CN112585273A - 诱导免疫耐受的抗体、所诱导的淋巴细胞、以及使用所诱导的淋巴细胞的细胞治疗剂治疗法 - Google Patents

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内田浩一郎
竹田和由
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Abstract

本发明提供诱导免疫耐受的抗体、所诱导的淋巴细胞、以及使用所诱导的淋巴细胞的细胞治疗剂治疗法。特别是，本发明提供一种抗体，其抑制在某种细胞的细胞表面表达的CD80和/或CD86与在其它细胞的细胞表面表达的CD28的相互作用，且实质上不诱导因免疫激活而诱导的细胞因子。在特定的实施方式中，抗体的Fc部分是实质上不产生因免疫激活而诱导的细胞因子的部分。

Description

诱导免疫耐受的抗体、所诱导的淋巴细胞、以及使用所诱导的 淋巴细胞的细胞治疗剂治疗法
技术领域
本发明涉及关于免疫耐受的新技术。更具体而言，本发明涉及诱导免疫耐受的抗体、所诱导的淋巴细胞、以及使用所诱导的淋巴细胞的细胞治疗剂治疗法。
背景技术
肝脏移植已被广泛用作对晚期肝衰竭患者的最终疗法。每年在日本境外有20000以上的病例，在日本有超过500的病例。
移植是针对晚期的肾脏、心脏、肝脏、胰腺等的器官衰竭所选择的主要处置之一，尽管近些年在移植排斥反应的处置方面取得了显著进步，但大部分移植在没有免疫抑制方案的情况下最终会被排斥。对于依赖于连续药物疗法的目前的免疫抑制方案而言，药物不仅抑制明显针对移植的反应，还抑制所有的免疫反应，因此器官移植患者更容易产生对于传染病、癌症的敏感性的增加。
尽管再生医疗也引起了关注，但即使使用诱导多能干细胞(iPS细胞)等，只要最终不是自体细胞就可能发生免疫排斥反应，因此免疫耐受的技术受到关注。
作为该诱导免疫耐受的技术，有诱导T细胞的抗原特异性无免疫应答(无反应性)。具体而言，报道了：向器官移植患者直接给予抑制抗原呈递细胞上的CD80/CD86与未活化(初始)T细胞上的CD28的相互作用的抗体，从而在生物体内诱导供体抗原特异性无反应性的技术(专利文献1)；通过在相同抗体的存在下对受体细胞和经辐射线照射的供体细胞进行共培养，从而在体外诱导供体抗原特异性无反应性细胞并返回至受体的技术(专利文献2、专利文献3和非专利文献1～3)。
现有技术文献
专利文献
专利文献1：日本特表2002-504120号公报
专利文献2：日本特表2007-131598号公报
专利文献3：日本特表2016-520081号公报
非专利文献
非专利文献1：Satoru Todo et al.Hepatorogy,64(vol.2)、632-643(2016)
非专利文献2：Teraoka S，Koyama I,Bashuda H,Uchida K,Tonsho M,et al.(2017)J Transplant Res 2(1)p1-8
非专利文献3：Bashuda H et al.,J.Clin.Invest.115：1896-1902(2005).
发明内容
用于解决问题的方案
本发明人等尝试了使用抑制CD80/CD86与CD28的相互作用的、具有某特定人Fc区的抗体来诱导无免疫应答(无反应性)，结果发现：通过与巨噬细胞、中性粒细胞、自然杀伤(NK)细胞之类的跟免疫系统相关的细胞结合，从而激活这些细胞，诱导释放出管理免疫反应的白细胞介素、干扰素(IFN)等体液因子。本发明人等新发现：这些体液因子的释放会诱导与免疫耐受相反的免疫系统的不利激活，因此通过使用具有不与这些细胞结合的人Fc区的抗体来调节无免疫应答(无反应性)的诱导，从而能够改善免疫耐受的效果或抑制免疫耐受效果的减弱。由此，本发明人等提供具有如下结构的抗体，所述结构具有改善免疫耐受的效果、或不使免疫耐受的效果减弱的特征。
因此，本发明提供以下方案。
(1)一种实质上不诱导基于免疫激活的细胞因子的产生的抗体或其变体，其抑制在某种细胞的细胞表面表达的CD80和/或CD86与在其它细胞的细胞表面表达的CD28的相互作用。
(2)根据上述项目所述的抗体或其变体，其中，前述细胞因子包含干扰素γ。
(3)根据上述项目中任一项所述的抗体或其变体，其为嵌合抗体。
(4)根据上述项目中任一项所述的抗体或其变体，其中，前述抗体的亚类为IgG1。
(5)根据上述项目中任一项所述的抗体或其变体，其具有重链和轻链，所述重链具有序列号38或42所述的氨基酸序列，所述轻链具有序列号40或44所述的氨基酸序列。
(6)根据上述项目中任一项所述的抗体或其变体，其包含：
(a)VH和VL，所述VH包含：序列号53所述的氨基酸序列的CDRH1、序列号54所述的氨基酸序列的CDRH2、和序列号55所述的氨基酸序列的CDRH3，所述VL包含：序列号56所述的氨基酸序列的CDRL1、序列号57所述的氨基酸序列的CDRL2、和序列号58所述的CDRL3；
或者包含：
(b)VH和VL，所述VH包含：序列号59所述的氨基酸序列的CDRH1、序列号60所述的氨基酸序列的CDRH2、和序列号61所述的氨基酸序列的CDRH3，所述VL包含：序列号62所述的氨基酸序列的CDRL1、序列号63所述的氨基酸序列的CDRL2、和序列号64所述的CDRL3。
(7)根据上述项目中任一项所述的抗体或其变体，其包含：
(a)具有序列号46所述的氨基酸序列或其改造序列的VH和具有序列号48所述的氨基酸序列或其改造序列的VL；
或者包含：
(b)具有序列号50所述的氨基酸序列或其改造序列的VH和具有序列号52所述的氨基酸序列或其改造序列的VL。
(8)根据上述项目中任一项所述的抗体或其变体，其中，前述抗体的Fc部分为实质上不诱导基于免疫激活的细胞因子的产生的部分。
(9)根据上述项目中任一项所述的抗体或其变体，其中，前述抗体的亚类为IgG2或IgG4。
(10)根据上述项目中任一项所述的抗体或其变体，其中，前述抗体的亚类为IgG4。
(11)根据上述项目中任一项所述的抗体或其变体，其中，前述抗体的变体是欠缺了前述抗体的Fc部分的变体。
(12)根据上述项目中任一项所述的抗体或其变体，其中，前述抗体的变体为Fab抗体、F(ab’)2抗体、Fab’抗体、Fv抗体或scFv抗体。
(13)根据上述项目中任一项所述的抗体或其变体，其具有诱导免疫耐受的能力。
(14)根据上述项目中任一项所述的抗体或其变体，其中，表达CD80和/或CD86的前述细胞为抗原呈递细胞，表达CD28的前述其它细胞为T细胞。
(15)根据上述项目中任一项所述的抗体，其中，前述抗体或其变体为拮抗性抗CD80抗体、拮抗性抗CD86抗体、拮抗性抗CD28抗体、或针对CD80和CD86的拮抗性双特异性抗体、或它们的变体。
(16)根据上述项目中任一项所述的抗体或其变体，其为人源化抗体或人抗体、或它们的变体中的任意者。
(17)根据上述项目中任一项所述的抗体或其变体，其包含人抗体的IgG2或IgG4的Fc部分。
(18)根据上述项目中任一项所述的抗体或其变体，其包含人抗体的IgG4的Fc部分。
(19)根据上述项目中任一项所述的抗体或其变体，其包含：
(a)VH和VL，所述VH包含：序列号25所述的氨基酸序列的CDRH1、序列号26所述的氨基酸序列的CDRH2、和序列号27所述的氨基酸序列的CDRH3；所述VL包含：序列号28所述的氨基酸序列的CDRL1、序列号29所述的氨基酸序列的CDRL2、和序列号30所述的CDRL3；
或者包含：
(b)VH和VL，所述VH包含：序列号31所述的氨基酸序列的CDRH1、序列号32所述的氨基酸序列的CDRH2、和序列号33所述的氨基酸序列的CDRH3，所述VL包含：序列号34所述的氨基酸序列的CDRL1、序列号35所述的氨基酸序列的CDRL2、和序列号36所述的CDRL3。
(20)根据上述项目中任一项所述的抗体或其变体，其包含：
(a)具有序列号18所述的氨基酸序列或其改造序列的VH和具有序列号20所述的氨基酸序列或其改造序列的VL
(b)具有序列号22所述的氨基酸序列或其改造序列的VH和具有序列号24所述的氨基酸序列或其改造序列的VL。
(21)一种核酸分子，其编码上述项目中任一项所述的抗体或其变体的氨基酸序列或其一部分。
(22)根据上述项目中任一项所述的核酸分子，其含有：
(a)编码VH的多核苷酸和编码VL的多核苷酸，所述编码VH的多核苷酸具有序列号17或序列号45所述的核苷酸序列，所述编码VL的多核苷酸具有序列号19或序列号47所述的核苷酸序列；
或者含有：
(b)编码VH的多核苷酸和编码VL的多核苷酸，所述编码VH的多核苷酸具有序列号21或序列号49所述的核苷酸序列，所述编码VL的多核苷酸具有序列号23或序列号51所述的核苷酸序列。
(23)一种载体，其具有上述项目中任一项所述的核酸分子。
(24)一种细胞，其包含上述项目中任一项所述的核酸分子或项目23所述的载体。
(25)一种上述项目中任一项所述的抗体或其变体的制造方法，其包括培养上述项目中任一项所述细胞。
(26)一种细胞，其通过上述项目中任一项所述的抗体或其变体诱导了免疫耐受。
(27)根据上述项目中任一项所述的细胞，其中，前述免疫耐受是通过将前述抗体或其变体、源自待检体的细胞、和并非源自该待检体的抗原或含有该抗原的物质混合而诱导的。
(28)一种用于制作诱导了免疫耐受的细胞的组合物，其包含上述项目中任一项所述的抗体或其变体中的至少1种。
(29)根据上述项目中任一项所述的组合物，其包含：拮抗性抗CD80抗体、拮抗性抗CD86抗体、拮抗性抗CD28抗体、或针对CD80和CD86的拮抗性双特异性抗体、或它们的变体、或这些中的任意者的组合。
(30)一种用于制造用于处置或预防由于并非源自待检体的抗原而产生的疾病、障碍或状态的细胞的方法，所述方法包括将上述项目中任一项所述的抗体或其变体、源自待检体的细胞、和并非源自该待检体的抗原或含有该抗原的物质混合的步骤。
(31)根据上述项目中任一项所述的方法，其中，前述疾病、障碍或状态选自由移植免疫排斥反应、变态反应、自身免疫疾病、移植物抗宿主疾病、以及由iPS细胞或ES细胞和源自这些细胞的细胞、组织或器官的移植引起的免疫排斥反应组成的组。
(32)根据上述项目中任一项所述的方法，其中，前述含有抗原的物质为细胞。
(33)一种细胞，其利用上述项目中任一项所述的方法而制造。
(34)根据上述项目中任一项所述的细胞，其包含T细胞。
(35)一种细胞治疗剂，其包含通过上述项目中任一项所述的抗体或其变体诱导了免疫耐受的细胞、利用上述项目中任一项所述的方法制造的细胞、或上述项目中任一项所述的细胞。
(36)一种用于处置或预防由于并非源自待检体的抗原而产生的疾病、障碍或状态的组合物，其包含通过上述项目中任一项所述的抗体或其变体诱导了免疫耐受的细胞、利用上述项目中任一项所述的方法制造的细胞、或上述项目中任一项所述的细胞。
(37)根据上述项目中任一项所述的组合物，其中，前述疾病、障碍或状态选自由移植免疫排斥反应、变态反应、自身免疫疾病、移植物抗宿主疾病、由iPS细胞或ES细胞和源自这些细胞的细胞、组织或器官的移植引起的免疫排斥反应组成的组。
(38)根据上述项目中任一项所述的组合物，其特征在于，前述免疫排斥中，接受移植的器官为肾脏、肝脏、心脏、皮肤、肺、胰腺、食道、胃、小肠、大肠、神经、血液、包括免疫系统细胞在内的血细胞、骨、软骨、血管、角膜、眼球或骨髄。
(39)一种用于在待检体中处置或预防由于并非源自该待检体的抗原而产生的疾病、障碍或状态的方法，其包括如下工序：
对待检体给予有效量的、通过上述项目中任一项所述的抗体或其变体诱导了免疫耐受的细胞、利用上述项目中任一项所述的方法制造的细胞、或上述项目中任一项所述的细胞。
(40)根据上述项目中任一项所述的方法，其中，前述疾病、障碍或状态选自由移植免疫排斥反应、变态反应、自身免疫疾病、移植物抗宿主疾病、由iPS细胞或ES细胞和源自这些细胞的细胞、组织或器官的移植引起的免疫排斥反应组成的组。
(41)根据上述项目中任一项所述的方法，其特征在于，前述免疫排斥中，接受移植的器官为肾脏、肝脏、心脏、皮肤、肺、胰腺、食道、胃、小肠、大肠、神经、血液、包括免疫系统细胞在内的血细胞、骨、软骨、血管、角膜、眼球或骨髄。
(39A)一种通过上述项目中任一项所述的抗体或其变体诱导了免疫耐受的细胞、利用上述项目中任一项所述的方法制造的细胞、或上述项目中任一项所述的细胞在制造用于在待检体中处置或预防由于并非源自该待检体的抗原而产生的疾病、障碍或状态的药物中的应用。
(40A)根据上述项目中任一项所述的应用，其中，前述疾病、障碍或状态选自由移植免疫排斥反应、变态反应、自身免疫疾病、移植物抗宿主疾病、由iPS细胞或ES细胞和源自这些细胞的细胞、组织或器官的移植引起的免疫排斥反应组成的组。
(41A)根据上述项目中任一项所述的应用，其特征在于，前述免疫排斥中，接受移植的器官为肾脏、肝脏、心脏、皮肤、肺、胰腺、食道、胃、小肠、大肠、神经、血液、包括免疫系统细胞在内的血细胞、骨、软骨、血管、角膜、眼球或骨髄。
(39B)一种通过上述项目中任一项所述的抗体或其变体诱导了免疫耐受的细胞、利用上述项目中任一项所述的方法制造的细胞、或上述项目中任一项所述的细胞，其用于制造用于在待检体中处置或预防由于并非源自该待检体的抗原而产生的疾病、障碍或状态的药物。
(40B)根据上述项目中任一项所述的细胞，其中，前述疾病、障碍或状态选自由移植免疫排斥反应、变态反应、自身免疫疾病、移植物抗宿主疾病、由iPS细胞或ES细胞和源自这些细胞的细胞、组织或器官的移植引起的免疫排斥反应组成的组。
(41B)根据上述项目中任一项所述的细胞，其特征在于，前述免疫排斥中，接受移植的器官为肾脏、肝脏、心脏、皮肤、肺、胰腺、食道、胃、小肠、大肠、神经、血液、包括免疫系统细胞在内的血细胞、骨、软骨、血管、角膜、眼球或骨髄。
本发明还提供以下方案。
(A1)一种抗体，其抑制在某种细胞的细胞表面表达的CD80和/或CD86与在其它细胞的细胞表面表达的CD28的相互作用，且实质上不诱导基于免疫激活的细胞因子的产生。
(A2)根据(A1)所述的抗体，其中，前述细胞因子包含干扰素γ。
(A3)根据(A1)或(A2)所述的抗体，其中，前述抗体的Fc部分为实质上不诱导基于免疫激活的细胞因子的产生的部分。
(A4)根据(A1)～(A3)中任一项所述的抗体，其中，前述抗体的亚类为IgG2或IgG4。
(A5)根据(A4)所述的抗体，其中，前述抗体的亚类为IgG4。
(A6)根据(A1)或(A2)所述的抗体，其中，前述抗体欠缺Fc部分。
(A7)根据(A6)所述的抗体，其中，前述抗体为Fab抗体、F(ab’)2抗体、Fab’抗体、Fv抗体或scFv抗体。
(A8)根据(A1)～(A7)中任一项所述的抗体，其具有诱导免疫耐受的能力。
(A9)根据(A1)～(A8)中任一项所述的抗体，其中，表达CD80和/或CD86的前述细胞为抗原呈递细胞，表达CD28的前述其它细胞为T细胞。
(A10)根据(A1)～(A9)中任一项所述的抗体，其中，前述抗体为拮抗性抗CD80抗体、拮抗性抗CD86抗体、拮抗性抗CD28抗体、或针对CD80和CD86的拮抗性双特异性抗体。
(A11)根据(A1)～(A10)中任一项所述的抗体，其为嵌合抗体、人源化抗体或人抗体中的任意者。
(A12)根据(A1)～(A11)中任一项所述的抗体，其包含人抗体的IgG2或IgG4的Fc部分。
(A13)根据(A1)～(A12)中任一项所述的抗体，其包含人抗体的IgG4的Fc部分。
(A14)根据(A1)～(A13)中任一项所述的抗体，其包含：
(a)VH和VL，所述VH包含：序列号25所述的氨基酸序列的CDRH1、序列号26所述的氨基酸序列的CDRH2、和序列号27所述的氨基酸序列的CDRH3；所述VL包含：序列号28所述的氨基酸序列的CDRL1、序列号29所述的氨基酸序列的CDRL2、和序列号30所述的CDRL3；
或者包含：
(b)VH和VL，所述VH包含：序列号31所述的氨基酸序列的CDRH1、序列号32所述的氨基酸序列的CDRH2、和序列号33所述的氨基酸序列的CDRH3，所述VL包含：序列号34所述的氨基酸序列的CDRL1、序列号35所述的氨基酸序列的CDRL2、和序列号36所述的CDRL3。
(A15)根据(A14)所述的抗体，其包含：
(a)具有序列号18所述的氨基酸序列或其改造序列的VH和具有序列号20所述的氨基酸序列或其改造序列的VL；
(b)具有序列号22所述的氨基酸序列或其改造序列的VH和具有序列号24所述的氨基酸序列或其改造序列的VL。
(A16)一种核酸分子，其编码(A1)～(A15)中任一项所述的抗体的氨基酸序列或其一部分。
(A17)根据(A16)所述的核酸分子，其含有：
(a)编码VH的多核苷酸和编码VL的多核苷酸，所述编码VH的多核苷酸具有序列号17所述的核苷酸序列，所述编码VL的多核苷酸具有序列号19所述的核苷酸序列；
或者含有：
(b)编码VH的多核苷酸和编码VL的多核苷酸，所述编码VH的多核苷酸具有序列号21所述的核苷酸序列，所述编码VL的多核苷酸具有序列号23所述的核苷酸序列。
(A18)一种载体，其具有(A16)或(A17)所述的核酸分子。
(A19)一种细胞，其包含(A16)或(A17)所述的核酸分子或(A18)所述的载体。
(A20)根据(A1)～(A15)中任一项所述的抗体的制造方法，其包括培养(A19)的细胞。
(A21)一种细胞，其通过(A1)～(A15)中任一项所述的抗体诱导了免疫耐受。
(A22)根据(A21)所述的细胞，其中，前述免疫耐受是通过将前述抗体、源自待检体的细胞、和并非源自该待检体的抗原或含有该抗原的物质混合而诱导的。
(A23)一种用于制作诱导了免疫耐受的细胞的组合物，其包含(A1)～(A15)中任一项所述的抗体中的至少1种。
(A24)根据(A23)所述的组合物，其包含拮抗性抗CD80抗体、拮抗性抗CD86抗体、拮抗性抗CD28抗体、或针对CD80和CD86的拮抗性双特异性抗体、或这些中的任意者的组合。
(A25)一种用于制造用于处置或预防由于并非源自待检体的抗原而产生的疾病、障碍或状态的细胞的方法，所述方法包括如下步骤：将(A1)～(A15)中任一项所述的抗体、源自待检体的细胞、和并非源自该待检体的抗原或含有该抗原的物质混合。
(A26)根据(A25)所述的方法，其中，前述疾病、障碍或状态选自由移植免疫排斥反应、变态反应、自身免疫疾病、移植物抗宿主疾病、以及由iPS细胞或ES细胞和源自这些细胞的细胞、组织或器官的移植引起的免疫排斥反应组成的组中。
(A27)根据(A25)或(A26)所述的方法，其中，前述含有抗原的物质为细胞。
(A28)一种细胞，其利用(A25)～(A27)中任一项中所述的方法而制造。
