JP6999809B2 - 免疫寛容を誘導する抗体、誘導されたリンパ球、また誘導されたリンパ球を用いる細胞治療剤治療法 - Google Patents

Description

本開示は、免疫寛容に関する新規技術に関する。より特定すると、本開示は、免疫寛容を誘導する抗体、誘導されたリンパ球、また誘導されたリンパ球を用いる細胞治療剤治療法に関する。

肝臓移植は、末期の肝不全の患者に対する最終的な処置として広く使用されてきた。毎年、日本国外では２０、０００以上の症例があり、日本では５００を超える症例がある。

移植は、末期の腎臓、心臓、肝臓、膵臓、等の臓器不全に対して選択される主な処置の１つであり、近年における移植拒絶反応の処置の著しい進歩にもかかわらず、免疫抑制レジメン無しには移植の大部分は最終的には拒絶される。連続的な薬物療法に依存する現在の免疫抑制レジメンは、薬物では移植に対して明確に向けられた反応のみならず、全ての免疫反応を抑制するため、臓器移植患者に、感染症や癌に対する感受性の増加を生じやすくしてしまう。

再生医療も注目されるが、誘導性多能性幹細胞（ｉＰＳ細胞）等を用いても、最終的には自己由来の細胞で無い限りは免疫拒絶反応が起こり得るため、免疫寛容の技術は注目されている。

この免疫寛容を誘導する技術として、Ｔ細胞の抗原特異的な不免疫応答（アナジー）の誘導がある。具体的には、抗原提示細胞上のＣＤ８０／ＣＤ８６と未活性化（ナイーブ）Ｔ細胞上のＣＤ２８との相互作用を阻害する抗体を臓器移植患者に直接投与して生体内でドナー抗原特異的アナジーを誘導する技術（特許文献１）や、同じ抗体の存在下でレシピエント細胞と放射線照射したドナー細胞を共培養により体外でドナー抗原特異的アナジー細胞を誘導し、レシピエントに戻す技術が報告されている（特許文献２、特許文献３および非特許文献1～３）。

特表２００２－５０４１２０号公報 特表２００７－１３１５９８号公報 特表２０１６－５２００８１号公報

Ｓａｔｏｒｕ Ｔｏｄｏ ｅｔ ａｌ．Ｈｅｐａｔｏｒｏｇｙ、 ６４（ｖｏｌ．２）、６３２－６４３ （２０１６） Ｔｅｒａｏｋａ Ｓ， Ｋｏｙａｍａ Ｉ， Ｂａｓｈｕｄａ Ｈ， Ｕｃｈｉｄａ Ｋ， Ｔｏｎｓｈｏ Ｍ， ｅｔ ａｌ． （２０１７） Ｊ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ Ｒｅｓ ２（１） ｐ１－８ Ｂａｓｈｕｄａ Ｈ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｃｌｉｎ． Ｉｎｖｅｓｔ． １１５：１８９６－１９０２ （２００５）．

本発明者らは、ＣＤ８０／ＣＤ８６とＣＤ２８との相互作用を阻害するある特定のヒトＦｃ領域を有する抗体を用いた不免疫応答（アナジー）の誘導を試みた結果、マクロファージ、好中球、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞のような免疫系に関与する細胞と結合することにより、これらの細胞を活性化し、免疫反応をつかさどるインターロイキンやインターフェロン（ＩＦＮ）などの液性因子放出を誘導することを見出した。本発明者らは、これらの液性因子の放出は免疫寛容とは逆の好ましくない免疫系の活性化を誘導することから、これらの細胞に結合しないヒトＦｃ領域を有する抗体を用いて不免疫応答（アナジー）の誘導を調整することにより、免疫寛容の効果を改善または免疫寛容の効果の減弱を抑制することができることをを新たに発見した。これにより、本発明者らは、免疫寛容の効果を改善する、または免疫寛容の効果を減弱させない特徴を有する構造をもつ抗体を提供する。

したがって、本開示は以下を提供する。
（１）ある細胞の細胞表面に発現するＣＤ８０および／またはＣＤ８６と、他の細胞の細胞表面に発現するＣＤ２８との相互作用を阻害する抗体またはその改変体であって、免疫活性化によるサイトカインの産生を実質的に誘導しない抗体またはその改変体。
（２）前記サイトカインがインターフェロンγを含む、上記項目に記載の抗体またはその改変体。
（３）キメラ抗体である、上記項目のいずれかに記載の抗体またはその改変体。
（４）前記抗体のサブクラスがＩｇＧ１である、上記項目のいずれかのいずれか一項に記載の抗体またはその改変体。
（５）配列番号３８または４２に記載のアミノ酸配列を有する重鎖、および配列番号４０または４４に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖を有する、上記項目のいずれかに記載の抗体またはその改変体。
（６）（ａ）配列番号５３に記載のアミノ酸配列のＣＤＲＨ１、配列番号５４に記載のアミノ酸配列のＣＤＲＨ２、および配列番号５５に記載のアミノ酸配列のＣＤＲＨ３を含むＶＨ、ならびに配列番号５６に記載のアミノ酸配列のＣＤＲＬ１、配列番号５７に記載のアミノ酸配列のＣＤＲＬ２、および配列番号５８に記載のＣＤＲＬ３を含むＶＬ、または
（ｂ）配列番号５９に記載のアミノ酸配列のＣＤＲＨ１、配列番号６０に記載のアミノ酸配列のＣＤＲＨ２、および配列番号６１に記載のアミノ酸配列のＣＤＲＨ３を含むＶＨ、ならびに配列番号６２に記載のアミノ酸配列のＣＤＲＬ１、配列番号６３に記載のアミノ酸配列のＣＤＲＬ２、および配列番号６４に記載のＣＤＲＬ３を含むＶＬ
を含む、上記項目のいずれかに記載の抗体またはその改変体。
（７）（ａ）配列番号４６に記載のアミノ酸配列またはその改変配列を有するＶＨおよび配列番号４８に記載のアミノ酸配列またはその改変配列を有するＶＬ、あるいは
（ｂ）配列番号５０に記載のアミノ酸配列またはその改変配列を有するＶＨおよび配列番号５２に記載のアミノ酸配列またはその改変配列を有するＶＬ
を含む、上記項目のいずれかに記載の抗体またはその改変体。
（８）前記抗体のＦｃ部分が、免疫活性化によるサイトカインの産生を実質的に誘導しない部分である、上記項目のいずれかに記載の抗体またはその改変体。
（９）前記抗体のサブクラスがＩｇＧ２またはＩｇＧ４である、上記項目のいずれかに記載の抗体またはその改変体。
（１０）前記抗体のサブクラスがＩｇＧ４である、上記項目のいずれかに記載の抗体またはその改変体。
（１１）前記抗体の改変体が、前記抗体のＦｃ部分を欠いている改変体である、上記項目のいずれかに記載の抗体またはその改変体。
（１２）前記抗体の改変体が、Ｆａｂ抗体、Ｆ（ａｂ’）_２抗体、Ｆａｂ’抗体、Ｆｖ抗体またはｓｃＦｖ抗体である、上記項目のいずれかに記載の抗体またはその改変体。
（１３）免疫寛容を誘導する能力を有する、上記項目のいずれかに記載の抗体またはその改変体。
（１４）ＣＤ８０および／またはＣＤ８６を発現する前記細胞が抗原提示細胞であり、ＣＤ２８を発現する前記他の細胞がＴ細胞である、上記項目のいずれかに記載の抗体またはその改変体。
（１５）前記抗体またはその改変体は、アンタゴニスティック抗ＣＤ８０抗体、アンタゴニスティック抗ＣＤ８６抗体、アンタゴニスティック抗ＣＤ２８抗体、またはＣＤ８０およびＣＤ８６に対するアンタゴニスティック二重特異性抗体、あるいはそれらの改変体である、上記項目のいずれかに記載の抗体。
（１６）ヒト化抗体またはヒト抗体、あるいはそれらの改変体のいずれかである、上記項目のいずれかに記載の抗体またはその改変体。
（１７）ヒト抗体のＩｇＧ２またはＩｇＧ４のＦｃ部分を含む、上記項目のいずれかに記載の抗体またはその改変体。
（１８）ヒト抗体のＩｇＧ４のＦｃ部分を含む、上記項目のいずれかに記載の抗体またはその改変体。
（１９）（ａ）配列番号２５に記載のアミノ酸配列のＣＤＲＨ１、配列番号２６に記載のアミノ酸配列のＣＤＲＨ２、および配列番号２７に記載のアミノ酸配列のＣＤＲＨ３を含むＶＨ、ならびに配列番号２８に記載のアミノ酸配列のＣＤＲＬ１、配列番号２９に記載のアミノ酸配列のＣＤＲＬ２、および配列番号３０に記載のＣＤＲＬ３を含むＶＬ、または
（ｂ）配列番号３１に記載のアミノ酸配列のＣＤＲＨ１、配列番号３２に記載のアミノ酸配列のＣＤＲＨ２、および配列番号３３に記載のアミノ酸配列のＣＤＲＨ３を含むＶＨ、ならびに配列番号３４に記載のアミノ酸配列のＣＤＲＬ１、配列番号３５に記載のアミノ酸配列のＣＤＲＬ２、および配列番号３６に記載のＣＤＲＬ３を含むＶＬ
を含む、上記項目のいずれかに記載の抗体またはその改変体。
（２０）（ａ）配列番号１８に記載のアミノ酸配列またはその改変配列を有するＶＨおよび配列番号２０に記載のアミノ酸配列またはその改変配列を有するＶＬ
（ｂ）配列番号２２に記載のアミノ酸配列またはその改変配列を有するＶＨおよび配列番号２４に記載のアミノ酸配列またはその改変配列を有するＶＬ
を含む、上記項目のいずれかに記載の抗体またはその改変体。
（２１）上記項目のいずれかに記載の抗体またはその改変体のアミノ酸配列またはその一部をコードする核酸分子。
（２２）（ａ）配列番号１７もしくは配列番号４５に記載のヌクレオチド配列を有する、ＶＨをコードするポリヌクレオチド、および配列番号１９もしくは配列番号４７に記載のヌクレオチド配列を有する、ＶＬをコードするポリヌクレオチド、または
（ｂ）配列番号２１もしくは配列番号４９に記載のヌクレオチド配列を有する、ＶＨをコードするポリヌクレオチド、および配列番号２３もしくは配列番号５１に記載のヌクレオチド配列を有する、ＶＬをコードするポリヌクレオチド
を含有する、上記項目のいずれかに記載の核酸分子。
（２３）上記項目のいずれかに記載の核酸分子を有するベクター。
（２４）上記項目のいずれかに記載の核酸分子あるいは項目２３に記載のベクターを含む細胞。
（２５）上記項目のいずれかの細胞を培養することを含む、上記項目のいずれかに記載の抗体またはその改変体の製造方法。
（２６）上記項目のいずれかに記載の抗体またはその改変体で免疫寛容を誘導された細胞。
（２７）前記免疫寛容は、前記抗体またはその改変体と、被験体由来の細胞と、該被験体に由来しない抗原または該抗原の含有物とを混合することによって誘導される、上記項目のいずれかに記載の細胞。
（２８）上記項目のいずれかに記載の抗体またはその改変体のうちの少なくとも１つを含む、免疫寛容が誘導された細胞を作製するための組成物。
（２９）アンタゴニスティック抗ＣＤ８０抗体、アンタゴニスティック抗ＣＤ８６抗体、アンタゴニスティック抗ＣＤ２８抗体、もしくはＣＤ８０およびＣＤ８６に対するアンタゴニスティック二重特異性抗体、またはそれらの改変体、あるいはこれらの任意の組み合わせを含む、上記項目のいずれかに記載の組成物。
（３０）上記項目のいずれかに記載の抗体またはその改変体と、被験体由来の細胞と、該被験体に由来しない抗原または該抗原の含有物とを混合するステップを含む、該被験体に由来しない抗原によって生じる疾患、障害または状態を処置または予防するための細胞を製造するための方法。
（３１）前記疾患、障害または状態は、移植免疫拒絶反応、アレルギー、自己免疫疾患、移植片対宿主病、ならびにｉＰＳ細胞またはＥＳ細胞およびそれらの細胞由来の細胞、組織または臓器の移植によって引き起こされる免疫拒絶反応からなる群より選択される、上記項目のいずれかに記載の方法。
（３２）前記抗原の含有物は細胞である、上記項目のいずれかに記載の方法。
（３３）上記項目のいずれかに記載の方法で製造される細胞。
（３４）Ｔ細胞を含む、上記項目のいずれかに記載の細胞。
（３５）上記項目のいずれかに記載の抗体またはその改変体で免疫寛容を誘導された細胞、上記項目のいずれかに記載の方法によって製造される細胞、あるいは上記項目のいずれかに記載の細胞を含む、細胞治療剤。
（３６）上記項目のいずれかに記載の抗体またはその改変体で免疫寛容を誘導された細胞、上記項目のいずれかに記載の方法によって製造される細胞、あるいは上記項目のいずれかに記載の細胞を含む、被験体に由来しない抗原によって生じる疾患、障害または状態を処置または予防するための組成物。
（３７）前記疾患、障害または状態は、移植免疫拒絶反応、アレルギー、自己免疫疾患、移植片対宿主病、ｉＰＳ細胞またはＥＳ細胞およびそれらの細胞由来の細胞、組織または臓器の移植によって引き起こされる免疫拒絶反応からなる群より選択される、上記項目のいずれかに記載の組成物。
（３８）前記免疫拒絶は、移植を受ける臓器が、腎臓、肝臓、心臓、皮膚、肺、すい臓、食道、胃、小腸、大腸、神経、血液、免疫系細胞を含む血球細胞、骨、軟骨、血管、角膜、眼球または骨髄であることを特徴とする、上記項目のいずれかに記載の組成物。
（３９）上記項目のいずれかに記載の抗体またはその改変体で免疫寛容を誘導された細胞、上記項目のいずれかに記載の方法によって製造される細胞、あるいは上記項目のいずれかに記載の細胞の有効量を、被験体に投与する工程を含む、被験体において、該被験体に由来しない抗原によって生じる疾患、障害または状態を処置または予防するための方法。
（４０）前記疾患、障害または状態は、移植免疫拒絶反応、アレルギー、自己免疫疾患、移植片対宿主病、ｉＰＳ細胞またはＥＳ細胞およびそれらの細胞由来の細胞、組織または臓器の移植によって引き起こされる免疫拒絶反応からなる群より選択される、上記項目のいずれかに記載の方法。
（４１）前記免疫拒絶は、移植を受ける臓器が、腎臓、肝臓、心臓、皮膚、肺、すい臓、食道、胃、小腸、大腸、神経、血液、免疫系細胞を含む血球細胞、骨、軟骨、血管、角膜、眼球または骨髄であることを特徴とする、上記項目のいずれかに記載の方法。
（３９Ａ）被験体において、該被験体に由来しない抗原によって生じる疾患、障害または状態を処置または予防するための医薬を製造するための、上記項目のいずれかに記載の抗体またはその改変体で免疫寛容を誘導された細胞、上記項目のいずれかに記載の方法によって製造される細胞、あるいは上記項目のいずれかに記載の細胞の使用。
（４０Ａ）前記疾患、障害または状態は、移植免疫拒絶反応、アレルギー、自己免疫疾患、移植片対宿主病、ｉＰＳ細胞またはＥＳ細胞およびそれらの細胞由来の細胞、組織または臓器の移植によって引き起こされる免疫拒絶反応からなる群より選択される、上記項目のいずれかに記載の使用。
（４１Ａ）前記免疫拒絶は、移植を受ける臓器が、腎臓、肝臓、心臓、皮膚、肺、すい臓、食道、胃、小腸、大腸、神経、血液、免疫系細胞を含む血球細胞、骨、軟骨、血管、角膜、眼球または骨髄であることを特徴とする、上記項目のいずれかに記載の使用。
（３９Ｂ）被験体において、該被験体に由来しない抗原によって生じる疾患、障害または状態を処置または予防するための医薬を製造するための、上記項目のいずれかに記載の抗体またはその改変体で免疫寛容を誘導された細胞、上記項目のいずれかに記載の方法によって製造される細胞、あるいは上記項目のいずれかに記載の細胞。
（４０Ｂ）前記疾患、障害または状態は、移植免疫拒絶反応、アレルギー、自己免疫疾患、移植片対宿主病、ｉＰＳ細胞またはＥＳ細胞およびそれらの細胞由来の細胞、組織または臓器の移植によって引き起こされる免疫拒絶反応からなる群より選択される、上記項目のいずれかに記載の細胞。
（４１Ｂ）前記免疫拒絶は、移植を受ける臓器が、腎臓、肝臓、心臓、皮膚、肺、すい臓、食道、胃、小腸、大腸、神経、血液、免疫系細胞を含む血球細胞、骨、軟骨、血管、角膜、眼球または骨髄であることを特徴とする、上記項目のいずれかに記載の細胞。
本開示は以下をも提供する。
（Ａ１） ある細胞の細胞表面に発現するＣＤ８０および／またはＣＤ８６と、他の細胞の細胞表面に発現するＣＤ２８との相互作用を阻害する抗体であって、免疫活性化によるサイトカインの産生を実質的に誘導しない抗体。
（Ａ２） 前記サイトカインがインターフェロンγを含む、（Ａ１）に記載の抗体。
（Ａ３） 前記抗体のＦｃ部分が、免疫活性化によるサイトカインの産生を実質的に誘導しない部分である、（Ａ１）または（Ａ２）に記載の抗体。
（Ａ４） 前記抗体のサブクラスがＩｇＧ２またはＩｇＧ４である、（Ａ１）～（Ａ３）のいずれか一項に記載の抗体。
（Ａ５） 前記抗体のサブクラスがＩｇＧ４である、（Ａ４）に記載の抗体。
（Ａ６） 前記抗体が、Ｆｃ部分を欠いている、（Ａ１）または（Ａ２）に記載の抗体。
（Ａ７） 前記抗体が、Ｆａｂ抗体、Ｆ（ａｂ’）_２抗体、Ｆａｂ’抗体、Ｆｖ抗体またはｓｃＦｖ抗体である、（Ａ６）に記載の抗体。
（Ａ８） 免疫寛容を誘導する能力を有する、（Ａ１）～（Ａ７）のいずれか一項に記載の抗体。
（Ａ９） ＣＤ８０および／またはＣＤ８６を発現する前記細胞が抗原提示細胞であり、ＣＤ２８を発現する前記他の細胞がＴ細胞である、（Ａ１）～（Ａ８）のいずれか一項に記載の抗体。
（Ａ１０）前記抗体は、アンタゴニスティック抗ＣＤ８０抗体、アンタゴニスティック抗ＣＤ８６抗体、アンタゴニスティック抗ＣＤ２８抗体、またはＣＤ８０およびＣＤ８６に対するアンタゴニスティック二重特異性抗体である、（Ａ１）～（Ａ９）のいずれか一項に記載の抗体。
（Ａ１１） キメラ抗体、ヒト化抗体またはヒト抗体のいずれかである、（Ａ１）～（Ａ１０）のいずれか一項に記載の抗体。
（Ａ１２） ヒト抗体のＩｇＧ２またはＩｇＧ４のＦｃ部分を含む、（Ａ１）～（Ａ１１）のいずれか一項に記載の抗体。
（Ａ１３） ヒト抗体のＩｇＧ４のＦｃ部分を含む、（Ａ１）～（Ａ１２）のいずれか一項に記載の抗体。
（Ａ１４） （ａ）配列番号２５に記載のアミノ酸配列のＣＤＲＨ１、配列番号２６に記載のアミノ酸配列のＣＤＲＨ２、および配列番号２７に記載のアミノ酸配列のＣＤＲＨ３を含むＶＨ、ならびに配列番号２８に記載のアミノ酸配列のＣＤＲＬ１、配列番号２９に記載のアミノ酸配列のＣＤＲＬ２、および配列番号３０に記載のＣＤＲＬ３を含むＶＬ、または
（ｂ）配列番号３１に記載のアミノ酸配列のＣＤＲＨ１、配列番号３２に記載のアミノ酸配列のＣＤＲＨ２、および配列番号３３に記載のアミノ酸配列のＣＤＲＨ３を含むＶＨ、ならびに配列番号３４に記載のアミノ酸配列のＣＤＲＬ１、配列番号３５に記載のアミノ酸配列のＣＤＲＬ２、および配列番号３６に記載のＣＤＲＬ３を含むＶＬ
を含む、（Ａ１）～（Ａ１３）のいずれか一項に記載の抗体。
（Ａ１５） （ａ）配列番号１８に記載のアミノ酸配列またはその改変配列を有するＶＨおよび配列番号２０に記載のアミノ酸配列またはその改変配列を有するＶＬ
（ｂ）配列番号２２に記載のアミノ酸配列またはその改変配列を有するＶＨおよび配列番号２４に記載のアミノ酸配列またはその改変配列を有するＶＬ
を含む、（Ａ１４）に記載の抗体。
（Ａ１６） （Ａ１）～（Ａ１５）のいずれか１項に記載の抗体のアミノ酸配列またはその一部をコードする核酸分子。
（Ａ１７） （ａ）配列番号１７に記載のヌクレオチド配列を有する、ＶＨをコードするポリヌクレオチド、および配列番号１９に記載のヌクレオチド配列を有する、ＶＬをコードするポリヌクレオチド、または
（ｂ）配列番号２１に記載のヌクレオチド配列を有する、ＶＨをコードするポリヌクレオチド、および配列番号２３に記載のヌクレオチド配列を有する、ＶＬをコードするポリヌクレオチド
を含有する、（Ａ１６）に記載の核酸分子。
（Ａ１８） （Ａ１６）または（Ａ１７）に記載の核酸分子を有するベクター。
（Ａ１９） （Ａ１６）または（Ａ１７）に記載の核酸分子あるいは（Ａ１８）に記載のベクターを含む細胞。
（Ａ２０） （Ａ１９）の細胞を培養することを含む、（Ａ１）～（Ａ１５）のいずれか一項に記載の抗体の製造方法。
（Ａ２１） （Ａ１）～（Ａ１５）のいずれか一項に記載の抗体で免疫寛容を誘導された細胞。（Ａ２２） 前記免疫寛容は、前記抗体と、被験体由来の細胞と、該被験体に由来しない抗原または該抗原の含有物とを混合することによって誘導される、（Ａ２１）に記載の細胞。（Ａ２３） （Ａ１）～（Ａ１５）のいずれか一項に記載の抗体のうちの少なくとも１つを含む、免疫寛容が誘導された細胞を作製するための組成物。
（Ａ２４） アンタゴニスティック抗ＣＤ８０抗体、アンタゴニスティック抗ＣＤ８６抗体、アンタゴニスティック抗ＣＤ２８抗体、またはＣＤ８０およびＣＤ８６に対するアンタゴニスティック二重特異性抗体、あるいはこれらの任意の組み合わせを含む、（Ａ２３）に記載の組成物。
（Ａ２５） （Ａ１）～（Ａ１５）のいずれか一項に記載の抗体と、被験体由来の細胞と、該被験体に由来しない抗原または該抗原の含有物とを混合するステップを含む、該被験体に由来しない抗原によって生じる疾患、障害または状態を処置または予防するための細胞を製造するための方法。
（Ａ２６） 前記疾患、障害または状態は、移植免疫拒絶反応、アレルギー、自己免疫疾患、移植片対宿主病、ならびにｉＰＳ細胞またはＥＳ細胞およびそれらの細胞由来の細胞、組織または臓器の移植によって引き起こされる免疫拒絶反応からなる群より選択される、（Ａ２５）に記載の方法。
（Ａ２７） 前記抗原の含有物は細胞である、（Ａ２５）または（Ａ２６）に記載の方法。
（Ａ２８） （Ａ２５）～（Ａ２７）のいずれか一項に記載の方法で製造される細胞。
（Ａ２９） Ｔ細胞を含む、（Ａ２８）に記載の細胞。
（Ａ３０） （Ａ１）～（Ａ１５）のいずれか一項に記載の抗体で免疫寛容を誘導された細胞、（Ａ２５）もしくは（Ａ２６）に記載の方法によって製造される細胞、あるいは（Ａ２１）、（Ａ２２）、（Ａ２８）もしくは（Ａ２９）に記載の細胞を含む、細胞治療剤。
（Ａ３１） （Ａ１）～（Ａ１５）のいずれか一項に記載の抗体で免疫寛容を誘導された細胞、（Ａ２５）もしくは（Ａ２６）に記載の方法によって製造される細胞、あるいは（Ａ２１）、（Ａ２２）、（Ａ２８）もしくは（Ａ２９）に記載の細胞を含む、被験体に由来しない抗原によって生じる疾患、障害または状態を処置または予防するための組成物。
（Ａ３２） 前記疾患、障害または状態は、移植免疫拒絶反応、アレルギー、自己免疫疾患、移植片対宿主病、ｉＰＳ細胞またはＥＳ細胞およびそれらの細胞由来の細胞、組織または臓器の移植によって引き起こされる免疫拒絶反応からなる群より選択される、（Ａ３１）に記載の組成物。
（Ａ３３） 前記免疫拒絶は、移植を受ける臓器が、腎臓、肝臓、心臓、皮膚、肺、すい臓、食道、胃、小腸、大腸、神経、血液、免疫系細胞を含む血球細胞、骨、軟骨、血管、角膜、眼球または骨髄であることを特徴とする、（Ａ３２）に記載の組成物。
（Ａ３４） （Ａ１）～（Ａ１５）のいずれか一項に記載の抗体で免疫寛容を誘導された細胞、（Ａ２３）もしくは（Ａ２４）に記載の方法によって製造される細胞、あるいは（Ａ２１）、（Ａ２２）、（Ａ２８）もしくは（Ａ２９）に記載の細胞の有効量を、被験体に投与する工程を含む、被験体において、該被験体に由来しない抗原によって生じる疾患、障害または状態を処置または予防するための方法。
（Ａ３５） 前記疾患、障害または状態は、移植免疫拒絶反応、アレルギー、自己免疫疾患、移植片対宿主病、ｉＰＳ細胞またはＥＳ細胞およびそれらの細胞由来の細胞、組織または臓器の移植によって引き起こされる免疫拒絶反応からなる群より選択される、（Ａ３４）に記載の方法。
（Ａ３６） 前記免疫拒絶は、移植を受ける臓器が、腎臓、肝臓、心臓、皮膚、肺、すい臓、食道、胃、小腸、大腸、神経、血液、免疫系細胞を含む血球細胞、骨、軟骨、血管、角膜、眼球または骨髄であることを特徴とする、（Ａ３５）に記載の方法。

