CN112625921B - 一种用于处理高木质素含量废弃物的菌制剂 - Google Patents

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Abstract

本发明属于微生物领域，具体涉及一种用于处理高木质素含量废弃物的菌制剂。具体技术方案为：一株梳棉状嗜热丝孢菌，于2020年12月01日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为：CGMCC No.21075。并提供了一种处理含木质素废弃物的菌制剂，包括所述梳棉状嗜热丝孢菌和粪壳菌。本发明提供了两种新的可降解木质素的微生物，均具有独立降解木质素的能力，还具有一定的降解纤维素和半纤维素的能力。并将这两种微生物制备为可用于高木质素含量废弃物堆肥的菌制剂，达到了只使用两种微生物即可大幅提高堆肥效率的效果，在木质素处理上具有广阔的应用前景。

Description

一种用于处理高木质素含量废弃物的菌制剂
技术领域
本发明属于微生物领域，具体涉及一种用于处理高木质素含量废弃物的菌制剂。
背景技术
木质素是自然界含量仅次于纤维素和甲壳素的生物质，其存在形式多样且无规则。根据构成木质素前体的不同可将其分为三类：介子醇作为前体，由紫丁香基苯丙烷结构单体聚合而成的丁香基木质素(Syringyl lignin，S-木质素)、松柏醇作为前体，由愈创木基苯丙烷结构单体聚合而成的愈创木基木质素(Guajacyl lignin，G-木质素)、香豆醇作为前体由对羟基苯基苯丙烷结构单体聚合而成的对羟苯基对羟基苯基木质素(Hydroxyphenyl lignin，H-木质素)。
同时，不同植物中，木质素存在的结构单元组合也不一样。复杂的结构使得木质素在自然界中转化率极低。在木质组织中，木质素包围着半纤维素和纤维素，组成植物外层基质，形成一个紧密的网状结构。因此，木质素的低转化率也限制了对纤维素和半纤维素的利用。
现有技术中，几乎没有将木质素利用起来，往往是使用强酸、强碱等将其从植物中脱除，不仅要耗费大量化学试剂，还会污染环境，同时也直接浪费了大量木质素，且可能降低纤维素、半纤维素的品质。这也导致园林废弃物、秸秆等含木质素含量高的垃圾处理效果不佳。如果能利用微生物降解木质素，对高木质素含量废弃物进行堆肥处理，不仅可解决既往污染环境的问题，还可以合理利用木质素资源。
同时，木质素降解产物(酚类物质)是合成腐殖酸的前体，如果能利用微生物针对性强化木质素的降解，还可以促进堆肥物料定向腐殖化的发生，进一步提升堆肥产物的商业价值。
因此，开发新的木质素降解微生物资源，具有重要的现实意义。
发明内容
本发明的目的是提供一种可用于处理高木质素含量废弃物的菌制剂及其制备和应用方法。
为实现上述发明目的，本发明所采用的技术方案是：一株梳棉状嗜热丝孢菌，于2020年12月01日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编：100101，保藏编号为：CGMCCNo.21075。
相应的，一株梳棉状嗜热丝孢菌，其ITS基因序列如SEQ ID No.2所示。
相应的，所述梳棉状嗜热丝孢菌在降解木质素中的应用。
优选的，所述梳棉状嗜热丝孢菌在进行含木质素的物料堆肥中的应用。
优选的，与粪壳菌联合应用，所述粪壳菌于2020年12月01日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为：CGMCC No.21076。
优选的，先添加所述粪壳菌，待温度＞50℃后，再添加所述梳棉状嗜热丝孢菌。
优选的，所述应用的pH为3.0～9.0。
优选的，所述应用需外加氮源，所述外加氮源为酒石酸铵、尿素、蛋白胨、硝酸铵、氯化铵中的一种或几种混合。
相应的，一种处理含木质素废弃物的菌制剂，菌制剂中包括梳棉状嗜热丝孢菌和粪壳菌；梳棉状嗜热丝孢菌于2020年12月01日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编：100101，保藏编号为：CGMCC No.21075；粪壳菌于2020年12月01日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为：CGMCC No.21076。