(A29)根据(A28)所述的细胞，其包含T细胞。
(A30)一种细胞治疗剂，其包含通过(A1)～(A15)中任一项所述的抗体诱导了免疫耐受的细胞、利用(A25)或(A26)所述的方法制造的细胞、或(A21)、(A22)、(A28)或(A29)所述的细胞。
(A31)一种用于处置或预防由于并非源自待检体的抗原而产生的疾病、障碍或状态的组合物，其包含通过(A1)～(A15)中任一项所述的抗体诱导了免疫耐受的细胞、利用(A25)或(A26)所述的方法制造的细胞、或(A21)、(A22)、(A28)或(A29)所述的细胞。
(A32)根据(A31)所述的组合物，其中，前述疾病、障碍或状态选自由移植免疫排斥反应、变态反应、自身免疫疾病、移植物抗宿主疾病、由iPS细胞或ES细胞和源自这些细胞的细胞、组织或器官的移植引起的免疫排斥反应组成的组。
(A33)根据(A32)所述的组合物，其特征在于，前述免疫排斥中，接受移植的器官为肾脏、肝脏、心脏、皮肤、肺、胰腺、食道、胃、小肠、大肠、神经、血液、包括免疫系统细胞在内的血细胞、骨、软骨、血管、角膜、眼球或骨髄。
(A34)一种用于在待检体中处置或预防由于并非源自待检体的抗原而产生的疾病、障碍或状态的方法，其包括如下工序：对待检体给予有效量的、通过(A1)～(A15)中任一项所述的抗体诱导了免疫耐受的细胞、利用(A23)或(A24)所述的方法而制造的细胞、或(A21)、(A22)、(A28)或(A29)所述的细胞。
(A35)根据(A34)所述的方法，其中，前述疾病、障碍或状态选自由移植免疫排斥反应、变态反应、自身免疫疾病、移植物抗宿主疾病、由iPS细胞或ES细胞和源自这些细胞的细胞、组织或器官的移植引起的免疫排斥反应组成的组。
(A36)根据(A35)所述的方法，其特征在于，前述免疫排斥中，接受移植的器官为肾脏、肝脏、心脏、皮肤、肺、胰腺、食道、胃、小肠、大肠、神经、血液、包括免疫系统细胞在内的血细胞、骨、软骨、血管、角膜、眼球或骨髄。
本发明进而还涉及以下的发明。
(B1)一种抗体，其特征在于，具有人Fc区，能够抑制在细胞表面表达的CD80或CD86与在其它细胞表面表达的CD28的相互作用，并且不促进基于人PBMC的细胞因子产生。
(B2)根据(B1)所述的抗体，其能够抑制在抗原呈递细胞表面表达的CD80或CD86与在T细胞表面表达的CD28的相互作用。
(B3)根据(B1)或(B2)所述的抗体，其中，通过与抗原或表面具有抗原的细胞一起跟PBMC接触，从而能够诱导针对该抗原的免疫耐受。
(B4)根据(B1)～(B3)中任一项所述的抗体，其特征在于，细胞因子为IFNγ。
(B5)(B1)～(B4)中任一项所述的抗体，其为抗CD80抗体或抗CD86抗体。
(B6)根据(B1)～(B5)中任一项所述的抗体，其为嵌合抗体、人源化抗体、或人抗体。
(B7)根据(B1)～(B6)中任一项所述的抗体，其为单克隆抗体。
(B8)根据(B1)～(B7)中任一项所述的抗体，其中，亚类为IgG2或IgG4。
(B8A)根据(B1)～(B7)中任一项所述的抗体，其中，亚类为IgG1。
(B8B)根据(B8A)所述的抗体，其具有重链，所述重链具有选自序列号38、序列号42中的1个序列号所述的氨基酸序列。
(B8C)根据(B8B)所述的抗体，其具有：具有序列号38所述的氨基酸序列的重链、具有序列号40所述的氨基酸序列的轻链；
或者具有：
具有序列号42所述的氨基酸序列的重链、具有序列号44所述的氨基酸序列的轻链。
(B8D)根据(B1)～(B7)、(B8A)～(B8C)中任一项所述的抗体，其具有序列号55或序列号61所述的氨基酸序列的CDRH3。
(B8E)根据(B8D)所述的抗体，其为：
(Bi)具有序列号53所述的氨基酸序列的CDRH1、序列号54所述的氨基酸序列的CDRH2、序列号55所述的氨基酸序列的CDRH3的抗体；或为：
(Bii)具有序列号59所述的氨基酸序列的CDRH1、序列号60所述的氨基酸序列的CDRH2、序列号61所述的氨基酸序列的CDRH3的抗体。
(B8F)一种抗体，其为：
(B8E)的(Bi)所述的抗体，其具有序列号56所述的氨基酸序列的CDRL1、序列号57所述的氨基酸序列的CDRL2、序列号58所述的氨基酸序列的CDRL3；或为：
(B8E)的(Bii)所述的抗体，其具有序列号62所述的氨基酸序列的CDRL1、序列号63所述的氨基酸序列的CDRL2、序列号64所述的氨基酸序列的CDRL3。
(B8G)根据(B8D)所述的抗体，其具有重链可变区(VH)，所述重链可变区(VH)具有序列号46或序列号50所述的氨基酸序列。
(B8H)根据(B8G)所述的抗体，其具有VH和轻链可变区(VL)，所述VH具有序列号46所述的氨基酸序列，所述轻链可变区(VL)具有序列号48所述的氨基酸序列；或者具有VH和VL，所述VH具有序列号50所述的氨基酸序列，所述VL具有序列号52所述的氨基酸序列。
(B8I)根据(B8G)所述的抗体，其具有重链，所述重链具有选自序列号38或序列号42中的1个序列号所述的氨基酸序列。
(B8J)根据(B8I)所述的抗体，其具有：
具有序列号38所述的氨基酸序列的重链、具有序列号40所述的氨基酸序列的轻链；或者具有：
具有序列号42所述的氨基酸序列的重链、具有序列号44所述的氨基酸序列的轻链。
(B9)根据(B1)～(B8)中任一项所述的抗体，其具有序列号27或序列号33所述的氨基酸序列的CDRH3。
(B10)根据(B9)所述的抗体，其为：
(Bi)具有序列号25所述的氨基酸序列的CDRH1、序列号26所述的氨基酸序列的CDRH2、序列号27所述的氨基酸序列的CDRH3的抗体；或为：
(Bii)具有序列号31所述的氨基酸序列的CDRH1、序列号32所述的氨基酸序列的CDRH2、序列号33所述的氨基酸序列的CDRH3的抗体。
(B11)一种抗体，其为：
(B10)的(Bi)所述的抗体，其具有序列号28所述的氨基酸序列的CDRL1、序列号29所述的氨基酸序列的CDRL2、序列号30所述的氨基酸序列的CDRL3；或为
(B10)的(Bii)所述的抗体，其具有序列号34所述的氨基酸序列的CDRL1、序列号35所述的氨基酸序列的CDRL2、序列号36所述的氨基酸序列的CDRL3。
(B12)根据(B9)所述的抗体，其具有重链可变区(VH)，所述重链可变区(VH)具有序列号18或序列号22所述的氨基酸序列。
(B13)根据(B12)所述的抗体，其具有VH和轻链可变区(VL)，所述VH具有序列号18所述的氨基酸序列，所述轻链可变区(VL)具有序列号20所述的氨基酸序列；或者具有VH和VL，所述VH具有序列号22所述的氨基酸序列，所述VL具有序列号24所述的氨基酸序列。
(B14)根据(B12)所述的抗体，其具有重链，所述重链具有选自序列号2、序列号6、序列号10、序列号14中的1个序列号所述的氨基酸序列。
(B15)根据(B14)所述的抗体，其具有：
具有序列号2所述的氨基酸序列的重链、具有序列号4所述的氨基酸序列的轻链；或者具有：
具有序列号6所述的氨基酸序列的重链、具有序列号8所述的氨基酸序列的轻链；或者具有：
具有序列号10所述的氨基酸序列的重链、具有序列号12所述的氨基酸序列的轻链；或者具有：
具有序列号14所述的氨基酸序列的重链、具有序列号16所述的氨基酸序列的轻链。
(B16)一种医疗用组合物，其含有(B1)～(B15)中任一项所述的抗体。
(B17)根据(B16)所述的医疗用组合物，其含有抗CD80抗体抗CD86抗体。
(B18)根据(B16)或(B17)所述的医疗用组合物，其用于诱导免疫耐受。
(B19)根据(B18)所述的医疗用组合物，其用于诱导从接受器官移植的患者采集的细胞的免疫耐受。
(B20)根据(B19)或(B20)所述的医疗用组合物，其特征在于，接受移植的器官为心脏、肾脏或肝脏。
(B21)根据(B18)所述的医疗用组合物，其用于在自身免疫疾病或变态反应性疾病的患者中诱导免疫耐受。
(B22)一种核酸分子，其编码(B12)～(B15)中任一项所述的抗体的氨基酸序列。
(B23)根据(B22)所述的核酸分子，其含有编码VH的多核苷酸和编码VL的多核苷酸，所述编码VH的多核苷酸具有选自序列号1、5、9、13中的任意1个所述的核苷酸序列，所述编码VL的多核苷酸具有选自序列号3、7、11、15中的任意1个所述的核苷酸序列。
(B24)一种载体，其具有(B22)或(B23)所述的核酸分子。
(B25)一种宿主细胞，其具有(B24)所述的载体。
(B26)一种(B1)～(B15)中任一项所述的抗体的制造方法，其包括培养(B25)的宿主细胞。
(B27)一种诱导PBMC对抗原的免疫耐受的方法，其包括使(B1)～(B15)中任一项所述的抗体、与想要诱导免疫耐受的抗原或表面具有该抗原的细胞、与PBMC接触。
(B28)根据(B27)所述的诱导方法，其特征在于，在体外进行。
(B29)根据(B27)或(B28)所述的方法，其中，PBMC是由接受器官移植的患者采集的细胞。
(B30)根据(B27)或(B28)所述的方法，其中，PBMC是由自身免疫疾病或变态反应疾病的患者采集的细胞。
(B31)一种PBMC，其利用(B27)～(B30)中任一项所述的方法诱导了免疫耐受。
(B32)一种细胞治疗剂，其含有(B30)所述的PBMC作为有效性成分。
(B33)根据(B32)所述的细胞治疗剂，其用于抑制器官移植中的排斥反应。
(B34)根据(B33)所述的细胞治疗剂，其特征在于，接受移植的器官为肾脏、肝脏、心脏、皮肤、肺、胰腺、食道、胃、小肠、大肠、神经、血液、包括免疫系统细胞在内的血细胞、骨、软骨、血管、角膜、眼球或骨髄。
(B35)根据(B32)所述的细胞治疗剂，其用于治疗自身免疫疾病或变态反应性疾病。
(B36)一种器官移植中的排斥反应的抑制方法，所述方法包括将(B1)～(B15)中任一项所述的抗体给予接受器官移植的患者。
(B37)根据(B36)所述的方法，其特征在于，接受移植的器官为肾脏、肝脏、心脏、皮肤、肺、胰腺、食道、胃、小肠、大肠、神经、血液、包括免疫系统细胞在内的血细胞、骨、软骨、血管、角膜、眼球或骨髄。
(B37)一种自身免疫疾病或变态反应性疾病的治疗方法，所述方法包括将(B1)～(B15)中任一项所述的抗体给予自身免疫疾病或变态反应性疾病。
(B38)一种抑制器官移植中的排斥反应的方法，所述方法包括将(B32)～(B34)中任一项所述的细胞治疗剂给予接受器官移植的患者。
(B39)一种自身免疫疾病或变态反应性疾病的治疗方法，所述方法包括将(B32)或(B35)的细胞治疗剂给予自身免疫疾病或变态反应性疾病的患者。
(B40)根据(B27)～(B30)中任一项所述的方法，其还包括将诱导了免疫耐受的PBMC给予患者。
(B41)根据(B40)所述的方法，所述方法包括将源自诱导了针对所移植的器官的免疫耐受的患者的PBMC给予接受器官移植的患者。
(B42)根据(B40)所述的方法，所述方法包括将源自诱导了针对成为自身免疫疾病或变态反应性疾病的原因的抗原的免疫耐受的患者的PBMC给予自身免疫疾病或变态反应性疾病的患者。
本发明中，上述一个或多个特征除了明确示出的组合之外，可有意识地进一步组合来提供。本领域技术人员若根据需要阅读理解以下详细的说明，则可认识到本发明的进一步的实施方式和优点。
发明的效果
本发明的抗体维持免疫耐受的诱导能力的同时抑制IFNγ产生。特别是，本发明的亚类IgG2或IgG4的抗体能够在不产生IFNγ的情况下制造诱导免疫耐受的细胞。
附图说明
图1示出抗人CD80和抗CD86抗体(IgG1)存在下的混合淋巴细胞反应(3H-胸苷摄入)的结果。初始；未添加供体、未添加抗体、同种异体(Allo)；有添加供体、未添加抗体。10、1、0、1为所添加的各抗体的浓度(μg/ml)。纵轴表示以未添加抗体(同种异体(Allo))作为基准的3H-胸苷摄入。
图2示出抗人CD80和抗CD86抗体(IgG1)存在下的混合淋巴细胞反应(IFNγ产生)的结果。纵轴表示培养基中的浓度(pg/ml)。
图3示出抗人CD80和抗CD86抗体(IgG1)存在下的混合淋巴细胞反应(3H-胸苷摄入)的结果。纵轴表示以未添加抗体(同种异体(Allo))作为基准的3H-胸苷摄入。
图4示出抗人CD80和抗CD86抗体(IgG1)存在下的混合淋巴细胞反应(IFNγ产生)的结果。上排：有供体刺激、下排：无供体刺激。*表示50000pg/mL以上。纵轴表示培养基中的浓度(pg/ml)。
图5示出抗CD80和抗CD86抗体(IgG2、IgG4)存在下的混合淋巴细胞反应(3H-胸苷摄入)的结果。纵轴表示以未添加抗体(同种异体(Allo))作为基准的3H-胸苷摄入。10、3、1为所添加的各抗体的浓度(μg/ml)。
图6示出抗CD80和抗CD86抗体(IgG1、IgG2、IgG4)存在下的混合淋巴细胞反应(IFNγ产生)的结果。纵轴表示培养基中的浓度(pg/ml)。
图7示出添加在抗CD80和抗CD86抗体(IgG1、IgG2、IgG4)存在下得到的细胞时的混合淋巴细胞反应(3H-胸苷摄入)的结果。纵轴表示以未添加抗体(同种异体(Allo))作为基准的3H-胸苷摄入。1/2、1/4、1/8为相对于初始的应答细胞的、抗CD80和抗CD86抗体(IgG1、IgG2、IgG4)存在下得到的细胞的混合比率。
图8示出嵌合抗CD80抗体和嵌合抗CD86抗体存在下的混合淋巴细胞反应(IFNγ产生)的结果。纵轴表示培养基中的浓度(pg/ml)。
图9示出添加在嵌合抗CD80抗体和嵌合抗CD86抗体存在下得到的细胞时的混合淋巴细胞反应(3H-胸苷摄入)的结果。纵轴表示以未添加抗体(同种异体)作为基准的3H-胸苷摄入。1/2、1/4、1/8、1/16为相对于初始的应答细胞的、嵌合抗CD80抗体和嵌合抗CD86抗体存在下得到的细胞的混合比率。
具体实施方式
本说明书中使用的术语只要没有特别声明，则应理解为以该领域中通常使用的含义来使用。因此，除非另有定义，否则本说明书中使用的全部专业术语和科学技术术语具有与本发明所属领域的本领域技术人员的通常理解相同的含义。如有冲突，则以本说明书(包括定义)为准。
(术语的定义)
本说明书中，“约”是指在明书中使用的情况下的、后续的数值的±10％。
本说明书中，“免疫耐受”是指：未显示出对特定抗原的特异性免疫反应、或特异性免疫反应得到抑制的状态。免疫耐受可以定义为免疫细胞(特别是T细胞)未显示出对特定抗原的特异性免疫反应、或特异性免疫反应得到抑制的状态；以及人未显示出对特定抗原的特异性免疫反应、或特异性免疫反应得到抑制的状态中的两者或任一者。通过诱发免疫耐受，从而能够进行免疫排斥反应的处置，或能够进行变态反应的治疗，因此受到注目。本说明书中，“无反应性”是指：在由抗原呈递细胞呈递抗原时不输入共刺激，从而即使下一次在具有共刺激的条件下被刺激也无法发生反应的状态。本说明书中，“诱导了免疫耐受的PBMC(或T细胞)”与“无反应性的PBMC(或T细胞)”含义相同。
本说明书中，“待检体”包括驯养动物(例如，牛、绵羊、猫、狗、马)、灵长类(例如，人和猴子等非人灵长类)、兔子、以及啮齿类(例如，小鼠和大鼠)。在特定的实施方式中，待检体为人。
本说明书中，“免疫激活”是指：对免疫系统的细胞(例如，巨噬细胞、中性粒细胞、自然杀伤(NK)细胞、T细胞、B细胞等)的刺激、免疫系统的细胞的增殖。通过激活免疫系统的细胞而诱导细胞因子(例如，INF)的产生、细胞毒活性。
本说明书中，“实质上不诱导基于免疫激活的细胞因子的产生”是指：在抗原存在下且本发明的抗体不存在下，产生的细胞因子为由源自待检体的细胞(例如，巨噬细胞、中性粒细胞、自然杀伤(NK)细胞、T细胞、B细胞等)产生的细胞因子量的约20％以下。
本说明书中，广义的“抗体”是指能与抗原上的特定表位特异性结合的分子或其群体。本说明书中的广义的“抗体”可以是全长抗体(即，具有Fc部分的抗体)，还可以是欠缺Fc部分的抗体。欠缺Fc部分的抗体只要能与目标抗原结合即可，作为这样的抗体，例如可列举出Fab抗体、F(ab’)2抗体、Fab’抗体、Fv抗体、scFv抗体等，但不限定于这些。另外，抗体包括抗体修饰物或抗体非修饰物。抗体修饰物可以是抗体与例如聚乙二醇等各种分子结合而成者。抗体修饰物可以通过使用公知的方法对抗体实施化学修饰而获得。
本说明书中，狭义的“抗体”是指能与抗原上的特定表位特异性结合的免疫球蛋白或其群体，将其变体称为“抗体的变体”。本说明书中的狭义的“抗体”可以是全长抗体(即，具有Fc部分的抗体)，本说明书中的“抗体的变体”可以是上述抗体的欠缺Fc部分的变体。因此，本说明书中狭义的抗体还可以称为全长抗体，抗体的变体还可以称为全长抗体的变体。欠缺Fc部分的变体只要能与目标抗原结合即可，作为这样的变体，例如可列举出Fab抗体、F(ab’)2抗体、Fab’抗体、Fv抗体、scFv抗体等，但不限定于这些。另外，抗体的变体包括抗体修饰物或抗体非修饰物。抗体修饰物可以是抗体与例如聚乙二醇等各种分子结合而成者。抗体修饰物可以通过使用公知的方法对抗体实施化学修饰而获得。
本发明的一个实施方式中，例如，为了诱导抗原特异性多克隆抗体的产生，可以通过对哺乳类(例如，大鼠、小鼠、兔子、牛、猴等)、鸟类等给予包含目标抗原的免疫原而生成“多克隆抗体”。免疫原的给予中，可以注入1种以上的免疫剂、及根据期望的佐剂。佐剂还可用于增强免疫应答，还可以包含弗氏佐剂(完全或不完全)、矿物凝胶(氢氧化铝等)、或表面活性物质(溶血卵磷脂等)等。免疫方案在本技术领域中是公知的，有时根据所选择的宿主生物，通过诱发免疫应答的任意的方法来实施(蛋白质实验手册,羊土社(2003)：86-91.)。
本发明的一个实施方式中，“单克隆抗体”包括如下情况：除了少量具有能自然发生的突变的抗体之外，构成群体的每个抗体为实质上对应于单一表位的相同抗体。或者，除了少量具有能自然发生的突变的抗体之外，构成群体的每个抗体可以是实质上相同的抗体。单克隆抗体具有高度特异性，与典型地包含对应于不同表位的不同抗体那样的通常的多克隆抗体和/或典型地包含对应于相同表位的不同抗体那样的通常的多克隆抗体不同。除了其特异性之外，单克隆抗体的有用之处在于，可以由不被其它免疫球蛋白污染的杂交瘤培养而合成。“单克隆”这样的描述可以示出实质上由均匀的抗体群体获得这一特征，但并不意味着必须利用特定的方法生产抗体。例如，单克隆抗体可以通过与”Kohler G,Milstein C.,Nature.1975 Aug 7；256(5517)：495-497.”中公开的杂交瘤法同样的方法来制作。或者，单克隆抗体还可以通过与美国专利第4816567号中记载那样的重组法同样的方法来制作。或者，单克隆抗体可以使用与”Clackson et al.,Nature.1991 Aug 15；352(6336)：624-628.”、或”Marks et al.,J Mol Biol.1991 Dec 5；222(3)：581-597.”中记载那样的技术同样的方法从噬菌体抗体文库中分离。或者，还可以通过”蛋白质实验手册,羊土社(2003)：92-96.”中记载的方法来制作。
