CN112294889B - 一种鳗鱼爱德华氏菌病防治药物及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种鳗鱼爱德华氏菌病防治药物及其制备方法，药物配方如下：五倍子1～5份，黄芩1～5份，白芷1～5份，虎杖5～15份，穿心莲5～15份，白花蛇舌草10～50份，鱼腥草5～30份，鸡骨草5～15份，马齿苋5～50份，甘草5～30份；本方取五倍子和黄芩抗菌、袪毒、止血，白芷的化瘀排脓、生肌止痛，虎杖活血、散瘀，穿心莲和马齿苋袪毒消肿、消炎止痛、保肝护肝，白花蛇舌草清热解毒、消痛散结，鱼腥草抗菌、增强免疫，鸡骨草清热解毒、疏肝止痛之功效，甘草清热解毒、补脾益气、调和诸药之功效，能有效消除鳗鱼胸鳍臀鳍体表出血、肝肾肿大、淤血、溃疡、胃肠积液等病症，具有配方合理，起效快，安全无毒、疗效稳定等特点。

Description

一种鳗鱼爱德华氏菌病防治药物及其制备方法
【技术领域】
本发明涉及一种渔药，特别是涉及一种防治爱德华氏菌感染引起鳗鱼胸鳍臀鳍充血发红、肝肾肿大、淤血、溃疡、胃肠积液等病症的鳗鱼细菌性疾病防治药物及其制备方法。
【背景技术】
爱德华氏菌病又称肝肾病，多见于日本鳗、欧鳗、美洲鳗，流行季节为夏季高温期，春季苗种培育期因开口活饵料丝蚯蚓带入亦而时常发生，白仔、黑仔期为急性病，幼鳗、成鳗期为慢性病。病原体为迟钝爱德华氏菌、浙江爱德华氏菌、或福建爱德华氏菌，是鳗鱼养殖病害的主要病原之一。爱德华氏菌分类学上属于肠杆菌科爱德华氏菌属，为革兰氏阴性杆菌，广泛分布于鱼类、爬虫类和水体中。长期以来一直使用抗生素和化学合成类抗菌药防治爱德华氏菌感染引起的疾病，但是由于大范围长时间使用抗菌药物造成爱德华氏菌的耐药性不断增强，且目前国际上严格限制鳗鱼产品中的化学药物残留量，导致鳗鱼养殖生产中出现无药可用的现状，一旦感染爱德华氏菌，将造成鳗鱼大批死亡，经济损失巨大。当前渔药市场上仍未见已研制开发的防治爱德华氏菌感染的高效、绿色环保、安全的植物源药物。
【发明内容】
本发明目的之一在于提供一种药用功效发挥充分、起效快、易于吸收的鳗鱼爱德华氏菌病防治药物。
为实现上述目的，本发明的技术解决方案是：
一种鳗鱼爱德华氏菌病防治药物，所述药物的原料组分及其重量份含量如下：五倍子1～5份，黄芩1～5份，白芷1～5份，虎杖5～15份，穿心莲5～15份，白花蛇舌草10～50份，鱼腥草5～30份，鸡骨草5～15份，马齿苋5～50份，甘草5～30份。
进一步地，所述药物的原料组分及其重量份含量如下：五倍子1.5～3.5份，黄芩2～4份，白芷2～4份，虎杖5～10份，穿心莲10～15份，白花蛇舌草20～30份，鱼腥草10～20份，鸡骨草5～10份，马齿苋10～30份，甘草10～20份。
进一步地，所述药物的原料组分及其重量份含量如下：五倍子1份，黄芩3份，白芷2份，虎杖10份，穿心莲10份，白花蛇舌草30份，鱼腥草10份，鸡骨草10份，马齿苋10份，甘草20份。
本发明的目的之二在于提供一种制备操作简单、易行、有利于工业化大规模生产的鳗鱼爱德华氏菌病防治药物的制备方法。
为实现上述目的，本发明的技术解决方案是：
一种鳗鱼爱德华氏菌病防治药物的制备方法，包括以下步骤：
步骤(11)、按照用量比，将五倍子、黄芩、白花蛇舌草、鸡骨草加水10倍量煎煮三次，每次1.5小时，合并煎液，静置，滤过，滤液浓缩至相对密度60℃的波美度1.25～1.28的清膏备用；
步骤(12)、按照用量比，将白芷、虎杖、鱼腥草、穿心莲、马齿苋、甘草，用质量百分比70％乙醇回流三次，每次2小时，合并提取液，回收乙醇、滤过，滤液浓缩至相对密度60℃的波美度1.25～1.28的清膏备用；
