CN110639010A - 适用于眼部的含有重组水蛭素中药组合物及制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及眼部治疗的技术领域，更具体地，本发明提供一种适用于眼部的含有重组水蛭素的中药组合物、制剂及制备方法和应用。本发明提供一种适用于眼部的含有重组水蛭素的中药组合物，按组合物的重量百分比计，包括1～3％油相组分、0.3～0.8％增溶剂、5～15％重组水蛭素发酵液、0.8～2％中药组分以及余量水相组分。本发明提供的能够缓解和治疗眼部疲劳和干眼症的组合物具有改善和缓解视力障碍，对于眼睛的干涩感、异物感、烧灼感、痒感、微光、眼红、视物模糊、视力波动、眼痛刺激感的眼疲劳症状都有改善。另外对眼部皮肤黑眼圈，鱼尾纹，眼袋，浮肿等症状也有缓解和消除。

Description

适用于眼部的含有重组水蛭素中药组合物及制备方法

技术领域

本发明涉及眼部治疗的技术领域，更具体地，本发明提供一种适用于眼部的含有重组水蛭素的中药组合物、制剂及制备方法和应用。

背景技术

眼部疲劳和干眼症是一类常见的眼表疾病，日益影响人们的生活质量。随着生活节奏加快和学习工作压力增加，电子产品在大学生中的广泛普及，不良用眼和生活习惯的养成，主诉“视疲劳”的人越来越多，出现视频终端综合征(VDT)症状的大学生也与日俱增，干眼的发病率逐渐上升。近年来我国干眼的发病率呈逐年上升趋势并向低龄化发展，干眼的病因复杂，可由瞬目减少、睑板腺分泌异常、激素水平紊乱、免疫性疾病等多种原因引起。

干眼症在初期患者自觉眼睛疲劳、酸胀不适，异物感或干涩感，眼红畏光，视力波动甚至模糊，休息后可自行缓解，往往被患者忽视。如伴有结膜炎症，可出现异物感、结膜充血水肿，累及角膜者，证见畏光、流泪，严重者视力下降。但长期处于干眼状态，会造成眼球不可逆损伤，诱发结膜干燥斑、结膜炎等眼部疾病。干眼症给人们的生活带来极大的不便与精神压力，严重影响患者生活、工作。而很多人为了快速解除症状自行购买滴眼液等眼部药物以及保养品，而这些保养品也是鱼龙混杂，其中大部分含有抗生素和防腐剂，会进一步损坏泪膜，加重症状，形成恶性循环。正如本调查研究结果显示，长期使用眼药水，干眼症的发病率会明显升高。

中药贴敷疗法治疗眼病自古己有记载，如《银海精微》、《审视瑶函》、《外科正宗》，多用新鲜草药或药粉敷搽眼睑；现代多在此基础上使药末加工得更加细腻，增加了无菌消毒措施，在一定程度上起到保健预防眼病的作用。中医治疗具有副作用小、疗效显著的特点，其中尤以外治法显效快、操作简便。眼贴能够通过皮肤对药物的有效吸收，改善眼周血管循环，促进眼部神经、肌肉细胞的营养交换，达到缓解眼部肌肉紧张的目的，从而缓解视疲劳的症状。基于此，需要提供一种能有效改善眼部状况，并适用于制备形成眼贴的组合物。

发明内容

为解决上述技术问题，本发明提供一种适用于眼部的含有重组水蛭素的中药组合物，按组合物的重量百分比计，包括1～3％油相组分、0.3～0.8％增溶剂、5～15％重组水蛭素发酵液、0.8～2％中药组分以及余量水相组分。

作为本发明的一种优选技术方案，其中，中药组分选自野菊花、桑叶、决明子、黄柏、珍珠粉、炉甘石、益母草、红花、川芎、丹参、石斛、桂枝、薄荷、谷精草、青葙子、冰片、枸杞子、北沙参、麦冬、玉竹、密蒙花、秦皮中的任一种或多种的组合。

作为本发明的一种优选技术方案，其中，按组合物的重量百分比计，水相组分包括4.5～9.5％小分子醇、0.02～0.05％络合剂、0.01～0.04％氨基酸以及余量水。

作为本发明的一种优选技术方案，其中，氨基酸选自精氨酸、谷氨酰胺、组氨酸、丝氨酸、谷氨酸、甘氨酸中的任一种或多种的组合。

作为本发明的一种优选技术方案，其中，油相组分包括保湿剂与透明质酸钠，保湿剂与透明质酸钠的重量比为1：(0.05～0.3)。

作为本发明的一种优选技术方案，其中，保湿剂选自木糖醇类物质、羟基乙酸、黄原胶、甘油辛酸酯、聚乙二醇、海藻糖、赤藓醇、吡咯烷酮羧酸钠、乙氧基葡萄糖衍生物中的任一种或多种的组合。

作为本发明的一种优选技术方案，其中，增溶剂选自油醇聚醚、聚丙烯酸酯、硬脂醇、氢化蓖麻油、吐温、司盘中的任一种或多种的组合。

作为本发明的一种优选技术方案，其中，油醇聚醚选自油醇聚醚-12、油醇聚醚-15、油醇聚醚-20中的任一种或多种的组合。

本发明第二方面提供了一种所述适用于眼部的含有重组水蛭素的中药组合物的制备方法，包括如下步骤：

(1)将组分A混合均匀、加热；

(2)B组分混合均匀、搅拌并加热；

(3)将B组分加入到A中，剪切混合物；

(4)自然降温，加入重组水蛭素发酵液以及中药组分，搅拌均匀；

(5)再加入增溶剂搅拌均匀，即得。

本发明第三方面提供了所述适用于眼部的含有重组水蛭素的中药组合物的应用，其应用于治疗眼部疲劳和干眼症。

与现有技术相比，本发明提供了一种能够缓解和治疗眼部疲劳和干眼症的组合物、制备方法和应用。该产品具有改善和缓解视力障碍，对于眼睛的干涩感、异物感、烧灼感、痒感、微光、眼红、视物模糊、视力波动、眼痛刺激感的眼疲劳症状都有改善，另外对眼部皮肤黑眼圈，鱼尾纹，眼袋，浮肿等症状也有缓解和消除。

具体实施方式

除非另有说明、从上下文暗示或属于现有技术的惯例，否则本申请中所有的份数和百分比都基于重量，且所用的测试和表征方法都是与本申请的提交日期同步的。如果现有技术中披露的具体术语的定义与本申请中提供的任何定义不一致，则以本申请中提供的术语定义为准。

下面结合具体实施方式对本发明提供技术方案中的技术特征作进一步清楚、完整的描述，并非对其保护范围的限制。

本发明中的词语“优选的”、“优选地”、“更优选的”等是指，在某些情况下可提供某些有益效果的本发明实施方案。然而，在相同的情况下或其他情况下，其他实施方案也可能是优选的。此外，对一个或多个优选实施方案的表述并不暗示其他实施方案不可用，也并非旨在将其他实施方案排除在本发明的范围之外。本发明中未提及的组分的来源均为市售。

为解决上述技术问题，本发明提供一种适用于眼部的含有重组水蛭素的中药组合物，按组合物的重量百分比计，包括1～3％油相组分、0.3～0.8％增溶剂、5～15％重组水蛭素发酵液、0.8～2％中药组分以及余量水相组分；优选地，包括1.5％油相组分、0.5％增溶剂、8％重组水蛭素发酵液、1.2％中药组分以及余量水相组分。

在一种实施方式中，油相组分包括保湿剂与透明质酸钠，保湿剂与透明质酸钠的重量比为1：(0.05～0.3)；优选地，保湿剂与透明质酸钠的重量比为1：(0.08～0.2)；更优选地，保湿剂与透明质酸钠的重量比为1：0.1。

在一种实施方式中，保湿剂选自木糖醇类物质、羟基乙酸、黄原胶、甘油辛酸酯、聚乙二醇、海藻糖、赤藓醇、吡咯烷酮羧酸钠、乙氧基葡萄糖衍生物中的任一种或多种的组合；优选地，保湿剂为木糖醇类物质与黄原胶；进一步优选地，木糖醇类物质与黄原胶的重量比为1：(0.2～0.5)；更优选地，木糖醇类物质与黄原胶的重量比为1：0.3。

在一种实施方式中，木糖醇类物质包括木糖醇、无水木糖醇以及木糖醇基葡糖苷，本发明对木糖醇类物质的购买厂家不做限制，一种实施方式中，木糖醇类物质购自法国SEPPIC公司，AQUAXYL木糖醇。

