CN112656854B - 一种防治鱼类内脏白点病的中药组合物及其制备方法和应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种防治鱼类内脏白点病的中药组合物及其制备方法和应用。本发明的中药组合物，由以下重量份数的组分组成：诃子1～5份，赤芍1～5份，金银花5～15份，半枝莲5～15份，白花蛇舌草10～50份，鸡骨草5～15份，甘草1～5份。本发明中药组合物能有效消除病鱼体充血、出血、腹水和内脏结节等内脏白点病症状，具有配方合理，起效快，安全无毒、疗效稳定等特点。

Description

一种防治鱼类内脏白点病的中药组合物及其制备方法和应用

技术领域

本发明属于水产药物领域，具体涉及一种防治鱼类内脏白点病的中药组合物及其制备方法和应用。

背景技术

鱼类典型“内脏白点病”的症状：病鱼无活力，反应迟钝。解剖发现脾、肾脏、肝脏等内部器官上长满白点，并伴随腹水症状。对发病鱼进行组织病理观察，发病鱼肝、脾、肾等内脏组织都出现明显损伤，表现出不同程度的充血、出血、坏死等。随着病原菌在鱼体内大量增殖，鱼全身多器官组织的细胞出现坏死溶解，最终导致感染鱼因多组织器官的功能衰竭而死亡。例如，大 黄 鱼 白 点 病 感 染 率 达 70% ～ 80% ，病原菌有变形假单胞菌或维氏气单胞菌，主要在低温时发病，目前尚无有效防治方法。大黄鱼“内脏白点病”是近年影响大黄鱼养殖的重要细菌性疾病，已成为制约大黄鱼养殖产业发展的屏障。当前渔药市场上仍未见已研制开发的防治鱼类“内脏白点病”的安全、高效、绿色环保的植物源中草药复方。

因此，提供一种安全、高效、绿色环保的防治鱼类“内脏白点病”的植物源中药组合物是本领域技术人员亟待解决的技术难题。

发明内容

本发明的第一目的是，针对现有技术中的不足，提供一种防治鱼类内脏白点病的中药组合物。

本发明的第二目的是，提供上述中药组合物的制备方法。

本发明的第三目的是，提供上述中药组合物的用途。

为了实现上述第一个目的，本发明采取的技术方案是：

一种防治鱼类内脏白点病的中药组合物，由以下重量份数的组分组成：诃子1～5份，赤芍 1～5份，金银花5～15份，半枝莲5～15份，白花蛇舌草10～50份，鸡骨草5～15份，甘草1～5份。

优选地，所述中药组合物由以下重量份数的组分组成：诃子1.5～3.5份，赤芍2～4份，金银花5～10份，半枝莲10～15份，白花蛇舌草20～30份，鸡骨草5～10份，甘草3～5份。

优选地，所述中药组合物由以下重量份数的组分组成：诃子1份，赤芍3份，金银花10份，半枝莲10份，白花蛇舌草30份，鸡骨草10份，甘草5份。

为了实现上述第二目的，本发明的技术方案是：

如上任一所述中药组合物的制备方法。

优选地，所述制备方法包括如下步骤：

S1.按照用量比，将半枝莲、白花蛇舌草、鸡骨草加水煎煮，静置，滤过，滤液浓缩至清膏备用；

S2.按照用量比，将诃子、赤芍、金银花、甘草，用70%乙醇回流，回收乙醇、滤过，滤液浓缩至清膏备用；

S3.将步骤S2中的药渣再加水提取，回收乙醇、滤过，滤液浓缩至清膏备用；

S4.合并步骤S1、S2和S3的三种清膏，浓缩至稠膏，减压干燥，冷冻粉碎成细粉，制备成防治鱼类内脏白点病的中药组合物。

进一步地，S1中水的用量为半枝莲、白花蛇舌草、鸡骨草体积的1~2倍；步骤S2中70%乙醇的用量为诃子、赤芍、金银花、甘草体积的1.5倍。

进一步地，步骤S1中滤液浓缩至相对密度60℃的波美度1.25～1.28的清膏备用；步骤S2中滤液浓缩至相对密度60℃的波美度1.25～1.28的清膏备用；步骤S3中滤液浓缩至相对密度60℃的波美度1.25～1.28的清膏备用；步骤S4中三种清膏，浓缩至相对密度为60℃的波美度1.25～1.28的稠膏。

