加入乙二醇二缩水甘油醚1.0g,充分搅拌。倒入每孔容积约为L7ml 的细胞培养用48孔板中,置于35'C恒温箱6小时,即形成大小一致、形状规则 的交联透明质酸凝胶块。取出凝胶块,加入到浓度为0. 2M的50ml醋酸溶液中, 室温放置14小时。然后倒去醋酸溶液,用生理平衡液清洗、透析,在随后的5 天内,更换10次生理平衡液,每次用于透析的生理平衡液为500ml。除去生理 平衡液,将交联透明质酸凝胶块装入挤压装置中,利用5kg的正压力将凝胶块通过孔径为600um的多孔滤片挤出,块状凝胶变成微粒凝胶。使用咔唑分析法测 定凝胶中透明质酸浓度,为1.95%。 对比例1将l.Og细菌发酵来源的透明质酸钠干粉(分子量为IOO万道尔顿)溶解于 10ml的0.2MNaOH溶液中,搅拌,使其彻底溶解,配制成10. 0% (w/v)透明质酸 碱性溶液,加入丁二醇二縮水甘油醚1.3g,充分搅拌。倒入每孔容积约为3.0ml 的细胞培养用24孔板中,置于35'C恒温箱6小时,即形成大小一致、形状规则 的交联透明质酸凝胶块。取出凝胶块,直接用生理平衡液清洗、透析,在随后的 5天内,更换10次生理平衡液,每次用于透析的生理平衡液为500ml。除去生理 平衡液,将交联透明质酸凝胶块装入挤压装置中,利用5kg的正压力将凝胶块通 过孔径为400ym的多孔滤片挤出,块状凝胶变成微粒凝胶。使用咔唑分析法测 定凝胶中透明质酸浓度,为1.46%。 对比例2将l.Og细菌发酵来源的透明质酸钠干粉(分子量为IOO万道尔顿)溶解于 10ml的0.5MNaOH溶液中,搅拌,使其彻底溶解,配制成10. 0% (w/v)透明质酸 碱性溶液,加入丁二醇二縮水甘油醚1.0g,充分搅拌。倒入每孔容积约为3. Oml 的细胞培养用24孔板中,置于35'C恒温箱6小时,即形成大小一致、形状规则 的交联透明质酸凝胶块。取出凝胶块,直接用生理平衡液清洗、透析,在随后的 5天内,更换10次生理平衡液,每次用于透析的生理平衡液为500inl。除去生理 平衡液,将交联透明质酸凝胶块装入挤压装置中,利用5kg的正压力将凝胶块通 过孔径为400pm的多孔滤片挤出,块状凝胶变成微粒凝胶。使用咔唑分析法测 定凝胶中透明质酸浓度,为1. 21%。分析酸溶液处理对交联透明质酸凝胶性能的影响:对实施例l一实施例7、对比例1和对比例2制备得到的交联透明质酸微粒 凝胶进行浓度测定、流变学性能测定和体外透明质酸酶降解试验等分析。采用咔 唑法测定糖醛酸含量,可推算得到透明质酸凝胶浓度。流变学性能的测定,于 0. 05-10Hz及25'C下,采用流变仪(AR 2000e,美国TA公司)测定各凝胶的储 能模量G'、耗能模量G"、相角S以及复数粘度n*。体外透明质酸酶降解试验,各取lg凝胶于含有33U透明质酸酶的磷酸盐缓冲液5ml中,37T:作用48 小时之后,使用咔挫分析法测定降解液中糖醛酸浓度,推算交联透明质酸凝胶的 降解率。结果见表l。表1酸溶液处理对交联透明质酸凝胶性能的影响实施例 浓度 流变性能(0.05 —10Hz) 酶降解率 G' (Pa) G" (Pa) S Tf (Pa.s) 实施例1 2.18% 1152-1605 128-160 4.6°- 7.9° 3080-32 23.4%实施例2 2.02% 901-1256 102-124 4.7。- 7.9° 2890-20 31.1%实施例3 2. 15% 】】6卜1622 】22-167 4.7。- 7.9° 3100-35 23.2%实施例4 1. 93% 1012-1278 98-115 4.8。-8.0° 2634-23 34.8%实施例5 2. 23% 1233-1823 142-186 4.5°- 7.8° 3300-40 18.5%实施例6 1.98% 968-1377 4.8。- 2987-24 33.5%实施例7 1.95% 885-1165 88-120 4,9。-8.1° 2881-19 36.7%对比例1 1.46% 502-766 121-79 5.9。誦13.5° 2012-12 58.5%对比例2 1.21% 255-390 42-57 8.3。-11.7° 1017-6 76.7%结果表明,制备交联透明质酸凝胶时,用酸处理凝胶块可显著提高交联透明 质酸凝胶的终浓度、粘弹性和稳定性。另外,流变学性能结果还显示用于组织填 充的交联透明质酸微粒凝胶具有高度粘弹性和假塑性。分析高温处理对交联透明质酸凝胶性能的影响:将实施例l、实施例2制备得到的交联透明质酸微粒凝胶进行高温(121°C, 30min)处理,于0.05-10Hz及35'C下,采用流变仪测定灭菌前后凝胶的储能模 量G'、耗能模量G"、相角S以及复数粘度11*。