本发明对透明质酸钠的购买厂家不做特别限制，一种实施方式中，透明质酸钠纳诺HA，购自华熙福瑞达。

在一种实施方式中，增溶剂选自油醇聚醚、聚丙烯酸酯、硬脂醇、氢化蓖麻油、吐温、司盘中的任一种或多种的组合；优选地，增溶剂为油醇聚醚。

在一种实施方式中，油醇聚醚选自油醇聚醚-12、油醇聚醚-15、油醇聚醚-20中的任一种或多种的组合；优选地，油醇聚醚包括油醇聚醚-12、油醇聚醚-15、油醇聚醚-20；进一步优选地，油醇聚醚-12、油醇聚醚-15、油醇聚醚-20的重量比为1：(0.8～1.2)：(0.8～1.2)；更优选地，油醇聚醚-12、油醇聚醚-15、油醇聚醚-20的重量比为1：1：1。

重组水蛭素发酵液

水蛭素是迄今为止世界上所发现最强的凝血酶天然特异抑制剂。它在降血稠、血脂、血糖、血压、尿酸方面效果极佳，现已在治疗三高症、心脑血管疾病、痛风、中风、糖尿病等疾病上效果显著。但是天然的水蛭素只存在水蛭的唾液中，含量极低，通过野外捞取和人工培养水蛭，然后获取水蛭素，就在成本高，杂质多，活性低等种种问题。

我们采用基因工程技术，将水蛭素基因克隆到酿酒酵母菌株中，经过发酵培养产生了重组水蛭素发酵液，该发酵液中的水蛭素能促进皮肤内层的血液循环，加快代谢，提高肌肤清除自由基的能力和细胞活力，而发酵液还富含糖分，小分子肽和维生素，为皮肤提供营养成分。

在一种实施方式中，重组水蛭素发酵液的制备过程为：将种子液置于初始培养基中，当DO值大于55％时，滴加补料培养基；其中，初始培养基的制备原料包括糖溶液、微量金属溶液以及维生素溶液。

在一种优选地实施方式中，重组水蛭素的制备方法，其中，重组水蛭素的制备过程包括：将种子液置于初始培养基中，通无菌空气，并保持DO值大于40％；当DO值大于55％时，于初始培养基中通过流加的方式滴加补料培养基。

在一种实施方式中，无菌空气的通气量为3～7L/min；优选地，无菌空气的通气量为5L/min。

在一种实施方式中，初始培养基的温度为25～40℃；优选地，初始培养基的温度为27～35℃；更优选地，初始培养基的温度为30℃。

在一种实施方式中，重组水蛭素的制备过程在本领域常规或熟知的装置和条件下进行。

在一种实施方式中，重组水蛭素的制备过程在摇瓶中进行，转速为300～1000r/min；优选地，转速为650r/min。

在一种实施方式中，重组水蛭素的制备过程在5L发酵罐中进行。

在一种实施方式中，通过滴加氨水控制初始培养基的pH为4.5～5.5；优选地，通过滴加氨水控制初始培养基的pH为5.0。

在一种实施方式中，氨水的浓度为20～30wt％；优选地，氨水的浓度为25wt％。

在一种实施方式中，种子液的接种量为10～15％；优选地，种子液的接种量为11～13％。

在一种实施方式中，种子液的制备方法为：接种工程菌甘油保藏菌至装有种子培养基的瓶中，培养，即得待接种的种子液。

优选地，种子液的制备方法为：，种子液的制备方法为：①接种工程菌甘油保藏菌至装有5mL种子培养基的100mL三角瓶中，于30℃，220rpm摇床培养24小时；②转接至装有50mL种子培养基的250mL三角瓶中，于30℃，220rpm摇床培养24小时；③转接至装有250mL种子培养基的1000mL三角瓶中(共两瓶)，于30℃，220rpm摇床培养12小时，即得待接种的种子液。

在一种实施方式中，种子培养基包括葡萄糖、YNB、氨基酸以及水。

在一种实施方式中，种子培养基中的葡萄糖含量为初始培养基的溶液的总体积的10～30g/L；优选地，种子培养基中的蔗糖含量为初始培养基的溶液的总体积的20g/L。

在一种实施方式中，葡萄糖、YNB、氨基酸的重量比为(10～30)：(5～9)：(1～2)；优选地，葡萄糖、YNB、氨基酸的重量比为20：7：1.5。

在一种实施方式中，种子培养基中的水含量为400～550mL；优选地，种子培养基中的水含量为480mL。

在一种实施方式中，氨基酸选自L-精氨酸、L-天冬氨酸、L-谷氨酸、L-组氨酸、L-亮氨酸、L-赖氨酸、L-蛋氨酸、L-苯丙氨酸、L-丝氨酸、L-苏氨酸、L-色氨酸、L-酪氨酸、L-缬氨酸中的任一种或多种的组合；进一步优选地，氨基酸为L-精氨酸、L-组氨酸以及L-色氨酸的重量比为1：(0.8～1.2)：(0.8～1.2)；更优选地，L-精氨酸、L-组氨酸以及L-色氨酸的重量比为1：1：1。

在一种实施方式中，接种工程菌为INVSC1酿酒酵母菌株。

在一种实施方式中，糖溶液包括无氨基酵母氮源(YNB)、碳源以及氨基酸溶液；优选地，糖溶液还包括铵盐、磷酸盐、镁盐、锌盐、锰盐、钴盐、铁盐、钙盐、钠盐、铜盐中的至少一种；更优选地，糖溶液还包括消泡剂。

在一种实施方式中，糖溶液包括无氨基酵母氮源(YNB)、碳源、氨基酸溶液、铵盐、磷酸盐、镁盐以及消泡剂。

在一种实施方式中，无氨基酵母氮源(YNB)含量为初始培养基的溶液的总体积的4～10g/L；优选地，无氨基酵母氮源(YNB)含量为初始培养基的溶液的总体积的6～8g/L；更优选地，无氨基酵母氮源(YNB)含量为初始培养基的溶液的总体积的7g/L。

在一种实施方式中，碳源含量为初始培养基的溶液的总体积的20～50g/L；优选地，碳源含量为初始培养基的溶液的总体积的30～40g/L；更优选地，碳源含量为初始培养基的溶液的总体积的35g/L。

在一种实施方式中，氨基酸溶液含量为初始培养基的溶液的总体积的10～40mL/L；优选地，氨基酸溶液含量为初始培养基的溶液的总体积的15～30mL/L；更优选地，氨基酸溶液含量为初始培养基的溶液的总体积的20mL/L。

在一种实施方式中，糖溶液中的铵盐、磷酸盐以及镁盐的重量比为(1～1.5)：(1.5～3)：1；优选地，糖溶液中的铵盐、磷酸盐以及镁盐的重量比为1.3：2.5：1。

在一种实施方式中，糖溶液中的铵盐含量为初始培养基的溶液的总体积的10～30g/L；优选地，糖溶液中的铵盐含量为初始培养基的溶液的总体积的15g/L。

在一种实施方式中，消泡剂含量为初始培养基的溶液的总体积的0.1～1mL/L；优选地，消泡剂含量为初始培养基的溶液的总体积的0.5mL/L。

在一种实施方式中，消泡剂为有机硅类消泡剂和/或聚醚类消泡剂；优选地，消泡剂为吐温80。

在一种实施方式中，氨基酸溶液包括L-精氨酸、L-天冬氨酸、L-谷氨酸、L-组氨酸、L-亮氨酸、L-赖氨酸、L-蛋氨酸、L-苯丙氨酸、L-丝氨酸、L-苏氨酸、L-色氨酸、L-酪氨酸、L-缬氨酸中的至少一种；优选地，氨基酸溶液包括L-组氨酸、L-亮氨酸、L-赖氨酸以及L-蛋氨酸；进一步优选地，L-组氨酸、L-亮氨酸、L-赖氨酸以及L-蛋氨酸的重量比为1：(2～4)：(1～3)：(0.5～1.5)；更优选地，L-组氨酸、L-亮氨酸、L-赖氨酸以及L-蛋氨酸的重量比为1：3：1.5：1。

在一种实施方式中，L-组氨酸含量为100X氨基酸溶液的1～3g/L；优选地，L-组氨酸含量为氨基酸溶液的2g/L。

在一种实施方式中，初始培养基的制备原料中的微量金属溶液含量为初始培养基的溶液的总体积的5～20mL/L；优选地，初始培养基的制备原料中的微量金属溶液含量为初始培养基的溶液的总体积的10mL/L。