步骤(13)、将步骤(12)中的药渣再加水提取三次，每次1小时，合并提取液，回收乙醇、滤过，滤液浓缩至相对密度60℃的波美度1.25～1.28的清膏备用；
步骤(14)、合并步骤(11)、(12)和(13)的三种清膏，浓缩至相对密度为60℃的波美度1.35～1.38的稠膏，减压干燥，冷冻粉碎成细粉，制备成防治鳗鱼爱德华氏菌病的药物组合物。
本发明的目的之三在于提供另一种制备操作简单、易行、有利于工业化大规模生产的鳗鱼爱德华氏菌病防治药物的制备方法。
为实现上述目的，本发明的技术解决方案是：
一种鳗鱼爱德华氏菌病防治药物的制备方法，包括以下步骤：
步骤(21)、按照用量比，将五倍子、白芷、虎杖、黄芩,采用冷冻超微粉碎机进行粉碎，粉碎至300目以上的超微粉，备用；
步骤(22)、按照用量比，将白花蛇舌草、鸡骨草、鱼腥草、穿心莲、马齿苋、甘草，用质量百分比70％乙醇回流三次，每次2小时，合并提取液，回收乙醇、滤过，滤液浓缩至相对密度60℃的波美度1.25～1.28的清膏备用；
步骤(23)、将步骤(22)的药渣再加水提取三次，每次1小时，合并提取液，回收乙醇、滤过，滤液浓缩至相对密度60℃的波美度1.25～1.28的清膏备用；
步骤(24)、合并步骤(21)的超微粉、步骤(22)和(23)的两种清膏，经减压干燥，冷冻粉碎成细粉，制备成防治鳗鱼爱德华氏菌病的药物组合物。
本发明具有如下优点：
(1)本发明以中医药学理论为基础(如中医药学认为，细菌外邪或湿热内蕴为主，邪气阻滞气血运行、气血失和、瘀阻自生。本病是肝肾罴极之本失调，从而表现为肝肾肿大乃至体表出血而亡。一般早期宜袪邪为主，扶正为辅，强调扶正不留邪，袪邪不伤正，攻补兼施)科学合理地配置原料中的各组分药物和用量，使各组分的药效能够有机的结合起来，综合发挥药用效果，药物的防治效果好，毒副反应小。本方取五倍子和黄芩抗菌、袪毒、止血，白芷的化瘀排脓、生肌止痛，虎杖活血、散瘀，穿心莲和马齿苋袪毒消肿、消炎止痛、保肝护肝，白花蛇舌草清热解毒、消痛散结，鱼腥草抗菌、增强免疫，鸡骨草清热解毒、疏肝止痛之功效，甘草清热解毒、补脾益气、调和诸药之功效。
(2)本发明的药物组合物能有效消除鳗鱼体表充血、肝肾肿大淤血、胃肠积液等病症，消肿散瘀，促进肝脏代谢，具有配方合理，起效快(消除胸鳍臀鳍充血的起效时间5-7天，肝胆肿大的消退时间17-18天，治愈所需时间28-30天)，安全无毒、疗效稳定等特点。经养殖现场用药观察，病鳗摄食情况好转，摄食量明显增加，病症明显减轻，疗效好且无毒副作用。在4-10月g发病季节拌于饲料中低剂量喂服，可有效预防鳗鱼爱德华氏菌病的爆发。
(3)本发明的药物组合物在制备过程中将浸提与冷冻超微粉碎相结合，使药物组合物的有效药物含量高，而且经过超微粉碎，药物的有效成分更有利于鱼体吸收，最大程度地发挥药物作用，而且制备操作易行，有利于工业化大规模生产。
【附图说明】
下面参照附图结合实施例对本发明作进一步的说明。
图1为本发明实施例中对照组和给药组的爱德华氏菌感染鳗鱼的体表症状示意图。
【具体实施方式】
本发明涉及一种鳗鱼爱德华氏菌病防治药物，所述药物的原料组分及其重量份含量如下：五倍子1～5份，黄芩1～5份，白芷1～5份，虎杖5～15份，穿心莲5～15份，白花蛇舌草10～50份，鱼腥草5～30份，鸡骨草5～15份，马齿苋5～50份，甘草5～30份。
较优的，所述药物的原料组分及其重量份含量如下：五倍子1.5～3.5份，黄芩2～4份，白芷2～4份，虎杖5～10份，穿心莲10～15份，白花蛇舌草20～30份，鱼腥草10～20份，鸡骨草5～10份，马齿苋10～30份，甘草10～20份。