优选的，将梳棉状嗜热丝孢菌和粪壳菌分别与载体混合，制备为梳棉状嗜热丝孢菌菌制剂和粪壳菌菌制剂；使用菌制剂时，在处理开始时，联合添加梳棉状嗜热丝孢菌菌制剂和粪壳菌菌制剂，或在处理开始时，添加粪壳菌菌制剂，待处理温度达到50℃以上时，添加梳棉状嗜热丝孢菌菌制剂。
本发明具有以下有益效果：本发明提供了两种新的可降解木质素的微生物，均具有独立降解木质素的能力，还具有一定的降解纤维素和半纤维素的能力。并将这两种微生物制备为可用于高木质素含量废弃物堆肥的菌制剂，达到了只使用两种微生物即可大幅提高堆肥效率的效果，在木质素处理上具有广阔的应用前景。
附图说明
图1为MSDA1的菌落形态示意图；
图2为MSDA1的显微形态示意图；
图3为HDGA2的菌落形态示意图；
图4为HDGA2的显微形态示意图；
图5为MSDA1在PDA平板和碱木质素平板上的生长曲线；
图6为HDGA2在PDA平板和碱木质素平板上的生长曲线；
图7为不同时间对MSDA1降解碱木质素影响示意图；
图8为不同时间对HDGA2降解碱木质素影响示意图；
图9为不同pH对MSDA1降解碱木质素影响示意图；
图10为不同pH对HDGA2降解碱木质素影响示意图；
图11为不同氮源对MSDA1降解碱木质素影响示意图；
图12为不同氮源对HDGA2降解碱木质素影响示意图；
图13为不同氮比例对MSDA1降解碱木质素影响示意图；
图14为不同氮比例对HDGA2降解碱木质素影响示意图；
图15为不同碱木质素浓度对MSDA1降解碱木质素影响示意图；
图16为不同碱木质素浓度对HDGA2降解碱木质素影响示意图；
图17为不同转速对MSDA1降解碱木质素影响示意图；
图18为不同转速对HDGA2降解碱木质素影响示意图；
图19为不同Mn2+浓度对MSDA1降解碱木质素影响示意图；
图20为不同Mn2+浓度对HDGA2降解碱木质素影响示意图；
图21为不同Cu2+浓度对MSDA1降解碱木质素影响示意图；
图22为不同Cu2+浓度对HDGA2降解碱木质素影响示意图；
图23为MSDA1在木屑中生长10天后的生长情况示意图；
图24为HDGA2在木屑中生长10天后的生长情况示意图；
图25为堆肥中各组温度变化示意图。
具体实施方式
本发明提供了两种新的可降解木质素的微生物，分别为：粪壳菌属菌命名为：粪壳菌MSDA1(Sordaria sp.)，于2020年12月01日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编：100101，保藏编号为：CGMCC No.21076。梳棉状嗜热丝孢菌HDGA2(Thermomyceslanuginosus)，于2020年12月01日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编：100101，保藏编号为：CGMCC No.21075。
并将上述两种微生物制备为菌制剂，用于木质素含量高的废弃物处理。
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。若未特别指明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段。
实施例一：木质素降解菌的筛选与鉴定
1、培养基的配置
(1)碱木质素培养基：碱木质素1.0g，NH4Cl 2.0g，K2HPO4 1.0g，KH2PO4 1.0g,MgSO4·7H2O 0.20g，CaCl2 0.1g，FeSO4·7H2O 0.05g，MnSO4·7H2O 0.02g，加入琼脂15.0g，补水至1000mL。121℃灭菌20min。对应的液体培养基不加琼脂即可。
(2)马铃薯培养基(PDA)：去皮马铃薯200g，切块煮沸，用纱布过滤，滤液中再加葡萄糖20.0g，KH2PO4 3.0g，MgSO4·7H2O 1.5g，加入琼脂15.0g，补水至1000mL。115℃灭菌30min。对应的液体培养基不加琼脂即可。