在一种实施方式中，初始培养基的制备原料中的维生素溶液含量为初始培养基的溶液的总体积的5～20mL/L；优选地，初始培养基的制备原料中的维生素溶液含量为初始培养基的溶液的总体积的10～15mL/L；初始培养基的制备原料中的维生素溶液含量为初始培养基的溶液的总体积的12mL/L。

在一种实施方式中，补料培养基包括微量金属溶液、维生素溶液以及碳源；优选地，补料培养基还包括磷酸盐、铵盐、磷酸盐、镁盐、锌盐、锰盐、钴盐、铁盐、钙盐、钠盐、铜盐、钾盐中的至少一种。

在一种实施方式中，补料培养基包括微量金属溶液、维生素溶液、碳源、磷酸盐、镁盐以及钾盐。

申请人意外发现，在特定的初始培养基以及补料培养基协同作用下，利用本发明提供的制备方法所得水蛭素的活性较高，可能由于有利于在菌体发酵过程的不同阶段营养成分充足，活性物产量较高，同时避免新生水蛭素的分解，最后有效表达的水蛭素产率较高。

在一种实施方式中，补料培养基中的碳源含量为初始培养基的溶液与补料培养基的溶液的总体积的300～500g/L；优选地，补料培养基中的碳源含量为初始培养基的溶液与补料培养基的溶液的总体积的350～450g/L；更优选地，补料培养基中的碳源含量为初始培养基的溶液与补料培养基的溶液的总体积的400g/L。

在一种实施方式中，补料培养基中的维生素溶液含量为初始培养基的溶液与补料培养基的溶液的总体积的5～20mL/L；优选地，补料培养基中的维生素溶液含量为初始培养基的溶液与补料培养基的溶液的总体积的10～15mL/L；更优选地，补料培养基中的维生素溶液含量为初始培养基的溶液与补料培养基的溶液的总体积的12mL/L。

在一种实施方式中，补料培养基中的微量金属溶液含量为初始培养基的溶液与补料培养基的溶液的总体积的3～15mL/L；优选地，补料培养基中的微量金属溶液含量为初始培养基的溶液与补料培养基的溶液的总体积的8～12mL/L；更优选地，补料培养基中的微量金属溶液含量为初始培养基的溶液与补料培养基的溶液的总体积的10mL/L。

在一种实施方式中，补料培养基中的钾盐含量为初始培养基的溶液与补料培养基的溶液的总体积的1.5～6g/L；优选地，补料培养基中的钾盐含量为初始培养基的溶液与补料培养基的溶液的总体积的3～5g/L；更优选地，补料培养基中的钾盐含量为初始培养基的溶液与补料培养基的溶液的总体积的3.5g/L。

在一种实施方式中，补料培养基中的钾盐、镁盐以及磷酸盐的重量比为1：(1～3)：(2～5)；优选地，补料培养基中的钾盐、镁盐以及磷酸盐的重量比为1：1.5：3.5。

在一种实施方式中，碳源选自葡萄糖、蔗糖、半乳糖、淀粉、麦芽糖、乳糖中的任一种或多种的组合。

在一种实施方式中，微量金属溶液包括锌盐、锰盐、钴盐、铁盐、钙盐、钠盐、铜盐、钾盐中的至少一种；优选地，微量金属溶液包括钠盐、锌盐、钙盐以及锰盐；进一步优选地，钠盐、锌盐、钙盐以及锰盐的重量比为1：(50～90)：(20～40)：(3～10)；更优选地，钠盐、锌盐、钙盐以及锰盐的重量比为1：80：30：5。

在一种实施方式中，微量金属溶液中的钠盐含量为微量金属溶液的0.05～0.2g/L；优选地，微量金属溶液中的钠盐含量为微量金属溶液的0.1g/L。

在一种实施方式中，微量金属溶液还包括0.5M EDTA；进一步优选地，EDTA含量为微量金属溶液的70～90mL/L；更优选地，EDTA含量为微量金属溶液的80mL/L。

在一种实施方式中，可列举的锌盐包括但不限于：硫酸锌、氯化锌；可列举的锰盐包括但不限于：硫酸锰、二氯化锰、甘氨酸锰；可列举的钴盐包括但不限于：二氯化钴；可列举的铁盐包括但不限于：硫酸亚铁、氯化亚铁；可列举的钙盐包括但不限于：氯化钙、甘氨酸钙；可列举的钠盐包括但不限于：氯化钠、钼酸钠；可列举的铜盐包括但不限于：无水硫酸铜、甘氨酸铜；可列举的钾盐包括但不限于：硫酸钾、氯化钾、钼酸钾；可列举的铵盐包括但不限于：硝酸铵、硫酸铵、氯化铵；可列举的磷酸盐包括但不限于：磷酸二氢钾、磷酸二氢钠、磷酸二氢钙。

在一种实施方式中，维生素溶液包括生物素、烟酸、盐酸硫胺、维生素B2中的至少一种；优选地，维生素溶液包括生物素、烟酸以及盐酸硫胺；进一步优选地，生物素、烟酸以及盐酸硫胺的重量比为1：(15～30)：(10～30)；更优选地，生物素、烟酸以及盐酸硫胺的重量比为1：22：20。

在一种实施方式中，生物素含量为维生素溶液的0.03～0.1g/L；优选地，生物素含量为维生素溶液的0.05g/L。

在一种实施方式中，初始培养基的制备过程包括以下步骤：

(1)将糖溶液进行灭菌处理，并添加于发酵罐中；

(2)将微量金属溶液过滤除菌，并添加于发酵罐中；

(3)将维生素溶液过滤除菌，并添加于发酵罐中，即得初始培养基。

在一种优选地实施方式中，初始培养基的制备过程包括以下步骤：

(1)将糖溶液进行灭菌处理，并通过流加的方式添加于发酵罐中；

(2)将微量金属溶液通过0.22μm的无菌过滤器过滤除菌，并添加于发酵罐中；

(3)将维生素溶液通过0.22μm的无菌过滤器过滤除菌，并添加于发酵罐中，即得初始培养基。

在一种实施方式中，中药组分的制备原料选自野菊花、桑叶、决明子、黄柏、珍珠粉、炉甘石、益母草、红花、川芎、丹参、石斛、桂枝、薄荷、谷精草、青葙子、冰片、枸杞子、北沙参、麦冬、玉竹、密蒙花、秦皮中的任一种或多种的组合；优选地，中药组分的制备原料包括野菊花、桑叶、决明子、黄柏、珍珠粉、炉甘石、益母草、红花、川芎、丹参、石斛、桂枝、薄荷、谷精草、青葙子、冰片、枸杞子、北沙参、麦冬、玉竹、密蒙花以及秦皮；更优选地，野菊花、桑叶、决明子、黄柏、珍珠粉、炉甘石、益母草、红花、川芎、丹参、石斛、桂枝、薄荷、谷精草、青葙子、冰片、枸杞子、北沙参、麦冬、玉竹、密蒙花以及秦皮的含量相同。

野菊花

别名为野菊、野黄菊、苦薏野；本品为菊科植物野菊Chrysanthemum indicum L.的干燥头状花序。秋、冬二季花初开放时采摘，晒干，或蒸后晒干。菊花味苦、辛、凉，清热解毒，疏风散热，散瘀，明目，降血压。防治流行性脑脊髓膜炎，预防流行性感冒、感冒，治疗高血压、肝炎、痢疾、痈疖疗疮都有明显效果。野菊花的浸液对杀灭孑孓及蝇蛆也非常有效。临床上不仅可以和夏枯草、决明子等配伍治疗肝火上炎之目痛、目肿,也可以和枸杞子、熟地黄等共用治疗肝肾阴虚之目昏。

桑叶

本品为桑科植物桑Morus alba L.的干燥叶。初霜后采收，除去杂质，晒干；桑叶味苦、甘，性微寒。归肺、肝经。清凉散降，该品轻清疏散，有疏散风热、清肺润燥、清肝、明目功效，常用治风热感冒、燥热伤肺、肝阳上亢及风热或肝火目赤感冒、燥热伤肺、肝阳上亢及风热或肝火目赤肿痛、肝阴不足之眼目昏花。此外，又能凉血止血。《本草新编》：桑叶之功，更佳于桑皮，最善补骨中之髓、添肾中之精，止身中之汗，填脑明目，活血生津，种子安胎，调和血脉，通利关节，止霍乱吐泻，除风湿寒痹，消水肿脚浮。桑叶中富含芸香苷，槲皮素等黄酮类成分，另外还有生物碱，植物甾醇桑叶多糖等各种成分。