更优的，所述药物的原料组分及其重量份含量如下：五倍子1份，黄芩3份，白芷2份，虎杖10份，穿心莲10份，白花蛇舌草30份，鱼腥草10份，鸡骨草10份，马齿苋10份，甘草20份。
本发明还涉及上述一种鳗鱼爱德华氏菌病防治药物的制备方法之一，包括以下步骤：
步骤(11)、按照用量比，将五倍子、黄芩、白花蛇舌草、鸡骨草加水10倍量煎煮三次，每次1.5小时，合并煎液，静置，滤过，滤液浓缩至相对密度60℃的波美度1.25～1.28的清膏备用；
步骤(12)、按照用量比，将白芷、虎杖、鱼腥草、穿心莲、马齿苋、甘草，用质量百分比70％乙醇回流三次，每次2小时，合并提取液，回收乙醇、滤过，滤液浓缩至相对密度60℃的波美度1.25～1.28的清膏备用；
步骤(13)、将步骤(12)中的药渣再加水提取三次，每次1小时，合并提取液，回收乙醇、滤过，滤液浓缩至相对密度60℃的波美度1.25～1.28的清膏备用；
步骤(14)、合并步骤(11)、(12)和(13)的三种清膏，浓缩至相对密度为60℃的波美度1.35～1.38的稠膏，减压干燥，冷冻粉碎成细粉，制备成防治鳗鱼爱德华氏菌病的药物组合物。
本发明又涉及上述一种鳗鱼爱德华氏菌病防治药物的制备方法之二，包括以下步骤：
步骤(21)、按照用量比，将五倍子、白芷、虎杖、黄芩,采用冷冻超微粉碎机进行粉碎，粉碎至300目以上的超微粉，备用；
步骤(22)、按照用量比，将白花蛇舌草、鸡骨草、鱼腥草、穿心莲、马齿苋、甘草，用质量百分比70％乙醇回流三次，每次2小时，合并提取液，回收乙醇、滤过，滤液浓缩至相对密度60℃的波美度1.25～1.28的清膏备用；
步骤(23)、将步骤(22)的药渣再加水提取三次，每次1小时，合并提取液，回收乙醇、滤过，滤液浓缩至相对密度60℃的波美度1.25～1.28的清膏备用；
步骤(24)、合并步骤(21)的超微粉、步骤(22)和(23)的两种清膏，经减压干燥，冷冻粉碎成细粉，制备成防治鳗鱼爱德华氏菌病的药物组合物。
下面将结合附图和具体实施方式对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
一、本发明所用的原料：
五倍子：本品为同翅目(Homoptera)蚜虫科的角倍蚜(Malaphis chinensis)或倍蛋蚜雌虫寄生于漆树科(Anacardiaceae)植物“盐肤木”(Rhus javanica Thunberg)及其同属其他植物的嫩叶或叶柄，刺伤而生成一种囊状聚生物虫瘿(cecidium)，经烘倍干燥后所得。
黄芩：本品为唇形科黄芩属植物黄芩Scutellaria baicalensis Georgi的干燥根。
白芷：本品为伞形科当归属的植物白芷Angelica dahurica(Fisch.ex Hoffm.)Benth.et Hook.f.ex Franch.et Sav)的干燥根。
虎杖：本品为蓼科Polygonaceae植物虎杖Polygonum cuspidatum Sieb.et Zucc.的干燥根茎和根。
穿心莲：本品为爵床科(Acanthaceae)穿心莲属(Andrographis)穿心莲Andrographis paniculata的干燥全草。
白花蛇舌草：本品为茜草科耳草属的植物白花蛇舌草Hedyotis diffusa的干燥全草。
鱼腥草：本品为三白草科植物蕺菜Houttuynia cordata Thunb.的干燥地上部分。
鸡骨草：本品为豆科植物广州相思子Abrus cantoniensis Hance的干燥全草。