本開示は、さらに以下の発明にも関する。
（Ｂ１） ヒトＦｃ領域を有する抗体であって、細胞表面に発現するＣＤ８０またはＣＤ８６と、他の細胞表面に発現するＣＤ２８との相互作用を阻害することができ、かつ、ヒトＰＢＭＣによるサイトカイン産生を促進しないことを特徴とする抗体。
（Ｂ２） 抗原提示細胞表面に発現するＣＤ８０またはＣＤ８６とＴ細胞表面に発現するＣＤ２８との相互作用を阻害することができる、（Ｂ１）に記載の抗体。
（Ｂ３） 抗原または抗原を表面に有する細胞と共にＰＢＭＣに接触させることにより、当該抗原に対する免疫寛容を誘導することができる、（Ｂ１）または（Ｂ２）に記載の抗体。
（Ｂ４） サイトカインがＩＦＮγであることを特徴とする、（Ｂ１）～（Ｂ３）のいずれか１項に記載の抗体。
（Ｂ５） 抗ＣＤ８０抗体または抗ＣＤ８６抗体である、（Ｂ１）～（Ｂ４）のいずれか１項に記載の抗体。
（Ｂ６） キメラ抗体、ヒト化抗体、またはヒト抗体である、（Ｂ１）～（Ｂ５）のいずれか１項に記載の抗体。
（Ｂ７） モノクローナル抗体である、（Ｂ１）～（Ｂ６）のいずれか１項に記載の抗体。
（Ｂ８） サブクラスがＩｇＧ２またはＩｇＧ４である、（Ｂ１）～（Ｂ７）のいずれか１項に記載の抗体。
（Ｂ８Ａ） サブクラスがＩｇＧ１である、（Ｂ１）～（Ｂ７）のいずれか１項に記載の抗体。
（Ｂ８Ｂ） 配列番号３８、配列番号４２から選択される１つの配列番号に記載のアミノ酸配列を有する重鎖を有する、（Ｂ８Ａ）に記載の抗体。
（Ｂ８Ｃ） 配列番号３８に記載のアミノ酸配列を有する重鎖、配列番号４０に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖を有するか、または
配列番号４２に記載のアミノ酸配列を有する重鎖、配列番号４４に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖を有する、（Ｂ８Ｂ）に記載の抗体。
（Ｂ８Ｄ） 配列番号５５または配列番号６１に記載のアミノ酸配列のＣＤＲＨ３を有する、（Ｂ１）～（Ｂ７）、（Ｂ８Ａ）～（Ｂ８Ｃ）のいずれか１項に記載の抗体。
（Ｂ８Ｅ） （Ｂ８Ｄ）に記載の抗体であって、
（Ｂｉ）配列番号５３に記載のアミノ酸配列のＣＤＲＨ１、配列番号５４に記載のアミノ酸配列のＣＤＲＨ２、配列番号５５に記載のアミノ酸配列のＣＤＲＨ３を有する抗体、あるいは、
（Ｂｉｉ）配列番号５９に記載のアミノ酸配列のＣＤＲＨ１、配列番号６０に記載のアミノ酸配列のＣＤＲＨ２、配列番号６１に記載のアミノ酸配列のＣＤＲＨ３を有する抗体。
（Ｂ８Ｆ） （Ｂ８Ｅ）の（Ｂｉ）に記載の抗体であって、配列番号５６に記載のアミノ酸配列のＣＤＲＬ１、配列番号５７に記載のアミノ酸配列のＣＤＲＬ２、配列番号５８に記載のアミノ酸配列のＣＤＲＬ３を有する抗体、あるいは、
（Ｂ８Ｅ）の（Ｂｉｉ）に記載の抗体であって、配列番号６２に記載のアミノ酸配列のＣＤＲＬ１、配列番号６３に記載のアミノ酸配列のＣＤＲＬ２、配列番号６４に記載のアミノ酸配列のＣＤＲＬ３を有する抗体。
（Ｂ８Ｇ） 配列番号４６または配列番号５０に記載のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域（ＶＨ）を有する、（Ｂ８Ｄ）に記載の抗体。
（Ｂ８Ｈ） 配列番号４６に記載のアミノ酸配列を有するＶＨを有し、かつ、配列番号４８に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）を有するか、または、配列番号５０に記載のアミノ酸配列を有するＶＨを有し、かつ、配列番号５２に記載のアミノ酸配列を有するＶＬを有する、（Ｂ８Ｇ）に記載の抗体。
（Ｂ８Ｉ） 配列番号３８または配列番号４２から選択される１つの配列番号に記載のアミノ酸配列を有する重鎖を有する、（Ｂ８Ｇ）に記載の抗体。
（Ｂ８Ｊ） 配列番号３８に記載のアミノ酸配列を有する重鎖、配列番号４０に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖を有するか、または
配列番号４２に記載のアミノ酸配列を有する重鎖、配列番号４４に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖を有する、（Ｂ８Ｉ）に記載の抗体。（Ｂ９） 配列番号２７または配列番号３３に記載のアミノ酸配列のＣＤＲＨ３を有する、（Ｂ１）～（Ｂ８）のいずれか１項に記載の抗体。
（Ｂ１０） （Ｂ９）に記載の抗体であって、
（Ｂｉ）配列番号２５に記載のアミノ酸配列のＣＤＲＨ１、配列番号２６に記載のアミノ酸配列のＣＤＲＨ２、配列番号２７に記載のアミノ酸配列のＣＤＲＨ３を有する抗体、あるいは、
（Ｂｉｉ）配列番号３１に記載のアミノ酸配列のＣＤＲＨ１、配列番号３２に記載のアミノ酸配列のＣＤＲＨ２、配列番号３３に記載のアミノ酸配列のＣＤＲＨ３を有する抗体。
（Ｂ１１） （Ｂ１０）の（Ｂｉ）に記載の抗体であって、配列番号２８に記載のアミノ酸配列のＣＤＲＬ１、配列番号２９に記載のアミノ酸配列のＣＤＲＬ２、配列番号３０に記載のアミノ酸配列のＣＤＲＬ３を有する抗体、あるいは、
（Ｂ１０）の（Ｂｉｉ）に記載の抗体であって、配列番号３４に記載のアミノ酸配列のＣＤＲＬ１、配列番号３５に記載のアミノ酸配列のＣＤＲＬ２、配列番号３６に記載のアミノ酸配列のＣＤＲＬ３を有する抗体。
（Ｂ１２） 配列番号１８または配列番号２２に記載のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域（ＶＨ）を有する、（Ｂ９）に記載の抗体。
（Ｂ１３） 配列番号１８に記載のアミノ酸配列を有するＶＨを有し、かつ、配列番号２０に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）を有するか、または、配列番号２２に記載のアミノ酸配列を有するＶＨを有し、かつ、配列番号２４に記載のアミノ酸配列を有するＶＬを有する、（Ｂ１２）に記載の抗体。
（Ｂ１４） 配列番号２、配列番号６、配列番号１０、配列番号１４から選択される１つの配列番号に記載のアミノ酸配列を有する重鎖を有する、（Ｂ１２）に記載の抗体。
（Ｂ１５） 配列番号２に記載のアミノ酸配列を有する重鎖、配列番号４に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖を有するか、
配列番号６に記載のアミノ酸配列を有する重鎖、配列番号８に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖を有するか、
配列番号１０に記載のアミノ酸配列を有する重鎖、配列番号１２に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖を有するか、または
配列番号１４に記載のアミノ酸配列を有する重鎖、配列番号１６に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖を有する、（Ｂ１４）に記載の抗体。
（Ｂ１６） （Ｂ１）～（Ｂ１５）のいずれか１項に記載の抗体を含有する医療用組成物。
（Ｂ１７） 抗ＣＤ８０抗体抗ＣＤ８６抗体を含有する、（Ｂ１６）に記載の医療用組成物。（Ｂ１８） 免疫寛容を誘導するために用いられる、（Ｂ１６）または（Ｂ１７）に記載の医療用組成物。
（Ｂ１９） 臓器移植を受ける患者から採取された細胞の免疫寛容を誘導するために用いられる、（Ｂ１８）に記載の医療用組成物。
（Ｂ２０） 移植を受ける臓器が、心臓、腎臓または肝臓であることを特徴とする（Ｂ１９）または（Ｂ２０）に記載の医療用組成物。
（Ｂ２１） 自己免疫疾患またはアレルギー性疾患の患者において免疫寛容を誘導するために用いられる、（Ｂ１８）に記載の医療用組成物。
（Ｂ２２） （Ｂ１２）～（Ｂ１５）のいずれか１項に記載の抗体のアミノ酸配列をコードする核酸分子。
（Ｂ２３） 配列番号１、５、９、１３から選択されるいずれか１つに記載のヌクレオチド配列を有するＶＨをコードするポリヌクレオチド、配列番号３、７、１１、１５から選択されるいずれか１つに記載のヌクレオチド配列を有するＶＬをコードするポリヌクレオチドを含有する、（Ｂ２２）に記載の核酸分子。
（Ｂ２４） （Ｂ２２）または（Ｂ２３）に記載の核酸分子を有するベクター。
（Ｂ２５） （Ｂ２４）に記載のベクターを有する宿主細胞。
（Ｂ２６） （Ｂ２５）の宿主細胞を培養することを含む、（Ｂ１）～（Ｂ１５）のいずれか１項に記載の抗体の製造方法。
（Ｂ２７） （Ｂ１）～（Ｂ１５）のいずれか１項に記載の抗体と、免疫寛容を誘導しようとする抗原または該抗原を表面に有する細胞と、ＰＢＭＣとを接触させることを含む、ＰＢＭＣの前記抗原に対する免疫寛容の誘導方法。
（Ｂ２８） ｅｘ ｖｉｖｏで行われることを特徴とする、（Ｂ２７）に記載の誘導方法。
（Ｂ２９） ＰＢＭＣが臓器移植を受ける患者から採取された細胞である、（Ｂ２７）または（Ｂ２８）に記載の方法。
（Ｂ３０） ＰＢＭＣが自己免疫疾患またはアレルギー疾患の患者から採取された細胞である、（Ｂ２７）または（Ｂ２８）に記載の方法。
（Ｂ３１） （Ｂ２７）～（Ｂ３０）のいずれか１項に記載の方法により免疫寛容を誘導されたＰＢＭＣ。
（Ｂ３２） （Ｂ３０）に記載のＰＢＭＣを有効性成分として含有する細胞治療剤。
（Ｂ３３） 臓器移植における拒絶反応を抑制するための、（Ｂ３２）に記載の細胞治療剤
（Ｂ３４） 移植を受ける臓器が、腎臓、肝臓、心臓、皮膚、肺、すい臓、食道、胃、小腸、大腸、神経、血液、免疫系細胞を含む血球細胞、骨、軟骨、血管、角膜、眼球または骨髄であることを特徴とする（Ｂ３３）に記載の細胞治療剤。
（Ｂ３５） 自己免疫疾患またはアレルギー性疾患を治療するための、（Ｂ３２）に記載の細胞治療剤。
（Ｂ３６） （Ｂ１）～（Ｂ１５）のいずれか１項に記載の抗体を臓器移植を受ける患者に投与することを含む、臓器移植における拒絶反応の抑制方法。
（Ｂ３７） 移植を受ける臓器が、腎臓、肝臓、心臓、皮膚、肺、すい臓、食道、胃、小腸、大腸、神経、血液、免疫系細胞を含む血球細胞、骨、軟骨、血管、角膜、眼球または骨髄であることを特徴とする（Ｂ３６）に記載の方法。
（Ｂ３７） （Ｂ１）～（Ｂ１５）のいずれか１項に記載の抗体を自己免疫疾患またはアレルギー性疾患の患者に投与することを含む、自己免疫疾患またはアレルギー性疾患の治療方法。
（Ｂ３８） （Ｂ３２）～（Ｂ３４）のいずれか１項に記載の細胞治療剤を臓器移植を受ける患者に投与することを含む、臓器移植における拒絶反応の抑制方法。
（Ｂ３９） （Ｂ３２）または（Ｂ３５）の細胞治療剤を自己免疫疾患またはアレルギー性疾患の患者に投与することを含む、自己免疫疾患またはアレルギー性疾患の治療方法。
（Ｂ４０） 更に、免疫寛容を誘導されたＰＢＭＣを患者に投与することを含む、（Ｂ２７）～（Ｂ３０）のいずれか１項に記載の方法。
（Ｂ４１） 移植される臓器に対する免疫寛容を誘導された患者由来のＰＢＭＣを臓器移植を受ける患者に投与することを含む、（Ｂ４０）に記載の方法。
（Ｂ４２） 自己免疫疾患またはアレルギー性疾患の原因となる抗原に対する免疫寛容を誘導された患者由来のＰＢＭＣを自己免疫疾患またはアレルギー性疾患の患者に投与することを含む、（Ｂ４０）に記載の方法。

本開示において、上記１または複数の特徴は、明示された組み合わせに加え、さらに組み合わせて提供されうることが意図される。本開示のなおさらなる実施形態および利点は、必要に応じて以下の詳細な説明を読んで理解すれば、当業者に認識される。

本開示の抗体は、免疫寛容の誘導能を維持したまま、ＩＦＮγ産生を抑制する。特に、本開示のサブクラスＩｇＧ２またはＩｇＧ４の抗体は、ＩＦＮγを産生することなく、免疫寛容を誘導する細胞を製造することができる。