2、菌种的分离与纯化
将堆肥厂玉米秸秆样品在无菌条件下接种到碱木质素固体培养基上，30℃培养7天。期间间隔24h进行观察，选择在相同条件下能更快长满碱木质素培养基的微生物并挑取菌丝，接种到新的碱木质素固体培养基上，反复接种纯化直至获得纯菌株。将所得各菌株接种到液体PDA培养基中，在30℃、150r下培养24h，将获得的种子液按10％(v/v)的比例接种到新的液体碱木质素培养基中，计算5天后培养基中碱木质素降解率，选出降解率前两名的微生物，分别命名为MSDA1和HDGA2。
将获得的菌种进行测序分析：采用真菌全基因组快速抽提试剂盒，提取纯菌株的全基因组，通过选用真菌ITS通用引物进行PCR扩增，然后测序分析。MSDA1的ITS基因序列如SEQ ID No.1所示，HDGA2的ITS基因序列如SEQ ID No.2所示。测序结果经NCBI数据库中的BLAST比对，菌株MSDA1与粪壳菌属Sordaria sp.的同源性为98.96％，结合该菌菌落形态(如图1所示)和显微形态(如图2所示)，鉴定该菌株为粪壳菌属菌。HDGA2与梳棉状嗜热丝孢菌Thermomyces lanuginosus的同源性为99.96％，结合该菌菌落形态(如图3所示)和显微形态(如图4所示)，鉴定该菌株为梳棉状嗜热丝孢菌。
将所述粪壳菌属菌命名为：MSDA1(Sordaria sp.)，于2020年12月01日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编：100101，保藏编号为：CGMCC No.21076。
将所述梳棉状嗜热丝孢菌命名为：HDGA2(Thermomyces lanuginosus)，于2020年12月01日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编：100101，保藏编号为：CGMCC No.21075。
3、生长性能展示
(1)将MSDA1接种到新的PDA平板上，30℃下培养至微生物长满平板。用打孔器从长满微生物的平板上取菌块，将菌块分别倒置接种于PDA平板和碱木质素培养基平板上，定时测定菌落直径，绘制MSDA1在PDA平板和碱木质素平板上的生长曲线。结果如图5所示：MSDA1在PDA平板和碱木质素培养基平板上生长速度相当，且都能在48h内长满平板。同法测定MSDA1在碱木质素培养基平板上的生长pH和温度。每12h观察1次，结果如表1所示。表1中，“-”表示不生长，“+”表示能在84h内长满平板，“++”表示能在72h内长满平板，“+++”表示能在60h内长满平板，“++++”表示能在48h内长满平板，“+++++”表示能在36h内长满平板。
表1 MSDA1生长性能对照表
Figure BDA0002867595220000061
结果显示：MSDA1在pH为3.0～9.0范围均能生长，最适生长pH为5.0，在25℃～45℃范围内能够生长，最适生长温度30℃。
(2)将HDGA2接种到新的PDA平板上，30℃下培养至微生物长满平板。用打孔器从长满微生物的平板上取菌块，将菌块分别倒置接种于PDA平板和碱木质素培养基平板上，定时测定菌落直径，绘制HDGA2在PDA平板和碱木质素平板上的生长曲线。结果如图6所示：HDGA2在PDA平板和碱木质素培养基平板上生长速度相当，且都能在90h内长满平板。同法测定HDGA2在碱木质素培养基平板上的生长pH和温度。每10h观察1次，结果如表2所示。表2中，“-”表示不生长，“+”表示能在120h内长满平板，“++”表示能在110h内长满平板，“+++”表示能在100h内长满平板，“++++”表示能在90h内长满平板，“+++++”表示能在80h内长满平板。
表2HDGA2生长性能对照表
Figure BDA0002867595220000071
结果显示：HDGA2在pH为3.0～9.0范围均能生长，最适生长pH为7.0，在25℃～55℃范围内均能生长，最适生长温度50℃。
实施例二：木质素降解菌降解碱木质素的条件优化