本发明的一个实施方式中，“嵌合抗体”例如是将异种生物之间的抗体的可变区与抗体的恒定区连接而成的，能够通过基因重组技术而构建。小鼠-人嵌合抗体例如可以利用"Roguska et al.,Proc Natl Acad Sci USA.1994Feb 1；91(3)：969-973."中记载的方法来制作。用于制作小鼠-人嵌合抗体的基本方法例如为：使经克隆化的cDNA中存在的小鼠前导序列和可变区序列、与在哺乳类细胞表达载体中已经存在的编码人抗体恒定区的序列连接。或者，还可以使经克隆化的cDNA中存在的小鼠前导序列和可变区序列与编码人抗体恒定区的序列连接后，与哺乳类细胞表达载体连接。人抗体恒定区的片段可以是任意的人抗体的H链恒定区和人抗体的L链恒定区的片段，例如对于人H链，可以列举出：Cγ1、Cγ2、Cγ3或Cγ4，对于L链，可以列举出：Cλ或Cκ。
本发明的一个实施方式中，“人源化抗体”是例如具有源自非人物种的1个以上的CDR、和人免疫球蛋白来源的框架区(FR)、进而人免疫球蛋白来源的恒定区并且与期望的抗原结合的抗体。抗体的人源化可以通过使用本技术领域中已知的各种方法来实施(Almagroet al.,Front Biosci.2008 Jan 1；13：1619-1633.)。例如可列举出：CDR绘图(Ozaki etal.,Blood.1999 Jun1；93(11)：3922-3930.)、Re-surfacing(Roguska et al.,Proc NatlAcad Sci USA.1994 Feb 1；91(3)：969-973.)、或FR置换(Damschroder et al.,MolImmunol.2007Apr；44(11)：3049-3060.Epub 2007 Jan 22.)等。为了改变(优选为改善)抗原结合，可以将人FR区域的氨基酸残基置换成来自CDR供体抗体的对应的残基。该FR置换可以通过本技术领域中公知的方法来实施(Riechmann et al.,Nature.1988 Mar 24；332(6162)：323-327.)。例如，可以通过CDR与FR残基的相互作用的模拟来鉴定对于抗原结合重要的FR残基。或者，可以通过序列比较来鉴定特定位置处的异常的FR残基。
本发明的一个实施方式中，“人抗体”例如是包含构成抗体的重链的可变区和恒定区、轻链的可变区和恒定区的区域源自编码人免疫球蛋白的基因的抗体。作为主要的制作方法，有：人抗体制作用转基因小鼠法、噬菌体展示法等。人抗体制作用转基因小鼠法中，若在基因敲除了内源性Ig的小鼠中导入功能性的人的Ig基因，则代替小鼠抗体而产生多样化的具有抗原结合能力的人抗体。若进一步对该小鼠进行免疫，则可以利用现有的杂交瘤法获得人单克隆抗体。例如可以利用“Lonberg et al.,Int Rev Immunol.1995；13(1)：65-93.”中记载的方法来制作。噬菌体展示法典型的是在作为大肠杆菌病毒之一的M13、T7等纤维状噬菌体的外壳蛋白(g3p、g10p等)的N末端侧使不失去噬菌体的感染性的外源基因作为融合蛋白表达的系统。例如可以利用“Vaughanet al.,Nat Biotechnol.1996 Mar；14(3)：309-314.”中记载的方法来制作。
本说明书中，氨基酸序列的情况下，“改造序列”是指：与原始序列相比，具有至少1个氨基酸残基的改变(置换、添加或缺失)的序列；核酸序列的情况下，“改造序列”是指：不会发生移码那样的至少1个碱基的改变(置换、添加或缺失)。改造序列具有与原始序列所具有的功能相似的功能，例如，与原始序列相比，至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％相同。原始序列为抗体的情况，改造序列优选在CDR内不具有改变，但只要维持原始抗体的结合能力或功能，就可以具有1个或多个改变，优选具有3个以下的改变，更优选具有2个以下的改变，最优选具有1个改变。在CDR内导入改变的情况，本领域技术人员可以选择适合的改变以维持原始抗体的结合能力或功能。
本说明书中，“源自待检体的细胞”是指：由给予了本发明的组合物的待检体得到的细胞或源自由该待检体得到的细胞的细胞。本说明书中，“待检体来源的抗原”是指：产生免疫应答的待检体本身所生成的抗原、例如，具有自身免疫疾病的待检体中的成为自身免疫疾病的原因的待检体本身所生成的抗原。本说明书中，“并非源自待检体的抗原”是指：能够产生免疫应答的外源抗原。本说明书中，“并非源自待检体的含有抗原的物质(antigen-containing material)”是指含有并非源自待检体的抗原的任意的物质或物质的集合物，例如可列举出表达了并非源自待检体的抗原的细胞、细胞群、组织等。
本说明书中，“移植免疫排斥反应”是指：接受了器官、组织或细胞的移植的待检体中，待检体的免疫系统对所移植的器官、组织或细胞进行攻击、损伤或破坏。
本说明书中，“变态反应”是指：针对并非源自待检体的抗原发生过度的免疫应答的状态。引起变态反应的并非源自待检体的抗原也被称为变应原，例如可列举出：螨抗原、蛋白抗原、乳抗原、小麦抗原、花生抗原、大豆抗原、荞麦抗原、芝麻抗原、米抗原、甲壳类抗原、猕猴桃抗原、苹果抗原、香蕉抗原、桃子抗原、西红柿抗原、金枪鱼抗原、鲑鱼抗原、鲭鱼抗原、牛肉抗原、鸡肉抗原、猪肉抗原、猫皮屑抗原、昆虫抗原、花粉抗原、狗皮屑抗原、真菌抗原、细菌抗原、胶乳、半抗原和金属等，但不限定于这些。
本说明书中，“自身免疫疾病”是指：免疫系统对自身的细胞、组织或器官进行不希望的免疫应答的任意的疾病。作为自身免疫疾病，例如可列举出：类风湿性关节炎、多发性硬化症、1型糖尿病、炎症性肠病(例如，克罗恩病或溃疡性结肠炎)、系统性红斑狼疮、牛皮癣、硬皮病、自身免疫性甲状腺疾病、斑秃、格雷夫斯病、格林-巴利综合征、乳糜泻、干燥综合征、风湿热、胃炎、自身免疫性萎缩性胃炎、自身免疫性肝炎、胰腺炎、卵巢炎、精巣炎、葡萄膜炎、晶状体诱发性葡萄膜炎、重症肌无力、原发性粘液水肿、恶性贫血、自身免疫性溶血性贫血、艾迪生氏病、硬皮病、肺出血肾炎综合征、肾炎(例如，肾小球肾炎)、牛皮癣、寻常型天疱疮、类天疱疮、交感性眼炎、特发性血小板减少型紫癜、特发性白细胞减少症、韦格纳肉芽肿病和多发性/皮肌炎，但不限定于这些。
本说明书中，“移植物抗宿主疾病”是指：所移植的器官、组织或细胞通过免疫应答而对接受了移植的待检体的细胞、组织或器官进行攻击、损伤或破坏。
本说明书中，“由于iPS细胞或ES细胞或源自这些细胞的细胞、组织或器官的移植而引起的免疫排斥反应”是指：由于iPS细胞或ES细胞所具有的抗原、或源自iPS细胞或ES细胞的细胞、组织或器官所具有的抗原而产生的免疫排斥反应。
(优选的实施方式)
以下记载优选的实施方式的说明，但该实施方式是本发明的示例，应理解为本发明的范围不限定于这样的优选的实施方式。应理解为本领域技术人员参考以下那样的优选的实施例而能够容易地进行在本发明的范围内的改变、变更等。对于这些实施方式，本领域技术人员可以适宜组合任意的实施方式。
本发明人等尝试了使用抑制CD80和/或CD86与CD28的相互作用的具有人Fc区的抗体来诱导无免疫应答(无反应性)，结果发现：激活如巨噬细胞、中性粒细胞、自然杀伤(NK)细胞之类的与免疫系统相关的细胞，诱导管理免疫反应的白细胞介素、干扰素(IFN)等体液因子释放。新发现：这些体液因子的释放诱导与免疫耐受相反的免疫系统的不利激活，因此存在下述问题：在使用了具有人Fc区的抗体的无免疫应答(无反应性)的诱导中，使免疫耐受的效果减弱，且发现：通过调节该人Fc区，从而能够改善免疫耐受的效果。
具体而言，抑制CD80和/或CD86与CD28的相互作用、诱导免疫耐受的嵌合抗体通过如下方式制作：用重组人CD80/CD86-Fc融合蛋白使Balb/c小鼠免疫致敏后，从该小鼠的脾脏提取mRNA，合成cDNA，使用利用RT-PCR法扩增的基因构建噬菌体展示文库，选择从所述文库鉴定的与CD80/CD86亲和性高的Fab抗体后，以基因工程方式赋予人Fc部分，从而制作。
为了使对免疫耐受诱导中使用的抗体的排斥反应最小化，发明人等利用由Xoma公司开发出的CDR移植法实施嵌合抗体的人源化，制作了人源化抗体(亚类；IgG1)。将得到的人源化抗CD80抗体和抗CD86抗体(亚类；IgG1)添加至利用从假定为供体和受体的2位志愿者采集的PBMC(外周血单核细胞)的混合淋巴细胞反应中，评价了诱导的细胞的相同抗原刺激时的抑制功能。具体而言，从1位志愿者采集PBMC并照射30Gy辐射线，在人源化抗CD80/CD86抗体的存在下与从另一位志愿者采集的PBMC共培养7天，而诱导了供体抗原特异性无反应性细胞。将该诱导的细胞以一定的比例添加至相同的受体与供体的混合淋巴细胞中，以氚标记的胸苷掺入量形式来测定伴随抗原刺激的细胞分裂增殖的抑制能力。其结果，确认了：人源化抗CD80抗体和抗CD86抗体显著抑制胸苷掺入量，使用该抗体诱导的细胞新获得了抑制功能。
然而，在测定培养7天后的上清液中存在的IFNγ量时，即使在无抗原刺激时，添加抗体也生了IFNγ。另外，证实了：对于通过添加照射了辐射线的PBMC而在同种异体抗原刺激时通常产生的IFNγ，即使添加抗体，在上清液中也存在同等量。
因此，本发明人等为了获得在维持免疫耐受的诱导能力的同时不会诱导IFNγ的产生的抗体进行了深入研究，结果发现：通过将人源化抗CD80/CD86抗体的亚类设为IgG2或IgG4，从而可以得到在不产生IFNγ的情况下诱导免疫耐受的细胞。
(抗体)
在本发明的一个方式中，本发明提供一种抗体，其抑制在某细胞的细胞表面表达的CD80和/或CD86与在其它细胞的细胞表面表达的CD28的相互作用，且实质上不诱导基于免疫激活的细胞因子的产生。本发明的抗体可以是抗CD80抗体和/或抗CD86抗体，可以是针对CD80和CD86的双特异性抗体，可以是抗CD28抗体，或者可以是它们的混合物。在一些实施方式中，本发明的抗体的Fc部分可以是实质上不诱导基于免疫激活的细胞因子的产生的部分。在特定的实施方式中，本发明的抗体的亚类为IgG2或IgG4。对于亚类为IgG2或IgG4的本发明的抗体，令人惊讶地，完全不会诱导免疫系统细胞产生细胞因子。由于本发明中使用的抗体可能通过激活受体而产生不希望的作用，因此优选为拮抗性抗体。
在一些实施方式中，实质上不诱导基于免疫激活的细胞因子的产生的抗体可能会导致产生由源自待检体的细胞(例如，巨噬细胞、中性粒细胞、自然杀伤(NK)细胞、T细胞、B细胞等)在本发明的抗体不存在时所产生的细胞因子量的约20％以下、优选为约10％以下、更优选为约5％以下、最优选为约0％的细胞因子。
本说明书中，“拮抗性(抗体)”与拮抗剂(抗体)、抑制(抗体)或封闭(blocking)(抗体)等含义相同，是指：具有抑制成为对象的功能或信号的作用、使生物体的作用减弱或失活的功能的物质(抗体的情况，抗体)。
如上所述，通过将抗体的亚类从IgG1变更至IgG2或IgG4，意料之外地抑制了细胞因子的诱导产生。虽不希望受到理论约束，但可认为：Fc部分在IgG亚类之间发挥的功能不同，因此诱导细胞因子产生的原因在于IgG1抗体的Fc部分。因此，在其它实施方式中，本发明的抗体可以是欠缺了Fc部分的抗体。作为这样的抗体，例如可列举出Fab抗体、F(ab’)2抗体、Fab’抗体、Fv抗体、scFv抗体等，但不限定于这些。
在一些实施方式中，表达CD80和/或CD86的前述细胞为抗原呈递细胞，表达CD28的前述其它细胞可以是T细胞。
在本发明的另一个方案中，本发明的抗体的特征在于，能够抑制在细胞表面表达的CD80和/或CD86、与在其它细胞表面表达的CD28的相互作用。对于候补抗体是否能够抑制在细胞表面表达的CD80和/或CD86、与在其它细胞表面表达的CD28的相互作用而言，例如可以利用共免疫沉淀法进行判定。具体而言，在使这些蛋白质进行结合后，使用与任一蛋白质(诱饵(bait))结合的抗体使其免疫沉淀，在免疫沉淀后测定另一蛋白质(捕获物(Prey))。与不包含候补抗体的对照相比添加了候补抗体且免疫沉淀物中包含的Prey减少的情况下，判定该候补抗体抑制了蛋白质之间的结合。免疫沉淀物中包含的Prey可以根据需要用Prey进行标记等从而进行测定。另外，也可以使用拉下实验法(pull-down assay method)使任一蛋白质(bait)与载体结合，在存在/没有候补抗体的情况下与另一蛋白质(Prey)接触并比较与载体结合的Prey的量。
优选地，本发明的抗体能够抑制在抗原呈递细胞表面表达的CD80和/或CD86与在T细胞表面表达的CD28的相互作用。对于候补抗体是否能够抑制在抗原呈递细胞表面表达的CD80和/或CD86与在T细胞表面表达的CD28的相互作用而言，在抗原候补抗体的存在下使表达CD80和/或CD86的抗原呈递细胞与表达CD28的T细胞接触，在T细胞未被激活的情况下，能够判定抑制了在抗原呈递细胞表面表达的CD80和/或CD86与在T细胞表面表达的CD28的相互作用。
另外，本发明的抗体的特征在于，不促进人PBMC产生细胞因子。对于候补抗体是否促进人PBMC产生细胞因子而言，可以通过使候补抗体与培养基中的人PBMC接触，测定释放到培养基中的细胞因子量，从而进行判定。与不存在抗体的情况下人PBMC所释放的细胞因子量相比，候补抗体存在下所释放的细胞因子量少/多的该候补抗体可判定为不促进/促进人PBMC产生细胞因子。作为细胞因子，可以列举出：IL-1β、IL-2、IL-4、IL-5、IL-6、IL-8、IL-9、IL-14、IL-15、IL-17、IL-18等白细胞介素；CC、CXC、CX3C、C等趋化因子；IFNα、IFNβ、IFNγ等干扰素；、TNFα等细胞毒因子。优选为炎症性细胞因子，更优选为IFNγ。细胞因子的测定可以使用市售的试剂盒进行。例如，IFNγ可以使用Bioligands公司制Human IFNγELISAMAXTM Deluxe进行测定。
优选地，通过使本发明的抗体与抗原或表面具有抗原的细胞一起跟PBMC接触，从而能够对该抗原诱导免疫耐受。对于候补抗体是否能够通过与抗原或表面具有抗原的细胞一起跟PBMC接触对该抗原诱导免疫耐受而言，可以通过如下方式进行判定：在候补抗体的存在下使抗原或表面具有抗原的细胞与PBMC接触数天～7天后，添加3H-胸苷，在添加3H-胸苷的16～20小时后去除培养液中的3H-胸苷后，测定PBMC的3H-胸苷摄取量，从而判定。在与未添加候补抗体的对照相比添加了候补抗体时PBMC的3H-胸苷摄入量少的情况下，可以判断该抗体能够通过与抗原或表面具有抗原的细胞一起跟PBMC接触而对该抗原诱导免疫耐受。
本说明书中，“免疫耐受”是指：未显示出对特定抗原的特异性免疫反应、或特异性免疫反应得到抑制的状态。免疫耐受可以定义为以下状态中的两者或任一者，所述状态为：免疫细胞(特别是T细胞)未显示出对特定抗原的特异性免疫反应、或特异性免疫反应得到抑制的状态；以及人未显示出对特定抗原的特异性免疫反应、或特异性免疫反应得到抑制的状态。本说明书中，“无反应性”是指：在由抗原呈递细胞呈递抗原时不输入共刺激，从而即使下一次在具有共刺激的条件下被刺激也无法发生反应的T细胞。本说明书中，“诱导了免疫耐受的PBMC(或T细胞)”与“无反应性的PBMC(或T细胞)”含义相同。
优选地，本发明涉及抗CD80抗体和抗CD86抗体。本说明书中，抗CD80抗体和抗CD86抗体分别与CD80和CD86特异性结合。本说明书中，抗体“特异性”结合是指：该抗体以比与其它蛋白质、肽的亲和性实质上更高的亲和性与目标蛋白质(CD80或CD86)结合。此处，“以实质上更高的亲和性结合”是指高至如下程度的亲和性，所述程度是能够利用期望的测定装置或方法与其它蛋白质、肽区分开地检测作为目标的特定蛋白质、肽的程度。例如，实质上更高的亲和性还可以定义为：作为利用ELISA或EIA检测的强度(例如，荧光强度)，为约3倍以上、约4倍以上、约5倍以上、约6倍以上、约7倍以上、约8倍以上、约9倍以上、约10倍以上、约20倍以上、约30倍以上、约40倍以上、约50倍以上、约100倍以上。
作为本发明的抗体与CD80、CD86或CD28的结合中的结合速率常数(Ka1)，例如可以列举出：约1×104Ms-1以上、约1×105Ms-1以上、约5×105Ms-1以上。另外，作为本发明的抗体与CD80、CD86或CD28的结合中的解离速率常数(Kd1)，例如可列举出：约1×10-3以下、约1×10-4以下。作为本发明的抗体与CD80、CD86或CD28的结合中的结合常数(KD)，例如可以是约1×10-8(M)以下、约5×10-8(M)以下、约1×10-9(M)以下、约5×10-9(M)以下。对于本说明书中的抗体的结合速率常数(Ka1)、解离速率常数(Kd1)、结合常数(KD)，可以使用BIACORE(GEHealthcare Bio-Sciences KK、BIACORE-X100)，依据生产商提供的指南，在SA芯片上固定生物素化CD80、CD86或CD28或表达它们的细胞后，使待检抗体流过，测定结合速率常数Ka1、解离速率常数Kd1，使用二价拟合(bivalent fitting)而确定结合常数KD值。
本发明的抗体可以是多克隆抗体，也可以是单克隆抗体，但优选为单克隆抗体。本发明中，“单克隆抗体”是与单一抗原决定簇反应的均质结构的抗体。进而，本发明的抗体包括具有非人动物的抗体的氨基酸序列和源自人的抗体的氨基酸序列的抗体、人抗体。作为非人动物的抗体，例如可以列举出：小鼠、大鼠、仓鼠、豚鼠、兔子、狗、猴、绵羊、山羊、骆驼、鸡、鸭等的抗体，优选为能够制作杂交瘤的动物的抗体，更优选为小鼠、大鼠或兔子的抗体。作为具有非人动物的抗体的氨基酸序列和源自人的抗体的氨基酸序列的抗体，可以列举出人型嵌合抗体、人源化抗体。上述中，“嵌合抗体”是指：进行了基因工程改造、从而将非人动物来源的且与目标抗原(CD80、CD86或CD28)特异性结合的抗体的恒定区改造为具有与人的抗体相同的恒定区的抗体，优选为人/小鼠嵌合抗体(参照欧州专利公开公报EP0125023)。“人源化抗体”是指：进行了基因工程改造、从而将非人动物来源的且与CD80、CD86或CD28特异性结合的抗体的除H链和L链的互补性决定区(CDR)以外的一级结构改造为对应于人抗体的一级结构的抗体。此处，CDR可以基于Kabat等人(“Sequences of Proteins ofImmunological Interest”、Kabat、E.等人U.S.Department of Health and HumanServices、1983)或Chothia等人(Chothia&Lesk(1987)J.Mol.Biol.、196：901-917)中的任意的定义。“人抗体”是指：作为完全源自人的抗体基因的表达产物的人抗体，例如可以列举出使用导入了与人的抗体产生相关的基因的转基因动物而制作的单克隆抗体(参照欧州专利公开公报EP0546073)等。例如，在将本发明的抗体用于治疗、预防、或通过投入体内而使用的诊断的情况下，作为本发明的抗体优选为人/非人动物的嵌合抗体、人源化抗体、或人抗体。