桑叶中含有丰富的氨基酸、纤维素、维生素、矿物质以及多种生理活性物质，具有降血糖、降血压、降血脂、延缓衰老等多种保健功效；对糖尿病、高血压、高血脂患者都有辅助治疗作用。

决明子

别名为马蹄决明、钝叶决明、假绿豆、草决明；本品为豆科植物决明Cassiaobtusifolia L.或小决明Cassia tora L.的干燥成熟种子。秋季采收成熟果实，晒干，打下种子，除去杂质。决明子味苦、甘、咸，性微寒，入肝、肾、大肠经；清肝明目，润肠通便，治疗便秘及高血脂，高血压。清肝明目，利水通便，有缓泻作用，降血压降血脂。用于目赤涩痛，羞明多泪，头痛眩晕，目暗不明，大便秘结。《神农本草经》：治青盲，目淫肤赤白膜，眼赤痛，泪出，久服益精光。《中华本草》曰：“清肝益肾，明目，利水通便。主治目赤肿痛，羞明泪多、青盲、雀目、头痛头晕、视物昏暗、肝硬化腹水、小便不利，习惯性便秘。外治肿毒、癣疾。决明子又称“还瞳子”，决明子含有多种维生素和丰富的氨基酸、脂肪、碳水化合物等，其保健功能日益受到人们的重视。决明子具有清肝火、祛风湿、益肾明目等功能，常饮决明子茶，可使血压正常，大便通畅，老眼不花。临床实验证明，喝决明子茶可以清肝明目、防止视力模糊、降血压、降血脂、减少胆固醇等，对于防治冠心病、高血压都有不错的疗效；而且决明子富含维生素A及锌，可防治夜盲症以及避免小儿缺锌。此外，决明子茶润肠通便的功能也能解决现代人肠胃及便秘的问题，可以治疗大便燥结，帮助顺利排便。

黄柏

黄柏别名黄檗、元柏、檗木；本品为芸香科植物黄皮树Phellodendron chinenseSchneid.或黄檗Phellodendron amurense Rupr.的干燥树皮。前者习称“川黄柏”，后者习称“关黄柏”。剥取树皮后，除去粗皮，晒干。为芸香科植物黄皮树的干燥树皮。习称“川黄柏”，剥取树皮后，除去粗皮，晒干；用于湿热泻痢，黄疸尿赤，带下阴痒，热淋涩痛，脚气痿蹙，骨蒸劳热，盗汗，遗精，疮疡肿毒，湿疹湿疮。盐黄柏滋阴降火。用于阴虚火旺，盗汗骨蒸；此外，还具有清热燥湿，解毒疗疮的功效，黄柏中富含小檗碱，具有良好的消炎抗菌的效果，用于眼部，可以起到消炎消肿的效果。

珍珠粉

本品为珍珠贝科动物马氏珍珠贝Pteria martensii(Dunker)、蚌科动物三角帆蚌Hyriopsis cumingii(Lea)或褶纹冠蚌Cristaria plicata(Leach)等双壳类动物受刺激形成的珍珠。自动物体内取出，洗净，干燥。味甘，咸寒，归心，肝经，具有安神定惊，明目消翳，解毒生肌之功效。珍珠粉有清热解毒之效，能够清肝火；肝主目，肝火旺则目生翳，视力模糊，同时经过研究发现，珍珠粉中的硒可以强化视觉神经的传导，改善视力状况；微量元素中的锌可促进视神经的轴浆运输，改善视网膜及视网膜色素上皮细胞的代谢与功能。《中华人民共和国药典》叙述：“珍珠有明目消翳之功能，主治目生云翳”，所以很多学者都将珍珠粉成为“眼科圣药”。

珍珠粉还有降低高血压的作用，中医理论中高血压属于肝阳上亢所致，近代医学研究结果证明，我国中药瑰宝——珍珠粉有镇惊安神、养阴熄风、镇肝潜阳的功效，从而达到降压的功效，现代临床使用降压药“珍菊降压丸”就是根据这个原理制成的。另外，外用珍珠粉还有美白、控油、祛痘、去黑头、淡斑、生肌等功效。珍珠粉的主要活性成分是蛋白质(水解后可得到18种氨基酸，其中7种是人体必需氨基酸)、文石结构的碳酸钙，20多种微量元素及维生素B等。

炉甘石

别名为甘石、浮水甘石；本品为碳酸盐类矿物方解石族菱锌矿，主含碳酸锌(ZnCO3)。采挖后，洗净，晒干，除去杂石。炉甘石性甘味平，以外用药为主，忌口服，解毒明目退翳，收湿止痒敛疮。用于目赤肿痛，眼缘赤烂，翳膜胬肉，溃疡不敛，脓水淋漓，湿疮，皮肤瘙痒。其主要成分是不溶于水的天然碳酸锌，广泛用于皮肤科，作为中度的防腐、收敛、保护剂治疗皮肤炎症或表面创伤.一般用5％～10％水混悬液，亦有用油膏者；外用可抑制局部葡萄球菌生长，能部分吸收创面分泌液，有收敛、保护作用；尚能抑制局部葡萄球菌的生长。

益母草

别名为益母蒿、益母艾、红花艾、坤草、茺蔚、三角胡麻、四楞子棵益母草：本品为唇形科植物益母草Leonurus japonicus Houtt.的新鲜或干燥地上部分。鲜品春季幼苗期至初夏花前期采割；干品夏季茎叶茂盛、花未开或初开时采割，晒干，或切段晒干。辛、苦、微寒，归心、肝、膀胱经；活血化瘀，利水消肿。益母草可全草入药，有效成分为益母草素，益母草含益母草碱、水苏碱、益母草定、益母草宁等多种生物碱及苯甲酸、氯化钾等。

益母草的作用包括调节免疫功能；抑制血小板聚集；兴奋子宫作用；抑制皮肤真菌作用等等，用于眼部，主要是促进眼部微血管的血液循环，加快肌肉运动舒缓疲劳等。

红花

主产河南、湖南、四川、新疆、西藏等地。活血通经，散瘀止痛，有助于治经闭、痛经、恶露不行、胸痹心痛、瘀滞腹痛、胸胁刺痛、跌打损伤、疮疡肿痛疗效。有活血化瘀，散湿去肿的功效。

川芎

别名为芎藭、小叶川芎；本品为伞形科植物川芎Ligusticum chuanxiong Hort.(或Ligusticum wallichii Franch.)的干燥根茎。夏季当茎上的节盘显着突出，并略带紫色时采挖，除去泥沙，晒后炕干，再去须根。用于感冒头痛，属于风寒者，可与荆芥、防风、白芷同用；属于风热者，可与菊花、薄荷同用。川芎在生活中对于人体的功效是非常的多的。川芎有明显的镇静作用。川芎挥发油少量时对动物大脑的活动具有抑制作用，而对延脑呼吸中枢、血管运动中枢及脊髓反射中枢具有兴奋作用。用于眼部产品主要也是行气活血，促进眼部的血液循环。

丹参

别名为红根、大红袍、血参根、血山根、红丹参、紫丹参；本品为唇形科植物丹参Salvia miltiorrhiza Bunge.的干燥根及根茎。春、秋二季采挖，除去泥沙，干燥。丹参具有祛淤止痛，活血通经，清心除烦的功效，常被用于治疗月经不调，经闭痛经，癥瘕积聚，胸腹刺痛，热痹疼痛，疮疡肿痛，心烦不眠，肝脾肿大，心绞痛等疾病。

丹参能加强心肌收缩力、改善心脏功能，不增加心肌耗氧量；丹参制剂中含有隐丹参酮、二氢丹参酮，对体外的葡萄球菌、大肠杆菌、变性杆菌有抑制作用。所以丹参在医学上也被用作这些方面的治疗；丹参对中枢神经有抑制作用，有抗肿瘤作用；丹参能保护胃黏膜，保护缺血性肾损伤。对于有胃病的患者比较适合食用丹参；丹参能使主动脉粥样斑块形成面积明显减少，血清总胆固醇、甘油三酯、均有一定程度的降低。丹参可抑制高脂膳食家兔的血脂上升；丹参能提高纤溶酶活性，延长出、凝血时间；抑制血小板聚集，有抗凝血，促进纤溶，抑制血小板凝聚，抑制血栓形成的功效；丹参能改善肝微循环，具有保肝护肝的功效；丹参能扩张冠状动脉，增加冠脉流量，改善心肌缺血、梗塞和心脏功能，加强心肌的收缩力，调节心律。能扩张外周血管，血流量增加，脑血流量下降，改善微循环。