抗ヒトＣＤ８０および抗ＣＤ８６抗体（ＩｇＧ１）存在下での混合リンパ球反応（^３Ｈ－チミジン取り込み）の結果を示す。Ｎａｉｖｅ；ドナー添加なし、抗体添加なし、Ａｌｌｏ；ドナー添加あり、抗体添加なし。１０，１，０，１は、添加した各抗体の濃度（μｇ／ｍｌ）である。縦軸は、抗体添加なし（Ａｌｌｏ）を基準とした^３Ｈ－チミジン取り込みを示す。 抗ヒトＣＤ８０および抗ＣＤ８６抗体（ＩｇＧ１）存在下での混合リンパ球反応（ＩＦＮγ産生）の結果を示す。縦軸は、培地中の濃度（ｐｇ／ｍｌ）を示す。 抗ヒトＣＤ８０および抗ＣＤ８６抗体（ＩｇＧ１）存在下での混合リンパ球反応（^３Ｈ－チミジン取り込み）の結果を示す。縦軸は、抗体添加なし（Ａｌｌｏ）を基準とした^３Ｈ－チミジン取り込みを示す。 抗ヒトＣＤ８０および抗ＣＤ８６抗体（ＩｇＧ１）存在下での混合リンパ球反応（ＩＦＮγ産生）の結果を示す。上段：ドナー刺激あり、下段：ドナー刺激なし。＊は、５００００ｐｇ／ｍＬ以上を表す。縦軸は、培地中の濃度（ｐｇ／ｍｌ）を示す。 抗ＣＤ８０および抗ＣＤ８６抗体（ＩｇＧ２、ＩｇＧ４）存在下での混合リンパ球反応（^３Ｈ－チミジン取り込み）の結果を示す。縦軸は、抗体添加なし（Ａｌｌｏ）を基準とした^３Ｈ－チミジン取り込みを示す。１０，３，１は、添加した各抗体の濃度（μｇ／ｍｌ）である。 抗ＣＤ８０および抗ＣＤ８６抗体（ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ４）存在下での混合リンパ球反応（ＩＦＮγ産生）の結果を示す。縦軸は、培地中の濃度（ｐｇ／ｍｌ）を示す。 抗ＣＤ８０および抗ＣＤ８６抗体（ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ４）存在下で得られた細胞添加時の混合リンパ球反応（^３Ｈ－チミジン取り込み）の結果を示す。縦軸は、抗体添加なし（Ａｌｌｏ）を基準とした^３Ｈ－チミジン取り込みを示す。１／２，１／４，１／８は、ナイーブなレスポンダー細胞に対する、抗ＣＤ８０および抗ＣＤ８６抗体（ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ４）存在下で得られた細胞の混合比率である。 キメラ抗ＣＤ８０抗体およびキメラ抗ＣＤ８６抗体存在下での混合リンパ球反応（ＩＦＮγ産生）の結果を示す。縦軸は、培地中の濃度（ｐｇ／ｍｌ）を示す。 キメラ抗ＣＤ８０抗体およびキメラ抗ＣＤ８６抗体存在下で得られた細胞添加時の混合リンパ球反応（^３Ｈ－チミジン取り込み）の結果を示す。縦軸は、抗体添加なし（Ａｌｌｏ）を基準とした^３Ｈ－チミジン取り込みを示す。１／２、１／４、１／８、１／１６は、ナイーブなレスポンダー細胞に対する、キメラ抗ＣＤ８０抗体およびキメラ抗ＣＤ８６抗体存在下で得られた細胞の混合比率である。

本明細書において使用される用語は、特に言及しない限り、当該分野で通常用いられる意味で用いられることが理解されるべきである。したがって、他に定義されない限り、本明細書中で使用されるすべての専門用語および科学技術用語は、本開示の属する分野の当業者によって一般的に理解されるのと同じ意味を有する。矛盾する場合、本明細書（定義を含めて）が優先する。

（用語の定義）
本明細書において「約」とは、本明細書で使用される場合、後に続く数値の±１０％を意味する。

本明細書において、「免疫寛容」とは、特定の抗原に対する特異的免疫反応を示さないか、特異的免疫反応が抑制された状態のことである。免疫寛容は、免疫細胞（特にＴ細胞）が特定の抗原に対する特異的免疫反応を示さないか、特異的免疫反応が抑制された状態と、ヒトが特定の抗原に対する特異的免疫反応を示さないか、特異的免疫反応が抑制された状態の両方またはいずれか一方を意味していてもよい。免疫寛容が惹起されることにより、免疫拒絶反応に対する処置が可能になったり、アレルギーに対する治療が可能なったりすることから注目されている。本明細書において、「アナジー」とは、抗原提示細胞から抗原を提示される際に共刺激が入力されないことにより、当該次回に共刺激のある条件で刺激されても反応できなくなった状態を意味する。本明細書において、「免疫寛容を誘導されたＰＢＭＣ（またはＴ細胞）」と「アナジーなＰＢＭＣ（またはＴ細胞）」とは同意義である。

本明細書において、「被験体」とは、飼育動物（例えば、ウシ、ヒツジ、ネコ、イヌ、ウマ）、霊長類（例えば、ヒト、およびサルなどの非ヒト霊長類）、ウサギ、ならびに、げっ歯類（例えば、マウスおよびラット）を含む。特定の実施形態では、被験体は、ヒトである。

本明細書において、「免疫活性化」とは、免疫系の細胞（例えば、マクロファージ、好中球、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、Ｔ細胞、Ｂ細胞など）への刺激、免疫系の細胞の増殖を意味する。免疫系の細胞が活性化されることによりサイトカイン（例えば、ＩＮＦ）の産生や細胞傷害活性が誘導される。

本明細書において、「免疫活性化によるサイトカインの産生を実質的に誘導しない」とは、抗原存在下かつ本開示の抗体非存在下で、被験体に由来する細胞（例えば、マクロファージ、好中球、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、Ｔ細胞、Ｂ細胞など）により産生されるサイトカイン量の約２０％以下のサイトカイン産生をもたらすことをいう。

本明細書において広義の「抗体」は、抗原上の特定のエピトープに特異的に結合することができる分子またはその集団をいう。本明細書における広義の「抗体」は、全長抗体（すなわち、Ｆｃ部分を有する抗体）であっても、Ｆｃ部分を欠いている抗体であってもよい。Ｆｃ部分を欠いている抗体は、目的の抗原に結合することができればよく、そのような抗体としては、例えば、Ｆａｂ抗体、Ｆ（ａｂ’）_２抗体、Ｆａｂ’抗体、Ｆｖ抗体、ｓｃＦｖ抗体などが挙げられるが、これらに限定されない。また抗体は、抗体修飾物または抗体非修飾物を含む。抗体修飾物は、抗体と、例えばポリエチレングリコール等の各種分子が結合していてもよい。抗体修飾物は、抗体に公知の手法を用いて化学的な修飾を施すことによって得ることができる。

本明細書において狭義の「抗体」は、抗原上の特定のエピトープに特異的に結合することができるイムノグロブリンまたはその集団をいい、その改変体を「抗体の改変体」という。本明細書における狭義の「抗体」は、全長抗体（すなわち、Ｆｃ部分を有する抗体）であり得、本明細書における「抗体の改変体」は、上記抗体のＦｃ部分を欠いている改変体であり得る。したがって、本明細書において狭義の抗体は全長抗体とも称され得、抗体の改変体は全長抗体の改変体とも称され得る。Ｆｃ部分を欠いている改変体は、目的の抗原に結合することができればよく、そのような改変体としては、例えば、Ｆａｂ抗体、Ｆ（ａｂ’）_２抗体、Ｆａｂ’抗体、Ｆｖ抗体、ｓｃＦｖ抗体などが挙げられるが、これらに限定されない。また抗体の改変体は、抗体修飾物または抗体非修飾物を含む。抗体修飾物は、抗体と、例えばポリエチレングリコール等の各種分子が結合していてもよい。抗体修飾物は、抗体に公知の手法を用いて化学的な修飾を施すことによって得ることができる。

本開示の一実施形態において「ポリクローナル抗体」は、例えば、抗原に特異的なポリクローナル抗体の産生を誘導するために、哺乳類（例えば、ラット、マウス、ウサギ、ウシ、サル等）、鳥類等に、目的の抗原を含む免疫原を投与することによって生成することが可能である。免疫原の投与は、1つ以上の免疫剤、および所望の場合にはアジュバントの注入をしてもよい。アジュバントは、免疫応答を増加させるために使用されることもあり、フロイントアジュバント（完全または不完全）、ミネラルゲル（水酸化アルミニウム等）、または界面活性物質（リゾレシチン等）等を含んでいてもよい。免疫プロトコールは、当該技術分野で公知であり、選択する宿主生物に合わせて、免疫応答を誘発する任意の方法によって実施される場合がある（タンパク質実験ハンドブック,羊土社(2003):86-91.）。

本開示の一実施形態において「モノクローナル抗体」は、集団を構成する個々の抗体が、少量自然に生じることが可能な突然変異を有する抗体を除いて、実質的に単一のエピトープに対応する同一な抗体である場合を含む。または、集団を構成する個々の抗体が、少量自然に生じることが可能な突然変異を有する抗体を除いて、実質的に同一である抗体であってもよい。モノクローナル抗体は高度に特異的であり、異なるエピトープに対応する異なる抗体を典型的に含むような、および／または同一なエピトープに対応する異なる抗体を典型的に含むような、通常のポリクローナル抗体とは異なる。その特異性に加えて、モノクローナル抗体は、他の免疫グロブリンによって汚染されていないハイブリドーマ培養から合成できる点で有用である。「モノクローナル」という形容は、実質的に均一な抗体集団から得られるという特徴を示していてもよいが、抗体を何か特定の方法で生産しなければならないことを意味するものではない。例えば、モノクローナル抗体は、"Kohler G, Milstein C.,Nature. 1975 Aug 7;256(5517):495-497."に掲載されているようなハイブリドーマ法と同様の方法によって作製してもよい。あるいは、モノクローナル抗体は、米国特許第4816567号に記載されているような組換え法と同様の方法によって作製してもよい。または、モノクローナル抗体は、"Clackson et al., Nature. 1991 Aug 15;352(6336):624-628."、または"Marks et al., J Mol Biol. 1991 Dec 5;222(3):581-597."に記載されているような技術と同様の方法を用いてファージ抗体ライブラリーから単離してもよい。または、"タンパク質実験ハンドブック,羊土社(2003):92-96."に掲載されている方法でよって作製してもよい。

本開示の一実施形態において「キメラ抗体」は、例えば、異種生物間における抗体の可変領域と、抗体の定常領域とを連結したもので、遺伝子組換え技術によって構築できる。マウス-ヒトキメラ抗体は、例えば、"Roguska et al., Proc Natl Acad Sci U S A. 1994Feb 1;91(3):969-973."に記載の方法で作製できる。マウス-ヒトキメラ抗体を作製するための基本的な方法は、例えば、クローン化されたcDNAに存在するマウスリーダー配列および可変領域配列を、哺乳類細胞の発現ベクター中にすでに存在するヒト抗体定常領域をコードする配列に連結する。または、クローン化されたcDNAに存在するマウスリーダー配列および可変領域配列をヒト抗体定常領域をコードする配列に連結した後、哺乳類細胞発現ベクターに連結してもよい。ヒト抗体定常領域の断片は、任意のヒト抗体のH鎖定常領域およびヒト抗体のL鎖定常領域のものとすることができ、例えばヒトH鎖のものについてはCγ1、Cγ2、Cγ3またはCγ4を、L鎖のものについてはCλまたはCκを各々挙げることができる。

本開示の一実施形態において「ヒト化抗体」は、例えば、非ヒト種由来の1つ以上のCDR、およびヒト免疫グロブリン由来のフレームワーク領域（FR）、さらにヒト免疫グロブリン由来の定常領域を有し、所望の抗原に結合する抗体である。抗体のヒト化は、当該技術分野で既知の種々の手法を使用して実施可能である(Almagro et al., Front Biosci. 2008 Jan 1;13:1619-1633.)。例えば、CDRグラフティング（Ozaki et al.,Blood.1999 Jun1;93(11):3922-3930.）、Re-surfacing (Roguska et al., Proc Natl Acad Sci US A.1994Feb 1;91(3):969-973.)、またはFRシャッフル（Damschroder et al., Mol Immunol. 2007Apr;44(11):3049-3060. Epub 2007 Jan 22.）などが挙げられる。抗原結合を改変するために（好ましくは改善するために）、ヒトFR領域のアミノ酸残基は、CDRドナー抗体からの対応する残基と置換してもよい。このFR置換は、当該技術分野で周知の方法によって実施可能である（Riechmann et al., Nature. 1988 Mar 24;332(6162):323-327.）。例えば、CDRとFR残基の相互作用のモデリングによって抗原結合に重要なFR残基を同定してもよい。または、配列比較によって、特定の位置で異常なFR残基を同定してもよい。

本開示の一実施形態において「ヒト抗体」は、例えば、抗体を構成する重鎖の可変領域および定常領域、軽鎖の可変領域および定常領域を含む領域が、ヒトイムノグロブリンをコードする遺伝子に由来する抗体である。主な作製方法としてはヒト抗体作製用トランスジェニックマウス法、ファージディスプレイ法などがある。ヒト抗体作製用トランスジェニックマウス法では、内因性Igをノックアウトしたマウスに機能的なヒトのIg遺伝子を導入すれば、マウス抗体の代わりに多様な抗原結合能を持つヒト抗体が産生される。さらにこのマウスを免疫すればヒトモノクローナル抗体を従来のハイブリドーマ法で得ることが可能である。例えば、"Lonberg et al., Int Rev Immunol.1995;13(1):65-93."に記載の方法で作製できる。ファージディスプレイ法は、典型的には大腸菌ウイルスの一つであるM13やT7などの繊維状ファージのコート蛋白質（g3p、g10p等）のN末端側にファージの感染性を失わないよう外来遺伝子を融合蛋白質として発現させるシステムである。例えば、"Vaughanet al., Nat Biotechnol. 1996 Mar;14(3):309-314."に記載の方法で作製できる。

本明細書において「改変配列」とは、アミノ酸配列の場合、元々の配列に対して、少なくとも１つのアミノ酸残基の改変（置換、付加または欠失）を有する配列をいい、核酸配列の場合、フレームシフトが生じないような、少なくとも１つの塩基の改変（置換、付加または欠失）をいう。改変配列は、元々の配列が有する機能と類似の機能を有しており、例えば、元々の配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％同一である。元々の配列が抗体である場合は、改変配列は、ＣＤＲ内に改変を有さないことが好ましいが、元々の抗体の結合能力または機能を維持する限り、１または複数の改変を有してもよく、好ましくは、３個以下の改変、より好ましくは、２個以下の改変、最も好ましくは１個の改変を有する。ＣＤＲ内に改変を導入する場合、当業者であれば、元々の抗体の結合能力または機能を維持するように、適切な改変を選択することが可能である。

本明細書において、「被験体由来の細胞」とは、本開示の組成物が投与される被験体から得た細胞または該被験体から得た細胞に由来する細胞をいう。本明細書において、「被験体由来の抗原」とは、免疫応答を生じさせる被験体自身が生成する抗原、例えば、自己免疫疾患を有する被験体における自己免疫疾患の原因となる被験体自身が生成する抗原をいう。本明細書において、「被験体に由来しない抗原」とは、免疫応答を生じさせ得る外来の抗原をいう。本明細書において、「被験体に由来しない抗原の含有物（ａｎｔｉｇｅｎ－ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ ｍａｔｅｒｉａｌ）」は、被験体に由来しない抗原を含有する任意の物質または物質の集合物をいい、例えば、被験体に由来しない抗原を発現している細胞、細胞集団、組織等が挙げられる。

本明細書において、「移植免疫拒絶反応」とは、臓器、組織または細胞の移植を受けた被験体において、被験体の免疫系が、移植された臓器、組織または細胞に対して攻撃し、損傷または破壊することをいう。

本明細書において、「アレルギー」とは、被験体に由来しない抗原に対して、免疫応答が過剰に起こる状態をいう。アレルギーを引き起こす被験体に由来しない抗原は、アレルゲンとも呼ばれ、例えば、ダニ抗原、卵白抗原、ミルク抗原、小麦抗原、ピーナッツ抗原、大豆抗原、ソバ抗原、ゴマ抗原、コメ抗原、甲殻類抗原、キウイ抗原、リンゴ抗原、バナナ抗原、モモ抗原、トマト抗原、マグロ抗原、サケ抗原、サバ抗原、牛肉抗原、鶏肉抗原、豚肉抗原、ネコ皮屑抗原、昆虫抗原、花粉抗原、イヌ皮屑抗原、真菌抗原、細菌抗原、ラテックス、ハプテンおよび金属等が挙げられるがこれらに限定されない。

本明細書において、「自己免疫疾患」とは、免疫系が自身の細胞、組織または臓器に対して望ましくない免疫応答を行う任意の疾患をいう。自己免疫疾患としては、例えば、関節リウマチ、多発性硬化症、１型糖尿病、炎症性腸疾患（例えば、クローン病または潰瘍性大腸炎）、全身性エリテマトーデス、乾癬、強皮症、自己免疫性甲状腺疾患、円形脱毛症、グレーブス病、ギラン・バレー症候群、セリアック病、シェーグレン症候群、リウマチ熱、胃炎、自己免疫性萎縮性胃炎、自己免疫性肝炎、膵島炎、卵巣炎、精巣炎、ブドウ膜炎、水晶体起因性ブドウ膜炎、重症筋無力症、原発性粘液水腫、悪性貧血、自己免疫性溶血性貧血、アジソン病、強皮症、グッドパスチャー症候群、腎炎（例えば、糸球体腎炎）、乾癬、尋常性天疱瘡、類天疱瘡、交感性眼炎、特発性血小板減少性紫斑病、特発性白血球減少症、ウェゲナー肉芽腫および多発性／皮膚筋炎が挙げられるが、これらに限定されない。

本明細書において、「移植片対宿主病」とは、移植された臓器、組織または細胞が、免疫応答によって、移植を受けた被験体の細胞、組織または臓器を攻撃し、損傷または破壊することをいう。

本明細書において、「ｉＰＳ細胞もしくはＥＳ細胞またはそれらの細胞に由来する細胞、組織もしくは臓器の移植によって引き起こされる免疫拒絶反応」とは、ｉＰＳ細胞もしくはＥＳ細胞が有する抗原、またはｉＰＳ細胞もしくはＥＳ細胞に由来する細胞、組織もしくは臓器が有する抗原によって生じる免疫拒絶反応をいう。

（好ましい実施形態）
以下に好ましい実施形態の説明を記載するが、この実施形態は本開示の例示であり、本開示の範囲はそのような好ましい実施形態に限定されないことが理解されるべきである。当業者はまた、以下のような好ましい実施例を参考にして、本開示の範囲内にある改変、変更などを容易に行うことができることが理解されるべきである。これらの実施形態について、当業者は適宜、任意の実施形態を組み合わせ得る。

本発明者らは、ＣＤ８０および／またはＣＤ８６とＣＤ２８との相互作用を阻害するヒトＦｃ領域を有する抗体を用いた不免疫応答（アナジー）の誘導を試みた結果、マクロファージ、好中球、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞のような免疫系に関与する細胞を活性化し、免疫反応をつかさどるインターロイキンやインターフェロン（ＩＦＮ）などの液性因子放出を誘導することを見出した。これらの液性因子の放出は免疫寛容とは逆の好ましくない免疫系の活性化を誘導することから、ヒトＦｃ領域を有する抗体を用いた不免疫応答（アナジー）の誘導には、免疫寛容の効果を減弱させるという問題が存在することを新たに発見し、このヒトＦｃ領域を調整することで免疫寛容の効果を改善することができることを見出した。

具体的には、ＣＤ８０および／またはＣＤ８６とＣＤ２８との相互作用を阻害し、免疫寛容を誘導するキメラ抗体は、リコンビナント・ヒトＣＤ８０／ＣＤ８６―Ｆｃ融合タンパクをＢａｌｂ／ｃマウスに免疫感作後、そのマウスの脾臓からｍＲＮＡを抽出し、ｃＤＮＡを合成、ＲＴ－ＰＣＲ法により増幅した遺伝子を用いて構築したファージディズプレイ・ライブラリーより同定したＣＤ８０／ＣＤ８６に親和性の高いＦａｂ抗体を選択した後、ヒトＦｃ部分を遺伝子工学的に付与し作製した。