优选地，本发明的抗体的免疫球蛋白类别是IgG。另外，本发明的抗体的亚类优选为IgG2、或IgG4。进一步优选地，本发明的抗体的亚类为IgG4。或者，优选地，本发明的抗体的亚类为IgG2。另外，本发明的抗体可以是单特异性、双特异性(双特异性抗体)、三特异性(三特异性抗体)(例如，WO1991/003493号)、四特异性(四特异性抗体)、其以上的多特异性(多抗原特异性)。
在一个方式中，本发明的抗体具有序列号27或序列号33所述的氨基酸序列的CDRH3。优选地，本发明的抗体具有序列号25所述的氨基酸序列的CDRH1、序列号26所述的氨基酸序列的CDRH2、序列号27所述的氨基酸序列的CDRH3，或者具有序列号31所述的氨基酸序列的CDRH1、序列号32所述的氨基酸序列的CDRH2、序列号33所述的氨基酸序列的CDRH3。更优选地，本发明的抗体具有序列号25所述的氨基酸序列的CDRH1、序列号26所述的氨基酸序列的CDRH2、序列号27所述的氨基酸序列的CDRH3，并且具有序列号28所述的氨基酸序列的CDRL1、序列号29所述的氨基酸序列的CDRL2、序列号30所述的氨基酸序列的CDRL3；或者具有序列号31所述的氨基酸序列的CDRH1、序列号32所述的氨基酸序列的CDRH2、序列号33所述的氨基酸序列的CDRH3，并且具有序列号34所述的氨基酸序列的CDRL1、序列号35所述的氨基酸序列的CDRL2、序列号36所述的氨基酸序列的CDRL3。
在一个方式中，本发明的抗体可以是具有重链和轻链的抗体或其变体，所述重链具有序列号38或42所述的氨基酸序列或其改造序列，所述轻链具有序列号40或44所述的氨基酸序列或其改造序列。优选地，本发明的抗体优选可以是如下抗体或其变体，所述抗体或其变体包含(a)VH和VL，所述VH包含：序列号53所述的氨基酸序列或其改造序列的CDRH1、序列号54所述的氨基酸序列或其改造序列的CDRH2、和序列号55所述的氨基酸序列或其改造序列的CDRH3，所述VL包含：序列号56所述的氨基酸序列或其改造序列的CDRL1、序列号57所述的氨基酸序列或其改造序列的CDRL2、和序列号58所述的氨基酸序列或其改造序列的CDRL3；或者包含(b)VH和VL，所述VH包含：序列号59所述的氨基酸序列或其改造序列的CDRH1、序列号60所述的氨基酸序列或其改造序列的CDRH2、和序列号61所述的氨基酸序列或其改造序列的CDRH3，所述VL包含：序列号62所述的氨基酸序列或其改造序列的CDRL1、序列号63所述的氨基酸序列或其改造序列的CDRL2、和序列号64所述的氨基酸序列或其改造序列CDRL3。在特定的实施方式中，可以是如下抗体或其变体，所述抗体或其变体包含：(a)具有序列号46所述的氨基酸序列或其改造序列的VH和具有序列号48所述的氨基酸序列或其改造序列的VL；或者包含：(b)具有序列号50所述的氨基酸序列或其改造序列的VH和具有序列号52所述的氨基酸序列或其改造序列的VL。改造序列优选在CDR内不包含改变(氨基酸的置换、添加或缺失)，但只要维持改变前的抗体的结合能力和/或功能，则可以在各CDR内包含数个(3个以下、2个以下，优选为1个以下)的改变。改造序列优选与原始序列相比可具有至少90％的一致性。
在另一个方案中，本发明的抗体涉及具有VH的抗体，所述VH具有序列号18或序列号22所述的氨基酸序列。优选地，本发明的抗体具有如下VH和VL，所述VH具有序列号18所述的氨基酸序列，所述VL具有序列号20所述的氨基酸序列；或者具有如下VH和VL，所述VH具有序列号22所述的氨基酸序列，所述VL具有序列号24所述的氨基酸序列。
进而，本发明涉及一种抗体，其VH具有由下述核酸序列编码的氨基酸序列，所述核酸序列是与编码序列号18或序列号22所述的氨基酸序列的核酸序列在严谨条件下进行杂交的核酸序列。优选地，本发明涉及具有如下VH和VL的抗体：所述VH具有由下述核酸序列编码的氨基酸序列，所述核酸序列是与编码序列号18所述的氨基酸序列的核酸序列在严谨条件下进行杂交的核酸序列，并且所述VL具有由下述核酸序列编码的氨基酸序列，所述核酸序列是与编码序列号20所述的氨基酸序列的核酸序列在严谨条件下进行杂交的核酸序列；或者，所述VH具有由下述核酸序列编码的氨基酸序列，所述核酸序列是与编码序列号22所述的氨基酸序列的核酸序列在严谨条件下进行杂交的核酸序列，并且所述VL具有由下述核酸序列编码的氨基酸序列，所述核酸序列是与编码序列号24所述的氨基酸序列的核酸序列在严谨条件下进行杂交的核酸序列。本说明书中，在严谨条件下进行杂交是指：本领域技术人员在通常使用的杂交分析条件下进行杂交。例如可以利用Molecular Cloning、aLaboratory Mannual、Fourth Edition、Cold Spring Harbor Laboratory Press(2012)或Current Protocols in Molecular Biology、Wiley Online Library等中记载的方法来确定是否杂交。例如，杂交的条件可以是如下条件：在6×SSC(0.9M NaCl、0.09M柠檬酸三钠)或6×SSPE(3M NaCl、0.2M NaH2PO4、20mM EDTA·2Na、pH7.4)中在42℃下进行杂交，然后在42℃下以0.5×SSC进行清洗的条件。
另外，本发明包括一种抗体，其VH具有与序列号18或序列号22的氨基酸序列具有80％以上的一致性的氨基酸序列。优选地，本发明的抗体中，VH具有与序列号18的氨基酸序列具有80％以上的一致性的氨基酸序列，并且VL具有与序列号20的氨基酸序列具有80％以上的一致性的氨基酸序列，或者VH具有与序列号22的氨基酸序列具有80％以上的一致性，并且VL具有与序列号24的氨基酸序列具有80％以上的一致性的氨基酸序列。氨基酸序列的一致性是指：在2种蛋白质之间，在成为比较对象的氨基酸序列范围内的种类相同的氨基酸数的比例(％)，例如可以使用BLAST、FASTA等公知的程序进行确定。作为上述的一致性，可以是比80％以上更高的一致性，例如，可以是85％以上、90％以上、95％以上、98％以上、或99％以上的一致性。
上述的VH具有由在严谨条件下进行杂交的核酸序列编码的氨基酸序列的抗体、具有具有80％以上的一致性的氨基酸序列的抗体优选具有上述的CDR序列。
作为更具体的例子，本发明包括具有如下重链的抗体，所述重链具有选自序列号2、序列号6、序列号10、序列号14中的1个序列号所述的氨基酸序列。优选地，本发明的抗体具有：具有序列号2所述的氨基酸序列的重链、具有序列号4所述的氨基酸序列的轻链；或者具有：具有序列号6所述的氨基酸序列的重链、具有序列号8所述的氨基酸序列的轻链；或者具有：具有序列号10所述的氨基酸序列的重链、具有序列号12所述的氨基酸序列的轻链；或者具有：具有序列号14所述的氨基酸序列的重链、具有序列号16所述的氨基酸序列的轻链。
在优选的实施方式中，抗体可以包含(a)VH和VL：所述VH包含：序列号25所述的氨基酸序列的CDRH1、序列号26所述的氨基酸序列的CDRH2、和序列号27所述的氨基酸序列的CDRH3，所述VL包含：序列号28所述的氨基酸序列的CDRL1、序列号29所述的氨基酸序列的CDRL2、和序列号30所述的CDRL3；或者包含(b)VH和VL：所述VH包含：序列号31所述的氨基酸序列的CDRH1、序列号32所述的氨基酸序列的CDRH2、和序列号33所述的氨基酸序列的CDRH3，所述VL包含：序列号34所述的氨基酸序列的CDRL1、序列号35所述的氨基酸序列的CDRL2、和序列号36所述的CDRL3。在其它优选的实施方式中，抗体可以包含(a)具有序列号18所述的氨基酸序列或其改造序列的VH和具有序列号20所述的氨基酸序列或其改造序列的VL；或者可以包含：(b)具有序列号22所述的氨基酸序列或其改造序列的VH和具有序列号24所述的氨基酸序列或其改造序列的VL。改造序列优选在CDR内不包含改变(氨基酸的置换、添加或缺失)，但只要维持改变前的抗体的结合能力和/或功能，则可以在各CDR内包含数个(3个以下、2个以下，优选为1个以下)改变。改造序列优选与原始序列相比可具有至少90％的一致性。
本发明的抗体可以通过如下方式制作：将CD80、CD86或CD28蛋白质或其胞外域或者表达CD80、CD86或CD28的细胞作为免疫原，根据需要与免疫刺激剂(例如，矿物油或铝沉淀物与加热死菌或脂多糖、弗氏完全佐剂、或弗氏不完全佐剂等)一起对会产生免疫反应的非人动物、优选通过过度免疫对自身产生免疫反应(自身抗体)的非人动物(例如，MRL/lpr小鼠)进行免疫，从而制作。作为免疫动物，只要是如小鼠、大鼠、仓鼠、豚鼠、兔子、狗、猴、绵羊、山羊、鸡、鸭等能够制作杂交瘤的动物就没有特别限定，优选为小鼠或大鼠，更优选为小鼠，最优选为MRL/lpr小鼠。对于免疫原向动物的给予，例如可以通过皮下注射、腹腔内注射、静脉内注射、皮内注射、肌肉注射或脚底注射(foot sole injection)将1×106个细胞进行1次或适当隔开间隔地进行数次(通常将每1～6周1次的免疫总计进行2～10次左右)。自最后的免疫开始1～2周后，从免疫的动物的眼窝或尾静脉进行采血，使用其血清进行抗体效价的测定。本发明的抗体可以通过由显示出足够的抗体效价的动物的血清进行纯化而获得。
单克隆抗体可以通过培养杂交瘤而获得，所述杂交瘤通过将由利用上述方法免疫的免疫致敏动物得到的抗体产生细胞与骨髓瘤系细胞(Myeloma cells)融合而获得。作为其融合方法，例如可以列举出Milstein等人的方法(Galfre、G.&Milstein、C.(1981)Methods Enzymol.、73：3-46)。所使用的抗体产生细胞可以从利用上述方法免疫、且血清显示出足够的抗体效价的小鼠或大鼠的脾脏、胰腺、淋巴结、外周血采集。作为使用的骨髓瘤系细胞例如只要是源自小鼠、大鼠、豚鼠、仓鼠、兔子或人等哺乳动物的细胞、且是在体外能增殖的细胞就没有特别限定。作为这样的细胞，例如可以列举出：P3-X63Ag8(X63)(Nature、256、495、1975)、P3/NS1/1-Ag4-1(NS1)(Eur.J.Immunol.、6、292、1976)、P3X63Ag8U1(P3U1)(Curr.Top.Microbiol.Immunol.、81、1、1978)、P3X63Ag8.653(653)(J.Immunol.、123、1548、1979)、Sp2/0-Ag14(Sp2/O)(Nature、276、269、1978)、Sp2/O/FO-2(FO-2)(J.Immunol.Methods、35、1、1980)、SP2ab等，优选为与抗体产生细胞同种动物来源的细胞，更优选为与抗体产生细胞同系统的动物来源的细胞。
培养后，采集培养上清液，通过使用了CD80、CD86或CD28蛋白质或其胞外域或者表达CD80、CD86或CD28的细胞的ELISA，选择与CD80、CD86或CD28结合的克隆。对于所选择的克隆，可以通过将极限稀释法重复1～5次来进行单细胞化，由此能够获得产生单克隆抗体的细胞。
或者，例如可以通过利用抗体噬菌体文库获得与CD80、CD86或CD28结合的抗体(富塚等人，Nature Genet.、15、146-156(1997))。利用抗体噬菌体文库的情况，例如可以通过如下方式获得期望的克隆，将CD80、CD86或CD28蛋白质或其胞外域或者表达CD80、CD86或CD28的细胞固定化于固相，与噬菌体抗体文库反应，清洗去除非结合的噬菌体后，回收结合的噬菌体，从而获得(淘选)。
或者，可以通过如下方式获得：参照本说明书中记载的氨基酸序列，设计目标抗体或其免疫反应性片段的氨基酸序列，制备编码该设计的氨基酸序列的DNA，整合到表达载体中，将该载体导入适合的宿主细胞中使其表达而得到抗体，由该抗体依据上述方法对与CD80、CD86或CD28特异性高的抗体进行筛选，从而获得。
本发明的抗体为人型嵌合抗体的情况下，可以通过如下方式获得：制备编码非人动物单克隆抗体的VHVL的DNA，使其与人免疫球蛋白的恒定区cDNA结合并整合到表达载体中，将该载体导入适合的宿主细胞中使其表达，从而获得(Morrison,S.L.等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA、81、6851-6855、1984)。
本发明的抗体为人源化抗体的情况下，可以通过如下方式获得：构建编码V区的DNA，所述V区是将非人动物单克隆抗体的VHVL的CDR的氨基酸序列移植到人抗体的VHVL的构架区(Framework Region：FR)中而得到的，使所构建的DNA与人来源免疫球蛋白的恒定区cDNA结合并整合到表达载体中，将该载体导入适合的宿主细胞中使其表达，从而获得(参照L.Rieohmann等人，Nature、332、323、1988：Kettleborough、C.A.等人，Protein Eng.、4、773-783、1991；Clark M.、Immunol.Today.、21、397-402、2000)。非人动物单克隆抗体的CDR可以通过将基于编码利用上述方法得到的非人动物单克隆抗体的VHVL的DNA序列预测的氨基酸序列与已知的抗体的VHVL的全氨基酸序列进行比较，从而获得。已知的抗体的氨基酸序列例如可以利用注册于蛋白质数据库等数据库中的抗体的氨基酸序列而获得。另外，作为人源化抗体的FR，只要移植后的抗体发挥本发明的效果就没有特别限定，优选地，是使人源化抗体的可变区(以下称为“V区”)与CDR所来源的非人动物单克隆抗体的V区立体结构类似的人抗体的FR、或与所使用的非人动物单克隆抗体的FR的氨基酸序列同源性高的人抗体FR。人源化抗体中，构成源自人抗体的FR的氨基酸的一部分(特别是存在于空间上接近CDR的位置的氨基酸)还可以根据需要置换成CDR所来源的非人动物单克隆抗体的FR序列(参照Queen等人，美国专利第5585089号)。所使用的编码人源化抗体的V区的DNA序列设计成：对应于将非人动物单克隆抗体的CDR的氨基酸序列与人抗体的FR的氨基酸序列结合而成的氨基酸序列的DNA序列。编码人源化抗体的V区的DNA可以以所设计的DNA序列为基础，利用本领域技术人员公知的方法而制作。
人抗体例如可以通过利用人抗体噬菌体文库或产生人抗体的转基因小鼠而获得(富塚等人，Nature Genet.、15、146-156(1997))。利用人抗体噬菌体文库的情况下，例如可以通过如下方式获得期望的克隆：使CD80、CD86或CD28蛋白质或其胞外域或者表达CD80、CD86或CD28的细胞与固相结合，使噬菌体抗体文库反应，清洗去除非结合的噬菌体后，回收结合的噬菌体，从而获得(淘选)。产生人抗体的转基因小鼠是将人抗体的Ig基因导入敲除了内源性免疫球蛋白(Ig)基因的小鼠中而得的小鼠。通过将产生人抗体的转基因小鼠作为免疫动物，依据上述本发明的抗体制作方法免疫抗原蛋白，从而能够获得特异性识别CD80、CD86或CD28的人抗体。
(核酸分子/载体/宿主细胞)
在另一个方案中，本发明涉及具有编码上述本发明的抗体的多核苷酸的核酸分子。例如，本发明的核酸分子包含序列号17或序列号21所述的核苷酸序列作为编码VH的多核苷酸。另外，在另一个方案中，本发明的核酸分子包含序列号19或序列号23所述的核苷酸序列作为编码VL的多核苷酸。作为更具体的例子，本发明的核酸分子含有：编码具有选自序列号1、5、9、13中的任意1个所述的核苷酸序列的VH的多核苷酸；编码具有选自序列号3、7、11、15中的任意1个所述的核苷酸序列的VL的多核苷酸。本发明的核酸分子还可以具有在严谨条件下与上述序列号杂交的核酸序列。进而，本发明包括具有前述核酸分子的载体。作为这样的载体，只要是能用于表达抗体的载体就没有特别限制，可以根据所使用的宿主来选择适合的病毒载体或质粒载体等。在另一个方案中，本发明涉及含有前述载体的宿主细胞。作为宿主细胞，只要是能表达抗体的宿主细胞就没有特别限制，可以列举出哺乳类细胞(小鼠细胞、大鼠细胞、兔子细胞、人细胞等)、酵母、微生物(大肠杆菌等)。本发明包括本发明的抗体的制造方法，所述方法包括培养上述宿主细胞。培养基培养方法可以根据所采用的宿主细胞，利用本领域技术人员公知的手段进行适宜确定。
本发明的核酸可以如下得到：从产生上述所得到的抗体的杂交瘤中克隆，或者以上述得到的抗体或其免疫反应性片段的氨基酸序列为基础而设计适宜的核酸序列，从而获得。本发明的载体可以通过将得到的核酸适宜整合到适于表达的载体中而获得。本发明的载体中，除了本发明的核酸之外，可以包含表达所需的区域(启动子、增强子、终止子等)。另外，本发明的宿主细胞可以通过将本发明的载体导入适合的细胞株(例如，动物细胞、昆虫细胞、植物细胞、酵母、大肠杆菌等微生物)中而获得。
(组合物)
在本发明的一个方式中，本发明提供用于制作诱导免疫耐受的细胞的组合物，所述组合物包含本说明书中记载的抗体中的至少1种。本发明的一个实施方式中，组合物可以包含抗CD80抗体、抗CD86抗体、抗CD28抗体、或针对CD80和CD86的双特异性抗体、或这些中的任意者的组合。通过向例如接受了器官移植的待检体给予诱导了免疫耐受的细胞，从而能够降低由器官移植所致的排斥反应。诱导了免疫耐受的细胞可以是源自被检者(受体)或供体的细胞；或它们的混合细胞。令人惊讶地，本发明的组合物实质上不诱导产细胞因子细胞(例如，巨噬细胞、中性粒细胞、自然杀伤(NK)细胞)释放细胞因子。由于细胞因子会减弱免疫耐受，因此不诱导细胞因子的释放这一点是有利的。
在另一个方案中，本发明涉及含有本说明书中记载的抗体的医疗用组合物。一个例子中，本发明的医疗用组合物包含抗CD80抗体、抗CD86抗体、抗CD28抗体、或针对CD80和CD86的双特异性抗体。本发明的医疗用组合物能够用于诱导免疫耐受。在整个本说明书中，“用于诱导免疫耐受”包括如下情况：例如，用于诱导对所移植的器官的免疫耐受、即用于抑制器官移植中的排斥反应；在自身免疫疾病或变态反应性疾病患者中抑制对成为免疫源的诱发物质的过度免疫反应而用于缓和或治疗这些疾病的症状。在其它实施方式中，本发明的药物组合物可以用于制作诱导了免疫耐受的细胞。