石斛

别名吊兰，本品为兰科植物环草石斛Dendrobium loddigesii Rolfe.、马鞭石斛Dendrobium fimbriatum Hook.var.oculatum Hook.、黄草石斛Dendrobium chrysanthumWall.、铁皮石斛Dendrobium candidum Wall.ex Lindl.或金钗石斛Dendrobium nobileLindl.的新鲜或干燥茎。全年均可采收，鲜用者除去根及泥沙；干用者采收后，除去杂质，用开水略烫或烘软，再边搓边烘晒，至叶鞘搓净，干燥。铁皮石斛剪去部分须根后，边炒边扭成螺旋形或弹簧状，烘干，习称“耳环石斛”。石斛主要的成分为石斛多糖、石斛碱、石斛酚、石斛胺，总氨基酸,还有特殊的菲类、联抗癌成分。苄类其中石斛多糖含量高达22％。铁皮石斛含有17种氨基酸和7种无机元素,其野生品及其悬浮培养的原球茎氨基酸的总量分别达到133.1、120.4mg/g,其中,铁皮石斛生品以谷氨酸、天冬氨酸、缬氨酸和亮氨酸为主要氨基酸,4种氨基酸占总氨基酸的43.8％。而悬浮培养的原球茎以谷氨酸、天冬氨酸和精氨酸为主要氨基酸,这3种氨基酸占总氨基酸的52.0％。谷氨酸、天冬氨酸的含量在野生品和原球茎中都比较高,在人体必需氨基酸中,两者都含有除色氨酸以外的全部人体必需氨基酸,其中,亮氨酸比例最高。

石斛滋阴降火、提高免疫力、补益脾胃、降低血糖、解酒养胃护肝、抑制肿瘤、强筋降脂、延年益寿、明亮眼睛、滋养肌肤。

桂枝

本品为樟科植物肉桂Cinnamomum cassia Presl的干燥嫩枝。春、夏二季采收，除去叶，晒干，或切片晒干。桂枝主产于广西、广东及云南等地。春、夏季剪下嫩枝，晒干或阴干，切成薄片或小段用。辛、甘，温。归心、肺、膀胱经。具有发汗解肌，温通经脉，助阳化气，平冲降气的功效。常用于风寒感冒，脘腹冷痛，血寒经闭，关节痹痛，痰饮，水肿，心悸等。

薄荷

本品为唇形科薄荷属植物薄Mentha haplocalyx Briq.的干燥地上部分。夏、秋二季茎叶茂盛或花开至三轮时，选晴天，分次采割，晒干或阴干。薄荷具有医用和食用双重功能，主要食用部位为茎和叶，也可榨汁服。在食用上，薄荷既可作为调味剂，又可作香料，还可配酒、冲茶等。每100克干薄荷中，含水分9.6克、蛋白质6.8克和纤维31.1克，能提供870.7千焦的热量。

薄荷是中国常用中药，幼嫩茎尖可作菜食，全草又可入药，治感冒发热喉痛，头痛，目赤痛，肌肉疼痛，皮肤风疹搔痒，麻疹不透等症，此外对痈、疽、疥、癣、漆疮亦有效。

薄荷含有薄荷醇，该物质可清新口气并具有多种药性，可缓解腹痛、胆囊问题如痉挛，还具有防腐杀菌、利尿、化痰、健胃和助消化等功效。大量食用薄荷可导致失眠，但小剂量食用却有助于睡眠。

谷精草

别名为耳朵刷子、挖耳朵草、珍珠草、鼓槌草、衣钮草、谷精珠；本品为谷精草科植物谷精草Eriocaulon buergerianum Koern.的干燥带花茎的头状花序。秋季采收，将花序连同花茎拔出，晒干。谷精草味微苦、甜，性温，无毒。入肝脾二经，为清热明目之品。治喉痹、牙痛、退翳膜、散火热，疗疮疡。用治肝经风热所致之目赤肿痛、目生翳膜、羞明多泪、雀盲、头痛、齿痛、喉痹、鼻衄等。

青葙子

别名为野鸡冠花、狗尾花、狗尾苋；本品为苋科植物青葙Celosia argentea L.的干燥成熟种子。秋季果实成熟时采割植株或摘取果穗，晒干，收集种子，除去杂质。青葙子味苦,性微寒，归肝经，具有清肝火，祛风热，明目退翳的功效。主治肝热目赤肿痛，眼生翳膜，视物昏花，阳亢眩晕，鼻衄，皮肤风热痛痒，疥癞，疮癣。《本草纲目》：青葙子治眼，与决明子、苋实同功；《日华子本草》：治五脏邪气，益脑髓，明耳目，镇肝，坚筋骨，去风寒湿痹；《药性论》：治肝脏热毒冲眼，赤障、青盲、翳肿。

青葙子中含有丰富的脂肪酸，硝酸钾和烟酸，另外还含有β-谷甾醇、棕榈酸胆甾烯酯、3,4-二羟基苯甲醛、对羟基苯甲酸、3,4-二羟基苯甲酸、正丁基-β-D-果糖甙等。

目赤肿痛，翳膜障眼，症属风热者，与可菊花、蔓荆子、木贼等配伍，以疏风清热明目；属肝火上炎者，可与决明子、栀子、夏枯草等同用，以清肝泻火退翳；若伤寒热毒攻眼，赤痛兼白翳者，宜与黄连、黄芩、大黄等相合；凡治目生翳膜者，均可与谷精草、密蒙花等并用，以增强明目退翳之功；若肝虚眼目昏涩，泪出翳生者，则应与干地黄、菟丝子、五味子等配用，以补益肝肾。

冰片

别名合成龙脑、梅片、艾粉、结片；分机制冰片与艾片两类。机制冰片以松节油、樟脑等为原料经化学方法合成的龙脑；艾片为菊科艾纳香属植物大风艾的鲜叶经蒸气蒸馏、冷却所得的结晶，又称“艾粉”或“结片”。冰片味辛、苦，微寒；归心、肝、肺经；清香宣散，具有开窍醒神，清热散毒，明目退翳的功效，主治热病高热神昏，中风痰厥惊痫，暑湿蒙蔽清窍，喉痹耳聋，口疮齿肿，疮痈疳痔，目赤肿痛，翳膜遮睛；凡痰火郁闭，喉痹音哑，或火热壅滞，口疮齿肿者，冰片可与朱砂、硼砂、玄明粉配伍吹搽患处，以散火解毒；热闭神昏者，冰片可与麝香、牛黄、黄连、郁金等配伍，以清热开窍；暴发火眼，或翳膜胬肉者，冰片可与炉甘石、玄明粉、硼砂配伍，为末点眼。

枸杞子

本品为茄科植物宁夏枸杞Lycium barbarum L.的干燥成熟果实。夏、秋二季果实呈红色时采收，热风烘干，除去果梗。或晾至皮皱后，晒干，除去果梗。枸杞子富含枸杞多糖，枸杞多糖是一种水溶性多糖，由阿拉伯糖、葡萄糖、半乳糖、甘露糖、木糖、鼠李糖这6种单糖成分组成，具有生理活性，能够增强非特异性免疫功能，提高抗病能力，抑制肿瘤生长和细胞突变；枸杞多糖不仅是一种调节免疫反应的生物反应调节剂，而且可通过神经--内分泌--免疫调节网络发挥抗癌作用；人体的视网膜光感受器是由视黄醇和视蛋白所构成，枸杞中所含丰富的胡萝卜素可在人体内转化成维生素A，而维生素A可生成视黄醇，从而提高视力，防止黄斑症。

枸杞富含胡萝卜素，在人体内能转化成维生素A，具有维持上皮组织正常生长与分化的功能，量充足时可预防鼻、咽、喉和其他呼吸道感染，提高呼吸道抗病能力；皮肤衰老主要是由于自由基氧化所造成，而枸杞中所含的枸杞多糖、胡萝卜素都是强力的抗氧化剂，再加上枸杞所含的微量元素硒和维生素E的协同作用，组成了强大的抗氧化部队；另外，维生素A可维持上皮组织的生长与分化，防止皮肤干燥和毛囊角化，从而起到美容养颜、滋润肌肤的作用。

抗脂肪肝枸杞中所含的甜菜碱有抑制脂肪在肝细胞内沉积、促进肝细胞新生的作用。同时可防止四氯化碳引起的肝功能紊乱，故而构杞具有明确的保护肝脏、抗脂肪肝的功效；枸杞所含枸杞多糖可保护白细胞，促进机体造血功能恢复。此外.宁夏枸杞还具有调节神经内分泌、修复缺血性脑损伤、减轻脑水肿、改善大脑功能等作用。