优选地，所述制备方法包括如下步骤：

S1.按照用量比，将诃子、赤芍,采用冷冻超微粉碎机进行粉碎，粉碎至300目以上的超微粉，备用；

S2.按照用量比，将金银花、白花蛇舌草、鸡骨草、半枝莲、甘草，用70%乙醇，回收乙醇、滤过，滤液浓缩至清膏备用；

S3.将步骤S2的药渣再加水提取，回收乙醇、滤过，滤液浓缩至清膏备用；

S4.合并步骤S1的超微粉、步骤S2和S3的两种清膏，经减压干燥，冷冻粉碎成细粉，制备成防治鱼类内脏白点病的中药组合物。

进一步地，步骤S2中70%乙醇的用量为金银花、白花蛇舌草、鸡骨草、半枝莲、甘草体积的1.5倍。

进一步地，步骤S2中滤液浓缩至相对密度60℃的波美度1.25～1.28的清膏备用；步骤S3中滤液浓缩至相对密度60℃的波美度1.25～1.28的清膏备用。

为了实现上述第三目的，本发明的技术方案是：

如上任一所述中药组合物在制备防治鱼类内脏白点病药物中的应用。

本发明的中药组合物中各中药成分的特性如下：

诃 子：本品为使君子科植物诃子Terminalia chebula Retz. 的干燥成熟果实。其化学成分含鞣质、诃子素、诃子酸、没食子酸、鞣酸酶、多酚氧化酶、过氧化物酶、抗坏血酸氧化酶等成分，具有抗菌、抗氧化、收敛、止泻之功效。

赤 芍：本品为毛茛科植物川赤芍Paeonia veitchii Lynch.的干燥根。具有清热凉血，活血祛瘀的功效。

金银花：本品为忍冬科忍冬属植物忍冬Lonicera japonica Thunb.的花蕾或带初开的花。具有清热解毒，消炎退肿，抗菌、抗毒、抗炎、解热、促进炎性细胞吞噬功能、增强机体免疫功能作用。

半枝莲：本品为唇形科植物半枝莲Scutellaria barbata D. Don.的全草，性寒味酸。全草含多种维生素、微量元素及氨基酸等成分。有凉血解毒，散瘀止痛，消肿和清热利湿之功效。

白花蛇舌草：本品为茜草科耳草属的植物白花蛇舌草Oldenlandia diffusa(Willd) Roxb.的干燥全草，主要含对乙烯基苯酚、对乙烯基愈创木酚和芳樟醇。具有增强免疫功能和抗菌作用。

鸡骨草：本品为豆科植物广州相思子Abrus cantoniensis Hance的干燥带根全草。主要含相思子碱、胆碱、大黄醌、大黄素甲醚、鸡骨草三醇等。另含相思子皂醇、大黄酚和大黄素甲醚等成分。具有保肝作用、抗炎及增强免疫作用。

甘草：本品为豆科植物甘草Glycyrrhiza uralensis Fisch.的干燥根及根茎，主要含甘草苷、甘草酸、甘草甜素、甘草香豆精、光果甘草苷元、异甘草黄酮醇、三萜皂苷、香豆素等成分。具有补脾益气、止咳祛痰、缓急定痛、调和药性的作用。

采用上述方案后，本发明具有以下优点：

中医药学认为，细菌外邪或湿热内蕴为主，邪气阻滞气血运行、气血失和、瘀阻自生。鱼类内脏白点病是肝肾罴极之本失调，从而表现为肝肾肿大乃至体表出血而亡。一般早期宜袪邪为主，扶正为辅，强调扶正不留邪，袪邪不伤正，攻补兼施。本发明以上述中医药学理论为基础，科学合理地配制原料中的各组分中草药复方和用量，使各组分的药效能够有机的结合起来，综合发挥药用效果，防治效果好，毒副反应小。本发明取诃子和赤芍抗菌、袪毒、止血，金银花活血、散瘀，半枝莲袪毒消肿、消炎止痛、保肝护肝，白花蛇舌草清热解毒、消痛散结，鸡骨草清热解毒、疏肝止痛之功效，甘草清热解毒、补脾益气、调和诸药之功效。本药方在养殖生产上，依据不同使用时期来调整配方，预防期以金银花、半枝莲为主药；轻症期，以白花蛇舌草、鸡骨草为主药；重症期，以白花蛇舌草、赤芍、鸡骨草、半枝莲为主药。

本发明的中药组合物能有效消除病鱼充血、出血症状和腹水症状，促进肝脏代谢，减少脾、肾脏、肝脏等内部器官上形成白点，起效快、安全无毒、疗效稳定等特点。在网箱养殖用药后观察，病鱼摄食情况均有好转，摄食量明显增加，病症明显减轻，疗效好且无毒副作用。在4~10月发病季节拌于饲料中低剂量喂服，可有效预防鱼类内脏白点病的爆发。