本说明书中的“器官移植”中，作为接受移植的“器官”，没有特别限制，作为例子，包括心脏、肾脏、肺、胰腺、食道、胃、小肠、大肠、皮肤、神经、血液、包括免疫系统细胞在内的血细胞、骨、软骨、血管、角膜、眼球、骨髄或肝脏。另外，本说明书中，“器官”除了整个器官、器官的块之外还包括器官的一部分或构成器官的细胞。例如，心肌细胞、角膜细胞等也包括在移植器官中。另外，器官移植除了将他人器官移植至患者中的情况之外，还包括在再生医疗等中将使用异体来源干细胞制作的器官移植至患者中的情况。
本发明的抗体可在根据需要进行纯化后依据常规方法进行制剂化，由此可以作为医疗用组合物使用。另外，本发明包括：本发明的抗体的用于制造用于诱导免疫耐受的医疗用组合物的应用。或者，本发明包括：本发明的抗体的用于诱导免疫耐受的应用。进而，本发明涉及诱导免疫耐受的方法，所述方法包括添加或给予本发明的抗体。例如，本发明包括如下方法：包括向接受器官移植的患者给予本发明的抗体的、器官移植中的排斥反应的抑制方法；包括向自身免疫疾病或变态反应性疾病的患者给予本发明的抗体的、自身免疫疾病或变态反应性疾病的治疗方法；包括向接受了iPS细胞或ES细胞或源自这些细胞的细胞、组织、器官移植的患者给予本发明的抗体的、在iPS细胞或ES细胞或源自这些细胞的(由其分化的)细胞、组织、器官移植中的排斥反应的抑制方法。
作为源自iPS细胞或ES细胞的(由其分化的)细胞、组织或器官，例如可列举出：神经细胞或组织、角膜细胞或组织、心肌细胞或组织、肝脏或组织、软骨细胞或组织、皮肤细胞或组织、肾脏或组织等，但不限定于这些。在优选的实施方式中，作为源自iPS细胞或ES细胞的(由其分化的)细胞、组织或器官，可列举出神经细胞或组织、心肌细胞或组织、软骨细胞或组织和皮肤细胞或组织。
本发明的医疗用组合物可以通过向患者直接给予来使用，还可以如下使用：与诱导免疫耐受的目标抗原一起在体外与从想要诱导免疫耐受的患者采集的PBMC接触，从而制作对该抗原无反应的免疫细胞。
向患者直接给予本发明的医疗用组合物的情况下，可以采用经口或非经口的任意的制剂。作为用于非经口给予的组合物，例如可以列举出：滴眼、注射剂、滴鼻剂、栓剂、贴剂、软膏等。优选为注射剂。本发明的医疗用组合物的剂型例如可以列举出液体制剂或冷冻干燥制剂。将本发明的医疗用组合物用作注射剂的情况，可以根据需要加入丙二醇、乙二胺等助溶剂、磷酸盐等缓冲材料、氯化钠、甘油等等渗剂、亚硫酸盐等稳定剂、苯酚等保存剂、利多卡因等止疼剂等添加物(参照“药物添加物事典”药事日报社，“Handbook ofPharmaceutical Excipients Fifth Edition”APhA Publications公司)。另外，将本发明的医疗用组合物用作注射剂的情况，作为保存容器，可以列举出安瓿、小瓶、载药注射器、笔型注射器用针筒、点滴用袋等。
例如，本发明的医疗用组合物(治疗药或预防药)可以用作注射剂，包括静脉注射剂、皮下注射剂、皮内注射剂、肌肉注射剂、玻璃体内注射剂、点滴注射剂等剂型。这样的注射剂可以依据公知的方法进行制备，例如，将上述抗体等溶解、悬浮或乳化于通常注射剂中使用的无菌的水性或油性液中，从而制备。作为注射用的水性液，例如可以使用包含生理盐水、葡萄糖、蔗糖、甘露糖醇、其它辅助药的等渗液等，可以与适合的助溶剂、例如醇(例、乙醇)、多元醇(例、丙二醇、聚乙二醇)、非离子表面活性剂〔例如，聚山梨酯80、聚山梨酯20、HCO-50(氢化蓖麻油的聚氧乙烯(50mol)加成物)〕等组合使用。作为油性液，例如可以使用芝麻油、大豆油等，可以与作为助溶剂的苯甲酸苄酯、苄醇等组合使用。所制备的注射液通常被填充于适合的安瓿、小瓶、注射器中。另外，还可以通过添加适于本发明的抗体或其免疫反应性片段的赋形剂，从而制备冷冻干燥制剂，在使用时，用注射用水、生理盐水等溶解而制成注射液。需要说明的是，通常认为由于消化器官的分解而难以进行抗体等蛋白质的经口给予，但通过抗体片段、改造的抗体片段及剂型的创新，从而也存在经口给予的可能性。作为经口给予的制剂，例如可以列举出：胶囊剂、片剂、糖浆剂、颗粒剂等。
本发明的医疗用组合物优选制成适合活性成分的给予量那样的给药单位的剂型。作为这样的给药单位的剂型，可示例出注射剂(安瓿、小瓶、载药注射器)，每一给药单位剂型通常可以含有5～500mg、5～100mg、10～250mg的本发明的抗体或其免疫反应性片段。
本发明的医疗用组合物的给予可以是局部，还可以是全身。给予方法没有特别限制，如上所述可非经口或经口给予。作为非经口的给予途径，可列举出向眼内、皮下、腹腔内、血中(静脉内、或动脉内)或脊髄液中的注射或点滴等，优选为向血液中的给予。本发明的医疗用组合物(治疗药或预防药)可以一次性给予，或还可以持续或间断地给予。例如，给予时，还可以进行1分钟～2周之间的持续给予。
本发明的医疗用组合物的给予量只要是可以获得期望的治疗效果或预防效果的给予量就没有特别限定，可以根据症状、性别、年龄等进行适宜确定。本发明的医疗用组合物的给予量例如可以以免疫耐受的诱导程度作为指标来确定。例如，作为本发明的医疗用组合物的有效成分的1次量，通常将0.01～20mg/kg体重左右、优选将0.1～10mg/kg体重左右、进一步优选将0.1～5mg/kg体重左右通过静脉注射以1月1～10次左右、优选为1月1～5次左右进行给予是适合的。对于其它非经口给予经口给予的情况，也可以给予以此为基准的量。症状特别严重的情况下，可以根据其症状增加量或增加给予次数。
在将本发明的医疗用组合物用于与诱导免疫耐受的目标抗原一起和从想要诱导免疫耐受的患者采集的PBMC在体外接触、由此制作对该抗原无反应性的免疫细胞时，可以依据上述给予用的组合物以液态、粉末状、压片状、凝胶状、颗粒状等形态进行制备。
(免疫耐受诱导细胞)
在另一个方案中，提供通过本说明书中记载的抗体诱导了免疫耐受的细胞。通过与源自待检体的细胞、并非源自待检体的抗原或含有抗原的物质混合，可诱导免疫耐受。在进一步的本发明的方案中，本发明提供用于制造用于处置或预防由于并非源自待检体的抗原而产生的疾病、障碍或状态的细胞的方法，所述方法包括将本说明书中记载的抗体、源自待检体的细胞、和并非源自待检体的抗原或含有抗原的物质(例如，细胞)混合的步骤。疾病、障碍或状态可以选自由移植免疫排斥反应、变态反应、自身免疫疾病、移植物抗宿主疾病、由iPS细胞或ES细胞和源自这些细胞的细胞、组织或器官的移植引起的免疫排斥反应组成的组。
在本发明所针对的对象疾病等为移植免疫排斥反应的实施方式中，无反应性细胞可以通过将上述抗体、源自受体的细胞(PBMC或脾细胞)、及源自供体的抗原或源自供体的含有抗原的物质混合而诱导。源自供体的含有抗原的物质可以是PBMC、脾细胞或所移植的器官来源的细胞。
在本发明所针对的对象疾病等为变态反应的实施方式中，无反应性细胞可以通过将上述抗体、源自待检体的细胞(PBMC或脾细胞)、及引起变态反应的并非源自待检体的抗原混合而诱导。
在本发明所针对的对象疾病等为自身免疫疾病的实施方式中，无反应性细胞可以通过将上述抗体、源自待检体的细胞(PBMC或脾细胞)、及成为自身免疫疾病的原因的待检体来源的抗原混合而诱导。
在本发明所针对的对象疾病等为移植物抗宿主疾病的实施方式中，无反应性细胞可以通过将上述抗体、提供移植片的供体的PBMC或脾细胞、及源自受体的抗原或含有该抗原的物质混合而诱导。源自受体的含有抗原的物质可以是PBMC、脾细胞或移植器官的部位的周边的细胞或源自其的细胞。
在本发明所针对的对象疾病等为由iPS细胞或ES细胞和源自这些细胞的细胞、组织或器官的移植引起的免疫排斥反应的实施方式中，无反应性细胞可以通过将上述抗体、源自待检体的细胞(PBMC或脾细胞)、及由iPS细胞或ES细胞分化的移植中使用的细胞混合而诱导。
以下示出基于本发明的疾病等的治疗例，但不限定于以下。
(变态反应和自身免疫疾病)
关于变态反应和自身免疫疾病，利用常规方法将从患者的外周血得到的巨噬细胞分化为抗原呈递能力高的树状细胞(巨噬细胞来源树状细胞)，向照射辐射线(γ射线)后的该细胞呈递变态反应、自身免疫疾病中的成为过度反应的原因的抗原，与从相同的患者外周血得到的T细胞群在抗CD80抗体和/或抗CD86抗体的存在下共培养1～2周，得到成为变态反应、自身免疫疾病的原因的抗原特异性无反应性细胞。通过向患者给予该无反应性细胞，从而诱导针对成为变态反应、自身免疫疾病原因的抗原的、特异性的免疫耐受，用于预防和治疗变态反应和自身免疫疾病。根据是预防性疗法还是治疗、进而症状的轻重等各种条件，给予次数也可以是多次。
(移植物抗宿主疾病)
对于移植物抗宿主疾病而言，与针对移植免疫排斥反应的治疗相对照地，将提供移植片的供体的PBMC或T细胞等能成为移植物抗宿主疾病的原因的细胞、与经辐射线(γ射线)照射的宿主来源的PBMC或除此以外的细胞在抗CD80抗体和/或抗CD86抗体的存在下共培养1～2周，得到宿主特异性无反应性细胞。通过向宿主给予该无反应性细胞，抑制由成为移植物抗宿主疾病的原因的移植片导致的对宿主的反应(诱导免疫耐受)，从而预防和治疗移植物抗宿主疾病。根据是预防性疗法还是治疗、进而所移植的组织、其大小、症状的轻重等各种条件，给予次数也可以是多次。
(由iPS细胞或ES细胞和源自这些细胞的细胞、组织或器官的移植引起的免疫排斥反应)
对于在使用了iPS细胞或ES细胞的治疗中的应用，对由iPS细胞或ES细胞分化的移植中使用的细胞或树状细胞照射辐射线(γ射线)，将该细胞与接受移植的患者的PBMC或T细胞群在抗CD80抗体和/或抗CD86抗体的存在下共培养1～2周，得到由iPS细胞或ES细胞分化的细胞特异性的无反应性细胞。通过向宿主给予该无反应性细胞，从而诱导针对源自iPS细胞或ES细胞的移植的细胞、组织和器官的特异性的免疫耐受，预防和治疗对它们的排斥反应。根据是预防性疗法还是治疗、进而所移植的组织、其大小、症状的轻重的各种条件，给予次数也可以是多次。
具体的实施方式中，本发明涉及诱导患者的PBMC针对前述抗原的无反应性的方法，所述方法包括使上述抗体(包括含有上述抗体的组合物，以下同样)、想要诱导免疫耐受的抗原或表面具有该抗原的细胞、与PBMC接触。本发明的诱导免疫耐受的方法在体外进行。例如，在器官移植中为了抑制接受移植的患者对移植器官的排斥反应的情况下，PBMC是从接受器官移植的患者采集的细胞。另外，对于PBMC而言，在为了治疗或改善自身免疫疾病或变态反应疾病的情况下，PBMC是从该患者采集的细胞。
例如，用于抑制器官移植的排斥反应的免疫耐受的诱导可以利用以下的方法进行。制备接受器官移植的患者(受体)PBMC和提供器官的对象者(供体)PBMC，对供体PBMC照射辐射线30Gy。以1：1与受体PBMC混合，添加本发明的抗体(优选为抗人CD80抗体和抗人CD86抗体的组合)。在PBMC用培养基中、在37℃、5％CO2恒温箱内培养3～7天，由此能够制备对供体无反应性的受体PBMC。
另外，例如，用于治疗或改善自身免疫疾病或变态反应疾病的免疫耐受的诱导可以利用以下的方法进行。制备患者PBMC，与成为自身免疫疾病或变态反应疾病的原因的抗原混合，添加本发明的抗体(优选为抗人CD80抗体和抗人CD86抗体的组合)。在PBMC用培养基中、在37℃、5％CO2恒温箱内培养3～7天，由此能够制备对前述抗原无反应性的受体PBMC。
本发明包括利用上述方法诱导了无反应性的细胞(例如，PBMC)。通过向患者给予诱导了无反应性的细胞(例如，PBMC)，从而能够诱导患者中的免疫耐受等，因此可以将诱导了无反应性的细胞(例如，PBMC)作为细胞治疗剂。因此，本发明涉及：含有利用上述方法诱导了无反应性的细胞(例如，PBMC)作为有效性成分的细胞治疗剂；优选地，含有对移植器官诱导了无反应性的接受移植的患者的细胞(例如，PBMC)作为有效性成分的、用于抑制器官移植中的排斥反应的细胞治疗剂；或者含有对通过过度免疫反应而成为自身免疫疾病或变态反应性疾病的原因的抗原诱导了无反应性的细胞(例如，PBMC)作为有效性成分的、用于治疗自身免疫疾病或变态反应性疾病的细胞治疗剂；用于抑制iPS细胞、ES细胞、源自这些细胞的细胞、组织或器官的移植中的排斥反应的细胞治疗剂。作为这样的排斥反应，可示例出移植物抗宿主疾病。
通过向患者给予本发明的细胞治疗剂，从而能够诱导患者中的免疫耐受。例如，本发明包括器官移植中的排斥反应的抑制方法，所述方法包括向接受器官移植的患者给予用于抑制器官移植中的排斥反应的细胞治疗剂，所述细胞治疗剂含有对移植器官诱导了无反应性的接受移植的患者的细胞(例如，PBMC)作为有效性成分。另外，本发明包括自身免疫疾病或变态反应性疾病的治疗方法，所述方法包括向自身免疫疾病或变态反应性疾病的患者给予用于治疗自身免疫疾病或变态反应性疾病的细胞治疗剂，所述细胞治疗剂含有对通过过度地免疫反应而成为自身免疫疾病或变态反应性疾病的原因的抗原诱导了无反应性的细胞(例如，PBMC)作为有效性成分。另外，本发明包括iPS细胞、ES细胞、源自这些细胞的细胞、组织或器官的移植中的排斥反应的抑制方法，所述方法包括向接受器官移植的患者给予用于抑制iPS细胞、ES细胞、源自这些细胞的细胞、组织或器官的移植中的排斥反应的细胞治疗剂，所述细胞治疗剂含有对移植的iPS细胞或ES细胞或源自这些细胞的细胞、组织或器官诱导了无反应性的、接受移植的患者的细胞(例如，PBMC)作为有效性成分。
本发明的细胞治疗剂在含有/不含有血清的能向人给予的培养基或生理盐水中含有PBMC。为粘附性细胞的情况下，可以负载于能剥离细胞的基材上加以保存，在使用时将细胞剥离来使用。例如，可以使用能够根据温度变化而剥离细胞的基材(RepCell、CellSeedInc.、日本)等。
本发明可以是在患者中诱导免疫耐受的方法，所述方法包括如下操作：通过将上述抗体、与想要诱导免疫耐受的抗原或表面具有该抗原的细胞、与细胞(例如，PBMC)接触，从而诱导患者的细胞(例如，PBMC)对前述抗原无反应性；向患者给予诱导了无反应性的细胞(例如，PBMC)。例如，本发明包括器官移植中的排斥反应的抑制方法，所述方法包括：通过使供体来源细胞与患者的细胞(例如，PBMC)接触，从而诱导患者的细胞(例如，PBMC)对移植器官无反应性，由此制备对所移植的器官诱导了免疫耐受的源自患者的细胞(例如，PBMC)；将所制备的细胞(例如，PBMC)给予接受器官移植的患者。另外，本发明可以是自身免疫疾病或变态反应性疾病的治疗方法或改善方法，所述方法包括：通过使成为自身免疫疾病或变态反应性疾病的原因的抗原与患者的细胞(例如，PBMC)接触，从而诱导患者的细胞(例如，PBMC)对前述抗原无反应性，由此制备对成为自身免疫疾病或变态反应性疾病的原因的抗原诱导了免疫耐受的源自患者的细胞(例如，PBMC)；向自身免疫疾病或变态反应性疾病的患者给予所制备的细胞(例如，PBMC)。另外，本发明包括iPS细胞或ES细胞或源自这些细胞的细胞、组织或器官的移植中的排斥反应的抑制方法，所述方法包括：通过使iPS细胞或ES细胞、或这些细胞来源的细胞、组织或器官与患者的细胞(例如，PBMC)接触，从而诱导患者的细胞(例如，PBMC)对iPS细胞、ES细胞或源自这些细胞的细胞、组织或器官无反应性，从而制备对待移植的iPS细胞或ES细胞或源自这些细胞的细胞、组织或器官诱导了免疫耐受的患者来源的细胞(例如，PBMC)；向接受iPS细胞或ES细胞或源自这些细胞的细胞、组织或器官移植的患者给予所制备的细胞(例如，PBMC)。
本说明书中，对于细胞治疗剂(诱导了无反应性的细胞、例如PBMC)的给予而言，只要是可以获得期望的治疗效果或预防效果的给予量就没有特别限定，可以根据症状、性别、年龄等进行适宜确定。本发明的细胞治疗剂的给予量例如可以以免疫耐受的诱导程度作为指标来确定。例如，作为本发明的细胞治疗剂的诱导了无反应性的PBMC的1次量，通常将1.0～3.7×107个细胞/kg体重左右、优选将2.0～5.0×107个细胞/kg体重左右、进一步优选将3.0～5.0×107个细胞/kg体重左右通过静脉注射以1个月1～10次左右、优选以1个月1～5次左右进行给予是适合的。在未观察到免疫抑制效果的情况下，可以根据其症状增加量或增加给予次数。
(附注)
本说明书中，“或”在可以采用文章中所列举的事项的“至少1个以上“时使用。”或者”也是同样。本说明书中明确记载为“2个值的范围内”的情况下，该范围还包括2个值本身。
对于本说明书中引用的科学文献、专利、专利申请等参考文献，将其整体以与各自具体记载的内容相同程度地作为参考引入本说明书中。
以上为了容易理解本发明而示出优选的实施方式进行了说明。以下基于实施例对本发明进行说明，但上述的说明和以下的实施例仅出于示例的目的而提供，并非出于限定本发明的目的而提供。因此，本发明的范围不限定于本说明书中具体记载的实施方式或实施例，仅由权利要求书来限定。
实施例
以下基于实施例对本发明进行更具体地说明。但是，本发明不限定于这些实施例。需要说明的是，在整个本申请中，所引用的全部文献通过引用直接并入本申请中。
以下记载实施例。以下的实施例中使用的生物的操作遵守顺天堂大学、监管机构所制定的基准。在实施动物实验时，遵守基于“关于动物的保护和管理的法律”、“关于实验动物的饲养和保管以及减轻苦痛的基准”(平成18年环境省公告第88号)、“关于研究机构等中的动物实验等实施的基本方针”(平成18年文部科学省公告第71号)所制定的顺天堂大学动物实验等管理规则来进行。实验基于所谓的3R制定计划，向顺天堂大学医学部实验动物委员会提出计划书，在审议后已经得到了认可并受理。在使用基因操作小鼠时，使用了重组DNA制作动物的实验计划、接受了校内安全委员会的审查并得到了认可。进而，关于重组DNA实验，向顺天堂大学医学部DNA实验安全委员会提出计划书，在审议后已经认可并受理，依据“关于通过规定基因重组生物等的使用等确保生物的多样性的法律”等相关规定进行了研究。关于使用了人外周血(PBMC)的实验，在顺天堂大学医学部伦理委员会，基于公正的审议及信息公开原则进行了审查，根据适宜的判断而已经得到了认可。由待检体提供者得到关于研究目的/计划/方法的知情同意书后，严格进行个人信息的保护，保持匿名的同时进行研究。在进行实验时，遵守顺天堂大学医学部和相模原医院的伦理理委员会制定伦理规定、以及厚生劳动省制定的“关于临床研究的方针”。试剂类具体而言使用实施例中记载的制品，也可以用其它生产商(Sigma-Aldric、和光纯药、Nacalai Tesque、R&DSystems、USCNLife Science INC、BD bioscience、BioLegend等)的同等品进行替代。