取PDA斜面活化24h的菌种，按2％接种量分别将MSDA1和HDGA2接种于100mL/250mL三角瓶中，30℃、150r培养24小时，制备成种子液，种子液中，各微生物活菌浓度≥108CFU/mL。再将各微生物的种子液分别按照体积比10％的接种比例接种到50mL的液体碱木质素培养基中，采用单因素试验分别考察不同时间、不同氮源、不同转速、不同碱木质素浓度等对MSDA1和HDGA2降解碱木质素的影响。除考察因素外，培养条件为：pH＝6.5、30℃、150r/min摇床培养5天。具体如下：
1、不同时间对碱木质素降解率的影响。按照10％的接种比将种子液接种到50mL碱木质素培养基中，30℃、150r培养5天，使用分光光度法测定碱木质素浓度，计算碱木质素降解率。
MSDA1的结果如图7所示，MSDA1第1天对碱木质素降解速度最快，降解率高达52.78％，而后速度变慢，第5天降解率为71.80％，第6天降解率为71.89％，较前一天仅提高0.09％。故此，后续实验选择测定第1天和第5天的木质素降解率，以判断考察因素对MSDA1降解碱木质素的影响。
HDGA2的结果如图8所示，HDGA2第1天对碱木质素降解速度最快，降解率高达21.38％，而后速度变慢，第5天降解率为36.01％，第6天降解率为36.36％，较前一天仅提高0.26％。故此，后续实验选择测定第1天和第5天的木质素降解率来判断单因素对HDGA2降解碱木质素的影响。
2、初始pH对碱木质素降解的影响。将种子液接种到不同初始pH(3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、8.0、9.0)的液体碱木质素培养基中(使用盐酸调节pH)，30℃、150r培养5天，测定第一天和第五天木质素浓度变化。
MSDA1结果如图9所示。pH对MSDA1降解碱木质素具有显著影响，初始pH为5.0时，其对碱木质素降解速度最快。HDGA2的结果如图10所示，pH对HDGA2降解碱木质素具有显著影响，pH为5.0时其对碱木质素降解速度最快，第5天降解率为84.27％,较原pH提高了134.01％，pH为4.0时，第5天降解率76.48％，提高了112.39％。
3、不同氮源对木质素降解的影响。分别使用3.4g/L酒石酸铵、1.2g/L尿素、3.6g/L蛋白胨、1.5g/L硝酸铵作为外加氮源，替换所述碱木质素培养基中的氮源(氯化铵2g/L)。外加氮源的总量与碱木质素质量比为1.0％。分别测量各组碱木质素降解率。
MSDA1的结果如图11所示。MSDA1降解碱木质素的最佳氮源为酒石酸铵，其次为蛋白胨。酒石酸铵对应的第1天和第5天碱木质素降解率分别为54.78％、75.82％，蛋白胨对应的第1天和第5天碱木质素降解率分别为52.14％、75.07％。HDGA2的结果如图12所示，HDGA2降解碱木质素的最佳氮源为硝酸铵，其次为酒石酸铵，第1天和第5天碱木质素降解率分别为25.26％、45.72％和25.68％、44.38％。
4、不同氮比例对木质素降解的影响。分别配制氯化铵含量为1g/L、2g/L、3g/L、4g/L的碱木质素培养基，外加氮源的氮总量与碱木质素质量比分别为0.5％、1.0％、1.5％、2.0％。分别测量各组碱木质素降解率。
MSDA1的结果如图13所示。质量比为1％时，MSDA1降解碱木质素速度最快，第1天和第5天碱木质素降解率分别为47.56％、72.35％。HDGA2的结果如图14所示，质量比为1.5％时，HDGA2降解碱木质素速度最快，第1天和第5天碱木质素降解率分别为33.19％、44.70％。
5、碱木质素浓度对木质素降解的影响。分别配制碱木质素浓含量为0.5g/L、1.0g/L、1.5g/L、2.0g/L、2.5g/L的碱木质素培养基。分别测量各组碱木质素降解率。
MSDA1的结果如图15所示。过高浓度的碱木质素不利于MSDA1降解碱木质素，0.5g/L、1.0g/L浓度的碱木质素培养基第5天降解率分别为68.04％、67.59％，而1.5g/L、2.0g/L、2.5g/L浓度的碱木质素培养基第5天降解率分别为51.09％、49.80％、35.80％，呈降低趋势。HDGA2的结果如图16所示，适宜浓度的碱木质素有利于HDGA2降解碱木质素，1.0g/L浓度的碱木质素培养基第5天降解率为37.38％。