本发明的中药组合物在制备过程中将浸提与冷冻超微粉碎相结合，使中药组合物的有效成分含量高，而且经过超微粉碎，中药组合物的有效成分更有利于鱼体吸收，最大程度地发挥中草药复方作用，疗效显著，而且制备操作易行，有利于工业化大规模生产。

具体实施方式

下面结合具体实施方式，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。此外应理解，在阅读了本发明记载的内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。

实施例1 配方1

本实施例用于防治鱼类内脏白点病的中药组合物，由以下重量的组分组成：诃子3g，赤芍1g，金银花10g，半枝莲10g，白花蛇舌草20g，鸡骨草10g，甘草2g。

本实施例的用于防治鱼类内脏白点病中药组合物的制备方法（一），包括如下步骤：

S1.按照用量比，将半枝莲、白花蛇舌草、鸡骨草加水15倍量煎煮二次，每次1.5小时，合并煎液，静置，滤过，滤液浓缩至相对密度60℃的波美度1.25～1.28的清膏备用；

S2.按照用量比，将诃子、赤芍、金银花、甘草，用质量百分比70%乙醇回流三次，每次2小时，合并提取液，回收乙醇、滤过，滤液浓缩至相对密度60℃的波美度1.25～1.28的清膏备用；

S3.将步骤S2中的药渣再加水提取三次，每次1小时，合并提取液，回收乙醇、滤过，滤液浓缩至相对密度60℃的波美度1.25～1.28的清膏备用；

S4.合并步骤S1、S2和S3的三种清膏，浓缩至相对密度为60℃的波美度1.25～1.28的稠膏，减压干燥，冷冻粉碎成细粉，制备成防治鱼类内脏白点病的中药组合物。

本实施例的用于防治鱼类内脏白点病中药组合物的制备方法（二），包括如下步骤：

S1.按照用量比，将诃子、赤芍,采用冷冻超微粉碎机进行粉碎，粉碎至300目以上的超微粉，备用；

S2.按照用量比，将半枝莲、金银花、白花蛇舌草、鸡骨草、甘草，用质量百分比70%乙醇回流三次，每次2小时，合并提取液，回收乙醇、滤过，滤液浓缩至相对密度60℃的波美度1.25～1.28的清膏备用；