北沙参

别名莱阳沙参、海沙参、辽沙参、条沙参；本品为伞形科植物珊瑚菜Glehnialittoralis Fr.Schmidt ex Miq.的干燥根。夏、秋二季采挖，除去须根，洗净，稍晾，置沸水中烫后，除去外皮，干燥。或洗净直接干燥。含花椒毒素、别异欧前胡内酯、东莨菪素、印度榅桲素、佛手柑内酯、开环异落叶树脂酚、咖啡酸、丁香苷、香豆素类化合物等成分。另据报道，含挥发油、氨基酸及北沙参多糖。对心脏和血压有一定的影响，如水浸液在低浓度时能增强离体蟾蜍心脏的收缩，高浓度时出现抑制作用，心室停跳，但能恢复，对在体心脏亦有作用。近年来药理研究有较大进展，发现具有解热止痛、镇痛，免疫抑制等作用。

麦冬

别名麦门冬、沿阶草；本品为百合科植物麦冬(沿阶草)Ophiopogon japonicus(Thunb.)Ker-Gawl.的干燥块根。夏季采挖，洗净，反复暴晒、堆置，至七八成干，除去须根，干燥。麦冬主要含沿阶草苷、甾体皂苷、生物碱、谷甾醇、葡萄糖、氨基酸、维生素等，具有抗疲劳、清除自由基、提高细胞免疫功能以及降血糖的作用。另外，麦冬有镇静、催眠、抗心肌缺血、抗心律失常、抗肿瘤等作用，尤其对增进老年人健康具有多方面功效；麦冬还有促进胰岛细胞功能恢复、增加肝糖原、降低血糖的作用，是糖友处方中的常用品。麦冬可代茶饮。取适量麦冬，开水浸泡，每天多服几次，能有效缓解口干渴的症状。部分糖尿病患者气阴两虚，因此饮用麦冬水时，可搭配一点党参，更能起到补气的作用。

玉竹

别名萎蕤、玉参、尾参、铃当菜、小笔管菜、甜草根、靠山竹；本品为百合科植物玉竹Polygonatum odoratum(Mill.)Druce的干燥根茎。秋季采挖，除去须根，洗净，晒至柔软后，反复揉搓、晾晒至无硬心，晒干；或蒸透后，揉至半透明，晒干。养阴润肺(肺阴虚证)用治阴虚肺燥有热的干咳少痰，咯血，声音嘶哑等症，常与沙参、麦冬等同用，如沙参麦冬汤。本品补阴而不恋邪，治素体阴虚，感受外邪所致的发热，头痛，咳嗽，咽干口渴等症，可与葱白、豆豉等同用，如加减葳蕤汤。

益胃生津(胃阴虚证)用治燥伤胃阴，口干舌燥，食欲缺乏，常与麦冬、沙参等同用；用治胃热津伤之消渴，可与石膏、知母等同用。

安神强心，玉竹补而不腻，不寒不燥，故有“补益五脏，滋养气血，平补而润，兼除风热”之功，有滋养镇静神经和强心的作用。对心悸、心绞痛有很好的缓解作用；降血糖，玉竹对血糖具有明显降低作用，能改善人体的耐糖功能；润肤、消炎，玉竹还有润泽皮肤，消散皮肤慢性炎症和治疗跌伤扭伤的功效。

密蒙花

别名蒙花、蒙花珠、老蒙花、羊耳朵朵尖、水锦花、黄花醉鱼草；本品为马钱科植物密蒙花Buddleja officinalis Maxim.的干燥花蕾及其花序。春季花未开放时采收，除去杂质，干燥。密蒙花含有刺槐素等多种黄酮类物质。刺槐素有类似于维生素P的功效，能解除平滑肌痉挛，降低皮肤、血管的通透性，从而减轻炎性病变。在临床上，多用于治疗目红肿痛、烂眼多泪、怕光、白内障等眼科疾病。以密蒙花加石决明、木贼、白蒺藜、菊花、羌活，煎汤，内服，可防治泪多、怕光、红肿疼痛、视物不清及眼部时痛时痒等症。取密蒙花与黄柏同用，可治眼障翳。取密蒙花配伍菊花、枸杞、蔓荆子、青葙子、木贼、石决明、白蒺藜，可治两眼昏暗，羞明怕光。

秦皮

别名梣皮；本品为木犀科植物苦枥白蜡树Fraxinus rhynchophylla Hance、白蜡树Fraxinus chinensis Roxb.、尖叶白蜡树Fraxinus szaboana Lingelsh.或宿柱白蜡树Fraxinus stylosa Lingelsh.的干燥枝皮或干皮。春、秋二季剥取，晒干。秦皮味苦，寒；归肝经、胆经、大肠经；秦皮有清热燥湿，清肝明目，收涩止痢，止带的功效；秦皮主治热毒泻痢，带下阴痒，肝热目赤肿痛，目生翳障，秦皮清热之中，能泻肝火、明目退翳，用治肝经郁火所致目赤肿痛、目生翳膜，可单用煎水洗眼；或配栀子、淡竹叶煎服；秦皮治湿热泻痢、带下：秦皮性苦寒而收涩，功能清热燥湿、收涩止痢、止带，故可用治湿热泻痢，里急后重，常配白头翁、黄连、黄柏等药用。

在一种实施方式中，中药组分的制备方法如下：

(1)将中药组分的制备原料用冷水浸泡，干燥后备用；

(2)将步骤(1)所得产物放入蒸馏水中蒸煮，过滤得滤液、滤渣，将滤液浓缩，得A组分提取液；

(3)将步骤(2)中的滤渣放入乙醇的混合液中，回流提取，浓缩得B组分提取液，即得。

在一种实施方式中，按组合物的重量百分比计，水相组分包括4.5～9.5％小分子醇、0.02～0.05％络合剂、0.01～0.04％氨基酸以及余量水；优选地，水相组分包括5.5％小分子醇、0.03％络合剂、0.02％氨基酸以及余量水。

在一种实施方式中，小分子醇选自丙二醇、1,3-丁二醇、1,2-已二醇、甘油中的任一种或多种的组合；优选地，小分子醇为1,3-丁二醇与1,2-已二醇；进一步优选地，1,3-丁二醇与1,2-已二醇的重量比为1：(0.05～0.2)；更优选地，1,3-丁二醇与1,2-已二醇的重量比为1：0.1。

在一种实施方式中，氨基酸选自精氨酸、谷氨酰胺、组氨酸、丝氨酸、谷氨酸、甘氨酸中的任一种或多种的组合；优选地，氨基酸为精氨酸。

在一种实施方式中，络合剂为EDTA二钠和\或EDTA四钠；优选地，络合剂为EDTA二钠。

申请人发现当采用重组水蛭素发酵液与多种中药组分一起使用时，可以有效治疗眼疲劳，眼部干涩红肿，视物模糊，眼痒眼痛、黑眼圈以及眼袋的问题，可能由于重组水蛭素发酵液与其一起使用，有着很好的主要起到促进眼部皮肤的血液循环和肌肉舒缓的作用，有调节免疫能力、降血糖、降血脂、抗肺瘤、抗炎抑菌、清肝明目、保肝利胆、滋养肌肤的作用，同时促进皮肤对成分的吸收，从而有效减轻眼疲劳，眼部干涩红肿，视物模糊，眼痒眼痛、黑眼圈以及眼袋的症状；此外，申请人也发现，通过调控增溶剂，可以有效提高对眼疲劳，眼部干涩红肿，视物模糊，眼痒眼痛、黑眼圈以及眼袋的治疗效果，可能由于通过调控增溶剂以改善体系的相容性与分散性，从而改善皮肤对组合物的吸收效果，进而影响组合物对眼部的治疗的效果。