(实施例1)抗人CD80和抗CD86抗体(亚类IgG1)存在下的混合淋巴细胞反应(MLR)
(材料和方法)
使用Promo cell公司制淋巴细胞分离介质(Cat.No.C-44010)，从三位志愿者(将一人指定为供体(供体C)，将二人指定为受体(受体A和受体B))的人外周血中分离单核细胞(PBMC)，用Biowest公司制含有2％人血清AB型(库(pool))的ALyS505N-0培养基(细胞科学研究所(CSTI)1020P10)调整为4×106个细胞/ml。对供体PBMC照射辐射线(γ射线)30Gy。
将供体PBMC与受体PBMC以成为1：1的比率的方式、各100μL/孔地分注于96孔板(Corning公司制、Cat.No.3799)的4孔中(最终总计200μL/孔)，向其中添加人源化抗人CD80抗体(v2(亚类IgG1))和抗人CD86抗体(v5(亚类IgG1))的组合、或eBioscience公司制小鼠抗人CD80抗体(Cat.No.16-0809-85)(亚类IgG1)和小鼠抗人CD86抗体(Cat.No.16-0869-85)(亚类IgG2)的组合各10μl，以使各抗体的添加后浓度为0.1、1、10μg/mL，在37℃、5％CO2恒温箱中开始进行培养。在培养开始第4天添加3H-胸苷(10μL)，在培养开始第5天(添加3H-胸苷的16～20小时后)通过细胞收集器(Cell Harvester，Molecular Devices)回收培养细胞，用闪烁计数器测定了3H-胸苷摄取量。
对于IFNγ产生，利用与前述同样的方法进行混合，同样地将添加有各抗体的PBMC混合物以500μL/孔分注于48孔板(Corning公司制、Cat.No.3548)的3孔中，在37℃、5％CO2恒温箱中开始进行培养。在培养第6天回收上清液，将回收的样品稀释10～25倍后，使用Bioligands公司制Human IFNγELISA MAXTM Deluxe、Cat.430104进行测定。
(结果)
其结果，如图1所示，对于人源化抗人CD80抗体(v2(亚类IgG1))和人源化抗人CD86抗体(v5(亚类IgG1))的组合而言，与eBioscience公司制小鼠抗人CD80抗体和小鼠抗人CD86抗体的组合几乎同等地3H-胸苷摄入少，即，抑制了免疫细胞的激活。另一方面，如图2所示，IFNγ产生评价的结果是：在eBioscience公司制小鼠抗人CD80、CD86抗体的存在下IFNγ产生少，而在人源化抗人CD80、CD86抗体(亚类IgG1)的存在下可观察到基于抗体添加量的IFNγ产生，10μg/mL时，观察到大于等于不存在抗体时(图2同种异体)的产生。虽不希望受到理论约束，但可认为：eBioscience公司制抗体由于是小鼠抗体且反应性低，因此IFNγ产生少。
(实施例2)抗人CD80和抗CD86抗体(亚类IgG1)存在下的混合淋巴细胞反应(MLR)
(材料和方法)
利用与实施例1相同的方法，评价了将人源化抗人CD80抗体(v2(亚类IgG1))和抗人CD86抗体(v5或v9(亚类IgG1))的组合、或eBioscience公司制小鼠抗人CD80抗体(Cat.No.16-0809-85)和小鼠抗人CD86抗体(Cat.No.16-0869-85)的组合以添加各抗体后浓度为10μg/mL的方式添加时的3H-胸苷摄入。需要说明的是，三位志愿者中，将一人指定为供体(供体F)，将二人指定为受体(受体D和受体E)。
另外，对于人源化抗人CD80抗体(v2(亚类IgG1))和人源化抗人CD86抗体(v9(亚类IgG1))的组合、以及eBioscience公司制小鼠抗人CD80抗体和抗人CD86抗体的组合评价了IFNγ产生。对于人源化抗人CD80抗体(v2(亚类IgG1))和抗人CD86抗体(v9(亚类IgG1))的组合而言，在实施例1的方法的基础上，对于未加入经辐射线照射的供体PBMC时的IFNγ产生也进行了评价。
(结果)
其结果，如图3所示，对于人源化抗人CD80抗体和抗人CD86抗体的组合而言，与小鼠抗人CD80抗体和抗人CD86抗体的组合相比，显示出抑制3H-胸苷摄入。另一方面，如图4所示，关于IFNγ产生，与实施例1同样地，在eBioscience公司制小鼠抗人CD80、CD86抗体的情况下产生量少。在人源化抗人CD80、CD86抗体中，观察到与不存在抗体的情况下的供体刺激时同等或其以上的产生，进而即使在不加入经辐射线照射的供体PBMC的情况下，在添加人源化抗CD80和抗人CD86抗体时也观察到同样的IFNγ产生。
(实施例3)抗人CD80和抗CD86抗体(亚类IgG1、IgG2、IgG4)存在下的混合淋巴细胞反应(MLR)
实施例2中，在未加入经辐射线照射的供体PBMC的情况下也观察到IFNγ产生，因此进行人源化抗人CD80抗体和抗人CD86抗体的类别切换，对于将该人源化抗人CD80抗体(v2(亚类IgG2或IgG4))和抗人CD86抗体(v9(亚类IgG2或IgG4))的相同的亚类彼此的组合、及eBioscience公司制小鼠抗人CD80抗体(产品编号16-0809-85)和抗人CD86抗体(产品编号16-0869-85)的组合以添加各抗体后浓度为1、3或10μg/mL的方式添加时的3H-胸苷摄入、以及以添加各抗体后浓度为10μg/mL的方式添加时的IFNγ产生进行了评价。需要说明的是，在三位志愿者中，将一人指定为供体(供体I)，将二人指定为受体(受体G和受体H)。具体的实验体系如下所述。
[3H-胸苷摄入(抗体浓度各1、3、10μg/mL)](图5)
-未添加抗体(同种异体)、经辐射线照射的供体PBMC添加
-eBioscience公司制小鼠抗人CD80抗体、小鼠抗人CD86抗体
-人源化抗人CD80抗体(v2(IgG2))、人源化抗人CD86抗体(v9(IgG2))
-人源化抗人CD80抗体(v2(IgG4))、人源化抗人CD86抗体(v9(IgG4))
[IFNγ产生(抗体浓度各10μg/mL)](图6)
添加有经辐射线照射的供体PBMC(同种异体)
-未添加抗体
-eBioscience公司制小鼠抗人CD80抗体、抗人CD86抗体
-人源化抗人CD80抗体(v2(IgG2))、人源化抗人CD86抗体(v9(IgG2))
-人源化抗人CD80抗体(v2(IgG4))、人源化抗人CD86抗体(v9(IgG4))
未添加经辐射线照射的供体PBMC(初始)
-未添加抗体
-eBioscience公司制小鼠CD80抗体、抗CD86抗体
-人源化抗CD80抗体(v2(IgG1))、人源化抗人CD86抗体(v9(IgG1))
-人源化抗CD80抗体(v2(IgG2))、人源化抗人CD86抗体(v9(IgG2))
-人源化抗CD80抗体(v2(IgG4))、人源化抗人CD86抗体(v9(IgG4))
(结果)
其结果，如图5所示，亚类IgG2和IgG4与实施例1和2同样地显示出抑制3H-胸苷摄入。另一方面，如图6所示，对于IFNγ产生，在亚类IgG1中观察到其产生，但令人惊讶地，在亚类IgG2和IgG4中完全未产生IFNγ。
(实施例4)添加了在抗人CD80和抗人CD86抗体(亚类IgG1、IgG2、IgG4)的存在下进行培养而得到的细胞时的混合淋巴细胞反应(MLR)
(材料和方法)
利用实施例1中记载的方法，在人源化抗人CD80抗体(v2)和抗人CD86抗体(v9)的亚类IgG1、IgG2、IgG4的组合的存在下持续培养至第14天。对于亚类IgG2的人源化抗人CD80抗体(v2)，重链由序列号2的氨基酸序列组成，轻链由序列号4的氨基酸序列组成。对于亚类IgG4的人源化抗人CD80抗体(v2)，重链由序列号6的氨基酸序列组成，轻链由序列号8的氨基酸序列组成。对于亚类IgG2的抗人CD86抗体(v9)，重链由序列号10的氨基酸序列组成，轻链由序列号12的氨基酸序列组成。对于亚类IgG4的抗人CD86抗体(v9)，重链由序列号14的氨基酸序列组成，轻链由序列号16的氨基酸序列组成。培养后，依据以下的表将得到的无反应性细胞和受体PBMC(R-PBMC)、照射了辐射线的供体PBMC(D-PBMC)混合后，利用实施例1中记载的方法评价了3H-胸苷摄入量。
[表1]
Figure BDA0002944840990000511
(结果)
其结果，如图7所示，在任意亚类的抗体的存在下得到的细胞均抑制了同等3H-胸苷摄入。
(实施例5)接受了器官移植的患者中的免疫耐受的诱导
利用与Satoru Todo et al.Hepatorogy、64(vol.2)、632-643(2016)中记载的方法同样的方法进行试验。简便起见，通过将从受体的脾脏或外周血回收的淋巴细胞、以30Gy照射了辐射线的源自供体的淋巴细胞、及实施例4中使用的亚类IgG4的人源化抗CD80抗体和抗CD86抗体进行共培养，从而诱导供体抗原特异性无反应性T细胞。在术后第13天，将该无反应性T细胞给予接受了肝脏移植的受体中。然后，观察经过。
(实施例6)嵌合抗人CD80和嵌合抗人CD86抗体(亚类IgG1)
抗体的制作
本发明人等考虑到在细胞治疗中的应用，尝试了抗人CD80抗体和抗人CD86抗体的改良。具体而言，以eBioscience公司制小鼠抗人CD80抗体和小鼠抗人CD86抗体作为基础，制作了各自的嵌合抗体。对于制得的嵌合抗人CD80抗体(亚类IgG1)，重链由序列号38的氨基酸序列组成，轻链由序列号40的氨基酸序列组成。另外，对于制得的嵌合抗人CD86抗体(亚类IgG1)，重链由序列号42的氨基酸序列组成，轻链由序列号44的氨基酸序列组成。委托外部(TPG Biologics，Inc.台湾)由CHO细胞表达编码这些的质粒，产生、纯化了抗体。
嵌合抗人CD80和嵌合抗CD86抗体(亚类IgG1)存在下的混合淋巴细胞反应(MLR)
IFNγ产生
与实施例1中记载的方法几乎同样地，使用Promo cell公司制淋巴细胞分离介质(Cat.No.C-44010)，从二位志愿者(将一人指定为供体、将另一人指定为受体)的人外周血中分离单核细胞(PBMC)，用Biowest公司制含2％人血清AB型(库)的ALyS505N-0培养基(细胞科学研究所(CSTI)1020P10)调整为2×106个细胞/ml。对供体PBMC照射辐射线(γ射线)30Gy。
如下所述，构建了实验体系：
1.“初始”：受体PBMC 1×106细胞
2.“同种异体”：受体PBMC 1×106细胞和供体PBMC 1×106细胞
3.“嵌合抗CD80”：受体PBMC 1×106细胞和嵌合抗人CD80抗体4μg
4.“嵌合抗CD86”：受体PBMC 1×106细胞和嵌合抗人CD86抗体4μg
将体系1.～4.放入96孔板(Corning公司制、Cat.No.3799)的每个孔中，使最终的反应体积为200μL(抗体的最终浓度为约20μg/mL)。在37℃、5％CO2恒温箱中开始进行培养。在培养开始第5天和第6天回收上清液，将回收的样品稀释至20～25倍后，使用Bioligands公司制Human IFNγELISA MAX TM Deluxe、Cat.430104进行测定。
结果
如图8所示，嵌合抗人CD80抗体以及嵌合抗人CD86抗体均未示出能检测到的IFNγ产生。
测定3H-胸苷摄取量
基本上，依据实施例1和实施例4中记载的方法进行实验。对于受体PBMC和供体PBMC，分别使用从人外周血新鲜分离者或将在-80℃下冷冻保存者迅速解冻来使用。这些细胞均用Biowest公司制含2％人血清AB型(库)的ALyS505N-0培养基(细胞科学研究所(CSTI)1020P10)调整为4×106个细胞/mL。对供体PBMC照射20Gy辐射线。以1：1混合这些受体PBMC和供体PBMC，在该混合物中分别添加嵌合抗人CD80抗体和嵌合抗人CD86抗体以使最终浓度为10μg/ml。培养用6cm～10cm培养皿(培养体积6～18mL)并在37℃、5％CO2恒温箱中进行7天。
在培养开始后第7天通过离心分离回收培养的受体PBMC，用上述的培养基调整为4×106个细胞/mL。在该培养的受体PBMC中，以细胞数比成为2：1的方式添加新制备的经照射的供体PBMC，进而分别添加嵌合抗人CD80抗体和嵌合抗人CD86抗体以使最终浓度为5μg/ml。培养在与上述相同的条件下进行7天(细胞密度：4×106个细胞/mL)。
从培养开始起第14天通过离心分离回收诱导细胞，按照以下的比例混合各细胞：
1.“初始”：受体PBMC 4×105细胞
2.“同种异体”：受体PBMC 4×105细胞和供体PBMC 4×105细胞
3.“1：1/2”：受体PBMC 4×105细胞和供体PBMC 4×105细胞和诱导细胞2×105细胞
4.“1：1/4”：受体PBMC 4×105细胞和供体PBMC 4×105细胞和诱导细胞1×105细胞
5.“1：1/8”：受体PBMC 4×105细胞和供体PBMC 4×105细胞和诱导细胞5×104细胞
6.“1：1/16”：受体PBMC 4×105细胞和供体PBMC 4×105细胞和诱导细胞2.5×104细胞
将体系1.～6.分别分注于96孔板(Corning公司制、Cat.No.3799)的4个孔中，在37℃、5％CO2恒温箱中进行共培养。在共培养开始第4天添加3H-胸苷(10μl)，在共培养开始第5天(添加3H-胸苷的16～20小时后)去除培养液中的3H-胸苷，测定了3H-胸苷摄取量。
结果
如图9所示，诱导细胞依赖于用量地降低了3H-胸苷摄取量(即，抑制了免疫细胞的激活)。因此，证实了：嵌合抗人CD80抗体和嵌合抗人CD86抗体能够诱导无反应性T细胞，且不会引起有害的IFNγ产生，是适于细胞治疗的抗体。
(附注)
如上，使用本发明的优选的实施方式示例出了本发明，但可理解的是本发明仅通过权利要求书解释其范围。可理解的是，对于本说明书中引用的专利、专利申请和其它文献，其内容本身以与本说明书中具体记载的内容同样内容的方式作为参考引用至本说明书中。本申请主张日本专利申请特愿2018-118996(2018年6月22日申请)的优先权的利益，可理解的是，该申请的内容(可以是全部)作为参考引入本申请中。另外，日本专利申请特愿2018-119001和特愿2018-1190031(均为2018年6月22日申请)以及对这些主张优先权的国际申请的内容的一部分或全文作为参考引入本说明书中
产业上的可利用性
本发明提供具有特征在于改善免疫耐受的效果、或不会使免疫耐受的效果减弱的结构的抗体。提供能用于与基于这样的技术的制剂等相关的产业(制药)的技术。
序列表自由文本
序列号1：抗CD80抗体(IgG2)重链核酸序列
序列号2：抗CD80抗体(IgG2)重链氨基酸序列
序列号3：抗CD80抗体(IgG2)轻链核酸序列
序列号4：抗CD80抗体(IgG2)轻链氨基酸序列
序列号5：抗CD80抗体(IgG4)重链核酸序列
序列号6：抗CD80抗体(IgG4)重链氨基酸序列
序列号7：抗CD80抗体(IgG4)轻链核酸序列
序列号8：抗CD80抗体(IgG4)轻链氨基酸序列
序列号9：抗CD86抗体(IgG2)重链核酸序列
序列号10：抗CD86抗体(IgG2)重链氨基酸序列
序列号11：抗CD86抗体(IgG2)轻链核酸序列
序列号12：抗CD86抗体(IgG2)轻链氨基酸序列
序列号13：抗CD86抗体(IgG4)重链核酸序列
序列号14：抗CD86抗体(IgG4)重链氨基酸序列
序列号15：抗CD86抗体(IgG4)轻链核酸序列
序列号16：抗CD86抗体(IgG4)轻链氨基酸序列
序列号17：抗CD80抗体(IgG2)重链可变区核酸序列
序列号18：抗CD80抗体(IgG2)重链可变区氨基酸序列
序列号19：抗CD80抗体(IgG2)轻链可变区核酸序列
序列号20：抗CD80抗体(IgG2)轻链可变区氨基酸序列
序列号21：抗CD86抗体(IgG2)重链可变区核酸序列
序列号22：抗CD86抗体(IgG2)重链可变区氨基酸序列
序列号23：抗CD86抗体(IgG2)轻链可变区核酸序列
序列号24：抗CD86抗体(IgG2)轻链可变区氨基酸序列
序列号25：抗CD80抗体(IgG2)CDRH1氨基酸序列
序列号26：抗CD80抗体(IgG2)CDRH2氨基酸序列
序列号27：抗CD80抗体(IgG2)CDRH3氨基酸序列
序列号28：抗CD80抗体(IgG2)CDRL1氨基酸序列
序列号29：抗CD80抗体(IgG2)CDRL2氨基酸序列
序列号30：抗CD80抗体(IgG2)CDRL3氨基酸序列
序列号31：抗CD86抗体(IgG2)CDRH1氨基酸序列
序列号32：抗CD86抗体(IgG2)CDRH2氨基酸序列
序列号33：抗CD86抗体(IgG2)CDRH3氨基酸序列
序列号34：抗CD86抗体(IgG2)CDRL1氨基酸序列
序列号35：抗CD86抗体(IgG2)CDRL2氨基酸序列
序列号36：抗CD86抗体(IgG2)CDRL3氨基酸序列
序列号37 嵌合抗CD80抗体 重链核酸序列
序列号38 嵌合抗CD80抗体 重链氨基酸序列
序列号39 嵌合抗CD80抗体 轻链核酸序列
序列号40 嵌合抗CD80抗体 轻链氨基酸序列
序列号41 嵌合抗CD86抗体 重链核酸序列
序列号42 嵌合抗CD86抗体 重链氨基酸序列
序列号43 嵌合抗CD86抗体 轻链核酸序列
序列号44 嵌合抗CD86抗体 轻链氨基酸序列
序列号45 嵌合抗CD80抗体 重链可变区核酸序列
序列号46 嵌合抗CD80抗体 重链可变区氨基酸序列
序列号47 嵌合抗CD80抗体 轻链可变区核酸序列
序列号48 嵌合抗CD80抗体 轻链可变区氨基酸序列
序列号49 嵌合抗CD86抗体 重链可变区核酸序列
序列号50 嵌合抗CD86抗体 重链可变区氨基酸序列
序列号51 嵌合抗CD86抗体 轻链可变区核酸序列
序列号52 嵌合抗CD86抗体 轻链可变区氨基酸序列
序列号53 嵌合抗CD80抗体CDRH1氨基酸序列
序列号54 嵌合抗CD80抗体CDRH2氨基酸序列
序列号55 嵌合抗CD80抗体CDRH3氨基酸序列
序列号56 嵌合抗CD80抗体CDRL1氨基酸序列
序列号57 嵌合抗CD80抗体CDRL2氨基酸序列
序列号58 嵌合抗CD80抗体CDRL3氨基酸序列
序列号59 嵌合抗CD86抗体CDRH1氨基酸序列
序列号60 嵌合抗CD86抗体CDRH2氨基酸序列
序列号61 嵌合抗CD86抗体CDRH3氨基酸序列
序列号62 嵌合抗CD86抗体CDRL1氨基酸序列
序列号63 嵌合抗CD86抗体CDRL2氨基酸序列
序列号64 嵌合抗CD86抗体CDRL3氨基酸序列
序列表
<110> 顺天生化股份有限公司(JUNTEN BIO Co., Ltd.)