S3.将步骤S2的药渣再加水提取三次，每次1小时，合并提取液，回收乙醇、滤过，滤液浓缩至相对密度60℃的波美度1.25～1.28的清膏备用；

合并步骤S1的超微粉、步骤S2和S3的两种清膏，经减压干燥，冷冻粉碎成细粉，制备成防治鱼类内脏白点病的中药组合物。

用法用量：预防时，本品500g拌入250kg饲料，投喂30天；治疗时，本品500g拌入10kg饲料，投喂3~5天。

实施例2 配方2

本实施例用于防治鱼类内脏白点病的中药组合物，由以下重量的组分组成：诃子2g，赤芍3g，金银花5g，半枝莲5g，白花蛇舌草20g，鸡骨草15g，甘草2g。

制备方法：参考实施例1中的制备方法（一）和（二）

用法用量：预防时，本品500g拌入250kg饲料，投喂30天；治疗时，本品500g拌入10kg饲料，连续投喂3~5天。

实施例3 配方3

本实施例用于防治鱼类内脏白点病的中药组合物，由以下重量的组分组成：诃子5g，赤芍1g，金银花5g，半枝莲5g，白花蛇舌草28g，鸡骨草10g，甘草3g。

制备方法：参考实施例1中的制备方法（一）和（二）

用法用量：预防时，本品500g拌入250kg饲料，投喂30天；治疗时，本品500g拌入10kg饲料，投喂3~5天。

实施例4 配方4

本实施例用于防治鱼类内脏白点病的中药组合物，由以下重量的组分组成：诃子2g，赤芍5g，金银花15g，半枝莲10g，白花蛇舌草30g，鸡骨草5g，甘草3g。

制备方法：参考实施例1中的制备方法（一）和（二）

用法用量：预防时，本品500g拌入250kg饲料，投喂30天；治疗时，本品500g拌入10kg饲料，投喂3~5天。

实施例5 配方5

本实施例用于防治鱼类内脏白点病的中药组合物，由以下重量的组分组成：诃子4g，赤芍2g，金银花15g，半枝莲15g，白花蛇舌草10g，鸡骨草5g，甘草5g。

制备方法：参考实施例1中的制备方法（一）和（二）

用法用量：预防时，本品500g拌入250kg饲料，投喂30天；治疗时，本品500g拌入10kg饲料，投喂3~5天。

实施例6 配方6

本实施例用于防治鱼类内脏白点病的中药组合物，由以下重量的组分组成：诃子1g，赤芍4g，金银花10g，半枝莲10g，白花蛇舌草15g，鸡骨草10g，甘草5g。

制备方法：参考实施例1中的制备方法（一）和（二）

用法用量：预防时，本品500g拌入250kg饲料，投喂30天；治疗时，本品500g拌入10kg饲料，投喂3~5天。

实施例7 配方7

本实施例用于防治鱼类内脏白点病的中药组合物，由以下重量的组分组成：诃子1g，赤芍3g，金银花5g，半枝莲5g，白花蛇舌草25g，鸡骨草5g，甘草3g。

制备方法：参考实施例1中的制备方法（一）和（二）

用法用量：预防时，本品500g拌入250kg饲料，投喂30天；治疗时，本品500g拌入10kg饲料，投喂3~5天。

实施例8 配方8

本实施例用于防治鱼类内脏白点病的中药组合物，由以下重量的组分组成：诃子1g，赤芍1g，金银花10g，半枝莲15g，白花蛇舌草35g，鸡骨草7g，甘草1g。

制备方法：参考实施例1中的制备方法（一）和（二）

用法用量：预防时，本品500g拌入250kg饲料，投喂30天；治疗时，本品500g拌入10kg饲料，投喂3~5天。

实施例9 配方9

本实施例用于防治鱼类内脏白点病的中药组合物，由以下重量的组分组成：诃子3g，赤芍5g，金银花5g，半枝莲5g，白花蛇舌草40g，鸡骨草10g，甘草1g。

制备方法：参考实施例1中的制备方法（一）和（二）

用法用量：预防时，本品500g拌入250kg饲料，投喂30天；治疗时，本品500g拌入10kg饲料，投喂3~5天。

实施例10 本发明中药组合物的药效试验

1、药方的体外抑菌效果

实验目的：选择5株有代表性的致病菌（本研究室从内脏白点病鱼内脏中分离出的、攻毒死亡率高于85%的致病菌：维氏气单胞菌9L2（Aeromonas Veronica 9L2）、变形假单胞菌9G2（Pseudomonas Proteus 9G2）、溶藻弧菌9A2（Vibrio alginolyticus 9A2）、创伤弧菌9H1（Vibrio vulnificus 9H1）、河流弧菌82216E2（Vibrio fluvialis 82216E2）），测定不同配方中药组合物（本实施例3、6、8对应的中药组合物）的体外抑菌作用，考察本专利药方的抑菌效果。

实验方法：采用琼脂稀释法，将不同药方（本实施例3、6、8对应的中药组合物）配制成不同浓度梯度的含药培养基。每个药物浓度梯度做两组平行试验，对照组为不加中药的TSA琼脂培养基。取2 μL制备好的菌悬液点种于含药培养基后倒置于28 ℃恒温箱培养，分别于24 h、48 h后记录培养基上菌落的生长情况，并计算最低抑菌浓度（minimuminhibitory concentration，MIC）及计算最低杀菌浓度（minimum bactericidalconcentration，MBC）值。

实验结论：本实施例3、6、8中的中药组合物（配方3、6、8）对5株致病菌的体外抑菌及杀菌作用均较好，抑菌浓度范围为0.90~3.60 mg/mL。

表1 本专利药方对5株致病菌的体外抑菌浓度

2、药方口服的安全性试验

实验目的：观察健康鱼低剂量服用本发明中药组合物所发生的毒副反应程度及生长影响，为客观评价其用药安全性提供科学依据。

实验方法：选用本发明实施例2、5、9对应的中药组合物（配方2、5、9），添加剂量为2‰，在养殖箱中分别投喂30天，每个配方设计3个平行组。到期从每个养殖箱中随机捞取50尾称重，利用SPSS25.0软件进行统计分析。

实验结论：给予本发明的中药组合物对健康鱼摄食行为和外观无明显的毒性影响，鱼的摄食力略有增加，可以促进鱼的生长。

表2 本发明的中草药复方对健康鱼生长性能的影响

3、药方防治白点病的有效性试验

实验目的：在养殖生产中，使用本专利药方的高剂量制作成药饵，再投喂病鱼进行疗效验证。

实验方法：选取本实施例1、4、7中对应的中药组合物（配方1、4、7），添加剂量为2%，分别各投喂3个养殖箱。一个疗程为药饵投喂5天停2天，记录死亡情况，连续三个疗程后，随机抽取每个养殖箱中50尾鱼，利用SPSS25.0软件进行统计分析本发明复方的疗效。