免疫寛容誘導に使用した抗体に対する拒絶反応を最小化するため、発明者らはキメラ抗体のヒト化をＸｏｍａ社により開発されたＣＤＲグラフティング法により実施し、ヒト化抗体（サブクラス；ＩｇＧ１）を作製した。得られたヒト化抗ＣＤ８０抗体および抗ＣＤ８６抗体（サブクラス；ＩｇＧ１）を、ドナーとレシピエントを想定した２人のボランティアから採取したＰＢＭＣ（末梢血単核細胞）による混合リンパ球反応に添加し、誘導した細胞の同じ抗原刺激時の抑制機能を評価した。具体的には、１人のボランティアからＰＢＭＣを採取し３０Ｇｙ放射線照射し別のボランティアから採取したＰＢＭＣと、ヒト化抗ＣＤ８０／ＣＤ８６抗体の存在下で７日間共培養してドナー抗原特異的アナジー細胞を誘導した。この誘導した細胞を同じレシピエントとドナーの混合リンパ球に一定の割合で添加して、抗原刺激に伴う細胞の分裂増殖の抑制能をトリチウム標識したチミジンの取込量として測定した。その結果、ヒト化抗ＣＤ８０抗体および抗ＣＤ８６抗体は有意にチミジン取込量を抑制し、その抗体を用いて誘導した細胞には抑制機能を新たに獲得していることが確認された。

しかしながら、７日間培養後の上清に存在するＩＦＮγ量を測定した所、非抗原刺激時でも抗体を添加するとＩＦＮγが産生されていた。また、放射線を照射したＰＢＭＣ添加によるアロ抗原刺激時に通常産生されているＩＦＮγは抗体を添加してもほぼ同等量上澄中に存在していることがあきらかになった。

そこで、本発明者らは、免疫寛容の誘導能を維持したまま、ＩＦＮγ産生を誘導しない抗体を得るべく鋭意検討した結果、ヒト化抗ＣＤ８０／ＣＤ８６抗体のサブクラスをＩｇＧ２、またはＩｇＧ４とすることで、ＩＦＮγを産生する事なく、免疫寛容を誘導する細胞を得られることを見い出した。

（抗体）
本開示の一態様において、本開示は、ある細胞の細胞表面に発現するＣＤ８０および／またはＣＤ８６と、他の細胞の細胞表面に発現するＣＤ２８との相互作用を阻害する抗体であって、免疫活性化によるサイトカインの産生を実質的に誘導しない抗体を提供する。本開示の抗体は、抗ＣＤ８０抗体および／または抗ＣＤ８６抗体であってもよく、ＣＤ８０およびＣＤ８６に対する二重特異性抗体であってもよく、抗ＣＤ２８抗体であってもよく、あるいはこれらの混合物であってもよい。いくつかの実施形態において、本開示の抗体のＦｃ部分は、免疫活性化によるサイトカインの産生を実質的に誘導しない部分であり得る。特定の実施形態では、本開示の抗体のサブクラスはＩｇＧ２またはＩｇＧ４である。サブクラスがＩｇＧ２またはＩｇＧ４である本開示の抗体は、驚くべきことに、免疫系の細胞によるサイトカインの産生をまったく誘導しなかった。本開示で使用される抗体は、レセプターを作動することによって望ましくない作用が生じる可能性があるため、アンタゴニスティック抗体であることが好ましい。

いくつかの実施形態において、免疫活性化によるサイトカインの産生を実質的に誘導しない抗体は、本開示の抗体非存在下で、被験体に由来する細胞（例えば、マクロファージ、好中球、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、Ｔ細胞、Ｂ細胞など）により産生されるサイトカイン量の約２０％以下、好ましくは、約１０％以下、より好ましくは、約５％以下、最も好ましくは、約０％のサイトカイン産生をもたらし得る。

本明細書において「アンタゴニスティック（抗体）」とは、アンタゴニスト（抗体）、阻害（抗体）またはブロッキング（抗体）などと同義であり、対象となる機能またはシグナルの働きを阻害し、生体の作用を弱めるまたは不活性化させる機能を有するもの（抗体の場合は、抗体）をいう。

上述のとおり、抗体のサブクラスをＩｇＧ１からＩｇＧ２またはＩｇＧ４に変更するとにより、予想外にサイトカインの産生を誘導が抑制された。理論に束縛されることを望まないが、ＩｇＧサブクラス間では、Ｆｃ部分を介した機能が異なっているため、サイトカイン産生の誘導は、ＩｇＧ１抗体のＦｃ部分に起因していると考えられる。したがって、別の実施形態において、本開示の抗体は、Ｆｃ部分を欠いた抗体であってもよい。そのような抗体としては、例えば、Ｆａｂ抗体、Ｆ（ａｂ’）_２抗体、Ｆａｂ’抗体、Ｆｖ抗体、ｓｃＦｖ抗体などが挙げられるが、これらに限定されない。

いくつかの実施形態において、ＣＤ８０および／またはＣＤ８６を発現する前記細胞が抗原提示細胞であり、ＣＤ２８を発現する前記他の細胞がＴ細胞であり得る。

本開示の別の局面において、本開示の抗体は、細胞表面に発現するＣＤ８０および／またはＣＤ８６と、他の細胞表面に発現するＣＤ２８との相互作用を阻害することができることを特徴とする。候補抗体が細胞表面に発現するＣＤ８０および／またはＣＤ８６と、他の細胞表面に発現するＣＤ２８との相互作用を阻害することができるか否かは、例えば、共免疫沈降法により判定することができる。具体的には、これらのタンパク質を結合させた後、いずれか一方のタンパク質（ｂａｉｔ）に結合する抗体を用いて免疫沈降させ、免疫沈降されたもう一方のタンパク質（Ｐｒｅｙ）測定する。候補抗体を含まないコントロールと比較して候補抗体を添加した場合に免疫沈降物中に含まれるＰｒｅｙが減少した場合には、当該候補抗体はタンパク質間の結合を阻害すると判定される。免疫沈降物中に含まれるＰｒｅｙは、必要に応じてＰｒｅｙを標識化するなどして測定することができる。また、プルダウンアッセイ法を用いて、いずれか一方のタンパク質（ｂａｉｔ）を担体に結合させ、候補抗体の存在下／非存在下でもう一方のタンパク質（Ｐｒｅｙ）を接触させ、担体に結合したＰｒｅｙの量を比較してもよい。

好ましくは、本開示の抗体は抗原提示細胞表面に発現するＣＤ８０および／またはＣＤ８６とＴ細胞表面に発現するＣＤ２８との相互作用を阻害することができる。候補抗体が、抗原提示細胞表面に発現するＣＤ８０および／またはＣＤ８６とＴ細胞表面に発現するＣＤ２８との相互作用を阻害するか否かは、ＣＤ８０および／またはＣＤ８６を発現する抗原提示細胞と、ＣＤ２８を発現するＴ細胞を抗原候補抗体の存在下で接触させて、Ｔ細胞が活性化されない場合には抗原提示細胞表面に発現するＣＤ８０および／またはＣＤ８６とＴ細胞表面に発現するＣＤ２８との相互作用を阻害すると判定することができる。

また、本開示の抗体は、ヒトＰＢＭＣによるサイトカイン産生を促進しないことを特徴とする。候補抗体がヒトＰＢＭＣによるサイトカイン産生を促進しないか否かは、候補抗体と培地中のヒトＰＢＭＣを接触させて、培地中に放出されたサイトカイン量を測定することにより判定することができる。抗体非存在下でヒトＰＢＭＣにより放出されたサイトカイン量と比較して、候補抗体の存在下で放出されたサイトカイン量が少ない／多い該候補抗体は、ヒトＰＢＭＣによるサイトカイン産生を促進しない／すると判定される。サイトカインとしては、ＩＬ－１β、ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－６、ＩＬ－８、ＩＬ－９、ＩＬ－１４、ＩＬ－１５、ＩＬ－１７、ＩＬ－１８などのインターロイキン；ＣＣ、ＣＸＣ、ＣＸ３Ｃ、Ｃなどのケモカイン；ＩＦＮα、ＩＦＮβ、ＩＦＮγなどのインターフェロン；、ＴＮＦαなどの細胞傷害因子を挙げることができる。好ましくは、炎症性サイトカインであり、より好ましくはＩＦＮγである。サイトカインの測定は、市販のキットを用いて行うことができる。例えば、ＩＦＮγはＢｉｏｌｉｇａｎｄｓ社製Ｈｕｍａｎ ＩＦＮγ ＥＬＩＳＡ ＭＡＸＴＭ Ｄｅｌｕｘｅを用いて測定することができる。

好ましくは、本開示の抗体は、抗原または抗原を表面に有する細胞と共にＰＢＭＣに接触させることにより、当該抗原に対する免疫寛容を誘導することができる。候補抗体が、抗原または抗原を表面に有する細胞と共にＰＢＭＣに接触させることにより、当該抗原に対する免疫寛容を誘導することができるか否かは、候補抗体の存在下で抗原または抗原を表面に有する細胞とＰＢＭＣを数日～７日間接触させた後、^３Ｈ－チミジンを添加し、^３Ｈ－チミジン添加の１６～２０時間後に培養液中の^３Ｈ－チミジン除去後、ＰＢＭＣによる^３Ｈ－チミジン取込み量を測定することにより判定することができる。候補抗体を展開してないコントロールと比較して、候補抗体を添加した場合において、ＰＢＭＣによる^３Ｈ－チミジン取り込み量が少ない場合、当該抗体は抗原または抗原を表面に有する細胞と共にＰＢＭＣに接触させることにより、当該抗原に対する免疫寛容を誘導することができると判定することができる。

本明細書において、「免疫寛容」とは、特定の抗原に対する特異的免疫反応を示さないか、特異的免疫反応が抑制された状態のことである。免疫寛容は、免疫細胞（特にＴ細胞）が特定の抗原に対する特異的免疫反応を示さないか、特異的免疫反応が抑制された状態と、ヒトが特定の抗原に対する特異的免疫反応を示さないか、特異的免疫反応が抑制された状態の両方またはいずれか一方を意味していてもよい。本明細書において、「アナジー」とは、抗原提示細胞から抗原を提示される際に共刺激が入力されないことにより、当該次回に共刺激のある条件で刺激されても反応できなくなったＴ細胞を意味する。本明細書において、「免疫寛容を誘導されたＰＢＭＣ（またはＴ細胞）」と「アナジーなＰＢＭＣ（またはＴ細胞）」とは同意義である。

好ましくは、本開示は、抗ＣＤ８０抗体および抗ＣＤ８６抗体に関する。本明細書において、抗ＣＤ８０抗体および抗ＣＤ８６抗体は、それぞれ、ＣＤ８０およびＣＤ８６と特異的に結合する。本明細書において、抗体が「特異的に」結合するとは、その抗体が他のタンパク質やペプチドに対する親和性よりも、目的のタンパク質（ＣＤ８０またはＣＤ８６）に対して実質的に高い親和性で結合することを意味する。ここで、「実質的に高い親和性で結合する」とは、所望の測定装置または方法によって、目的とする特定のタンパク質やペプチドを他のタンパク質やペプチドから区別して検出することが可能な程度に高い親和性を意味する。例えば、実質的に高い親和性は、ＥＬＩＳＡまたはＥＩＡにより検出された強度（例えば、蛍光強度）として、約３倍以上、約４倍以上、約５倍以上、約６倍以上、約７倍以上、約８倍以上、約９倍以上、約１０倍以上、約２０倍以上、約３０倍以上、約４０倍以上、約５０倍以上、約１００倍以上であることを意味していてもよい。

本開示の抗体とＣＤ８０、ＣＤ８６またはＣＤ２８との結合における結合速度定数（Ｋａ１）としては、例えば、約１×１０^４Ｍｓ^－１以上、約１×１０^５Ｍｓ^－１以上、約５×１０^５Ｍｓ^－１以上を挙げることができる。また、本開示の抗体とＣＤ８０、ＣＤ８６またはＣＤ２８との結合における解離速度定数（Ｋｄ１）としては、例えば、約１×１０^－３以下、約１×１０^－４以下を挙げられる。本開示の抗体とＣＤ８０、ＣＤ８６またはＣＤ２８との結合における結合定数（ＫＤ）としては、例えば、約１×１０^－８（Ｍ）以下、約５×１０^－８（Ｍ）以下、約１×１０^－９（Ｍ）以下、約５×１０^－９（Ｍ）以下であり得る。本明細書における抗体の結合速度定数（Ｋａ１）、解離速度定数（Ｋｄ１）、結合定数（ＫＤ）はＢＩＡＣＯＲＥ（ＧＥヘルスケアバイオサイエンス株式会社、ＢＩＡＣＯＲＥ－Ｘ１００）を用いて、製造者提供のマニュアルに従い、ＳＡチップにビオチン化ＣＤ８０、ＣＤ８６もしくはＣＤ２８またはこれらを発現する細胞を固定後、被検抗体を流し、結合速度定数Ｋａ１、解離速度定数Ｋｄ１を測定し、ｂｉｖａｌｅｎｔフィッティングを用いて結合定数ＫＤ値を決定することができる。

本開示の抗体は、ポリクローナル抗体であっても、モノクローナル抗体であってもよいが、好ましくは、モノクローナル抗体である。本開示において、「モノクローナル抗体」は、単一な抗原決定基と反応する、構造が均一な抗体である。更に、本開示の抗体は、非ヒト動物の抗体のアミノ酸配列とヒト由来の抗体のアミノ酸配列を有する抗体、ヒト抗体を包含する。非ヒト動物の抗体としては、例えば、マウス、ラット、ハムスター、モルモット、ラビット、イヌ、サル、ヒツジ、ヤギ、ラクダ、ニワトリ、アヒル等の抗体を挙げることができ、好ましくは、ハイブリドーマを作製することができる動物の抗体であり、より好ましくはマウス、ラットまたはウサギの抗体である。非ヒト動物の抗体のアミノ酸配列とヒト由来の抗体のアミノ酸配列を有する抗体としては、ヒト型キメラ抗体、ヒト化抗体を挙げることができる。上記において、「キメラ抗体」とは、非ヒト動物由来であって目的の抗原（ＣＤ８０、ＣＤ８６またはＣＤ２８）と特異的に結合する抗体の定常領域をヒトの抗体と同じ定常領域を有するように遺伝子工学的に改変した抗体のことであり、好ましくは、ヒト・マウス・キメラ抗体（欧州特許公開公報ＥＰ０１２５０２３参照）である。「ヒト化抗体」とは、非ヒト動物由来であってＣＤ８０、ＣＤ８６またはＣＤ２８と特異的に結合する抗体のＨ鎖とＬ鎖の相補認識領域（ＣＤＲ）以外の一次構造をヒトの抗体に対応する一次構造に遺伝子工学的に改変した抗体のことである。ここで、ＣＤＲとは、Ｋａｂａｔら（“Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ”、Ｋａｂａｔ、Ｅ．ら、Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ、１９８３）またはＣｈｏｔｈｉａら（Ｃｈｏｔｈｉａ＆Ｌｅｓｋ（１９８７）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、１９６：９０１－９１７）のいずれの定義によるものであってもよい。「ヒト抗体」とは、完全にヒト由来の抗体遺伝子の発現産物であるヒト抗体のことであり、例えば、ヒトの抗体産生に関与する遺伝子を導入したトランスジェニック動物を用いて作製したモノクローナル抗体（欧州特許公開公報ＥＰ０５４６０７３参照）等を挙げることができる。例えば、本開示の抗体を治療、予防、または体内に投与することにより用いる診断に使用する場合には、本開示の抗体として好ましくは、ヒト・非ヒト動物のキメラ抗体、ヒト化抗体、またはヒト抗体である。

好ましくは、本開示の抗体のイムノグロブリンクラスは、ＩｇＧである。また、本開示の抗体のサブクラスは、好ましくは、ＩｇＧ２、またはＩｇＧ４である。さらに好ましくは、本開示の抗体のサブクラスは、ＩｇＧ４である。あるいは、好ましくは、本開示の抗体のサブクラスは、ＩｇＧ２である。また、本開示の抗体は、モノスペシフィック、バイスペシフィック（二重特異性抗体）、トリスペシフィック（三重特異性抗体）（例えば、ＷＯ１９９１／００３４９３号）、テトラスペシフィック（四重特異性抗体）、それ以上のマルチスペシフィック（多重抗原特異性）であってもよい。

一態様において、本開示の抗体は、配列番号２７または配列番号３３に記載のアミノ酸配列のＣＤＲＨ３を有する。好ましくは、本開示の抗体は、配列番号２５に記載のアミノ酸配列のＣＤＲＨ１、配列番号２６に記載のアミノ酸配列のＣＤＲＨ２、配列番号２７に記載のアミノ酸配列のＣＤＲＨ３を有するか、あるいは、配列番号３１に記載のアミノ酸配列のＣＤＲＨ１、配列番号３２に記載のアミノ酸配列のＣＤＲＨ２、配列番号３３に記載のアミノ酸配列のＣＤＲＨ３を有する。より好ましくは、本開示の抗体は、配列番号２５に記載のアミノ酸配列のＣＤＲＨ１、配列番号２６に記載のアミノ酸配列のＣＤＲＨ２、配列番号２７に記載のアミノ酸配列のＣＤＲＨ３を有し、かつ、配列番号２８に記載のアミノ酸配列のＣＤＲＬ１、配列番号２９に記載のアミノ酸配列のＣＤＲＬ２、配列番号３０に記載のアミノ酸配列のＣＤＲＬ３を有するか、あるいは、配列番号３１に記載のアミノ酸配列のＣＤＲＨ１、配列番号３２に記載のアミノ酸配列のＣＤＲＨ２、配列番号３３に記載のアミノ酸配列のＣＤＲＨ３を有し、かつ、配列番号３４に記載のアミノ酸配列のＣＤＲＬ１、配列番号３５に記載のアミノ酸配列のＣＤＲＬ２、配列番号３６に記載のアミノ酸配列のＣＤＲＬ３を有する。

一態様において、本開示の抗体は、配列番号３８または４２に記載のアミノ酸配列またはその改変配列を有する重鎖、および配列番号４０または４４に記載のアミノ酸配列またはその改変配列を有する軽鎖を有する抗体はまたはその改変体であり得る。好ましくは、本開示の抗体は、（ａ）配列番号５３に記載のアミノ酸配列またはその改変配列のＣＤＲＨ１、配列番号５４に記載のアミノ酸配列またはその改変配列のＣＤＲＨ２、および配列番号５５に記載のアミノ酸配列またはその改変配列のＣＤＲＨ３を含むＶＨ、ならびに配列番号５６に記載のアミノ酸配列またはその改変配列のＣＤＲＬ１、配列番号５７に記載のアミノ酸配列またはその改変配列のＣＤＲＬ２、および配列番号５８に記載のアミノ酸配列またはその改変配列のＣＤＲＬ３を含むＶＬ、あるいは（ｂ）配列番号５９に記載のアミノ酸配列またはその改変配列のＣＤＲＨ１、配列番号６０に記載のアミノ酸配列またはその改変配列のＣＤＲＨ２、および配列番号６１に記載のアミノ酸配列またはその改変配列のＣＤＲＨ３を含むＶＨ、ならびに配列番号６２に記載のアミノ酸配列またはその改変配列のＣＤＲＬ１、配列番号６３に記載のアミノ酸配列またはその改変配列のＣＤＲＬ２、および配列番号６４に記載のアミノ酸配列またはその改変配列ＣＤＲＬ３を含むＶＬを含む、抗体またはその改変体であり得る。特定の実施形態において、（ａ）配列番号４６に記載のアミノ酸配列またはその改変配列を有するＶＨおよび配列番号４８に記載のアミノ酸配列またはその改変配列を有するＶＬ、あるいは（ｂ）配列番号５０に記載のアミノ酸配列またはその改変配列を有するＶＨおよび配列番号５２に記載のアミノ酸配列またはその改変配列を有するＶＬを含む、抗体またはその改変体であり得る。改変配列は、ＣＤＲ内に改変（アミノ酸の置換、付加または欠失）を含まないのが好ましいが、改変前の抗体の結合能力および／または機能を維持する限り、各ＣＤＲ内に数個（３個以下、２個以下、好ましくは１個以下）の改変を含んでもよい。改変配列は、好ましくは、元々の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有し得る。