同时,各取lg凝胶于含有 33U透明质酸酶的磷酸盐缓冲液5ral中,37'C作用48小时之后,使用咔唑分析 法测定降解液中糖醛酸浓度,推算交联透明质酸凝胶的降解率。结果如表2。表2高温处理对交联透明质酸凝胶性能的影响 实施例1 实施例2 高温处理前 高温处理后 高温处理前 高温处理后流变性能 (0.05 G, 1152-1605 Pa 1015-1556 Pa 901-1256 Pa 855-1179 Pa G" 128-160 Pa 121-172 Pa 102-124 Pa 106-134 Pa12<table>table see original document page 13</column></row> <table>结果表明,高温处理凝后,交联透明质酸凝胶的流变性性能变化不明显,抗 酶降解能力有所下降,但下降程度仍属可接受水平。用于组织填充的交联透明质酸微粒凝胶的微粒大小及其分布测定: 对实施例l、实施例2制备得到的交联透明质酸微粒凝胶,使用激光散射仪(LS 300)测定其微粒的大小及其分布。并以美国FDA批准上市的、以丁二醇二 缩水甘油醚制备的的软组织填充用产品Restylane (Q-MED公司)、Juvederm(LEA Derm公司)作为对照,结果如表3。表3与国外市售产品微粒大小及分布的比较<table>table see original document page 13</column></row> <table>结果表明,本发明的微粒凝胶的微粒大小及其分布与市售同类产品一致,具 有良好的可注射能力。交联透明质酸微粒凝胶细胞相容性的测定:将实施例1制备得到的交联透明质酸微粒凝胶经过蒸汽高压灭菌后,依照国家医疗器械生物学评价规定的方法进行细胞毒性试验。采用MTT法、浸提液方式,检测凝胶的细胞毒性,结果发现实施例1的透明质酸凝胶组的细胞增殖率接近于阴性对照组,细胞毒性为l级,如图4所示,表明本发明的交联透明质酸微 粒凝胶适用于人体组织填充。

Claims (7)

1.一种用于组织填充的交联透明质酸微粒凝胶的制备方法,其特征在于,其步骤为: 第一步.将分子量为50-300万道尔顿的透明质酸原料溶解于pH>10、浓度为0.05-4.0M碱性溶液中,配制成5-20%透明质酸碱性溶液,加入交联剂,交联剂与透明质酸原料重量份配比为15∶1-1∶5,在多孔模具容器中,经交联反应,反应温度为25℃-50℃,反应时间为2小时-12小时,得到交联透明质酸凝胶块; 第二步.将交联透明质酸凝胶块加入到浓度为0.01-2M、pH值<5的酸性溶液中,酸性溶液的量与凝胶块重量份配比为1∶1-10∶1,室温放置2小时-24小时,然后倒去盐酸溶液,用生理平衡液清洗、透析,在至少2天内,更换6次以上生理平衡液,每次用于透析的生理平衡液量为凝胶体积的5-50倍,得到透明质酸浓度为0.5%-4.0%凝胶块; 第三步.利用不锈钢挤压装置,利用2kg-8kg的正压力将凝胶块通过孔径为50μm-2000μm的多孔滤片挤出,将块状凝胶挤碎成高度粘弹性的微粒凝胶。
2. 根据权利要求1所述的一种用于组织填充的交联透明质酸微粒凝胶的制备方 法,其特征在于,所述的透明质酸原料为细菌发酵来源的透明质酸盐,可选 自透明质酸钠、透明质酸钾或透明质酸钙。
3. 根据权利要求1所述的一种用于组织填充的交联透明质酸微粒凝胶的制备方 法,其特征在于,所述的碱性溶液为NaOH、 K0H或者Na2C(V溶液。
4. 根据权利要求1所述的一种用于组织填充的交联透明质酸微粒凝胶的制备方 法,其特征在于,所述的交联剂为双环氧化物。
5. 根据权利要求4所述的一种用于组织填充的交联透明质酸微粒凝胶的制备方 法,其特征在于,所述的双环氧化物为l, 3-丁二烯二环氧化物、1, 2, 7, 8-二环氧辛烷、1, 5-己二烯二环氧化物;乙二醇二缩水甘油醚、丁二醇二缩 水甘油醚、聚丙二醇二縮水甘油醚等二縮水甘油醚。其中特别优选使用乙二醇二縮水甘油醚和丁二醇二縮水甘油醚。
6. 根据权利要求1所述的一种用于组织填充的交联透明质酸微粒凝胶的制备方 法,其特征在于,所述的多孔模具容器的每孔容积为0.5 ml-10ml,各孔大小一致,形状相同,其材质为玻璃、塑料、聚四氟乙烯或不锈钢。所述的多 孔模具容器可选自细胞培养用12孔板、24孔板或48孔板。
7. 根据权利要求1所述的一种用于组织填充的交联透明质酸微粒凝胶的制备方 法,其特征在于,所述的酸性溶液为盐酸、硫酸、磷酸或醋酸溶液。
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