马齿苋：本品为马齿苋科马齿苋属马齿苋Portulaca oleracea L.的干燥全草。
甘草：本品为蝶形花亚科甘草属甘草Glycyrrhiza uralensis Fisch.的干燥根及根茎。
二、鳗鱼爱德华氏菌病防治药物，所述药物组分及其含量如下：
实施例1
最佳配方：其按照质量g数，五倍子3g，黄芩1g，白芷1g，虎杖10g，穿心莲10g，白花蛇舌草20g，鱼腥草20g，鸡骨草10g，马齿苋25g，甘草10g。
实施例2
其按照质量g数，五倍子2g，黄芩3g，白芷2g，虎杖5g，穿心莲5g，白花蛇舌草20g，鱼腥草20g，鸡骨草15g，马齿苋18g，甘草10g。
实施例3
其按照质量g数，五倍子5g，黄芩1g，白芷1g，虎杖5g，穿心莲5g，白花蛇舌草28g，鱼腥草10g，鸡骨草10g，马齿苋20g，甘草15g。
实施例4
其按照质量g数，五倍子2g，黄芩5g，白芷3g，虎杖15g，穿心莲10g，白花蛇舌草30g，鱼腥草5g，鸡骨草5g，马齿苋5g，甘草20g。
实施例5
其按照质量g数，五倍子4g，黄芩2g，白芷4g，虎杖15g，穿心莲15g，白花蛇舌草10g，鱼腥草25g，鸡骨草5g，马齿苋15g，甘草5g。
实施例6
其按照质量g数，五倍子1g，黄芩4g，白芷5g，虎杖10g，穿心莲10g，白花蛇舌草15g，鱼腥草30g，鸡骨草10g，马齿苋10g，甘草5g。
实施例7
最佳配方：其按照质量g数，五倍子1g，黄芩3g，白芷1g，虎杖5g，穿心莲5g，白花蛇舌草25g，鱼腥草15g，鸡骨草5g，马齿苋30g，甘草10g。
实施例8
其按照质量g数，五倍子1g，黄芩1g，白芷1g，虎杖10g，穿心莲15g，白花蛇舌草35g，鱼腥草5g，鸡骨草7g，马齿苋10g，甘草15g。
实施例9
其按照质量g数，五倍子3g，黄芩5g，白芷2g，虎杖5g，穿心莲5g，白花蛇舌草40g，鱼腥草10g，鸡骨草10g，马齿苋15g，甘草5g。
三、鳗鱼爱德华氏菌病防治药物的制备方法：
制备方法1：
步骤(11)、按照用量比，将五倍子、黄芩、白花蛇舌草、鸡骨草加水10倍量煎煮三次，每次1.5小时，合并煎液，静置，滤过，滤液浓缩至相对密度60℃的波美度1.25～1.28的清膏备用；
步骤(12)、按照用量比，将白芷、虎杖、鱼腥草、穿心莲、马齿苋、甘草，用质量百分比70％乙醇回流三次，每次2小时，合并提取液，回收乙醇、滤过，滤液浓缩至相对密度60℃的波美度1.25～1.28的清膏备用；
步骤(13)、将步骤(12)中的药渣再加水提取三次，每次1小时，合并提取液，回收乙醇、滤过，滤液浓缩至相对密度60℃的波美度1.25～1.28的清膏备用；
步骤(14)、合并步骤(11)、(12)和(13)的三种清膏，浓缩至相对密度为60℃的波美度1.35～1.38的稠膏，减压干燥，冷冻粉碎成细粉，制备成防治鳗鱼爱德华氏菌病的药物组合物。
实施例1～5按上述方法1制备得到药物组合物。
制备方法2：
步骤(21)、按照用量比，将五倍子、白芷、虎杖、黄芩,采用冷冻超微粉碎机进行粉碎，粉碎至300目以上的超微粉，备用；
步骤(22)、按照用量比，将白花蛇舌草、鸡骨草、鱼腥草、穿心莲、马齿苋、甘草，用质量百分比70％乙醇回流三次，每次2小时，合并提取液，回收乙醇、滤过，滤液浓缩至相对密度60℃的波美度1.25～1.28的清膏备用；
步骤(23)、将步骤(22)的药渣再加水提取三次，每次1小时，合并提取液，回收乙醇、滤过，滤液浓缩至相对密度60℃的波美度1.25～1.28的清膏备用；