別の局面において、本開示の抗体は、配列番号１８または配列番号２２に記載のアミノ酸配列を有するＶＨを有する抗体に関する。好ましくは、本開示の抗体は、配列番号１８に記載のアミノ酸配列を有するＶＨを有し、かつ、配列番号２０に記載のアミノ酸配列を有するＶＬを有するか、または、配列番号２２に記載のアミノ酸配列を有するＶＨを有し、かつ、配列番号２４に記載のアミノ酸配列を有するＶＬを有する。

更に、本開示は、ＶＨが、配列番号１８、または配列番号２２に記載のアミノ酸配列をコードする核酸配列とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸配列によりコードされたアミノ酸配列を有する抗体に関する。好ましくは、本開示は、ＶＨが、配列番号１８記載のアミノ酸配列をコードする核酸配列とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸配列によりコードされたアミノ酸配列を有し、かつ、ＶＬが配列番号２０に記載されたアミノ酸配列をコードする核酸配列とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸配列によりコードされたアミノ酸配列を有する抗体、あるいは、ＶＨが、配列番号２２記載のアミノ酸配列をコードする核酸配列とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸配列によりコードされたアミノ酸配列を有し、かつ、ＶＬが配列番号２４に記載されたアミノ酸配列をコードする核酸配列とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸配列によりコードされたアミノ酸配列を有する抗体に関する。本明細書において、ストリンジェントな条件下でハイブリダイズするとは、当業者に通常用いられるハイブリダイゼーション条件でハイブリダイズすることを意味する。例えば、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ、ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｎｕａｌ、Ｆｏｕｒｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ（２０１２）または、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ、 Ｗｉｌｅｙ Ｏｎｌｉｎｅ Ｌｉｂｒａｒｙ等に記載の方法によりハイブリダイズするか否かを決定することができる。例えば、ハイブリダイズの条件は、６×ＳＳＣ（０．９Ｍ ＮａＣｌ、０．０９Ｍ クエン酸三ナトリウム）または６×ＳＳＰＥ（３Ｍ ＮａＣｌ、０．２Ｍ ＮａＨ２ＰＯ４、２０ｍＭ ＥＤＴＡ・２Ｎａ、ｐＨ７．４）中４２℃でハイブリダイズさせ、その後４２℃で０．５×ＳＳＣで洗浄する条件であってもよい。

また、本開示は、ＶＨが、配列番号１８または配列番号２２のアミノ酸配列と８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を有する抗体を含む。好ましくは、本開示の抗体は、ＶＨが、配列番号１８のアミノ酸配列と８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を有し、かつ、ＶＬが、配列番号２０のアミノ酸配列と８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を有するか、あるいは、ＶＨが、配列番号２２のアミノ酸配列と８０％以上の同一性を有し、かつ、ＶＬが、配列番号２４のアミノ酸配列と８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を有する。アミノ酸配列の同一性は、２種類のタンパク質間において、比較対象とするアミノ酸配列範囲における種類が同一なアミノ酸数の割合（％）を意味し、例えば、ＢＬＡＳＴ、ＦＡＳＴＡ等の公知のプログラムを用いて決定することができる。上述の同一性としては、８０％以上よりも高い同一性であってもよく、例えば、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９８％以上、または９９％以上の同一性であってもよい。

上述のＶＨが、ストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸配列によりコードされたアミノ酸配列を有する抗体、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を有する抗体は、好ましくは、上述のＣＤＲ配列を有する。

より具体的な例として、本開示は配列番号２、配列番号６、配列番号１０、配列番号１４から選択される１つの配列番号に記載のアミノ酸配列を有する重鎖を有する抗体を含む。好ましくは、本開示の抗体は、配列番号２に記載のアミノ酸配列を有する重鎖、配列番号４に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖を有するか、配列番号６に記載のアミノ酸配列を有する重鎖、配列番号８に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖を有するか、配列番号１０に記載のアミノ酸配列を有する重鎖、配列番号１２に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖を有するか、または配列番号１４に記載のアミノ酸配列を有する重鎖、配列番号１６に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖を有する。

好ましい実施形態において、抗体は、（ａ）配列番号２５に記載のアミノ酸配列のＣＤＲＨ１、配列番号２６に記載のアミノ酸配列のＣＤＲＨ２、および配列番号２７に記載のアミノ酸配列のＣＤＲＨ３を含むＶＨ、ならびに配列番号２８に記載のアミノ酸配列のＣＤＲＬ１、配列番号２９に記載のアミノ酸配列のＣＤＲＬ２、および配列番号３０に記載のＣＤＲＬ３を含むＶＬ、または（ｂ）配列番号３１に記載のアミノ酸配列のＣＤＲＨ１、配列番号３２に記載のアミノ酸配列のＣＤＲＨ２、および配列番号３３に記載のアミノ酸配列のＣＤＲＨ３を含むＶＨ、ならびに配列番号３４に記載のアミノ酸配列のＣＤＲＬ１、配列番号３５に記載のアミノ酸配列のＣＤＲＬ２、および配列番号３６に記載のＣＤＲＬ３を含むＶＬを含み得る。別の好ましい実施形態において、抗体は、（ａ）配列番号１８に記載のアミノ酸配列またはその改変配列を有するＶＨおよび配列番号２０に記載のアミノ酸配列またはその改変配列を有するＶＬ（ｂ）配列番号２２に記載のアミノ酸配列またはその改変配列を有するＶＨおよび配列番号２４に記載のアミノ酸配列またはその改変配列を有するＶＬを含み得る。改変配列は、ＣＤＲ内に改変（アミノ酸の置換、付加または欠失）を含まないのが好ましいが、改変前の抗体の結合能力および／または機能を維持する限り、各ＣＤＲ内に数個（３個以下、２個以下、好ましくは１個以下）の改変を含んでもよい。改変配列は、好ましくは、元々の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有し得る。

本開示の抗体は、ＣＤ８０、ＣＤ８６またはＣＤ２８タンパク質若しくはその細胞外ドメイン、あるいはＣＤ８０、ＣＤ８６またはＣＤ２８を発現する細胞を免疫原として、必要に応じて免疫賦活剤（例えば、鉱油若しくはアルミニウム沈殿物と加熱死菌若しくはリポ多糖体、フロインドの完全アジュバント、または、フロインドの不完全アジュバント等）とともに、免疫反応を生じる非ヒト動物、好ましくは、過剰免疫により自己に対して免疫反応（自己抗体）を生じる非ヒト動物（例えば、ＭＲＬ／ｌｐｒマウス）を免疫することにより作製することができる。免疫動物としては、マウス、ラット、ハムスター、モルモット、ラビット、イヌ、サル、ヒツジ、ヤギ、ニワトリ、アヒル等ハイブリドーマを作製することが可能な動物であれば特に限定はないが、好ましくは、マウスまたはラットであり、より好ましくはマウスであり、最も好ましくはＭＲＬ／ｌｐｒマウスである。動物への免疫原の投与は、例えば、１×１０^６個の細胞を１回または適当な間隔をあけて数回（通常１～６週毎に１回の免疫を合計２～１０回程度）、皮下注射、腹腔内注射、静脈内注射、皮内注射、筋肉内注射または足蹠注射により行うことができる。最後の免疫から１～２週間後に、免疫した動物の眼窩または尾静脈から採血を行い、その血清を用いて抗体価の測定を行う。本開示の抗体は、十分な抗体価を示す動物の血清から精製することにより得ることができる。

モノクローナル抗体は、上記方法により免疫した免疫感作動物から得た抗体産生細胞と、骨髄腫系細胞（ミエローマ細胞）を融合することにより得られるハイブリドーマを培養することにより得ることができる。当該融合方法としては、例えば、ミルステインらの方法（Ｇａｌｆｒｅ、Ｇ．＆Ｍｉｌｓｔｅｉｎ、Ｃ．（１９８１）Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ．、７３：３－４６）を挙げることができる。使用する抗体産生細胞は、上記方法により免疫し血清が十分な抗体価を示したマウスまたはラットの脾臓、膵臓、リンパ節、末梢血より採取することができる。使用する骨髄腫系細胞は、例えば、マウス、ラット、モルモット、ハムスター、ラビットまたはヒト等の哺乳動物に由来する細胞であって、ｉｎ ｖｉｔｒｏで増殖可能な細胞であれば特に限定はない。このような細胞としては、例えば、Ｐ３－Ｘ６３Ａｇ８（Ｘ６３）（Ｎａｔｕｒｅ、２５６、４９５、１９７５）、Ｐ３／ＮＳ１／１－Ａｇ４－１（ＮＳ１）（Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、６、２９２、１９７６）、Ｐ３Ｘ６３Ａｇ８Ｕ１（Ｐ３Ｕ１）（Ｃｕｒｒ．Ｔｏｐ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、８１、１、１９７８）、Ｐ３Ｘ６３Ａｇ８．６５３（６５３）（Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１２３、１５４８、１９７９）、Ｓｐ２／０－Ａｇ１４（Ｓｐ２／Ｏ）（Ｎａｔｕｒｅ、２７６、２６９、１９７８）、Ｓｐ２／Ｏ／ＦＯ－２（ＦＯ－２）（Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ、３５、１、１９８０）、ＳＰ２ａｂ等を挙げることができ、好ましくは、抗体産生細胞と同種動物由来の細胞であり、より好ましくは、抗体産生細胞と同系統の動物由来の細胞である。

培養後、培養上清を採取し、ＣＤ８０、ＣＤ８６またはＣＤ２８タンパク質若しくはその細胞外ドメイン、あるいはＣＤ８０、ＣＤ８６またはＣＤ２８を発現する細胞を用いたＥＬＩＳＡにより、ＣＤ８０、ＣＤ８６またはＣＤ２８に結合するクローンを選択する。選択されたクローンについて、限界希釈法を１～５回繰り返すことにより単一細胞化を行うことにより、モノクローナル抗体を産生する細胞を得ることができる。

あるいは、例えば、抗体ファージライブラリーを利用することによりＣＤ８０、ＣＤ８６またはＣＤ２８に結合する抗体を得ることができる（富塚ら、Ｎａｔｕｒｅ Ｇｅｎｅｔ．、１５、１４６－１５６（１９９７））。抗体ファージライブラリーを利用する場合、例えば、ＣＤ８０、ＣＤ８６またはＣＤ２８タンパク質若しくはその細胞外ドメイン、あるいはＣＤ８０、ＣＤ８６またはＣＤ２８を発現する細胞を固相に固定化し、ファージ抗体ライブラリーを反応させて、非結合のファージを洗浄除去した後、結合したファージを回収することにより、所望のクローンを得ることができる（パンニング）。

あるいは、本明細書記載のアミノ酸配列を参照して、目的の抗体またはその免疫反応性断片のアミノ酸配列をデザインし、当該デザインされたアミノ酸配列をコードするＤＮＡを調製して、発現ベクターに組み込み、適当な宿主細胞に当該ベクターを導入して発現させることにより得た抗体から、上述の方法に従ってＣＤ８０、ＣＤ８６またはＣＤ２８への特異性が高い抗体をスクリーニングすることにより得ることができる。

本開示の抗体がヒト型キメラ抗体の場合、非ヒト動物モノクローナル抗体のＶＨＶＬをコードするＤＮＡを調製し、これをヒト免疫グロブリンの定常領域ｃＤＮＡと結合して発現ベクターに組み込み、適当な宿主細胞に当該ベクターを導入して発現させることにより得ることができる（Ｍｏｒｒｉｓｏｎ、Ｓ．Ｌ．ら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、８１、６８５１－６８５５、１９８４）。

本開示の抗体がヒト化抗体の場合は、非ヒト動物モノクローナル抗体のＶＨＶＬのＣＤＲをコードするアミノ酸配列をヒト抗体のＶＨＶＬのＦｒａｍｅｗｏｒｋ Ｒｅｇｉｏｎ（ＦＲ）に移植したＶ領域をコードするＤＮＡを構築し、構築したＤＮＡをヒト由来免疫グロブリンの定常領域ｃＤＮＡと結合して発現ベクターに組み込み、適当な宿主細胞に当該ベクターを導入して発現させることにより得ることができる（Ｌ．Ｒｉｅｏｈｍａｎｎら、Ｎａｔｕｒｅ、３３２、３２３、１９８８：Ｋｅｔｔｌｅｂｏｒｏｕｇｈ、Ｃ．Ａ．ら、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．、４、７７３－７８３、１９９１；Ｃｌａｒｋ Ｍ．、Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｔｏｄａｙ．、２１、３９７－４０２、２０００参照）。非ヒト動物モノクローナル抗体のＣＤＲは、上述の方法によって得られた非ヒト動物モノクローナル抗体のＶＨＶＬをコードするＤＮＡ配列から予測されるアミノ酸配列と、既知の抗体のＶＨＶＬの全アミノ酸配列とを比較して得ることができる。既知の抗体のアミノ酸配列は、例えば、プロテイン・データ・バンク等のデータベースに登録されている抗体のアミノ酸配列より得ることができる。また、ヒト化抗体のＦＲとしては、移植後の抗体が本開示の効果を奏するものであれば特に限定は無いが、好ましくは、ヒト化抗体の可変領域（以下、「Ｖ領域」という）がＣＤＲが由来する非ヒト動物モノクローナル抗体のＶ領域と類似の立体構造となるヒト抗体のＦＲ、または、使用する非ヒト動物モノクローナル抗体のＦＲのアミノ酸配列と相同性が高いヒト抗体ＦＲである。ヒト化抗体において、ヒト抗体に由来するＦＲを構成するアミノ酸の一部（特には、立体的にＣＤＲと近接した位置に存在するアミノ酸）は、必要に応じてＣＤＲが由来する非ヒト動物モノクローナル抗体のＦＲ配列に置換されていてもよい（Ｑｕｅｅｎら、米国特許第５５８５０８９号参照）。使用するヒト化抗体のＶ領域をコードするＤＮＡ配列は、非ヒト動物モノクローナル抗体のＣＤＲのアミノ酸配列とヒト抗体のＦＲのアミノ酸配列を結合したアミノ酸配列に対応するＤＮＡ配列として設計する。ヒト化抗体のＶ領域をコードするＤＮＡは、設計したＤＮＡ配列を基に、当業者周知の方法によって作製することができる。

ヒト抗体は、例えば、ヒト抗体ファージライブラリーまたはヒト抗体産生トランスジェニックマウスを利用することにより得ることができる（富塚ら、Ｎａｔｕｒｅ Ｇｅｎｅｔ．、１５、１４６－１５６（１９９７））。ヒト抗体ファージライブラリーを利用する場合、例えば、ＣＤ８０、ＣＤ８６またはＣＤ２８タンパク質若しくはその細胞外ドメイン、あるいはＣＤ８０、ＣＤ８６またはＣＤ２８を発現する細胞を固相に結合させ、ファージ抗体ライブラリーを反応させて、非結合のファージを洗浄除去した後、結合したファージを回収することにより、所望のクローンを得ることができる（パンニング）。ヒト抗体産生トランスジェニックマウスは、内因性免疫グロブリン（Ｉｇ）遺伝子をノックアウトしたマウスにヒト抗体のＩｇ遺伝子を導入したマウスである。ヒト抗体産生トランスジェニックマウスを免疫動物として、上述の本開示の抗体作製方法に準じて抗原タンパクを免疫することにより、ＣＤ８０、ＣＤ８６またはＣＤ２８を特異的に認識するヒト抗体を得ることができる。

（核酸分子・ベクター・宿主細胞）
別の局面において、本開示は、上述の本開示の抗体をコードするポリヌクレオチドを有する核酸分子に関する。例えば、本開示の核酸分子は、配列番号１７または配列番号２１に記載のヌクレオチド配列をＶＨとして含む。また、別の局面において、本開示の核酸分子は、配列番号１９または配列番号２３に記載のヌクレオチド配列をＶＬとして含む。より具体的な例として、本開示の核酸分子は、配列番号１、５、９、１３から選択されるいずれか１つに記載のヌクレオチド配列を有するＶＨをコードするポリヌクレオチド、配列番号３、７、１１、１５から選択されるいずれか１つに記載のヌクレオチド配列を有するＶＬをコードするポリヌクレオチドを含有する。本開示の核酸分子は、上述の配列番号とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸配列を有していてもよい。更に、本開示は、前記核酸分子を有するベクターを包含する。このようなベクターとしては、抗体の発現に利用可能なベクターであれば特に制限されるものではなく、適切なウイルスベクターまたはプラスミドベクターなどを使用する宿主に応じて選択することができる。別の局面において、本開示は、前記ベクターを含有する宿主細胞に関する。宿主細胞としては、抗体の発現に利用可能な宿主細胞であれば特に制限されるものではなく、哺乳類細胞（マウス細胞、ラット細胞、ウサギ細胞、ヒト細胞など）、酵母、微生物（大腸菌など）を挙げることができる。本開示は、上述の宿主細胞を培養することを含む、本開示の抗体の製造方法を含む。培地培養方法は、採用する宿主細胞に応じて、当業者周知の手段で適宜決定することができる。

本開示の核酸は、上述において得られた抗体を産生するハイブリドーマからクローニングするか、あるいは、上述において得られた抗体またはその免疫反応性断片のアミノ酸配列を基に、適宜核酸配列を設計することにより得ることができる。本開示のベクターは、得られた核酸を適宜発現に適したベクターに組み込むことにより得ることができる。本開示のベクターは、本開示の核酸の他、発現に必要な領域（プロモーター、エンハンサー、ターミネーター等）を含んでいてもよい。また、本開示の宿主細胞は、本開示のベクターを適切な細胞株（例えば、動物細胞、昆虫細胞、植物細胞、酵母、大腸菌等の微生物）に導入することにより得ることができる。

（組成物）
本開示の一態様において、本開示は、本明細書に記載の抗体のうちの少なくとも１つを含む、免疫寛容が誘導された細胞を作製するための組成物を提供する。本開示の一実施形態では、組成物は、抗ＣＤ８０抗体、抗ＣＤ８６抗体、抗ＣＤ２８抗体、またはＣＤ８０およびＣＤ８６に対する二重特異性抗体、あるいはこれらの任意の組み合わせを含み得る。免疫寛容が誘導された細胞を、例えば、臓器移植を受けた被験体に投与することによって、臓器移植による拒絶反応を低減することが可能である。免疫寛容が誘導された細胞は、被験者（レシピエント）またはドナー由来の細胞、あるいは、これらが混合した細胞であってもよい。本開示の組成物は、驚くべきことに、サイトカイン産生細胞（例えば、マクロファージ、好中球、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞）によるサイトカインの放出を実質的に誘導しない。サイトカインは免疫寛容を減弱するため、サイトカインの放出が誘導されないことは有利である。

別の局面において、本開示は本明細書に記載の抗体を含有する医療用組成物に関する。一例において、本開示の医療用組成物は、抗ＣＤ８０抗体、抗ＣＤ８６抗体、抗ＣＤ２８抗体、またはＣＤ８０およびＣＤ８６に対する二重特異性抗体を含む。本開示の医療用組成物は、免疫寛容を誘導するために用いることができる。本明細書全体において、「免疫寛容を誘導するため」とは、例えば、移植された臓器に対する免疫寛容を誘導するため、すなわち、臓器移植における拒絶反応を抑制するため、自己免疫疾患またはアレルギー性疾患の患者において、免疫源となる原因物質に対する過剰な免疫反応を抑制し、これらの疾患の症状緩和または治療のために用いる場合を含む。別の実施形態では、本開示の医薬組成物は、免疫寛容を誘導された細胞を作製するために使用される。

本明細書における「臓器移植」において、移植を受ける「臓器」としては、特に制限するものでは例として、心臓、腎臓、肺、すい臓、食道、胃、小腸、大腸、皮膚、神経、血液、免疫系細胞を含む血球細胞、骨、軟骨、血管、角膜、眼球、骨髄または肝臓を含む。また、本明細書において「臓器」は、臓器の全部や臓器の塊の他、臓器の一部または臓器を構成する細胞を含む。例えば、心筋細胞や角膜細胞などをも移植臓器に含まれる。また、臓器移植とは、他人の臓器を患者に移植する場合の他、再生医療等において他家由来幹細胞を用いて作製された臓器を患者に移植する場合も含む。