6、转速对木质素降解的影响。将接种了的碱木质素液体培养基分别置于100r、120r、150r、180r、200r恒温摇床培养。分别测量各组碱木质素降解率。
MSDA1的结果如图17所示。一定范围内提高转速能够提高MSDA1降解碱木质素效率，180r培养5天后降解率为75.23％。HDGA2的结果如图18所示，一定范围内提高转速能够提高HDGA2降解碱木质素效率，180r培养5天后降解率为43.32％。
7、Mn2+浓度对木质素降解的影响。调节MgSO4·7H2O的含量，分别配制Mn2+浓度为0mmol/L、0.4mmol/L、0.6mmol/L、0.8mmol/L、1.0mmol/L的碱木质素培养基，原培养基中Mn2+浓度为0.72mmol/L。分别测量各组碱木质素降解率。
MSDA1的结果如图19所示。MSDA1降解碱木质素的最佳Mn2+浓度为0.8mmol/L，第五天降解率为74.93％。HDGA2的结果如图20所示，HDGA2降解碱木质素的最佳Mn2+浓度为0.2mmol/L，第五天降解率为44.01％。
8、Cu2+浓度对木质素降解的影响。分别配制0mmol/L、0.05mmol/L、0.1mmol/L、0.25mmol/L、0.5mmol/L、1.0mmol/L Cu2+的碱木质素培养基(使用硫酸铜提供铜离子)，原培养基Cu2+浓度为0mmol/L。分别测量各组碱木质素降解率。
MSDA1的结果如图21所示。Cu2+在培养初期对MSDA1降解碱木质素有明显抑制作用，培养5天后，添加Cu2+的各培养基种，碱木质素降解率均低于原培养基。HDGA2的结果如图22所示，HDGA2降解碱木质素的最佳Cu2+浓度为0.05mmol/L，第五天降解率为42.26％。
实施例三：木质素降解菌降解木屑中木质素的效果验证
将木屑105℃干燥后，过40目筛，分别将粪壳菌MSDA1、丝孢菌HDGA2的PDA种子液(各活菌浓度≥108CFU/mL)接种到木屑中，接种量为1mL/g，充分混匀后，培养温度为30℃，静置培养10天。以直接将MSDA1接种到木屑中作为组1；添加3.4g/kg酒石酸铵，其他条件与组1相同，作为组2；直接将HDGA2接种到木屑中作为组3；添加1.5g/L硝酸铵，其他条件与组3相同，作为组4。测定失重率、木质素和纤维素的降解率(范式法)及其选择性系数。选择性系数＝木质素降解率/纤维素降解率。结果如表3所示。组1、3的MSDA1和HDGA2在木屑中生长10天后的生长情况分别如图23、24所示。
表3微生物处理木屑的性能展示
组别 失重率(％) 木质素降解率(％) 纤维素降解率(％) 选择性系数
组1 13.16 17.29 6.43 2.69
组2 35.76 48.35 16.24 2.98
组3 8.4 15.15 5.26 2.88
组4 28.79 32.13 14.68 2.19
实施例四：木质素降解菌在园林废弃物堆肥中的应用
1、材料准备。收集来自成都市金堂县的园林废弃物，废弃物中主要包括修建的树木枝丫、草棍等。挑拣出废弃物中的塑料垃圾等不可用于堆肥的材料，将废弃物粉碎，过40目筛。
同时准备菌剂。其中，中温菌剂为MSDA1的PDA种子液，活菌浓度≥108CFU/mL；高温菌剂为HDGA2的PDA种子液，活菌浓度≥108CFU/mL；混合菌剂为MSDA1和HDGA2的上述种子液按质量比为1:1混匀。
利用菌剂制备对应的菌制剂。具体制备方法为：将各菌剂(中温、高温、混合)按照麸皮：菌剂＝5：2的质量比吸附到麸皮上，通过摊开晾晒等方式控制含水率为30％，保存备用。
2、实验设计一个对照组，两个实验组，每组各设置3个重复。三组实验的原料相同，C/N、含水率一致。其中，对照组不添加任何菌制剂，实验组1在堆肥初期混入4％(w/w)混合菌制剂，实验组2在堆肥初期混入2％(w/w)中温菌制剂，高温期前期混入2％(w/w)高温菌制剂。堆体体积为200L，期间采用间歇性通风，每隔1小时通气2小时，通气量为0.2L·kg-1·min-1，前30天每三天翻堆一次。堆肥中，堆体温度从初始上升至50℃的过程为升温期；温度达到50℃以上时，视为进入高温期；温度从50℃开始回落至略高于室温的期间，为降温期。