步骤(24)、合并步骤(21)的超微粉、步骤(22)和(23)的两种清膏，经减压干燥，冷冻粉碎成细粉，制备成防治鳗鱼爱德华氏菌病的药物组合物。
实施例4-9案上述方法2制备得到药物组合物。
四、本发明实施例1-9组合药物的药效试验
1、长期毒性试验
试验目的：观察健康鳗鱼长期低剂量服用防治爱德华氏菌病的组合药物所发生的毒性反应及程度，为客观评价其用药安全性提供科学依据。
试验结果：
长期给予本发明的组合药物对鳗鱼行为和外观无明显的毒性影响。
长期给予本发明的组合药物，在试验中对鳗鱼的心、肝、脾、肾、肠的生长过程无影响。
2.病理组织学试验
病理组织学检查表明试验中鳗鱼肝肾逐步消肿，体表出血逐渐消退，胃肠积液逐渐减少，而其余脏器组织无病理学变化。
目的：研究本发明的药物组合物的杀菌消炎、散瘀消肿、化瘀排脓、增强免疫之功效。
方法：选用爱德华氏菌感染导致鳍出血、肝肾肿大、腹水的病鳗饲服给药，研究本发明的组合药物的杀菌消炎、散瘀消肿、化瘀排脓、增强免疫作用。
结果：本发明的组合药物能显著抑制肝脏内感染细菌数量；5-7天胸鳍臀鳍出血症状减轻、内脏出血开始消退；17-18天修复受损肝脏，肝肾表面肿大明显减小；免疫球蛋白G水平有所升高。如图1所示，图1左图为对照组感染爱德华氏菌的体表症状，图1右图为给药组感染爱德华氏菌的体表症状，从图1中可知，经过药饵投喂，鳗鱼被爱德华氏菌感染后的症状没有恶化，体表出血的症状较轻，仅鳃部有出血点；而且未发现表皮鼓起或溃烂，肝肾未出现肿大，说明药饵可提高鳗鱼对爱德华氏菌的抵抗力，阻止爱德华氏菌入侵到鱼体细胞内，而造成组织细胞发生炎症坏死。
结论：本发明的组合药物具有明显的杀菌消炎、散瘀消肿、化瘀排脓、增强免疫之功效。
3.防治有效性试验
在鳗鱼精养殖池(水泥池面积约200m2～400m2，幼鳗放养密度17～19kg/m3)中饲喂药饵，连续给药40天，第10天和第20天往水体中投放爱德华氏菌(菌液浓度105CFU/m3)浸泡，观察本发明的实施例1组合药物对爱德华氏菌感染发病鳗鱼的影响。
Figure BDA0002758781760000101
结论：对三种鳗鱼投喂药饵试验组，每尾平均质量均略有增加，存活率亦明显高于对照组。
对欧洲鳗的疗效总有效率为74.96％。
对花鳗鲡的疗效总有效率为56.60％。
对美洲鳗的疗效总有效率为34.07％。
对日本鳗的疗效总有效率为24.91％。
综上，本发明具有以下优点：(1)本发明以中医药学理论为基础(如中医药学认为，细菌外邪或湿热内蕴为主，邪气阻滞气血运行、气血失和、瘀阻自生。本病是肝肾罴极之本失调，从而表现为肝肾肿大乃至体表出血而亡。一般早期宜袪邪为主，扶正为辅，强调扶正不留邪，袪邪不伤正，攻补兼施)科学合理地配置原料中的各组分药物和用量，使各组分的药效能够有机的结合起来，综合发挥药用效果，药物的防治效果好，毒副反应小。本方取五倍子和黄芩抗菌、袪毒、止血，白芷的化瘀排脓、生肌止痛，虎杖活血、散瘀，穿心莲和马齿苋袪毒消肿、消炎止痛、保肝护肝，白花蛇舌草清热解毒、消痛散结，鱼腥草抗菌、增强免疫，鸡骨草清热解毒、疏肝止痛之功效，甘草清热解毒、补脾益气、调和诸药之功效。
(2)本发明的药物组合物能有效消除鳗鱼体表充血、肝肾肿大淤血、胃肠积液等病症，消肿散瘀，促进肝脏代谢，具有配方合理，起效快(消除胸鳍臀鳍充血的起效时间5-7天，肝胆肿大的消退时间17-18天，治愈所需时间28-30天)，安全无毒、疗效稳定等特点。经养殖现场用药观察，病鳗摄食情况好转，摄食量明显增加，病症明显减轻，疗效好且无毒副作用。在4-10月g发病季节拌于饲料中低剂量喂服，可有效预防鳗鱼爱德华氏菌病的爆发。