本開示の抗体は、必要により精製した後、常法に従って製剤化することにより、医療用組成物として用いることができる。また、本開示は、免疫寛容を誘導するための医療用組成物を製造するための、本開示の抗体の使用を含む。あるいは、本開示は、本開示の抗体の免疫寛容を誘導するための使用を含む。更に、本開示は、本開示の抗体を添加または投与することを含む、免疫寛容を誘導する方法に関する。例えば、本開示は、本開示の抗体を臓器移植を受ける患者に投与することを含む、臓器移植における拒絶反応の抑制方法、本開示の抗体を自己免疫疾患またはアレルギー性疾患の患者に投与することを含む、自己免疫疾患またはアレルギー性疾患の治療方法、本開示の抗体をiPS細胞もしくはES細胞、またはこれらの細胞由来の細胞、組織、臓器移植を受ける患者に投与することを含む、iPS細胞もしくはES細胞、またはこれらの細胞由来の（から分化した）細胞、組織、臓器移植における拒絶反応の抑制方法、を含む。

ｉＰＳ細胞またはＥＳ細胞に由来する（から分化した）細胞、組織もしくは臓器としては、例えば、神経細胞または組織、角膜細胞または組織、心筋細胞または組織、肝臓または組織、軟骨細胞または組織、皮膚細胞または組織、腎臓または組織、などが挙げられるが、これらに限定されない。好ましい実施形態において、ｉＰＳ細胞またはＥＳ細胞に由来する（から分化した）細胞、組織もしくは臓器としては、神経細胞または組織、心筋細胞または組織、軟骨細胞または組織および皮膚細胞または組織が挙げられる。

本開示の医療用組成物は、患者に直接投与することにより使用することもできるし、免疫寛容を誘導しようとする患者から採取したＰＢＭＣに、免疫寛容を誘導する目的の抗原と共にｅｘ ｖｉｖｏで接触させることにより、当該抗原に対してアナジーである免疫細胞を作製することにより使用することもできる。

本開示の医療用組成物を患者に直接投与する場合、経口または非経口のいかなる製剤を採用してもよい。非経口投与のための組成物としては、例えば、点眼、注射剤、点鼻剤、坐剤、貼布剤、軟膏等を挙げることができる。好ましくは、注射剤である。本開示の医療用組成物の剤形は、例えば、液剤または凍結乾燥製剤を挙げることができる。本開示の医療用組成物を注射剤として使用する場合、必要に応じて、プロピレングリコール、エチレンジアミン等の溶解補助剤、リン酸塩等の緩衝材、塩化ナトリウム、グリセリン等の等張化剤、亜硫酸塩等の安定剤、フェノール等の保存剤、リドカイン等の無痛化剤等の添加物（「医薬品添加物事典」薬事日報社、「Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ Ｆｉｆｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ」ＡＰｈＡ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ社参照）を加えることができる。また、本開示の医療用組成物を注射剤として使用する場合、保存容器としては、アンプル、バイアル、プレフィルドシリンジ、ペン型注射器用カートリッジ、点滴用バッグ等を挙げることができる。

例えば、本開示の医療用組成物（治療薬若しくは予防薬）は、注射剤として利用することができ、静脈注射剤、皮下注射剤、皮内注射剤、筋肉注射剤、硝子体内注射剤、点滴注射剤などの剤形を包含する。このような注射剤は、公知の方法に従って、例えば、上記抗体等を通常注射剤に用いられる無菌の水性もしくは油性液に溶解、懸濁または乳化することによって調製することができる。注射用の水性液としては、例えば、生理食塩水、ブドウ糖、ショ糖、マンニトール、その他の補助薬を含む等張液等が用いることができ、適当な溶解補助剤、例えば、アルコール（例、エタノール）、ポリアルコール（例、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール）、非イオン界面活性剤〔例、ポリソルベート８０、ポリソルベート２０、ＨＣＯ－５０（ｐｏｌｙｏｘｙｅｔｈｙｌｅｎｅ（５０ｍｏｌ）ａｄｄｕｃｔ ｏｆ ｈｙｄｒｏｇｅｎａｔｅｄ ｃａｓｔｏｒ ｏｉｌ）〕等と併用することができる。油性液としては、例えば、ゴマ油、大豆油などを用いることができ、溶解補助剤として安息香酸ベンジル、ベンジルアルコール等と併用することができる。調製された注射液は、通常、適当なアンプル、バイアル、シリンジに充填される。また、本開示の抗体またはその免疫反応性断片に適当な賦形剤を添加することにより、凍結乾燥製剤を調製し、用時、注射用水、生理食塩水などで溶解して注射液とすることもできる。なお、一般的に抗体などのタンパク質の経口投与は消化器により分解されるため困難とされるが、抗体断片や修飾した抗体断片と剤形の創意工夫により、経口投与の可能性もある。経口投与の製剤としては、例えば、カプセル剤、錠剤、シロップ剤、顆粒剤等を挙げることができる。

本開示の医療用組成物は、活性成分の投与量に適合するような投薬単位の剤形に調製されることが好適である。このような投薬単位の剤形としては、注射剤（アンプル、バイアル、プレフィルドシリンジ）が例示され、投薬単位剤形当たり通常５～５００ｍｇ、５～１００ｍｇ、１０～２５０ｍｇの本開示の抗体またはその免疫反応性断片を含有していても良い。

本開示の医療用組成物の投与は、局所的であってもよく、全身的であってもよい。投与方法には特に制限はなく、上述のとおり非経口的または経口的に投与される。非経口的投与経路としては、眼内、皮下、腹腔内、血中（静脈内、若しくは動脈内）または脊髄液への注射または点滴等が挙げられ、好ましくは血中への投与である。本開示の医療用組成物（治療薬若しくは予防薬）は、一時的に投与してもよいし、持続的または断続的に投与してもよい。例えば、投与は、１分間～２週間の持続投与することもできる。

本開示の医療用組成物の投与量は、所望の治療効果または予防効果が得られる投与量であれば特に限定は無く、症状、性別、年齢等により適宜決定することができる。本開示の医療用組成物の投与量は、例えば、免疫寛容の誘導の程度を指標として決定することができる。例えば、本開示の医療用組成物の有効成分の１回量として、通常０．０１～２０ｍｇ／ｋｇ体重程度、好ましくは０．１～１０ｍｇ／ｋｇ体重程度、さらに好ましくは０．１～５ｍｇ／ｋｇ体重程度を、１月１～１０回程度、好ましくは１月１～５回程度、静脈注射により投与するのが好都合である。他の非経口投与経口投与の場合もこれに準ずる量を投与することができる。症状が特に重い場合には、その症状に応じて増量または投与回数を増加させてもよい。

本開示の医療用組成物を、免疫寛容を誘導しようとする患者から採取したＰＢＭＣに、免疫寛容を誘導する目的の抗原と共にｅｘ ｖｉｖｏで接触させることにより、当該抗原に対してアナジーである免疫細胞を作製することにより使用する場合、上述の投与用の組成物に準じて液状、粉末状、タブレット状、ゲル状、顆粒状などの形態で調製することができる。

（免疫寛容誘導細胞）
別の局面において、本明細書に記載の抗体で免疫寛容を誘導された細胞を提供する。免疫寛容は、被験体由来の細胞と、被験体に由来しない抗原または抗原の含有物とを混合することによって誘導され得る。さらなる本開示の局面において、本開示は、本明細書に記載の抗体と、被験体由来の細胞と、被験体に由来しない抗原または抗原の含有物（例えば、細胞）とを混合するステップを含む、被験体に由来しない抗原によって生じる疾患、障害または状態を処置または予防するための細胞を製造するための方法を提供する。疾患、障害または状態は、移植免疫拒絶反応、アレルギー、自己免疫疾患、移植片対宿主病、ｉＰＳ細胞またはＥＳ細胞およびそれらの細胞に由来する細胞、組織または臓器の移植によって引き起こされる免疫拒絶反応からなる群より選択され得る。

本開示が対象とする疾患等が移植免疫拒絶反応である実施形態において、アナジー細胞は、上記抗体と、レシピエント由来の細胞（ＰＢＭＣまたは脾臓細胞）と、ドナー由来の抗原またはドナー由来の抗原の含有物とを混合することによって誘導され得る。ナー由来の抗原の含有物は、ＰＢＭＣ、脾臓細胞または移植される臓器由来の細胞であり得る。

本開示が対象とする疾患等がアレルギーである実施形態において、アナジー細胞は、上記抗体と、被験体由来の細胞（ＰＢＭＣまたは脾臓細胞）と、アレルギーを引き起こす被験体に由来しない抗原とを混合することによって誘導され得る。

本開示が対象とする疾患等が自己免疫疾患である実施形態において、アナジー細胞は、上記抗体と、被験体由来の細胞（ＰＢＭＣまたは脾臓細胞）と、自己免疫疾患の原因となる被験体由来の抗原とを混合することによって誘導され得る。

本開示が対象とする疾患等が移植片対宿主病である実施形態において、アナジー細胞は、上記抗体と、移植片を提供するドナーのＰＢＭＣまたは脾臓細胞と、レシピエント由来の抗原または該抗原の含有物とを混合することによって誘導され得る。レシピエント由来の抗原の含有物は、ＰＢＭＣ、脾臓細胞または臓器が移植される部位の周辺の細胞もしくはそれに由来する細胞であり得る。

本開示が対象とする疾患等がｉＰＳ細胞またはＥＳ細胞およびそれらの細胞に由来する細胞、組織または臓器の移植によって引き起こされる免疫拒絶反応である実施形態において、アナジー細胞は、上記抗体と、被験体由来の細胞（ＰＢＭＣまたは脾臓細胞）と、ｉＰＳ細胞またはＥＳ細胞から分化させた移植に用いる細胞とを混合することによって誘導され得る。

以下に本開示による疾患等の治療例を示すが、以下に限定されるものではない。

（アレルギーおよび自己免疫疾患）
アレルギーおよび自己免疫疾患に関しては、患者の末梢血から得たマクロファージを慣例的な方法により抗原提示能の高い樹状細胞（マクロファージ由来樹状細胞）へと分化させ、放射線（γ線）照射後のこの細胞にアレルギーや自己免疫疾患における過剰反応の原因となっている抗原を提示させ、同じ患者末梢血から得たＴ細胞群と、抗ＣＤ８０抗体および／または抗ＣＤ８６抗体の存在下で１～２週間共培養し、アレルギーや自己免疫疾患の原因となっている抗原に特異的なアナジー細胞を得る。このアナジー細胞を患者に投与することで、アレルギーや自己免疫疾患の原因となっている抗原に特異的な免疫寛容を誘導し、アレルギーおよび自己免疫疾患の予防および治療に用いる。予防的療法であるか治療であるか、さらに症状の強弱等の諸条件により、投与回数は複数回となることもある。

（移植片対宿主病）
移植片対宿主病においては、移植免疫拒絶反応に対する治療とは対照的に、移植片を提供するドナーのＰＢＭＣまたはＴ細胞等の移植片対宿主病の原因となりうる細胞を、放射線（γ線）照射した宿主由来のＰＢＭＣまたはそれ以外の細胞と抗ＣＤ８０抗体および／または抗ＣＤ８６抗体の存在下で１～２週間共培養し、宿主に特異的なアナジー細胞を得る。このアナジー細胞を宿主に投与することで、移植片対宿主病の原因となっている移植片による宿主への反応を抑制し（免疫寛容を誘導し）移植片対宿主病を予防および治療する。予防的療法であるか治療であるか、さらに移植する組織やその大きさ、症状の強弱等の諸条件により、投与回数は複数回となることもある。

（ｉＰＳ細胞またはＥＳ細胞およびそれらの細胞に由来する細胞、組織または臓器の移植によって引き起こされる免疫拒絶反応）
ｉＰＳ細胞またはＥＳ細胞を用いた治療への応用においては、ｉＰＳ細胞またはＥＳ細胞から分化させた移植に用いる細胞または樹状細胞に放射線（γ線）を照射し、この細胞と移植を受ける患者のＰＢＭＣまたはＴ細胞群を抗ＣＤ８０抗体および／または抗ＣＤ８６抗体の存在下で１～２週間共培養し、ｉＰＳ細胞またはＥＳ細胞から分化させた細胞に特異的なアナジー細胞を得る。このアナジー細胞を宿主に投与することで、ｉＰＳ細胞またはＥＳ細胞に由来する移植した細胞、組織、および臓器に特異的な免疫寛容を誘導し、それらへの拒絶反応を予防および治療する。予防的療法であるか治療であるか、さらに移植する組織やその大きさ、症状の強弱の諸条件により、投与回数は複数回となることもある。

具体的な実施形態において、本開示は、上記抗体（上記抗体を含有する組成物を含む、以下同様）と、免疫寛容を誘導しようとする抗原または該抗原を表面に有する細胞と、ＰＢＭＣとを接触させることを含む、患者のＰＢＭＣの前記抗原に対するアナジーを誘導する方法に関する。本開示の免疫寛容を誘導する方法は、ｅｘ ｖｉｖｏで行われる。例えば、臓器移植において移植を受ける患者の移植臓器に対する拒絶反応を抑制することを目的とする場合、ＰＢＭＣは臓器移植を受ける患者から採取された細胞である。また、ＰＢＭＣが自己免疫疾患またはアレルギー疾患の治療または改善を目的とする場合、ＰＢＭＣは当該患者から採取された細胞である。

例えば、臓器移植の拒絶反応を抑制するための免疫寛容の誘導は、以下の方法により行うことができる。臓器移植を受ける患者（レシピエント）ＰＢＭＣと臓器を提供する対象者（ドナー）ＰＢＭＣを調製し、ドナーＰＢＭＣに放射線３０Ｇｙを照射する。レシピエントＰＢＭＣと１：１で混合して、本開示の抗体（好ましくは、抗ヒトＣＤ８０抗体および抗ヒトＣＤ８６抗体の組み合わせ）を添加する。ＰＢＭＣ用培地中、３７℃、５％ＣＯ_２インキュベーター内で３～７日培養することで、ドナーに対してアナジーなレシピエントＰＢＭＣを調製することができる。

また、例えば、自己免疫疾患またはアレルギー疾患の治療または改善のための免疫寛容の誘導は、以下の方法により行うことができる。患者ＰＢＭＣを調製し、自己免疫疾患またはアレルギー疾患の原因となる抗原と混合して、本開示の抗体（好ましくは、抗ヒトＣＤ８０抗体および抗ヒトＣＤ８６抗体の組み合わせ）を添加する。ＰＢＭＣ用培地中、３７℃、５％ＣＯ_２インキュベーター内で３～７日培養することで、前記抗原に対してアナジーなレシピエントＰＢＭＣを調製することができる。

本開示は、上記方法によりアナジーを誘導された細胞（例えば、ＰＢＭＣ）を含む。アナジーを誘導された細胞（例えば、ＰＢＭＣ）は、患者に投与することにより、患者における免疫寛容を誘導することができることから、アナジーを誘導された細胞（例えば、ＰＢＭＣ）は細胞治療剤とすることができる。よって、本開示は、上記方法によりアナジーを誘導された細胞（例えば、ＰＢＭＣ）を有効性成分として含有する細胞治療剤、好ましくは、移植臓器に対するアナジーを誘導された移植を受ける患者の細胞（例えば、ＰＢＭＣ）を有効性成分として含有する、臓器移植における拒絶反応を抑制するための細胞治療剤、あるいは、過剰に免疫反応することで自己免疫疾患またはアレルギー性疾患の原因となっている抗原に対するアナジーを誘導された細胞（例えば、ＰＢＭＣ）を有効性成分として含有する、自己免疫疾患またはアレルギー性疾患を治療するための細胞治療剤、iPS細胞やES細胞やそれらの細胞に由来する細胞、組織または臓器の移植における拒絶反応を抑制するための細胞治療剤に関する。そのような拒絶反応としては、移植片対宿主病が例示される。

本開示の細胞治療剤は、患者に投与することにより、患者における免疫寛容を誘導することができる。例えば、本開示は、移植臓器に対するアナジーを誘導された移植を受ける患者の細胞（例えば、ＰＢＭＣ）を有効性成分として含有する、臓器移植における拒絶反応を抑制するための細胞治療剤を臓器移植を受ける患者に投与することを含む、臓器移植における拒絶反応の抑制方法を含む。また、本開示は、過剰に免疫反応することで自己免疫疾患またはアレルギー性疾患の原因となっている抗原に対するアナジーを誘導された細胞（例えば、ＰＢＭＣ）を有効性成分として含有する、自己免疫疾患またはアレルギー性疾患を治療するための細胞治療剤を自己免疫疾患またはアレルギー性疾患の患者に投与することを含む、自己免疫疾患またはアレルギー性疾患の治療方法を含む。また本開示は、移植するiPS細胞もしくはES細胞、またはそれらの細胞由来の細胞、組織または臓器に対してアナジーが誘導された、移植を受ける患者の細胞（例えば、ＰＢＭＣ）を有効性成分として含有する、iPS細胞やES細胞やそれらの細胞に由来する細胞、組織または臓器の移植における拒絶反応を抑制するための細胞治療剤を、臓器移植を受ける患者に投与することを含む、iPS細胞やES細胞やそれらの細胞に由来する細胞、組織または臓器の移植における拒絶反応の抑制方法を含む。

本開示の細胞治療剤は、血清含有／非含有のヒトに投与可能な培地または生理食塩水中にＰＢＭＣを含有する。細胞が接着性の場合には、細胞剥離が可能な基材に担持して保存し、用時に細胞を剥離して使用することができる。例えば、温度変化により細胞剥離可能な基材（ＲｅｐＣｅｌｌ、セルシード社、日本）などを用いることができる。

本開示は、上記抗体と、免疫寛容を誘導しようとする抗原または該抗原を表面に有する細胞と、細胞（例えば、ＰＢＭＣ）とを接触させることにより、患者の細胞（例えば、ＰＢＭＣ）の前記抗原に対するアナジーを誘導すること、アナジーを誘導された細胞（例えば、ＰＢＭＣ）を患者に投与することを含む、患者における免疫寛容を誘導する方法であってもよい。例えば、本開示は、ドナー由来細胞と、患者の細胞（例えば、ＰＢＭＣ）とを接触させることにより、患者の細胞（例えば、ＰＢＭＣ）の移植臓器に対するアナジーを誘導することにより、移植される臓器に対する免疫寛容を誘導された患者由来の細胞（例えば、ＰＢＭＣ）を調製すること、調製された細胞（例えば、ＰＢＭＣ）を臓器移植を受ける患者に投与することを含む、臓器移植における拒絶反応の抑制方法を含む。また、本開示は、自己免疫疾患またはアレルギー性疾患の原因となる抗原と、患者の細胞（例えば、ＰＢＭＣ）とを接触させることにより、患者の細胞（例えば、ＰＢＭＣ）の前記抗原に対するアナジーを誘導することにより、自己免疫疾患またはアレルギー性疾患の原因となる抗原に対する免疫寛容を誘導された患者由来の細胞（例えば、ＰＢＭＣ）を調製すること、、調製された細胞（例えば、ＰＢＭＣ）を自己免疫疾患またはアレルギー性疾患の患者に投与することを含む、自己免疫疾患またはアレルギー性疾患の治療方法または改善方法であってもよい。また、本開示は、ｉＰＳ細胞もしくはＥＳ細胞、あるいはこれらの細胞
由来の細胞、組織または臓器と、患者の細胞（例えば、ＰＢＭＣ）とを接触させることにより、患者の細胞（例えば、ＰＢＭＣ）のｉＰＳ細胞やＥＳ細胞、またはこれらの細胞由来の細胞、組織または臓器に対するアナジーを誘導することにより、移植されるｉＰＳ細胞もしくはＥＳ細胞、またはこれらの細胞由来の細胞、組織もしくは臓器に対する免疫寛容が誘導された患者由来の細胞（例えば、ＰＢＭＣ）を調製すること、調製された細胞（例えば、ＰＢＭＣ）をｉＰＳ細胞もしくはＥＳ細胞、またはこれらの細胞由来の細胞、組織もしくは臓器移植を受ける患者に投与することを含む、ｉＰＳ細胞もしくはＥＳ細胞、またはこれらの細胞由来の細胞、組織もしくは臓器の移植における拒絶反応の抑制方法を含む。