本发明第二方面提供了一种所述适用于眼部的含有重组水蛭素的中药组合物的制备方法，包括如下步骤：

(1)将组分A混合均匀、加热；

(2)B组分混合均匀、搅拌并加热；

(3)将B组分加入到A中，剪切混合物；

(4)自然降温，加入重组水蛭素发酵液以及中药组分，搅拌均匀；

(5)再加入增溶剂搅拌均匀，即得。

优选地，所述适用于眼部疲劳的组合物的制备方法，包括如下步骤：

(1)将组分A混合均匀，并加热至70-80℃；

(2)B组分混合均匀，搅拌并加热至70-80℃；

(3)将B组分加入到A中，加完后剪切混合物5～10min，至料体为均匀的白色乳液状；

(4)自然降温，待温度降到50℃后，加入重组水蛭素发酵液以及中药组分搅拌均匀；

(5)待温度将至40℃后，加入增溶剂搅拌均匀，即得。

本发明第三方面提供了所述适用于眼部的含有重组水蛭素的中药组合物的应用，其应用于治疗眼部疲劳和干眼症。

实施例1

本发明的实施例1提供一种适用于眼部的含有重组水蛭素的中药组合物，按组合物的重量百分比计，包括1.5％油相组分、0.5％增溶剂、8％重组水蛭素发酵液、1.2％中药组分以及余量水相组分；

油相组分包括保湿剂与透明质酸钠，保湿剂与透明质酸钠的重量比为1：0.1；

保湿剂为木糖醇类物质与黄原胶，木糖醇类物质与黄原胶的重量比为1：0.3；

木糖醇类物质购自法国SEPPIC公司，AQUAXYL木糖醇；

增溶剂为油醇聚醚，油醇聚醚包括油醇聚醚-12、油醇聚醚-15、油醇聚醚-20，油醇聚醚-12、油醇聚醚-15、油醇聚醚-20的重量比为1：1：1；

中药组分的制备原料包括野菊花、桑叶、决明子、黄柏、珍珠粉、炉甘石、益母草、红花、川芎、丹参、石斛、桂枝、薄荷、谷精草、青葙子、冰片、枸杞子、北沙参、麦冬、玉竹、密蒙花以及秦皮，野菊花、桑叶、决明子、黄柏、珍珠粉、炉甘石、益母草、红花、川芎、丹参、石斛、桂枝、薄荷、谷精草、青葙子、冰片、枸杞子、北沙参、麦冬、玉竹、密蒙花以及秦皮的含量相同；

中药组分的制备方法如下：

(1)将中药组分的制备原料用冷水浸泡，干燥后备用；

(2)将步骤(1)所得产物放入蒸馏水中蒸煮，过滤得滤液、滤渣，将滤液浓缩，得A组分提取液；

(3)将步骤(2)中的滤渣放入乙醇的混合液中，回流提取，浓缩得B组分提取液，即得；

重组水蛭素发酵液的制备过程为：将种子液置于初始培养基中，通无菌空气，并保持DO值大于40％；当DO值大于55％时，于初始培养基中通过流加的方式滴加补料培养基；其中，无菌空气的通气量为5L/min，初始培养基的温度为30℃，并通过滴加氨水控制初始培养基的pH为5.0，且氨水的浓度为25wt％；

重组水蛭素的制备过程在摇瓶中进行，转速为650r/min；

种子液的接种量为11％；

种子液的制备方法为：，种子液的制备方法为：①接种工程菌甘油保藏菌至装有5mL种子培养基的100mL三角瓶中，于30℃，220rpm摇床培养24小时；②转接至装有50mL种子培养基的250mL三角瓶中，于30℃，220rpm摇床培养24小时；③转接至装有250mL种子培养基的1000mL三角瓶中(共两瓶)，于30℃，220rpm摇床培养12小时，即得待接种的种子液；

种子培养基包括葡萄糖、YNB、氨基酸以及水，种子培养基中的蔗糖含量为初始培养基的溶液的总体积的20g/L；葡萄糖、YNB、氨基酸的重量比为20：7：1.5；种子培养基中的水含量为480mL；氨基酸为L-精氨酸、L-组氨酸以及L-色氨酸；L-精氨酸、L-组氨酸以及L-色氨酸的重量比为1：1：1；接种工程菌为INVSC1酿酒酵母菌株；

初始培养基的制备原料包括糖溶液、微量金属溶液以及维生素溶液；

糖溶液包括无氨基酵母氮源(YNB)、碳源、氨基酸溶液、铵盐、磷酸盐、镁盐以及消泡剂，无氨基酵母氮源(YNB)含量为初始培养基的溶液的总体积的7g/L，碳源含量为初始培养基的溶液的总体积的35g/L，氨基酸溶液含量为初始培养基的溶液的总体积的20mL/L，铵盐含量为初始培养基的溶液的总体积的15g/L；

糖溶液中的铵盐、磷酸盐以及镁盐的重量比为1.3：2.5：1；

消泡剂为吐温80；消泡剂含量为初始培养基的溶液的总体积的1mL/L；

氨基酸溶液包括L-组氨酸、L-亮氨酸、L-赖氨酸以及L-蛋氨酸，L-组氨酸、L-亮氨酸、L-赖氨酸以及L-蛋氨酸的重量比为1：3：1.5：1；其中，L-组氨酸含量为氨基酸溶液的2g/L；

初始培养基的制备原料中的微量金属溶液含量为初始培养基的溶液的总体积的10mL/L，初始培养基的制备原料中的维生素溶液含量为初始培养基的溶液的总体积的12mL/L；

补料培养基包括微量金属溶液、维生素溶液、碳源、磷酸盐、镁盐以及钾盐，补料培养基中的碳源含量为初始培养基的溶液与补料培养基的溶液的总体积的400g/L；补料培养基中的维生素溶液含量为初始培养基的溶液与补料培养基的溶液的总体积的12mL/L；补料培养基中的微量金属溶液含量为初始培养基的溶液与补料培养基的溶液的总体积的10mL/L；补料培养基中的钾盐含量为初始培养基的溶液与补料培养基的溶液的总体积的3.5g/L；补料培养基中的钾盐、镁盐以及磷酸盐的重量比为1：1.5：3.5；

碳源为半乳糖；

微量金属溶液包括钠盐、锌盐、钙盐以及锰盐，钠盐、锌盐、钙盐以及锰盐的重量比为1：80：30：5；其中，微量金属溶液中的钠盐含量为微量金属溶液的0.1g/L；

微量金属溶液还包括0.5M EDTA，EDTA含量为微量金属溶液的80mL/L；

锌盐为硫酸锌，钠盐为钼酸钠，钙盐为氯化钙，锰盐为二氯化锰；钾盐为硫酸钾，镁盐为硫酸镁，磷酸盐为磷酸二氢钾；铵盐为硫酸铵；

维生素溶液包括生物素、烟酸以及盐酸硫胺，生物素、烟酸以及盐酸硫胺的重量比为1：22：20；其中，生物素含量为维生素溶液的0.05g/L；

初始培养基的制备过程包括以下步骤：

(1)将糖溶液进行灭菌处理，并通过流加的方式添加于发酵罐中；

(2)将微量金属溶液通过0.22μm的无菌过滤器过滤除菌，并添加于发酵罐中；

(3)将维生素溶液通过0.22μm的无菌过滤器过滤除菌，并添加于发酵罐中，即得初始培养基；

按组合物的重量百分比计，水相组分包括5.5％小分子醇、0.03％络合剂、0.02％氨基酸以及余量水；

小分子醇为1,3-丁二醇与1,2-已二醇，1,3-丁二醇与1,2-已二醇的重量比为1：0.1；

氨基酸为精氨酸，络合剂为EDTA二钠；

所述适用于眼部疲劳的组合物的制备方法，包括如下步骤：

(1)将组分A混合均匀，并加热至75℃；

(2)B组分混合均匀，搅拌并加热至75℃；

(3)将B组分加入到A中，加完后剪切混合物7min，至料体为均匀的白色乳液状；

(4)自然降温，待温度降到50℃后，加入重组水蛭素发酵液以及中药组分搅拌均匀；

(5)待温度将至40℃后，加入增溶剂搅拌均匀，即得。

实施例2

本发明的实施例2提供一种适用于眼部的含有重组水蛭素的中药组合物，按组合物的重量百分比计，包括3％油相组分、0.8％增溶剂、15％重组水蛭素发酵液、2％中药组分以及余量水相组分；

油相组分包括保湿剂与透明质酸钠，保湿剂与透明质酸钠的重量比为1：0.3；

保湿剂为木糖醇类物质与黄原胶，木糖醇类物质与黄原胶的重量比为1：0.5；

木糖醇类物质购自法国SEPPIC公司，AQUAXYL木糖醇；

增溶剂为油醇聚醚，油醇聚醚包括油醇聚醚-12、油醇聚醚-15、油醇聚醚-20，油醇聚醚-12、油醇聚醚-15、油醇聚醚-20的重量比为1：1.2：1.2；

中药组分的制备原料包括野菊花、桑叶、决明子、黄柏、珍珠粉、炉甘石、益母草、红花、川芎、丹参、石斛、桂枝、薄荷、谷精草、青葙子、冰片、枸杞子、北沙参、麦冬、玉竹、密蒙花以及秦皮，野菊花、桑叶、决明子、黄柏、珍珠粉、炉甘石、益母草、红花、川芎、丹参、石斛、桂枝、薄荷、谷精草、青葙子、冰片、枸杞子、北沙参、麦冬、玉竹、密蒙花以及秦皮的含量相同；中药组分的制备方法同实施例1；