3、实验结果。
(1)温度。每天12：00使用温度计测定堆体温度。温度是好氧堆肥的一个非常重要的理化参数之一，不仅能够反映堆肥进程，还能反映堆体中微生物的活性并对其产生影响，同时高温还能杀灭原料中的病虫卵，提高堆肥产品的安全性。
堆肥过程持续60d，期间共翻堆10次，集中在前30天完成。在堆肥升温期和高温期，翻堆后约半天温度得以回升，而降温期及腐熟期，翻堆后不能回升至原来的温度。温度变化如图25所示，对照组、实验组1和实验组2高于55℃的天数分别为第12d、16d和17d，最高温度分别为72.5℃、79.25℃和79.5℃。在整个堆肥过程中，实验组1、2的温度都比对照组高，其中实验组1、实验组2高温期(＞50℃)的天数相较于对照组分别延长了8d、12d。实验结果表明，接种木质素降解菌剂能有效提高堆体温度、延长堆肥高温期，且中高温菌剂分批接种比混合一次接种效果更好。
(2)总氮、有机质及腐殖酸含量变化。堆肥是指物料在微生物驱动下发生碳氮物质矿化分解、有机物稳定化和腐殖化的过程。堆肥过程中，氮素会在硝态氮、亚硝态氮及铵态氮间进行转化，或以氨气、氮气或二氧化氮的形势散失。而氮素作为重要的营养元素，其转化与损失是衡量堆肥效率的重要标准。本实验采用凯氏定氮仪测定三组总氮变化。
在整个堆肥过程中,初始时堆料中的有机质迅速分解,腐殖质碳含量降低。之后开始进入腐殖化阶段,堆料中的有机质向稳定化和腐殖化方向转化，过多的有机质损失不利于形成稳定有机质和定向腐殖化，会降低堆肥品质。通过测定堆肥结束时三组有机质变化，可以考察堆肥过程中有机质的损失。本实验采用重铬酸钾-硫酸消煮滴定测定样品有机质。
腐殖酸含量也是检测堆肥效果的重要标准之一。胡敏酸与富里酸是腐殖质的主要成分，胡敏酸的分子量大于富里酸，结构更复杂、更复杂，两者含量的高低从很大程度上决定着堆肥中腐殖质的含量，进而影响堆肥的品质。腐殖化指数(胡敏酸与富里酸的比值)能说明腐殖物质在不同形成条件下的复杂程度，腐殖化指数越高(即胡敏酸含量越高)，分子量越大，芳化度越高，复杂程度越大，堆肥品质越好，是描述堆肥腐殖化程度的重要参数。本实验通过焦磷酸钠-氢氧化钠提取重铬酸钾氧化容量法测定堆肥前后样品中总腐殖酸和胡敏酸含量。
上述各结果如表4所示。
表4各组堆肥后组分变化展示
Figure BDA0002867595220000131
从上表可以看出：对照组60天堆肥后总氮为22.5g/kg，而实验组1和实验组2的总氮含量分别增为25.16g/kg和29.34g/kg。说明添加菌制剂能够显著减少堆肥过程中的氮损失，且中高温菌制剂分批接种比混合一次接种效果好。
堆肥结束时对照组总腐殖酸、胡敏酸含量分别为151.2g/kg、84.36g/kg，腐殖化指数为1.11，均低于实验组1、2。表明添加菌制剂可极大提高腐殖化指数，有利于胡敏酸的转化，使堆肥腐殖化更彻底，进而直接提高了堆肥产品腐殖酸的含量与品质，中高温菌制剂分批加入比一批加入效果更好。
堆肥结束时，对照组有机质含量为39.28％，而实验组1和实验组2的有机质含量分别为42.07％和51.29％。结果表明添加菌剂能够显著减少堆肥过程中有机质的损失，有利于提高堆肥品质，中高温菌制剂分批接种效果更好。
以上所述的实施例仅是对本发明的优选方式进行描述，并非对本发明的范围进行限定，在不脱离本发明设计精神的前提下，本领域普通技术人员对本发明的技术方案做出的各种变形、变型、修改、替换，均应落入本发明权利要求书确定的保护范围内。
序列表
<110> 中国科学院成都生物研究所
<120> 一种用于处理高木质素含量废弃物的菌制剂
<160> 2
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 481
<212> DNA
<213> 粪壳菌属(Sordaria sp.)