本明細書において、細胞治療剤（アナジーを誘導された細胞、例えばＰＢＭＣ）の投与は、所望の治療効果または予防効果が得られる投与量であれば特に限定は無く、症状、性別、年齢等により適宜決定することができる。本開示の細胞治療剤の投与量は、例えば、免疫寛容の誘導の程度を指標として決定することができる。例えば、本開示の細胞治療剤のアナジーを誘導されたＰＢＭＣの１回量として、通常1.0～3.7×10⁷細胞／ｋｇ体重程度、好ましくは2.0～5.0×10⁷細胞／ｋｇ体重程度、さらに好ましくは3.0～5.0×10⁷細胞／ｋｇ体重程度を、１月１～１０回程度、好ましくは１月１～５回程度、静脈注射により投与するのが好都合である。免疫抑制効果がみられない場合には、その症状に応じて増量または投与回数を増加させてもよい。

（注記）
本明細書において「または」は、文章中に列挙されている事項の「少なくとも1つ以上」を採用できるときに使用される。「もしくは」も同様である。本明細書において「2つの値の範囲内」と明記した場合、その範囲には2つの値自体も含む。

本明細書において引用された、科学文献、特許、特許出願などの参考文献は、その全体が、各々具体的に記載されたのと同じ程度に本明細書において参考として援用される。

以上、本開示を、理解の容易のために好ましい実施形態を示して説明してきた。以下に、実施例に基づいて本開示を説明するが、上述の説明および以下の実施例は、例示の目的のみに提供され、本開示を限定する目的で提供したのではない。従って、本開示の範囲は、本明細書に具体的に記載された実施形態にも実施例にも限定されず、特許請求の範囲によってのみ限定される。

以下、実施例に基づいて本開示をより具体的に説明する。ただし、本開示はこれらの実施例に限定されるものではない。なお、本願全体を通して引用される全文献は参照によりそのまま本願に組み込まれる。

以下に実施例を記載する。以下の実施例で用いる生物の取り扱いは、順天堂大学や監督官庁において規定される基準を遵守した。動物実験の実施にあたっては、「動物の愛護及び管理に関する法律」、「実験動物の飼養及び保管並びに苦痛の軽減に関する基準」(平成18年環境省告示第88号)、「研究機関等における動物実験等の実施に関する基本指針」(平成18年文部科学省告示第71号)に基づいて制定された順天堂大学動物実験等管理規則を遵守して行った。実験はいわゆる3Rに基づいて計画し、順天堂大学医学部実験動物委員会に計画書を提出し審議の上、既に承認、受理されている。遺伝子操作マウスの使用においては、組み替えDNA作出動物を用いた実験計画の学内安全委員会の審査を受け承認を受けている。さらに、組み換えDNA実験に関しては、順天堂大学医学部DNA実験安全委員会に計画書を提出し審議の上、既に承認、受理されており、「遺伝子組み換え生物等の使用等の規制による生物の多様性の確保に関する法律」等の関係規定に従って研究を進めた。ヒト末梢血(PBMC)を用いた実験に関しては、順天堂大学医学部倫理委員会において、公正な審議と情報公開の原則に基づいた審査を受け、適切との判断により承認を既に受けている。検体提供者より研究目的・計画・方法に関するインフォームドコンセントを得たうえで、個人情報の保護を厳重に行い、匿名性を保ちながら研究を進めた。実験を遂行するに当たっては、順天堂大学医学部および相模原病院の倫理委員会が定める倫理規定、ならびに厚生労働省の定める“臨床研究に関する指針”を遵守した。試薬類は具体的には実施例中に記載した製品を使用したが、他メーカー（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃ、和光純薬、ナカライ、Ｒ＆ＤＳｙｓｔｅｍｓ、ＵＳＣＮ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ＩＮＣ、ＢＤ ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ等）の同等品でも代用可能である。

（実施例１）抗ヒトＣＤ８０および抗ＣＤ８６抗体（サブクラスＩｇＧ１）存在下での混合リンパ球反応（ＭＬＲ）
（材料および方法）
Ｐｒｏｍｏ ｃｅｌｌ社製Ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ Ｍｅｄｉａ（Ｃａｔ．Ｎｏ．Ｃ―４４０１０）を用いて、三人のボランティア（一人をドナー（ドナーＣ）、二人をレシピエント（レシピエントＡおよびレシピエントＢ）に指定）のヒト末梢血から単核細胞（ＰＢＭＣ）を分離し、Ｂｉｏｗｅｓｔ社製２％ヒト血清ＡＢ型（プール）入りＡＬｙＳ５０５Ｎ－０培地（細胞科学研究所（CSTI）1020Ｐ10）で４×１０^６ｃｅｌｌｓ／ｍｌとなるよう調整した。ドナーＰＢＭＣには放射線(γ線)３０Ｇｙを照射した。

ドナーPBMCとレシピエントＰＢＭＣを１：１の比率になるよう、９６ｗｅｌｌ ｐｌａｔｅ（Ｃｏｒｎｉｎｇ社製、Ｃａｔ．Ｎｏ．３７９９）に１００μＬ／ｗｅｌｌずつ４ｗｅｌｌに分注し（合わせて最終的に２００μＬ／ｗｅｌｌ）、そこへ、ヒト化抗ヒトＣＤ８０抗体（ｖ２（サブクラスＩｇＧ１））と抗ヒトＣＤ８６抗体（ｖ５（サブクラスＩｇＧ１））の組み合わせ、またはｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ社製マウス抗ヒトＣＤ８０抗体（Ｃａｔ．Ｎｏ．１６－０８０９－８５）（サブクラスＩｇＧ１）とマウス抗ヒトＣＤ８６抗体（Ｃａｔ．Ｎｏ．１６－０８６９－８５）（サブクラスＩｇＧ２）の組み合わせを、各抗体の添加後濃度が０．１、１、１０μｇ／ｍＬになるように１０μｌずつ添加し、３７℃、５％ＣＯ_２インキュベーター中で培養を開始した。培養開始４日目に^３Ｈ－チミジン（１０μＬ）を添加し、培養開始５日目（^３Ｈ－チミジン添加の１６～２０時間後）にＣｅｌｌ Ｈａｒｖｅｓｔｅｒ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ）により培養細胞を回収し、シンチレーションカウンターで^３Ｈ－チミジン取込み量を測定した。

ＩＦＮγ産生は、前述と同様の方法で混合され、同様に各抗体を添加されたＰＢＭＣ混合物を４８ｗｅｌｌ Ｐｌａｔｅ（Ｃｏｒｎｉｎｇ社製、Ｃａｔ．Ｎｏ．３５４８）に５００μＬ／ｗｅｌｌで３ｗｅｌｌに分注し、３７℃、５％ＣＯ_２インキュベーター中で培養を開始した。培養６日目に上清を回収し、回収したサンプルを１０～２５倍に希釈後、Ｂｉｏｌｉｇａｎｄｓ社製Ｈｕｍａｎ ＩＦＮγ ＥＬＩＳＡ ＭＡＸ^ＴＭ Ｄｅｌｕｘｅ、Ｃａｔ．４３０１０４を用いて測定した。

（結果）
その結果、図１に示したように、ヒト化抗ヒトＣＤ８０抗体（ｖ２（サブクラスＩｇＧ１））とヒト化抗ヒトＣＤ８６抗体（ｖ５（サブクラスＩｇＧ１））の組み合わせは、ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ社製マウス抗ヒトＣＤ８０抗体とマウス抗ヒトＣＤ８６抗体の組み合わせとほぼ同等に^３Ｈ－チミジン取り込みが少なく、すなわち、免疫細胞の活性化を抑制した。一方、図２に示したように、ＩＦＮγ産生評価の結果、ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ社製マウス抗ヒトＣＤ８０、ＣＤ８６抗体存在下では産生が少なかったのに対して、ヒト化抗ヒトＣＤ８０、ＣＤ８６抗体（サブクラスＩｇＧ１）存在下では抗体添加量によるＩＦＮγ産生が見られ、１０μｇ／ｍＬでは抗体非存在下（図２ Ａｌｌｏ）以上の産生が見られた。理論に束縛されることは望まないが、ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ社製抗体は、マウス抗体であり反応性が低いことに起因して、ＩＦＮγ産生が少ないと考えられる。

（実施例２）抗ヒトＣＤ８０および抗ＣＤ８６抗体（サブクラスＩｇＧ１）存在下での混合リンパ球反応（ＭＬＲ）
（材料および方法）
実施例１と同じ方法で、ヒト化抗ヒトＣＤ８０抗体（ｖ２（サブクラスＩｇＧ１））と抗ヒトＣＤ８６抗体（ｖ５またはｖ９（サブクラスＩｇＧ１））の組み合わせ、またはｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ社製マウス抗ヒトＣＤ８０抗体（Ｃａｔ．Ｎｏ．１６－０８０９－８５）とマウス抗ヒトＣＤ８６抗体（Ｃａｔ．Ｎｏ．１６－０８６９－８５）の組み合わせを、各抗体の添加後濃度が１０μｇ／ｍＬになるように添加した場合の^３Ｈ－チミジン取り込みを評価した。なお、三人のボランティアのうち、一人をドナー（ドナーＦ）、二人をレシピエント（レシピエントＤおよびレシピエントＥ）に指定した。

また、ヒト化抗ヒトＣＤ８０抗体（ｖ２（サブクラスＩｇＧ１））とヒト化抗ヒトＣＤ８６抗体（ｖ９（サブクラスＩｇＧ１））の組み合わせ、およびｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ社製マウス抗ヒトＣＤ８０抗体と抗ヒトＣＤ８６抗体の組み合わせについて、ＩＦＮγ産生について評価した。ヒト化抗ヒトＣＤ８０抗体（ｖ２（サブクラスＩｇＧ１））と抗ヒトＣＤ８６抗体（ｖ９（サブクラスＩｇＧ１））の組み合わせについては、実施例１の方法に加え、放射線照射したドナーＰＢＭＣを加えない場合のＩＦＮγ産生についても評価した。

（結果）
その結果、図３に示した様に、ヒト化抗ヒトＣＤ８０抗体と抗ヒトＣＤ８６抗体の組み合わせは、マウス抗ヒトＣＤ８０抗体と抗ヒトＣＤ８６抗体の組み合わせよりも^３Ｈ－チミジン取り込み抑制を示した。一方、図４に示した様に、ＩＦＮγ産生は、実施例１と同様にｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ社製マウス抗ヒトＣＤ８０、ＣＤ８６抗体では産生量は少なかった。ヒト化抗ヒトＣＤ８０、ＣＤ８６抗体では、抗体非存在でのドナー刺激時と同等またはそれ以上の産生が見られ、さらには放射線照射したドナーＰＢＭＣを加えない場合でもヒト化抗ＣＤ８０と抗ヒトＣＤ８６抗体の添加時には同様なＩＦＮγ産生が見られた。

（実施例３）抗ヒトＣＤ８０および抗ＣＤ８６抗体（サブクラスＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ４）存在下での混合リンパ球反応（ＭＬＲ）
実施例２において、放射線照射したドナーＰＢＭＣを加えない場合でもＩＦＮγ産生が見られたことから、ヒト化抗ヒトＣＤ８０抗体と抗ヒトＣＤ８６抗体のクラススイッチを行い、このヒト化抗ヒトＣＤ８０抗体（ｖ２（サブクラスＩｇＧ２またはＩｇＧ４））と抗ヒトＣＤ８６抗体（ｖ９（サブクラスＩｇＧ２またはＩｇＧ４））の同じサブクラスどうしの組み合わせ、およびｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ社製マウス抗ヒトＣＤ８０抗体（品番１６－０８０９－８５）と抗ヒトＣＤ８６抗体（品番１６－０８６９－８５）の組み合わせを、各抗体の添加後濃度が１、３または１０μｇ／ｍＬになるように添加した場合の^３Ｈ－チミジン取り込みと、各抗体の添加後濃度が１０μｇ／ｍＬになるように添加した場合のＩＦＮγ産生について評価した。なお、三人のボランティアのうち、一人をドナー（ドナーＩ）、二人をレシピエント（レシピエントＧおよびレシピエントＨ）に指定した。具体的な実験系は以下のとおりとした。

［^３Ｈ－チミジン取り込み（抗体濃度 各１、３、１０μｇ／ｍＬ）］（図５）
－抗体添加なし（Ａｌｌｏ）、放射線照射したドナーＰＢＭＣ添加
－ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ社製マウス抗ヒトＣＤ８０抗体、マウス抗ヒトＣＤ８６抗体
－ヒト化抗ヒトＣＤ８０抗体（ｖ２（ＩｇＧ２））、ヒト化抗ヒトＣＤ８６抗体（ｖ９（ＩｇＧ２））
－ヒト化抗ヒトＣＤ８０抗体（ｖ２（ＩｇＧ４））、ヒト化抗ヒトＣＤ８６抗体（ｖ９（ＩｇＧ４））

［ＩＦＮγ産生（抗体濃度 各１０μｇ／ｍＬ）］（図６）
放射線照射したドナーＰＢＭＣ添加あり（Ａｌｌｏ）
－抗体添加なし
－ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ社製マウス抗ヒトＣＤ８０抗体、抗ヒトＣＤ８６抗体
－ヒト化抗ヒトＣＤ８０抗体（ｖ２（ＩｇＧ２））、ヒト化抗ヒトＣＤ８６抗体（ｖ９（ＩｇＧ２））
－ヒト化抗ヒトＣＤ８０抗体（ｖ２（ＩｇＧ４））、ヒト化抗ヒトＣＤ８６抗体（ｖ９（ＩｇＧ４））
放射線照射したドナーＰＢＭＣ添加なし（Ｎａｉｖｅ）
－抗体添加なし
－ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ社製マウスＣＤ８０抗体、抗ＣＤ８６抗体
－ヒト化抗ＣＤ８０抗体（ｖ２（ＩｇＧ１））、ヒト化抗ヒトＣＤ８６抗体（ｖ９（ＩｇＧ１））
－ヒト化抗ＣＤ８０抗体（ｖ２（ＩｇＧ２））、ヒト化抗ヒトＣＤ８６抗体（ｖ９（ＩｇＧ２））
－ヒト化抗ＣＤ８０抗体（ｖ２（ＩｇＧ４））、ヒト化抗ヒトＣＤ８６抗体（ｖ９（ＩｇＧ４））

（結果）
その結果、図５に示した様に、サブクラスＩｇＧ２とＩｇＧ４は、実施例１および２と同様に^３Ｈ－チミジン取り込み抑制を示した。一方、図６に示した様に、ＩＦＮγ産生については、サブクラスＩｇＧ１ではその産生が見られるが、驚くべきことに、サブクラスＩｇＧ２およびＩｇＧ４では、ＩＦＮγが全く産生されなかった。

（実施例４）抗ヒトＣＤ８０および抗ヒトＣＤ８６抗体（サブクラスＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ４）存在下で培養し得られた細胞を添加した場合の混合リンパ球反応（ＭＬＲ）
（材料および方法）
実施例１に記載の方法で、ヒト化抗ヒトＣＤ８０抗体（ｖ２）と抗ヒトＣＤ８６抗体（ｖ９）のサブクラスＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ４の組み合わせの存在下で１４日目まで培養を継続した。サブクラスＩｇＧ２のヒト化抗ヒトＣＤ８０抗体（ｖ２）は、重鎖が配列番号２のアミノ酸配列からなり、軽鎖が配列番号４のアミノ酸配列からなる。サブクラスＩｇＧ４のヒト化抗ヒトＣＤ８０抗体（ｖ２）は、重鎖が配列番号６のアミノ酸配列からなり、軽鎖が配列番号８のアミノ酸配列からなる。サブクラスＩｇＧ２の抗ヒトＣＤ８６抗体（ｖ９）は、重鎖が配列番号１０のアミノ酸配列からなり、軽鎖が配列番号１２のアミノ酸配列からなる。サブクラスＩｇＧ４の抗ヒトＣＤ８６抗体（ｖ９）は、重鎖が配列番号１４のアミノ酸配列からなり、軽鎖が配列番号１６のアミノ酸配列からなる。培養後、得られたアナジー細胞とレシピエントＰＢＭＣ（Ｒ－ＰＢＭＣ）、放射線を照射したドナーＰＢＭＣ（Ｄ－ＰＢＭＣ）を以下の表に従って混合後、実施例１に記載の方法で^３Ｈ－チミジン取り込み量を評価した。

（結果）
その結果、図７に示した様に、いずれのサブクラスの抗体存在下で得られた細胞も、同等の^３Ｈ－チミジン取り込みを抑制した。

（実施例５）臓器移植を受けた患者における免疫寛容の誘導
Ｓａｔｏｒｕ Ｔｏｄｏ ｅｔ ａｌ．Ｈｅｐａｔｏｒｏｇｙ、 ６４（ｖｏｌ．２）、６３２－６４３ （２０１６）に記載の方法と同様の方法により試験した。簡潔には、レシピエントの脾臓または抹消血から回収したリンパ球と、３０Ｇｙで放射線照射されたドナー由来のリンパ球と、実施例４で使用したサブクラスＩｇＧ４のヒト化抗ＣＤ８０抗体および抗ＣＤ８６抗体とを共培養することにより、ドナー抗原に特異的なアナジーＴ細胞を誘導する。このアナジーＴ細胞を、肝臓移植を受けたレシピエントに術後１３日目に投与する。その後、経過を観察する。

（実施例６）キメラ抗ヒトＣＤ８０およびキメラ抗ヒトＣＤ８６抗体（サブクラスＩｇＧ１）
抗体の作製
本発明者らは、細胞治療での使用を考慮して、抗ヒトＣＤ８０抗体および抗ヒトＣＤ８６抗体の改良を試みた。具体的には、ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ社製マウス抗ヒトＣＤ８０抗体とマウス抗ヒトＣＤ８６抗体をベースとして、それぞれのキメラ抗体を作製した。作製したキメラ抗ヒトＣＤ８０抗体（サブクラスＩｇＧ１）は、重鎖が配列番号３８のアミノ酸配列からなり、軽鎖が配列番号４０のアミノ酸配列からなる。また作製したキメラ抗ヒトＣＤ８６抗体（サブクラスＩｇＧ１）は、重鎖が配列番号４２のアミノ酸配列からなり、軽鎖が配列番号４４のアミノ酸配列からなる。これらをコードするプラスミドを、外部（ＴＰＧ Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ，Ｉｎｃ．台湾）に委託してＣＨＯ細胞から発現させ、抗体を産生・精製した。

キメラ抗ヒトＣＤ８０およびキメラ抗ＣＤ８６抗体（サブクラスＩｇＧ１）存在下での混合リンパ球反応（ＭＬＲ）
ＩＦＮγ産生
実施例１に記載の方法とほぼ同様に、Ｐｒｏｍｏ ｃｅｌｌ社製Ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ Ｍｅｄｉａ（Ｃａｔ．Ｎｏ．Ｃ―４４０１０）を用いて、二人のボランティア（一人をドナー、もう一人をレシピエントに指定）のヒト末梢血から単核細胞（ＰＢＭＣ）を分離し、Ｂｉｏｗｅｓｔ社製２％ヒト血清ＡＢ型（プール）入りＡＬｙＳ５０５Ｎ－０培地（細胞科学研究所（ＣＳＴＩ）１０２０Ｐ１０）で２×１０^６細胞／ｍｌとなるよう調整した。ドナーＰＢＭＣには放射線（γ線）３０Ｇｙを照射した。