<120> 诱导免疫耐受的抗体、所诱导的淋巴细胞、以及使用所诱导的淋巴细胞的细胞治疗剂治疗法
<130> JB002PCT
<150> JP 2018-118996
2018-06-22
<160> 64
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 1347
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 抗体
<220>
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<400> 1
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Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
tct ctg aga ctg tct tgt gcc gcc tct ggc ttc gtg ttc agc tcc gac 96
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Val Phe Ser Ser Asp
20 25 30
gat atg tcc tgg gtc cga cag gct cct ggc aaa gga ttg gag tgg gtc 144
Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
gcc tac atc tct tct ggc ggc gac tac acc tac tat ccc gac acc gtg 192
Ala Tyr Ile Ser Ser Gly Gly Asp Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Thr Val
50 55 60
aag ggc aga ttc acc atc tcc aga gac aac gcc aag aac tcc ctg tac 240
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
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85 90 95
gcc aga cac ctg tac ggc tcc tcc agc tac tac gtg atg gac tat tgg 336
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Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro
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agc gtt ttc cct ctg gct cct tgc tcc aga tcc acc tcc gag tct aca 432
Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr
130 135 140
gct gct ctg ggc tgc ctg gtc aag gac tac ttt cct gag cct gtg acc 480
Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr
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gtg tcc tgg aac tct ggc gct ctg aca tct ggc gtg cac acc ttt cca 528
Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro
165 170 175
gct gtg ctg cag tcc tct ggc ctg tac tct ctg tcc tcc gtc gtg acc 576
Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr
180 185 190
gtg cct tcc tct aac ttt ggc acc cag acc tac acc tgt aat gtg gac 624
Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp
195 200 205
cac aag cct tcc aac acc aag gtg gac aag acc gtg gaa cgg aag tgc 672
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210 215 220
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Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser
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gtg ttt ctg ttc cct cca aag cct aag gac acc ctg atg atc tct cgg 768
Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg
245 250 255
acc cct gaa gtg acc tgc gtg gtg gtg gat gtg tct cac gag gat ccc 816
Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro
260 265 270
gaa gtg cag ttc aat tgg tac gtg gac ggc gtg gaa gtg cac aac gcc 864
Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala
275 280 285
aag acc aag cct aga gag gaa cag ttc aac tcc acc ttc aga gtg gtg 912
Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val
290 295 300
tcc gtg ctg acc gtg gtg cat cag gat tgg ctg aac ggc aaa gag tac 960
Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr
305 310 315 320
aag tgc aag gtg tcc aac aag ggc ctg cct gct cct atc gaa aag acc 1008
Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr
325 330 335
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Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu
340 345 350
cct cca agc cgg gaa gag atg acc aag aac cag gtg tcc ctg acc tgc 1104
Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys
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ctc gtg aag ggc ttc tac cct tcc gat atc gcc gtg gaa tgg gag agc 1152
Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser
370 375 380
aat ggc cag cct gag aac aac tac aag acc aca cct cct atg ctg gac 1200
Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp
385 390 395 400
tcc gac ggc tca ttc ttc ctg tac tcc aag ctg aca gtg gac aag tcc 1248
Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser
405 410 415
aga tgg cag cag ggc aac gtg ttc tcc tgc tcc gtg atg cac gag gcc 1296
Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala
420 425 430
ctg cac aat cac tac acc cag aag tcc ctg tct ctg tcc cct ggc aaa 1344
Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440 445
tga 1347
<210> 2
<211> 448
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 2
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Val Phe Ser Ser Asp
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Ala Tyr Ile Ser Ser Gly Gly Asp Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Thr Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg His Leu Tyr Gly Ser Ser Ser Tyr Tyr Val Met Asp Tyr Trp
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Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro
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Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr
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145 150 155 160
Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro
165 170 175
Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr
180 185 190
Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp
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Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser
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Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg
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Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro
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Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala
275 280 285
Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val
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Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr
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Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr
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Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu
340 345 350
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355 360 365
Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser
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Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala
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Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 抗体
<220>
<221> CDS
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Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ile Pro Lys Leu Leu Val
35 40 45
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Tyr Lys Ala Ser Asn Leu His Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
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Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Gln Ser Tyr Pro Leu
85 90 95
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Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
cct tcc gtg ttc atc ttc cca cct tcc gac gag cag ctg aag tcc ggc 384
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
aca gct tct gtc gtg tgc ctg ctg aac aac ttc tac cct cgg gaa gcc 432
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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<223> 合成构建体
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 抗体
<220>
<221> CDS
<222> (1)..(1350)
<400> 5
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Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
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Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly
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Lys
<210> 6
<211> 449
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 6
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Val Phe Ser Ser Asp
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Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
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Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val
290 295 300
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
305 310 315 320
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys
325 330 335
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
340 345 350
Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr
355 360 365
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
370 375 380
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
385 390 395 400
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys
405 410 415
Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
420 425 430
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Lys
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<220>
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Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly
1 5 10 15
gac aga atc acc atc acc tgt cac gcc agc cag aac atc aac gtg tgg 96
Asp Arg Ile Thr Ile Thr Cys His Ala Ser Gln Asn Ile Asn Val Trp
20 25 30
ctg tcc tgg tat cag cag aag ccc ggc aag atc ccc aag ctg ctg gtg 144
Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ile Pro Lys Leu Leu Val
35 40 45
tac aag gcc tcc aat ctg cac acc ggc gtg ccc tct aga ttc tcc gga 192
Tyr Lys Ala Ser Asn Leu His Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
tct ggc tct ggc acc gac ttt acc ctg aca atc tcc agc ctg cag cct 240
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
gag gac ttc gcc acc tac tat tgt cag cag ggc cag agc tac cct ctg 288
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Gln Ser Tyr Pro Leu
85 90 95
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Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
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Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
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165 170 175
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Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Val Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr His Asp Val Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gln Gly Asp Pro Tyr Ser Gly Asn Tyr Gln Phe Thr Tyr Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro
115 120 125
Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr
130 135 140
Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr
145 150 155 160
Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro
165 170 175
Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr
180 185 190
Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp
195 200 205
His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr
210 215 220
Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro
225 230 235 240
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
245 250 255
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp
260 265 270
Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
275 280 285
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val
290 295 300
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
305 310 315 320
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys
325 330 335
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
340 345 350
Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr
355 360 365
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
370 375 380
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
385 390 395 400
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys
405 410 415
Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
420 425 430
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly
435 440 445
Lys
<210> 15
<211> 645
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 抗体
<220>
<221> CDS
<222> (1)..(645)
<400> 15
gac atc cag atg acc cag tct cca tcc tct ctg tcc gcc tct gtg ggc 48
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
gac aga gtg acc atc acc tgt aga gcc tct cag gac gtg tcc acc gag 96
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Glu
20 25 30
gtc gtg tgg tat cag cag aag cct ggc aag gcc cct aag ctg ctg atc 144
Val Val Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
tac tcc gcc tcc tac cgg tac tct ggc gtg ccc tct aga ttc tcc ggc 192
Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
tct ggc tct ggc acc gac ttt acc ctg aca atc tcc agc ctg cag cct 240
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
gag gac ttc gcc acc tac tac tgc cag cag cac tac agc acc cct tac 288
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Ser Thr Pro Tyr
85 90 95
acc ttt ggc cag ggc acc aag ctg gaa atc aag cgg aca gtg gcc gct 336
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
cct tcc gtg ttc atc ttc cca cct tcc gac gag cag ctg aag tcc ggc 384
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
aca gct tct gtc gtg tgc ctg ctg aac aac ttc tac cct cgg gaa gcc 432
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
aag gtg cag tgg aag gtg gac aat gcc ctg cag tcc ggc aac tcc caa 480
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
gag tct gtg acc gag cag gac tcc aag gac agc acc tac agc ctg tcc 528
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
tcc aca ctg acc ctg tcc aag gcc gac tac gag aag cac aag gtg tac 576
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
gcc tgc gaa gtg acc cat cag ggc ctg tct agc cct gtg acc aag tct 624
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
ttc aac cgg ggc gag tgc tga 645
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 16
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 16
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Glu
20 25 30
Val Val Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Ser Thr Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 17
<211> 366
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 抗体可变区
<220>
<221> CDS
<222> (1)..(366)
<400> 17
gag gtg cag ttg gtt gaa tct ggc gga gga ctg gtt cag cct ggc gga 48
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
tct ctg aga ctg tct tgt gcc gcc tct ggc ttc gtg ttc agc tcc gac 96
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Val Phe Ser Ser Asp
20 25 30
gat atg tcc tgg gtc cga cag gct cct ggc aaa gga ttg gag tgg gtc 144
Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
gcc tac atc tct tct ggc ggc gac tac acc tac tat ccc gac acc gtg 192
Ala Tyr Ile Ser Ser Gly Gly Asp Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Thr Val
50 55 60
aag ggc aga ttc acc atc tcc aga gac aac gcc aag aac tcc ctg tac 240
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
ctg cag atg aac agc ctg aga gcc gag gac acc gcc gtg tac tac tgt 288
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
gcc aga cac ctg tac ggc tcc tcc agc tac tac gtg atg gac tat tgg 336
Ala Arg His Leu Tyr Gly Ser Ser Ser Tyr Tyr Val Met Asp Tyr Trp
100 105 110
ggc cag ggc acc ctg gtc aca gtg tcc tct 366
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 18
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 18
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Val Phe Ser Ser Asp
20 25 30
Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Tyr Ile Ser Ser Gly Gly Asp Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Thr Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg His Leu Tyr Gly Ser Ser Ser Tyr Tyr Val Met Asp Tyr Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 19
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 抗体可变区
<220>
<221> CDS
<222> (1)..(321)
<400> 19
gac atc cag atg acc cag tct cca tcc tct ctg tct gcc agc ctg ggc 48
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly
1 5 10 15
gac aga atc acc atc acc tgt cac gcc agc cag aac atc aac gtg tgg 96
Asp Arg Ile Thr Ile Thr Cys His Ala Ser Gln Asn Ile Asn Val Trp
20 25 30
ctg tcc tgg tat cag cag aag ccc ggc aag atc ccc aag ctg ctg gtg 144
Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ile Pro Lys Leu Leu Val
35 40 45
tac aag gcc tcc aat ctg cac acc ggc gtg ccc tct aga ttc tcc gga 192
Tyr Lys Ala Ser Asn Leu His Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
tct ggc tct ggc acc gac ttt acc ctg aca atc tcc agc ctg cag cct 240
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
gag gac ttc gcc acc tac tat tgt cag cag ggc cag agc tac cct ctg 288
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Gln Ser Tyr Pro Leu
85 90 95
acc ttt ggc gct ggc acc aag ctg gaa atc aag 321
Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 20
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 20
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Arg Ile Thr Ile Thr Cys His Ala Ser Gln Asn Ile Asn Val Trp
20 25 30
Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ile Pro Lys Leu Leu Val
35 40 45
Tyr Lys Ala Ser Asn Leu His Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Gln Ser Tyr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 21
<211> 366
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 抗体可变区
<220>
<221> CDS
<222> (1)..(366)
<400> 21
cag gtg cag ttg gtt cag tct ggc gcc gaa gtg aag aaa cct ggc gcc 48
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
tct gtg aag gtg tcc tgc aag gct tcc ggc tac acc ttt acc agc tac 96
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
gtg atc cac tgg gtc cga cag gct cca gga caa ggc ttg gag tgg atg 144
Val Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
ggc tac atc aac ccc tac cac gac gtg acc aag tac aac gag aag ttc 192
Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr His Asp Val Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
cag ggc aga gtg acc atg acc aga gac acc tcc acc agc acc gtg tac 240
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
atg gaa ctg tcc agc ctg aga tcc gag gac acc gcc gtg tac tac tgc 288
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
gcc aga cag ggc gac cct tac tcc ggc aac tac cag ttt acc tac tgg 336
Ala Arg Gln Gly Asp Pro Tyr Ser Gly Asn Tyr Gln Phe Thr Tyr Trp
100 105 110
ggc cag ggc acc ctg gtc aca gtt tct tcc 366
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 22
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 22
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Val Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr His Asp Val Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gln Gly Asp Pro Tyr Ser Gly Asn Tyr Gln Phe Thr Tyr Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 23
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 抗体可变区
<220>
<221> CDS
<222> (1)..(321)
<400> 23
gac atc cag atg acc cag tct cca tcc tct ctg tcc gcc tct gtg ggc 48
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
gac aga gtg acc atc acc tgt aga gcc tct cag gac gtg tcc acc gag 96
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Glu
20 25 30
gtc gtg tgg tat cag cag aag cct ggc aag gcc cct aag ctg ctg atc 144
Val Val Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
tac tcc gcc tcc tac cgg tac tct ggc gtg ccc tct aga ttc tcc ggc 192
Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
tct ggc tct ggc acc gac ttt acc ctg aca atc tcc agc ctg cag cct 240
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
gag gac ttc gcc acc tac tac tgc cag cag cac tac agc acc cct tac 288
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Ser Thr Pro Tyr
85 90 95
acc ttt ggc cag ggc acc aag ctg gaa atc aag 321
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 24
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 24
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Glu
20 25 30
Val Val Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Ser Thr Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 25
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> CDR
<400> 25
Ser Asp Asp Met Ser
1 5
<210> 26
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> CDR
<400> 26
Tyr Ile Ser Ser Gly Gly Asp Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Thr Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 27
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> CDR
<400> 27
His Leu Tyr Gly Ser Ser Ser Tyr Tyr Val Met Asp Tyr
1 5 10
<210> 28
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> CDR
<400> 28
His Ala Ser Gln Asn Ile Asn Val Trp Leu Ser
1 5 10
<210> 29
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> CDR
<400> 29
Lys Ala Ser Asn Leu His Thr
1 5
<210> 30
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> CDR
<400> 30
Gln Gln Gly Gln Ser Tyr Pro Leu Thr
1 5
<210> 31
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> CDR
<400> 31
Ser Tyr Val Ile His
1 5
<210> 32
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> CDR
<400> 32