(3)本发明的药物组合物在制备过程中将浸提与冷冻超微粉碎相结合，使药物组合物的有效药物含量高，而且经过超微粉碎，药物的有效成分更有利于鱼体吸收，最大程度地发挥药物作用，而且制备操作易行，有利于工业化大规模生产。
虽然以上描述了本发明的具体实施方式，但是熟悉本技术领域的技术人员应当理解，我们所描述的具体的实施例只是说明性的，而不是用于对本发明的范围的限定，熟悉本领域的技术人员在依照本发明的精神所作的等效的修饰以及变化，都应当涵盖在本发明的权利要求所保护的范围内。

Claims (5)

1.一种鳗鱼爱德华氏菌病防治药物，其特征在于：所述药物的原料组分及其重量份含量如下：五倍子1～5份，黄芩1～5份，白芷1～5份，虎杖5～15份，穿心莲5～15份，白花蛇舌草10～50份，鱼腥草5～30份，鸡骨草5～15份，马齿苋5～50份，甘草5～30份。
2.根据权利要求1所述的一种鳗鱼爱德华氏菌病防治药物，其特征在于：所述药物的原料组分及其重量份含量如下：五倍子1.5～3.5份，黄芩2～4份，白芷2～4份，虎杖5～10份，穿心莲10～15份，白花蛇舌草20～30份，鱼腥草10～20份，鸡骨草5～10份，马齿苋10～30份，甘草10～20份。
3.根据权利要求1所述的一种鳗鱼爱德华氏菌病防治药物，其特征在于：所述药物的原料组分及其重量份含量如下：五倍子1份，黄芩3份，白芷2份，虎杖10份，穿心莲10份，白花蛇舌草30份，鱼腥草10份，鸡骨草10份，马齿苋10份，甘草20份。
4.一种根据权利要求1~3任一项所述的鳗鱼爱德华氏菌病防治药物的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：
步骤（11）、按照用量比，将五倍子、黄芩、白花蛇舌草、鸡骨草加水10倍量煎煮三次，每次1.5小时，合并煎液，静置，滤过，滤液浓缩至相对密度60℃的波美度1.25～1.28的清膏备用；
步骤（12）、按照用量比，将白芷、虎杖、鱼腥草、穿心莲、马齿苋、甘草，用质量百分比70%乙醇回流三次，每次2小时，合并提取液，回收乙醇、滤过，滤液浓缩至相对密度60℃的波美度1.25～1.28的清膏备用；
步骤（13）、将步骤（12）中的药渣再加水提取三次，每次1小时，合并提取液，回收乙醇、滤过，滤液浓缩至相对密度60℃的波美度1.25～1.28的清膏备用；
步骤（14）、合并步骤（11）、（12）和（13）的三种清膏，浓缩至相对密度为60℃的波美度1.35～1.38的稠膏，减压干燥，冷冻粉碎成细粉，制备成防治鳗鱼爱德华氏菌病的药物组合物。
5.一种根据权利要求1~3任一项所述的鳗鱼爱德华氏菌病防治药物的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：
步骤（21）、按照用量比，将五倍子、白芷、虎杖、黄芩,采用冷冻超微粉碎机进行粉碎，粉碎至300目以上的超微粉，备用；
步骤（22）、按照用量比，将白花蛇舌草、鸡骨草、鱼腥草、穿心莲、马齿苋、甘草，用质量百分比70%乙醇回流三次，每次2小时，合并提取液，回收乙醇、滤过，滤液浓缩至相对密度60℃的波美度1.25～1.28的清膏备用；
步骤（23）、将步骤（22）的药渣再加水提取三次，每次1小时，合并提取液，回收乙醇、滤过，滤液浓缩至相对密度60℃的波美度1.25～1.28的清膏备用；
步骤（24）、合并步骤（21）的超微粉、步骤（22）和（23）的两种清膏，经减压干燥，冷冻粉碎成细粉，制备成防治鳗鱼爱德华氏菌病的药物组合物。
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