下記のように、実験系を構築した：
１．「ｎａｉｖｅ」：レシピエントＰＢＭＣ １×１０^６細胞
２．「ａｌｌｏ」：レシピエントＰＢＭＣ １×１０^６細胞およびドナーＰＢＭＣ １×１０^６細胞
３．「キメラ抗ＣＤ８０」：レシピエントＰＢＭＣ １×１０^６細胞およびキメラ抗ヒトＣＤ８０抗体 ４μｇ
４．「キメラ抗ＣＤ８６」：レシピエントＰＢＭＣ １×１０^６細胞およびキメラ抗ヒトＣＤ８６抗体 ４μｇ
系１．～４．を、９６ｗｅｌｌ ｐｌａｔｅ（Ｃｏｒｎｉｎｇ社製、Ｃａｔ．Ｎｏ．３７９９）のウェルごとに入れ、最終的な反応体積を２００μＬとした（抗体の最終濃度は約２０μｇ／ｍＬ）。３７℃、５％ＣＯ_２インキュベーター中で培養を開始した。培養開始５日目と６日目とに上清を回収し、回収したサンプルを２０～２５倍に希釈後、Ｂｉｏｌｉｇａｎｄｓ社製Ｈｕｍａｎ ＩＦＮγ ＥＬＩＳＡ ＭＡＸ^ＴＭ Ｄｅｌｕｘｅ、Ｃａｔ．４３０１０４を用いて測定した。

結果
図８に示したように、キメラ抗ヒトＣＤ８０抗体もキメラ抗ヒトＣＤ８６抗体も、検出可能なＩＦＮγ産生を示さなかった。

^３Ｈ－チミジン取込み量測定
基本的には、実施例１および実施例４に記載の方法に従い実験を行った。レシピエントＰＢＭＣおよびドナーＰＢＭＣには、それぞれヒト末梢血から新鮮に分離したものを使用するか、または－８０℃で凍結保存したものを急速解凍して使用した。これらの細胞はともに、Ｂｉｏｗｅｓｔ社製２％ヒト血清ＡＢ型（プール）入りＡＬｙＳ５０５Ｎ－０培地（細胞科学研究所（ＣＳＴＩ）１０２０Ｐ１０）にて４×１０^６細胞／ｍＬに調整した。ドナーＰＢＭＣには、２０Ｇｙ放射線を照射した。これらのレシピエントＰＢＭＣとドナーＰＢＭＣとを、１：１で混合し、この混合物に、キメラ抗ヒトＣＤ８０抗体およびキメラ抗ヒトＣＤ８６抗体をそれぞれ最終濃度１０μｇ／ｍｌとなるように添加した。培養は、６ｃｍ～１０ｃｍシャーレ（培養体積６～１８ｍＬ）にて３７℃、５％ＣＯ_２インキュベーター中で７日間行った。

培養開始から７日目に遠心により、培養したレシピエントＰＢＭＣを回収し、上記の培地で４×１０^６細胞／ｍＬに調整した。この培養したレシピエントＰＢＭＣに、新たに調製した照射済みドナーＰＢＭＣを細胞数比２：１になるように添加し、さらにキメラ抗ヒトＣＤ８０抗体およびキメラ抗ヒトＣＤ８６抗体をそれぞれ最終濃度５μｇ／ｍｌになるように添加した。培養は、上記と同じ条件で７日間行った（細胞密度：４×１０^６細胞／ｍＬ）。

培養開始から通算して１４日目に遠心により誘導細胞を回収し、以下の割合で、各細胞を混合する：
１．「ｎａｉｖｅ」：レシピエントＰＢＭＣ ４×１０^５細胞
２．「ａｌｌｏ」：レシピエントＰＢＭＣ ４×１０^５細胞およびドナーＰＢＭＣ ４×１０^５細胞
３．「１：１／２」：レシピエントＰＢＭＣ ４×１０^５細胞およびドナーＰＢＭＣ ４×１０^５細胞および誘導細胞 ２×１０^５細胞
４．「１：１／４」：レシピエントＰＢＭＣ ４×１０^５細胞およびドナーＰＢＭＣ ４×１０^５細胞および誘導細胞 １×１０^５細胞
５．「１：１／８」：レシピエントＰＢＭＣ ４×１０^５細胞およびドナーＰＢＭＣ ４×１０^５細胞および誘導細胞 ５×１０^４細胞
６．「１：１／１６」：レシピエントＰＢＭＣ ４×１０^５細胞およびドナーＰＢＭＣ ４×１０^５細胞および誘導細胞 ２．５×１０^４細胞
系１．～６．各々を、９６ｗｅｌｌ ｐｌａｔｅ（Ｃｏｒｎｉｎｇ社製、Ｃａｔ．Ｎｏ．３７９９）の４ウェルに分注し、３７℃、５％ＣＯ_２インキュベーターで共培養した。共培養開始４日目に^３Ｈ－チミジン（１０μｌ）を添加し、共培養開始５日目（^３Ｈ－チミジン添加の１６～２０時間後）に培養液中の^３Ｈ－チミジンを除去し、^３Ｈ－チミジン取込み量を測定した。

結果
図９に示したように、誘導細胞は、用量依存的に^３Ｈ－チミジン取込み量を低減させた（すなわち、免疫細胞の活性化を抑制した）。したがって、キメラ抗ヒトＣＤ８０抗体およびキメラ抗ヒトＣＤ８６抗体は、アナジーＴ細胞を誘導することができ、かつ有害なＩＦＮγ産生を引き起こさない、細胞治療に適した抗体であることが実証された。

（注記）
以上のように、本開示の好ましい実施形態を用いて本開示を例示してきたが、本開示は、特許請求の範囲によってのみその範囲が解釈されるべきであることが理解される。本明細書において引用した特許、特許出願及び他の文献は、その内容自体が具体的に本明細書に記載されているのと同様にその内容が本明細書に対する参考として援用されるべきであることが理解される。本出願は、日本国特許出願特願２０１８－１１８９９６（２０１８年６月２２日出願）に対して優先権主張の利益を主張するものであり、当該出願の内容は本願において、その内容が（全部であり得る）参考として援用されることが理解される。また、日本国特許出願特願２０１８－１１９００１および特願２０１８－１１９００３１（いずれも２０１８年６月２２日出願）ならびにそれらに対して優先権主張する国際出願の内容は、その一部または全文が、本明細書において参考として援用される。

本開示は、免疫寛容の効果を改善する、または免疫寛容の効果を減弱させない特徴を有する構造をもつ抗体を提供する。このような技術に基づく製剤等に関連する産業（製薬）において利用可能な技術が提供される。

配列番号１：抗ＣＤ８０抗体（ＩｇＧ２）重鎖核酸配列
配列番号２：抗ＣＤ８０抗体（ＩｇＧ２）重鎖アミノ酸配列
配列番号３：抗ＣＤ８０抗体（ＩｇＧ２）軽鎖核酸配列
配列番号４：抗ＣＤ８０抗体（ＩｇＧ２）軽鎖アミノ酸配列
配列番号５：抗ＣＤ８０抗体（ＩｇＧ４）重鎖核酸配列
配列番号６：抗ＣＤ８０抗体（ＩｇＧ４）重鎖アミノ酸配列
配列番号７：抗ＣＤ８０抗体（ＩｇＧ４）軽鎖核酸配列
配列番号８：抗ＣＤ８０抗体（ＩｇＧ４）軽鎖アミノ酸配列
配列番号９：抗ＣＤ８６抗体（ＩｇＧ２）重鎖核酸配列
配列番号１０：抗ＣＤ８６抗体（ＩｇＧ２）重鎖アミノ酸配列
配列番号１１：抗ＣＤ８６抗体（ＩｇＧ２）軽鎖核酸配列
配列番号１２：抗ＣＤ８６抗体（ＩｇＧ２）軽鎖アミノ酸配列
配列番号１３：抗ＣＤ８６抗体（ＩｇＧ４）重鎖核酸配列
配列番号１４：抗ＣＤ８６抗体（ＩｇＧ４）重鎖アミノ酸配列
配列番号１５：抗ＣＤ８６抗体（ＩｇＧ４）軽鎖核酸配列
配列番号１６：抗ＣＤ８６抗体（ＩｇＧ４）軽鎖アミノ酸配列
配列番号１７：抗ＣＤ８０抗体（ＩｇＧ２）重鎖可変領域核酸配列
配列番号１８：抗ＣＤ８０抗体（ＩｇＧ２）重鎖可変領域アミノ酸配列
配列番号１９：抗ＣＤ８０抗体（ＩｇＧ２）軽鎖可変領域核酸配列
配列番号２０：抗ＣＤ８０抗体（ＩｇＧ２）軽鎖可変領域アミノ酸配列
配列番号２１：抗ＣＤ８６抗体（ＩｇＧ２）重鎖可変領域核酸配列
配列番号２２：抗ＣＤ８６抗体（ＩｇＧ２）重鎖可変領域アミノ酸配列
配列番号２３：抗ＣＤ８６抗体（ＩｇＧ２）軽鎖可変領域核酸配列
配列番号２４：抗ＣＤ８６抗体（ＩｇＧ２）軽鎖可変領域アミノ酸配列
配列番号２５：抗ＣＤ８０抗体（ＩｇＧ２）ＣＤＲＨ１アミノ酸配列
配列番号２６：抗ＣＤ８０抗体（ＩｇＧ２）ＣＤＲＨ２アミノ酸配列
配列番号２７：抗ＣＤ８０抗体（ＩｇＧ２）ＣＤＲＨ３アミノ酸配列
配列番号２８：抗ＣＤ８０抗体（ＩｇＧ２）ＣＤＲＬ１アミノ酸配列
配列番号２９：抗ＣＤ８０抗体（ＩｇＧ２）ＣＤＲＬ２アミノ酸配列
配列番号３０：抗ＣＤ８０抗体（ＩｇＧ２）ＣＤＲＬ３アミノ酸配列
配列番号３１：抗ＣＤ８６抗体（ＩｇＧ２）ＣＤＲＨ１アミノ酸配列
配列番号３２：抗ＣＤ８６抗体（ＩｇＧ２）ＣＤＲＨ２アミノ酸配列
配列番号３３：抗ＣＤ８６抗体（ＩｇＧ２）ＣＤＲＨ３アミノ酸配列
配列番号３４：抗ＣＤ８６抗体（ＩｇＧ２）ＣＤＲＬ１アミノ酸配列
配列番号３５：抗ＣＤ８６抗体（ＩｇＧ２）ＣＤＲＬ２アミノ酸配列
配列番号３６：抗ＣＤ８６抗体（ＩｇＧ２）ＣＤＲＬ３アミノ酸配列
配列番号３７ キメラ抗ＣＤ８０抗体 重鎖核酸配列
配列番号３８ キメラ抗ＣＤ８０抗体 重鎖アミノ酸配列
配列番号３９ キメラ抗ＣＤ８０抗体 軽鎖核酸配列
配列番号４０ キメラ抗ＣＤ８０抗体 軽鎖アミノ酸配列
配列番号４１ キメラ抗ＣＤ８６抗体 重鎖核酸配列
配列番号４２ キメラ抗ＣＤ８６抗体 重鎖アミノ酸配列
配列番号４３ キメラ抗ＣＤ８６抗体 軽鎖核酸配列
配列番号４４ キメラ抗ＣＤ８６抗体 軽鎖アミノ酸配列
配列番号４５ キメラ抗ＣＤ８０抗体 重鎖可変領域核酸配列
配列番号４６ キメラ抗ＣＤ８０抗体 重鎖可変領域アミノ酸配列
配列番号４７ キメラ抗ＣＤ８０抗体 軽鎖可変領域核酸配列
配列番号４８ キメラ抗ＣＤ８０抗体 軽鎖可変領域アミノ酸配列
配列番号４９ キメラ抗ＣＤ８６抗体 重鎖可変領域核酸配列
配列番号５０ キメラ抗ＣＤ８６抗体 重鎖可変領域アミノ酸配列
配列番号５１ キメラ抗ＣＤ８６抗体 軽鎖可変領域核酸配列
配列番号５２ キメラ抗ＣＤ８６抗体 軽鎖可変領域アミノ酸配列
配列番号５３ キメラ抗ＣＤ８０抗体 ＣＤＲＨ１アミノ酸配列
配列番号５４ キメラ抗ＣＤ８０抗体 ＣＤＲＨ２アミノ酸配列
配列番号５５ キメラ抗ＣＤ８０抗体 ＣＤＲＨ３アミノ酸配列
配列番号５６ キメラ抗ＣＤ８０抗体 ＣＤＲＬ１アミノ酸配列
配列番号５７ キメラ抗ＣＤ８０抗体 ＣＤＲＬ２アミノ酸配列
配列番号５８ キメラ抗ＣＤ８０抗体 ＣＤＲＬ３アミノ酸配列
配列番号５９ キメラ抗ＣＤ８６抗体 ＣＤＲＨ１アミノ酸配列
配列番号６０ キメラ抗ＣＤ８６抗体 ＣＤＲＨ２アミノ酸配列
配列番号６１ キメラ抗ＣＤ８６抗体 ＣＤＲＨ３アミノ酸配列
配列番号６２ キメラ抗ＣＤ８６抗体 ＣＤＲＬ１アミノ酸配列
配列番号６３ キメラ抗ＣＤ８６抗体 ＣＤＲＬ２アミノ酸配列
配列番号６４ キメラ抗ＣＤ８６抗体 ＣＤＲＬ３アミノ酸配列

Claims (21)

1. ある細胞の細胞表面に発現するＣＤ８０および／またはＣＤ８６と、他の細胞の細胞表面に発現するＣＤ２８との相互作用を阻害する、ＣＤ８０および／またはＣＤ８６を標的とする抗体またはその改変体であって、該抗体またはその改変体は、被験体の細胞に対して免疫寛容を誘導し、免疫活性化によるサイトカインの産生を実質的に誘導せず、免疫寛容が誘導されていない細胞と比較して、該被験体の細胞における^３Ｈ－チミジン取込み量を低減させ、前記抗体は、（１）配列番号３８に記載のアミノ酸配列を有する重鎖、および配列番号４０に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖を有するか、または（２）配列番号４２に記載のアミノ酸配列を有する重鎖、および配列番号４４に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖を有するキメラ抗体であり、前記抗体のサブクラスがＩｇＧ１であり、該改変体は、（１）または（２）に規定される該キメラ抗体のアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有し、かつ（１）または（２）に規定される該キメラ抗体のアミノ酸配列の各ＣＤＲ内に改変を含まない、抗体またはその改変体。
2. 前記サイトカインがインターフェロンγを含む、請求項１に記載の抗体またはその改変体。
3. 前記抗体が、
   （ａ）配列番号５３に記載のアミノ酸配列のＣＤＲＨ１、配列番号５４に記載のアミノ酸配列のＣＤＲＨ２、および配列番号５５に記載のアミノ酸配列のＣＤＲＨ３を含むＶＨ、ならびに配列番号５６に記載のアミノ酸配列のＣＤＲＬ１、配列番号５７に記載のアミノ酸配列のＣＤＲＬ２、および配列番号５８に記載のＣＤＲＬ３を含むＶＬ、または
   （ｂ）配列番号５９に記載のアミノ酸配列のＣＤＲＨ１、配列番号６０に記載のアミノ酸配列のＣＤＲＨ２、および配列番号６１に記載のアミノ酸配列のＣＤＲＨ３を含むＶＨ、ならびに配列番号６２に記載のアミノ酸配列のＣＤＲＬ１、配列番号６３に記載のアミノ酸配列のＣＤＲＬ２、および配列番号６４に記載のＣＤＲＬ３を含むＶＬ
   を含み、前記改変体が、（ａ）または（ｂ）に規定される該ＶＨ及び該ＶＬのアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有し、かつ（ａ）または（ｂ）に規定される該ＶＨ及び該ＶＬのアミノ酸配列の各ＣＤＲ内に改変を含まない、請求項１または２に記載の抗体またはその改変体。
4. 前記抗体が、
   （ａ）配列番号４６に記載のアミノ酸配列を有するＶＨおよび配列番号４８に記載のアミノ酸配列を有するＶＬ、あるいは
   （ｂ）配列番号５０に記載のアミノ酸配列を有するＶＨおよび配列番号５２に記載のアミノ酸配列を有するＶＬ
   を含み、前記改変体が、（ａ）または（ｂ）に規定される該ＶＨ及び該ＶＬのアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有し、かつ（ａ）または（ｂ）に規定される該ＶＨ及び該ＶＬのアミノ酸配列の各ＣＤＲ内に改変を含まない、請求項３に記載の抗体またはその改変体。
5. 前記抗体のＦｃ部分が、免疫活性化によるサイトカインの産生を実質的に誘導しない部分である、請求項１～４のいずれか一項に記載の抗体またはその改変体。
6. 免疫寛容を誘導する能力を有する、請求項１～５のいずれか一項に記載の抗体またはその改変体。
7. ＣＤ８０および／またはＣＤ８６を発現する前記細胞が抗原提示細胞であり、ＣＤ２８を発現する前記他の細胞がＴ細胞である、請求項１～６のいずれか一項に記載の抗体またはその改変体。
8. 前記抗体またはその改変体は、アンタゴニスティック抗ＣＤ８０抗体、アンタゴニスティック抗ＣＤ８６抗体、アンタゴニスティック抗ＣＤ２８抗体、またはＣＤ８０およびＣＤ８６に対するアンタゴニスティック二重特異性抗体、あるいはそれらの改変体である、請求項１～７のいずれか一項に記載の抗体またはその改変体。
9. 請求項１～８のいずれか１項に記載の抗体またはその改変体のアミノ酸配列をコードする核酸分子。
10. （ａ）配列番号４５に記載のヌクレオチド配列を有する、ＶＨをコードするポリヌクレオチド、および配列番号４７に記載のヌクレオチド配列を有する、ＶＬをコードするポリヌクレオチド、または
    （ｂ）配列番号４９に記載のヌクレオチド配列を有する、ＶＨをコードするポリヌクレオチド、および配列番号５１に記載のヌクレオチド配列を有する、ＶＬをコードするポリヌクレオチド
    を含有する、請求項９に記載の核酸分子。
11. 請求項９または請求項１０に記載の核酸分子を有するベクター。
12. 請求項９または請求項１０に記載の核酸分子あるいは請求項１１に記載のベクターを含む細胞。
13. 請求項１２の細胞を培養することを含む、請求項１～８のいずれか一項に記載の抗体またはその改変体の製造方法。
14. 請求項１～８のいずれか一項に記載の抗体またはその改変体のうちの少なくとも１つを含む、免疫寛容が誘導された細胞を作製するための組成物。
15. アンタゴニスティック抗ＣＤ８０抗体、アンタゴニスティック抗ＣＤ８６抗体、アンタゴニスティック抗ＣＤ２８抗体、もしくはＣＤ８０およびＣＤ８６に対するアンタゴニスティック二重特異性抗体、またはそれらの改変体、あるいはこれらの任意の組み合わせを含む、請求項１４に記載の組成物。
16. 請求項１～８のいずれか一項に記載の抗体またはその改変体と、被験体由来の細胞と、該被験体に由来しない抗原または該抗原の含有物とを混合するステップを含む、該被験体に由来しない抗原によって生じる疾患、障害または状態を処置または予防するための細胞を製造するための方法。
17. 前記疾患、障害または状態は、移植免疫拒絶反応、アレルギー、自己免疫疾患、移植片対宿主病、ならびにｉＰＳ細胞またはＥＳ細胞およびそれらの細胞由来の細胞、組織または臓器の移植によって引き起こされる免疫拒絶反応からなる群より選択される、請求項１６に記載の方法。
18. 前記抗原の含有物は細胞である、請求項１６または１７に記載の方法。
19. 前記キメラ抗体がマウスとヒトのキメラ抗体である、請求項１～８のいずれか一項に記載の抗体またはその改変体。
20. 免疫寛容が誘導されていない細胞と比較して、前記被験体の細胞における^３Ｈ－チミジン取込み量が約７３％低減される、請求項１～８、及び１９のいずれか一項に記載の抗体またはその改変体。
21. 配列番号３８に記載のアミノ酸配列を有する重鎖および配列番号４０に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖を有する、請求項１～８、１９、及び２０のいずれか一項に記載の抗体またはその改変体と、配列番号４２に記載のアミノ酸配列を有する重鎖および配列番号４４に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖を有する、請求項１～８、１９、及び２０のいずれか一項に記載の抗体またはその改変体との組み合わせ物。

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