按组合物的重量百分比计，水相组分包括9.5％小分子醇、0.05％络合剂、0.04％氨基酸以及余量水；

小分子醇为1,3-丁二醇与1,2-已二醇，1,3-丁二醇与1,2-已二醇的重量比为1：0.2；

氨基酸为精氨酸，络合剂为EDTA二钠；

所述适用于眼部疲劳的组合物的制备方法同实施例1。

实施例3

本发明的实施例3提供一种适用于眼部的含有重组水蛭素的中药组合物，按组合物的重量百分比计，包括1％油相组分、0.3％增溶剂、5％重组水蛭素发酵液、0.8％中药组分以及余量水相组分；

油相组分包括保湿剂与透明质酸钠，保湿剂与透明质酸钠的重量比为1：0.05；

保湿剂为木糖醇类物质与黄原胶，木糖醇类物质与黄原胶的重量比为1：0.2；

木糖醇类物质购自法国SEPPIC公司，AQUAXYL木糖醇；

增溶剂为油醇聚醚，油醇聚醚包括油醇聚醚-12、油醇聚醚-15、油醇聚醚-20，油醇聚醚-12、油醇聚醚-15、油醇聚醚-20的重量比为1：0.8：0.8；

中药组分的制备原料包括野菊花、桑叶、决明子、黄柏、珍珠粉、炉甘石、益母草、红花、川芎、丹参、石斛、桂枝、薄荷、谷精草、青葙子、冰片、枸杞子、北沙参、麦冬、玉竹、密蒙花以及秦皮，野菊花、桑叶、决明子、黄柏、珍珠粉、炉甘石、益母草、红花、川芎、丹参、石斛、桂枝、薄荷、谷精草、青葙子、冰片、枸杞子、北沙参、麦冬、玉竹、密蒙花以及秦皮的含量相同；中药组分的制备方法同实施例1；

按组合物的重量百分比计，水相组分包括4.5％小分子醇、0.02％络合剂、0.01％氨基酸以及余量水；

小分子醇为1,3-丁二醇与1,2-已二醇，1,3-丁二醇与1,2-已二醇的重量比为1：0.05；

氨基酸为精氨酸，络合剂为EDTA二钠；

所述适用于眼部疲劳的组合物的制备方法同实施例1。

实施例4

本发明的实施例4提供一种适用于眼部的含有重组水蛭素的中药组合物，其具体实施方式同实施例1，不同之处在于，冰片提取物与野菊花提取物含量为0。

实施例5

本发明的实施例5提供一种适用于眼部的含有重组水蛭素的中药组合物，其具体实施方式同实施例1，不同之处在于，桑叶提取物与决明子提取物含量为0。

实施例6

本发明的实施例6提供一种适用于眼部的含有重组水蛭素的中药组合物，其具体实施方式同实施例1，不同之处在于，益母草提取物与谷精草提取物含量为0。

实施例7

本发明的实施例7提供一种适用于眼部的含有重组水蛭素的中药组合物，其具体实施方式同实施例1，不同之处在于，中药组分的含量为0。

实施例8

本发明的实施例8提供一种适用于眼部的含有重组水蛭素的中药组合物，其具体实施方式同实施例1，不同之处在于，重组水蛭素发酵液含量为0。

实施例9

本发明的实施例9提供一种适用于眼部的含有重组水蛭素的中药组合物，其具体实施方式同实施例1，不同之处在于，重组水蛭素发酵液与中药组分含量为0。

实施例10

本发明的实施例10提供一种适用于眼部的含有重组水蛭素的中药组合物，其具体实施方式同实施例1，不同之处在于，油醇聚醚-12含量为0。

实施例11

本发明的实施例11提供一种适用于眼部的含有重组水蛭素的中药组合物，其具体实施方式同实施例1，不同之处在于，油醇聚醚-20含量为0。

性能评估

在上海和广州挑选有眼部干眼症和眼疲劳的志愿者，对缓解眼疲劳，消除眼部干涩红肿，视物模糊，眼痒眼痛、祛黑眼圈和眼袋的症状进行了临床试验，志愿者年龄在15-40岁之间，每个实施例所得产品观察100例志愿者，实验结果记录为有效与无效，计算不同实施例1～11所得组合物对不同症状的治疗有效率，结果见表1；其中，有效为症状明显减轻，无效为症状没有减轻。

使用过程中，将实施例1～11所得组合物用于检测，志愿者每天晚上使用一次，连续使用两天后，观察眼疲劳、眼痒眼痛、干涩红肿、视物模糊、异物感这些症状是否有减轻，连续使用3天后，观察黑眼圈症状是否有减轻，连续使用7天后，观察眼袋症状是否减轻。

表1不同症状有效率性能测试结果

利用本发明提供的组合物制备的该眼贴将水蛭素和中药复方相结合，其对眼疲劳，眼痒眼痛，眼部干涩红肿，视物模糊和异物感有非常明显的效果，使用两次眼部的相关症状基本消失，有效率达到95％～100％，连续使用3天，对黑眼圈有明显的缓解效果，连续一周，对祛眼袋也有很好的效果，该眼贴疗效确切，使用方便。

前述的实例仅是说明性的，用于解释本发明所述方法的一些特征。所附的权利要求旨在要求可以设想的尽可能广的范围，且本文所呈现的实施例仅是根据所有可能的实施例的组合的选择的实施方式的说明。因此，申请人的用意是所附的权利要求不被说明本发明的特征的示例的选择限制。在权利要求中所用的一些数值范围也包括了在其之内的子范围，这些范围中的变化也应在可能的情况下解释为被所附的权利要求覆盖。

Claims (10)

1.一种适用于眼部的含有重组水蛭素的中药组合物，其特征在于，按组合物的重量百分比计，包括1～3％油相组分、0.3～0.8％增溶剂、5～15％重组水蛭素发酵液、0.8～2％中药组分以及余量水相组分。

2.根据权利要求1所述的中药组合物，其特征在于，中药组分的制备原料选自野菊花、桑叶、决明子、黄柏、珍珠粉、炉甘石、益母草、红花、川芎、丹参、石斛、桂枝、薄荷、谷精草、青葙子、冰片、枸杞子、北沙参、麦冬、玉竹、密蒙花、秦皮中的任一种或多种的组合。

3.根据权利要求1或2所述的中药组合物，其特征在于，按组合物的重量百分比计，水相组分包括4.5～9.5％小分子醇、0.02～0.05％络合剂、0.01～0.04％氨基酸以及余量水。

4.根据权利要求3所述的中药组合物，其特征在于，氨基酸选自精氨酸、谷氨酰胺、组氨酸、丝氨酸、谷氨酸、甘氨酸中的任一种或多种的组合。

5.根据权利要求1或2所述适用于眼部的含有重组水蛭素的中药组合物，其特征在于，油相组分包括保湿剂与透明质酸钠，保湿剂与透明质酸钠的重量比为1：(0.05～0.3)。

6.根据权利要求5所述的中药组合物，其特征在于，保湿剂选自木糖醇类物质、羟基乙酸、黄原胶、甘油辛酸酯、聚乙二醇、海藻糖、赤藓醇、吡咯烷酮羧酸钠、乙氧基葡萄糖衍生物中的任一种或多种的组合。

7.根据权利要求1或2所述的中药组合物，其特征在于，增溶剂选自油醇聚醚、聚丙烯酸酯、硬脂醇、氢化蓖麻油、吐温、司盘中的任一种或多种的组合。

8.根据权利要求7所述的中药组合物，其特征在于，油醇聚醚选自油醇聚醚-12、油醇聚醚-15、油醇聚醚-20中的任一种或多种的组合。

9.一种根据权利要求1～8任一项所述的中药组合物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)将组分A混合均匀、加热；

(2)B组分混合均匀、搅拌并加热；

(3)将B组分加入到A中，剪切混合物；

(4)自然降温，加入重组水蛭素发酵液以及中药组分，搅拌均匀；

(5)再加入增溶剂搅拌均匀，即得。

10.根据权利要求1～8任一项所述的中药组合物应用于治疗眼部疲劳和干眼症。