实验结论：对病鱼投喂药饵试验组，每尾平均质量明显增加，死亡率显著降低，保护率达到75%以上，疗效突出。

表3 高剂量药饵饲喂的疗效

综上，本发明中药组合物对鱼类内脏白点病致病菌的体外抑菌及杀菌作用均较好，能有效消除病鱼充血、出血症状和腹水症状，促进肝脏代谢，减少脾、肾脏、肝脏等内部器官上形成白点，起效快、安全无毒、疗效稳定等特点。给予本发明的中药组合物对健康鱼摄食行为和外观无明显的毒性影响，鱼的摄食力略有增加，可以促进鱼的生长。对病鱼投喂药饵试验组，每尾平均质量明显增加，死亡率显著降低，保护率达到75%以上，疗效突出。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和补充，这些改进和补充也应视为本发明的保护范围。

Claims (10)

1.一种防治鱼类内脏白点病的中药组合物，其特征在于，所述中药组合物由以下重量份数的组分组成：诃子1～5份，赤芍1～5份，金银花5～15份，半枝莲5～15份，白花蛇舌草10～50份，鸡骨草5～15份，甘草1～5份，所述鱼类内脏白点病的病原为维氏气单胞菌、变形假单胞菌、溶藻弧菌、创伤弧菌或河流弧菌中的一种或多种。

2.如权利要求1所述的中药组合物，其特征在于，所述中药组合物由以下重量份数的组分组成：诃子1.5～3.5份，赤芍2～4份，金银花5～10份，半枝莲10～15份，白花蛇舌草20～30份，鸡骨草5～10份，甘草3～5份。

3.如权利要求1所述的中药组合物，其特征在于，所述中药组合物由以下重量份数的组分组成：诃子1份，赤芍3份，金银花10份，半枝莲10份，白花蛇舌草30份，鸡骨草10份，甘草5份。

4.一种如权利要求1~3任一所述中药组合物的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：

S1.按照用量比，将半枝莲、白花蛇舌草、鸡骨草加水煎煮，静置，滤过，滤液浓缩至清膏备用；

S2.按照用量比，将诃子、赤芍、金银花、甘草，用70%乙醇回流，回收乙醇、滤过，滤液浓缩至清膏备用；

S3.将步骤S2中的药渣再加水提取，回收乙醇、滤过，滤液浓缩至清膏备用；

S4.合并步骤S1、S2和S3的三种清膏，浓缩至稠膏，减压干燥，冷冻粉碎成细粉，制备成防治鱼类内脏白点病的中药组合物。

5.一种如权利要求1~3任一所述中药组合物的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：

S1.按照用量比，将诃子、赤芍,采用冷冻超微粉碎机进行粉碎，粉碎至300目以上的超微粉，备用；

S2.按照用量比，将金银花、白花蛇舌草、鸡骨草、半枝莲、甘草，用70%乙醇，回收乙醇、滤过，滤液浓缩至清膏备用；

S3.将步骤S2的药渣再加水提取，回收乙醇、滤过，滤液浓缩至清膏备用；

S4.合并步骤S1的超微粉、步骤S2和S3的两种清膏，经减压干燥，冷冻粉碎成细粉，制备成防治鱼类内脏白点病的中药组合物。

6.一种如权利要求4所述的中药组合物制备方法，其特征在于，所述步骤S1中水的用量为半枝莲、白花蛇舌草、鸡骨草体积的1~2倍；所述步骤S2中70%乙醇的用量为诃子、赤芍、金银花、甘草体积的1.5倍。

7.一种如权利要求4所述的中药组合物制备方法，其特征在于，所述步骤S1中滤液浓缩至相对密度60℃的波美度1.25～1.28的清膏备用；所述步骤S2中滤液浓缩至相对密度60℃的波美度1.25～1.28的清膏备用；所述步骤S3中滤液浓缩至相对密度60℃的波美度1.25～1.28的清膏备用；所述步骤S4中三种清膏，浓缩至相对密度为60℃的波美度1.25～1.28的稠膏。

8.一种如权利要求5所述的中药组合物制备方法，其特征在于，所述步骤S2中70%乙醇的用量为金银花、白花蛇舌草、鸡骨草、半枝莲、甘草体积的1.5倍。

9.一种如权利要求5所述的中药组合物制备方法，其特征在于，所述步骤S2中滤液浓缩至相对密度60℃的波美度1.25～1.28的清膏备用；所述步骤S3中滤液浓缩至相对密度60℃的波美度1.25～1.28的清膏备用。

10.如权利要求1~3任一所述的中药组合物在制备防治鱼类内脏白点病药物中的应用。