Tyr Ile Asn Pro Tyr His Asp Val Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 33
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> CDR
<400> 33
Gln Gly Asp Pro Tyr Ser Gly Asn Tyr Gln Phe Thr Tyr
1 5 10
<210> 34
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> CDR
<400> 34
Arg Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Glu Val Val
1 5 10
<210> 35
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> CDR
<400> 35
Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Ser
1 5
<210> 36
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> CDR
<400> 36
Gln Gln His Tyr Ser Thr Pro Tyr Thr
1 5
<210> 37
<211> 1359
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 嵌合抗CD80抗体重链
<400> 37
gaagtgaagc tgttggagtc tggcggcgga ctggttaagc ctggcggatc tctgaagctg 60
tcttgtgccg cctctggctt cgtgttcagc tccgacgata tgtcctgggt ccgacagtct 120
cctgagaagc ggcttgagtg ggtcgcctac atctcttccg gcggagacta cacctactat 180
cccgacaccg tgaagggcag attcaccatc tccagagaca acgccaagaa caccctgtac 240
ctgcagatgt ccagcctgaa gtctgaggac accgccatgt actactgcgc cagacacctg 300
tacggctcct ccagctacta cgtgatggac tattggggcc agggcacctc tgtcacagtg 360
tcctctgctt ccaccaaggg acccagcgtg ttccctctgg ctccttccag caagtctacc 420
tctggcggaa cagctgctct gggctgcctg gtcaaggact actttcctga gcctgtgacc 480
gtgtcctgga actctggcgc tctgacatct ggcgtgcaca cattccctgc tgtgctgcag 540
tcctccggcc tgtactctct gtcctctgtc gtgaccgtgc cttccagctc tctgggaacc 600
cagacctaca tctgcaatgt gaaccacaag ccttccaaca ccaaggtgga caagaaggtg 660
gaacccaagt cctgcgacaa gacccacacc tgtcctccat gtcctgctcc agaactgctc 720
ggcggacctt ccgtgttcct gtttcctcca aagcctaagg acaccctgat gatctctcgg 780
acccctgaag tgacctgcgt ggtggtggat gtgtcccacg aggacccaga agtgaagttc 840
aattggtacg tggacggcgt ggaagtgcac aacgccaaga ccaagcctag agaggaacag 900
tacaactcca cctacagagt ggtgtccgtg ctgaccgtgc tgcaccagga ttggctgaac 960
ggcaaagagt acaagtgcaa ggtgtccaac aaggccctgc ctgctcctat cgaaaagacc 1020
atctccaagg ccaagggcca gcctcgagaa ccccaggttt acaccttgcc tccatctcgg 1080
gacgagctga ccaagaacca ggtgtccctg acctgtctcg tgaagggctt ctacccctcc 1140
gacattgccg tggaatggga gtctaatggc cagccagaga acaactacaa gacaacccct 1200
cctgtgctgg actccgacgg ctcattcttc ctgtactcca agctgacagt ggacaagtcc 1260
agatggcagc agggcaacgt gttctcctgc tccgtgatgc acgaggccct gcacaatcac 1320
tacacacaga agtccctgtc tctgagcccc ggcaaatga 1359
<210> 38
<211> 452
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 嵌合抗CD80抗体重链
<400> 38
Glu Val Lys Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Val Phe Ser Ser Asp
20 25 30
Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ser Pro Glu Lys Arg Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Tyr Ile Ser Ser Gly Gly Asp Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Thr Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Ser Ser Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg His Leu Tyr Gly Ser Ser Ser Tyr Tyr Val Met Asp Tyr Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro
115 120 125
Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr
130 135 140
Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr
145 150 155 160
Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro
165 170 175
Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr
180 185 190
Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn
195 200 205
His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser
210 215 220
Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu
225 230 235 240
Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu
245 250 255
Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser
260 265 270
His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu
275 280 285
Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr
290 295 300
Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn
305 310 315 320
Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro
325 330 335
Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln
340 345 350
Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val
355 360 365
Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val
370 375 380
Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro
385 390 395 400
Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr
405 410 415
Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val
420 425 430
Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu
435 440 445
Ser Pro Gly Lys
450
<210> 39
<211> 645
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 嵌合抗CD80抗体轻链
<400> 39
gacatccaga tgacccagtc tccatcctct ctgtctgcca gcctgggcga caccatcacc 60
atcacatgtc acgccagcca gaacatcaac gtgtggctgt cctggtatca gcagaagccc 120
ggcaacatcc ccaagctgct ggtgtacaag gcctccaatc tgcacaccgg cgtgccctct 180
agattctccg gatctggctc tggcaccggc tttaccctga caatcagctc cttgcagccc 240
gaggacattg ccacctacta ctgtcagcag ggccagagct accctctgac ctttggcgct 300
ggcaccaagc tggaactgaa gcggacagtg gccgctcctt ccgtgttcat cttcccacct 360
tccgacgagc agctgaagtc cggcacagct tctgtcgtgt gcctgctgaa caacttctac 420
cctcgggaag ccaaggtgca gtggaaggtg gacaatgccc tgcagtccgg caactcccaa 480
gagtctgtga ccgagcagga ctccaaggac agcacctaca gcctgtcctc cacactgacc 540
ctgtccaagg ccgactacga gaagcacaag gtgtacgcct gcgaagtgac ccatcagggc 600
ctgtctagcc ctgtgaccaa gtctttcaac cggggcgagt gctga 645
<210> 40
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 嵌合抗CD80抗体轻链
<400> 40
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Thr Ile Thr Ile Thr Cys His Ala Ser Gln Asn Ile Asn Val Trp
20 25 30
Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Asn Ile Pro Lys Leu Leu Val
35 40 45
Tyr Lys Ala Ser Asn Leu His Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Gly Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Gln Ser Tyr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 41
<211> 1359
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 嵌合抗CD86抗体重链
<400> 41
gaggttcagt tgcagcagtc tggacccgag ctggtcaagc ctggcacctc cgtgaagatg 60
tcctgcaagg cctccggcta caccttcacc agctacgtga tccactgggt caaagagaag 120
ccaggccagg gccttgagtg gatcggctac atcaacccct accacgacgt gaccaagtac 180
aacgagaagt tcaagggcag agctaccctg acctccgaca agtcctcttc caccgcctac 240
atggaactgt ccagcctgac ctctgaggac tccgccgtgt actactgctc tagacagggc 300
gacccttact ccggcaacta ccagtttacc tactggggcc agggcaccct ggtcacagtt 360
tctgccgctt ccaccaaggg acccagcgtg ttccctctgg ctccttccag caagtctacc 420
tctggcggaa cagctgctct gggctgcctg gtcaaggact actttcctga gcctgtgacc 480
gtgtcctgga actctggcgc tctgacatct ggcgtgcaca cattccctgc tgtgctgcag 540
tcctccggcc tgtactctct gtcctctgtc gtgaccgtgc cttccagctc tctgggaacc 600
cagacctaca tctgcaatgt gaaccacaag ccttccaaca ccaaggtgga caagaaggtg 660
gaacccaagt cctgcgacaa gacccacacc tgtcctccat gtcctgctcc agaactgctc 720
ggcggacctt ccgtgttcct gtttcctcca aagcctaagg acaccctgat gatctctcgg 780
acccctgaag tgacctgcgt ggtggtggat gtgtcccacg aggacccaga agtgaagttc 840
aattggtacg tggacggcgt ggaagtgcac aacgccaaga ccaagcctag agaggaacag 900
tacaactcca cctacagagt ggtgtccgtg ctgaccgtgc tgcaccagga ttggctgaac 960
ggcaaagagt acaagtgcaa ggtgtccaac aaggccctgc ctgctcctat cgaaaagacc 1020
atctccaagg ccaagggcca gcctcgagaa ccccaggttt acaccttgcc tccatctcgg 1080
gacgagctga ccaagaacca ggtgtccctg acctgtctcg tgaagggctt ctacccctcc 1140
gacattgccg tggaatggga gtctaatggc cagccagaga acaactacaa gacaacccct 1200
cctgtgctgg actccgacgg ctcattcttc ctgtactcca agctgacagt ggacaagtcc 1260
agatggcagc agggcaacgt gttctcctgc tccgtgatgc acgaggccct gcacaatcac 1320
tacacacaga agtccctgtc tctgagcccc ggcaaatga 1359
<210> 42
<211> 452
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 嵌合抗CD86抗体重链
<400> 42
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Thr
1 5 10 15
Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Val Ile His Trp Val Lys Glu Lys Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr His Asp Val Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Ala Thr Leu Thr Ser Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ser Arg Gln Gly Asp Pro Tyr Ser Gly Asn Tyr Gln Phe Thr Tyr Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala Ala Ser Thr Lys Gly Pro
115 120 125
Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr
130 135 140
Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr
145 150 155 160
Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro
165 170 175
Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr
180 185 190
Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn
195 200 205
His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser
210 215 220
Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu
225 230 235 240
Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu
245 250 255
Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser
260 265 270
His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu
275 280 285
Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr
290 295 300
Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn
305 310 315 320
Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro
325 330 335
Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln
340 345 350
Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val
355 360 365
Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val
370 375 380
Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro
385 390 395 400
Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr
405 410 415
Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val
420 425 430
Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu
435 440 445
Ser Pro Gly Lys
450
<210> 43
<211> 645
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 嵌合抗CD86抗体轻链
<400> 43
gacatcgtga tgtcccagag ccacaagttc atgtccacct ccgtgggcga cagagtgtct 60
atcgcctgca aggcctctca ggacgtgtcc acagaggtcg tgtggttcca gcagaagcct 120
ggccagtctc ctaagctgct gatctactcc gcctcctaca gatacaccgg cgtgcccgat 180
agattcaccg gctctggctc tggcaccgac tttaccttca ccatcagctc cgtgcaggcc 240
gaggatctgg ccgtgtacta ctgtcagcag cactacagca ccccttacac ctttggcgga 300
ggcaccaagc tggaaatcaa gcggacagtg gccgctcctt ccgtgttcat cttcccacct 360
tccgacgagc agctgaagtc cggcacagct tctgtcgtgt gcctgctgaa caacttctac 420
cctcgggaag ccaaggtgca gtggaaggtg gacaatgccc tgcagtccgg caactcccaa 480
gagtctgtga ccgagcagga ctccaaggac agcacctaca gcctgtcctc cacactgacc 540
ctgtccaagg ccgactacga gaagcacaag gtgtacgcct gcgaagtgac ccatcagggc 600
ctgtctagcc ctgtgaccaa gtctttcaac cggggcgagt gctga 645
<210> 44
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 嵌合抗CD86抗体轻链
<400> 44
Asp Ile Val Met Ser Gln Ser His Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Ser Ile Ala Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Glu
20 25 30
Val Val Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Val Gln Ala
65 70 75 80
Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Ser Thr Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 45
<211> 366
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 嵌合抗CD80抗体重链可变区
<400> 45
gaagtgaagc tgttggagtc tggcggcgga ctggttaagc ctggcggatc tctgaagctg 60
tcttgtgccg cctctggctt cgtgttcagc tccgacgata tgtcctgggt ccgacagtct 120
cctgagaagc ggcttgagtg ggtcgcctac atctcttccg gcggagacta cacctactat 180
cccgacaccg tgaagggcag attcaccatc tccagagaca acgccaagaa caccctgtac 240
ctgcagatgt ccagcctgaa gtctgaggac accgccatgt actactgcgc cagacacctg 300
tacggctcct ccagctacta cgtgatggac tattggggcc agggcacctc tgtcacagtg 360
tcctct 366
<210> 46
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 嵌合抗CD80抗体重链可变区
<400> 46
Glu Val Lys Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Val Phe Ser Ser Asp
20 25 30
Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ser Pro Glu Lys Arg Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Tyr Ile Ser Ser Gly Gly Asp Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Thr Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Ser Ser Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg His Leu Tyr Gly Ser Ser Ser Tyr Tyr Val Met Asp Tyr Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 47
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 嵌合抗CD80抗体轻链可变区
<400> 47
gacatccaga tgacccagtc tccatcctct ctgtctgcca gcctgggcga caccatcacc 60
atcacatgtc acgccagcca gaacatcaac gtgtggctgt cctggtatca gcagaagccc 120
ggcaacatcc ccaagctgct ggtgtacaag gcctccaatc tgcacaccgg cgtgccctct 180
agattctccg gatctggctc tggcaccggc tttaccctga caatcagctc cttgcagccc 240
gaggacattg ccacctacta ctgtcagcag ggccagagct accctctgac ctttggcgct 300
ggcaccaagc tggaactgaa g 321
<210> 48
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 嵌合抗CD80抗体轻链可变区
<400> 48
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Thr Ile Thr Ile Thr Cys His Ala Ser Gln Asn Ile Asn Val Trp
20 25 30
Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Asn Ile Pro Lys Leu Leu Val
35 40 45
Tyr Lys Ala Ser Asn Leu His Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Gly Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Gln Ser Tyr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys
100 105
<210> 49
<211> 366
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 嵌合抗CD86抗体重链可变区
<400> 49
gaggttcagt tgcagcagtc tggacccgag ctggtcaagc ctggcacctc cgtgaagatg 60
tcctgcaagg cctccggcta caccttcacc agctacgtga tccactgggt caaagagaag 120
ccaggccagg gccttgagtg gatcggctac atcaacccct accacgacgt gaccaagtac 180
aacgagaagt tcaagggcag agctaccctg acctccgaca agtcctcttc caccgcctac 240
atggaactgt ccagcctgac ctctgaggac tccgccgtgt actactgctc tagacagggc 300
gacccttact ccggcaacta ccagtttacc tactggggcc agggcaccct ggtcacagtt 360
tctgcc 366
<210> 50
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 嵌合抗CD86抗体重链可变区
<400> 50
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Thr
1 5 10 15
Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Val Ile His Trp Val Lys Glu Lys Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr His Asp Val Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Ala Thr Leu Thr Ser Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ser Arg Gln Gly Asp Pro Tyr Ser Gly Asn Tyr Gln Phe Thr Tyr Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala
115 120
<210> 51
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 嵌合抗CD86抗体轻链可变区
<400> 51
gacatcgtga tgtcccagag ccacaagttc atgtccacct ccgtgggcga cagagtgtct 60
atcgcctgca aggcctctca ggacgtgtcc acagaggtcg tgtggttcca gcagaagcct 120
ggccagtctc ctaagctgct gatctactcc gcctcctaca gatacaccgg cgtgcccgat 180
agattcaccg gctctggctc tggcaccgac tttaccttca ccatcagctc cgtgcaggcc 240
gaggatctgg ccgtgtacta ctgtcagcag cactacagca ccccttacac ctttggcgga 300
ggcaccaagc tggaaatcaa g 321
<210> 52
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 嵌合抗CD86抗体轻链可变区
<400> 52
Asp Ile Val Met Ser Gln Ser His Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Ser Ile Ala Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Glu
20 25 30
Val Val Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Val Gln Ala
65 70 75 80
Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Ser Thr Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 53
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 嵌合抗CD80抗体CDRH1
<400> 53
Ser Asp Asp Met Ser
1 5
<210> 54
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 嵌合抗CD80抗体CDRH2
<400> 54
Tyr Ile Ser Ser Gly Gly Asp Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Thr Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 55
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 嵌合抗CD80抗体CDRH3
<400> 55
His Leu Tyr Gly Ser Ser Ser Tyr Tyr Val Met Asp Tyr
1 5 10
<210> 56
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 嵌合抗CD80抗体CDRL1
<400> 56
His Ala Ser Gln Asn Ile Asn Val Trp Leu Ser
1 5 10
<210> 57
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 嵌合抗CD80抗体CDRL2
<400> 57
Lys Ala Ser Asn Leu His Thr
1 5
<210> 58
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 嵌合抗CD80抗体CDRL3
<400> 58
Gln Gln Gly Gln Ser Tyr Pro Leu Thr
1 5
<210> 59
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 嵌合抗CD86抗体CDRH1
<400> 59
Ser Tyr Val Ile His
1 5
<210> 60
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 嵌合抗CD86抗体CDRH2
<400> 60
Tyr Ile Asn Pro Tyr His Asp Val Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 61
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 嵌合抗CD86抗体CDRH3
<400> 61
Gln Gly Asp Pro Tyr Ser Gly Asn Tyr Gln Phe Thr Tyr
1 5 10
<210> 62
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 嵌合抗CD86抗体CDRL1
<400> 62
Lys Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Glu Val Val
1 5 10
<210> 63
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 嵌合抗CD86抗体CDRL2
<400> 63
Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Thr
1 5
<210> 64
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 嵌合抗CD86抗体CDRL3
<400> 64
Gln Gln His Tyr Ser Thr Pro Tyr Thr
1 5

Claims (41)

1.一种抗体或其变体，其抑制在某种细胞的细胞表面表达的CD80和/或CD86与在其它细胞的细胞表面表达的CD28的相互作用，且实质上不诱导基于免疫激活的细胞因子的产生。
2.根据权利要求1所述的抗体或其变体，其中，所述细胞因子包含干扰素γ。
3.根据权利要求1或2所述的抗体或其变体，其为嵌合抗体。
4.根据权利要求1～3中任一项所述的抗体或其变体，其中，所述抗体的亚类为IgG1。
5.根据权利要求1～4中任一项所述的抗体或其变体，其具有重链和轻链，所述重链具有序列号38或42所述的氨基酸序列，所述轻链具有序列号40或44所述的氨基酸序列。
6.根据权利要求1～5中任一项所述的抗体或其变体，其包含：
(a)VH和VL，所述VH包含：序列号53所述的氨基酸序列的CDRH1、序列号54所述的氨基酸序列的CDRH2、和序列号55所述的氨基酸序列的CDRH3，所述VL包含：序列号56所述的氨基酸序列的CDRL1、序列号57所述的氨基酸序列的CDRL2、和序列号58所述的CDRL3；
或者包含：
(b)VH和VL，所述VH包含：序列号59所述的氨基酸序列的CDRH1、序列号60所述的氨基酸序列的CDRH2、和序列号61所述的氨基酸序列的CDRH3，所述VL包含：序列号62所述的氨基酸序列的CDRL1、序列号63所述的氨基酸序列的CDRL2、和序列号64所述的CDRL3。
7.根据权利要求6所述的抗体或其变体，其包含：
(a)具有序列号46所述的氨基酸序列或其改造序列的VH和具有序列号48所述的氨基酸序列或其改造序列的VL；
或者包含：
(b)具有序列号50所述的氨基酸序列或其改造序列的VH和具有序列号52所述的氨基酸序列或其改造序列的VL。
8.根据权利要求1～7中任一项所述的抗体或其变体，其中，所述抗体的Fc部分为实质上不诱导基于免疫激活的细胞因子的产生的部分。
9.根据权利要求1～3和8中任一项所述的抗体或其变体，其中，所述抗体的亚类为IgG2或IgG4。
10.根据权利要求9所述的抗体或其变体，其中，所述抗体的亚类为IgG4。
11.根据权利要求1～7中任一项所述的抗体或其变体，其中，所述抗体的变体为欠缺了所述抗体的Fc部分的变体。
12.根据权利要求11所述的抗体或其变体，其中，所述抗体的变体为Fab抗体、F(ab’)2抗体、Fab’抗体、Fv抗体或scFv抗体。
13.根据权利要求1～12中任一项所述的抗体或其变体，其具有诱导免疫耐受的能力。
14.根据权利要求1～13中任一项所述的抗体或其变体，其中，表达CD80和/或CD86的所述细胞为抗原呈递细胞，表达CD28的所述其它细胞为T细胞。
15.根据权利要求1～14中任一项所述的抗体，其中，所述抗体或其变体为拮抗性抗CD80抗体、拮抗性抗CD86抗体、拮抗性抗CD28抗体、或针对CD80和CD86的拮抗性双特异性抗体、或它们的变体。
16.根据权利要求1～15中任一项所述的抗体或其变体，其为人源化抗体或人抗体、或它们的变体中的任意者。
17.根据权利要求1～3和8～16中任一项所述的抗体或其变体，其包含人抗体的IgG2或IgG4的Fc部分。
18.根据权利要求1～3和8～17中任一项所述的抗体或其变体，其包含人抗体的IgG4的Fc部分。
19.根据权利要求1～3和8～18中任一项所述的抗体或其变体，其包含：
(a)VH和VL，所述VH包含：序列号25所述的氨基酸序列的CDRH1、序列号26所述的氨基酸序列的CDRH2、和序列号27所述的氨基酸序列的CDRH3；所述VL包含：序列号28所述的氨基酸序列的CDRL1、序列号29所述的氨基酸序列的CDRL2、和序列号30所述的CDRL3；
或者包含：
(b)VH和VL，所述VH包含：序列号31所述的氨基酸序列的CDRH1、序列号32所述的氨基酸序列的CDRH2、和序列号33所述的氨基酸序列的CDRH3，所述VL包含：序列号34所述的氨基酸序列的CDRL1、序列号35所述的氨基酸序列的CDRL2、和序列号36所述的CDRL3。
20.根据权利要求19所述的抗体或其变体，其包含：
(a)具有序列号18所述的氨基酸序列或其改造序列的VH和具有序列号20所述的氨基酸序列或其改造序列的VL；
(b)具有序列号22所述的氨基酸序列或其改造序列的VH和具有序列号24所述的氨基酸序列或其改造序列的VL。
21.一种核酸分子，其编码权利要求1～20中任一项所述的抗体或其变体的氨基酸序列或其一部分。
22.根据权利要求21所述的核酸分子，其含有：
(a)编码VH的多核苷酸和编码VL的多核苷酸，所述编码VH的多核苷酸具有序列号17或序列号45所述的核苷酸序列，所述编码VL的多核苷酸具有序列号19或序列号47所述的核苷酸序列；
或者含有：
(b)编码VH的多核苷酸和编码VL的多核苷酸，所述编码VH的多核苷酸具有序列号21或序列号49所述的核苷酸序列，所述编码VL的多核苷酸具有序列号23或序列号51所述的核苷酸序列。
23.一种载体，其具有权利要求21或权利要求22所述的核酸分子。
24.一种细胞，其包含权利要求21或权利要求22所述的核酸分子或权利要求23所述的载体。
25.一种权利要求1～20中任一项所述的抗体或其变体的制造方法，其包括培养权利要求24的细胞的步骤。
26.一种细胞，其通过权利要求1～20中任一项所述的抗体或其变体诱导了免疫耐受。
27.根据权利要求26所述的细胞，其中，所述免疫耐受是通过将所述抗体或其变体、源自待检体的细胞、和并非源自该待检体的抗原或含有该抗原的物质混合而诱导的。
28.一种用于制作诱导了免疫耐受的细胞的组合物，其包含权利要求1～20中任一项所述的抗体或其变体中的至少1种。
29.根据权利要求28所述的组合物，其包含：拮抗性抗CD80抗体、拮抗性抗CD86抗体、拮抗性抗CD28抗体、或针对CD80和CD86的拮抗性双特异性抗体、或它们的变体、或这些中的任意者的组合。
30.一种用于制造用于处置或预防由于并非源自待检体的抗原而产生的疾病、障碍或状态的细胞的方法，所述方法包括将权利要求1～20中任一项所述的抗体或其变体、源自待检体的细胞、和并非源自该待检体的抗原或含有该抗原的物质混合的步骤。
31.根据权利要求30所述的方法，其中，所述疾病、障碍或状态选自由移植免疫排斥反应、变态反应、自身免疫疾病、移植物抗宿主疾病、以及由iPS细胞或ES细胞和源自这些细胞的细胞、组织或器官的移植引起的免疫排斥反应组成的组。
32.根据权利要求30或31所述的方法，其中，所述含有抗原的物质为细胞。
33.一种细胞，其利用权利要求30～32中任一项所述的方法而制造。
34.根据权利要求33所述的细胞，其包含T细胞。
35.一种细胞治疗剂，其包含通过权利要求1～20中任一项所述的抗体或其变体诱导了免疫耐受的细胞、利用权利要求30或31所述的方法制造的细胞、或者权利要求26、27、33或34所述的细胞。
36.一种用于处置或预防由于并非源自待检体的抗原而产生的疾病、障碍或状态的组合物，其包含通过权利要求1～20中任一项所述的抗体或其变体诱导了免疫耐受的细胞、利用权利要求30或31所述的方法制造的细胞、或者权利要求26、27、33或34所述的细胞。
37.根据权利要求36所述的组合物，其中，所述疾病、障碍或状态选自由移植免疫排斥反应、变态反应、自身免疫疾病、移植物抗宿主疾病、由iPS细胞或ES细胞和源自这些细胞的细胞、组织或器官的移植引起的免疫排斥反应组成的组。
38.根据权利要求37所述的组合物，其特征在于，所述免疫排斥中，接受移植的器官为肾脏、肝脏、心脏、皮肤、肺、胰腺、食道、胃、小肠、大肠、神经、血液、包括免疫系统细胞在内的血细胞、骨、软骨、血管、角膜、眼球或骨髄。
39.一种用于在待检体中处置或预防由于并非源自待检体的抗原而产生的疾病、障碍或状态的方法，其包括如下工序：
对待检体给予有效量的、通过权利要求1～20中任一项所述的抗体或其变体诱导了免疫耐受的细胞、利用权利要求30或31所述的方法制造的细胞、或者权利要求26、27、33或34所述的细胞。
40.根据权利要求39所述的方法，其中，所述疾病、障碍或状态选自由移植免疫排斥反应、变态反应、自身免疫疾病、移植物抗宿主疾病、由iPS细胞或ES细胞和源自这些细胞的细胞、组织或器官的移植引起的免疫排斥反应组成的组。
41.根据权利要求40所述的方法，其特征在于，所述免疫排斥中，接受移植的器官为肾脏、肝脏、心脏、皮肤、肺、胰腺、食道、胃、小肠、大肠、神经、血液、包括免疫系统细胞在内的血细胞、骨、软骨、血管、角膜、眼球或骨髄。
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