<400> 1
tcctcaggcc ccggaccctc ggttcccccg ctcgcggggg gctgcccgcc ggaatgccga 60
aaccaaactc ttgatatttt atgtctctct gagtaaactt ttaaataagt caaaactttc 120
aacaacggat ctcttggttc tggcatcgat gaagaacgca gcgaaatgcg ataagtaatg 180
tgaattgcag aattcagtga atcatcgaat ctttgaacgc acattgcgct cgccagtatt 240
ctggcgagca tgcctgttcg agcgtcattt caaccatcaa gctctgcttg cgttggggat 300
ccgcggctgc ccgcggtccc tcaaaaacag tggcgggctc gctagtcaca ccgagcgtag 360
taactctaca tcgctatggt cgtgcggcgg gttcttgccg taaaaccccc aatttctaag 420
gttgacctcg gatcaggtag gaatacccgc tgaacttaag catatcaata aagcggagga 480
a 481
<210> 2
<211> 604
<212> DNA
<213> 梳棉状嗜热丝孢菌(Thermomyces lanuginosus)
<400> 2
acctgcggaa ggatcattac cgagtgcggg aacccagtcg ggtcccaatc tcccacccgt 60
gtctaccaca cctagtgttg ctttggcggg cccactcctc cggtgttccg ccgggggggt 120
cgtcccgggg cgcggtgtgc ccccggggcc cgtgcccgcc agaggcactc actgtgaacg 180
cttttgtgaa tgcgaggatt gtctgagtga cgaaatgcaa tcgttcaaaa ctttcaacaa 240
tggatctctt ggttccggca tcgatgaaga acgcagcgaa atgcgataag taatgtgaat 300
tgcagaattc cgtgaatcat cgaatctttg aacgcacatt gcgccctctg gtattccggg 360
gggcatgcct gtccgagcgt cattgcgaac cctcaagcac ggcttgtgtg ttgggccgcc 420
gtcccctcgt ttggagggga cgggcctgaa aggcagcggc ggcgtcgcgt ccggtcctcg 480
agcgtatggg gctctgtcac gcgctcaagg aggggtccgg ccggggccat agcctctgaa 540
ggtcaattct tccaaggttg acctcggatc aggtaggagt acccgctgaa cttaagcata 600
tcaa 604

Claims (9)

1.一株梳棉状嗜热丝孢菌（Thermomyceslanuginosus）HDGA2 ，其特征在于：于2020年12月01日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为：CGMCCNo.21075。
2.权利要求1所述梳棉状嗜热丝孢菌在降解木质素中的应用。
3.根据权利要求2所述应用，其特征在于：所述梳棉状嗜热丝孢菌在进行含木质素的物料堆肥中的应用。
4.根据权利要求2所述应用，其特征在于：与粪壳菌（Sordaria sp.）MSDA1 联合应用，所述粪壳菌于2020年12月01日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为：CGMCC No.21076。
5.根据权利要求4所述应用，其特征在于：先添加所述粪壳菌，待温度＞50℃后，再添加所述梳棉状嗜热丝孢菌。
6.根据权利要求2所述应用，其特征在于：所述应用的pH为3.0～9.0。
7.根据权利要求2所述应用，其特征在于：所述应用需外加氮源，所述外加氮源为酒石酸铵、尿素、蛋白胨、硝酸铵、氯化铵中的一种或几种混合。
8.一种处理含木质素废弃物的菌制剂，其特征在于：菌制剂中包括梳棉状嗜热丝孢菌和粪壳菌；梳棉状嗜热丝孢菌于2020年12月01日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为：CGMCC No.21075；粪壳菌于2020年12月01日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为：CGMCC No.21076。
9.根据权利要求8所述菌制剂，其特征在于：所述菌制剂包括梳棉状嗜热丝孢菌菌制剂和粪壳菌菌制剂；将梳棉状嗜热丝孢菌和粪壳菌分别与载体混合，分别制备为梳棉状嗜热丝孢菌菌制剂和粪壳菌菌制剂；使用菌制剂时，在处理开始时，联合添加梳棉状嗜热丝孢菌菌制剂和粪壳菌菌制剂，或在处理开始时，添加粪壳菌菌制剂，待处理温度达到50℃以上时，添加梳棉状嗜热丝孢菌菌制剂。
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